WO2020256464A1 - 항염 활성을 갖는 아피오스 아메리카나 괴경 추출물의 분획물의 알코올성 위염 예방 또는 치료제로서의 용도 및 이의 제조방법 - Google Patents

항염 활성을 갖는 아피오스 아메리카나 괴경 추출물의 분획물의 알코올성 위염 예방 또는 치료제로서의 용도 및 이의 제조방법 Download PDF

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extract
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서영혜
최고야
문병철
김중선
박건혁
임혜선
이아영
류승목
김효선
남현화
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Korea Institute of Oriental Medicine KIOM
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Definitions

  • the present invention relates to the use of a fraction of Apios americana tuber extract having anti-inflammatory activity as a prophylactic or therapeutic agent for alcoholic gastritis, and a method for preparing the same, and more particularly, to an anti-inflammatory comprising Apios americana tuber fraction extracted and fractionated with a specific solvent A composition, a composition for preventing, ameliorating or treating an inflammatory disease or alcoholic gastritis comprising the anti-inflammatory composition, a method for preventing or treating an inflammatory disease or alcoholic gastritis using the anti-inflammatory composition, an anti-inflammatory agent, preventing or treating an inflammatory disease or alcoholic gastritis
  • the use of the ethanol fraction of the ethanol extract of Apios americana tuber in the manufacture of a medicament for the preparation and a method of preparing the fraction having anti-inflammatory activity are provided.
  • Nitric oxide is an important intracellular and intercellular signaling molecule involved in regulating various physiological mechanisms in the immune system. Nitric oxide reacts with superoxide to produce peroxynitrite ions, and the generated ions induce excessive inflammatory activity, sepsis, ulcerative colitis, arthritis, and lupus. (systemic lupus erythematosus, SLE) and Sjogren's syndrome (SS) are known to cause diseases. Reactive oxygen species (ROS) and nitric oxide (NO) play a very important physiological role as intermediate mediators in the signaling process.
  • ROS reactive oxygen species
  • NO nitric oxide
  • inflammatory regulators in cells are inflammatory cells such as macrophages in vivo by inducible nitric oxide synthase (iNOS) or cyclo-oxygenase-2 (COX-2).
  • Inflammatory mediators such as nitric oxide (NO), prostaglandin (PG), interleukin-1 beta (IL-1 ⁇ ), and tumor necrosis factor-alpha; TNF- ⁇ ) and cytokines are produced in large quantities.
  • Non-steroidal anti-inflammatory drugs which are widely used as treatments for most inflammatory diseases, are prostaglandin from arachidonic acid called cyclooxygenase (COX). By inhibiting the enzyme activity involved in the biosynthesis of, it exhibits anti-inflammatory action. In addition to the main therapeutic action, it causes serious side effects such as gastrointestinal disorders, liver disorders, and renal disorders, so there are restrictions in long-term use.
  • COX cyclooxygenase
  • Alcoholic gastritis one of the inflammatory diseases, refers to a condition in which the gastric mucosa is damaged by chronic irritation caused by alcohol. Alcoholic gastritis is difficult to digest and sometimes complains of a sore sensation, but most do not have any special symptoms, and then serious symptoms are found through endoscopy and ultrasound. Chronically drinking alcohol causes related diseases by damaging not only gastritis, but also the pancreas or liver, and also increases the risk of esophageal cancer, stomach cancer, and colon cancer.
  • Alcohol stimulates the cells of the stomach wall to increase acid secretion, and excessive alcohol intake causes swelling of the gastric mucosa, causing bleeding and inducing the production of inflammatory cells. .
  • necrosis or apoptosis due to oxidative stress, the gastric mucosa is damaged, and gastric bleeding occurs.
  • Korean Patent Application Publication No. 10-2009-0046425 composition for preventing or treating gastritis or gastric ulcer containing Cheonma extract
  • Korean Patent Registration No. 10-1091025 non-steroidal anti-inflammatory agent containing Bokbunja extract
  • Korean Patent Laid-Open Publication No. 10-2012-0051904 Gastritis and gastric ulcer treatment composition containing poison ivy extract
  • Korean Patent No. 10-1204981 Gao-seon sap And a composition for preventing and treating gastric ulcers
  • Apios ( Apios americana Medikus) is a vine perennial herb belonging to the legume family, and its origin is in temperate and subtropical regions in eastern North America, and is also called'Indian potato' because it has been eaten by North American Indians since ancient times.
  • Apios was first introduced to Japan in Asia and used as a health food, but recently, it has been introduced to Korea and is actively cultivated as a new farm income crop.
  • Apios forms flowers and leaves in the upper part and tubers in the basement part, of which tubers are mainly used for food.
  • the main components of apios are starch, protein, and moisture, and in addition, saponin, calcium, iron, dietary fiber, and the like are contained in large amounts, and are widely used as natural calcium agents.
  • Korean Laid-Open Patent No. 10-2018-0095193 discloses the anticancer activity of Apios Americana extract
  • Korean Laid-Open Patent No. 10-2015-0132616 discloses Apios extract or fermented extract. It has been disclosed that RAW 264.7 cells exhibit an immunity enhancing effect by increasing the expression of a gene or protein of NO, an immune enhancing factor, in RAW 264.7 cells.
  • the present inventors confirmed that the fraction obtained by fractionating Apios americana tuber extract with a specific solvent exhibits an activity of inhibiting NO production in LSP-induced RAW 264.7 cells, and completed the present invention.
  • An object of the present invention is to provide the use of the ethanol fraction of the ethanol extract of Apios Americana tuber in the preparation of an anti-inflammatory composition and/or an anti-inflammatory agent comprising a fraction of Apios Americana tuber extract.
  • Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating inflammatory diseases and/or a health functional food composition for preventing or improving inflammatory diseases, including a fraction of Apios Americana tuber extract.
  • Another object of the present invention is a method for preventing or treating inflammatory diseases using a fraction of Apios Americana tuber extract and/or ethanol of Apios Americana tuber ethanol extract in the manufacture of a medicament for the prevention or treatment of inflammatory diseases It is to provide the use of fractions.
  • Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of alcoholic gastritis, and/or a health functional food composition for the prevention or improvement of alcoholic gastritis, comprising a fraction of Apios Americana tuber extract.
  • Another object of the present invention is a method for preventing or treating alcoholic gastritis using a fraction of Apios Americana tuber extract and/or ethanol of Apios Americana tuber ethanol extract in the manufacture of a medicament for the prevention or treatment of alcoholic gastritis. It is to provide the use of fractions.
  • Another object of the present invention is to provide a method for preparing a fraction of Apios americana tuber extract having anti-inflammatory activity.
  • the present invention provides an anti-inflammatory composition comprising an ethanol fraction of an ethanol extract of Apios Americana tubers.
  • the ethanol extract may be obtained by using 50 (v/v)% to 90 (v/v)% ethanol as an extraction solvent.
  • the ethanol fraction is 50(v/v)% to 90(v/v)% ethanol extract to 5(v/v)% to 35(v/v)% ethanol. It may be obtained by fractionation.
  • the anti-inflammatory composition is 2′-hydroxy-5-methoxygenistein-7,4′- O- ⁇ -D-diglucopyranoside, 2′-hydroxy genistein -7,4'- O - ⁇ -D- gluconic di nose side Llano, 2'-hydroxy-genistein -7- O - ⁇ -D- thio Zen rainy side, and 7,2 ', 4'-trihydroxy It may contain one or more compounds selected from the group consisting of -5-methoxyisoflavone-4'- O- ⁇ -D-glucopyranoside.
  • the present invention also provides the use of the ethanol fraction of the ethanol extract of Apios Americana tubers in the preparation of anti-inflammatory agents.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating inflammatory diseases and/or a health functional food composition for preventing or improving inflammatory diseases, including the anti-inflammatory composition described above.
  • the present invention also provides a method for preventing or treating an inflammatory disease, comprising administering a composition comprising an ethanol fraction of ethanol extract of Apios Americana tubers to an individual in need thereof.
  • the present invention also provides the use of the ethanol fraction of Apios Americana tuber ethanol extract in the manufacture of a medicament for preventing or treating inflammatory diseases.
  • the inflammatory disease may be a nitrogen monoxide (NO) mediated disease.
  • NO nitrogen monoxide
  • the nitrogen monoxide (NO) mediated inflammatory disease is edema, dermatitis, allergy, atopy, asthma, conjunctivitis, periodontitis, rhinitis, otitis media, sore throat, tonsillitis, pneumonia, gastric ulcer, gastritis, Crohn Disease, colitis, hemorrhoids, gout, ankylosing spondylitis, rheumatoid fever, lupus, fibromyalgia, psoriatic arthritis, osteoarthritis, rheumatoid arthritis, peri-shoulderitis, tendinitis, tendonitis, myositis, hepatitis, cystitis, nephritis, sjogren's syndrom And it may be selected from the group consisting of multiple sclerosis.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating alcoholic gastritis, and/or a health functional food composition for preventing or improving alcoholic gastritis, including the anti-inflammatory composition described above.
  • the present invention also provides a method for preventing or treating alcoholic gastritis, comprising administering a composition comprising an ethanol fraction of an ethanol extract of Apios Americana tubers to an individual in need thereof.
  • the present invention also provides the use of the ethanol fraction of Apios Americana tuber ethanol extract in the manufacture of a medicament for preventing or treating alcoholic gastritis.
  • the alcoholic gastritis may be selected from the group consisting of alcohol-induced acute gastric mucosal damage, gastric ulcer, acute gastritis, and chronic gastritis.
  • the present invention also provides a method for preparing a fraction of Apios americana tuber extract comprising the following steps:
  • the ethanol of step d) may be ethanol having a concentration of 5 (v/v)% to 35 (v/v)%.
  • the systemic fractionation in step d) may be performed using flash chromatography.
  • the fraction prepared by the above preparation method is 2′-hydroxy-5-methoxygenistein-7,4′- O- ⁇ -D-diglucopyranoside, 2 '-Hydroxygenistein-7,4'- O - ⁇ -D-diglucopyranoside, 2'-hydroxygenistein-7- O - ⁇ -D-genthiobioside and 7,2',4' -Trihydroxy-5-methoxyisoflavone-4′- O - ⁇ -D-glucopyranoside may contain one or more compounds selected from the group consisting of.
  • the anti-inflammatory composition comprising the ethanol fraction of the ethanol extract of Apios Americana tuber of the present invention exhibits excellent nitric oxide (NO) production inhibitory activity, it is for preventing, improving or treating various inflammatory diseases including alcoholic gastritis. It can be used in medicines, quasi-drugs, health functional foods, cosmetics or feed.
  • the present invention is the most environmentally friendly and economical in food processing because ethanol is used as a solvent in the manufacture of fractions, and it is safe for the human body because the resources of food materials are extracted and fractionated.
  • 1 is a schematic diagram showing a method for preparing Apios americana tuber extract and each fraction thereof of the present invention.
  • FIG. 2 is a graph showing the NO inhibitory activity of the ethanol extract of Apios americana tubers.
  • Figure 3 is a graph showing the NO production inhibitory activity of each fraction of the ethanol extract of Apios americana tubers.
  • Figures 7a to 7e confirm the effect of improving alcoholic gastritis according to the administration of the ethanol fraction of Apios americana tubers
  • Figure 7a is a photograph observed with the naked eye the degree of inflammation of the stomach tissue
  • Figures 7b and 7c are histopathological evaluation For hematoxylin & eosin (H&E) staining and PAS staining are shown
  • Figures 7d and 7e show the results of evaluating the ulcer index.
  • the present inventors have confirmed that unlike the previously known activity of promoting NO production of Apios americana, the fraction of Apios americana tuber extract exhibits an activity of inhibiting NO production in LPS-induced RAW 264.7 cells.
  • the present invention provides an anti-inflammatory composition comprising the ethanol fraction of the ethanol extract of Apios Americana tubers.
  • Apios americana Medikus used in the present invention is a vine perennial herb belonging to the legume family and is also called an Indian potato.
  • the site of Apios Americana used in the composition of the present invention is a tuber in the basement, api Os americana tubers can be purchased commercially, or can be harvested or grown in nature.
  • extract refers to an extract obtained by extraction treatment of the Apios americana tubers, more preferably dried Apios americana tubers, a dilution or concentrate of the extract, a dried product obtained by drying the extract, It includes the extract of all formulations that can be formed using the extract itself and the extract, such as the preparation or purified product of the extract, or a mixture thereof.
  • the extract of the present invention may be extracted from natural, hybrid or variant plants of Apios americana, and may also be extracted from plant tissue culture.
  • the ethanol extract may be obtained by using 50 (v/v)% to 90 (v/v)% ethanol as an extraction solvent, more preferably from 60 (v/v)% to It may be obtained by using 80 (v/v)% ethanol, most preferably 65 (v/v)% to 75 (v/v)% ethanol as an extraction solvent.
  • composition of the present invention can be prepared as a solvent extract obtained by extracting the dried Apios americana tubers at least once using the solvent, and then freeze-drying or spray-drying the solvent extract under reduced pressure. I can.
