WO2022124777A1 - 면역활성을 유도하는 장기 안정성을 가지는 알로페론 복합체 - Google Patents

면역활성을 유도하는 장기 안정성을 가지는 알로페론 복합체 Download PDF

Info

Publication number
WO2022124777A1
WO2022124777A1 PCT/KR2021/018493 KR2021018493W WO2022124777A1 WO 2022124777 A1 WO2022124777 A1 WO 2022124777A1 KR 2021018493 W KR2021018493 W KR 2021018493W WO 2022124777 A1 WO2022124777 A1 WO 2022124777A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
complex
alloferon
fibroin
virus
alloperon
Prior art date
Application number
PCT/KR2021/018493
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
유광진
Original Assignee
유광진
주식회사 비에이치월드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 유광진, 주식회사 비에이치월드 filed Critical 유광진
Publication of WO2022124777A1 publication Critical patent/WO2022124777A1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/1767—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00—Function of food ingredients
    • A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A23V2200/324—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on the immune system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
    • A61K2800/57—Compounds covalently linked to a(n inert) carrier molecule, e.g. conjugates, pro-fragrances
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Definitions

  • the present invention relates to a complex of alloferon and fibroin, wherein alloperon forms a complex with fibroin to improve stability in the aqueous phase including serum of alloperon and to have more excellent immunostimulating activity.
  • Insects that pass through the fly shedding stage are known to respond to microbial infections through the production of several types of immune-inducing molecules, including antibacterial or antifungal peptides.
  • Alloferon is an immunomodulatory protein discovered during the study of peptides isolated from these infected insects. Alloferon is known to exhibit antiviral and anticancer effects. Specifically, it increases the expression of NK cell activating receptors such as 2B4 to increase the cell killing activity of NK cells, and increases the production of IFN- ⁇ and TNF- ⁇ . , increases granular exocytosis from NK cells, thereby increasing cancer cell killing activity. (Bae et al., Immunobiology, Vol. 218, Issue 8, August 2013, 1026-1033). Alloferon has several amino acid sequences, and although each amino acid has a different effect and degree of activity in the body, it is known that it has an immunomodulatory function in common.
  • alloferon is a peptide, it has low stability in an aqueous phase including serum, so it is inactivated within a short time after administration, so it has a problem that it must be used in excess compared to the effect that can be actually expected.
  • Aqueous phases containing water, physiological saline, and serum can modify the structure of peptides to inhibit activity.
  • serum contains far more proteins, enzymes, lipids, and chemical components than other aqueous phases, so the activity of peptides is particularly high. has a great detrimental effect on Therefore, if it is stable in serum, it may be a method to increase the stability of the peptide in aqueous phase including water and physiological saline.
  • the disadvantage of alloferon, which is unstable in serum is a barrier to its application in medicine, beauty or health food industry, despite its excellent efficacy.
  • Korean Patent Publication No. 10-0394864 discloses the immunomodulatory function of alloferon. However, if the stability of the peptide containing alloferon in the aqueous phase including the serum is improved, the immune modulatory function can be further increased, but a method for increasing the stability in the aqueous phase including the serum of alloferone is not disclosed.
  • One object of the present invention is to provide an alloperon-fibroin complex with improved stability in an aqueous phase including serum.
  • Another object of the present invention is to provide an immune-enhancing pharmaceutical composition and health functional food comprising the alloperon-fibroin complex as an active ingredient.
  • Another object of the present invention is to provide an antiviral pharmaceutical composition and health functional food comprising the alloperon-fibroin complex as an active ingredient.
  • Another object of the present invention is to provide a cosmetic composition for enhancing immunity comprising the alloperon-fibroin complex as an active ingredient.
  • Another object of the present invention is to provide a method for preparing an alloperon-fibroin complex.
  • one aspect provides a complex comprising alloferon and fibroin.
  • the alloferon may be a polypeptide having a commonly known amino acid sequence.
  • the amino acid sequence of alloferon includes, for example, SEQ ID NO: 5, and may consist of an amino acid sequence further comprising 0 to 5 amino acids at the N-terminus and C-terminus in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, respectively. More specifically, the alloferon may be a polypeptide having an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, and SEQ ID NO: 5, or a mixture thereof.
  • the fibroin is a naturally-derived biomaterial, a fibroin protein synthesized in the larval silk glands of silkworms represented by the silkworm (Bombyx mori).
  • the hydrophobic region has the property of forming a protein crystal structure based on the beta-sheet structure through physical cross-linking to be spontaneously stabilized.
  • the hydrophobic region consists of hydrophobic amino acids such as alanine, glycine-alanine, glycine-alanine-serine, or a short repeating structure of these amino acids. Most amino acids are located at the N- and C-terminus.
  • the alloferon may form a complex with 2 moles of fibroin per 1 mole of alloferon.
  • the alloperon-fibroin complex may be bound by an electrostatic bond.
  • the alloperon-fibroin complex may have a molecular weight of 300 to 450 kDa, preferably 350 to 400 kDa.
  • the surface charge of the alloperon-fibroin complex is a negative charge, and may be, for example, -30 mV to -10 mV, -25 mV to -10 mV, or -20 mV to -15 mV.
  • the alloperon-fibroin complex may enhance immune activity.
  • the enhancement of the immune activity means enhancing the cytotoxic activity of T cells or NK cells, and may have antiviral activity, antibacterial activity, or cancer cell killing ability according to the enhancement of immune activity.
  • Another aspect provides a pharmaceutical composition for enhancing immunity containing the alloferon-fibroin complex as an active ingredient.
  • the pharmaceutical composition for enhancing immunity may be for preventing or treating cancer.
  • the alloferon-fibroin complex may be to enhance the apoptosis of immune cells by 1.2 times, 1.5 times, 2 times, or 2.5 times or more, compared to alloferon alone, for example, the apoptosis effect of T lymphocytes It may be one that can enhance about 3 times based on the concentration of 500 ng / ml.
  • Another aspect provides a health functional food for enhancing immunity containing the alloferon-fibroin complex as an active ingredient.
  • the alloperon-fibroin complex according to one embodiment has excellent stability in the aqueous phase including serum, so it exhibits an excellent immune-enhancing effect even in a small amount, and has few side effects, so it is suitable as an active ingredient in a pharmaceutical composition or health functional food.
  • Another aspect provides an antiviral pharmaceutical composition containing the alloperon-fibroin complex as an active ingredient.
  • Another aspect provides an antiviral health functional food containing the alloperon-fibroin complex as an active ingredient.
  • the antiviral pharmaceutical composition and health functional food by using the antiviral pharmaceutical composition and health functional food, it is possible to prevent or treat diseases caused by viral infection.
  • the antivirus is, for example, rhinovirus, poliovirus, rotavirus, norovirus, enterovirus, hepatovirus, astrovirus, sapovirus, hepatitis E virus, influenza A / B / C virus, Parainfluenza virus, mumps virus, measles virus, human metapneumovirus, RS virus, nipa virus, Hendra virus, yellow fever virus, dengue virus, Japanese encephalitis virus, West Nile virus, hepatitis B/C virus, Eastern and Western hemp encephalitis virus, o'nyong-nyong virus, rubella virus, Lassa virus, junin virus, Machupo virus, guanarito virus, sa Via virus, Crimea Congo hemorrhagic fever virus, Sandfly fever, Hantavirus, Sin Nombre virus, Rabies virus, Ebola virus, Marburgvirus, bat lyssavirus, Human T Cellular leukemia virus, human immunodeficiency virus, human
  • the active ingredient is alloferon
  • the fibroin may act as a carrier.
  • fibroin acts as a carrier, it can be easily decomposed and excreted from the body by enzymatic action after alloferon is favored.
  • Another aspect provides a cosmetic composition for enhancing immunity comprising the alloperon-fibroin complex as an active ingredient.
  • the cosmetic composition can prevent or treat skin infections caused by dermis or viruses.
  • the composition may further include a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the pharmaceutically acceptable carrier is, for example, lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, starch, gum acacia, calcium phosphate, alginate, gelatin, calcium silicate, microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone. , cellulose, water, syrup, methyl cellulose, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, and mineral oil, but not limited thereto.
  • the pharmaceutical composition may further include a lubricant, a wetting agent, a sweetening agent, a flavoring agent, an emulsifying agent, a suspending agent, a preservative, and the like.
  • the pharmaceutical composition can be used orally, parenterally, or as a skin patch, and in the case of parenteral administration, it can be administered by intravenous injection, subcutaneous injection, intramuscular injection, intraperitoneal injection, transdermal administration, mucosal administration, and eye drop administration. and a suitable dosage can be appropriately adjusted under the guidance of a specialist in consideration of factors such as formulation, administration mode, patient's age, weight, sex, pathological condition, food, administration time, administration route, excretion rate, and response sensitivity .
  • the pharmaceutical composition may be provided in various dosage forms depending on the purpose of administration, for example, in the form of a spray, aerosol, solution, suspension, syrup or emulsion in oil or aqueous medium, extract, powder, powder, granule , tablets or capsules, but are not limited thereto.
  • a spray or an aerosol it may additionally contain a propellant such as chlorofluorohydrocarbon, nitrogen, propane/butane or dimethyl ether, but is not limited thereto.
  • the health functional food examples include, but are not limited to, nutritional supplements, nutritional supplements, pharmaceutical food, health food, nutraceutical, designer food, food additives, and the like.
  • the complex is used as a food additive, the food includes meat, sausage, bread, chocolate, candy, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gum, dairy products including ice cream, various soups, beverages, tea , drinks, alcoholic beverages, and vitamin complexes, but are not limited thereto.
  • the cosmetic composition may be in the form of skin, serum, lotion, emulsion, cream, essence, lotion, foundation, pack, soap, surfactant-containing cleansing, spray, or powder, but is not limited thereto.
  • the cosmetic composition may further include an appropriate carrier to enhance the skin absorption rate and improve the feeling of use.
  • an appropriate carrier to enhance the skin absorption rate and improve the feeling of use.
  • the cosmetic composition is a paste, cream, or gel
  • the cosmetic composition is a powder or a spray
  • lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used as a carrier component, and in particular, in the case of a spray, additional chlorofluorohydrocarbon, propane/ propellants such as butane or dimethyl ether, but are not limited thereto.
  • a solvent, solubilizer or emulsifier may be used as a carrier component, for example, water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, 1,3-butylglycol oil, glycerol fatty esters, fatty acid esters of polyethylene glycol or sorbitan, but not limited thereto.
