WO2021123699A1 - Composition cosmétique comprenant un extrait de levure debaryomyces nepalensis - Google Patents
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Abstract
La présente invention concerne une composition cosmétique comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un extrait de levure Debaryomyces nepalensis et au moins un adjuvant cosmétique choisi dans le groupe constitué par les filtres UV, les agents antioxydants, les parfums, les vitamines, les huiles, les agents épaississants, les agents émollients, les agents hydratants, les agents anti-âge, les prébiotiques et/ou dérivés de probiotiques, et leurs mélanges.
Description
Composition cosmétique comprenant un extrait de levure Debaryomyces nepalensis DOMAINE DE L'INVENTION
La présente invention concerne le domaine de la cosmétique. Elle concerne notamment une composition cosmétique comprenant un extrait de levure Debaryomyces nepalensis destinée, notamment, à améliorer l’hydratation circadienne de la peau et ainsi à prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané.
ETAT DE LA TECHNIQUE
Le tissu cutané est la première barrière de protection de l'organisme vis-à-vis de l'environnement. Il est ainsi quotidiennement soumis à des facteurs d’origine externe ou interne susceptibles de fragiliser la barrière cutanée, favoriser la déshydratation de la peau et/ou des lèvres et altérer leur aspect esthétique et leur jeunesse.
La peau du visage est une partie du corps tout particulièrement sensible à la perte d’eau. Une bonne hydratation de la peau et des lèvres est indispensable au confort, qui influence notamment la sensibilité au toucher (Effect of hydration on the tactile and thermal sensitivity of the lip, S.Guest, Physiology & Behavior 123 (2014), 127-135).
De nombreuses solutions cosmétiques ont été proposées pour agir sur la fonction barrière et pour améliorer l’hydratation de la peau, mais il demeure un besoin constant de trouver de nouveaux agents capables de nourrir et hydrater la peau et/ou les lèvres, de rétablir la barrière cutanée et ainsi de prévenir et/ou diminuer les effets délétères subis quotidiennement par notre peau et qui favorisent le vieillissement cutané.
De manière inattendue, la Demanderesse a mis en évidence les effets in vitro d’un extrait de levure Debaryomyces nepalensis. Cet extrait de levure permet notamment de favoriser et/ou stimuler le renouvellement épidermique, le métabolisme énergétique des cellules cutanées, la nutrition des matières kératiniques et/ou l’efficacité vitaminique, la barrière cutanée et son film hydrolipidique, l’hydratation de la peau, l’équilibre du microbiote cutané, et/ou améliorer l’intégrité et la résistance de la peau aux stress, améliorer la synchronisation circadienne des cellules cutanées. Il est donc envisagé d’utiliser cet extrait de levure comme actif cosmétique pour stimuler et/ou favoriser l’hydratation circadienne de la peau, et/ou prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, notamment la perte de fermeté, la perte d’élasticité, la diminution de l’épaisseur de la peau, l’apparition de rides et/ou ridules, et/ou la sécheresse de la peau.
RESUME DE L'INVENTION
Le premier objet de l’invention concerne une composition cosmétique comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un extrait de levure Debaryomyces nepalensis et au moins un adjuvant cosmétique choisi dans le groupe constitué par les filtres UV, les agents antioxydants, les parfums, les vitamines, les huiles, les agents épaississants, les agents émollients, les agents hydratants, les agents anti-âge, les prébiotiques et/ou dérivés de probiotiques, et leurs mélanges.
Par « milieu physiologiquement acceptable », on entend un milieu compatible avec les matières kératiniques, en particulier la peau et/ou les lèvres.
On entend par « matières kératiniques » selon l’invention la peau et/ou ses phanères, et les lèvres. En particulier, il s’agira de la peau du visage, du cou et/ou du corps, et des lèvres.
Par « adjuvant cosmétique » on entend une substance dépourvue d’effet cosmétique en tant que telle, mais utile à l’incorporation de l’extrait de levure Debaryomyces nepalensis dans la composition cosmétique de l’invention ou à la mise en forme celle-ci.
De préférence, ledit extrait de levure Debaryomyces nepalensis est un extrait aqueux, obtenu par un procédé comprenant au moins les étapes de : a) Solubilisation de la biomasse dans l’eau, b) Hydrolyse, c) Séparation des phases soluble et insoluble pour récupérer la phase soluble, d) Purification(s), e) Filtration(s), f) Filtration(s) stérilisante(s).
L’invention porte encore sur un procédé cosmétique de soin et/ou de maquillage des matières kératiniques, plus particulièrement de la peau et/ou des lèvres et notamment de la peau du visage et/ou du cou, comprenant l’application topique sur lesdites matières kératiniques, d’une composition cosmétique selon l’invention.
Le procédé cosmétique de l’invention est notamment destiné à favoriser et/ou stimuler le renouvellement épidermique, le métabolisme énergétique des cellules cutanées, la nutrition des matières kératiniques et/ou l’efficacité vitaminique, la barrière cutanée et son film hydrolipidique, l’hydratation de la peau, l’équilibre du microbiote cutané, et/ou améliorer l’intégrité et la résistance de la peau aux stress, améliorer la synchronisation circadienne des cellules cutanées, en particulier l’hydratation circadienne de la peau, et/ou prévenir et/ou diminuer les signes du
vieillissement cutané, notamment la perte de fermeté, la perte d’élasticité, la diminution de l’épaisseur de la peau, l’apparition de rides et/ou ridules, la sécheresse de la peau.
Par « favoriser et/ou stimuler l’équilibre du microbiote cutané » on entend favoriser et/ou stimuler l’équilibre de la population de micro-organismes qui, de par leur diversité, participent au contrôle de l'équilibre qui caractérise une peau saine et participent à la protection de l’organisme en limitant le risque de colonisation de la peau par des bactéries pathogènes.
Par « améliorer la synchronisation circadienne des cellules cutanées, en particulier l’hydratation circadienne de la peau », on entend notamment selon l’invention favoriser la persistance du rythme biologique des gènes horloges et par conséquence des gènes dont l’expression est sous leur dépendance, incluant des gènes participant à l’hydratation cutanée tels que les aquaporines.
La présente invention porte encore sur l’utilisation cosmétique d’un extrait de levure Debaryomyces nepalensis selon l’invention, pour une application topique sur les matières kératiniques, plus particulièrement de la peau et/ou les lèvres et notamment de la peau du visage et/ou du cou, en tant qu’actif cosmétique destiné à favoriser et/ou stimuler le renouvellement épidermique, le métabolisme énergétique des cellules cutanées, la nutrition des matières kératiniques et/ou l’efficacité vitaminique, la barrière cutanée et son film hydrolipidique, l’hydratation de la peau, l’équilibre du microbiote cutané, et/ou améliorer l’intégrité et la résistance de la peau aux stress, améliorer la synchronisation circadienne des cellules cutanées, en particulier l’hydratation circadienne de la peau, et/ou prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, notamment la perte de fermeté, la perte d’élasticité, la diminution de l’épaisseur de la peau, l’apparition de rides et/ou ridules, et/ou la sécheresse de la peau.
DESCRIPTION DES FIGURES
La figure 1 est un graphique montrant l’enregistrement du rythme circadien des cellules cutanées placées dans différentes conditions expérimentales.
DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION
Extrait de levure Debaryomyces nepalensis
Les compositions cosmétiques de l’invention utilisent comme actif cosmétique un extrait de levure Debaryomyces nepalensis.
Par « Debaryomyces nepalensis » au sens de l’invention, on entend toute levure portant cette classification de la famille des Debaryomycetaceae. Elle peut être aussi référencée sous les appellations synonymes de : Debaryomyces cavensis, Debaryomyces japonicus et Saccharomyces disaccharomellis. Dans le cadre de la présente invention, les levures utilisées ne sont pas génétiquement modifiées.
