WO2021075707A1 - 기억력 개선 및 인지기능장애 예방 또는 개선용 펩타이드 및 이를 포함하는 조성물, 그리고 그 제조방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 실크 유래 펩타이드의 제조방법에 관한 것으로, 본 발명에 따른 실크 유래 펩타이드의 제조방법은 실크 피브로인을 용해시키는 용해 단계; 상기 실크 피브로인 용해물에 브로멜라인(bromelain)을 포함하는 제1 단백질 가수분해 효소 및 플라보자임(Flavourzyme), 프로타맥스(Protamex), 뉴트라제(Neutrase), 베론-더블유(Veron), 수미자임(Sumizyme), 징지바인(zingibain), 칼파인(Calpain), 프로테아제NP(Protease NP), 발리다제(Validase) 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나를 포함하는 제2 단백질 가수분해 효소를 포함하는 혼합효소로 처리하여 가수분해하는 단계; 및 단백질 가수분해 효소를 제거하는 효소 제거단계를 포함하는 것일 수 있다.

Description

기억력 개선 및 인지기능장애 예방 또는 개선용 펩타이드 및 이를 포함하는 조성물, 그리고 그 제조방법
본 발명은 기억력 개선 및 인지기능장애 예방 또는 개선용 펩타이드 및 이를 포함하는 조성물, 그리고 그 제조방법에 관한 것이다. 보다 상세하게는 기억력 개선 및 인지기능장애 예방 또는 개선용 펩타이드 및 이를 포함하는 조성물을 제공한다. 또한 실크 피브로인을 효소 가수분해하여 기억력 개선 및 인지기능장애 예방 또는 개선용 펩타이드 조성물을 제공할 수 있는 방법을 제공한다.
현대사회에서 기능성 소재 분야는 신소재를 찾는 방법 이외에 기존의 소재에서 필요로 하는 유효성분을 특정하여 정제 및 분리하여 필요에 맞는 형태로 제공할 수 있도록 하고 있다.
한편, 누에고치는 섬유상 단백질인 피브로인과 그것을 둘러싸고 있는 고무상 단백질인 세리신으로 구성되어 있다. 실크 단백질의 아미노산은 글라이신(glycine), 알라닌(alanine), 세리신(sericine), 티로신(tyrosine) 등으로서 주요 아미노산이 90% 이상을 차지하고 있다. 이러한 단백질을 최근에는 기능성 식품이나 음료의 소재로 이용하기 위한 개발이 활발히 진행되고 있다. 그러나 이제까지의 기술들은 누에고치로 채취되는 견단백질을 별다른 처리 공정을 거치지 아니하고 원형 그대로 사용하였거나 용해된 피브로인 수용액의 정제를 투석(Dialysis)에 의해 정제하는 방법을 사용하였다. 따라서 대량 생산에 의하는 경우 생산의 수율이 저하되는 비경제적인 면이 있었으며 견단백질이 가지고 있는 섬유상의 구조적인 특징 및 아미노산의 배열 등으로 인체 내에서의 분해의 지연이나 분해가 어려워 흡수율이 저하되어 기능성 식품 소재로서의 가치가 떨어지는 등의 문제점이 내포되어 있다.
실크 아미노산의 제조 기술은 크게 산 가수분해방법과 효소분해방법이 알려져 있다. 일본에서는 이러한 실크 단백질을 산, 알칼리 또는 효소적 가수분해를 통해 저분자 펩타이드 또는 아미노산 형태로 분해하여 소화흡수를 용이하게 하는 방식으로 식용화하고 있다. 그 중 효소분해법은 효소의 단백질의 특정 결합에 관여하여 결합고리를 절단하게 되므로, 견단백질이 아미노산까지 분해되는 분해율이 매우 낮은데 비하여 산가수분해법은 거의 대부분이 아미노산이나 펩타이드까지 분해가 된다. 실제 대량생산 공정상에서 볼 때 효소분해법은 공정이 간단한데 비하여 분해율이 낮고, 그로 인한 수율이 저조하며, 인체 흡수율이 낮은데 비하여, 산가수분해법으로 생산된 실크 아미노산은 인체 흡수율 거의 90% 정도로 흡수되기 효과적인 형태로 구성되어 있으며, 인체에 유용한 생리활성을 가지는 기능적 아미노산은 더 많이 함유되어 있다.
본 발명에서 제시된 실크단백질의 산가수분해법은 산가수분해물의 아미노산 조성 및 생리활성을 나타내는 기능적 성분의 함량에서 더 우위를 차지하는 제품을 생산할 수 있는 새로운 것이다.
단백질원의 가수분해를 통하여 생산되는 기능성 펩타이드의 시장 및 그 연구개발은 현재 일본이 가장 앞서고 있지만 아직 펩타이드 식품의 응용범위는 아직 제한되어 있으며 시장도 형성단계에 있다. 현재 일본에서 상품화된 기능성 펩타이드 식품은 소화흡수 촉진 기능성, 실크 가수분해물의 단백질 분자량의 분포 및 소화에 관한 연구, 실크 피브로인의 혈청콜레스테롤 억제효과, 콜레스테롤의 대사에 있어서 함황아미노산의 중요성, 칼슘흡수촉진 및 골다공증 예방, 알코올 흡수저해 기능성, 고혈압 예방 기능성, 항산화 기능성, 항알레르기 기능성 등이 계속 연구되고 있는 것으로 알려져 있다.
그리고 실크 피브로인의 또 다른 기능성 연구로서 기포성의 식품가공에의 이용 및 견직물 잔사의 식품소재로서의 응용에 관한 연구결과도 보고되어 있다. 그러나 이들 생리활성에 대한 체계적인 연구가 되어 있는 것이 아니라 가수분해물을 동물에 투여하여 활성을 확인하는 정도이거나(항당뇨, 알콜대사촉진, 콜레스테롤 저하작용 등) 주요 아미노산이 나타낼 수 있는 활성이 가수분해물에서도 나타날 것으로 추정하는 정도이다. 본 발명에서 제시된 제품의 기능성은 유전자의 손상을 억제시켜주는 항암, 항유전 독성 등이다.
한편, 치매는 일반적으로 인간의 인지기능, 지적능력, 감정 및 행동변화 등에서 뚜렷한 손상을 나타내는 복합 임상 증후군으로서, 기억력, 주의력, 언어기능, 시공간 능력 등의 대뇌피질 기능장애가 발생하여 일상, 사회생활을 영위하는데 큰 어려움을 겪게 되는 상태이다. 치매라고 정의할 때는 기억력을 포함하여 다른 인지기능 중 한 가지 이상의 장애가 있는 경우를 말하며, 단순히 기억력만 떨어진 경우는 치매라고 하지 않는다.
치매의 원인으로는 퇴행성 뇌질환인 알츠하이머병(Alzheimer's Disease)이나 파킨슨병(Parkinson's Disease)에서부터 뇌출혈, 대사성질환인 간성뇌병증, 윌슨병(Wilson's Disease), 감염성 질환인 신경매독, 후천성면역결핍증, 알코올과 같은 약물중독, 뇌외상 등 다양한 병인이 있으며, 어떤 형태로는 중추신경계에 구조적, 기능적 이상을 초래할 수 있는 질환은 치매를 유발할 수가 있다. 그 중에서도 알츠하이머병에 의한 치매가 50 내지 60 %로 가장 많으며, 뇌혈관 질환에 의한 치매가 그 다음이다.
기억 인지 장애는 알츠하이머 질환자들이 처음으로 겪는 증상이며 또한 가장 흔한 증상이다. 알츠하이머병의 초기에 환자들은 최근의 대화나 일의 내용을 자세하게 기억하지 못하는 최근 기억(recent memory) 장애를 겪게 되는데, 이는 해마의 신경세포가 손상되어 최근 기억을 저장하는 기능이 떨어진 데에서 기인한다. 하지만 이 시기에는 먼 과거에 있었던 사건들에 대한 과거 기억(remote long-term memory)은 상대적으로 잘 유지된다. 그러나 병이 점차 진행됨에 따라 장기기억의 저장과 관련된 대뇌피질이 손상되면서 이러한 과거의 기억도 점차 장애를 보이게 된다.
본 발명의 목적은 인지기능 개선 효과, 특히 초기 개선효과가 우수한 펩타이드 및 이를 포함하는 조성물, 그리고 그 제조방법을 제공하기 위한 것이다.
본 발명은 기억력 및 인지기능 장애에 대한 개선활성이 우수하고, 특히 초기 개선 활성이 뛰어난 기억력 개선 및 인지기능장애 예방 또는 개선용 펩타이드 조성물을 제공하기 위한 것이다.
본 발명은 가수분해 효소를 이용하여 보다 효과적으로 실크 유래 펩타이드를 생산할 수 있는 실크 유래 펩타이드의 제조방법을 제공하기 위한 것이다.
본 발명은 동일한 최종 생성물 생성량 대비 기존의 공정설비를 소형화 할 수 있고, 작은 공정으로 짧은 시간 내 높은 수율을 가지는 실크 유래 펩타이드를 생산할 수 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 일 실시예에 따른 펩타이드는 하기의 일반식 1 내지 일반식 5 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 것일 수 있다.
[일반식 1]
Tyr-Gly-X 1-X 2
(상기 일반식에서 X 1은 Ala, Tyr, Thr, Val, Gly, Ile 또는 Gln이고, X 2는 Ala, Tyr, Ile, Val 또는 Gly이다.)
[일반식 2]
Ile-Gly-Z 1-Z 2
(상기 일반식에서 Z 1은 Ala, Tyr, Val 또는 Gln이고, Z 2는 Ala, Tyr, Val 또는 Gly이다.)
[일반식 3]
Ile-Gly-Val-a 1-a 2
(상기 일반식에서 a 1은 Ala, Tyr, 또는 Val이고, a 2은 Ala, Tyr, Thr, Val, Gly 또는 Gln이다.)
[일반식 4]
a 1-Gly-Gly-a 1
(상기 일반식에서 a 1은 Ala, Tyr, 또는 Val이다)
[일반식 5]
a 1-Gly-Gly-a 1-Gly-a 2
(상기 일반식에서 a 1은 Ala, Tyr, 또는 Val이고, a 2은 Ala, Tyr, Ile 또는 Val이다.)
본 발명의 다른 일 실시예에 따른 기억력 개선 및 인지기능장애 예방 또는 개선용 펩타이드 조성물은 상기 펩타이드를 포함하는 것일 수 있다.
상기 조성물은 실크 피브로인에서 유래된 것일 수 있다.
본 발명의 다른 일 실시예에 따른 기억력 개선 및 인지기능장애 예방 또는 개선용 실크 유래 펩타이드의 제조방법은 실크 피브로인을 용해시키는 용해 단계; 상기 실크 피브로인 용해물에, 브로멜라인(bromelain)을 포함하는 제1 단백질 가수분해 효소 및 플라보자임(Flavourzyme), 프로타맥스(Protamex), 뉴트라제(Neutrase), 베론-더블유(Veron), 수미자임(Sumizyme), 징지바인(zingibain), 칼파인(Calpain), 프로테아제NP(Protease NP), 발리다제(Validase) 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나를 포함하는 제2 단백질 가수분해 효소를 포함하는 혼합효소로 처리하여 가수분해하는 단계; 및 단백질 가수분해 효소를 제거하는 효소 제거단계를 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 또 다른 일 실시예에 따른 기억력 개선 및 인지기능장애 예방 또는 개선용 실크 유래 펩타이드의 제조방법은 실크 피브로인을 용해시키는 용해 단계; 상기 실크 피브로인 용해물에 플라보자임(Flavourzyme), 파파인(Papain), 프로타맥스(Protamex), 뉴트라제(Neutrase), 베론-더블유(Veron), 수미자임(Sumizyme), 징지바인(zingibain), 칼파인(Calpain), 프로테아제NP(Protease NP), 발리다제(Validase) 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나를 단백질 가수분해 효소로 처리하여 가수분해하는 단계; 및 단백질 가수분해 효소를 제거하는 효소 제거단계를 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 또 다른 일 실시예에 따른 기억력 개선 및 인지기능장애 예방 또는 개선용 실크 유래 펩타이드의 제조방법은 실크 피브로인을 용해시키는 용해 단계; 상기 실크 피브로인 용해물에, 델보라아제(delvorase), 키모트립신(Chymotrypsin), 서브틸리신(Subtilisin), 액티니딘(Actinidin), 락토페린(Lactoferrin), 코크라제P(Kokulase P), 케라티나아제(Keratinase), 카텝신 K(Cathepsin K) 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나를 포함하는 단백질 가수분해 효소로 처리하여 가수분해하는 단계; 및 단백질 가수분해 효소를 제거하는 효소 제거단계를 포함하는 것일 수 있다.
