WO2020218117A1 - ホルダーおよびそのキット - Google Patents

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WO2020218117A1
WO2020218117A1 PCT/JP2020/016595 JP2020016595W WO2020218117A1 WO 2020218117 A1 WO2020218117 A1 WO 2020218117A1 JP 2020016595 W JP2020016595 W JP 2020016595W WO 2020218117 A1 WO2020218117 A1 WO 2020218117A1
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WO
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culture
culture bag
support
holder
connecting means
Prior art date
Application number
PCT/JP2020/016595
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English (en)
French (fr)
Inventor
竹内　誠亮
桂 松尾
由以 萩原
直朗 安村
邦宏 福田
Original Assignee
ニプロ株式会社
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Publication date
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M3/00—Tissue, human, animal or plant cell, or virus culture apparatus

Definitions

  • the present invention relates to a holder for holding a plurality of culture bags and a kit for constructing the holder. By using such a holder, culture using a culture bag can be carried out more efficiently.
  • the culture bag has a structure in which a resin film defining the main surface is bonded, and a space for accommodating a liquid substance (for example, a cell suspension) can be formed between the main surfaces.
  • a liquid material is placed in such a culture bag and placed on a tray on an incubator for culturing. Due to the nature of the resin film that composes the culture bag and the structure of the culture bag, such a culture bag does not have independence when the main surface is upright.
  • the culture bag containing the culture solution is horizontally arranged on the tray in the incubator (that is, when the culture bag is arranged, the main surface of the culture bag is located on the tray in contact with the tray, that is, so-called horizontal arrangement.
  • the culture bag containing the culture solution is horizontally arranged on the tray in the incubator (that is, when the culture bag is arranged, the main surface of the culture bag is located on the tray in contact with the tray, that is, so-called horizontal arrangement.
  • each culture bag When handling multiple culture bags as described above, put the culture solution in each culture bag (or each set of multiple culture bags arranged horizontally) and arrange them horizontally on a tray in the incubator for a predetermined time. Incubate. After that, it is necessary to take out each culture bag from the incubator, add a medium to each culture bag, return each culture bag to the incubator again, arrange them side by side, and restart the culture. In this case, it is necessary to handle each culture bag (or individual set) one by one. This handling is a complicated task, and it is desired to simplify this task.
  • the width that is, the frontage is wide
  • a plurality of culture bags (or a set of culture bags) can be placed.
  • the incubator needs to accommodate larger trays, thus increasing the incubator footprint. Such a large installation area is not always preferable.
  • the inventors have formed a set of culture bags that can be handled together by holding the culture bags in a horizontally stacked state when culturing using a plurality of culture bags. We have found that more efficient culture is possible.
  • a holder that holds a plurality of adjacent culture bags in a separated state.
  • a holder having supports located on both sides of each culture bag and long members that hold the supports at predetermined intervals and extend in the separated directions of the culture bags. This holder can be used to form a set of culture bags in which each culture bag is placed between the supports.
  • the support is a plate and the elongated member has connecting means that can be coupled to at least the edges of each plate.
  • the connecting means can be connected to each support, particularly to the edge of each plate, at predetermined intervals.
  • the connecting means can move along the longitudinal direction of the elongated member.
  • the holder of the present invention can be used to change the predetermined interval according to the thickness of the culture bag (and thus the amount of liquid content).
  • the present invention also provides, in a second gist, a kit that constitutes the holder described herein. Specifically, the present invention is described in the second gist.
  • a kit comprising supports located on both sides of the culture bag, holding the supports at predetermined intervals, and extending in the separated direction of the culture bag.
  • the support is a plate and the elongated member has a connecting means that can be coupled to at least the edge of each plate.
  • the connecting means can be connected to each support, particularly to the edge of each plate, at predetermined intervals.
  • the holder of the present invention can be used to change the predetermined interval according to the thickness of the culture bag (and thus the amount of liquid content).
  • a plurality of long members capable of holding the supports at different predetermined intervals may be used, or a single long member capable of changing the predetermined intervals of the supports may be used.
  • the present invention also provides a holder and a long member constituting the kit described in the present specification, respectively.
  • the present invention provides a culture method using the holders described herein.
  • the culture method of the present invention comprises the step of preparing a set in which the culture bags are arranged between the supports separated at predetermined intervals by using the holders of the present invention described above and described later.
  • the liquid material is supplied to the culture bag before or after the set is prepared. That is, the set may be formed by using the culture bag that already contains the liquid material, or the liquid material may be supplied to the culture bag after the set is formed.
  • the predetermined interval of the support held by the long member can be changed, and this change can be carried out in the culture process. Therefore, the culture method of the present invention can include a step of changing a predetermined interval of the support.
  • a plurality of culture bags can be held integrally, a plurality of culture bags can be handled together, so that the work performed when culturing using the culture bags can be simplified.
  • the culture bags can be cultivated in a horizontally stacked state, it is possible to cultivate using a plurality of culture bags in substantially the same occupied area as the occupied area of a single culture bag.
  • by adding a culture solution and gradually increasing the thickness of the culture bag in response to the proliferation of cells inside the culture bag efficient expansion of cells can be performed.
  • FIG. 1 is a cross-sectional view schematically showing a state in which three culture bags stacked horizontally using the holder of the present invention are integrally held.
  • FIG. 2 schematically shows an example of a culture bag that can be stacked using the holder of the present invention in a plan view.
  • FIG. 3 is a perspective view schematically showing a state in which six culture bags stacked horizontally using the holder of the present invention are integrally held (however, a predetermined distance between the supports is D1).
  • FIG. 4 schematically shows a state in which six culture bags stacked horizontally using the holder of the present invention are integrally held (however, a predetermined interval between the supports is D2), as in FIG. It is a perspective view which shows.
  • FIG. 1 is a cross-sectional view schematically showing a state in which three culture bags stacked horizontally using the holder of the present invention are integrally held.
  • FIG. 2 schematically shows an example of a culture bag that can be stacked using the holder of the present
  • FIG. 5 is a perspective view schematically showing a state in which six culture bags arranged vertically and arranged in parallel using the holder of the present invention are integrally held.
  • FIG. 6 schematically shows one aspect of a long member constituting the holder of the present invention in a perspective view.
  • FIG. 7 is an exploded perspective view of the long member schematically showing the components of the long member shown in FIG.
  • the holder of the present invention is configured by the kit of the present invention (hence, by the members constituting the kit), and the culture method of the present invention can be carried out using the holder of the present invention.
  • the present invention will be described in detail below by taking the holder and the members of the kit constituting the holder as an example, but the contents thereof are similarly applied to the kit and the culture method of the present invention unless there is a particular inconvenience.
  • FIG. 1 schematically shows an example of a mode in which the culture bag is integrally held in a horizontal position using the holder of the present invention in a cross-sectional view.
  • the holder 10 of the present invention includes a support 12 and a long member 14.
  • three culture bags 16-1, 16-2 and 16-3 are integrally held at a distance corresponding to the thickness of the support 12.
  • the support 12 and the culture bag 16 extend horizontally (that is, in a horizontal position), and the elongated member 14 extends vertically with respect to them, and thus extends vertically. Exists.
  • the long member has a feature of holding the support in a state of being separated at a predetermined interval and a feature of extending in the separation direction of the culture bag.
  • the culture bag 16 is integrally held in a state of being separated by a distance corresponding to the thickness of the support 12.
  • the "separation direction" means a direction in which a plurality of culture bags are separated, that is, a direction substantially perpendicular to the main surface of the culture bags.
  • the support is a member capable of supporting a culture bag containing a predetermined amount of liquid as needed. Specifically, it is preferable that the culture bag is placed on the support and is not substantially deformed. In another aspect, the support may be temporarily deformed with the culture bag placed on it, or may return to its original shape (and thus elastically deform) when the culture bag is removed. .. For example, when a set in which a plurality of culture bags are held in a stacked state is arranged horizontally based on the present invention, such deformation if the deformed support does not adversely affect the culture bag located below the culture bag. Can be tolerated. Plastic deformation may be acceptable, but less preferred.
  • the support may be formed of a single material selected from various materials such as paper, wood, plastic, and metal, a member thereof, or a composite member of a plurality of materials.
  • the support may have any preferred form, for example, a plate shape (specifically, a sheet shape, a plate shape, a net, a thin plate shape, etc.).
  • the support is substantially planar as a whole.
  • the support may be at least partially curved so that the culture bag partially follows a curved main surface that bulges outward when containing liquids.
  • the shape of the support may be any one having a planar spread necessary for supporting the culture bag, and if necessary, for example, in order to facilitate access to the culture bag held in the set. , May have a notch.
  • the support is located in contact with both sides of the culture bag or at a predetermined interval to sandwich the culture bag.
