WO2021085876A1 - 흰목이버섯 배양액 추출물을 포함하는 조성물 - Google Patents

흰목이버섯 배양액 추출물을 포함하는 조성물 Download PDF

Info

Publication number
WO2021085876A1
WO2021085876A1 PCT/KR2020/013429 KR2020013429W WO2021085876A1 WO 2021085876 A1 WO2021085876 A1 WO 2021085876A1 KR 2020013429 W KR2020013429 W KR 2020013429W WO 2021085876 A1 WO2021085876 A1 WO 2021085876A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
white
culture medium
extract
mushroom
mycelium
Prior art date
Application number
PCT/KR2020/013429
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
염현숙
오원보
김지혜
이혜자
박진오
이지원
김철호
오백록
김민수
허선연
서정우
Original Assignee
대봉엘에스 주식회사
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 대봉엘에스 주식회사 filed Critical 대봉엘에스 주식회사
Priority to CA3163428A priority Critical patent/CA3163428A1/en
Priority to US17/773,220 priority patent/US20220370337A1/en
Priority to CN202080003412.4A priority patent/CN113498337A/zh
Publication of WO2021085876A1 publication Critical patent/WO2021085876A1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9728—Fungi, e.g. yeasts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L31/00—Edible extracts or preparations of fungi; Preparation or treatment thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/125—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives containing carbohydrate syrups; containing sugars; containing sugar alcohols; containing starch hydrolysates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/72—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds
    • A61K8/73—Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/007—Preparations for dry skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00—Function of food ingredients
    • A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A23V2200/318—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on skin health and hair or coat
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2250/00—Food ingredients
    • A23V2250/20—Natural extracts
    • A23V2250/208—Fungi extracts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
    • A61K2800/52—Stabilizers
    • A61K2800/522—Antioxidants; Radical scavengers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
    • A61K2800/85—Products or compounds obtained by fermentation, e.g. yoghurt, beer, wine

Definitions

  • the present invention relates to a composition comprising an extract of white wood ear mushroom culture, and more particularly, to a cosmetic composition and a food composition capable of improving the skin condition through skin moisturizing, anti-wrinkle or antioxidant.
  • White fungus (Tremella fuciformis) is in the basidiomycete River (Heterobasidiomycetes) White-necked neck (Tremellales) timber unit epigenetic mushrooms that occur on the old trees of deciduous trees, dry branches and stems throughout the fall belongs to the white mokyigwa (Tremellaceae) from the spring of Korea, It is distributed all over the world, including Japan, China, Europe and America (Oh et al., 2006). The common name is called white jelly fungus or silver ear, and in Japan it is called'rokikurage' (Ko, 2012).
  • the white-necked mushroom extract has the effect of improving body fat and inhibiting the increase of cholesterol, and is known to have long- and short-term anti-stress effects (Cheng et al., 2002; Cheung, 1996; Ko et al., 2009). ).
  • Korean Patent Registration No. 10-1924342 which is a related prior art, discloses the adsorption activity of fine dust of polysaccharides derived from the fruiting body of white-throated mushrooms, and Korean Patent Publication No. 10-2018-0124443 has the effect of strengthening the skin barrier of the fruiting body of white-throated mushroom It is starting.
  • most of these mushroom-derived substances are fruiting body extracts, which are not only produced in small quantities, but also have a very high production cost.
  • Patent Document 0001 Korean Registered Patent Publication No. 10-1924342
  • Patent Document 0002 Korean Laid-Open Patent Publication No. 10-2018-0124443
  • the inventors of the present invention have completed the present invention by preparing an extract of the white-throated mushroom culture solution and confirming its moisturizing, anti-wrinkle and antioxidant activities.
  • composition comprising an extract of a culture medium of Tremella fuciformis as an active ingredient.
  • the cosmetic composition according to the present invention includes an extract of a culture medium of Tremella fuciformis as an active ingredient.
  • the white-necked mushroom culture medium may be a mycelium culture medium.
  • the white-necked mushroom culture medium may include a polysaccharide derived from the mycelium culture medium, and the polysaccharide may have a mannose content of 20 to 60% by weight.
  • the white tree mushroom culture solution may be cultured for 6 to 48 hours.
  • the white tree mushroom culture solution may be cultured at a temperature of 15 to 35 °C.
  • the extract may be a polysaccharide derived from white wood mushroom culture medium.
  • the extract may be extracted with water, C 1 to C 4 lower alcohol or a mixed solvent thereof.
  • the cosmetic composition may exhibit at least one effect selected from skin moisturizing, anti-wrinkle, and antioxidant.
  • the food composition according to the present invention includes an extract of a culture medium of Tremella fuciformis as an active ingredient.
  • the food composition may exhibit at least one effect selected from skin moisturizing, anti-wrinkle, and antioxidant.
  • the extract of the white wood ear mushroom culture medium according to the present invention has low cytotoxicity, increases the amount of moisturizing factor, increases the amount of collagen and collagen fibers, and has the effect of inhibiting active oxygen species in cells, so that it is a moisturizing, anti-wrinkle and antioxidant functional material derived from natural products. As it can be used, it can be used in various fields of beauty and food for improving skin conditions.
  • 1 is a view showing the results of sugar analysis of the extract of the white-necked mushroom mycelium culture medium according to the present invention.
  • Figure 2 is a view showing the results of analyzing the molecular weight of the polysaccharide derived from the white-throated mushroom mycelium culture medium according to the present invention.
  • Figure 3 is a view showing the result of confirming the production amount of the moisturizing factor hyaluronic acid (HA) of the extract of the mycelium culture medium of white wood ear mushrooms according to the present invention.
  • HA moisturizing factor hyaluronic acid
  • Figure 8 is a view showing the results of confirming the intracellular reactive oxygen species according to the treatment of the extract of the mycelium culture broth of white wood ear mushrooms according to the present invention.
  • the white-necked mushroom culture solution may be cultured for 6 to 48 hours, and preferably cultured for 12 to 36 hours, but is not limited thereto.
  • HaCaT cells were dispensed into a 96-well plate at a concentration of 5 ⁇ 10 4 cells/mL, and cultured for 18 hours at 37°C and 5% CO 2. After exchanging the cultured cells with a serum-free medium, extracts of the white-throated mushroom mycelium culture solution prepared in Example 1 were at various concentrations (0.1, 0.5, 1.0, 2.0, 4.0 v/v%). Processed. Thereafter, EZ-cytox was added to each well and reacted for 30 minutes at 37° C. and 5% CO 2. The absorbance was measured at 450 nm of each well using a microplate reader.
  • HaCaT cells were aliquoted into a 24-well plate at 1.0 x 10 5 cells/mL and cultured for 18 hours at 37°C and 5% CO 2. After replacing the cultured cell medium with serum-free DMEM medium, the extracts of the white-throated mushroom mycelium culture solution prepared in Example 1 were treated at concentrations of 0.1, 0.5, and 1.0 v/v%, respectively, and cultured for 24 hours. Then, the amount of hyaluronic acid produced in the culture medium extract of each experimental group was measured. The control group was treated with retinoic acid (RA) at a concentration of 10 ⁇ M.
  • RA retinoic acid
  • HaCaT cells were aliquoted into a 24-well plate at 1.0 x 10 5 cells/mL and cultured for 18 hours at 37°C and 5% CO 2. After replacing the cultured cell medium with serum-free DMEM medium, the extracts of the white-throated mushroom mycelium culture solution prepared in Example 1 were treated at concentrations of 0.1, 0.5, and 1.0 v/v%, respectively, and cultured for 24 hours. After lysing the cells of each experimental group, a protein was taken, and the amount of aquaporin 3 produced in the culture medium extract was measured. The control group was treated with retinoic acid (RA) at a concentration of 10 ⁇ M.
  • RA retinoic acid
  • Fig. 4 shows the result of measuring the production amount of aquaporin 3 according to the extract treatment of the white tree mushroom mycelium culture solution.
  • the amount of procollagen was measured using a procollagen type I peptide (PIP) EIA kit (Takara Biomedical Co.), and the amount of collagen was quantified by measuring absorbance at a wavelength of 450 nm according to the manufacturer's manual.
  • Fig. 5 shows the results of quantifying the amount of procollagen type 1 peptide produced according to the treatment of the white tree mushroom mycelium culture medium extract.
  • the extract of the white wood ear mushroom mycelium culture solution prepared in Example 1 increases collagen synthesis and production of collagen fibers, and thus has a high possibility of use as an anti-wrinkle material.
  • HaCaT cells were inoculated into a 24-well plate with 1.0 x 10 5 cells/well and incubated for 24 hours, and then the extract of the white-throated mushroom mycelium prepared in Example 1 was pretreated for 24 hours. . After washing the pretreated cells with phosphate buffered saline (PBS), experiments were performed according to the manufacturer's manual using an Intracellular ROS assay kit (Green Fluorescence). The results of measuring the inhibitory effect of active oxygen in the cells are shown in FIG. 7.
  • PBS phosphate buffered saline
  • HaCaT cells which are skin keratinocytes, were inoculated in a 24-well plate at a concentration of 1.0 to 10 5 cells/well and cultured for 24 hours, and then prepared in Example 1.
  • the extracts of the white-throated mushroom mycelium culture were treated with various concentrations (0.1, 0.5, 1.0, 2.0 v/v%) and cultured for 24 hours.
  • H 2 O 2 was treated at a concentration of 300 ⁇ M, followed by additional culture for 3 hours.
  • DCF-DA dichlorofluorescein diacetate
  • a dye for measuring intracellular active oxygen was added at a concentration of 50 ⁇ M and incubated for 1 hour. After washing the cultured cells with PBS, the degree of fluorescence expression of the washed cells was measured using a fluorescence microscope.
  • Fig. 8 shows the results of measuring the intracellular reactive oxygen species of the extract of the white wood ear mushroom mycelium culture medium.
  • the extract of the white tree mushroom mycelium culture solution prepared in Example 1 has a remarkable effect of inhibiting active oxygen species in cells, and thus has a high possibility of use as an antioxidant material.
  • the present inventors prepared an extract of the white-necked mushroom culture solution, and the extract was found to have low cytotoxicity, increased moisturizing factor production, increased collagen and collagen fiber production, and inhibited intracellular reactive oxygen species.
  • the extract of the white-necked ear mushroom culture solution of the present invention may be used as a moisturizing, anti-wrinkle, and antioxidant functional material derived from natural products, and the extract of the white-necked ear mushroom culture solution of the present invention is used in the field of beauty and food for improving skin conditions. It can be used in various ways.
  • composition ratio of the vitamin and mineral mixture is relatively suitable for health food, but it may be arbitrarily modified, and the above ingredients are mixed according to a conventional health food manufacturing method.
  • Granules can be prepared, and used for preparing a health food composition according to a conventional method.
  • the resulting solution is filtered and obtained in a sterilized 2 L container, sealed and sterilized, and then stored in the refrigerator. It was used to prepare the health beverage composition of the present invention.
  • composition ratio is composed of ingredients suitable for a relatively preferred beverage in a preferred embodiment, but the mixing ratio may be arbitrarily modified according to regional and ethnic preferences such as the demand class, the country of demand, and the purpose of use.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Cosmetics (AREA)

