KR102153103B1 - 실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법 및 이를 이용한 기억력 및 인지기능 개선용 조성물 - Google Patents
실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법 및 이를 이용한 기억력 및 인지기능 개선용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법 및 이를 이용한 인지기능 개선용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법은 누에고치와 정제수를 혼합하고 열처리하여 세리신(sericin)이 제거하고 실크 피브로인을 수득하는 세리신 제거단계; 실크 피브로인 및 염화칼슘을 혼합하여 용해시키는 용해물을 수득하는 용해단계; 상기 용해물에서 염화칼슘을 제거하는 제거단계; 및 상기 제거단계 이후에 용해물에 산가수분해 효소, 단백질 가수분해 효소 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나를 처리하는 가수분해 단계를 포함하는 것일 수 있다.
Description
본 발명은 실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법 및 이를 이용한 인지기능 개선용 조성물에 관한 것이다. 보다 상세하게는 두뇌 및 인지기능 개선효과를 가지는 유효물질에 대한 수득효율 및 인지기능 개선효과가 향상된 실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법 및 이를 이용한 인지기능 개선용 조성물을 제공하기 위한 것이다.
실크 펩타이드는 실크의 원료인 명주실을 저분자 상태인 아미노산 및 아미노산 몇 개의 결합상태로 분해시킨 것을 일컫는다. 건강한 누에가 오령 삼일(38일)이 지나면 실샘에서 명주실을 토사해 고치를 짓는다. 이 고치의 실, 즉, 명주실은 98%의 단백질로 구성되어 있다.
단백질 급원으로부터 부가가치가 높은 단백질을 만들어 내기 위한 연구는 최근 수년간 많은 관심과 성과를 얻고 있다. 누에(Bombyx mori)로부터 생산되는 실크는 천연에서 얻을 수 있는 훌륭한 거대 단백질이며, 섬유상 단백질인 피브로인(fibroin)과 이들을 부착시키는 고무상 단백질인 세리신(sericin)으로 구성되어 있다. 이 실크단백질은 18종의 아미노산으로 구성되어 있는데, 피브로인의 주성분은 글리신과 알라닌이며 이 두 종류의 아미노산이 피브로인 전체 성분의 65%를 차지하고, 세리신은 세린, 아스파라긴산, 글루타민산이 세리신 전체 성분의 약 60%를 차지한다. 또한 인체 내에서 합성되지 않기 때문에 외부에서 섭취해야하는 필수아미노산도 피브로인의 경우 전체의 약 6%, 세리신의 경우 약 19% 내외로 포함되어 있다.
단백질의 가수분해 산물로 얻어지는 유리아미노산, 올리고 펩타이드 및 저분자 단백질은 고유의 기능을 가지므로 새로운 생물활성 소재로 이용될 가능성이 크다. 특히 최근 실크 피브로인 유래 펩타이드와 아미노산은 인지기능 향상, 당뇨 개선, 파킨슨병 증상에 대한 완화, 체력 증진과 비만 개선 등에 대한 효과와 관련된 연구가 활발히 진행되고 있다.
특히, 두뇌 또는 인지기능 개선에 효과를 나타내는 천연물은 상당히 제한적이기 때문에 실크 단백질이 상당히 고가 원료이고, 이로부터 생산되는 실크 피브로인 유래 펩타이드 또는 아미노산 역시 상당히 비싼 가격임에도 불구하고, 인지기능 개선 효과를 나타내는 주요한 천연물로 각광을 받고 있다. 이에 따라 실크 피브로인 유래 펩타이드 또는 아미노산을 이용한 인지기능 개선용 조성물에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다.
관련하여 종래의 기술들은 보면 특정 효소를 사용하여 실크 피브로인 유래 펩타이드 또는 아미노산이 인지기능 개선에 효과가 있다는 점을 확인하거나, 특정 시퀀스를 가지는 실크 단백질 유래의 아미노산에 대하여 인지기능 개선에 효과가 있다는 점을 확인하는 정도에 머물러 있다.
이에 인지기능 개선효과를 나타내는 실크 피브로인 유래 펩타이드 또는 아미노산의 생산효율을 높이는 제조방법이 필요한 실태이며, 특히 두뇌 또는 인지기능 개선효과를 더욱 향상시킨 실크 피브로인 유래 펩타이드에 대한 제조방법이 개발될 필요가 있다.
선행기술 1의 경우 특정 효소 등을 사용한 실크 펩타이드에 대한 인지기능을 개선 효과를 개시하고 있다. 그러나 상술한 바와 같이 생산효율을 높일 수 있도록 하는 보다 개선된 실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법의 개발이 필요하다.
선행기술 2의 경우 실크 단백질 및 아미노산을 분석하여 인지기능 개선효과를 가지는 특정 아미노산 서열을 가지는 단백질-미미킹(mimicking) 펩타이드를 개시하고 있다. 그러나 효소 분해법을 이용하면서 공정효율 및 두뇌 또는 인지기능 개선효과를 향상시킨 실크 피브로인 유래 펩타이드에 대한 제조방법에 대한 개발이 필요하다.