  • fraction means a result obtained by performing fractionation in order to separate a specific component or a specific component group from a mixture containing several different constituents.
  • the fractionation method for obtaining the fraction in the present invention is not particularly limited, and may be performed according to a method commonly used in the art.
  • Non-limiting examples of the fractionation method include a method of obtaining a fraction from the extract by treating an extract obtained by extracting dried Apios americana tubers with a predetermined solvent.
  • the type of solvent used to obtain the fraction is ethanol.
  • the content of the active ingredient exhibiting anti-inflammatory activity decreases rapidly, and the intended physiological activity may not appear.
  • the ethanol fraction is obtained by fractionating 5 (v/v)% to 35 (v/v)% ethanol extract into 10 (v/v)% to 30 (v/v)% ethanol It may be, and most preferably 15 (v/v)% to 25 (v/v)% ethanol extract may be obtained by fractionation.
  • an Apios americana extract prepared using 70 (v/v)% ethanol as an extraction solvent is used in water, 20 (v/v)% ethanol, and 100 (v/v). )% ethanol was fractionated and purified for each compartment, and each fraction was treated with LPS-induced macrophage cell line RAW264.7 to confirm the NO production inhibitory effect.
  • the composition of the present invention contains a fraction obtained by systematically fractionating the Apios americana extract with water and ethanol as an active ingredient.
  • it may be obtained by systematic fractionation of the Apios americana extract with water and 5 (v/v)% to 35 (v/v)% ethanol, and more preferably the Apios americana extract with water and 10 (v /v)% to 30 (v/v)% ethanol, most preferably water and 15 (v/v)% to 25 (v/v)% ethanol may be sequentially obtained by systematic fractionation.
  • the present invention also provides the use of the ethanol fraction of the ethanol extract of Apios Americana tubers in the preparation of anti-inflammatory agents.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of inflammatory diseases and/or a health functional food composition for the prevention or improvement of inflammatory diseases, including the ethanol fraction of Apios Americana tuber ethanol extract.
  • the present invention also provides a method for preventing or treating inflammatory diseases, comprising administering a composition comprising an ethanol fraction of ethanol extract of Apios Americana tubers to an individual in need thereof.
  • the present invention also provides the use of the ethanol fraction of Apios Americana tuber ethanol extract in the manufacture of a medicament for preventing or treating inflammatory diseases.
  • the inflammatory disease may be a nitrogen monoxide (NO) mediated inflammatory disease
  • the nitrogen monoxide (NO) mediated inflammatory disease may be edema, dermatitis, allergy, atopy, asthma, conjunctivitis, periodontitis, rhinitis, otitis media, sore throat, tonsillitis, pneumonia, gastric ulcer.
  • Gastritis, Crohn's disease, colitis, hemorrhoids, gout, ankylosing spondylitis, rheumatoid fever, lupus, fibromyalgia, psoriatic arthritis, osteoarthritis, rheumatoid arthritis, periarthritis, tendonitis, tendonitis, myositis, hepatitis, cystitis, nephritis, Sjogren's syndrome (sjogren's syndrom) and multiple sclerosis may be selected from the group consisting of.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of alcoholic gastritis and/or a health functional food composition for the prevention or improvement of alcoholic gastritis, including the ethanol fraction of the ethanol extract of Apios Americana tubers.
  • the present invention also provides a method for preventing or treating alcoholic gastritis, comprising administering a composition comprising an ethanol fraction of an ethanol extract of Apios Americana tubers to an individual in need thereof.
  • the present invention also provides the use of the ethanol fraction of Apios Americana tuber ethanol extract in the manufacture of a medicament for preventing or treating alcoholic gastritis.
  • the alcoholic gastritis may be selected from the group consisting of alcohol-induced acute gastric mucosal injury, gastric ulcer, acute gastritis, and chronic gastritis.
  • the ethanol fraction of Apios americana tubers remarkably restores gastric tissue damaged by gastritis induced by HCl/EtOH, and has an excellent effect of protecting the mucous layer of the gastric mucosa.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may additionally include a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be prepared in a pharmaceutical formulation using methods well known in the art to provide rapid, sustained or delayed release of the active ingredient after administration to a mammal.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is formulated and used in the form of oral dosage forms such as powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols, etc., external preparations, suppositories, and sterile injectable solutions according to conventional methods.
  • a suitable carrier, excipient, and diluent commonly used in the preparation of the composition may be further included.
  • carriers that may be included in the pharmaceutical composition of the present invention include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, gum acacia, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, Cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, mineral oil, and the like, but are not limited thereto.
  • it is prepared using diluents or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, and surfactants that are usually used.
  • Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, and these solid preparations contain at least one excipient, such as starch, calcium carbonate, and sucrose. ) Or lactose (lactose), gelatin, etc. are mixed to prepare. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc are also used.
  • Liquid preparations for oral use include suspensions, liquid solutions, emulsions, syrups, etc., and various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, preservatives, etc., in addition to water and liquid paraffin, which are commonly used simple diluents. have.
  • Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized formulations, and suppositories.
  • non-aqueous solvent and suspending agent propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, and injectable ester such as ethyl oleate may be used.
  • injectable ester such as ethyl oleate
  • a base for suppositories witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin, glycerogelatin, and the like may be used.
  • administering means introducing the pharmaceutical composition of the present invention to a patient by any suitable method.
  • the method of administration of the pharmaceutical composition according to the present invention is not particularly limited, and may be followed by a method commonly used in the art.
  • the mode of administration is not limited as long as it can reach the target tissue, but may be administered intraperitoneally, intravenously, intramuscularly, subcutaneously, intradermally, orally, topically, or intranasally.
  • the pharmaceutical composition according to the present invention may be prepared in various formulations according to the intended administration method.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be administered in a pharmaceutically effective amount.
  • the "pharmaceutically effective amount” means an amount sufficient to treat a disease with a reasonable benefit/risk ratio applicable to medical treatment, and the effective dose level is the type and severity of the individual, age, sex, type of infected virus, drug Activity, sensitivity to drugs, time of administration, route of administration and rate of excretion, duration of treatment, factors including drugs used concurrently, and other factors well known in the medical field.
  • a typical daily dosage of the pharmaceutical composition according to the present invention may be appropriately selected by a person skilled in the art, and may be administered once or dividedly several times.
  • composition of the present invention may be administered daily or intermittently, and the number of administrations per day may be administered once or divided into 2-3 times.
  • composition of the present invention may be used alone or in combination with other drug treatments to enhance immunity. It is important to administer an amount capable of obtaining the maximum effect in a minimum amount without side effects in consideration of all the above factors, and can be easily determined by a person skilled in the art.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be administered to a subject in need of anti-inflammatory activity or to a subject having a nitrogen monoxide (NO) mediated inflammatory disease to suppress an excessive inflammatory response or treat a nitrogen monoxide (NO) mediated inflammatory disease.
  • NO nitrogen monoxide
  • the term "individual” refers to all animals including humans who have developed or are likely to develop nitrogen monoxide (NO) mediated inflammatory diseases.
  • the animals may be mammals such as cattle, horses, sheep, pigs, goats, camels, antelopes, dogs, cats, etc. in need of treatment for symptoms similar to humans, but are not limited thereto.
  • the present invention provides a quasi-drug composition for preventing or improving inflammatory diseases comprising an ethanol fraction of an ethanol extract of Apios Americana tubers.
  • the term "quasi-drug" used in the present invention refers to fibers, rubber products, or the like, which are used for the purpose of treating, alleviating, treating, or preventing diseases of humans or animals, and the action on the human body is weak or does not act directly on the human body, It means something similar to something that is not an instrument or machine.
  • an article corresponding to one of the preparations used for sterilization, insecticide, and similar purposes for the prevention of infectious type among the articles used for the purpose of diagnosing, treating, alleviating, treating or preventing human or animal diseases, instruments and machines
  • it may refer to an article other than a device, machine, or device among articles that are not devices and are used for the purpose of having a pharmacological effect on the structure and function of humans or animals.
  • the quasi-drug may include external skin preparations and personal hygiene products. Specifically, it may be a disinfectant cleaner, shower foam, gagrin, wet tissue, detergent soap, hand wash, or ointment, but is not limited thereto.
  • the quasi-drug composition of the present invention When used as a quasi-drug additive, the composition may be added as it is or may be used together with other quasi-drug or quasi-drug components, and may be appropriately used according to a conventional method.
  • the mixing amount of the active ingredient may be appropriately determined according to the purpose of use.
  • food used in the present invention refers to meat, sausage, bread, chocolate, candy, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gum, dairy products including ice cream, various soups, beverages, tea, drinks, alcohol There are beverages, vitamin complexes, health functional foods, and health foods, and all foods in the usual sense are included.
  • the health functional food composition of the present invention includes the form of pills, powders, granules, needles, tablets, capsules or liquids, and as foods to which the composition of the present invention can be added, for example, various foods, such as For example, there are beverages, gum, tea, vitamin complexes, and dietary supplements.
  • other ingredients other than those containing the ethanol fraction of the ethanol extract of Apios americana tuber are not particularly limited, and various herbal extracts, food supplements, or It may contain natural carbohydrates and the like as additional ingredients.
  • the food additives include food additives conventional in the art, such as flavoring agents, flavoring agents, coloring agents, fillers, stabilizers, and the like.
  • Examples of the natural carbohydrate include monosaccharides such as glucose, fructose, and the like; Disaccharides such as maltose, sucrose, and the like; And polysaccharides, for example, common sugars such as dextrin and cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol.
  • natural flavoring agents for example, rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.
  • synthetic flavoring agents sacharin, aspartame, etc.
  • the health functional food composition of the present invention includes various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), flavoring agents such as synthetic flavors and natural flavoring agents, coloring agents and fillers (cheese, chocolate, etc.), pectic acid and salts thereof, alginic acid. And salts thereof, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonates used in carbonated beverages, and the like. In addition, it may contain flesh for the manufacture of natural fruit juice and fruit juice beverages and vegetable beverages. These components may be used independently or in combination.
  • the health supplements include health functional foods and health foods.
  • Functional food is the same term as food for special health use (FoSHU), and is a medicine that is processed so that the bioregulatory function effectively appears in addition to nutrition supply, and has high medical effect.
  • the term “function (sex)” means obtaining useful effects for health purposes such as controlling nutrients or physiological effects on the structure and function of the human body.
  • the food of the present invention can be prepared by a method commonly used in the art, and during the production, raw materials and ingredients commonly added in the art may be added to prepare the food product.
  • the formulation of the food may be prepared without limitation as long as it is a formulation recognized as a food.
  • the health functional food composition of the present invention can be prepared in various forms, and unlike general drugs, it has the advantage of not having side effects that may occur when taking the drug for a long time by using food as a raw material.
  • the present invention also provides a cosmetic composition for preventing or improving inflammatory diseases comprising the ethanol fraction of the ethanol extract of Apios Americana tubers.
  • the cosmetic composition may be used as an active ingredient of a functional cosmetic, and the content of the fermented product included in the functional cosmetic is not particularly limited, but may be, for example, 0.01 to 99.9% by weight (w/w)%.
  • Functional cosmetics of the present invention may contain the above fractions as an active ingredient, and may additionally contain commonly used cosmetics, for example, glycerol, propylene glycol, 1,3-butylene glycol, sorbitol for water-soluble skin formulations. , Polyethylene glycol, carboxyvinyl polymer, xanthan gum, carboxymethyl cellulose, hydroxyethyl cellulose, hydroxymethyl cellulose, locust bean gum, allantoin, carrageenan, etc.
  • Pigments include extender pigments such as titanium dioxide, fine particles of ditanic dioxide, kaolin, nylon powder, talc, sericite, mica, and polymethyl methacrylate, and yellow iron oxide, black iron oxide, red iron oxide, ultramarine, chromium oxide, chromium hydroxide, etc.
  • a colored pigment of can be used;
  • a moisturizing agent natural moisturizing substances such as 1,3-butylene glycol, concentrated glycerin, ethylene glycol, etc., such as chitin, chitosan, hyaluronic acid, hyaluronic acid, lactic acid, and glycolic acid, may be used;
  • a preservative paraoxybenzoic acid esters, imidazolidinyl urea, and the like can be used, as well as one or two or more kinds of the above ingredients according to product characteristics.
  • the functional cosmetic may be prepared in any formulation conventionally prepared in the art, for example, solution, suspension, emulsion, paste, gel, cream, lotion, powder, soap, surfactant-containing cleansing, oil , Powder foundation, emulsion foundation, wax foundation, and spray may be formulated, but are not limited thereto. In more detail, it may be prepared in the form of a flexible lotion, nutritional lotion, nutritional cream, massage cream, essence, eye cream, cleansing cream, cleansing foam, cleansing water, pack, spray or powder.
  • the formulation is a paste, cream or gel, animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tracant, cellulose derivatives, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc, or zinc oxide may be used as a carrier component. .
  • lactose When the formulation is a powder or spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used as a carrier component, and in particular, in the case of a spray, additional chlorofluorohydrocarbon, propane/butane Or a propellant such as dimethyl ether.