  • adjacent it means that the other member is located next to one member, and there may or may not be a space between the two members. May be good.
  • the term "separation” is used, and another member may or may not exist in the space.
  • laminate is particularly used when the members extend laterally (for example, in the horizontal direction) and are adjacent to each other.
  • the "predetermined interval" in which the supports are held apart is the thickness t of the culture bag when the culture bag is inflated by a predetermined amount of liquid matter contained in the space of the culture bag. (Ie, the dimension of the bag in a direction substantially perpendicular to the main surface of the culture bag) or greater length distance D (hence D ⁇ t, see FIG. 1).
  • the thickness t is the most swollen portion (that is, the thick portion) when the culture bag containing the liquid substance is placed horizontally (that is, the main surface of the culture bag extends horizontally). Means the thickness of the culture bag.
  • the predetermined interval D is t
  • the predetermined interval is slightly larger than t (that is, t ⁇ D), for example, in consideration of the fact that the culture bag may be tightly sandwiched between the supports. It is preferably 05 times to 1.5 times (1.05t ⁇ D ⁇ 1.5t), and more preferably 1.1 times to 1.3 times (1.1t ⁇ D ⁇ 1.3t). , 1.2 times (D ⁇ 1.2t) is particularly preferable.
  • the culture bag 16 is sandwiched and held by supports 12 located apart from each other on both sides thereof, and thereby separated from other adjacent culture bags.
  • the culture bag 12-1 is sandwiched and held by supports 12-1 and 12-2 located on both sides thereof, and is separated from the adjacent culture bag 16-2 by the support 12-2.
  • the culture bag 12-3 is also sandwiched, held and separated by the supports 12-3 and 12-4.
  • the culture bag 16-2 is sandwiched and held by the supports 12-2 and 12-3 located on both sides thereof, and is separated from the other culture bags 16-1 and 16-3 located on both sides thereof. ing.
  • the supports 12-1 to 12-4 that separate the plurality of culture bags in this way are connected to the long member 14 at the edge thereof. That is, the long member 14 has a connecting means that can be coupled to the support 12.
  • the connecting means is not particularly limited as long as it can be connected to the support, particularly at least its edge.
  • the edge portion 20 of the support is fitted into the recess 18 provided in the long member 14 to be connected.
  • This coupling may be, for example, a connecting means such as a press-fit mechanism that fits into pushing the edge 20 into the recess 18. Any other suitable coupling mechanism may be used as such a connecting means, and for example, in another embodiment, snap-fitting may be used.
  • fastening means or gripping (or gripping) means may be provided on the elongated member to connect the edges of the support to the elongated member.
  • the connecting means it is generally convenient to use one that enables temporary connection as described above (that is, one that enables reversible connection), but it is permanent like an adhesive. You may also use the one that enables the connection.
  • the long member 14 extends along the separation direction or the stacking direction (see arrow A in FIG. 1) of the culture bag.
  • the holder 10 has an elongated member 14 on both side edges 20 and 21 of the support 12.
  • the materials used for the support 12 and the long member 14, their shapes and / or the bonding strength between the long member 14 and the support 12 (hence, for example, the width of the long member (that is, in the direction perpendicular to FIG. 1). If no adverse effect on the culture is predicted depending on the length)) and the like, one of the long members may be omitted.
  • the holder of the present invention preferably has at least one pair of elongated members to be coupled to each of the opposing pair of edges (20 and 21) of the support as shown.
  • the supports 12 are located on both sides of the plurality of culture bags 16, and each connecting means of a long member extending in a direction (preferably in a vertical direction) intersecting with the main surface of the culture bag is provided.
  • each connecting means of a long member extending in a direction (preferably in a vertical direction) intersecting with the main surface of the culture bag is provided.
  • FIG. 2 shows a schematic plan view of an example of the culture bag 16 that can be integrally held by the holder of the present invention.
  • the six culture bags 16 are shown slightly offset along the main surface for easy understanding.
  • the illustrated culture bag 16 for example, by heat-sealing the peripheral portion in a state where two films of a plastic material are stacked (in the illustrated embodiment, the hexagonal peripheral seal portion 19 is formed), the film is sandwiched between the films.
  • a space portion 23 capable of accommodating a liquid substance can be formed.
  • the culture bag has a lower port 24 below it, through which the liquid material can be supplied into the space 23.
  • it has an upper port 22 at the upper part, from which gas and / or liquid matter in the space can be discharged.
  • the gas collects above the space, and therefore the gas is discharged from the upper port 22. It is convenient to do.
  • the port may be of any suitable embodiment, for example, a self-sealing rubber stopper.
  • the needle portion 30 provided at the tip of the tube (for example, an elastic tube) 28 can be inserted to ensure fluid communication with the space portion in the culture bag.
  • the culture bag targeted by the present invention is not particularly limited, and may be a generally used one.
  • the number of culture bags integrally held by the holder is not particularly limited, but may be, for example, 2 to 10, preferably 3 to 8, and particularly 4 to 7.
  • the culture bags 16 (N pieces) can be stacked and held integrally as shown, for example, as follows: N + 1 supports 12 are prepared. Next, in consideration of the thickness of the support, a long member 14-1 having N + 1 connecting means 18 provided so that the distance between the supports is a predetermined distance D is prepared. After that, the edge portion 20 of the support is connected to the long member 14-1 by the connecting means 18, and the support extends from the long member 14-1 in a state of being separated by a predetermined interval D. The culture bags 16 are then inserted between the supports and arranged so that they extend between the supports to form a set that holds the culture bags together.
  • the support may be bonded to the long member in a state where the culture bag and the support are alternately laminated in the horizontal direction. ..
  • the support may be attached to the elongated member with the culture bag and support lined up in a non-horizontal orientation (ie, vertically, eg, vertically or diagonally). The latter aspect corresponds to a state in which the support and the culture bag 16 are rotated by 90 ° in a state shown in FIG. 1 in which the support and the culture bag 16 are substantially extended in the horizontal direction, and the long member 14 is extended in the horizontal direction.
  • a port provided at the lower edge of the culture bag by arranging a set in which a plurality of culture bags are integrally held as described above so that the culture bags extend in an oblique direction, preferably in a vertical direction or a direction close thereto.
  • Supply liquid from In this case, even if the gas is pre-existing in the culture bag or mixed with the liquid substance, if another port is provided at the upper edge of the culture bag, such a port is provided through the port.
  • Can discharge gas for example, as in the culture bag shown in FIG. 2, a liquid substance can be supplied from the lower port 24, and gas can be discharged from the upper port 22 provided on the upper edge of the culture bag.
  • two ports can be provided on the upper edge of the culture bag to supply liquid from one and expel gas from the other.
  • the holder of the present invention is used to integrally hold a plurality of culture bags to form a set so that the bags extend diagonally to vertically. Placing the set, that is, vertically, is convenient because it simplifies gas discharge.
  • the set of the culture bags held integrally may be placed horizontally, and in that state, it is placed on the tray in the incubator to perform the culture process.
  • a plurality of culture bags can be handled together as a set, and these culture bags can be easily changed from horizontal to vertical and vice versa. it can.
  • the problems of each placement for example, it is difficult to discharge gas in horizontal placement, and the concentration of sedimentary cells in vertical placement can vary greatly in the vertical direction
  • each placement is performed.
  • the vertical installation makes it easy to discharge gas
  • the horizontal installation makes the change in cell concentration small).
  • FIG. 3 schematically shows a state of holding a plurality of culture bags using the holder of the present invention in a perspective view.
  • the culture bag is not shown for simplicity.
  • a total of 6 were formed between a total of 7 supports 42 arranged apart by 4 elongated members 46. It shows how the culture bags are arranged and held integrally in the gaps. That is, the holder of the present invention includes a support 42 and a long member 46.
  • each of the elongated members 46 holds seven supports 42 in a separated state with a predetermined interval D1. That is, the support 42 is located on two long members 46-1 and 46-2 located on both sides of the culture bag near the upper edge, and on both sides of the support 42 near the lower edge of the culture bag. It is attached to one elongated member 46-3 and 46-4, and a culture bag is integrally held between these supports.
  • the elongated member 46 comprises a longitudinal portion 48 and a grip portion (or grip portion) 50 extending vertically from it. In the illustrated embodiment, the grip portion 50 is visible at the end of the longitudinal portion (the grip portion 50 located between the ends is almost invisible), but each of the elongated members is visible.
  • the longitudinal portion 48 of the 46 has eight grip portions 50 separated so that the supports are spaced apart at predetermined intervals, and the edge of the support 42 is pushed between the adjacent grip portions 50. .. That is, the longitudinal portion 48 and the grip portion 50 (strictly speaking, the gap defined by the adjacent grip portion 50 and the longitudinal portion 48) function as a connecting means for connecting to the edge portion of the support.