본 발명의 목적은 기억력 개선, 인지기능 및 두뇌기능 개선효과를 나타내는 실크 피브로인 유래 펩타이드에 있어서, 상기 개선효과가 높아지도록 하는 실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법을 제공하기 위한 것이다.
본 발명의 목적은 공정조건을 개선하여 실크 피브로인 유래 펩타이드의 수득 효율 및 신경세포 보호 활성 향상된 실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법을 제공하기 위한 것이다.
본 발명의 목적은 공정효율이 개선된 실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법을 제공하기 위한 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 실크 피브로인 유래 펩타이드 제조방법을 이용한 인지기능 개선용 조성물을 제공하기 위한 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 일 실시예에 따른 실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법은 누에고치와 정제수를 혼합하고 열처리하여 세리신(sericin)이 제거하고 실크 피브로인을 수득하는 세리신 제거단계; 실크 피브로인 및 염화칼슘을 혼합하여 용해시키는 용해물을 수득하는 용해단계; 상기 용해물에서 염화칼슘을 제거하는 제거단계; 상기 제거단계 이후에 용해물에 산가수분해 효소, 단백질 가수분해 효소 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나를 처리하는 가수분해 단계를 포함하는 것일 수 있다.
상기 실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방에 있어서, 상기 세리신 제거단계는 점증제 및 첨가제를 포함하는 것이고, 30 내지 70℃로 열처리하는 것일 수 있다.
상기 실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법에 있어서, 상기 세리신 제거단계에서 누에고치와 정제수의 혼합물은 점도가 1.2 내지 120 cP인 것일 수 있다.
상기 실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법에 있어서, 상기 첨가제는 자일나아제; 소르비톨; 만니톨; 칼락토오스 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 것일 수 있다.
본 발명의 다른 일 실시예에 따른 기억력 또는 인지기능 개선용 조성물은 상기 실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법에 따라 제조된 실크 펩타이드를 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 다른 또 일 실시예에 따른 기억력 또는 인지기능 개선용 식품 조성물은 상기 실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법에 따라 제조된 실크 피브로인 유래 펩타이드를 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 다른 또 일 실시예에 따른 기억력 또는 인지기능 관련 질환의 예방 및 치료용 약학 조성물은 상기 실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법에 따라 제조된 실크 피브로인 유래 펩타이드를 포함하는 것일 수 있다.
이하, 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다.
본 발명의 일 실시예에 따른 실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법은 누에고치와 정제수를 혼합하고 열처리하여 세리신(sericin)이 제거하고 실크 피브로인을 수득하는 세리신 제거단계; 실크 피브로인 및 염화칼슘을 혼합하여 용해시키는 용해물을 수득하는 용해단계; 상기 용해물에서 염화칼슘을 제거하는 제거단계; 상기 제거단계 이후에 용해물에 산가수분해 효소, 단백질 가수분해 효소 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나를 처리하는 가수분해 단계를 포함하는 것일 수 있다.
실크(silk)란 누에가 만든 고치로부터 얻어지는 섬유를 말하며, 이것을 원료로 한 견사로 제조한 제품을 총칭한다. 넓은 뜻으로는 작잠사 등의 야잠사, 견 방사를 원료한 견 제품을 포함하여 가리키기도 한다. 보통 견이라고 부르는 가잠견(true silk)은 사육 견(cultivated or domestic silk)이라고도 한다.
본 발명에서 말하는 누에고치는 실크를 포함하는 개념으로 정의한다.
실크 섬유는 피브로인과 세리신으로 구성되어 있으며, 그 밖에 소량의 뇌질, 지방질 및 무기염류를 함유하고 있다.
실크의 구성성분은 피브로인과 세리신이고 이들은 섬유모양의 단백질이다. 이것은 천연의 상태에서는 생체 고분자로 구성되어 있다. 보통 분자량이 10,000이상인 화합물은 섬유, 막(membrance) 또는 덩이모양이다. 실크는 고분자의 단백질이고, 단백질은 아미노산으로 되어있으며, 아미노산은 탄소에 아미노기(-NH2)와 카르복실기(-COOH)가 결합되어 단순한 알파 아미노산으로 구성된다.
그리고 수많은 아미노산들이 사슬고리를 가지고 염주모양으로 연결된 고분자를 폴리펩타이드라 한다. 결국 두 개의 아미노산의 -NH2와 -COOH가 반응하여 물(H2O)이 빠져나가게 되고 평행으로 배열하여 섬유화가 이루어진다
피브로인을 이루는 아미노산은 글라이신(측쇄 -H), 알라닌(-CH3)이 많은데 이들 아미노산은 분자의 측쇄가 짧은 것이 특색이다. 그리고 세린(측쇄 -CH2OH), 티로신(측쇄-CH(OH)CH2)를 합하면 90% 이상이다. 그리고 산성 아미노산(아스파르트산, 글루탐산)과 여기성 아미노산(라이신, 알라닌, 히스디틴)의 함량이 적은 것이 세리신의 아미노산 조성과의 차이이다. 이들 아미노산을 서로 다른 연결조합으로 결합하면 폴리펩타이드를 형성한다. 피브로인을 가수분해시키면 아미노산이 되고, 분자량이 30 내지 50만으로부터 3,000 내지 3,500의 알파 아미노산이 결합하여 한 가닥의 분자를 구성한다.
