WO2020138028A1 - 細胞移植キット、袋状構造物の製造方法、および糖尿病治療剤 - Google Patents

細胞移植キット、袋状構造物の製造方法、および糖尿病治療剤 Download PDF

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諒 古川
中村　健太郎
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富士フイルム株式会社
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    • A61F2250/0058—Additional features; Implant or prostheses properties not otherwise provided for
    • A61F2250/006—Additional features; Implant or prostheses properties not otherwise provided for modular
    • A61F2250/0063—Nested prosthetic parts

Definitions

  • the present invention relates to a cell transplant kit useful in treating a specific disease by transplanting cells.
  • the present invention further relates to a method for producing a bag-like structure used in the above cell transplantation kit and a therapeutic agent for diabetes containing the above cell transplantation kit.
  • Trans-portal intrahepatic transplantation is currently the main method of islet transplantation.
  • most of the pancreatic islets transplanted by intraportal intrahepatic transplantation die in a short time due to an immune reaction, so multiple transplants are required to obtain a sufficient transplantation effect.
  • problems such as embolism and bleeding cannot be avoided, and it is not easy to remove it.
  • Searches for other transplantation sites have been conducted to solve the above problems.
  • blood flow was low at transplant sites other than portal vein transplantation, especially subcutaneously, and the survival rate of pancreatic islets was lower than other sites. Therefore, it has been attempted to increase the engraftment rate of pancreatic islets by creating a transplant site rich in blood flow before transplanting pancreatic islets.
  • Non-Patent Document 1 describes that the engraftment of transplanted cells is improved by creating a vascular bed.
  • U.S. Pat. No. 6,096,849 is a device for implanting cells within a host, comprising a porous scaffold including at least one chamber having a proximal end and a distal end, and within the at least one chamber, and/or Alternatively, a device comprising at least one removable plug configured to be disposed within at least a portion of the porous scaffold, the porous scaffold comprising polypropylene mesh is described.
  • Patent Document 2 discloses a neovascular bed forming tool to be embedded in a tissue, which is capable of forming a void covered with capillaries around the neovascular bed forming tool when implanted. Have been described.
  • the tool described in Patent Document 2 is a tool used to create a tissue rich in capillaries.
  • Non-Patent Document 2 describes that cells are immunoisolated by alginate capsules.
  • An object of the present invention is to provide a cell transplantation kit capable of exerting a high therapeutic effect by transplanted cells, a method for producing a bag-like structure used in the cell transplantation kit, and a therapeutic agent for diabetes containing the cell transplantation kit. ..
  • the present inventor preliminarily transplanted cells by preliminarily transplanting a bag-shaped structure having micropores in which blood vessels and immune cells were difficult to enter into a living body. It was found that the heterogeneous cells can be engrafted and the therapeutic effect can be exerted by preparing and then transplanting the microencapsulated cells to the transplant site.
  • the present invention has been completed based on the above findings.
  • a first bag-shaped structure composed of a film having pores having an average pore diameter of 0.2 mm or less, and a plurality of average major diameters larger than the average pore diameter of the pores of the first bag-shaped structure.
  • a cell transplantation kit including a second bag-shaped structure, wherein at least a part of the plurality of second bag-shaped structures contains cells.
  • the material of the first bag-shaped structure contains nylon, polysulfone, polytetrafluoroethylene, polyurethane, polyester, vinyl chloride, polycarbonate, acrylic, stainless steel, titanium, silicon, or 2-methacryloyloxyethylphosphorylcholine.
  • ⁇ 3> The cell transplant kit according to ⁇ 1> or ⁇ 2>, wherein the material of the first bag-shaped structure contains nylon or polysulfone.
  • the material of the second bag-shaped structure is polysaccharide hydrogel, polypeptide, polylactic acid, polyglycolic acid, lactic acid/glycolic acid copolymer, hyaluronic acid, glycosaminoglycan, proteoglycan, chondroitin, cellulose, agarose, carboxy.
