WO2014065640A2 - 외톨개모자반 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 치료 또는 예방용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 염증성 질환 치료 또는 예방용 조성물에 관한 것으로, 외톨개모자반(Myagropsis myagroides) 추출물 또는 상기 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다. 본 발명의 외톨개모자반 추출물 또는 이의 분획물은 종래 알려진 푸코잔틴(fucoxanthin)이 전혀 함유되어 있지 않음에도 일산화질소(NO), 프로스타글란딘 E₂(prostaglandin E₂, PGE₂) 및 염증성 사이토카인의 생성을 억제할 뿐만 아니라 iNOS 및 COX-2의 발현을 효과적으로 억제하는 효과가 있는 바, 염증성 질환의 예방 및 치료에 유용하게 이용될 수 있다.

Description

외톨개모자반 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 치료 또는 예방용 조성물

본 발명은 염증성 질환 치료 또는 예방용 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 외톨개모자반 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 치료 또는 예방용 조성물에 관한 것이다.

염증은 조직의 손상, 외부의 자극 또는 다양한 감염원에 대한 생체조직의 방어 반응의 하나로, 혈관과 체액 내의 각종 염증 매개 인자 및 다양한 면역 세포의 유기적 상호작용으로 인한 효소 활성화, 염증매개물질 분비, 세포 침윤 및 체액 삼출, 순환 장애, 조직의 변질과 과증식 등 일련의 복합적인 병리 현상이다. 염증반응의 과정은, 초기에 대식세포가 상처부위로 모여들어 침입한 세균을 공격한 후, 상처부위에 혈장이 축적되고 혈류가 증가되어 발열, 홍반, 부종, 통증 현상 등의 외적 증상이 일어나게 된다. 이러한 염증 반응이 지속적으로 또는 과도하게 일어나면 오히려 질환의 주요 병리현상(과민성 알러지 질환, 만성 염증 질환)으로 진행되며, 심각한 이상 장애를 초래하게 된다.

대부분의 염증 질환의 치료제로서 널리 사용되고 있는 제제인 비스테로이드성 소염제(non-steroidal anti-inflammatory drugs, NSAIDS)는 시클로옥시게나제(cyclooxygenase, COX)라고 하는 아라키돈산(arachidonic acid)로부터 프로스타글란딘(prostaglandin)의 생합성에 관여하는 효소 활성을 억제함으로써, 항염증 작용을 나타내는데, 주 치료작용 외에 위장관 장애, 간장애, 신장애 등의 심각한 부작용을 야기하기므로 장기간의 사용에 있어서 제약이 따르는 실정이다(Rajakariar R et al. 2006). 따라서 부작용이 거의 없어 장기간 사용하는데 무리가 없으면서 항염증 효능에 탁월한 새로운 소염 진통제의 개발이 널리 요구되고 있으며, 이는 최근 천연 자원으로부터의 효능 검증을 통한 소재 개발 연구가 활성화 되고 있는 이유이기도 하다.

생체에 있어서 염증의 발생 원인으로서는 다양한 생화학적인 현상이 관여하고 있다. 대식세포(Macrophage)는 다양한 기능을 가진 세포로 화학적 자극에 의하여 여러 가지 사이토카인(cytokine)과 NO를 생성하여 염증반응에서 중요한 역할을 한다. 특히 대식세포에서 지질다당류(lipopolysaccharide; LPS)나 인터페론γ, TNF-α와 같은 사이토카인 자극에 의해 발현되는 유도성 질소산화물 합성효소(iNOS)는 장시간 동안 다량의 질소산화물(NO)을 생산한다. 이러한 산화적 스트레스는 IκB에 의하여 억제되어 있는 염증 반응의 전사인자인 NFκB 활성을 촉진시키는 것으로 알려져 있다. 활성화된 NFκB는 핵으로 이동하여 iNOS, COX-2 및 IL-1β나 TNF-α와 같은 여러 종류의 사이토카인 등 염증반응을 유도하는 유전자 발현을 촉진시키는 것으로 알려져 있으며, 이들 인자들을 저해하면 염증 반응을 억제하는 것으로 알려져 있다(Baeuerle et al., Annu. Rev. Immunol., 12:141-179, 1994).

질소산화물(NO)은 세 가지 주요한 질소산화물 합성효소(NOS) 이성질체인 neuronal NOS(nNOS), endothelial NOS(eNOS), inducible NOS(iNOS)에 의해 L-아르기닌(L-arginine)으로부터 생성된다. nNOS와 eNOS는 Ca2+/칼모듈린(calmodulin)에 의해 조절되지만, iNOS는 인터루킨(interleukin), 인터페론(interferon), LPS와 같은 염증성 자극에 의해 전사 수준에서 조절된다. nNOS나 eNOS에 의해 소량 생성된 NO는 혈관확장, 신경전달, 병원체에 대한 세포파괴 등과 같은 정상적인 생리기능을 담당하지만, 대식세포에서 iNOS에 의해 과다 생성된 NO는 염증과 암을 포함한 다양한 병리생리학적 과정에 관여하며, 수퍼옥사이드(superoxide)와 반응하여 퍼옥시니트라이트(peroxynitrite)를 형성하고 이는 강력한 산화제로 작용하여 세포에 손상을 입히고, 염증성 자극에 의해 활성화된 대식세포에서 NFκB를 활성화시켜 염증반응, 암, 동맥경화 등 만성질환에 관련하는 것으로 알려져 있다(Lawrence et al., Nat Med., 7:1291-1297, 2001; Riehemann et al., FEBS Lett., 442:89-94, 1999;Stamler et al., Science, 258:1898-1902, 1992).

프로스타글란딘은 환상구조를 지닌 20개의 탄소를 포함하고 있는 불포화 지방산 유도체로 주로 만성 염증 질환에 관여하는 화학 전달물질이며 천식 등의 자가면역질환에도 관여한다(Ruf et al., Eur. J. Biochem., 204:1069-1073, 1992). 프로스타글란딘은 COX에 의하여 생합성되는데 이 효소는 COX-1과 COX-2의 두 가지 이성질체가 존재한다(Smith et al., J. Biol. Chem., 271:33157-33160, 1996). COX-1은 위나 신장과 같은 조직에서 일정하게 존재하는 효소로서 정상적인 항상성을 유지하는데 관여하는 반면, COX-2는 염증이나 기타 면역 반응시 세포분열인자나 사이토카인에 의해 세포 내에서 일시적이고 빠르게 발현된다. 급성 혹은 류마티스성 관절염과 같은 만성의 염증 질환의 치료에 사용되는 NSAIDs은 COX-2 효소를 억제할 뿐만 아니라 COX-1 효소도 억제함으로써 앞서 언급한 위장관 장애와 같은 여러 가지 부작용을 나타내는 것으로 알려져 있다(Masferrer et al., P. Natl. Acad. Sci. USA., 91:3228-3232, 1994).

따라서, 종양 괴사 인자(TNF-α)와 질소산화물(NO) 생성을 억제하거나, 프로스타글란딘 생성을 억제하거나, IL-1β의 생성을 억제하는 물질을 탐색하면, 염증 질환 등에 효과적인 물질로 판명할 수 있을 것이다.

한편, 외톨개모자반(Myagropsis myagroides)은 모자반목 모자반과에 속하는 갈조류로 우리나라 남해안과 일본의 전 연안에 서식하고 있으며 주로 사료로 이용되고 있다. 지금까지 외톨개모자반에 대한 연구로는 항균 (Lee et al., 2010), 항고혈압활성(Cha et al., 2006), 간손상보호(Wong et al., 2004), 항혈액응고(Athukorala at al., 2007)등의 효과가 보고되고 있으며, 꽈배기모자반(Heo et al, Food Chem. Toxicol. 50:3336-3342, 2012), 외톨개모자반(Kim et al., Eur. J. Pharmacol. 649:369-75, 2010; Heo et al., Food Chem. Toxicol, 48:2045-51, 2010), 다시마(Lee et al., Eur. J. Nutr. Epub ahead of print, 2012)로부터 분리된 푸코잔틴(fucoxanthin)의 항염증효과가 보고되고 있다. 그러나 푸코잔틴(fucoxanthin)이 함유되지 않은 외톨개모자반 추출물의 항염증 활성에 대해서는 연구가 전무한 상태이다.