한편, 본 발명에서는 체내에 흡수될 수 있는 정도의 크기로 상기 실크에서 유래한 실크 피브로인을 일정한 아미노산 서열을 가지는 것으로 가수분해하여 가공한 것을 실크 피브로인 유래 펩타이드 또는 실크 피브로인 단백질로 구별하여 정의한다.
상기 실크 피브로인 유래 펩타이드를 제조하기 위해서는 세리신 제거단계는 실크 피브로인을 감싸고 있는 세리신을 제거하는 단계를 말한다. 세리신은 극성 아미노산을 포함하고 있으므로, 정제수에 열처리를 하면서 제거하는 것이 일반적이다. 특히 높은 온도에서 세리신 제거단계를 진행할수록 세리신 제거의 공정효율이 증가하지만, 97 ℃를 초과하는 온도에서는 피브로인에 대한 손실이 발생하기 때문에 온도를 무제한으로 높일 수 없다는 문제가 있다.
상기 실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방에 있어서, 상기 세리신 제거단계는 점증제 및 첨가제를 포함하는 것이고, 30 내지 70℃로 열처리하는 것일 수 있다.
상기 세리신 제거단계는 점증제 및 첨가제를 포함하면서 30 내지 70℃에서 열처리를 진행하는 경우 열처리하면서, 동일한 온도에서, 점도를 높이지 않은 경우에 비하여 세리신 제거공정이 훨씬 빨라질 수 있다. 특히 점도를 높이는 경우 피브로인의 손실이 발생하지 않는다는 장점이 있다.
상기 실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법에 있어서, 상기 세리신 제거단계에서 누에고치와 정제수의 혼합물은 점도가 1.2 내지 120 cP인 것일 수 있다.
상기 점도 범위에 의하는 경우 세리신 제거공정에 있어서 세리신이 빠르게 제거될 수 있을 뿐만 아니라 피브로인의 손실이 거의 없다는 장점을 가진다.
바람직하게 상기 실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법에 있어서, 상기 세리신 제거단계는 누에고치와 정제수의 혼합물은 점도가 1.3 내지 40 cP이고, 98 내지 100℃에서 2 내지 10분 간 열처리 하는 1차 열처리 단계 및 30 내지 40℃로 열처리하는 2차 열처리 단계를 포함하는 것일 수 있다.
상기 1차 열처리 단계는 피브로인이 용해되는 온도이지만, 누에고치와 정제수의 혼합물에 대한 점도를 1.3 내지 40 cP로 조절하여 열처리를 개시하는 경우 피브로인의 손실이 발생하지 않을 수 있다.
이후 상대적으로 낮은 2차 열처리 단계를 진행하는 경우 빠르게 세리신이 제거될 수 있다.
상기 1차 열처리 단계에 있어서 누에고치와 정제수의 혼합물에 대한 점도가 1.3 cP 미만인 경우 급격한 피브로인의 손실이 발생하는 문제가 있다. 반면 점도가 40 cP를 초과하는 경우에는 1차 열처리 단계에 불구하고 세리신 제거에 대한 공정개선 효과가 나타나지 않을 수 있다.
따라서 상기 점도 범위를 유지하면서 1차 열처리 및 2차 열처리 공정에 의하는 경우 세리신을 보다 효과적으로 제거하면서도 피브로인에 대한 손실이 발생하지 않아 세리신 제거공정의 효율을 높일 수 있다.
상기 실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법에 있어서, 상기 첨가제는 자일나아제; 소르비톨; 만니톨; 칼락토오스 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 것일 수 있다.
상기 첨가제를 포함하는 경우 피부로인에 대한 소실을 최소화 시킬 수 있을 뿐만 아니라, 이후 단계에서 기억력 및 인지기능 개선효과를 나타내는 피브로인 가수분해물, 즉 실크 피브로인 유래 펩타이드에 대한 수득률을 높일 수 있다.
바람직하게 상기 첨가제는 자일나아제를 포함하고, 상기 자일나아제 100 중량부에 대하여, 소르비톨 10 내지 100 중량부; 만니톨 1 내지 10 중량부; 칼락토오스 0.1 내지 5 중량부가 포함되는 것일 수 있다.
상기 범위에 의하는 경우 세리신 제거 단계에서 피브로인의 손실을 줄이고, 가수분해 단계에서 인지기능개선 효과를 가지는 실크 피브로인 유래 펩타이드의 수득량이 높아지고, 인지기능 및 기억력 개선효율이 개선될 수 있다.
바람직하게, 실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법에 있어서 용해 단계 및 염화칼슘 제거단계는 실크 피브로인 및 염화마그네슘을 혼합하고 50 내지 300Pa의 압력을 가하여 용해시키는 용해물을 수득하는 용해단계; 및 상기 용해물에서 염화마그네슘을 제거하는 제거단계인 것일 수 있다.
