WO2021172595A1

WO2021172595A1 - 抗原提示細胞外小胞、それを含む組成物、及びそれらを製造するための方法

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Publication number: WO2021172595A1
Application number: PCT/JP2021/007778
Authority: WO
Inventors: 力成華山; 友義山野; 一隆的場
Original assignee: 国立大学法人金沢大学; 日産化学株式会社
Priority date: 2020-02-28
Filing date: 2021-03-01
Publication date: 2021-09-02
Also published as: AU2021228499A1; EP4112124A4; US20230126199A1; EP4112730A1; KR20220147107A; JPWO2021172596A1; KR20220147106A; WO2021172596A1; JPWO2021172595A1; TW202146433A; CN115176015A; CA3173726A1; US20230143831A1; TW202146434A; CN115209956A; EP4112124A1

Abstract

抗原特異的なＴ細胞を満足に活性化等することが可能な細胞外小胞を提供すること。　抗原提示ＭＨＣ分子及びＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示する該抗原提示細胞外小胞を提供する。

Description

抗原提示細胞外小胞、それを含む組成物、及びそれらを製造するための方法

　本発明は、抗原提示細胞外小胞、それを含む組成物、及びそれらを製造するための方法に関する。

　生体によるガン細胞等の排除や、自己抗原、アレルギー性物質等に対する応答の調節等の免疫反応には、抗原特異的なＴ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞等）が中心的な働きをしていることが知られている。抗原特異的なＴ細胞は、樹状細胞やマクロファージ等の抗原提示細胞の細胞表面のＭＨＣ分子と、ガン、アレルギー性物質等に由来する抗原との結合複合体をＴ細胞受容体で認識して活性化、増殖、分化等する。活性化等した抗原特異的なＴ細胞は、抗原を提示しているガン細胞等を特異的に傷害することや、自己抗原、アレルギー性物質等に対する応答を調節する。したがって、抗原特異的なＴ細胞を活性化、増殖、分化等させることが、免疫反応において特に重要であると考えられている。

　抗原特異的なＴ細胞を活性化等させる方法としては、既に実用化されているＴ細胞にキメラ抗原受容体を発現させる方法だけでなく、その他の方法も開発されている。例えば、特許文献１は、ＭＨＣ分子とＴ細胞共刺激分子とを表面上に含むナノ粒子が、抗原特異的なＴ細胞を増殖させることを開示している。また、非特許文献１は、ＰＴＧＦＲＮを介してＩＬ－１２を膜上に発現させたエクソソームが、腫瘍抗原特異的なＣＤ８陽性Ｔ細胞を増殖させることを開示している。

特表２０１６－５２０５１８号公報

Katherine Kirwin, et al., "Exosome Surface Display of IL-12 Results in Tumor-Retained Pharmacology with Superior Potency and Limited Systemic Exposure Compared to Recombinant IL-12", 令和１年１１月６日, 34th Annual Meeting of the Society for Immuno-therapy of Cancer Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ　Ｖｅｓｉｃｌｅｓ（２０１８）；７：１５３５７５０

　本発明者らは、抗原特異的なＴ細胞を活性化等しうる新たな方法として、ＭＨＣ分子とＴ細胞共刺激分子とを膜に含む細胞外小胞を使用する方法を試みた。しかし、この細胞外小胞を用いて抗原特異的なＴ細胞の活性化等を試みたところ、抗原特異的なＴ細胞を満足に活性化等することができないことを初めて見出した。

　したがって、本発明は、抗原特異的なＴ細胞を満足に活性化等することが可能な細胞外小胞を提供することを目的とする。

　上記課題に鑑み、鋭意検討を重ねたところ、本発明者は、意外にも、ＭＨＣ分子、及びＴ細胞刺激性サイトカインを膜に含む細胞外小胞を用いることで、抗原特異的なＴ細胞を満足に活性化等することができることを見出し、本発明を完成するに至った。

　したがって、本発明は、以下のものを含む：
〔０〕　抗原提示ＭＨＣ分子及びＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示する細胞外小胞。
〔１〕　抗原提示細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ａ）抗原提示ＭＨＣ分子を含む、該抗原を膜外に提示可能なタンパク質；及び
（Ｂ）第１のＴ細胞刺激性サイトカイン又はそのサブユニットを含む、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能なタンパク質；
を含む、抗原提示細胞外小胞。
〔２〕　〔１〕に記載の抗原提示細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ａ）抗原提示ＭＨＣ分子と、細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメインとを含む、該抗原を膜外に提示可能な融合タンパク質又はタンパク質複合体；及び
（Ｂ）第１のＴ細胞刺激性サイトカイン又はそのサブユニットと、細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメインとを含む、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質；
を含む、抗原提示細胞外小胞。
〔３〕　〔１〕又は〔２〕に記載の抗原提示細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ａ）抗原提示ＭＨＣ分子と、テトラスパニン若しくはその膜貫通ドメイン又はＭＦＧ－Ｅ８若しくはそのドメインとを含む、該抗原を膜外に提示可能な融合タンパク質又はタンパク質複合体；及び
（Ｂ）第１のＴ細胞刺激性サイトカイン又はそのサブユニットと、テトラスパニンの部分配列とを含む、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質であって、該テトラスパニンの部分配列が、２つの膜貫通ドメインを少なくとも有し、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインが、該２つの膜貫通ドメインの間に配置されている、融合タンパク質、又は
（Ｂ）第１のＴ細胞刺激性サイトカイン又はそのサブユニットと、ＭＦＧ－Ｅ８又はそのドメインとを含む、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質；
を含む、抗原提示細胞外小胞。
〔４〕　〔１〕～〔３〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能な融合タンパク質であって、Ｎ末端側から、
　（Ａ－１）ＭＨＣ分子拘束性抗原ペプチド、
　（Ａ－２）存在していてもよいスペーサー配列、
　（Ａ－３）単鎖ＭＨＣ分子、
　（Ａ－４）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　（Ａ－５）テトラスパニン
からなるアミノ酸配列を含む、融合タンパク質、又は
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能なタンパク質複合体であって、
　Ｎ末端側から、
　　（Ａ－１）ＭＨＣ分子拘束性抗原ペプチド、
　　（Ａ－２）存在していてもよいスペーサー配列、
　　（Ａ－３）ＭＨＣクラスＩα鎖、β_２ミクログロブリン、ＭＨＣクラスＩＩα鎖、又はＭＨＣクラスＩＩβ鎖
　　（Ａ－４）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　　（Ａ－５）テトラスパニン
からなるアミノ酸配列を含む、融合タンパク質と、
　（Ａ－６）β_２ミクログロブリン、ＭＨＣクラスＩα鎖、ＭＨＣクラスＩＩβ鎖、又はＭＨＣクラスＩＩα鎖のアミノ酸配列を含む、タンパク質と
を含む、タンパク質複合体；並びに
（Ｂ）Ｎ末端側から、
　（Ｂ－１）Ｎ末端側から、膜貫通ドメイン１、小型細胞外ループ、膜貫通ドメイン２、小型細胞内ループ及び膜貫通ドメイン３を含むテトラスパニンの部分配列、
　（Ｂ－２）存在していてもよいスペーサー配列、
　（Ｂ－３）第１のＴ細胞刺激性サイトカイン、
　（Ｂ－４）存在していてもよいスペーサー配列、並びに
　（Ｂ－５）膜貫通ドメイン４を含むテトラスパニンの部分配列
からなるアミノ酸配列を含む、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質、又は
（Ｂ）Ｎ末端側から、
　（Ｂ－３）第１のＴ細胞刺激性サイトカイン、
　（Ｂ－４）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　（Ｂ－５）ＭＦＧ－Ｅ８
からなるアミノ酸配列を含む、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質；
を含む、抗原提示細胞外小胞。
〔５〕　〔４〕に記載の抗原提示細胞外小胞であって、膜に以下：
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能な融合タンパク質であって、Ｎ末端側から、
　（Ａ－１）ＭＨＣクラスＩ分子拘束性抗原ペプチド、
　（Ａ－２）存在していてもよいスペーサー配列、
　（Ａ－３）単鎖ＭＨＣクラスＩ分子、
　（Ａ－４）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　（Ａ－５）テトラスパニン
からなるアミノ酸配列を含む、融合タンパク質
を含む、抗原提示細胞外小胞。
〔６〕　〔４〕に記載の抗原提示細胞外小胞であって、膜に以下：
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能なタンパク質複合体であって、
　Ｎ末端側から、
　　（Ａ－１）ＭＨＣクラスＩＩ分子拘束性抗原ペプチド、
　　（Ａ－２）存在していてもよいスペーサー配列、
　　（Ａ－３）ＭＨＣクラスＩＩβ鎖、
　　（Ａ－４）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　　（Ａ－５）テトラスパニン
からなるアミノ酸配列を含む、融合タンパク質と、
　（Ａ－６）ＭＨＣクラスＩＩα鎖のアミノ酸配列を含む、タンパク質と
を含む、タンパク質複合体
を含む、抗原提示細胞外小胞。
〔７〕　第１のＴ細胞刺激性サイトカインが、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－１２のサブユニット又はＴＧＦ－βである、〔１〕～〔６〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞。
〔８〕　〔１〕～〔７〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ｃ）Ｔ細胞共刺激分子を含む、該Ｔ細胞共刺激分子とＴ細胞とが相互作用可能なタンパク質；
を含む、抗原提示細胞外小胞。
〔９〕　〔１〕～〔８〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ｃ）Ｔ細胞共刺激分子と、細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメインとを含む、該Ｔ細胞共刺激分子とＴ細胞とが相互作用可能な融合タンパク質；
を含む、抗原提示細胞外小胞。
〔１０〕　〔１〕～〔９〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ｃ）Ｔ細胞共刺激分子と、テトラスパニン若しくはその膜貫通ドメイン又はＭＦＧ－Ｅ８若しくはそのドメインとを含む、該Ｔ細胞共刺激分子とＴ細胞とが相互作用可能な融合タンパク質；
を含む、抗原提示細胞外小胞。
〔１１〕　〔１〕～〔１０〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ｃ）Ｎ末端側から、
　（Ｃ－１）Ｔ細胞共刺激分子、
　（Ｃ－２）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　（Ｃ－３）テトラスパニン
からなるアミノ酸配列を含む、該Ｔ細胞共刺激分子とＴ細胞とが相互作用可能な融合タンパク質；
を含む、抗原提示細胞外小胞。
〔１２〕　細胞外小胞が、エクソソームである、〔１〕～〔１１〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞。
〔１３〕　ポリヌクレオチドであって、以下：
　（ｉ）〔２〕～〔６〕のいずれかで定義される（Ａ）の融合タンパク質若しくはタンパク質複合体；
　（ｉｉ）〔２〕～〔４〕のいずれかで定義される（Ｂ）の融合タンパク質；又は
　（ｉｉｉ）〔９〕～〔１１〕のいずれかで定義される（Ｃ）の融合タンパク質；
のいずれかをコードする、ポリヌクレオチド。
〔１４〕　〔１３〕に記載のポリヌクレオチドから選択される少なくとも１種のポリヌクレオチドを含んでなるベクター。
〔１５〕　以下：
　（ｉ）〔２〕～〔６〕のいずれかで定義される（Ａ）の融合タンパク質若しくはタンパク質複合体をコードするポリヌクレオチド；及び
　（ｉｉ）〔２〕～〔４〕のいずれかで定義される（Ｂ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、並びに、任意で
　（ｉｉｉ）〔９〕～〔１１〕のいずれかで定義される（Ｃ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド
を含んでなる、単一のベクター又は２以上のベクターの組み合わせにより形質転換された細胞。
〔１６〕　〔１５〕に記載の細胞を培養して得られてなる、培養上清。
〔１７〕　〔１６〕に記載の培養上清から得られてなる、抗原提示細胞外小胞。
〔１８〕　〔１〕～〔１２〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞を製造するための方法であって、〔１５〕に記載の細胞を培養して得られる培養上清を回収する工程を含む、方法。
〔１９〕　〔１〕～〔１２〕及び〔１７〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞、又は〔１６〕に記載の培養上清を含む、医薬組成物。
〔２０〕　感染症を処置又は予防するための、〔１〕～〔１２〕及び〔１７〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞、又は〔１６〕に記載の培養上清を含む、医薬組成物。
〔２１〕　ガンを処置又は予防するための、〔５〕及び〔７〕～〔１２〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞を含む、医薬組成物。
〔２２〕　自己免疫疾患を処置又は予防するための、〔６〕～〔１２〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞を含む、医薬組成物。
〔２３〕　アレルギー性疾患を処置又は予防するための、〔６〕～〔１２〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞を含む医薬組成物。
〔２４〕　特異的な抗原に対するＴ細胞を活性化及び／又は増殖させるための方法であって、〔１〕～〔１２〕及び〔１７〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞とＴ細胞とをｉｎｖｉｔｒｏ又はｅｘｖｉｖｏにおいて接触させることを含む、方法。

〔２５〕
　（Ａ）に規定されるタンパク質又はタンパク質複合体と（Ｂ）に規定されるタンパク質又はタンパク質複合体とが融合している、〔１〕～〔１１〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞。
〔２６〕
　（Ａ）に規定されるタンパク質又はタンパク質複合体と（Ｃ）に規定されるタンパク質又はタンパク質複合体とが融合している、〔８〕～〔１１〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞。
〔２７〕
　（Ｂ）に規定されるタンパク質又はタンパク質複合体と（Ｃ）に規定されるタンパク質又はタンパク質複合体とが融合している、〔８〕～〔１１〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞。
〔２８〕
　（Ａ）に規定されるタンパク質又はタンパク質複合体と、（Ｂ）に規定されるタンパク質又はタンパク質複合体と（Ｃ）に規定されるタンパク質又はタンパク質複合体とが融合している、〔８〕～〔１１〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞。
〔２９〕　細胞外小胞が、エクソソームである、〔２５〕～〔２７〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞。

〔３０〕　免疫チェックポイント阻害剤を含む、〔２１〕に記載の医薬組成物。
〔３１〕　前記免疫チェックポイント阻害剤が、前記抗原提示細胞外小胞の膜上に存在している、〔３０〕に記載の医薬組成物。
〔３２〕　前記免疫チェックポイント阻害剤が抗ＰＤ－１抗体又はその活性断片；抗ＣＴＬＡ－４抗体又はその活性断片；及びＰＤ－Ｌ１抗体又はその活性断片からなる群から選択される、〔３０〕又は〔３１〕に記載の医薬組成物。

〔１Ａ〕
　抗原提示細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ｄ）抗原提示ＭＨＣ分子と、すくなくとも１種のＴ細胞刺激性サイトカインまたはそのサブユニットを含み、該抗原と該Ｔ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質を含む、抗原提示細胞外小胞。
〔２Ａ〕　〔１Ａ〕に記載の抗原提示細胞外小胞であって、
　前記融合タンパク質が、前記抗原提示ＭＨＣ分子と、前記すくなくとも１種のＴ細胞刺激性サイトカイン又はそのサブユニットと、細胞外小胞の膜に局在することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはその膜結合ドメインとを含む、抗原提示細胞外小胞。
〔３Ａ〕　〔２Ａ〕に記載の抗原提示細胞外小胞であって、
　前記細胞外小胞の膜に局在することが可能な膜タンパク質又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質が、テトラスパニン又はＭＦＧ－Ｅ８である、抗原提示細胞外小胞。
〔４Ａ〕　〔３Ａ〕に記載の抗原提示細胞外小胞であって、
前記融合タンパク質が、Ｎ末端側から、
　（Ｄ－１）ＭＨＣ分子拘束性抗原ペプチド、
　（Ｄ－２）存在していてもよいスペーサー配列、
　（Ｄ－３）単鎖ＭＨＣ分子、
　（Ｄ－４）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　（Ｄ－５）テトラスパニン又はその膜貫通ドメインあるいはＭＦＧ－Ｅ８又はその膜貫通ドメインと、前記すくなくとも１種のＴ細胞刺激性サイトカイン又はそのサブユニットを含む融合ペプチド、
を、この順番でコードするアミノ酸配列を含む、抗原提示細胞外小胞、
〔５Ａ〕　〔３Ａ〕に記載の抗原提示細胞外小胞であって、
前記融合タンパク質が、Ｎ末端側から、
　（Ｄ－１）テトラスパニン又はその膜貫通ドメインあるいはＭＦＧ－Ｅ８又はその膜貫通ドメインと、前記すくなくとも１種のＴ細胞刺激性サイトカイン又はそのサブユニットを含む融合ペプチド
　（Ｄ－２）存在していてもよいスペーサー配列、
　（Ｄ－３）単鎖ＭＨＣ分子、
　（Ｄ－４）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　（Ｄ－５）ＭＨＣ分子拘束性抗原ペプチドを、
この順にコードするアミノ酸配列を含む、抗原提示細胞外小胞。
〔６Ａ〕
　前記融合ペプチドが、Ｎ末端側から、
　　（１）膜貫通ドメイン１、小型細胞外ループ、膜貫通ドメイン２、小型細胞内ループ及び膜貫通ドメイン３を含むテトラスパニンの部分配列、
　　（２）存在していてもよいスペーサー配列、
　　（３）前記すくなくとも１つのＴ細胞刺激性サイトカイン又はそのサブユニット、
　　（４）存在していてもよいスペーサー配列、並びに
　　（５）膜貫通ドメイン４を含むテトラスパニンの部分配列
をこの順番でコードするアミノ酸配列を含む、〔４Ａ〕又は〔５Ａ〕に記載の抗原提示細胞外小胞。
〔７Ａ〕
　前記融合ペプチドが、Ｎ末端側から、
　（１）前記すくなくとも１のＴ細胞刺激性サイトカイン又はそのサブユニット、
　（２）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　（３）ＭＦＧ－Ｅ８
をこの順番でコードするアミノ酸配列を含む、〔４Ａ〕又は〔５Ａ〕に記載の抗原提示細胞外小胞。
〔８Ａ〕
　前記ＭＨＣ分子拘束性抗原ペプチドがＭＨＣクラスＩ分子拘束性抗原ペプチドであり、前記単鎖ＭＨＣ分子が、ＭＨＣクラスＩα鎖の細胞外領域を含む、〔４Ａ〕又は〔５Ａ〕に記載の抗原提示細胞外小胞。
〔９Ａ〕
　前記ＭＨＣ分子拘束性抗原ペプチドがＭＨＣクラスＩI分子拘束性抗原ペプチドであり、前記単鎖ＭＨＣ分子が、ＭＨＣクラスＩIα鎖の細胞外ドメイン及び／又はＭＨＣクラスＩIβ鎖の細胞外ドメインを含む、〔４Ａ〕又は〔５Ａ〕に記載の抗原提示細胞外小胞。

〔１０Ａ〕
　（Ｃ）すくなくとも１つのＴ細胞共刺激分子を含む、該Ｔ細胞共刺激分子とＴ細胞とが相互作用可能なタンパク質をさらにその膜に含む、〔１Ａ〕～〔９Ａ〕のいずれか一項に記載の抗原提示細胞外小胞。
〔１１Ａ〕
　前記Ｔ細胞と相互作用可能なタンパク質が、前記すくなくとも１つのＴ細胞共刺激分子と、細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメインとを含む、〔１０Ａ〕に記載の抗原提示細胞外小胞。
〔１２Ａ〕
　前記Ｔ細胞と相互作用可能なタンパク質が、前記すくなくとも１つのＴ細胞共刺激分子と、テトラスパニン若しくはその膜貫通ドメイン又はＭＦＧ－Ｅ８若しくはそのドメインとを含む、〔１１Ａ〕に記載の抗原提示細胞外小胞。
〔１３Ａ〕
　前記Ｔ細胞と相互作用可能なタンパク質が、
（Ｃ）Ｎ末端側から、
　（Ｃ－１）前記すくなくとも１つのＴ細胞共刺激分子、
　（Ｃ－２）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　（Ｃ－３）テトラスパニンを
この順にコードするアミノ酸配列を含む、〔１２Ａ〕に記載の抗原提示細胞外小胞。
〔１４Ａ〕　前記（Ａ）融合タンパク質と前記（Ｃ）Ｔ細胞と相互作用可能なタンパク質が融合している、〔１０Ａ〕～〔１３Ａ〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞。
〔１５Ａ〕　細胞外小胞が、エクソソームである、〔１Ａ〕～〔１４Ａ〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞。

〔１Ｂ〕　〔１Ａ〕～〔１５Ａ〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞と薬理学的に許容される担体を含む、医薬組成物。

〔１Ｃ〕　ガンを処置又は予防するための、〔１Ａ〕～〔１５Ａ〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞を含む、医薬組成物；ここで、好ましくは前記抗原ペプチドがガン抗原ペプチドを含む。
〔２Ｃ〕　自己免疫疾患を処置又は予防するための、〔１Ａ〕～〔１５Ａ〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞を含む、医薬組成物；ここで、好ましくは前記抗原ペプチドが自己抗原ペプチドを含む。
〔３Ｃ〕　アレルギー性疾患を処置又は予防するための、〔１Ａ〕～〔１５Ａ〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞を含む、医薬組成物；ここで、好ましくは前記抗原ペプチドがアレルゲンを含む。
〔４Ｃ〕　免疫チェックポイント阻害剤を含む、〔１Ｃ〕に記載の医薬組成物。
〔５Ｃ〕　前記免疫チェックポイント阻害剤が、前記抗原提示細胞外小胞の膜上に存在している、〔４Ｃ〕に記載の医薬組成物。
〔６Ｃ〕　前記免疫チェックポイント阻害剤が抗ＰＤ－１抗体又はその活性断片；抗ＣＴＬＡ－４抗体又はその活性断片；及びＰＤ－Ｌ１抗体又はその活性断片からなる群から選択される、〔４Ｃ〕又は〔５Ｃ〕に記載の医薬組成物。
〔７Ｃ〕　〔１Ａ〕～〔１５Ａ〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞と薬理学的に許容される担体を含む、感染症を処置又は予防するための医薬組成物；ここで、好ましくは前記抗原ペプチドが前記感染症を引きおこす感染病原体由来である。

〔１Ｄ〕　ガンの処置又は予防における使用のための〔１Ａ〕～〔１５Ａ〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞；ここで、好ましくは前記抗原ペプチドがガン抗原ペプチドを含む。
〔２Ｄ〕　自己免疫疾患の処置又は予防における使用のための、〔１Ａ〕～〔１５Ａ〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞；ここで、好ましくは前記抗原ペプチドが自己抗原ペプチドを含む。
〔３Ｄ〕　アレルギー性疾患の処置又は予防における使用のための、〔１Ａ〕～〔１５Ａ〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞；ここで、好ましくは前記抗原ペプチドがアレルゲンを含む。
〔４Ｄ〕　免疫チェックポイント阻害剤とともに使用される、〔１Ｄ〕に記載の使用のための抗原提示細胞外小胞。
〔５Ｄ〕　前記免疫チェックポイント阻害剤が、前記抗原提示細胞外小胞の膜上に存在している、〔４Ｄ〕に記載の使用のための抗原提示細胞外小胞。
〔６Ｄ〕　前記免疫チェックポイント阻害剤が抗ＰＤ－１抗体又はその活性断片；抗ＣＴＬＡ－４抗体又はその活性断片；及びＰＤ－Ｌ１抗体又はその活性断片からなる群から選択される、〔４Ｄ〕又は〔５Ｄ〕に記載の使用のための抗原提示細胞外小胞。
〔７Ｄ〕　感染症を処置又は予防における使用のための〔１Ａ〕～〔１５Ａ〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞；ここで、好ましくは前記抗原ペプチドが前記感染症を引きおこす感染病原体由来である。

〔１Ｅ〕　ガンを処置又は予防するための医薬の製造における〔１Ａ〕～〔１５Ａ〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞の使用；ここで、好ましくは前記抗原ペプチドがガン抗原ペプチドを含む。
〔２Ｅ〕　自己免疫疾患の処置又は予防するための医薬の製造における〔１Ａ〕～〔１５Ａ〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞の使用；ここで、好ましくは前記抗原ペプチドが自己抗原ペプチドを含む。
〔３Ｅ〕　アレルギー性疾患の処置又は予防するための医薬の製造における〔１Ａ〕～〔１５Ａ〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞の使用；ここで、好ましくは前記抗原ペプチドがアレルゲンを含む。
〔４Ｅ〕　前記医薬が、免疫チェックポイント阻害剤とともに使用される、〔１Ｅ〕に記載の使用。
〔５Ｅ〕　前記免疫チェックポイント阻害剤が、前記抗原提示細胞外小胞の膜上に存在している、〔４Ｅ〕に記載の使用。
〔６Ｅ〕　前記免疫チェックポイント阻害剤が抗ＰＤ－１抗体又はその活性断片；抗ＣＴＬＡ－４抗体又はその活性断片；及びＰＤ－Ｌ１抗体又はその活性断片からなる群から選択される、〔４Ｅ〕又は〔５Ｅ〕に記載の使用。
〔７Ｅ〕　感染症を処置又は予防するための医薬の製造における〔１Ａ〕～〔１５Ａ〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞の使用；ここで、好ましくは前記抗原ペプチドが前記感染症を引きおこす感染病原体由来である。

〔１Ｆ〕　対象においてガンを処置又は予防する方法であって、
　有効量の〔１Ａ〕～〔１５Ａ〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞を対象に投与して、対象内の、ガン抗原を認識するＴ細胞を活性化及び／又は増殖させ、該活性化及び／又は増殖したＴ細胞にガン細胞を攻撃させることにより、ガンを処置又は予防する、方法；ここで、好ましくは、前記該活性化及び／又は増殖したＴ細胞がＣＤ８陽性の細胞傷害性Ｔ細胞であり、好ましくは前記抗原ペプチドがガン抗原ペプチドを含む。
〔２Ｆ〕　対象において自己免疫疾患を処置又は予防する方法であって、有効量の〔１Ａ〕～〔１５Ａ〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞を対象に投与して、対象内の、自己抗原を認識するＴ細胞を活性化及び／又は増殖させ、対象内で前記自己抗原に対して免疫反応を脱感作させることにより、自己免疫疾患を処置又は予防する方法；ここで、好ましくは、前記該活性化及び／又は増殖したＴ細胞がＣＤ４陽性の制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）であり、好ましくは前記抗原ペプチドが自己抗原ペプチドを含む。
〔３Ｆ〕　対象においてアレルギー性疾患を処置又は予防する方法であって、有効量の〔１Ａ〕～〔１５Ａ〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞を対象に投与して、対象内の、アレルゲンを認識するＴ細胞を活性化及び／又は増殖させ、対象内で前記自己抗原に対して免疫反応を脱感作させることにより、自己免疫疾患を処置又は予防する方法；ここで、好ましくは、前記該活性化及び／又は増殖したＴ細胞がＣＤ４陽性の制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）であり、好ましくは前記抗原ペプチドがアレルゲンを含む。
〔４Ｆ〕　前記抗原提示細胞外小胞が免疫チェックポイント阻害剤とともに投与される、〔１Ｆ〕に記載の方法。
〔５Ｆ〕　前記免疫チェックポイント阻害剤が、前記抗原提示細胞外小胞の膜上に存在している、〔４Ｆ〕に記載の方法。
〔６Ｆ〕　前記免疫チェックポイント阻害剤が抗ＰＤ－１抗体又はその活性断片；抗ＣＴＬＡ－４抗体又はその活性断片；及びＰＤ－Ｌ１抗体又はその活性断片からなる群から選択される、〔４Ｆ〕又は〔５Ｆ〕に記載の方法。
〔７Ｆ〕　対象において感染症を処置又は予防する方法であって、有効量の〔１Ａ〕～〔１５Ａ〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞を対象に投与して、
１）炎症性サイトカインを分泌させ、対象の自然免疫を活性化させて、及び/又は
２）前記感染症を引きおこす感染病原体に対する獲得免疫を前記対象にもたせて、
体内での前記感染症を引きおこす感染病原体を排除すること、及び／又はその増殖を抑えることを含む、感染症を処置又は予防する方法。

〔１Ｇ〕　特異的な抗原に対するＴ細胞を活性化及び／又は増殖させるための方法であって、〔１Ａ〕～〔１５Ａ〕のいずれかに記載の抗原提示細胞外小胞とＴ細胞とをｉｎｖｉｔｒｏ又はｅｘｖｉｖｏにおいて接触させることを含む、方法。

〔１Ｈ〕　（ｉ）〔１Ａ〕～〔９Ａ〕のいずれかで定義される（Ｄ）の融合タンパク質若しくはタンパク質複合体；
　（ｉｉ）〔１０Ａ〕～〔１３Ａ〕のいずれかで定義される（Ｃ）のＴ細胞と相互作用可能なタンパク質；又は
　（ｉｉｉ）〔１４Ａ〕に記載の（Ｄ）の融合タンパク質と（Ｃ）のＴ細胞と相互作用可能なタンパク質の融合タンパク質をコードする、ポリヌクレオチド。
〔２Ｈ〕　〔１Ｇ〕に記載の核酸を含むベクター。

　本発明によれば、ＭＨＣ分子、及びＴ細胞刺激性サイトカインを膜に含む細胞外小胞（抗原提示細胞外小胞）を用いることで、抗原特異的なＴ細胞を満足に活性化等することができる。

抗原ペプチド－単鎖ＭＨＣクラスＩ分子（ｓｃ－Ｔｒｉｍｅｒ）－ＣＤ８１融合タンパク質のモデル図を示す。抗原ペプチド－単鎖ＭＨＣクラスＩ分子（ｓｃ－Ｔｒｉｍｅｒ）－ＣＤ８１融合タンパク質のアミノ酸配列を示す。ＣＤ８０－ＣＤ９融合タンパク質のモデル図を示す。ＣＤ８０－ＣＤ９融合タンパク質のアミノ酸配列を示す。ＣＤ６３－ＩＬ－２融合タンパク質のモデル図を示す。ＣＤ６３－ＩＬ－２融合タンパク質のアミノ酸配列を示す。抗原ペプチド－ＭＨＣクラスＩＩβ鎖（ｓｃ－Ｄｉｍｅｒ）－ＣＤ８１融合タンパク質のモデル図を示す。抗原ペプチド－ＭＨＣクラスＩＩβ鎖（ｓｃ－Ｄｉｍｅｒ）－ＣＤ８１融合タンパク質のアミノ酸配列を示す。ＭＨＣクラスＩＩα鎖のアミノ酸配列を示す。ＴＧＦ－β－ＭＦＧ－Ｅ８融合タンパク質のモデル図を示す。ＴＧＦ－β－ＭＦＧ－Ｅ８融合タンパク質のアミノ酸配列を示す。ＣＤ８１－ＩＬ－４融合タンパク質のモデル図を示す。ＣＤ８１－ＩＬ－４融合タンパク質のアミノ酸配列を示す。実施例１の抗原提示細胞外小胞のモデル図を示す。実施例２の抗原提示細胞外小胞のモデル図を示す。実施例３の抗原提示細胞外小胞のモデル図を示す。実施例４の抗原提示細胞外小胞のモデル図を示す。実施例５の抗原提示細胞外小胞のモデル図を示す。実施例６の抗原提示細胞外小胞のモデル図を示す。実施例７の抗原提示細胞外小胞のモデル図を示す。実施例８の抗原提示細胞外小胞のモデル図を示す。実施例９の抗原提示細胞外小胞のモデル図を示す。その他の実施態様の抗原提示細胞外小胞のモデル図を例示する。試験例１－１において、実施例２の抗原提示細胞外小胞の膜に含まれる融合タンパク質をフローサイトメトリーで解析した結果を示す。試験例１－２において、実施例３の抗原提示細胞外小胞の膜に含まれる融合タンパク質をフローサイトメトリーで解析した結果を示す。試験例１－３において、実施例４の抗原提示細胞外小胞の膜に含まれる融合タンパク質をフローサイトメトリーで解析した結果を示す。試験例１－４において、実施例５の抗原提示細胞外小胞の膜に含まれる融合タンパク質をフローサイトメトリーで解析した結果を示す。試験例１－５において、実施例６の抗原提示細胞外小胞の膜に含まれる融合タンパク質をフローサイトメトリーで解析した結果を示す。試験例１－６において、実施例７の抗原提示細胞外小胞の膜に含まれる融合タンパク質をフローサイトメトリーで解析した結果を示す。試験例１－７において、実施例８の抗原提示細胞外小胞の膜に含まれる融合タンパク質をフローサイトメトリーで解析した結果を示す。試験例１－８において、実施例９の抗原提示細胞外小胞の膜に含まれる融合タンパク質をフローサイトメトリーで解析した結果を示す。試験例２において、実施例１，２の抗原提示細胞外小胞が、抗原特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞（ＯＴ－１Ｔ細胞）を活性化等するかを、ｉｎｖｉｔｒｏで評価した結果を示す。試験例３において、実施例２の抗原提示細胞外小胞が、抗原特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞（ＯＴ－１）を活性化等するかを、ｉｎｖｉｖｏで評価した結果を示す。試験例４において、実施例３の抗原提示細胞外小胞が、抗原特異的ＣＤ４陽性Ｔ細胞を活性化等するかを、ｉｎｖｉｔｒｏで評価した結果を示す。試験例５において、実施例４の抗原提示細胞外小胞が、抗原特異的ＣＤ４陽性Ｔ細胞（ＯＴ－２Ｔ細胞）を制御性Ｔ細胞へと分化誘導するかを、ｉｎｖｉｔｒｏで評価した結果を示す。試験例６において、実施例３，５の抗原提示細胞外小胞が、抗原特異的ＣＤ４陽性Ｔ細胞（ＯＴ－２Ｔ細胞）をＴｈ２Ｔ細胞へと分化誘導するかどうかを、ｉｎｖｉｔｒｏで評価した結果を示す。試験例７において、実施例６の抗原提示細胞外小胞が、抗原特異的ＣＤ４陽性Ｔ細胞をＴｈ１細胞へと分化誘導するかどうかを、ｉｎｖｉｔｒｏで評価した結果を示す。試験例８において、実施例７の抗原提示細胞外小胞が、抗原特異的ＣＤ４陽性Ｔ細胞をＴｈ１７細胞へと分化誘導するかどうかを、ｉｎｖｉｔｒｏで評価した結果を示す。試験例９において、実施例１と実施例８の抗原提示細胞外小胞が、抗原特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞を顕著に増殖させたことを示す。試験例１０において、実施例８の抗原提示細胞外小胞が、Ｂ１６メラノーマ細胞の増殖を顕著に抑制したことを示す。

