KR102107825B1 - 실크 피브로인 가용화 방법 및 그 가수분해물의 제조방법 - Google Patents

실크 피브로인 가용화 방법 및 그 가수분해물의 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 실크 피브로인 용해방법 및 그 가수분해물의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 실크 피브로인 가용화 방법은 누에고치와 정제수를 혼합하고 열처리하여 세리신(sericin)이 제거하고 실크 피브로인을 수득하는 세리신 제거단계; 상기 실크 피브로인에 오일 및 레시틴을 혼합하는 전처리 단계; 상기 전처리 된 실크 피브로인에 유기산을 포함하는 혼합 용액에 용해하는 가용화 단계; 및 상기 용해물에서 혼합용액을 제거하고 물을 혼합하면서 혼합용액 정제단계를 포함하는 것일 수 있다.
본 발명에 의하는 경우 실크 피브로인의 가용화에 일반적으로 사용되는 고순도의 염화칼슘을 사용하지 않고 실크 피브로인을 가용화 할 수 있다. 따라서 다양한 분야의 용도로 실크 피브로인을 사용하는데 활용되도록 할 수 있다.

Description

실크 피브로인 가용화 방법 및 그 가수분해물의 제조방법{METHOD FOR DISSOLVING SILK FIBROIN AND IT'S HYDROLYZATE}
본 발명은 실크 피브로인 용해방법 및 그 가수분해물의 제조방법에 관한 것이다. 보다 상세하게는 염화칼슘을 사용하지 않으면서도 실크 피브로인을 용해할 수 있는 방법과 상기 염화칼슘을 사용하지 않으면서도 용해과정을 진행한 실크 피브로인의 가수분해물의 제조방법을 제공하기 위한 것이다.
자연계에 존재하는 수많은 다당류 또는 단백질과 같은 천연고분자들은 합성고분자에 비해 고가이고 가공성이 떨어지는 단점을 지니지만 생체적합성과 생분해성이 합성고분자 보다 우수하여 의료용 소재로 이용하기 위한 연구들이 지속되고 있다.
특히 누에고치로부터 얻어지는 천연단백질인 실크 단백질은 대표적인 천연고분자로 중심부에 두 가닥으로 존재하는 피브로인과 그 주변을 감싸고 있는 세리신으로 구성되어 있다. 이 중 친수성이며 점착성을 갖는 단백질인 세리신은 정련과정을 거쳐 제거되며, 의료용 소재로서, 외용제 또는 식품, 기타 약제 등으로는 일반적으로 피브로인만을 이용하는 것이 일반적이다.
또한, 최근 실크 단백질의 다양한 기능이 소개되고 있는데, 이러한 실크 단백질을 기능성 식품 또는 약제 등으로 사용하기 위해서는 상술한 바와 같이 실크 단백질로부터 실크 펩타이드를 얻기 위하여 실크에서 세리신을 제거하여 피브로인을 정제한다. 또한 정제된 피브로인을 일정한 효소 또는 산을 사용하여 가수분해하는 과정을 진행하게 된다.
세리신을 제거하는 단계는 약 알칼리성의 용액으로 처리하여 진행하는 것이 일반적이다. 한편, 실크 피브로인은 강력한 수소결합과 결정성 구조를 갖는 섬유상 단백질로서, 물이나 용매에 쉽게 용해되지 않기 때문에, 피브로인 단백질의 결합을 끊을 수 있는 유/무기 염, 플르오르화 용매, 이온화 용액, 강산 등을 이용하여 실크단백질을 용해시켜야 한다.
이러한 실크 피브로인을 용해하는데는 염화칼슘을 사용하는 것이 일반적이다. 또한, 식품 소재로서 피브로인 가수분해물을 사용하기 위해서는 순도가 높은 염화칼슘을 사용하여야 한다. 그러나 식품 소재를 생산하는 공정에서 사용할 수 있는 고순도의 염화칼슘은 일본산이 주류를 이루고 있다.