상기 염화마그네슘을 사용하면서 가압하여 용해시키는 경우 피브로인의 손실 없이 용해되고, 이후 실크 피브로인 유래 펩타이드의 가수분해 과정에서 기억력 및 인지기능개선 효과를 나타내는 유효성분의 수득률이 증가한다. 한편, 상기 가압공정을 진행하면서 염화칼슘을 사용하는 경우 피브로인의 손실이 대량으로 발생할 수 있고, 기억력 및 인지기능개선 효과를 나타내는 유효성분에 대한 수득률이 낮아지지만, 상기 염화마그네슘을 사용하는 경우 피브로인의 손실이 없고, 가수분해 공정 이후에 기억력 및 인지기능 개선 효과를 나타내는 조성물이 증가하게 된다.
또한 상기 가압단계를 진행하는 경우 상기 세리신 제거단계의 정제수는 자일나아제를 포함하고, 상기 자일나아제 100 중량부에 대하여, 소르비톨 10 내지 100 중량부; 만니톨 1 내지 10 중량부; 칼락토오스 0.1 내지 5 중량부가 포함된 첨가제가 혼합된 것이어야 한다.
상기 첨가제가 포함되지 않은 경우 가압단계에 의하여 피브로인의 손실이 높아지기 때문에 가수분해 공정 이후에 기억력 및 인지기능 개선 효과를 나타내는 유효 펩타이드의 함량이 크게 낮아지는 문제가 있다.
따라서, 바람직하게 상기 실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법은 누에고치와 정제수를 혼합하고 열처리하여 세리신(sericin)이 제거하고 실크 피브로인을 수득하는 세리신 제거단계; 실크 피브로인 및 염화마그네슘을 혼합하고 50 내지 300Pa의 압력을 가하여 용해시키는 용해물을 수득하는 용해단계; 및 상기 용해물에서 염화마그네슘을 제거하는 제거단계; 및 상기 제거단계 이후에 용해물에 산가수분해 효소, 단백질 가수분해 효소 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나를 처리하는 가수분해 단계를 포함하는 것이고, 상기 세리신 제거단계에서 있어서 상기 정제수는 자일나아제를 포함하고, 상기 자일나아제 100 중량부에 대하여, 소르비톨 10 내지 100 중량부; 만니톨 1 내지 10 중량부; 칼락토오스 0.1 내지 5 중량부가 포함된 첨가제가 혼합된 것일 수 있다.
상기 범위에 의하는 경우 가압공정에 따른 피브로인의 손실을 최소화 시키면서도 가수분해 공정 이후에 기억력 및 인지기능 개선 효과를 나타내는 유효 펩타이드의 함량을 높일 수 있게 된다.
더 바람직하게 상기 실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법에 상술한 점증제를 혼합하여 점도를 조절하는 경우 상술한 세리신 제거 효율이 증가할 뿐만 아니라 가압공정에 있어서 피브로인의 손실을 최소화 시키면서도 가압공정에 의한 기억력 및 인지기능 개선효과를 나타내는 유효 펩타이드의 함c을 증가시킬 수 있다.
상기 가수분해 단계는 제거단계 이후에 용해물에 산가수분해 효소, 단백질 가수분해 효소 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나를 처리하여 이루어지는 것일 수 있다.
바람직하게 상기 가수분해 단계는 12 내지 38 ℃에서 산가수분해 효소를 처리하여 가수분해시키는 것일 수 있다.
실크 피브로인 유래 펩타이드를 제조하기 위한 가수분해단계는 일반적으로 산가수분해를 효소를 사용하는 경우 70 내지 120 ℃를 초과하는 온도에 진행하여야 흡수가능한 분자량 범위의 가수분해물이 생성될 수 있다. 또한 단백질 가수분해효소를 사용하는 경우에도 60 내지 95 ℃에서 가수분해 단계가 진행되어야 흡수가능한 일정한 크기의 가수분해물이 생성될 수 있다.
그러나 용해단계에서 상술한 가압공정을 진행하는 경우 비교적 저온인 12 내지 38 ℃에서 산가수분해 효소를 사용하여 흡수가능한 가수분해물이 생성될 수 있다. 이를 통하여 공정효율이 높아질 수 있을 뿐만 아니라, 저온공정에 의하여 가수분해물의 손실이 최소화 될 수 있으므로 기억력 및 인지기능 개선 효과를 나타내는 유효물질의 수득률이 크게 높아지게 된다.
한편, 용해단계에서 가압공정을 진행한 경우 가수분해단계의 온도를 12 ℃ 미만으로 진행하는 경우 가수분해단계가 충분하지 않기 때문에 흡수가능한 범위의 펩타이드 생산효율이 크게 저하되는 문제가 있다. 반면 38 ℃를 초과하는 가수분해물의 크기가 너무 작아지고 펩타이드의 손실이 발생하기 때문에 공정효율이 저하되는 문제가 있다.
바람직하게 본 발명에 따른 실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법은 상기 제거단계 이후에 감압단계를 더 포함하는 것일 수 있다.
가수분해 단계 전에 염화칼슘 또는 염화마그네슘이 제거된 용해물을 감압하는 경우 가수분해단계에서 진행되는 가수분해를 촉진시키고 인지기능개선 효과가 높은 유효성분에 대한 수득률이 높아질 수 있다.