L’extrait selon l’invention peut être un extrait de toute souche de Debaryomyces nepalensis. Préférentiellement, l’extrait selon l’invention est un extrait d’une souche de Debaryomyces nepalensis isolée et identifiée sur la rhizosphère de la plante Malva sylvestris. Il peut s’agir de la souche identifiée par le numéro NCYC 3413. Il peut s’agir plus particulièrement de la souche déposée selon le Traité de Budapest dans la collection BCCM/MUCL à la Mycothèque de l’Université catholique de Louvain, croix du Sud, 2- boîte L7.05.06, 1348 Louvain -la- Neuve, le 14 septembre 2015 sous le numéro BCCM 56661 ou de la souche déposée dans la collection CIRM sous le numéro CLIB n°2137.
Debaryomyces nepalensis est une levure halotolérante impliquée dans la fermentation alimentaire. Elle forme des colonies de couleur blanche à crème, butyreuses. Elle se reproduit par bourgeonnement, n’a pas de filaments mais des asques persistants contenant chacun une ascospore.
A la connaissance de la Demanderesse, aucun extrait de levure Debaryomyces nepalensis n’a été décrit dans l’art antérieur pour une utilisation comme actif cosmétique présentant des propriétés remarquables au niveau des matières kératiniques chez l’Homme.
De préférence, la présente invention utilise des levures Debaryomyces nepalensis isolées à partir de racines de mauve ( Malva sylvestris ).
L’extrait de levure Debaryomyces nepalensis utilisé dans la présente invention peut être inclus dans les compositions cosmétiques de l'invention sous une forme vivante, semi-active ou inactivée, morte. Il peut être inclus sous forme de fractions de composants cellulaires ou sous la forme de métabolites. Le microorganisme, métabolite(s) ou fraction(s) peu(ven)t également être introduit(s) sous la forme d'une poudre lyophilisée, d'un surnageant de culture et/ou le cas échéant sous une forme concentrée.
Selon un mode de réalisation particulier, la levure Debaryomyces nepalensis est mise en œuvre sous une forme inactivée voire morte, plus particulièrement sous forme d'un lysat.
Par « lysat », on entend notamment un matériau obtenu par lyse cellulaire des cellules du microorganisme considéré provoquant ainsi la libération des constituants
biologiques intracellulaires naturellement contenus dans lesdites cellules. Le lysat mis en œuvre est formé en tout ou partie des constituants biologiques intracellulaires et des constituants des parois et membranes cellulaires. La présente invention concerne donc la mise en œuvre d'un lysat probiotique et/ou une de ses fractions et/ou un de ses métabolites.
Selon un mode de réalisation préféré, la lyse cellulaire est effectuée dans un solvant polaire.
Selon la présente invention, l’expression « solvant polaire » signifie que le solvant a une valeur d’indice de Polarité qui est égale ou supérieure à une valeur de 4. L’indice de polarité est une grandeur calculée sur la base de grandeurs thermodynamiques (de solubilité et de changement d’état) qui met en évidence le caractère plus ou moins polaire d’une molécule. On se reportera, pour les indices de polarité des solvants, à l'article de L.R. SNYDER : Classification of the solvent properties of common liquids ; Journal of Chromatography, 92 (1974), 223-230.
Les solvants polaires préférés sont ceux constitués d’un composé comprenant au moins une liaison covalente polaire de type O-H. A titre de solvant polaire particulièrement préféré, on choisit un solvant ou un mélange de solvants choisi(s) parmi l’eau, les alcools en C1 -C4, tel que l’éthanol, les glycols, tels que l’éthylène glycol, le glycérol, le butylène glycol et le propylène glycol, et leurs mélanges.
L’extrait de levure Debaryomyces nepalensis utilisé dans l’invention est obtenu avantageusement au moyen d’un solvant polaire cosmétiquement acceptable.
De préférence, on utilisera l’eau, l’éthanol ou leur mélange, et de préférence encore l’eau.
Selon un mode de réalisation particulier et préféré, ledit extrait de levure Debaryomyces nepalensis utilisé par l’invention est un hydrolysat. Par « hydrolysat », on entend que la lyse est cellulaire est effectuée dans de l’eau. On parlera indifféremment d’hydrolysat ou d’extrait aqueux dans le reste de la description.
Par « hydrolysat de levure Debaryomyces nepalensis » au sens de l’invention, on entend tout extrait de levure Debaryomyces nepalensis obtenu par un procédé comprenant au moins une étape d'hydrolyse enzymatique ou chimique de la biomasse de Debaryomyces nepalensis.
Ainsi, selon un mode particulier et préféré, l’extrait de levure Debaryomyces nepalensis utilisé par l’invention est un hydrolysat de levure Debaryomyces nepalensis (non vivante).
Selon un autre mode particulier, il s’agit d’un hydrolysat de levure Debaryomyces nepalensis (non vivante) de la souche NCYC 3413.
Selon un autre mode particulier, il s’agit d’un hydrolysat de levure Debaryomyces nepalensis (non vivante) de la souche déposée selon le Traité de Budapest dans la collection BCCM/MUCL à la Mycothèque de l’Université catholique de Louvain croix du Sud, 2- boîte L7.05.06, 1348 Louvain-la-Neuve, le 14 septembre 2015 sous le numéro BCCM 56661 .
Selon un autre mode particulier, il s’agit d’un hydrolysat de levure Debaryomyces nepalensis (non vivante) de la souche déposée dans la collection CIRM sous le numéro CLIB n°2137.
L’extrait peut être préparé par différents procédés d’extraction connus de l’Homme du métier, mettant en œuvre des étapes de : lyse, de préférence hydrolyse, desdites levures Debaryomyces nepalensis, séparation des phases soluble et insoluble, purification, filtration et stérilisation, optionnellement séchage et éventuellement remise en solution.
Selon certains modes de réalisation, une culture de levures Debaryomyces nepalensis est réalisée préalablement à la mise en œuvre du procédé d’extraction. Cette culture est notamment conduite, de manière classique pour l’Homme du métier, sur un milieu adapté à son développement (par exemple, milieu de culture pour levures ATCC Medium : 1245 YPD Medium), afin d’obtenir une biomasse de levures en quantité industrielle. Une fois la biomasse produite, les molécules produites ainsi que la biomasse sont récupérées par centrifugation.
La matière récupérée suite à cette étape de centrifugation est désignée de façon générique par le terme « biomasse ».
Selon un mode de réalisation préféré, l’invention utilise un extrait de levure Debaryomyces nepalensis obtenu par la mise en œuvre des étapes suivantes : a) Solubilisation de la biomasse dans de l’eau, b) Lyse, de préférence hydrolyse, c) Séparation des phases soluble et insoluble pour récupérer la phase soluble, d) Purification(s), notamment par ultrafiltration, e) Filtration(s), f) Filtration(s) stérilisante(s), notamment sur filtre 0,22 pm.
L’étape d’hydrolyse peut notamment être une étape d’hydrolyse enzymatique ou d’hydrolyse chimique. Il s’agit préférentiellement d’une étape d’hydrolyse chimique, en particulier d’une hydrolyse acide.
En outre, le procédé peut éventuellement comprendre une étape de traitement thermique de l’extrait.
Des étapes de décoloration ou désodorisation peuvent aussi être ajoutées.
Selon un mode de réalisation, l’extrait obtenu à l’issue de ce procédé d’extraction est un extrait se présentant sous une forme aqueuse.
Selon un autre mode de réalisation, l’extrait peut ensuite éventuellement être associé à un support d’atomisation et séché, pour se présenter sous forme solide.
Les étapes des procédés décrits ci-avant, prises individuellement, sont usuelles dans le domaine des extractions d’actifs à partir de matières premières naturelles et l’Homme du métier est à même d’en ajuster les paramètres réactionnels sur la base de ses connaissances générales.