최근 일본산 소재의 국내 수출 규제에 따라 식품 생산공정에서 사용할 수 있는 고순도의 염화칼슘은 그 수급이 상당히 불안정한 실정이라 할 수 있다. 또한 역시 국내의 다양한 기능성 소재를 개발하여 활용하는데 있어, 일본산 염화칼슘 소재를 필수적으로 사용하는 점은 국내의 기능성 식품 소재 분야의 발전을 저해하는 요인이 될 수 밖에 없다는 문제가 있다.
따라서 본 발명자들은 일본산 소재의 국내 수출 규제가 진행되기 전부터 위와 같은 문제점을 인식하고, 고순도의 염화칼슘을 사용하지 않고 피브로인을 용해할 수 있는 방법을 연구하였다. 특히 식품 공정에 적용될 수 있는 소재만을 사용하여 피브로인을 용해함으로서, 일본산 고순도 염화칼슘을 사용하지 않으면서 실크 피브로인을 용해하여 용해 이후의 피브로인 가공단계가 진행될 수 있는 실크 피브로인 용해방법을 완성하였다. 또한 본 발명에서 개시하는 용해방법으로 처리된 실크 피브로인의 가수분해물이 염화칼슘을 이용하여 용해한 실크 피브로인과 동일한 물성 및 용도상 효과를 가질 수 있다는 점을 확인하였다.
선행기술 1(WO 2016-159500 A)의 경우 세리신이 제거하여 실크 피브로인을 정제한 뒤 브롬화리튬 또는 염화칼슘으로 용해시키는 방법을 개시하고 있다. 특히 위 선행기술 1은 식품 소재에 대한 것이 아니므로 실크 피브로인을 용해하기 위하여 사용하는 염의 종류가 비교적 다양할 수 있다는 점을 감안하여도 본 발명에서 대체하기 위한 대상으로 특정하고 있는 염화칼슘을 가용화를 위한 필수요소로 개시하고 있다.
선행기술 2(10-2018-0101802)의 경우 역시 실크 피브로인을 가용화 하기 위하여 브롬화리튬 또는 염화칼슘을 사용하는 점을 알 수 있다. 이 경우 역시 본 발명이 해결하기 위한 종래의 기술의 범주에 있으며, 실크 피브로인을 용해시키기 위하여 브롬화리튬 또는 염화칼슘을 사용하는 점을 확인할 수 있다.
따라서 상술한 바와 같이 염화칼슘, 특히 식품 소재로 사용되는 경우 고순도 염화칼슘을 사용하지 않으면서도 실크 피브로인을 가용화할 수 있는 방법의 개발이 필요하다.
WO 2016-159500 A KR 10-2018-0101802 A
본 발명의 목적은 실크 피브로인을 가용화 하는 방법 및 상기 실크 피브로인을 가수분해하는 방법을 제공하기 위한 것이다.
본 발명의 목적은 실크 피브로인의 가용화에 사용되는 염화칼슘을 사용하지 않고 실크 피브로인을 가용화 할 수 있는 방법을 제공하기 위한 것이다. 특히, 본 발명에서 개시하는 실크 피브로인을 가용화 하는 방법에 의하는 경우 고순도 염화칼슘을 사용하지 않으면서도 실크 피브로인이 염화칼슘으로 가용화 된 경우와 동일한 물성 및 성상의 최종 생산물을 얻을 수 있다.
본 발명은 고순도 실크 피브로인의 가용화에 고순도 염화칼슘을 대체함으로서 국내 소재응용 분야에 있어 일본산 소재의 의존도를 줄일 수 있도록 하기 위한 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 일 실시예에 따른 실크 피브로인 가용화 방법은 누에고치와 정제수를 혼합하고 열처리하여 세리신(sericin)이 제거하고 실크 피브로인을 수득하는 세리신 제거단계; 상기 실크 피브로인에 오일 및 레시틴을 혼합하는 전처리 단계; 상기 전처리 된 실크 피브로인에 유기산을 포함하는 혼합 용액에 용해하는 가용화 단계; 및 상기 용해물에서 혼합용액을 제거하고 물을 혼합하면서 혼합용액 정제단계를 포함하는 것일 수 있다.
상기 실크 피브로인 가용화 방법에 있어서, 상기 혼합용액은 자일나아제, 소르비톨, 만니톨, 칼락토오스 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나를 더 포함하는 것일 수 있다.