  • ⁇ 5> The cell transplantation kit according to any one of ⁇ 1> to ⁇ 4>, wherein the material of the second bag-shaped structure contains sodium alginate.
  • ⁇ 6> The cell transplantation kit according to any one of ⁇ 1> to ⁇ 5>, wherein at least a part of the plurality of second bag-shaped structures does not contain cells.
  • ⁇ 7> The cell transplantation kit according to any one of ⁇ 1> to ⁇ 6>, wherein the proportion of the second bag-shaped structure that does not contain cells is 50% or less.
  • ⁇ 8> The cell transplantation kit according to any one of ⁇ 1> to ⁇ 7>, wherein the cells are cell aggregates.
  • ⁇ 9> The cell transplant kit according to ⁇ 8>, wherein the cell aggregate is a pancreatic islet.
  • the average number of cell aggregates encapsulated in one second bag-shaped structure is 1.0 or more and 5.0.
  • the following is the cell transplantation kit according to ⁇ 8> or ⁇ 9>.
  • ⁇ 11> The cell transplantation kit according to any one of ⁇ 1> to ⁇ 10>, wherein the pores of the first bag-shaped structure have an average pore diameter of 50 ⁇ m or less.
  • ⁇ 12> The cell transplantation kit according to any one of ⁇ 1> to ⁇ 11>, wherein the pores of the first bag-shaped structure have an average pore diameter of 1 ⁇ m or less.
  • the cell transplantation kit according to any one of ⁇ 1> to ⁇ 12> which contains mesenchymal stem cells inside the first bag-shaped structure.
  • ⁇ 16> The cell transplantation kit according to ⁇ 14> or ⁇ 15>, wherein the cells contained in the cell structure are mesenchymal stem cells.
  • the first bag-shaped structure is introduced into a living body, a film derived from the recipient is formed around the first bag-shaped structure introduced into the living body, and then the first bag-shaped structure is formed.
  • ⁇ 19> The cell according to ⁇ 18>, wherein the first bag-shaped structure containing a cell-nonadhesive material is sewn to the abdominal cavity side of the peritoneum to introduce the first bag-shaped structure into a living body.
  • Transplant kit. ⁇ 20> A therapeutic agent for diabetes comprising the cell transplant kit according to any one of ⁇ 1> to ⁇ 19>.
  • ⁇ 21> The cell transplantation kit according to any one of ⁇ 1> to ⁇ 19>, for use in the treatment of diabetes.
  • ⁇ 22> A method for producing a bag-shaped structure including islets, which comprises suspending islets in a polymer solution of 0.5 to 4% by mass, wherein the volume of the polymer solution for one islet is 0. The manufacturing method, which is 0.01 to 2.0 ⁇ L.
  • the cell transplantation kit of the present invention a high therapeutic effect of transplanted cells can be exhibited.
  • the method for producing a bag-shaped structure of the present invention it is possible to produce a bag-shaped structure suitable for use in the above-mentioned cell transplantation kit of the present invention.
  • FIG. 1 is a schematic diagram showing an operation for transplanting a pancreatic islet using an example of the cell transplant kit of the present invention.
  • FIG. 2 shows a state 4 weeks after the implantation of the first bag-shaped structure.
  • FIG. 3 shows a state of transplanting a pancreatic islet.
  • FIG. 4 shows the blood glucose level transition in xenogeneic islet transplantation using the first bag-shaped structure made of nylon.
  • FIG. 5 shows changes in body weight in xenogeneic islet transplantation using the first bag-shaped structure made of nylon.
  • FIG. 6 shows immunostaining images of tissue sections 4 weeks after transplantation of the cell structure (+) group and the cell structure ( ⁇ ) group.
  • FIG. 7 shows HE-stained images of tissue sections of the cell structure (+) group and the cell structure ( ⁇ ) group 4 weeks after transplantation.
  • FIG. 8 shows HE-stained images of tissue sections around the microcapsules 4 weeks after transplantation of the cell structure (+) group and the cell structure ( ⁇ ) group.
