FR3104999A1 - Composition cosmétique comprenant un extrait de levureDebaryomyces nepalensis - Google Patents
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Abstract
La présente invention concerne une composition cosmétique comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un extrait de levure Debaryomyces
nepalensis et au moins un adjuvant cosmétique choisi dans le groupe constitué par les filtres UV, les agents antioxydants, les parfums, les vitamines, les huiles, les agents épaississants, les agents émollients, les agents hydratants, les agents anti-âge, les prébiotiques et/ou dérivés de probiotiques, et leurs mélanges.
Description
DOMAINE DE L'INVENTION
La présente invention concerne le domaine de la cosmétique. Elle concerne notamment une composition cosmétique comprenant un extrait de levureDebaryomyces nepalensisdestinée, notamment, à améliorer l’hydratation circadienne de la peau et ainsi à prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané.
ETAT DE LA TECHNIQUE
Le tissu cutané est la première barrière de protection de l'organisme vis-à-vis de l'environnement. Il est ainsi quotidiennement soumis à des facteurs d’origine externe ou interne susceptibles de fragiliser la barrière cutanée, favoriser la déshydratation de la peau et/ou des lèvres et altérer leur aspect esthétique et leur jeunesse.
La peau du visage est une partie du corps tout particulièrement sensible à la perte d’eau. Une bonne hydratation de la peau et des lèvres est indispensable au confort, qui influence notamment la sensibilité au toucher (Effect of hydration on the tactile and thermal sensitivity of the lip, S.Guest, Physiology & Behavior 123 (2014), 127-135).
De nombreuses solutions cosmétiques ont été proposées pour agir sur la fonction barrière et pour améliorer l’hydratation de la peau, mais il demeure un besoin constant de trouver de nouveaux agents capables de nourrir et hydrater la peau et/ou les lèvres, de rétablir la barrière cutanée et ainsi de prévenir et/ou diminuer les effets délétères subis quotidiennement par notre peau et qui favorisent le vieillissement cutané.
De manière inattendue, la Demanderesse a mis en évidence les effetsin vitrod’un extrait de levureDebaryomyces nepalensis. Cet extrait de levure permet notamment de favoriser et/ou stimuler le renouvellement épidermique, le métabolisme énergétique des cellules cutanées, la nutrition des matières kératiniques et/ou l’efficacité vitaminique, la barrière cutanée et son film hydrolipidique, l’hydratation de la peau, l’équilibre du microbiote cutané, et/ou améliorer l’intégrité et la résistance de la peau aux stress, améliorer la synchronisation circadienne des cellules cutanées. Il est donc envisagé d’utiliser cet extrait de levure comme actif cosmétique pour stimuler et/ou favoriser l’hydratation circadienne de la peau, et/ou prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, notamment la perte de fermeté, la perte d’élasticité, la diminution de l’épaisseur de la peau, l’apparition de rides et/ou ridules, et/ou la sécheresse de la peau.
Le premier objet de l’invention concerne une composition cosmétique comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un extrait de levureDebaryomyces nepalensiset au moins un adjuvant cosmétique choisi dans le groupe constitué par les filtres UV, les agents antioxydants, les parfums, les vitamines, les huiles, les agents épaississants, les agents émollients, les agents hydratants, les agents anti-âge, les prébiotiques et/ou dérivés de probiotiques, et leurs mélanges.
Par «milieu physiologiquement acceptable», on entend un milieu compatible avec les matières kératiniques, en particulier la peau et/ou les lèvres.
On entend par « matières kératiniques » selon l’invention la peau et/ou ses phanères, et les lèvres. En particulier, il s’agira de la peau du visage, du cou et/ou du corps, et des lèvres.
Par «adjuvant cosmétique» on entend une substance dépourvue d’effet cosmétique en tant que telle, mais utile à l’incorporation de l’extrait de levureDebaryomyces nepalensisdans la composition cosmétique de l’invention ou à la mise en forme celle-ci.
De préférence, ledit extrait de levureDebaryomyces nepalensisest un extrait aqueux, obtenu par un procédé comprenant au moins les étapes de:
a) Solubilisation de la biomasse dans l’eau,
b) Hydrolyse,
c) Séparation des phases soluble et insoluble pour récupérer la phase soluble,
d) Purification(s),
e) Filtration(s),
f) Filtration(s) stérilisante(s).
L’invention porte encore sur un procédé cosmétique de soin et/ou de maquillage des matières kératiniques, plus particulièrement de la peau et/ou des lèvres et notamment de la peau du visage et/ou du cou, comprenant l’application topique sur lesdites matières kératiniques, d’une composition cosmétique selon l’invention.
Le procédé cosmétique de l’invention est notamment destiné à favoriser et/ou stimuler le renouvellement épidermique, le métabolisme énergétique des cellules cutanées, la nutrition des matières kératiniques et/ou l’efficacité vitaminique, la barrière cutanée et son film hydrolipidique, l’hydratation de la peau, l’équilibre du microbiote cutané, et/ou améliorer l’intégrité et la résistance de la peau aux stress, améliorer la synchronisation circadienne des cellules cutanées, en particulier l’hydratation circadienne de la peau, et/ou prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, notamment la perte de fermeté, la perte d’élasticité, la diminution de l’épaisseur de la peau, l’apparition de rides et/ou ridules, la sécheresse de la peau.
Par «favoriser et/ou stimuler l’équilibre du microbiote cutané» on entend favoriser et/ou stimuler l’équilibre de la population de micro-organismes qui, de par leur diversité, participent au contrôle de l'équilibre qui caractérise une peau saine et participent à la protection de l’organisme en limitant le risque de colonisation de la peau par des bactéries pathogènes.
Par «améliorer la synchronisation circadienne des cellules cutanées, en particulier l’hydratation circadienne de la peau», on entend notamment selon l’invention favoriser la persistance du rythme biologique des gènes horloges et par conséquence des gènes dont l’expression est sous leur dépendance, incluant des gènes participant à l’hydratation cutanée tels que les aquaporines.
La présente invention porte encore sur l’utilisation cosmétique d’un extrait de levureDebaryomyces nepalensisselon l’invention, pour une application topique sur les matières kératiniques, plus particulièrement de la peau et/ou les lèvres et notamment de la peau du visage et/ou du cou, en tant qu’actif cosmétique destiné à favoriser et/ou stimuler le renouvellement épidermique, le métabolisme énergétique des cellules cutanées, la nutrition des matières kératiniques et/ou l’efficacité vitaminique, la barrière cutanée et son film hydrolipidique, l’hydratation de la peau, l’équilibre du microbiote cutané, et/ou améliorer l’intégrité et la résistance de la peau aux stress, améliorer la synchronisation circadienne des cellules cutanées, en particulier l’hydratation circadienne de la peau, et/ou prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, notamment la perte de fermeté, la perte d’élasticité, la diminution de l’épaisseur de la peau, l’apparition de rides et/ou ridules, et/ou la sécheresse de la peau.
DESCRIPTION DES FIGURES
DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION
Extrait de levure Debaryomyces nepalensis
Les compositions cosmétiques de l’invention utilisent comme actif cosmétique un extrait de levureDebaryomyces nepalensis.
Par «Debaryomyces nepalensis» au sens de l’invention, on entend toute levure portant cette classification de la famille desDebaryomycetaceae. Elle peut être aussi référencée sous les appellations synonymes de :Debaryomyces cavensis,Debaryomyces japonicusetSaccharomyces disaccharomellis .Dans le cadre de la présente invention, les levures utilisées ne sont pas génétiquement modifiées.
L’extrait selon l’invention peut être un extrait de toute souche deDebaryomyces nepalensis. Préférentiellement, l’extrait selon l’invention est un extrait d’une souche deDebaryomyces nepalensisisolée et identifiée sur la rhizosphère de la planteMalva sylvestris. Il peut s’agir de la souche identifiée par le numéro NCYC 3413. Il peut s’agir plus particulièrement de la souche déposée à la Mycothèque de l’Université catholique de Louvain sous le numéro BCCM 56661 ou de la souche déposée dans la collection CIRM sous le numéro CLIB n°2137.