Abstract

본 발명은 흰목이버섯 배양액 추출물을 포함하는 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 흰목이버섯 배양액 추출물은 세포독성이 낮을 뿐만 아니라 보습인자 생성량 증가, 콜라겐 및 콜라겐 섬유 생성량 증가 및 세포 내 활성 산소종 억제 효과를 가지고 있어, 천연물 유래 보습, 항주름 및 항산화 기능성 소재로 이용될 수 있는바, 피부 상태 개선을 위한 미용 및 식품 분야에서 다양하게 활용될 수 있다.

Description

흰목이버섯 배양액 추출물을 포함하는 조성물
본 발명은 흰목이버섯 배양액 추출물을 포함하는 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 피부 보습, 항주름 또는 항산화를 통해 피부 상태를 개선할 수 있는 화장료 조성물 및 식품 조성물에 관한 것이다.
본 출원은 2019년 11월 1일자로 출원된 한국특허출원 제10-2019-0138381호에 대한 우선권 주장출원으로서, 해당출원의 명세서 및 도면에 개시된 모든 내용은 인용에 의해 본 출원에 원용된다.
흰목이버섯(Tremella fuciformis)은 이담자균강(Heterobasidiomycetes) 흰목이목(Tremellales) 흰목이과(Tremellaceae)에 속하며 봄부터 가을에 걸쳐 활엽수의 고목, 마른 가지 및 줄기 위에 발생하는 목재부후성 버섯으로 한국, 일본, 중국, 유럽 및 아메리카 등 전 세계에 걸쳐 분포하고 있다(Oh et al., 2006). 일반명은 흰 젤리버섯(white jelly fungus) 혹은 은이(silver ear)로 불리고 있으며, 일본에서는 '로키쿠라게'로 불린다(Ko, 2012). 또한 중국에서는 예로부터 목이버섯을 꾸준히 먹으면 면역체계가 활성화되어 암과 노화를 막고, 고혈압과 동맥경화를 예방할 수 있다고 알려져 있다(Chen and Cai, 2008). 흰목이버섯의 생리활성에 대한 연구에서는 흰목이버섯에서 분리한 산성 다당류를 이용하여 동물모델에서 육종 세포주인 sarcoma 180 세포에 대해 37 내지 64% 정도의 항 종양활성을 보이는 것으로 나타났다(Ukai et al., 1972). 또한 흰목이버섯 추출물이 체지방 개선 및 콜레스테롤 증가를 억제하는 효능이 있다는 결과도 보고되고 있으며, 장단기적 항스트레스 효과가 있다고 알려져 있다(Cheng et al., 2002; Cheung, 1996; Ko et al., 2009).
한편, 상황버섯, 영지버섯, 표고버섯 등 다양한 버섯에서 유래된 소재들이 많은 산업 분야에 응용되고 있다. 관련 선행기술인 한국 등록특허 제10-1924342호는 흰목이버섯 자실체 유래 다당체의 미세먼지 흡착 활성을 개시하고 있으며, 한국 공개특허 제10-2018-0124443호는 흰목이버섯 자실체 추출물의 피부장벽 강화 효과를 개시하고 있다. 그러나 이들 버섯 유래의 물질들은 대부분 자실체 추출물로써 소량 생산될 뿐만 아니라 생산 비용이 매우 크다는 한계가 있다.
[선행기술문헌]
[특허문헌]
(특허문헌 0001) 대한민국 등록특허공보 제10-1924342호
(특허문헌 0002) 대한민국 공개특허공보 제10-2018-0124443호
이에 본 발명자들은 전술한 바와 같은 종래기술의 문제점을 해결하기 위하여, 흰목이버섯 배양액의 추출물을 제조하고, 이의 보습, 항주름 및 항산화 활성을 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서 본 발명의 목적은, 흰목이버섯(Tremella fuciformis) 배양액의 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 흰목이버섯(Tremella fuciformis) 배양액의 추출물을 유효성분으로 포함한다.
여기서, 상기 흰목이버섯 배양액은 균사체 배양액일 수 있다.
이때, 상기 흰목이버섯 배양액은 상기 균사체 배양액 유래 다당체를 포함하고, 상기 다당체는 만노오스(mannose)의 함량이 20 내지 60 중량%인 것일 수 있다.
그리고, 상기 흰목이버섯 배양액은 6 내지 48 시간 동안 배양된 것일 수 있다.
또한, 상기 흰목이버섯 배양액은 15 내지 35 ℃의 온도에서 배양된 것일 수 있다.
그리고, 상기 추출물은 흰목이버섯 배양액 유래 다당체인 것일 수 있다.
또한, 상기 추출물은 물, C1 내지 C4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출된 것일 수 있다.
그리고, 상기 화장료 조성물은 피부 보습, 항주름 및 항산화에서 선택되는 1 이상의 효능을 나타내는 것일 수 있다.
한편, 본 발명에 따른 식품 조성물은 흰목이버섯(Tremella fuciformis) 배양액의 추출물을 유효성분으로 포함한다.
여기서, 상기 식품 조성물은 피부 보습, 항주름 및 항산화에서 선택되는 1 이상의 효능을 나타내는 것일 수 있다.
본 발명에 따른 흰목이버섯 배양액의 추출물은 세포독성이 낮을 뿐만 아니라 보습인자 생성량 증가, 콜라겐 및 콜라겐 섬유 생성량 증가 및 세포 내 활성 산소종 억제 효과를 가지고 있어, 천연물 유래 보습, 항주름 및 항산화 기능성 소재로 이용될 수 있는바, 피부 상태 개선을 위한 미용 및 식품 분야에서 다양하게 활용될 수 있다.
도 1은 본 발명에 따른 흰목이버섯 균사체 배양액 추출물의 당분석 결과를 나타낸 도면이다.
도 2는 본 발명에 따른 흰목이버섯 균사체 배양액 유래 다당체의 분자량을 분석한 결과를 나타낸 도면이다.
도 3은 본 발명에 따른 흰목이버섯 균사체 배양액 추출물의 보습인자 히알루론산(Hyaluronic acid, HA) 생성량을 확인한 결과를 나타내는 도면이다.
도 4는 본 발명에 따른 흰목이버섯 균사체 배양액 추출물의 보습인자 아쿠아포린 3(aquaporin 3, AQP3) 생성량을 확인한 결과를 나타내는 도면이다.
도 5는 본 발명에 따른 흰목이버섯 균사체 배양액 추출물의 처리에 따른 프로콜라겐 제1형 펩타이드 생성량을 정량한 결과를 나타내는 도면이다.
도 6은 본 발명에 따른 흰목이버섯 균사체 배양액 추출물의 처리에 따른 콜라겐 섬유 생성을, 형광현미경을 통해 관찰한 결과를 나타내는 도면이다.
도 7은 본 발명에 따른 흰목이버섯 균사체 배양액 추출물의 처리에 따른 활성 산소 억제 활성을 측정한 결과를 나타내는 도면이다.
도 8은 본 발명에 따른 흰목이버섯 균사체 배양액 추출물의 처리에 따른 세포 내 활성 산소종을 확인한 결과를 나타내는 도면이다.
이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예에 대하여 첨부한 도면을 참고로 하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예 및 도면에 한정되지 않는다.
본 발명에 따른 피부 상태 개선용 화장료 조성물은 흰목이버섯(Tremella fuciformis) 배양액의 추출물을 유효성분으로 포함한다.
본 발명에 따른 흰목이버섯 배양액의 추출물은 세포독성이 낮을 뿐만 아니라 보습인자 생성량 증가, 콜라겐 및 콜라겐 섬유 생성량 증가 및 세포 내 활성 산소종 억제 효과를 가지고 있어, 천연물 유래 피부 보습, 항주름 또는 항산화 기능성 화장료 조성물로 이용될 수 있다.
흰목이버섯은 균사체와 자실체로 구분된다. 균사체는 버섯의 영양기관으로서, 일반식물의 뿌리, 줄기, 잎 부분에 해당하고, 배색의 솜털 또는 실오라기처럼 보이는 버섯의 몸체에 해당하며, 버섯 일생의 대부분을 균사상태로 기생 또는 부생생활을 한다. 자실체는 버섯의 번식기관으로서, 일반식물의 꽃에 해당하며, 균사가 충분한 영양을 축적한 후, 기후조건이 맞으면 일시에 자라 눈에 보이는 자실체가 된다. 버섯의 균사체와 자실체는 구성당과 아미노산이 다르다(Lee et al., 1999, "Characteristics of polysaccharide isolated from the fruit body and cultured mycelia of Phellinus linteus IY001." The Korean Journal of Mycology 27.6(1999): 424-429).
여기서, 상기 흰목이버섯 배양액은 흰목이버섯의 균사체 배양액인 것이 효과적인 측면에서 더욱 바람직하나, 이에만 제한되는 것은 아니다.