본 발명의 목적은 외톨개모자반의 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 치료 또는 예방용 약학적 조성물, 건강기능 식품 및 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

상기의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 일 측면은 외톨개모자반(Myagropsis myagroides) 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 상기의 목적을 달성하기 위하여 본 발명의 다른 측면은 외톨개모자반(Myagropsis myagroides) 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 상기의 목적을 달성하기 위하여 본 발명의 또 다른 측면은 외톨개모자반(Myagropsis myagroides) 추출물, 또는 상기 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능 식품을 제공한다.

아울러, 상기의 목적을 달성하기 위하여 본 발명의 또 다른 측면은 외톨개모자반(Myagropsis myagroides) 추출물, 또는 상기 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 외톨개모자반 추출물 또는 이의 분획물은 종래 알려진 푸코잔틴(fucoxanthin)이 전혀 함유되어 있지 않음에도 일산화질소(NO), 프로스타글란딘 E₂(prostaglandin E₂, PGE₂) 및 염증성 사이토카인의 생성을 억제할 뿐만 아니라 iNOS 및 COX-2이 발현을 효과적으로 억제하는 효과가 있는 바, 염증성 질환의 예방 및 치료에 유용하게 이용될 수 있다.

다만, 본 발명의 효과는 상기에서 언급한 효과로 제한되지 아니하며, 언급되지 않은 또 다른 효과들은 하기의 기재로부터 당업자에게 명확히 이해될 수 있을 것이다.

도 1은 외톨개모자반으로부터 추출물(a) 및 분획물(b)을 수득하는 과정을 나타낸 순서도이다.

도 2는 외톨개모자반의 추출물 내에 포함된 폴리페놀성 화합물의 함량을 측정한 결과를 나타내는 그래프이다.

도 3은 표준물질(푸코잔틴)(a), 외톨개모자반 주정 추출물(b) 및 상기 주정 추출물의 n-헥산 분획물(c) 내에 포함된 푸코잔틴의 함량을 측정한 결과를 나타내는 그래프이다.

도 4는 외톨개모자반 추출물의 세포 독성을 측정한 결과를 나타내는 그래프이다.

도 5는 외톨개모자반 추출물의 일산화질소(NO) 생성 억제 효과를 측정한 결과를 나타내는 그래프이다.

도 6은 외톨개모자반 주정 추출물 및 상기 주정 추출물의 각종 분획물의 세포 독성을 측정한 결과를 나타내는 그래프이다.

도 7은 외톨개모자반 주정 추출물 및 상기 주정 추출물의 각종 분획물의 일산화질소(NO) 생성 억제 효과를 측정한 결과를 나타내는 그래프이다.

도 8은 외톨개모자반 주정 추출물 및 상기 주정 추출물의 n-헥산 분획물의 (a)프로스타글란딘 E₂, (b)TNF-α, (c)IL-1β 및 (d)IL-6 생성 억제 효과를 측정한 결과를 나타내는 그래프이다.

도 9는 외톨개모자반 주정 추출물 및 상기 주정 추출물의 n-헥산 분획물의 (a)iNOS와 COX-2의 단백질 발현 및 (b)iNOS와 COX-2의 mRNA 발현 억제 효과를 측정한 결과를 나타내는 그래프이다.

도 10은 외톨개모자반 주정 추출물 및 상기 주정 추출물의 n-헥산 분획물의 NF-κB 활성 억제 효과를 측정한 결과를 나타내는 그래프이다.

도 11은 외톨개모자반 주정 추출물 및 상기 주정 추출물의 n-헥산 분획물의 NF-κB 핵 이동 억제 효과를 confocal 현미경으로 관찰한 사진이다.

도 12는 외톨개모자반 주정 추출물 및 상기 주정 추출물의 n-헥산 분획물의 NF-κB 핵 이동 관련 단백질의 발현 억제 효과를 측정한 결과를 나타내는 그래프이다.

도 13은 외톨개모자반 주정 추출물 및 상기 주정 추출물의 n-헥산 분획물의 MAPKs 및 Akt 단백질의 활성화 억제 효과를 측정한 결과를 나타내는 그래프이다.

먼저, 본 발명의 명세서에서 이용된 용어를 설명한다.

본 발명에서 사용되는 용어 '염증'이란 외부 감염원(박테리아, 곰팡이, 바이러스, 다양한 종류의 알레르기 유발물질)의 침입에 의하여 형성되는 농양의 병리적 상태를 뜻한다.

본 발명에서 사용되는 용어 '예방'은 본 발명의 조성물의 투여로 염증성 질환을 억제시키거나 진행을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.

본 발명에서 사용되는 용어 '개선' 및 '치료'는 본 발명의 조성물의 투여로 염증성 질환의 증상이 호전 또는 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.

본 발명에서 사용되는 용어 '투여'는 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.

본 발명에서 사용되는 용어 '개체'는 본 발명의 조성물을 투여하여 염증성 질환의 증상이 호전될 수 있는 질환을 가진 인간, 원숭이, 개, 염소, 돼지 또는 쥐 등의 모든 동물을 의미한다.

본 발명에서 사용되는 용어 '약학적으로 유효한 양'은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜 또는 위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 이는 개체의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시에 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

1. 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물

본 발명의 일 측면은 외톨개모자반(Myagropsis myagroides) 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명의 다른 측면은 외톨개모자반(Myagropsis myagroides) 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 약학적 조성물은 염증성 질환의 예방, 개선 또는 치료 용도에 관한 것으로서, 외톨개모자반(Myagropsis myagroides)의 추출물 또는 외톨개모자반 추출물의 분획물을 포함한다.

상기 외톨개모자반 추출물은 당업계에 공지된 다양한 추출방법에 의해 수득될 수 있다. 바람직하게, 상기 외톨개모자반 추출물은 이에 한정되지는 아니하나, 1)외톨개모자반(Myagropsis myagroides)에 추출용매를 가하고 추출하여 추출액을 수득하는 단계; 2)상기 단계 1)에서 수득된 추출액을 여과하여 여과액을 수득하는 단계; 및 3)상기 단계 2)에서 수득된 여과액을 감압농축 및 건조하여 추출물을 수득하는 단계를 포함하는 제조방법에 의하여 제조될 수 있다.

상기 단계 1)의 외톨개모자반은 자연재배된 것 또는 양식된 것이 모두 이용될 수 있고, 부위에 상관없이 건조시켜 이용하는 것이 바람직하다. 특히, 상기 외톨개모자반을 건조시켜 이용하는 경우, 상기 건조물은 상기 추출용매와 반응하는 표면적이 넓도록 절단 또는 분쇄된 것이 바람직하다.

상기 단계 1)의 추출용매는 당업계에서 통상적으로 이용되는 모든 종류의 용매가 이용될 수 있으나, 상기 단계 1)의 추출용매는 물, 유기용매 또는 이들의 혼합물이 이용되는 것이 바람직하다. 단계 1)의 추출용매는 C₁ 내지 C₄의 저급 알코올인 것이 바람직하고, 단계 1)의 추출용매는 메탄올 또는 에탄올인 것이 더욱 바람직하며, 상기 단계 1)의 추출용매는 주정인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정되지 아니한다. 또한, 상기 단계 1)의 추출용매는 상기 외톨개모자반 총 중량의 2배 내지 20배를 첨가하여 추출하는 것이 바람직하고, 상기 외톨개모자반 총 중량의 4배 내지 15배를 첨가하여 추출하는 것이 더욱 바람직하고, 상기 외톨개모자반 총 중량의 5배 내지 7배를 첨가하여 추출하는 것이 가장 바람직하나, 이에 한정되지 아니한다.

상기 단계 1)의 추출은 열수 추출법, 중탕 추출법, 초음파 추출법, 환류냉각 추출법, Soxhlet 추출법, Bligh/Dyer 추출법, Stass Otto 추출법 및 Folch 추출법 등 당업계의 통상적으로 이용되는 추출방법이 모두 이용될 수 있다. 또한, 상기 단계 1)의 추출은 부패, 변색 및 변취를 방지하기 위하여 50 ℃ 내지 250 ℃, 바람직하게는 70 ℃ 내지 150 ℃의 온도에서 1시간 내지 12시간, 바람직하게는 3시간 내지 10시간동안 3회 내지 5회 반복하여 수행될 수 있다.