定義

細胞外小胞

　本明細書中で用いられる「細胞外小胞」とは、細胞から分泌される小胞である限り特段限定されるものではないが、例えば、Ｅｘｏｓｏｍｅｓ（エクソソーム）、Ｍｉｃｒｏｖｅｓｉｃｌｅｓ（ＭＶ；微小小胞体）、ＡｐｏｐｔｏｔｉｃＢｏｄｉｅｓ（アポトーシス小体）等が挙げられる。

　本明細書中で用いられる「エクソソーム」とは、エンドサイト－シス・パスウエイに由来する、約２０～約５００ｎｍ（好ましくは約２０～約２００ｎｍ、より好ましくは約２５～約１５０ｎｍ、更に好ましくは約３０～約１００ｎｍ）の小胞を意味する。エクソソームの構成成分としては、例えば、タンパク質、核酸（ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ノン・コーティングＲＮＡ）等が挙げられる。エクソソームは、細胞間コミュニケーションを司る機能を有しうる。エクソソームのマーカー分子としては、例えば、Ａｌｉｘ、Ｔｓｇ１０１、テトラスパニン、ｆｌｏｔｉｌｌｉｎ、フォスファチジルセリン等が挙げられる。

　本明細書中で用いられる「微小小胞体」とは、細胞質膜に由来する、約５０～約１０００ｎｍの小胞を意味する。微小小胞体の構成成分としては、例えば、タンパク質、核酸（ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ノン・コーティングＲＮＡ等）等が挙げられる。微小小胞体は、細胞間コミュニケーションを司る機能等を有しうる。微小小胞体のマーカー分子としては、例えば、インテグリン、セレクチン、ＣＤ４０、ＣＤ１５４等が挙げられる。

　本明細書中で用いられる「アポトーシス小体」とは、細胞質膜に由来する、約５００～約２０００ｎｍの小胞を意味する。アポトーシス小体の構成成分としては、例えば、断片化された核、細胞小器官（オルガネラ）等が挙げられる。アポトーシス小体は、ファゴサイトーシスを誘導する機能等を有しうる。アポトーシス小体のマーカー分子としては、例えば、ＡｎｎｅｘｉｎＶ、フォスファチジルセリン等が挙げられる。

　本明細書中で用いられる「抗原提示細胞外小胞」とは、その膜外に抗原を提示する細胞外小胞を意味する。

主要組織適合遺伝子複合体分子

　本明細書中で用いられる「主要組織適合遺伝子複合体（Major Histocompatibility Complex、以下、「ＭＨＣ」ともいう。）分子」は、抗原結合間隙を含み、Ｔ細胞、Ｔ細胞前駆体等へ提示する抗原と結合することができるものである限り特段限定されるものではない。ＭＨＣ分子としては、例えば、ＭＨＣクラスＩ分子、ＭＨＣクラスＩＩ分子等が挙げられる。ＭＨＣ分子は、任意の動物種由来のものであってもよい。例えば、ヒトでは、ヒト白血球型抗原（ＨＬＡ）、マウスでは、Ｈ２系が挙げられる。

　ＭＨＣクラスＩ分子に相当するＨＬＡは、例えば、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃｗ、ＨＬＡ－Ｆ、ＨＬＡ－Ｇ等のサブタイプに分類されることがある。これらサブタイプについては、多型（対立遺伝子）が知られている。ＨＬＡ－Ａの多型としては、例えば、ＨＬＡ－Ａ１、ＨＬＡ－Ａ０２０１、ＨＬＡ－Ａ２４等が挙げられ、ＨＬＡ－Ｂの多型としては、例えば、ＨＬＡ－Ｂ７、ＨＬＡ－Ｂ４０、ＨＬＡ－Ｂ４４０３等が挙げられ、ＨＬＡ－Ｃｗの多型としては、例えば、ＨＬＡ－Ｃｗ０３０１、ＨＬＡ－Ｃｗ０４０１、ＨＬＡ－Ｃｗ０６０２等が挙げられる。

　ＭＨＣクラスＩＩ分子に相当するＨＬＡは、例えば、ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＬＡ－ＤＱ、ＨＬＡ－ＤＰ等のサブタイプに分類されることがある。

　本明細書中に記載のＭＨＣ分子は、その機能を発揮することができるものである限り、その野生型のアミノ酸配列（例えば、ＭＨＣクラスＩ分子の場合：例えば、配列番号９等のＭＨＣクラスＩα鎖、配列番号７等のβ_２ミクログロブリン、配列番号６５等の単鎖ＭＨＣクラスＩ分子等；ＭＨＣクラスＩＩ分子の場合：例えば、配列番号７１等のＭＨＣクラスＩＩα鎖、配列番号３７等のＭＨＣクラスＩＩβ鎖、単鎖ＭＨＣクラスＩＩ分子等）に対して、アミノ酸配列同一性が、８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のものであってもよい。或いは、本明細書中に記載のＭＨＣ分子は、その機能を発揮することができるものである限り、その野生型のアミノ酸配列に対して、１個又は複数個のアミノ酸の欠失、挿入、付加及び／又は置換等されたものであってもよい。

　本明細書中で用いられる「抗原提示ＭＨＣ分子」とは、抗原を提示するＭＨＣ分子である限り特段限定されるものではないが、例えば、抗原提示ＭＨＣクラスＩ分子、抗原提示ＭＨＣクラスＩＩ分子等が挙げられる。「抗原提示ＭＨＣクラスＩ分子」としては、例えば、抗原とＭＨＣクラスＩα鎖又はその細胞外ドメインとβ_２ミクログロブリンとの複合体；抗原と単鎖ＭＨＣクラスＩ分子との複合体；抗原及び単鎖ＭＨＣクラスＩ分子が結合した融合タンパク質；抗原と、ＭＨＣクラスＩα鎖の細胞外ドメインと他のタンパク質又はそのドメイン若しくはそのフラグメント等との融合タンパク質（例えば、ＭＨＣクラスＩα鎖の細胞外ドメインと抗体のＦｃ部分との融合タンパク質；ＭＨＣクラスＩα鎖の細胞外ドメインと他の膜タンパク質の膜貫通ドメインとの融合タンパク質等）と、の複合体；等が挙げられる。「抗原提示ＭＨＣクラスＩＩ分子」としては、例えば、抗原とＭＨＣクラスＩＩα鎖又はその細胞外ドメインとＭＨＣクラスＩＩβ鎖又はその細胞外ドメインとの複合体；抗原と単鎖ＭＨＣクラスＩＩ分子との複合体；抗原及びＭＨＣクラスＩＩβ鎖が結合した融合タンパク質と、ＭＨＣクラスＩＩα鎖との複合体；抗原と、ＭＨＣクラスＩＩα鎖の細胞外ドメインと他のタンパク質又はそのドメイン若しくはそのフラグメント等との融合タンパク質（例えば、ＭＨＣクラスＩＩα鎖の細胞外ドメインと抗体のＦｃ部分との融合タンパク質；ＭＨＣクラスＩＩα鎖の細胞外ドメインと他の膜タンパク質の膜貫通ドメインとの融合タンパク質等）と、ＭＨＣクラスＩＩβ鎖の細胞外ドメインと他のタンパク質又はそのドメイン若しくはそのフラグメント等との融合タンパク質（例えば、ＭＨＣクラスＩＩβ鎖の細胞外ドメインと抗体のＦｃ部分との融合タンパク質；ＭＨＣクラスＩＩβ鎖の細胞外ドメインと他の膜タンパク質の膜貫通ドメインを含むアミノ酸配列との融合タンパク質等）と、の複合体等が挙げられる。

　本明細書中で用いられる「単鎖ＭＨＣ分子」、「単鎖ＭＨＣクラスＩ分子」又は「単鎖ＭＨＣクラスＩＩ分子」とは、ＭＨＣ分子（又はＭＨＣクラスＩ分子若しくはＭＨＣクラスＩＩ分子）のα鎖若しくはその細胞外ドメインと、β鎖若しくはその細胞外ドメイン又はβ_２ミクログロブリンとが、必要に応じてスペーサー配列等を介して連結した融合タンパク質を意味する。「単鎖ＭＨＣクラスＩ分子」としては、例えば、ＭＨＣクラスＩα鎖とβ_２ミクログロブリンとが必要に応じてスペーサー配列を介して連結した融合タンパク質等が挙げられる。「単鎖ＭＨＣクラスＩＩ分子」としては、例えば、ＭＨＣクラスＩＩα鎖とＭＨＣクラスＩＩβ鎖とが必要に応じてスペーサー配列を介して連結した融合タンパク質等が挙げられる。

　本明細書中で用いられる「抗原提示ＭＨＣ分子を含む、該抗原（若しくは抗原ペプチド）を膜外に提示可能なタンパク質（若しくは融合タンパク質、タンパク質複合体等）」とは、抗原提示ＭＨＣ分子を少なくとも含み、かつ抗原（若しくは抗原ペプチド）を膜外に提示することで、Ｔ細胞等に抗原を提示することが可能なタンパク質（若しくは融合タンパク質、タンパク質複合体等）を意味する。「抗原提示ＭＨＣ分子を含む、抗原（若しくは抗原ペプチド）を膜外に提示可能なタンパク質（若しくは融合タンパク質、タンパク質複合体等）」は、これが細胞外小胞の膜に発現するように、プラスミド等を用いて融合タンパク質、タンパク質複合体等の形態で発現させたものであってもよい。或いは、「抗原提示ＭＨＣ分子を含む、抗原（若しくは抗原ペプチド）を膜外に提示可能なタンパク質（若しくは融合タンパク質、タンパク質複合体等）」は、可溶性の抗原提示ＭＨＣ分子（これらに限定されるものではないが、例えば、特許文献１に記載されている、ＭＨＣクラスＩα鎖及び免疫グロブリン重鎖を含む融合タンパク質等；特開２００７－１６１７１９号公報に記載されている、可溶性のＭＨＣクラスＩ分子等）を用いる場合、可溶性の抗原提示ＭＨＣ分子と細胞外小胞とを、必要に応じて脂質リンカー、ペプチドリンカー等を介して、細胞外小胞の膜に結合させたものであってもよい（例えば、特開２０１８－１０４３４１号公報等に記載の方法を参考にしてもよい）。或いは、可溶性の抗原提示ＭＨＣ分子のＮ末端側又はＣ末端側に所望のタグ（例えば、Ｈｉｓタグ、ＦＬＡＧタグ、ＰＮＥタグ（配列番号７９：ＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬ）等）を付加したもの（該タグは、例えば、他の構成要素とともに融合タンパク質として発現させてもよいし、別途用意した可溶性の抗原提示ＭＨＣ分子に、必要に応じてリンカー等を介して結合させてもよい）と、該タグに対する抗体又はその抗原結合性フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ若しくはナノボディ）等を含むタンパク質（例えば、必要に応じてリンカー等を介して細胞外小胞の膜に結合した、該タグに対する抗体又はその抗原結合性フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ若しくはナノボディ）等自体；細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質又はその膜貫通ドメインのＮ末端側又はＣ末端側に、該タグに対するナノボディが結合した、融合タンパク質等）を膜に含む細胞外小胞とを、所望の条件で混合したものであってもよい（例えば、Raj D, et al., Gut., 2019 Jun;68(6):1052-1064等に記載の、ＰＮＥタグと該タグに対する抗体等とを用いる方法を参考にしてもよい）。

抗原

　本明細書中で用いられる「抗原」とは、抗原性を有しうるものである限り特段限定されるものではなく、ペプチド抗原だけでなく、リン脂質、複合炭水化物等の非ペプチド抗原（例えば、ミコール酸、リポアラビノアンナン等の細菌性膜構成要素等）も包含される。

　本明細書中で用いられる「抗原ペプチド」は、抗原となりうるペプチドである限り特段限定されるものではなく、天然由来のものであっても、合成由来のものであっても、市販されているものであってもよい。抗原ペプチドは、これらに限定されるものではないが、例えば、ＷＴ－１、α－胎児タンパク質、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、胎盤アルカリ性ホスファターゼシアリル－ルイスＸ、ＣＡ－１２５、ＣＡ－１９、ＴＡＧ－７２、上皮糖タンパク質２、５Ｔ４、α胎児タンパク質受容体、Ｍ２Ａ、チロシナーゼ、Ｒａｓ、ｐ５３、Ｈｅｒ－２／ｎｅｕ、ＥＧＦ－Ｒ、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、ｍｙｃ、ＢＣＲ－ＡＢＬ、ＨＰＶ型１６、メラノトランスフェリン、ＭＵＣ１、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３７、ＣＤ４５Ｒ、ＩＬ－２受容体α鎖、Ｔ細胞受容体、前立腺酸性ホスファターゼ、ＧＰ１００、ＭｅｌａｎＡ／Ｍａｒｔ－１、ｇｐ７５／ブラウン、ＢＡＧＥ、Ｓ－１００、イトケラチン、ＣＹＦＲＡ２１－１、Ｅｐ－ＣＡＭ等の腫瘍関連抗原ペプチド；インスリン、グルタミン酸デカルボキシラーゼ、ＩＣＡ５１２／ＩＡ－２タンパク質チロシンホスファターゼ、ＩＣＡ１２、ＩＣＡ６９、プレプロインスリン、ＨＳＰ６０、カルボキシペプチダーゼＨ、ペリフェリン、ＧＭ１－２、ビトロネクチン、βクリスタリン、カルレティキュリン、セロトランスフェリン、ケラチン、ピルビン酸カルボキシラーゼ、Ｃ１、ビリン２、ヌクレオソーム、リボヌクレオタンパク質、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質、ミエリン関連糖タンパク質、ミエリン／オリゴデンドロサイト塩基性タンパク質、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質、ミエリン塩基性タンパク質、プロテオリピドアポタンパク質等の自己抗原ペプチド；原生動物（例えば、マラリア原虫、リーシュマニア種、トリパノソーマ種）、細菌（例えば、グラム陽性球菌、グラム陽性桿菌、グラム陰性細菌、嫌気性菌）、真菌（例えば、アスペルギルス、ブラストミセス、カンジダ、コクシジオイデス、クリプトコッカス、ヒストプラスマ、パラコクシジオイデス、スポロスリックス）、ウイルス（例えば、アデノウイルス、単純ヘルペスウイルス、パピローマウイルス、呼吸シンシチアウイルス、ポックスウイルス、ＨＩＶ、インフルエンザウイルス、ＳＡＲＳ－ＣｏＶやＳＡＲＳ－ＣｏＶ２のようなコロナウイルス）、細胞内寄生体（例えば、クラミジア科、マイコプラズマ科、アコレプラスマ科、リケッチア科）、蠕虫（例えば、線虫、吸虫、条虫）等の感染病原体に由来する抗原ペプチド；プリオン等のその他の抗原ペプチド等が挙げられる。
　抗原ペプチドは、アレルギー症状を引き起こすアレルゲンを含んでもよい。アレルゲンとしては、上記原生動物、細菌、真菌、細胞内寄生体及び蠕虫に由来するペプチド以外に、外来性のペプチド、たとえば、ハウスダスト、ダニ、動物（たとえばネコ、イヌなどのコンパニオンアニマル）、及び花粉（たとえば、スギやヒノキ）由来のペプチド等が例示される。より詳細には、Ｃｒｙｊ１などのスギ花粉に含まれるタンパク質が例示される。あるいは、アレルギー症状を引き起こすアレルゲンは、食物由来のものであってよい。食物に対するアレルギー症状を引き超すアレルゲンとしては、鶏卵、牛乳、小麦、そば、かに、えび及び落花生由来のペプチド等が例示される。

　本明細書中で用いられる「ＭＨＣ分子拘束性抗原ペプチド」とは、ｉｎｖｉｔｒｏ、ｉｎｖｉｖｏ及び／又はｅｘｖｉｖｏ等で、ＭＨＣ分子に結合することが可能な抗原ペプチドを意味する。「ＭＨＣ分子拘束性抗原ペプチド」のアミノ酸残基数は、通常、約７～約３０である。「ＭＨＣ分子拘束性抗原ペプチド」としては、例えば、ＭＨＣクラスＩ分子拘束性抗原ペプチド、ＭＨＣクラスＩＩ分子拘束性抗原ペプチド等が挙げられる。

　本明細書中で用いられる「ＭＨＣクラスＩ分子拘束性抗原ペプチド」とは、ｉｎｖｉｔｒｏ、ｉｎｖｉｖｏ及び／又はｅｘｖｉｖｏ等で、ＭＨＣクラスＩ分子に結合することが可能な抗原ペプチドを意味する。ＭＨＣクラスＩ分子拘束性抗原ペプチドが細胞外小胞の膜外に提示されると、例えば、該抗原ペプチドが前駆体Ｔ細胞等に認識され、細胞傷害性Ｔ細胞等を誘導しうる。「ＭＨＣクラスＩ分子拘束性抗原ペプチド」のアミノ酸残基数は、通常、約７～約３０であり、好ましくは約７～約２５であり、より好ましくは約７～約２０であり、更に好ましくは約７～約１５であり、より更に好ましくは約７～約１２である。

　本明細書中で用いられる「ＭＨＣクラスＩＩ分子拘束性抗原ペプチド」とは、ｉｎｖｉｔｒｏ、ｉｎｖｉｖｏ及び／又はｅｘｖｉｖｏ等で、ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合することが可能な抗原ペプチドを意味する。ＭＨＣクラスＩＩ分子拘束性抗原ペプチドが細胞外小胞の膜外に提示されると、例えば、該抗原ペプチドが前駆体Ｔ細胞等に認識され、ヘルパーＴ細胞等を誘導しうる。「ＭＨＣクラスＩＩ分子拘束性抗原ペプチド」のアミノ酸残基数は、通常、約７～約３０であり、好ましくは約１０～約２５であり、より好ましくは約１２～約２４である。

　「ＭＨＣ分子拘束性抗原ペプチド」、「ＭＨＣクラスＩ分子拘束性抗原ペプチド」、又は「ＭＨＣクラスＩＩ分子拘束性抗原ペプチド」としては、ＭＨＣ分子、ＭＨＣクラスＩ分子又はＭＨＣクラスＩＩ分子に結合することが可能な抗原ペプチドである限り、特段限定されるものではない。

Ｔ細胞刺激性サイトカイン

　本明細書中で用いられる「Ｔ細胞刺激性サイトカイン」とは、Ｔ細胞の膜上に発現する受容体等を介して、Ｔ細胞を刺激（例えば、活性化、抑制等）することが可能なサイトカインである限り特段限定されるものではない。Ｔ細胞刺激性サイトカインとしては、これらに限定されるものではないが、例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＴＧＦ－β、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－γ等が挙げられる。これらのうち、ホモ若しくはヘテロのサブユニットの多量体を形成しうるもの（例えば、ＩＬ－１２、ＴＧＦ－β等）は、機能的である限り（即ち、所望の薬理活性を有しうる限り）、場合によりペプチドリンカー等を介して連結された、連続したアミノ酸配列のものであってもよい。

　本明細書中に記載のＴ細胞刺激性サイトカインは、任意の動物種由来のものであってもよい。例えば、マウス、ラット等のげっ歯類；ウサギ等のウサギ目；ブタ、ウシ、ヤギ、ウマ、ヒツジ等の有蹄類；イヌ、ネコ等のネコ目；ヒト、サル、アカゲザル、カニクイザル、マーモセット、オランウータン、チンパンジー等の霊長類等の哺乳動物等の動物に由来するものが挙げられる。本明細書中に記載のＴ細胞刺激性サイトカインは、好ましくは、げっ歯類又は哺乳類動物に由来するものであり、より好ましくは、マウス又はヒトに由来するものである。

　本明細書中に記載のＴ細胞刺激性サイトカインは、その機能を発揮することができるものである限り、その野生型のアミノ酸配列（例えば、ＩＬ－２の場合、例えば配列番号２５等；ＩＬ－４の場合、例えば配列番号５３等）に対して、アミノ酸配列同一性が、８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のものであってもよい。或いは、本明細書中に記載のＴ細胞刺激性サイトカインは、その機能を発揮することができるものである限り、その野生型のアミノ酸配列に対して、１個又は複数個のアミノ酸の欠失、挿入、付加及び／又は置換等されたものであってもよい。

　本明細書中で用いられる「（第１の、第２の）Ｔ細胞刺激性サイトカインを含む、該（第１の、第２の）Ｔ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能なタンパク質」とは、Ｔ細胞刺激性サイトカインを少なくとも含み、細胞外小胞の膜外に該Ｔ細胞刺激性サイトカインを提示することが可能なタンパク質を意味する。「（第１の、第２の）Ｔ細胞刺激性サイトカインを含む、該（第１の、第２の）Ｔ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能なタンパク質」は、これが細胞外小胞の膜に発現するように、プラスミド等を用いて、Ｔ細胞刺激性サイトカインと膜タンパク質又はその膜貫通ドメインを含むフラグメント等とを含む融合タンパク質として発現させたものであってもよい。或いは、「（第１の、第２の）Ｔ細胞刺激性サイトカインを含む、該（第１の、第２の）Ｔ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能なタンパク質」は、可溶性のＴ細胞刺激性サイトカイン（これらに限定されるものではないが、例えば、Ｔ細胞刺激性サイトカインそのもの；Ｔ細胞刺激性サイトカインと抗体のＦｃ部分との融合タンパク質；Ｔ細胞刺激性サイトカインと、該Ｔ細胞刺激性サイトカインを認識する抗体、又はその抗原結合性フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ若しくはナノボディ）等と、の複合体等）を用いる場合、可溶性のＴ細胞刺激性サイトカインと細胞外小胞とを、必要に応じて脂質リンカー、ペプチドリンカー等を介して、細胞外小胞の膜に結合させたものであってもよい（例えば、特開２０１８－１０４３４１号公報等に記載の方法を参考にしてもよい）。或いは、可溶性のＴ細胞刺激性サイトカインのＮ末端側又はＣ末端側に所望のタグ（例えば、Ｈｉｓタグ、ＦＬＡＧタグ、ＰＮＥタグを付加したもの（該タグは、例えば、他の構成要素とともに融合タンパク質として発現させてもよいし、別途用意した可溶性のＴ細胞刺激性サイトカインに、必要に応じてリンカー等を介して結合させてもよい）と、該タグに対する抗体又はその抗原結合性フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ若しくはナノボディ）等を含むタンパク質（例えば、必要に応じてリンカー等を介して細胞外小胞の膜に結合した、該タグに対する抗体又はその抗原結合性フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ若しくはナノボディ）等自体；細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質又はその膜貫通ドメインのＮ末端側又はＣ末端側に、該タグに対するナノボディが結合した、融合タンパク質等）を膜に含む細胞外小胞とを、所望の条件で混合したものであってもよい（例えば、Raj D, et al., Gut., 2019 Jun;68(6):1052-1064等に記載の、ＰＮＥタグと該タグに対する抗体等とを用いる方法を参考にしてもよい）。なお、サブユニットの多量体で形成されるＴ細胞刺激性サイトカインの場合、そのサブユニットの１つが、細胞外小胞の膜外に提示することが可能なタンパク質であれば、残りのサブユニットは膜外に提示可能な態様である必要はない。そのサブユニットの１つが、細胞外小胞の膜外に提示することが可能なタンパク質であれば、他のサブユニットを添加又は共発現させることにより、機能的なＴ細胞刺激性サイトカインが細胞外小胞の膜外に構築されうる。

Ｔ細胞共刺激分子

　本明細書中で用いられる「Ｔ細胞共刺激分子」とは、ＣＤ２８、ＣＤ１３４等のＴ細胞の膜上に存在する分子と相互作用することで、Ｔ細胞の活性化等に寄与しうる分子を意味する。Ｔ細胞共刺激分子としては、これらに限定されるものではないが、例えば、ＣＤ８０、ＣＤ８６等の分子、又はこれらの細胞外ドメイン若しくはその機能的なフラグメント；抗ＣＤ２８抗体、抗ＣＤ１３４抗体等の抗体、又はこれらの抗原結合性フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ若しくはナノボディ）等；これらと、他のタンパク質の膜貫通ドメイン若しくは抗体のＦｃ部分等との融合タンパク質（若しくは複合体、会合体）等が挙げられる。

　本明細書中に記載のＴ細胞共刺激分子は、任意の動物種由来のものであってもよい。例えば、マウス、ラット、ハムスター、モルモット等のげっ歯類；ウサギ等のウサギ目；ブタ、ウシ、ヤギ、ウマ、ヒツジ等の有蹄類；イヌ、ネコ等のネコ目；ヒト、サル、アカゲザル、カニクイザル、マーモセット、オランウータン、チンパンジー等の霊長類等の哺乳動物等の動物に由来するものが挙げられる。本明細書中に記載のＴ細胞共刺激分子は、好ましくは、げっ歯類又は哺乳類動物に由来するものであり、より好ましくは、マウス又はヒトに由来するものである。

　本明細書中に記載のＴ細胞共刺激分子は、上述した機能を発揮することができるものである限り、その野生型のアミノ酸配列（例えば、ＣＤ８０の場合、例えば配列番号６７等）に対して、アミノ酸配列同一性が、８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のものであってもよい。或いは、本明細書中に記載のＴ細胞共刺激分子は、その機能を発揮することができるものである限り、その野生型のアミノ酸配列に対して、１個又は複数個のアミノ酸の欠失、挿入、付加及び／又は置換等されたものであってもよい。

　本明細書中で用いられる「Ｔ細胞共刺激分子を含む、該Ｔ細胞共刺激分子とＴ細胞とが相互作用可能なタンパク質」とは、Ｔ細胞共刺激分子を少なくとも含み、Ｔ細胞の膜上に存在する分子と相互作用可能なタンパク質を意味する。即ち、少なくともＴ細胞共刺激分子中に存在するＴ細胞と相互作用可能な部分が、細胞外小胞の膜外に位置していることを意味する。「Ｔ細胞共刺激分子を含む、該Ｔ細胞共刺激分子とＴ細胞とが相互作用可能なタンパク質」は、これが細胞外小胞の膜に発現するように、プラスミド等を用いて発現させたものであってもよい。或いは、「Ｔ細胞共刺激分子を含む、該Ｔ細胞共刺激分子とＴ細胞とが相互作用可能なタンパク質」は、可溶性のＴ細胞共刺激分子（これらに限定されるものではないが、例えば、ＣＤ８０の細胞外ドメインと抗体のＦｃ部分との融合タンパク質；抗ＣＤ２８抗体、又はその抗原結合性フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ若しくはナノボディ）等）を用いる場合、可溶性のＴ細胞共刺激分子と細胞外小胞とを、必要に応じて脂質リンカー、スペーサー配列等を介して、細胞外小胞の膜に結合させたものであってもよい（例えば、特開２０１８－１０４３４１号公報等に記載の方法を参考にしてもよい）。或いは、可溶性のＴ細胞共刺激分子のＮ末端側又はＣ末端側に所望のタグ（例えば、Ｈｉｓタグ、ＦＬＡＧタグ、ＰＮＥタグを付加したもの（該タグは、例えば、他の構成要素とともに融合タンパク質として発現させてもよいし、別途用意した可溶性のＴ細胞共刺激分子に、必要に応じてリンカー等を介して結合させてもよい）と、該タグに対する抗体又はその抗原結合性フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ若しくはナノボディ）等を含むタンパク質（例えば、必要に応じてリンカー等を介して細胞外小胞の膜に結合した、該タグに対する抗体又はその抗原結合性フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ若しくはナノボディ）等自体；細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質又はその膜貫通ドメインのＮ末端側又はＣ末端側に、該タグに対するナノボディが結合した、融合タンパク質等）を膜に含む細胞外小胞とを、所望の条件で混合したものであってもよい（例えば、Raj D, et al., Gut., 2019 Jun;68(6):1052-1064等に記載の、ＰＮＥタグと該タグに対する抗体等とを用いる方法を参考にしてもよい）。

　本明細書中で用いられる「細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン」としては、細胞外小胞の膜に発現することが可能なものである限り、任意の膜タンパク質又はその膜貫通ドメインを選択することができる。「細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質又はその膜貫通ドメイン」は、細胞外小胞（例えば、エクソソーム等）に発現しうることが知られている膜タンパク質（例えば、テトラスパニン、ＣＤ５８、ＩＣＡＭ－１、ＰＴＧＦＲＮ（例えば、非特許文献１、国際公開第２０１９／１８３５７８号等を参照）等）、又はこれらの膜貫通ドメイン等が好ましい。

　本明細書中で用いられる「細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメイン」としては、細胞外小胞の膜に結合することが可能なものである限り、任意のタンパク質又はそのドメインを選択することができる。「細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメイン」は、細胞外小胞（例えば、エクソソーム等）の膜に結合しうることが知られているもの（例えば、ＭＦＧ－Ｅ８、又はそのドメイン（例えば、Alain Delcayre, et al., Blood Cells, Molecules, and Diseases 35 (2005) 158-168に記載のＭＦＧ－Ｅ８のＣ１、Ｃ２ドメイン））等が好ましい。

　本明細書中に記載の「細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン」又は「細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメイン」は、任意の動物種由来のものであってもよい。例えば、マウス、ラット等のげっ歯類；ウサギ等のウサギ目；ブタ、ウシ、ヤギ、ウマ、ヒツジ等の有蹄類；イヌ、ネコ等のネコ目；ヒト、サル、アカゲザル、カニクイザル、マーモセット、オランウータン、チンパンジー等の霊長類等の哺乳動物等の動物に由来するものが挙げられる。本明細書中に記載の「細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン」又は「細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメイン」は、好ましくは、げっ歯類又は哺乳類動物に由来するものであり、より好ましくは、マウス又はヒトに由来するものである。

　非特許文献２によると、哺乳動物の細胞外小胞のマーカーは以下のように分類される。
　細胞外小胞のマーカータンパク質として用いることのできる膜タンパク質又はＧＰＩアンカータンパク質としては、
１）組織非特異的なもの
　テトラスパニン（ＣＤ６３，ＣＤ９，ＣＤ８１，ＣＤ８２），他の複数膜貫通型の膜タンパク質（ＣＤ４７やヘテロ３量体Ｇタンパク質（ＧＮＡ：Ｇｕａｎｉｎｅ　ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ－ｂｉｎｄｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ）など）
　ＭＨＣ　クラスＩ（ＨＬＡ－Ａ／Ｂ／Ｃ，Ｈ２－Ｋ／Ｄ／Ｑ），
インテグリン（ＩＴＧＡ／ＩＴＧＢ）、トランスフェリン受容体（ＴＦＲ２）；
　ＬＡＭＰ１／２；
　ヘパラン硫酸プロテオグリカン（シンデカン（ＳＤＣ）を含む）；
　細胞外マトリックスメタロプロテアーゼ誘導物質（ＥＭＭＰＲＩＮ）（ＢＳＧ又はＣＤ１４７ともいう）；
　ＡＤＡＭ１０；
　ＧＰＩアンカー型の５’ヌクレオチダーゼであるＣＤ７３（ＮＴ５Ｅ），
　ＧＰＩアンカー型の補体結合タンパク質であるＣＤ５５及びＣＤ５９；
　ソニックヘッジホッグタンパク質（ＳＨＨ）
２）細胞／組織特異的なもの
　いくつかのテトラスパニン：ＴＳＰＡＮ８（上皮細胞特異的）、ＣＤ３７及びＣＤ５３（白血球特異的）；
　ＰＥＣＡＭ１（内皮細胞特異的）；
　ＥＲＢＢ２（乳癌特異的）；
　ＥＰＣＡＭ（上皮性特異的）；
　ＣＤ９０（ＴＨＹ１）（間葉系幹細胞特異的）；
　ＣＤ４５（ＰＴＰＲＣ）（免疫細胞特異的）、ＣＤ４１（ＩＴＧＡ２Ｂ）又はＣＤ４２ａ（ＧＰ９）（血小板特異的）；
　グリコホリンＡ（ＧＹＰＡ）（赤血球特異的）；
　ＣＤ１４（単球特異的），ＭＨＣクラスＩＩ（ＨＬＡ－ＤＲ／ＤＰ／ＤＱ，Ｈ２－Ａ）；
　ＣＤ３（Ｔ細胞特異的）；
　アセチルコリンエステラーゼ／ＡＣｈＥ－Ｓ（神経細胞特異的）、ＡＣｈＥ－Ｅ（赤血球特異的）；
　アミロイドβＡ４／ＡＰＰ（神経細胞特異的）；
などが挙げられる。
　従って、これらに限定しないが、細胞外小胞のマーカーであるタンパク質を本発明における「細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質」又は「細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質」として用いてもよい。

　本明細書中で用いられる「テトラスパニン」とは、テトラスパニンファミリーに属するタンパク質（これらに限定されるものではないが、例えば、ＣＤ９、ＣＤ５３、ＣＤ６３、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ１５１等）を意味する。テトラスパニンは、通常、Ｎ末端側から、膜貫通ドメイン１（以下、「ＴＭ１」ともいう。）、小型細胞外ループ（以下、「ＳＥＬ」ともいう。）、膜貫通ドメイン２（以下、「ＴＭ２」ともいう。）、小型細胞内ループ（以下、「ＳＩＬ」ともいう。）、膜貫通ドメイン３（以下、「ＴＭ３」ともいう。）、大型細胞外ループ（以下、「ＬＥＬ」ともいう。）、及び膜貫通ドメイン４（以下、「ＴＭ４」ともいう。）を有することから、４回膜貫通型であり、かつ、Ｎ末端側及びＣ末端側の両方が細胞質側に存在する。例えば、テトラスパニンがマウスＣＤ６３（アミノ酸配列１～２３８：配列番号２７）の場合、通常、アミノ酸配列約１～約１１０において、ＴＭ１、ＳＥＬ、ＴＭ２、ＳＩＬ及びＴＭ３を含み、アミノ酸配列約１１１～約２００において、ＬＥＬを含み、アミノ酸配列約２０１～約２３８において、ＴＭ４を含みうる。

　本明細書中に記載の「テトラスパニン」における各ドメイン（例えば、ＴＭ１、ＳＥＬ、ＳＩＬ、ＬＴＬ等）は、同一のテトラスパニン由来のものであってもよいし、全部又は一部が異なるテトラスパニン由来のものであってもよい。

　本明細書中に記載のテトラスパニンは、細胞外小胞の膜に発現することが可能なものである限り、その野生型のアミノ酸配列（例えば、全長のＣＤ９の場合、例えば配列番号２１等；全長のＣＤ６３の場合、例えば配列番号２７等；全長のＣＤ８１の場合、例えば配列番号１５等）に対して、アミノ酸配列同一性が、８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のものであってもよい。或いは、本明細書中に記載のテトラスパニンは、細胞外小胞の膜に発現することが可能なものである限り、その野生型のアミノ酸配列に対して、１個又は複数個のアミノ酸の欠失、挿入、付加及び／又は置換等されたものであってもよい。