이때, 상기 흰목이버섯 배양액은 상기 균사체 배양액 유래 다당체를 포함하고, 상기 다당체는 만노오스(mannose)의 함량이 20 내지 60 중량%인 것이 바람직하고, 더 바람직하게는 30 내지 50 중량%인 것일 수 있다.
그리고, 상기 흰목이버섯 배양액은 6 내지 48 시간 동안 배양된 것일 수 있고, 바람직하게는 12 내지 36 시간 동안 배양된 것일 수 있으나, 이에만 제한되는 것은 아니다.
상기 배양 시간이 6 시간 미만인 경우 균사체의 배양이 충분히 이루어지지 않아 유효성분의 함량 및 수율이 낮을 수 있고, 상기 배양 시간이 48 시간을 초과할 경우, 균사체의 배양 효율 감소 또는 균사체의 변형이 발생할 수 있다.
그리고, 상기 흰목이버섯 배양액은 15 내지 35 ℃의 온도에서 배양된 것일 수 있고, 바람직하게는 20 내지 30 ℃에서 배양된 것일 수 있으나, 이에만 제한되는 것은 아니다.
상기 배양 온도가 15 ℃ 미만인 경우 균사체의 배양이 충분히 이루어지지 않아 유효성분의 함량 및 수율이 낮을 수 있고, 상기 배양 온도가 35 ℃를 초과할 경우, 균사체의 배양 효율 감소 또는 균사체의 변형이 발생할 수 있다.
한편, 상기 추출물은 흰목이버섯 배양액 유래 다당체일 수 있으며, 이러한 다당체는 고점성 다당류이므로, 프로콜라겐 합성능을 증가시키고 젤라틴과 같은 특성으로 피부 보습능을 향상시켜 피부 주름개선에 효과적이며 항염 효과와 항노화 효과, 미백 효과 및 콜라겐 합성 촉진 효과 등이 우수하다. 그리고, 외부의 유해물질로 인한 pH 변화로부터 안정하기 때문에 피부 자극을 진정시키는 효과도 있다.
그리고, 상기 추출물은 피부 상태 개선에 바람직하게 작용할 수 있도록 물, C1 내지 C4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출된 것일 수 있다. 상기 저급알코올은 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올일 수 있고, 상기 혼합용매를 특별히 한정하는 것은 아니지만, 바람직하게는 20 내지 80 부피%의 메탄올, 에탄올, 부탄올 또는 프로판올 수용액, 더욱 바람직하게는 60 내지 80 부피%의 에탄올 수용액을 들 수 있다.
한편, 본 발명의 다른 측면에 따른 피부 상태 개선용 식품 조성물은, 흰목이버섯(Tremella fuciformis) 배양액의 추출물을 유효성분으로 포함한다.
흰목이버섯 배양액의 추출물은 세포독성이 낮을 뿐만 아니라 보습인자 생성량 증가, 콜라겐 및 콜라겐 섬유 생성량 증가 및 세포 내 활성 산소종 억제 효과를 가지고 있어, 천연물 유래 피부 보습, 항주름 또는 항산화 기능성 식품 조성물로 이용될 수 있다.
이하, 구체적인 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명한다. 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 흰목이버섯 균사체 배양액의 추출물 제조
흰목이버섯 균사체를 배양한 배양액을 에탄올로 추출하여, 흰목이버섯 균사체 배양액의 추출물을 제조하였다. 구체적으로, 흰목이버섯으로부터 균사체를 분리하고, 분리된 균사체를 300 mL의 MCM(Mushroom Complete Medium) 배지, 25 ℃, 180 rpm 조건에서 24 시간 동안 배양하였다. 배양된 균사체를 원심분리하여 상층액을 얻었다. 분리된 상층액 및 에탄올을 혼합(분리된 상층액:에탄올=1:3(부피비))한 후, 4 ℃에서 교반하며 밤새도록(overnight) 배양하였다. 배양된 혼합물을 원심분리(12,000 rpm)하여 침전물, 즉, 흰목이버섯 균사체 배양액 유래 다당체를 수득하였다. 수득된 흰목이버섯 균사체 배양액 유래 다당체를 정제수로 희석(다당체:정제수=1:99(부피비)) 및 여과하여, 흰목이버섯 균사체 배양액의 추출물을 제조하였다.
실험예 1. 흰목이버섯 균사체 배양액 유래 추출물의 당분석
1-1. 흰목이버섯 균사체 배양액 유래 추출물의 다당체 함량분석
1-1-1. 중성당 가수분해
Microcentrifuge tube에 흰목이버섯 균사체 배양액 유래 다당체 100 μg과 2 M의 TFA(Trifluoroacetic acid) 400 μl를 각각 넣고 100 ℃에서, 4 시간 동안 가수분해하였다. 실온에서 식힌 후, 진공원심농축기를 이용하여 건조하고 흰목이버섯 균사체 배양액 유래 다당체를 3차 증류수 2 ml에 녹여 02. Um filter로 여과하였다.
1-1-2. Glucuronic acid 가수분해
Microcentrifuge tube에 흰목이버섯 균사체 배양액 유래 다당체 100 μg과 2 M의 TFA(Trifluoroacetic acid) 400 μl를 각각 넣고 100 ℃에서, 6 시간 동안 가수분해하였다. 실온에서 식힌 후, 진공원심농축기를 이용하여 건조하고 시료를 3차 증류수 1 ml에 녹여 02. Um filter로 여과하였다.
1-1-3. HPAEC(High-Performance Anion-Exchange Chromatography)를 이용한 당분석
HPAEC를 이용하여 상기 실험예 1-1-1 및 1-1-2에서 가수분해된 당을 분석하였다. 구체적인 HPAEC 분석 조건은 하기 표 1과 같으며, 당 분석 결과는 도 1 및 표 2에 나타내었다.
중성당 Glucuronic acid
Mode Anion-exchange chromatography
검출 Integrated amperometry
용매 2 mM NaOH 100 mM NaOH /
150 mM sodium acetate
유속
(ml/min)		 0.5 1.0
Column CarboPac PA20 column
(3×150㎜, Dionex, 060142) and
AminTrap(3x30 ㎜, Dionex 060146)		 CarboPac PA1 column
(4×250 ㎜, Dionex, 035391) and
guard column(4×50 ㎜, Dionex, 043096)
온도, ℃ Column oven, 30; Autosampler, 8
흰목이버섯 균사체 배양액 추출물 흰목이버섯 자실체 배양액 추출물
sugar Content(중량%) Content(중량%)
Fucose 17.1 11.2
Glucose 1.3 50.5
Xylose 21.0 15.2
annose 40.3 8.5
Glucuronic acid 17.1 13.0
Total 96.8 98.4
표 2에 나타난 바와 같이, 흰목이버섯 균사체 배양액 유래 다당체는 Glucose의 함량이 흰목이버섯 자실체 유래 다당체보다 낮은 것을 확인하였다. 반면에, 흰목이버섯 균사체 배양액 유래 다당체는 mannose의 함량이 흰목이버섯 자실체 배양액 유래 다당체보다 약 8배 높은 것을 확인하였다. α-mannan이 속하는 mannose는 세포막에 존재하는 Dectin-2 receptor에 결합하여 피부 면역 및 장관 면역을 유도하는 다당체이다.
1-2. 흰목이버섯 균사체 배양액 유래 추출물의 다당체 분자량 분석
흰목이버섯 균사체 배양액 유래 다당체의 평균 분자량은 고성능 액체크로마토그래피-MALS(Multi-angle light scattering) 시스템(Wyatt Technology, Santa Babara, CA)에서 SEC 컬럼(TSK-gel-GMPWXL, 30 cm Х 7.8 mm, 13 μm, Tosoh)을 이용하여 분석하였다. 흰목이버섯 균사체 배양액 유래 다당체를 3 mg/mL의 농도가 되도록 인산염완충액(pH 7.3~7.5)에 용해하여 분석시료를 준비하였다. 분석시료는 고성능 액체크로마토그래피 유량 0.5 mL/min, 인젝션 볼륨 100 ㎕, 이동상 인산완충생리식염수(pH 7.3~7.5), 검출기 DAWN HELEOS II, Optilab rEX를 이용한 조건으로 분석하였다. 분자량 계산은 dn/dc값(specific refractive index increment)은 문헌을 참고하여 0.15 mL/g으로 결정하였다. 흰목이버섯 균사체 배양액 유래 다당체 평균 분자량의 계산은 ASTRA 6 software(Wyatt Technology)를 이용하였다. 흰목이버섯 균사체 배양액 유래 다당체를 이용한 고성능 액체크로마토그래피-MALS 결과를 도 2에 나타내었다.
도 2에 나타낸 바와 같이, 흰목이버섯 균사체 배양액 유래 다당체의 평균 분자량은 1.79 Х 106(±0.721%)임을 확인하였다.
실험예 2. 피부세포 배양
2-1. 피부 각질 형성세포 배양