  • the cosmetic composition is a suspension
  • a liquid diluent such as water, ethanol or propylene glycol
  • a suspending agent such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, microcrystalline Cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar or tracanth may be used, but is not limited thereto.
  • fatty alcohol, fatty acid glyceride, fatty acid diethanolamide, vegetable oil, lanolin derivative or ethoxylated glycerol fatty acid ester may be used, but is not limited thereto.
  • Another aspect is to obtain fibroin; forming a complex by mixing the fibroin and alloferon; It provides a method for preparing an alloperon-fibroin complex comprising the step of washing the formed complex with an organic solvent.
  • the fibroin and alloferon may be mixed after each preparation as an aqueous solution, and the aqueous solution may refer to dissolving fibroin or alloferon in a solution such as water, saline, or buffer.
  • alloferon and fibroin may be mixed in a vacuum state in order to prevent the peptide from being denatured or degraded due to a prolonged preparation time, for example, about 5 to 7 hours in a vacuum of 1 to 4 bar. It may be deposited at 10 to 20 °C so that it can be mixed and reacted during the reaction.
  • the organic solvent may be ethanol, propanol, isopropanol, acetone, acetonitrile, chloroform, or a combination thereof, but is not limited thereto.
  • a drying step of removing the organic solvent to increase purity may be included.
  • a sublimation method may be used, and storage stability may be further improved while the organic solvent is removed by selectively mixing a freeze-drying agent and freeze-drying.
  • the alloferon-fibroin complex according to an aspect has high stability in an aqueous phase including serum, so it can be administered into the body, and a high effect can be obtained compared to the dosage. Therefore, alloferon can be used as a pharmaceutical, health functional food, or cosmetic composition.
  • 1 is a schematic diagram of the peptide structure of the alloperon-fibroin complex.
  • FIG. 2 is a graph showing the T lymphocyte cytotoxic activity of the present invention against cancer cells.
  • FIG. 3 is a graph showing the NK cell cytotoxic activity of the present invention against cancer cells.
  • FIG. 4 is a graph showing the antiviral activity of the present invention against human influenza virus A.
  • 5 is a graph showing the initial immune effect of the virus of the present invention on human influenza virus A.
  • FIG. 6 is a graph showing the stability in serum of the present invention.
  • the silk fibroin silk was dried in a hood for 12 hours, dissolved in 9.3M LiBr solution at 60° C. for 4 hours, and distilled water for 3 days at room temperature using a Slide-a-Lyzer dialysis cassette (MWCO-3500). Dialysis was performed with 6 replacements. A silk fibroin protein solution of high purity was obtained by centrifuging the silk fibroin solution obtained through the dialysis process at 5° C. to remove undissolved residues.
  • the obtained silk fibroin had a purity of about 99% and a yield of about 93%.
  • the obtained silk fibroin solution was prepared as an aqueous solution with a concentration of 2 mM. Alloferon was synthesized with the sequence shown in Table 1 below by the de novo peptide synthesis method, and was prepared as an aqueous solution having a concentration of 0.2 to 20 mM, respectively.
  • Alloferon 1 His-Gly-Val-Ser-Gly-His-Gly-Gln-His-Gly-Val-His-Gly Alloferon 2 (SEQ ID NO: 2) Gly-Val-Ser-Gly-His-Gly-Gln-His-Gly-Val-His-Gly Alloferon 3 (SEQ ID NO: 3) Ser-Gly-His-Gly-Gln-His-Gly-Val Alloferon 4 (SEQ ID NO: 4) Val-Ser-Gly-His-Gly-Gln-His-Gly-Val-His Alloferon 5 (SEQ ID NO: 5) Gly-His-Gly-Gln-His-Gly-Gly-His-Gly-Gly-His-Gly-Val-His Alloferon 5 (SEQ ID NO: 5) Gly-His-Gly-Gln-His-Gly-Gly-His
  • Each prepared fibroin and alloferon were mixed, and the complex was allowed to form for 6 hours in a vacuum of 4 bar or less at room temperature. After the complex formation reaction, it was washed 2-3 times with 100% ethyl alcohol and dissolved in water to confirm the structure of the complex.
  • the mixing ratio of fibroin and alloferon used in the complex formation reaction is shown in Table 2 below. The indicated ratio is the molar ratio of alloferone to 1 mole of fibroin, and the molar ratio was adjusted while the fibroin concentration was fixed at 2 mM and the concentration of alloperon was adjusted. After washing with ethyl alcohol, the sample dissolved in water is separated by SDS-PAGE gel electrophoresis, and the case where both proteins are detected by treatment with fibroin antibody and alloferon antibody. 2 shows the degree of formation of the complex.
  • the cytotoxic activity of T lymphocytes against cancer cells was confirmed by using Example 1 containing alloferon 1 in Preparation Example 1 and having a molar ratio of fibroin and alloperon of 2:1.
  • the spleen was isolated from the immunized BALB/c mice, homogenized using a syringe in a Petri dish, suspended in purified water, filtered using a 70 ⁇ m nylon filter, and centrifuged to obtain spleen cells.
  • the obtained spleen cells were treated with a random sequence of peptides having no homology with alloferon (negative control), alloferon 1 peptide, and Example 1 at 0.5 ng/ml to 500 ng/ml, respectively, and incubated for 1 hour,
  • the cancer cells were treated with K562-s cells, and the apoptosis rate (%) of the cancer cells was measured and shown in Table 3 and FIG. 2 below.
  • Example 1 (Mean value, p ⁇ 0.001) As a result, in Example 1, the cancer cell death rate according to the activity of T lymphocytes was significantly higher than in the case of treatment with alloferon alone.
  • Example 1 the ability to kill cancer cells by NK cell activity was evaluated.
  • PBMCs peripheral blood mononuclear cells
  • NK cells were isolated using a flow cytometer, and then, a peptide of a random sequence with no homology to alloferon (negative control), an alloferon 1 peptide, and Example 1 were added to 0.5 ng/ml to 500 ng/ml, respectively.
  • the cancer cell K562-s cells were treated with the NK cells to measure the apoptosis rate (%) of the cancer cells, and are shown in Tables 4 and 3 below.
  • INF-a2b was treated.
  • Example 1 confirmed that the cancer cell death rate according to the NK activity was significantly higher than that in the case of treatment with alloferon alone, and was almost similar to the positive control, INF-a2b.
  • Antiviral activity against human influenza virus A was evaluated using Example 1 above.
  • mice were prepared and anesthetized, and then infected with human antiviral A through the nasal mucosa, and 20 mice were prepared according to each treatment group and concentration, and a peptide of a random sequence having no homology to alloferon (negative control group) ), Alloperon 1 peptide, and Example 1 were administered intraperitoneally at 125 ⁇ g/kg and 1,250 ⁇ g/kg, respectively. Then, the number of individuals who died while watching for 10 days were counted and shown in Table 5 and FIG. 4 below. To the positive control group, 1 mg of rimantadine, a flu treatment, was administered.
  • Example 1 confirmed that the antiviral effect was significantly superior to that of treatment with alloferon alone, and was almost at a level similar to that of rimantadine, a positive control.
  • mice were prepared and anesthetized, and then infected with human antiviral A through the nasal mucosa, and 8 mice were prepared according to each treatment group and concentration, and a peptide of a random sequence having no homology to alloferon (negative control group) ), Alloperon 1 peptide, and Example 1 were administered intraperitoneally at 125 ⁇ g/kg, respectively. Then, after 24 hours, blood was collected and interferon (IFN) abundance (unit) was measured and shown in Table 6 and FIG. 5 below. To the positive control group, 1 mg of cycloferon was administered.
  • IFN interferon
  • Example 1 confirmed that the initial immune effect against the virus was significantly superior to that of the case of treatment with alloferon alone, and was superior to that of cycloferon, a positive control.
  • Test Example 5 Immune inducing ability according to the structure of alloferon
  • Example 1 In order to confirm the difference in immunity inducing ability according to the structure of alloferon, a complex was prepared as in Example 1 using alloferon as shown in Table 1, and the complex containing alloferon 1 to 5 was used in Examples 1 to 5, respectively. named as Then, as in Test Example 2, the cytotoxic activity of NK cells against cancer cells was evaluated and shown in Table 7 below.
  • Example 1 was administered once intraperitoneally at a concentration of 500 to 6,000 mg/kg, and observed for 10 days.
  • the pharmacotoxic dose ratio was estimated to be 1>1,200,000 (50 ⁇ g).
  • Example 1 was administered at 0.5, 5, and 50 mg/kg, respectively, once every two days for 90 days to induce anaphylactic shock, immune complex reaction, and adipocyte degranulation. of indirect reactions, conjunctive probes, and delayed hypersensitivity reactions were observed.
  • Example 1 was subcutaneously injected at concentrations of 0.5, 5, and 50 mg/kg, and the born pups were observed.
  • the DNA SOS reaction according to the AMES test Bacterial reverse mutation test, reverse mutation test was evaluated using bacteria to determine whether the complex of the present invention has a risk of inducing mutation.
  • Salmonella typhimurium S. typhimurium
  • Escherichia coli PQ37
  • Salmonella typhimurium and Escherichia coli PQ37 strains were prepared, treated at a concentration of 0.5 to 500 ⁇ g/dish, and cultured for 48 hours in a medium containing a small amount of histidine, and the number of colonies was counted.
  • Alloperon has low serum stability. Accordingly, it was evaluated whether the complex of the present invention has long-term structural stability compared to alloferon alone.
  • Example 1 had significantly better serum stability than the alloferon alone form.
  • Test Example 8 Evaluation of antiviral activity against various viruses
  • Cossackie A16 virus, Cossackie B3 virus, Cossackie B4 virus and Enterovirus 71 (EV71), as herpes virus herpes simplex types 1 and 2 (HSV 1/2, VR- 734, 1383) and herpes zoster (HZV) (VR-1367DQ) were purchased from the American Type Culture Collection (ATCC).
  • As enteroviruses, Cossackie A16 virus (A16), Cossackie B3 virus (B3), Cossackie B4 virus (B4) and Enterovirus 71 (EV71) were propagated and cultured in Vero cells, and herpes virus in NIH3T3-E1 cells. Virus titer was measured to calculate a virus solution corresponding to TCID50.
  • each cultured cell 2 ⁇ 10 4 each was placed in each well of a 96-well plate and cultured for 24 hours. After 24 hours, the culture supernatant from each well was removed, and 90 ⁇ l of each virus solution diluted to TCID 50 was put into each well, and then Example 1, Alloperon 1 peptide and the control were each added at a concentration of 50 ng/ml. It was diluted in 10 ⁇ l of the medium mixture and administered to each well, and the virus proliferation inhibitory ability was measured after 3 days.
  • the virus proliferation inhibitory ability was measured according to the method presented in Patent Registration No. 682069 invented by Kwon Doo-han et al. After completion of the virus infection test, 100 ⁇ l of 10% trichloroacetic acid (TCA) was added to each well, left at 4° C. for 1 hour, and washed several times with distilled water. After drying at room temperature, 100 ⁇ l of a 0.4% (w/v) SRB (sulforhodamine B) solution dissolved in 1% (v/v) acetic acid was added and stained for 30 minutes. SRB staining solution not bound to cells was washed several times with 1% (v/v) acetic acid and then dried again.
  • TCA trichloroacetic acid
  • Example 1 was 88% in cosakivirus A16 type, 82% in B3 type, 79% in B5, 84% in enterovirus EV71, 90% in herpes simplex type 1, and herpes simplex.
  • Rex type 2 showed 94% infection inhibition and herpes zoster 98%, which was 5 to 60 times superior to the negative control group and 2 to 4 times more effective than Alloperon 1 treatment.
  • the present invention relates to an alloperon complex having long-term stability inducing immune activity, and has potential for use in health functional food related industries.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