　本明細書中に記載のテトラスパニンの部分配列（例えば、各ドメイン；ＴＭ１、ＳＥＬ、ＴＭ２、ＳＩＬ及びＴＭ３を含む部分配列（例えば、ＣＤ６３の場合、配列番号５７等；ＣＤ８１の場合、配列番号６１等）；ＴＭ４を含む部分配列（例えば、ＣＤ６３の場合、配列番号５９等；ＣＤ８１の場合、配列番号６３等））は、その野生型のアミノ酸配列に対して、アミノ酸配列同一性が、８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のものであってもよい。或いは、本明細書中に記載のテトラスパニンの部分配列は、その野生型のアミノ酸配列に対して、１個又は複数個のアミノ酸の欠失、挿入、付加及び／又は置換等されたものであってもよい。

　本明細書中に記載のＭＦＧ－Ｅ８は、細胞外小胞の膜に結合することが可能なものである限り、その野生型のアミノ酸配列（例えば、配列番号４９等）に対して、アミノ酸配列同一性が、８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のものであってもよい。或いは、本明細書中に記載のＭＦＧ－Ｅ８は、細胞外小胞の膜に結合することが可能なものである限り、その野生型のアミノ酸配列に対して、１個又は複数個のアミノ酸の欠失、挿入、付加及び／又は置換等されたものであってもよい。

　本明細書中に記載のＣＤ５８、ＰＴＧＦＲＮ等は、細胞外小胞の膜に発現することが可能なものであるか、又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なものである限り、その野生型のアミノ酸配列に対して、アミノ酸配列同一性が、８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のものであってもよい。或いは、本明細書中に記載のＣＤ５８、ＰＴＧＦＲＮ等は、細胞外小胞の膜に発現することが可能なものであるか、又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なものである限り、その野生型のアミノ酸配列に対して、１個又は複数個のアミノ酸の欠失、挿入、付加及び／又は置換等されたものであってもよい。

スペーサー配列

　本明細書中で用いられる「スペーサー配列」とは、２以上のタンパク質又はその部分配列若しくはドメイン等の間に存在する、少なくとも１つのアミノ酸残基を有する任意の配列を意味する。スペーサー配列は、例えば、２以上のタンパク質又はその部分配列若しくはドメイン等を連結する際に使用されうる。スペーサー配列は、ペプチドリンカーを包含する。スペーサー配列は、アミノ酸残基の長さとして、通常、１～約５０であり、好ましくは、約２～約２８であり、より好ましくは、約４～約２５である。スペーサー配列としては、これらに限定されるものではないが、例えば、（ＧＧＧＸＳ）_ｎＧ_ｍ（式中、Ｘは出現するごとに独立して、Ａ又はＧであり、ｎは、１～８であり、ｍは、０～３である）（例えば、配列番号５、１１、２９、３９等）；（ＧＧＧＳ）_ｎＧ_ｍ（式中、ｎは、１～１０であり、ｍは、０～３である）；Ｔ_ａＳ_ｂ（ＧＧＸ）_ｎＧ_ｍ（式中、Ｘは出現するごとに独立して、Ｓ又はＴであり、ｎは、１～８であり、ｍは、０～３であり、ａは、０又は１であり、ｂは、０又は１である）（例えば、配列番号７７等）；等が挙げられる。

本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞

　本発明の一実施態様では、抗原提示ＭＨＣ分子及びＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示する細胞外小胞を提供する（図２J（１）にそのモデルを例示する）。
　かかる細胞外小胞は、以下の（Ａ）と（Ｂ）に規定されるタンパク質を膜に含むことによって、抗原提示ＭＨＣ分子及びＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示させてもよいし、（Ｄ）に規定されるタンパク質を膜に含むことによって、抗原提示ＭＨＣ分子及びＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示させてもよい。
　あるいは、単離した細胞外小胞にあとから、その膜表面に抗原提示ＭＨＣ分子及びＴ細胞刺激性サイトカインを付着させてもよい。付着させる方法は特に限定しないが、抗原提示ＭＨＣ分子及びＴ細胞刺激性サイトカインに各々リン脂質を結合し、細胞外小胞の膜に新脂質部分を取り込ませることにより、膜表面に抗原提示ＭＨＣ分子及びＴ細胞刺激性サイトカインを付着させてもよい。細胞外小胞にはフォスファチジルセリンが表面に存在している。従って、フォスファチジルセリンと結合するＭＦＧ－Ｅ８に、提示させたい抗原提示ＭＨＣ分子又はＴ細胞刺激性サイトカインを融合させたタンパク質を各々合成精製して、その融合タンパク質と細胞外小胞を混合することにより、膜表面に抗原提示ＭＨＣ分子及びＴ細胞刺激性サイトカインを提示する細胞外小胞を作製することができる。また、ペプチドネオエピトープ（ＰＮＥ）ナノボディをあらかじめ発現させた細胞外小胞に、後からＰＮＥｔａｇを付けた抗原提示ＭＨＣ分子及びＴ細胞刺激性サイトカインを加えて細胞外小胞の膜表面に提示させてもよい。ストレプトアビジンを発現させた細胞外小胞にビオチン化した抗原提示ＭＨＣ分子及びＴ細胞刺激性サイトカインを加えて、細胞外小胞の膜表面に提示させてもよい。

　本発明の一実施態様では、複数種類（２、３、４、５種）の抗原提示ＭＨＣ分子及び複数種類（２、３、４、５種）のＴ細胞刺激性サイトカイン（各々のＴ細胞刺激性サイトカインを識別するために、以下、第一のＴ細胞刺激性サイトカイン、第二のＴ細胞刺激性サイトカイン、それ以上のＴ細胞刺激性サイトカイン等と呼称する場合がある）を膜外に提示する細胞外小胞であってもよい。あるいは１種類の抗原提示ＭＨＣ分子と複数種類の細胞刺激性サイトカインを膜外に提示する細胞外小胞であってもよい（図２J（３）に１種類の抗原提示ＭＨＣ分子と２種類のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示する細胞外小胞のモデルを例示する）。

　本発明の一実施態様では、抗原提示細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ａ）抗原提示ＭＨＣ分子を含む、該抗原を膜外に提示可能なタンパク質；及び
（Ｂ）第１のＴ細胞刺激性サイトカインを含む、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能なタンパク質；
を含む、抗原提示細胞外小胞を提供する。

構成要件（Ａ）
　上記（Ａ）の「抗原提示ＭＨＣ分子を含む、該抗原を膜外に提示可能なタンパク質」は、抗原を細胞外小胞の膜外に提示可能なタンパク質である限り、抗原提示ＭＨＣ分子の他に、他のタンパク質又はそのドメイン等を含んでいてもよい。

　本発明の一実施態様では、上記（Ａ）は、抗原提示ＭＨＣ分子と、細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメインを含む、該抗原を膜外に提示可能な融合タンパク質又はタンパク質複合体である。

　本発明の一実施態様では、上記（Ａ）は、抗原提示ＭＨＣ分子と、テトラスパニン若しくはその膜貫通ドメイン又はＭＦＧ－Ｅ８若しくはそのドメインとを含む、該抗原を膜外に提示可能な融合タンパク質又はタンパク質複合体である。

　本発明の一実施態様では、上記（Ａ）は、
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能な融合タンパク質であって、Ｎ末端側から、
　（Ａ－１）ＭＨＣ分子拘束性抗原ペプチド、
　（Ａ－２）存在していてもよいスペーサー配列、
　（Ａ－３）単鎖ＭＨＣ分子、
　（Ａ－４）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　（Ａ－５）テトラスパニン
からなるアミノ酸配列を含む、融合タンパク質、又は
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能なタンパク質複合体であって、
　Ｎ末端側から、
　　（Ａ－１）ＭＨＣ分子拘束性抗原ペプチド、
　　（Ａ－２）存在していてもよいスペーサー配列、
　　（Ａ－３）ＭＨＣクラスＩα鎖、β_２ミクログロブリン、ＭＨＣクラスＩＩα鎖、又はＭＨＣクラスＩＩβ鎖
　　（Ａ－４）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　　（Ａ－５）テトラスパニン
からなるアミノ酸配列を含む、融合タンパク質と、
　（Ａ－６）β_２ミクログロブリン、ＭＨＣクラスＩα鎖、ＭＨＣクラスＩＩβ鎖、又はＭＨＣクラスＩＩα鎖のアミノ酸配列を含む、タンパク質と
を含む、タンパク質複合体
である。

　本発明の一実施態様では、上記（Ａ）は、
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能な融合タンパク質であって、Ｎ末端側から、
　（Ａ－１）ＭＨＣクラスＩ分子拘束性抗原ペプチド、
　（Ａ－２）存在していてもよいスペーサー配列、
　（Ａ－３）単鎖ＭＨＣクラスＩ分子、
　（Ａ－４）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　（Ａ－５）テトラスパニン
からなるアミノ酸配列を含む、該抗原ペプチドを膜外に提示可能な融合タンパク質である。
　また、本発明の一実施態様では、上記（Ａ）は、
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能な融合タンパク質であって、Ｎ末端側から、
　（Ａ－１）ＭＨＣクラスＩＩ分子拘束性抗原ペプチド、
　（Ａ－２）存在していてもよいスペーサー配列、
　（Ａ－３）単鎖ＭＨＣクラスＩＩ分子、
　（Ａ－４）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　（Ａ－５）テトラスパニン
からなるアミノ酸配列を含む、該抗原ペプチドを膜外に提示可能な融合タンパク質である。

　本発明の一実施態様では、上記（Ａ）は、
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能なタンパク質複合体であって、
　Ｎ末端側から、
　　（Ａ－１）ＭＨＣクラスＩ分子拘束性抗原ペプチド、
　　（Ａ－２）存在していてもよいスペーサー配列、
　　（Ａ－３）β_２ミクログロブリン、
　　（Ａ－４）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　　（Ａ－５）テトラスパニン
からなるアミノ酸配列を含む、融合タンパク質と、
　（Ａ－６）ＭＨＣクラスＩα鎖のアミノ酸配列を含む、タンパク質と
を含む、タンパク質複合体である。
　また、本発明の一実施態様では、上記（Ａ）は、
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能なタンパク質複合体であって、
　Ｎ末端側から、
　　（Ａ－１）ＭＨＣクラスＩ分子拘束性抗原ペプチド、
　　（Ａ－２）存在していてもよいスペーサー配列、
　　（Ａ－３）ＭＨＣクラスＩα鎖、
　　（Ａ－４）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　　（Ａ－５）テトラスパニン
からなるアミノ酸配列を含む、融合タンパク質と、
　（Ａ－６）β_２ミクログロブリンのアミノ酸配列を含む、タンパク質と
を含む、タンパク質複合体である。
　また、本発明の一実施態様では、上記（Ａ）は、
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能なタンパク質複合体であって、
　Ｎ末端側から、
　　（Ａ－１）ＭＨＣクラスＩＩ分子拘束性抗原ペプチド、
　　（Ａ－２）存在していてもよいスペーサー配列、
　　（Ａ－３）ＭＨＣクラスＩＩβ鎖、
　　（Ａ－４）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　　（Ａ－５）テトラスパニン
からなるアミノ酸配列を含む、融合タンパク質と、
　（Ａ－６）ＭＨＣクラスＩＩα鎖のアミノ酸配列を含む、タンパク質と
を含む、タンパク質複合体である。
　また、本発明の一実施態様では、上記（Ａ）は、
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能なタンパク質複合体であって、
　Ｎ末端側から、
　　（Ａ－１）ＭＨＣクラスＩＩ分子拘束性抗原ペプチド、
　　（Ａ－２）存在していてもよいスペーサー配列、
　　（Ａ－３）ＭＨＣクラスＩＩα鎖、
　　（Ａ－４）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　　（Ａ－５）テトラスパニン
からなるアミノ酸配列を含む、融合タンパク質と、
　（Ａ－６）ＭＨＣクラスＩＩβ鎖のアミノ酸配列を含む、タンパク質と
を含む、タンパク質複合体である。

　本発明の一実施態様では、上記（Ａ－３）が「単鎖ＭＨＣクラスＩ分子」の場合、「単鎖ＭＨＣクラスＩ分子」は、Ｎ末端側から、β_２ミクログロブリン（例えば、配列番号７等、又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）、存在していてもよいスペーサー配列（存在する場合、例えば、配列番号５、１１、２９、３９、７７等）、及びＭＨＣクラスＩα鎖（例えば、配列番号９等、又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）からなる。本発明の一実施態様では、上記（Ａ－３）が「単鎖ＭＨＣクラスＩ分子」の場合、「単鎖ＭＨＣクラスＩ分子」は、配列番号６５、又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のものである。

　本発明の一実施態様では、上記（Ａ－３）が「単鎖ＭＨＣクラスＩＩ分子」の場合、「単鎖ＭＨＣクラスＩＩ分子」は、Ｎ末端側から、ＭＨＣクラスＩＩβ鎖、存在していてもよいスペーサー配列、及びＭＨＣクラスＩＩα鎖からなる。

　本発明の一実施態様では、上記（Ａ－３）及び／又は（Ａ－６）が「β_２ミクログロブリン」の場合、「β_２ミクログロブリン」は、配列番号７、又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のものである。

　本発明の一実施態様では、上記（Ａ－３）及び／又は（Ａ－６）が「ＭＨＣクラスＩα鎖」の場合、「ＭＨＣクラスＩα鎖」は、配列番号９、又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のものである。

　本発明の一実施態様では、上記（Ａ－３）及び／又は（Ａ－６）が「ＭＨＣクラスＩＩβ鎖」の場合、「ＭＨＣクラスＩＩβ鎖」は、配列番号３７、又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のものである。

　本発明の一実施態様では、上記（Ａ－３）及び／又は（Ａ－６）が「ＭＨＣクラスＩＩα鎖」の場合、「ＭＨＣクラスＩＩα鎖」は、配列番号７１、又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のものである。

　上記各実施態様における（Ａ－２）及び（Ａ－４）の「存在していてもよいスペーサー配列」は、存在する場合、独立して選択されうる。（Ａ－２）は、存在する場合、例えば、配列番号５、１１、２９、３９、７７等のスペーサー配列であってもよい。（Ａ－４）は、存在する場合、例えば、配列番号５、１１、２９、３９、７７等のスペーサー配列であってもよい。

　本発明の一実施態様では、上記各実施態様における（Ａ－５）のテトラスパニンは、ＣＤ９、ＣＤ６３及びＣＤ８１からなる群より選択される。本発明の一実施態様では、上記各実施態様における（Ａ－５）のテトラスパニンは、ＣＤ８１（好ましくは、配列番号１５等、又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）である。

　本発明の一実施態様では、上記（Ａ）は、
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能な融合タンパク質であって、Ｎ末端側から、
　（Ａ－１）ＭＨＣクラスＩ分子拘束性抗原ペプチド、
　（Ａ－２）配列番号５のスペーサー配列、
　（Ａ－３）配列番号６５（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）の単鎖ＭＨＣクラスＩ分子、及び
　（Ａ－５）配列番号１５（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニン
からなるアミノ酸配列である、融合タンパク質である。

　本発明の一実施態様では、上記（Ａ）は、
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能なタンパク質複合体であって、
　Ｎ末端側から、
　　（Ａ－１）ＭＨＣクラスＩＩ分子拘束性抗原ペプチド、
　　（Ａ－２）配列番号３９のスペーサー配列、
　　（Ａ－３）配列番号３７（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＭＨＣクラスＩＩβ鎖、及び
　　（Ａ－５）配列番号１５（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニン、
からなるアミノ酸配列である、融合タンパク質と
　（Ａ－６）配列番号７１（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＭＨＣクラスＩＩα鎖と
を含む、タンパク質複合体である。

構成要件（Ｂ）
　上記（Ｂ）の「第１のＴ細胞刺激性サイトカインを含む、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能なタンパク質」は、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能なタンパク質である限り、第１のＴ細胞刺激性サイトカインの他に、他のタンパク質若しくはそのドメイン等を含んでいてもよい。

　本発明の一実施態様では、上記（Ｂ）は、第１のＴ細胞刺激性サイトカインと、細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメインを含む、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質である。

　本発明の一実施態様では、上記（Ｂ）は、
（Ｂ）第１のＴ細胞刺激性サイトカインと、テトラスパニンの部分配列とを含む、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質であって、該テトラスパニンの部分配列が、２つの膜貫通ドメインを少なくとも有し、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインが、該２つの膜貫通ドメインの間に配置されている、融合タンパク質、又は
（Ｂ）第１のＴ細胞刺激性サイトカインと、ＭＦＧ－Ｅ８又はそのドメインとを含む、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質である。

　本明細書中で用いられる「テトラスパニンの部分配列が、２つの膜貫通ドメインを少なくとも有し、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインが、該２つの膜貫通ドメインの間に配置されている」とは、例えば、テトラスパニンの部分配列がテトラスパニンのＴＭ１とＴＭ２とを少なくとも含み、かつ該第１のＴ細胞刺激性サイトカインがＴＭ１とＴＭ２との間に配置されている場合、テトラスパニンの部分配列がテトラスパニンのＴＭ３とＴＭ４とを少なくとも含み、かつ該第１のＴ細胞刺激性サイトカインがＴＭ３とＴＭ４との間に配置されている場合等が挙げられる。

　本発明の一実施態様では、上記（Ｂ）は、
（Ｂ）Ｎ末端側から、
　（Ｂ－１）Ｎ末端側から、膜貫通ドメイン１、小型細胞外ループ、膜貫通ドメイン２、小型細胞内ループ及び膜貫通ドメイン３を含むテトラスパニンの部分配列、
　（Ｂ－２）存在していてもよいスペーサー配列、
　（Ｂ－３）第１のＴ細胞刺激性サイトカイン、
　（Ｂ－４）存在していてもよいスペーサー配列、並びに
　（Ｂ－５）膜貫通ドメイン４を含むテトラスパニンの部分配列
からなるアミノ酸配列を含む、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質、又は
（Ｂ）Ｎ末端側から、
　（Ｂ－３）第１のＴ細胞刺激性サイトカイン、
　（Ｂ－４）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　（Ｂ－５）ＭＦＧ－Ｅ８
からなるアミノ酸配列を含む、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質である。

　国際公開第２０１６／１３９３５４号で開示されているとおり、テトラスパニンは、その大型細胞外ループ（ＬＥＬ）が全体的に又は部分的に異なるアミノ酸配列に置き換えられていても、膜に発現しうることが報告されている。したがって、（Ｂ－３）の第１のＴ細胞刺激性サイトカインは、存在していてもよいスペーサー配列を介して、テトラスパニンのＬＥＬに替えて挿入されていてもよいし、テトラスパニンのＬＥＬ中又はその部分配列中の任意の位置に挿入されていてもよい。

　（Ｂ－１）の「膜貫通ドメイン１、小型細胞外ループ、膜貫通ドメイン２、小型細胞内ループ及び膜貫通ドメイン３を含むテトラスパニンの部分配列」は、通常、テトラスパニンの膜貫通ドメイン４を含まない。（Ｂ－１）の「膜貫通ドメイン１、小型細胞外ループ、膜貫通ドメイン２、小型細胞内ループ及び膜貫通ドメイン３を含むテトラスパニンの部分配列」は、大型細胞外ループ又はその部分配列を含んでいてもよい。（Ｂ－１）における、膜貫通ドメイン１、小型細胞外ループ、膜貫通ドメイン２、小型細胞内ループ及び膜貫通ドメイン３の各ドメインは、それぞれ別のテトラスパニン由来の配列であってもよいし、全て同じテトラスパニン由来の配列であってもよい。好ましくは、（Ｂ－１）における、膜貫通ドメイン１、小型細胞外ループ、膜貫通ドメイン２、小型細胞内ループ及び膜貫通ドメイン３の各ドメインは、全て同じテトラスパニン由来の配列である。

　本発明の一実施態様では、（Ｂ－１）における、膜貫通ドメイン１、小型細胞外ループ、膜貫通ドメイン２、小型細胞内ループ及び膜貫通ドメイン３を含むテトラスパニンの部分配列が、全て、ＣＤ９由来、ＣＤ６３由来又はＣＤ８１由来の部分配列である。本発明の一実施態様では、（Ｂ－１）の膜貫通ドメイン１、小型細胞外ループ、膜貫通ドメイン２、小型細胞内ループ及び膜貫通ドメイン３を含むテトラスパニンの部分配列は、全てＣＤ６３又はＣＤ８１由来の部分配列（好ましくは、配列番号５７又は配列番号６１等、或いはこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）である。

　（Ｂ－５）の「膜貫通ドメイン４を含むテトラスパニンの部分配列」は、通常、テトラスパニンの膜貫通ドメイン１、小型細胞外ループ、膜貫通ドメイン２、小型細胞内ループ及び膜貫通ドメイン３を含まない。（Ｂ－５）の「膜貫通ドメイン４を含むテトラスパニンの部分配列」は、大型細胞外ループ又はその部分配列を含んでいてもよい。（Ｂ－５）における膜貫通ドメイン４は、（Ｂ－１）とは別のテトラスパニン由来の配列であってもよいし、（Ｂ－１）と同じテトラスパニン由来の配列であってもよい。好ましくは、（Ｂ－５）における膜貫通ドメイン４は、（Ｂ－１）と同じテトラスパニン由来の配列である。本発明の一実施態様では、（Ｂ－５）における、膜貫通ドメイン４を含むテトラスパニンの部分配列が、ＣＤ９由来、ＣＤ６３由来又はＣＤ８１由来の部分配列である。本発明の一実施態様では、（Ｂ－５）の膜貫通ドメイン４を含むテトラスパニンの部分配列は、ＣＤ６３又はＣＤ８１由来の部分配列（好ましくは、配列番号５９又は配列番号６３等、或いはこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）である。

　本発明の一実施態様では、（Ｂ－１）の「膜貫通ドメイン１、小型細胞外ループ、膜貫通ドメイン２、小型細胞内ループ及び膜貫通ドメイン３を含むテトラスパニンの部分配列」は、ＣＤ６３由来の部分配列（好ましくは、配列番号５７等、又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）であり、かつ、（Ｂ－５）の「膜貫通ドメイン４を含むテトラスパニンの部分配列」が、ＣＤ６３由来の部分配列（好ましくは、配列番号５９等、又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）である。本発明の一実施態様では、（Ｂ－１）の「膜貫通ドメイン１、小型細胞外ループ、膜貫通ドメイン２、小型細胞内ループ及び膜貫通ドメイン３を含むテトラスパニンの部分配列」は、ＣＤ８１由来の部分配列（好ましくは、配列番号６１等、又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）であり、かつ、（Ｂ－５）の「膜貫通ドメイン４を含むテトラスパニンの部分配列」が、ＣＤ８１由来の部分配列（好ましくは、配列番号６３等、又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）である。

　上記（Ｂ）の融合タンパク質がテトラスパニンの部分配列を含む融合タンパク質であり、かつ上記（Ａ）及び後述の場合により存在する（Ｃ）のうちの１以上がテトラスパニンのアミノ酸配列を含む融合タンパク質を含む場合、上記（Ｂ）の融合タンパク質は、上記（Ａ）及び／又は後述の場合により存在する（Ｃ）の融合タンパク質と別個の融合タンパク質であってもよいし、上記（Ａ）及び／又は後述の場合により存在する（Ｃ）の融合タンパク質の一部を構成していてもよい。上記（Ｂ）の融合タンパク質が「上記（Ａ）及び／又は後述の場合により存在する（Ｃ）の融合タンパク質の一部を構成」するとは、例えば、（Ａ－５）のテトラスパニンが（Ｂ）の融合タンパク質を構成する場合、及び／又は後述の場合により存在する（Ｃ－３）のテトラスパニンが（Ｂ）の融合タンパク質を構成する場合等が挙げられる。

　上記（Ｂ－５）の「ＭＦＧ－Ｅ８」は、好ましくは、配列番号４９等、又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のものである。

　本発明の一実施態様では、上記各実施態様の（Ｂ－３）における第１のＴ細胞刺激性サイトカインが、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－１２又はＴＧＦ－βである。本発明の一実施態様では、上記各実施態様の（Ｂ－３）における第１のＴ細胞刺激性サイトカインが、ＩＬ－２（好ましくは、配列番号２５、又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）、ＩＬ－４（好ましくは、配列番号５３、又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）、又はＴＧＦ－β（好ましくは、配列番号７３、又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）である。

　上記各実施態様の（Ｂ－２）及び（Ｂ－４）における「存在していてもよいスペーサー配列」は、存在する場合、独立して選択されうる。（Ｂ－２）は、存在する場合、例えば、配列番号５、１１、２９、３９、７７等のスペーサー配列であってもよい。（Ｂ－４）は、存在する場合、例えば、配列番号５、１１、２９、３９、７７等のスペーサー配列であってもよい。

　本発明の一実施態様では、上記（Ｂ）は、
（Ｂ）Ｎ末端側から、
　（Ｂ－１）配列番号５７（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニンの部分配列、
　（Ｂ－２）配列番号２９のスペーサー配列、
　（Ｂ－３）配列番号２５（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＩＬ－２である、第１のＴ細胞刺激性サイトカイン
　（Ｂ－４）配列番号２９のスペーサー配列、並びに
　（Ｂ－５）配列番号５９（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニンの部分配列
からなるアミノ酸配列である、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質である。

　本発明の一実施態様では、上記（Ｂ）は、配列番号３１（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）の、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質である。

本発明の一実施態様では、上記（Ｂ）は、
（Ｂ）Ｎ末端側から、
　（Ｂ－１）配列番号６１（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニンの部分配列、
　（Ｂ－２）配列番号２９のスペーサー配列、
　（Ｂ－３）配列番号５３（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＩＬ－４である、第１のＴ細胞刺激性サイトカイン、
　（Ｂ－４）配列番号２９のスペーサー配列、並びに
　（Ｂ－５）配列番号６３（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニンの部分配列
からなるアミノ酸配列である、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質である。

　本発明の一実施態様では、上記（Ｂ）は、配列番号５５（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）の、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質である。

本発明の一実施態様では、上記（Ｂ）は、
（Ｂ）Ｎ末端側から、
　（Ｂ－３）配列番号７３（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＴＧＦ－βである、第１のＴ細胞刺激性サイトカイン、
　（Ｂ－４）配列番号２９のスペーサー配列、及び
　（Ｂ－５）配列番号４９（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＭＦＧ－Ｅ８
からなるアミノ酸配列である、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質である。

　本発明の一実施態様では、上記（Ｂ）は、配列番号７５（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）の、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質である。

第２（又はそれ以上）のＴ細胞刺激性サイトカイン
　本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞は、第１のＴ細胞刺激性サイトカインに加えて、第２（又はそれ以上）のＴ細胞刺激性サイトカインを更に含んでいてもよい。したがって、本発明の一実施態様では、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞は、第２のＴ細胞刺激性サイトカインを更に含む。特に、抗原提示可能なＭＨＣ分子が抗原提示可能なＭＨＣクラスＩＩ分子である場合、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞は、第２のＴ細胞刺激サイトカインを含むことが好ましい。

　第２（又はそれ以上）のＴ細胞刺激性サイトカインは、例えば、上記（Ｂ）中に挿入されていてもよい（例えば、（Ｂ－３）の「第１のＴ細胞刺激性サイトカイン」のＮ末端側及び／又はＣ末端側に、必要に応じてスペーサー配列等を介して、第２（又はそれ以上）のＴ細胞刺激性サイトカインが連結されていてもよい）。或いは、第２（又はそれ以上）のＴ細胞刺激性サイトカインは、本明細書中に記載の構成要件（Ｂ）と同様の構成を有することにより、本明細書中に記載の構成要件（Ｂ）のタンパク質（又は融合タンパク質）とは別個のタンパク質（又は融合タンパク質）として、第１のＴ細胞刺激性サイトカインと同様に、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞の膜に含まれていてもよい。

　本発明の一実施態様では、第２のＴ細胞刺激性サイトカインが、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－１２又はＴＧＦ－βである。本発明の一実施態様では、第２のＴ細胞刺激性サイトカインが、ＴＧＦ－β（好ましくは、配列番号７３、又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）である。

　本発明の一実施態様では、第１のＴ細胞刺激性サイトカインが、ＩＬ－２又はＩＬ－４（好ましくは、配列番号２５又は配列番号５３、或いはこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）であり、かつ第２のＴ細胞刺激性サイトカインが、ＴＧＦ－β（好ましくは、配列番号７３、又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）である。

　本発明の一実施態様では、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ａ）抗原提示ＭＨＣ分子と、細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメインとを含む、該抗原を膜外に提示可能な融合タンパク質又はタンパク質複合体；及び
（Ｂ）第１のＴ細胞刺激性サイトカインと、細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメインとを含む、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質；
を含む、抗原提示細胞外小胞である。

　本発明の一実施態様では、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ａ）抗原提示ＭＨＣ分子と、テトラスパニン若しくはその膜貫通ドメイン又はＭＦＧ－Ｅ８若しくはそのドメインとを含む、該抗原を膜外に提示可能な融合タンパク質又はタンパク質複合体；及び
（Ｂ）第１のＴ細胞刺激性サイトカインと、テトラスパニンの部分配列とを含む、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質であって、該テトラスパニンの部分配列が、２つの膜貫通ドメインを少なくとも有し、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインが、該２つの膜貫通ドメインの間に配置されている、融合タンパク質、又は
（Ｂ）第１のＴ細胞刺激性サイトカインと、ＭＦＧ－Ｅ８又はそのドメインとを含む、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質；
を含む、抗原提示細胞外小胞である。

　本発明の一実施態様では、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能な融合タンパク質であって、Ｎ末端側から、
　（Ａ－１）ＭＨＣ分子拘束性抗原ペプチド、
　（Ａ－２）存在していてもよいスペーサー配列、
　（Ａ－３）単鎖ＭＨＣ分子、
　（Ａ－４）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　（Ａ－５）テトラスパニン
からなるアミノ酸配列を含む、融合タンパク質、又は
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能なタンパク質複合体であって、
　Ｎ末端側から、
　　（Ａ－１）ＭＨＣ分子拘束性抗原ペプチド、
　　（Ａ－２）存在していてもよいスペーサー配列、
　　（Ａ－３）ＭＨＣクラスＩα鎖、β_２ミクログロブリン、ＭＨＣクラスＩＩα鎖、又はＭＨＣクラスＩＩβ鎖
　　（Ａ－４）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　　（Ａ－５）テトラスパニン
からなるアミノ酸配列を含む、融合タンパク質と、
　（Ａ－６）β_２ミクログロブリン、ＭＨＣクラスＩα鎖、ＭＨＣクラスＩＩβ鎖、又はＭＨＣクラスＩＩα鎖のアミノ酸配列を含む、タンパク質と
を含む、タンパク質複合体；並びに
（Ｂ）Ｎ末端側から、
　（Ｂ－１）Ｎ末端側から、膜貫通ドメイン１、小型細胞外ループ、膜貫通ドメイン２、小型細胞内ループ及び膜貫通ドメイン３を含むテトラスパニンの部分配列、
　（Ｂ－２）存在していてもよいスペーサー配列、
　（Ｂ－３）第１のＴ細胞刺激性サイトカイン、
　（Ｂ－４）存在していてもよいスペーサー配列、並びに
　（Ｂ－５）膜貫通ドメイン４を含むテトラスパニンの部分配列
からなるアミノ酸配列を含む、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質、又は
（Ｂ）Ｎ末端側から、
　（Ｂ－３）第１のＴ細胞刺激性サイトカイン、
　（Ｂ－４）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　（Ｂ－５）ＭＦＧ－Ｅ８
からなるアミノ酸配列を含む、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質；
を含む、抗原提示細胞外小胞である。

　本発明の一実施態様では、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能な融合タンパク質であって、Ｎ末端側から、
　（Ａ－１）ＭＨＣクラスＩ分子拘束性抗原ペプチド、
　（Ａ－２）存在していてもよいスペーサー配列、
　（Ａ－３）単鎖ＭＨＣクラスＩ分子、
　（Ａ－４）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　（Ａ－５）テトラスパニン
からなるアミノ酸配列を含む、融合タンパク質
を含む、抗原提示細胞外小胞である。

　本発明の一実施態様では、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能なタンパク質複合体であって、
　Ｎ末端側から、
　　（Ａ－１）ＭＨＣクラスＩＩ分子拘束性抗原ペプチド、
　　（Ａ－２）存在していてもよいスペーサー配列、
　　（Ａ－３）ＭＨＣクラスＩＩβ鎖、
　　（Ａ－４）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　　（Ａ－５）テトラスパニン
からなるアミノ酸配列を含む、融合タンパク質と、
　（Ａ－６）ＭＨＣクラスＩＩα鎖のアミノ酸配列を含む、タンパク質と
を含む、タンパク質複合体；
を含む、抗原提示細胞外小胞である。

　本発明の一実施態様では、第１のＴ細胞刺激性サイトカインが、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－１２又はＴＧＦ－βである、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞を提供する。

　本発明の一実施態様では、さらにＴ細胞共刺激分子をその膜外に提示する、本明細書中に記載の細胞外小胞である（図２J（２）のそのモデルを例示する）。
　　かかる細胞外小胞は、以下の（Ｃ）に規定されるタンパク質を膜に含むことによって、Ｔ細胞共刺激分子を膜外に提示させてもよい。
　あるいは、単離した細胞外小胞にあとから、その膜表面にＴ細胞共刺激分子を付着させてもよい。付着させる方法は特に限定しないが、Ｔ細胞共刺激分子に各々リン脂質を結合し、細胞外小胞の膜に新脂質部分を取り込ませることにより、膜表面に抗原提示ＭＨＣ分子及びＴ細胞刺激性サイトカインを付着させてもよい。
　本発明の一実施態様では、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ｃ）Ｔ細胞共刺激分子を含む、該Ｔ細胞共刺激分子とＴ細胞とが相互作用可能なタンパク質；
を含む、抗原提示細胞外小胞である。

構成要件（Ｃ）
　上記（Ｃ）の「Ｔ細胞共刺激分子を含む、該Ｔ細胞共刺激分子とＴ細胞とが相互作用可能なタンパク質」は、該Ｔ細胞共刺激分子とＴ細胞とが相互作用可能なタンパク質である限り、Ｔ細胞共刺激分子の他に、他のタンパク質又はそのドメイン等を含んでいてもよい。

　本発明の一実施態様では、上記（Ｃ）は、Ｔ細胞共刺激分子と、細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメインとを含む、該Ｔ細胞共刺激分子とＴ細胞とが相互作用可能な融合タンパク質である。