상기 가수분해 효소는 우마미자임(Umamizyme)을 더 포함하는 것인
상기 가수분해 효소는 피신(Ficin)을 더 포함하는 것인
상기 기억력 개선 및 인지기능장애 예방 또는 개선용 실크 유래 펩타이드의 제조방법은 실크 피브로인을 용해시키는 용해 단계가 실크피브로인 분말을 용해시키는 것이고, 상기 실크피브로인 분말은 실크 피브로인 및 글리세린을 혼합하고, 분쇄한 다음 물로 세척하고 여과 및 건조하여 생성된 것일 수 있다.
상기 인지기능장애는 치매, 학습장애, 실인증, 건망증, 실어증, 실행증, 섬망, AIDS 유발 치매, 빈스완거 병, 루이소체 치매, 전두측두엽성 치매, 경도 인지 장애, 다발성 경색성 치매, 픽병, 의미치매, 알츠하이머성 치매 또는 혈관성 치매로 구성된 군으로부터 선택되는 것일 수 있다.
이하, 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다.
실크(silk)란 누에가 만든 고치로부터 얻어지는 섬유를 말하며, 이것을 원료로 한 견사로 제조한 제품을 총칭한다. 넓은 뜻으로는 작잠사 등의 야잠사, 견 방사를 원료한 견 제품을 포함하여 가리키기도 한다. 보통 견이라고 부르는 가잠견(true silk)은 사육 견(cultivated or domestic silk)이라고도 한다. 한편 본 발명에서 말하는 누에고치는 실크를 포함하는 개념으로 정의한다.
실크 섬유는 피브로인과 세리신으로 구성되어 있으며, 그 밖에 소량의 뇌질, 지방질 및 무기염류를 함유하고 있다. 실크의 구성성분은 피브로인과 세리신이고 이들은 섬유모양의 단백질이다. 이것은 천연의 상태에서는 생체 고분자로 구성되어 있다. 보통 분자량이 10,000이상인 화합물은 섬유, 막(membrance) 또는 덩이모양이다. 실크는 고분자의 단백질이고, 단백질은 아미노산으로 되어있으며, 아미노산은 탄소에 아미노기(-NH 2)와 카르복실기(-COOH)가 결합되어 단순한 알파 아미노산으로 구성된다.
그리고 수 많은 아미노산들이 사슬고리를 가지고 염주모양으로 연결된 고분자를 폴리펩타이드라 한다. 결국 두 개의 아미노산의 -NH 2와 -COOH가 반응하여 물(H 2O)이 빠져나가게 되고 평행으로 배열하여 섬유화가 이루어진다.
피브로인을 이루는 아미노산은 글라이신(측쇄 -H), 알라닌(-CH 3)이 많은데 이들 아미노산은 분자의 측쇄가 짧은 것이 특색이다. 그리고 세린(측쇄-CH 2OH), 티로신(측쇄-CH(OH)CH 2)를 합하면 90% 이상이다. 그리고 산성 아미노산(아스파르트산, 글루탐산)과 여기성 아미노산(라이신, 알라닌, 히스디틴)의 함량이 적은 것이 세리신의 아미노산 조성과의 차이이다. 이들 아미노산을 서로 다른 연결조합으로 결합하면 폴리펩타이드를 형성한다. 피브로인을 가수분해시키면 아미노산이 되고, 분자량이 30 내지 50만으로부터 3,000 내지 3,500의 알파 아미노산이 결합하여 한 가닥의 분자를 구성한다.
본 발명에서 말하는 실크 유래 펩타이드는 체내에 흡수될 수 있는 정도의 크기로 상기 실크에서 유래한 실크 피브로인을 일정한 아미노산 서열을 가지는 것으로 가수분해하여 가공된 것을 말한다.
또한 본 발명에서 말하는 실크 유래 펩타이드는 실크 단백질로도 표현될 수 있고 같은 의미로 사용될 수 있다.
바람직하게 실크 유래 펩타이드의 제조방법은 실크 피브로인을 용해시키는 용해 단계 이전에, 누에고치와 정제수를 혼합하고 열처리하여 세리신(sericin)이 제거하고 실크 피브로인을 수득하는 세리신 제거단계를 더 포함하는 것일 수 있다.
상기 세리신 제거단계는 실크 피브로인을 감싸고 있는 세리신을 제거하는 단계를 말한다. 세리신은 극성 아미노산을 포함하고 있으므로, 정제수에 열처리를 하면서 제거하는 것이 일반적이다. 특히 높은 온도에서 세리신 제거단계를 진행할수록 세리신 제거의 공정효율이 증가하지만, 97 ℃를 초과하는 온도에서는 피브로인에 대한 손실이 발생하기 때문에 온도를 무제한으로 높일 수 없다는 문제가 있다.
상기 실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법에 있어서, 상기 세리신 제거단계는 점증제 및 첨가제를 포함하는 것이고, 30 내지 70℃로 열처리하는 것일 수 있다.
상기 세리신 제거단계는 점증제 및 첨가제를 포함하면서 30 내지 70℃에서 열처리를 진행하는 경우 열처리하면서, 동일한 온도에서, 점도를 높이지 않은 경우에 비하여 세리신 제거공정이 훨씬 빨라질 수 있다. 특히 점도를 높이는 경우 피브로인의 손실이 발생하지 않는다는 장점이 있다.
상기 실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법에 있어서, 상기 세리신 제거단계에서 누에고치와 정제수의 혼합물은 점도가 1.2 내지 120 cP인 것일 수 있다.
상기 점도 범위에 의하는 경우 세리신 제거공정에 있어서 세리신이 빠르게 제거될 수 있을 뿐만 아니라 피브로인의 손실이 거의 없다는 장점을 가진다.
바람직하게 상기 실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법에 있어서, 상기 세리신 제거단계는 누에고치와 정제수의 혼합물은 점도가 1.3 내지 40 cP이고, 98 내지 100℃에서 2 내지 10분 간 열처리하는 1차 열처리 단계 및 30 내지 40℃로 열처리하는 2차 열처리 단계를 포함하는 것일 수 있다.
상기 1차 열처리 단계는 피브로인이 용해되는 온도이지만, 누에고치와 정제수의 혼합물에 대한 점도를 1.3 내지 40 cP로 조절하여 열처리를 개시하는 경우 피브로인의 손실이 발생하지 않을 수 있다.
이후 상대적으로 낮은 2차 열처리 단계를 진행하는 경우 빠르게 세리신이 제거될 수 있다.
상기 1차 열처리 단계에 있어서 누에고치와 정제수의 혼합물에 대한 점도가 1.3 cP 미만인 경우 급격한 피브로인의 손실이 발생하는 문제가 있다. 반면 점도가 40 cP를 초과하는 경우에는 1차 열처리 단계에 불구하고 세리신 제거에 대한 공정개선 효과가 나타나지 않을 수 있다.
따라서 상기 점도 범위를 유지하면서 1차 열처리 및 2차 열처리 공정에 의하는 경우 세리신을 보다 효과적으로 제거하면서도 피브로인에 대한 손실이 발생하지 않아 세리신 제거공정의 효율을 높일 수 있다.
상기 첨가제를 포함하는 경우 피부로인에 대한 소실을 최소화 할 수 있을 뿐만 아니라, 이후 단계에서 기억력 및 인지기능 개선효과를 나타내는 피브로인 가수분해물, 즉 실크 피브로인 유래 펩타이드에 대한 수득률을 높일 수 있다.
바람직하게 상기 첨가제는 자일나아제를 포함하고, 상기 자일나아제 100 중량부에 대하여, 소르비톨 10 내지 100 중량부; 만니톨 1 내지 10 중량부; 칼락토오스 0.1 내지 5 중량부가 포함되는 것일 수 있다.
상기 범위에 의하는 경우 세리신 제거 단계에서 피브로인의 손실을 줄이고, 가수분해 단계에서 인지기능개선 효과를 가지는 실크 피브로인 유래 펩타이드의 수득량이 높아지고, 인지기능 및 기억력 개선효율이 개선될 수 있다.
상기 용해 단계는 실크 피브로인이 정제수, 유기용매 기타 액체에 혼합된 상태가 되도록 제조하는 것을 말한다.
상기 가수분해 단계는 실크 피브로인 용해물에 브로멜라인(bromelain)을 포함하는 제1 단백질 가수분해 효소 및 플라보자임(Flavourzyme), 프로타맥스(Protamex), 뉴트라제(Neutrase), 베론-더블유(Veron), 수미자임(Sumizyme), 징지바인(zingibain), 칼파인(Calpain), 프로테아제NP(Protease NP), 발리다제(Validase) 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나를 포함하는 제2 단백질 가수분해 효소를 포함하는 혼합효소로 처리하여 가수분해 하는 것을 말한다.
바람직하게 상기 가수 분해 효소는 브로멜라인, 징지바인, 칼파인 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나인 것일 수 있다. 상기 범위에 의하는 경우 인지기능 및 기억력 개선 효과가 높은 실크 피브로인 펩타이드를 생산하게 할 수 있다.
더 바람직하게 상기 가수 분해 효소는 브로멜라인을 포함하고, 브로멜라인 100 중량부에 대하여 징지바인 10 내지 50 중량부, 칼파인 5 내지 30 중량부를 혼합시킨 혼합 효소를 사용한 것일 수 있다. 상기 범위에 의하는 경우 인지기능 및 기억력 개선 효과가 우수할 뿐만 아니라, 짧은 기간 내에 인지기능 및 기억력 개선효과가 급격하게 높아지는 효과를 낼 수 있다. 따라서 상대적으로 단기간 내에 인지기능 및 기억력 개선효과가 나타날 수 있는 실크 피브로인 펩타이드를 생산하게 할 수 있다.
바람직하게 상기 가수 분해 효소는 브로멜라인을 포함하고, 브로멜라인 100 중량부에 대하여 징지바인 10 내지 50 중량부, 칼파인 5 내지 30 중량부, 우마미자임 1 내지 20 중량부를 혼합시킨 혼합 효소를 사용한 것일 수 있다. 상기 범위에 의하는 경우 가수분해물의 흡수율과 인지기능 개선에 대한 유효성분의 활성이 크게 증가한 실크 유래 펩타이드를 제조할 수 있다.
바람직하게 상기 가수 분해 효소는 파파인, 징지바인, 칼파인 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나인 것일 수 있다. 상기 범위에 의하는 경우 인지기능 및 기억력 개선 효과가 높은 실크 피브로인 펩타이드를 생산하게 할 수 있다.