본 발명은 알로페론-피브로인 복합체에 관한 것으로, 피브로인과 복합체를 이루어 알로페론의 혈청을 포함한 수용상 내 안정성이 증가하여 낮은 함량으로 체내 투여되어도 우수하고 장기적인 면역 증진 효과를 갖는다.

Description

면역활성을 유도하는 장기 안정성을 가지는 알로페론 복합체
본 발명은 알로페론과 피브로인의 복합체에 관한 것으로서, 알로페론이 피브로인과 복합체를 이루어 알로페론의 혈청을 포함한 수용상 내 안정성이 개선되고 면역증진 활성이 보다 우수한 특징을 갖는다.
파리 유출 단계를 거치는 곤충은 항세균 또는 항진균 펩티드를 포함하는 여러 종류의 면역 유발 분자의 생산을 통하여 미생물 감염에 대응하는 것으로 알려져 있다. 알로페론(alloferon)은 이러한 감염된 곤충으로부터 분리된 펩티드를 연구하는 과정에서 발견된 면역조절 단백질이다. 알로페론은 항바이러스 및 항암효과를 나타내는 것으로 알려져 있는데, 구체적으로 2B4와 같은 NK 세포 활성 수용체의 발현을 증가시켜 NK 세포의 세포 살해 활성을 증가시키고, IFN-γ와 TNF-α의 생산을 증가시키고, NK 세포로부터의 과립 엑소시토시스(exocytosis)를 증가시켜 암세포 살해 활성을 증가시킨다. (Bae et al., Immunobiology, Vol. 218, Issue 8, August 2013, 1026-1033). 알로페론은 몇 가지의 아미노산 서열을 갖고, 각 아미노산 마다 체내 활성 효과 및 정도는 다르지만 공통적으로 면역 조절 기능을 갖는 것으로 알려져 있다.
그러나, 알로페론은 펩티드이므로 혈청을 포함한 수용상 내 안정성이 낮아 투여 후 빠른 시간 내 비활성화 되어 실제 기대할 수 있는 효과에 비해 과량으로 사용하여야 하는 문제점을 갖는다. 물, 생리식염수 및 혈청을 포함하는 수용상은 펩티드의 구조를 변형시켜 활성을 저해할 수 있으며, 특히 혈청의 경우 포함된 단백질, 효소, 지질 및 화학성분이 다른 수용상에 비해 월등히 많아 특히 펩티드의 활성을 저해하는 효과가 크다. 따라서 혈청에서 안정한 경우 물과 생리식염수를 포함한 수용상에서 펩티드의 안정성을 높이는 방법일 수 있다. 혈청 내에서 불안정한 알로페론의 단점은 알로페론의 우수한 효능에도 불구하고 의약이나 미용 또는 건강식품 산업에 적용하는데 장벽이 된다.
한국등록특허공보 10-0394864는 알로페론의 면역조절 기능을 개시한다. 그러나 알로페론을 포함한 펩티드의 혈청을 포함한 수용상 내 안정성을 증진시킬 경우 이러한 면역 조절기능을 더욱 증대시킬 수 있을 것이나 알로페론의 혈청을 포함한 수용상 내 안정성을 증가시킬 수 있는 방법은 개시하지 않는다.
본 발명의 일 목적은, 혈청을 포함한 수용상 내 안정성이 증진된 알로페론-피브로인 복합체를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은, 알로페론-피브로인 복합체를 유효성분으로 포함하는 면역증진용 약학적 조성물과 건강기능식품을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은, 알로페론-피브로인 복합체를 유효성분으로 포함하는 항바이러스 약학적 조성물과 건강기능식품을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은, 상기 알로페론-피브로인 복합체를 유효 성분으로 포함하는 면역증진용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은, 알로페론-피브로인 복합체를 제조하는 방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 해결하기 위해, 일 양상은 알로페론 및 피브로인을 포함하는 복합체를 제공한다.
상기 알로페론은 통상적으로 알려진 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드일 수 있다. 알로페론의 아미노산 서열은 예를 들어, 서열번호 5를 포함하는 것으로서, 서열번호 5의 아미노산 서열에서 N-말단 및 C 말단에 각각 0 내지 5 개의 아미노산을 더 포함하는 아미노산 서열로 이루어질 수 있다. 보다 구체적으로, 상기 알로페론은 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 및 서열번호 5로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 또는 이들의 혼합물일 수 있다.
상기 피브로인은 천연 유래 생체물질로서, 누에(Bombyx mori)로 대표되는 견사충의 유충 견사샘에서 합성하는 섬유단백질로 분자 구조는 6개의 소수성 아미노산이 반복적으로 배열된 소수성 부위와 비교적 짧은 친수성 부위의 반복으로 이루어져 있으며, 소수성 부위는 자발적으로 안정화되기 위해 물리적 가교를 통한 베타-시트 구조를 기반으로 하는 단백질 결정구조를 형성할 수 있는 성질을 가지고 있다. 이러한 소수성 부위는 알라닌, 글라이신-알라닌, 글라이신-알라닌-세린과 같은 소수성 아미노산 또는 이러한 아미노산의 짧은 반복구조로 이루어져 있으며,　피브로인　단백질의 pI(isoelectirc point) 값은 약 4이고, 친수성을 띠는 하전된 아미노산은 대부분 N-과 C-말단 쪽에 위치하고 있다.　
상기 알로페론은 알로페론 1 몰당 피브로인 2몰과 복합체를 이룰 수 있다. 알로페론-피브로인 복합체는 정전기적 결합으로 결합된 것일 수 있다.
상기 알로페론-피브로인 복합체는 300 내지 450 kDa일 수 있고, 바람직하게는 350 내지 400 kDa의 분자량을 갖는 것일 수 있다.
상기 알로페론-피브로인 복합체의 표면전하는 음전하로서, 예를 들어 -30 mV 내지 -10 mV, -25 mV 내지 -10 mV, 또는 -20 mV 내지 -15 mV 일 수 있다.
일 구체예에 따른 알로페론-피브로인 복합체는 면역활성을 증진시킬 수 있다. 상기 면역활성의 증진이란, T세포 또는 NK 세포의 세포독성활성을 증진시키는 것을 의미하고, 면역활성 증진에 따라 항바이러스 활성, 항박테리아 활성, 또는 암세포 살상능을 가질 수 있다.
다른 양상은 알로페론-피브로인 복합체를 유효성분으로 함유하는 면역증진용 약학적 조성물을 제공한다.
일 구체예에서, 상기 면역증진용 약학적 조성물은 암을 예방 또는 치료하기 위한 것일 수 있다.
상기 알로페론-피브로인 복합체는 복합체를 이루어도 T 세포 및 NK 세포의 세포살상능을 증진시키는 정도가 알로페론을 단독으로 이용한 경우에 비해 현저하게 우수하고, 그에 따라 우수한 암세포 살상능을 가짐을 확인하였다. 상기 알로페론-피브로인 복합체는 알로페론의 단독 대비 1.2 배 이상, 1.5 배 이상, 2 배 이상 또는 2.5 배 이상의 면역세포의 세포사멸능을 증진시키는 것일 수 있고, 예를 들어, T림프구의 세포사멸 효과를 500 ng/ml 농도를 기준으로 약 3 배 증진시킬 수 있는 것일 수 있다.
또 다른 양상은 상기 알로페론-피브로인 복합체를 유효성분으로 함유하는 면역증진용 건강기능식품을 제공한다.
일 구체예에 따른 알로페론-피브로인 복합체는 혈청을 포함한 수용상 내 안정성이 우수하므로 적은 양으로도 우수한 면역증진 효과를 나타내고, 부작용이 적어 약학적 조성물이나 건강기능식품의 유효성분으로서 적합하다.
또 다른 양상은 상기 알로페론-피브로인 복합체를 유효성분으로 함유하는 항바이러스 약학적 조성물을 제공한다.
또 다른 양상은 상기 알로페론-피브로인 복합체를 유효성분으로 함유하는 항바이러스 건강기능식품을 제공한다.
일 구체예에서, 상기 항바이러스 약학적 조성물 및 건강기능식품을 이용하여, 바이러스 감염으로 인한 질환을 예방하거나 치료할 수 있다.