Debaryomyces nepalensisest une levure halotolérante impliquée dans la fermentation alimentaire. Elle forme des colonies de couleur blanche à crème, butyreuses. Elle se reproduit par bourgeonnement, n’a pas de filaments mais des asques persistants contenant chacun une ascospore.
A la connaissance de la Demanderesse, aucun extrait de levureDebaryomyces nepalensisn’a été décrit dans l’art antérieur pour une utilisation comme actif cosmétique présentant des propriétés remarquables au niveau des matières kératiniques chez l’Homme.
De préférence, la présente invention utilise des levuresDebaryomyces nepalensisisolées à partir de racines de mauve (Malva sylvestris).
L’extrait de levureDebaryomyces nepalensisutilisé dans la présente invention peut être inclus dans les compositions cosmétiques de l'invention sous une forme vivante, semi-active ou inactivée, morte. Il peut être inclus sous forme de fractions de composants cellulaires ou sous la forme de métabolites. Le microorganisme, métabolite(s) ou fraction(s) peu(ven)t également être introduit(s) sous la forme d'une poudre lyophilisée, d'un surnageant de culture et/ou le cas échéant sous une forme concentrée.
Selon un mode de réalisation particulier, la levureDebaryomyces nepalensisest mise en œuvre sous une forme inactivée voire morte, plus particulièrement sous forme d'un lysat.
Par «lysat», on entend notamment un matériau obtenu par lyse cellulaire des cellules du microorganisme considéré provoquant ainsi la libération des constituants biologiques intracellulaires naturellement contenus dans lesdites cellules. Le lysat mis en œuvre est formé en tout ou partie des constituants biologiques intracellulaires et des constituants des parois et membranes cellulaires. La présente invention concerne donc la mise en œuvre d'un lysat probiotique et/ou une de ses fractions et/ou un de ses métabolites.
Selon un mode de réalisation préféré, la lyse cellulaire est effectuée dans un solvant polaire.
Selon la présente invention, l’expression «solvant polaire» signifie que le solvant a une valeur d’indice de Polarité qui est égale ou supérieure à une valeur de 4. L’indice de polarité est une grandeur calculée sur la base de grandeurs thermodynamiques (de solubilité et de changement d’état) qui met en évidence le caractère plus ou moins polaire d’une molécule. On se reportera, pour les indices de polarité des solvants, à l'article de L.R. SNYDER : Classification of the solvent properties of common liquids ; Journal of Chromatography, 92 (1974), 223-230.
Les solvants polaires préférés sont ceux constitués d’un composé comprenant au moins une liaison covalente polaire de type O-H. A titre de solvant polaire particulièrement préféré, on choisit un solvant ou un mélange de solvants choisi(s) parmi l’eau, les alcools en C1-C4, tel que l’éthanol, les glycols, tels que l’éthylène glycol, le glycérol, le butylène glycol et le propylène glycol, et leurs mélanges.
L’extrait de levureDebaryomyces nepalensisutilisé dans l’invention est obtenu avantageusement au moyen d’un solvant polaire cosmétiquement acceptable.
De préférence, on utilisera l’eau, l’éthanol ou leur mélange, et de préférence encore l’eau.
Selon un mode de réalisation particulier et préféré, ledit extrait de levureDebaryomyces nepalensisutilisé par l’invention est un hydrolysat. Par «hydrolysat», on entend que la lyse est cellulaire est effectuée dans de l’eau. On parlera indifféremment d’hydrolysat ou d’extrait aqueux dans le reste de la description.
Par « hydrolysat de levureDebaryomyces nepalensis» au sens de l’invention, on entend tout extrait de levureDebaryomyces nepalensisobtenu par un procédé comprenant au moins une étape d'hydrolyse enzymatique ou chimique de la biomasse deDebaryomyces nepalensis.
Ainsi, selon un mode particulier et préféré, l’extrait de levureDebaryomyces nepalensisutilisé par l’invention est un hydrolysat de levureDebaryomyces nepalensis(non vivante).
Selon un autre mode particulier, il s’agit d’un hydrolysat de levureDebaryomyces nepalensis(non vivante) de la souche NCYC 3413.
Selon un autre mode particulier, il s’agit d’un hydrolysat de levureDebaryomyces nepalensis(non vivante) de la souche déposée à la Mycothèque de l’Université catholique de Louvain sous le numéro BCCM 56661.
Selon un autre mode particulier, il s’agit d’un hydrolysat de levureDebaryomyces nepalensis(non vivante) de la souche déposée dans la collection CIRM sous le numéro CLIB n°2137.
L’extrait peut être préparé par différents procédés d’extraction connus de l’Homme du métier, mettant en œuvre des étapes de: lyse, de préférence hydrolyse, desdites levuresDebaryomyces nepalensis, séparation des phases soluble et insoluble, purification, filtration et stérilisation, optionnellement séchage et éventuellement remise en solution.
Selon certains modes de réalisation, une culture de levuresDebaryomyces nepalensisest réalisée préalablement à la mise en œuvre du procédé d’extraction. Cette culture est notamment conduite, de manière classique pour l’Homme du métier, sur un milieu adapté à son développement (par exemple, milieu de culture pour levures ATCC Medium : 1245 YPD Medium), afin d’obtenir une biomasse de levures en quantité industrielle. Une fois la biomasse produite, les molécules produites ainsi que la biomasse sont récupérées par centrifugation.
La matière récupérée suite à cette étape de centrifugation est désignée de façon générique par le terme «biomasse».
Selon un mode de réalisation préféré, l’invention utilise un extrait de levureDebaryomyces nepalensisobtenu par la mise en œuvre des étapes suivantes:
a) Solubilisation de la biomasse dans de l’eau,
b) Lyse, de préférence hydrolyse,
c) Séparation des phases soluble et insoluble pour récupérer la phase soluble,
d) Purification(s), notamment par ultrafiltration,
e) Filtration(s),
f) Filtration(s) stérilisante(s), notamment sur filtre 0,22µm.
L’étape d’hydrolyse peut notamment être une étape d’hydrolyse enzymatique ou d’hydrolyse chimique. Il s’agit préférentiellement d’une étape d’hydrolyse chimique, en particulier d’une hydrolyse acide.
En outre, le procédé peut éventuellement comprendre une étape de traitement thermique de l’extrait.
Des étapes de décoloration ou désodorisation peuvent aussi être ajoutées.
Selon un mode de réalisation, l’extrait obtenu à l’issue de ce procédé d’extraction est un extrait se présentant sous une forme aqueuse.
Selon un autre mode de réalisation, l’extrait peut ensuite éventuellement être associé à un support d’atomisation et séché, pour se présenter sous forme solide.
Les étapes des procédés décrits ci‐avant, prises individuellement, sont usuelles dans le domaine des extractions d’actifs à partir de matières premières naturelles et l’Homme du métier est à même d’en ajuster les paramètres réactionnels sur la base de ses connaissances générales.
De manière avantageuse, ce procédé d’extraction permet d’obtenir un extrait de levure ne présentant pas de caractéristiques olfactives gênantes pouvant limiter son utilisation dans des produits de soin cosmétiques ce qui est généralement le cas pour des extraits de levure.
Selon un mode particulier et préféré, l’extrait de levureDebaryomyces nepalensisutilisé dans les compositions de l’invention comprenant entre 10g/L et 20g/L de matière active (matière sèche), de préférence encore entre 12g/L et 17g/L de matière active, de manière encore préférée entre 13g/L et 16g/L de matière active et de manière préférée entre toutes entre 14g/L et 15g/L de matière active par rapport au poids total de l’extrait.