　本発明の一実施態様では、上記（Ｃ）は、Ｔ細胞共刺激分子と、テトラスパニン若しくはその膜貫通ドメイン又はＭＦＧ－Ｅ８若しくはそのドメインとを含む、該Ｔ細胞共刺激分子とＴ細胞とが相互作用可能な融合タンパク質である。

　本発明の一実施態様では、上記（Ｃ）は、
（Ｃ）Ｎ末端側から、
　（Ｃ－１）Ｔ細胞共刺激分子、
　（Ｃ－２）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　（Ｃ－３）テトラスパニン
からなるアミノ酸配列を含む、該Ｔ細胞共刺激分子とＴ細胞とが相互作用可能な融合タンパク質である。

　本発明の一実施態様では、（Ｃ－１）のＴ細胞共刺激分子が、ＣＤ８０又はＣＤ８６である。本発明の一実施態様では、（Ｃ－１）におけるＴ細胞共刺激分子が、ＣＤ８０（好ましくは、配列番号６７等、又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）である。

　上記（Ｃ－２）の「存在していてもよいスペーサー配列」は、存在する場合、例えば、配列番号５、１１、２９、３９、７７等のスペーサー配列であってもよい。

　本発明の一実施態様では、（Ｃ－３）のテトラスパニンは、ＣＤ９、ＣＤ６３及びＣＤ８１からなる群より選択される。本発明の一実施態様では、（Ｃ－３）におけるテトラスパニンは、ＣＤ９（好ましくは、配列番号２１等、又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）である。

　本発明の一実施態様では、上記（Ｃ）は、
（Ｃ）Ｎ末端側から、
　（Ｃ－１）配列番号６７（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＣＤ８０である、Ｔ細胞共刺激分子、及び
　（Ｃ－３）配列番号２１（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニン
からなるアミノ酸配列である、該Ｔ細胞共刺激分子とＴ細胞とが相互作用可能な融合タンパク質である。

　本発明の一実施態様では、上記（Ｃ）は、配列番号６９（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）の、該Ｔ細胞共刺激分子とＴ細胞とが相互作用可能な融合タンパク質である。

　本発明の一実施態様では、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能な融合タンパク質であって、Ｎ末端側から、
　（Ａ－１）ＭＨＣクラスＩ分子拘束性抗原ペプチド、
　（Ａ－２）配列番号５のスペーサー配列、
　（Ａ－３）配列番号６５（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）の単鎖ＭＨＣクラスＩ分子、及び
　（Ａ－５）配列番号１５（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニン
からなるアミノ酸配列である、融合タンパク質；並びに
（Ｂ）Ｎ末端側から、
　（Ｂ－１）配列番号５７（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニンの部分配列、
　（Ｂ－２）配列番号２９のスペーサー配列、
　（Ｂ－３）配列番号２５（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＩＬ－２である、第１のＴ細胞刺激性サイトカイン、
　（Ｂ－４）配列番号２９のスペーサー配列、及び
　（Ｂ－５）配列番号５９（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニンの部分配列
からなるアミノ酸配列である、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質；
を含む、抗原提示細胞外小胞である。

　本発明の一実施態様では、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能な融合タンパク質であって、Ｎ末端側から、
　（Ａ－１）ＭＨＣクラスＩ分子拘束性抗原ペプチド、
　（Ａ－２）配列番号５のスペーサー配列、
　（Ａ－３）配列番号６５（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）の単鎖ＭＨＣクラスＩ分子、及び
　（Ａ－５）配列番号１５（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニン
からなるアミノ酸配列である、融合タンパク質；並びに
（Ｂ）配列番号３１（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）の、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質；
を含む、抗原提示細胞外小胞である。

　本発明の一実施態様では、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能な融合タンパク質であって、Ｎ末端側から、
　（Ａ－１）ＭＨＣクラスＩ分子拘束性抗原ペプチド、
　（Ａ－２）配列番号５のスペーサー配列、
　（Ａ－３）配列番号６５（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）の単鎖ＭＨＣクラスＩ分子、及び
　（Ａ－５）配列番号１５（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニン
からなるアミノ酸配列である、融合タンパク質；
（Ｂ）Ｎ末端側から、
　（Ｂ－１）配列番号５７（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニンの部分配列、
　（Ｂ－２）配列番号２９のスペーサー配列、
　（Ｂ－３）配列番号２５（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＩＬ－２である、第１のＴ細胞刺激性サイトカイン、
　（Ｂ－４）配列番号２９のスペーサー配列、及び
　（Ｂ－５）配列番号５９（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニンの部分配列
からなるアミノ酸配列である、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質；並びに
（Ｃ）Ｎ末端側から、
　（Ｃ－１）配列番号６７（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＣＤ８０である、Ｔ細胞共刺激分子、及び
　（Ｃ－３）配列番号２１（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニン
からなるアミノ酸配列である、該Ｔ細胞共刺激分子とＴ細胞とが相互作用可能な融合タンパク質；
を含む、抗原提示細胞外小胞である。

　本発明の一実施態様では、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能な融合タンパク質であって、Ｎ末端側から、
　（Ａ－１）ＭＨＣクラスＩ分子拘束性抗原ペプチド、
　（Ａ－２）配列番号５のスペーサー配列、
　（Ａ－３）配列番号６５（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）の単鎖ＭＨＣクラスＩ分子、及び
　（Ａ－５）配列番号１５（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニン
からなるアミノ酸配列である、融合タンパク質；
（Ｂ）配列番号３１（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）の、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質；並びに
（Ｃ）配列番号６９（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）の、該Ｔ細胞共刺激分子とＴ細胞とが相互作用可能な融合タンパク質；
を含む、抗原提示細胞外小胞である。

　本発明の一実施態様では、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能なタンパク質複合体であって、
　Ｎ末端側から、
　　（Ａ－１）ＭＨＣクラスＩＩ分子拘束性抗原ペプチド、
　　（Ａ－２）配列番号３９のスペーサー配列、
　　（Ａ－３）配列番号３７（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＭＨＣクラスＩＩβ鎖、及び
　　（Ａ－５）配列番号１５（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニン、
からなるアミノ酸配列である、融合タンパク質と
　（Ａ－６）配列番号７１（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＭＨＣクラスＩＩα鎖と
からなる、タンパク質複合体；
（Ｂ）Ｎ末端側から、
　（Ｂ－１）配列番号５７（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニンの部分配列、
　（Ｂ－２）配列番号２９のスペーサー配列、
　（Ｂ－３）配列番号２５（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＩＬ－２である、第１のＴ細胞刺激性サイトカイン
　（Ｂ－４）配列番号２９のスペーサー配列、及び
　（Ｂ－５）配列番号５９（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニンの部分配列
からなるアミノ酸配列である、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質；並びに
（Ｃ）Ｎ末端側から、
　（Ｃ－１）配列番号６７（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＣＤ８０である、Ｔ細胞共刺激分子、及び
　（Ｃ－３）配列番号２１（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニン
からなるアミノ酸配列である、該Ｔ細胞共刺激分子とＴ細胞とが相互作用可能な融合タンパク質；
を含む、抗原提示細胞外小胞である。

　本発明の一実施態様では、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能なタンパク質複合体であって、
　Ｎ末端側から、
　　（Ａ－１）ＭＨＣクラスＩＩ分子拘束性抗原ペプチド、
　　（Ａ－２）配列番号３９のスペーサー配列、
　　（Ａ－３）配列番号３７（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＭＨＣクラスＩＩβ鎖、及び
　　（Ａ－５）配列番号１５（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニン、
からなるアミノ酸配列である、融合タンパク質と
　（Ａ－６）配列番号７１（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＭＨＣクラスＩＩα鎖と
からなる、タンパク質複合体；
（Ｂ）配列番号３１（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）の、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質；及び
（Ｃ）配列番号６９（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）の、該Ｔ細胞共刺激分子とＴ細胞とが相互作用可能な融合タンパク質；
を含む、抗原提示細胞外小胞である。

　本発明の一実施態様では、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能なタンパク質複合体であって、
　Ｎ末端側から、
　　（Ａ－１）ＭＨＣクラスＩＩ分子拘束性抗原ペプチド、
　　（Ａ－２）配列番号３９のスペーサー配列、
　　（Ａ－３）配列番号３７（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＭＨＣクラスＩＩβ鎖、及び
　　（Ａ－５）配列番号１５（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニン、
からなるアミノ酸配列である、融合タンパク質と
　（Ａ－６）配列番号７１（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＭＨＣクラスＩＩα鎖と
からなる、タンパク質複合体；
（Ｂ）Ｎ末端側から、
　（Ｂ－１）配列番号５７（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニンの部分配列、
　（Ｂ－２）配列番号２９のスペーサー配列、
　（Ｂ－３）配列番号２５（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＩＬ－２である、第１のＴ細胞刺激性サイトカイン、
　（Ｂ－４）配列番号２９のスペーサー配列、及び
　（Ｂ－５）配列番号５９（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニンの部分配列
からなるアミノ酸配列である、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質；
（Ｂ’）Ｎ末端側から、
　（Ｂ－３）配列番号７３（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＴＧＦ－βである、第２のＴ細胞刺激性サイトカイン、
　（Ｂ－４）配列番号２９のスペーサー配列、及び
　（Ｂ－５）配列番号４９（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＭＦＧ－Ｅ８
からなるアミノ酸配列である、該第２のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質；並びに
（Ｃ）Ｎ末端側から、
　（Ｃ－１）配列番号６７（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＣＤ８０である、Ｔ細胞共刺激分子、及び
　（Ｃ－３）配列番号２１（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニン
からなるアミノ酸配列である、該Ｔ細胞共刺激分子とＴ細胞とが相互作用可能な融合タンパク質；
を含む、抗原提示細胞外小胞である。

　本発明の一実施態様では、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能なタンパク質複合体であって、
　Ｎ末端側から、
　　（Ａ－１）ＭＨＣクラスＩＩ分子拘束性抗原ペプチド、
　　（Ａ－２）配列番号３９のスペーサー配列、
　　（Ａ－３）配列番号３７（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＭＨＣクラスＩＩβ鎖、及び
　　（Ａ－５）配列番号１５（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニン、
からなるアミノ酸配列である、融合タンパク質と
　（Ａ－６）配列番号７１（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＭＨＣクラスＩＩα鎖と
からなる、タンパク質複合体；
（Ｂ）配列番号３１（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）の、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質；
（Ｂ’）配列番号７５（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）の、該第２のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質；並びに
（Ｃ）配列番号６９（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）の、該Ｔ細胞共刺激分子とＴ細胞とが相互作用可能な融合タンパク質；
を含む、抗原提示細胞外小胞である。

　本発明の一実施態様では、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能なタンパク質複合体であって、
　Ｎ末端側から、
　　（Ａ－１）ＭＨＣクラスＩＩ分子拘束性抗原ペプチド、
　　（Ａ－２）配列番号３９のスペーサー配列、
　　（Ａ－３）配列番号３７（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＭＨＣクラスＩＩβ鎖、及び
　　（Ａ－５）配列番号１５（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニン、
からなるアミノ酸配列である、融合タンパク質と
　（Ａ－６）配列番号７１（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＭＨＣクラスＩＩα鎖と
からなる、タンパク質複合体；
（Ｂ）Ｎ末端側から、
　（Ｂ－１）配列番号６１（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニンの部分配列、
　（Ｂ－２）配列番号２９のスペーサー配列、
　（Ｂ－３）配列番号５３（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＩＬ－４である、第１のＴ細胞刺激性サイトカイン
　（Ｂ－４）配列番号２９のスペーサー配列、及び
　（Ｂ－５）配列番号６３（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニンの部分配列
からなるアミノ酸配列である、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質；並びに
（Ｃ）Ｎ末端側から、
　（Ｃ－１）配列番号６７（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＣＤ８０である、Ｔ細胞共刺激分子、及び
　（Ｃ－３）配列番号２１（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニン
からなるアミノ酸配列である、該Ｔ細胞共刺激分子とＴ細胞とが相互作用可能な融合タンパク質；
を含む、抗原提示細胞外小胞である。

　本発明の一実施態様では、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能なタンパク質複合体であって、
　Ｎ末端側から、
　　（Ａ－１）ＭＨＣクラスＩＩ分子拘束性抗原ペプチド、
　　（Ａ－２）配列番号３９のスペーサー配列、
　　（Ａ－３）配列番号３７（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＭＨＣクラスＩＩβ鎖、及び
　　（Ａ－５）配列番号１５（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニン、
からなるアミノ酸配列である、融合タンパク質と
　（Ａ－６）配列番号７１（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＭＨＣクラスＩＩα鎖と
からなる、タンパク質複合体；
（Ｂ）配列番号５５（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）の、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質；及び
（Ｃ）配列番号６９（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）の、該Ｔ細胞共刺激分子とＴ細胞とが相互作用可能な融合タンパク質；
を含む、抗原提示細胞外小胞である。

　本発明の一実施態様では、上記（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）について、（Ａ）と（Ｂ）が融合して、１分子となっていてもよいし、（Ｂ）と（Ｃ）が融合して、１分子となっていてもよいし、（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）が融合して、１分子となっていてもよい。かかる融合分子は、（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）間にスペーサー配列を含む又は含まない形で１つのタンパク質分子として翻訳されていてもよいし、（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）のタンパク質が化学的に架橋されること（たとえばシステイン残基間のジスルフィド結合）によって融合して１分子となっていてもよい。
　あるいは、上記（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）は、そのタンパク質が細胞外小胞に局在するための要素、すなわち、「細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン」又は「細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメイン」の部分を共有することにより、機能的に融合していてもよい。
　たとえば本発明の一実施態様において、
（Ａ）と（Ｂ）で「細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン」又は「細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメイン」部分を共有する形で融合した、
　（１）抗原提示ＭＨＣ分子；
　（２）すくなくとも１種のＴ細胞刺激性サイトカイン；及び
　（３）「細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン」又は「細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメイン」；を含む融合タンパク質（Ｄ）を含んでいてもよいし；
（Ａ）と（Ｃ）で「細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン」又は「細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメイン」部分を共有する形で融合した、
　（１）抗原提示ＭＨＣ分子；
　（２）Ｔ細胞共刺激分子；及び
　（３）「細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン」又は「細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメイン」；を含む融合タンパク質（Ｆ）を含んでいてもよいし；
（Ｂ）と（Ｃ）で「細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン」又は「細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメイン」部分を共有する形で融合した、
　（１）すくなくとも１種のＴ細胞刺激性サイトカイン；
　（２）Ｔ細胞共刺激分子；及び
　（３）「細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン」又は「細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメイン」；を含む融合タンパク質（Ｇ）を含んでいてもよいし；
あるいは
（Ａ）～（Ｃ）で「細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン」又は「細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメイン」部分を共有する形で融合した、
　（１）抗原提示ＭＨＣ分子；
　（２）すくなくとも１種のＴ細胞刺激性サイトカイン；
　（３）Ｔ細胞共刺激分子；及び
　（４）「細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン」又は「細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメイン」；を含む融合タンパク質（Ｅ）を含んでいてもよい。

　本発明の一実施態様において、構成要件（Ａ）の「細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質」の代わりに、構成要件（Ｂ）の「第１のＴ細胞刺激性サイトカインを含む、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能なタンパク質」を用いて、構成要件（Ａ）と構成要件（Ｂ）の機能を具備した融合タンパク質（Ｄ）を含む抗原提示細胞外小胞細胞であってよい。

　かかる構成要件（Ａ）と構成要件（Ｂ）の機能を具備した融合タンパク質（Ｄ）は、
（Ｄ）抗原提示ＭＨＣ分子とすくなくとも１種のＴ細胞刺激性サイトカインを含み、該抗原と該Ｔ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質であってもよい。
　前記融合タンパク質は、前記抗原提示ＭＨＣ分子と、前記すくなくとも１種のＴ細胞刺激性サイトカインと、細胞外小胞の膜に局在することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはその膜結合ドメインとを含んでもよい。

　構成要件（Ａ）と構成要件（Ｂ）の機能を具備した融合タンパク質（Ｄ）において、前記細胞外小胞の膜に局在することが可能な膜タンパク質又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質は、テトラスパニン又はＭＦＧ－Ｅ８であってもよい。
　前記融合タンパク質は、Ｎ末端側から、
　（Ｄ－１）ＭＨＣ分子拘束性抗原ペプチド、
　（Ｄ－２）存在していてもよいスペーサー配列、
　（Ｄ－３）単鎖ＭＨＣ分子、
　（Ｄ－４）存在していてもよいスペーサー配列、
　（Ｄ－５）テトラスパニン又はその膜貫通ドメインあるいはＭＦＧ－Ｅ８又はその膜貫通ドメインと、前記すくなくとも１種のＴ細胞刺激性サイトカインを含む融合ペプチドを、この順番でコードするアミノ酸配列を含んでもよい。
　前記融合タンパク質は、Ｎ末端側から、
　（Ｄ－１）テトラスパニン又はその膜貫通ドメインあるいはＭＦＧ－Ｅ８又はその膜貫通ドメインと、前記すくなくとも１種のＴ細胞刺激性サイトカインを含む融合ペプチド
　（Ｄ－２）存在していてもよいスペーサー配列、
　（Ｄ－３）単鎖ＭＨＣ分子、
　（Ｄ－４）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　（Ｄ－５）ＭＨＣ分子拘束性抗原ペプチドを、
この順にコードするアミノ酸配列を含んでもよい。
　ここで、前記融合ペプチドは、Ｎ末端側から、
　　（１）膜貫通ドメイン１、小型細胞外ループ、膜貫通ドメイン２、小型細胞内ループ及び膜貫通ドメイン３を含むテトラスパニンの部分配列、
　　（２）存在していてもよいスペーサー配列、
　　（３）前記すくなくとも１つのＴ細胞刺激性サイトカイン、
　　（４）存在していてもよいスペーサー配列、並びに
　　（５）膜貫通ドメイン４を含むテトラスパニンの部分配列
をこの順番でコードするアミノ酸配列を含んでもよい。
　前記融合ペプチドは、Ｎ末端側から、
　（１）前記すくなくとも１のＴ細胞刺激性サイトカイン、
　（２）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　（３）ＭＦＧ－Ｅ８
をこの順番でコードするアミノ酸配列を含んでもよい。

　本発明の一実施態様において、ＭＨＣ分子拘束性抗原ペプチドがＭＨＣクラスＩ分子拘束性抗原ペプチドであり、前記単鎖ＭＨＣ分子が、ＭＨＣクラスＩα鎖の細胞外領域を含んでもよく、前記ＭＨＣ分子拘束性抗原ペプチドがＭＨＣクラスＩI分子拘束性抗原ペプチドであり、前記単鎖ＭＨＣ分子が、ＭＨＣクラスＩIα鎖の細胞外ドメイン及び／又はＭＨＣクラスＩIβ鎖の細胞外ドメインを含んでもよい。

　構成要件（Ａ）と構成要件（Ｂ）の機能を具備した融合タンパク質（Ｄ）を含む態様において；
　（Ｃ）すくなくとも１つのＴ細胞共刺激分子を含む、該Ｔ細胞共刺激分子とＴ細胞とが相互作用可能なタンパク質をさらにその膜に含んでもよく；
　前記Ｔ細胞と相互作用可能なタンパク質が、前記すくなくとも１つのＴ細胞共刺激分子と、細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメインとを含んでもよく；
　前記Ｔ細胞と相互作用可能なタンパク質が、前記すくなくとも１つのＴ細胞共刺激分子と、テトラスパニン若しくはその膜貫通ドメイン又はＭＦＧ－Ｅ８若しくはそのドメインとを含んでもよい。

　本発明の一実施態様では、細胞外小胞が、エクソソームである。

　本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞は、その膜内又は膜中に、治療上有益でありうる物質（例えば、低分子化合物、核酸等）が包含されていてもよいし、結合されていてもよい。細胞外小胞の膜内に該物質を封入する方法は、これらに限定されるものではないが、例えば、該物質と本明細書中に記載の細胞外小胞とを好適な溶媒中で混合する方法等が挙げられる。
　本発明の一実施態様では、抗原提示細胞外小胞は、任意のタンパク製剤を含んでもよい。タンパク製剤としては、特に限定しないが、エリスロポエチンなどの天然にも存在しうるタンパク質でも、イムノグロブリン－ＣＴＬＡ４融合タンパクのように天然には存在しない合成タンパク質であってもよく、モノクローナル抗体またはその活性断片でもよい。これらのタンパク製剤は、細胞外小胞の膜に局在することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはその膜結合ドメインとの融合タンパク質として抗原提示細胞外小胞の表面に局在させてもよい。かかる抗原提示細胞外小胞は、融合タンパク質を発現させるためのベクターを、抗原提示細胞外小胞を産生する細胞にトランスフェクションすることにより作製することができる。

　本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞の膜に含まれる各融合タンパク質又はタンパク質複合体あるいはタンパク製剤は、１つ又は複数の検出可能な標識を含んでいてもよい。例えば、融合タンパク質又はタンパク質複合体あるいはタンパク製剤は、従来の方法で、特定のリポータ分子、発蛍光団、放射性材料、又は酵素（例えば、ペルオキシダーゼ、ホスファターゼ）等で標識されていてもよい。これらは、例えば、融合タンパク質又はタンパク質複合体あるいはタンパク製剤の構成要素として、該融合タンパク質又はタンパク質複合体あるいはタンパク製剤のＮ末端側又はＣ末端側に連結されていてもよい。

ポリヌクレオチド

　本発明の一実施態様では、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞の膜に含まれる（Ａ）及び（Ｂ）、並びに場合により存在する（Ｃ）における各融合タンパク質又はタンパク質複合体をコードするポリヌクレオチドを提供する。本発明の一実施態様では、本明細書中で定義される（Ａ）～（Ｇ）における各融合タンパク質又はタンパク質複合体をコードするポリヌクレオチドを提供する。

　本明細書中で用いられる「ポリヌクレオチド」は、一本鎖又は二本鎖ＤＮＡ分子又はＲＮＡ分子等を意味する。ポリヌクレオチドには、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｈｎＲＮＡ、ｍＲＮＡ等、及びこれらの全ての天然に存在するか又は人工的に修飾された誘導体等が含まれる。ポリヌクレオチドは、鎖状であっても、環状であってもよい。

　上述した（Ａ）～（Ｇ）における各融合タンパク質又はタンパク質複合体をコードするポリヌクレオチドは、当業者であれば、上記融合タンパク質又はタンパク質複合体のアミノ酸配列を参考に適宜決定しうる。なお、（Ａ）～（Ｇ）における各融合タンパク質又はタンパク質複合体のアミノ酸配列は、各融合タンパク質又はタンパク質複合体における各構成要素（例えば、（Ａ）の場合であれば、（Ａ－１）～（Ａ－５）、及び場合により（Ａ－６））のアミノ酸配列を参考に適宜決定しうる。ポリヌクレオチドを決定する際に使用されるコドンの種類は、任意のものを選択することができる。例えば、該ポリヌクレオチドを含むベクターを使用して形質転換させる細胞のコドンの頻度等を考慮して、ポリヌクレオチドを決定してもよい。

　上述した（Ａ）～（Ｇ）における各融合タンパク質又はタンパク質複合体をコードするポリヌクレオチドのＮ末端側には、必要に応じてシグナルペプチド（シグナルシークエンス）をコードするポリヌクレオチドを付加してもよい。

　シグナルペプチドのアミノ酸配列は、任意のものを使用することができ、例えば、発現させようとする融合タンパク質のアミノ酸配列等を考慮して決定してもよい。シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチドとしては、例えば、β_２ミクログロブリンのシグナルペプチド（例えば、配列番号１）をコードするポリヌクレオチド（例えば、配列番号２）、ＭＨＣクラスＩα鎖のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド、ＭＨＣクラスＩＩα鎖のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド、ＭＨＣクラスＩＩβ鎖のシグナルペプチド（例えば、配列番号３３）をコードするポリヌクレオチド（例えば、配列番号３４）等が挙げられる。

　上述した（Ａ）～（Ｇ）における各融合タンパク質又はタンパク質複合体の各構成要素（例えば、（Ａ）の場合であれば、（Ａ－１）～（Ａ－５）、及び存在する場合（Ａ－６））、及びシグナルペプチド等のアミノ酸配列、並びにこれらをコードするポリヌクレオチドの情報は、例えば、公知の文献やＮＣＢＩ（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/guide/）等のデータベースを検索して適宜入手してもよい。また、テトラスパニンの部分配列（例えば、（Ｃ－１）、（Ｃ－５）における部分配列）におけるアミノ酸配列及びこれをコードするポリヌクレオチドは、国際公開第２０１６／１３９３５４号を参考にしてもよい。

　本発明の一実施態様では、ポリヌクレオチドであって、以下：
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能な融合タンパク質であって、Ｎ末端側から、
　（Ａ－１）ＭＨＣ分子拘束性抗原ペプチド、
　（Ａ－２）存在していてもよいスペーサー配列、
　（Ａ－３）単鎖ＭＨＣ分子、
　（Ａ－４）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　（Ａ－５）テトラスパニン
からなるアミノ酸配列を含む、融合タンパク質、若しくは、
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能なタンパク質複合体を構成する融合タンパク質であって、
　Ｎ末端側から、
　　（Ａ－１）ＭＨＣ分子拘束性抗原ペプチド、
　　（Ａ－２）存在していてもよいスペーサー配列、
　　（Ａ－３）ＭＨＣクラスＩα鎖、β_２ミクログロブリン、ＭＨＣクラスＩＩα鎖、又はＭＨＣクラスＩＩβ鎖
　　（Ａ－４）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　　（Ａ－５）テトラスパニン
からなるアミノ酸配列を含む、融合タンパク質；
（Ｂ）Ｎ末端側から、
　（Ｂ－１）Ｎ末端側から、膜貫通ドメイン１、小型細胞外ループ、膜貫通ドメイン２、小型細胞内ループ及び膜貫通ドメイン３を含むテトラスパニンの部分配列、
　（Ｂ－２）存在していてもよいスペーサー配列、
　（Ｂ－３）第１のＴ細胞刺激性サイトカイン、
　（Ｂ－４）存在していてもよいスペーサー配列、並びに
　（Ｂ－５）膜貫通ドメイン４を含むテトラスパニンの部分配列
からなるアミノ酸配列を含む、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質、若しくは
（Ｂ）Ｎ末端側から、
　（Ｂ－３）第１のＴ細胞刺激性サイトカイン、
　（Ｂ－４）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　（Ｂ－５）ＭＦＧ－Ｅ８
からなるアミノ酸配列を含む、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質；又は
（Ｃ）Ｎ末端側から、
　（Ｃ－１）Ｔ細胞共刺激分子、
　（Ｃ－２）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　（Ｃ－３）テトラスパニン
からなるアミノ酸配列を含む、該Ｔ細胞共刺激分子とＴ細胞とが相互作用可能な融合タンパク質；
のいずれかをコードする、ポリヌクレオチドである。

　本発明の一実施態様では、ポリヌクレオチドであって、以下：
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能な融合タンパク質であって、Ｎ末端側から、
　（Ａ－１）ＭＨＣクラスＩ分子拘束性抗原ペプチド、
　（Ａ－２）配列番号５のスペーサー配列、
　（Ａ－３）配列番号６５（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）の単鎖ＭＨＣクラスＩ分子、及び
　（Ａ－５）配列番号１５（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニン
からなるアミノ酸配列である、融合タンパク質、若しくは
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能なタンパク質複合体を構成する融合タンパク質であって、
　Ｎ末端側から、
　　（Ａ－１）ＭＨＣクラスＩＩ分子拘束性抗原ペプチド、
　　（Ａ－２）配列番号３９のスペーサー配列、
　　（Ａ－３）配列番号３７（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＭＨＣクラスＩＩβ鎖、及び
　　（Ａ－５）配列番号１５（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニン、
からなるアミノ酸配列である、融合タンパク質；
（Ｂ）Ｎ末端側から、
　（Ｂ－１）配列番号５７（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニンの部分配列、
　（Ｂ－２）配列番号２９のスペーサー配列、
　（Ｂ－３）配列番号２５（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＩＬ－２である、第１のＴ細胞刺激性サイトカイン
　（Ｂ－４）配列番号２９のスペーサー配列、及び
　（Ｂ－５）配列番号５９（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニンの部分配列
からなるアミノ酸配列である、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質、
（Ｂ）Ｎ末端側から、
　（Ｂ－１）配列番号６１（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニンの部分配列、
　（Ｂ－２）配列番号２９のスペーサー配列、
　（Ｂ－３）配列番号５３（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＩＬ－４である、第１のＴ細胞刺激性サイトカイン
　（Ｂ－４）配列番号２９のスペーサー配列、及び
　（Ｂ－５）配列番号６３（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニンの部分配列
からなるアミノ酸配列である、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質、若しくは
（Ｂ’）Ｎ末端側から、
　（Ｂ－３）配列番号７３（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＴＧＦ－βである、第２のＴ細胞刺激性サイトカイン、
　（Ｂ－４）配列番号２９のスペーサー配列、及び
　（Ｂ－５）配列番号４９（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＭＦＧ－Ｅ８
からなるアミノ酸配列である、該第２（又は第１）のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質；又は
（Ｃ）Ｎ末端側から、
　（Ｃ－１）配列番号６７（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＣＤ８０である、Ｔ細胞共刺激分子、及び
　（Ｃ－３）配列番号２１（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニン
からなるアミノ酸配列である、該Ｔ細胞共刺激分子とＴ細胞とが相互作用可能な融合タンパク質；
のいずれかをコードする、ポリヌクレオチドを提供する。

　本発明の一実施態様では、ポリヌクレオチドであって、以下：
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能な融合タンパク質であって、Ｎ末端側から、
　（Ａ－１）ＭＨＣクラスＩ分子拘束性抗原ペプチド、
　（Ａ－２）配列番号５のスペーサー配列、
　（Ａ－３）配列番号６５（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）の単鎖ＭＨＣクラスＩ分子、及び
　（Ａ－５）配列番号１５（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニン
からなるアミノ酸配列である、融合タンパク質、若しくは
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能なタンパク質複合体を構成する融合タンパク質であって、
　Ｎ末端側から、
　　（Ａ－１）ＭＨＣクラスＩＩ分子拘束性抗原ペプチド、
　　（Ａ－２）配列番号３９のスペーサー配列、
　　（Ａ－３）配列番号３７（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＭＨＣクラスＩＩβ鎖、及び
　　（Ａ－５）配列番号１５（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニン、
からなるアミノ酸配列である、融合タンパク質；
（Ｂ）配列番号３１、７５若しくは５５（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）の、該第１（又は第２）のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質；又は
（Ｃ）配列番号２３（又はこれに対してアミノ酸配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）の、該Ｔ細胞共刺激分子とＴ細胞とが相互作用可能な融合タンパク質；
のいずれかをコードする、ポリヌクレオチドを提供する。

　本発明の一実施態様では、ポリヌクレオチドであって、以下：
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能な融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドであって、
　（Ａ－１）ＭＨＣクラスＩ分子拘束性抗原ペプチドをコードするポリヌクレオチド、
　（Ａ－２）配列番号６のスペーサー配列、
　（Ａ－３）配列番号６６（又はこれに対して配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）の単鎖ＭＨＣクラスＩ分子、及び
　（Ａ－５）配列番号１６（又はこれに対して配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニン
からなる配列である、ポリヌクレオチド、若しくは
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能なタンパク質複合体を構成する融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドであって、
　　（Ａ－１）ＭＨＣクラスＩＩ分子拘束性抗原ペプチドをコードするポリヌクレオチド、
　　（Ａ－２）配列番号４０のスペーサー配列、
　　（Ａ－３）配列番号３８（又はこれに対して配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＭＨＣクラスＩＩβ鎖、及び
　　（Ａ－５）配列番号１６（又はこれに対して配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニン、
からなる配列である、ポリヌクレオチド；
（Ｂ）第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドであって、
　（Ｂ－１）配列番号５８（又はこれに対して配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニンの部分配列、
　（Ｂ－２）配列番号３０のスペーサー配列、
　（Ｂ－３）配列番号２６（又はこれに対して配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＩＬ－２である、第１のＴ細胞刺激性サイトカイン
　（Ｂ－４）配列番号３０のスペーサー配列、及び
　（Ｂ－５）配列番号６０（又はこれに対して配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニンの部分配列
からなる配列である、ポリヌクレオチド、
（Ｂ）第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドであって、
　（Ｂ－１）配列番号６２（又はこれに対して配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニンの部分配列、
　（Ｂ－２）配列番号３０のスペーサー配列、
　（Ｂ－３）配列番号５４（又はこれに対して配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＩＬ－４である、第１のＴ細胞刺激性サイトカイン
　（Ｂ－４）配列番号３０のスペーサー配列、及び
　（Ｂ－５）配列番号６４（又はこれに対して配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニンの部分配列；
からなる配列である、ポリヌクレオチド、若しくは
（Ｂ’）第２（又は第１）のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドであって、
　（Ｂ－３）配列番号７４（又はこれに対し配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＴＧＦ－βである、第２（又は第１）のＴ細胞刺激性サイトカイン、
　（Ｂ－４）配列番号３０のスペーサー配列、及び
　（Ｂ－５）配列番号５０（又はこれに対して配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＭＦＧ－Ｅ８
からなる配列である、ポリヌクレオチド；又は
（Ｃ）該Ｔ細胞共刺激分子とＴ細胞とが相互作用可能な融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドであって、
　（Ｃ－１）配列番号６８（又はこれに対して配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＣＤ８０である、Ｔ細胞共刺激分子、及び
　（Ｃ－３）配列番号２２（又はこれに対して配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニン
からなる配列である、ポリヌクレオチド；
を提供する。

　本発明の一実施態様では、ポリヌクレオチドであって、以下：
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能な融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドであって、
　（Ａ－１）ＭＨＣクラスＩ分子拘束性抗原ペプチドをコードするポリヌクレオチド、
　（Ａ－２）配列番号６のスペーサー配列、
　（Ａ－３）配列番号６６（又はこれに対して配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）の単鎖ＭＨＣクラスＩ分子、及び
　（Ａ－５）配列番号１６（又はこれに対して配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニン
からなる配列である、ポリヌクレオチド、若しくは
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能なタンパク質複合体を構成する融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドであって、
　　（Ａ－１）ＭＨＣクラスＩＩ分子拘束性抗原ペプチドをコードするポリヌクレオチド、
　　（Ａ－２）配列番号４０のスペーサー配列、
　　（Ａ－３）配列番号３８（又はこれに対して配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のＭＨＣクラスＩＩβ鎖、及び
　　（Ａ－５）配列番号１６（又はこれに対して配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）のテトラスパニン、
からなる配列である、ポリヌクレオチド；
（Ｂ）配列番号３２、７６若しくは５６（又はこれに対して配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）の、該第１（又は第２）のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質をコードする、ポリヌクレオチド；又は
（Ｃ）配列番号２４（又はこれに対して配列同一性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上、更に好ましくは９８％以上、より更に好ましくは９９％以上のもの）の、該Ｔ細胞共刺激分子とＴ細胞とが相互作用可能な融合タンパク質をコードする、ポリヌクレオチド；
を提供する。