상기 항바이러스는 예를 들어, 리노바이러스(rhinovirus), 폴리오바이러스, 로타바이러스, 노로바이러스, 엔테로바이러스, 헤파토바이러스, 아스트로바이러스, 사포바이러스, E형 간염 바이러스, A/B/C형 인플루엔자 바이러스, 파라인플루엔자 바이러스, 멈프스 바이러스(mumps virus), 홍역 바이러스, 인간 메타뉴모바이러스, RS 바이러스, 니파 바이러스, 헨드라 바이러스, 황열 바이러스, 뎅기 바이러스, 일본 뇌염바이러스, 웨스트 나일 바이러스, B/C형 간염 바이러스, 동부 및 서부 마 뇌염 바이러스, 오뇽뇽 바이러스(o'nyong-nyong virus), 풍진 바이러스, 랏사 바이러스(Lassa virus), 쥬닌 바이러스(junin virus), 마추포 바이러스(Machupo virus), 구아나리토 바이러스, 사비아 바이러스, 크리미아 콩고 출혈열 바이러스, 모래파리 열(Sandfly fever), 한타바이러스, 신놈부레 바이러스(Sin Nombre virus), 광견병 바이러스, 에볼라바이러스, 마르부르크바이러스(Marburgvirus), 뱃 리사바이러스(bat lyssavirus), 사람 T세포 백혈병 바이러스, 인간면역부전 바이러스, 인간 코로나바이러스, SARS 코로나바이러스, 인간 파보바이러스, 인간 폴리오마바이러스, 인간 파필로마 바이러스, 아데노바이스, 헤르페스 바이러스, 바리셀로바이러스(varicellovirus), 대상포진 바이러스, EB 바이러스, 사이토메갈로바이러스, 천연두 바이러스, 원숭이 폭스바이러스, 우두바이러스, 몰러스시폭스바이러스(molluscipoxvirus) 및 파라폭스바이러스일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 일 구체예에서, 상기 복합체는 인플루엔자 A 바이러스(Influenza A viruses), 헤르페스심플렉스바이러스, 헤르페스조스터바이러스, 코사키바이러스 및 엔테로바이러스에 의한 감염증을 예방 또는 치료하기 위한 것일 수 있다.
상기 알로페론-피브로인 복합체를 포함하는 약학적 조성물, 건강기능식품, 또는 화장료 조성물에서, 유효 성분은 알로페론이고, 피브로인은 담체로서 작용하는 것일 수 있다. 피브로인이 담체로서 작용하는 경우, 알로페론을 유리한 후 체내에서 효소 작용에 의해 쉽게 분해되어 배설될 수 있다.
또 다른 양상은, 상기 알로페론-피브로인 복합체를 유효 성분으로 포함하는 면역증진용 화장료 조성물을 제공한다. 상기 화장료 조성물은 진피균이나 바이러스에 의한 피부 감염증을 예방 또는 치료할 수 있다.
상기 조성물을 약학적 조성물로 이용하는 경우, 상기 조성물은 약학적으로 허용되는 담체를 더 포함할 수 있다. 상기 약학적으로 허용되는 담체는 예를 들어, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일과 같은 통상적으로 이용되는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 상기 약학적 조성물은 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.
상기 약학적 조성물은 경구, 비경구 투여 또는 피부패치로 사용할 수 있으며, 비경구 투여인 경우에는 정맥내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 경피 투여, 점막 투여 및 점안 투여 등으로 투여할 수 있고, 적합한 투여량은 제형, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들을 고려하여 전문가의 지도하여 적절히 조절될 수 있다.
상기 약학적 조성물은 투여 목적에 따라 다양한 제형으로 제공될 수 있고, 예를 들어, 스프레이, 에어로졸, 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액, 시럽제 또는 유화액 형태이거나, 엑스제, 산제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제가 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 조성물이 스프레이 또는 에어로졸인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 질소, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 건강기능식품의 예로는, 영양 보조제, 영양제, 파머푸드(pharmafood), 건강식품, 뉴트라슈티칼(nutraceutical), 디자이너 푸드, 식품 첨가제 등이 있으나 이에 제한되지 않는다. 상기 복합체가 식품 첨가제로 사용되는 경우, 식품으로는, 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으나 이에 제한되지 않는다.
상기 화장료 조성물은 스킨, 세럼, 로션, 에멀전, 크림, 에센스, 화장수, 파운데이션, 팩, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 스프레이, 또는 파우더의 제형일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 화장료 조성물은 피부 흡수 속도를 증진시키고 사용감을 개선하기 위해 적절한 담체를 더 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 화장료 조성물이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등을 더 포함할 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
상기 화장료 조성물이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 화장료 조성물이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용될 수 있고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있으나 이에 제한되지 않는다.
상기 화장료 조성물이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
상기 화장료 조성물이 클렌징용인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
또 다른 양상은 피브로인을 수득하는 단계; 상기 피브로인과 알로페론을 혼합하여 복합체를 형성하는 단계; 상기 형성된 복합체를 유기용매로 세척하는 단계를 포함하는 알로페론-피브로인 복합체의 제조 방법을 제공한다.
상기 피브로인과 알로페론은 각각 수성용액으로 제조한 후 혼합할 수 있고, 수성용액이란 물, 식염수, 완충액 등의 용액에 피브로인 또는 알로페론을 용해시킨 것을 의미할 수 있다. 복합체를 형성하는 단계에서는 제조시간이 길어져 펩티드가 변성되거나 분해되지 않도록 하기 위해, 알로페론과 피브로인을 진공 상태에서 혼합할 수 있고, 예를 들어, 1 내지 4 bar의 진공상태에서 약 5 - 7 시간 동안 혼합하고 반응할 수 있도록 10 내지 20 ℃에서 예치하는 것일 수 있다.
상기 복합체를 형성한 후에는 복합체를 형성하지 않은 알로페론 및 피브로인을 제거하기 위해 유기용매로 세척할 수 있다. 상기 유기용매는 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 아세톤, 아세토니트릴, 클로로포름 또는 이들의 조합일 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
형성된 복합체를 세척한 후에는, 순도를 높이기 위해 유기용매를 제거하는 건조 단계를 포함할 수 있다. 상기 건조 단계는 승화법을 이용할 수 있고, 선택적으로 동결건조제를 혼합하고 동결건조하여 유기용매를 제거하면서 보관안정성을 더욱 높일 수 있다.
일 양상에 따른 알로페론-피브로인 복합체는 혈청을 포함한 수용상 내 안정성이 높아서 체내에 투여 가능하고, 투여량에 비해 높은 효과를 얻을 수 있다. 따라서 알로페론을 의약, 건강기능식품, 또는 화장료 조성물로 사용 가능하도록 한다.
도 1은 알로페론-피브로인 복합체의 펩티드 구조를 도식화한 것이다.
도 2는 암세포에 대한 본 발명의 T림프구 세포독성활성을 보여주는 그래프이다.
도 3은 암세포에 대한 본 발명의 NK세포 세포독성활성을 보여주는 그래프이다.
도 4는 인간 인플루엔자 바이러스 A에 대한 본 발명의 항바이러스 활성을 보여주는 그래프이다.
도 5는 인간 인플루엔자 바이러스 A에 대한 본 발명의 바이러스 초기 면역 효과를 보여주는 그래프이다.
도 6은 본 발명의 혈청 내 안정성을 보여주는 그래프이다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예 등을 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 실시예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 실시예들은 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