  • the cell transplantation kit of the present invention comprises a first bag-shaped structure composed of a film having pores having an average pore diameter of 0.2 mm or less, and an average major axis larger than the average pore diameter of the pores of the first bag-shaped structure. And a plurality of second bag-shaped structures having, wherein at least a part of the plurality of second bag-shaped structures contains cells.
  • a first bag-shaped structure composed of a film having pores having an average pore diameter of 0.2 mm or less, and an average major axis larger than the average pore diameter of the pores of the first bag-shaped structure.
  • a plurality of second bag-shaped structures having, wherein at least a part of the plurality of second bag-shaped structures contains cells.
  • the first bag-shaped structure is composed of a film having pores having an average pore diameter of 0.2 mm or less.
  • the average pore diameter of the pores of the first bag-shaped structure may be smaller than the average major axis of the second bag-shaped structure, preferably smaller than the minor axis of the second bag-shaped structure, more preferably It is 50% or less of the short diameter of the second bag-shaped structure.
  • the first bag-shaped structure has pores with an average pore diameter of 0.2 mm or less, preferably pores with an average pore diameter of 50 ⁇ m or less, more preferably pores with an average pore diameter of 20 ⁇ m or less, and It preferably has pores having an average pore diameter of 1 ⁇ m or less, and particularly preferably has pores having an average pore diameter of 0.05 ⁇ m or less.
  • the average pore diameter of the pores is 0.2 mm or less, invasion of connective tissue, blood vessels and immune cells into the first bag-shaped structure is not promoted.
  • the average pore diameter of the first bag-shaped structure 50 or more consecutive pores are selected, each pore diameter is measured, and an average value can be calculated as the average pore diameter. It can also be measured by ASTM F316-80.
  • the porosity of the first bag-shaped structure is not particularly limited, but is preferably 25% to 85%, more preferably 40% to 75%.
  • the porosity indicates the ratio of the area occupied by the pores on the entire surface of the bag-shaped structure.
  • the porosity is calculated by calculating the area ratio between the opening and the film material in the image of the surface or cross section of the film taken vertically from the film thickness direction using an optical microscope or a scanning electron microscope (SEM). It is measurable.
  • the pore size of the first bag-shaped structure is preferably more uniform. However, when the first bag-shaped structure has a pore size distribution in the thickness direction, a comparison of the pore size in the thickness direction of the membrane is performed by scanning a scanning electron microscope (SEM) photograph of the membrane cross section. It shall be divided into directions. The number of divisions can be appropriately selected depending on the thickness of the film. The number of divisions is at least 5 or more, and the size of the division width means the width of the film in the thickness direction, not the width in the photograph. In comparing the pore sizes in the thickness direction of the membrane, the pore sizes are compared as the average pore size of each section. The average pore diameter of each section may be, for example, the average value of 50 pores in each section of the membrane cross-sectional view.
  • the first bag-shaped structure is used for immunoisolation.
  • Immunoisolation is a method of preventing immune rejection.
  • immunoisolation is one of the methods of preventing immune rejection of the recipient during transplantation.
  • the immune rejection reaction is the rejection reaction of the recipient for the transplanted cells.
  • Immunoisolation isolates cells from the immune rejection of the recipient. Immune rejection reactions include those by a cellular immune response and those by a humoral immune response.
  • the first bag-shaped structure is preferably a permselective membrane that allows nutrients such as oxygen, water and glucose to permeate therethrough and prevents permeation of immune cells involved in immune rejection.
  • immune cells include macrophages, dendritic cells, neutrophils, eosinophils, basophils, natural killer cells, various T cells, B cells and other lymphocytes.
  • the first bag-shaped structure preferably blocks the permeation of high molecular weight proteins such as immunoglobulins (IgM or IgG) and complement depending on the intended use, and has a relatively low molecular weight physiologically active substance such as insulin. Is preferably transmitted.