상기 실크 피브로인 가용화 방법에 있어서, 상기 오일은 실크 피브로인 100 중량부에 대하여 1 내지 40 중량부, 레시틴은 0.1 내지 10 중량부가 혼합되는 것일 수 있다.
본 발명의 다른 일 실시예에 따른 실크 피브로인 가수분해물의 제조방법은 누에고치와 정제수를 혼합하고 열처리하여 세리신(sericin)이 제거하고 실크 피브로인을 수득하는 세리신 제거단계; 상기 실크 피브로인에 오일 및 레시틴을 혼합하는 전처리 단계; 상기 전처리 된 실크 피브로인에 유기산을 포함하는 혼합 용액에 용해하는 가용화 단계; 상기 용해물에서 혼합용액을 제거하고 물을 혼합하면서 혼합용액 정제단계; 및 상기 정제단계에서 얻어진 실크 피브로인 용해물을 단백질 가수분해 효소 또는 산으로 가수분해 하는 단계;를 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 실크 피브로인은 가수분해를 통하여 실크 펩타이드를 생산하기 위한 것일 수 있다.
본 발명의 또 다른 일 실시예에 따른 식품은 상기 실크 피브로인 또는 상기 실크 피브로인 가수분해물을 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 또 다른 일 실시예에 따른 인지기능장애 예방 또는 개선용 의약품은 상기 실크 피브로인 또는 상기 실크 피브로인 가수분해물을 포함하는 것일 수 있다.
상기 인지기능장애는 치매, 학습장애, 실인증, 건망증, 실어증, 실행증, 섬망, AIDS 유발 치매, 빈스완거 병, 루이소체 치매, 전두측두엽성 치매, 경도 인지 장애, 다발성 경색성 치매, 픽병, 의미치매, 알츠하이머성 치매 또는 혈관성 치매로 구성된 군으로부터 선택된 것일 수 있다.
이하, 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다.
본 발명의 일 실시예에 따른 실크 피브로인 가용화 방법은 누에고치와 정제수를 혼합하고 열처리하여 세리신(sericin)이 제거하고 실크 피브로인을 수득하는 세리신 제거단계; 상기 실크 피브로인에 오일 및 레시틴을 혼합하는 전처리 단계; 상기 전처리 된 실크 피브로인에 유기산을 포함하는 혼합 용액에 용해하는 가용화 단계; 및 상기 용해물에서 혼합용액을 제거하고 물을 혼합하면서 혼합용액 정제단계를 포함하는 것일 수 있다.
실크(silk)란 누에가 만든 고치로부터 얻어지는 섬유를 말하며, 이것을 원료로 한 견사로 제조한 제품을 총칭한다. 넓은 뜻으로는 작잠사 등의 야잠사, 견 방사를 원료한 견 제품을 포함하여 가리키기도 한다. 보통 견이라고 부르는 가잠견(true silk)은 사육 견(cultivated or domestic silk)이라고도 한다.
본 발명에서 말하는 누에고치는 실크를 포함하는 개념으로 정의한다.
실크 섬유는 피브로인과 세리신으로 구성되어 있으며, 그 밖에 소량의 뇌질, 지방질 및 무기염류를 함유하고 있다.
실크의 구성성분은 피브로인과 세리신이고 이들은 섬유모양의 단백질이다. 이것은 천연의 상태에서는 생체 고분자로 구성되어 있다. 보통 분자량이 10,000이상인 화합물은 섬유, 막(membrance) 또는 덩이모양이다. 실크는 고분자의 단백질이고, 단백질은 아미노산으로 되어있으며, 아미노산은 탄소에 아미노기(-NH2)와 카르복실기(-COOH)가 결합되어 단순한 알파 아미노산으로 구성된다.