상기 단계 2)의 여과는 당업계에서 통상적으로 이용되는 여과방법이 모두 이용될 수 있고, 여과지를 이용하여 여과될 수 있으나 이에 한정되니 아니한다.

상기 단계 3)의 감압농축은 회전진공농축기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 아니한다. 또한, 상기 단계 3)의 건조는 열풍건조, 진공건조 또는 동결건조를 모두 이용할 수 있으나 이에 한정되지 아니한다.

상기와 같이 수득된 외톨개모자반의 추출물, 바람직하게는 상기 외톨개모자반의 에탄올 추출물, 더욱 바람직하게는 상기 외톨개모자반의 주정 추출물을 추가적으로 분획하여, 상기 '외톨개모자반 추출물의 분획물'을 수득할 수 있다. 상기 '외톨개모자반 추출물의 분획물'은 당업계에 공지된 다양한 분획방법에 의해 수득될 수 있다. 바람직하게, 상기 분획물은 이에 한정되지는 아니하나, 외톨개모자반의 추출물을 물, 바람직하게는 물과 주정의 혼합용액에 현탁시킨 후, 극성을 달리하는 분획용매로 순차 분획함으로써 수득될 수 있다. 상기 분획용매는 n-헥산(n-hexane), 디클로로메탄(dichloromethane), 에틸아세테이트(ethyl acetate) 및 n-부탄올(n-butanol)일 수 있다. 즉, 상기 n-헥산 분획물은 상기 외톨개모자반 추출물에 n-헥산을 가하여 분획함으로써 수득된 분획물이고, 상기 디클로로메탄 분획물은 상기 n-헥산에 의해 분획되고 남은 물층(수용성 분획물)에 디클로로메탄을 가하여 분획함으로써 수득된 분획물이고, 상기 에틸아세테이트 분획물은 상기 디클로로메탄에 의해 분획되고 남은 물층(수용성 분획물)에 에틸아세테이트를 가하여 분획함으로써 수득된 분획물이며, 상기 n-부탄올 분획물은 상기 에틸아세테이트에 의해 분획되고 남은 물층(수용성 분획물)에 n-부탄올을 가하여 분획함으로써 수득된 분획물이다.

상기 외톨개모자반의 추출물 또는 상기 추출물에서 분획된 분획물은 염증성 질환의 치료 또는 예방에 효과가 있다. 특히, 상기 외톨개모자반의 추출물 또는 상기 추출물에서 분획된 분획물은 (1)NF-κB의 발현에 영향을 미치는 ERK(extracellular-regulated protein kinase), JNK(c-Jun NH2-protein kinase), p38 MAPK 및 PI3K/Akt의 신호 전달 경로를 억제(도 13 참조)함과 동시에 (2)NF-κB의 발현에 영향을 미치는 IκB-α의 활성화를 억제(도 12 참조)함으로써, NF-κB의 활성을 억제(도 10 및 도 11 참조)한다. 상기와 같이 활성이 억제된 NF-κB는 iNOS와 COX-2의 발현 억제(도 9 참조) 및 염증성 사이토카인(TNF-α, IL-1β 및 IL-6)의 생성 억제(도 8의 (b) 내지 (d) 참조)를 유도하고, 억제된 iNOS 및 COX-2는 일산화질소(NO)의 생성 억제(도 5 및 도 7 참조) 및 프로스타글란딘 E₂(prostaglandin E₂, PGE₂)의 생성 억제(도 8의 (a) 참조)를 유도한다. 상기와 같은 메커니즘을 통해, 상기 외톨개모자반의 추출물 또는 상기 추출물에서 분획된 분획물은 염증성 질환의 치료 또는 예방에 효과를 나타낸다. 또한, 상기 외톨개모자반의 추출물 또는 상기 추출물에서 분획된 분획물은 충분히 높은 농도에서도 세포 독성을 나타내지 않는 바(도 4 및 도 6 참조), 약학적 용도로서 안전하게 이용될 수 있다. 특히, 염증성 부종 유발 모델 동물에서 대조군에 비해, 상기 외톨개모자반의 추출물 또는 상기 추출물에서 분획된 분획물을 처리한 실험군에서 염증성 부종의 크기(두께)가 감소함을 확인(표 1 참조)함으로써, 본 발명의 외톨개모자반의 추출물 또는 상기 추출물의 분획물이 인 비보(in vivo)에서도 상기와 같은 염증성 질환의 치료 또는 예방 효과를 나타냄을 확인하였다.

상기 약학적 조성물은 상기 외톨개모자반의 추출물 또는 상기 추출물에서 분획된 분획물에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있고, 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 추가적으로 포함할 수 있다. 상기 담체, 부형제 및 희석제는 락토즈(lactose), 덱스트로즈(dextrose), 수크로즈(sucrose), 솔비톨(sorbitol), 만니톨(mannitol), 자일리톨(xylitol), 에리스리톨(erythritol), 말티톨(maltitol), 전분(starch), 아라비아 고무(gum Arabic), 알지네이트(alginate), 젤라틴(gelatin), 칼슘 포스페이트(calcium phosphate), 칼슘 실리케이트(calcium silicate), 셀룰로즈(cellulose), 메틸 셀룰로즈(methyl cellulose), 미정질 셀룰로스(microcrystalline cellulose), 폴리비닐 피롤리돈(polyvinyl pyrolidone), 물(water), 메틸히드록시벤조에이트(methylhydroxybenzoate), 프로필히드록시벤조에이트(propylhydroxybenzoate), 탈크(talc), 마그네슘 스테아레이트(magnesium stearate) 및 광물유(mineral oil) 등일 수 있으나, 이에 한정되지 아니한다. 상기 약학적 조성물이 제제화되는 경우, 일반적으로 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제가 사용될 수 있으나, 이에 한정되지 아니한다.

상기 약학적 조성물은 경구, 직장, 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내 등 다양한 경로로 투여될 수 있고, 바람직하게는 경구투여될 수 있다. 상기 약학적 조성물은 실제 임상 투여 시, 투여 경로에 따라, 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁제 등과 같은 경구투여용 제형, 또는 연고제와 같은 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액와 같은 비경구투여용 제형으로 제형화되어 사용될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제는 상기 분획물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로즈(sucrose), 락토즈(lactose) 또는 젤라틴(gelatin) 등을 섞어 제조될 수 있고, 상기와 같은 단순한 부형제 외에도 마그네슘 스테아레이트(magnesium stearate), 탈크(talc)와 같은 윤활제들도 이용될 수 있다. 경구투여를 위한 액상제제는 상기 분획물에 적어도 하나 이상의 희석제 또는 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등을 섞어 제조될 수 있다. 비경구투여용 제제는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제 등을 섞어 제조될 수 있고, 비수성용제 또는 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜(polyethylene glycol), 올리브 오일(olive oil)과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 특히, 좌제로 제형화되는 경우, 그 기재로서 위텝솔(witepsol), 폴리에틸렌 글리콜(polyethylene glycol), 트윈61(tween 61), 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴(glycerogelatin) 등이 이용될 수 있다.

상기 약학적 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 나이, 상태, 체중, 질병의 정도, 약물의 형태, 투여경로 및 시간에 따라 차이가 있으나, 일반적으로 바람직한 효과를 위한 유효성분의 투여 용량은 0.001 내지 1㎎/㎏, 바람직하게는 0.001 내지 0.1㎎/㎏의 양이 투여되도록 하며, 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정시간 간격으로 1일 수회, 바람직하게는 1회 내지 6회 분할 투여할 수 있다.

2. 염증성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능 식품 또는 화장료 조성물

본 발명의 또 다른 측면은 외톨개모자반(Myagropsis myagroides) 추출물, 또는 상기 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능 식품을 제공한다.