[제조예 1] 알로페론-피브로인 복합체의 제조
누에고치를 잘게 조각낸 후, 0.02 M 탄산나트륨 수용액으로 90℃에서 20 분간 정련하고, 표면에 부유하는 것을 제거하고, 20 분간 세척하는 단계를 2회 수행한 후 세레신과 탄산나트륨을 제거하여 실크 피브로인을 얻었다. 상기 실크 피브로인 견사를 12 시간 동안 후드에서 건조시키고, 9.3M LiBr 용액에서 60℃에서 4 시간 동안 용해시킨 후, Slide-a-Lyzer dialysis cassette (MWCO-3500)를 이용하여 상온에서 3일 동안 증류수를 6 번 교체하며 투석하였다. 투석 과정을 통해 얻은 실크 피브로인 용액을 5 ℃에서 원심분리하여 용해되지 않은 잔여물을 제거함으로써 높은 순도의 실크 피브로인 단백질 용액을 수득하였다. 수득한 실크 피브로인은 순도가 약 99%이고, 수득율은 약 93% 정도였다. 수득한 실크 피브로인 용액은 2mM 농도의 수용액으로 준비하였다. 알로페론은 de novo peptide synthesis 방법으로 하기의 표 1과 같은 서열로 합성하고, 각각 0.2 내지 20 mM 농도의 수용액으로 준비하였다.
이름 서열
알로페론 1(서열번호 1) His-Gly-Val-Ser-Gly-His-Gly-Gln-His-Gly-Val-His-Gly
알로페론 2(서열번호 2) Gly-Val-Ser-Gly-His-Gly-Gln-His-Gly-Val-His-Gly
알로페론 3(서열번호 3) Ser-Gly-His-Gly-Gln-His-Gly-Val
알로페론 4(서열번호 4) Val-Ser-Gly-His-Gly-Gln-His-Gly-Val-His
알로페론 5(서열번호 5) Gly-His-Gly-Gln-His-Gly
각 준비된 피브로인과 알로페론을 혼합하고 상온에서 4 bar 이하의 진공 상태에서 6 시간 동안 복합체가 형성되도록 하였다. 복합체 형성 반응 후 100 % 에틸알코올로 2~3회 세척하고, 물에 녹여서 복합체의 구조를 확인하였다. 복합체 형성 반응에서 사용된 피브로인과 알로페론의 혼합비는 하기의 표 2와 같다. 표시된 비율은 피브로인 1 몰에 대한 알로페론의 몰비로서, 피브로인 농도를 2mM로 고정하고 알로페론의 농도를 조절하면서 몰비를 맞추었다. 에틸알코올로 세척 후 물에 녹인 샘플을 SDS-PAGE 겔 전기영동하여 분리하고, 피브로인 항체와 알로페론 항체를 처리하여 두 단백질이 모두 검출되는 경우를 구분함으로써 복합체가 형성되었는지 여부를 확인하여 하기의 표 2에 복합체의 형성 정도를 나타내었다.
1:10 1:5 1:2 1:1 1:0.5 1:0.1
알로페론1 - - - + +++ ++
알로페론2 - - - - +++ +
알로페론3 - - - + +++ -
알로페론4 - - - - +++ -
알로페론5 - - - - ++ -
( - : 형성되지 않음, + : 형성정도 25%, ++ : 형성정도 50%, +++ : 형성정도 75% 이상)그 결과, 피브로인:알로페론의 몰비가 1:0.5인 경우 가장 많은 복합체가 형성되므로, 피브로인 2 몰에 대해 알로페론 1몰로 복합체를 형성함을 확인하였다.
[시험예 1] T림프구의 암세포에 대한 세포독성활성에 대한 효과 확인
상기 제조예 1 중 알로페론 1을 함유하고 피브로인 및 알로페론의 몰비가 2:1인 것을 실시예 1로하여 T림프구의 암세포에 대한 세포독성활성을 확인하였다.
구체적으로, 면역화된 BALB/c 마우스로부터 비장을 분리하고 페트리 디쉬에 시린지를 이용하여 균일화하고, 정제수에 현탁한 후 70㎛ 나일론 필터를 이용해 여과하고 원심분리하여 비장 세포를 얻었다. 수득된 비장 세포에 알로페론과 상동성이 없는 랜덤서열의 펩티드(음성 대조군), 알로페론 1 펩티드, 및 실시예 1을 각각 0.5 ng/ml 내지 500 ng/ml로 처리하고 1 시간 인큐베이션 한 후, 암세포인 K562-s 세포에 처리하고 암세포의 세포 사멸율(%)을 측정하여 하기의 표 3 및 도 2에 나타내었다.
농도(ng/ml) 0 0.05 0.5 5 50 500
음성대조군 21.3 18.2 21.74 20.54 13.5 10.5
알로페론 1 - 35.2 39.3 34.3 37.4 20.3
실시예 1 - 42.5 48.7 54.3 60.1 65.2
(Mean value, p<0.001)그 결과, 실시예 1은 알로페론만 처리한 경우 보다 T림프구의 활성에 따른 암세포 사멸율이 현저히 높았다.
[시험예 2] 말초혈액림프구의 NK세포 활성 유도능 확인
상기 실시예 1을 이용하여 NK 세포 활성에 의한 암세포 사멸능을 평가하였다.
구체적으로, 사람의 혈액을 채취하여 원심분리하고 말초 혈액 단핵세포(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)를 분리하였다. 그런 다음 유세포 분석기를 이용하여 NK 세포만을 분리한 다음, 알로페론과 상동성이 없는 랜덤서열의 펩티드(음성 대조군), 알로페론 1 펩티드, 및 실시예 1을 각각 0.5 ng/ml 내지 500 ng/ml로 처리하고 1 시간 인큐베이션한 후, 암세포인 K562-s 세포에 상기 NK 세포를 처리하여 암세포의 세포 사멸율(%)을 측정하여 하기의 표 4 및 도 3에 나타내었다. 양성대조군으로는 INF-a2b를 처리하였다.
농도(ng/ml) 0 INF-a2b 0.05 0.5 5 50 500
음성대조군 27.2 65.2 23.5 24.6 22.4 27.5 26.3
알로페론 1 - - 36.8 42.3 47.5 48.9 52.4
실시예 1 - - 56.3 68.2 70.5 74.3 68.3
(Mean value, p<0.001)그 결과, 실시예 1은 알로페론만 처리한 경우 보다 NK 활성에 따른 암세포 사멸율이 현저히 높고, 양성대조군인 INF-a2b와 거의 유사한 수준임을 확인하였다.
[시험예 3] 항바이러스 활성 확인
상기 실시예 1을 이용하여 인간 인플루엔자 바이러스 A에 대한 항바이러스 활성을 평가하였다.
구체적으로, BALB/c 마우스를 준비하고 마취한 다음 인간 항바이러스 A를 비점막을 통해 감염시키고, 각 처리 군 및 농도에 따라 20마리씩 준비하고, 알로페론과 상동성이 없는 랜덤서열의 펩티드(음성 대조군), 알로페론 1 펩티드, 및 실시예 1을 각각 125㎍/kg 및 1,250㎍/kg 으로 복강 투여하였다. 그런 다음, 10일 간 지켜보면서 사망한 개체 수를 세어 하기의 표 5 및 도 4에 나타내었다. 양성대조군에는 독감 치료제인 리만타딘 1mg을 투여하였다.
농도(㎍/kg) 0 125 1,250 리만타딘
(50mg/kg)
음성대조군 20 20 20 3
알로페론 1 - 17 7 -
실시예 1 - 8 4 -
(사망한 개체 수)그 결과, 실시예 1은 알로페론만 처리한 경우 보다 항바이러스 효과가 현저히 우수하고, 양성대조군인 리만타딘과 거의 유사한 수준임을 확인하였다.
[시험예 4] 바이러스 초기 면역 효과 확인
상기 실시예 1을 이용하여 인간 인플루엔자 바이러스 A에 대한 초기 면역 효과를 확인하였다.
구체적으로, BALB/c 마우스를 준비하고 마취한 다음 인간 항바이러스 A를 비점막을 통해 감염시키고, 각 처리 군 및 농도에 따라 8마리씩 준비하고, 알로페론과 상동성이 없는 랜덤서열의 펩티드(음성 대조군), 알로페론 1 펩티드, 및 실시예 1을 각각 125㎍/kg 으로 복강 투여하였다. 그런 다음, 24시간 후 혈액을 채취하여 인터페론(IFN) 존재량 (unit)을 측정하여 하기의 표 6 및 도 5에 나타내었다. 양성대조군에는 사이클로페론 1mg을 투여하였다.
음성대조군 사이클로페론 알로페론 1 실시예 1
IFN (Unit) 7.48 56.48 58.74 74.38
(Mean value, p<0.001)그 결과, 실시예 1은 알로페론만 처리한 경우 보다 바이러스에 대한 초기 면역 효과가 현저히 우수하고, 양성대조군인 사이클로페론 보다 더 우수함을 확인하였다.[시험예 5] 알로페론 구조에 따른 면역 유도능 확인