피부 각질 형성세포인 HaCaT 세포는 Cell Line Service GmbH.(Germany)에서 분양받아 사용하였다. 1% 페니실린-스트렙토마이신(penicillin-streptomycin)과 10% 소태아 혈청(fetal bovine serum, FBS)이 함유된 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium) 배지를 사용하여 37℃, 5% CO2 항온기에서 배양하였으며, 2 내지 3일 간격으로 계대배양을 시행하였다.
2-2. 피부섬유아세포 배양
피부섬유아세포인 Normal Human Dermal Fibroblasts(NHDF) 세포는 Lonza(Lonza Walkersville, Inc)로부터 분양받아 0.1% hFGF-B, 인슐린, GA-1000과 2% 소태아혈청이 함유된 FBM(Fibroblast Basal Medium) 배지를 사용하여 37℃, 5% CO2 항온기에서 배양하였으며, 3 내지 5일 간격으로 계대배양을 시행하였다.
실험예 3. 흰목이버섯 균사체 배양액 추출물의 세포 독성 평가
EZ-cytox assay는 water solution tetrazolium salt(WST)가 살아있는 세포의 탈수소효소(Dehydrogenase)와 반응하여 주황색의 수용성 포마잔(formazan)을 생성하는 원리를 이용하여 세포생존율을 측정하는 대표적인 세포 독성 평가 방법이다.
3-1. 피부 각질 형성세포에 대한 세포 독성 평가
세포에서의 독성을 확인하기 위하여, HaCaT 세포를 5Х104 cells/mL의 농도로 96 웰 플레이트에 분주하여 37℃, 5% CO2 조건에서 18 시간 동안 배양하였다. 배양된 세포를 무혈청(serum-free) 배지로 교환한 후, 상기 실시예 1에서 제조된 흰목이버섯 균사체 배양액의 추출물을 다양한 농도(0.1, 0.5, 1.0, 2.0, 4.0 v/v%)로 처리하였다. 이후 EZ-cytox를 각 웰에 첨가하여 37℃, 5% CO2 조건에서 30 분 동안 반응시켰다. 마이크로플레이트 리더를 사용하여 각 웰의 450 nm에서 흡광도를 측정하였다. 각 시료군에 대한 평균 흡광도 값을 구하였으며, 이 값을 대조군의 흡광도 값과 비교하여 세포생존율을 평가하였다. 피부 각질 형성세포에 대한 흰목이버섯 균사체 배양액 추출물의 세포 독성 평가 결과를 하기 표 3에 나타내었다.
구분 세포독성
처리농도(%) HaCaT 세포생장률(%)
무처리군 - 100
흰목이버섯 균사체 배양액의 추출물
(실시예 1)		 0.1 99.8 ± 4.3
0.5 98.6 ± 2.1
1.0 95.7 ± 6.5
2.0 94.8 ± 2.4
4.0 87.0 ± 4.7
상기 표 3에 나타낸 바와 같이, 흰목이버섯 균사체 배양액의 추출물은 피부 각질 형성세포에 대한 세포 독성이 낮은 것을 확인하였다.
3-2. 피부섬유아세포에 대한 세포 독성 평가
피부섬유아세포인 NHDF(Normal Human Dermal Fibroblasts) 세포를 1Х104 cells/mL의 농도로 96 웰 플레이트에 분주하였다. 상기 실험예 2-1의 EZ-cytox assay를 통해 NHDF 세포에 대한 흰목이버섯 균사체 배양액 추출물의 세포 독성을 평가하였다. 피부섬유아세포에 대한 흰목이버섯 균사체 배양액 추출물의 세포 독성 평가 결과를 하기 표 4에 나타내었다.
구분 세포독성
처리농도(%) NHDF 세포생장률(%)
무처리군 - 100
흰목이버섯 균사체 배양액의 추출물
(실시예 1)		 0.1 104.4 ± 3.8
0.5 97.4 ± 5.2
1.0 97.5 ± 4.2
2.0 91.1 ± 4.6
4.0 78.9 ± 5.0
상기 표 4에 나타낸 바와 같이, 흰목이버섯 균사체 배양액의 추출물은 피부섬유아세포에 대한 세포 독성이 낮은 것을 확인하였다.
실험예 4. 흰목이버섯 균사체 배양액 추출물의 보습 효과 확인
4-1. 흰목이버섯 균사체 배양액 추출물의 보습인자인 히알루론산(Hyaluronic acid, HA) 생성량 증가 효과 확인
HaCaT 세포를 24 웰 플레이트에 1.0Х105 cells/mL로 분주하여 37℃, 5% CO2 조건에서 18 시간 동안 배양하였다. 배양된 세포의 배지를 무혈청 DMEM 배지로 교환한 후 상기 실시예 1에서 제조된 흰목이버섯 균사체 배양액의 추출물을 각각 0.1, 0.5, 1.0 v/v%의 농도로 처리하여 24 시간 동안 배양하였다. 이후 각 실험군의 배양액 추출물의 히알루론산 생성량을 측정하였다. 대조군은 레티노산(retinoic acid, RA)을 10 μM의 농도로 처리하였다. 상기 히알루론산 생성량 측정은 HA-ELISA kit(Cusabio Biotechnology Co., Ltd)를 이용하였으며, 실험은 제조사에서 제공한 방법에 의해 진행하였다. 흰목이버섯 균사체 배양액의 추출물 처리에 따른 히알루론산 생성량 측정 결과를 도 3에 나타내었다.
도 3에 나타낸 바와 같이, 흰목이버섯 균사체 배양액의 추출물은 보습인자인 히알루론산의 생성을 농도 의존적으로 증가시키는 것을 확인하였다. 또한 흰목이버섯 균사체 배양액은 대조군인 레티노산과 유사한 수준의 히알루론산을 생성하는 것을 알 수 있다.
4-2. 흰목이버섯 균사체 배양액 추출물의 보습인자인 아쿠아포린 3(aquaporin 3, AQP3) 생성량 증가 효과 확인
HaCaT 세포를 24 웰 플레이트에 1.0Х105 cells/mL로 분주하여 37℃, 5% CO2 조건에서 18 시간 동안 배양하였다. 배양된 세포의 배지를 무혈청 DMEM 배지로 교환한 후 상기 실시예 1에서 제조된 흰목이버섯 균사체 배양액의 추출물을 각각 0.1, 0.5, 1.0 v/v%의 농도로 처리하여 24 시간 동안 배양하였다. 이후 각 실험군의 세포를 용해시킨 후 단백질을 취하여, 배양액 추출물의 아쿠아포린 3 생성량을 측정하였다. 대조군은 레티노산(retinoic acid, RA)을 10 μM의 농도로 처리하였다. 상기 아쿠아포린 3 생성량 측정은 AQP3-ELISA kit(Cusabio Biotechnology Co., Ltd)를 이용하였으며, 실험은 제조사에서 제공한 방법에 의해 진행하였다. 흰목이버섯 균사체 배양액의 추출물 처리에 따른 아쿠아포린 3 생성량 측정 결과를 도 4에 나타내었다.
도 4에 나타낸 바와 같이, 흰목이버섯 균사체 배양액의 추출물은 보습인자인 아쿠아포린 3의 생성을 농도 의존적으로 증가시키는 것을 확인하였다.
상기 실험 결과, 실시예 1에서 제조된 흰목이버섯 균사체 배양액의 추출물이 히알루론산 및 아쿠아포린 3의 생성을 증가시키는 것을 확인하였다. 상기 결과는 흰목이버섯 균사체 배양액 추출물이 만노오스를 고농도로 함유하고 있기 때문인 것으로 사료된다. 따라서 흰목이버섯 균사체 배양액 추출물은 천연 유래 보습 소재로서 활용 가능성이 높다는 것을 확인할 수 있다.
실험예 5. 흰목이버섯 균사체 배양액 추출물의 항주름 활성 확인
5-1. 흰목이버섯 균사체 배양액 추출물의 프로콜라겐 제1형 펩타이드(procollagen type I peptide, PIP) 생성 효과 확인
피부섬유아세포인 NHDF 세포를 24 웰 플레이트에 2Х104 cells/ml로 분주한 다음 세포 배양조건에서 24 시간 동안 배양하였다. 배양 후 무혈청 FBM 배지로 교체한 후 상기 실시예 1에서 제조된 흰목이버섯 균사체 배양액의 추출물을 각각 0.1, 0.5, 1.0 v/v%의 농도로 처리하였으며, 24 시간 동안 배양하였다. 배양 후 각 군의 상층액을 취하여, 배지 중 유리된 프로콜라겐(procollagen)의 양을 측정하였다. 대조군은 추출물 대신 아스코브산(ascorbic acid)을 10 μg/ml의 농도로 처리하였다. 상기 프로콜라겐 양의 측정은 procollagen type I peptide(PIP) EIA kit(Takara Biomedical Co.)를 이용하였으며, 제조사의 매뉴얼에 따라 450 nm의 파장에서 흡광도를 측정하여 콜라겐 양을 정량하였다. 흰목이버섯 균사체 배양액 추출물의 처리에 따른 프로콜라겐 제1형 펩타이드 생성량을 정량한 결과를 도 5에 나타내었다.
도 5에 나타낸 바와 같이, 흰목이버섯 균사체 배양액의 추출물은 콜라겐 합성을 농도 의존적으로 증가시키는 것을 확인하였다.
5-2. 흰목이버섯 균사체 배양액 추출물의 콜라겐 섬유 생성 효과 확인