  • the selective permeability of the first bag-shaped structure may be adjusted according to the application.
  • the first bag-shaped structure may be, for example, a selectively permeable membrane that blocks substances having a molecular weight of 500 kDa or more, 100 kDa or more, 80 kDa or more, or 50 kDa or more.
  • the first bag-shaped structure is preferably capable of blocking the penetration of IgG, which is the smallest antibody (molecular weight: about 160 kDa).
  • the first bag-shaped structure may be a selectively permeable membrane that blocks substances having a diameter of 500 nm or more, 100 nm or more, 50 nm or more, or 10 nm or more as a sphere size.
  • the first bag-shaped structure is preferably a material having high biocompatibility, and is preferably a material that does not cause an inflammatory reaction.
  • the material for the first bag-shaped structure is nylon, polysulfone, polytetrafluoroethylene (PTFE), polyurethane, polyester, vinyl chloride, polycarbonate, acrylic, stainless steel, titanium, silicon, or 2-methacryloyloxyethylphosphorylcholine (MPC). ) Is preferable, and nylon or polysulfone is more preferable.
  • the inside of the first bag-shaped structure may contain a cytokine or a substance having an anti-inflammatory effect.
  • the inside of the first bag-shaped structure may contain a cell or a cell structure.
  • the thickness of the film forming the first bag-shaped structure is not particularly limited, but is preferably 10 ⁇ m to 500 ⁇ m.
  • the lower limit of the thickness of the film forming the first bag-shaped structure may be 20 ⁇ m or more, or 30 ⁇ m or more.
  • the upper limit of the thickness of the film forming the first bag-shaped structure may be 400 ⁇ m or less, 300 ⁇ m or less, 250 ⁇ m or less, 200 ⁇ m or less, or 100 ⁇ m or less.
  • the surface of the first bag-like structure may be coated with a cell adhesive substance such as extracellular matrix, collagen, laminin or vitronectin.
  • the surface of the first bag-shaped structure may be coated with a cell non-adhesive coating agent.
  • the shape of the first bag-shaped structure may be rectangular or elliptical.
  • the first bag-shaped structure may be composed of a porous film.
  • the porous membrane refers to a membrane having a plurality of pores.
  • the holes can be confirmed by, for example, a scanning electron microscope (SEM) photographed image or a transmission electron microscope (TEM) photographed image of the membrane cross section.
  • the porous membrane has a layered dense portion having the smallest pore size therein, and the pore diameter continuously increases in the thickness direction from the dense portion toward at least one surface of the porous membrane. ..
  • the pore size shall be judged by the average pore size of the section described later.
  • the first bag-shaped structure can have a longer life because the porous membrane has a pore size distribution. This is because the effect of performing multi-stage filtration using membranes having substantially different pore sizes can be obtained, and deterioration of the membrane can be prevented.
  • the pore size may be measured from the photograph of the cross section of the film obtained by an electron microscope.
  • the porous membrane is cut with a microtome or the like, and a photograph of the cross section of the porous membrane can be obtained as a section of the thin film whose cross section can be observed.
  • -Comparison of the pore size in the thickness direction of the membrane shall be performed by dividing the SEM photograph of the membrane cross section in the thickness direction of the membrane.
  • the number of divisions can be appropriately selected depending on the thickness of the film.
  • the number of divisions is at least 5 or more.
  • the size of the division width means the width of the film in the thickness direction, and does not mean the width in the photograph.
  • the pore sizes are compared as the average pore size of each section.
  • the average pore diameter of each section may be, for example, the average value of 50 pores in each section of the membrane cross-sectional view.
  • the film cross-section in this case may be obtained, for example, with a width of 80 ⁇ m (distance of 80 ⁇ m in the direction parallel to the surface). At this time, with respect to the section where the holes are large and 50 pieces cannot be measured, it is sufficient if only the number that can be taken in the section is measured. At this time, if the hole is not large enough to fit in the section, the size of the hole is measured over the other sections.