알로페론 구조에 따른 면역 유도능의 차이를 확인하기 위해, 표 1과 같은 알로페론을 이용하되 실시예 1과 같이 복합체를 제조하고, 알로페론 1 내지 5를 포함하는 복합체를 각각 실시예 1 내지 5로 명명하였다. 그런 다음 시험예 2와 같이 NK세포의 암세포에 대한 세포독성활성을 평가하여 하기의 표 7에 나타내었다.
Sample 음성대조군 IFN-a2b 실시예 1 실시예 2 실시예 3 실시예 4 실시예 5
세포사멸능 (%) 21.4 43.2 48.3 46.8 65.1 42.1 39.5
(N=3, Mean value, p<0.001)그 결과, 모든 알로페론-피브로인 복합체가 음성 대조군 보다 우수하고, 양성대조군과는 유사하거나 보다 우수한 면역 유도능을 가짐을 확인하였다.
[시험예 6] 알로페론-피브로인 복합체의 독성 평가
(1) 급성독성 평가
본 발명의 복합체가 체내에서 급성독성을 갖는지 여부를 마우스를 이용해 평가하였다.
구체적으로, BALB/c 마우스를 각 농도 별로 다섯 마리 준비하고 실시예 1을 500~6,000mg/kg 농도로 복강 단 회 투여하고, 10일간 지켜보았다. 그 결과, 가장 높은 투여량을 포함한 어떠한 투여량에서도 폐사하지 않았고, 성장 장애, 식이 장애, 뇌의 구조 변화, 주입 부위의 괴사, 내분비기관의 변화 등이 관찰되지 않았다. 동물 시험 결과, 약리독성 용량비는 1>1,200,000 (50㎍)으로 평가되었다.
(2) 아급성 및 만성독성 평가
본 발명의 복합체가 체내에서 아급성 또는 만성독성을 갖는지 여부를 마우스를 이용해 평가하였다.
구체적으로, BALB/c 마우스를 각 농도 별로 다섯 마리 준비하고 실시예 1을 각각 0.5, 5, 및 50 mg/kg로 90일 동안 이틀에 한 번씩 투여하여 아나필락시스 쇼크, 면역복합반응, 지방세포탈과립화의 간접적 반응, 결막탐색자(conjunctive probe), 및 지연성 과민증 반응을 관찰하였다.
그 결과, 90일 동안 폐사한 시험 동물은 없었고, 성장 장애, 식이 장애, 직장의 온도, 검안(점막표면상태 및 눈의 형태), 신경정신(흥분한계치, 자발적 운동활성), 심혈관(심장수축기 동맥압, 심장박동율), 간, 신장(오줌량), 혈액학적 지수(hemogram, leukocyte 조성,coagulogram), 말초혈액의 생화학적지수(단백질, 요소, 크레아틴, 포도당, 지질, 콜레스테롤, 빌리루빈, Alp, Alk, 전해질), 혈액형성지수, 병리학 및 조직학(심장, 폐, 기관지, 위, 간, 비장, 신장, 뇌, 정소, 난소)적으로 개체기능의 음성적 변화가 관찰되지 않았다. 또한 치료 용량의 10 배 및 100 배에 해당하는 용량에서도 어떠한 징후가 관찰되지 않았다.
(3) 배아 독성
본 발명의 복합체가 배아독성을 갖는지 여부를 마우스를 이용해 평가하였다.
구체적으로, 임신한 BALB/c 마우스를 각 농도 별로 세 마리 준비하고 실시예 1을 0.5, 5, 및 50 mg/kg의 농도로 피하 주사하고, 출산한 새끼를 관찰하였다.
그 결과, 모든 투여 군에서 출산한 새끼가 정상인 것을 확인하였다.
(4) 돌연변이 유발성
본 발명의 복합체가 돌연변이를 유발할 위험이 있는지 박테리아를 이용하여 AMES 시험(Bacterial reverse mutation test, 복귀돌연변이시험)에 따른 DNA SOS반응을 평가하였다.
구체적으로, 살모넬라 티피무리움(S. typhimurium)과 대장균(PQ37) 균주를 준비하고, 0.5~500 ㎍/dish의 농도로 처리한 후 소량의 히스티딘을 포함하는 배지에서 48 시간 동안 배양하고, 콜로니 수를 카운팅하였다.
그 결과 각 농도별로 3 회 테스트하였으나 콜로니가 발생한 배지가 없는 것을 확인함으로써, 돌연변이가 발생한 시험군은 없음을 확인하였다.
[시험예 7] 구조 안정성 평가
알로페론은 혈청 내 안정성이 낮다. 이에, 단독의 알로페론과 비교하여 본 발명의 복합체가 장기적으로 구조 안정성을 갖는지 평가하였다.
구체적으로, 인간혈청 10ml에 알로페론과 상동성이 없는 랜덤서열의 펩티드(음성 대조군), 알로페론 1 펩티드, 및 실시예 1을 각각 50 ng/ml로 녹이고, 동적 광산란법을 이용하여 입자의 크기를 측정하였다(0시간). 그런 다음 상기 각 샘플을 37℃ 5%, CO2 환경에서 1, 3, 5 및 7일 동안 방치 후 해당 시간마다 동적 광산란법을 이용하여 입자 크기 변화를 측정하였다. 각 샘플은 6개씩 평가하였고, 그 평균을 내어 혈청 첨가 직후의 입자 크기를 100%로 하고 이를 기준으로 입자의 크기를 %로 하기의 표 8 및 도 6에 나타내었다.
처리 일수 0시간 1일 3일 5일 7일
음성대조군 100 5 3 0 0
알로페론 1 100 7 3 0 0
실시예 1 100 93 87 88 54
그 결과, 실시예 1의 경우 알로페론 단독 형태 보다 현저하게 우수한 혈청 안정성을 가짐을 확인하였다.[시험예 8] 다양한 바이러스에 대한 항바이러스 활성 평가
인플루엔자바이러스 외에 다양한 바이러스에 대해 면역 활성 유도에 의한 항바이러스 효과를 가질 수 있는지 평가하였다.
항바이러스 활성 분석에 사용된 엔테로바이러스로서는 코사키 A16 바이러스, 코사키 B3 바이러스, 코사키 B4 바이러스 및 엔테로바이러스 71(EV71), 헤르페스 바이러스로서 헤르페스 심플렉스 타입 1 및 2 (HSV 1/2, VR-734, 1383), 헤르페스조스터(HZV) (VR-1367DQ)는 ATCC(American Type Culture Collection)에서 구입하였다. 엔테로바이러스로서 코사키 A16 바이러스(A16), 코사키 B3 바이러스(B3), 코사키 B4 바이러스(B4), 엔테로바이러스 71(EV71)은 Vero 세포, 헤르페스 바이러스는 NIH3T3-E1 세포에서 증식 배양하고 각각의 바이러스 역가를 측정하여 TCID50에 해당하는 바이러스 용액을 산출하였다.
바이러스 증식 억제능을 측정하기 위해서, 각 배양 세포 2 × 104개를 96 웰 플레이트의 각 웰에 넣고 24 시간 배양하였다. 24 시간 후에 각 웰의 배양 상등액을 제거하고, TCID 50이 되도록 희석한 각 바이러스 용액 90 ㎕을 각 웰에 넣은 다음, 상기 실시예1, 알로페론1 펩티드 및 대조군을 각각 50 ng/ml의 농도로 배지 혼합액 10 ㎕에 희석하여 각 웰에 투여하고 3일 이후 바이러스 증식 억제능을 측정하였다.
바이러스 증식 억제능 측정은 권두한 등이 발명한 등록 특허 제682069호에 제시된 방법에 따라 실시하였다. 바이러스 감염시험이 종료된 후에 각 웰에 10% TCA(trichloroacetic acid)를 100㎕씩 첨가한 후 1 시간 동안 4℃에 방치하고 증류수로 수회 세척하였다. 실온에서 건조시킨 후 1%(v/v) 아세트산에 녹인 0.4%(w/v) SRB(sulforhodamine B) 용액 100 ㎕를 첨가해 30분 동안 염색시켰다. 세포와 결합하지 않은 SRB 염색액은 1%(v/v) 아세트산으로 수회 세척한 다음 다시 건조시켰다. 각 웰에 10 mM 트리스 용액(pH 10.5) 100 ㎕를 각 웰에 가하여 세포와 결합되어 있는 염색제를 충분히 녹인 후 560 nm에서 흡광도를 측정하여 그 값을 바이러스만을 처리한 대조군과 바이러스와 약물을 병행 처리한 군의 비율로서 바이러스 증식억제능을 평가하였다. 결과에 대한 통계는 동일한 조건에서 수행한 3번의 실험 결과 수치에 대한 평균값과 표준편차로 계산한 값을 제시하였다.
바이러스 A16 B3 B4 EV71 HSV1 HSV2 HZV
음성대조군 0 ± 12 0 ± 7 0 ± 4 0 ± 21 4 ± 32 3 ± 16 22 ± 7
알로페론 1 23 ± 6 28 ± 9 24 ± 12 28 ± 9 28 ± 14 37 ± 6 42 ± 11
실시예 1 88 ± 6 82 ± 6 79 ± 5 84 ± 12 90 ± 7 94 ± 6 98 ± 1
상기 표 9에 나타낸 바와 같이, 실시예 1은 코사키바이러스 A16 형에서는 88%, B3형에서는 82%, B5에서는 79%, 엔테로바이러스 EV71에서는 84%, 헤르페스심플렉스 1형에서는 90%, 헤르페스심플렉스 2형에서는 94% 그리고 헤르페스조스터에서는 98%의 감염억제능을 보여 음성대조군에 비해서는 5 ~ 60배, 알로페론1 처리보다 2~4배 이상 항바이러스능이 뛰어났다.
본 발명은 면역활성을 유도하는 장기 안정성을 가지는 알로페론 복합체에 관한 것으로서, 건강기능식품 관련 산업에서 이용 가능성이 있다.