더 바람직하게 상기 가수 분해 효소는 파파인을 포함하고, 파파인 100 중량부에 대하여 징지바인 10 내지 50 중량부, 칼파인 5 내지 30 중량부를 혼합시킨 혼합 효소를 사용한 것일 수 있다. 상기 범위에 의하는 경우 인지기능 및 기억력 개선 효과가 우수할 뿐만 아니라, 짧은 기간 내에 인지기능 및 기억력 개선효과가 급격하게 높아지는 효과를 낼 수 있다. 따라서 상대적으로 단기간 내에 인지기능 및 기억력 개선효과가 나타날 수 있는 실크 피브로인 펩타이드를 생산하게 할 수 있다.
바람직하게 상기 가수 분해 효소는 파파인을 포함하고, 파파인 100 중량부에 대하여 징지바인 10 내지 50 중량부, 칼파인 5 내지 30 중량부, 우마미자임 1 내지 20 중량부를 혼합시킨 혼합 효소를 사용한 것일 수 있다. 상기 범위에 의하는 경우 가수분해물의 흡수율과 인지기능 개선에 대한 유효성분의 활성이 크게 증가한 실크 유래 펩타이드를 제조할 수 있다.
바람직하게 상기 가수 분해 효소는 액티니딘(Actinidin), 코크라제P, 케라티나아제 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나인 것일 수 있다. 상기 범위에 의하는 경우 인지기능 및 기억력 개선 효과가 높은 실크 피브로인 펩타이드를 생산하게 할 수 있다.
더 바람직하게 상기 가수 분해 효소는 액티니딘을 포함하고, 상기 액티니딘 100 중량부에 대하여 코크라제P 5 내지 20 중량부, 케라티나아제 5 내지 20 중량부를 혼합시킨 혼합 효소를 사용한 것일 수 있다. 상기 범위에 의하는 경우 인지기능 및 기억력 개선 효과가 우수할 뿐만 아니라, 짧은 기간 내에 인지기능 및 기억력 개선효과가 급격하게 높아지는 효과를 낼 수 있다. 따라서 상대적으로 단기간 내에 인지기능 및 기억력 개선효과가 나타날 수 있는 실크 피브로인 펩타이드를 생산하게 할 수 있다.
바람직하게 상기 가수 분해 효소는 액티니틴을 포함하고, 상기 액티니틴 100 중량부에 대하여 코크라제P 5 내지 20 중량부, 케라티나아제 5 내지 20 중량부, 카텝신 K 1 내지 5 중량부를 혼합시킨 혼합 효소를 사용한 것일 수 있다. 상기 범위에 의하는 경우 가수분해물의 흡수율과 인지기능 개선에 대한 유효성분의 활성이 크게 증가한 실크 유래 펩타이드를 제조할 수 있다.
더 바람직하게 상기 가수 분해 효소는 피신을 포함하고, 상기 피신 100 중량부에 대하여 코크라제P 5 내지 20 중량부, 케라티나아제 5 내지 20 중량부를 혼합시킨 혼합 효소를 사용한 것일 수 있다. 상기 범위에 의하는 경우 인지기능 및 기억력 개선 효과가 우수할 뿐만 아니라, 짧은 기간 내에 인지기능 및 기억력 개선효과가 급격하게 높아지는 효과를 낼 수 있다. 따라서 상대적으로 단기간 내에 인지기능 및 기억력 개선효과가 나타날 수 있는 실크 피브로인 펩타이드를 생산하게 할 수 있다.
바람직하게 상기 가수 분해 효소는 피신을 포함하고, 상기 피신 100 중량부에 대하여 코크라제P 5 내지 20 중량부, 케라티나아제 5 내지 20 중량부, 카텝신 K 1 내지 5 중량부를 혼합시킨 혼합 효소를 사용한 것일 수 있다. 상기 범위에 의하는 경우 가수분해물의 흡수율과 인지기능 개선에 대한 유효성분의 활성이 크게 증가한 실크 유래 펩타이드를 제조할 수 있다.
상기 단백질 가수분해 효소를 제거하는 효소 제거단계는 가수분해 단계 이후 효소를 제거하거나 효소의 활성을 제거하는 것을 말하며, 해당 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 사용할 수 있는 모든 형태의 것을 포함하는 것으로 정의한다.
또한 상기 효소 제거단계는 열처리 하여 효소의 활성을 제거하는 것일 수 있다.
상기 효소 제거단계는 열처리 하여 효소의 활성을 제거하는 것일 수 있다.
상기 실크 유래 펩타이드의 제조방법에 있어서, 상기 실크 유래 펩타이드는 기억력 개선용인 것일 수 있다.
상기 실크 피브로인 분말은 실크 피브로인 및 글리세린을 혼합하고, 분쇄한 다음 물로 세척하고 여과 및 건조하여 생성된 것일 수 있다.
상기 실크 피브로인은 저온 플라즈마 처리가 된 것일 수 있다.
상기 실크 피브로인 분말을 사용하는 경우 실크 피브로인을 용해하는 단계에서 종래에 기술에 비하여 훨씬 적은 양의 염화칼슘과 물을 사용할 수 있으며, 상대적으로 낮은 온도에서 실크 피브로인을 용해할 수 있다. 이에 따라 실크 유래 펩타이드를 사용하는데 소요되는 공정을 소형화 할 수 있을 뿐만 아니라 사용되는 물의 함량을 줄일 수 있다.
구체적으로 종래의 기술은 실크 피브로인을 염화칼슘 용액에 용해한 뒤 가수분해를 진행한다. 따라서 실크 피브로인을 용해하는데 사용되는 염화칼슘 용액은 실크피브로인 대비 약 5 내지 10배 수의 용매를 사용하는 것이 보통이다. 또한 용해하는데 사용되는 반응온도 역시 80 내지 110 ℃의 상대적인 고온에서 진행된다.
그러나 상기 실크 피브로인 분말을 사용하는 경우 염화칼슘 용매의 용량을 실크 피브로인 분말의 질량 대비 0.8 배 내지 1.3 배로 혼합하여, 실크 피브로인 분말을 용해할 수 있다. 또한, 상대적으로 저온인 40 내지 60℃에서 반응이 진행될 수 있다. 이에 따라 반응물의 용량이 작아질 수 있기 때문에 공정의 소형화를 달성할 수 있다. 또한 사용되는 염화칼슘 용액의 양이 감소하기 때문에 염을 제거하는데 사용되는 물의 양과, 염을 제거하는 공정에 소요되는 시간을 단축할 수 있다. 따라서 동일한 양의 최종 생성물을 수득하는데 훨씬 작은 반응기로 짧은 시간 내에 실크 유래 펩타이드를 제조할 수 있어 우수한 공정 효율성을 가지게 할 수 있다.
구체적으로 상기 실크 피브로인 분말은 세리신을 제거한 실크 피브로인에 글리세린을 혼합한다. 그 다음 분쇄된 상기 혼합물을 물로 세척하고, 여과 및 건조한다. 위 방법으로 제조된 실크 피브로인 분말은 그 자체로서 일정한 용해도를 가질 수 있게 된다.
또한 세리신이 제거된 실크 피브로인을 대기압에서 저온 플라즈마를 처리하여 실크 피브로인 소재의 표면을 개질하고, 글리세린을 혼합한 뒤 상기 세척, 여과 및 건조과정을 진행하는 경우 보다 우수한 용해도를 가지게 된다.
일반적인 실크 피브로인의 경우 물에 대한 불용성을 가지지만, 상기 방법으로 제조된 실크 피브로인 분말은 물에 대하여 약 30% 이상의 용해도를 가지게 된다. 또한 일반적인 실크 피브로인을 사용하는 경우와 달리 훨씬 적은 양의 염화칼슘 용액을 사용하여도 실크 피브로인이 완전히 용해될 수 있다.
상기 실크 유래 펩타이드의 제조방법에 있어서, 상기 실크 유래 펩타이드는 인지기능장애 예방 또는 개선용인 것일 수 있다.
상기 인지기능장애는 치매, 학습장애, 실인증, 건망증, 실어증, 실행증, 섬망, AIDS 유발 치매, 빈스완거 병, 루이소체 치매, 전두측두엽성 치매, 경도 인지 장애, 다발성 경색성 치매, 픽병, 의미치매, 알츠하이머성 치매 또는 혈관성 치매로 구성된 군으로부터 선택되는 것일 수 있다.
본 발명의 다른 일 실시예에 따른 인지기능 및 기억력 개선용 식품은 상기 실크 유래 펩타이드의 제조방법에 따라 제조된 실크 유래 펩타이드를 포함하는 것일 수 있다.
본 발명에서 말하는 인지기능 및 기억력 개선은 단순히 인지기능 (cognitive function) 및 기억력의 둔화가 회복되거나 보다 개선되는 의미뿐만 아니라. 뇌 신경질환에 의하여 발생한 인지기능 및 기억력 저하의 현상이 예방 또는 개선되는 것을 포함하는 것으로 정의한다.
본 발명의 또 다른 일 실시예에 따른 뇌 신경질환 예방 및 개선용 의약품은 상기 실크 유래 펩타이드의 제조방법에 따라 제조된 실크 유래 펩타이드를 포함하는 것일 수 있다.
본 발명에서 말하는 상기 뇌 신경질환은 치매, 헌팅톤 질병, 파킨슨씨 질병 및 근위축성 측삭 경화증 등과 같은 신경 퇴행성 질환, 허혈성 뇌졸중 등과 같은 허혈 또는 재관류에 의한 질환, 우울증, 정신분열증 및 심적 외상후 스트레스 장애와 같은 정신 질환을 모두 포함하는 것으로 정의한다.
본 발명의 일 실시예에 따른 펩타이드는 하기의 일반식 1로 표시되는 것일 수 있다.
[일반식 1]
Tyr-Gly-X 1-X 2
(상기 일반식에서 X 1은 Ala, Tyr, Thr, Val, Gly, Ile 또는 Gln이고, X 2는 Ala, Tyr, Ile, Val 또는 Gly이다.)
특정한 단백질 가수분해 효소를 조합하여 실크 피브로인을 가수분해 하면서 특정한 시퀀스를 가지는 아미노산이 포함되는 경우 인지기능 및 기억력 개선효과가 나타날 뿐 아니라 매우 짧은 기간 내에 인지기능 및 기억력 개선효과가 나타난다는 점을 확인하고, 일반적인 가수분해물과 달리 빠른 작용, 효과가 나타나는 아미노산 서열을 확인하기 위하여 구체적인 분석을 진행하였다.
이에 따라 해당 가수분해물을 분석하여 위와 같은 효과가 나타날 수 있도록 하는 상기 일반식 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드; 일반식 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드와 일반식 2의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드가 혼합된 펩타이드 조성물과 같이 구성된 펩타이드 또는 펩타이드 조성물의 경우에 의하여 위와 같은 효과가 나타나는 것으로 추정하고, 이에 대한 실험을 진행한 결과 상기의 펩타이드 또는 펩타이드 조성물에 의하는 경우 높은 정도의 인지기능 및 기억력 개선효과가 나타날 뿐 아니라 매우 짧은 기간 내에 인지기능 및 기억력 개선효과가 나타난다는 점을 확인하게 되었다.
바람직하게 상기 일반식 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드는 하기의 [표 1]과 같이 P1-1 내지 P1-6 중 어느 하나인 것일 수 있다.
펩타이드 아미노산 서열
P1-1 Tyr-Gly-Gln-Gly
P1-2 Tyr-Gly-Gly-Ala
P1-3 Tyr-Gly-Ala-Ala
P1-4 Tyr-Gly-Val-Gly
P1-5 Tyr-Gly-Val-Ile
P1-6 Tyr-Gly-Ile-Ala
더 바람직하게 상기 일반식 1의 펩타이드는 상기 [표 1]에서 펩타이드 P1-2, P1-3, P1-5, P1-6인 것일 수 있다. 상기 펩타이드에 의하는 경우 인지기능 및 기억력 개선효과가 뛰어날 뿐만 아니라 초기 효과가 매우 우수하여 단기간 내에 인지기능 및 기억력 개선효과를 낼 수 있다.