De manière avantageuse, ce procédé d’extraction permet d’obtenir un extrait de levure ne présentant pas de caractéristiques olfactives gênantes pouvant limiter son utilisation dans des produits de soin cosmétiques ce qui est généralement le cas pour des extraits de levure.
Selon un mode particulier et préféré, l’extrait de levure Debaryomyces nepalensis utilisé dans les compositions de l’invention comprenant entre 10 g/L et 20 g/L de matière active (matière sèche), de préférence encore entre 12 g/L et 17 g/L de matière active, de manière encore préférée entre 13 g/L et 16 g/L de matière active et de manière préférée entre toutes entre 14 g/L et 15 g/L de matière active par rapport au poids total de l’extrait.
Selon un mode particulier, l’extrait de levure Debaryomyces nepalensis utilisé dans les compositions de l’invention comprend préférentiellement au moins 25 % carbohydrates en poids de matières sèches de l’extrait, encore plus préférentiellement au moins 40 %. La fraction glucidique de l’extrait selon l’invention comprend préférentiellement au moins des oligosaccharides, préférentiellement des oligosaccharides phosphatés. De façon préférée la fraction glucidique comprend au moins 50 % d’oligosaccharides en poids de matière sèche de la fraction glucidique, de préférence au moins 70 %. Ces oligosaccharides, sont préférentiellement constitués de molécules de masses molaires allant de 360 Da à 3060 Da. L’extrait selon l’invention comprenant également d’autres constituants, notamment des protéines et/ou des
cendres minérales Préférentiellement, l’extrait selon l’invention présente une teneur en cendres inférieure à 15 % en poids de matière sèche de l’extrait.
De préférence, l’extrait de levure Debaryomyces nepalensis utilisé par l’invention est un extrait comprenant de 0,5 % à 2,5 % de matière sèche dans de l’eau.
Le nom INCI (International Nomenclature Cosmetics Ingrédients) de cet extrait de levure Debaryomyces nepalensis est : Water, Yeast extract.
Selon un mode particulièrement préféré, l’extrait de levure Debaryomyces nepalensis utilisé par l’invention est un hydrolysat obtenu par la mise en œuvre des étapes suivantes :
- Solubilisation de la biomasse de Debaryomyces nepalensis dans l’eau à raison de 50g/ L,
- Hydrolyse acide,
- Séparation des phases soluble et insoluble,
- Purification de la phase soluble pour éliminer les molécules de tailles supérieures à 5kDa,
- Filtration et filtration stérilisante.
Cet extrait est caractérisé par :
- Une teneur en matières sèches de 14,6 g/L,
- Une quantité de sucres (méthode de Dubois) de 6,6 g/L (soit 45,2 %) dont une partie, se présente sous forme d’oligosaccharides phosphatés,
- Une quantité de protéines (méthode de Lowry) de 0,53 g/L (soit 3,6 %).
Composition et Galéniques
Dans le cadre de la présente invention, l’extrait de levure Debaryomyces nepalensis est utilisé pour la préparation de compositions, notamment la préparation de compositions cosmétiques pour application topique sur les matières kératiniques.
Ainsi, selon un premier aspect, la présente invention porte sur une composition cosmétique comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un extrait de levure Debaryomyces nepalensis et au moins un adjuvant cosmétique choisi dans le groupe constitué par les filtres UV, les agents antioxydants, les parfums, les vitamines, les huiles, les agents épaississants, les agents émollients, les agents hydratants, les agents anti-âge, les prébiotiques et/ou dérivés de probiotiques, et leurs mélanges.
On entend par « prébiotique » des constituants alimentaires non vivants capables de moduler la croissance et l’activité des souches probiotiques et d’autres souches bactériennes bénéfiques à la santé.
On entend par « probiotique » des microorganismes vivants (type bactéries lactobacillus ou levures) qui, lorsqu’ils sont administrés en quantité suffisante, exercent des effets positifs sur la santé au-delà des effets nutritionnels traditionnels (définition OMS/FAO Food and Agriculture Organizations of the United nation). On utilisera généralement des « dérivés probiotiques » correspondant à des microorganismes rendus non vivants pour être utilisés en cosmétique ; on parle souvent de dérivés de probiotiques, de fractions de probiotiques et/ou de postbiotiques.
On entend par « postbiotique » des dérivés non-vivants de probiotique, porteurs d’une activité biologique bénéfique pour son hôte.
De préférence, les compositions cosmétiques de l’invention comprennent un extrait de levure Debaryomyces nepalensis tel que décrit ci-dessus.
Ainsi, selon un mode de réalisation préféré, la composition cosmétique de l’invention se caractérise en ce que ladite levure Debaryomyces nepalensis est isolée à partir de racines de mauve ( Malva sylvestris).
Selon un autre mode de réalisation préféré, la composition cosmétique de l’invention se caractérise en ce que ledit extrait de levure Debaryomyces nepalensis est un extrait aqueux de levure Debaryomyces nepalensis.
Par « extrait aqueux » selon l’invention, on entend que l’extrait de levure Debaryomyces nepalensis est un extrait dans de l’eau.
Selon un mode de réalisation préféré, l’invention porte sur une composition cosmétique caractérisée en ce que ledit extrait de levure Debaryomyces nepalensis est obtenu par un procédé comprenant au moins les étapes de : a) Solubilisation de la biomasse dans l’eau, b) Hydrolyse, c) Séparation des phases soluble et insoluble pour récupérer la phase soluble, d) Purification(s), e) Filtration(s), f) Filtration(s) stérilisante(s).
Selon un mode de réalisation particulier, l’invention porte sur une composition cosmétique comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un extrait de levure Debaryomyces nepalensis, en particulier un extrait de levure Debaryomyces nepalensis NCYC 3413, de préférence la souche déposée à la Mycothèque de l’Université catholique de Louvain sous le numéro BCCM 56661 ou de la souche déposée dans la collection CIRM sous le numéro CLIB n°2137 ; et au moins un adjuvant cosmétique choisi dans le groupe constitué par les filtres UV, les agents antioxydants, les parfums,
les vitamines, les huiles, les agents épaississants, les agents émollients, les agents hydratants, les agents anti-âge, les prébiotiques et/ou extraits de dérivés probiotiques, et leurs mélanges.
Dans le cadre de l’invention, l’extrait de levure Debaryomyces nepalensis est incorporé dans une composition adaptée à une application topique sur les matières kératiniques. Il est notamment utilisé dans une quantité efficace pour obtenir l’effet recherché.
Selon un mode de réalisation préféré, la composition cosmétique de l’invention est caractérisée en ce que ledit extrait de levure Debaryomyces nepalensis est présent en une teneur allant de 0,01 % à 10 %, de préférence de 0,1 % à 5 %, de préférence encore de 1 ¾ à 3 % en poids de matière première par rapport au poids total de la composition.
Selon un mode de réalisation préféré, la composition cosmétique de l’invention est caractérisée en ce que ledit extrait de levure Debaryomyces nepalensis est présent en une teneur allant de 0,00005 % à 0,25 %, de préférence de 0,0005 % à 0,125 %, de préférence encore de 0,005 % à 0,075 % en poids de matière sèche par rapport au poids total de la composition.
Selon un autre mode de réalisation particulier, l’invention porte sur une composition cosmétique comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un extrait de levure Debaryomyces nepalensis, en particulier un extrait de levure Debaryomyces nepalensis NCYC 3413, de préférence la souche déposée à la Mycothèque de l’Université catholique de Louvain sous le numéro BCCM 56661 ou de la souche déposée dans la collection CIRM sous le numéro CLIB n°2137 en une teneur allant de 0,01 % à 10 % en poids, de préférence encore de 0,1 % à 5 % en poids, de préférence encore de 1 % à 3 % en poids de matière première par rapport au poids total de la composition, et au moins un adjuvant cosmétique choisi dans le groupe constitué par les filtres UV, les agents antioxydants, les parfums, les vitamines, les huiles, les solvants organiques, les agents épaississants, les agents émollients, les agents hydratants, les agents anti-âge, les prébiotiques et/ou dérivés de probiotiques, et leurs mélanges.