아울러, 본 발명의 또 다른 측면은 외톨개모자반(Myagropsis myagroides) 추출물, 또는 상기 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

상기 외톨개모자반의 추출물 또는 상기 추출물에서 분획된 분획물에 관해서는 상기 "1. 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 " 항목에서 설명한 바와 동일하다. 따라서 이에 관해서는 상기 "1. 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 " 항목의 설명을 원용하여 상세한 설명은 생략하도록 하고, 이하에서는 상기 건강기능 식품 및 화장료 조성물에 특이적인 구성에 대해서만 설명한다.

본 발명의 외톨개모자반의 추출물 또는 상기 추출물의 분획물을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 추출물 또는 분획물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 그의 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 발명의 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.

본 발명의 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 0.01 g 내지 0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 g 내지 0.03 g이다.

상기 외에 본 발명의 추출물 또는 이의 분획물은 여러가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 추출물 또는 분획물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만, 본 발명의 추출물 또는 분획물 100 중량부당 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

본 발명의 외톨개모자반의 추출물 또는 상기 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하여 제조되는 화장품은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조할 수 있다. 유화 제형의 화장품으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 가용화 제형의 화장품으로는 유연화장수가 있다.

적합한 화장품의 제형으로는 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.

또한, 상기 화장품은 본 발명의 추출물 또는 이의 분획물에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예 및 제제예에 의하여 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예 및 제제예는 본 발명의 이해를 돕기 위한 것일 뿐, 본 발명이 하기의 실시예 및 제제예에 의하여 한정되는 것은 아니다.

<실시예 1> 외톨개모자반( Myagropsis myagroides ) 추출물의 제조

도 1의 (a)와 같은 방법으로, 부산광역시 기장군 및 전라남도 완도군에서 채집한 외톨개모자반(Myagropsis myagroides)으로부터 추출물을 수득하였다. 보다 상세하게는 하기와 같다.

<1-1> 메탄올 추출물의 제조

채집한 외톨개모자반(Myagropsis myagroides)을 양지에서 자연건조한 후, 분쇄하여 분말화하였다. 상기 외톨개모자반의 건조 분말 2 ㎏을 각각 10 ℓ의 100% 메탄올에 침지하여 잘 교반한 다음, 70 ℃에서 1시간 내지 5시간 동안 3회 환류냉각 추출한 후, 여과지(와트만사, 미국)로 감압여과하였다. 상기 감압여과된 여과물을 40 ℃에서 진공회전농축기로 감압농축하여 용매를 제거한 후, 남은 잔사를 외톨개모자반 추출물로서 수득하였다.

그 결과, 외톨개모자반의 메탄올 추출물 365.5 g을 수득할 수 있었다.

<1-2> 에탄올 추출물의 제조

상기 실시예 <1-1>과 동일한 방법으로 추출물을 제조하되, 100% 메탄올이 아닌 100% 에탄올을 추출용매로 이용하여 추출하였다.

그 결과, 외톨개모자반의 에탄올 추출물 364.2 g을 수득할 수 있었다.

<1-3> 주정 추출물의 제조

상기 실시예 <1-1>과 동일한 방법으로 추출물을 제조하되, 100% 메탄올이 아닌 에탄올 농도 105%인 발효 주정(우리주정 주식회사, 한국)을 추출용매로 이용하여 추출하였다.

그 결과, 외톨개모자반의 주정 추출물 358.8 g을 수득할 수 있었다.

<1-4> 아세톤 추출물의 제조

상기 실시예 <1-1>과 동일한 방법으로 추출물을 제조하되, 100% 메탄올이 아닌 70% 아세톤을 추출용매로 이용하여 추출하였다.

그 결과, 외톨개모자반의 아세톤 추출물 372.3 g을 수득할 수 있었다.

<실시예 2> 외톨개모자반( Myagropsis myagroides ) 추출물의 분획물 제조

도 1의 (b)와 같은 방법으로, 상기 실시예 1에서 수득한 외톨개모자반(Myagropsis myagroides) 추출물로부터 분획물을 수득하였다. 보다 상세하게는 하기와 같다.

<2-1> n-헥산 분획물의 제조

상기 실시예 <1-3>에서 제조한 외톨개모자반의 주정 추출물 100 g에 n-헥산(n-hexane), 주정, 물이 10 : 9 : 1의 비율로 혼합된 혼합용매 4 ℓ를 가하고, 물층과 n-헥산층이 분리되도록 정치하였다. 충분한 시간이 경과한 후, 상기 혼합물은 2 ℓ의 물층과 2 ℓ의 n-헥산층으로 분리되었다. 상기와 같이 분리된 2 ℓ의 물층에 다시 2 ℓ의 n-헥산을 가하고 정치하여, 2 ℓ의 n-헥산층을 분리해 내는 과정을 3회 반복하였다. 그 결과, 최종적으로 총 8 ℓ의 n-헥산층과 2 ℓ의 물층을 수득하였다.

상기와 같이 분리수득한 8 ℓ의 n-헥산층을 40 ℃에서 진공회전농축기로 감압농축하여 용매를 제거한 후, 남은 잔사 151.1 g을 n-헥산 분획물로서 수득하였다.

<2-2> 디클로로메탄 분획물의 제조

상기 실시예 <2-1>에서 최종적으로 수득한 2 ℓ의 물층에 2 ℓ의 디클로로메탄(dichloromethane)을 가하고 정치하여, 2 ℓ의 디클로로메탄층을 분리해 내는 과정을 3회 반복하였다. 그 결과, 최종적으로 총 6 ℓ의 디클로로메탄층과 2 ℓ의 물층을 수득하였다.

상기와 같이 분리수득한 6ℓ의 디클로로메탄층을 40 ℃에서 진공회전농축기로 감압농축하여 용매를 제거한 후, 남은 잔사 0.8 g을 디클로로메탄 분획물로서 수득하였다.

<2-3> 에틸아세테이트 분획물의 제조

상기 실시예 <2-2>에서 최종적으로 수득한 2 ℓ의 물층에 2 ℓ의 디에틸아세테이트(ethyl acetate)을 가하고 정치하여, 2 ℓ의 에틸아세테이트층을 분리해 내는 과정을 3회 반복하였다. 그 결과, 최종적으로 총 6 ℓ의 에틸아세테이트층과 2 ℓ의 물층을 수득하였다.

상기와 같이 분리수득한 6ℓ의 에틸아세테이트층을 40 ℃에서 진공회전농축기로 감압농축하여 용매를 제거한 후, 남은 잔사 0.8 g을 에틸아세테이트 분획물로서 수득하였다.

<2-4> n-부탄올 분획물의 제조

상기 실시예 <2-3>에서 최종적으로 수득한 2 ℓ의 물층에 2 ℓ의 n-부탄올(n-butanol)을 가하고 정치하여, 2 ℓ의 n-부탄올층을 분리해 내는 과정을 3회 반복하였다. 그 결과, 최종적으로 총 6 ℓ의 n-부탄올층과 2 ℓ의 물층을 수득하였다.

상기와 같이 분리수득한 6ℓ의 n-부탄올층을 40 ℃에서 진공회전농축기로 감압농축하여 용매를 제거한 후, 남은 잔사 0.5 g을 n-부탄올 분획물로서 수득하였다.

<실시예 3> 성분 분석

<3-1> 폴리페놀성 화합물의 함량 측정

상기 실시예 <1-1> 내지 <1-4>에서 각각 수득한 외톨개모자반의 메탄올, 에탄올, 주정 및 아세톤 추출물의 일부를 1N의 폴린-시오칼토 시약(Folin-Ciocalteu reagent)와 먼저 반응시킨 다음, 20%의 탄산나트륨(sodium carbonate)과 반응시켜, 상기 4 종류의 외톨개모자반 추출물 내에 함유된 폴리페놀성 화합물을 함량을 측정하였다. 표준물질로는 플로로글루시놀(phloroglucinol)이 이용되었다.

그 결과, 도2 에 도시된 바와 같이, 외톨개모자반의 아세톤 추출물에서 폴리페놀성 화합물의 양이 다소 높은 것으로 나타났을 뿐, 나머지 3 종류의 외톨개모자반 추출물에서는 상기 폴리페놀성 화합물의 양에 유의적인 차이가 나타나지 않았다(도 2).