피부섬유아세포인 NHDF 세포를 24 웰 플레이트에 2Х104 cells/ml로 분주한 다음 세포 배양조건에서 24 시간 동안 배양하였다. 배양 후 무혈청 FBM 배지로 교체한 후 상기 실시예 1에서 제조된 흰목이버섯 균사체 배양액의 추출물을 각각 0.1, 0.5, 1.0 v/v%의 농도로 처리하였으며, 24 시간 동안 배양하였다. 배양 후 HEPES-BSS(HEPES Buffered Saline Solution)로 세포를 세척한 후 면역형광염색방법에 따라 세포 내 콜라겐 섬유를 염색하였다. 형광현미경을 이용하여 염색된 세포의 형광 발현 정도를 측정하였다. 흰목이버섯 균사체 배양액 추출물의 처리에 따른 콜라겐 섬유 생성을 확인한 결과를 도 6에 나타내었다.
도 6에 나타낸 바와 같이, 흰목이버섯 균사체 배양액의 추출물은 피부섬유아세포에서 콜라겐 섬유의 생성을 농도 의존적으로 증가시키는 것을 확인하였다.
상기 실험 결과, 실시예 1에서 제조된 흰목이버섯 균사체 배양액의 추출물이 콜라겐 합성 및 콜라겐 섬유의 생성을 증가시키는바, 항주름 소재로서 활용 가능성이 높다는 것을 확인할 수 있다.
실험예 6. 흰목이버섯 균사체 배양액 추출물의 항산화 효과 확인
6-1. 세포 내 활성산소(Reactive oxygen species, ROS) 억제 효과 측정
세포 내 활성산소 변화를 측정하기 위하여 HaCaT 세포를 24 웰 플레이트에 1.0Х105 cells/well 접종하여 24 시간 동안 배양한 후, 상기 실시예 1에서 제조된 흰목이버섯 균사체 배양액 추출물을 24 시간 동안 전처리하였다. 전처리된 세포를 PBS(phosphate buffered saline)로 세척한 후 Intracellular ROS assay kit(Green Fluorescence)를 이용하여 제조사의 매뉴얼에 따라 실험하였다. 세포 내 활성산소 억제 효과를 측정한 결과는 도 7에 나타내었다.
도 7에 나타낸 바와 같이, 흰목이버섯 균사체 배양액의 추출물은 농도 의존적으로 자유라디칼 소거 활성이 높은 것을 확인하였다. 특히, 흰목이버섯 균사체 배양액의 추출물을 2.0 v/v%의 농도로 처리한 실험군은 자유라디칼이 약 40 % 이상 소거된 것을 확인할 수 있다.
6-2. 이미징을 통한 세포 내 활성 산소종(Reactive oxygen species, ROS) 억제 효과 측정
세포 내 활성 산소종(ROS)의 변화를 시각화하기 위하여 피부 각질 형성세포인 HaCaT 세포를 24 웰 플레이트에 1.0Х105 cells/well의 농도로 접종하여 24 시간 동안 배양한 후, 실시예 1에서 제조된 흰목이버섯 균사체 배양액의 추출물을 다양한 농도(0.1, 0.5, 1.0, 2.0 v/v%)로 처리한 후 24 시간 동안 배양하였다. 배양된 세포를 인산염 완충액(phosphate buffered saline, PBS)로 세척한 후 H2O2를 300 μM 농도로 처리하여 3 시간 동안 추가 배양하였다. 세포 내 활성 산소를 측정하기 위한 염료인 DCF-DA(dichlorofluorescein diacetate)를 50 μM의 농도로 첨가하여 1 시간 동안 배양하였다. 배양된 세포를 PBS로 세척한 후, 형광현미경을 이용하여 세척된 세포의 형광 발현 정도를 측정하였다. 흰목이버섯 균사체 배양액 추출물의 세포 내 활성 산소종을 측정한 결과를 도 8에 나타내었다.
도 8에 나타낸 바와 같이, 흰목이버섯 균사체 배양액의 추출물은 농도 의존적으로 세포 내 활성 산소종의 생성을 억제하는 것을 확인하였다. 특히, 흰목이버섯 균사체 배양액의 추출물을 0.5, 1.0 및 2.0 v/v%의 농도로 처리한 실험군은 세포 내 활성 산소종 억제 활성이 우수한 것을 알 수 있다.
상기 실험 결과, 실시예 1에서 제조된 흰목이버섯 균사체 배양액의 추출물이 세포 내 활성 산소종 억제 효과가 현저한바, 항산화 소재로서 활용 가능성이 높다는 것을 확인할 수 있다.
종합적으로 본 발명자들은 흰목이버섯 배양액의 추출물을 제조하고, 상기 추출물은 세포독성이 낮을 뿐만 아니라, 보습인자 생성량 증가, 콜라겐 및 콜라겐 섬유 생성량 증가 및 세포 내 활성 산소종 억제 효과가 있음을 확인하였다. 이는 본 발명의 흰목이버섯 배양액의 추출물이 천연물 유래 보습, 항주름 및 항산화 기능성 소재로 이용 가능성이 있음을 의미하는 바, 본 발명의 흰목이버섯 배양액의 추출물은 피부 상태 개선을 위한 미용 및 식품 분야에서 다양하게 활용될 수 있다.
이하, 제조예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 제조예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 제조예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는다.
제조예 1. 피부 상태 개선용 화장료 조성물의 제조
1-1. 유연화장수(스킨로션)의 제조
흰목이버섯 배양액의 추출물 0.5 중량%
베타-1,3-글루칸 1.0 중량%
부틸렌글리콜 2.0 중량%
프로필렌글리콜 2.0 중량%
카르복시비닐폴리머 0.1 중량%
피이지-12 노닐페닐에테르 0.2 중량%
폴리솔베이트 80 0.4 중량%
에탄올 10.0 중량%
트리에탄올아민 0.1 중량%
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 to 100 중량%
1-2. 영양화장수(밀크로션)의 제조
흰목이버섯 배양액 추출물 0.5 중량%
베타-1,3-글루칸 1.0 중량%
밀납 4.0 중량%
폴리솔베이트 60 1.5 중량%
솔비탄세스퀴올레이트 1.5 중량%
유동파라핀 0.5 중량%
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 5.0 중량%
글리세린 3.0 중량%
부틸렌글리콜 3.0 중량%
프로필렌글리콜 3.0 중량%
카르복시비닐 폴리머 0.1 중량%
트리에탄올아민 0.2 중량%
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 to 100 중량%
1-3. 영양크림의 제조
흰목이버섯 배양액 추출물 1.0 중량%
베타-1,3-글루칸 5.0 중량%
밀날 10.0 중량%
폴리솔베이트 60 1.5 중량%
피이지 60 경화피마자유 2.0 중량%
솔비탄세스퀴올레이트 0.5 중량%
유동파라핀 10.0 중량%
스쿠알란 5.0 중량%
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 5.0 중량%
글리세린 5.0 중량%
부틸렌글리콜 3.0 중량%
프로필렌글리콜 3.0 중량%
트리에탄올아민 0.2 중량%
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 to 100 중량%
제조예 2. 피부 상태 개선용 식품 제제의 제조
2-1. 건강식품의 제조
흰목이버섯 배양액 추출물 100 mg
비타민 혼합물 적량
비타민 A 아세테이트 70 g
비타민 E 1.0 mg
비타민 B1 0.13 mg
비타민 B2 0.15 mg
비타민 B6 0.5 mg
비타민 B12 0.2 g
비타민 C 10 mg
비오틴 10 g
니코틴산아미드 1.7 mg
엽산 50 g
판토텐산 칼슘 0.5 mg
무기질 혼합물 적량
황산제1철 1.75 mg
산화아연 0.82 mg
탄산마그네슘 25.3 mg
제1인산칼륨 15 mg
제2인산칼슘 55 mg
구연산칼륨 90 mg
탄산칼슘 100 mg
염화마그네슘 24.8 mg
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
2-2. 건강음료의 제조
흰목이버섯 배양액 추출물 100 mg
비타민 C 15 g
비타민 E(분말) 100 g
젖산철 19.75 g
산화아연 3.5 g
니코틴산아미드 3.5 g
비타민 A 0.2 g
비타민 B1 0.25 g
비타민 B2 0.3 g
물 정량
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1 시간 동안 85 ℃에서 교반 및 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 L 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용하였다.
상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
이상의 설명은 본 발명을 예시적으로 설명한 것에 불과한 것으로, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예 및 실험예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims (10)