Selon un mode particulier, l’extrait de levureDebaryomyces nepalensisutilisé dans les compositions de l’invention comprend préférentiellement au moins 25% carbohydrates en poids de matières sèches de l’extrait, encore plus préférentiellement au moins 40%. La fraction glucidique de l’extrait selon l’invention comprend préférentiellement au moins des oligosaccharides, préférentiellement des oligosaccharides phosphatés. De façon préférée la fraction glucidique comprend au moins 50% d’oligosaccharides en poids de matière sèche de la fraction glucidique, de préférence au moins 70%. Ces oligosaccharides, sont préférentiellement constitués de molécules de masses molaires allant de 360 Da à 3060 Da. L’extrait selon l’invention comprenant également d’autres constituants, notamment des protéines et/ou des cendres minérales Préférentiellement, l’extrait selon l’invention présente une teneur en cendres inférieure à 15% en poids de matière sèche de l’extrait.
De préférence, l’extrait de levureDebaryomyces nepalensisutilisé par l’invention est un extrait comprenant de 0,5% à 2,5% de matière sèche dans de l’eau.
Le nom INCI (International Nomenclature Cosmetics Ingrédients) de cet extrait de levureDebaryomyces nepalensisest : Water, Yeast extract.
Selon un mode particulièrement préféré, l’extrait de levureDebaryomyces nepalensisutilisé par l’invention est un hydrolysat obtenu par la mise en œuvre des étapes suivantes:
- Solubilisation de la biomasse de Debaryomyces nepalensis dans l’eau à raison de 50g/L,
- Hydrolyse acide,
- Séparation des phases soluble et insoluble,
- Purification de la phase soluble pour éliminer les molécules de tailles supérieures à 5kDa,
- Filtration et filtration stérilisante.
Cet extrait est caractérisé par:
- Une teneur en matières sèches de 14,6 g/L,
- Une quantité de sucres (méthode de Dubois) de 6,6g/L (soit 45,2%) dont une partie, se présente sous forme d’oligosaccharides phosphatés,
- Une quantité de protéines (méthode de Lowry) de 0,53g/L (soit 3,6%).
Composition et Galéniques
Dans le cadre de la présente invention, l’extrait de levureDebaryomyces nepalensisest utilisé pour la préparation de compositions, notamment la préparation de compositions cosmétiques pour application topique sur les matières kératiniques.
Ainsi, selon un premier aspect, la présente invention porte sur une composition cosmétique comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un extrait de levureDebaryomyces nepalensiset au moins un adjuvant cosmétique choisi dans le groupe constitué par les filtres UV, les agents antioxydants, les parfums, les vitamines, les huiles, les agents épaississants, les agents émollients, les agents hydratants, les agents anti-âge, les prébiotiques et/ou dérivés de probiotiques, et leurs mélanges.
On entend par « prébiotique » des constituants alimentaires non vivants capables de moduler la croissance et l’activité des souches probiotiques et d’autres souches bactériennes bénéfiques à la santé.
On entend par «probiotique» des microorganismes vivants (type bactéries lactobacillus ou levures) qui, lorsqu’ils sont administrés en quantité suffisante, exercent des effets positifs sur la santé au-delà des effets nutritionnels traditionnels (définition OMS/FAO Food and Agriculture Organizations of the United nation). On utilisera généralement des «dérivés probiotiques» correspondant à des microorganismes rendus non vivants pour être utilisés en cosmétique; on parle souvent de dérivés de probiotiques, de fractions de probiotiques et/ou de postbiotiques.
On entend par «postbiotique» des dérivés non-vivants de probiotique, porteurs d’une activité biologique bénéfique pour son hôte.
De préférence, les compositions cosmétiques de l’invention comprennent un extrait de levureDebaryomyces nepalensistel que décrit ci-dessus.
Ainsi, selon un mode de réalisation préféré, la composition cosmétique de l’invention se caractérise en ce que ladite levureDebaryomyces nepalensisest isolée à partir de racines de mauve (Malva sylvestris).
Selon un autre mode de réalisation préféré, la composition cosmétique de l’invention se caractérise en ce que ledit extrait de levureDebaryomyces nepalensisest un extrait aqueux de levureDebaryomyces nepalensis.
Par «extrait aqueux» selon l’invention, on entend que l’extrait de levureDebaryomyces nepalensisest un extrait dans de l’eau.
Selon un mode de réalisation préféré, l’invention porte sur une composition cosmétique caractérisée en ce que ledit extrait de levureDebaryomyces nepalensisest obtenu par un procédé comprenant au moins les étapes de:
a) Solubilisation de la biomasse dans l’eau,
b) Hydrolyse,
c) Séparation des phases soluble et insoluble pour récupérer la phase soluble,
d) Purification(s),
e) Filtration(s),
f) Filtration(s) stérilisante(s).
Selon un mode de réalisation particulier, l’invention porte sur une composition cosmétique comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un extrait de levureDebaryomyces nepalensis, en particulier un extrait de levureDebaryomyces nepalensisNCYC 3413, de préférence la souche déposée à la Mycothèque de l’Université catholique de Louvain sous le numéro BCCM 56661 ou de la souche déposée dans la collection CIRM sous le numéro CLIB n°2137; et au moins un adjuvant cosmétique choisi dans le groupe constitué par les filtres UV, les agents antioxydants, les parfums, les vitamines, les huiles, les agents épaississants, les agents émollients, les agents hydratants, les agents anti-âge, les prébiotiques et/ou extraits de dérivés probiotiques, et leurs mélanges.
Dans le cadre de l’invention, l’extrait de levureDebaryomyces nepalensisest incorporé dans une composition adaptée à une application topique sur les matières kératiniques. Il est notamment utilisé dans une quantité efficace pour obtenir l’effet recherché.
Selon un mode de réalisation préféré, la composition cosmétique de l’invention est caractérisée en ce que ledit extrait de levureDebaryomyces nepalensisest présent en une teneur allant de 0,01% à 10%, de préférence de 0,1% à 5%, de préférence encore de 1% à 3% en poids de matière première par rapport au poids total de la composition.
Selon un mode de réalisation préféré, la composition cosmétique de l’invention est caractérisée en ce que ledit extrait de levureDebaryomyces nepalensisest présent en une teneur allant de 0,00005% à 0,25%, de préférence de 0,0005% à 0,125%, de préférence encore de 0,005% à 0,075% en poids de matière sèche par rapport au poids total de la composition.
Selon un autre mode de réalisation particulier, l’invention porte sur une composition cosmétique comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un extrait de levureDebaryomyces nepalensis, en particulier un extrait de levureDebaryomyces nepalensisNCYC 3413, de préférence la souche déposée à la Mycothèque de l’Université catholique de Louvain sous le numéro BCCM 56661 ou de la souche déposée dans la collection CIRM sous le numéro CLIB n°2137 en une teneur allant de 0,01% à 10% en poids, de préférence encore de 0,1% à 5% en poids, de préférence encore de 1% à 3% en poids de matière première par rapport au poids total de la composition, et au moins un adjuvant cosmétique choisi dans le groupe constitué par les filtres UV, les agents antioxydants, les parfums, les vitamines, les huiles, les solvants organiques, les agents épaississants, les agents émollients, les agents hydratants, les agents anti-âge, les prébiotiques et/ou dérivés de probiotiques, et leurs mélanges.
Dans un mode de réalisation préféré, ladite composition cosmétique comprenant l’extrait de levureDebaryomyces nepalensisde l’invention est une composition de soin et/ou de maquillage des matières kératiniques, en particulier de la peau et/ou des lèvres et notamment de la peau du visage et/ou du cou.
L’invention porte donc également sur une composition cosmétique caractérisée en ce qu’elle est sous la forme d’une crème, émulsion huile-dans-eau ou eau-dans-huile ou émulsion multiple, solution, huile, suspension, gel, lait, lotion, sérum, baume, stick ou poudre.
De préférence, l’extrait de levureDebaryomyces nepalensisde l’invention est mis en œuvre dans la phase aqueuse de la composition de l’invention.
Ainsi, selon un mode particulier, la composition de l’invention comprend au moins une phase aqueuse.
La phase aqueuse de la composition selon l'invention comprend de l'eau et éventuellement un solvant hydrosoluble.