<3-2> 푸코잔틴(fucoxanthin)의 함량 측정

상기 실시예 <1-3>과 <2-1>에서 각각 수득한 외톨개모자반 주정추출물과 외톨개모자반 n-헥산 분획물에 함유된 푸코잔틴 성분의 함량을 확인하기 위하여, Shimadzu HPLC 시스템(Kyoto, Japan)으로 HPLC(High performance liquid chromatography)를 수행하였다. 상기 Shimadzu HPLC 시스템(Kyoto, Japan)은 펌프(Shimadzu LC-20AD), 포토다이오드 광선(photodiode array) 검출기(Shimadzu SPD-M20A), 자동시료주입기(SIL-20A), 시스템 콘트롤러 (CBM-20A) 및 Shimadzu LCsolution(ver.1.22sp) 데이터 분석 프로그램으로 구성되었다.

푸코잔틴의 함량 분석을 위하여, 표준물질(푸코잔틴) 및 상기 실시예 <1-3>과 <2-1>에서 각각 수득한 외톨개모자반 주정추출물과 외톨개모자반 n-헥산 분획물을 각각 100 ppm 농도로 메탄올에 녹인 후, 2 마이크로 리터를 HPLC에 부착된 Luna RP-18 column(Luna C18(2), 3 μm, 150 x 3.0 mm, Phenomenex, 캐나다)으로 분리하였다. 분리용매는 100% 메탄올(용매 A)과 0.1% 개미산 수용액(용매 B)를 사용하였다. 먼저, 용매 A/B의 혼합비율을 78:22에서 시작하여 95:5의 비율로 100분 동안 직선농도구배로 분리한 다음, 10분간 95:5의 비율로 흘려준 후, 20분간 78:22 비율의 용매로 평형화시켰다.

그 결과, 도 3의 (a)에 도시된 바와 같이 표준물질인 푸코잔틴은 46분경에 분리된 반면, 도 3의 (b) 및 (c)에 각각 도시된 바와 같이 외톨개모자반 주정추출물 및 외톨개모자반 n-헥산 분획물에서는 46분경에 푸코잔틴에 해당하는 피크가 나타나지 않았다.

상기와 같은 결과로부터, 상기 실시예 <1-3>과 <2-1>에서 각각 수득한 외톨개모자반 주정추출물과 외톨개모자반 n-헥산 분획물에는 푸코잔틴(fucoxanthin)이 존재하지 않음을 알 수 있다.

<실시예 4> 외톨개모자반( Myagropsis myagroides ) 추출물의 세포독성 효과 및 일산화질소(NO) 생성 억제 효과

<4-1> 외톨개모자반 추출물의 처리

아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(ATCC, Rockville, MD, USA)에서 입수한 마우스 대식세포(macrophage) RAW 264.7를 10% 우태아혈청(FBS), 100 units/㎖ 페니실린, 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신을 첨가한 DMEM 배지로 37°C, 5% CO₂ 환경에서 배양하였다.

상기와 같이 배양된 RAW 264.7 세포를 20 웰 플레이트에 5 × 10⁴ 개/웰 또는 1 × 10⁵ 개/웰의 농도로 분주한 후, 서로 다른 농도(0, 25, 50, 100 ㎍/㎖)의 시료들(상기 실시예 <1-1> 내지 <1-4>에서 각각 수득한 외톨개모자반의 메탄올, 에탄올, 주정 및 아세톤 추출물)이 각각 함유된 DMEM 배지로 1시간 동안 배양한 다음, 1 ㎍/㎖의 LPS를 처리하여 24시간 동안 배양하였다.

<4-2> 외톨개모자반 추출물의 세포독성 효과

상기 실시예 <1-1> 내지 <1-4>에서 각각 수득한 외톨개모자반의 메탄올, 에탄올, 주정 및 아세톤 추출물의 안전성을 확인하고자 MTS 분석에 의한 세포독성 실험을 수행하였다.

상기 실시예 <4-1>에서와 같이 외톨개모자반 추출물들이 처리된 RAW 264.7 세포 배양물에서 100 ㎕의 배지를 취하여 5 ㎕의 MTS 용액과 함께 96 웰 플레이트에 각각 분주하여 1시간 동안 반응시킨 다음, 마이크로플레이트 리더(microplate reader)를 이용하여 490 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 측정치는 3회 반복 실험의 평균값으로 결정하였고, 상기와 같이 결정된 측정치를 대조군과 비교를 통해 상대적인 세포 생존율(% of control)을 계산하였다.

그 결과, 도 4에 도시된 바와 같이, 외톨개모자반의 메탄올, 에탄올, 주정 또는 아세톤 추출물 모두 100 ㎍/㎖의 농도까지 세포 독성이 나타나지 않았다(도 4).

<4-3> 외톨개모자반 추출물의 일산화질소(NO) 생성 억제 효과

상기 실시예 <1-1> 내지 <1-4>에서 각각 수득한 외톨개모자반의 메탄올, 에탄올, 주정 및 아세톤 추출물의 일산화질소 생성 억제 효과를 확인하고자, Green LC 등(Anal Biochem.(1982) 126:131-138)의 문헌에 보고된 구체적인 일산화질소 생성량 측정 방법에 따라 실험을 수행하였다.

상기 실시예 <4-1>에서와 같이 외톨개모자반 추출물들이 처리된 RAW 264.7 세포 배양물에서 100 ㎕의 배지를 취하여 96 웰 플레이트에 각각 분주하고, 100 ㎕의 Griess 시약을 각각의 웰에 처리하여 10분 동안 반응시킨 다음, ELISA 리더를 이용하여 540 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 표준농도 곡선은 질산나트륨(sodium nitrite, NaNO₂)을 연속 희석하여 얻었다.

그 결과, 도 5에 도시된 바와 같이, RAW 264.7 세포에서 LPS에 의해 유도된 일산화질소의 생성은 외톨개모자반의 메탄올, 에탄올, 주정 또는 아세톤 추출물에 의하여 농도의존적으로 감소하였고, 특히 외톨개모자반의 메탄올, 에탄올, 주정 및 아세톤 추출물 중에서 외톨개모자반의 주정 추출물이 가장 높은 일산화질소 생성 억제 효율을 나타내었다(도 5).

<실시예 5> 외톨개모자반( Myagropsis myagroides ) 추출물의 분획물의 세포독성 효과 및 일산화질소(NO) 생성 억제 효과

<5-1> 외톨개모자반 추출물의 분획물의 처리

아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(ATCC, Rockville, MD, USA)에서 입수한 마우스 대식세포(macrophage) RAW 264.7를 10% 우태아혈청(FBS), 100 units/㎖ 페니실린, 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신을 첨가한 DMEM 배지로 37°C, 5% CO₂ 환경에서 배양하였다.

상기와 같이 배양된 RAW 264.7 세포를 20 웰 플레이트에 5 × 10⁴ 개/웰 또는 1 × 10⁵ 개/웰의 농도로 분주한 후, 서로 다른 농도(0, 25, 50, 100 ㎍/㎖)의 시료들(상기 실시예 <1-3>에서 수득한 외톨개모자반의 주정 추출물 및 실시예 <2-1> 내지 <2-3>에서 각각 수득한 외톨개모자반 주정 추출물의 분획물)이 각각 함유된 DMEM 배지로 1시간 동안 배양한 다음, 1 ㎍/㎖의 LPS를 처리하여 24시간 동안 배양하였다.

<5-2> 외톨개모자반 추출물의 분획물의 세포독성 효과

상기 실시예 <2-1> 내지 <2-3>에서 각각 수득한 외톨개모자반 추출물의 분획물의 안전성을 확인하고자 MTS 분석에 의한 세포독성 실험을 수행하였다.

상기 실시예 <5-1>에서와 같이 외톨개모자반 추출물의 분획물들이 처리된 RAW 264.7 세포 배양물에서 100 ㎕의 배지를 취하여 5 ㎕의 MTS 용액과 함께 96 웰 플레이트에 각각 분주하여 1시간 동안 반응시킨 다음, 마이크로플레이트 리더(microplate reader)를 이용하여 490 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 측정치는 3회 반복 실험의 평균값으로 결정하였고, 상기와 같이 결정된 측정치를 대조군과 비교를 통해 상대적인 세포 생존율(% of control)을 계산하였다.