Dans un mode de réalisation préféré, ladite composition cosmétique comprenant l’extrait de levure Debaryomyces nepalensis de l’invention est une composition de soin et/ou de maquillage des matières kératiniques, en particulier de la peau et/ou des lèvres et notamment de la peau du visage et/ou du cou.
L’invention porte donc également sur une composition cosmétique caractérisée en ce qu’elle est sous la forme d’une crème, émulsion huile-dans-eau ou eau-dans-huile ou
émulsion multiple, solution, huile, suspension, gel, lait, lotion, sérum, baume, stick ou poudre.
De préférence, l’extrait de levure Debaryomyces nepalensis de l’invention est mis en œuvre dans la phase aqueuse de la composition de l’invention.
Ainsi, selon un mode particulier, la composition de l’invention comprend au moins une phase aqueuse.
La phase aqueuse de la composition selon l'invention comprend de l'eau et éventuellement un solvant hydrosoluble.
On entend par « solvant hydrosoluble » selon l’invention, un composé liquide à température ambiante et miscible à l'eau (miscibilité dans l'eau supérieure à 50 % en poids à 25 °C et pression atmosphérique). On peut citer notamment :
- les mono-alcools inférieurs en C1-C5 tels que l'éthanol, l'isopropanol et leurs mélanges,
- les glycols en C2-C8 tels que l'éthylène glycol, le propylène glycol, le 1 ,3-butylène glycol, le dipropylène glycol, et leurs mélanges,
- les polyols en C2-C32 tels que les polyglycérols, les polyéthylènes glycols, et leurs mélanges,
- et leurs mélanges.
Elle peut comprendre également des gélifiants hydrophiles, des antioxydants, des conservateurs et leurs mélanges.
A titre de « gélifiants hydrophiles », on peut citer notamment les polymères d’acide acrylique, les copolymères d’acides acrylique et méthacrylique, les polymères carboxyvinyliques, les gélifiants polysaccharidiques, les gommes naturelles ou modifiées, les gélifiants minéraux, et leurs mélanges.
La teneur en gélifiant(s) hydrophile(s) dans la composition cosmétique de l’invention ira généralement de 0,01 % à 5 %, notamment de 0,1 % à A %, de préférence de 0,2 % à 3 % et de préférence encore de 0,5 % à 2 % en poids par rapport au poids total de ladite composition.
Procédés cosmétiques et utilisations
Les procédés cosmétiques et utilisations cosmétiques décrits ci-dessous sont destinés à une application sur des matières kératiniques, notamment sur des matières kératiniques saines, de préférence des peaux et/ou des lèvres saines, en particulier sur une peau fatiguée, une peau atone, impactée par un contexte nutritionnel défavorable ou déséquilibré, de stress émotionnel ou de manque de sommeil, une peau sèche et/ou une peau exposée à un stress oxydant.
Par « matières kératiniques saines » selon l’invention en entend des matières kératiniques ne présentant pas de troubles ou de désordres qui relèveraient d’un état pathologique (sujets ‘non sains’, atteints d’une pathologie).
Un autre objet de l’invention porte donc sur un procédé cosmétique de soin et/ou de maquillage des matières kératiniques, plus particulièrement de la peau et/ou des lèvres et notamment de la peau du visage et/ou du cou, comprenant l’application topique sur lesdites matières kératiniques, d’une composition cosmétique telle que décrit ci- dessus.
Dans le cadre de la présente invention, ledit procédé cosmétique est destiné à favoriser et/ou stimuler le renouvellement épidermique, le métabolisme énergétique des cellules cutanées, la nutrition des matières kératiniques et/ou l’efficacité vitaminique, la barrière cutanée et son film hydrolipidique, l’hydratation de la peau, l’équilibre du microbiote cutané, et/ou améliorer l’intégrité et la résistance de la peau aux stress, améliorer la synchronisation circadienne des cellules cutanées, en particulier l’hydratation circadienne de la peau, et/ou prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, notamment la perte de fermeté, la perte d’élasticité, la diminution de l’épaisseur de la peau, l’apparition de rides et/ou ridules, et/ou la sécheresse de la peau.
La présente invention porte encore sur l’utilisation cosmétique, non thérapeutique, d’un extrait de levure Debaryomyces nepalensis tel que défini ci-dessus, pour une application topique sur les matières kératiniques, en particulier des matières kératiniques saines, plus particulièrement de la peau et/ou les lèvres et notamment de la peau du visage et/ou du cou, en tant qu’actif cosmétique destiné à favoriser et/ou stimuler le renouvellement épidermique, le métabolisme énergétique des cellules cutanées, la nutrition des matières kératiniques et/ou l’efficacité vitaminique, la barrière cutanée et son film hydrolipidique, l’hydratation de la peau, l’équilibre du microbiote cutané, et/ou améliorer l’intégrité et la résistance de la peau aux stress, améliorer la synchronisation circadienne des cellules cutanées, en particulier l’hydratation circadienne de la peau, et/ou prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, notamment la perte de fermeté, la perte d’élasticité, la diminution de l’épaisseur de la peau, l’apparition de rides et/ou ridules, et/ou la sécheresse de la peau.
Selon un mode particulier, les compositions utilisées dans les procédés et/ou utilisations selon l’invention comprennent dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un extrait de levure Debaryomyces nepalensis, en particulier un lysat de levure
Debaryomyces nepalensis et au moins un adjuvant cosmétique choisi dans le groupe constitué par les filtres UV, les agents antioxydants, les parfums, les vitamines, les huiles, les agents épaississants, les agents émollients, les agents hydratants, les agents anti-âge, les prébiotiques et/ou dérivés de probiotiques, et leurs mélanges.
Selon un autre mode particulier, les compositions utilisées dans les procédés et/ou utilisations selon l’invention comprennent dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un extrait de levure Debaryomyces nepalensis, en particulier un extrait de levure Debaryomyces nepalensis NCYC 3413, de préférence la souche déposée à la Mycothèque de l’Université catholique de Louvain sous le numéro BCCM 56661 ou de la souche déposée dans la collection CIRM sous le numéro CLIB n°2137 en une teneur allant de 0,01 % à 10 % en poids, de préférence encore de 0,1 ¾ à 5 % en poids, de préférence encore de 1 % à 3 % en poids de matière première par rapport au poids total de la composition, et au moins un adjuvant cosmétique choisi dans le groupe constitué par les filtres UV, les agents antioxydants, les parfums, les vitamines, les huiles, les solvants organiques, les agents épaississants, les agents émollients, les agents hydratants, les agents anti-âge, les prébiotiques et/ou dérivés de probiotiques, et leurs mélanges.
La présente invention va désormais être illustrée dans les exemples non limitatifs suivants.
Les % sont exprimés en poids de matière première par rapport au poids total de la composition, sauf indication contraire.
EXEMPLES
Les études menées par la Demanderesse et illustrées dans les exemples ci-après visent à évaluer les différentes activités biologiques de l’extrait de levure Debaryomyces nepalensis utilisé par l’invention. Notamment l’extrait de levure utilisé dans ces exemples et désigné indifféremment « extrait de levure Debaryomyces nepalensis », « extrait de levure de mauve » ou « LM2 », correspond à l’extrait obtenu selon le procédé d’extraction illustré à l’Exemple 1. Cet extrait est utilisé dans le milieu de culture des cellules aux concentrations 1 % et 3 %.