　本発明の一実施態様では、上記（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）について、（Ａ）と（Ｂ）が融合して、1分子となる融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドであってもよいし、（Ｂ）と（Ｃ）が融合して、1分子となる融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドであってもよいし、（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）が融合して、1分子となる融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドであってもよい。かかるポリヌクレオチドは、（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）間にスペーサー配列を含む又は含まない形の１つの融合タンパク質をコードしていてよい。。
　あるいは、本発明の一実施態様におけるポリヌクレオチドは、上記（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）が、そのタンパク質が細胞外小胞に局在するための要素、すなわち、「細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン」又は「細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメイン」の部分を共有することにより、機能的に融合した融合タンパク質をコードしていてもよい。
　たとえば本発明の一実施態様において、
（Ａ）と（Ｂ）で「細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン」又は「細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメイン」部分を共有する形で融合した、
　（１）抗原提示ＭＨＣ分子；
　（２）すくなくとも１種のＴ細胞刺激性サイトカイン；及び
　（３）「細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン」又は「細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメイン」；を含む融合タンパク質（Ｄ）をコードするポリヌクレオチドであってもよいし；
（Ａ）と（Ｃ）で「細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン」又は「細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメイン」部分を共有する形で融合した、
　（１）抗原提示ＭＨＣ分子；
　（２）Ｔ細胞共刺激分子；及び
　（３）「細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン」又は「細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメイン」；を含む融合タンパク質（Ｆ）をコードするポリヌクレオチドであってもよいし；
（Ｂ）と（Ｃ）で「細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン」又は「細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメイン」部分を共有する形で融合した、
　（１）すくなくとも１種のＴ細胞刺激性サイトカイン；
　（２）Ｔ細胞共刺激分子；及び
　（３）「細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン」又は「細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメイン」；を含む融合タンパク質（Ｇ）をコードするポリヌクレオチドであってもよいし；
あるいは
（Ａ）～（Ｃ）で「細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン」又は「細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメイン」部分を共有する形で融合した、
　（１）抗原提示ＭＨＣ分子；
　（２）すくなくとも１種のＴ細胞刺激性サイトカイン；
　（２）Ｔ細胞共刺激分子；及び
　（４）「細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン」又は「細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメイン」；を含む融合タンパク質（Ｅ）をコードするポリヌクレオチドであってもよい。

　本発明の一実施態様は、構成要件（Ａ）の細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質の代わりに、構成要件（Ｂ）の第１のＴ細胞刺激性サイトカインを含む、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能なタンパク質を用いて、構成要件（Ａ）と構成要件（Ｂ）の機能を具備した融合タンパク質（Ｄ）である、
抗原提示ＭＨＣ分子とすくなくとも１種のＴ細胞刺激性サイトカインを含み、該抗原と該Ｔ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質
をコードするポリヌクレオチドであってよい。

　かかる構成要件（Ａ）と構成要件（Ｂ）の機能を具備した融合タンパク質（Ｄ）は、抗原提示ＭＨＣ分子とすくなくとも１種のＴ細胞刺激性サイトカインを含み、該抗原と該Ｔ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質であってもよい。
　前記融合タンパク質は、前記抗原提示ＭＨＣ分子と、前記すくなくとも１種のＴ細胞刺激性サイトカインと、細胞外小胞の膜に局在することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはその膜結合ドメインとを含んでもよい。

　構成要件（Ａ）と構成要件（Ｂ）の機能を具備した融合タンパク質（Ｄ）において、　前記細胞外小胞の膜に局在することが可能な膜タンパク質又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質は、テトラスパニン又はＭＦＧ－Ｅ８であってもよい。
　前記融合タンパク質は、Ｎ末端側から、
　（Ｄ－１）ＭＨＣ分子拘束性抗原ペプチド、
　（Ｄ－２）存在していてもよいスペーサー配列、
　（Ｄ－３）単鎖ＭＨＣ分子、
　（Ｄ－４）存在していてもよいスペーサー配列、
　（Ｄ－５）テトラスパニン又はその膜貫通ドメインあるいはＭＦＧ－Ｅ８又はその膜貫通ドメインと、前記すくなくとも１種のＴ細胞刺激性サイトカインを含む融合ペプチドを、この順番でコードするアミノ酸配列を含んでもよい。
　前記融合タンパク質は、Ｎ末端側から、
　（Ｄ－１）テトラスパニン又はその膜貫通ドメインあるいはＭＦＧ－Ｅ８又はその膜貫通ドメインと、前記すくなくとも１種のＴ細胞刺激性サイトカインを含む融合ペプチド
　（Ｄ－２）存在していてもよいスペーサー配列、
　（Ｄ－３）単鎖ＭＨＣ分子、
　（Ｄ－４）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　（Ｄ－５）ＭＨＣ分子拘束性抗原ペプチドを、
この順にコードするアミノ酸配列を含んでもよい。
　ここで、前記融合ペプチドは、Ｎ末端側から、
　　（１）膜貫通ドメイン１、小型細胞外ループ、膜貫通ドメイン２、小型細胞内ループ及び膜貫通ドメイン３を含むテトラスパニンの部分配列、
　　（２）存在していてもよいスペーサー配列、
　　（３）前記すくなくとも１つのＴ細胞刺激性サイトカイン、
　　（４）存在していてもよいスペーサー配列、並びに
　　（５）膜貫通ドメイン４を含むテトラスパニンの部分配列
をこの順番でコードするアミノ酸配列を含んでもよい。
　前記融合ペプチドは、Ｎ末端側から、
　（１）前記すくなくとも１のＴ細胞刺激性サイトカイン、
　（２）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　（３）ＭＦＧ－Ｅ８
をこの順番でコードするアミノ酸配列を含んでもよい。

ベクター、キット

　本発明の一実施態様では、本明細書中に記載のポリヌクレオチドから選択される少なくとも１種のポリヌクレオチドを含んでなるベクターを提供する。

　本明細書中で用いられる「ベクター」とは、任意のベクター（これらに限定されるものではないが、例えば、プラスミドベクター、コスミドベクター、ファージ等のファージベクター、アデノウイルスベクター、バキュロウイルスベクター等のウイルスベクター、人工染色体ベクター等を含む）を意味する。ベクターは、発現ベクター、クローニングベクター等を含む。発現ベクターは、一般的に、所望のコード配列、及び宿主生物（例えば、植物、昆虫、動物等）又はインビトロでの発現系における作動可能に連結されたコード配列の発現に必要な適切なポリヌクレオチドを含有していてもよい。クローニングベクターは、所望のポリヌクレオチド断片を操作及び／又は増幅させるために使用してもよい。クローニングベクターは、所望のポリヌクレオチド断片の発現に必要とされる機能的な配列を欠失していてもよい。

　本発明の一実施態様では、本明細書中に記載のポリヌクレオチドは、これらが作動可能に挿入されうる限り、全て同一のベクター内に挿入されていてもよし、２以上のポリヌクレオチドが別個のベクターに挿入されていてもよい。本発明の一実施態様では、本明細書中に記載のポリヌクレオチドから選択される少なくとも１種のポリヌクレオチドを含んでなる２種以上のベクターを組み合わせたキットを提供する。

形質転換細胞

　本発明の一実施態様では、以下：
　（ｉ）本明細書中に記載の（Ａ）の融合タンパク質又はタンパク質複合体をコードするポリヌクレオチド、
　（ｉｉ）本明細書中に記載の（Ｂ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、又は
　（ｉｉｉ）本明細書中に記載の（Ｃ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド
を含んでなるベクターにより形質転換された細胞を提供する。

　本発明の一実施態様では、以下：
　（ｉ）本明細書中に記載の（Ａ）の融合タンパク質又はタンパク質複合体をコードするポリヌクレオチド、及び
　（ｉｉ）本明細書中に記載の（Ｂ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、並びに、場合により
　（ｉｉｉ）本明細書中に記載の（Ｃ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド
を含んでなる、単一のベクター又は２以上のベクターの組み合わせにより形質転換された細胞を提供する。

　本発明の一実施態様の細胞では、上記（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）について、（Ａ）と（Ｂ）が融合して、1分子となる融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含むベクター、（Ｂ）と（Ｃ）が融合して、1分子となる融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含むベクター、あるいは（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）が融合して、1分子となる融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含むベクターで形質転換されていてもよい。かかるポリヌクレオチドは、（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）間にスペーサー配列を含む又は含まない形の１つの融合タンパク質をコードしていてよい。
　あるいは、上記（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）は、そのタンパク質が細胞外小胞に局在するための要素、すなわち、「細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン」又は「細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメイン」の部分を共有することにより、機能的に融合した融合タンパク質をコードしていてもよい。
　たとえば本発明の一実施態様において、
（Ａ）と（Ｂ）で「細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン」又は「細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメイン」部分を共有する形で融合した、
　（１）抗原提示ＭＨＣ分子；
　（２）すくなくとも１種のＴ細胞刺激性サイトカイン；及び
　（３）「細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン」又は「細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメイン」；を含む融合タンパク質（Ｄ）をコードするポリヌクレオチドを含むベクター；
（Ａ）と（Ｃ）で「細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン」又は「細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメイン」部分を共有する形で融合した、
　（１）抗原提示ＭＨＣ分子；
　（２）Ｔ細胞共刺激分子；及び
　（３）「細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン」又は「細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメイン」；を含む融合タンパク質（Ｆ）をコードするポリヌクレオチドを含むベクター；
（Ｂ）と（Ｃ）で「細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン」又は「細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメイン」部分を共有する形で融合した、
　（１）すくなくとも１種のＴ細胞刺激性サイトカイン；
　（２）Ｔ細胞共刺激分子；及び
　（３）「細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン」又は「細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメイン」；を含む融合タンパク質（Ｇ）をコードするポリヌクレオチドを含むベクター；
あるいは
（Ａ）～（Ｃ）で「細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン」又は「細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメイン」部分を共有する形で融合した、
　（１）抗原提示ＭＨＣ分子；
　（２）すくなくとも１種のＴ細胞刺激性サイトカイン；
　（３）Ｔ細胞共刺激分子；及び
　（４）「細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン」又は「細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメイン」；を含む融合タンパク質（Ｅ）をコードするポリヌクレオチドを含むベクター
で形質転換されていてもよい。

　あるいは、本発明の一実施態様では、
　（ｉｖ）構成要件（Ａ）の細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質の代わりに、構成要件（Ｂ）の第１のＴ細胞刺激性サイトカインを含む、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能なタンパク質を用いて、構成要件（Ａ）と構成要件（Ｂ）の機能を具備した融合タンパク質である、
本明細書中に記載の（Ｄ）の抗原提示ＭＨＣ分子とすくなくとも１種のＴ細胞刺激性サイトカインを含み、該抗原と該Ｔ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド
を含むベクターにより形質転換された細胞を提供する。

　「単一のベクター又は２以上のベクターの組み合わせにより形質転換された」とは、例えば、細胞が、上記（ｉ）～（ｉｖ）のポリヌクレオチドが全て同一のベクター内に挿入されたものにより形質転換されてもよいし、これらのうち２以上が別個のベクターに挿入された２以上のベクターの組み合わせにより形質転換されてもよいことを意味する。

　「単一のベクター又は２以上のベクターの組み合わせ」としては、（Ａ）が融合タンパク質である場合、例えば、以下のものが挙げられる：
　・（Ａ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び（Ｂ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクター；
　・（Ａ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターと、（Ｂ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターとの組み合わせ；
　・（Ａ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、（Ｂ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び（Ｃ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクター；
　・（Ａ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び（Ｂ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターと、（Ｃ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターとの組み合わせ；
　・（Ａ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び（Ｃ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターと、（Ｂ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターとの組み合わせ；
　・（Ｂ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び（Ｃ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターと、（Ａ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターとの組み合わせ；又は
　・（Ａ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターと、（Ｂ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターと、（Ｃ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターとの組み合わせ。

　或いは、「単一のベクター又は２以上のベクターの組み合わせ」としては、（Ａ）がタンパク質複合体である場合、例えば、以下のものが挙げられる：
　・（Ａ－１）～（Ａ－５）からなるアミノ酸配列を含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、（Ａ－６）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び（Ｂ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクター；
　・（Ａ－１）～（Ａ－５）からなるアミノ酸配列を含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び（Ａ－６）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターと、（Ｂ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターとの組み合わせ；
　・（Ａ－１）～（Ａ－５）からなるアミノ酸配列を含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び（Ｂ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターと、（Ａ－６）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターとの組み合わせ；
　・（Ａ－１）～（Ａ－５）からなるアミノ酸配列を含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターと、（Ａ－６）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び（Ｂ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターとの組み合わせ；
　・（Ａ－１）～（Ａ－５）からなるアミノ酸配列を含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターと、（Ａ－６）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターと、（Ｂ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターとの組み合わせ；
　・（Ａ－１）～（Ａ－５）からなるアミノ酸配列を含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、（Ａ－６）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチド、（Ｂ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び（Ｃ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクター；
　・（Ａ－１）～（Ａ－５）からなるアミノ酸配列を含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、（Ａ－６）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び（Ｂ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターと、（Ｃ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターとの組み合わせ；
　・（Ａ－１）～（Ａ－５）からなるアミノ酸配列を含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、（Ｂ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び（Ｃ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターと、（Ａ－６）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターとの組み合わせ；
　・（Ａ－６）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチド、（Ｂ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び（Ｃ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターと、（Ａ－１）～（Ａ－５）からなるアミノ酸配列を含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターとの組み合わせ；
　・（Ａ－１）～（Ａ－５）からなるアミノ酸配列を含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、（Ａ－６）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び（Ｃ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターと、（Ｂ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターとの組み合わせ；
　・（Ａ－１）～（Ａ－５）からなるアミノ酸配列を含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び（Ａ－６）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターと、（Ｂ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び（Ｃ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターとの組み合わせ；
　・（Ａ－１）～（Ａ－５）からなるアミノ酸配列を含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び（Ｂ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターと、（Ａ－６）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び（Ｃ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターとの組み合わせ；
　・（Ａ－１）～（Ａ－５）からなるアミノ酸配列を含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び（Ｃ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターと、（Ａ－６）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び（Ｂ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターとの組み合わせ；
　・（Ａ－１）～（Ａ－５）からなるアミノ酸配列を含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターと、（Ａ－６）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターと、（Ｂ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び（Ｃ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターとの組み合わせ；
　・（Ａ－１）～（Ａ－５）からなるアミノ酸配列を含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターと、（Ｂ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターと、（Ａ－６）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び（Ｃ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターとの組み合わせ；
　・（Ａ－１）～（Ａ－５）からなるアミノ酸配列を含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターと、（Ｃ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターと、（Ａ－６）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び（Ｂ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターとの組み合わせ；
　・（Ａ－６）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターと、（Ｂ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターと、（Ａ－１）～（Ａ－５）からなるアミノ酸配列を含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び（Ｃ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターとの組み合わせ；
　・（Ａ－６）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターと、（Ｃ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターと、（Ａ－１）～（Ａ－５）からなるアミノ酸配列を含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び（Ｂ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターとの組み合わせ；
　・（Ｂ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターと、（Ｃ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターと、（Ａ－１）～（Ａ－５）からなるアミノ酸配列を含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び（Ａ－６）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターとの組み合わせ；又は
　・（Ａ－１）～（Ａ－５）からなるアミノ酸配列を含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターと、（Ａ－６）を含むタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターと、（Ｂ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターと、（Ｃ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでなるベクターとの組み合わせ。

　形質転換させる細胞は、形質転換させた後に本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞を得ることができるものである限り特段限定されるものではなく、初代培養細胞であっても、継代細胞であっても、株化細胞であってもよく、これらは正常細胞であっても、ガン化又は腫瘍化した細胞を含む病変細胞であってもよい。また、形質転換させる細胞の由来は、特段限定されるものではないが、例えば、マウス、ラット、ハムスター、モルモット等のげっ歯類、ウサギ等のウサギ目、ブタ、ウシ、ヤギ、ウマ、ヒツジ等の有蹄類、イヌ、ネコ等のネコ目、ヒト、サル、アカゲザル、カニクイザル、マーモセット、オランウータン、チンパンジー等の霊長類等の哺乳動物等の動物由来の細胞；植物由来の細胞；昆虫由来の細胞等が挙げられる。形質転換させる細胞としては、好ましくは動物由来の細胞である。動物由来の細胞としては、これらに限定されるものではないが、例えば、ヒト胚腎臓細胞（ＨＥＫ２９３Ｔ細胞等を含む）、ヒトＦＬ細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）、ＣＯＳ－７、Ｖｅｒｏ、マウスＬ細胞、ラットＧＨ３等が挙げられる。

　細胞を形質転換させる方法は、細胞に目的のポリヌクレオチドを導入しうる方法であれば特に限定されるものではない。例えば、エレクトロポレーション法、マイクロインジェクション法、リン酸カルシウム法、カチオン性脂質法、リポソームを使用する方法、ポリエチレンイミン等の非リポソーム性のものを使用する方法、ウイルス感染法等であってもよい。

　形質転換された細胞は、（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）、（Ｆ）及び／又は（Ｇ）の融合タンパク質又はタンパク質複合体を、一過性に発現する形質転換細胞であってもよいし、安定的に発現する形質転換細胞（安定細胞株）であってもよい。

　形質転換された細胞の培養条件は、特段限定されるものではない。例えば、形質転換された細胞が動物由来の細胞である場合、例えば、細胞培養等に一般に使用されている培地（例えば、ＲＰＭＩ１６４０培地、ＥａｇｌｅのＭＥＭ培地、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ培地）、ＨａｍＦ１２培地、又はこれらの任意の組み合わせ等）、又はこれにウシ胎児血清、抗生物質、アミノ酸等の他の成分を添加した培地等を使用し、例えば、約１～約１０％（好ましくは約２～約５％）ＣＯ_２の存在下、約３０～約４０℃（好ましくは約３７℃）で、所望の時間（例えば、約０．５時間～約２４０時間（好ましくは、約５～約１２０時間、より好ましくは、約１２～約７２時間））、培養（例えば、静置下又は振盪下）してもよい。

　形質転換された細胞を培養して得られてなる培養上清中には、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞が含まれうる。そのため、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞を得る目的で形質転換細胞を培養する際、必要に応じて、エクソソーム等の細胞外小胞を除去した培地（例えば、エクソソームを除去した約１～約５％ウシ胎児血清を含むダルベッコ改変イーグル培地等）を用いてもよい。

培養上清

　本発明の一実施態様では、本明細書中に記載の形質転換された細胞を培養して得られてなる、培養上清を提供する。

　本明細書中に記載の培養上清中に含まれる抗原提示細胞外小胞は、例えば、該培養上清を精製（例えば、遠心分離、クロマトグラフィー等）、濃縮、単離等をすることにより、より回収することができる。

　本発明の一実施態様では、本明細書中に記載の培養上清から得られてなる、抗原提示細胞外小胞を提供する。

本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞を製造するための方法

　本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞は、これらに限定されるものではないが、例えば、当業者に公知の遺伝子組み換え技術等の手段により（例えば、以下に記載の方法により、若しくは実施例に記載の方法により、又はこれらに類似する方法により）、得てもよい。
　通常の遺伝子組み換え技術により、上述した（Ａ）及び（Ｂ）（あるいは（Ａ）と（Ｂ）の代わりに（Ｄ））、並びに場合により（Ｃ）のタンパク質をそれぞれコードするポリヌクレオチドを得、これらを同一の又は別個のベクターに作動可能に挿入することができる。（Ａ）及び（Ｂ）（あるいは（Ａ）と（Ｂ）の代わりに（Ｄ））、並びに場合により（Ｃ）のタンパク質をそれぞれコードするポリヌクレオチドのうちの２種以上を同一のベクターに挿入する場合、それぞれが同一の又は別個のプロモーターに作動可能に連結されていてもよい。得られた単一の又は２以上のベクターを、細胞に同時に又は逐次的に形質転換させ、形質転換細胞（これら融合タンパク質を、一過性に発現する形質転換細胞であってもよいし、安定的に発現する形質転換細胞（安定株）であってもよい）を得ることができる。得られた形質転換細胞を所望の条件下で培養して培養上清を得、得られた培養上清を必要に応じて精製（例えば、遠心分離、抗体（例えば、細胞外小胞の膜に含まれるタンパク質等を認識する抗体）、クロマトグラフィー、フローサイトメトリー等を用いた精製）、濃縮（例えば、限外濾過等）、乾燥等することで、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞を得ることができる。

　或いは、上述した（Ａ）及び（Ｂ）（あるいは（Ａ）と（Ｂ）の代わりに（Ｄ））、並びに場合により（Ｃ）のタンパク質として、可溶性のものを用いる場合、例えば、以下の方法により本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞を得てもよい。
　上述した（Ａ）及び（Ｂ）（あるいは（Ａ）と（Ｂ）の代わりに（Ｄ））、並びに場合により（Ｃ）を可溶性のタンパク質として、通常の遺伝子組み換え技術によって得たものか、又は市販のものを用いる。次に、所望の細胞から、例えば、公知の方法により若しくは本明細書中に記載の方法により、又はこれらに類似する方法により、細胞外小胞を得る。次に、得られた細胞外小胞と、上述の可溶性のタンパク質の１種以上とを、所望の溶媒中、所望の条件下で反応させる（例えば、特開２０１８－１０４３４１号公報等に記載の方法を参考にしてもよい）。この操作を、（Ａ）及び（Ｂ）（あるいは（Ａ）と（Ｂ）の代わりに（Ｄ））、並びに場合により（Ｃ）の可溶性のタンパク質が、細胞外小胞の膜に含まれるまで、条件を適宜変更しながら実施することで、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞を得ることができる。

　或いは、上述した（Ａ）及び（Ｂ）（あるいは（Ａ）と（Ｂ）の代わりに（Ｄ））、並びに場合により（Ｃ）のタンパク質として、可溶性のものを用いる場合、例えば、以下の方法により本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞を得てもよい。
　上述した（Ａ）及び（Ｂ）（あるいは（Ａ）と（Ｂ）の代わりに（Ｄ））、並びに場合により（Ｃ）の可溶性のタンパク質として、それらのＮ末端側又はＣ末端側に所望のタグ（例えば、Ｈｉｓタグ、ＦＬＡＧタグ、配列番号７９のＰＮＥタグ等が挙げられ、これらは全て同じタグであってもよいし、全て異なる種類のタグであってもよい）を付加したものを、通常の遺伝子組み換え技術によって得る。次に、所望の細胞から、例えば、公知の方法により若しくは本明細書中に記載の方法により、又はこれらに類似する方法により、細胞外小胞を得、これに該タグに対する抗体又はその抗原結合性フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ若しくはナノボディ、例えば、配列番号８３の抗ＰＮＥタグナノボディ）等を、必要に応じてペプチドリンカー等を介して結合させるか；或いは、通常の遺伝子組み換え技術によって、細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質又はその膜貫通ドメインのＮ末端側又はＣ末端側に該タグに対する抗体又はその抗原結合性フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ若しくはナノボディ）等が結合した融合タンパク質（例えば、配列番号８９の、抗ＰＮＥタグナノボディ（配列番号８３）とＣＤ８ａ（配列番号８５）とＣＤ８１（配列番号１５）との融合タンパク質等）をコードするポリヌクレオチド（例えば、配列番号８８、９０等）を得、これをベクターに作動可能に挿入したものを用いて細胞に形質転換させることで、形質転換細胞（融合タンパク質を、一過性に発現する形質転換細胞であってもよいし、安定的に発現する形質転換細胞（安定株）であってもよい）を得、得られた形質転換細胞を培養等し、上述した方法等により細胞外小胞を回収する。タグが付加した可溶性の（Ａ）及び（Ｂ）、並びに場合により（Ｃ）のタンパク質と、該タグに対する抗体又はその抗原結合性フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ若しくはナノボディ）等を含むタンパク質を膜に含む細胞外小胞とを、所望の条件で混合することで、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞を得てもよい。

　あるいは、上述した（Ａ）～（Ｇ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを組み合わせて用いて形質転換を行い、得られた形質転換細胞から、明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞を得てもよい。

　あるいは、上述した方法のうちの２以上を組み合わせた方法により、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞を得てもよい。

　本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞は、例えば、フローサイトメトリー、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロッティング等の手法により、（Ａ）及び（Ｂ）（あるいは（Ａ）と（Ｂ）の代わりに（Ｄ））、並びに場合により（Ｃ）のタンパク質が膜に含まれていることを確認してもよい。

　本発明の一実施態様では、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞を製造するための方法であって、本明細書中に記載の形質転換された細胞を培養して得られてなる培養上清を回収することを含む、方法を提供する。

　本発明の一実施態様では、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞を製造するための方法であって、
　（ｉ）本明細書中に記載の（Ａ）の融合タンパク質又はタンパク質複合体をコードするポリヌクレオチド、及び
　（ｉｉ）本明細書中に記載の（Ｂ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、並びに、場合により
　（ｉｉｉ）本明細書中に記載の（Ｃ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド
を含んでなる、単一のベクター又は２以上のベクターの組み合わせを、細胞に同時又は逐次的に（好ましくは、同時に）形質転換させることと、
　得られた形質転換細胞を培養して得られてなる培養上清を回収することと
を含む、方法を提供する。
　あるいは、本発明の一実施態様では、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞を製造するための方法であって、
　（ｉｖ）本明細書中に記載の（Ｄ）の抗原提示ＭＨＣ分子とすくなくとも１種のＴ細胞刺激性サイトカインを含み、該抗原と該Ｔ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び
場合により
　（ｉｉｉ）本明細書中に記載の（Ｃ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド
を含んでなる、単一のベクター又は２以上のベクターの組み合わせを、細胞に同時又は逐次的に（好ましくは、同時に）形質転換させることと、
　得られた形質転換細胞を培養して得られてなる培養上清を回収することと
を含む、方法を提供する。
　あるいは、本発明の一実施態様では、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞を製造するための方法であって、
　（ｖ）本明細書中に記載の（Ｅ）の抗原提示ＭＨＣ分子とすくなくとも１種のＴ細胞刺激性サイトカインとＴ細胞共刺激分子を含み、該抗原と該Ｔ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド
を含んでなる、ベクターを、細胞に形質転換させることと、
　得られた形質転換細胞を培養して得られてなる培養上清を回収することと
を含む、方法を提供する。

　本発明の一実施態様では、本明細書中に記載の培養上清から得られてなる抗原提示細胞外小胞を提供する。

　本発明の一実施態様では、抗原提示細胞外小胞であって、以下：
　（ｉ）本明細書中に記載の（Ａ）の融合タンパク質又はタンパク質複合体をコードするポリヌクレオチド、及び
　（ｉｉ）本明細書中に記載の（Ｂ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、並びに、場合により
　（ｉｉｉ）本明細書中に記載の（Ｃ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド
を含んでなる、単一のベクター又は２以上のベクターの組み合わせを、細胞に同時又は逐次的に（好ましくは、同時に）形質転換させることと、
　得られた形質転換細胞を培養して得られてなる培養上清を回収することと
を含む方法により得られる、抗原提示細胞外小胞を提供する。
　あるいは、本発明の一実施態様では、抗原提示細胞外小胞であって、以下：
　（ｉｖ）本明細書中に記載の（Ｄ）の抗原提示ＭＨＣ分子とすくなくとも１種のＴ細胞刺激性サイトカインを含み、該抗原と該Ｔ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び
場合により
　（ｉｉｉ）本明細書中に記載の（Ｃ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド
を含んでなる、単一のベクター又は２以上のベクターの組み合わせを、細胞に同時又は逐次的に（好ましくは、同時に）形質転換させることと、
　得られた形質転換細胞を培養して得られてなる培養上清を回収することと
を含む方法により得られる、抗原提示細胞外小胞を提供する。
　あるいは、本発明の一実施態様では、抗原提示細胞外小胞であって、以下：
　（ｖ）本明細書中に記載の（Ｅ）の抗原提示ＭＨＣ分子とすくなくとも１種のＴ細胞刺激性サイトカインとＴ細胞共刺激分子を含み、該抗原と該Ｔ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを、細胞に形質転換させることと、
　得られた形質転換細胞を培養して得られてなる培養上清を回収することと
を含む方法により得られる、抗原提示細胞外小胞を提供する。

組成物、用途

　本発明の一実施態様では、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞、ポリヌクレオチド及び／又はこれを含むベクター、並びに／又は形質転換細胞及び／又はその培養上清、を含む組成物（例えば、医薬組成物）を提供する。本発明の一実施態様では、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞、又は本明細書中に記載の培養上清を含む医薬組成物を提供する。

　本明細書中に記載の組成物（例えば、医薬組成物）は、これらに限定されるものではないが、例えば、賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、ｐＨ調整剤、溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、無痛化剤、防腐剤、抗酸化剤、着色剤、甘味剤、界面活性剤等の添加剤を含むことができる。これら添加剤の種類、その使用量等は、目的に応じて当業者が適宜選択しうる。医薬組成物として用いる場合、これらの添加剤は薬理学的に許容できる担体であることが好ましい。さらに、本明細書中に記載の組成物がポリヌクレオチドを含む場合、必須ではないが、核酸のＤＤ（ドラッグデリバリー）に適した担体を含むことが好ましく、これらの担体として脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）及びポリマー（たとえばＰＥＩ）が挙げられる。

　本明細書中に記載の組成物（例えば、医薬組成物）は、上述した添加剤と共に、自体公知の方法により、例えば、錠剤、被覆錠剤、口腔内崩壊錠、チュアブル剤、丸剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、液剤（例えば、シロップ剤、注射剤、ローション剤等を含む）、懸濁剤、乳剤、ゼリー剤、貼付剤、軟膏剤、クリーム剤、吸入剤、坐剤等に製剤化することができる。これらは、経口剤であってもよいし、非経口剤であってもよい。製剤化されたものは、その目的に応じて、有益な他の成分（例えば、治療上有益な他の成分）を更に含んでいてもよい。

　本発明の一実施態様である組成物は、試験例が示すように、特定の抗原に対して獲得免疫（細胞性免疫及び/又は液性免疫）を増強することは可能であり、抗原として感染病原体（病原菌やウイルス等）由来のペプチドを用いれば、感染病原体によって引き起こされる感染症を処置又は予防するための医薬組成物として使用できる。
　また、本発明の一実施態様である組成物は、試験例が示すように、炎症性サイトカインの誘導を可能にし、自然免疫を活性化（好中球、単球、マクロファージなどを動員、活性化して病原菌などを食菌させることを含む）することにより、感染病原体を排除することが可能であり、感染病原体によって引き起こされる感染症を処置又は予防するための医薬組成物として使用できる。

　本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞（好ましくは、膜にＭＨＣクラスＩ拘束性抗原ペプチド及びＭＨＣクラスＩ分子を含む抗原提示細胞外小胞）、そのポリヌクレオチド及び／又はこれを含むベクター、並びに／又は形質転換細胞及び／又はその培養上清、或いはこれらを含む組成物（例えば、医薬組成物）は、ガンを処置又は予防するために有用でありうる。

　したがって、本発明の一実施態様では、ガンを処置又は予防するための、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞、ポリヌクレオチド及び／又はこれを含むベクター、並びに／又は形質転換細胞及び／又はその培養上清、或いはこれらを含む組成物（例えば、医薬組成物）を提供する。試験例が示すように、本発明の一実施態様である抗原提示細胞外小胞等は、用いる抗原特異的な細胞傷害性Ｔ細胞の増殖・活性化をすることが可能であり、用いる抗原として腫瘍関連抗原ペプチドを用いれば、増殖・活性化した細胞傷害性Ｔ細胞がガン細胞を認識して攻撃することにより、ガン細胞を死滅させることができる。

　本発明の別の実施態様では、ガンを処置又は予防するための医薬を製造するための、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞、ポリヌクレオチド及び／又はこれを含むベクター、並びに／又は形質転換細胞及び／又はその培養上清、或いはこれらを含む組成物（例えば、医薬組成物）の使用を提供する。

　本発明の別の実施態様では、ガンを処置又は予防するための方法であって、これを必要とする被験体に、有効量の本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞、ポリヌクレオチド及び／又はこれを含むベクター、並びに／又は形質転換細胞及び／又はその培養上清、或いはこれらを含む組成物を投与することを含む、方法を提供する。

　ガンとしては、何れの固形ガン及び血液ガンが含まれ、これらに限定されるものではないが、例えば、小細胞肺ガン、非小細胞肺ガン、乳ガン、食道ガン、胃ガン、小腸ガン、大腸ガン、結腸ガン、直腸ガン、膵臓ガン、前立腺ガン、骨髄ガン、腎臓ガン（腎細胞ガン等を含む）、副甲状腺ガン、副腎ガン、尿管ガン、肝ガン、胆管ガン、子宮頸ガン、卵巣ガン（例えば、その組織型が、漿液性腺ガン、粘液性腺ガン、明細胞腺ガン等）、精巣ガン、膀胱ガン、外陰部ガン、陰茎ガン、甲状腺ガン、頭頸部ガン、頭蓋咽頭ガン、咽頭ガン、舌ガン、皮膚ガン、メルケル細胞ガン、黒色腫（悪性黒色腫等）、上皮ガン、扁平上皮細胞ガン、基底細胞ガン、小児ガン、原発不明ガン、繊維肉腫、粘膜肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原生肉腫、脊索腫、血管肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、精上皮腫、ウィルムス腫瘍、脳腫瘍、神経膠腫、膠芽腫、星状細胞腫、骨髄芽腫、髄膜腫、神経芽細胞腫、髄芽腫、網膜芽細胞腫、脊椎腫瘍、悪性リンパ腫（例えば、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫等）、慢性又は急性リンパ球性白血病、成人Ｔ細胞白血病等が挙げられる。