  • the pushed portion of the support also has some indented portion so that the longitudinal portion is partially fitted into the portion as shown. That is, it is preferable that the gap portion and the indent portion engage with each other, and in the illustrated embodiment, the exposed surface of the longitudinal portion 48 exists in the vicinity of the exposed surface of the edge portion of the support 42.
  • the support 42 and the culture bag are alternately laminated horizontally and then one of the supports as shown in FIG.
  • the elongated members 46-1 and 46-2 can be coupled on both sides of the edge portion of the above, and the elongated members 46-3 and 46-4 can be coupled on both sides of the other edge portion.
  • the elongate member is made of, for example, resin and, as a result, is elastically deformable
  • the lowest support in FIG. 3 is coupled to the lowest connecting means of the long member and above the support.
  • Place the culture bag on the surface, place the next support on it and connect it to the long means, place the culture bag on it, and so on, and then connect the support to the long member. It is also possible to repeatedly place the culture bag on the support and hold it integrally.
  • the culture bag arranged between the supports may be in an inflated state containing a predetermined amount of liquid, and in another embodiment, may be in an empty state. In the latter aspect, a predetermined amount of liquid can be supplied after holding the culture bag integrally.
  • four long members are arranged.
  • the longitudinal portion 48 when the length w in the width direction of the longitudinal portion 48 is increased, the vicinity of the central portion between the opposite edges of the support (arrow B).
  • the long members By arranging the long members on both sides of the indicated portion 52), it is also possible to arrange the two long members to hold the culture bag.
  • the distance extending from the longitudinal portion 48 to the grip portion 50 is increased, for example, in the illustrated embodiment, the distance between the right side and the left side of the support is increased to the center (see the portion 54 indicated by x) or more. If the grip portion 50 is extended and / or the appropriate material is selected for the grip portion, it is possible to hold the culture bag even with a single elongated member.
  • the connecting means and thus its gripping portion, can be coupled to at least the edge of the support.
  • the extending length of the grip portion 50 is the distance to the center of the support (that is, the width of the support). 1/2 or less, preferably 1/4 or less, particularly preferably 1/8 or less. In one preferred embodiment, it can be coupled to the edge of the support (eg, such that the extension length of the grip portion 50 is about 1/10 of the distance to the center), in which case it is elongated. It is easy to connect and release the member and the support.
  • long members two on both sides that are connected to the support at 52 near the center of the edge of the support may be provided.
  • the number of long members can be appropriately selected depending on the shape and material of the long member and the support, the shape and characteristics of the culture bag to be laminated, and the like. Therefore, the holder of the present invention has at least one elongated member, preferably an even (eg, 2, 4 or 6) elongated member such that it is coupled at the opposing edges on both sides of the support. Has. As the number of supports increases, the work of forming and disassembling the set of culture bags becomes complicated, so it is generally desirable that the number of long members is 2, especially 4.
  • FIG. 4 schematically shows a state of holding a plurality of culture bags using the holder of the present invention in a perspective view as in FIG. Also in the illustrated embodiment, the culture bag is not shown for the sake of simplicity.
  • the aspect of FIG. 4 is substantially different from the aspect of FIG. 3 except that the predetermined interval D2 between the adjacent supports 42 is larger than that of the aspect of FIG. 3 (that is, D2> D1). Is the same as.
  • FIG. 4 shows a grip portion 50 located between adjacent supports, which was difficult to see in FIG.
  • the thickness of the bag increases. .. In that case, it is impossible to hold the increased-thickness culture bag when the supports are separated by the predetermined interval D1 in FIG. Therefore, as shown in FIG. 4, the width (or thickness, that is, the dimension along the direction in which the long member extends) of the grip portion 50 sandwiched between the supports 42 is increased to increase the width between the supports.
  • the culture bag is integrally held using a long member 46 having a longitudinal portion 48 configured to have a larger D2 at predetermined intervals.
  • Substitution of a long member having a predetermined interval of D1 with another long member having a predetermined interval of D2 can be carried out, for example, as follows: A set of culture bags integrally held by the holder of the present invention is shown in FIG. As shown, it is placed horizontally and placed on the table 40. Next, in this state, the long member 46 is pulled out from the support to remove it so that the culture bag is sandwiched between the supports 42. After that, the long member is replaced by pushing the edge portion of the support 42 between the gripping portions of the connecting means of another long member 46 formed at the predetermined interval D2 shown in FIG. 4 and joining them. ..
  • the height (or thickness t0) of the base 40 is made larger than the thickness (tg) of the gripping member 50 located at the end of the long member, and the long member 46 is attached to and detached from the support 42. It is preferable to make it easy.
  • the support and the culture bag are alternately laminated as described above, that is, the long member is placed on the support horizontally as shown in FIG. Can be combined on both the upper and lower sides of the. Further, when disassembling the set of the culture bags held integrally, the long member can be removed with the set placed horizontally.
  • the supports and culture bags are placed vertically and arranged using the holders of the invention so that the culture bags are located (preferably adjacent) between the supports, and then By connecting the elongated member to the support, a set in which the culture bag is integrally held may be formed.
  • FIG. 5 schematically shows a set formed by arranging it vertically in a perspective view.
  • the support 42 and the culture bag 43 are alternately arranged vertically, and the long members 46-1 and 46-2 are arranged vertically above both side edges of the support, and the long members 46-1 and 46-2 are vertically arranged downward.
  • the members 46-3 and 46-4 are arranged respectively, and the long members (four long members in total) are connected to the support 42.
  • only the supports 42 are arranged vertically adjacent to each other in advance, and then the long members 46 are joined to prepare a set in the absence of the culture bag, and then the culture bags are prepared between the supports. 43 can also be inserted.
  • the edges of the vertically placed supports 42-1 are attached to the connecting means located at the ends of each elongated member, and the culture bag is adjacent to the supports.
  • the next support is arranged vertically next to the culture bag and bonded to a long member, the culture bags are arranged vertically adjacent to the support, and adjacent to the culture bag.
  • the next supports are arranged vertically and connected to the long member.
  • the support 42 has notches 49 above and below it. The notch 49 facilitates access to the port of the culture bag.
  • the long member 46 used in the set shown in which the support and the culture bag are placed side by side in a vertical position is replaced with another long member (for example, to change a predetermined distance between the supports).
  • the illustrated parallel state of the support and the culture bag can be temporarily held, and the long member 46 can be removed from the support and another long member can be joined while holding the support as such.
  • the culture bag can be taken out after similarly removing the long member 46 from the set in which the support and the culture bag are placed vertically and arranged side by side.
  • a belt (preferably a belt having appropriate elasticity) can be wrapped around the set and bundled in a support and culture bag vertically placed state.
  • supports 42-1 and 42-7 located at the ends in the set state can be supported so as not to fall, for example, a peripheral wall surrounding the set, preferably vertically arranged supports.
  • a plate that can be sandwiched (for example, a bookend form) may be used.
  • FIG. 6 shows a schematic perspective view of an example of a preferred embodiment of the long member 60 of the present invention.
  • the long member 60 has a connecting means 62 to the support.
  • the number of connecting means corresponds to the number of supports (not shown) to be joined.
  • each connecting means 62 comprises a grip portion 64 capable of binding the support by facing each other and sandwiching an edge of the support between them.
  • the connecting means 62 is movable along the longitudinal direction of the elongated member (see arrow C). Specifically, the longitudinal position of the connecting means 62 can be changed by rotating the knob 66 located at the end of the elongated member 60. Therefore, when it is desired to change the predetermined interval between the supports, there is an advantage that the predetermined interval can be changed without temporarily removing the support bonded to the long member 60.
  • the gripping portion 64 of the connecting means 62 is substantially adjacent to each other in a contact state. From this state, by rotating the knob 66, the connecting means 62 can move along the longitudinal direction of the long member, and as a result, the connecting means are separated from each other as shown in FIG. 6B, for example.
  • the central connecting means does not necessarily have to move, and the connecting means located on both sides of the connecting means 62 move in opposite directions to each other. Distances are equal.
  • FIG. 7 schematically shows an exploded perspective view of such a connecting means 60.
  • the long member 60 includes a cylindrical member 70 and a housing member 72.
  • the cylindrical member 70 has the same number of supports that should hold the long opening (spiral opening) 77 that extends spirally along the side surface thereof.
  • the spiral opening means an opening that, when moving along the opening, can move along the side surface of the cylinder and at the same time in the axial direction.
  • the housing member 72 is composed of an upper member 74 and a lower member 76, and a housing is formed by combining these.
  • the housing has a long opening (linear opening) 78 that is located inside the cylindrical member so that the cylindrical member 70 can rotate and extends along the longitudinal direction of the long member.