그리고 수많은 아미노산들이 사슬고리를 가지고 염주모양으로 연결된 고분자를 폴리펩타이드라 한다. 결국 두 개의 아미노산의 -NH2와 -COOH가 반응하여 물(H2O)이 빠져나가게 되고 평행으로 배열하여 섬유화가 이루어진다
피브로인을 이루는 아미노산은 글라이신(측쇄 -H), 알라닌(-CH3)이 많은데 이들 아미노산은 분자의 측쇄가 짧은 것이 특색이다. 그리고 세린(측쇄 -CH2OH), 티로신(측쇄-CH(OH)CH2)를 합하면 90% 이상이다. 그리고 산성 아미노산(아스파르트산, 글루탐산)과 여기성 아미노산(라이신, 알라닌, 히스디틴)의 함량이 적은 것이 세리신의 아미노산 조성과의 차이이다. 이들 아미노산을 서로 다른 연결조합으로 결합하면 폴리펩타이드를 형성한다. 피브로인을 가수분해시키면 아미노산이 되고, 분자량이 30 내지 50만으로부터 3,000 내지 3,500의 알파 아미노산이 결합하여 한 가닥의 분자를 구성한다.
한편, 체내에 흡수될 수 있는 정도의 크기로 상기 실크에서 유래한 실크 피브로인을 일정한 아미노산 서열을 가지는 것으로 가수분해하여 가공한 것을 실크 피브로인 유래 펩타이드 또는 실크 피브로인 단백질로 말할 수 있다.
또한 본 발명에서 말하는 실크 유래 펩타이드는 실크 단백질로도 표현될 수 있고 같은 의미로 사용될 수 있다.
상기 세리신 제거단계는 실크를 알칼리로 처리하여 제거하는 방법이 가장 일반적으로 사용된다. 다만 본 발명은 위 방법에 한정하는 것은 아니며 상기 세리신 제거단계는 해당분야에서 통상의 지식을 가진 자가 세리신을 제거하고 피브로인을 수득하는 사용할 수 있는 모든 수단을 포함하는 것으로 본다.
일반적으로 실크 펩타이드는 염화칼슘 용액을 용매로 하여 용해한 뒤 산 가수분해 효소 또는 단백질 가수분해 효소를 처리하여 일정한 크기의 실크 펩타이드가 생성되도록 한다. 특히 식품으로 실크 펩타이드를 제조하는 경우 소화기관에서 흡수할 수 있는 정도의 일정한 크기를 가지는 실크 펩타이드를 제조하는 것이 중요하다.
한편, 실크 피브로인에 바로 산처리를 진행하여 용해하는 경우 실크 피브로인이 분해되기 때문에 상기 실크 펩타이드를 제조할 수 없다는 문제가 있다. 또한 산의 농도나 pH를 조절하여 산을 처리 하더라도 실크 피브로인에 직접적인 분해가 발생하고, 실크 피브로인이 부분적으로 분해된 부분과 분해되지 않고 용해되지도 않는 부분이 남기 때문에 일정한 형태의 실크 펩타이드를 얻을 수 없다는 문제가 있다. 또한 상기와 같이 일반적으로 실크 피브로인에 용해과정 직접 산으로 처리하여 진행하면 이후 가수분해 효소에 따라 일정한 아미노산 서열을 가지는 실크 펩타이드를 수득할 수 없게 된다는 문제를 가진다.
따라서 산을 이용한 실크 피브로인의 가용화를 진행하는 경우에는 필수적으로 전처리 단계가 진행되어야 한다.
그로므로 본 발명에 따른 실크 피브로인의 가용화 방법은 오일 및 레시틴을 포함하는 전처리 조성물을 사용하여 실크 피브로인과 혼합하는 것이 필요하다. 상기 전처리 단계를 진행한 후에 유기산을 처리하는 경우 실크 피브로인의 일부 분해가 발생하게 되지만, 이후 진행되는 가수분해에 영향을 주지 않을 정도의 펩타이드 조각으로 분해될 수 있다. 따라서 실질적으로 염화칼슘을 사용하지 않으면서 실크 피브로인을 가용화 하는 방법이 될 수 있다.
또한 상기 가용화 단계는 유기산을 사용하는 것이어야 하며, 염산 또는 황산 등을 사용하는 경우 상술한 실크 피브로인의 전부 또는 일부가 완전히 분해되어 용해된 실크 피브로인을 일정한 효소로 목적하는 형태에 맞게 가수분해할 수 없게 된다는 문제가 있다.