Claims (12)

  1. 알로페론 및 피브로인을 포함하는 복합체.
  2. 제1항에 있어서, 상기 알로페론 및 피브로인의 몰비는 1:2인 것인 복합체.
  3. 제1항에 있어서, 상기 알로페론 및 피브로인은 정전기적으로 결합된 것인 복합체.
  4. 제1항에 있어서, 상기 복합체는 면역활성을 증진시키는 것인 복합체.
  5. 제1항의 복합체를 유효성분으로 포함하는 면역증진용 약학적 조성물.
  6. 제5항에 있어서, 상기 조성물은 암을 예방 또는 치료하기 위한 것인 조성물.
  7. 제1항의 복합체를 유효성분으로 포함하는 면역증진용 건강기능식품.
  8. 제1항의 복합체를 유효성분으로 포함하는 항바이러스 약학적 조성물.
  9. 제8항에 있어서, 상기 바이러스는 인플루엔자바이러스, 헤르페스 심플렉스바이러스, 헤르페스 조스터 바이러스, 코사키바이러스 또는 엔테로바이러스 중 1종 이상의 바이러스 인 것을 특징으로 하는 항바이러스 약학적 조성물
  10. 제1항의 복합체를 유효성분으로 포함하는 면역증진용 건강기능식품.
  11. 제1항의 복합체를 유효 성분으로 포함하는 면역증진용 화장료 조성물.
  12. 피브로인을 수득하는 단계;
    상기 피브로인과 알로페론을 혼합하여 복합체를 형성하는 단계;
    상기 형성된 복합체를 유기용매로 세척하는 단계를 포함하는 알로페론-피브로인 복합체의 제조 방법.
PCT/KR2021/018493 2020-12-07 2021-12-07 면역활성을 유도하는 장기 안정성을 가지는 알로페론 복합체 WO2022124777A1 (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2020-0169256 2020-12-07
KR1020200169256A KR102253715B1 (ko) 2020-12-07 2020-12-07 면역활성을 유도하는 장기 안정성을 가지는 알로페론 복합체