바람직하게 상기 감압단계는 -3 내지 -30Pa로 감압하는 것일 수 있다. 상기 범위에 의하는 경우 제거단계를 거친 피브로인의 물성이 개선되어 가수분해단계 이후에 기억력 및 인지기능 개선효과를 나타내는 유효성분의 수득에 보다 유리할 수 있다. 상기 감압단계는 -3 Pa 미만으로 진행되는 경우 감압단계에 따른 상승효과가 나타나지 않으며, -30 Pa을 초과하여 감압하는 경우 제거단계를 거친 피브로인의 구조가 불리하게 변형되어 가수분해단계 이후에 기억력 및 인지기능 개선효과를 나타내는 유효성분의 수득에 오히려 불리하게 되는 문제가 있다.
본 발명의 다른 일 실시예에 따른 기억력 또는 인지기능 개선용 조성물은 상기 실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법에 따라 제조된 실크 펩타이드를 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 다른 또 일 실시예에 따른 기억력 또는 인지기능 개선용 식품 조성물은 상기 실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법에 따라 제조된 실크 피브로인 유래 펩타이드를 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 다른 또 일 실시예에 따른 기억력 또는 인지기능 관련 질환의 예방 및 치료용 약학 조성물은 상기 실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법에 따라 제조된 실크 피브로인 유래 펩타이드를 포함하는 것일 수 있다.
본 발명 전반에 걸쳐 상기 기억력 또는 인지기능 관련 질환의 예방 및 치료용 약학 조성물에 있어서 상기 기억력 또는 인지기능 관련 질환은 정신분열증, 파킨슨병, 헌팅톤병, 피크병, 크로이츠펠트-야콥병, 알츠하이머, 우울증, 노화, 두부 외상, 뇌졸중, CNS 저산소증, 뇌 허혈증, 뇌염, 건망증, 외상성 뇌손상, 저혈당증, 베르니케 코르사코프 신드롬, 약물중독, 뇌전증, 간질, 해마경화증, 두통, 치매, 전측두엽 변성, 종양, 정상뇌압수두증, HIV, 뇌혈관성질환, 뇌신경질환, 심혈관계 질환, 기억상실, 방사능 노출, 대사성 질환, 갑상선 기능 저하증, 및 경도인지장애를 포함하는 것으로 정의한다.
본 발명은 기억력 개선, 인지기능 및 두뇌기능 개선효과를 나타내는 실크 피브로인 유래 펩타이드에 있어서, 상기 개선효과가 높아지도록 하는 실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법을 제공한다.
본 발명은 공정조건을 개선하여 실크 피브로인 유래 펩타이드의 수득 효율 및 신경세포 보호 활성 향상된 실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법을 제공한다.
본 발명은 공정효율이 개선된 실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법을 제공한다.
본 발명은 상기 실크 피브로인 유래 펩타이드 제조방법을 이용한 인지기능 개선용 조성물을 제공한다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 흐름도에 관한 것이다.
도 2은 본 발명의 일 실시예에 따른 흐름도에 관한 것이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 실크 펩타이드 건조물의 수득량을 비교한 그래프이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 실크 펩타이드의 허혈에 의한 뇌경색 부위에 대한 효과실험 결과를 나타내는 그래프에 관한 것이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 실크 펩타이드 건조물을 사용한 인지 지억평가실험 결과에 관한 것이다.
도 2은 본 발명의 일 실시예에 따른 흐름도에 관한 것이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 실크 펩타이드 건조물의 수득량을 비교한 그래프이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 실크 펩타이드의 허혈에 의한 뇌경색 부위에 대한 효과실험 결과를 나타내는 그래프에 관한 것이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 실크 펩타이드 건조물을 사용한 인지 지억평가실험 결과에 관한 것이다.
이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예에 대하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다. 한편 본 발명에서 표기하는 S1은 세리신 제거단계, S2는 용해단계, S3는 제거단계, S3.5는 감압단계, S4는 가수분해단계를 말한다.
[제조예 1: 실크 펩타이드의 제조]
각 공정에 따른 효과상 차이를 확인하기 위하여 하기의 표 1과 같은 단계에 따라 실크 펩타이드를 제조하였다.