특히, 상기 펩타이드 P1-5, P1-6에 의하는 경우 인지기능 및 기억력 개선 효과가 우수할 뿐만 아니라 보다 짧은 시간 내에 우수한 인지기능 개선 효과를 나타내게 할 수 있다.
본 발명의 다른 일 실시예에 따른 펩타이드는 하기의 일반식 2로 표시되는 것일 수 있다.
[일반식 2]
Ile-Gly-Z 1-Z 2
(상기 일반식에서 Z 1은 Ala, Tyr, Val 또는 Gln이고, Z 2는 Ala, Tyr, Val 또는 Gly이다.)
본 발명의 또 다른 일 실시예에 따른 펩타이드 조성물은 상기의 일반식 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드 및 상기의 일반식 2로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 포함하는 것일 수 있다.
바람직하게 상기 [일반식 2]로 표시되는 펩타이드는 [표 2]과 같이 P2-1 내지 P2-4 중 어느 하나인 것일 수 있다.
펩타이드 아미노산 서열
P2-1 Ile-Gly-Tyr-Val
P2-2 Ile-Gly-Val-Ala
P2-3 Ile-Gly-Ala-Tyr
P2-4 Ile-Gly-Gln-Gly
상기 [표 2]에 따른 펩타이드가 혼합되어 펩타이드 조성물을 구성하는 경우 인지기능 및 기억력 개선 효과가 우수할 뿐만 아니라 그 효과가 단기간 내에 나타나도록 할 수 있다.
한편, 상기 펩타이드 조성물은 상기 [일반식 2]로 표시되는 펩타이드는 상기 [일반식 1]로 표시되는 펩타이드 100 중량부에 중량부에 대하여 50 내지 80 중량부로 포함되는 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따른 펩타이드는 하기의 일반식 3으로 표시되는 것일 수 있다.
[일반식 3]
Ile-Gly-Val-a 1-a 2
(상기 일반식에서 a 1은 Ala, Tyr, 또는 Val이고, a 2은 Ala, Tyr, Thr, Val, Gly 또는 Gln이다.)
바람직하게 상기 일반식 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드는 하기의 [표 3] F1 내지 F3 중 어느 하나인 것일 수 있다.
펩타이드 아미노산 서열
F1 Ile-Gly-Val-Ala-Thr
F2 Ile-Gly-Val-Ala-Tyr
F3 Ile-Gly-Val-Ala-Gly
상기 [표 3]에 의하는 경우 인지기능 및 기억력 개선 효과가 우수할 뿐만 아니라, 우수한 활성으로 초기 개선효과가 급격히 향상되는 효과를 얻을 수 있다.
본 발명의 다른 실험단계에서 제조된 기억력 및 인지기능 개선용 펩타이드는 상기 일반식 3으로 표시되는 아미노산과 상기의 일반식 1로 표시되는 아미노산을 포함하는 것이다.
특정한 단백질 가수분해 효소를 조합하여 실크 피브로인을 가수분해하면서 특정한 시퀀스를 가지는 아미노산이 포함되는 경우 인지기능 및 기억력 개선효과가 나타날 뿐 아니라 매우 짧은 기간 내에 인지기능 및 기억력 개선효과가 나타난다는 점을 확인하고, 일반적인 가수분해물과 달리 빠른 작용, 효과가 나타나는 아미노산 서열을 확인하기 위하여 구체적인 분석을 진행하였다.
이에 따라 해당 가수분해물을 분석하여 위와 같은 효과가 나타날 수 있도록 하는 상기 일반식 1-1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드; 일반식 1-1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드와 일반식 1-2의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드가 혼합된 펩타이드 조성물과 같이 구성된 펩타이드 또는 펩타이드 조성물의 경우에 의하여 위와 같은 효과가 나타나는 것으로 추정하고, 이에 대한 실험을 진행한 결과 상기의 펩타이드 또는 펩타이드 조성물에 의하는 경우 높은 정도의 인지기능 및 기억력 개선효과가 나타날 뿐 아니라 매우 짧은 기간 내에 인지기능 및 기억력 개선효과가 나타난다는 점을 확인하게 되었다.
본 발명의 따른 펩타이드는 하기의 일반식 1a 또는 일반식 1b로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것일 수 있다.
[일반식 4]
a 1-Gly-Gly-a 1
(상기 일반식에서 a 1은 Ala, Tyr, 또는 Val이다)
[일반식 5]
a 1-Gly-Gly-a 1-Gly-a 2
(상기 일반식에서 a 1은 Ala, Tyr, 또는 Val이고, a 2은 Ala, Tyr, Ile 또는 Val이다.)
특정한 단백질 가수분해 효소를 조합하여 실크 피브로인을 가수분해하면서 특정한 시퀀스를 가지는 아미노산이 포함되는 경우 인지기능 및 기억력 개선효과가 나타날 뿐 아니라 매우 짧은 기간 내에 인지기능 및 기억력 개선효과가 나타난다는 점을 확인하고, 일반적인 가수분해물과 달리 빠른 작용, 효과가 나타나는 아미노산 서열을 확인하기 위하여 구체적인 분석을 진행하였다.
이에 따라 해당 가수분해물을 분석하여 위와 같은 효과가 나타날 수 있도록 하는 상기 일반식 4 또는 일반식 5의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드; 일반식 4 또는 일반식 5의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드와 상기 일반식 2의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드가 혼합된 펩타이드 조성물과 같이 구성된 펩타이드 또는 펩타이드 조성물의 경우에 의하여 위와 같은 효과가 나타나는 것으로 추정하고, 이에 대한 실험을 진행한 결과 상기의 펩타이드 또는 펩타이드 조성물에 의하는 경우 높은 정도의 인지기능 및 기억력 개선효과가 나타날 뿐 아니라 매우 짧은 기간 내에 인지기능 및 기억력 개선효과가 나타난다는 점을 확인하게 되었다.
바람직하게 상기 일반식 4의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드는 하기의 [표 4]와 같이 P4-1 내지 P4-3 중 어느 하나인 것일 수 있다. 또한, 일반식 5의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드는 하기의 [표 4]와 같이 P5-1 내지 P5-4 중 어느 하나인 것일 수 있다.
펩타이드 아미노산 서열
P4-1 Ala-Gly-Gly-Ala
P4-2 Tyr-Gly-Gly-Tyr
P4-3 Val-Gly-Gly-Val
P5-1 Tyr-Gly-Gly-Tyr-Gly-Ile
P5-2 Tyr-Gly-Gly-Tyr-Gly-Val
P5-3 Tyr-Gly-Gly-Tyr-Gly-Ala
P5-4 Tyr-Gly-Gly-Tyr-Gly-Tyr
더 바람직하게 상기 일반식 4의 펩타이드는 상기 [표 4]에서 펩타이드 P4-2, P4-3인 것일 수 있다. 상기 펩타이드에 의하는 경우 인지기능 및 기억력 개선효과가 뛰어날 뿐만 아니라 초기 효과가 매우 우수하여 단기간 내에 인지기능 및 기억력 개선효과를 낼 수 있다.
특히, 상기 펩타이드 P4-2에 의하는 경우 인지기능 및 개선 효과가 우수할 뿐만 아니라 보다 짧은 시간 내에 우수한 인지기능 개선 효과를 나타내게 할 수 있다.
더 바람직하게 상기 [일반식 5]의 펩타이드는 상기 [표 4]에서 펩타이드 P5-1 또는 P5-4인 것일 수 있다.
상기 범위에 의하는 경우 인지기능 및 기억력 개선효과가 우수하고, 투여 초기에 개선효과가 급격히 높아지게 할 수 있다.
바람직하게 본 발명의 또 다른 일 실시예에 따른 펩타이드 조성물은 상기의 일반식 4 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 포함하고, 상기의 일반식 2로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 더 포함하는 것일 수 있다.
또한 본 발명에 따른 펩타이드 조성물은 상기의 일반식 5 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 포함하고, 상기의 일반식 2로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 더 포함하는 것일 수 있다.
상기 일반식 1 내지 5로 표시되는 펩타이드는 합성하여 첨가하는 것일 수 있으며, 본 발명에 따른 제조방법에 의하는 경우 상기 펩타이드가 포함된 조성물을 제조할 수 있다.
상기 범위에 의하는 경우 상호 작용에 의한 상승효과로 인지기능 및 개선효과의 활성이 빠르게 나타나도록 할 수 있다.
본 발명의 또 다른 일 실시예에 따른 식품은 상기 펩타이드 또는 상기 펩타이드 조성물을 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 또 다른 일 실시예에 따른 인지기능장애 예방 또는 개선용 의약품은 상기 펩타이드 또는 상기 펩타이드 조성물을 포함하는 것일 수 있다.
상기 인지기능장애는 치매, 학습장애, 실인증, 건망증, 실어증, 실행증, 섬망, AIDS 유발 치매, 빈스완거 병, 루이소체 치매, 전두측두엽성 치매, 경도 인지 장애, 다발성 경색성 치매, 픽병, 의미치매, 알츠하이머성 치매 또는 혈관성 치매로 구성된 군으로부터 선택된 것일 수 있다.
상기 조성물은 약학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다. 상기 조성물에 포함되는 약학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 소르비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로오스, 물, 시럽, 오일류 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 약학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.
상기 약학적 조성물은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있다.
경구 투여시, 단백질 또는 펩타이드는 소화가 되기 때문에 경구용 조성물은 활성 약제를 코팅하거나 위에서의 분해로부터 보호되도록 제형화 되어야 한다. 또한, 상기 조성물은 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다.
상기 약학적 조성물의 적합한 투여량은 약학적 유효량으로 사용될 수 있으며 이는 기억장애, 인지장애 또는 학습장애를 예방 또는 치료하는데 충분한 양을 의미한다.
본 발명은 인지기능 개선 효과, 특히 초기 개선효과가 우수한 펩타이드 및 이를 포함하는 조성물, 그리고 그 제조방법을 제공한다.
본 발명은 기억력 및 인지기능 장애에 대한 개선활성이 우수하고, 특히 초기 개선 활성이 뛰어난 기억력 개선 및 인지기능장애 예방 또는 개선용 펩타이드 조성물을 제공한다.
본 발명은 가수분해 효소를 이용하여 보다 효과적으로 실크 유래 펩타이드를 생산할 수 있는 실크 유래 펩타이드의 제조방법을 제공한다.
본 발명에 의하는 경우 동일한 최종 생성물 생성량 대비 기존의 공정설비를 소형화 할 수 있고, 작은 공정으로 짧은 시간 내 높은 수율을 가지는 실크 유래 펩타이드를 생산할 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 실크 유래 펩타이드의 제조방법에 대한 흐름도이다.
도 2, 4, 6, 8은 본 발명의 일 실시예에 따라 제조된 실크 펩타이드에 관한 인지기억평가실험 결과에 관한 것이다.
도 3, 5, 7, 9는 본 발명의 일 실시예에 따라 제조된 실크 펩타이드의 허혈에 의한 뇌경색 부위에 대한 효과실험 결과에 대한 것이다.
도 10 내지 15는 본 발명의 일 실시예에 따른 펩타이드의 인지기억력 개선 효과 실험에 관한 것이다.
본 발명은 기억력 개선 및 인지기능장애 예방 또는 개선용 펩타이드 및 이를 포함하는 조성물, 그리고 그 제조방법에 관한 것으로, 기억력 개선 및 인지기능장애 예방 또는 개선용 펩타이드 및 이를 포함하는 조성물을 제공하며, 실크 피브로인을 효소 가수분해하여 기억력 개선 및 인지기능장애 예방 또는 개선용 펩타이드 조성물을 제공할 수 있는 방법을 제공하는 것이다.