  1. 흰목이버섯(Tremella fuciformis) 배양액의 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 흰목이버섯 배양액은 균사체 배양액인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 흰목이버섯 배양액은 상기 균사체 배양액 유래 다당체를 포함하고,
    상기 다당체는 만노오스(mannose)의 함량이 20 내지 60 중량%인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 흰목이버섯 배양액은 6 내지 48 시간 동안 배양된 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 흰목이버섯 배양액은 15 내지 35 ℃의 온도에서 배양된 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 추출물은 흰목이버섯 배양액 유래 다당체인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 추출물은 물, C1 내지 C4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출된 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  8. 제1항에 있어서,
    상기 화장료 조성물은 피부 보습, 항주름 및 항산화에서 선택되는 1 이상의 효능을 나타내는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  9. 흰목이버섯(Tremella fuciformis) 배양액의 추출물을 유효성분으로 포함하는 식품 조성물.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 식품 조성물은 피부 보습, 항주름 및 항산화에서 선택되는 1 이상의 효능을 나타내는 것을 특징으로 하는 식품 조성물.
PCT/KR2020/013429 2019-11-01 2020-09-29 흰목이버섯 배양액 추출물을 포함하는 조성물 WO2021085876A1 (ko)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CA3163428A CA3163428A1 (en) 2019-11-01 2020-09-29 Composition comprising the tremella fuciformis culture medium extract
US17/773,220 US20220370337A1 (en) 2019-11-01 2020-09-29 Composition comprising the extract of tremella fuciformis culture medium
CN202080003412.4A CN113498337A (zh) 2019-11-01 2020-09-29 包含银耳培养液提取物的组合物