T1 | T2 | T3 | T4 | T5 | T6 | |
S1 | S1A | S1B | S1C | S1D | S1C | S1D |
S2 | S2A | S2A | S2A | S2A | S2B | S2C |
S3 | S3A | S3A | S3A | S3A | S3A | S3B |
S4 | S4A | S4A | S4A | S4A | S4B | S4B |
** S1A: 일반 정제수를 사용하고 90℃에서 열처리한 세리신 제거단계를 진행** S1B: 점도를 1.8 cP로 유지하고, 30 내지 70℃로 열처리 한 세리신 제거단계를 진행
** S1C: 점도를 1.8 cP로 유지하고, 자일나아제를 첨가하여 30 내지 70℃로 열처리 한 세리신 제거단계를 진행
** S1D: S1C와 동일하게 구성하고, 자일나아제 100 중량부에 대하여 소르비톨 15 중량부, 만니톨 5 중량부, 칼락토오스 2 중량부를 혼합하여 진행
** S2A: 염화칼슘을 사용하여 용해단계 진행
** S2B: 염화칼슘을 사용하고, 100 Pa에서 가압 용해 진행
** S2C: 염화마그네슘을 사용하고 자일나아제, 소르비톨, 만니톨, 칼락토오스 혼합물을 첨가하고 100 Pa에서 가압 용해 진행
** S3A: 염화칼슘의 제거공정을 진행
** S3B: 염화마그네슘의 제거공정을 진행
** S4A: HCl을 가수분해효소로 사용하고 100 ℃에서 가수분해 진행
** S4B: HCl을 가수분해효소로 사용하고 35 ℃에서 가수분해 진행
[실험예 1: 수득량 평가]
상기 [표 1]에 따른 제조방법에 따른 실크펩타이드 최종 수득량을 평가하여 하기의 [도 3]에 그래프로 도시하였다. 각 수득량은 객관적인 평가가 될 수 있도록 최초원료대비 수득량을 평가한 뒤 T1의 최종 펩타이드 수득량과 비교하여 평가하였다. 또한, 각 수득량은 스프레이 드라이어를 이용하여 건조된 상태의 중량을 기준으로 평가하였다.
하기의 [도 3]을 참조하면, 세리신 제거단에서 T3 및 T4의 조건으로 점도를 조절하면서 첨가제를 사용하는 경우 세리신 제거효율을 높이면서도 피브로인의 용해를 막아 최종적인 수득물이 증가되게 할 수 있다는 점을 알 수 있다.
한편, T5 및 T6를 비교하면, 가압공정에 의하는 경우 염화칼슘을 사용하는 경우 가압공정에 의하여 피브로인의 손실이 발생하지만 염화마그네슘과 자일나아제를 첨가하여 가압공정을 진행하는 경우 피브로인의 손실이 발생하지 않는다는 점을 알 수 있다.
[제조예 2: 실크 펩타이드의 제조]
각 제조공정에 따른 생산물의 효능을 확인하기 위하여 실크펩타이드의 수득량이 우수한 T1, T4, T6와 함께 T6에 대하여 감압단계를 진행한 T7을 제조하였다. 또한 각 단계별 공정에 따른 효능의 차이가 비교될 수 있도록 수득률이 좋지 않았던 T5를 비교하여 함께 평가하였다. 따라서 하기의 [표 2]와 같은 공정으로 제조된 실크 펩타이드를 제조하였다.
T1 | T4 | T5 | T6 | T7 | |
S1 | S1A | S1D | S1C | S1D | S1D |
S2 | S2A | S2A | S2B | S2C | S2C |
S3 | S3A | S3A | S3A | S3B | S3B |
S3.5 | - | - | - | - | S3.5A |
S4 | S4A | S4A | S4B | S4A | S4A |
** S3.5A: - 10 Pa 내지 -20pa 범위에서 감압 단계 진행
[실험예 2: 기억력 및 인지기능 개선 효과에 관한 실험]
상기 T1, T4, T5, T6 및 T7에서 제조된 실크 펩타이드에 대한 기억력 및 인지기능 개선효과 정도를 확인하기 위하여 아래와 같은 실험을 진행하였다.
실험예 2-1: 국부적 허혈 유도 동물 모델
상기 T1, T4, T5, T6 및 T7에서 제조된 실크 펩타이드에 대한 기억력 및 인지기능 개선효과 정도를 확인하기 위하여 국부적 허혈 유도 동물 모델을 사용하여 허혈로 인한 뇌경색 면적에 미치는 영향을 평가하는 실험을 진행하였다.
A. 약물 처리 및 국부적 허혈 유도 동물 모델의 제작
체중 200 내지 250 g인 웅성 백서 (Sprague-Dawley rat)를 이용하여 국부적 허혈 유도 동물 모델을 제작하였다. 약물은 실험번호 상기 T1, T4, T5, T6 및 T7 1g/㎏을 허혈 유도 1시간 전에 1회 또는 허혈 유도 1시간 후에 1회 구강 투여하였고(구강 투여군, n=6), 허혈 대조군(n=6)은 약물처리군과 같은 용량의 BG101을 투여하였다. 실험동물에 케타민(ketamine) 30 내지 40 ㎎/㎏을 근육주사 하여 마취시킨 다음에 앙와위에서 목부분에 피부절개를 가하고 경동맥(common carotid artery), 외경동맥(external carotid artery) 및 내경동맥 (internal carotid artery)을 찾아 주위조직과 분리시켰다. 우선 외경동맥의 분지인 상부 상갑선 동맥과 후두와 동맥을 전기 소작시키고, 내경동맥의 분지인 익돌구개(pterygopalatine) 동맥을 전기소작하고 외경동맥을 잘라 4-0 나일론실(ETHICON, INC)을 외경동맥을 통하여 내경동맥으로 삽입한 다음에 경동맥 분지에서 나일론 실이 16 내지 18 ㎜가 들어가게 하여 위치시켜 중대뇌 동맥(Middle Cerebral Artery) 기시부를 폐색하였다.