이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예에 대하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다.
[제조예 1: 실크 유래 펩타이드의 제조]
용해된 실크 피브로인을 정제수와 혼합하고 하기의 [표 5]와 같은 조성에 따른 단백질 가수분해 효소 T1 내지 T11을 1w% 처리하고, 5 시간 동안 가수분해를 진행하였다. 그 이후 10분간 열처리를 하여 효소의 활성을 제거한 뒤 동결건조 하여 [표 6]과 같은 분말상을 제조하였다.
T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9 T10 T11
플라보자임 100 - - - - - - - - - -
프로타맥스 - 100 - - - - - - - - -
브로멜라인 - - 100 100 100 100 100 100 100 100 100
징지바인 - - - 5 10 30 50 60 30 30 30
칼파인 - - - 5 10 20 30 40 20 20 20
우마미자임 - - - - - - - - 0.5 10 25
(단위: 중량부)
NF1 NF2 TF1 TF2 TF3 TF4 TF5 TF6 TF7 TF8 TF9
처리효소 T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9 T10 T11
[실험예 1: 기억력 및 인지기능 개선 효과에 관한 실험]
실험예1-1: 인지기능 개선에 대한 동물 모델 실험
A. 실험 동물의 준비
실험 동물은 웅성 백서 (Sprague Dawley, 140 내지 180 g, 대한실험동물센터)로서, 이들은 일정한 환경 (실내온도 25±1℃, 상대습도 60±10%)에서 일주일 동안 하나의 사육 상자 당 4 마리씩 넣어 물은 제한 없이 제공하였으며, 이때, 몸무게의 80%를 유지하도록 제한 급식을 실시하였다. 본 실험에서는 총 50 마리를 사용하였다. 훈련 3일 전부터 5분씩 미로에 적응시켜 검사를 진행하였다.
B. 교대 지연 검사(delayed alternation test)
총 세 개의 통로(왼쪽, 오른쪽, 중앙부)가 있으며, 각 통로 입구는 실험자가 동물의 출입을 통제할 수 있도록 칸막이를 설치한 "ㅠ"자 모양의 미로를 준비하였다.
첫 시행에서는 출발 상자에 1분간 적응시켰다. 첫 시행은 '강제 선택 시행'으로, 칸막이로 한쪽 통로를 막아놓고 반대편 통로에 동물이 들어가면 칸막이로 후방을 막았다. 동물의 사지가 통로 입구를 통과하면 동물이 들어간 것으로 간주하였다. 60초간 동물이 해당 통로에서 먹이를 먹도록 하였다.
다음 시행부터는 '자유 선택 시행'으로 동물이 출발상자에서 출발하여 자유롭게 통로의 방향(왼쪽 혹은 오른쪽)을 선택하도록 하였다. 동물은 바로 이전의 시행에서 들어갔던 통로와 반대편 통로로 들어갔을 경우에만 먹이 보상을 하였다.
시행 간격은 5초 및 20초로 지연 시간(delay)를 두고 구성되며, 매 시행의 제한시간(cut-off time)은 60초로 하였다. 동물이 강화가 주어지는 통로에 정확하게 들어간 횟수와 통로까지 들어가는데 걸린 시간을 측정하였다. 하루에 10 시행식 9일 동안 동일한 절차를 수행하여 평가하였다.
C. 투여 방법
본 발명의 제조방법에 따라 제조된 실크 펩타이드 NF 1, 2와 TF 1 내지 TF 9를 100 ㎎/㎖의 용액으로 제조하여 구강 투여하였다. 모든 시료들은 증류수에 용해하여 구강 투여하였다.
D. 인지 기억 평가 결과
실크펩타이드 NF 1, 2와 TF 1 내지 TF 9를 투여한 군에 대해 T-maze 실험을 진행한 결과를 하기의 [도 2]에 나타내었다. [도 2]는 시행 간격을 5초로 구성하여 실험을 진행한 것으로, 9일 간의 훈련 기간 동안 성능이 점차적으로 향상되었다.
본 발명자들은 동시에 진행한 다른 실험에서 파파인을 중심으로 한 혼합효소를 사용한 경우와 유사한 경향성이 있는 결과를 도출할 수 있었는데, 하기의 [도 2]를 참조하면, TF3 내지 TF5, TF7 내지 TF9에 의하는 경우 인지기능에 대한 향상 효과가 뚜렷하게 나타난다는 점을 확인할 수 있다. 또한 위 제조예에 의하는 경우에는 초반 개선효과도 우수하다는 점을 알 수 있었다.
특히 TF8의 경우 다른 제조예에 비하여 월등히 우수한 투여 초기 인지기능 개선효과를 나타낸다는 점을 알 수 있다. 이는 혼합 가수분해 효소에 의하여 가수분해된 실크 피브로인에서 특정한 시퀀스를 가지는 펩타이드가 일정한 범위로 혼합되어 존재하는 경우 인지기능 개선효과를 가속화 시킴으로서 투여 초기에 빠른 효과를 나타내게 한다는 것으로 이해될 수 있다.
이에 대하여 분석한 결과, 후술하는 바와 같이 가수분해물에는 일반식 1 내지 5로 표시되는 펩타이드가 포함되고, 상기 펩타이드에 의하여 위와 같은 가속효과가 발생하는 것을 확인할 수 있었다.
따라서 상기 범위에 의하는 경우 인지기능 및 기억력 개선 효과를 가지는 실크 유래 펩타이드를 제공하게 할 수 있으며, 특히 인지기능 및 기억력 개선에 대한 초기 상승효과를 가속화 시킬 수 있고, 기억력 및 인지기능 효과가 더욱 향상된 실크 펩타이드를 제조할 수 있다.
실험예 1-2: 국부적 허혈 유도 동물 모델
상기 NF1, NF2, TF5 및 TF8의 가수분해 효소를 사용하여 제조된 실크 펩타이드에 대한 기억력 및 인지기능 개선효과 정도를 확인하기 위하여 국부적 허혈 유도 동물 모델을 사용하여 허혈로 인한 뇌경색 면적에 미치는 영향을 평가하는 실험을 진행하였다.
A. 약물 처리 및 국부적 허혈 유도 동물 모델의 제작
체중 200 내지 250 g인 웅성 백서 (Sprague-Dawley rat)를 이용하여 국부적 허혈 유도 동물 모델을 제작하였다. 약물은 실험번호 상기 NF1, NF2, TF5 및 TF8 1g/㎏을 허혈 유도 1시간 전에 1회 또는 허혈 유도 1시간 후에 1회 구강 투여하였고(구강 투여군, n=6), 허혈 대조군(n=6)은 약물처리군과 같은 용량의 BG101을 투여하였다. 실험동물에 케타민(ketamine) 30 내지 40 ㎎/㎏을 근육주사 하여 마취시킨 다음에 목부분에 피부절개를 가하고 경동맥(common carotid artery), 외경동맥(external carotid artery) 및 내경동맥 (internal carotid artery)을 찾아 주위조직과 분리시켰다. 우선 외경동맥의 분지인 상부 상갑선 동맥과 후두와 동맥을 전기 소작시키고, 내경동맥의 분지인 익돌구개(pterygopalatine) 동맥을 전기소작하고 외경동맥을 잘라 4-0 나일론실(ETHICON, INC)을 외경동맥을 통하여 내경동맥으로 삽입한 다음에 경동맥 분지에서 나일론 실이 16 내지 18 ㎜가 들어가게 하여 위치시켜 중대뇌 동맥(Middle Cerebral Artery) 기시부를 폐색하였다.
B. 허혈에 의한 뇌경색 부위 감소 효과 실험
허혈 유도 6시간 후 동물을 단두하여 뇌를 적출하였다. 적출된 뇌는 전방극 (anterior pole)으로부터 2 ㎜ 간격으로 절편하고, 2% 트리페닐 테트라졸리움 클로라이드 (triphenyl tetrazolium chloride: TTC, Sigma) 용액으로 37℃에서 30분간 반응시킨 후 4% 파라포름알데히드(Sigma) 용액에 넣어 고정시켰다. 염색된 조직절편을 촬영한 후 사진을 MCID image processing system (Imaging Research Inc.)을 이용하여 적색으로 염색된 정상부위와 달리 뇌경색이 발생하여 백색으로 변한 부위의 면적을 측정하였으며, 전체 뇌 절편의 면적 대비 뇌경색 면적 비율을 구한 후 평균치를 계산하였다. 또한 각각의 뇌 절편에서 전체 부피에서 뇌경색 부위가 차지하는 부피의 비율을 측정하였다. 그 결과를 [도 3]에 나타내었다.
상기 도 3을 참조하면 본 발명에서 제공하는 실크 유리 피브로인에 의하는 경우 뇌경색 부위를 감소시킬 수 있다는 점을 확인할 수 있다.
[제조예 2: 실크 유래 펩타이드의 제조]
용해된 실크 피브로인을 정제수와 혼합하고 하기의 [표 7]과 같은 조성에 따른 단백질 가수분해 효소 T1 내지 T11을 1w% 처리하고, 5 시간 동안 가수분해를 진행하였다. 그 이후 10분간 열처리를 하여 효소의 활성을 제거한 뒤 동결건조 하여 [표 8]과 같은 분말상을 제조하였다.
T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9 T10 T11
플라보자임 100 - - - - - - - - - -
프로타맥스 - 100 - - - - - - - - -
파파인 - - 100 100 100 100 100 100 100 100 100
징지바인 - - - 5 10 30 50 60 30 30 30
칼파인 - - - 5 10 20 30 40 20 20 20
우마미자임 - - - - - - - - 0.5 10 25
(단위: 중량부)
NF1 NF2 NF3 NF4 NF5 NF6 NF7 NF8 NF9 NF10 NF11
처리효소 T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9 T10 T11
[실험예 2: 기억력 및 인지기능 개선 효과에 관한 실험]
실험예 2-1: 인지기능 개선에 대한 동물 모델 실험
위 실험예 1-1과 동일한 방법으로, A. 인지기능 개선에 대한 동물 모델 실험; B. 교대 지연 검사(delayed alternation test); C. 투여 방법으로 D. 인지 기억 평가 결과를 진행하였다.
실크펩타이드 NF 1 내지 NF 11을 투여한 군에 대해 T-maze 실험을 진행한 결과를 하기의 [도 4]에 나타내었다. [도 4]는 시행 간격을 5초로 구성하여 실험을 진행한 것으로, 9일 간의 훈련 기간 동안 성능이 점차적으로 향상되었다.
하기의 [도 4]를 참조하면, NF5 내지 NF7, NF9 내지 NF11에 의하는 경우 인지기능에 대한 향상 효과가 뚜렷하게 나타난다는 점을 확인할 수 있다. 또한 위 제조예에 의하는 경우에는 초반 개선효과도 우수하다는 점을 알 수 있었다.
특히 NF10의 경우 다른 제조예에 비하여 월등히 우수한 투여 초기 인지기능 개선효과를 나타낸다는 점을 알 수 있다. 이는 혼합 가수분해 효소에 의하여 가수분해된 실크 피브로인에서 특정한 시퀀스를 가지는 펩타이드가 일정한 범위로 혼합되어 존재하는 경우 인지기능 개선효과를 가속화 시킴으로서 투여 초기에 빠른 효과를 나타내게 한다는 것으로 이해될 수 있다.
이에 대하여 분석한 결과, 이 경우 역시 상기의 [일반식 1] 및 [일반식 2]로 표시되는 시퀀스를 포함하는 펩타이드가 동시에 포함되는 경우 위와 같은 가속 효과가 발생할 수 있는 것으로 여겨진다.