  • a solvent, a solubilizing agent or an emulsifying agent is used as a carrier component, such as water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, 1,3 -Butyl glycol oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol or fatty acid ester of sorbitan.
  • a liquid diluent such as water, ethanol or propylene glycol as a carrier component, an ethoxylated isostearyl alcohol, a suspending agent such as polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, microcrystalline cellulose , Aluminum metahydroxide, bentonite, agar or tracant, and the like may be used.
  • the formulation is a surfactant containing cleansing
  • aliphatic alcohol sulfate aliphatic alcohol ether sulfate, sulfosuccinic acid monoester, isethionate, imidazolinium derivative, methyltaurate, sarcosinate, fatty acid amide ether sulfate , Alkylamidobetaine, aliphatic alcohol, fatty acid glyceride, fatty acid diethanolamide, vegetable oil, lanolin derivative or ethoxylated glycerol fatty acid ester, and the like may be used.
  • the present invention also provides a feed composition for preventing or improving inflammatory diseases comprising an ethanol fraction of an ethanol extract of Apios Americana tubers.
  • the feed composition may contain a feed additive.
  • the feed additive of the present invention corresponds to an auxiliary feed in the feed management law.
  • feed used in the present invention may mean any natural or artificial diet, one meal meal, etc., or a component of the one meal meal, for animals to eat, ingest, and digest.
  • the kind of feed is not particularly limited, and feed commonly used in the art may be used.
  • Non-limiting examples of the feed include vegetable feeds such as grains, root fruits, food processing by-products, algae, fiber, pharmaceutical by-products, oils and fats, starches, meals or grain by-products; Animal feeds such as proteins, inorganic logistics, oils and fats, minerals, oils and fats, single-cell proteins, zooplanktons or foods. These may be used alone or in combination of two or more.
  • the term “individual” means any animal (eg, human, horse, pig, rabbit, dog, sheep, goat, non-human primate, cow, Cats, guinea pigs or rodents). These terms do not refer to a particular age or gender. Accordingly, it is intended to include adult/adult and newborn subjects, whether female/female or male/male, as well as fetuses.
  • Patient refers to a subject suffering from a disease or disorder. The term patient includes human and veterinary subjects.
  • the term "individual in need thereof” may include healthy healthy subjects.
  • the term "individual in need thereof” refers to a healthy normal individual or alcoholic gastritis. This should be interpreted as encompassing underived entities.
  • the effect of the ethanol fraction of the ethanol extract of Apios americana tuber and the description of the composition including the route of administration, the number of administration, the dosage, etc. are the same as described above. Therefore, the description is omitted.
  • the present invention also provides a method for preparing a fraction of Apios americana tuber extract comprising the following steps:
  • the Apios americana tuber of step a) may be dried through a conventional drying method such as natural drying or hot air drying.
  • the kind of extraction solvent used to extract the Apios americana tubers in step b) is ethanol.
  • Ethanol extraction ie, alcohol extraction
  • 50(v/v)% to 90(v/v)% ethanol more preferably 60(v/v)% to 80(v/v)% ethanol, most preferably 65(v/v) )% to 75 (v/v)% ethanol can be used as an extraction solvent.
  • the method of extracting the extract of step c) is not particularly limited, and may be extracted according to a method commonly used in the art.
  • Non-limiting examples of the extraction method include immersion extraction, hot water extraction, ultrasonic extraction, filtration, reflux extraction, and the like, which may be performed alone or in combination of two or more methods.
  • an extract was prepared using immersion extraction.
  • a solvent extract can be prepared by extracting Apios americana tubers at least once using the solvent and extraction method, and a dry extract obtained by freeze drying or spray drying after distilling the solvent extract under reduced pressure is used. Can be manufactured.
  • the system fraction of step d) may be performed by flash chromatography, and preferably, a column filled with a weak basic anion exchange resin, for example, a dia-ion HP20 resin Using flash chromatography.
  • the ethanol of step d) is ethanol at a concentration of 5 (v/v)% to 35 (v/v)%, and 10 (v/v)% to 30 (v/v)% ethanol , Most preferably 15 (v/v)% to 25 (v/v)% ethanol.
  • Fractions prepared by the preparation method of the present invention are 2'-hydroxy-5-methoxygenistein-7,4'- O- ⁇ -D-diglucopyranoside, 2'-hydroxygenistein-7,4' -O - ⁇ -D-diglucopyranoside, 2′-hydroxygenistein-7- O - ⁇ -D-genthiobioside and 7,2′,4′-trihydroxy-5-methoxyiso It contains at least one selected from the group consisting of flavone-4′- O- ⁇ -D-glucopyranoside, and exhibits excellent anti-inflammatory activity as these four effective compounds are contained in high concentration.
  • the Apios Americana tuber used in the present invention was purchased from a farm in Sacheon, Gyeongsangnam-do. After pulverizing 8.5 kg of dried Apios Americana tubers, immersion extraction was performed with 85 L of 70 (v/v)% ethanol at 40° C. for 15 hours twice. After the extract was filtered on a filter paper, the filtrate was concentrated and dried using a rotary vacuum concentrator, and finally, 1.7 kg of dried Apios americana tuber extract was obtained.
  • the NO production inhibitory activity of the Apios americana extract prepared in Example 1-1 was evaluated in LPS-induced RAW 264.7 cells.
  • LPS-induced RAW 264.7 cells (Korea Cell Line Bank) were plated on a 96-well plate at a density of 0.9 ⁇ 10 5 cells/mL and cultured for 24 hours. Accumulated nitrite, an indicator of NO production in the culture medium, was measured according to the Griess reagent.
  • the culture supernatant was mixed with the grease reagent for 10 minutes, and then the absorbance at 540 nm was measured in a microplate reader (Molecular Devices Inc., USA). Fresh culture medium was used as a blank for all experiments, l- N 6 -(1-iminoethyl)-lysine (NIL) was used as a positive control, and the amount of nitrite in the sample was determined by referring to the sodium nitrite standard curve.
  • NIL l- N 6 -(1-iminoethyl)-lysine
  • the Apios americana tuber extract exhibited an IC 50 value of >100 ⁇ g/ml.
  • the subfraction B08 (2.1 g) was separated by connecting two SNAP Ultra C 18 120 g cartridges (Biotage, Sweden) with a flash chromatography system (Biotage, Selekt, Sweden) (water-methanol, 90:10-60 :40), 18 subfractions (B0801-B0818) were obtained.
  • the lower fraction B0803 (44.0 mg) was separated by flash chromatography system by connecting four SNAP 10 g cartridges filled with Sephadex LH-20 resin (MilliporeSigma, USA) (water-methanol, 30:70), and compound 1 (2.8 mg) was obtained.
  • the isolated compound is 2′-hydroxy-5-methoxygenistein-7,4′- after comparing the spectroscopic analysis data including NMR ( 1 H and 13 C NMR) and LC/MS with the previously reported paper data.
  • O - ⁇ -D-diglucopyranoside (2′-hydroxy-5-methoxygenistein-7,4′- O - ⁇ -D-diglucopyranoside; compound 1 ), 2′-hydroxygenistein-7,4′- O - ⁇ -D- gluconic di nose Llano side (2'-hydroxygenistein-7,4'- O - ⁇ -D-diglucopyranoside; compound 2), 2'-hydroxy-genistein -7- O - ⁇ -D- Zen Thiobioside (2′-hydroxygenistein-7- O- ⁇ -D-gentiobioside; compound 3 ) (Ichige, M.; Fukuda, E.; Miida, S.; Hattan, J.-i.; Misawa, N.
  • Compound 4 is a new structure 7,2′,4 '- trihydroxy-5-methoxy isoflavone -4'- O - ⁇ -D- gluconic nose side pyrano (7,2', 4'-trihydroxy- 5-methoxyisoflavone-4'- O - ⁇ -D- It was identified as glucopyranoside; compound 4 ).
  • Example 2 In order to evaluate the anti-inflammatory activity of the four active compounds identified in Example 2, the NO production inhibitory activity according to the treatment of each compound was confirmed in the same manner as in Example 1-2.
  • each of the four compounds showed an IC 50 of 0.42 to 0.71 ⁇ M, showing excellent anti-inflammatory activity.
  • Example 3 In order to prepare a fraction containing as a main component 4 kinds of compounds showing excellent anti-inflammatory activity identified in Example 3, a sample of 20.0 g of the apiose ethanol extract prepared in Example 1-1 was taken, and Diaion HP20 resin was added as a filler. Then, three kinds of Apios Americana fractions having different mobile phase solvent compositions were finally prepared by loading the cartridge column and applying it to a flash chromatography system. The flash chromatography system was performed under the conditions of Table 2 below, and the elution amount, yield and yield according to the solvent composition of the mobile phase are shown in Table 3.
  • Example 1-2 In the same manner as in Example 1-2, the activity of inhibiting NO generation according to the fraction treatment was confirmed.
  • sample IC 50 ( ⁇ g/ml) 100(v/v)% water fraction >100 20(v/v)% ethanol fraction 38.52 ⁇ 9.16 100 (v/v)% ethanol fraction >100
  • Figure 4 shows all samples on the same scale, in Apios americana tuber ethanol extract (A), the ratio of inactive primary metabolites such as starch is high, and the active fraction, 20 (v/v)% ethanol fraction (C) It can be seen that the peak for the active ingredient having the included anti-inflammatory activity appears very weak.
  • the proportion of the raw material ethanol extract (A) is very high (weight yield: 84.8(w/w)%), but inert substances dissolved in water and eluted Most of them, as materials without a UV chromophore, did not appear on the HPLC detector (UV detector).
  • the active compounds contained in the ethanol extract (A) are 20 (v/v)% ethanol fraction (C ), and in the case of the 100(v/v)% water fraction (B), the scale is too enlarged and it can be seen that it looks exaggerated unlike the actual one.
  • the active compounds contained in the 20(v/v)% ethanol fraction (C) were identified as compounds 1 to 4, and these 4 types of active compounds were contained in a high content to provide excellent anti-inflammatory effect and prevention or treatment of alcoholic gastritis It is judged to be effective.
  • the effect of improving alcoholic gastritis was evaluated using a 20 (v/v)% ethanol fraction, which contained 4 kinds of active compounds at a high concentration and had the best NO inhibitory activity.
  • mice Seven week old C57BL/6 mice were purchased from Dooyeol Biotech. The light/dark cycle at 23°C was set at 12-hour intervals, and diet and water were freely supplied to adapt to the basic diet for one week.
  • mice were divided into 4 groups as shown in Table 7 to conduct the experiment.
  • the ethanol fraction was orally administered to mice at different concentrations (50 mg/kg/day or 200 mg/kg/day), and gastritis was induced with HCl/EtOH after fasting for 12 hours.
  • the experimental samples were dissolved in ethanol (5.0 g/kg) and administered orally once.
  • the animals were anesthetized with ether, and heart blood was collected and gastric tissue was removed after opening.
  • the gastric tissues extracted from each group were fixed to observe the extent and extent of damage. As shown in FIG. 7A, in the case of the gastritis-induced group administered with only HCl/EtOH, inflammation, bleeding, redness, and swelling of the stomach tissue occurred, resulting in damage to the gastric mucosa, and the area of the injury site was also very large. This gastric tissue damage was significantly recovered in a concentration-dependent manner in the experimental group treated with the 20(v/v)% ethanol fraction.
  • Tissues were fixed in 10% NBF for 24 hours for histopathological analysis. After paraffin embedding, 3-4 ⁇ m sections were prepared, and hematoxylin & eosin (H&E) staining and PAS staining were performed for examination with an optical microscope. As shown in FIGS. 7B and 7C, it was confirmed that the degree of damage and morphological deformation of the gastric mucosa were improved to a level similar to that of the normal group. In addition, in the gastritis-induced group, the mucous layer protecting the mucous membrane was lost by HCl/EtOH, but a distinctly stained mucus layer was observed in the fraction administration group.
  • H&E hematoxylin & eosin
  • the gastric tissue was separated, the internal mucosa of the stomach was washed with 0.9% NaCl, expanded, and photographed using an optical digital camera, and the damage area was measured using the image J program. Calculated.
  • the gastritis-inducing group exhibited a high ulcer index of 16.736 ⁇ 3.70 due to gastric mucosa damage caused by HCl/EtOH stimulation, but in the ethanol fraction treatment group, the degree of mucosal damage was significantly dependent on concentration. It was reduced, and in particular, at the concentration of 200 mg/kg/day, it showed an improvement effect of more than 60%.

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Abstract

본 발명은 항염 활성을 갖는 아피오스 아메리카나 괴경 추출물의 분획물의 알코올성 위염 예방 또는 치료제로서의 용도 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 특정 용매로 추출 및 분획한 아피오스 아메리카나 괴경 분획물을 포함하는 항염 조성물, 상기 항염 조성물을 포함하는 염증성 질환 또는 알코올성 위염의 예방, 개선 또는 치료용 조성물, 상기 항염 조성물을 이용한 염증성 질환 또는 알코올성 위염의 예방 또는 치료 방법, 항염제, 염증성 질환 또는 알코올성 위염을 예방 또는 치료하기 위한 약제의 제조 시 아피오스 아메리카나 괴경 에탄올 추출물의 에탄올 분획물의 용도 및 항염 활성을 갖는 상기 분획물의 제조방법을 제공한다.