그 결과, 도 6에 도시된 바와 같이, 외톨개모자반 추출물의 n-헥산, 디클로로메탄 또는 에틸아세테이트 분획물은 모두 100 ㎍/㎖의 농도까지 세포 독성이 나타나지 않았다(도 6).

<5-3> 외톨개모자반 추출물의 분획물의 일산화질소(NO) 생성 억제 효과

상기 실시예 <2-1> 내지 <2-3>에서 각각 수득한 외톨개모자반 추출물의 분획물의 일산화질소 생성 억제 효과를 확인하고자, Green LC 등(Anal Biochem.(1982) 126:131-138)의 문헌에 보고된 구체적인 일산화질소 생성량 측정 방법에 따라 실험을 수행하였다.

상기 실시예 <5-1>에서와 같이 외톨개모자반 추출물들이 처리된 RAW 264.7 세포 배양물에서 100 ㎕의 배지를 취하여 96 웰 플레이트에 각각 분주하고, 100 ㎕의 Griess 시약을 각각의 웰에 처리하여 10분 동안 반응시킨 다음, ELISA 리더를 이용하여 540 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 표준농도 곡선은 질산나트륨(sodium nitrite, NaNO₂)을 연속 희석하여 얻었다.

그 결과, 도 7에 도시된 바와 같이, RAW 264.7 세포에서 LPS에 의해 유도된 일산화질소의 생성은 외톨개모자반 추출물의 n-헥산, 디클로로메탄 또는 에틸아세테이트 분획물에 의하여 농도의존적으로 감소하였고, 특히 외톨개모자반 추출물의 n-헥산, 디클로로메탄 또는 에틸아세테이트 분획물 중에서 외톨개모자반 추출물의 n-헥산 분획물이 가장 높은 일산화질소 생성 억제 효율을 나타내었다(도 7).

<실시예 6> 외톨개모자반( Myagropsis myagroides ) 주정 추출물 및 주정 추출물의 n-헥산 분획물의 인 비트로(in vitro)에서의 염증 억제 효과 확인

<6-1> 외톨개모자반 주정 추출물 및 주정 추출물의 n-헥산 분획물의 처리

아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(ATCC, Rockville, MD, USA)에서 입수한 마우스 대식세포(macrophage) RAW 264.7를 10% 우태아혈청(FBS), 100 units/㎖ 페니실린, 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신을 첨가한 DMEM 배지로 37°C, 5% CO₂ 환경에서 배양하였다.

상기와 같이 배양된 RAW 264.7 세포를 24 웰 플레이트에 1 × 10⁵ 개/웰의 농도로 분주한 후, 서로 다른 농도(0, 25, 50, 100 ㎍/㎖)의 시료들(상기 실시예 <1-3>에서 수득한 외톨개모자반의 주정 추출물 및 실시예 <2-1>에서 수득한 외톨개모자반 주정 추출물의 n-헥산 분획물)이 각각 함유된 DMEM 배지로 1시간 동안 배양한 다음, 1 ㎍/㎖의 LPS를 처리하여 24시간 동안 배양하였다.

<6-2> 염증성 사이토카인 및 케모카인의 생성 억제 효과 확인

상기 실시예 <1-3>에서 수득한 외톨개모자반의 주정 추출물 및 실시예 <2-1>에서 수득한 외톨개모자반 주정 추출물의 n-헥산 분획물의 염증 억제 효과를 확인하고자 PEG₂ 생성 억제 효과를 확인하였다.

상기 실시예 <6-1>에서와 같이 외톨개모자반 추출물 또는 분획물이 처리된 RAW 264.7 세포 배양물에서 100 ㎕의 배지를 취하여 ELISA 키트(BD Biosciences, 미국)로 상기 배지에 분비된 염증성 사이토카인(cytokine) 및 케모카인(chemokine)인 프로스타글란딘 E₂(prostaglandin E₂, PGE₂), 종양 괴사 인자(tumor necrosis factor-α, TNF-α), 인터루킨-1β(interleukin-1β, IL-1β) 및 인터루킨-6(interleukin-6, IL-6)의 생성량을 각각 측정하였다.

그 결과, 도 8의 (a) 내지 (d)에 도시된 바와 같이, RAW 264.7 세포에서 LPS에 의해 유도된 PEG₂, TNF-α, IL-1β 및 IL-6의 생성은 외톨개모자반의 주정 추출물 및 외톨개모자반 주정 추출물의 n-헥산 분획물에 의하여 농도의존적으로 감소함을 확인하였다(도 8).

<6-3> iNOS 및 COX-2의 단백질 생성 억제 효과 확인

일산화질소(NO) 및 프로스타글란딘 E₂(prostaglandin E₂, PGE₂)의 생성 억제가 각각 iNOS 및 COX-2의 발현 억제에 의한 것인지를 확인하기 위하여, iNOS 및 COX-2 단백질에 대한 외톨개모자반의 주정 추출물 및 외톨개모자반 주정 추출물의 n-헥산 분획물의 영향을 웨스턴 블럿(western blot) 및 RT-PCR을 통해 확인하였다.

그 결과, 도 9의 (a) 및 (b)에 도시된 바와 같이, RAW 264.7 세포에서 LPS에 의해 유도된 iNOS의 발현은 외톨개모자반의 주정 추출물 및 외톨개모자반 주정 추출물의 n-헥산 분획물에 의하여 농도의존적으로 감소하였고, COX-2의 발현은 100 ㎍/㎖ 농도의 외톨개모자반의 주정 추출물 및 외톨개모자반 주정 추출물의 n-헥산 분획물에서 유의적으로 감소하였다(도 9).

상기와 같은 결과로부터 상기 외톨개모자반의 주정 추출물 및 외톨개모자반 주정 추출물은 iNOS의 단백질 발현 과정에 영향을 미쳐, 상기 iNOS의 생성을 억제함으로써, 일산화질소(NO)의 생성을 억제함을 확인하였다.

반면에, 상기 외톨개모자반의 주정 추출물 및 외톨개모자반 주정 추출물의 n-헥산 분획물은 상대적으로 높은 농도에서만 COX-2의 단밸질 발현을 억제한다. 이는 상기 외톨개모자반의 주정 추출물 및 외톨개모자반 주정 추출물의 n-헥산 분획물이 COX-2 단백질의 발현 과정 보다는 COX-2 단백질의 활성화 과정에 영향을 미치기 때문인 것으로 판단된다.

<6-4> NF-κB의 활성화 억제 효과 확인

iNOS, COX-2, TNF-α, IL-1β 및 IL-6의 생성 억제가 NF-κB의 발현 억제에 의한 것인지를 확인하기 위하여, NF-κB의 활성화에 대한 외톨개모자반의 주정 추출물 및 외톨개모자반 주정 추출물의 n-헥산 분획물의 영향을 루시퍼라제 분석(luciferase assay), 면역염색(immunostain) 및 웨스턴 블럿(western blot)으로 확인하였다.

먼저, 루시퍼라제 분석(luciferase assay)은 NF-κB의 프로모터 사이트에 루시퍼라제(luciferase)가 재조합된 재조합 유전자를 상기 실시예 <6-1>과 같이 배양된 RAW 264.7 세포에 형질도입하고 안정화시킨 다음, 상기와 같이 안정화된 세포에 외톨개모자반의 주정 추출물 및 외톨개모자반 주정 추출물의 n-헥산 분획물을 처리 및 배양하여, 세포패쇄액으로부터 인광(luminescence)을 측정함으로써 수행되었다. 그 결과, 도 10에 도시된 바와 같이, RAW 264.7 세포에서 LPS에 의해 유도된 NF-κB 전사인자의 활성화가 외톨개모자반의 주정 추출물 및 외톨개모자반 주정 추출물의 n-헥산 분획물에 의하여 농도의존적으로 억제됨을 확인하였다(도 10).