상기 전처리와 함께 상기 사용화 단계에서 유기산을 사용하는 경우 위와 같은 문제를 방지할 수 있다.
바람직하게 상기 가용화 단계에 있어서 상기 유기산은 시트르산 및 초산의 혼합물인 것일 수 있다. 상기 시트르산 및 초산을 사용하는 경우 상기 전처리된 실크 피브로인이 용해될 정도의 수준으로 분해되기 때문에 가수분해 단계를 원활히 진행할 수 있게 된다.
더 바람직하게 상기 가용화 단계에 있어서, 상기 유기산은 시트르산 및 초산이 3: 7 내지 7: 3 중량비로 혼합된 것이고, 제2 인산 나트륨이 더 포함되는 것일 수 있다. 상기 제2 인산 나트륨이 더 포함되는 경우 산 분해 속도가 조절될 수 있어서, 과분해를 방지할 수 있다.
또한 실크 피브로인의 용해물에 사용되는 용매의 양은 무엇보다 중요하다. 용매의 양이 증가하면 공정의 크기가 커질 수 밖에 없고, 이후 단계에서 처리하는 양에 비하여 수득되는 최종 생성물의 양이 작아질 수 밖에 없다. 상기 범위에 의하는 경우 실크 피브로인에 대하여 1 내지 4 배의 질량부의 용매를 사용하여도 실크 피브로인이 가용화 되도록 할 수 있다.
한편, 정제단계에서는 상당량의 물을 혼합하면서 상기 가용화 단계에서 사용된 유기산이 제거되도록 하여야 한다.
상기 혼합 용액은 자일나아제, 소르비톨, 만니톨, 칼락토오스 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나를 더 포함하는 것일 수 있다.
바람직하게는 상기 혼합 용액에 자일나아제, 소르비톨, 만니톨의 혼합물이 더 포함되는 것일 수 있다. 실크 피브로인의 용해 활성을 높일 수 있고, 유기산에 의하여 실크 펩타이드가 과분해되는 것을 방지할 수 있다.
상기 오일은 실크 피브로인 100 중량부에 대하여 1 내지 40 중량부, 레시틴은 0.1 내지 10 중량부가 혼합되는 것일 수 있다.
바람직하게 상기 오일은 홍화씨유이고, 실크 피브로인 100 중량부에 대하여 홍화씨유 10 내지 30 중량부;및 레시틴은 0.5 내지 5 중량부가 혼합되는 것일 수 있다. 상기 범위에 의하는 경우 유기산에 의한 피브로인의 과분해를 방지할 수 있다.
더 바람직하게 상기 전처리 단계는 실크 피브로인 100 중량부에 대하여 녹말 10 내지 30 중량부; 홍화씨유 10 내지 30 중량부;및 레시틴은 0.5 내지 5 중량부가 혼합되는 것일 수 있다.
상기 범위로 녹말이 더 포함되는 경우 유기산에 의한 과분해가 효과적으로 방지될 수 있어, 상기 유기산을 통한 가용화 단계를 진행한 실크 피브로인을 가수분해 하였을 때, 염화칼슘으로 실크 피브로인을 용해한 경우 거의 유사한 성상 및 물성을 나타낼 수 있도록 할 수 있다.
본 발명의 다른 일 실시예에 따른 실크 피브로인 가수분해물의 제조방법은 누에고치와 정제수를 혼합하고 열처리하여 세리신(sericin)이 제거하고 실크 피브로인을 수득하는 세리신 제거단계; 상기 실크 피브로인에 오일 및 레시틴을 혼합하는 전처리 단계; 상기 전처리 된 실크 피브로인에 유기산을 포함하는 혼합 용액에 용해하는 가용화 단계; 상기 용해물에서 혼합용액을 제거하고 물을 혼합하면서 혼합용액 정제단계; 및 상기 정제단계에서 얻어진 실크 피브로인 용해물을 단백질 가수분해 효소 또는 산으로 가수분해 하는 단계;를 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 실크 피브로인은 가수분해를 통하여 실크 펩타이드를 생산하기 위한 것일 수 있다.