Exemple 1 : Extrait de levure Debaryomyces nepalensis utilisé dans l’invention
Production de la biomasse :
La biomasse de levures Debaryomyces nepalensis a été produite comme décrit ci- dessus. Notamment, dans une première étape, les levures Debaryomyces nepalensis de la souche déposée à la Mycothèque de l’Université catholique de Louvain sous le numéro
BCCM 56661 ont été mises en culture dans un milieu pour levures de type « ATCC Medium : 1245 YPD Medium »._Puis, la culture cellulaire a été menée de manière classique pour l’homme du métier afin d’obtenir une biomasse de la levure en quantité industrielle. Une fois la biomasse produite, les molécules produites ainsi que la biomasse sont récupérées par centrifugation.
Procédé d’extraction :
L’extrait de levure utilisé dans les exemples ci-après est un hydrolysat obtenu par la mise en œuvre des étapes suivantes :
- Solubilisation de la biomasse de Debaryomyces nepalensis dans l’eau à raison de 50 g/L,
- Hydrolyse acide,
- Séparation des phases soluble et insoluble,
- Purification de la phase soluble pour éliminer les molécules de tailles supérieures à 5 kDa,
- Filtration et filtration stérilisante.
L’extrait est caractérisé par :
- Une teneur en matières sèches de 14,6 g/L,
- Une quantité de sucres (méthode de Dubois) de 6,6 g/L (soit 45,2 %) dont une partie, se présente sous forme d’oligosaccharides phosphatés,
- Une quantité de protéines (méthode de Lowry) de 0,53 g/L (soit 3,6 %).
Exemple 2 : Effets de l’extrait de levure Debaryomyces nepalensis sur l’expression de gènes clefs de plusieurs processus cutanés d’intérêt
Cette étude, menée sur des cultures de kératinocytes ou de fibroblastes, illustre les effets de l’extrait de levure Debaryomyces nepalensis sur l’expression de gènes clefs impliqués dans plusieurs processus cutanés d’intérêt tels que la fonction barrière, l’hydratation, l’équilibre du microbiote cutané, le renouvellement cellulaire ou encore la protection contre le stress.
Matériel et méthodes Cellules étudiées
- Kératinocytes humains normaux (ou KHN) issus d’une plastie abdominale. Les cellules ont été ensemencées dans du milieu de culture Epilife complémenté avec du HKGS (Human Kératinocytes Growth Supplément) à une densité d’ensemencement de 100 000 cellules par puits dans des plaques 12 puits.
- Fibroblastes humains normaux (ou FHN) issus d’une plastie abdominale. Les cellules ont été ensemencées dans du milieu DMEM contenant 1 g/L de glucose complémenté de 10 %
de sérum de veau foetal avec une densité d’ensemencement de 250 000 cellules par puits, dans des plaques 6 puits. La veille du traitement avec l’extrait, les cellules ont été cultivées dans du milieu DMEM contenant 1 g/L de glucose avec 0,5 % de sérum de veau foetal.
Traitement des cellules avec l’extrait de levure de mauve
- Traitement des KHN : à 50 % de confluence, les cellules ont été traitées avec l’extrait LM2 aux deux doses préparées extemporanément à la concentration finale d’utilisation (1 % et 3 %) dans du milieu de culture Epilife. Après 24 heures de traitement, les cellules ont été récupérées afin d’en extraire les ARN totaux.
- Traitement des FHN : A confluence, les cellules ont été traitées avec l’extrait LM2 aux deux doses d’ingrédients actifs préparées extemporanément à la concentration finale d’utilisation (1 % et 3 %) dans du milieu DMEM contenant 1 g/L de glucose + 0,5 % sérum de veau foetal. Après 24 heures de traitement, les cellules ont été récupérées afin d’en extraire les ARN totaux.
Mesure de l’expression génique par RT-PCR quantitative
- Obtention des ARN totaux à l’aide du MicrolabSTAR (Hamilton)
Le milieu de culture des cellules a été éliminé, et 250 pL de tampon de lyse RLT (fourni dans le kit Nucleospin RNA trace (Macherey-Nagel) ont été ajoutés. Les cellules ont été raclées à l’aide d’un Cell Scraper puis, le lysat cellulaire a été récupéré dans une deepwell 1 ,2 mL (fourni dans le kit Nucleospin RNA). Les ARN totaux ont été extraits selon les protocoles mis au point.
Les solutions d’ARN totaux obtenues ont été dosées, et leur qualité vérifiée, à l'aide d'un lecteur de microplaques, le Lunatic (UnchainedLab) couplé au MicrolabSTAR. Cet appareil relié à l'ordinateur pilotant la plateforme Robotique, possède le logiciel spécifique d'analyse des résultats (Lunatic Anlaysis). La technique nécessite une micro plaque de 96 puits (Lunatic plate).
- Synthèse des ADN complémentaires
Le kit de reverse transcription (RT) High Capacity Reverse Transcription Kit (Thermo Fisher) a été utilisé selon le protocole fourni. 1000 ng d’ARN totaux ont été dilués dans de l’eau pour un volume final de 50 pL. Ils ont été ensuite incubés pendant 10 minutes à 25 °C puis 2 heures à 37 °C en présence de 50 pL de mélange réactionnel de High Capacity Reverse Transcription Kit 2X préalablement préparé comme indiqué au tableau 1. Les différentes incubations ont été faites au sein du TRobot (Biométra).
- Réalisation de la PCR-TaqMan Low Density Array
25 mI_ de chaque RT ont été mélangés à 100 mΐ d’eau puis 125 mI_ de TaqMan Gene Expression master mix (ThermoFisher) ont été ajoutés. Après homogénéisation, 100 pL ont été déposés sur les cartes de microfluidiques :
- Carte microfluidique 96 gènes spécifique pour les KHN
- Carte microfluidique 96 gènes spécifique pour les FHN
Après remplissage des différentes cupules, ces cartes ont été centrifugées puis scellées.
Le CD correspondant au profil des gènes déposés sur les plaques a été chargé dans le logiciel SDS 2.3, précisant l’emplacement de chaque gène sur la carte. Le gène contrôle (ou « endogeneous » gene) à utiliser pour la normalisation des résultats a été à indiquer avant le lancement de la PCR. Cette dernière a été réalisée selon le protocole fourni par Applied Biosystems dans l’appareil ABI Prism 7900HT Sequence détection System. Les étapes de la qPCR sont 2 min à 50°C, 10 min à 94,5°C puis 30s à 97°C et 1 min à 59,7°C pour 40 cycles.
Analyse statistique
La PCR quantitative en temps réel peut être exploitée si son efficacité est comprise entre 90 % et 110 %. Pour chaque échantillon, le nombre de cycles auquel apparaît le signal a été déterminé par le logiciel 5DS 2.4. Pour un même essai, les niveaux d’expression des transcrits d’intérêt obtenus ont été normalisés par rapport à la valeur obtenue pour le gène de ménage Beta-2-microglobuline. Ce gène dont l’expression est constitutive et invariante permet de s’affranchir toutes variations induites au cours de l’expérience (dosage des ARNs totaux, pipetages, étape de réverse transcription, PCR dans l’appareillage).
Dans la méthode de RT-PCR TLDA, la quantification est effectuée en utilisant la méthode comparative de AACt. Les valeurs de quantification relative (RQ) obtenues correspondent au niveau d’amplitude (x fois plus ou moins que le contrôle) de l’expression par rapport à notre contrôle ici le non irradié. Le RQ est obtenu par le calcul suivant où le contrôle est égal à 1 : RQ = 2-AACt = 2-(ACt traité - ACt non traité)
ACt traité = Ct gène cible traité - Ct gène de ménage traité
ACt non traité = Ct gène cible non traité - Ct gène de ménage non traité
Afin d’évaluer des variations d’activité transcriptionnelle statistiquement significative, le test t de Student a été utilisé. Chaque condition a été réalisée en triplicat (3 non traités et 3 traités dans les mêmes conditions). Le test-F de Fischer a tout d’abord été appliqué en comparant les deux matrices de données. Lorsque la valeur est supérieure à a = 0,05 alors la variance pour le test t de Student est de 2, lorsque le test-F de Fischer est inférieur à a = 0,05 alors la variance sera égale à 3. Les variations transcriptionnelles retenues sont celles qui ont un test t de Student inférieur à p = 0,05.