다음으로, NF-κB가 핵으로 이동함에 있어서, 외톨개모자반의 주정 추출물 및 외톨개모자반 주정 추출물의 n-헥산 분획물이 미치는 영향을 확인하기 위하여, 상기 실시예 <6-1>에서와 같이 10% 우태아혈청(FBS), 100 units/㎖ 페니실린, 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신을 첨가한 DMEM 배지로 37°C, 5% CO₂ 환경에서 배양한 RAW 264.7 세포에 시료들(상기 실시예 <1-3>에서 수득한 외톨개모자반의 주정 추출물 및 실시예 <2-1>에서 수득한 외톨개모자반 주정 추출물의 n-헥산 분획물)이 포함된 DMEM 배지로 1시간 동안 배양한 다음, 1 ㎍/㎖의 LPS를 처리하여 1시간 동안 배양하였다. 상기와 같이 배양된 RAW 264.7 세포를 NF-κB 항체와 DAPI로 면역염색(immunostain)한 다음, 콘포칼(confocal) 현미경으로 NF-κB의 세포내 위치를 관찰하였다. 그 결과, 도 11에 도시된 바와 같이, RAW 264.7 세포에서 LPS에 의해 유도된 NF-κB의 핵으로의 이동은 외톨개모자반의 주정 추출물 및 외톨개모자반 주정 추출물의 n-헥산 분획물에 의하여 억제됨을 확인하였다(도 11).

마지막으로, IκB-α의 인산화 및 NF-κB의 핵으로의 이동에 있어서, 외톨개모자반의 주정 추출물 및 외톨개모자반 주정 추출물의 n-헥산 분획물이 미치는 영향을 확인하기 위하여,

상기 실시예 <6-1>에서와 같이 10% 우태아혈청(FBS), 100 units/㎖ 페니실린, 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신을 첨가한 DMEM 배지로 37°C, 5% CO₂ 환경에서 배양한 RAW 264.7 세포에 시료들(상기 실시예 <1-3>에서 수득한 외톨개모자반의 주정 추출물 및 실시예 <2-1>에서 수득한 외톨개모자반 주정 추출물의 n-헥산 분획물)이 포함된 DMEM 배지로 1시간 동안 배양한 다음, 1 ㎍/㎖의 LPS를 처리하여 30분 동안 배양하였다. 상기와 같이 배양된 RAW 264.7 세포로부터 세포 용해물(cell lysate)를 회수하고, pIκB-α, IκB-α 및 NF-κB 항체를 이용하여 웨스턴 블럿을 수행하였다. 그 결과, 도 12에 도시된 바와 같이, 외톨개모자반의 주정 추출물 및 외톨개모자반 주정 추출물의 n-헥산 분획물에 의하여 세포질에서의 IκB-α의 인산화 및 NF-κB의 핵으로의 이동, 및 핵 내의 NF-κB의 양이 농도의존적으로 억제되었다(도 12).

상기와 같은 결과로부터, 외톨개모자반의 주정 추출물 및 외톨개모자반 주정 추출물의 n-헥산 분획물이 LPS에 의해 유도되는 IκB-α의 인산화 및 분해를 농도의존적으로 억제하고, 순차적으로 NF-κB의 유리화 및 핵으로의 이동을 감소시켜 전사 인자로서의 NF-κB의 기능을 차단한다는 점을 알 수 있다.

<6-5> MAPKs/Akt 경로의 억제 효과 확인

NF-κB의 전사 인자 활성으로 인하여 활성화되는 ERK(extracellular-regulated protein kinase), JNK(c-Jun NH2-protein kinase) 및 p38 MAPK 및 PI3K/Akt에 대한 외톨개모자반의 주정 추출물 및 외톨개모자반 주정 추출물의 n-헥산 분획물의 영향을 웨스턴 블럿(western blot)으로 확인하였다.

그 결과, 도 13에 도시된 바와 같이, 본 발명의 외톨개모자반의 주정 추출물 및 외톨개모자반 주정 추출물의 n-헥산 분획물은 LPS에 의해 RAW 264.7 세포에서 유도된 ERK, JNK, p38 MAOK의 인산화를 비롯하여, PI3K의 하류에 존재하는 Akt의 인산화까지 농도의존적으로 억제하였다.

<실시예 7> 외톨개모자반( Myagropsis myagroides ) 주정 추출물 및 주정 추출물의 n-헥산 분획물의 인 비보(in vivo)에서의 염증 억제 효과 확인

<7-1> 실험동물의 사육

염증 동물 모델로 가장 많이 사용되고 있는 실험동물인, 8주령의 ICR 마우스((주)대한바이오링크)를 온도 20 ℃ 내지 22 ℃, 상대습도 50 % 내지 60 %, 12 시간 간격으로 명암이 조절되는 환경에 적응하도록 순화시켰으며, 육안적 증상을 관찰하여 정상적인 동물만을 선별하여 각 군당 10마리씩 무작위 분배하여 실험에 사용하였다.

<7-2> 실험동물의 사육

상기 실시예 <7-1>과 같이 사육된 실험동물의 오른쪽 귀에 외톨개모자반의 주정 추출물 및 외톨개모자반 주정 추출물의 n-헥산 분획물을 도포하였다. 1시간 경과 후, 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트(phorbol 12-myristate 13-acetate, PMA) 6 ㎍을 30 ㎕의 아세톤 용액에 녹인 후, 상기 실험동물의 오른쪽 귀 및 왼쪽 귀에 도포하였다. 도포 6시간 후, 실험동물을 마취하고 각 귀의 두께를 마이크로미터(micrometer)로 측정하여 부종 지표로서 증가율을 계산하였다. 100 % 부종지수는 MPA만 처리한 군으로 정의하여 상대적인 부종율(% of control)을 제시하였다. 모든 측정 결과는 평균과 표준편차로 나타내었으며, 실험군 간의 차이는 Student's t-test를 사용하여 통계학적 분석을 수행하였으며, p < 0.05 값인 경우에 통계적으로 유의성이 있는 것으로 판정하였다.

그 결과, PMA만 처리한 대조군에 비하여, 외톨개모자반의 주정 추출물을 처리한 군에서 66.8 %, 외톨개모자반 주정 추출물의 n-헥산 분획물을 처리한 군에서 44.8 %의 부종 억제율을 나타내었다(표 1).

표 1

	대조군	추출물 처리 실험군	분획물 처리 실험군
PMA	○	○	○
실시예 <1-3>의 추출물	×	○	×
실시예 <2-1>의 분획물	×	×	○
부종 억제율(%)	100	66.8	44.8

이하, 본 발명의 조성물을 위한 제제예를 예시한다.

<제제예 1> 약학적 제제의 제조

본 발명의 외톨개모자반 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 약학적 제제는 다음과 같이 제조한다.

1. 산제의 제조

<실시예 1>의 추출물 또는 <실시예 2>의 분획물 2g

유당 1g

상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

2. 정제의 제조

<실시예 1>의 추출물 또는 <실시예 2>의 분획물 100㎎

옥수수전분 100㎎

유 당 100㎎

스테아린산 마그네슘 2㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

3. 캡슐제의 제조

<실시예 1>의 추출물 또는 <실시예 2>의 분획물 100㎎

옥수수전분 100㎎

유 당 100㎎

스테아린산 마그네슘 2㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.

4. 환의 제조

<실시예 1>의 추출물 또는 <실시예 2>의 분획물 1 g

유당 1.5 g

글리세린 1 g

자일리톨 0.5 g

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 1 환 당 4 g이 되도록 제조한다.

5. 과립의 제조

<실시예 1>의 추출물 또는 <실시예 2>의 분획물 150 ㎎

대두 추출물 50 ㎎

포도당 200 ㎎

전분 600 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 30% 에탄올 100 ㎎을 첨가하여 60 ℃에서 건조하여 과립을 형성한 후, 포에 충진한다.

<제제예 2> 식품의 제조

본 발명의 외톨개모자반 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 식품들을 다음과 같이 제조한다.

1. 밀가루 식품의 제조

본 발명의 <실시예 1>의 추출물 또는 <실시예 2>의 분획물 0.5 ~ 5.0 중량을 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조한다.

2. 유제품(dairy products)의 제조

본 발명의 <실시예 1>의 추출물 또는 <실시예 2>의 분획물 5 ~ 10 중량%를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조한다.