  • the elongated member 60 further comprises connecting means 62 that can move along the elongated opening 78.
  • the connecting means 62 includes an end portion 80 and a base portion 82, and a grip portion 64 projects from the base portion 82.
  • the connecting means 82 further comprises a constriction 84 located between the end portion 80 and the base portion 82 to connect them, and the grip portion 64 is coupled to the edge of the support.
  • the end 80 of the connecting means 62 is located inside the cylindrical member 70, the base 82 is located outside the housing member, and the constriction 84 is both spirals. It is configured to be located at the spiral openings 77 and 78.
  • the connecting member 62 can be positioned only at the intersection of the spiral opening 77 and the linear opening 78. Therefore, when the cylindrical member 70 is axially rotated with respect to the housing member 72 in a fixed state, the connecting member 62 can be positioned. Since such an intersection exists by moving in the longitudinal direction of the housing member, the connecting means 62 can move along the linear opening 78 of the housing member 72.
  • a spiral in which intersections are located along a linear opening so that locations where the connecting members 62 should be located are separated at predetermined equal intervals by a predetermined rotation of the cylindrical member 70 with respect to the housing member 72.
  • the shape opening 77 may be formed.
  • the number of spiral openings 77 is the same as the number of connecting means 62, and the spiral openings 77-0 to which the connecting means that do not need to move move are substantially the circumference of the circle that defines the cylinder. Is. That is, even if it moves in the rotational direction, it moves only in the circumferential direction and does not move in the axial direction.
  • the holder of the present invention holds a plurality of culture bags, if the number of culture bags is N, the number of supports is usually N + 1, and therefore the number of connecting means is also N + 1. Therefore, an opening of N + 1 is provided along the bus G1 of the cylindrical member at a position (indicated by ⁇ in FIG. 7) where the connecting means of N + 1 should be arranged when the culture bag is held in a separated state at a predetermined interval D1.
  • the generatrix G2 of the cylindrical member (a location rotated by a predetermined angle (for example, 60 ° from the position of G1)).
  • An opening of N + 1 (indicated by a circle in FIG. 7) is provided along the generatrix), and a connecting means is provided at a position corresponding to a predetermined interval D3 in the same manner.
  • the spiral opening of the cylindrical member is connected by connecting the opening that should be located when one specific connecting means is D1, the opening that should be located at D2, the opening that should be located at D3, and so on. 77 is formed, and spiral openings 77 are formed in the same manner for other connecting means. These spiral openings extend spirally along the side surface of the cylindrical member, and these spirals and cylinders.
  • Connection means can be present at intersections of members with the same bus, and these intersections provide a predetermined interval, eg D2, at which the supports are separated when the connecting member is located at that location.
  • a long member 60 can be used in place of the long member in FIG.
  • the holder of the present invention can be used to form a set in which a plurality of culture bags are integrally held in a state where their main surfaces are adjacent to each other but separated from each other.
  • this set By handling this set as a single unit, a plurality of culture bags can be handled together, so that efficient culture is possible.
  • the culture bag separation is substantially perpendicular to the main surface of the culture bag, so that one culture bag is overlaid with another culture bag via a support. It has a laminated structure that is located.
  • the area occupied by the set is equivalent to the area occupied when a single culture bag is placed horizontally. Therefore, efficient culture is possible from the viewpoint of the occupied area.