Résultats Tableau 2 : Expression génique dans des cultures de KHN
Tableau 3 : Expression génique dans des cultures de FHN
En conclusion : l’extrait de levure Debaryomyces nepalensis offre une vaste palette d’activités biologiques en modulant, au niveau cutané, l’expression de nombreux gènes clefs intervenant dans des processus biologiques variés tels que la fonction barrière (KLK7, SPRR1B, COL17A1 , OCLN, CLDN1 , CTSS), l’hydratation (HAS3, AQP3, AQP9, FABP5) l’équilibre du microbiote (DEFB103A et 3B, PI3) le renouvellement cellulaire (SMAD4, SMAD7, CDKN1A ou p21 ) la protection contre le stress (HSPA1A et 1B, SOD1 , ABCC1 , ABCC2, LONP1 ).
Ainsi, l’extrait de levure Debaryomyces nepalensis utilisé dans les compositions cosmétiques de l’invention permet de favoriser et/ou stimuler le renouvellement épidermique, le métabolisme énergétique des cellules cutanées, la barrière cutanée et son film hydrolipidique, l’hydratation de la peau ainsi que l’équilibre du microbiote cutané. Cet extrait présente ainsi un intérêt cosmétique notamment pour améliorer l’intégrité et la résistance de la peau aux stress, et/ou prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, notamment la perte de fermeté, la perte d’élasticité, la diminution de l’épaisseur de la peau, l’apparition de rides et/ou ridules et/ou la sécheresse de la peau.
Exemple 3 : Effets de l’extrait de levure Debaryomyces nepalensis sur l’expression des gènes des transporteurs et récepteurs vitaminiques
Cette étude, menée sur des cultures de kératinocytes, de mélanocytes ou de fibroblastes, illustre les effets de l’extrait de levure Debaryomyces nepalensis utilisé par l’invention sur l’expression de gènes des transporteurs et récepteurs vitaminiques. Matériel et méthodes
Traitement des cellules avec l’extrait de levure de mauve
- Traitement des KHN : des KHN issus d’une plastie abdominale ont été utilisées. Les cellules ont été cultivées dans le milieu Epilife complet à P5 avec une densité d’ensemencement de 50 000 cellules par puits en plaque 12 puits. A sub-confluence, les cellules ont été traitées pendant 24 heures puis les cellules ont été récupérées afin d’en extraire les ARN totaux.
- Traitement des FHN : des FHN issus d’une plastie abdominale ont été utilisées. Les cellules ont été cultivées dans le milieu DMEM 1 g/L glucose complémenté de 10 % de
sérum de veau foetal à P7 avec une densité d’ensemencement de 200 000 cellules par puits en plaque 6 puits. La veille du traitement, les cellules ont été cultivées dans du milieu DMEM 1 g/L glucose complémenté de 0,5 % de sérum de veau foetal. Les cellules ont été traitées pendant 24 heures puis les cellules ont été récupérées afin d’en extraire les ARN totaux.
- Traitement des MHN : des MHN issus d’une plastie abdominale ont été utilisées. Les cellules ont été cultivées dans le milieu de culture 254 complet à P7 avec une densité d’ensemencement de 200 000 cellules par puits en plaque 6 puits. A confluence, soit une semaine après l’ensemencement, les cellules ont été traitées pendant 24 heures puis les cellules ont été récupérées afin d’en extraire les ARN totaux.
Mesure de l’expression génique par RT-PCR quantitative et analyses statistiques
Le protocole utilisé est le même que pour l’Exemple 2
Résultats
Tableau 4 : Expression génique dans des cultures de KHN
Tableau 5 : Expression génique dans des cultures de FHN
Tableau 6 : Expression génique dans des cultures de MHN
En conclusion : l’extrait de levure Debaryomyces nepalensis permet de stimuler l’expression des transporteurs et/ou récepteur vitaminiques de la peau.
De par ces effets, l’extrait de levure Debaryomyces nepalensis utilisé par les compositions cosmétiques de l’invention présente des effets pro-vitaminique et pro nutritionnel sur les cellules cutanées. Cet extrait présente donc un intérêt cosmétique notamment pour prévenir et/ou corriger l’altération de processus cutanés essentiels à la nutrition cutanée et ainsi favoriser la qualité, la résistance, l’esthétique et la jeunesse de la peau.
Exemple 4 : Effet pro-circadien de l’extrait de levure Debaryomyces nepalensis
Cette étude, menée sur des cultures de kératinocytes ou de mélanocytes, illustre les effets de l’extrait de levure Debaryomyces nepalensis sur le cycle circadien en mesurant l’expression des gènes horloge dans les cellules cutanées.
Matériel et méthodes
Traitement des cellules avec l’extrait LM2
- Traitement des KHN : des KHN issus d’une plastie abdominale ont été utilisées. Les cellules ont été cultivées dans le milieu Epilife complet à P5 avec une densité d’ensemencement de 50 000 cellules par puits en plaque 12 puits. A sub-confluence, les cellules ont été traitées pendant 24 heures puis les cellules ont été récupérées afin d’en extraire les ARN totaux.
- Traitement des MHN : des MHN issus d’une plastie abdominale ont été utilisées. Les cellules ont été cultivées dans le milieu de culture 254 complet à P7 avec une densité d’ensemencement de 200 000 cellules par puits en plaque 6 puits. A confluence, soit une semaine après l’ensemencement, les cellules ont été traitées pendant 24 heures puis les cellules ont été récupérées afin d’en extraire les ARN totaux.
Mesure de l’expression génique par RT-PCR quantitative et analyses statistiques
Le protocole utilisé est le même que pour l’Exemple 1
Résultats
Tableau 7 : Expression génique dans des cultures de KHN
Tableau 8 : Expression génique dans des cultures de MHN
En conclusion : l’extrait de levure Debaryomyces nepalensis permet de stimuler plusieurs gènes impliqués dans l’horloge biologique et le rythme circadien des cellules cutanées.
De par ces effets sur les gènes horloge de la peau, l’extrait de levure Debaryomyces nepalensis utilisé dans les compositions de l’invention présente un intérêt cosmétique en tant qu’actif anti-âge.
Exemple 5 : Effet de l’extrait de levure Debaryomyces nepalensis sur la synchronisation du rythme circadien
Cette étude explore le potentiel de l’extrait de levure Debaryomyces nepalensis à synchroniser le rythme circadien de fibroblastes dermiques. Matériel et méthodes Culture cellulaire
Fibroblastes humains normaux (ou FHN) issus d’une plastie abdominale. Les cellules ont été décongelées au passage 3 dans une flasque de 150 cm2 dans le milieu DMEM 1 g/L glucose avec 10 % de sérum de veau fœtal. A confluence, elles ont été décollées du support de culture par action de la trypsine, puis ensemencées dans des boîtes de Pétri de 35 mm de diamètre prévue pour l’étude (Nunclon, Fisher) en milieu DMEM 1 g/L glucose complémenté de 10 % de SVF. 30 boîtes de Pétri ont été ensemencées, 3 boîtes témoin non traitées, 3 boîtes traitées avec l’extrait de levure Debaryomyces
nepalensis utilisé selon l’invention à 3 % (LM2) et 3 boîtes témoins dexaméthasone 0,1 mM.