본 발명의 또 다른 일 실시예에 따른 식품은 상기 실크 피브로인 또는 상기 실크 피브로인 가수분해물을 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 또 다른 일 실시예에 따른 인지기능장애 예방 또는 개선용 의약품은 상기 실크 피브로인 또는 상기 실크 피브로인 가수분해물을 포함하는 것일 수 있다.
상기 인지기능장애는 치매, 학습장애, 실인증, 건망증, 실어증, 실행증, 섬망, AIDS 유발 치매, 빈스완거 병, 루이소체 치매, 전두측두엽성 치매, 경도 인지 장애, 다발성 경색성 치매, 픽병, 의미치매, 알츠하이머성 치매 또는 혈관성 치매로 구성된 군으로부터 선택된 것일 수 있다.
본 발명은 실크 피브로인을 가용화 하는 방법 및 상기 실크 피브로인을 가수분해하는 방법을 제공한다.
본 발명은 실크 피브로인의 가용화에 사용되는 염화칼슘을 사용하지 않고 실크 피브로인을 가용화 할 수 있는 방법을 제공한다. 특히, 본 발명에서 개시하는 실크 피브로인을 가용화 하는 방법에 의하는 경우 고순도 염화칼슘을 사용하지 않으면서도 실크 피브로인이 염화칼슘으로 가용화 된 경우와 동일한 물성 및 성상의 최종 생산물을 얻을 수 있다.
본 발명은 고순도 실크 피브로인의 가용화에 고순도 염화칼슘을 대체함으로서 국내 소재응용 분야에 있어 일본산 소재의 의존도를 줄일 수 있도록 할 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 흐름도에 관한 것이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 실크 펩타이드의 인지기능 및 기억력 개선효과 실험에 관한 것이다.
이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예에 대하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다.
[제조예 1: 산을 이용한 가용화]
하기의 [표 1]과 같은 조성으로 세리신이 제거된 실크 피브로인을 용해하였다. 하기 [표 1]의 산성 용매는 상기 실크 피브로인과 1: 1의 질량비로 혼합하였다.
A1 A2 A3 A4 A5 A6 A7 A8 A9
염산 100 - - - - - - - -
초산 - 100 - - 10 30 50 70 90
시트르산 - - 100 - 90 70 50 30 10
뷰티르산 - - - 100 - - - - -
(단위: 중량부)
[실험예 1: 과분해 평가]
산을 포함하는 용매를 사용하는 경우 상기 실크 피브로인이 과분해된 정도를 평가하여 하기의 [표 2]에 나타내었다. 전부 과분해된 경우 XXX, 상당부분 과분해되었고, 가수분해 과정을 진행할 수 없는 정도 XX, 일부 과분해 되었고 가수분해 과정을 진행할 수 없는 정도 X, 소량 과분해되었고, 가수분해 과정을 진행할 수 있는 정도 Z, 과분해가 거의 일어나지 않은 정도 O, 일부 또는 전부가 용해되지 않은 경우 N으로 표기 평가하였다.
T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9
용매 A1 A2 A3 A4 A5 A6 A7 A8 A9
과분해 평가 XXX XX N N N X X X XX
상기 [표 2]를 참조하면, 전처리를 진행하지 않는 경우에는 과분해가 발생하기 때문에 가수분해를 통한 실크 펩타이드를 제조할 수 있는 형태의 용해된 실크 피브로인을 제조할 수 없다는 점을 확인할 수 있다.
[제조예 2: 전처리 후 가용화]
전처리에 따른 실크 피브로인의 과분해 방지 효과를 확인하기 위하여 하기의 [표 3]같은 조성의 전처리 조성물을 사용하면서, A1, A2 및 A7을 용매로 하여 가용화를 [표 4]와 같이 실크 피브로인에 대한 가용화를 진행하였다.