  • the layered dense part with the smallest pore size refers to the layered part of the porous membrane corresponding to the section with the smallest average pore size in the section of the above membrane cross section. Even if the dense part is composed of a part corresponding to one section, from a part corresponding to a plurality of sections having an average pore size within 1.1 times of the section having the smallest average pore size, such as two or three. It may be.
  • the dense portion may have a thickness of 0.5 ⁇ m to 50 ⁇ m, and preferably 0.5 ⁇ m to 30 ⁇ m.
  • the average pore size of the dense part is the minimum pore size of the porous membrane.
  • the minimum pore size of the porous membrane is preferably 0.02 ⁇ m to 1.5 ⁇ m, more preferably 0.02 ⁇ m to 1.3 ⁇ m. This is because at least the normal permeation of cells can be prevented with the minimum pore size of such a porous membrane.
  • ASTM F316-80 it is assumed that the average pore size of the dense part is measured by ASTM F316-80.
  • the porous membrane has a dense part inside. “Inside” means not in contact with the surface of the membrane, and “having a dense portion inside” means that the dense portion is not the closest division to any surface of the membrane.
  • an immunoisolation membrane by using a porous membrane having a structure having a dense site inside, it is possible to obtain a substance that is intended to permeate more than when a porous membrane having the same dense site in contact with the surface is used. Permeability does not easily decrease. Although not bound to any theory, it is considered that the protein is less likely to be adsorbed due to the dense portion inside.
  • the dense part is biased toward one surface side of the central part of the thickness of the porous membrane.
  • the dense portion is preferably located within a distance of 1 ⁇ 5 of the thickness of the porous film from one surface of the porous film, and more preferably within a distance of 1 ⁇ 3 of the thickness of the porous film. More preferably, the distance is within a quarter. This distance may be determined in the above-mentioned film cross-section photograph.
  • the surface of the porous membrane on the side closer to the dense portion is referred to as “surface X”.
  • the pore diameter continuously increases in the thickness direction from the dense portion toward at least one surface.
  • the pore size may continuously increase in the thickness direction from the dense part to the surface X, and the pore size may continuously increase in the thickness direction from the dense part to the surface opposite to the surface X.
  • the pore diameter may continuously increase in the thickness direction when going from the dense portion to any surface of the porous membrane.
  • the pore diameter continuously increases in the thickness direction means that the difference in the average pore diameter between adjacent sections in the thickness direction is 50% or less of the difference between the maximum average pore diameter (maximum pore diameter) and the minimum average pore diameter (minimum pore diameter). , Preferably 40% or less, more preferably 30% or less. “Continuous increase” essentially means that there is no decrease and that the increase is uniform, but the decreasing site may occur by accident. For example, when two divisions are combined from the surface, the average value of the combination is uniformly increasing (uniformly decreasing when going from the surface to the dense part), “from the dense part to the surface of the membrane”. The pore diameter continuously increases in the thickness direction.”
  • the structure of the porous membrane in which the pore diameter continuously increases in the thickness direction can be realized by, for example, the manufacturing method described later.
  • the surface X of the porous film is on the inner side. That is, it is preferable that the porous membrane is arranged such that the dense portion of the porous membrane is closer to the inside of the first bag-shaped structure.
  • the porous membrane generally comprises a polymer.
  • the porous membrane is preferably essentially composed of a polymer.
  • the polymer forming the porous membrane is preferably biocompatible.
  • biocompatibility means nontoxicity and nonallergenicity, but does not include the property that a polymer is encapsulated in a living body.
  • the polymer preferably has a number average molecular weight (Mn) of 1,000 to 10,000,000, more preferably 5,000 to 1,000,000.
  • polymers include thermoplastic or thermosetting polymers.
  • specific examples of the polymer include polysulfone, cellulose acylate, nitrocellulose, sulfonated polysulfone, polyether sulfone, polyacrylonitrile, styrene-acrylonitrile copolymer, styrene-butadiene copolymer, saponified ethylene-vinyl acetate copolymer, polyvinyl alcohol.