Description

항염 활성을 갖는 아피오스 아메리카나 괴경 추출물의 분획물의 알코올성 위염 예방 또는 치료제로서의 용도 및 이의 제조방법
본 발명은 항염 활성을 갖는 아피오스 아메리카나 괴경 추출물의 분획물의 알코올성 위염 예방 또는 치료제로서의 용도 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 특정 용매로 추출 및 분획한 아피오스 아메리카나 괴경 분획물을 포함하는 항염 조성물, 상기 항염 조성물을 포함하는 염증성 질환 또는 알코올성 위염의 예방, 개선 또는 치료용 조성물, 상기 항염 조성물을 이용한 염증성 질환 또는 알코올성 위염의 예방 또는 치료 방법, 항염제, 염증성 질환 또는 알코올성 위염을 예방 또는 치료하기 위한 약제의 제조 시 아피오스 아메리카나 괴경 에탄올 추출물의 에탄올 분획물의 용도 및 항염 활성을 갖는 상기 분획물의 제조방법을 제공한다.
일산화질소(NO, Nitric oxide)는 면역시스템에서 다양한 생리학적 메카니즘을 조절하는데 관여하는 중요한 세포내 및 세포간 신호전달 분자이다. 일산화질소는 수퍼옥사이드와 반응하여 퍼옥시나이트라이트(peroxynitrite) 이온을 생성하고, 생성된 이온은 과도한 염증 활성을 유도하며, 패혈증(sepsis), 궤양성 대장염(ulcerative colitis), 관절염(arthritis), 루푸스(systemic lupus erythematosus, SLE) 및 쇼그렌 증후군(Sjogren's syndrome, SS) 등의 질환을 발생시키는 것으로 알려져 있다. 활성산소종(Reactive oxygen species, ROS) 및 일산화질소(nitric oxide, NO)는 신호전달과정의 중간 매개자로서 매우 중요한 생리학적 역할을 담당한다.
또한, 세포내 다양한 염증 조절 인자들은 유도형 일산화질소 합성효소(inducible nitric oxide synthase; iNOS)나 사이클로-옥시제나제 (cyclo-oxygenase-2; COX-2)에 의해 생체 내 대식세포와 같은 염증 세포들이 활성화 되면서 염증 매개인자인 일산화질소(Nitric oxide; NO), 프로스타글란딘(Prostaglandin; PG), 인터루킨-1 베타(Interleukin-1 beta; IL-1β), 종양괴사인자-알파(Tumor necrosis factor-alpha; TNF-α), 사이토카인(cytokine) 등이 다량 생산된다.
대부분의 염증 질환의 치료제로서 널리 사용되고 있는 제제인 비스테로이드성 소염제(non-steroidal anti-inflammatory drugs, NSAIDS)는 시클로옥시게나제(cyclooxygenase, COX)라고 하는 아라키돈산(arachidonic acid)으로부터 프로스타글란딘(prostaglandin)의 생합성에 관여하는 효소 활성을 억제함으로써, 항염증 작용을 나타내는데, 주 치료작용 외에 위장관 장애, 간장애, 신장애 등의 심각한 부작용을 야기하므로 장기간의 사용에 있어서 제약이 따르는 실정이다.
염증성 질환 중 하나인 알코올성 위염은 알코올로 인한 만성적인 자극에 의해 위 점막이 손상된 상태를 일컫는다. 알코올성 위염에 걸리면 소화가 잘 되지 않고 쓰린 느낌을 호소하는 경우도 있지만 대부분 특별한 증상이 없다가 내시경 검사와 초음파 검사를 통해 심각한 증상이 발견된다. 만성적으로 술을 마시는 경우 위염뿐만 아니라 췌장이나 간 등도 손상시켜 관련질환을 유발하며, 또한 식도암, 위암, 대장암의 위험도 높아진다.
특히, 알코올로 인한 위염 및 위궤양은 가장 주의를 요하는데, 알코올은 위벽의 세포를 자극해 산 분비를 증가시키며, 과도한 알코올 섭취는 위점막의 부종을 발생시켜 출혈을 일으키고 염증세포들의 생성을 유도한다. 또한, 산화적 스트레스로 인한 괴사 혹은 세포사멸을 유도하여 위점막을 손상시키고, 위출혈이 나타나게 된다.
종래의 위염 및 위궤양의 치료제로는 과다 분비된 위산을 중화시키는 제산제(antacid), 산 분비 억제 목적의 히스타민 길항제(histamine antagonist), 프로톤 펌프 저해제(proton pump inhibitor), 콜린 억제제, 위내막의 내성을 증가시키고 회복을 돕는 위점막보호제(sucralfate) 등이 있다. 다만, 이와 같은 치료제들은 합성 의약품으로 식욕감퇴, 무력감, 알레르기 등의 부작용이 발생하는 문제점이 있었다.
이에 따라, 대한민국 공개특허 제10-2009-0046425호(천마 추출물을 함유하는 위염 또는 위궤양의 예방 또는 치료용 조성물), 대한민국 등록특허 제10-1091025호(복분자 추출물을 함유하는 비스테로이드성 항염증제에 의해 유발된 위염 및 위궤양 예방 및 치료용 조성물), 대한민국 공개특허 제10-2012-0051904호(옻나무 추출물을 포함하는 위염 및 위궤양 치료제 조성물), 대한민국 등록특허 제10-1204981호(고로쇠 수액을 함유하는 위염 및 위궤양의 예방 및 치료용 조성물) 등에 개시된 바와 같이 위염 및 위궤양의 예방 및 치료 효과가 있는 천연 추출물에 대한 관심이 높아지고 있다.
한편, 아피오스(Apios americana Medikus)는 콩과에 속하는 덩굴성 다년생 초본으로, 원산지는 북미 동부의 온대 및 아열대 지역이며, 예로부터 북미 인디언들이 식용으로 많이 섭취한 탓에 '인디언 감자'라고도 불린다. 아피오스는 아시아 지역에서는 일본에 먼저 도입되어 건강식품으로 이용되다가, 최근에는 국내에도 도입 되어 새로운 농가소득 작물로 활발히 재배되고 있다. 아피오스는 지상부에 꽃과 잎을, 지하부에 덩이줄기 모양의 괴경을 형성하는데, 이 중 괴경이 식용으로 주로 사용되고 있다. 아피오스의 주성분은 전분, 단백질, 수분이며, 그밖에 사포닌, 칼슘, 철분, 식이섬유 등이 다량 함유되어 있어, 천연칼슘제로도 널리 이용되고 있다.
아피오스 아메리카나의 효능과 관련하여, 대한민국 공개특허 제10-2018-0095193호에는 아피오스 아메리카나 추출물의 항암 활성이 개시된 바 있고, 대한민국 공개특허 제10-2015-0132616호에는 아피오스 추출물 또는 발효 추출물이 RAW 264.7 세포 내에서 면역증강인자인 NO의 유전자 또는 단백질 발현을 증가시켜 면역증강 효과를 나타낸다는 것이 개시된 바 있다.
이러한 배경 하에, 본 발명자들은 아피오스 아메리카나 괴경 추출물을 특정 용매로 분획한 분획물이 LSP-유도 RAW 264.7 세포에서 NO 생성을 억제하는 활성을 나타낸다는 것을 확인하였고, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 아피오스 아메리카나(Apios Americana) 괴경 추출물의 분획물을 포함하는 항염 조성물 및/또는 항염제의 제조 시 아피오스 아메리카나 괴경 에탄올 추출물의 에탄올 분획물의 용도를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 아피오스 아메리카나(Apios Americana) 괴경 추출물의 분획물을 포함하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물 및/또는 염증성 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 아피오스 아메리카나(Apios Americana) 괴경 추출물의 분획물을 이용한 염증성 질환의 예방 또는 치료 방법 및/또는 염증성 질환의 예방 또는 치료를 위한 약제의 제조 시 아피오스 아메리카나 괴경 에탄올 추출물의 에탄올 분획물의 용도를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 아피오스 아메리카나(Apios Americana) 괴경 추출물의 분획물을 포함하는 알코올성 위염의 예방 또는 치료용 약학 조성물 및/또는 알코올성 위염의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 아피오스 아메리카나(Apios Americana) 괴경 추출물의 분획물을 이용한 알코올성 위염의 예방 또는 치료 방법 및/또는 알코올성 위염의 예방 또는 치료를 위한 약제의 제조 시 아피오스 아메리카나 괴경 에탄올 추출물의 에탄올 분획물의 용도를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 항염 활성을 갖는 아피오스 아메리카나 괴경 추출물의 분획물 제조방법을 제공한다.
상술한 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 아피오스 아메리카나(Apios Americana) 괴경 에탄올 추출물의 에탄올 분획물을 포함하는 항염 조성물을 제공한다.
본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 상기 에탄올 추출물은 50(v/v)% 내지 90(v/v)% 에탄올을 추출 용매로 하여 수득한 것일 수 있다.
본 발명의 바람직한 다른 일실시예에 따르면, 상기 에탄올 분획물은 50(v/v)% 내지 90(v/v)% 에탄올 추출물을 5(v/v)% 내지 35(v/v)% 에탄올로 분획하여 수득한 것일 수 있다.
본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 상기 항염 조성물은 2′-하이드록시-5-메톡시제니스테인-7,4′-O-β-D-디글루코피라노사이드, 2′-하이드록시제니스테인-7,4′-O-β-D-디글루코피라노사이드, 2′-하이드록시제니스테인-7-O-β-D-젠티오비오사이드 및 7,2′,4′-트리하이드록시-5-메톡시이소플라본-4′-O-β-D-글루코피라노사이드로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 화합물을 포함할 수 있다.
본 발명은 또한, 항염제의 제조 시 아피오스 아메리카나(Apios Americana) 괴경 에탄올 추출물의 에탄올 분획물의 용도를 제공한다.
추가로, 본 발명은 전술한 항염 조성물을 포함하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물 및/또는 염증성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한, 아피오스 아메리카나(Apios Americana) 괴경 에탄올 추출물의 에탄올 분획물을 포함하는 조성물을 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 염증성 질환의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 염증성 질환을 예방 또는 치료하기 위한 약제의 제조 시 아피오스 아메리카나(Apios Americana) 괴경 에탄올 추출물의 에탄올 분획물의 용도를 제공한다.
본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 상기 염증성 질환은 일산화질소(NO) 매개 질환일 수 있다.
본 발명의 바람직한 다른 일실시예에 따르면, 상기 일산화질소(NO) 매개 염증성 질환은 부종, 피부염, 알레르기, 아토피, 천식, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위궤양, 위염, 크론병, 대장염, 치질, 통풍, 강직성 척추염, 류마티스 열, 루프스, 섬유근통(fibromyalgia), 건선관절염, 골관절염, 류마티스관절염, 견관절주위염, 건염, 건초염, 근육염, 간염, 방광염, 신장염, 쇼그렌 증후군(sjogren's syndrom) 및 다발성 경화증으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
나아가, 본 발명은 전술한 항염 조성물을 포함하는 알코올성 위염의 예방 또는 치료용 약학 조성물 및/또는 알코올성 위염의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한, 아피오스 아메리카나(Apios Americana) 괴경 에탄올 추출물의 에탄올 분획물을 포함하는 조성물을 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 알코올성 위염의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 알코올성 위염을 예방 또는 치료하기 위한 약제의 제조 시 아피오스 아메리카나(Apios Americana) 괴경 에탄올 추출물의 에탄올 분획물의 용도를 제공한다.
본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 상기 알코올성 위염은 알코올에 의해 유도된 급성 위점막 손상, 위궤양, 급성 위염 및 만성 위염으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명은 또한, 다음의 단계를 포함하는 아피오스 아메리카나 괴경 추출물의 분획물 제조방법을 제공한다:
a) 아피오스 아메리카나(Apios Americana) 괴경을 분쇄하는 단계;
b) 분쇄물 중량 대비 1 내지 15배수의 50(v/v)% 내지 90(v/v)% 에탄올을 분쇄물에 투입하는 단계;
c) 20℃내지 80℃에서 1시간 내지 30시간 동안 추출하여 추출물을 제조하는 단계; 및
d) 수득된 추출물을 물 및 에탄올로 계통 분획하는 단계.
본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 상기 d) 단계의 에탄올은 5(v/v)% 내지 35(v/v)% 농도의 에탄올일 수 있다.
본 발명의 바람직한 다른 일실시예에 따르면, 상기 d) 단계의 계통 분획은 플래쉬 크로마토그래피 (Flash chromatography)를 이용하여 수행될 수 있다.