  • the subject of the present invention is not particularly limited as long as it is a culture using a culture bag, and the liquid substance is not particularly limited as long as it is used for such a culture. Specifically, it is suitable for culturing such as adherent cells that adhere to and proliferate on the inner surface of a culture bag, and examples of the liquid material include a medium, serum, and reagent suitable for the target cells.

Abstract

培養バッグを用いる培養をより効率的に実施する。　隣接する複数の培養バッグを離隔した状態で保持するホルダー１０は、　各培養バッグの両側に位置する支持体１２と、　所定間隔で離間した状態で支持体を保持し、培養バッグの離隔方向に延在する長尺部材１４と を有する。

Description

ホルダーおよびそのキット
　本発明は、複数の培養バッグを保持するホルダーおよびそれを構成するためのキットに関する。そのようなホルダーを用いることによって、培養バッグを用いる培養をより効率的に実施することができる。
　培養バッグは、主表面を規定する樹脂フィルムを貼り合わせた構造を有し、その主表面の間に液状物（例えば細胞懸濁液）を収容する空間を形成できる。そのような培養バッグに液状物を入れて、それをインキュベータ上のトレイに載置して培養する。このような培養バッグは、それを構成する樹脂フィルムの性質および培養バッグの構造故に、主表面が立った状態では自立性を有さない。
　大量の液状物を用いて培養するために、複数の培養バッグが使用される。この場合、インキュベータ内のトレイ上で培養液を含む培養バッグを水平方向に配置して（即ち、配置した場合に培養バッグの主表面がトレイと接触した状態でその上に位置する、いわゆる横置きで）並べることが一般的に行われている（例えば、下記特許文献１参照）。
ＷＯ２０１６／１９０３１４
　上述のように複数の培養バッグを取り扱う場合、各培養バッグ（または横置きに並べた複数の培養バッグの各セット）に培養液を入れ、それをインキュベータ内のトレイ上で横置きに並べて所定時間培養する。その後、各培養バッグをインキュベータから取り出して、各培養バッグに培地を追加して、再び各培養バッグをインキュベータに戻して並べて培養を再開する作業が必要となる。この場合、個々の培養バッグ（または個々のセット）をひとつずつ取り扱う必要がある。この取り扱いは煩雑な作業であり、この作業を簡素化することが望まれる。
　更に、上述のように培養バッグ（または培養バッグのセット）を横置きに並べて培養する場合、複数の培養バッグ（または培養バッグのセット）を載置できるように幅が広い（即ち、間口が広い）トレイを収容できる必要がある。その結果、インキュベータはより大きいトレイを収容する必要があり、従って、インキュベータの設置面積は大きくなる。このような大きい設置面積は必ずしも好ましくない。
　発明者らは、上記課題に鑑み、複数の培養バッグを用いて培養するに際して、培養バッグを横置きで積層した状態で保持して一緒に取り扱うことができる培養バッグのセットを形成することによって、より効率的な培養が可能なることを見出した。
　本発明は、第１の要旨において、
　隣接する複数の培養バッグを離隔した状態で保持するホルダーであって、
　各培養バッグの両側に位置する支持体と、この支持体を所定間隔で離間した状態で保持し、培養バッグの離隔した方向に延在する長尺部材と
を有して成るホルダーを提供する。このホルダーを用いて、各培養バッグがそれぞれ支持体の間に配置された培養バッグのセットを形成できる。
　本発明のホルダーの好ましい１つの態様では、支持体はプレートであり、長尺部材は各プレートの少なくとも縁部に結合できる接続手段を有する。具体的には、接続手段は、所定間隔で離れた箇所にて各支持体に、特に各プレートの縁部に結合できるのが好ましい。別の態様では、接続手段は、長尺部材の長手方向に沿って移動できる。特に好ましい態様では、本発明のホルダーを用いて、培養バッグの厚さ（従って、内容液量）に対応して所定間隔を変更できる。
　また、本発明は、第２の要旨において、本明細書において説明するホルダーを構成するキットを提供する。具体的には、本発明は、第２の要旨において、
　隣接する複数の培養バッグを離隔した状態で保持するホルダーを構成するキットであって、
　培養バッグの両側に位置する支持体と、この支持体を所定間隔で離間した状態で保持し、培養バッグの離隔した方向に延在する長尺部材と
を有して成るキットを提供する。
　本発明のキットの好ましい１つの態様では、支持体はプレートであり、長尺部材は各プレートの少なくとも縁部に結合できる接続手段を有する。具体的には、接続手段は、所定間隔で離れた箇所にて各支持体に、特に各プレートの縁部に結合できるのが好ましい。好ましい態様では、本発明のホルダーを用いて、培養バッグの厚さ（従って、内容液量）に対応して所定間隔を変更できる。この態様では、異なる所定間隔で支持体を保持できる複数の長尺部材を用いてよく、あるいは支持体の所定間隔を変更できる単一の長尺部材を用いてよい。
　更に、本発明は、別の要旨において、本明細書において説明するキットを構成するホルダーおよび長尺部材をもそれぞれ提供する。加えて、本発明は、本明細書において説明するホルダーを用いる培養方法を提供する。
　例えば、本発明の培養方法は、上述および後述の本発明のホルダーを用いて、所定間隔で離間した支持体の間に培養バッグが配置されたセットを準備する工程を含んで成る。この方法において、培養バッグへの液状物の供給は、セットを準備する前であっても、後であってもよい。即ち、液状物を既に含む培養バッグを用いてセットを形成しても、あるいは、セットを形成した後に培養バッグに液状物を供給してもよい。本発明のホルダーにおいて、長尺部材が保持する支持体の所定間隔を変更することができ、この変更を培養過程において実施できる。従って、本発明の培養方法は、支持体の所定間隔を変更する工程を含むことができる。
　本発明のホルダーを用いると、複数の培養バッグを一体に保持することができるので、複数の培養バッグを一緒に取り扱うことができるので、培養バッグを用いて培養するに際して実施する作業を簡素化でき、複数の培養バッグを用いて同一の条件で培養することができる。また、培養バッグを横置きで積層した状態で培養できるので、単一の培養バッグの専有面積と実質的に同じ専有面積で複数の培養バッグを用いて培養できる。更に、培養バッグ内部の細胞の増殖に対応して、培養液を追加して培養バッグの厚さを順次広げていくことにより、効率的な細胞の拡大培養が可能となる。
図１は、本発明のホルダーを用いて横置きで積層した３つの培養バッグを一体に保持する状態を模式的に示す断面図である。 図２は、本発明のホルダーを用いて積層できる培養バッグの一例を平面図にて模式的に示す。 図３は、本発明のホルダーを用いて横置きで積層した６つの培養バッグを一体に保持する状態（但し、支持体間の所定間隔がＤ１である）を模式的に示す斜視図である。 図４は、図３と同様に、本発明のホルダーを用いて横置きで積層した６つの培養バッグを一体に保持する状態（但し、支持体間の所定間隔がＤ２である）を模式的に示す斜視図である。 図５は、本発明のホルダーを用いて縦置きで並列に配置した６つの培養バッグを一体に保持する状態を模式的に示す斜視図である。 図６は、本発明のホルダーを構成する長尺部材の１つの態様を模式的に斜視図にて示す。 図７は、図６に示す長尺部材の構成要素を模式的に示す、長尺部材の分解斜視図である。
　次に、図面を参照して本発明を更に詳細に説明する。尚、本発明のホルダーは、本発明のキットによって（従って、キットを構成する部材によって）構成され、また、本発明の培養方法は、本発明のホルダーを用いて実施できる。以下、ホルダーおよびそれを構成するキットの部材を例として、本発明を以下に詳細に説明するが、その内容は、特に不都合が無い限り、本発明のキットおよび培養方法にも同様に当て嵌まる。
　図１に、本発明のホルダーを用いて、横置き状態で培養バッグを一体に保持している態様の一例を模式的に断面図にて示す。本発明のホルダー１０は、支持体１２および長尺部材１４を有して成る。図示した態様では、複数の例として３つの培養バッグ１６－１、１６－２および１６－３が支持体１２の厚さに相当する距離で離隔した状態で一体に保持されている。尚、図示した態様では、支持体１２および培養バッグ１６は、水平方向に（即ち、横置き状態で）延在し、長尺部材１４は、これらに対して垂直に、従って、鉛直方向に延在している。このように、長尺部材は、所定間隔で離間した状態で支持体を保持する特徴および培養バッグの離隔方向に延在する特徴を有する。その結果、図示した態様では、培養バッグ１６が支持体１２の厚さに相当する距離で離隔した状態で一体に保持されている。尚、「離隔方向」とは、複数の培養バッグを離隔する方向、即ち、培養バッグの主表面に対して実質的に垂直な方向を意味する。
　支持体は、必要に応じて所定量の液状物を含む培養バッグをその上に支持できる部材である。具体的には、培養バッグを支持体上に載置した状態で、実質的に変形しないのが好ましい。別の態様では、支持体は、培養バッグを載置した状態で一時的に変形しても、培養バッグを取り除くと元の形状に戻るもの（従って、弾性的変形するもの）であってもよい。例えば、本発明に基づいて複数の培養バッグを積層状態で保持したセットを横置きで配置し場合に、変形した支持体がその下方に位置する培養バッグに悪影響を与えなければ、そのような変形を許容できる。塑性的な変形は、許容できる場合があるが、それほど好ましくはない。