- Les particules virales pLV6-Bmluc : vecteur lentiviral contenant le promoteur codant pour le gène horloge Bmall (organisme d'origine: souris) lié au gène rapporteur luciférase (organisme d'origine: luciole). pMD2G : plasmide d'enveloppe (VSV-G) pour la production de particules virales (addgene). psPAX2 : plasmide d’emballage pour la production de particules virales contenant le promoteur CAG pour l'expression de protéines d'emballage (addgene).
Ces 3 plasmides ont été gracieusement offerts par: Prof. Steven A. Brown / Chronobiology and Sleep Research Group / Institute of Pharmacology and Toxicology / University of Zurich / Winterthurerstrasse 190 - 8057 Zurich, Switzerland (Brown, Steven A et al. “The period length of fibroblast circadian gene expression varies widely among human individuals.” PLoS biology vol. 3,10 (2005): e338. doi: 10.1371 / journal, pbio.0030338).
Principe et chronologie de l’étude
Les cellules transduites avec le lentivirus pLV6-Bmluc sont luminescentes : elles expriment la luciférase sous le contrôle du promoteur du gène horloge BMAL1 (gène d’intérêt dont l’expression a été quantifiée). La luciférase catalyse une réaction d’oxydation de la luciférine (ajoutée en excès) en oxyluciférine, avec émission de photons (560 nm).
Transduction des FHN avec les particules lentivi raies BMAL1-LUC
La transduction des cellules a été effectuée à 30-50 % de confluence. La solution de lentivirus (production titrée à 6,8.106), conservée à -80 °C, a été décongelée dans un labtop cooler à 4 °C. Pour l’infection une concentration de lentivirus 10X (solution stock 100X dans un volume de 50 pL) a été utilisée dans un volume de 3 mL/BP35 mm. Pour 30 boîtes de Pétri, un volume de 100 mL de solution d’infection (100 mL de DMEM 1 g/L glucose + 10 % SVF, 50 pL de protamine sulfate et 250 pL de lentivirus 100X) a été préparé.
Après aspiration du milieu de culture initial, 3 mL de solution de transduction ont été ajoutés dans chacune des boîtes, ces dernières ont ensuite été placées à 37 °C et 5 % de C02 pendant 20 heures.
Le lendemain, l’infection a été arrêtée par aspiration du milieu et remplacée par du milieu DMEM 1 g/L glucose + 10 % SVF neuf. Le milieu a été renouvelé jusqu’à confluence complète des cellules pour procéder à la suite de l’étude.
Synchronisation des cellules
Pour visualiser le rythme d’expression du gène BAAAL1 au cours du temps, les cellules ont été synchronisées afin qu’elles émettent toutes le même signal de fluorescence en même temps, de telle sorte qu’il soit possible de mesurer les variations cycliques. Pour se faire un changement de milieu contenant 10 % de sérum, et un agent synchronisateur connu, a été effectué.
Le but de cette étude a été de regarder le pouvoir synchronisateur des ingrédients sélectionnés. La dexaméthasone, un puissant synchronisateur du rythme circadien, a été utilisé comme témoin positif pour comparer avec les ingrédients à tester. En parallèle, des cultures témoins sans dexaméthasone ni ingrédient à tester (témoin négatif) ont été réalisées.
Le milieu de culture a été aspiré puis remplacé par 2 mL de milieu DMEM 1 g/L glucose + 10 % SVF contenant ou non (témoins) 100 mM de dexaméthasone ou l’extrait de levure Debaryomyces nepalensis selon l’invention à la concentration 3 %. Le traitement a été effectué pendant 30 minutes à 37 °C + 5 % C02 pour la dexaméthasone et 1 heure pour les ingrédients actifs. Les boîtes « témoins de non synchronisation » ne contenant que du milieu de culture. Après le traitement, les cellules ont été rincées deux fois avec du PBS. Après rinçage, 3 mL de milieu d’enregistrement (Annexe) a été déposé dans chacune des boîtes, ces dernières ont alors été scellées avec de la graisse silicone puis placées dans le LumiCycle.
Enregistrement de la Bioluminescence
L’enregistrement de la bioluminescence a été fait au moyen d’un LumiCycle (Actimetrix) permettant l’enregistrement en boucle de 32 échantillons par vagues successives de 4 échantillons simultanés. La fréquence d’enregistrement a été fixée à une fois toutes les 10 minutes. L’appareil permet le maintien en culture des cellules dans des conditions contrôlées de température.
Analyses statistiques
Le logiciel d’analyse LumiCycle Analysis et le logiciel Sigma PLOT ont été utilisés, afin d’obtenir les différents paramètres du rythme et leurs significativités.
Résultats
La figure 1 illustre l’enregistrement du rythme circadien des cellules cutanées placées dans les différentes conditions expérimentales. Il peut être observé que le rythme
circadien diminue dans le temps (phénomène d’amortissement ou d’affaiblissement). Ce phénomène correspond à une désynchronisation progressive des cellules entre elles après leur synchronisation par le sérum.
L’analyse de ces courbes est réalisée avec le logiciel Sigma PLOT avec ses principaux paramètres résumés dans le tableau 13 :
- La période du rythme observé correspondant au temps entre 2 pics ou 2 minimas de fluorescence,
- La vitesse d’amortissement de ce rythme correspondant à la pente de la droite décrivant la perte progressive du rythme circadien. Ces droites sont représentées dans la figure ci- dessous.
Tableau 9 : Effet de l’actif sur le rythme circadien
Ainsi la dexamethasone (DX), un puissant synchronisateur du rythme circadien, limite fortement la vitesse d’amortissement du rythme circadien à 0,1 mM avec une pente calculée de -259 contre -853 pour le témoin non traité (NT) soit une correction de 70 % de la vitesse d’amortissement. L’extrait de levure Debaryomyces nepalensis utilisé selon l’invention, testé à la concentration de 3 %, limite également la vitesse d’amortissement du rythme circadien avec une pente calculée de -587 contre -853 pour le témoin non traité (NT) soit une correction de 31 % de la vitesse d’amortissement. Si l’on exprime l’efficacité de l’extrait de levure Debaryomyces nepalensis utilisé à 3 % par rapport à celle de la dexamethasone à 0,1 mM par la formule [(LM2-NT) / (DX-NT) x 100] on obtient une valeur d’efficacité de 45 %.
Par ailleurs, ni l’extrait de levure de mauve, ni la dexamethasone (DX) ne modifient la période du rythme circadien qui reste très proche de 24h.
En conclusion : L’extrait de levure Debaryomyces nepalensis selon l’invention permet avantageusement de ralentir l’affaiblissement dans le temps de la synchronisation circadienne des cellules de la peau.
De par ces effets sur les gènes horloge de la peau, l’extrait de levure Debaryomyces nepalensis de l’invention présente un intérêt cosmétique en tant qu’actif anti-âge.
Formulations cosmétiques
Les compositions sont préparées selon les méthodes classiques utilisées dans le domaine cosmétique. Les % sont exprimés en poids de matière première par rapport au poids total de ladite composition.
Composition sous forme d’une crème
*tel que décrit dans le matériel et méthode
Appliquée sur la peau du visage, la crème améliore la barrière cutanée et l’hydratation de la peau, elle prévient notamment la sécheresse de la peau et diminue les signes du vieillissement cutané.
Composition sous la forme d’un sérum
*tel que décrit dans le matériel et méthode
Appliqué sur la peau du visage, le sérum permet d’améliorer la fermeté de la peau, de ou prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, notamment la perte de fermeté, la perte d’élasticité, la diminution de l’épaisseur de la peau, et/ou l’apparition de rides et/ou ridules.