본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 상기 제조방법으로 제조된 분획물은 2′-하이드록시-5-메톡시제니스테인-7,4′-O-β-D-디글루코피라노사이드, 2′-하이드록시제니스테인-7,4′-O-β-D-디글루코피라노사이드, 2′-하이드록시제니스테인-7-O-β-D-젠티오비오사이드 및 7,2′,4′-트리하이드록시-5-메톡시이소플라본-4′-O-β-D-글루코피라노사이드로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 화합물을 포함할 수 있다.
본 발명의 아피오스 아메리카나(Apios Americana) 괴경 에탄올 추출물의 에탄올 분획물을 포함하는 항염 조성물은 우수한 일산화질소(NO) 생성 억제 활성을 나타내므로, 알코올성 위염을 포함한 다양한 염증성 질환을 예방, 개선 또는 치료하기 위한 의약품, 의약외품, 건강기능식품, 화장품 또는 사료 등에 활용될 수 있다. 또한, 본 발명은 분획물의 제조에 있어서 에탄올을 용매로 사용하기 때문에 식품 가공상 가장 친환경적이며 경제적이며, 식품 소재의 자원을 추출 및 분획하여 사용하므로 인체에 안전하다.
도 1은 본 발명의 아피오스 아메리카나 괴경 추출물 및 이의 각 분획물의 제조방법을 개략도로 나타낸 것이다.
도 2는 아피오스 아메리카나 괴경의 에탄올 추출물의 NO 억제 활성을 그래프로 나타낸 것이다.
도 3은 아피오스 아메리카나 괴경의 에탄올 추출물의 각 분획물의 NO 생성 억제 활성을 그래프로 나타낸 것이다.
도 4는 아피오스 아메리카나 괴경의 에탄올 추출물 및 이의 각 분획물의 UHPLC 분석 결과로, 모든 시료를 동일한 스케일로 나타낸 것이다.
도 5는 아피오스 아메리카나 괴경의 에탄올 추출물 및 이의 각 분획물의 UHPLC 분석 결과로, 모든 시료를 풀 스케일로 나타낸 것이다.
도 6은 아피오스 아메리카나 괴경의 에탄올 추출물 및 이의 각 분획물의 UHPLC 분석 결과로, 추출물만 풀 스케일로 나타내고, 나머지 각 분획물은 동일한 스케일로 나타낸 것이다.
도 7a 내지 7e는 아피오스 아메리카나 괴경의 에탄올 분획물 투여에 따른 알코올성 위염 개선 효과를 확인한 것으로, 도 7a는 위 조직의 염증 완화 정도를 육안으로 관찰한 사진이고, 도 7b 및 7c는 조직병리학적 평가를 위해 헤마톡실린&에오신 (H&E) 염색 및 PAS 염색을 수행한 결과를 나타낸 것이며, 도 7d 및 7e는 궤양 지수를 평가한 결과를 나타낸 것이다.
상술한 바와 같이, 본 발명자들은 종래에 알려진 아피오스 아메리카나의 NO 생성 촉진 활성과 달리, 아피오스 아메리카나 괴경 추출물의 분획물이 LPS-유도 RAW 264.7 세포에서 NO 생성을 억제하는 활성을 나타냄을 확인하였다.
따라서, 본 발명은 아피오스 아메리카나(Apios Americana) 괴경 에탄올 추출물의 에탄올 분획물을 포함하는 항염 조성물을 제공한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "아피오스 아메리카나(Apios americana Medikus)는 콩과에 속하는 덩굴성 다년생 초본으로, 인디언 감자라고도 불린다. 본 발명의 조성물에 사용되는 아피오스 아메리카나의 부위는 지하부의 괴경이며, 아피오스 아메리카나 괴경은 상업적으로 판매되는 것을 구입하거나, 자연에서 채취 또는 재배된 것을 사용할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, "추출물"은 상기 아피오스 아메리카나 괴경, 보다 바람직하게는 건조된 아피오스 아메리카나 괴경의 추출처리에 의하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다.
본 발명의 상기 추출물은, 아피오스 아메리카나의 천연, 잡종 또는 변종 식물로부터 추출될 수 있고, 식물 조직 배양물로부터도 추출이 가능하다.
본 발명의 조성물에 있어서, 상기 에탄올 추출물은 50(v/v)% 내지 90(v/v)% 에탄올을 추출 용매로 하여 수득한 것일 수 있고, 보다 바람직하게는 60(v/v)% 내지 80(v/v)% 에탄올, 가장 바람직하게는 65(v/v)% 내지 75(v/v)% 에탄올을 추출 용매로 하여 수득한 것일 수 있다.
본 발명의 조성물은 상기 용매를 사용하여 건조된 아피오스 아메리카나 괴경을 1회 이상 추출하여 용매 추출물을 제조할 수 있으며, 상기 용매 추출물을 감압농축한 후 동결 건조 또는 분무 건조하여 얻은 건조 추출물로 제조할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, "분획물"은 여러 다양한 구성 성분들을 포함하는 혼합물로부터 특정 성분 또는 특정 성분 그룹을 분리하기 위하여 분획을 수행하여 얻어진 결과물을 의미한다.
본 발명에서 상기 분획물을 얻는 분획 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 수행될 수 있다. 상기 분획 방법의 비제한적인 예로는, 건조된 아피오스 아메리카나 괴경을 추출하여 얻은 추출물에 소정의 용매를 처리하여 상기 추출물로부터 분획물을 얻는 방법을 들 수 있다.
본 발명에서 상기 분획물을 얻는 데에 사용되는 용매의 종류는 에탄올인 것이 바람직하다. 에탄올 이외의 다른 용매를 사용하는 경우, 항염 활성을 나타내는 유효 성분의 함량이 급격하게 감소하여, 의도한 생리활성이 나타나지 않을 수 있다.
본 발명의 조성물에 있어서, 상기 에탄올 분획물은 5(v/v)% 내지 35(v/v)% 에탄올 추출물을 10(v/v)% 내지 30(v/v)% 에탄올로 분획하여 수득한 것일 수 있고, 가장 바람직하게는 15(v/v)% 내지 25(v/v)% 에탄올 추출물로 분획하여 수득한 것일 수 있다.
본 발명의 구체적인 일실시예에서는 도 1에 나타낸 바와 같이 70(v/v)% 에탄올을 추출 용매로 하여 제조된 아피오스 아메리카나 추출물을 물, 20(v/v)% 에탄올, 100(v/v)% 에탄올 조건으로 각 구획 별로 분획 및 정제하였고, 각 분획물을 LPS로 유도된 대식세포주 RAW264.7에 처리하여 NO 생성 억제 효과를 확인하였다.
도 2 및 3에서 확인되는 바와 같이, 물 및 20(v/v)% 에탄올로 순차적으로 계통 분획하여 수득한 20(v/v)% 에탄올 분획물만이 우수한 NO 생성 억제 활성(IC50: 38.52±9.16 μg/ml)을 나타낸다는 것을 확인하였다.
추가로, 본 발명자들은 상기 추출물 및 각 분획물에 대해 UHPLC 분석을 수행하였으며, 도 4 내지 6에서 확인되는 바와 같이 20(v/v)% 에탄올 분획물(C)에 화합물 1 내지 4의 유효 화합물들이 대부분 포함되어 있음을 알 수 있다.
따라서, 본 발명의 조성물은 아피오스 아메리카나 추출물을 물 및 에탄올로 순차적으로 계통 분획하여 수득한 분획물을 유효성분으로 포함하는 것이 바람직하다. 바람직하게는 아피오스 아메리카나 추출물을 물 및 5(v/v)% 내지 35(v/v)% 에탄올로 계통 분획하여 수득한 것일 수 있고, 보다 바람직하게는 아피오스 아메리카나 추출물을 물 및 10(v/v)% 내지 30(v/v)% 에탄올, 가장 바람직하게는 물 및 15(v/v)% 내지 25(v/v)% 에탄올로 순차적으로 계통 분획하여 수득한 것일 수 있다.
본 발명은 또한, 항염제의 제조 시 아피오스 아메리카나(Apios Americana) 괴경 에탄올 추출물의 에탄올 분획물의 용도를 제공한다.
추가로, 본 발명은 아피오스 아메리카나(Apios Americana) 괴경 에탄올 추출물의 에탄올 분획물을 포함하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물 및/또는 염증성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한, 아피오스 아메리카나(Apios Americana) 괴경 에탄올 추출물의 에탄올 분획물 포함하는 조성물을 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 염증성 질환의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 염증성 질환을 예방 또는 치료하기 위한 약제의 제조 시 아피오스 아메리카나(Apios Americana) 괴경 에탄올 추출물의 에탄올 분획물의 용도를 제공한다.
본 발명의 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물 및/또는 염증성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물에 포함되는 아피오스 아메리카나 괴경의 에탄올 추출물의 에탄올 분획물에 대한 설명은 전술한 바와 동일하므로, 그 기재를 생략한다.
상기 염증성 질환은 일산화질소(NO) 매개 염증성 질환일 수 있고, 일산화질소(NO) 매개 염증성 질환은 부종, 피부염, 알레르기, 아토피, 천식, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위궤양, 위염, 크론병, 대장염, 치질, 통풍, 강직성 척추염, 류마티스 열, 루프스, 섬유근통(fibromyalgia), 건선관절염, 골관절염, 류마티스관절염, 견관절주위염, 건염, 건초염, 근육염, 간염, 방광염, 신장염, 쇼그렌 증후군(sjogren's syndrom) 및 다발성 경화증으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있다.
나아가, 본 발명은 아피오스 아메리카나(Apios Americana) 괴경 에탄올 추출물의 에탄올 분획물을 포함하는 알코올성 위염의 예방 또는 치료용 약학 조성물 및/또는 알코올성 위염의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한, 아피오스 아메리카나(Apios Americana) 괴경 에탄올 추출물의 에탄올 분획물 포함하는 조성물을 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 알코올성 위염의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 알코올성 위염을 예방 또는 치료하기 위한 약제의 제조 시 아피오스 아메리카나(Apios Americana) 괴경 에탄올 추출물의 에탄올 분획물의 용도를 제공한다.
본 발명의 알코올성 위염의 예방 또는 치료용 약학 조성물 및/또는 알코올성 위염의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물에 포함되는 아피오스 아메리카나 괴경의 에탄올 추출물의 에탄올 분획물에 대한 설명은 전술한 바와 동일하므로, 그 기재를 생략한다.
상기 알코올성 위염은 알코올에 의해 유도된 급성 위점막 손상, 위궤양, 급성 위염 및 만성 위염으로 이루어진 군으로부터 선택된 것일 수 있다.
도 7a 내지 7e에 나타난 바와 같이, 아피오스 아메리카나 괴경의 에탄올 분획물은 HCl/EtOH로 유도된 위염으로 인해 손상된 위 조직을 현저하게 회복시키며, 위점막의 점액층을 보호하는 효과가 탁월하다.
본 발명의 약학 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은, 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 잘 알려진 방법을 사용하여 약학적 제형으로 제조될 수 있다. 제형의 제조에 있어서, 활성 성분을 담체와 함께 혼합 또는 희석하거나, 용기 형태의 담체 내에 봉입시키는 것이 바람직하다.
따라서, 본 발명의 약학 조성물은, 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있고, 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.
예를 들어, 본 발명의 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.
경구 투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들어, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스 (lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다.
경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되고, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들어 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성 용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성 용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명에서 사용된 용어, "투여"는 어떠한 적절한 방법으로 환자에게 본 발명의 약학 조성물을 도입하는 것을 의미한다.
본 발명에 따른 약학 조성물의 투여 방식은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방식에 따를 수 있다. 상기 투여 방식은 목적 조직에 도달할 수 있는 한 제한되지 않으나, 복강 내 투여, 정맥 내 투여, 근육 내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여, 국소 투여, 비 내 투여될 수 있다. 본 발명에 따른 약학 조성물은 목적하는 투여 방식에 따라 다양한 제형으로 제작될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여할 수 있다.
상기 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분 한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 감염된 바이러스 종류, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물의 통상적인 1일 투여량은 당업자가 적절하게 선택할 수 있으며, 1회 또는 수 회로 나누어 투여될 수 있다.
본 발명의 조성물을 매일 투여 또는 간헐적으로 투여해도 좋고, 1일당 투여 횟수는 1회 또는 2~3회로 나누어 투여하는 것이 가능하다. 또한, 본 발명의 조성물은 면역 증진을 위하여 단독으로, 또는 다른 약물 치료와 병용하여 사용할 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 항염 활성을 필요로 하는 개체 또는 일산화질소(NO) 매개 염증성 질환을 갖는 개체에 투여하여 과도한 염증반응을 억제하거나 일산화질소(NO) 매개 염증성 질환을 치료할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, "개체"란, 일산화질소(NO) 매개 염증성 질환이 발병되었거나 발병할 가능성이 있는 인간을 포함한 모든 동물을 의미한다. 상기 동물은 인간뿐만 아니라 이와 유사한 증상의 치료를 필요로 하는 소, 말, 양, 돼지, 염소, 낙타, 영양, 개, 고양이 등의 포유동물일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
추가로, 본 발명은 아피오스 아메리카나(Apios Americana) 괴경 에탄올 추출물의 에탄올 분획물을 포함하는 염증성 질환의 예방 또는 개선용 의약외품 조성물을 제공한다.