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2022124777A1 true WO2022124777A1 (ko) 2022-06-16

Family

ID=76135436

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/KR2021/018493 WO2022124777A1 (ko) 2020-12-07 2021-12-07 면역활성을 유도하는 장기 안정성을 가지는 알로페론 복합체

Country Status (2)

Country Link
KR (1) KR102253715B1 (ko)
WO (1) WO2022124777A1 (ko)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102253715B1 (ko) * 2020-12-07 2021-05-27 유광진 면역활성을 유도하는 장기 안정성을 가지는 알로페론 복합체
KR102626708B1 (ko) * 2022-01-28 2024-01-18 엔케이메딕스 주식회사 알로페론을 포함하는 nk세포 배양용 조성물 및 이를 이용한 nk 세포 배양방법

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001270836A (ja) * 2000-03-23 2001-10-02 Natl Inst Of Sericultural & Entomological Science 抗ウイルス剤
KR100973779B1 (ko) * 2008-04-17 2010-08-04 화인코주식회사 피브로인 마이크로스피어, 이를 포함하는 에멀젼 및 이를포함하는 분산액의 제조 방법
KR20110018167A (ko) * 2009-08-17 2011-02-23 한국원자력연구원 생리활성이 증가된 실크 펩타이드의 제조방법 및 그 방법에 의해 제조된 실크 펩타이드
KR101127120B1 (ko) * 2011-06-22 2012-03-20 월드웨이(주) 실크 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 면역력 증강, 암 예방 및 개선용 조성물
KR20130138590A (ko) * 2012-06-11 2013-12-19 (주)알로텍 알로페론을 포함하는 항염증 약학적 조성물 및 화장료 조성물
KR102253715B1 (ko) * 2020-12-07 2021-05-27 유광진 면역활성을 유도하는 장기 안정성을 가지는 알로페론 복합체

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001270836A (ja) * 2000-03-23 2001-10-02 Natl Inst Of Sericultural & Entomological Science 抗ウイルス剤
KR100973779B1 (ko) * 2008-04-17 2010-08-04 화인코주식회사 피브로인 마이크로스피어, 이를 포함하는 에멀젼 및 이를포함하는 분산액의 제조 방법
KR20110018167A (ko) * 2009-08-17 2011-02-23 한국원자력연구원 생리활성이 증가된 실크 펩타이드의 제조방법 및 그 방법에 의해 제조된 실크 펩타이드
KR101127120B1 (ko) * 2011-06-22 2012-03-20 월드웨이(주) 실크 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 면역력 증강, 암 예방 및 개선용 조성물
KR20130138590A (ko) * 2012-06-11 2013-12-19 (주)알로텍 알로페론을 포함하는 항염증 약학적 조성물 및 화장료 조성물
KR102253715B1 (ko) * 2020-12-07 2021-05-27 유광진 면역활성을 유도하는 장기 안정성을 가지는 알로페론 복합체

Also Published As

Publication number Publication date
KR102253715B1 (ko) 2021-05-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2022124777A1 (ko) 면역활성을 유도하는 장기 안정성을 가지는 알로페론 복합체
KR101341210B1 (ko) 신규한 항균 펩타이드 및 이의 용도
WO2017048028A1 (ko) 마이시니딘 펩타이드로부터 유래한 신규 항균 펩타이드 및 이의 용도
RU2569302C2 (ru) Соединения и фармацевтические комбинации для лечения нейродегенеративных и ишемических болезней мозга
MX2008000596A (es) Inmunomodulacion inducida por la chaperonina 10.
EP1006124B1 (en) Immunomodulatory materials from Calliphora vicina larvae, their preparation and use
EP2667887B1 (en) Pharmaceutical composition comprising the peptide glu-asp-gly and use for treating helicobacter pylori induced gastroduodenal diseases
WO2024053836A1 (ko) 항생제 내성균에 대한 항균 활성을 가지는 항균 펩타이드 h103b 및 이의 용도
WO2022124776A1 (ko) 알로페론 판토텐산 복합체를 유효성분으로 함유하는 미백용 또는 주름개선용 조성물
WO2023048411A1 (ko) 신규한 항균 펩타이드 및 이의 용도
WO2020197016A1 (ko) P s e u d i n -2 펩타이드로부터 유래한 신규 항균 펩타이드 및 이의 용도
WO2022265195A1 (ko) 신규한 항균 펩타이드 및 이의 용도
US4482543A (en) Biologically active substance, process for preparing the substance and immunoactive composition
US4621054A (en) Biologically active substance, process for preparing the substance and immunoactive composition
JP2017149692A (ja) 生体防御用組成物及びその用途
WO2012046922A1 (en) Novel use of antimicrobial peptides in regeneration of skin cells
KR20210122125A (ko) 갈색거저리 유충 단백질 또는 이의 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 근감소증의 예방, 개선 또는 치료용 조성물
WO2019172666A1 (ko) Ll37 펩타이드로부터 유래한 신규 항균 펩타이드 및 이의 용도
WO2019059709A2 (ko) Ｈｐ1404 펩타이드로부터 유래한 신규 항균 펩타이드 및 이의 용도
Anderson et al. Chediak‐Higashi Syndrome in a Black Child
JPH01313433A (ja) 抗ｈｉｖ剤
WO2023200064A1 (ko) 인플루엔자 바이러스 억제용 조성물
JPH02233619A (ja) ウィルス感染防御剤
US3966915A (en) Treatment of heart diseases
KR100487112B1 (ko) 백강잠 101ａ로부터 분리, 정제한 뇌신경성장 촉진물질(4ｅ, 6ｅ, 2ｓ,3ｒ)-2-ｎ-아이코사노일-4,6-테트라데카스핀게닌

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 21903823

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 21903823

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

32PN Ep: public notification in the ep bulletin as address of the adressee cannot be established

Free format text: NOTING OF LOSS OF RIGHTS PURSUANT TO RULE 112(1) EPC