　本発明の一実施態様において、ガンを処置又は予防するために、免疫チェックポイント阻害薬を併用することができる。免疫チェックポイント阻害薬を、同時又は順次患者に投与してもよいし、本発明に係る医薬に含まれていてもよい。
　免疫チェックポイント阻害薬としては、ＰＤ－１阻害剤（たとえば、ニブルマブ、ベムブロリジマブなどの抗ＰＤ－１抗体）、ＣＴＬＡ－４阻害剤（たとえばイピリムマブなどの抗ＣＴＬＡ－４抗体）、ＰＤ－Ｌ１阻害剤（たとえばデュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブなどの抗ＰＤ－Ｌ１抗体）などが例示されるがこれに限定されない。免疫チェックポイント阻害薬が抗体又はその活性断片の場合、その抗体又はその活性断片を、細胞外小胞の膜に局在することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはその膜結合ドメインと結合させて、本発明に係る細胞外小胞の膜上に存在させてもよい。
　かかる免疫チェックポイント阻害剤の併用は、ガン細胞に対する細胞傷害性を増強する。

　本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞（好ましくは、膜上にＭＨＣクラスＩＩ拘束性抗原ペプチド及びＭＨＣクラスＩＩ分子を含む抗原提示細胞外小胞）、そのポリヌクレオチド及び／又はこれを含むベクター、並びに／又は形質転換細胞及び／又はその培養上清、或いはこれらを含む組成物は、自己免疫疾患を処置又は予防するために有用でありうる。試験例が例示するように、本発明の一実施態様である抗原提示細胞外小胞は、用いる抗原特異的な制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の増殖・活性化をすることが可能であり、用いる抗原として自己抗原ペプチドを用いれば、増殖・活性化したＴｒｅｇが自己抗原に対する免疫寛容を引き起こし、自己免疫疾患を処置又は予防できる。

　したがって、本発明の一実施態様では、自己免疫疾患を処置又は予防するための、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞、ポリヌクレオチド及び／又はこれを含むベクター、並びに／又は形質転換細胞及び／又はその培養上清、或いはこれらを含む組成物（例えば、医薬組成物）を提供する。

　本発明の別の実施態様では、自己免疫疾患を処置又は予防するための医薬を製造するための、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞、ポリヌクレオチド及び／又はこれを含むベクター、並びに／又は形質転換細胞及び／又はその培養上清、或いはこれらを含む組成物（例えば、医薬組成物）の使用を提供する。

　本発明の別の実施態様では、自己免疫疾患を処置又は予防するための方法であって、これを必要とする被験体に、有効量の本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞、ポリヌクレオチド及び／又はこれを含むベクター、並びに／又は形質転換細胞及び／又はその培養上清、或いはこれらを含む組成物を投与することを含む、方法を提供する。

　自己免疫疾患としては、これらに限定されるものではないが、例えば、喘息、乾癬、全身性エリテマトーデス、ギランバレー症候群、シェーグレン症候群、多発性硬化症、重症筋無力症、悪性貧血、バセドウ病、橋本甲状腺炎、Ｉ型糖尿病、クローン病、炎症性腸疾患、関節リウマチ等が挙げられる。

　本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞（好ましくは、膜上にＭＨＣクラスＩＩ拘束性抗原ペプチド及びＭＨＣクラスＩＩ分子を含む抗原提示細胞外小胞）、そのポリヌクレオチド及び／又はこれを含むベクター、並びに／又は形質転換細胞及び／又はその培養上清、或いはこれらを含む組成物（例えば、医薬組成物）は、アレルギー性疾患を処置又は予防するために有用でありうる。試験例が示すように、本発明の一実施態様である抗原提示細胞外小胞等は、用いる抗原特異的な制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の増殖・活性化をすることが可能であり、用いる抗原としてアレルゲンを用いれば、増殖・活性化したＴｒｅｇがアレルゲンに対する免疫寛容を引き起こし、アレルギー疾患を処置又は予防できる。

　したがって、本発明の一実施態様では、アレルギー性疾患を処置又は予防するための、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞、ポリヌクレオチド及び／又はこれを含むベクター、並びに／又は形質転換細胞及び／又はその培養上清、或いはこれらを含む組成物（例えば、医薬組成物）を提供する。

　本発明の別の実施態様では、アレルギー性疾患を処置又は予防するための医薬を製造するための、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞、ポリヌクレオチド及び／又はこれを含むベクター、並びに／又は形質転換細胞及び／又はその培養上清、或いはこれらを含む組成物（例えば、医薬組成物）の使用を提供する。

　本発明の別の実施態様では、アレルギー性疾患を処置又は予防するための方法であって、これを必要とする被験体に、有効量の本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞、ポリヌクレオチド及び／又はこれを含むベクター、並びに／又は形質転換細胞及び／又はその培養上清、或いはこれらを含む組成物を投与することを含む、方法を提供する。

　アレルギー性疾患としては、これらに限定されるものではないが、例えば、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、アレルギー性喘息、アレルギー性結膜炎、アレルギー性胃腸炎、食物アレルギー、薬物アレルギー、蕁麻疹等が挙げられる。

　上述した各種疾患を処置又は予防する対象となる被験体は、これらに限定されるものではないが、例えば、マウス、ラット、ハムスター、モルモット等のげっ歯類；ウサギ等のウサギ目；ブタ、ウシ、ヤギ、ウマ、ヒツジ等の有蹄類；イヌ、ネコ等のネコ目；ヒト、サル、アカゲザル、カニクイザル、マーモセット、オランウータン、チンパンジー等の霊長類；等の哺乳動物等の動物、或いは植物が挙げられるが、好ましくは動物であり、より好ましくはげっ歯類又は霊長類であり、更に好ましくはマウス又はヒトである。

　本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞、ポリヌクレオチド及び／又はこれを含むベクター、並びに／又は形質転換細胞及び／又はその培養上清、或いはこれらを含む組成物又はこれを製剤化したものの投与量は、投与する被験体の性別、年齢、体重、健康状態、病状の程度若しくは食事；投与時間；投与方法；他の薬物との組み合わせ；その他の要因を考慮して適宜決定することができる。

特異的な抗原に対するＴ細胞を活性化、増殖及び／又は分化等させるための方法

　本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞は、ｉｎｖｉｔｒｏ、ｅｘｖｉｖｏ、及び／又はｉｎｖｉｖｏでＴ細胞（これらに限定されるものではないが、例えば、末梢血、脾臓等から得られたＴ細胞又はＴ細胞集団）と接触することで、特異的な抗原に対するＴ細胞を活性化、増殖、分化等させることができうる。

　本発明の一実施態様では、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞とＴ細胞とをｉｎｖｉｔｒｏ又はｅｘｖｉｖｏにおいて接触させることを含む、特異的な抗原に対するＴ細胞を活性化、増殖及び／又は分化させるための方法を提供する。

　本発明の一実施態様では、前述した方法によって得られる、Ｔ細胞を提供する。

　上記した方法により得られたＴ細胞を、疾患（例えば、ガン、自己免疫疾患、アレルギー性疾患等）を処置及び／又は予防するために、被験体に投与してもよい。

　以下、実施例を用いて本発明をより詳細に説明するが、これら実施例は、本発明の範囲を何ら限定するものではない。

プラスミドの調製１
　ｐＣＡＧ－ｐｕｒｏベクターを使用し、抗原を膜外に提示可能なＭＨＣクラスＩ分子を細胞外小胞の膜上に発現させるためのベクターを作製した。
　確立されたクローニング技術によって、β_２ミクログロブリンのシグナルペプチド（アミノ酸１～２０；配列番号１）をコードするポリヌクレオチド（配列番号２）、モデル抗原ペプチドであるＯＶＡペプチド（配列番号３）をコードするポリヌクレオチド（配列番号４）、ペプチドリンカー（アミノ酸配列：配列番号５、ポリヌクレオチド：配列番号６）、シグナルペプチドを除いたβ_２ミクログロブリンの全長配列（アミノ酸２１～１１９；配列番号７）をコードするポリヌクレオチド（配列番号８）、ペプチドリンカー（配列番号１１）をコードするポリヌクレオチド（配列番号１２）、及びシグナルペプチドを除いたＭＨＣクラスＩα鎖の全長配列（アミノ酸２２～３６９；配列番号９）をコードするポリヌクレオチド（配列番号１０）からなる、シングルチェーントライマー（ｓｃ－Ｔｒｉｍｅｒ）を作製した（アミノ酸配列：配列番号１３；ポリヌクレオチド：配列番号１４）。次に、ｓｃ－ＴｒｉｍｅｒとテトラスパニンであるＣＤ８１の全長配列（アミノ酸１～２３６；配列番号１５）をコードするポリヌクレオチド（配列番号１６）とを連結したポリヌクレオチド（配列番号１８；対応するアミノ酸配列：配列番号１７）をｐＣＡＧ－ｐｕｒｏベクターに挿入した（図１Ａ、１Ｂ：以下、ｓｃ－Ｔｒｉｍｅｒ－ＣＤ８１）。
　同様の方法により、Ｔ細胞共刺激分子の一つであるＣＤ８０を細胞外小胞の膜上に発現させるため、ＣＤ８０の全長配列（アミノ酸１～３０６；配列番号１９）をコードするポリヌクレオチド（配列番号２０）とテトラスパニンであるＣＤ９の全長の全長配列（アミノ酸１～３０６；配列番号２１）をコードするポリヌクレオチド（配列番号２２）とを連結したポリヌクレオチド（配列番号２４；対応するアミノ酸配列：配列番号２３）をｐＣＡＧ－ｐｕｒｏ又はｐＭＸベクターに挿入した（図１Ｃ、１Ｄ：以下、ＣＤ８０－ＣＤ９）。
　同様の方法により、Ｔ細胞刺激性サイトカインの一つであるＩＬ－２を細胞外小胞の膜上に発現させるため、ＩＬ－２のシグナルペプチドを除いた全長配列（アミノ酸２１～１６９；配列番号２５）をコードするポリヌクレオチド（配列番号２６）を、テトラスパニンであるマウスＣＤ６３（アミノ酸１～２３８：配列番号２７；ポリヌクレオチド：配列番号２８）の大型細胞外ループ中にあるアミノ酸１７０Ｃと１７１Ｉの間に挿入した（即ち、配列番号５７のＣＤ６３の部分配列をコードするポリヌクレオチド（配列番号５８）と、配列番号５９のＣＤ６３の部分配列をコードするポリヌクレオチド（配列番号６０）との間に、ＩＬ－２の配列を挿入した）。なお、ＩＬ－２のＮ末端側及びＣ末端側にはそれぞれ、ペプチドリンカー（アミノ酸配列ＧＧＧＧＳ：配列番号２９）をコードするポリヌクレオチド（配列番号３０）を付加した。このポリヌクレオチド（配列番号３２；対応するアミノ酸配列：配列番号３１）をｐＣＡＧ－ｐｕｒｏベクターに挿入した（図１Ｅ、１Ｆ：以下、ＣＤ６３－ＩＬ－２）。

プラスミドの調製２：
　ｐＣＡＧ－ｐｕｒｏベクターを使用し、抗原を膜外に提示可能なＭＨＣクラスＩＩ分子を細胞外小胞の膜上に発現させるためのベクターを作製した。
　確立されたクローニング技術によって、ＭＨＣクラスＩＩβ鎖のシグナルペプチド（アミノ酸１～２７；配列番号３３）をコードするポリヌクレオチド（配列番号３４）、モデル抗原ペプチドであるＯＶＡペプチド（配列番号３５）をコードするポリヌクレオチド（配列番号３６）及びシグナルペプチドを除いたＭＨＣクラスＩＩβ鎖の全長配列（アミノ酸２８～２６５；配列番号３７）をコードするポリヌクレオチド（配列番号３８）をペプチドリンカー（配列番号３９）をコードするポリヌクレオチド（配列番号４０）で繋ぎ、シングルチェーンダイマー（ｓｃ－Ｄｉｍｅｒ）を作製した（アミノ酸配列：配列番号４１；ポリヌクレオチド：配列番号４２）。次に、ｓｃ－ＤｉｍｅｒとテトラスパニンであるＣＤ８１の全長配列（アミノ酸１～２３６；配列番号１５）をコードするポリヌクレオチド（配列番号１６）とを連結したポリヌクレオチド（配列番号４４；対応するアミノ酸配列：配列番号４３）をｐＣＡＧ－ｐｕｒｏベクターに挿入した（図１Ｇ、１Ｈ：以下、ｓｃ－Ｄｉｍｅｒ－ＣＤ８１）。
　ＭＨＣクラスＩＩ分子の構成要素であるＭＨＣクラスＩＩα鎖の全長配列（アミノ酸１～２５６；配列番号４５）をコードするポリヌクレオチド（配列番号４６）を別のｐＣＡＧ－ｐｕｒｏベクターに挿入した（図１Ｉ：以下、ＭＨＣクラスＩＩα鎖）。
　同様の方法により、Ｔ細胞刺激性サイトカインの一つであるＴＧＦ－β１を細胞外小胞の膜上に発現させるため、ＬＡＰドメインの３３、２２３、２２５番目の３つのＣをＳに変更したＴＧＦ－β１の全長配列（アミノ酸１～３９０；配列番号４７）をコードするポリヌクレオチド（配列番号４８）と、８９番目のＤをＥに変更したＭＦＧ－Ｅ８のシグナルペプチドを除いた全長配列（アミノ酸２３～４６３；配列番号４９）をコードするポリヌクレオチド（配列番号５０）とを、ペプチドリンカー（配列番号２９）をコードするポリヌクレオチド（配列番号３０）を介して連結させた。このポリヌクレオチド（配列番号５２；対応するアミノ酸配列：配列番号５１）をｐＣＡＧ－ｐｕｒｏベクターに挿入した（図１Ｊ、１Ｋ：以下、ＴＧＦ－β－ＭＦＧ－Ｅ８）。
　同様の方法により、Ｔ細胞刺激性サイトカインの一つであるＩＬ－４を細胞外小胞の膜上に発現させるため、ＩＬ－４のシグナルペプチドを除いた全長配列（アミノ酸２１～１４０；配列番号５３）をコードするポリヌクレオチド（配列番号５４）を、テトラスパニンであるマウスＣＤ８１（アミノ酸１～２３６：配列番号１５；ポリヌクレオチド：配列番号１６）の大型細胞外ループ中にあるアミノ酸１７７Ｓと１７８Ｇの間に挿入した（即ち、配列番号６１のＣＤ８１の部分配列をコードするポリヌクレオチド（配列番号６２）と、配列番号６３のＣＤ８１の部分配列をコードするポリヌクレオチド（配列番号６４）との間に、ＩＬ－４の配列を挿入した）。なお、ＩＬ－４のＮ末端側及びＣ末端側にはそれぞれ、ペプチドリンカー（アミノ酸配列ＧＧＧＧＳ；配列番号２９）をコードするポリヌクレオチド（配列番号３０）を付加した。このポリヌクレオチド（配列番号５６；対応するアミノ酸配列：配列番号５５）をｐＣＡＧ－ｐｕｒｏベクターに挿入した（図１Ｌ、１Ｍ：以下、ＣＤ８１－ＩＬ－４）。

プラスミドの調製３：
ｓｃ－Ｄｉｍｅｒ－ＣＤ８１―ＩＬ―１２ｐ４０
　上記ｓｃ－Ｄｉｍｅｒに、ＣＤ８１とＴ細胞刺激性サイトカインであるＩＬ－１２のサブユニットであるＩＬ－１２ｐ４０を融合させたタンパク質（配列番号９１）をコードするポリヌクレオチド（配列番号９２）をｐＣＡＧ－ｐｕｒｏベクターに挿入して、融合タンパク質を発現するベクターを調製した。
ＩＬ―１２ｐ３５
　ＩＬ－１２のもう１つのサブユニットであるＩＬ―１２ｐ３５（配列番号９７）をコードするポリヌクレオチド（配列番号９８）をｐＣＡＧ－ｐｕｒｏ又はｐＭＸベクターに挿入して、に挿入して、ＩＬ―１２ｐ３５を発現するベクターを調製した。

ＣＤ８１―ＩＬ―６
　　Ｔ細胞刺激性サイトカインの一つであるＩＬ－６を細胞外小胞の膜上に発現させるため、ＩＬ－６のシグナルペプチドを除いた全長配列（配列番号９９）をコードするポリヌクレオチド（配列番号１００）を、テトラスパニンであるＣＤ８１の細胞外ループをコードするポリヌクレオチド中に導入して、ＣＤ８１－ＩＬ－６融合タンパク質（配列番号１０１）をコードするポリヌクレオチド（配列番号１０２）をｐＣＡＧ－ｐｕｒｏ又はｐＭＸベクターに挿入して、に挿入して、融合タンパク質を発現するベクターを調製した。

ｈＣＤ８０－ｈＣＤ９
　Ｔ細胞共刺激分子の一つであるヒトＣＤ８０を細胞外小胞の膜上に発現させるため、ヒトＣＤ８０と、テトラスパニンであるヒトＣＤ９との融合タンパク質（配列番号１０７）をコードするポリヌクレオチド（配列番号１０８）をｐＣＡＧ－ｐｕｒｏ又はｐＭＸベクターに挿入して、融合タンパク質を発現するベクターを調製した。
ｓｃ－Ｔｒｉｍｅｒ－ＣＤ８１―ＩＬ―２　
　Ｔ細胞刺激性サイトカインの一つであるＩＬ－２を細胞外小胞の膜上に発現させるため、上記ＣＤ８１―ＩＬ―４と同様に、ＣＤ８１－ＩＬ２の融合ペプチドをコードするポリヌクレオチドを作製し、そのポリヌクレオチド配列とｓｃ－Ｔｒｉｍｅｒ－をコードするヌクレオチドを結合して、ｓｃ－Ｔｒｉｍｅｒ－ＣＤ８１―ＩＬ―２（配列番号１３５）をコードするポリヌクレオチドを（配列番号１３６）作製し、ｐＣＡＧ－ｐｕｒｏ又はｐＭＸベクターに挿入して、融合タンパク質を発現するベクターを調製した。

ｈｓｃ―Ｔｒｉｍｅｒ―ｈＣＤ８１
　上記ｓｃ－Ｔｒｉｍｅｒ－ＣＤ８１をヒトの遺伝子配列（ＭＨＣ－Ｉの配列としてＨＬＡ－Ａ２４０２を用いた）を用いて、ｈｓｃ―Ｔｒｉｍｅｒ―ｈＣＤ８１（配列番号１３１）をコードするポリヌクレオチド（配列番号１３２）を作製し、ｐＣＡＧ－ｐｕｒｏ又はｐＭＸベクターに挿入して、融合タンパク質を発現するベクターを調製した。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ｓｃ－Ｔｒｉｍｅｒ－ｈＣＤ８１
　ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ペプチド(アミノ酸配列：配列番号１４１；ポリヌクレオチド配列：配列番号１４２))を抗原とし、ＭＨＣ分子としてＨＬＡ－Ａ０２０１を用いて、抗原提示ＭＨＣ分子（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ｓｃ－Ｔｒｉｍｅｒ;アミノ酸配列：配列番号１４７）をコードするポリヌクレオチド（配列番号１４８）を作製し、さらにｈＣＤ８１をコードするポリヌクレオチドと結合させて、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ｓｃ－Ｔｒｉｍｅｒ－ｈＣＤ８１（配列番号１４９）をコードするポリヌクレオチド（配列番号１５０）を作製した。作製したポリヌクレオチドをｐＣＡＧ－ｐｕｒｏ又はｐＭＸベクターに挿入して、融合タンパク質を発現するベクターを調製した。
ｈＣＤ６３－ｈＩＬ－２
　上記ＣＤ６３－ＩＬ－２を、ヒト遺伝子配列を用いて作製した。ｈＣＤ６３－ｈＩＬ－２（配列番号１１５）をコードするポリヌクレオチド（配列番号１１６）を作製し、ｐＣＡＧ－ｐｕｒｏ又はｐＭＸベクターに挿入して、融合タンパク質を発現するベクターを調製した。

ＣＤ６３―Ａｋａｌｕｃ
　陰性対照として、ＣＤ６３とＡｋａｌｕｃルシフェラーゼを融合させ、細胞外小胞にAlkaLuc融合タンパク質（配列番号１３９）を局在させるためのポリヌクレオチド（配列番号１４０）を作製し、ｐＣＡＧ－ｐｕｒｏ又はｐＭＸベクターに挿入して、融合タンパク質を発現するベクターを調製した。

　実施例で使用した各配列を、以下の表１～１３に示す。なお、各配列における下線部分は、シグナルペプチドを示す。

エクソソームを除去したウシ胎児血清の調製
　１０ｍＬの非働化処理ＦＢＳと２ｍＬの５０％Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）１０，０００溶液（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製、＃８１２８０）を４℃、２時間撹拌した後に、１５００×ｇ、４℃、３０分間の遠心条件でエクソソームを沈殿させ、上清を回収することで、エクソソームを除去したウシ胎児血清を得た。

［実施例１］ＭＨＣクラスＩ分子及びＴ細胞刺激性サイトカインを膜に含む抗原提示細胞外小胞
　ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を細胞培養ディッシュに播種し、２％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたダルベッコ改変イーグル培地で培養した。約５０％コンフルエンスの細胞に、製造業者の指示にしたがって、プラスミド（ｓｃ－Ｔｒｉｍｅｒ－ＣＤ８１、及びＣＤ６３－ＩＬ－２をそれぞれコードするｐＣＡＧベクター）をＰｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｉｍｉｎｅ“Ｍａｘ”（Polysciences社製）を用いて、２つ同時にトランスフェクトした。トランスフェクションの３時間後に培地を交換し、トランスフェクションの２４時間後にエクソソームを除去した２％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたダルベッコ改変イーグル培地に培地を交換した。トランスフェクションの７２時間後、上清を回収し、該上清を０．２２μｍフィルターに通した後、３００ｇで５分間遠心分離した。上清を回収し、該上清を２，０００ｇ、２０分間、遠心分離した。上清を回収し、該上清を１０，０００ｇ、３０分間、遠心分離した。上清を回収し、該上清を１００，０００ｇで２時間遠心分離した後、上清を取り除き、ペレットをＰＢＳで洗浄した。ペレットにＰＢＳを加え、１００，０００ｇで２時間、遠心分離した後、上清を取り除き、ペレットを１００μＬのＰＢＳで懸濁したものを、実施例１の抗原提示細胞外小胞として用いた（図２Ａ）。細胞外小胞の濃度は、ＢＣＡタンパクアッセイキット（Thermo Fisher Scientific社製）を用い、製造業者の指示にしたがって測定した。

［実施例２］ＭＨＣクラスＩ分子、Ｔ細胞共刺激分子、及びＴ細胞刺激性サイトカインを膜に含む抗原提示細胞外小胞
　ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を細胞培養ディッシュに播種し、２％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたダルベッコ改変イーグル培地で培養した。約５０％コンフルエンスの細胞に、製造業者の指示にしたがって、上記で調製したプラスミド（ｓｃ－Ｔｒｉｍｅｒ－ＣＤ８１、ＣＤ８０－ＣＤ９、及びＣＤ６３－ＩＬ－２をそれぞれコードするｐＣＡＧベクター）をＰｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｉｍｉｎｅ“Ｍａｘ”（Polysciences社製）を用いて、３つ同時にトランスフェクトした。トランスフェクションの３時間後に培地を交換し、トランスフェクションの２４時間後にエクソソームを除去した２％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたダルベッコ改変イーグル培地に培地を交換した。トランスフェクションの７２時間後、上清を回収し、該上清を０．２２μｍフィルターに通した後、３００ｇで５分間遠心分離した。上清を回収し、該上清を２，０００ｇ、２０分間、遠心分離した。上清を回収し、該上清を１０，０００ｇ、３０分間、遠心分離した。上清を回収し、該上清を１００，０００ｇで２時間遠心分離した後、上清を取り除き、ペレットをＰＢＳで洗浄した。ペレットにＰＢＳを加え、１００，０００ｇで２時間、遠心分離した後、上清を取り除き、ペレットを１００μＬのＰＢＳで懸濁したものを、実施例２の抗原提示細胞外小胞として用いた（図２Ｂ）。抗原提示細胞外小胞の濃度は、ＢＣＡタンパクアッセイキット（Thermo Fisher Scientific社製）を用い、製造業者の指示にしたがって測定した。

［実施例３］ＭＨＣクラスＩＩ分子、Ｔ細胞共刺激分子、及びＴ細胞刺激性サイトカインを膜に含む抗原提示細胞外小胞１
　ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を細胞培養ディッシュに播種し、２％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたダルベッコ改変イーグル培地で培養した。約５０％コンフルエンスの細胞に、製造業者の指示にしたがって、上記で調製したプラスミド（ｓｃ－Ｄｉｍｅｒ－ＣＤ８１、ＭＨＣクラスＩＩα鎖、ＣＤ８０－ＣＤ９、及びＣＤ６３－ＩＬ－２をそれぞれコードするｐＣＡＧベクター）をＰｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｉｍｉｎｅ“Ｍａｘ”（Polysciences社製）を用いて、４つ同時にトランスフェクトした。トランスフェクションの３時間後に培地を交換し、トランスフェクションの２４時間後にエクソソームを除去した２％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたダルベッコ改変イーグル培地に培地を交換した。トランスフェクションの７２時間後、上清を回収し、該上清を０．２２μｍフィルターに通した後、３００ｇで５分間遠心分離した。上清を回収し、該上清を２，０００ｇ、２０分間、遠心分離した。上清を回収し、該上清を１０，０００ｇ、３０分間、遠心分離した。上清を回収し、該上清を１００，０００ｇで２時間遠心分離した後、上清を取り除き、ペレットをＰＢＳで洗浄した。ペレットにＰＢＳを加え、１００，０００ｇで２時間、遠心分離した後、上清を取り除き、ペレットを１００μＬのＰＢＳで懸濁したものを、実施例３の抗原提示細胞外小胞として用いた（図２Ｃ）。抗原提示細胞外小胞の濃度は、ＢＣＡタンパクアッセイキット（Thermo Fisher Scientific社製）を用い、製造業者の指示にしたがって測定した。

［実施例４］ＭＨＣクラスＩＩ分子、Ｔ細胞共刺激分子、及びＴ細胞刺激性サイトカインを膜に含む抗原提示細胞外小胞２
　ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を細胞培養ディッシュに播種し、２％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたダルベッコ改変イーグル培地で培養した。約５０％コンフルエンスの細胞に、製造業者の指示にしたがって、プラスミド（ｓｃ－Ｄｉｍｅｒ－ＣＤ８１、ＭＨＣクラスＩＩα鎖、ＣＤ８０－ＣＤ９、ＴＧＦ－β－ＭＦＧＥ８、及びＣＤ６３－ＩＬ－２をそれぞれコードするｐＣＡＧベクター）をＰｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｉｍｉｎｅ“Ｍａｘ”（Polysciences社製）を用いて、５つ同時にトランスフェクトした。トランスフェクションの３時間後に培地を交換し、トランスフェクションの２４時間後にエクソソームを除去した２％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたダルベッコ改変イーグル培地に培地を交換した。トランスフェクションの７２時間後、上清を回収し、該上清を０．２２μｍフィルターに通した後、３００ｇで５分間遠心分離した。上清を回収し、該上清を２，０００ｇ、２０分間、遠心分離した。上清を回収し、該上清を１０，０００ｇ、３０分間、遠心分離した。上清を回収し、該上清を１００，０００ｇで２時間遠心分離した後、上清を取り除き、ペレットをＰＢＳで洗浄した。ペレットにＰＢＳを加え、１００，０００ｇで２時間、遠心分離した後、上清を取り除き、ペレットを１００μＬのＰＢＳで懸濁したものを、実施例４の抗原提示細胞外小胞として用いた（図２Ｄ）。抗原提示細胞外小胞の濃度は、ＢＣＡタンパクアッセイキット（Thermo Fisher Scientific社製）を用い、製造業者の指示にしたがって測定した。

［実施例５］ＭＨＣクラスＩＩ分子、Ｔ細胞共刺激分子、及びＴ細胞刺激性サイトカインを膜に含む抗原提示細胞外小胞３
　ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を細胞培養ディッシュに播種し、２％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたダルベッコ改変イーグル培地で培養した。約５０％コンフルエンスの細胞に、製造業者の指示にしたがって、上記で調製したプラスミド（ｓｃ－Ｄｉｍｅｒ－ＣＤ８１、ＭＨＣクラスＩＩα鎖、ＣＤ８０－ＣＤ９、及びＣＤ８１－ＩＬ－４をそれぞれコードするｐＣＡＧベクター）をＰｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｉｍｉｎｅ“Ｍａｘ”（Polysciences社製）を用いて、４つ同時にトランスフェクトした。トランスフェクションの３時間後に培地を交換し、トランスフェクションの２４時間後にエクソソームを除去した２％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたダルベッコ改変イーグル培地に培地を交換した。トランスフェクションの７２時間後、上清を回収し、該上清を０．２２μｍフィルターに通した後、３００ｇで５分間遠心分離した。上清を回収し、該上清を２，０００ｇ、２０分間、遠心分離した。上清を回収し、該上清を１０，０００ｇ、３０分間、遠心分離した。上清を回収し、該上清を１００，０００ｇで２時間遠心分離した後、上清を取り除き、ペレットをＰＢＳで洗浄した。ペレットにＰＢＳを加え、１００，０００ｇで２時間、遠心分離した後、上清を取り除き、ペレットを１００μＬのＰＢＳで懸濁したものを、実施例５の抗原提示細胞外小胞として用いた（図２Ｅ）。抗原提示細胞外小胞の濃度は、ＢＣＡタンパクアッセイキット（Thermo Fisher Scientific社製）を用い、製造業者の指示にしたがって測定した。

［参考例１］コントロール細胞外小胞
　ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を細胞培養ディッシュに播種し、２％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたダルベッコ改変イーグル培地で培養した。約５０％コンフルエンスの細胞に培地を交換し、２４時間後にエクソソームを除去した２％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたダルベッコ改変イーグル培地に培地を交換した。エクソソームを除去した該培地に交換した４８時間後、上清を回収し、該上清を０．２２μｍフィルターに通した後、３００ｇで５分間遠心分離した。上清を回収し、該上清を２，０００ｇ、２０分間、遠心分離した。上清を回収し、該上清を１０，０００ｇ、３０分間、遠心分離した。上清を回収し、該上清を１００，０００ｇで２時間遠心分離した後、上清を取り除き、ペレットをＰＢＳで洗浄した。ペレットにＰＢＳを加え、１００，０００ｇで２時間、遠心分離した後、上清を取り除き、ペレットを１００μＬのＰＢＳで懸濁したものを、参考例１の細胞外小胞として用いた。抗原提示細胞外小胞の濃度は、ＢＣＡタンパクアッセイキット（Thermo Fisher Scientific社製）を用い、製造業者の指示にしたがって測定した。

［参考例２］ＭＨＣクラスＩ分子を膜に含む細胞外小胞
　ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を細胞培養ディッシュに播種し、２％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたダルベッコ改変イーグル培地で培養した。約５０％コンフルエンスの細胞に、製造業者の指示にしたがって、プラスミド（ｓｃ－Ｔｒｉｍｅｒ－ＣＤ８１をコードするｐＣＡＧベクター）をＰｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｉｍｉｎｅ“Ｍａｘ”（Polysciences社製）を用いて、トランスフェクトした。トランスフェクションの３時間後に培地を交換し、トランスフェクションの２４時間後にエクソソームを除去した２％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたダルベッコ改変イーグル培地に培地を交換した。トランスフェクションの７２時間後、上清を回収し、該上清を０．２２μｍフィルターに通した後、３００ｇで５分間遠心分離した。上清を回収し、該上清を２，０００ｇ、２０分間、遠心分離した。上清を回収し、該上清を１０，０００ｇ、３０分間、遠心分離した。上清を回収し、該上清を１００，０００ｇで２時間遠心分離した後、上清を取り除き、ペレットをＰＢＳで洗浄した。ペレットにＰＢＳを加え、１００，０００ｇで２時間、遠心分離した後、上清を取り除き、ペレットを１００μＬのＰＢＳで懸濁したものを、参考例２の細胞外小胞として用いた。細胞外小胞の濃度は、ＢＣＡタンパクアッセイキット（Thermo Fisher Scientific社製）を用い、製造業者の指示にしたがって測定した。

［参考例３］Ｔ細胞共刺激分子を膜に含む細胞外小胞
　ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を細胞培養ディッシュに播種し、２％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたダルベッコ改変イーグル培地で培養した。約５０％コンフルエンスの細胞に、製造業者の指示にしたがって、プラスミド（ＣＤ８０－ＣＤ９をコードするｐＣＡＧベクター）をＰｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｉｍｉｎｅ“Ｍａｘ”（Polysciences社製）を用いて、トランスフェクトした。トランスフェクションの３時間後に培地を交換し、トランスフェクションの２４時間後にエクソソームを除去した２％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたダルベッコ改変イーグル培地に培地を交換した。トランスフェクションの７２時間後、上清を回収し、該上清を０．２２μｍフィルターに通した後、３００ｇで５分間遠心分離した。上清を回収し、該上清を２，０００ｇ、２０分間、遠心分離した。上清を回収し、該上清を１０，０００ｇ、３０分間、遠心分離した。上清を回収し、該上清を１００，０００ｇで２時間遠心分離した後、上清を取り除き、ペレットをＰＢＳで洗浄した。ペレットにＰＢＳを加え、１００，０００ｇで２時間、遠心分離した後、上清を取り除き、ペレットを１００μＬのＰＢＳで懸濁したものを、参考例３の細胞外小胞として用いた。細胞外小胞の濃度は、ＢＣＡタンパクアッセイキット（Thermo Fisher Scientific社製）を用い、製造業者の指示にしたがって測定した。
［参考例４］Ｔ細胞刺激性サイトカインを膜に含む細胞外小胞
　ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を細胞培養ディッシュに播種し、２％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたダルベッコ改変イーグル培地で培養した。約５０％コンフルエンスの細胞に、製造業者の指示にしたがって、プラスミド（ＣＤ６３－ＩＬ－２をコードするｐＣＡＧベクター）をＰｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｉｍｉｎｅ“Ｍａｘ”（Polysciences社）を用いて、トランスフェクトした。トランスフェクションの３時間後に培地を交換し、トランスフェクションの２４時間後にエクソソームを除去した２％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたダルベッコ改変イーグル培地に培地を交換した。トランスフェクションの７２時間後、上清を回収し、該上清を０．２２μｍフィルターに通した後、３００ｇで５分間遠心分離した。上清を回収し、該上清を２，０００ｇ、２０分間、遠心分離した。上清を回収し、該上清を１０，０００ｇ、３０分間、遠心分離した。上清を回収し、該上清を１００，０００ｇで２時間遠心分離した後、上清を取り除き、ペレットをＰＢＳで洗浄した。ペレットにＰＢＳを加え、１００，０００ｇで２時間、遠心分離した後、上清を取り除き、ペレットを１００μＬのＰＢＳで懸濁したものを、参考例４の細胞外小胞として用いた。細胞外小胞の濃度は、ＢＣＡタンパクアッセイキット（Thermo Fisher Scientific社製）を用い、製造業者の指示にしたがって測定した。