따라서 상기 범위에 의하는 경우 인지기능 및 기억력 개선 효과를 가지는 실크 유래 펩타이드를 제공하게 할 수 있으며, 특히 인지기능 및 기억력 개선에 대한 초기 상승효과를 가속화시킬 수 있고, 기억력 및 인지기능 효과가 더욱 향상된 실크 펩타이드를 제조할 수 있다.
실험예 2-2: 국부적 허혈 유도 동물 모델
위 실험예 1-2와 동일하게 A. 약물 처리 및 국부적 허혈 유도 동물 모델의 제작하고; B. 허혈에 의한 뇌경색 부위 감소 효과 실험을 진행하였다. 그 결과를 하기의 [도 5]에 나타내었다.
상기 [도 5]를 참조하면 본 발명에서 제공하는 실크 유리 피브로인에 의하는 경우 뇌경색 부위를 감소시킬 수 있다는 점을 확인할 수 있다.
[제조예 3: 실크 유래 펩타이드의 제조]
용해된 실크 피브로인을 정제수와 혼합하고 하기의 [표 9]와 같은 조성에 따른 단백질 가수분해 효소 S1 내지 S11을 1w% 처리하고, 5 시간 동안 가수분해를 진행하였다. 그 이후 10분간 열처리를 하여 효소의 활성을 제거한 뒤 동결건조 하여 [표 10]과 같은 분말상을 제조하였다.
S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11
플라보자임 100 - - - - - - - - - -
프로타맥스 - 100 - - - - - - - - -
액티니틴 - - 100 100 100 100 100 100 100 100 100
코크라제P - - - 1 5 10 20 30 10 10 10
케라티나아제 - - - 1 5 10 20 30 10 10 10
카뎁신K - - - - - - - - 0.5 3 6
(단위: 중량부)
NF1 NF2 TP1 TP2 TP3 TP4 TP5 TP6 TP7 TP8 TP9
처리효소 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11
[실험예 3: 기억력 및 인지기능 개선 효과에 관한 실험]
실험예3-1: 인지기능 개선에 대한 동물 모델 실험
위 실험예 1-1과 동일한 방법으로, A. 인지기능 개선에 대한 동물 모델 실험; B. 교대 지연 검사(delayed alternation test); C. 투여 방법으로 D. 인지 기억 평가 결과를 진행하였다.
실크펩타이드 NF 1, 2와 TP 1 내지 TP 9를 투여한 군에 대해 T-maze 실험을 진행한 결과를 하기의 [도 6]에 나타내었다. [도 6]은 시행 간격을 5초로 구성하여 실험을 진행한 것으로, 9일 간의 훈련 기간 동안 성능이 점차적으로 향상되었다.
본 발명자들은 동시에 진행한 다른 실험에서 파파인을 중심으로 한 혼합효소를 사용한 경우와 유사한 경향성이 있는 결과를 도출할 수 있었는데, 하기의 [도 6]을 참조하면, TP3 내지 TP5, TP7 내지 TP9에 의하는 경우 인지기능에 대한 향상 효과가 뚜렷하게 나타난다는 점을 확인할 수 있다. 또한 위 제조예에 의하는 경우에는 초반 개선효과도 우수하다는 점을 알 수 있었다.
특히 TP8의 경우 다른 제조예에 비하여 월등히 우수한 투여 초기 인지기능 개선효과를 나타낸다는 점을 알 수 있다. 이는 혼합 가수분해 효소에 의하여 가수분해된 실크 피브로인에서 특정한 시퀀스를 가지는 펩타이드가 일정한 범위로 혼합되어 존재하는 경우 인지기능 개선효과를 가속화 시킴으로서 투여 초기에 빠른 효과를 나타내게 한다는 것으로 이해될 수 있다.
실험예 3-2: 국부적 허혈 유도 동물 모델
위 실험예 1-2와 동일하게 A. 약물 처리 및 국부적 허혈 유도 동물 모델의 제작하고; B. 허혈에 의한 뇌경색 부위 감소 효과 실험을 진행하였다. 그 결과를 하기의 [도 7]에 나타내었다.
상기 [도 7]을 참조하면 본 발명에서 제공하는 실크 유리 피브로인에 의하는 경우 뇌경색 부위를 감소시킬 수 있다는 점을 확인할 수 있다.
[제조예 4: 실크 유래 펩타이드의 제조]
용해된 실크 피브로인을 정제수와 혼합하고 하기의 [표 11]과 같은 조성에 따른 단백질 가수분해 효소 S1 내지 S11을 1w% 처리하고, 5 시간 동안 가수분해를 진행하였다. 그 이후 10분간 열처리를 하여 효소의 활성을 제거한 뒤 동결건조 하여 [표 12]와 같은 분말상을 제조하였다.
S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11
플라보자임 100 - - - - - - - - - -
프로타맥스 - 100 - - - - - - - - -
피신 - - 100 100 100 100 100 100 100 100 100
코크라제P - - - 1 5 10 20 30 10 10 10
케라티나아제 - - - 1 5 10 20 30 10 10 10
카뎁신K - - - - - - - - 0.5 3 6
(단위: 중량부)
NF1 NF2 TN1 TN2 TN3 TN4 TN5 TN6 TN7 TN8 TN9
처리효소 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11
[실험예 4: 기억력 및 인지기능 개선 효과에 관한 실험]
실험예 4-1: 인지기능 개선에 대한 동물 모델 실험
위 실험예 1-1과 동일한 방법으로, A. 인지기능 개선에 대한 동물 모델 실험; B. 교대 지연 검사(delayed alternation test); C. 투여 방법으로 D. 인지 기억 평가 결과를 진행하였다.
실크펩타이드 NF 1, 2와 TN 1 내지 TN 9를 투여한 군에 대해 T-maze 실험을 진행한 결과를 하기의 [도 9]에 나타내었다. [도 9]는 시행 간격을 5초로 구성하여 실험을 진행한 것으로, 9일 간의 훈련 기간 동안 성능이 점차적으로 향상되었다.
본 발명자들은 동시에 진행한 다른 실험에서 파파인을 중심으로 한 혼합효소를 사용한 경우와 유사한 경향성이 있는 결과를 도출할 수 있었는데, 하기의 [도 8]을 참조하면, TN3 내지 TN5, TN7 내지 TN9에 의하는 경우 인지기능에 대한 향상 효과가 뚜렷하게 나타난다는 점을 확인할 수 있다. 또한 위 제조예에 의하는 경우에는 초반 개선효과도 우수하다는 점을 알 수 있었다.
특히 TN8의 경우 다른 제조예에 비하여 월등히 우수한 투여 초기 인지기능 개선효과를 나타낸다는 점을 알 수 있다. 이는 혼합 가수분해 효소에 의하여 가수분해된 실크 피브로인에서 특정한 시퀀스를 가지는 펩타이드가 일정한 범위로 혼합되어 존재하는 경우 인지기능 개선효과를 가속화 시킴으로서 투여 초기에 빠른 효과를 나타내게 한다는 것으로 이해될 수 있다.
이에 대하여 분석한 결과, 상기의 [일반식 1a] 또는 [일반식 1b]로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드; 상기의 [일반식 2]로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드가 동시에 포함되는 경우 위와 같은 가속 효과가 발생할 수 있는 것으로 여겨진다.
실험예 4-2: 국부적 허혈 유도 동물 모델
위 실험예 1-2와 동일하게 A. 약물 처리 및 국부적 허혈 유도 동물 모델의 제작하고; B. 허혈에 의한 뇌경색 부위 감소 효과 실험을 진행하였다. 그 결과를 하기의 [도 9]에 나타내었다.
상기 [도 9]를 참조하면 본 발명에서 제공하는 실크 유리 피브로인에 의하는 경우 뇌경색 부위를 감소시킬 수 있다는 점을 확인할 수 있다.
[제조예 5: 실크 피브로인 분말의 제조]
세리신이 제거된 실크 피브로인(R1)에 하기의 [표 13]와 같이 처리하여 실크 피브로인 분말 R2 내지 R4를 제조하였다.
R1 세리신이 제거된 실크 피브로인
R2 실크 피브로인에 알코올을 혼합하고 분쇄 및 건조하여 분말 제조
R3 실크 피브로인에 글리세린을 혼합하고 분쇄하고 물로 세척한 뒤 건조하여 분말 제조
R4 대기압 플라즈마 처리된 실크 피브로인에 P3와 동일한 방법으로 분말 제조
[실험예 5: 실크 피브로인 분말의 제조]
상기 [표 14]에서 생성된 피브로인 분말 R2 내지 R4에 대하여 50℃를 유지하면서 R1 내지 R4의 실크 피브로인에 대하여 염화칼슘 용액을 혼합하면서 상기 실크 피브로인이 가수분해할 수 있을 정도로 완전히 용해되는데 소요되는 염화칼슘 용액의 양을 평가하였다. 상기 염화칼슘 용액의 양은 용질로 사용된 실크 피브로인의 중량에 대한 비율로 나타내었다.
R1 R2 R3
염화칼슘 용액 830% 130% 80%
상기 [표 14]을 참조하면, R2 및 R3에 의하는 경우 상대적으로 훨씬 적은 량의 염화칼슘 용액을 사용하여도 실크 피브로인을 완전히 용해시킬 수 있다는 점을 알 수 있다. 특히 종래의 기술에 비하여 낮은 반응온도에 의하는 경우에도 우수한 용해도를 가질 수 있다는 점을 확인할 수 있다.
따라서 상기 실크 피브로인 분말에 의하는 경우 용매로 사용되는 염화칼슘 용액의 양의 크게 줄일 수 있기 때문에 실크 피브로인을 용해하는 단계, 가수분해하는 단계에서 사용되는 반응기의 소형화 함으로서 공정효율을 높일 수 있다. 또한 사용되는 염화칼슘의 양이 줄어들 수 있기 때문에 염을 제거하는데 소요되는 물의 양과 시간을 줄일 수 있어 공정효율성을 달성할 수 있다는 점을 알 수 있다.
상기 제조된 실크피브로인 분말을 이용하여 상기 실험예 1 내지 3과 같은 실험을 진행하여 동일한 결과를 얻을 수 있었다. 따라서 상기 실크 피브로인 분말을 이용하는 경우 용해 및 가수분해공정의 효율성을 높일 수 있다는 점을 확인할 수 있다.
[실크 가수분해물의 시퀀스 분석]
상술한 상승효과를 나타내는 펩타이드를 찾기 위하여 상기 실크 피브로인의 가수분해물에 포함된 펩타이드를 분석하였고, 종래 알려진 펩타이드와 비교하면서 상기 가속효과 및 상승효과의 원인이 되는 펩타이드를 선별하였다. 분석결과 하기의 일반식 1 내지 5로 표시되는 펩타이드가 포함되는 경우 상기 초기 상승효과 및 가속효과가 발생하는 것으로 확인되었다.
특히 상기 일반식 1 내지 5로 표시되는 펩타이드에 따른 상승효과 및 가속효과를 확인하기 위하여 일반식 1 내지 5의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드를 합성하고, 이를 기반으로 인지기능 개선효과에 대한 실험을 진행하였다.
[일반식 1]
Tyr-Gly-X 1-X 2
(상기 일반식에서 X 1은 Ala, Tyr, Thr, Val, Gly, Ile 또는 Gln이고, X 2는 Ala, Tyr, Ile, Val 또는 Gly이다.)
[일반식 2]
Ile-Gly-Z 1-Z 2
(상기 일반식에서 Z 1은 Ala, Tyr, Val 또는 Gln이고, Z 2는 Ala, Tyr, Val 또는 Gly이다.)
[일반식 3]
Ile-Gly-Val-a 1-a 2
(상기 일반식에서 a 1은 Ala, Tyr, 또는 Val이고, a 2은 Ala, Tyr, Thr, Val, Gly 또는 Gln이다.)