3. 선식의 제조

현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 70메쉬의 분말로 제조한다. 검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 70메쉬의 분말로 제조한다. 본 발명의 <실시예 1>의 추출물 또는 <실시예 2>의 분획물을 진공 농축기에서 감압농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 70메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻는다. 상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 <실시예 1>의 추출물 또는 <실시예 2>의 분획물의 건조분말을 다음의 비율로 배합하여 제조한다.

곡물류(현미 30중량%, 율무 15중량%, 보리 20중량%),

종실류(들깨 7중량%, 검정콩 8중량%, 검정깨 7중량%),

<실시예 1>의 추출물 또는 <실시예 2>의 분획물의 건조분말(3 중량%),

영지(0.5중량%),

지황(0.5중량%)

<제제예 3> 음료의 제조

1. 건강음료의 제조

<실시예 1>의 추출물 또는 <실시예 2>의 분획물 1000 ㎎

구연산 1000 ㎎

올리고당 100 g

매실농축액 2 g

타우린 2 g

정제수를 가하여 전체 900 ㎖

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1 시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 l용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성한 것이지만, 수요계층, 수요국가, 사용 용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

2. 야채쥬스의 제조

본 발명의 <실시예 1>의 추출물 또는 <실시예 2>의 분획물 5g을 토마토 또는 당근 쥬스 1,000㎖에 가하여 건강 증진용 야채쥬스를 제조한다.

3. 과일쥬스의 제조

본 발명의 <실시예 1>의 추출물 또는 <실시예 2>의 분획물 1g을 사과 또는 포도 쥬스 1,000㎖에 가하여 건강 증진용 과일쥬스를 제조한다.

<제제예 4> 화장품의 제조

본 발명의 외톨개모자반 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 부종 또는 다양한 염증의 예방 또는 개선용 화장품을 제조할 수 있다. 상기 화장품으로서 영양화장수, 크림, 에센스 등의 유화 제형의 화장품 및 유연화장수 등의 가용화 제형의 화장품이 제조될 수 있다

<4-1> 유화 제형의 화장품 제조

표 1에 기재된 조성으로 유화제형의 화장품을 제조한다. 제조 방법은 하기와 같다.

1) 성분 1 내지 9의 원료를 혼합한 혼합물을 65~70℃로 가열한다.

2) 성분 10의 원료를 상기 단계 1)의 혼합물에 투입한다.

3) 성분 11 내지 13의 원료의 혼합물을 65 ℃ 내지 70 ℃로 가열하여 완전히 용해시킨다.

4) 상기 단계 3)을 거치는 동안, 상기 2)의 혼합물을 서서히 첨가하여 8,000 rpm에서 2분 내지 3분간 유화시킨다.

5) 성분 14의 원료를 소량의 물에 용해시킨 후, 상기 단계 4)의 혼합물에 첨가하고 2분간 더 유화시킨다.

6) 성분 15 내지 17의 원료를 각각 평량한 후, 상기 단계 5)의 혼합물에 넣고 30초간 더 유화시킨다.

7) 상기 단계 6)의 혼합물을 유화 후 탈기과정을 거쳐 25 ℃ 내지 35 ℃로 냉각시킴으로써 유화제형의 화장품을 제조한다.

표 2

조성		유화제형 1	유화제형 2	유화제형 3
1	스테아린 산	0.3	0.3	0.3
2	스테알리 알콜	0.2	0.2	0.2
3	글리세릴 모노스테아레이트	1.2	1.2	1.2
4	밀납	0.4	0.4	0.4
5	폴리옥시에틸렌솔비탄모노라우린산 에스테르	2.2	2.2	2.2
6	파라옥시안식향산 메틸	0.1	0.1	0.1
7	파라옥시안식향산 프로필	0.05	0.05	0.05
8	세틸에틸헥사노에이트	5	5	5
9	트리글리세라이드	2	2	2
10	사이클로메티콘	3	3	3
11	증류수	~ 100	~ 100	~ 100
12	농글리세린	5	5	5
13	트리에탄올아민	0.15	0.15	0.15
14	폴리아크릴산 중합체	0.12	0.12	0.12
15	색소	0.0001	0.0001	0.0001
16	향	0.10	0.10	0.10
17	<실시예 1>의 추출물또는 <실시예 2>의 분획물	0.0001	1	10

<4-2> 가용화 제형의 화장품 제조

표 2에 기재된 조성으로 가용화 제형의 화장품을 제조한다. 제조 방법은 하기와 같다.

1) 성분 2 내지 6의 원료를 1의 원료(정제수)에 넣고 아직믹서를 이용하여 용해시킨다.

2) 성분 8 내지 11의 원료를 7의 원료(알코올)에 넣고 완전용해시킨다.

3) 상기 단계 2)의 혼합물을 상기 단계 1)의 혼합물에 서서히 첨가하면서 가용화시킨다.

표 3

조성		가용화 제형 1	가용화 제형 2	가용화 제형 3
1	정제수	~ 100	~ 100	~ 100
2	농글리세린	3	3	3
3	1,3-부틸렌글리콜	2	2	2
4	EDTA-2Na	0.01	0.01	0.01
5	색소	0.0001	0.0002	0.0002
6	<실시예 1>의 추출물또는 <실시예 2>의 분획물	0.1	5	5
7	알코올(95%)	8	8	8
8	파라옥시안식향산 메틸	0.1	0.1	0.1
9	폴리옥시에틸렌하이드로제네이디트에스테르	0.3	0.3	0.3
10	향	0.15	0.15	0.15
11	사이클로메티콘	-	-	0.2

상기에서는 본 발명의 바람직한 실시예를 예시적으로 설명하였으나, 본 발명의 범위는 상기와 같은 특정 실시예에만 한정되지 아니하며, 해당 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명의 특허청구범위에 기재된 범주 내에서 적절하게 변경이 가능할 것이다.

본 발명의 염증성 질환 치료 또는 예방용 조성물, 보다 구체적으로는 외톨개모자반 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 치료 또는 예방용 조성물은 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 염증성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능 식품, 염증성 질환의 예방 또는 개선용 화장료 조성물에 적용이 가능하다.

Claims (11)

1. 외톨개모자반(Myagropsis myagroides) 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 외톨개모자반 추출물은 외톨개모자반을 물, 유기용매 또는 이들의 혼합물로 추출한 것을 특징으로 하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
3. 제2항에 있어서, 상기 유기용매는 C₁ 내지 C₄의 저급 알코올인 것을 특징으로 하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
4. 제3항에 있어서, 상기 저급 알코올은 메탄올 또는 에탄올인 것을 특징으로 하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
5. 제4항에 있어서, 상기 에탄올은 주정인 것을 특징으로 하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
6. 외톨개모자반(Myagropsis myagroides) 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
7. 제6항에 있어서, 상기 외톨개모자반 추출물은 외톨개모자반의 에탄올 추출물인 것을 특징으로 하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
8. 제6항에 있어서, 상기 분획물은 상기 외톨개모자반의 추출물을 n-헥산(n-hexane), 디클로로메탄(dichloromethane), 에틸아세테이트(ethyl acetate) 및 n-부탄올(n-butanol)로 순차적으로 분획하여 얻은 n-헥산 분획물, 디클로로메탄 분획물, 에틸아세테이트 분획물 또는 n-부탄올 분획물인 것을 특징으로 하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
9. 제1항 또는 제6항에 있어서, 상기 염증성 질환은 피부염, 알레르기, 아토피, 천식, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 홍채염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위궤양, 췌장염, 위염, 크론병, 대장염, 치질, 통풍, 강직성 척추염, 류마티스 열, 루프스, 섬유근통(fibromyalgia), 건선관절염, 골관절염, 류마티스 관절염, 견관절주위염, 건염, 건막염, 건초염, 건주위염, 근육염, 간염, 방광염, 신장염, 쇼그렌 증후군(Sjogren's syndrome) 및 다발성 경화증으로 구성되는 군에서 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
10. 외톨개모자반(Myagropsis myagroides) 추출물, 또는 외톨개모자반 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 개선용 건강기능 식품.
11. 외톨개모자반(Myagropsis myagroides) 추출물, 또는 외톨개모자반 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.

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