［参考例５］ＭＨＣクラスＩ分子及びＴ細胞共刺激分子を膜に含む細胞外小胞
　ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を細胞培養ディッシュに播種し、２％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたダルベッコ改変イーグル培地で培養した。約５０％コンフルエンスの細胞に、製造業者の指示にしたがって、プラスミド（ｓｃ－Ｔｒｉｍｅｒ－ＣＤ８１、及びＣＤ８０－ＣＤ９をそれぞれコードするｐＣＡＧベクター）をＰｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｉｍｉｎｅ“Ｍａｘ”（Polysciences社製）を用いて、２つ同時にトランスフェクトした。トランスフェクションの３時間後に培地を交換し、トランスフェクションの２４時間後にエクソソームを除去した２％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたダルベッコ改変イーグル培地に培地を交換した。トランスフェクションの７２時間後、上清を回収し、該上清を０．２２μｍフィルターに通した後、３００ｇで５分間遠心分離した。上清を回収し、該上清を２，０００ｇ、２０分間、遠心分離した。上清を回収し、該上清を１０，０００ｇ、３０分間、遠心分離した。上清を回収し、該上清を１００，０００ｇで２時間遠心分離した後、上清を取り除き、ペレットをＰＢＳで洗浄した。ペレットにＰＢＳを加え、１００，０００ｇで２時間、遠心分離した後、上清を取り除き、ペレットを１００μＬのＰＢＳで懸濁したものを、参考例５の細胞外小胞として用いた。細胞外小胞の濃度は、ＢＣＡタンパクアッセイキット（Thermo Fisher Scientific社製）を用い、製造業者の指示にしたがって測定した。

試験例１－１：細胞外小胞の膜に含まれる融合タンパク質のフローサイトメトリー解析
　実施例２の抗原提示細胞外小胞を、ＰＳＣａｐｔｕｒｅ（商標）エクソソームフローサイトメトリーキット（富士フイルム和光純薬株式会社製）によって、製造業者の指示にしたがって免疫染色を行った。染色に使用した抗体は以下のとおりである（染色時間：１５分、温度：４℃）。染色後、各融合タンパク質の発現を、フローサイトメーターＦＡＣＳＣａｎｔｏＩＩ（ＢＤバイオサイエンシス社製）で検出した。
　・ＡＰＣコンジュゲート抗マウスＨ－２ＫｂＯＶＡ複合体抗体（２５－Ｄ１．１６ Biolegend社製）
　・ＰＥコンジュゲート抗マウスＣＤ８０抗体（１６－１０Ａ１ Biolegend社製）
　・ＢｒｉｌｌｉａｎｔＶｉｏｌｅｔ４２１コンジュゲート抗マウスＩＬ－２抗体（ＪＥＳ６－５Ｈ４ Biolegend社製）
　結果を図３Ａに示す。

［結果］
　試験例１－１の結果より、実施例２の抗原提示細胞外小胞は、その膜に、ＯＶＡ抗原を提示するＭＨＣクラスＩ分子、ＣＤ８０、及びＩＬ－２を含むことが分かる（図３Ａ）。

試験例１－２：細胞外小胞の膜に含まれる融合タンパク質のフローサイトメトリー解析
　実施例３の抗原提示細胞外小胞を、ＰＳＣａｐｔｕｒｅ（商標）エクソソームフローサイトメトリーキット（富士フイルム和光純薬株式会社製）によって、製造業者の指示にしたがって免疫染色を行った。染色に使用した抗体は以下のとおりである。染色後、各融合タンパク質の発現を、フローサイトメーターＦＡＣＳＣａｎｔｏＩＩ（ＢＤバイオサイエンシス社製）で検出した。
　・ＡＰＣコンジュゲート抗マウスＩＬ－２抗体（ＪＥＳ６－５Ｈ４ Biolegend社製）
　・ＰＥコンジュゲート抗マウスＣＤ８０抗体（１６－１０Ａ１ Biolegend社製）
　・ＡＰＣ―Ｃｙ７コンジュゲート抗マウスＩ－Ａ／Ｉ－Ｅ抗体（Ｍ５／１１４．１５．２ Biolegend社製）
　結果を図３Ｂに示す。

［結果］
　試験例１－２の結果より、実施例３の抗原提示細胞外小胞は、その膜に、ＯＶＡ抗原を提示するＭＨＣクラスＩＩ分子、ＣＤ８０、及びＩＬ－２を含むことが分かる（図３Ｂ）。

試験例１－３：細胞外小胞の膜に含まれる融合タンパク質のフローサイトメトリー解析
　実施例４の抗原提示細胞外小胞を、ＰＳＣａｐｔｕｒｅ（商標）エクソソームフローサイトメトリーキット（富士フイルム和光純薬株式会社製）によって、製造業者の指示にしたがって免疫染色を行った。染色に使用した抗体は以下のとおりである。染色後、各融合タンパク質の発現を、フローサイトメーターＦＡＣＳＣａｎｔｏＩＩ（ＢＤバイオサイエンシス社製）で検出した。
　・ＡＰＣコンジュゲート抗マウスＩＬ－２抗体（ＪＥＳ６－５Ｈ４ Biolegend社製）
　・ＰＥコンジュゲート抗マウスＣＤ８０抗体（１６－１０Ａ１ Biolegend社製）
　・ＡＰＣ―Ｃｙ７コンジュゲート抗マウスＩ－Ａ／Ｉ－Ｅ抗体（Ｍ５／１１４．１５．２ Biolegend社製）
　・ＡＰＣコンジュゲート抗マウスＬＡＰ（ＴＧＦ－β１）抗体（ＴＷ７－１６Ｂ４ Biolegend社製）
　結果を図３Ｃに示す。

［結果］
　試験例１－３の結果より、実施例４の抗原提示細胞外小胞は、その膜に、ＯＶＡ抗原を提示するＭＨＣクラスＩＩ分子、ＣＤ８０、ＩＬ－２、及びＴＧＦ－β１を含むことが分かる（図３Ｃ）。

試験例１－４：細胞外小胞の膜に含まれる融合タンパク質のフローサイトメトリー解析
　実施例５の抗原提示細胞外小胞を、ＰＳＣａｐｔｕｒｅ（商標）エクソソームフローサイトメトリーキット（富士フイルム和光純薬株式会社製）によって、製造業者の指示にしたがって免疫染色を行った。染色に使用した抗体は以下のとおりである。染色後、各融合タンパク質の発現を、フローサイトメーターＦＡＣＳＣａｎｔｏＩＩ（ＢＤバイオサイエンシス社製）で検出した。
　・ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８コンジュゲート抗マウスＩＬ－４抗体（１１Ｂ１１ Biolegend社製）
　・ＰＥコンジュゲート抗マウスＣＤ８０抗体（１６－１０Ａ１ Biolegend社製）
　・ＡＰＣ―Ｃｙ７コンジュゲート抗マウスＩ－Ａ／Ｉ－Ｅ抗体（Ｍ５／１１４．１５．２ Biolegend社製）
　結果を図３Ｄに示す。

［結果］
　試験例１－４の結果より、実施例５の抗原提示細胞外小胞は、その膜に、ＯＶＡ抗原を提示するＭＨＣクラスＩＩ分子、ＣＤ８０、及びＩＬ－４を含むことが分かる（図３Ｄ）。

試験例２：ｉｎｖｉｔｒｏにおける、抗原提示細胞外小胞によるＯＶＡ特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞（ＯＴ－１Ｔ細胞）の活性化実験
　抗原提示細胞外小胞が抗原特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞を活性化等するかどうかを調べるために、ｉｎｖｉｔｒｏにおいて以下の試験を実施した。
　ＯＶＡ反応性ＴＣＲトランスジェニックマウスであるＯＴ－１マウスから摘出したリンパ節を１００μｍフィルター上で破砕し、リンパ節細胞懸濁液を得た。細胞懸濁液を、細胞増殖アッセイ試薬であるＣｅｌｌＴｒａｃｅＶｉｏｌｅｔ（Thermo Fisher Scientific社製）を用いて、製造業者の指示にしたがって染色した。染色したリンパ節細胞２×１０^５個を、１０％ウシ胎児血清、５０μＭ２－メルカプトエタノール及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたＲＰＭＩ１６４０培地２００μＬに懸濁し、実施例１又は２の抗原提示細胞外小胞（最終濃度３μｇ／ｍＬ）、或いは参考例２～４の３種類の細胞外小胞の混合物（３種類の細胞外小胞の各々の最終濃度３μｇ／ｍＬ）又は参考例１、２又は５の細胞外小胞（最終濃度３μｇ／ｍＬ）を加え、９６穴丸底プレートで３日間培養した後、免疫染色を行った。染色に使用した抗体は以下のとおりである（染色時間：１５分、温度：４℃）。染色後、ＯＴ－１Ｔ細胞における細胞増殖アッセイ試薬であるＣｅｌｌＴｒａｃｅＶｉｏｌｅｔの発光強度をフローサイトメーターＦＡＣＳＣａｎｔｏＩＩ（ＢＤバイオサイエンシス社製）で検出した。
　・ＡＰＣコンジュゲート抗マウスＣＤ８抗体（５３－６．７ Biolegend社製）
　・ＰＥコンジュゲート抗マウスＴＣＲＶｂ５．１，５．２抗体（ＭＲ９－４ Biolegend社製）
　結果を図４に示す。

［結果］
　試験例２の結果より、実施例１，２の抗原提示細胞外小胞は、参考例２～４の３種の細胞外小胞の混合物、又は参考例１，２，５の細胞外小胞と比較して、抗原特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞を顕著に分化及び／又は増殖させた（図４）。

試験例３：ｉｎｖｉｖｏにおける、抗原提示細胞外小胞によるＯＶＡ特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞（ＯＴ－１Ｔ細胞）の活性化実験
　抗原提示細胞外小胞が抗原特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞を活性化等するかどうかを調べるために、ｉｎｖｉｖｏにおいて以下の試験を実施した。
　ＯＶＡ反応性ＴＣＲトランスジェニックマウスであるＯＴ－１マウスからリンパ節を摘出し、試験例２と同様にリンパ球懸濁液を調製した。ＣＤ４５．１コンジェニックマウスからも同様にリンパ節を摘出し、リンパ球懸濁液を調製した。それぞれのリンパ球懸濁液を１：１の割合で混合し、細胞増殖アッセイ試薬であるＣｅｌｌＴｒａｃｅＶｉｏｌｅｔを用いて染色した。ＰＢＳに懸濁した１×１０^７個のＣｅｌｌＴｒａｃｅＶｉｏｌｅｔ染色した混合リンパ球懸濁液を、ＣＤ４５．１／ＣＤ４５．２コンジェニックマウスの尾静脈から移入した。翌日、実施例２の抗原提示細胞外小胞若しくは参考例１の細胞外小胞５０μｇ、又は１．５μｇのＩＬ－２（Biolegend社製）と５０μｇの抗マウスＩＬ－２抗体（Ｓ４Ｂ６－１ Bio X Cell社製）との混合物（ＩＬ－２／抗ＩＬ－２抗体複合体）をＣＤ４５．１／ＣＤ４５．２コンジェニックマウスに尾静脈から移入した。細胞移入４日後、レシピエントマウスからリンパ節を摘出し、リンパ球懸濁液を調製し、免疫染色を行った。染色に使用した抗体は以下のとおりである（染色時間：１５分、温度：４℃）。染色後、移入したＯＴ－１Ｔ細胞及び野生型ＣＤ８Ｔ細胞における細胞増殖アッセイ試薬であるＣｅｌｌＴｒａｃｅＶｉｏｌｅｔの発光強度をフローサイトメーターＦＡＣＳＣａｎｔｏＩＩ（ＢＤバイオサイエンシス社製）で検出した。
　・ＰＥ－Ｃｙ７コンジュゲート抗マウスＣＤ８抗体（５３－６．７ Biolegend社製）
　・ＰＥコンジュゲート抗マウスＴＣＲＶｂ５．１，５．２抗体（ＭＲ９－４ Biolegend社製）
　・ＦＩＴＣコンジュゲート抗マウスＣＤ４５．１抗体（Ａ２０ Biolegend社製）
　・ＡＰＣコンジュゲート抗マウスＣＤ４５．２抗体（１０４ Biolegend社製）
　結果を図５に示す。

［結果］
　試験例３の結果より、実施例２の抗原提示細胞外小胞は、参考例１の細胞外小胞と比較して、ｉｎｖｉｖｏにおいて、他のＣＤ８陽性Ｔ細胞（抗原非特異的なＣＤ８陽性Ｔ細胞）をほとんど活性化等することなく、抗原特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞を顕著に分化及び／又は増殖させたことが分かる（図５）。また、実施例２の抗原提示細胞外小胞は、ＩＬ－２／抗ＩＬ－２抗体複合体と比較して、他のＣＤ８陽性Ｔ細胞（抗原非特異的なＣＤ８陽性Ｔ細胞）をほとんど活性化させなかったことから、サイトカインストーム等の重篤な副作用が低い可能性が考えられる（図５）。

試験例４：ｉｎｖｉｔｒｏにおける、抗原提示細胞外小胞によるＯＶＡ特異的ＣＤ４陽性Ｔ細胞（ＯＴ－２Ｔ細胞）の活性化実験
　抗原提示細胞外小胞が抗原特異的ＣＤ４陽性Ｔ細胞を活性化等するかどうかを調べるために、ｉｎｖｉｔｒｏにおいて以下の試験を実施した。
　ＯＶＡ反応性ＣＤ４ＴＣＲトランスジェニックマウスであるＯＴ－２マウスから摘出したリンパ節を１００μｍフィルター上で破砕し、リンパ節細胞懸濁液を得た。細胞懸濁液を、細胞増殖アッセイ試薬であるＣｅｌｌＴｒａｃｅＶｉｏｌｅｔ（Thermo Fisher Scientific社製）を用いて、製造業者の指示にしたがって染色した。染色したリンパ節細胞２×１０^５個を、１０％ウシ胎児血清、５０μＭ２－メルカプトエタノール及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたＲＰＭＩ１６４０培地２００μＬに懸濁し、最終濃度が１０μｇ／ｍＬになるように実施例３の抗原提示細胞外小胞又は参考例１の細胞外小胞を加え、９６穴丸底プレートで４日間培養した。４日後、細胞を回収し、免疫染色を行った。染色に使用した抗体は以下のとおりである（染色時間：１５分、温度：４℃）。染色後、ＯＴ－２Ｔ細胞における細胞増殖アッセイ試薬であるＣｅｌｌＴｒａｃｅＶｉｏｌｅｔの発光強度をフローサイトメーターＦＡＣＳＣａｎｔｏＩＩ（ＢＤバイオサイエンシス社製）で検出した。
　・ＰＥ－Ｃｙ７コンジュゲート抗マウスＣＤ４抗体（ＲＭ４－５ Biolegend社製）
　・ＡＰＣコンジュゲート抗マウスＴＣＲＶｂ５．１，５．２抗体（ＭＲ９－４ Biolegend社製）
　結果を図６に示す。

［結果］
　試験例４の結果より、実施例３の抗原提示細胞外小胞は、参考例１の細胞外小胞と比較して、抗原特異的ＣＤ４Ｔ細胞を顕著に分化及び／又は増殖させた（図６）。

試験例５：ｉｎｖｉｔｒｏにおける、抗原提示細胞外小胞によるＯＶＡ特異的ＣＤ４陽性Ｔ細胞（ＯＴ－２Ｔ細胞）の制御性Ｔ細胞への分化誘導実験
　抗原提示細胞外小胞が抗原特異的ＣＤ４陽性Ｔ細胞を制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）へと誘導するかどうかを調べるために、ｉｎｖｉｔｒｏにおいて以下の試験を実施した。
　ＯＶＡ反応性ＣＤ４ＴＣＲトランスジェニックマウスであるＯＴ－２マウスから摘出したリンパ節を１００μｍフィルター上で破砕し、リンパ節細胞懸濁液を得た。細胞懸濁液を、細胞増殖アッセイ試薬であるＣｅｌｌＴｒａｃｅＶｉｏｌｅｔ（Thermo Fisher Scientific社製）を用いて、製造業者の指示にしたがって染色した。染色したリンパ節細胞２×１０^５個を、１０％ウシ胎児血清、５０μＭ２－メルカプトエタノール及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたＲＰＭＩ１６４０培地２００μＬに懸濁し、最終濃度が１０μｇ／ｍＬになるように実施例４の抗原提示細胞外小胞又は参考例１の細胞外小胞を加え、９６穴丸底プレートで４日間培養した。４日後、細胞を回収し、細胞外免疫染色を行った。染色使用した抗体は以下のとおりである（染色時間：１５分、温度：４℃）。細胞外染色後、Ｔｒｕｅ－ＮｕｃｌｅａｒＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＦａｃｔｏｒＢｕｆｆｅｒＳｅｔ（Biolegend社製）及び抗マウスＦＯＸＰ３抗体を用いて、製造業者の指示にしたがって細胞内免疫染色を行った。細胞内染色後、ＯＴ－２Ｔ細胞上の制御性Ｔ細胞のマーカーであるＣＤ２５分子とＦＯＸＰ３分子の発現をフローサイトメーターＦＡＣＳＣａｎｔｏＩＩ（ＢＤバイオサイエンシス社製）で検出した。
　・ＰＥコンジュゲート抗マウスＣＤ２５抗体（ＰＣ６１ Biolegend社製）
　・ＰＥ－Ｃｙ７コンジュゲート抗マウスＣＤ４抗体（ＲＭ４－５ Biolegend社製）
　・ＡＰＣコンジュゲート抗マウスＴＣＲＶｂ５．１，５．２抗体（ＭＲ９－４ Biolegend社製）
　・ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８コンジュゲート抗マウスＦＯＸＰ３抗体（ＭＦ－１４ Biolegend社製）
　結果を図７に示す。

［結果］
　試験例５の結果より、実施例４の抗原提示細胞外小胞は、参考例１の細胞外小胞と比較して、抗原特異的ＣＤ４陽性Ｔ細胞を制御性Ｔ細胞（好ましくは、Ｆｏｘｐ３を発現している制御性Ｔ細胞）へと分化誘導させたことが分かる（図７）。

試験例６：ｉｎｖｉｔｒｏにおける、抗原提示細胞外小胞によるＯＶＡ特異的ＣＤ４陽性Ｔ細胞（ＯＴ－２Ｔ細胞）のＴｈ２Ｔ細胞への分化誘導実験
　抗原提示細胞外小胞が抗原特異的ＣＤ４陽性Ｔ細胞をＴｈ２Ｔ細胞へと分化誘導するかどうかを調べるために、ｉｎｖｉｔｒｏにおいて以下の試験を実施した。
　ＯＶＡ反応性ＣＤ４ＴＣＲトランスジェニックマウスであるＯＴ－２マウスから摘出したリンパ節を１００μｍフィルター上で破砕し、リンパ節細胞懸濁液を得た。細胞懸濁液を、細胞増殖アッセイ試薬であるＣｅｌｌＴｒａｃｅＶｉｏｌｅｔ（Thermo Fisher Scientific社製）を用いて、製造業者の指示にしたがって染色した。染色したリンパ節細胞２×１０^５個を、１０％ウシ胎児血清、５０μＭ２－メルカプトエタノール及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたＲＰＭＩ１６４０培地２００μＬに懸濁し、最終濃度が１０μｇ／ｍＬになるように実施例３若しくは５の抗原提示細胞外小胞又は参考例１の細胞外小胞を加え、９６穴丸底プレートで４日間培養した。４日後、細胞を回収し、細胞外免疫染色を行った。染色使用した抗体は以下のとおりである（染色時間：１５分、温度：４℃）。細胞外染色後、Ｔｒｕｅ－ＮｕｃｌｅａｒＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＦａｃｔｏｒＢｕｆｆｅｒＳｅｔ（Biolegend社製）及び抗ＧＡＴＡ３抗体を用いて、製造業者の指示にしたがって細胞内免疫染色を行った。細胞内染色後、ＯＴ－２Ｔ細胞の細胞増殖アッセイ試薬であるＣｅｌｌＴｒａｃｅＶｉｏｌｅｔの発光強度とＴｈ２Ｔ細胞のマーカーであるＧＡＴＡ３の発現をフローサイトメーターＦＡＣＳＣａｎｔｏＩＩ（ＢＤバイオサイエンシス社製）で検出した。
　・ＰＥコンジュゲート抗マウスＴＣＲＶｂ５．１，５．２抗体（ＭＲ９－４ Biolegend社製）
　・ＰＥ－Ｃｙ７コンジュゲート抗マウスＣＤ４抗体（ＲＭ４－５ Biolegend社製）
　・ＡＰＣコンジュゲート抗ＧＡＴＡ３抗体（１６Ｅ１０Ａ２３ Biolegend社製）
　結果を図８に示す。

［結果］
　試験例６の結果より、実施例３，５の抗原提示細胞外小胞は、参考例１の細胞外小胞と比較して、ｉｎｖｉｔｒｏにおいて、抗原特異的ＣＤ４陽性Ｔ細胞をＴｈ２細胞へと分化誘導させたことが分かる（図８）。Ｔｈ２細胞は、ＩＬ－４やＩＬ－５などのサイトカインを分泌し、同じ抗原を認識するナイーブＢ細胞を分化活性化させ、抗原特異的ＩｇＥ産生誘導（すなわち液性免疫の活性化）を促す。

［実施例６］ＭＨＣクラスＩＩ分子、Ｔ細胞共刺激分子、及びＴ細胞刺激性サイトカインを膜に含む抗原提示細胞外小胞４
　ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を細胞培養ディッシュに播種し、２％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたダルベッコ改変イーグル培地で培養した。約５０％コンフルエンスの細胞に、製造業者の指示にしたがって、上記で調製したプラスミド（ｓｃ－Ｄｉｍｅｒ－ＣＤ８１―IL―１２ｐ４０、ＭＨＣクラスＩＩα鎖、ＣＤ８０－ＣＤ９、及びIL―１２ｐ３５をそれぞれコードするｐＣＡＧベクター）をＰｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｉｍｉｎｅ“Ｍａｘ”（Polysciences社製）を用いて、４つ同時にトランスフェクトした。トランスフェクションの３－１２時間後に培地を交換し、トランスフェクションの２４時間後にエクソソームを除去した２％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたダルベッコ改変イーグル培地に培地を交換した。トランスフェクションの７２時間後、上清を回収し、該上清を０．２２μｍフィルターに通した後、３００ｇで５分間遠心分離した。上清を回収し、該上清を２，０００ｇ、２０分間、遠心分離した。上清を回収し、該上清を１０，０００ｇ、３０分間、遠心分離した。上清を回収し、該上清を１００，０００ｇで２時間遠心分離した後、上清を取り除き、ペレットをＰＢＳで洗浄した。ペレットにＰＢＳを加え、１００，０００ｇで２時間、遠心分離した後、上清を取り除き、ペレットを１００μＬのＰＢＳで懸濁したものを、実施例６の抗原提示細胞外小胞として用いた。抗原提示細胞外小胞の濃度は、ＢＣＡタンパクアッセイキット（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用い、製造業者の指示にしたがって測定した。

試験例１－５：細胞外小胞の膜に含まれる融合タンパク質のフローサイトメトリー解析
　実施例６の抗原提示細胞外小胞を、ＰＳ　Ｃａｐｔｕｒｅ（商標）　エクソソームフローサイトメトリーキット（富士フイルム和光純薬株式会社製）によって、製造業者の指示にしたがって免疫染色を行った。染色に使用した抗体は以下のとおりである。染色後、各融合タンパク質の発現を、フローサイトメーターＦＡＣＳＣａｎｔｏＩＩ（ＢＤバイオサイエンシス社製）で検出した。
　・Ａｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ　４８８コンジュゲート抗マウスＩ－Ａ／Ｉ－Ｅ抗体（Ｍ５／１１４．１５．２　Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社製）
　・ＰＥコンジュゲート抗マウスＩＬ－１２抗体（Ｃ１５．６　Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社製）
　・ＡＰＣコンジュゲート抗マウスＣＤ８０抗体（１６－１０Ａ１　Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社製）　結果を図３Ｅに示す。

［結果］
　試験例１－５の結果より、実施例６の抗原提示細胞外小胞は、その膜に、ＯＶＡ抗原を提示するＭＨＣクラスＩＩ分子、ＣＤ８０、及び機能的なＩＬ－１２を含むことが分かる（図３Ｅ）

［実施例7］ＭＨＣクラスＩＩ分子、Ｔ細胞共刺激分子、及びＴ細胞刺激性サイトカインを膜に含む抗原提示細胞外小胞５
　ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を細胞培養ディッシュに播種し、２％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたダルベッコ改変イーグル培地で培養した。約５０％コンフルエンスの細胞に、製造業者の指示にしたがって、上記で調製したプラスミド（ｓｃ－Ｄｉｍｅｒ－ＣＤ８１、ＭＨＣクラスＩＩα鎖、ＣＤ８０－ＣＤ９、ＣＤ８１―IL―６及びＴＧＦ－β－ＭＦＧＥ８をそれぞれコードするｐＣＡＧベクター）をＰｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｉｍｉｎｅ“Ｍａｘ”（Polysciences社製）を用いて、５つ同時にトランスフェクトした。トランスフェクションの３-12時間後に培地を交換し、トランスフェクションの２４時間後にエクソソームを除去した２％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたダルベッコ改変イーグル培地に培地を交換した。トランスフェクションの７２時間後、上清を回収し、該上清を０．２２μｍフィルターに通した後、３００ｇで５分間遠心分離した。上清を回収し、該上清を２，０００ｇ、２０分間、遠心分離した。上清を回収し、該上清を１０，０００ｇ、３０分間、遠心分離した。上清を回収し、該上清を１００，０００ｇで２時間遠心分離した後、上清を取り除き、ペレットをＰＢＳで洗浄した。ペレットにＰＢＳを加え、１００，０００ｇで２時間、遠心分離した後、上清を取り除き、ペレットを１００μＬのＰＢＳで懸濁したものを、実施例７の抗原提示細胞外小胞として用いた。抗原提示細胞外小胞の濃度は、ＢＣＡタンパクアッセイキット（Thermo Fisher Scientific社製）を用い、製造業者の指示にしたがって測定した。

試験例１－６：細胞外小胞の膜に含まれる融合タンパク質のフローサイトメトリー解析
　実施例７の抗原提示細胞外小胞を、ＰＳ　Ｃａｐｔｕｒｅ（商標）　エクソソームフローサイトメトリーキット（富士フイルム和光純薬株式会社製）によって、製造業者の指示にしたがって免疫染色を行った。染色に使用した抗体は以下のとおりである。染色後、各融合タンパク質の発現を、フローサイトメーターＦＡＣＳＣａｎｔｏＩＩ（ＢＤバイオサイエンシス社製）で検出した。
　・ＦＩＴＣコンジュゲート抗マウスＣＤ８０抗体（１６－１０Ａ１　Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社製）
　・ＰＥコンジュゲート抗マウスＩＬ－６抗体（ＭＰ５－２０Ｆ３　Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社製）
　・ＡＰＣ―Ｃｙ７コンジュゲート抗マウスＩ－Ａ／Ｉ－Ｅ抗体（Ｍ５／１１４．１５．２　Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社製）
　・ＡＰＣコンジュゲート抗マウスＬＡＰ（ＴＧＦ－β１）抗体（ＴＷ７－１６Ｂ４　Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社製）
　結果を図３Ｆに示す。

［結果］
　試験例１－６の結果より、実施例７の抗原提示細胞外小胞は、その膜に、ＯＶＡ抗原を提示するＭＨＣクラスＩＩ分子、ＣＤ８０、ＩＬ－６、及びＴＧＦｂを含むことが分かる（図３Ｆ）

［実施例８］ＭＨＣクラスＩ分子、Ｔ細胞共刺激分子、及びＴ細胞刺激性サイトカインを安定に発現する細胞株の樹立と抗原提示細胞外小胞の調製
　ＰＬＡＴ―Ａ細胞を細胞培養ディッシュに播種し、２％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたダルベッコ改変イーグル培地で培養した。約５０％コンフルエンスの細胞に、製造業者の指示にしたがって、ＣＤ８０－ＣＤ９またはｓｃ－Ｔｒｉｍｅｒ－ＣＤ８１―ＩＬ―２をコードするｐＭＸベクターをＰｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｉｍｉｎｅ“Ｍａｘ”（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ社製）を用いてそれぞれトランスフェクトした。トランスフェクションの１２時間後に培地を交換し、トランスフェクションの６０時間後、上清を回収し、３００ｇで５分間遠心分離した。回収した上清をウイルス粒子として用いた。　ＨＥＫ２９３細胞を細胞培養ディッシュに播種し、２％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたダルベッコ改変イーグル培地で培養した。約５０％コンフルエンスの細胞に、上記で調整したＣＤ８０－ＣＤ９を組み込んだウイルス粒子にＤＯＴＡＰトランスフェクション試薬（Ｒｏｃｈｅ）を製造業者の指示にしたがって加え、ＨＥＫ２９３細胞に添加した。ウイルス粒子を加えた細胞は２５００ｒｐｍで３時間、遠心感染を行った。感染２４時間後、培地を交換し１週間後、ＣＤ８０陽性細胞をＦＡＣＳＭｅｌｏｄｙ（ＢＤバイオサイエンシス社製）でソーティングした。ソーティングしたＣＤ８０陽性細胞を１週間培養した後、ディッシュに播種し、２％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたダルベッコ改変イーグル培地で培養した。約５０％コンフルエンスの細胞に上記で調製したｓｃ－Ｔｒｉｍｅｒ－ＣＤ８１―ＩＬ―２を組み込んだウイルス粒子にＤＯＴＡＰトランスフェクション試薬を製造業者の指示にしたがって加え、ＣＤ８０陽性ＨＥＫ２９３細胞に添加した。ウイルス粒子を加えた細胞は２５００ｒｐｍで３時間、遠心感染を行った。感染２４時間後、培地を交換し１週間後、ＣＤ８０陽性、ＭＨＣＩ陽性細胞をＦＡＣＳＭｅｌｏｄｙ（ＢＤバイオサイエンシス社製）でソーティングした。ソーティングした細胞を安定発現細胞として用いた。安定発現細胞をディッシュに播種し、２％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたダルベッコ改変イーグル培地で培養した。約５０％コンフルエンスの細胞の上清をエクソソームを除去した２％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたダルベッコ改変イーグル培地に培地を交換した。培地交換７２時間後、上清を回収し、該上清を０．２２μｍフィルターに通した後、３００ｇで５分間遠心分離した。上清を回収し、該上清を２，０００ｇ、２０分間、遠心分離した。上清を回収し、該上清を１０，０００ｇ、３０分間、遠心分離した。上清を回収し、該上清を１００，０００ｇで２時間遠心分離した後、上清を取り除き、ペレットをＰＢＳで洗浄した。ペレットにＰＢＳを加え、１００，０００ｇで２時間、遠心分離した後、上清を取り除き、ペレットを１００μＬのＰＢＳで懸濁したものを、実施例８の抗原提示細胞外小胞として用いた。

試験例１－７：細胞外小胞の膜に含まれる融合タンパク質のフローサイトメトリー解析
　実施例８の抗原提示細胞外小胞を、ＰＳ　Ｃａｐｔｕｒｅ（商標）　エクソソームフローサイトメトリーキット（富士フイルム和光純薬株式会社製）によって、製造業者の指示にしたがって免疫染色を行った。染色に使用した抗体は以下のとおりである（染色時間：１５分、温度：４℃）。染色後、各融合タンパク質の発現を、フローサイトメーターＦＡＣＳＣａｎｔｏＩＩ（ＢＤバイオサイエンシス社製）で検出した。
　・ＰＥコンジュゲート抗マウスＨ－２ＫｂＯＶＡ複合体抗体（２５－Ｄ１．１６　Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社製）
　・ＦＩＴＣコンジュゲート抗マウスＣＤ８０抗体（１６－１０Ａ１　Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社製）
　・ＡＰＣコンジュゲート抗マウスＩＬ－２抗体（ＪＥＳ６－５Ｈ４　Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社製）
　結果を図３Ｇに示す。

［結果］
　試験例１－７の結果より、実施例８の抗原提示細胞外小胞は、その膜に、ＯＶＡ抗原を提示するＭＨＣクラスＩ分子、ＣＤ８０、及びＩＬ－２を含むことが分かる（図３Ｇ）。

［実施例９］HLAクラスＩ分子、ヒトＴ細胞共刺激分子、及びヒトＴ細胞刺激性サイトカインを膜に含む抗原提示細胞外小胞
　B2mを欠損させたＨＥＫ２９３Ｔ細胞を細胞培養ディッシュに播種し、２％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたダルベッコ改変イーグル培地で培養した。約５０％コンフルエンスの細胞に、製造業者の指示にしたがって、上記で調製したプラスミド（ＨＬＡｓｃ－Ｔｒｉｍｅｒ－ヒトＣＤ８１、ヒトＣＤ８０－ヒトＣＤ９およびヒトＣＤ６３－ＩＬ２をそれぞれコードするｐＣＡＧベクター）をＰｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｉｍｉｎｅ“Ｍａｘ”（Polysciences社製）を用いて、２つ同時にトランスフェクトした。トランスフェクションの３-12時間後に培地を交換し、トランスフェクションの２４時間後にエクソソームを除去した２％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたダルベッコ改変イーグル培地に培地を交換した。トランスフェクションの７２時間後、上清を回収し、該上清を０．２２μｍフィルターに通した後、３００ｇで５分間遠心分離した。上清を回収し、該上清を２，０００ｇ、２０分間、遠心分離した。上清を回収し、該上清を１０，０００ｇ、３０分間、遠心分離した。上清を回収し、該上清を１００，０００ｇで２時間遠心分離した後、上清を取り除き、ペレットをＰＢＳで洗浄した。ペレットにＰＢＳを加え、１００，０００ｇで２時間、遠心分離した後、上清を取り除き、ペレットを１００μＬのＰＢＳで懸濁したものを、実施例９のヒト化抗原提示細胞外小胞として用いた。抗原提示細胞外小胞の濃度は、ＢＣＡタンパクアッセイキット（Thermo Fisher Scientific社製）を用い、製造業者の指示にしたがって測定した。
　ｈｓｃ―Ｔｒｉｍｅｒ―ｈＣＤ８１の代わりにＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ｓｃ－Ｔｒｉｍｅｒ－ｈＣＤ８１を用いることにより、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ペプチドを抗原として提示する抗原提示ＭＨＣ分子と、ｈＣＤ８０、及びｈＩＬ－２をその表面に提示するヒト化抗原提示細胞外小胞を作製することができる。