B. 허혈에 의한 뇌경색 부위 감소 효과 실험
허혈 유도 6시간 후 동물을 단두하여 뇌를 적출하였다. 적출된 뇌는 전방극 (anterior pole)으로부터 2 ㎜ 간격으로 절편하고, 2% 트리페닐 테트라졸리움 클로라이드 (triphenyl tetrazolium chloride: TTC, Sigma) 용액으로 37℃에서 30분간 반응시킨 후 4% 파라포름알데히드(Sigma) 용액에 넣어 고정시켰다. 염색된 조직절편을 촬영한 후 사진을 MCID image processing system (Imaging Research Inc.)을 이용하여 적색으로 염색된 정상부위와 달리 뇌경색이 발생하여 백색으로 변한 부위의 면적을 측정하였으며, 전체 뇌 절편의 면적 대비 뇌경색 면적 비율을 구한 후 평균치를 계산하였다. 또한 각각의 뇌 절편에서 전체 부피에서 뇌경색 부위가 차지하는 부피의 비율을 측정하였다. 그 결과를 [도 4]에 나타내었다.
본 발명의 실크 펩타이드는 T5를 제외하고 허혈에 의한 뇌경색 부위를 유의성 있는 수준으로 감소하였고, 각각의 뇌 절편을 비교한 결과에서 뇌경색 감소 효과가 특정 부위에 치중되어 있지 않고 전반적으로 나타남을 관찰할 수 있었다.
하기의 [도 4]의 결과와 같이 뇌 절편의 부피 대비 뇌경색 부피 비율을 측정해본 결과 T6 및 T7에 의하는 경우 국부적 허혈에 의한 뇌경색 부위 감소에 상당히 유의한 효과를 보였다. 즉 T6 및 T7 공정에 의하는 경우 T1에 비하여 인지기능 개선에 유익한 유효성분 수득률이 높아진다는 것을 알 수 있다. 또한 T7의 감압공정에 의하는 경우 T6에 비하여 기억력 및 인지기능 개선 효과를 내는 유효성분의 수득률이 상승한다는 점을 알 수 있다.
특히 T6 및 T7의 경우 뇌경색 부위를 빠르게 감소시키는 것을 확인하였는데, 이를 통하여 T6 및 T7는 초기 개선효과가 매우 우수하다는 점을 알 수 있었다. 즉, 섭취한 후 즉각적인 효과를 내는데 있어서 T6 및 T7의 제조방법에 의하는 경우 기억력 및 인지기능 개선효과가 보다 향상된 실크 피브로인 유래 펩타이드를 제조할 수 있다.
실험예 2-2 인지기능 개선에 대한 동물 모델 실험
A. 실험 동물의 준비
실험 동물은 웅성 백서 (Sprague Dawley, 140 내지 180 g, 대한실험동물센터)로서, 이들은 일정한 환경 (실내온도 25±1℃, 상대습도 60±10%)에서 일주일 동안 하나의 사육 상자 당 4 마리씩 넣어 물은 제한 없이 제공하였으며, 이때, 몸무게의 80%를 유지하도록 제한 급식을 실시하였다. 본 실험에서는 총 50 마리를 사용하였다. 훈련 3일 전부터 5분씩 미로에 적응시켜 검사를 진행하였다.
B. 교대 지연 검사(delayed alternation test)
총 세 개의 통로(왼쪽, 오른쪽, 중앙부)가 있으며, 각 통로 입구는 실험자가 동물의 출입을 통제할 수 있도록 칸막이를 설치한 T자 모양의 미로를 준비하였다.
첫 시행에서는 출발 상자에 1분간 적응시켰다. 첫 시행은 '강제 선택 시행'으로, 칸막이로 한쪽 통로를 막아놓고 반대편 통로에 동물이 들어가면 칸막이로 후방을 막았다. 동물의 사지가 통로 입구를 통과하면 동물이 들어간 것으로 간주하였다. 60초간 동물이 해당 통로에서 먹이를 먹도록 하였다.
다음 시행부터는 '자유 선택 시행'으로 동물이 출발상자에서 출발하여 자유롭게 통로의 방향(왼쪽 혹은 오른쪽)을 선택하도록 하였다. 동물은 바로 이전의 시행에서 들어갔던 통로와 반대편 통로로 들어갔을 경우에만 먹이 보상을 하였다.
시행 간격은 5초 및 20초로 지연 시간(delay)를 두고 구성되며, 매 시행의 제한시간(cut-off time)은 60초로 하였다. 동물이 강화가 주어지는 통로에 정확하게 들어간 횟수와 통로까지 들어가는데 걸린 시간을 측정하였다. 하루에 10 시행식 9일 동안 동일한 절차를 수행하여 평가하였다.
C. 투여 방법
본 발명의 제조방법에 따라 제조된 실크 펩타이드 T1, T4 내지 T7 을 100 ㎎/㎖의 용액으로 제조하여 구강 투여하였다. 모든 시료들은 증류수에 용해하여 구강 투여하였다.
D. 인지 기억 평가 결과
실크펩타이드 T1, T4, T5, T6, T7을 투여한 군에 대해 T-maze 실험을 진행한 결과를 하기의 [도 5]에 나타내었다. 도 3은 시행 간격을 5초로 구성하여 실험을 진행한 것으로, 9일 간의 훈련 기간 동안 성능이 점차적으로 향상되었다.