　より具体的には、支持体は、紙、木材、プラスチック、金属等の種々の材料から選択される単一材料またはその組み合わせの部材、複数材料の複合部材で形成されたものであってよい。支持体はいずれの好ましい形態であってよく、例えばプレート状（具体的にはシート状、板状、ネット、薄板状等）であってよい。支持体は、全体としては実質的に平面状である。別の態様では、培養バッグが液状物を含む時に外側に膨らんだ湾曲形状の主表面に部分的に沿うように、支持体が少なくとも部分的に湾曲していてもよい。また支持体の形状は、培養バッグを支持するに必要な平面的な広がりを有するものであればよく、必要に応じて、例えばセットで保持している培養バッグへのアクセスを容易にするために、切り欠き部を有してよい。
　支持体は、培養バッグの両側に接触して位置し、あるいは所定の間隔を隔てて位置し、培養バッグを挟む。本明細書において、２つの部材が「隣接」すると呼ぶ場合、一方の部材の隣に他方の部材が位置することを意味し、２つの部材の間に空間が存在しても、あるいはしなくてもよい。特に前者の場合（空間が存在する場合）を意味する場合には、「離間」なる用語を使用し、空間に別の部材が存在しても、あるいは存在しなくてもよい。更に、この空間に別の部材が存在する場合は、「離隔」なる用語を用いる。尚、部材が横方向（例えば水平方向）に延在して隣接する場合に、特に「積層」なる用語を使用する。
　複数の培養バッグを保持する場合、支持体は、隣接する培養バッグの間に、通常１つ存在し、これが一般的には好ましい。この場合、積層した培養バッグの最外側に位置する培養バッグの外側にも１つの支持体が存在するが、この支持体は、特に問題が生じない限り、一方の外側または両方の外側については、省略してもよい。この支持体で培養バッグを挟み込むことにより培養バッグの表面が実質的に平面となり、接着細胞などを培養バッグの平面に安定して接着することができる。また、培養バッグの両方の外側に支持体を設けることによって、培養バッグの内側の両平面に接着細胞などを安定して接着することができる。
　尚、支持体が離間した状態で保持される「所定間隔」とは、培養バッグの空間部に含まれて所定量の液状物によって培養バッグが膨れた状態にある場合の培養バッグの厚さｔ（即ち、培養バッグの主表面に対して実質的に垂直な方向のバッグのディメンジョン）またはそれより大きい長さ距離Ｄを意味する（従って、Ｄ≧ｔ、図１参照）。厚さｔは、液状物を含む状態にある培養バッグを横置きで（即ち、培養バッグの主表面が水平方向に延在するように）載置した時に最も膨らんだ部分（即ち、厚い部分）の培養バッグの厚さを意味する。所定間隔Ｄがｔである場合、支持体間で培養バッグが緊密に挟まれた状態となり得ることを考慮して、所定間隔はｔより多少大きめ（即ち、ｔ≦Ｄ）、例えばｔの１．０５倍～１．５倍（１．０５ｔ≦Ｄ≦１．５ｔ）であるのが好ましく、１．１倍～１．３倍（１．１ｔ≦Ｄ≦１．３ｔ）であるのがより好ましく、１．２倍程度（Ｄ≒１．２ｔ）であるのが特に好ましい。この所定の間隔を制御することにより培養バッグ内の液状物の内容量を制御することが可能となり、また液状物の過剰な注入を防ぐことができる。
　容易に理解できるように、培養バッグ１６は、その両側で離間して位置する支持体１２によって挟まれて保持され、また、それによって隣接する他の培養バッグから離隔されている。詳しくは、培養バッグ１２－１は、その両側に位置する支持体１２－１および１２－２によって挟まれて保持され、また、支持体１２－２によって隣接する培養バッグ１６－２から離隔されている。培養バッグ１２－３についても、同様に、支持体１２－３および１２－４によって挟まれて保持され、また、離隔されている。培養バッグ１６－２については、その両側に位置する支持体１２－２および１２－３によって挟まれて保持され、また、その両側に位置する他の培養バッグ１６－１および１６－３から離隔されている。
　このように複数の培養バッグを離隔する支持体１２－１～４は、図示するように、その縁部で長尺部材１４に結合している。即ち、長尺部材１４は支持体１２に結合できる接続手段を有する。接続手段は、支持体に、特に少なくともその縁部に、結合できるものであれば、特に限定されるものではない。図示した態様では、長尺部材１４に設けた凹部１８に支持体の縁部２０が嵌まり込むことによって結合している。この結合は、例えば、縁部２０を凹部１８に押し込むことに嵌まり込むプレスフィット機構のような接続手段であってよい。このような接続手段として、他のいずれの適当な結合機構を用いてもよく、例えば、別の態様では、スナップフィットで結合してもよい。更に別の態様では、締結手段または握持（または把持）手段（例えばピンチ）を長尺部材に設けて、支持体の縁部を長尺部材に結合してよい。接続手段としては、上述のような一時的な接続を可能にするもの（即ち、可逆的な接続を可能にするもの）を用いるのが一般的に好都合であるが、接着剤のように永続的な接続を可能にするものも用いてもよい。
　尚、長尺部材１４は、培養バッグの離隔方向または積層方向（図１の矢印Ａ参照）に沿って延在する。図示した態様では、ホルダー１０は、長尺部材１４を支持体１２の両側の縁部２０および２１に有する。尚、支持体１２および長尺部材１４に用いる材料、これらの形状および／または長尺部材１４と支持体１２の結合強度（従って、例えば長尺部材の幅（即ち、図１に垂直な方向の長さ））等に応じて、培養への悪影響が予測されない場合には、一方の長尺部材を省略してもよい。一般的には、本発明のホルダーは、図示するように支持体の対向する１組の縁部（２０および２１）の各々に結合するように、長尺部材を少なくとも１対有するのが好ましい。
　図示した態様では、複数の培養バッグ１６の両側に支持体１２が位置し、培養バッグの主表面に対して交差する方向に（好ましくは垂直方向に）延在する長尺部材の各接続手段が支持体に結合してこれを保持すると、隣接状態でありながらも支持体によって離隔された状態で複数の培養バッグを一体に保持することができる。このように一体に保持された複数の培養バッグは、培養バッグのセットとみなすことができる。従って、単一のセットを取り扱うことによって、複数の培養バッグを一緒に取り扱うことができる。その結果、培養バッグを用いる培養作業を簡素化・効率化できる。
　図２に、本発明のホルダーで一体に保持できる培養バッグ１６の一例を模式的平面図にて示す。図示した態様では、容易に理解できるように、６枚の培養バッグ１６を主表面に沿った方向で少しずらした状態で示している。図示した培養バッグ１６は、例えばプラスチック材料のフィルムを２枚重ねた状態で周辺部分をヒートシールすることにより（図示した態様では、六角形状の周辺シール部１９を形成している）、フィルム間に液状物を収容できる空間部２３を形成できる。図示した態様では、培養バッグは、その下部に下部ポート２４を有し、これを介して液状物を空間２３内に供給できる。また、上部に上部ポート２２を有し、そこから空間部内の気体および／または液状物を排出できる。培養バッグを縦置き（即ち、主表面が水平でない方向、好ましくは鉛直方向に延在するように配置する方式）に配置することによって気体が空間部の上方に集まるので、上部ポート２２から気体排出するのが好都合である。ポートは、いずれの適当な態様であってもよく、例えば自己シール性を有するゴム栓であってよい。この場合、図示するように、チューブ（例えば弾性チューブ）２８の先端部に設けたニードル部３０を差し込んで、培養バッグ内の空間部との流体連通を確保できる。本発明が対象とする培養バッグは特に限定されるものではなく、一般的に用いられているものであってよい。ホルダーが一体に保持する培養バッグの数も特に限定されるものではないが、例えば２～１０個、好ましくは３～８個、特に４～７個であってよい。
　本発明のホルダーを用いて、図示するように培養バッグ１６（Ｎ個）を積層して一体に保持するには、例えば次のように実施できる：Ｎ＋１個の支持体１２を準備する。次に、支持体の厚さを考慮した上で、支持体間の距離が所定間隔Ｄとなるように設けたＮ＋１個の接続手段１８を有する長尺部材１４－１を準備する。その後、接続手段１８によって支持体の縁部２０を長尺部材１４－１に結合し、所定間隔Ｄで離間した状態で支持体が長尺部材１４－１から延在させる。次に、支持体の間に培養バッグ１６を挿入し、これらが支持体の間で延在するように配置して、培養バッグを一体に保持したセットを形成する。その後、必要に応じて、支持体の対向する縁部２１に同じ構造の別の長尺部材１４－２を結合してよく、このようにして、図２に示すような構造とするのが通常好ましく、これによって、培養バッグのセットがより堅牢なものとなる。このようにして本発明のホルダーによって培養バッグを一体に保持する場合、別の態様では、培養バッグおよび支持体が水平方向で交互に積層された状態で支持体を長尺部材に結合してよい。更に別の態様では、培養バッグおよび支持体が水平でない方向で（即ち、縦置きで、例えば鉛直方向または斜め方向で）並んだ状態で支持体を長尺部材に結合してよい。支持体および培養バッグ１６が実質的に水平方向に延在する図１に示す状態を９０°回転して長尺部材１４が水平方向に延在する状態が後者の態様に対応する。
　上述のように複数の培養バッグを一体に保持したセットを、培養バッグが斜め方向、好ましくは鉛直方向またはそれに近い方向で延在するように配置して、培養バッグの下縁部に設けたポートから液状物を供給する。この場合、培養バッグに気体が予め存在していても、あるいは液状物と一緒に混入しても、培養バッグの上縁部に別のポートを設けておくと、そのポートを介してそのような気体を排出できる。例えば、図２に示す培養バッグのように、下部ポート２４から液状物を供給し、培養バッグの上縁に設けた上部ポート２２から気体を排出できる。別の態様では、培養バッグの上縁部に２つのポートを設け、一方から液状物を供給し、他方から気体を排出できる。このように、培養バッグから気体を排出する作業が必要な場合、本発明のホルダーを用いて複数の培養バッグを一体に保持してセットを形成し、バッグを斜め～鉛直に延在するようにセットを配置すると、即ち、縦置きに配置すると、気体の排出を簡素化できるので好都合である。