BT1 BT2 BT3 BT4 BT5 BT6 BT7 BT8 BT9 BT10 BT11
실크피브로인 100 100 100 100 100 100 100 100 - - -
식용유 20 - - - - - - - - - -
홍화씨유 - 20 5 10 20 30 40 20 20 20 20
레시틴 - - 0.1 0.5 2 5 7 2 2 2 2
녹말 - - - - - - - 5 10 30 40
(단위: 중량부)
S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13
전저리 BT1 BT2 BT3 BT4 BT5 BT6 BT7 BT8 BT9 BT10 BT11 BT5 BT5
가용화용매 A7 A7 A7 A7 A7 A7 A7 A7 A7 A7 A7 A1 A2
[ 실험예 2: 과분해 평가]
상기 S1 내지 S13의 제조예에 대하여 상술한 방법과 동일한 방법으로 가수분해단계를 진행할 수 있을 정도로 과분해되지 않고 용해될 수 있는지 평가를 진행하였고, 그 결과를 하기의 [표 5]에 나타내었다.
S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13
전저리 X X X Z Z Z X Z O O Z XX X
상기 [표 5]를 참고하면, 일정한 범위에서 전처리가 진행되는 경우 특정범위의 산을 포함하는 용매를 사용하여 가용화 시킬 때, 실크 피브로인의 과분해를 방지할 수 있다는 것을 알 수 있다.
구체적으로 S4 내지 S6, S8 내지 11의 경우 가수분해를 진행할 수 있는 정도 였으며, 특히 S9 및 S10의 경우에는 과분해가 거의 확인되지 않았으며, 염화칼슘을 사용한 경우와 거의 유사한 정도의 성상을 나타내는 것을 확인할 수 있었다.
[실험예 3: 실크 펩타이드의 효과 실험]
염화칼슘이 없이 가용화 단계를 진행한 경우 가수분해단계를 거쳐 최종적으로 생산된 실크 펩타이드가 종래의 염화칼슘으로 가용화를 진행한 경우와 동일한 효과를 나타내는지 확인하기 위하여 하기의 [표 6]과 같은 가수분해효소로 상기 T1, S5, S10에 의하여 제조된 실크 피브로인을 가수분해 하여 실크 펩타이드를 제조하였다.
T1 S5 S10
가수분해효소 A B1 B2 B3
가수분해효소 B C2 C2 C3
- 가수분해 효소 A: 브로멜라인 + 징지바인 혼합효소
- 가수분해 효소 B: 브로멜라인 + 징지바인 + 칼파인 + 우마미자임 혼합효소
인지기능 개선에 대한 동물 모델 실험
A. 실험 동물의 준비
실험 동물은 웅성 백서 (Sprague Dawley, 140 내지 180 g, 대한실험동물센터)로서, 이들은 일정한 환경 (실내온도 25±1℃, 상대습도 60±10%)에서 일주일 동안 하나의 사육 상자 당 4 마리씩 넣어 물은 제한 없이 제공하였으며, 이때, 몸무게의 80%를 유지하도록 제한 급식을 실시하였다. 본 실험에서는 총 50 마리를 사용하였다. 훈련 3일 전부터 5분씩 미로에 적응시켜 검사를 진행하였다.
B. 교대 지연 검사(delayed alternation test)
총 세 개의 통로(왼쪽, 오른쪽, 중앙부)가 있으며, 각 통로 입구는 실험자가 동물의 출입을 통제할 수 있도록 칸막이를 설치한 T자 모양의 미로를 준비하였다.
첫 시행에서는 출발 상자에 1분간 적응시켰다. 첫 시행은 '강제 선택 시행'으로, 칸막이로 한쪽 통로를 막아놓고 반대편 통로에 동물이 들어가면 칸막이로 후방을 막았다. 동물의 사지가 통로 입구를 통과하면 동물이 들어간 것으로 간주하였다. 60초간 동물이 해당 통로에서 먹이를 먹도록 하였다.
다음 시행부터는 '자유 선택 시행'으로 동물이 출발상자에서 출발하여 자유롭게 통로의 방향(왼쪽 혹은 오른쪽)을 선택하도록 하였다. 동물은 바로 이전의 시행에서 들어갔던 통로와 반대편 통로로 들어갔을 경우에만 먹이 보상을 하였다.