On entend par «solvant hydrosoluble» selon l’invention, un composé liquide à température ambiante et miscible à l'eau (miscibilité dans l'eau supérieure à 50% en poids à 25°C et pression atmosphérique). On peut citer notamment:
- les mono-alcools inférieurs en C1-C5 tels que l'éthanol, l'isopropanol et leurs mélanges,
- les glycols en C2-C8 tels que l'éthylène glycol, le propylène glycol, le 1,3-butylène glycol, le dipropylène glycol, et leurs mélanges,
- les polyols en C2-C32 tels que les polyglycérols, les polyéthylènes glycols, et leurs mélanges,
- et leurs mélanges.
Elle peut comprendre également des gélifiants hydrophiles, des antioxydants, des conservateurs et leurs mélanges.
A titre de «gélifiants hydrophiles», on peut citer notamment les polymères d’acide acrylique, les copolymères d’acides acrylique et méthacrylique, les polymères carboxyvinyliques, les gélifiants polysaccharidiques, les gommes naturelles ou modifiées, les gélifiants minéraux, et leurs mélanges.
La teneur en gélifiant(s) hydrophile(s) dans la composition cosmétique de l’invention ira généralement de 0,01% à 5%, notamment de 0,1% à 4%, de préférence de 0,2% à 3% et de préférence encore de 0,5% à 2% en poids par rapport au poids total de ladite composition.
Procédés cosmétiques et utilisations
Les procédés cosmétiques et utilisations cosmétiques décrits ci-dessous sont destinés à une application sur des matières kératiniques, notamment sur des matières kératiniques saines, de préférence des peaux et/ou des lèvres saines, en particulier sur une peau fatiguée, une peau atone, impactée par un contexte nutritionnel défavorable ou déséquilibré, de stress émotionnel ou de manque de sommeil, une peau sèche et/ou une peau exposée à un stress oxydant.
Par «matières kératiniques saines» selon l’invention en entend des matières kératiniques ne présentant pas de troubles ou de désordres qui relèveraient d’un état pathologique (sujets ‘non sains’, atteints d’une pathologie).
Un autre objet de l’invention porte donc sur un procédé cosmétique de soin et/ou de maquillage des matières kératiniques, plus particulièrement de la peau et/ou des lèvres et notamment de la peau du visage et/ou du cou, comprenant l’application topique sur lesdites matières kératiniques, d’une composition cosmétique telle que décrit ci-dessus.
Dans le cadre de la présente invention, ledit procédé cosmétique est destiné à favoriser et/ou stimuler le renouvellement épidermique, le métabolisme énergétique des cellules cutanées, la nutrition des matières kératiniques et/ou l’efficacité vitaminique, la barrière cutanée et son film hydrolipidique, l’hydratation de la peau, l’équilibre du microbiote cutané, et/ou améliorer l’intégrité et la résistance de la peau aux stress, améliorer la synchronisation circadienne des cellules cutanées, en particulier l’hydratation circadienne de la peau, et/ou prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, notamment la perte de fermeté, la perte d’élasticité, la diminution de l’épaisseur de la peau, l’apparition de rides et/ou ridules, et/ou la sécheresse de la peau.
La présente invention porte encore sur l’utilisation cosmétique, non thérapeutique, d’un extrait de levureDebaryomyces nepalensistel que défini ci-dessus, pour une application topique sur les matières kératiniques, en particulier des matières kératiniques saines, plus particulièrement de la peau et/ou les lèvres et notamment de la peau du visage et/ou du cou, en tant qu’actif cosmétique destiné à favoriser et/ou stimuler le renouvellement épidermique, le métabolisme énergétique des cellules cutanées, la nutrition des matières kératiniques et/ou l’efficacité vitaminique, la barrière cutanée et son film hydrolipidique, l’hydratation de la peau, l’équilibre du microbiote cutané, et/ou améliorer l’intégrité et la résistance de la peau aux stress, améliorer la synchronisation circadienne des cellules cutanées, en particulier l’hydratation circadienne de la peau, et/ou prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, notamment la perte de fermeté, la perte d’élasticité, la diminution de l’épaisseur de la peau, l’apparition de rides et/ou ridules, et/ou la sécheresse de la peau.
Selon un mode particulier, les compositions utilisées dans les procédés et/ou utilisations selon l’invention comprennent dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un extrait de levureDebaryomyces nepalensis, en particulier un lysat de levureDebaryomyces nepalensiset au moins un adjuvant cosmétique choisi dans le groupe constitué par les filtres UV, les agents antioxydants, les parfums, les vitamines, les huiles, les agents épaississants, les agents émollients, les agents hydratants, les agents anti-âge, les prébiotiques et/ou dérivés de probiotiques, et leurs mélanges.
Selon un autre mode particulier, les compositions utilisées dans les procédés et/ou utilisations selon l’invention comprennent dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un extrait de levureDebaryomyces nepalensis, en particulier un extrait de levureDebaryomyces nepalensisNCYC 3413, de préférence la souche déposée à la Mycothèque de l’Université catholique de Louvain sous le numéro BCCM 56661 ou de la souche déposée dans la collection CIRM sous le numéro CLIB n°2137 en une teneur allant de 0,01% à 10% en poids, de préférence encore de 0,1% à 5% en poids, de préférence encore de 1% à 3% en poids de matière première par rapport au poids total de la composition, et au moins un adjuvant cosmétique choisi dans le groupe constitué par les filtres UV, les agents antioxydants, les parfums, les vitamines, les huiles, les solvants organiques, les agents épaississants, les agents émollients, les agents hydratants, les agents anti-âge, les prébiotiques et/ou dérivés de probiotiques, et leurs mélanges.
La présente invention va désormais être illustrée dans les exemples non limitatifs suivants.
Les % sont exprimés en poids de matière première par rapport au poids total de la composition, sauf indication contraire.
EXEMPLES
Les études menées par la Demanderesse et illustrées dans les exemples ci-après visent à évaluer les différentes activités biologiques de l’extrait de levureDebaryomyces nepalensisutilisé par l’invention. Notamment l’extrait de levure utilisé dans ces exemples et désigné indifféremment «extrait de levureDebaryomyces nepalensis», «extrait de levure de mauve» ou «LM2», correspond à l’extrait obtenu selon le procédé d’extraction illustré à l’Exemple 1. Cet extrait est utilisé dans le milieu de culture des cellules aux concentrations 1% et 3%.
Exemple
1:
E
xtrait de levure
Debaryomyces
nepalensis
utilisé dans l’invention
L’extrait de levure utilisé dans les exemples ci-après est un hydrolysat obtenu par la mise en œuvre des étapes suivantes:
- Solubilisation de la biomasse deDebaryomyces nepalensisdans l’eau à raison de 50g/L,
- Hydrolyse acide,
- Séparation des phases soluble et insoluble,
- Purification de la phase soluble pour éliminer les molécules de tailles supérieures à 5kDa,
- Filtration et filtration stérilisante.
L’extrait est caractérisé par:
- Une teneur en matières sèches de 14,6g/L,
- Une quantité de sucres (méthode de Dubois) de 6,6g/L (soit 45,2%) dont une partie, se présente sous forme d’oligosaccharides phosphatés,
- Une quantité de protéines (méthode de Lowry) de 0,53g/L (soit 3,6%).
Exemple 2 : Effets de l’extrait de levure Debaryomyces nepalensis sur l’expression de gènes clefs de plusieurs processus cutanés d’intérêt
Cette étude, menée sur des cultures de kératinocytes ou de fibroblastes, illustre les effets de l’extrait de levureDebaryomyces nepalensissur l’expression de gènes clefs impliqués dans plusieurs processus cutanés d’intérêttels que la fonction barrière, l’hydratation, l’équilibre du microbiote cutané, le renouvellement cellulaire ou encore la protection contre le stress.
Matériel et méthodes
Cellules étudiées
-Kératinocytes humains normaux(ou KHN) issus d’une plastie abdominale. Les cellules ont été ensemencées dans du milieu de culture Epilife complémenté avec du HKGS (Human Keratinocytes Growth Supplement) à une densité d’ensemencement de 100000cellules par puits dans des plaques 12puits.