본 발명의 의약외품 조성물에 포함되는 아피오스 아메리카나 괴경의 에탄올 추출물의 에탄올 분획물에 대한 설명은 전술한 바와 동일하므로, 그 기재를 생략한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "의약외품"은 사람이나 동물의 질병을 치료, 경감, 처치 또는 예방할 목적을 사용되는 섬유, 고무제품 또는 이와 유사한 것, 인체에 대한 작용이 약하거나 인체에 직접 작용하지 아니하며, 기구 또는 기계가 아닌 것과 이와 유사한 것을 의미한다. 또한, 감염형 예방을 위하여 살균, 살충 및 이와 유사한 용도로 사용되는 제제 중 하나에 해당하는 물품으로서, 사람이나 동물의 질병을 진단, 치료, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용하는 물품 중 기구, 기계 또는 장치가 아닌 것 및 사람이나 동물의 구조와 기능에 약리학적 영향을 줄 목적으로 사용하는 물품 중 기구, 기계 또는 장치가 아닌 것을 제외한 물품을 의미할 수 있다. 또한, 상기 의약외품은 피부외용제 및 개인위생용품을 포함할 수 있다. 구체적으로, 소독청결제, 샤워폼, 가그린, 물티슈, 세제비누, 핸드워시, 또는 연고제일 수 있으나 이에 제한되지는 않는다.
본 발명의 의약외품 조성물을 의약외품 첨가물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 의약외품 또는 의약외품 성분과 함께 사용 할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합량은 사용 목적에 따라 적합하게 결정될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "식품"은 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올음료, 비타민 복합제, 건강 기능 식품 및 건강 식품 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 식품을 모두 포함한다.
본 발명의 건강기능식품 조성물은 환제, 분말, 과립, 침제, 정제, 캡슐 또는 액제 등의 형태를 포함하며, 본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 예를 들어, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있다.
본 발명의 건강기능식품 조성물에 포함될 수 있는 필수 성분으로 상기 아피오스 아메리카나 괴경 에탄올 추출물의 에탄올 분획물을 함유하는 것 외에는 다른 성분에는 특별히 제한이 없으며 통상의 식품과 같이 여러 가지 생약추출물, 식품 보조 첨가제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.
또한, 상기 식품 보조 첨가제는 당업계에 통상적인 식품 보조 첨가제, 예를 들어 향미제, 풍미제, 착색제, 충진제, 안정화제 등을 포함한다.
상기 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외에 향미제로서 천연 향미제(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다.
상기 외에 본 발명의 건강기능식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 천연 과일쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다.
본 발명에서 상기 건강보조식품은 건강기능식품 및 건강식품 등을 포함한다.
상기 건강기능(성)식품(functional food)이란, 특정보건용 식품(food for special health use, FoSHU)과 동일한 용어로, 영양 공급 외에도 생체조절기능이 효율적으로 나타나도록 가공된 의학, 의료효과가 높은 식품을 의미한다. 여기서 "기능(성)"이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 본 발명의 식품은 당 업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조가능하며, 상기 제조시에는 당 업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한 상기 식품의 제형 또한 식품으로 인정되는 제형이면 제한 없이 제조될 수 있다. 본 발명의 건강기능식품 조성물은 다양한 형태의 제형으로 제조될 수 있으며, 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있다.
본 발명은 또한, 아피오스 아메리카나(Apios Americana) 괴경 에탄올 추출물의 에탄올 분획물을 포함하는 염증성 질환의 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 아피오스 아메리카나 괴경의 에탄올 추출물의 에탄올 분획물에 대한 설명은 전술한 바와 동일하므로, 그 기재를 생략한다.
상기 화장료 조성물은 기능성 화장품의 유효성분으로 사용될 수 있는데, 상기 기능성 화장품에 포함되는 상기 발효물의 함량은 특별히 제한되지 않으나 일 예로서, 0.01 내지 99.9 중량(w/w)%가 될 수 있다.
본 발명의 기능성 화장품은 상기 분획물을 유효성분으로 포함하고, 통상적으로 사용되는 화장료를 추가로 함유할 수 있는데, 예를 들면 수용성 스킨제제화를 위하여 글리세롤, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 솔비톨, 폴리에틸렌글리콜, 카르복시비닐 폴리머, 잔탄검, 카르복시메틸셀룰로오스, 하이드록시에틸셀룰로오스, 하이드록시메틸셀룰로오스, 로커스트빈검, 알란토인, 카라기난 등을 첨가할 수 있으며; 점도와 경도조절제로 밀납, 파라핀 왁스, 스테아릴알콜, 카르나우바 왁스, 칸데릴라 왁스 및 칼슘스테아레이트, 알루미늄스테아레이트, 아연스테아레이트, 위치하젤(witchhazel) 등을 사용할 수 있고; 자외선 흡수제로 부틸메톡시디벤조일메탄, 옥틸메톡시신나메이트 등을 사용할 수 있으며; 안료로는 이산화티탄, 미립자 이산화디탄, 카올린, 나이론 파우다, 탈크, 세리사이트, 마이카, 폴리메틸메타크릴레이트 등의 체질 안료와 황색산화철, 흑색산화철, 적색산화철, 울트라마린, 산화크롬, 수산화크롬 등의 착색안료를 사용할 수 있고; 보습제로 1,3-부틸렌글리콜, 농글리세린, 에틸렌글리콜 등과 키틴, 키토산, 히아론산, 하이알루로닌산, 젖산, 글리콜산 등의 천연보습 물질들을 이용할 수 있으며; 방부제로 파라옥시안식향산 에스테르류, 이미다졸리디닐우레아 등을 사용할 수 있을 뿐만 아니라, 상기한 성분들을 제품특성에 따라 1종 또는 2종이상 혼용 배합할 수도 있다.
상기 기능성 화장품은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.
상기 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
상기 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
상기 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
상기 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
상기 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명은 또한, 아피오스 아메리카나(Apios Americana) 괴경 에탄올 추출물의 에탄올 분획물을 포함하는 염증성 질환의 예방 또는 개선용 사료 조성물을 제공한다.
본 발명의 사료 조성물에 포함되는 아피오스 아메리카나 괴경의 에탄올 추출물의 에탄올 분획물에 대한 설명은 전술한 바와 동일하므로, 그 기재를 생략한다.
상기 사료용 조성물은 사료 첨가제를 포함할 수 있다. 본 발명의 사료첨가제는 사료관리법상의 보조사료에 해당한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "사료"는 동물이 먹고, 섭취하며, 소화시키기 위한 또는 이에 적당한 임의의 천연 또는 인공 규정식, 한끼식 등 또는 상기 한끼식의 성분을 의미할 수 있다.
상기 사료의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 사료를 사용할 수 있다. 상기 사료의 비제한적인 예로는, 곡물류, 근과류, 식품 가공 부산물류, 조류, 섬유질류, 제약 부산물류, 유지류, 전분류, 박류 또는 곡물 부산물류 등과 같은 식물성 사료; 단백질류, 무기물류, 유지류, 광물성류, 유지류, 단세포 단백질류, 동물성 플랑크톤류 또는 음식물 등과 같은 동물성 사료를 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상을 혼합하여 사용될 수 있다.
본 발명의 염증성 질환 또는 알코올성 위염의 예방 또는 치료 방법에 있어서, 용어 "개체"는 임의의 동물 (예를 들어, 인간, 말, 돼지, 토끼, 개, 양, 염소, 비-인간 영장류, 소, 고양이, 기니피그 또는 설치류)을 포함하지만 이에 한정되지는 않는다. 이러한 용어는 특정 연령 또는 성별을 나타내지 않는다. 따라서, 여성/암컷이든 남성/수컷이든, 성인/성체 및 신생 대상체, 뿐만 아니라 태아가 포함되도록 의도된다. 환자는 질환 또는 장애에 걸린 대상체를 지칭한다. 환자라는 용어는 인간 및 수의학 대상체를 포함한다.
특히, 본 발명의 알코올성 위염의 예방 또는 치료 방법에 있어서, 용어 "이를 필요로 하는 개체"는 건강한 정상 개체를 포함할 수 있다. 예를 들어, 알코올성 위염을 예방하기 위한 목적으로 음주 전후에 아피오스 아메리카나 괴경 에탄올 추출물의 에탄올 분획물을 포함하는 조성물을 섭취하는 것이 가능하므로, 용어 "이를 필요로 하는 개체"는 건강한 정상 개체 또는 알코올성 위염이 유도되지 않은 개체를 포괄하는 것으로 해석되어야 한다.
본 발명의 염증성 질환 또는 알코올성 위염의 예방 또는 치료 방법에 있어서, 아피오스 아메리카나 괴경 에탄올 추출물의 에탄올 분획물의 효과 및 이의 투여 경로, 투여 횟수, 투여량 등을 포함하는 구성에 대한 설명은 전술한 바와 동일하므로, 그 기재를 생략한다.
본 발명은 또한, 다음의 단계를 포함하는 아피오스 아메리카나 괴경 추출물의 분획물 제조방법을 제공한다:
a) 아피오스 아메리카나(Apios Americana) 괴경을 분쇄하는 단계;
b) 분쇄물 중량 대비 1 내지 15배수의 50(v/v)% 내지 90(v/v)% 에탄올을 분쇄물에 투입하는 단계;
c) 20℃내지 80℃에서 1시간 내지 30시간 동안 추출하여 추출물을 제조하는 단계; 및
d) 수득된 추출물을 물 및 에탄올로 계통 분획하는 단계.
본 발명의 제조방법에 있어서, 상기 a) 단계의 아피오스 아메리카나 괴경은 자연건조 또는 열풍건조 방법 등과 같이 통상적인 건조방법을 통해 건조한 것일 수 있다.
본 발명의 조성물에 있어서, 상기 b) 단계에서 아피오스 아메리카나 괴경을 추출하는데 사용되는 추출 용매의 종류는 에탄올이다. 에탄올을 이용한 추출 (즉, 주정추출)은 식품 가공상 가장 친환경적이며 경제적인 추출방법이다. 바람직하게는 50(v/v)% 내지 90(v/v)% 에탄올, 보다 바람직하게는 60(v/v)% 내지 80(v/v)% 에탄올, 가장 바람직하게는 65(v/v)% 내지 75(v/v)% 에탄올을 추출 용매를 사용할 수 있다.
본 발명의 제조방법에 있어서, 상기 c) 단계의 추출물을 추출하는 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다. 상기 추출 방법의 비제한적인 예로는, 침지 추출법, 열수 추출법, 초음파 추출법, 여과법, 환류 추출법 등을 들 수 있으며, 이들은 단독으로 수행되거나 2 종 이상의 방법을 병용하여 수행될 수 있다. 본 발명의 구체적인 일실시예에서는 침지 추출을 이용하여 추출물을 제조하였다.
본 발명의 제조방법은 상기 용매 및 추출방법을 사용하여 아피오스 아메리카나 괴경을 1회 이상 추출함으로써 용매 추출물을 제조할 수 있으며, 상기 용매 추출물을 감압 증류한 후 동결 건조 또는 분무 건조하여 얻은 건조 추출물을 제조할 수 있다.
본 발명의 제조방법에 있어서, 상기 d) 단계의 계통 분획은 플래쉬 크로마토그래피 (Flash chromatography)로 수행될 수 있고, 바람직하게는 약한 염기성 음이온 교환 수지, 예를 들어 다이아 이온 HP20 수지로 충진된 컬럼을 이용하여 플래쉬 크로마토그래피로 수행될 수 있다.
본 발명의 제조방법에 있어서, 상기 d) 단계의 에탄올은 5(v/v)% 내지 35(v/v)% 농도의 에탄올, 10(v/v)% 내지 30(v/v)% 에탄올, 가장 바람직하게는 15(v/v)% 내지 25(v/v)% 에탄올일 수 있다.
본 발명의 제조방법으로 제조된 분획물은 2′-하이드록시-5-메톡시제니스테인-7,4′-O-β-D-디글루코피라노사이드, 2′-하이드록시제니스테인-7,4′-O-β-D-디글루코피라노사이드, 2′-하이드록시제니스테인-7-O-β-D-젠티오비오사이드 및 7,2′,4′-트리하이드록시-5-메톡시이소플라본-4′-O-β-D-글루코피라노사이드로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 포함하며, 이들 4종의 유효 화합물이 고농도로 함유되어 우수한 항염 활성을 나타낸다.
또한, 우수한 항염 활성을 바탕으로 다양한 NO 매개 염증성 질환 및 알코올성 위염의 예방, 개선 또는 치료에 탁월한 효과를 나타낸다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
[실시예 1]
아피오스 아메리카나 괴경 추출물의 NO 생성 억제 활성 확인
1-1. 아피오스 아메리카나 괴경 추출물 제조
본 발명에서 사용한 아피오스 아메리카나 괴경(Apios Americana tuber)은 경상남도 사천시 농장에서 구입하였다. 건조된 아피오스 아메리카나 괴경 8.5kg을 분쇄한 후, 85L의 70(v/v)% 에탄올로 40℃에서 15시간 2회 반복하여 침지 추출하였다. 추출물을 여과지에 여과한 후 여과액을 회전감압농축기를 이용하여 농축 및 건조하였고, 최종적으로 건조된 아피오스 아메리카나 괴경 추출물 1.7kg을 수득하였다.