　液状物の供給が完了した後、場合により気体の排出も完了した後、一体に保持した培養バッグのセットを横置きにしてよく、その状態で、インキュベータ内のトレイ上に配置して培養工程を実施できる。このように、本発明のホルダーを用いると、複数の培養バッグをセットとして一緒に扱うことができ、しかも、これらの培養バッグを横置きから縦置きに、また、その逆の配置に簡便に変更できる。その結果、それぞれの配置の問題点（例えば、横置きでは気体を排出し難いこと、縦置きでは沈降性の細胞ではその濃度が鉛直方向で大きく異なり得ること）を回避すると共に、それぞれの載置の利点（例えば、縦置きでは気体の排出が容易であること、横置きでは細胞の濃度変化が小さいこと）を容易に活用できる。
　図３に、本発明のホルダーを用いて、複数の培養バッグを保持する様子を斜視図にて模式的に示す。図示した態様では、簡単のため、培養バッグの図示を省略している。図示した態様では、台４０上に、本発明のホルダーを用いて、４つの長尺部材４６によって離間して配置された、合わせて７枚の支持体４２の間に形成された、合わせて６つの間隙に、培養バッグがそれぞれ配置されて一体に保持されている様子を示す。即ち、本発明のホルダーは、支持体４２および長尺部材４６を有して成る。　
　図示した態様では、それぞれの長尺部材４６が７枚の支持体４２を所定間隔Ｄ１を隔てて離間状態で保持している。即ち、支持体４２は、培養バッグの上縁部付近でその両側に位置する２つの長尺部材４６－１および４６－２に、また、培養バッグの下縁部付近でその両側に位置する２つの長尺部材４６－３および４６－４に結合し、これらの支持体の間で培養バッグが一体に保持されている。図示した態様では、長尺部材４６は、長手方向部分４８およびそれから垂直に延びる握持部分（または把持部分）５０を有して成る。図示した態様では、握持部分５０は、長手方向部分の端部に位置するものが見えている（端部の間に位置する握持部分５０は殆ど見えない状態）が、それぞれの長尺部材４６の長手方向部分４８は、支持体が所定間隔で離間するように離れた８つの握持部分５０を有し、隣接する握持部分５０の間に支持体４２の縁部が押し込まれている。即ち、長手方向部分４８および握持部分５０が（厳密には隣接する握持部分５０と長手方向部分４８により規定される空隙部）が支持体の縁部に結合する接続手段として機能する。好ましい態様では、支持体の押し込まれる部分も若干のインデント部分を有し、その部分に長手方向部分が図示するように部分的に嵌まり込むようになっている。即ち、上記空隙部とインデント部が相互に係合するのが好ましく、図示した態様では、長手方向部分４８の露出面が支持体４２の縁部の露出面の近傍に存在する。
　本発明のホルダーを用いて、図３に示すように培養バッグを一体に保持するには、支持体４２および培養バッグを横置きで交互に積層した後に、図３に示すように支持体の一方の縁部の両側にて長尺部材４６－１および４６－２を、他方の縁部の両側にて長尺部材４６－３および４６－４を結合することができる。別の態様では、長尺部材が例えば樹脂で形成され、その結果、弾性変形できる場合、図３の最下位の支持体を長尺部材の最下位の接続手段に結合し、その支持体の上に培養バッグを載置し、その上に次の支持体を配置して長尺手段に結合し、その上に培養バッグを載置するというように、支持体の長尺部材への結合、その後の培養バッグの支持体上への載置を繰り返して一体に保持することもできる。
　尚、支持体間に配置する培養バッグは、所定量の液状物を含んで膨らんだ状態であってよく、別の態様では、空の状態であってよい。後者の態様では、培養バッグを一体に保持した後に所定量の液状物を供給できる。
　図３では、４つ長尺部材が配置されているが、例えば、長手方向部分４８の幅方向の長さｗを大きくすると、支持体の対向する縁部の間の中央部付近（矢印Ｂで示す箇所５２参照）の両側に長尺部材を配置することで２つの長尺部材を配置して培養バッグを保持する態様も可能である。また、長手方向部分４８から握持部分５０が延びる距離を長くすると、例えば、図示する態様では、支持体の右側と左側との間の中央（×で示す箇所５４参照）まで、またはそれ以上に握持部分５０が延在するようにし、および／または握持部分に適切な材料を選択すると、単一の長尺部材を用いても培養バッグを保持することが可能となる。この意味で、本発明において、接続手段は、従って、その握持部分は、支持体の少なくとも縁部に結合できる。握持部分５０の延在長さが大きくなると、その取り扱いが煩雑になる場合があるので、握持部分５０の延在長さは、支持体の上記中央までの距離（即ち、支持体の幅の半分）の１／２以下、好ましくは１／４以下、特に好ましくは１／８以下である。１つの好ましい態様では、支持体の縁部に（例えば握持部分５０の延在長さが中央までの距離の１／１０程度の延在長さとなるように）結合でき、この場合、長尺部材と支持体との結合およびその解除が簡便になる。
　更に別の態様では、図３のように、４つの長尺部材に加えて、支持体の縁部の中央付近５２にて支持体に結合する長尺部材（両側で２箇所）を設けてもよい。長尺部材の数は、長尺部材と支持体の形状および材料、積層すべき培養バッグの形状および特性等に応じて適宜選択できる。従って、本発明のホルダーは、少なくとも１つの長尺部材を有し、好ましくは、支持体の両側の対向する縁部にて結合するように、偶数（例えば２、４または６）の長尺部材を有する。支持体の数が増えると、培養バッグのセットの形成およびその解体の作業が繁雑になるので、長尺部材の数は２、特に４であるのが一般的に望ましい。
　図４に、本発明のホルダーを用いて、複数の培養バッグを保持する様子を、図３と同様に斜視図にて模式的に示す。図示した態様においても、簡単のため、培養バッグの図示を省略している。図４の態様では、隣接する支持体４２の間の所定間隔Ｄ２が図３の態様より大きい点（即ち、Ｄ２＞Ｄ１）で図３に示す態様と異なる以外は、図３の態様と実質的に同じである。その結果、図３では見え難かった隣接する支持体の間に位置する握持部分５０を図４では図示している。
　図３に示す状態で培養バッグに液状物を供給して培養した後、（例えば細胞成長および．または細胞数増加のために）培養バッグに液状物を追加する場合、バッグの厚さが大きくなる。その場合、図３の所定間隔Ｄ１で支持体が離間した状態では、厚さが大きくなった培養バッグを保持することは不可能となる。そこで、図４に示すように、支持体４２に挟まれた握持部分５０の幅（または厚さ、即ち、長尺部材が延在する方向に沿ったディメンジョン）を大きくして支持体間の所定間隔をより大きいＤ２となるように構成した長手方向部分４８を有する長尺部材４６を用いて、培養バッグを一体に保持する。
　所定間隔をＤ１とする長尺部材の所定間隔をＤ２とする別の長尺部材による置換は、例えば次のように実施できる：本発明のホルダーによって一体に保持した培養バッグのセットを図３に示すよう横置きにして台４０上に配置する。次に、この状態で長尺部材４６を支持体から引き抜くことにより外して、支持体４２の間に培養バッグが挟まれている状態にする。その後、予め準備した、図４に示す所定間隔Ｄ２にできる別の長尺部材４６の接続手段の握持部分の間に支持体４２の縁部を押し込んで結合することによって長尺部材を置換する。尚、台４０の高さ（または厚さｔ０）は、長尺部材の端部に位置する握持部材５０の厚さ（ｔｇ）より大きくして、支持体４２に対する長尺部材４６の着脱を容易にするのが好ましい。
　本発明のホルダーによって培養バッグを一体に保持する場合、上述のように支持体および培養バッグを交互に積層した、即ち、横置きに載置した後に長尺部材を図３に示すように支持体の上方の両側と下方の両側に結合することができる。また、一体に保持した培養バッグのセットを解体する場合も、セットを横置きに配置した状態で長尺部材を取り外すことができる。
　別の態様では、支持体および培養バッグを縦置きに配置して、本発明のホルダーを用いて支持体の間に（好ましくは隣接するように）培養バッグが位置するようにして並べ、その後、長尺部材を支持体に結合することによって培養バッグが一体に保持されたセットを形成してよい。図５に縦置きに配置して形成したセットを模式的に斜視図にて示す。
　図５に示すように、支持体４２および培養バッグ４３を交互に縦置きに並べ、支持体の側方の両縁部の上方に長尺部材４６－１および４６－２を、下方に長尺部材４６－３および４６－４をそれぞれ配置して長尺部材（合わせて４つの長尺部材）を支持体４２に結合する。別の態様では、支持体４２のみを予め隣接して縦置きで並べた後に長尺部材４６を結合して、培養バッグが存在しない状態のセットを予め準備し、その後、支持体間に培養バッグ４３を挿入することもできる。更に別の態様では、各長尺部材の端部に位置する接続手段に縦置き配置した支持体４２－１（または４２－７）の縁部を結合し、その支持体に隣接して培養バッグを縦置きで並べ、その培養バッグに隣接して次の支持体を縦置きで並べて長尺部材に結合し、その支持体に隣接して培養バッグを縦置きで並べ、その培養バッグに隣接して次の支持体を縦置きで並べて長尺部材に結合する。このように結合することおよび並べることを繰り返して、本発明のホルダーによって培養バッグが一体に保持された、図５に示すセットを形成できる。
　このように培養バッグが縦置きで配置されたセットを用いると、そのままの状態で形成したセットに液状物を供給でき、培養バッグ内の存在し得る気体を簡単に排出できる。また、図示するように、培養バッグの排出ポート２４が下方に位置するように培養バッグを縦置き配置となるようにセットを載置すると、例えば所定の培養後に培養バッグから液状物を容易に排出できる。この時、培養バッグ内への気体流入を確保すると、例えば図示するように、培養バッグの上方に設けたポート２２から気体が流入できると、液状物の排出が更に容易になる。尚、図示した態様では、支持体４２は、その上方および下方に切り欠き部４９を有する。この切り欠き部４９によって、培養バッグのポートへのアクセスが簡便になる。
　また、支持体および培養バッグが縦置きで並列した状態にある、図示するセットに用いた長尺部材４６を、（例えば支持体間の所定間隔を変更するために）別の長尺部材に置換する場合、支持体および培養バッグの図示する並列状態を一時的に保持し、そのように保持したままで長尺部材４６を支持体から外して別の長尺部材を結合できる。また、支持体および培養バッグが縦置きで並列した状態のセットから同様に長尺部材４６を外した後に、培養バッグを取り出すことができる。