-Fibroblastes humains normaux(ou FHN) issus d’une plastie abdominale. Les cellules ont été ensemencées dans du milieu DMEM contenant 1g/L de glucose complémenté de 10% de sérum de veau fœtal avec une densité d’ensemencement de 250000 cellules par puits, dans des plaques 6puits. La veille du traitement avec l’extrait, les cellules ont été cultivées dans du milieu DMEM contenant 1g/L de glucose avec 0,5% de sérum de veau fœtal.
Traitement des cellules avec l’extrait
de levure de mauve
-Traitement des KHN: à 50% de confluence, les cellules ont été traitées avec l’extrait LM2 aux deux doses préparées extemporanément à la concentration finale d’utilisation (1% et 3%) dans du milieu de culture Epilife. Après 24 heures de traitement, les cellules ont été récupérées afin d’en extraire les ARN totaux.
-Traitement des FHN: A confluence, les cellules ont été traitées avec l’extrait LM2 aux deux doses d’ingrédients actifs préparées extemporanément à la concentration finale d’utilisation (1% et 3%) dans du milieu DMEM contenant 1g/L de glucose + 0,5% sérum de veau fœtal. Après 24 heures de traitement, les cellules ont été récupérées afin d’en extraire les ARN totaux.
Mesure de l’expression génique par RT-PCR quantitative
- Obtention des ARN totaux à l’aide du MicrolabSTAR (Hamilton)
Le milieu de culture des cellules a été éliminé, et 250µL de tampon de lyse RLT (fourni dans le kit Nucleospin RNA trace (Macherey-Nagel) ont été ajoutés. Les cellules ont été raclées à l’aide d’un Cell Scraper puis, le lysat cellulaire a été récupéré dans une deepwell 1,2mL (fourni dans le kit Nucleospin RNA). Les ARN totaux ont été extraits selon les protocoles mis au point.
Les solutions d’ARN totaux obtenues ont été dosées, et leur qualité vérifiée, à l'aide d'un lecteur de microplaques, le Lunatic (UnchainedLab) couplé au MicrolabSTAR. Cet appareil relié à l'ordinateur pilotant la plateforme Robotique, possède le logiciel spécifique d'analyse des résultats (Lunatic Anlaysis). La technique nécessite une micro-plaque de 96puits (Lunatic plate).
- Synthèse des ADN complémentaires
Le kit de reverse transcription (RT) High Capacity Reverse Transcription Kit (Thermo Fisher) a été utilisé selon le protocole fourni. 1000ng d’ARN totaux ont été dilués dans de l’eau pour un volume final de 50µL. Ils ont été ensuite incubés pendant 10minutes à 25°C puis 2heures à 37°C en présence de 50µL de mélange réactionnel de High Capacity Reverse Transcription Kit 2X préalablement préparé comme indiqué au tableau 1. Les différentes incubations ont été faites au sein du TRobot (Biométra).
| Réactifs | RT buffer | dNTP | Random Primer | RNase OUT | RT | H2O |
| Volume | 10µL | 4µL | 10µL | 1µL | 5µL | 20µL |
- Réalisation de la PCR-TaqMan Low Density Array
25µL de chaque RT ont été mélangés à 100µl d’eau puis 125µL de TaqMan Gene Expression master mix (ThermoFisher) ont été ajoutés. Après homogénéisation, 100µL ont été déposés sur les cartes de microfluidiques:
- Carte microfluidique 96 gènes spécifique pour les KHN
- Carte microfluidique 96 gènes spécifique pour les FHN
Après remplissage des différentes cupules, ces cartes ont été centrifugées puis scellées.
Le CD correspondant au profil des gènes déposés sur les plaques a été chargé dans le logiciel SDS 2.3, précisant l’emplacement de chaque gène sur la carte. Le gène contrôle (ou «endogeneous» gene) à utiliser pour la normalisation des résultats a été à indiquer avant le lancement de la PCR. Cette dernière a été réalisée selon le protocole fourni par Applied Biosystems dans l’appareil ABI Prism 7900HT Sequence detection system. Les étapes de la qPCR sont 2 min à 50°C, 10 min à 94,5°C puis 30s à 97°C et 1 min à 59,7°C pour 40 cycles.
Analyse statistique
La PCR quantitative en temps réel peut être exploitée si son efficacité est comprise entre 90% et 110%. Pour chaque échantillon, le nombre de cycles auquel apparaît le signal a été déterminé par le logiciel SDS 2.4. Pour un même essai, les niveaux d’expression des transcrits d’intérêt obtenus ont été normalisés par rapport à la valeur obtenue pour le gène de ménage Beta-2-microglobuline. Ce gène dont l’expression est constitutive et invariante permet de s’affranchir toutes variations induites au cours de l’expérience (dosage des ARNs totaux, pipetages, étape de réverse transcription, PCR dans l’appareillage).
Dans la méthode de RT-PCR TLDA, la quantification est effectuée en utilisant la méthode comparative de ΔΔCt. Les valeurs de quantification relative (RQ) obtenues correspondent au niveau d’amplitude (x fois plus ou moins que le contrôle) de l’expression par rapport à notre contrôle ici le non irradié. Le RQ est obtenu par le calcul suivant où le contrôle est égal à 1: RQ = 2-ΔΔCt = 2-(ΔCt traité - ΔCt non traité)
ΔCt traité = Ct gène cible traité – Ct gène de ménage traité
ΔCt non traité = Ct gène cible non traité – Ct gène de ménage non traité
Afin d’évaluer des variations d’activité transcriptionnelle statistiquement significative, le test t de Student a été utilisé. Chaque condition a été réalisée en triplicat (3 non traités et 3 traités dans les mêmes conditions). Le test-F de Fischer a tout d’abord été appliqué en comparant les deux matrices de données. Lorsque la valeur est supérieure à α = 0,05 alors la variance pour le test t de Student est de 2, lorsque le test-F de Fischer est inférieur à α = 0,05 alors la variance sera égale à 3. Les variations transcriptionnelles retenues sont celles qui ont un test t de Student inférieur à p = 0,05.
Résultats
Tableau 2: Expression génique dans des cultures de KHN
| Processus cutanés impliquant le gène | Symbole | Gène | Extrait de levure de Mauve à 3% |
| Desquamation | KLK7 | Kallikrein 7 (Chymotryptic, Stratum Corneum) | 2.554 |
| Formation de la barrière cutanée; protection | SPRR1B | Small Proline Rich Protein 1B | 2.297 |
| Cohésion; jonctions cellulaires | COL17A1 | Collagen Type XVII Alpha 1 Chain | 4.166 |
| Cohésion; jonctions cellulaires | OCLN | Occludin | 1.627 |
| Cohésion; jonctions cellulaires | CLDN1 | Claudin 1 | 1.878 |
| Synthèse de la Matrice extracellulaire et hydratation | HAS3 | Hyaluronan Synthase 3 | 1.642 |
| Flux hydriques, hydratation | AQP3 | Aquaporin 3 (Gill Blood Group) | 1.650 |
| Flux hydrique, hydratation | AQP9 | Aquaporin 9 | 2.938 |
| Formation des lipides cutanés | FABP5 | Fatty Acid Binding Protein 5 | 1.545 |
| Equilibre du microbiote | DEFB103A et 3B | Defensin Beta 103A et 3B | 2.109 |
| Equilibre du microbiote | PI3 | Peptidase Inhibitor 3; Elafin | 2.711 |
Tableau 3: Expression génique dans des cultures de FHN
| Processus cutanés impliquant le gène | Symbole | Gène | Levure de Mauve à 1% | Levure de Mauve à 3% |
| Dégradation de la matrice extracellulaire | CTSS | Cathepsin S | - | 0.546 |
| Hydratation et réserves hydriques | HAS3 | Hyaluronan Synthase 3 | 2.003 | 2.006 |
| Protection contre le stress (oxydant) | HSPA1A; 1B | Heat Shock Protein Family A (Hsp70) Member 1A; 1B | - | 1.647 |
| Contrôle de la prolifération et de la différenciation cellulaire | SMAD4 | SMAD Family Member 4 | - | 1.548 |
| Contrôle de la prolifération et de la différenciation cellulaire | SMAD7 | SMAD Family Member 7 | 1.529 | - |
| Protection contre le stress (oxydant) | SOD1 | Superoxide Dismutase 1 | 1.667 | 1.658 |
| Protection contre le stress (oxydant) | ABCC1 | ATP Binding Cassette Subfamily C Member 1 | 1.501 | 1.631 |
| Protection contre le stress (oxydant) | ABCC2 | ATP Binding Cassette Subfamily C Member 2 | - | 1.845 |
| Protection mitochondriale, | LONP1 | Lon Peptidase 1, Mitochondrial | 1.521 | 1.582 |
| Energétique mitochondriale | MT-ATP6 | Mitochondrially Encoded ATP Synthase Membrane Subunit 6 | 1.630 | - |
| Contrôle du cycle cellulaire | CDKN1A ou p21 | Cyclin Dependent Kinase Inhibitor 1A | 1.503 | 1.554 |
En conclusion: l’extrait de levureDebaryomyces nepalensisoffre une vaste palette d’activités biologiques en modulant, au niveau cutané, l’expression de nombreux gènes clefs intervenant dans des processus biologiques variés tels que la fonction barrière (KLK7, SPRR1B, COL17A1, OCLN, CLDN1, CTSS), l’hydratation (HAS3, AQP3, AQP9, FABP5) l’équilibre du microbiote (DEFB103A et 3B, PI3) le renouvellement cellulaire (SMAD4, SMAD7, CDKN1A ou p21) la protection contre le stress (HSPA1A et 1B, SOD1, ABCC1, ABCC2, LONP1).