1-2. NO 생성 억제 활성 확인
상기 실시예 1-1에서 제조된 아피오스 아메리카나 추출물의 NO 생성 억제 활성을 LPS-유도 RAW 264.7 세포에서 평가하였다.
LPS-유도 RAW 264.7 세포 (한국세포주은행)를 0.9 × 105 세포/mL의 밀도로 96-웰 플레이트에 도말하고 24시간 동안 배양하였다. 배양 배지에서 NO 생성의 지표인 축적된 아질산염을 그리스 시약(Griess reagent)에 따라 측정하였다.
구체적으로, 배양 상등액을 그리스 시약과 10분 동안 혼합한 다음 540nm에서의 흡광도를 마이크로플레이트 판독기(Molecular Devices Inc., USA)에서 측정하였다. 신선한 배양 배지를 모든 실험의 블랭크로 사용하였고, l-N 6-(1-이미노에틸)-리신 (NIL)은 양성 대조군으로 사용하였으며, 시료 중의 아질산염 양은 아질산 나트륨 표준 곡선을 참조하여 결정되었다.
그 결과 도 2에서 확인되는 바와 같이 아피오스 아메리카나 괴경 추출물은 >100 μg/ml의 IC50 값을 나타냈다.
[실시예 2]
아피오스 아메리카나 추출물의 유효 화합물 분리
상기 실시예 1-1에서 수득된 아피오스 아메리카나 괴경 추출물 중 300g을 취하여 증류수에 현탁시키고, 극성도에 따라 순차적으로 노르말헥산, 에틸아세테이트, 노르말부탄올 순으로 용매분획을 실시하여 노르말헥산(1.2 g), 에틸아세테이트(4.9 g), 노르말부탄올(28.0 g) 분획물을 수득하였다. 이 중 노르말부탄올 분획물 25 g을 플래쉬 크로마토그래피 시스템을 이용하여 Diaion HP-20 수지(Supelco, USA)가 충진된 SNAP 340 g 카트리지(물-메탄올, 100:0-0:100)로 분리하였으며, 14개의 하위 분획물(B01-B14)을 수득하였다. 그 후 하위 분획 B08(2.1 g)을 플래쉬 크로마토그래피 시스템(Biotage, Selekt, Sweden)으로 SNAP Ultra C18 120 g 카트리지(Biotage, Sweden) 두개를 연결하여 분리하였으며(물-메탄올, 90:10-60:40), 18개의 하위 분획물(B0801-B0818)을 수득하였다. 그 중 하위 분획 B0803(44.0 mg)을 Sephadex LH-20 수지(MilliporeSigma, USA)가 충진된 SNAP 10 g 카트리지 4개를 연결하여 플래쉬 크로마토그래피 시스템으로 분리하였고(물-메탄올, 30:70), 화합물 1(2.8 mg)을 수득하였다. 화합물 2(16.0 mg)와 화합물 3(98.9 mg)은 각각 하위 분획 B0804와 B0807에서 침전되어 이를 여과하여 수득하였다. 또한, 하위 분획 B0812(48.1 mg)을 플래쉬 크로마토그래피 시스템으로 SNAP Ultra C18 30 g 카트리지를 이용하여 분리하였고(물-메탄올, 75:25), 화합물 4(4.3 mg)를 수득하였다.
상기 분리된 화합물은 NMR (1H 및 13C NMR) 및 LC/MS을 포함한 분광 분석 데이터와 기존의 보고된 논문 데이터를 비교 후 2′-하이드록시-5-메톡시제니스테인-7,4′-O-β-D-디글루코피라노사이드 (2′-hydroxy-5-methoxygenistein-7,4′-O-β-D-diglucopyranoside; 화합물 1), 2′-하이드록시제니스테인-7,4′-O-β-D-디글루코피라노사이드 (2′-hydroxygenistein-7,4′-O-β-D-diglucopyranoside; 화합물 2), 2′-하이드록시제니스테인-7-O-β-D-젠티오비오사이드 (2′-hydroxygenistein-7-O-β-D-gentiobioside; 화합물 3)(Ichige, M.; Fukuda, E.; Miida, S.; Hattan, J.-i.; Misawa, N.;Saito, S.; Fujimaki, T.; Imoto, M.; Shindo, K. J. Agric. Food Chem. 2013, 61, 21832187.)임을 확인하였고, 화합물 4는 신규 구조로 7,2′,4′-트리하이드록시-5-메톡시이소플라본-4′-O-β-D-글루코피라노사이드(7,2′,4′-trihydroxy-5-methoxyisoflavone-4′-O-β-D-glucopyranoside; 화합물 4)로 동정하였다.
각 화합물의 구조는 다음과 같다.
[화합물 1]
Figure PCTKR2020007962-appb-I000001
[화합물 2]
Figure PCTKR2020007962-appb-I000002
[화합물 3]
Figure PCTKR2020007962-appb-I000003
[화합물 4]
Figure PCTKR2020007962-appb-I000004
화합물 1 내지 4의 각 NMR 데이터는 다음과 같다.
Figure PCTKR2020007962-appb-I000005
Figure PCTKR2020007962-appb-I000006
Figure PCTKR2020007962-appb-I000007
Figure PCTKR2020007962-appb-I000008
[실시예 3]
유효 화합물 4종의 NO 생성 억제 활성 확인
상기 실시예 2에서 확인된 4종의 유효 화합물의 항염 활성을 평가하기 위해, 실시예 1-2와 동일한 방법으로 각 화합물의 처리에 따른 NO 생성 억제 활성을 확인하였다.
그 결과, 표 1에서 확인되는 바와 같이 각 4종의 화합물은 모두 0.42 내지 0.71 μM의 IC50을 나타내어 우수한 항염 활성을 나타냈다.
시료 IC50 (μM)
화합물 1 (2′-하이드록시-5-메톡시제니스테인-7,4′-O-β-D-디글루코피라노사이드) 0.42
화합물 2 (2′-하이드록시제니스테인-7,4′-O-β-D-디글루코피라노사이드) 0.71
화합물 3 (2′-하이드록시제니스테인-7-O-β-D-젠티오비오사이드) 0.60
화합물 4 (7,2′,4′-트리하이드록시-5-메톡시이소플라본-4′-O-β-D-글루코피라노사이드) 0.47
[실시예 4]
아피오스 아메리카나 괴경 분획물의 NO 생성 억제 활성 확인
4-1. 아피오스 아메리카나 괴경 분획물의 제조
실시예 3에서 확인된 우수한 항염 활성을 나타내는 4종의 화합물을 주요 성분으로 함유하는 분획물을 제조하기 위해, 실시예 1-1에서 제조된 아피오스 에탄올 추출물 중 시료 20.0g을 취하여 Diaion HP20 수지를 충진제로 하여 제작한 카트리지 컬럼에 로딩하고 이를 플래쉬 크로마토그래피 시스템에 적용하여 이동상 용매조성을 달리한 3가지 종류의 아피오스 아메리카나 분획물을 최종적으로 제조하였다. 플래쉬 크로마토그래피 시스템은 하기 표 2의 조건으로 수행하였으며, 이동상의 용매조성에 따른 용출량, 수득량 및 수득률은 표 3에 나타내었다.
구분 상세 내용
컬럼 Diaion HP20 수지로 충진된 수동 패킹된 SNAP 건조 로드 카트리지 (340g 스케일, Biotage)
이동상 A: 물B: 에탄올
유속 50ml/분
번호 분획물 이동상 용매 조성(A)물:(B)에탄올 이동상용출량(ml) 수득량(mg) 수득률(%)
1 100(v/v)% 물 분획물 100:0 6000 16960.8 84.8
2 20(v/v)% 에탄올 분획물 80:20 6000 795.8 4.0
3 100(v/v)% 에탄올 분획물 0:100 6000 1196.4 6.0
4-2. NO 생성 억제 활성 확인
실시예 1-2와 동일한 방법으로 분획물 처리에 따른 NO 생성 억제 활성을 확인하였다.
그 결과, 도 3 및 표 4에서 확인되는 바와 같이 20(v/v)% 에탄올 분획물의 IC50값이 38.52±9.16μg/ml을 나타내어 우수한 항염 활성을 갖는다는 것을 확인하였다.
시료 IC50 (μg/ml)
100(v/v)% 물 분획물 >100
20(v/v)% 에탄올 분획물 38.52±9.16
100(v/v)% 에탄올 분획물 >100
[실시예 5]
아피오스 아메리카나 괴경 추출물 및 이의 분획물의 UHPLC 분석
실시예 1과 3에서 제조된 추출물 및 이의 분획물에 대한 UHPLC 분석을 하기 표 5 및 6의 조건으로 수행하였고, 분석결과는 크로마토그램의 Y축 스케일에 따라 각각 도 3 내지 6에 나타내었다.
구분 상세내용
UHPLC 시스템 Waters Acquity H class plus UPLC system
컬럼 ACQUITY UPLC CSHTM C18 컬럼 (2.1 x 100mm, 1.7μm)
이동상 A: 물에 용해시킨 0.1% 포름산B: 아세토니트릴
주입 용량 2.0 μl
컬럼 온도 35℃
샘플 농도 2.0 mg/ml
시간 (분) 유속(μl/min) A(%) B(%)
시작 300 95.0 5.0
15.00 300 75.0 25.0
17.50 300 0.0 100.0
20.00 300 0.0 100.0
도 4는 모든 시료를 동일한 스케일로 나타낸 것으로, 아피오스 아메리카나 괴경 에탄올 추출물(A)에서 전분 등 비활성 일차 대사산물이 차지하는 비율이 높아, 활성분획인 20(v/v)% 에탄올 분획물(C)에 포함된 항염증 활성을 갖는 유효성분에 대한 피크가 매우 약하게 나타나는 것을 확인할 수 있다. 100(v/v)% 물 분획물(B)의 경우 원시료인 에탄올 추출물(A) 내에서 차지하는 비율이 매우 높지만(무게 수율: 84.8(w/w)%), 물에 녹아서 용출되는 비활성 물질들이 대부분이며, UV 발색단이 없는 물질들로서 HPLC 검출기(UV detector) 상에 나타나지 않았다. 이는 100(v/v)% 물 분획물에서 비활성 물질들이 용출되어 제거되었음을 의미한다. 20(v/v)% 에탄올 분획물(C)에는 유효 화합물이 대부분 잘 포함되어(trapping) 있음을 확인할 수 있으며, 100(v/v)% 에탄올 분획물(D)에는 비활성 화합물들이 녹아 용출되었음을 확인할 수 있다.
도 5는 모든 시료를 풀 스케일(full scale)로 나타낸 것으로, 추출물 및 각 분획물의 특성을 잘 확인할 수 있는데, 에탄올 추출물(A)에 포함된 활성 화합물들이 20(v/v)% 에탄올 분획물(C)에 대부분 포함되어 있음을 확인할 수 있고, 100(v/v)% 물 분획물(B)의 경우 스케일이 너무 확대되어 실제와 달리 과장되어 보임을 확인할 수 있다. 이때, 20(v/v)% 에탄올 분획물(C)에 포함된 활성 화합물은 화합물 1 내지 4로 확인되었으며, 이들 4종의 활성 화합물이 높은 함량으로 포함되어 우수한 항염 효과 및 알코올성 위염의 예방 또는 치료 효과를 나타내는 것으로 판단된다.
도 6은 에탄올 추출물(A)만 풀 스케일로 나타내고, 나머지 각 분획물은 동일한 스케일로 나타내어 비교한 것으로, 원시료인 에탄올 추출물로부터 크로마토그래피를 통해 각 분획의 특성을 용이하게 확인할 수 있다.
[실시예 6]
20(v/v)% 에탄올 분획물의 알코올성 위염 개선 효과 확인
본 실시예에서는 4종의 유효 화합물을 고농도로 포함하며, NO 억제 활성이 가장 우수한 것으로 확인된 20(v/v)% 에탄올 분획물을 이용하여 알코올성 위염 개선 효과를 평가하였다.
6-1. 실험군 설정 및 시료 투여
7주령의 C57BL/6 마우스를 두열바이오테크로부터 구입하였다. 23℃에서 명/암 주기를 12시간 간격으로 설정하고, 식이와 물을 자유롭게 공급하여 1 주일간 기본식이로 적응시켰다.
마우스를 표 7과 같이 4 그룹으로 나누어 실험을 진행하였다.