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2019-0138381 2019-11-01
KR1020190138381A KR102085492B1 (ko) 2019-11-01 2019-11-01 흰목이버섯 배양액 추출물을 포함하는 조성물

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2021085876A1 true WO2021085876A1 (ko) 2021-05-06

Family

ID=69803882

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/KR2020/013429 WO2021085876A1 (ko) 2019-11-01 2020-09-29 흰목이버섯 배양액 추출물을 포함하는 조성물

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20220370337A1 (ko)
KR (1) KR102085492B1 (ko)
CN (1) CN113498337A (ko)
CA (1) CA3163428A1 (ko)
WO (1) WO2021085876A1 (ko)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102085492B1 (ko) * 2019-11-01 2020-03-05 대봉엘에스 주식회사 흰목이버섯 배양액 추출물을 포함하는 조성물
CN111329043A (zh) * 2020-03-18 2020-06-26 福建紫山食品科技有限公司 一种具有美容养颜功效的银耳罐头及其生产方法
KR102535894B1 (ko) 2020-06-26 2023-05-23 농업회사법인 고려홍삼원 주식회사 식물성 콜라겐을 포함하는 흰목이버섯 효소처리 저분자 다당체 추출물의 제조방법
KR102439976B1 (ko) * 2021-09-13 2022-09-06 (주)닥터솔루션 천연 항산화 물질인 신양벚나무열매 추출물과 멜라토닌을 함유한 천연 항산화 항균 화장료 조성물
KR102682332B1 (ko) 2022-04-04 2024-07-04 변한섭 흰목이버섯 균사체 발효액 제조 방법 및 그 방법으로 제조한 흰목이버섯 균사체 발효액
KR102537140B1 (ko) * 2022-12-08 2023-05-26 엘르로이 주식회사 개선된 안티에이징 효과 및 광채를 나타내는 화장료 조성물