Ainsi, l’extrait de levureDebaryomyces nepalensisutilisé dans les compositions cosmétiques de l’invention permet de favoriser et/ou stimuler le renouvellement épidermique, le métabolisme énergétique des cellules cutanées, la barrière cutanée et son film hydrolipidique, l’hydratation de la peau ainsi que l’équilibre du microbiote cutané. Cet extrait présente ainsi un intérêt cosmétique notamment pour améliorer l’intégrité et la résistance de la peau aux stress, et/ou prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, notamment la perte de fermeté, la perte d’élasticité, la diminution de l’épaisseur de la peau, l’apparition de rides et/ou ridules et/ou la sécheresse de la peau.
Exemple
3
: Effets de l’extrait de levure
Debaryomyces nepalensis
sur
l’expression
des gènes des transporteurs et récepteurs vitaminiques
Cette étude, menée sur des cultures de kératinocytes, de mélanocytes ou de fibroblastes, illustre les effets de l’extrait de levureDebaryomyces nepalensisutilisé par l’invention sur l’expression de gènes des transporteurs et récepteurs vitaminiques.
Matériel et méthodes
Traitement des cellules avec l’extrait
de levure de mauve
-Traitement des KHN: des KHN issus d’une plastie abdominale ont été utilisées. Les cellules ont été cultivées dans le milieu Epilife complet à P5 avec une densité d’ensemencement de 50000 cellules par puits en plaque 12 puits. A sub-confluence, les cellules ont été traitées pendant 24 heures puis les cellules ont été récupérées afin d’en extraire les ARN totaux.
-Traitement des FHN: des FHN issus d’une plastie abdominale ont été utilisées. Les cellules ont été cultivées dans le milieu DMEM 1g/L glucose complémenté de 10% de sérum de veau fœtal à P7 avec une densité d’ensemencement de 200000 cellules par puits en plaque 6puits. La veille du traitement, les cellules ont été cultivées dans du milieu DMEM 1g/L glucose complémenté de 0,5% de sérum de veau fœtal. Les cellules ont été traitées pendant 24 heures puis les cellules ont été récupérées afin d’en extraire les ARN totaux.
-Traitement des MHN: des MHN issus d’une plastie abdominale ont été utilisées. Les cellules ont été cultivées dans le milieu de culture 254 complet à P7 avec une densité d’ensemencement de 200000 cellules par puits en plaque 6 puits. A confluence, soit une semaine après l’ensemencement, les cellules ont été traitées pendant 24 heures puis les cellules ont été récupérées afin d’en extraire les ARN totaux.
Mesure de l’expression génique par RT-PCR quantitative
et analyses statistiques
Le protocole utilisé est le même que pour l’Exemple 2
Résultats
Tableau 4: Expression génique dans des cultures de KHN
| Type Gènes | Symbole | Gène | Levure de Mauve à 3% |
| Récepteur vitamine B3 ou niacine | HCAR2 | Hydroxycarboxylic acid receptor 2 |
1.852 |
| Récepteur vitamine B12 | TCN1 | Transcobalamin 1 | 3.735 |
| Récepteur vitamine B12 | CUBN | Cubulin | 5.318 |
Tableau 5: Expression génique dans des cultures de FHN
| Type Gènes | Symbole | Gène | Levure de Mauve à 3% | Levure de Mauve à 1% |
| Transport vitamineC ou ascorbic acid | SLC23A3 | Solute carrier family 23 member 3 |
- | 1.843 |
| Récepteur vitamine B9 | FOLR1 | Folate receptor 1 | 2.637 | - |
Tableau 6: Expression génique dans des cultures de MHN
| Type Gènes | Symbole | Gène | Levure de Mauve à 3% |
| Transport vitamineA, rétinol | RBP4 | Retinol binding protein 4 | 3.618 |
En conclusion: l’extrait de levureDebaryomyces nepalensispermet de stimuler l’expression des transporteurs et/ou récepteur vitaminiques de la peau.
De par ces effets, l’extrait de levureDebaryomyces nepalensisutilisé par les compositions cosmétiques de l’invention présente des effets pro-vitaminique et pro-nutritionnel sur les cellules cutanées. Cet extrait présente donc un intérêt cosmétique notamment pour prévenir et/ou corriger l’altération de processus cutanés essentiels à la nutrition cutanée et ainsi favoriser la qualité, la résistance, l’esthétique et la jeunesse de la peau.
Exemple
4
: Effet pro-circadien de l’extrait de levure
Debaryomyces nepalensis
Cette étude, menée sur des cultures de kératinocytes ou de mélanocytes, illustre les effets de l’extrait de levureDebaryomyces nepalensissur le cycle circadien en mesurant l’expression des gènes horloge dans les cellules cutanées.
Matériel et méthodes
Traitement des cellules avec l’extrait LM2
-Traitement des KHN: des KHN issus d’une plastie abdominale ont été utilisées. Les cellules ont été cultivées dans le milieu Epilife complet à P5 avec une densité d’ensemencement de 50000 cellules par puits en plaque 12 puits. A sub-confluence, les cellules ont été traitées pendant 24 heures puis les cellules ont été récupérées afin d’en extraire les ARN totaux.
-Traitement des MHN: des MHN issus d’une plastie abdominale ont été utilisées. Les cellules ont été cultivées dans le milieu de culture 254 complet à P7 avec une densité d’ensemencement de 200000 cellules par puits en plaque 6 puits. A confluence, soit une semaine après l’ensemencement, les cellules ont été traitées pendant 24 heures puis les cellules ont été récupérées afin d’en extraire les ARN totaux.