Claims
1. Composition cosmétique comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un extrait de levure Debaryomyces nepalensis et au moins un adjuvant cosmétique choisi dans le groupe constitué par les filtres UV, les agents antioxydants, les parfums, les vitamines, les huiles, les agents épaississants, les agents émollients, les agents hydratants, les agents anti-âge, les prébiotiques et/ou fractions de probiotiques, et leurs mélanges ; caractérisée en ce que la levure est choisie parmi la souche identifiée par le numéro BCCM 56661 et la souche identifiée par le numéro CLIB n°2137.
2. Composition cosmétique selon la revendication 1 , caractérisée en ce que ledit extrait de levure Debaryomyces nepalensis est un hydrolysat de levure Debaryomyces nepalensis.
3. Composition cosmétique selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que ledit extrait de levure Debaryomyces nepalensis est obtenu par un procédé comprenant au moins les étapes de : a) Solubilisation de la biomasse dans l’eau, b) Hydrolyse, c) Séparation des phases soluble et insoluble pour récupérer la phase soluble, d) Purification(s), e) Filtration(s), f) Filtration(s) stérilisante(s).
4. Composition cosmétique selon l’une quelconque de revendications 1 à 3, caractérisée en ce que ledit extrait de levure est présent en une teneur allant de 0,01 % à 10 %, de préférence de 0,1 % à 5 %, de préférence encore de 1 % à 3 % en poids de matière première par rapport au poids total de la composition.
5. Composition cosmétique selon l’une quelconque de revendications 1 à 4, caractérisée en ce qu’elle est sous la forme d’une crème, émulsion huile-dans-eau ou eau-dans-huile ou émulsion multiple, solution, huile, suspension, gel, lait, lotion, sérum, baume, stick ou poudre.
6. Procédé cosmétique de soin et/ou de maquillage des matières kératiniques, plus particulièrement de la peau et/ou des lèvres et notamment de la peau du visage et/ou du cou, comprenant l’application topique sur lesdites matières kératiniques, d’une composition cosmétique telle que définie dans l’une quelconque des revendications 1 à 5.
7. Procédé cosmétique selon la revendication 6, caractérisé en ce que qu’il destiné à favoriser et/ou stimuler le renouvellement épidermique, le métabolisme énergétique des cellules cutanées, la nutrition des matières kératiniques et/ou l’efficacité vitaminique, la barrière cutanée et son film hydrolipidique, l’hydratation de la peau, l’équilibre du microbiote cutané, et/ou améliorer l’intégrité et la résistance de la peau aux stress, améliorer la synchronisation circadienne des cellules cutanées, en particulier l’hydratation circadienne de la peau, et/ou prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, notamment la perte de fermeté, la perte d’élasticité, la diminution de l’épaisseur de la peau, l’apparition de rides et/ou ridules, et/ou la sécheresse de la peau.
8. Procédé cosmétique selon la revendication 6 ou la revendication 7, caractérisé en ce que ladite composition cosmétique est appliquée sur une peau fatiguée, une peau atone, impactée par un contexte nutritionnel défavorable ou déséquilibré, de stress émotionnel ou de manque de sommeil, une peau sèche et/ou une peau exposée à un stress oxydant.
9. Utilisation cosmétique d’un extrait de levure Debaryomyces nepalensis tel que défini dans l’une quelconque des revendications 1 à 3, pour une application topique sur les matières kératiniques, plus particulièrement de la peau et/ou les lèvres et notamment de la peau du visage et/ou du cou, en tant qu’actif cosmétique destiné à favoriser et/ou stimuler le renouvellement épidermique, le métabolisme énergétique des cellules cutanées, la nutrition des matières kératiniques et/ou l’efficacité vitaminique, la barrière cutanée et son film hydrolipidique, l’hydratation de la peau, l’équilibre du microbiote cutané, et/ou améliorer l’intégrité et la résistance de la peau aux stress, améliorer la synchronisation circadienne des cellules cutanées, en particulier l’hydratation circadienne de la peau, et/ou prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, notamment la perte de fermeté, la perte d’élasticité, la diminution de l’épaisseur de la peau, l’apparition de rides et/ou ridules, et/ou la sécheresse de la peau.
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Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2797186A1 (fr) * | 1999-08-02 | 2001-02-09 | Silab Sa | Procede d'extraction d'un principe actif a partir de levures, notamment pour le traitement des rides, principe actif obtenu, compositions cosmetiques et traitement adaptes |
| FR2913339A1 (fr) * | 2007-03-07 | 2008-09-12 | Limousine D Applic Biolog Dite | Utilisation cosmetique d'un extrait de debaryomyces hansenii. |
-
2019
- 2019-12-19 FR FR1914870A patent/FR3104999B1/fr active Active
-
2020
- 2020-12-21 WO PCT/FR2020/052585 patent/WO2021123699A1/fr active Application Filing
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2797186A1 (fr) * | 1999-08-02 | 2001-02-09 | Silab Sa | Procede d'extraction d'un principe actif a partir de levures, notamment pour le traitement des rides, principe actif obtenu, compositions cosmetiques et traitement adaptes |
| FR2913339A1 (fr) * | 2007-03-07 | 2008-09-12 | Limousine D Applic Biolog Dite | Utilisation cosmetique d'un extrait de debaryomyces hansenii. |
Non-Patent Citations (7)
| Title |
|---|
| BROWN, STEVEN A ET AL.: "The period length of fibroblast circadian gene expression varies widely among human individuals", PLOS BIOLOGY, vol. 3, no. 10, 2005, pages e338 |
| L.R. SNYDER: "Classification of the solvent properties of common liquids", JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY, vol. 92, 1974, pages 223 - 230, XP026527138, DOI: 10.1016/S0021-9673(00)85732-5 |
| PRADEEP LAL ET AL: "Use of Response Surface Methodology to Study the Combined Effect of Salt, pH, and Temperature on the Growth of Food-Spoiling Halotolerant Yeast,NCYC 3413", FOOD AND BIOPROCESS TECHNOLOGY ; AN INTERNATIONAL JOURNAL, SPRINGER-VERLAG, NEW YORK, vol. 4, no. 5, 5 February 2009 (2009-02-05), pages 723 - 730, XP019905894, ISSN: 1935-5149, DOI: 10.1007/S11947-009-0183-1 * |
| S.GUEST: "Effect of hydration on the tactile and thermal sensitivity of the lip", PHYSIOLOGY ET BEHAVIOR, vol. 123, 2014, pages 127 - 135 |
| SAWAN KUMAR ET AL: "Differential Response of the Catalase, Superoxide Dismutase and Glycerol-3-phosphate Dehydrogenase to Different Environmental Stresses inNCYC 3413", CURRENT MICROBIOLOGY, SPRINGER-VERLAG, NE, vol. 62, no. 2, 20 July 2010 (2010-07-20), pages 382 - 387, XP019873887, ISSN: 1432-0991, DOI: 10.1007/S00284-010-9717-Z * |
| SAWAN KUMAR ET AL: "Metabolism of glucose and xylose as single and mixed feed inNCYC 3413: production of industrially important metabolites", APPLIED MICROBIOLOGY AND BIOTECHNOLOGY, SPRINGER, BERLIN, DE, vol. 89, no. 5, 18 November 2010 (2010-11-18), pages 1405 - 1415, XP019880857, ISSN: 1432-0614, DOI: 10.1007/S00253-010-2997-1 * |
| SAWAN KUMAR ET AL: "Osmotic adaptation in halotolerant yeast, Debaryomyces nepalensis NCYC 3413: role of osmolytes and cation transport", EXTREMOPHILES ; LIFE UNDER EXTREME CONDITIONS, SPRINGER-VERLAG, TO, vol. 13, no. 5, 11 July 2009 (2009-07-11), pages 793 - 805, XP019742654, ISSN: 1433-4909, DOI: 10.1007/S00792-009-0267-X * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR3104999B1 (fr) | 2022-02-04 |
| FR3104999A1 (fr) | 2021-06-25 |
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