[일반식 4]
a 1-Gly-Gly-a 1
(상기 일반식에서 a 1은 Ala, Tyr, 또는 Val이다)
[일반식 5]
a 1-Gly-Gly-a 1-Gly-a 2
(상기 일반식에서 a 1은 Ala, Tyr, 또는 Val이고, a 2은 Ala, Tyr, Ile 또는 Val이다.)
[제조예 6: 펩타이드의 합성 및 혼합]
이에 따라 예측된 펩타이드가 단기간 내 인지기능 및 기억력 개선효과를 나타내는지 여부를 확인하기 위하여 상기 P1-1 내지 P1-6의 펩타이드를 외부기관에 의뢰하여 합성하였다.
또한 각 펩타이드의 혼합에 의한 상승효과를 확인하기 위하여 상기 [표 2]의 P2-1 내지 P2-4을 합성하고, 하기의 [표 15]와 같은 조성으로 합성 펩타이드를 혼합하여 펩타이드 조성물을 제조하였다.
P1-6 M1 M2 M3 M4
P1-6 100 100 100 100 100
P2-1 - 50 - - -
P2-2 - - 50 - -
P2-3 - - 50 -
P2-4 - - - - 50
(단위: 중량부)
[실험예 6: 기억력 및 인지기능 개선 효과에 관한 실험]
실험예 6-1: 인지기능 개선에 대한 동물 모델 실험
위 실험예 1-1과 동일한 방법으로, A. 인지기능 개선에 대한 동물 모델 실험; B. 교대 지연 검사(delayed alternation test); C. 투여 방법으로 D. 인지 기억 평가 결과를 진행하였다.
P1-1 내지 P1-6와 M1 내지 M4를 투여한 군에 대해 T-maze 실험을 진행한 결과를 하기의 [도 10] 및 [도 12]에 나타내었다. [도 10] 및 [도 12]는 시행 간격을 5초로 구성하여 실험을 진행한 것으로, 9일 간의 훈련 기간 동안 성능이 점차적으로 향상되었다.
[도 10]을 참조하면, 본 발명에서 개시하는 P1-1 내지 P1-6에 의하는 경우 전반적으로 인지기억력이 향상된다는 사실을 알 수 있다. 또한 펩타이드 P1-2, P1-3, P1-5, P1-6에 의하는 경우 P1-1 및 P1-4에 비하여 인지기능 및 기억력 향상 효과가 높아진다는 점을 있다.
한편, P1-6의 경우 다른 합성 펩타이드에 비하여 투여 초기부터 인지기능 및 기억력 개선 효과가 급격하게 높아진다는 사실을 확인할 수 있었다.
[도 12]를 참조하면, 본 발명에서 개시하는 M1 내지 M4와 같이 P2-1 내지 P2-4가 혼합되는 경우 인지기능 및 기억력 개선 효과에 대한 상승작용이 생길 뿐만 아니라, 초기 개선 효과가 급격히 좋아지는 것을 알 수 있다. 즉, [도 11]을 참조하면, P2-2는 상대적으로 인지기능 및 기억력 개선 효과가 우수한 편이지만, 이를 제외한 P2-1, P2-3 및 P2-4는 그 자체로서는 인지기능 및 기억력 개선 효과가 개선되는 정도가 상대적으로 낮다. 하지만 P2-1 내지 P2-4 전체가 [일반식 1]의 펩타이드와 혼합되어 펩타이드 조성물로 제공되는 경우 상호작용에 의한 상승효과에 의하여 인지기능 및 기억력 개선 효과와 초기 개선효과가 크게 높아진다는 점을 알 수 있다. 따라서 [일반식 1]의 펩타이드와 [일반식 2]의 펩타이드가 혼합되어 펩타이드 조성물을 이루는 경우 인지기억력 개선 효과 및 초기 활성이 빠른 조성물을 제공할 수 있다는 점을 확인할 수 있다.
특히 인지기능 및 기억력 개선용 식품 또는 의약품의 경우 초기 활성이 상당히 중요하기 때문에 본 발명에 의하는 경우 인지기능 및 기억력 개선 효과와 초기 개선 효과를 향상시킨 식품 또는 의약품을 제공하게 할 수 있다.
[제조예 7: 펩타이드의 합성 및 혼합]
위 실험결과를 기초로 상기 [표 3]에 나타낸 F1, F2 및 F3의 펩타이드를 외부기관에 의뢰하여 합성하였다.
[실험예 7: 기억력 및 인지기능 개선 효과에 관한 실험]
실험예 7-1: 인지기능 개선에 대한 동물 모델 실험
상기 실험예 6과 동일한 방법으로 합성된 펩타이드 F1, F2, F3에 대한 인지기능 개선 실험을 진행하였다.
도 13을 참조하면, F1, F2, F3의 경우 P2-2 보다 전반적으로 높은 인지기능 및 기억력 개선효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었고, 초기 개선 활성 역시 F1, F2, F3의 경우 P2-2 보다 우수하다는 점을 확인할 수 있다.
[제조예 8: 펩타이드의 합성 및 혼합]
실크 피브로인 가수분해물 중 단기간 내에 인지기능 및 기억력 개선효과가 나타나는 가수분해물을 분석하고, 빠른 효과를 나타낼 수 있게 하는 펩타이드를 예측하였다.
이에 따라 예측된 펩타이드가 단기간 내 인지기능 및 기억력 개선효과를 나타내는지 여부를 확인하기 위하여 상기 P4-1 내지 P4-3, P5-1 내지 P5-4의 펩타이드를 외부기관에 의뢰하여 합성하였다.
또한 각 펩타이드의 혼합에 의한 상승효과를 확인하기 위하여 상기 [표 2]의 P2-1 내지 P2-4을 합성하고, 하기의 [표 16]과 같은 조성으로 합성 펩타이드를 혼합하여 펩타이드 조성물을 제조하였다.
P5-1 M1 M2 M3 M4
P5-1 100 100 100 100 100
P2-1 - 50 - - -
P2-2 - - 50 - -
P2-3 - - 50 -
P2-4 - - - - 50
(단위: 중량부)
[실험예 8: 기억력 및 인지기능 개선 효과에 관한 실험]
실험예 8-1: 인지기능 개선에 대한 동물 모델 실험
위 실험예 1-1과 동일한 방법으로, A. 인지기능 개선에 대한 동물 모델 실험; B. 교대 지연 검사(delayed alternation test); C. 투여 방법으로 D. 인지 기억 평가 결과를 진행하였다.
P1-1 내지 P1-6와 M1 내지 M4를 투여한 군에 대해 T-maze 실험을 진행한 결과를 하기의 [도 14] 및 [도 15]에 나타내었다. [도 14] 및 [도 15]는 시행 간격을 5초로 구성하여 실험을 진행한 것으로, 9일 간의 훈련 기간 동안 성능이 점차적으로 향상되었다.
[도 14]를 참조하면, 본 발명에서 개시하는 P4-1 내지 P4-3에 의하는 경우 전반적으로 인지기억력이 향상된다는 사실을 알 수 있다. 또한 펩타이드 P4-2에 의하는 경우 다른 실시예인 P4-1 및 P1-3에 비하여 인지기능 및 기억력 향상 효과가 높아진다는 점을 있다. 특히, P4-1의 경우 다른 합성 펩타이드에 비하여 투여 초기부터 인지기능 및 기억력 개선 효과가 급격하게 높아진다는 사실을 확인할 수 있었다.
또한 P5-1 내지 P5-4에 의하는 경우 P4-1 및 P4-3 보다 우수한 인지기능 및 기억력 개선 효과를 나타낸다는 사실을 확인할 수 있었다. 특히 P5-1의 경우 P4-2 보다 확실하게 우수한 정도의 인지기능 및 기억력 개선효과를 낼 뿐만 아니라 초기 개선 활성이 우수하다는 점을 확인할 수 있었다.
[도 15]를 참조하면, 본 발명에서 개시하는 M1 내지 M4가 추가적으로 혼합되어 사용되는 경우 상호 작용에 의한 상승작용이 생길 뿐만 아니라, 초기 개선 효과가 급격히 좋아지는 것을 알 수 있다. 즉, [도 11]을 참조하면, P2-2는 상대적으로 인지기능 및 기억력 개선 효과가 우수한 편이지만, 이를 제외한 P2-1, P2-3 및 P2-4는 그 자체로서는 인지기능 및 기억력 개선 효과가 개선되는 정도가 상대적으로 낮다. 하지만 P2-1 내지 P2-4 전체가 [일반식 4] 또는 [일반식 5]로 표현되는 펩타이드와 혼합되어 펩타이드 조성물로 제공되는 경우 상호작용에 의한 상승효과에 의하여 인지기능 및 기억력 개선 효과와 초기 개선효과가 크게 높아진다는 점을 알 수 있다.
[일반식 4] 또는 [일반식 5]로 표현되는 펩타이드와 [일반식 2]로 표현되는 펩타이드가 혼합되어 펩타이드 조성물을 이루는 경우 인지기억력 개선 효과가 높아질 수 있고, 그 초기 활성이 빠른 조성물을 제공할 수 있다는 점을 확인할 수 있다.
따라서 본 발명에 따른 기억력 개선 및 인지기능장애 예방 또는 개선용 펩타이드 제조방법에 의하는 경우 상기 펩타이드의 생성에 따라 가속효과 및 상승효과를 도출할 수 있다는 점을 알 수 있다. 또한 상기 특정된 펩타이드를 통상의 기술자가 사용할 수 있는 방법을 통하여 생산하고 이를 제품에 포함하도록 하여 종래에 비하여 인지기능 개선 등에 상승효과와 함께 초기 급격한 개선효과를 나타내게 할 수 있다.
이상에서 본 발명의 바람직한 실시예에 대하여 상세하게 설명하였지만 본 발명의 권리범위는 이에 한정되는 것은 아니고 다음의 청구범위에서 정의하고 있는 본 발명의 기본 개념을 이용한 당업자의 여러 변형 및 개량 형태 또한 본 발명의 권리범위에 속하는 것이다.
본 발명은 기억력 개선 및 인지기능장애 예방 또는 개선용 펩타이드 및 이를 포함하는 조성물, 그리고 그 제조방법에 관한 것으로, 기억력 개선 및 인지기능장애 예방 또는 개선용 펩타이드 및 이를 포함하는 조성물을 제공하며, 실크 피브로인을 효소 가수분해하여 기억력 개선 및 인지기능장애 예방 또는 개선용 펩타이드 조성물을 제공할 수 있는 방법을 제공하는 것이다.

Claims (10)

  1. 하기의 일반식 1 내지 일반식 5 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드.
    [일반식 1]
    Tyr-Gly-X 1-X 2
    (상기 일반식에서 X 1은 Ala, Tyr, Thr, Val, Gly, Ile 또는 Gln이고, X 2는 Ala, Tyr, Ile, Val 또는 Gly이다.)
    [일반식 2]
    Ile-Gly-Z 1-Z 2
    (상기 일반식에서 Z 1은 Ala, Tyr, Val 또는 Gln이고, Z 2는 Ala, Tyr, Val 또는 Gly이다.)
    [일반식 3]
    Ile-Gly-Val-a 1-a 2
    (상기 일반식에서 a 1은 Ala, Tyr, 또는 Val이고, a 2은 Ala, Tyr, Thr, Val, Gly 또는 Gln이다.)
    [일반식 4]
    a 1-Gly-Gly-a 1
    (상기 일반식에서 a 1은 Ala, Tyr, 또는 Val이다)
    [일반식 5]
    a 1-Gly-Gly-a 1-Gly-a 2
    (상기 일반식에서 a 1은 Ala, Tyr, 또는 Val이고, a 2은 Ala, Tyr, Ile 또는 Val이다.)