  • PTFE polytetrafluoroethylene
  • polysulfone and cellulose acylate are preferable, and polysulfone is more preferable.
  • the porous membrane may contain components other than the polymer as an additive.
  • the additives include sodium chloride, lithium chloride, sodium nitrate, potassium nitrate, sodium sulfate, metal salts of inorganic acids such as zinc chloride, metal salts of organic acids such as sodium acetate and sodium formate, polyethylene glycol, polyvinyl pyrrolidone and the like.
  • examples thereof include molecules, polymer electrolytes such as sodium polystyrene sulfonate and polyvinylbenzyl trimethyl ammonium chloride, and ionic surfactants such as sodium dioctyl sulfosuccinate and sodium alkylmethyl taurate.
  • the additive may act as a swelling agent for the porous structure.
  • the porous film is preferably a film formed from one composition as a single layer, and preferably not a laminated structure of a plurality of layers.
  • the method for producing the porous film is not particularly limited as long as the porous film having the above-mentioned structure can be formed, and any ordinary method for forming a polymer film can be used.
  • the polymer film forming method include a stretching method and a casting method.
  • the porous membrane having the above-mentioned structure can be prepared by adjusting the type and amount of the solvent used in the membrane-forming stock solution and the drying method after the casting.
  • the porous membrane can be produced by the casting method, for example, by a method including the following (1) to (4) in this order.
  • a film-forming stock solution containing a polymer, an additive as required, and optionally a solvent is cast on a support in a dissolved state.
  • a temperature-controlled moist air is applied to the surface of the cast liquid film.
  • the support is peeled off if necessary.
  • the temperature of the controlled humidity air may be 4° C. to 60° C., preferably 10° C. to 40° C.
  • the relative humidity of the controlled humidity air may be 30% to 70%, preferably 40% to 50%.
  • the absolute humidity of the temperature-controlled humid air is preferably 1.2 to 605 g/kg air, more preferably 2.4 to 300 g/kg air.
  • the controlled humidity air may be applied at a wind speed of 0.1 m/sec to 10 m/sec for 0.1 second to 30 seconds, preferably 1 second to 10 seconds.
  • the average pore diameter and the position of the dense portion can be controlled by the concentration of water contained in the temperature-controlled moist air and the time for which the temperature-controlled moist air is applied.
  • the average pore size of the dense portion can be controlled by the amount of water content in the stock solution for film formation.
  • the polymer has a low solubility but is immersed in a coagulation liquid containing a solvent having compatibility with the solvent of the polymer to fix the above coacervation phase as fine pores and form pores other than fine pores. can do.
  • the temperature of the coagulating liquid in the above process of immersion in the coagulating liquid may be -10°C to 80°C.
  • the time from the formation of the coacervation phase from the dense part to the support surface side to solidification is adjusted, and the size of the pore diameter to reach the support surface side surface is controlled. Is possible.
  • the temperature of the coagulation liquid is increased, the formation of the coacervation phase is accelerated and the time until solidification is prolonged, so that the pore diameter toward the support surface side tends to be large.
  • the temperature of the coagulation liquid is lowered, the formation of the coacervation phase is delayed and the time until solidification is shortened, so that the pore diameter toward the support surface side is unlikely to be large.
  • a plastic film or glass plate may be used as the support.
  • the material of the plastic film include polyester such as polyethylene terephthalate (PET), polycarbonate, acrylic resin, epoxy resin, polyurethane, polyamide, polyolefin, cellulose derivative and silicone.
  • PET polyethylene terephthalate
  • acrylic resin epoxy resin
  • polyurethane polyamide
  • polyolefin polyamide
  • cellulose derivative cellulose derivative
  • silicone silicone
  • a glass plate or PET is preferable, and PET is more preferable.
  • the stock solution for film formation may contain a solvent.
  • a solvent in which the polymer used has high solubility hereinafter, may be referred to as “good solvent” may be used depending on the polymer used.