試験例１－８：細胞外小胞の膜に含まれる融合タンパク質のフローサイトメトリー解析
　実施例９の抗原提示細胞外小胞を、ＰＳ　Ｃａｐｔｕｒｅ（商標）　エクソソームフローサイトメトリーキット（富士フイルム和光純薬株式会社製）によって、製造業者の指示にしたがって免疫染色を行った。染色に使用した抗体は以下のとおりである（染色時間：１５分、温度：４℃）。染色後、各融合タンパク質の発現を、フローサイトメーターＦＡＣＳＣａｎｔｏＩＩ（ＢＤバイオサイエンシス社製）で検出した。
　・ＡＰＣコンジュゲート抗ヒトＩＬ－２抗体（ＭＱ１－１７Ｈ１２　Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社製）
　・ＰＥコンジュゲート抗ヒトＣＤ８０抗体（２Ｄ１０　Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社製）
　・ＡＰＣコンジュゲート抗ヒトβ２ｍ抗体（２Ｍ２　Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社製）
　結果を図３Ｈに示す。

［結果］
　試験例１－８の結果より、実施例９の抗原提示細胞外小胞は、その膜に、ＷＴ１抗原を提示するＭＨＣクラスＩ分子、ｈＣＤ８０、及びｈＩＬ－２を含むことが分かる（図３Ｈ）。

試験例７：ｉｎｖｉｔｒｏにおける、抗原提示細胞外小胞によるＯＶＡ特異的ＣＤ４陽性Ｔ細胞（ＯＴ－２Ｔ細胞）のＴｈ１Ｔ細胞への分化誘導実験
　抗原提示細胞外小胞が抗原特異的ＣＤ４陽性Ｔ細胞をＴｈ１Ｔ細胞へと分化誘導するかどうかを調べるために、ｉｎｖｉｔｒｏにおいて以下の試験を実施した。
　ＯＶＡ反応性ＣＤ４ＴＣＲトランスジェニックマウスであるＯＴ－２マウスから摘出したリンパ節を１００μｍフィルター上で破砕し、リンパ節細胞懸濁液を得た。細胞懸濁液を、細胞増殖アッセイ試薬であるＣｅｌｌＴｒａｃｅＶｉｏｌｅｔ（Thermo Fisher Scientific社製）を用いて、製造業者の指示にしたがって染色した。染色したリンパ節細胞２×１０^５個を、１０％ウシ胎児血清、５０μＭ２－メルカプトエタノール及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたＲＰＭＩ１６４０培地２００μＬに懸濁し、最終濃度が１０μｇ／ｍＬになるように実施例３若しくは６の抗原提示細胞外小胞又は参考例１の細胞外小胞を加え、９６穴丸底プレートで４日間培養した。４日後、細胞を回収し、細胞外免疫染色を行った。染色使用した抗体は以下のとおりである（染色時間：１５分、温度：４℃）。細胞外染色後、Ｔｒｕｅ－ＮｕｃｌｅａｒＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＦａｃｔｏｒＢｕｆｆｅｒＳｅｔ（Biolegend社製）及び抗Ｔ－ｂｅｔ抗体を用いて、製造業者の指示にしたがって細胞内免疫染色を行った。細胞内染色後、ＯＴ－２Ｔ細胞の細胞増殖アッセイ試薬であるＣｅｌｌＴｒａｃｅＶｉｏｌｅｔの発光強度とＴｈ１Ｔ細胞のマーカーであるＴ－ｂｅｔの発現をフローサイトメーターＦＡＣＳＣａｎｔｏＩＩ（ＢＤバイオサイエンシス社製）で検出した。
　・ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５コンジュゲート抗マウスＴＣＲＶａ２抗体（Ｂ２０．１　Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社製）
　・ＡＰＣ－Ｃｙ７コンジュゲート抗マウスＣＤ４抗体（ＲＭ４－５　Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社製）
　・ＰＥコンジュゲート抗Ｔ－ｂｅｔ抗体（４Ｂ１０　Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社製）
　結果を図９に示す。

［結果］
　試験例７の結果より、実施例６の抗原提示細胞外小胞は、参考例１の細胞外小胞と比較して、ｉｎｖｉｔｒｏにおいて、抗原特異的ＣＤ４陽性Ｔ細胞をＴｈ１細胞へと分化誘導させた（図９）。Ｔｈ１細胞はＩＦＮ－γやＩＬ－２等を産生し、病原体細胞、ウイルスに感染した細胞、がん細胞等の破壊を行う、マクロファージや細胞傷害性Ｔ細胞の活性化を促す（すなわち細胞性免疫の活性化）。

試験例８：ｉｎｖｉｔｒｏにおける、抗原提示細胞外小胞によるＯＶＡ特異的ＣＤ４陽性Ｔ細胞（ＯＴ－２Ｔ細胞）のＴｈ１７Ｔ細胞への分化誘導実験
　抗原提示細胞外小胞が抗原特異的ＣＤ４陽性Ｔ細胞をＴｈ１７Ｔ細胞へと分化誘導するかどうかを調べるために、ｉｎｖｉｔｒｏにおいて以下の試験を実施した。
　ＯＶＡ反応性ＣＤ４ＴＣＲトランスジェニックマウスにＲＯＲｒｔ－ＧＦＰマウスを掛け合わせたマウスから摘出したリンパ節を１００μｍフィルター上で破砕し、リンパ節細胞懸濁液を得た。細胞懸濁液を、細胞増殖アッセイ試薬であるＣｅｌｌＴｒａｃｅＶｉｏｌｅｔ（Thermo Fisher Scientific社製）を用いて、製造業者の指示にしたがって染色した。染色したリンパ節細胞２×１０^５個を、１０％ウシ胎児血清、５０μＭ２－メルカプトエタノール及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたＲＰＭＩ１６４０培地２００μＬに懸濁し、最終濃度が１０μｇ／ｍＬになるように実施例７の抗原提示小胞若しくは参考例１の細胞外小胞を加え、９６穴丸底プレートで４日間培養した。４日後、細胞を回収し、細胞外免疫染色を行った。染色使用した抗体は以下のとおりである（染色時間：１５分、温度：４℃）。細胞内染色後、ＯＴ－２Ｔ細胞の細胞増殖アッセイ試薬であるＣｅｌｌＴｒａｃｅＶｉｏｌｅｔの発光強度とＴｈ１７Ｔ細胞のマーカーであるＲＯＲｒｔの発現をフローサイトメーターＦＡＣＳＣａｎｔｏＩＩ（ＢＤバイオサイエンシス社製）で検出した。
　・ＡＰＣコンジュゲート抗マウスＴＣＲＶａ２抗体（Ｂ２０．１　Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社製）
　・ＰＥ－Ｃｙ７コンジュゲート抗マウスＣＤ４抗体（ＲＭ４－５　Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社製）
　・ＰＥコンジュゲート抗マウスＴＣＲＶｂ５．１，５．２抗体（ＭＲ９－４ Biolegend社製）
結果を図１０に示す。

［結果］
　試験例８の結果より、実施例７の抗原提示細胞外小胞は、参考例１の細胞外小胞と比較して、ｉｎｖｉｔｒｏにおいて、抗原特異的ＣＤ４陽性Ｔ細胞をＴｈ１７細胞へと分化誘導させたことが分かる（図１０）。Ｔｈ１７細胞はＴｈ１やＴｈ２細胞とは異なり、炎症性サイトカインである、ＩＬ－１７、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、ＴＮＦ－αなどを産生して、炎症を誘導し、好中球や単球の動員、増殖を促し、真菌（カンジタ菌、黄色ブドウ球菌、溶連菌など病原性真菌を含む）の感染防御に寄与する。

試験例９：ｉｎｖｉｔｒｏにおける、安定細胞株から精製した抗原提示細胞外小胞によるＯＶＡ特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞（ＯＴ－１Ｔ細胞）の活性化実験
　安定細胞株から精製した抗原提示細胞外小胞が抗原特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞を活性化等するかどうかを調べるために、ｉｎｖｉｔｒｏにおいて以下の試験を実施した。
　ＯＶＡ反応性ＴＣＲトランスジェニックマウスであるＯＴ－１マウスから摘出したリンパ節を１００μｍフィルター上で破砕し、リンパ節細胞懸濁液を得た。細胞懸濁液を、細胞増殖アッセイ試薬であるＣｅｌｌＴｒａｃｅＶｉｏｌｅｔ（Thermo Fisher Scientific社製）を用いて、製造業者の指示にしたがって染色した。染色したリンパ節細胞２×１０^５個を、１０％ウシ胎児血清、５０μＭ２－メルカプトエタノール及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたＲＰＭＩ１６４０培地２００μＬに懸濁し、最終濃度が９μｇ／ｍＬになるように実施例１若しくは８の抗原提示細胞外小胞又は参考例１の細胞外小胞を加え、９６穴丸底プレートで４日間培養した。９６穴丸底プレートで３日間培養した後、免疫染色を行った。染色に使用した抗体は以下のとおりである（染色時間：１５分、温度：４℃）。染色後、ＯＴ－１Ｔ細胞における細胞増殖アッセイ試薬であるＣｅｌｌＴｒａｃｅＶｉｏｌｅｔの発光強度をフローサイトメーターＦＡＣＳＣａｎｔｏＩＩ（ＢＤバイオサイエンシス社製）で検出した。
　・ＡＰＣコンジュゲート抗マウスＣＤ８抗体（５３－６．７ Biolegend社製）
　・ＰＥコンジュゲート抗マウスＴＣＲＶｂ５．１，５．２抗体（ＭＲ９－４ Biolegend社製）
　結果を図１１に示す。

［結果］
　試験例９の結果より、実施例１と実施例８の抗原提示細胞外小胞は、参考例１の細胞外小胞と比較して、抗原特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞を顕著に増殖させた（図１１）。これは、ｓｃ－Ｔｒｉｍｅｒ－ＣＤ８１に例示される構成要件（Ａ）とＣＤ８１―ＩＬ―２に例示される構成要件（Ｂ）が別々のタンパク質として存在する細胞外小胞だけでなく、ｓｃ－Ｔｒｉｍｅｒ－ＣＤ８１―ＩＬ―２に例示される、両者の機能を具備した融合タンパク質が存在する細胞外小胞であっても同等の効果をＴ細胞に奏することを示す。

試験例１０：抗原提示細胞外小胞による抗腫瘍効果の評価実験
　安定細胞株から精製した抗原提示細胞外小胞が抗腫瘍効果を持つかどうかを調べるためにＣＤ４５．１／ＣＤ４５．２コンジェニックマウスにＯＶＡを発現するＢ１６メラノーマ細胞１×１０^５個を皮下に摂取し、３日後１×１０^５個のＯＴ－１Ｔ細胞を移入した。ＯＴ－１Ｔ細胞移入後、１日、４日、７日後に実施例８の抗原提示細胞外小胞若しくは参考例１の細胞外小胞　５０μｇをレシピエントマウスの尾静脈から移入し、Ｂ１６メラノーマ細胞の大きさを観察した。

［結果］
　試験例１０の結果より、実施例８の抗原提示細胞外小胞は、参考例１の細胞外小胞と比較して、Ｂ１６メラノーマ細胞の増殖を顕著に抑制した（図１２）。これは、ｓｃ－Ｔｒｉｍｅｒ－ＣＤ８１に例示される構成要件（Ａ）とＣＤ８１―ＩＬ―２に例示される構成要件（Ｂ）が別々のタンパク質として存在する細胞外小胞だけでなく、ｓｃ－Ｔｒｉｍｅｒ－ＣＤ８１―ＩＬ―２に例示される、両者の機能を具備した融合タンパク質が存在する細胞外小胞であっても同等の医薬効果を奏することを示す。

［実施例１０］ｓｃ－Ｔｒｉｍｅｒ－ＣＤ８１―IL―２融合タンパク質を膜に含む抗原提示細胞外小胞
　ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を細胞培養ディッシュに播種し、２％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたダルベッコ改変イーグル培地で培養する。約５０％コンフルエンスの細胞に、製造業者の指示にしたがって、上記で調製したプラスミド（ｓｃ－Ｔｒｉｍｅｒ－ＣＤ８１―IL―２を発現する発現ベクターをＰｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｉｍｉｎｅ“Ｍａｘ”（Polysciences社製）を用いてトランスフェクションする。トランスフェクション後の細胞から上記の手法により、抗原提示細胞外小胞を調製する。

参考例６ＣＤ６３－ＡｋａＬｕｃ融合タンパク質膜に含む抗原提示細胞外小胞
　ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を細胞培養ディッシュに播種し、２％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを加えたダルベッコ改変イーグル培地で培養する。約５０％コンフルエンスの細胞に、製造業者の指示にしたがって、上記で調製したプラスミド（ＣＤ６３－ＡｋａＬｕｃを発現する発現ベクターをＰｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｉｍｉｎｅ“Ｍａｘ”（Polysciences社製）を用いてトランスフェクションする。トランスフェクション後の細胞から上記の手法により、抗原提示細胞外小胞を調製する。

試験例１１：ｉｎｖｉｖｏにおける、ｓｃ－Ｔｒｉｍｅｒ－ＣＤ８１―ＩＬ―２融合タンパク質を膜に含む抗原提示細胞外小胞によるＯＶＡ特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞（ＯＴ－１Ｔ細胞）の活性化実験
　ＯＶＡ反応性ＴＣＲトランスジェニックマウスであるＯＴ－１マウスからリンパ節を摘出し、１００μｍフィルター上で破砕し、リンパ節細胞懸濁液を得る。ＣＤ４５．１コンジェニックマウスからも同様にリンパ節を摘出し、リンパ球懸濁液を調製した。それぞれのリンパ球懸濁液を１：１の割合で混合し、細胞増殖アッセイ試薬であるＣｅｌｌＴｒａｃｅＶｉｏｌｅｔを用いて染色する。ＰＢＳに懸濁した１×１０^７個のＣｅｌｌＴｒａｃｅＶｉｏｌｅｔ染色した混合リンパ球懸濁液を、ＣＤ４５．１／ＣＤ４５．２コンジェニックマウスの尾静脈から移入する。翌日、実施例１１若しくは参考例６の細胞外小胞５０μｇを、ＣＤ４５．１／ＣＤ４５．２コンジェニックマウスに尾静脈から移入する。細胞移入４日後、レシピエントマウスから脾臓を摘出し、リンパ球懸濁液を調製し、免疫染色を行う。染色には以下の抗体を用いる（染色時間：１５分、温度：４℃）。染色後、移入したＯＴ－１Ｔ細胞及び野生型ＣＤ８Ｔ細胞における細胞増殖アッセイ試薬であるＣｅｌｌＴｒａｃｅＶｉｏｌｅｔの発光強度をフローサイトメーターＦＡＣＳＣａｎｔｏＩＩ（ＢＤバイオサイエンシス社製）で検出する。
　・ＰＥ－Ｃｙ７コンジュゲート抗マウスＣＤ８抗体（５３－６．７ Biolegend社製）
　・ＰＥコンジュゲート抗マウスＴＣＲＶｂ５．１，５．２抗体（ＭＲ９－４ Biolegend社製）
　・ＦＩＴＣコンジュゲート抗マウスＣＤ４５．１抗体（Ａ２０ Biolegend社製）
　・ＡＰＣコンジュゲート抗マウスＣＤ４５．２抗体（１０４ Biolegend社製）

　実施例１０の細胞外小胞は参考例６の細胞外小胞と比較して、ｉｎｖｉｖｏにおいて、他のＣＤ８陽性Ｔ細胞（抗原非特異的なＣＤ８陽性Ｔ細胞）をほとんど活性化等することなく、抗原特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞を顕著に分化及び／又は増殖させることができる。。

試験例１２：ｓｃ－Ｔｒｉｍｅｒ－ＣＤ８１―ＩＬ―２融合タンパク質を発現する細胞外小胞による内在性ＯＶＡ反応性Ｔ細胞の活性化実験
　実施例１０若しくは参考例６の細胞外小胞５０μｇを、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの尾静脈から移入する。移入４日後、レシピエントマウスから脾臓を摘出し、リンパ球懸濁液を調製し、ＯＶＡ反応性Ｔ細胞を製造業者の指示にしたがって、テトラマーで免疫染色を行う。染色には以下の抗体を用いる。染色後、テトラマー陽性細胞をフローサイトメーターＦＡＣＳＣａｎｔｏＩＩ（ＢＤバイオサイエンシス社製）で検出する。
・ＡＰＣコンジュゲートＨ－２Ｋｂ　ＯＶＡ　Ｔｅｔｒａｍｅｒ（ＴＥＴＲＡＭＥＲ　ＳＨＯＰ社）
　・ＰＥコンジュゲートＨ－２Ｋｂ　ＯＶＡ　Ｔｅｔｒａｍｅｒ（ＴＥＴＲＡＭＥＲ　ＳＨＯＰ社）
　・Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ　Ｖｉｏｌｅｔ４２１コンジュゲート抗マウスＣＤ８抗体（５３－６．７　Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社製）

　実施例１０の細胞外小胞は、参考例６の細胞外小胞と比較して、顕著に内在性に存在するＯＶＡ反応性ＣＤ８Ｔ細胞を増殖させることができる。

　以上、実施例で示されたとおり、本明細書中に記載の抗原提示細胞外小胞ならびにポリヌクレオチドは、抗原特異的なＴ細胞（例えば、抗原特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞、抗原特異的ＣＤ４陽性細胞等）を満足に活性化、増殖及び／又は分化等することができるものである。

　以下に、配列表に含まれる配列の概要を記載する。

Claims

　抗原提示ＭＨＣ分子及びＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示する該抗原提示細胞外小胞。
　請求項１に記載の抗原提示細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ａ）前記抗原提示ＭＨＣ分子を含む、該抗原を膜外に提示可能なタンパク質；及び
（Ｂ）第１の前記Ｔ細胞刺激性サイトカイン又はそのサブユニットを含む、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能なタンパク質；
を含む、抗原提示細胞外小胞。
　請求項２記載の抗原提示細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ａ）抗原提示ＭＨＣ分子と、細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメインとを含む、該抗原を膜外に提示可能な融合タンパク質又はタンパク質複合体；及び
（Ｂ）第１のＴ細胞刺激性サイトカイン又はそのサブユニットと、細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメインとを含む、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質；
を含む、抗原提示細胞外小胞。
　請求項２記載の抗原提示細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ａ）抗原提示ＭＨＣ分子と、テトラスパニン若しくはその膜貫通ドメイン又はＭＦＧ－Ｅ８若しくはそのドメインとを含む、該抗原を膜外に提示可能な融合タンパク質又はタンパク質複合体；及び
（Ｂ）第１のＴ細胞刺激性サイトカイン又はそのサブユニットと、テトラスパニンの部分配列とを含む、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質であって、該テトラスパニンの部分配列が、２つの膜貫通ドメインを少なくとも有し、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインが、該２つの膜貫通ドメインの間に配置されている、融合タンパク質、又は
（Ｂ）第１のＴ細胞刺激性サイトカイン又はそのサブユニットと、ＭＦＧ－Ｅ８又はそのドメインとを含む、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質；
を含む、抗原提示細胞外小胞。
　請求項２記載の抗原提示細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能な融合タンパク質であって、Ｎ末端側から、
　（Ａ－１）ＭＨＣ分子拘束性抗原ペプチド、
　（Ａ－２）存在していてもよいスペーサー配列、
　（Ａ－３）単鎖ＭＨＣ分子、
　（Ａ－４）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　（Ａ－５）テトラスパニン
からなるアミノ酸配列を含む、融合タンパク質、又は
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能なタンパク質複合体であって、
　Ｎ末端側から、
　　（Ａ－１）ＭＨＣ分子拘束性抗原ペプチド、
　　（Ａ－２）存在していてもよいスペーサー配列、
　　（Ａ－３）ＭＨＣクラスＩα鎖、β_２ミクログロブリン、ＭＨＣクラスＩＩα鎖、又はＭＨＣクラスＩＩβ鎖
　　（Ａ－４）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　　（Ａ－５）テトラスパニン
からなるアミノ酸配列を含む、融合タンパク質と、
　（Ａ－６）β_２ミクログロブリン、ＭＨＣクラスＩα鎖、ＭＨＣクラスＩＩβ鎖、又はＭＨＣクラスＩＩα鎖のアミノ酸配列を含む、タンパク質と
を含む、タンパク質複合体；並びに
（Ｂ）Ｎ末端側から、
　（Ｂ－１）Ｎ末端側から、膜貫通ドメイン１、小型細胞外ループ、膜貫通ドメイン２、小型細胞内ループ及び膜貫通ドメイン３を含むテトラスパニンの部分配列、
　（Ｂ－２）存在していてもよいスペーサー配列、
　（Ｂ－３）第１のＴ細胞刺激性サイトカイン又はそのサブユニット、
　（Ｂ－４）存在していてもよいスペーサー配列、並びに
　（Ｂ－５）膜貫通ドメイン４を含むテトラスパニンの部分配列
からなるアミノ酸配列を含む、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質、又は
（Ｂ）Ｎ末端側から、
　（Ｂ－３）第１のＴ細胞刺激性サイトカイン又はそのサブユニット、
　（Ｂ－４）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　（Ｂ－５）ＭＦＧ－Ｅ８
からなるアミノ酸配列を含む、該第１のＴ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質；
を含む、抗原提示細胞外小胞。
　請求項５記載の抗原提示細胞外小胞であって、膜に以下：
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能な融合タンパク質であって、Ｎ末端側から、
　（Ａ－１）ＭＨＣクラスＩ分子拘束性抗原ペプチド、
　（Ａ－２）存在していてもよいスペーサー配列、
　（Ａ－３）単鎖ＭＨＣクラスＩ分子、
　（Ａ－４）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　（Ａ－５）テトラスパニン
からなるアミノ酸配列を含む、融合タンパク質
を含む、抗原提示細胞外小胞。
　請求項５記載の抗原提示細胞外小胞であって、膜に以下：
（Ａ）抗原ペプチドを膜外に提示可能なタンパク質複合体であって、
　Ｎ末端側から、
　　（Ａ－１）ＭＨＣクラスＩＩ分子拘束性抗原ペプチド、
　　（Ａ－２）存在していてもよいスペーサー配列、
　　（Ａ－３）ＭＨＣクラスＩＩβ鎖、
　　（Ａ－４）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　　（Ａ－５）テトラスパニン
からなるアミノ酸配列を含む、融合タンパク質と、
　（Ａ－６）ＭＨＣクラスＩＩα鎖のアミノ酸配列を含む、タンパク質と
を含む、タンパク質複合体
を含む、抗原提示細胞外小胞。
　前記Ｔ細胞刺激性サイトカインが、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－１２又はＴＧＦ－β、あるいはそのサブユニットである、請求項１～７のいずれか一項記載の抗原提示細胞外小胞。
　請求項１～８のいずれか一項記載の抗原提示細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ｃ）Ｔ細胞共刺激分子を含む、該Ｔ細胞共刺激分子とＴ細胞とが相互作用可能なタンパク質；
を含む、抗原提示細胞外小胞。
　請求項１～９のいずれか一項記載の抗原提示細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ｃ）Ｔ細胞共刺激分子と、細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメインとを含む、該Ｔ細胞共刺激分子とＴ細胞とが相互作用可能な融合タンパク質；
を含む、抗原提示細胞外小胞。
　請求項１～９のいずれか一項記載の抗原提示細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ｃ）Ｔ細胞共刺激分子と、テトラスパニン若しくはその膜貫通ドメイン又はＭＦＧ－Ｅ８若しくはそのドメインとを含む、該Ｔ細胞共刺激分子とＴ細胞とが相互作用可能な融合タンパク質；
を含む、抗原提示細胞外小胞。
　請求項１～９のいずれか一項記載の抗原提示細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ｃ）Ｎ末端側から、
　（Ｃ－１）Ｔ細胞共刺激分子、
　（Ｃ－２）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　（Ｃ－３）テトラスパニン
からなるアミノ酸配列を含む、該Ｔ細胞共刺激分子とＴ細胞とが相互作用可能な融合タンパク質；
を含む、抗原提示細胞外小胞。
　（Ａ）に規定されるタンパク質又はタンパク質複合体と（Ｂ）に規定されるタンパク質又はタンパク質複合体とが融合している、請求項２～８のいずれか一項に記載の抗原提示細胞外小胞。
　（Ａ）に規定されるタンパク質又はタンパク質複合体と（Ｃ）に規定されるタンパク質又はタンパク質複合体とが融合している、請求項９～１２のいずれか一項に記載の抗原提示細胞外小胞。
　（Ｂ）に規定されるタンパク質又はタンパク質複合体と（Ｃ）に規定されるタンパク質又はタンパク質複合体とが融合している、請求項９～１２のいずれか一項に記載の抗原提示細胞外小胞。
　（Ａ）に規定されるタンパク質又はタンパク質複合体と、（Ｂ）に規定されるタンパク質又はタンパク質複合体と（Ｃ）に規定されるタンパク質又はタンパク質複合体とが融合している、請求項９～１２のいずれか一項に記載の抗原提示細胞外小胞。
　請求項１に記載の抗原提示細胞外小胞であって、その膜に以下：
（Ｄ）前記抗原提示ＭＨＣ分子と、すくなくとも１種の前記Ｔ細胞刺激性サイトカイン又はそのサブユニットを含み、該抗原と該Ｔ細胞刺激性サイトカインを膜外に提示可能な融合タンパク質を含む、抗原提示細胞外小胞。
　請求項１７に記載の抗原提示細胞外小胞であって、
　前記融合タンパク質が、前記抗原提示ＭＨＣ分子と、前記すくなくとも１種のＴ細胞刺激性サイトカイン又はそのサブユニットと、細胞外小胞の膜に局在することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはその膜結合ドメインとを含む、抗原提示細胞外小胞。
　請求項１８に記載の抗原提示細胞外小胞であって、
　前記細胞外小胞の膜に局在することが可能な膜タンパク質又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質が、テトラスパニン又はＭＦＧ－Ｅ８である、抗原提示細胞外小胞。
　請求項１９に記載の抗原提示細胞外小胞であって、
前記融合タンパク質が、Ｎ末端側から、
　（Ｄ－１）ＭＨＣ分子拘束性抗原ペプチド、
　（Ｄ－２）存在していてもよいスペーサー配列、
　（Ｄ－３）単鎖ＭＨＣ分子、
　（Ｄ－４）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　（Ｄ－５）テトラスパニン又はその膜貫通ドメインあるいはＭＦＧ－Ｅ８又はその膜貫通ドメインと、前記すくなくとも１種のＴ細胞刺激性サイトカイン又はそのサブユニットを含む融合ペプチド、
を、この順番でコードするアミノ酸配列を含む、抗原提示細胞外小胞、
　請求項１９に記載の抗原提示細胞外小胞であって、
前記融合タンパク質が、Ｎ末端側から、
　（Ｄ－１）テトラスパニン又はその膜貫通ドメインあるいはＭＦＧ－Ｅ８又はその膜貫通ドメインと、前記すくなくとも１種のＴ細胞刺激性サイトカイン又はそのサブユニットを含む融合ペプチド
　（Ｄ－２）存在していてもよいスペーサー配列、
　（Ｄ－３）単鎖ＭＨＣ分子、
　（Ｄ－４）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　（Ｄ－５）ＭＨＣ分子拘束性抗原ペプチドを、
この順にコードするアミノ酸配列を含む、抗原提示細胞外小胞。
　前記融合ペプチドが、Ｎ末端側から、
　　（１）膜貫通ドメイン１、小型細胞外ループ、膜貫通ドメイン２、小型細胞内ループ及び膜貫通ドメイン３を含むテトラスパニンの部分配列、
　　（２）存在していてもよいスペーサー配列、
　　（３）前記すくなくとも１つのＴ細胞刺激性サイトカイン又はそのサブユニット、
　　（４）存在していてもよいスペーサー配列、並びに
　　（５）膜貫通ドメイン４を含むテトラスパニンの部分配列
をこの順番でコードするアミノ酸配列を含む、請求項２０又は２１に記載の抗原提示細胞外小胞。
　前記融合ペプチドが、Ｎ末端側から、
　（１）前記すくなくとも１のＴ細胞刺激性サイトカイン又はそのサブユニット、
　（２）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　（３）ＭＦＧ－Ｅ８
をこの順番でコードするアミノ酸配列を含む、請求項２０又は２１に記載の抗原提示細胞外小胞。
　前記ＭＨＣ分子拘束性抗原ペプチドがＭＨＣクラスＩ分子拘束性抗原ペプチドであり、前記単鎖ＭＨＣ分子が、ＭＨＣクラスＩα鎖の細胞外領域を含む、請求項２０又は２１に記載の抗原提示細胞外小胞。
　前記ＭＨＣ分子拘束性抗原ペプチドがＭＨＣクラスＩI分子拘束性抗原ペプチドであり、前記単鎖ＭＨＣ分子が、ＭＨＣクラスＩIα鎖の細胞外ドメイン及び／又はＭＨＣクラスＩIβ鎖の細胞外ドメインを含む、請求項２０又は２１に記載の抗原提示細胞外小胞。
　（Ｃ）すくなくとも１つのＴ細胞共刺激分子を含む、該Ｔ細胞共刺激分子とＴ細胞とが相互作用可能なタンパク質をさらにその膜に含む、請求項１７～２５のいずれか一項に記載の抗原提示細胞外小胞。
　前記Ｔ細胞と相互作用可能なタンパク質が、前記すくなくとも１つのＴ細胞共刺激分子と、細胞外小胞の膜に発現することが可能な膜タンパク質若しくはその膜貫通ドメイン又は細胞外小胞の膜に結合することが可能なタンパク質若しくはそのドメインとを含む、請求項２６に記載の抗原提示細胞外小胞。
　前記Ｔ細胞と相互作用可能なタンパク質が、前記すくなくとも１つのＴ細胞共刺激分子と、テトラスパニン若しくはその膜貫通ドメイン又はＭＦＧ－Ｅ８若しくはそのドメインとを含む、請求項２６に記載の抗原提示細胞外小胞。
　前記Ｔ細胞と相互作用可能なタンパク質が、
（Ｃ）Ｎ末端側から、
　（Ｃ－１）前記すくなくとも１つのＴ細胞共刺激分子、
　（Ｃ－２）存在していてもよいスペーサー配列、及び
　（Ｃ－３）テトラスパニンを
この順にコードするアミノ酸配列を含む、請求項２６に記載の抗原提示細胞外小胞。
　前記（Ｄ）融合タンパク質と前記（Ｃ）Ｔ細胞と相互作用可能なタンパク質が融合している、請求項２６～２９のいずれか一項に記載の抗原提示細胞外小胞。
　細胞外小胞が、エクソソームである、請求項１～３０のいずれか一項記載の抗原提示細胞外小胞。
　ポリヌクレオチドであって、以下：
　（ｉ）請求項３～７のいずれか一項で定義される（Ａ）の融合タンパク質若しくはタンパク質複合体；
　（ｉｉ）請求項３～５のいずれか一項で定義される（Ｂ）の融合タンパク質；又は
　（ｉｉｉ）請求項１０～１２のいずれか一項で定義される（Ｃ）の融合タンパク質；
　（ｉｖ）請求項１８～２５のいずれか一項で定義される（Ｄ）の融合タンパク質；
のいずれかをコードする、ポリヌクレオチド。
　請求項３２記載のポリヌクレオチドから選択される少なくとも１種のポリヌクレオチドを含んでなるベクター。
　以下：
　（ｉ）請求項２～６のいずれか一項で定義される（Ａ）の融合タンパク質若しくはタンパク質複合体をコードするポリヌクレオチド；及び
　（ｉｉ）請求項２～４のいずれか一項で定義される（Ｂ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド、並びに、任意で
　（ｉｉｉ）請求項９～１１のいずれか一項で定義される（Ｃ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド
を含んでなる、単一のベクター又は２以上のベクターの組み合わせにより形質転換された細胞。
　（ｉｖ）請求項１８～２５のいずれか一項で定義される（Ｄ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド；並びに、任意で
　（ｉｉｉ）請求項１０～１２のいずれか一項で定義される（Ｃ）の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド
を含む、単一のベクター又は２以上のベクターの組み合わせにより形質転換された細胞。
　請求項３４又は３５記載の細胞を培養して得られてなる、培養上清。
　請求項３６記載の培養上清から得られてなる、抗原提示細胞外小胞。
　請求項１～１２のいずれか一項記載の抗原提示細胞外小胞を製造するための方法であって、請求項１５記載の細胞を培養して得られる培養上清を回収する工程を含む、方法。
　請求項１～３１及び３７のいずれか一項記載の抗原提示細胞外小胞、又は請求項３６記載の培養上清を含む、医薬組成物。
　感染症を処置又は予防するための、請求項１～３１及び３７のいずれか一項記載の抗原提示細胞外小胞、又は請求項３６記載の培養上清を含む、医薬組成物。
　ガンを処置又は予防するための、請求項１～３１及び３７のいずれか一項記載の抗原提示細胞外小胞、又は請求項３６記載の培養上清を含む、医薬組成物。
　免疫チェックポイント阻害剤を含む、請求項４１に記載の医薬組成物。
　前記免疫チェックポイント阻害剤が、前記抗原提示細胞外小胞の膜上に存在している、請求項４２に記載の医薬組成物。
前記免疫チェックポイント阻害剤が抗ＰＤ－１抗体又はその活性断片；抗ＣＴＬＡ－４抗体又はその活性断片；及びＰＤ－Ｌ１抗体又はその活性断片からなる群から選択される、請求項４２又は４３に記載の医薬組成物。
　自己免疫疾患を処置又は予防するための、請求項１～３１及び３７のいずれか一項記載の抗原提示細胞外小胞、又は請求項３６記載の培養上清を含む、医薬組成物。
　アレルギー性疾患を処置又は予防するための、請求項１～３１及び３７のいずれか一項記載の抗原提示細胞外小胞、又は請求項３６記載の培養上清を含む、医薬組成物。
　特異的な抗原に対するＴ細胞を活性化及び／又は増殖させるための方法であって、請求項１～３１及び３７のいずれか一項記載の抗原提示細胞外小胞とＴ細胞とをｉｎｖｉｔｒｏ又はｅｘｖｉｖｏにおいて接触させることを含む、方法。