시행 간격은 5초 및 20초로 지연 시간(delay)를 두고 구성되며, 매 시행의 제한시간(cut-off time)은 60초로 하였다. 동물이 강화가 주어지는 통로에 정확하게 들어간 횟수와 통로까지 들어가는데 걸린 시간을 측정하였다. 하루에 10 시행식 9일 동안 동일한 절차를 수행하여 평가하였다.
C. 투여 방법
본 발명의 제조방법에 따라 제조된 실크 펩타이드 B1 내지 B3, C1 내지 C3를 100 ㎎/㎖의 용액으로 제조하여 구강 투여하였다. 모든 시료들은 증류수에 용해하여 구강 투여하였다.
D. 인지 기억 평가 결과
실크 펩타이드 B1 내지 B3, C1 내지 C3을 투여한 군에 대해 T-maze 실험을 진행한 결과를 하기의 [도 2]에 나타내었다. 도 2는 시행 간격을 5초로 구성하여 실험을 진행한 것으로, 9일 간의 훈련 기간 동안 성능이 점차적으로 향상되었다.
하기의 [도 2]를 참조하면, B2 및 C2는 B1 및 B1과 효과상 차이가 드러나는 것을 알 수 있다. 이에 따라 전처리에 불구하고, 실크 피브로인에 과분해로 가수분해단계를 원활히 진행하기 어렵다는 점을 알 수 있다.
그러나 B3 및 C3의 경우 B1 및 B1과 효과가 거의 유사한 정도로 나타나고 있어 수득된 실크 펩타이드의 아미노산 조성이 일치하거나 적어도 가용화 단계에서 가수분해 단계에 대한 영향을 미치지 않는 정도의 분해가 발생하는 것이라는 점을 알 수 있다. 따라서 본 발명에 따라 제조된 실크 펩타이드는 염화칼슘으로 용해 및 가수분해한 경우와 동일한 정도의 활성을 나타낸다는 점을 확인할 수 있다.
이상에서 본 발명의 바람직한 실시예에 대하여 상세하게 설명하였지만 본 발명의 권리범위는 이에 한정되는 것은 아니고 다음의 청구범위에서 정의하고 있는 본 발명의 기본 개념을 이용한 당업자의 여러 변형 및 개량 형태 또한 본 발명의 권리범위에 속하는 것이다.

Claims (4)

  1. 누에고치와 정제수를 혼합하고 열처리하여 세리신(sericin)이 제거하고 실크 피브로인을 수득하는 세리신 제거단계;
    상기 실크 피브로인에 오일 및 레시틴을 혼합하는 전처리 단계;
    상기 전처리 된 실크 피브로인에 유기산을 포함하는 혼합 용액에 용해하는 가용화 단계; 및
    상기 용해물에서 혼합용액을 제거하고 물을 혼합하면서 혼합용액 정제단계를 포함하는 것이고
    상기 오일은 홍화씨유이고, 실크 피브로인 100 중량부에 대하여 홍화씨유 10 내지 30 중량부; 및 상기 레시틴은 0.5 내지 5 중량부가 혼합되는 것인
    실크 피브로인 가용화 방법.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 혼합용액은 자일나아제, 소르비톨, 만니톨, 칼락토오스 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나를 더 포함하는 것인
    실크 피브로인 가용화 방법.
  3. 삭제
  4. 누에고치와 정제수를 혼합하고 열처리하여 세리신(sericin)이 제거하고 실크 피브로인을 수득하는 세리신 제거단계;
    상기 실크 피브로인에 오일 및 레시틴을 혼합하는 전처리 단계;
    상기 전처리 된 실크 피브로인에 유기산을 포함하는 혼합 용액에 용해하는 가용화 단계;
    상기 용해물에서 혼합용액을 제거하고 물을 혼합하면서 혼합용액 정제단계; 및
    상기 정제단계에서 얻어진 실크 피브로인 용해물을 단백질 가수분해 효소 또는 산으로 가수분해 하는 단계;를 포함하고
    상기 오일은 홍화씨유이고, 실크 피브로인 100 중량부에 대하여 홍화씨유 10 내지 30 중량부; 및 상기 레시틴은 0.5 내지 5 중량부가 혼합되는 것인
    실크 피브로인 가수분해물의 제조방법.
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