  2. 제 1항에 따른 펩타이드를 포함하는 기억력 개선 및 인지기능장애 예방 또는 개선용 펩타이드 조성물.
  3. 제 2항에 있어서,
    상기 조성물은 실크 피브로인에서 유래된 것인
    기억력 개선 및 인지기능장애 예방 또는 개선용 펩타이드 조성물.
  4. 실크 피브로인을 용해시키는 용해 단계;
    상기 실크 피브로인 용해물에, 브로멜라인(bromelain)을 포함하는 제1 단백질 가수분해 효소 및
    플라보자임(Flavourzyme), 프로타맥스(Protamex), 뉴트라제(Neutrase), 베론-더블유(Veron), 수미자임(Sumizyme), 징지바인(zingibain), 칼파인(Calpain), 프로테아제NP(Protease NP), 발리다제(Validase) 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나를 포함하는 제2 단백질 가수분해 효소를 포함하는 혼합효소로 처리하여 가수분해하는 단계; 및
    단백질 가수분해 효소를 제거하는 효소 제거단계를 포함하는
    기억력 개선 및 인지기능장애 예방 또는 개선용 실크 유래 펩타이드의 제조방법.
  5. 실크 피브로인을 용해시키는 용해 단계;
    상기 실크 피브로인 용해물에 플라보자임(Flavourzyme), 파파인(Papain), 프로타맥스(Protamex), 뉴트라제(Neutrase), 베론-더블유(Veron), 수미자임(Sumizyme), 징지바인(zingibain), 칼파인(Calpain), 프로테아제NP(Protease NP), 발리다제(Validase) 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나를 단백질 가수분해 효소로 처리하여 가수분해하는 단계; 및
    단백질 가수분해 효소를 제거하는 효소 제거단계를 포함하는
    기억력 개선 및 인지기능장애 예방 또는 개선용 실크 유래 펩타이드의 제조방법.
  6. 실크 피브로인을 용해시키는 용해 단계;
    상기 실크 피브로인 용해물에, 델보라아제(delvorase), 키모트립신(Chymotrypsin), 서브틸리신(Subtilisin), 액티니딘(Actinidin), 락토페린(Lactoferrin), 코크라제P(Kokulase P), 케라티나아제(Keratinase), 카텝신 K(Cathepsin K) 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나를 포함하는 단백질 가수분해 효소로 처리하여 가수분해하는 단계; 및
    단백질 가수분해 효소를 제거하는 효소 제거단계를 포함하는
    기억력 개선 및 인지기능장애 예방 또는 개선용 실크 유래 펩타이드의 제조방법.
  7. 제 4항 또는 제 5항에 있어서,
    상기 가수분해 효소는 우마미자임(Umamizyme)을 더 포함하는 것인
    기억력 개선 및 인지기능장애 예방 또는 개선용 실크 유래 펩타이드의 제조방법.
  8. 제 6항 있어서,
    상기 가수분해 효소는 피신(Ficin)을 더 포함하는 것인
    기억력 개선 및 인지기능장애 예방 또는 개선용 실크 유래 펩타이드의 제조방법.
  9. 제 4항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    실크 피브로인을 용해시키는 용해 단계는
    실크피브로인 분말을 용해시키는 것이고,
    상기 실크피브로인 분말은 실크 피브로인 및 글리세린을 혼합하고, 분쇄한 다음 물로 세척하고 여과 및 건조하여 생성된 것인
    기억력 개선 및 인지기능장애 예방 또는 개선용 실크 유래 펩타이드의 제조방법.
  10. 제 4항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 인지기능장애는 치매, 학습장애, 실인증, 건망증, 실어증, 실행증, 섬망, AIDS 유발 치매, 빈스완거 병, 루이소체 치매, 전두측두엽성 치매, 경도 인지 장애, 다발성 경색성 치매, 픽병, 의미치매, 알츠하이머성 치매 또는 혈관성 치매로 구성된 군으로부터 선택되는 것인
    기억력 개선 및 인지기능장애 예방 또는 개선용 실크 유래 펩타이드의 제조방법.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113481272B (zh) * 2021-07-14 2022-12-20 中国科学院兰州化学物理研究所 一种使用橄榄油和核桃油制备的改善记忆的制品

Citations (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20040073425A (ko) * 2004-07-30 2004-08-19 주식회사 바이오그랜드 두뇌 또는 인지 기능 증진용 조성물
KR20050040124A (ko) * 2005-03-31 2005-05-03 주식회사 바이오그랜드 뇌신경질환의 예방 또는 치료용 식품 조성물
US20070260039A1 (en) * 2002-01-11 2007-11-08 Karatzas Costas N Methods of Producing Silk Polypeptides and Products Thereof
KR101434682B1 (ko) * 2005-12-02 2014-08-27 제넨테크, 인크. 결합 폴리펩티드 및 이들의 용도
KR101706296B1 (ko) * 2015-12-21 2017-02-13 주식회사 브레인온 기억력, 학습력, 인지력 향상용 조성물
KR101931363B1 (ko) * 2017-12-26 2018-12-20 주식회사 실크로 친환경적인 누에고치 유래 펩타이드의 제조방법 및 이로부터 제조된 누에고치 유래 펩타이드
WO2019094700A1 (en) * 2017-11-10 2019-05-16 Cocoon Biotech Inc. Silk-based products and methods of use
KR102107813B1 (ko) * 2019-11-21 2020-05-07 주식회사 네이처센스 농업회사법인 인지기능 및 기억력 개선용 실크 유래 기능성 단백질의 제조방법
KR102107808B1 (ko) * 2019-11-12 2020-05-07 주식회사 네이처센스 농업회사법인 기억력 및 인지기능 개선용 펩타이드
KR102107807B1 (ko) * 2019-11-12 2020-05-07 주식회사 네이처센스 농업회사법인 기억력 및 인지기능 개선용 펩타이드
KR102107809B1 (ko) * 2019-10-16 2020-05-07 주식회사 네이처센스 농업회사법인 실크 유래 펩타이드의 제조방법
KR102107804B1 (ko) * 2019-11-12 2020-05-07 주식회사 네이처센스 농업회사법인 기억력 및 인지기능 개선용 펩타이드
KR102107821B1 (ko) * 2019-10-28 2020-05-07 주식회사 네이처센스 농업회사법인 생산성이 향상된 실크 피브로인 가수분해물 제조방법 및 이를 이용하여 제조된 실크 피브로인 가수분해물
KR102107812B1 (ko) * 2019-11-07 2020-05-07 주식회사 네이처센스 농업회사법인 인지기능 및 기억력 개선용 실크 유래 펩타이드의 제조방법

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2002326531A1 (en) * 2001-08-03 2003-02-17 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Monoclonal antibodies to activated erbb family members and methods of use thereof
AU2003902474A0 (en) * 2003-05-21 2003-06-05 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation A bioelastomer i
JP2009518308A (ja) * 2005-12-01 2009-05-07 ユニヴァーシティ オヴ ピッツバーグ オヴ ザ コモンウェルス システム オヴ ハイアー エデュケーション アポトーシスを阻害するための化合物及び方法
US20110189292A1 (en) * 2009-04-20 2011-08-04 Allergan, Inc. Dermal fillers comprising silk fibroin hydrogels and uses thereof

Patent Citations (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20070260039A1 (en) * 2002-01-11 2007-11-08 Karatzas Costas N Methods of Producing Silk Polypeptides and Products Thereof
KR20040073425A (ko) * 2004-07-30 2004-08-19 주식회사 바이오그랜드 두뇌 또는 인지 기능 증진용 조성물
KR20050040124A (ko) * 2005-03-31 2005-05-03 주식회사 바이오그랜드 뇌신경질환의 예방 또는 치료용 식품 조성물
KR101434682B1 (ko) * 2005-12-02 2014-08-27 제넨테크, 인크. 결합 폴리펩티드 및 이들의 용도
KR101706296B1 (ko) * 2015-12-21 2017-02-13 주식회사 브레인온 기억력, 학습력, 인지력 향상용 조성물
WO2019094700A1 (en) * 2017-11-10 2019-05-16 Cocoon Biotech Inc. Silk-based products and methods of use
KR101931363B1 (ko) * 2017-12-26 2018-12-20 주식회사 실크로 친환경적인 누에고치 유래 펩타이드의 제조방법 및 이로부터 제조된 누에고치 유래 펩타이드
KR102107809B1 (ko) * 2019-10-16 2020-05-07 주식회사 네이처센스 농업회사법인 실크 유래 펩타이드의 제조방법
KR102107821B1 (ko) * 2019-10-28 2020-05-07 주식회사 네이처센스 농업회사법인 생산성이 향상된 실크 피브로인 가수분해물 제조방법 및 이를 이용하여 제조된 실크 피브로인 가수분해물
KR102107812B1 (ko) * 2019-11-07 2020-05-07 주식회사 네이처센스 농업회사법인 인지기능 및 기억력 개선용 실크 유래 펩타이드의 제조방법
KR102107808B1 (ko) * 2019-11-12 2020-05-07 주식회사 네이처센스 농업회사법인 기억력 및 인지기능 개선용 펩타이드
KR102107807B1 (ko) * 2019-11-12 2020-05-07 주식회사 네이처센스 농업회사법인 기억력 및 인지기능 개선용 펩타이드
KR102107804B1 (ko) * 2019-11-12 2020-05-07 주식회사 네이처센스 농업회사법인 기억력 및 인지기능 개선용 펩타이드
KR102107813B1 (ko) * 2019-11-21 2020-05-07 주식회사 네이처센스 농업회사법인 인지기능 및 기억력 개선용 실크 유래 기능성 단백질의 제조방법

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHENG NING, SUN YI, LIU SHU-YING: "Preparation and Antioxidant Activities of Walnut Protein Hydrolysates", CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES, vol. 34, no. 1, 10 January 2013 (2013-01-10), pages 72 - 76, XP055801950, DOI: 10.7503/cjcu20120277 *
DATABASE Protein 21 September 2019 (2019-09-21), "fibroin heavy chain precursor [Bombyx mori]", XP055801961, retrieved from NCBI Database accession no. NP_001106733 *
JOUNG JI AN, PARK MI NA, YOU JI YOUNG, SONG BONG JOON, CHOI JOON HO: "Application of Food-Grade Proteolytic Enzyme for the Hydrolysis of Regenerated Silk Fibroin from Bombyx mori", JOURNAL OF CHEMISTRY, HINDAWI PUBLISHING CORPORATION, US, vol. 2018, 1285823, 8 November 2018 (2018-11-08), US, pages 1 - 9, XP055801955, ISSN: 2090-9063, DOI: 10.1155/2018/1285823 *
MATSUI RIKO; HONDA RISA; KANOME MUTSUMI; HAGIWARA AKARI; MATSUDA YUKA; TOGITANI TOMOKA; IKEMOTO NARUMI; TERASHIMA MASAAKI: "Designing antioxidant peptides based on the antioxidant properties of the amino acid side-chains", FOOD CHEMISTRY, ELSEVIER LTD., NL, vol. 245, 5 December 2017 (2017-12-05), NL, pages 750 - 755, XP085314242, ISSN: 0308-8146, DOI: 10.1016/j.foodchem.2017.11.119 *
TAMBURRO A. M., GUANTIERI V., PANDOLFO L., SCOPA A.: "Synthetic fragments and analogues of elastin. II. Conformational studies", BIOPOLYMERS (PEPTIDE SCIENCE), WILEY PERIODICALS, INC., vol. 29, no. 4-5, 1 March 1990 (1990-03-01), pages 855 - 870, XP055801934, ISSN: 0006-3525, DOI: 10.1002/bip.360290419 *

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