실험군 (n=6) 실험시료
정상 대조군 -
위염 유발군 80% EtOH/150 mM HCl
20% EtOH 분획물처리군 80% EtOH/150 mM HCl + 20% EtOH 분획물 50 mg/kg/day
80% EtOH/150 mM HCl + 20% EtOH 분획물 200 mg/kg/day
7일간 에탄올 분획물을 농도별 (50 mg/kg/day 또는 200 mg/kg/day)로 마우스에게 경구투여하였고, 12시간 절식 후 HCl/EtOH로 위염을 유도하였다. 실험동물을 12시간 절식시킨 후 실험시료를 에탄올(5.0g/kg)로 용해하여 1회 경구투여하고, 1시간 후에 에테르 마취하여 개복 후 심장 채혈 및 위 조직을 적출하였다.
6-2. 위 조직 손상의 관찰
각 군에서 적출한 위 조직을 고정하여 손상된 범위 및 손상 정도를 관찰하였다. 도 7a에 나타난 바와 같이 HCl/EtOH만 투여한 위염 유발군의 경우, 위 조직의 염증, 출혈, 발적 및 부종이 발생하여 위 점막이 손상되었고, 손상 부위 면적 또한 매우 넓었다. 이러한 위 조직 손상은 20(v/v)% 에탄올 분획물을 처리한 실험군에서 농도 의존적으로 눈에 띄게 회복되었다.
6-3. 위 조직의 조직병리학적 평가
조직병리학적 분석을 위해 10% NBF에 24시간 동안 조직을 고정하였다. 파라핀 포매 (embedding) 후, 3-4 μm 절편을 준비하고 광학 현미경으로 검사하기 위해 헤마톡실린&에오신 (H&E) 염색 및 PAS 염색을 수행하였다. 도 7b 및 7c에 나타난 바와 같이 위 점막의 손상도 및 형태학적 변형이 정상군과 유사한 수준으로 개선되었음을 확인하였다. 또한, 위염 유발군에서는 HCl/EtOH에 의해 점막을 보호하는 점액층이 손실되었으나, 분획물 투여군에서는 뚜렷하게 염색된 점액층을 확인할 수 있었다.
6-4. 위 조직의 염증 발생 면적 분석
각 실험군의 궤양 지수 (Ulceration Index)를 평가하기 위해, 위 조직을 분리하였고 위 내부 점막은 0.9% NaCl로 세척하여 전개한 뒤 광학디지털 카메라를 이용하여 촬영하였고 손상 면적 측정은 image J 프로그램을 이용하여 계산하였다.
도 7d 및 7e에서 확인되는 바와 같이, 위염 유발군은 HCl/EtOH 자극으로 인한 위 점막 손상으로 16.736±3.70의 높은 궤양 지수를 나타냈으나, 에탄올 분획물 처리군에서는 농도 의존적으로 점막 손상 정도가 유의하게 감소되었으며, 특히 200 mg/kg/day 농도에서는 60% 이상의 개선 효과를 나타내었다.

Claims (29)

  1. 아피오스 아메리카나(Apios Americana) 괴경 에탄올 추출물의 에탄올 분획물을 포함하는 항염 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 에탄올 추출물은 50(v/v)% 내지 90(v/v)% 에탄올을 추출 용매로 하여 수득한 것인, 항염 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 에탄올 분획물은 50(v/v)% 내지 90(v/v)% 에탄올 추출물을 5(v/v)% 내지 35(v/v)% 에탄올로 분획하여 수득한 것인 항염 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 2′-하이드록시-5-메톡시제니스테인-7,4′-O-β-D-디글루코피라노사이드, 2′-하이드록시제니스테인-7,4′-O-β-D-디글루코피라노사이드, 2′-하이드록시제니스테인-7-O-β-D-젠티오비오사이드 및 7,2′,4′-트리하이드록시-5-메톡시이소플라본-4′-O-β-D-글루코피라노사이드로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 화합물을 포함하는, 항염 조성물.
  5. 항염제의 제조 시 아피오스 아메리카나(Apios Americana) 괴경 에탄올 추출물의 에탄올 분획물의 용도.
  6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 항염 조성물을 포함하는, 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  7. 제6항에 있어서, 상기 염증성 질환은 일산화질소(NO) 매개 염증성 질환인, 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  8. 제7항에 있어서, 상기 일산화질소(NO) 매개 염증성 질환은 부종, 피부염, 알레르기, 아토피, 천식, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위궤양, 위염, 크론병, 대장염, 치질, 통풍, 강직성 척추염, 류마티스 열, 루프스, 섬유근통(fibromyalgia), 건선관절염, 골관절염, 류마티스관절염, 견관절주위염, 건염, 건초염, 근육염, 간염, 방광염, 신장염, 쇼그렌 증후군(sjogren's syndrom) 및 다발성 경화증으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  9. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 항염 조성물을 포함하는, 염증성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  10. 제9항에 있어서, 상기 염증성 질환은 일산화질소(NO) 매개 염증성 질환인, 염증성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  11. 제10항에 있어서, 상기 일산화질소(NO) 매개 염증성 질환은 부종, 피부염, 알레르기, 아토피, 천식, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위궤양, 위염, 크론병, 대장염, 치질, 통풍, 강직성 척추염, 류마티스 열, 루프스, 섬유근통(fibromyalgia), 건선관절염, 골관절염, 류마티스관절염, 견관절주위염, 건염, 건초염, 근육염, 간염, 방광염, 신장염, 쇼그렌 증후군(sjogren's syndrom) 및 다발성 경화증으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 염증성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  12. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 항염 조성물을 유효량으로 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 염증성 질환의 예방 또는 치료 방법.
  13. 제12항에 있어서, 상기 염증성 질환은 일산화질소(NO) 매개 염증성 질환인, 염증성 질환의 예방 또는 치료 방법.
  14. 제13항에 있어서, 상기 일산화질소(NO) 매개 염증성 질환은 부종, 피부염, 알레르기, 아토피, 천식, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위궤양, 위염, 크론병, 대장염, 치질, 통풍, 강직성 척추염, 류마티스 열, 루프스, 섬유근통(fibromyalgia), 건선관절염, 골관절염, 류마티스관절염, 견관절주위염, 건염, 건초염, 근육염, 간염, 방광염, 신장염, 쇼그렌 증후군(sjogren's syndrom) 및 다발성 경화증으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 염증성 질환의 예방 또는 치료 방법.
  15. 염증성 질환을 예방 또는 치료하기 위한 약제의 제조 시 아피오스 아메리카나(Apios Americana) 괴경 에탄올 추출물의 에탄올 분획물의 용도.
  16. 제15항에 있어서, 상기 염증성 질환은 일산화질소(NO) 매개 염증성 질환인, 용도.
  17. 제16항에 있어서, 상기 일산화질소(NO) 매개 염증성 질환은 부종, 피부염, 알레르기, 아토피, 천식, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위궤양, 위염, 크론병, 대장염, 치질, 통풍, 강직성 척추염, 류마티스 열, 루프스, 섬유근통(fibromyalgia), 건선관절염, 골관절염, 류마티스관절염, 견관절주위염, 건염, 건초염, 근육염, 간염, 방광염, 신장염, 쇼그렌 증후군(sjogren's syndrom) 및 다발성 경화증으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 용도.
  18. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 항염 조성물을 포함하는 알코올성 위염의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  19. 제18항에 있어서, 상기 알코올성 위염은 알코올에 유도된 급성 위점막 손상, 위궤양, 급성 위염 및 만성 위염으로 이루어진 군으로부터 선택한 1종 이상인 알코올성 위염의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  20. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 항염 조성물을 포함하는 알코올성 위염의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  21. 제20항에 있어서, 상기 알코올성 위염은 알코올에 유도된 급성 위점막 손상, 위궤양, 급성숙취 위염 및 만성 위염으로 이루어진 군으로부터 선택한 1종 이상인 알코올성 위염의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  22. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 항염 조성물을 유효량으로 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 알코올성 위염의 예방 또는 치료 방법.
  23. 제22항에 있어서, 상기 알코올성 위염은 알코올에 유도된 급성 위점막 손상, 위궤양, 급성숙취 위염 및 만성 위염으로 이루어진 군으로부터 선택한 1종 이상인, 알코올성 위염의 예방 또는 치료 방법.
  24. 알코올성 위염을 예방 또는 치료하기 위한 약제의 제조 시 아피오스 아메리카나(Apios Americana) 괴경 에탄올 추출물의 에탄올 분획물의 용도.
  25. 제24항에 있어서, 상기 알코올성 위염은 알코올에 유도된 급성 위점막 손상, 위궤양, 급성숙취 위염 및 만성 위염으로 이루어진 군으로부터 선택한 1종 이상인, 용도.
  26. a) 아피오스 아메리카나(Apios Americana) 괴경을 분쇄하는 단계;
    b) 분쇄물 중량 대비 1 내지 15배수의 50(v/v)% 내지 90(v/v)% 에탄올을 분쇄물에 투입하는 단계;
    c) 20℃내지 80℃에서 1시간 내지 30시간 동안 추출하여 추출물을 제조하는 단계; 및
    d) 수득된 추출물을 물 및 에탄올로 계통 분획하는 단계;
    를 포함하는 항염 활성을 갖는 아피오스 아메리카나 괴경 추출물의 분획물 제조방법.
  27. 제26항에 있어서, 상기 d) 단계의 에탄올은 5(v/v)% 내지 35(v/v)% 농도의 에탄올인 것인 항염 활성을 갖는, 아피오스 아메리카나 괴경 추출물의 분획물 제조방법.
  28. 제26항에 있어서, 상기 d) 단계의 계통 분획은 플래쉬 크로마토그래피 (Flash chromatography)를 이용하여 수행되는, 아피오스 아메리카나 괴경 추출물의 분획물 제조방법.
  29. 제26항에 있어서, 상기 제조방법으로 제조된 분획물은 2'-하이드록시-5-메톡시제니스테인-7,4'-O-β-D-디글루코피라노사이드, 2'-하이드록시제니스테인-7,4'-O-β-D-디글루코피라노사이드, 2'-하이드록시제니스테인-7-O-β-D-젠티오비오사이드 및 7,2',4'-트리하이드록시-5-메톡시이소플라본-4'-O-β-D-글루코피라노사이드로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 포함하는, 아피오스 아메리카나 괴경 추출물의 분획물 제조방법.
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114377044A (zh) * 2021-12-01 2022-04-22 山东省农业科学院 一种芹菜籽提取物的制备方法
KR20230094888A (ko) * 2021-12-21 2023-06-28 한국 한의학 연구원 아피오스 아메리카나 괴경 추출물을 포함하는 알코올성 간 손상 또는 알코올 뇌 손상 보호용 조성물

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20120038321A (ko) * 2010-10-13 2012-04-23 전남과학대학 산학협력단 아피오스를 이용한 화장료 조성물 및 이의 제조방법
KR20150132616A (ko) * 2014-05-15 2015-11-26 주식회사 피토메카 아피오스 추출물 또는 아피오스 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 조성물
KR20190020889A (ko) * 2017-08-22 2019-03-05 안동대학교 산학협력단 아피오스 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈전증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20120038321A (ko) * 2010-10-13 2012-04-23 전남과학대학 산학협력단 아피오스를 이용한 화장료 조성물 및 이의 제조방법
KR20150132616A (ko) * 2014-05-15 2015-11-26 주식회사 피토메카 아피오스 추출물 또는 아피오스 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 조성물
KR20190020889A (ko) * 2017-08-22 2019-03-05 안동대학교 산학협력단 아피오스 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈전증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HYO-YOUNG KIM, JANG KIM, YANGKANG SO, SI-YONG KANG, HYE JEONG, CHANG JIN: "Anti-Inflammatory Effect of Lupinalbin A Isolated from Apios americana on Lipopolysaccharide-Treated RAW264.7 Cells", MOLECULES, vol. 23, no. 3, pages 583, XP055767230, DOI: 10.3390/molecules23030583 *
YOUNG HYE SEO, JU-HYUN JEON, MIRAN JEONG, SEUNG MOK RYU, WON KYUNG JEON, DAE SIK JANG, SANG HEE SHIM, DONGHO LEE, JUNG-HYE CHOI, J: "Chemical Constituents of Apios americana Tubers and Their Inhibitory Activities on Nitric Oxide Production in Lipopolysaccharide-Stimulated RAW 264.7 Macrophages", JOURNAL OF NATURAL PRODUCTS, AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, US, vol. 81, no. 7, 27 July 2018 (2018-07-27), US, pages 1598 - 1603, XP055767231, ISSN: 0163-3864, DOI: 10.1021/acs.jnatprod.8b00182 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114377044A (zh) * 2021-12-01 2022-04-22 山东省农业科学院 一种芹菜籽提取物的制备方法
KR20230094888A (ko) * 2021-12-21 2023-06-28 한국 한의학 연구원 아피오스 아메리카나 괴경 추출물을 포함하는 알코올성 간 손상 또는 알코올 뇌 손상 보호용 조성물
KR102715515B1 (ko) 2021-12-21 2024-10-11 한국 한의학 연구원 아피오스 아메리카나 괴경 추출물을 포함하는 알코올성 간 손상 또는 알코올 뇌 손상 보호용 조성물

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