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2006131558A (ja) * 2004-11-05 2006-05-25 Nippon Menaade Keshohin Kk コラーゲン生成促進剤
JP2008127341A (ja) * 2006-11-22 2008-06-05 Nippon Fine Chem Co Ltd シロキクラゲ由来水溶性多糖類の加水分解物、及びこれを含有する抗酸化剤並びに化粧料又は皮膚外用剤、食品
JP2014005248A (ja) * 2012-06-26 2014-01-16 Geol Kagaku Kk キノコの培養組成物
KR20180045912A (ko) * 2016-10-25 2018-05-08 재단법인 전주농생명소재연구원 흑목이버섯 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선 및 보습용 화장료 조성물
KR20180124443A (ko) * 2017-05-11 2018-11-21 (주)기호바이오 흰목이버섯 자실체 추출물을 포함하는 피부장벽강화용 화장료 조성물
KR102085492B1 (ko) * 2019-11-01 2020-03-05 대봉엘에스 주식회사 흰목이버섯 배양액 추출물을 포함하는 조성물

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060222608A1 (en) * 2005-04-01 2006-10-05 Agricultural Research Institute Edible tremella polysaccharide for skin care
KR20150058813A (ko) * 2013-11-21 2015-05-29 주식회사 엘씨에스바이오텍 흰목이 버섯 점액질, 그 제조방법 및 그를 포함하는 조성물
KR101816647B1 (ko) * 2015-09-23 2018-01-09 코웨이 주식회사 꽃송이버섯 균사체를 이용한 송라 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물
KR101924342B1 (ko) 2017-10-11 2018-12-03 이범천 흰목이버섯 다당체 추출방법과 추출된 흰목이버섯 다당체를 함유하는 미세먼지 흡착 클렌징 화장료 조성물

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2006131558A (ja) * 2004-11-05 2006-05-25 Nippon Menaade Keshohin Kk コラーゲン生成促進剤
JP2008127341A (ja) * 2006-11-22 2008-06-05 Nippon Fine Chem Co Ltd シロキクラゲ由来水溶性多糖類の加水分解物、及びこれを含有する抗酸化剤並びに化粧料又は皮膚外用剤、食品
JP2014005248A (ja) * 2012-06-26 2014-01-16 Geol Kagaku Kk キノコの培養組成物
KR20180045912A (ko) * 2016-10-25 2018-05-08 재단법인 전주농생명소재연구원 흑목이버섯 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선 및 보습용 화장료 조성물
KR20180124443A (ko) * 2017-05-11 2018-11-21 (주)기호바이오 흰목이버섯 자실체 추출물을 포함하는 피부장벽강화용 화장료 조성물
KR102085492B1 (ko) * 2019-11-01 2020-03-05 대봉엘에스 주식회사 흰목이버섯 배양액 추출물을 포함하는 조성물

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
YEOM, HYUN SOOK ET AL.: "Anti-aging Effect of Tremella fuciformis Mycelium Culture Extract", IFSCC. 25TH CONFERENCE (SEE ENTIRE DOCUMENT. THIS DOCUMENT IS A DOCUMENT DECLARING EXCEPTIONS TO LACK OF NOVELTY BY THE APPLICANT.), 30 September 2019 (2019-09-30) *

Also Published As

Publication number Publication date
KR102085492B1 (ko) 2020-03-05
US20220370337A1 (en) 2022-11-24
CN113498337A (zh) 2021-10-12
CA3163428A1 (en) 2021-05-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2021085876A1 (ko) 흰목이버섯 배양액 추출물을 포함하는 조성물
WO2017026855A1 (ko) 세리포리아 락세라타에 의해 생산되는 세포외다당체를 유효성분으로 함유하는 피부상태 개선용 조성물
WO2021137677A1 (ko) 식물 추출물을 함유하는 조성물
WO2019045259A2 (ko) 철피석곡 꽃 추출물을 포함하는 화장료 조성물
WO2020222472A1 (ko) hPL 함유 배지에서 배양된 중간엽 줄기세포의 배양액을 포함하는 화장료 조성물
WO2015056982A1 (ko) 만능 줄기세포의 유도 방법 및 상기 방법에 의해 제조된 만능줄기세포
WO2015099274A1 (ko) 탈분화 식물 프로토플라스트 내에 활성 물질이 인입된 구조체, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 화장료 조성물
WO2016013709A9 (ko) 석류 농축물을 유효성분으로 포함하는 피부 개선용 조성물
WO2012169664A1 (ko) 장미 태좌 조직 배양물 또는 그 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물 및 기능성 식품
KR20070019120A (ko) 작약 추출물를 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선용화장료 조성물
KR102373899B1 (ko) 피부의 주름 개선, 미백, 세포 재생, 상처 치유에 유효한 복합 천연물 추출물을 활성성분으로 함유하는 다 기능성 화장품 조성물
WO2020071630A1 (ko) 천연소재 추출물을 포함하는 피부 개선용 조성물
KR20210068366A (ko) 흰점박이꽃무지 유충의 효소 가수분해물을 함유하는 피부 미백용 조성물
WO2020045921A1 (ko) 피부 투명도 및 칙칙함 개선용 조성물
WO2021040470A1 (ko) 섬나리 추출물을 포함하는 조성물
KR102460456B1 (ko) 구실잣밤나무 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 피부 주름 또는 탄력 개선용 조성물
WO2022039572A1 (ko) 포로스테레움속 신균주 Porostereum sp.(KCTC18837P) 균사체 배양물 및 이를 포함하는 피부상태 개선용 화장료 조성물
KR100866784B1 (ko) 개서어나무 잎 추출물을 포함하는 피부주름 개선용 화장료조성물
KR102360618B1 (ko) 목단화 및 일라이트를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물
KR101821738B1 (ko) 해송이버섯 추출물을 이용한 주름개선 및 피부 처짐 개선용 화장료 조성물
KR20220120948A (ko) 율피, 백지, 마치현, 행인, 및 상백피 발효 추출물을 포함하는 기미, 주근깨, 미백 및 주름 개선용 화장료 조성물 및 이의 제조 방법
KR20180052151A (ko) 꽃송이 버섯 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 항노화 및 주름개선용 화장료 조성물 및 그 제조방법
WO2021095966A1 (ko) 클로렐라 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물
KR101008833B1 (ko) 팥배나무 잎 추출물을 포함하는 피부주름 개선용 화장료조성물
KR101441190B1 (ko) 비양나무 추출물을 포함하는 화장료 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 20883558

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 3163428

Country of ref document: CA

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 20883558

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1