Mesure de l’expression génique par RT-PCR quantitative et analyses statistiques
Le protocole utilisé est le même que pour l’Exemple 1
Résultats
Tableau 7 : Expression génique dans des cultures de KHN
| Type Gènes | Symbole | Gène | Levure de mauve à 3% |
| Gènes horloge | CRY1 | Cryptochrome Circadian Clock 1 | 1.620 |
| Gènes horloge | CSNK2A1 | Casein kinase 2A1 | 1.769 |
| Gènes horloge | PER3 | Period Circadian Clock 3 | 1.751 |
| Régulateurs de l'horloge | SIRT1 | Sirtuin 1 | 1.682 |
| Régulateurs de l'horloge | TIPIN | TIMELESS Interacting Protein | 1.950 |
Tableau 8 : Expression génique dans des cultures de MHN
| Type Gènes | Symbole | Gène | Levure de mauve à 3% |
| Gènes horloge | ARNTL2 | Aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator-like 2 | 2.836 |
| Régulateurs de l'horloge | MTNR1B | Melatonin receptor 1B | 4.796 |
| Régulateurs de l'horloge | PASD1 | PAS Domain Containing 1 | 3.292 |
En conclusion: l’extrait de levureDebaryomyces nepalensispermet de stimuler plusieurs gènes impliqués dans l’horloge biologique et le rythme circadien des cellules cutanées.
De par ces effets sur les gènes horloge de la peau, l’extrait de levureDebaryomyces nepalensisutilisé dans les compositions de l’invention présente un intérêt cosmétique en tant qu’actif anti-âge.
Exemple
5
:
Effet de l’extrait de levure Debaryomyces nepalensis sur la synchronisation du rythme circadien
Cette étude explore le potentiel de l’extrait de levureDebaryomyces nepalensisà synchroniser le rythme circadien de fibroblastes dermiques.
Matériel et méthodes
Culture cellulaire
Fibroblastes humains normaux (ou FHN) issus d’une plastie abdominale. Les cellules ont été décongelées au passage 3 dans une flasque de 150cm² dans le milieu DMEM 1g/L glucose avec 10% de sérum de veau fœtal. A confluence, elles ont été décollées du support de culture par action de la trypsine, puis ensemencées dans des boîtes de Pétri de 35mm de diamètre prévue pour l’étude (Nunclon, Fisher) en milieu DMEM 1 g/L glucose complémenté de 10% de SVF. 30 boîtes de Pétri ont été ensemencées, 3 boîtes témoin non traitées, 3boîtes traitées avec l’extrait de levureDebaryomyces nepalensisutilisé selon l’invention à 3% (LM2) et 3 boîtes témoins dexaméthasone 0,1mM.
Etude du rythme de BMAL1 avec le
Lumicycle
- Les particules virales
pLV 6-Bmluc: vecteur lentiviral contenant le promoteur codant pour le gène horloge Bmal1 (organisme d'origine: souris) lié au gène rapporteur luciférase (organisme d'origine: luciole).
pMD 2G: plasmide d'enveloppe (VSV-G) pour la production de particules virales (addgene).
psPAX 2: plasmide d’emballage pour la production de particules virales contenant le promoteur CAG pour l'expression de protéines d'emballage (addgene).
Ces 3 plasmides ont été gracieusement offerts par: Prof. Steven A. Brown / Chronobiology and Sleep Research Group / Institute of Pharmacology and Toxicology / University of Zurich / Winterthurerstrasse 190 - 8057 Zurich, Switzerland (Brown, Steven A et al. “The period length of fibroblast circadian gene expression varies widely among human individuals.” PLoS biology vol. 3,10 (2005): e338. doi:10.1371/journal.pbio.0030338).
Principe et chronologie de l’étude
Les cellules transduites avec le lentivirus pLV6-Bmluc sont luminescentes : elles expriment la luciférase sous le contrôle du promoteur du gène horloge BMAL1 (gène d’intérêt dont l’expression a été quantifiée). La luciférase catalyse une réaction d’oxydation de la luciférine (ajoutée en excès) en oxyluciférine, avec émission de photons (560 nm).
Transduction des FHN avec les particules
lentivirales
BMAL1-LUC
La transduction des cellules a été effectuée à 30-50% de confluence. La solution de lentivirus (production titrée à 6,8.106), conservée à -80°C, a été décongelée dans un labtop cooler à 4°C. Pour l’infection une concentration de lentivirus 10X (solution stock 100X dans un volume de 50µL) a été utilisée dans un volume de 3mL/BP35mm. Pour 30 boîtes de Pétri, un volume de 100mL de solution d’infection (100mL de DMEM 1g/L glucose + 10% SVF, 50µL de protamine sulfate et 250µL de lentivirus 100X) a été préparé.
Après aspiration du milieu de culture initial, 3mL de solution de transduction ont été ajoutés dans chacune des boîtes, ces dernières ont ensuite été placées à 37°C et 5% de CO2 pendant 20 heures.
Le lendemain, l’infection a été arrêtée par aspiration du milieu et remplacée par du milieu DMEM 1 g/L glucose + 10 % SVF neuf. Le milieu a été renouvelé jusqu’à confluence complète des cellules pour procéder à la suite de l’étude.
Synchronisation des cellules
Pour visualiser le rythme d’expression du gène BMAL1 au cours du temps, les cellules ont été synchronisées afin qu’elles émettent toutes le même signal de fluorescence en même temps, de telle sorte qu’il soit possible de mesurer les variations cycliques. Pour se faire un changement de milieu contenant 10% de sérum, et un agent synchronisateur connu, a été effectué.
Le but de cette étude a été de regarder le pouvoir synchronisateur des ingrédients sélectionnés. La dexaméthasone, un puissant synchronisateur du rythme circadien, a été utilisé comme témoin positif pour comparer avec les ingrédients à tester. En parallèle, des cultures témoins sans dexaméthasone ni ingrédient à tester (témoin négatif) ont été réalisées.
Le milieu de culture a été aspiré puis remplacé par 2mL de milieu DMEM 1g/L glucose + 10% SVF contenant ou non (témoins) 100µM de dexaméthasone ou l’extrait de levureDebaryomyces nepalensisselon l’invention à la concentration 3%. Le traitement a été effectué pendant 30minutes à 37°C + 5% CO2 pour la dexaméthasone et 1 heure pour les ingrédients actifs. Les boîtes «témoins de non synchronisation» ne contenant que du milieu de culture. Après le traitement, les cellules ont été rincées deux fois avec du PBS. Après rinçage, 3mL de milieu d’enregistrement (Annexe) a été déposé dans chacune des boîtes, ces dernières ont alors été scellées avec de la graisse silicone puis placées dans le LumiCycle.
Enregistrement de la Bioluminescence
L’enregistrement de la bioluminescence a été fait au moyen d’un LumiCycle (Actimetrix) permettant l’enregistrement en boucle de 32 échantillons par vagues successives de 4échantillons simultanés. La fréquence d’enregistrement a été fixée à une fois toutes les 10minutes. L’appareil permet le maintien en culture des cellules dans des conditions contrôlées de température.
Analyses statistiques
Le logiciel d’analyse LumiCycle Analysis et le logiciel Sigma PLOT ont été utilisés, afin d’obtenir les différents paramètres du rythme et leurs significativités.
Résultats
La figure 1 illustre l’enregistrement du rythme circadien des cellules cutanées placées dans les différentes conditions expérimentales. Il peut être observé que le rythme circadien diminue dans le temps (phénomène d’amortissement ou d’affaiblissement). Ce phénomène correspond à une désynchronisation progressive des cellules entre elles après leur synchronisation par le sérum.
L’analyse de ces courbes est réalisée avec le logiciel Sigma PLOT avec ses principaux paramètres résumés dans le tableau 13:
- La période du rythme observé correspondant au temps entre 2 pics ou 2 minimas de fluorescence,
- La vitesse d’amortissement de ce rythme correspondant à la pente de la droite décrivant la perte progressive du rythme circadien. Ces droites sont représentées dans la figure ci-dessous.