　このように並列状態を一時的に保持するには、例えばセットの周囲にベルト（好ましくは適度な弾性を有するベルト）を巻き付けて支持体および培養バッグ縦置き状態で束ねることができる。別の例としては、セットの状態で端に位置する支持体４２－１および４２－７が倒れないように支えることができる、例えばセットを包囲する周壁、好ましくは縦置きに並んだ支持体を挟むようにできるプレート（例えばブックエンド形態のもの）を用いてもよい。
　上述のように支持体および培養バッグのような部材を縦置きに並べてセットを形成する場合、意図して扱おうとする部材に隣接する他の部材によって、扱いが阻害され得ることを抑制できる。例えば、横置きで積層されている状態のセットにおいて、中央付近の支持体を取り外そうとする場合、そのまま支持体を引き出すと、当該支持体の下に位置する培養バッグも取り出される。従って、培養バッグが引き出されないようにするか、あるいは一緒に引き出して再び戻すことが必要となる。これに対して、支持体および培養バッグのような部材を縦置きに並べたセットの場合、意図する支持体だけを容易に取り出すことができる利点がある。このような利点は、セットとして並べる支持体および培養バッグの数が多くなるほど、顕著になる。
　図６に本発明の長尺部材６０の好ましい態様の一例を模式的斜視図にて示す。長尺部材６０は、支持体への接続手段６２を有する。接続手段の数は、結合すべき支持体（図示せず）の数に対応する。図示した態様では、各接続手段６２は、相互に対向してその間に支持体の縁部を挟み込むことによって支持体を結合できる握持部分６４を有して成る。接続手段６２は、長尺部材の長手方向（矢印Ｃ参照）に沿って移動可能である。詳しくは、長尺部材６０の端部に位置するノブ６６を回転することによって、接続手段６２の長手方向位置を変えることができる。従って、支持体間の所定間隔を変えたい場合には、長尺部材６０に結合している支持体を一旦外すことなく、所定間隔を変えることができる利点を有する。
　より詳しくは、図６（ａ）は、接続手段６２の握持部分６４が実質的に接触状態で隣接している。この状態から、ノブ６６を回転することによって、接続手段６２が長尺部材の長手方向に沿って移動でき、その結果、例えば図６（ｂ）に示すように接続手段が離間した状態となる。尚、図示した態様では、接続手段６２の数が奇数の場合、中央の接続手段は移動する必要は必ずしもなく、その両側に位置する接続手段が相互に反対の方向に移動して接続手段６２間の距離が等しくなる。
　このような接続手段６０の分解斜視図を図７に模式的に示す。長尺部材６０は、円筒部材７０および筐体部材７２を有して成る。円筒部材７０は、その側面に沿って螺旋状に延在する長尺開口部（螺旋状開口部）７７を保持すべき支持体の数と同数有する。螺旋状開口部とは、その開口部に沿って動く場合、円筒の側面に沿って移動しながら、同時に軸方向にも移動できる開口部を意味する。筐体部材７２は、上側部材７４および下側部材７６から構成され、これらを組み合わせることによって筐体を構成する。この筐体は、その内側で円筒部材７０が回転できるように円筒部材の周囲に位置し、長尺部材の長手方向に沿って延在する長尺開口部（線形開口部）７８を有する。長尺部材６０は、長尺開口部７８に沿って移動できる接続手段６２を更に有して成る。接続手段６２は、端部分８０および基部８２を有して成り、基部８２から握持部分６４が突出している。接続手段８２は、端部分８０と基部８２の間に位置してこれらを接続するくびれ部８４を更に有して成り、握持部分６４が支持体の縁部に結合する。
　図示した態様の長尺部材６０では、接続手段６２の端部分８０が円筒部材７０の内側に位置し、また、基部８２が筐体部材の外部に位置し、そして、くびれ部８４が双方の螺旋状開口部７７および７８に位置できるように構成されている。その結果、接続部材６２は、螺旋状開口部７７と線形開口部７８とが交差する箇所においてのみ位置できるので、筐体部材７２を固定した状態でそれに対して円筒部材７０を軸回転すると、そのような交差箇所は筐体部材の長手方向に移動して存在するので、接続手段６２は筐体部材７２の線形開口部７８に沿って移動できることになる。具体的には、筐体部材７２に対する円筒部材７０の所定の回転によって各接続部材６２が位置すべき箇所が所定の等間隔で離間するように、線形開口部に沿って交差箇所が位置する螺旋状開口部７７を形成すればよい。当然ながら、螺旋状開口部７７の数は接続手段６２の数と同じであり、移動する必要がない接続手段が移動する螺旋状開口部７７－０は、実質的に円筒を規定する円の周である。即ち、回転方向に移動しても周方向にのみ移動し、軸方向に移動しない開口部となる。
　本発明のホルダーは、複数の培養バッグを保持するので、培養バッグ数をＮとすると、支持体の数は通常Ｎ＋１となり、従って、接続手段の数もＮ＋１となる。従って、所定間隔Ｄ１で培養バッグを離隔状態で保持する場合にＮ＋１の接続手段を配置すべき箇所（図７にて●で示す）に、円筒部材の母線Ｇ１に沿ってＮ＋１の開口部を設け、次に、所定間隔Ｄ２で培養バッグを離隔状態で保持する場合に接続手段を配置すべき箇所に、円筒部材の母線Ｇ２（Ｇ１の位置から所定の角度だけ（例えば６０°だけ軸回転した箇所に存在する母線）に沿ってＮ＋１の開口部（図７にて○で示す）を設け、同様にして所定間隔Ｄ３に対応する箇所に接続手段を設け、ということを繰り返して開口部を設け、その後、特定のひとつの接続手段がＤ１の時に位置すべき開口部、Ｄ２の時に位置すべき開口部、Ｄ３の時に位置すべき開口部、・・・・をつないで円筒部材の螺旋状開口部７７を形成し、他の接続手段についても同様にして螺旋状開口部７７を形成する。これらの螺旋状開口部は、円筒部材の側面に沿って螺旋状に延在し、これらの螺旋と円筒部材の同一の母線との交差箇所にて接続手段が存在でき、これらの交差箇所は、等間隔で離れ、その箇所に接続部材が位置する場合に支持体が離間する所定間隔、例えばＤ２をもたらす。このような長尺部材６０は、図５において長尺部材に代えて使用することができる。
　先の説明から明らかなように、本発明のホルダーを用いて複数の培養バッグをその主表面が隣接しながらも離隔された状態で一体に保持したセットを形成することができる。このセットは、単一で扱うことによって複数の培養バッグを一緒に扱うことができるので効率的な培養が可能となる。加えて、このセットでは、培養バッグの離隔は、培養バッグの主表面に対して実質的に垂直な方向に沿っているので、１つの培養バッグの上に支持体を介して別の培養バッグが位置する積層構造となる。その結果、培養バッグが向きが横置きになるようにセットを載置した場合、セットが占有する面積は、単一の培養バッグを横置きで配置する場合に占有する面積と同等である。従って、専有面積の点からも効率的な培養を可能にする。
　本発明が対象とするのは、培養バッグを用いる培養であれば特に限定されるものではなく、液状物もそのような培養に用いられるものであれば、特に限定されるものではない。具体的には、培養バッグの内面に付着して増殖する接着細胞のような培養に好適であり、液状物としては、例えば目的の細胞に適した培地、血清、試薬を例示できる。
１０…ホルダー、１２…支持体、１４…長尺部材、１６…培養バッグ、
１８…接続手段（または凹部）、１９…シール部、２０，２１…縁部、
２２…上部ポート、２４…下部ポート、２８…チューブ、３０…ニードル部、
４０…台、４２…支持体、４３…培養バッグ、４６…長尺部材、
４８…長手方向部分、４９…切り欠き部、５０…握持部分、
５２…中央部付近、５４…中央付近、６０…長尺部材、６２…接続手段、
６４…握持部分、６６…ノブ、７０…円筒部材、７２…筐体部材、
７４…上側部材、７６…下側部材、７７…螺旋状開口部、７８…線形開口部、
８０…端部、８２…基部、８４…くびれ部。

Claims (12)

  1. 　隣接する複数の培養バッグを離隔した状態で保持するホルダーであって、
    　各培養バッグの両側に位置する支持体と、所定間隔で離間した状態で支持体を保持し、培養バッグの離隔方向に延在する長尺部材と
    を有して成るホルダー。
  2. 　各支持体はプレートであり、長尺部材は各プレートの縁部に結合できる接続手段を有する請求項１に記載のホルダー。
  3. 　長尺部材は、所定間隔で離れた箇所にて各プレートの縁部に結合できる接続手段を有する請求項２に記載のホルダー。
  4. 　接続手段は、長尺部材の長手方向に沿って移動できる請求項３に記載のホルダー。
  5. 　培養バッグの厚さに対応して所定間隔を変更できる請求項１～４のいずれかに記載のホルダー。
  6. 　隣接する複数の培養バッグを離隔した状態で保持するホルダーを構成するキットであって、
    　培養バッグの両側に位置する支持体と、所定間隔で離間した状態で支持体を保持し、培養バッグの離隔方向に延在する長尺部材と
    を有して成るキット。
  7. 　支持体はプレートであり、長尺部材はプレートの縁部に結合できる接続手段を有する請求項６に記載のキット。
  8. 　複数の長尺部材を有して成り、各長尺部材は、所定間隔で離れた箇所にて支持体の縁部に結合できる接続手段を有し、各長尺部材の接続手段の所定間隔は相互に異なる請求項７に記載のキット。
  9. 　長尺部材は、その長手方向に沿って移動でき、各プレートの各縁部に結合できる接続手段を有する請求項８に記載のキット。
  10. 　培養バッグを用いて培養する方法において、
    　請求項１～５のいずれかに記載のホルダーを用いて、複数のバッグを一体に保持する工程を含む培養方法。
  11. 　培養の途中で、支持体の所定間隔を変更する工程を含む請求項１０に記載の培養方法。
  12. 　培養バッグに培地を入れて接着細胞を培養することを特徴とする請求項１０または１１に記載の培養方法。
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