하기의 [도 5]를 참조하면, T6 및 T7의 제조공정에 의하는 경우 인지기능에 대한 향상 효과가 뚜렷하게 나타난다는 점을 확인할 수 있다. 특히 T7의 경우에는 초반 개선효과가 우수하다는 점을 알 수 있었다.
반면, T5의 경우 T1에 비하여 그 효과가 오히려 저하된다는 점을 알 수 있다. 이를 통하여 공정조건의 조절을 통하여 기억력 및 인지기능 개선의 유효물질의 구성 및 수득량이 달라진다는 점을 확인하였다. 따라서 본 발명의 구성에 의하는 제조방법으로 실크 펩타이드를 제조하는 경우 기억력 및 인지기능이 보다 개선된 실크 펩타이드를 제조할 수 있다. 특히 T6 및 T7의 조성에 의하는 경우 기억력 및 인지기능 효과가 더욱 향상된 실크 펩타이드를 제조할 수 있다.
이상에서 본 발명의 바람직한 실시예에 대하여 상세하게 설명하였지만 본 발명의 권리범위는 이에 한정되는 것은 아니고 다음의 청구범위에서 정의하고 있는 본 발명의 기본 개념을 이용한 당업자의 여러 변형 및 개량 형태 또한 본 발명의 권리범위에 속하는 것이다.
Claims (6)
- 누에고치와 정제수를 혼합하고 열처리하여 세리신(sericin)이 제거하고 실크 피브로인을 수득하는 세리신 제거단계;
실크 피브로인 및 염화마그네슘을 혼합하고 50 내지 300Pa의 압력을 가하여 용해시키는 용해물을 수득하는 용해단계;
상기 용해물에서 염화마그네슘을 제거하는 제거단계; 및
상기 제거단계 이후에 용해물에 염산, 단백질 가수분해 효소 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나를 처리하는 가수분해 단계를 포함하는 것이고
상기 상기 세리신 제거단계는 점증제 및 첨가제를 포함하는 것이고, 누에고치와 정제수의 혼합물은 점도가 1.3 내지 40 cP이고,
상기 첨가제는 자일나아제를 포함하고, 상기 자일나아제 100 중량부에 대하여, 소르비톨 10 내지 100 중량부; 만니톨 1 내지 10 중량부; 칼락토오스 0.1 내지 5 중량부가 포함되는 것인
실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법. - 누에고치와 정제수를 혼합하고 열처리하여 세리신(sericin)이 제거하고 실크 피브로인을 수득하는 세리신 제거단계;
실크 피브로인 및 염화칼슘을 혼합하고 용해시키는 용해물을 수득하는 용해단계;
상기 용해물에서 염화칼슘을 제거하는 제거단계; 및
상기 제거단계 이후에 용해물에 염산, 단백질 가수분해 효소 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나를 처리하는 가수분해 단계를 포함하는 것이고
상기 상기 세리신 제거단계는 점증제 및 첨가제를 포함하는 것이고, 누에고치와 정제수의 혼합물은 점도가 1.3 내지 40 cP이고,
상기 첨가제는 자일나아제를 포함하고, 상기 자일나아제 100 중량부에 대하여, 소르비톨 10 내지 100 중량부; 만니톨 1 내지 10 중량부; 칼락토오스 0.1 내지 5 중량부가 포함되는 것인
실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법. - 삭제
- 삭제
- 삭제
- 제 1항 또는 제2항에 따른 실크 피브로인 유래 펩타이드의 제조방법에 따라 제조된 실크 피브로인 유래 펩타이드를 포함하는
기억력 및 인지기능 개선용 식품 조성물.
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Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR101121040B1 (ko) * | 2011-08-25 | 2012-03-26 | 경북대학교 산학협력단 | 고분자량 실크 피브로인을 함유하는 혈당 및 콜레스테롤 강하용 조성물 및 그 제조방법 |
JP2014180216A (ja) | 2013-03-18 | 2014-09-29 | Kyoto Prefecture | 絹フィブロイン由来の食品機能材およびその製造方法 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR100494358B1 (ko) | 2004-07-30 | 2005-06-10 | 주식회사 바이오그랜드 | 두뇌 또는 인지 기능 증진용 조성물 |
KR100864380B1 (ko) | 2006-10-17 | 2008-10-21 | 주식회사 브레인가드 | 두뇌기능 향상과 뇌신경계 질환 예방 또는 치료용 펩타이드 |
KR101966892B1 (ko) * | 2017-03-06 | 2019-04-09 | 농업회사법인 에스에스바이오팜 주식회사 | 효소분해에 의한 실크피브로인의 분해방법. |
-
2019
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Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR101121040B1 (ko) * | 2011-08-25 | 2012-03-26 | 경북대학교 산학협력단 | 고분자량 실크 피브로인을 함유하는 혈당 및 콜레스테롤 강하용 조성물 및 그 제조방법 |
JP2014180216A (ja) | 2013-03-18 | 2014-09-29 | Kyoto Prefecture | 絹フィブロイン由来の食品機能材およびその製造方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
D. Keerl, University of Bayreuth 학위논문 (2014. 2.)* |
Also Published As
Publication number | Publication date |
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