Tableau 9: Effet de l’actif sur le rythme circadien
| Paramètres circadiens | Non traité (NT) |
Dexamethasone (DX) 0,1 mM |
Extrait de levureDebaryomyces nepalensis(LM2) 3% |
| Période (1=24h) | 0.99 | 0.95 | 1 |
| Vitesse d'amortissement (Pente droite d'amortissement) |
-854 | -260 | -587 |
| Réduction de la vitesse d'amortissement (%) |
0 | 70 | 31 |
| Efficacité d'amortissement versus DX (%) |
_ | 100 | 45 |
Ainsi la dexamethasone (DX), un puissant synchronisateur du rythme circadien, limite fortement la vitesse d’amortissement du rythme circadien à 0,1mM avec une pente calculée de -259 contre -853 pour le témoin non traité (NT) soit une correction de 70% de la vitesse d’amortissement. L’extrait de levureDebaryomyces nepalensisutilisé selon l’invention, testé à la concentration de 3%, limite également la vitesse d’amortissement du rythme circadien avec une pente calculée de -587 contre -853 pour le témoin non traité (NT) soit une correction de 31% de la vitesse d’amortissement. Si l’on exprime l’efficacité de l’extrait de levureDebaryomyces nepalensisutilisé à 3% par rapport à celle de la dexamethasone à 0,1mM par la formule [(LM2-NT) / (DX-NT) x 100] on obtient une valeur d’efficacité de 45%.
Par ailleurs, ni l’extrait de levure de mauve, ni la dexamethasone (DX) ne modifient la période du rythme circadien qui reste très proche de 24h.
En conclusion: L’extrait de levureDebaryomyces nepalensisselon l’invention permet avantageusement de ralentir l’affaiblissement dans le temps de la synchronisation circadienne des cellules de la peau.
De par ces effets sur les gènes horloge de la peau, l’extrait de levureDebaryomyces nepalensisde l’invention présente un intérêt cosmétique en tant qu’actif anti-âge.
Formulations cosmétiques
Les compositions sont préparées selon les méthodes classiques utilisées dans le domaine cosmétique. Les % sont exprimés en poids de matière première par rapport au poids total de ladite composition.
Composition sous forme d’une crème
| Matière première | Quantité |
| Extrait de levure Debaryomyces nepalensis * | 0,5 % |
| Triclycéride d’acides caprylic/capric | 10% |
| Glycérine | 7% |
| Alcool cetearylique | 3% |
| Hydroxystearate d’isostearyle | 2% |
| Isononanoate d’isotridécyle | 2% |
| Steareth-21 | 1% |
| Polyacrylate de sodium | 1% |
| Gomme de xanthane | 0,5% |
| Phenoxyéthanol | 0,5% |
| Hyaluronate de sodium | 0,5% |
| Acetate de tocopherol (vitamine E) | 0,05% |
| Palmitate de vitamine A | 0,1% |
| Glucoside d’ascorbyle (vitamine CG) | 2% |
| Eau | qsp 100% |
*tel que décrit dans le matériel et méthode
Appliquée sur la peau du visage, la crème améliore la barrière cutanée et l’hydratation de la peau, elle prévient notamment la sécheresse de la peau et diminue les signes du vieillissement cutané.
Composition sous la forme d’un sérum
| Matière première | Quantité |
| Extrait de levure Debaryomyces nepalensis * | 3 % |
| Alcool | 5% |
| Glycols | 8% |
| Isononanoate d’isotridecyle | 4% |
| Squalane | 2% |
| Triglycéride d’acides caprylique/caprique | 2% |
| Methyl gluceth-20 | 2% |
| Steareth-2 | 0,5% |
| Steareth-21 | 0,5% |
| Carbomer | 0,3% |
| Hyaluronate de sodium | 0,2% |
| Gomme de xanthane | 0,1% |
| Hydroxide de sodium | 0,1% |
| Adénosine | 0,04% |
| Eau | Qsp 100% |
*tel que décrit dans le matériel et méthode
Appliqué sur la peau du visage, le sérum permet d’améliorer la fermeté de la peau, de ou prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, notamment la perte de fermeté, la perte d’élasticité, la diminution de l’épaisseur de la peau, et/ou l’apparition de rides et/ou ridules.
Claims (11)
- Composition cosmétique comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un extrait de levureDebaryomyces nepalensiset au moins un adjuvant cosmétique choisi dans le groupe constitué par les filtres UV, les agents antioxydants, les parfums, les vitamines, les huiles, les agents épaississants, les agents émollients, les agents hydratants, les agents anti-âge, les prébiotiques et/ou dérivés de probiotiques, et leurs mélanges.
- Composition cosmétique selon la revendication 1, caractérisée en ce que la levure est choisie parmi la souche identifiée par le numéro NCYC 3413, la souche identifiée par le numéro BCCM 56661 et la souche identifiée par le numéro CLIB n°2137.
- Composition cosmétique selon la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisée en ce que ladite levureDebaryomyces nepalensisest isolée à partir de racines de mauve (Malva sylvestris).
- Composition cosmétique selon l’une quelconque de revendications 1 à 3, caractérisée en ce que ledit extrait de levureDebaryomyces nepalensisest un hydrolysat de levureDebaryomyces nepalensis.
- Composition cosmétique selon l’une quelconque de revendications 1 à 4, caractérisée en ce que ledit extrait de levureDebaryomyces nepalensisest obtenu par un procédé comprenant au moins les étapes de:
a) Solubilisation de la biomasse dans l’eau,
b) Hydrolyse,
c) Séparation des phases soluble et insoluble pour récupérer la phase soluble,
d) Purification(s),
e) Filtration(s),
f) Filtration(s) stérilisante(s). - Composition cosmétique selon l’une quelconque de revendications 1 à 5, caractérisée en ce que ledit extrait de levure est présent en une teneur allant de 0,01% à 10%, de préférence de 0,1% à 5%, de préférence encore de 1% à 3% en poids de matière première par rapport au poids total de la composition.
- Composition cosmétique selon l’une quelconque de revendications 1 à 6, caractérisée en ce qu’elle est sous la forme d’une crème, émulsion huile-dans-eau ou eau-dans-huile ou émulsion multiple, solution, huile, suspension, gel, lait, lotion, sérum, baume, stick ou poudre.
- Procédé cosmétique de soin et/ou de maquillage des matières kératiniques, plus particulièrement de la peau et/ou des lèvres et notamment de la peau du visage et/ou du cou, comprenant l’application topique sur lesdites matières kératiniques, d’une composition cosmétique telle que définie dans l’une quelconque des revendications 1 à 7.
- Procédé cosmétique selon la revendication 8, caractérisé en ce que qu’il destiné à favoriser et/ou stimuler le renouvellement épidermique, le métabolisme énergétique des cellules cutanées, la nutrition des matières kératiniques et/ou l’efficacité vitaminique, la barrière cutanée et son film hydrolipidique, l’hydratation de la peau, l’équilibre du microbiote cutané, et/ou améliorer l’intégrité et la résistance de la peau aux stress, améliorer la synchronisation circadienne des cellules cutanées, en particulier l’hydratation circadienne de la peau, et/ou prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, notamment la perte de fermeté, la perte d’élasticité, la diminution de l’épaisseur de la peau, l’apparition de rides et/ou ridules, et/ou la sécheresse de la peau.
- Procédé cosmétique selon la revendication 8 ou la revendication 9, caractérisé en ce que ladite composition cosmétique est appliquée sur une peau fatiguée, une peau atone, impactée par un contexte nutritionnel défavorable ou déséquilibré, de stress émotionnel ou de manque de sommeil, une peau sèche et/ou une peau exposée à un stress oxydant.
- Utilisation cosmétique d’un extrait de levureDebaryomyces nepalensistel que défini dans l’une quelconque des revendications 1 à 5, pour une application topique sur les matières kératiniques, plus particulièrement de la peau et/ou les lèvres et notamment de la peau du visage et/ou du cou, en tant qu’actif cosmétique destiné à favoriser et/ou stimuler le renouvellement épidermique, le métabolisme énergétique des cellules cutanées, la nutrition des matières kératiniques et/ou l’efficacité vitaminique, la barrière cutanée et son film hydrolipidique, l’hydratation de la peau, l’équilibre du microbiote cutané, et/ou améliorer l’intégrité et la résistance de la peau aux stress, améliorer la synchronisation circadienne des cellules cutanées, en particulier l’hydratation circadienne de la peau, et/ou prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, notamment la perte de fermeté, la perte d’élasticité, la diminution de l’épaisseur de la peau, l’apparition de rides et/ou ridules, et/ou la sécheresse de la peau.
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