  • the good solvent is preferably one that is quickly replaced with the coagulating liquid when immersed in the coagulating liquid.
  • the solvent include N-methyl-2-pyrrolidone, dioxane, tetrahydrofuran, dimethylformamide, dimethylacetamide or a mixed solvent thereof when the polymer is polysulfone and the like, and dioxane and N when the polymer is polyacrylonitrile and the like.
  • non-solvent a solvent having a low polymer solubility but having a compatibility with the polymer solvent
  • non-solvent examples include water, cellosolves, methanol, ethanol, propanol, acetone, tetrahydrofuran, polyethylene glycol, glycerin and the like. Of these, it is preferable to use water.
  • the polymer concentration as a film-forming stock solution may be 5% by mass or more and 35% by mass or less, preferably 10% by mass or more and 30% by mass or less.
  • the resulting porous film can be provided with sufficient permeability (for example, water permeability), and when the amount is 5% by mass or more, the substance can selectively permeate a substance. Can be secured.
  • the addition amount of the additive is not particularly limited as long as the uniformity of the stock solution for film formation is not lost by the addition, but is usually 0.5% by mass or more and 10% by mass or less with respect to the solvent.
  • the ratio of the non-solvent to the good solvent is not particularly limited as long as the mixed solution can maintain a uniform state, but is 1.0% by mass to 50% by mass. It is more preferably 2.0% by mass to 30% by mass, further preferably 3.0% by mass to 10% by mass.
  • a solvent in which the polymer used has a low solubility examples include alcohols such as water, methanol, ethanol and butanol; glycols such as ethylene glycol and diethylene glycol; aliphatic hydrocarbons such as ether, n-hexane and n-heptane; glycerin and the like. Examples include glycerols.
  • preferable coagulating liquid include water, alcohols, or a mixture of two or more thereof. Of these, it is preferable to use water.
  • washing can be performed by immersing in a solvent.
  • Diethylene glycol is preferred as the washing solvent.
  • the distribution of the N element in the porous membrane can be adjusted by using diethylene glycol as a washing solvent and adjusting either one or both of the temperature and the duration of diethylene glycol for immersing the membrane.
  • the amount of polyvinylpyrrolidone remaining in the film can be controlled. After washing with diethylene glycol, further washing with water may be performed.
  • the stock solution for forming the porous membrane is preferably a stock solution prepared by dissolving polysulfone and polyvinylpyrrolidone in N-methyl-2-pyrrolidone and adding water.
  • a stock solution prepared by dissolving polysulfone and polyvinylpyrrolidone in N-methyl-2-pyrrolidone and adding water Regarding the method for producing the porous membrane, reference can be made to JP-A-4-349927, JP-B-4-68966, JP-A-04-351645, JP-A-2010-235808 and the like.
  • the second bag-shaped structure has an average major axis larger than the average pore size of the holes of the first bag-shaped structure. At least a part of the plurality of second bag-shaped structures contains cells.
  • the average major axis can be measured from the image taken with ImageJ by photographing the culture dish containing 50 or more of the prepared second bag-like structures with BZ-X all-in-one tendency microscope (KEYENCE) or Cell3imager (Shimadzu). is there.
  • a polysaccharide hydrogel As the material of the second bag-shaped structure, preferably, a polysaccharide hydrogel, polypeptide, polylactic acid, polyglycolic acid, lactic acid/glycolic acid copolymer, hyaluronic acid, glycosaminoglycan, proteoglycan, chondroitin, cellulose, agarose, Carboxymethyl cellulose, chitin, chitosan, alginic acid, sodium alginate, calcium alginate, potassium alginate, barium alginate, alginate, polylysine layered matrix, polyornithine layered matrix, photopolymerizable polymer, polyacrylate, hydroxyethyl methacrylate, methyl methacrylate, silicone ( Silicon capsule, silicon nanocapsule), polyethersulfone membrane, acrylonitrile-co-vinyl chloride or a combination thereof.
  • those having biocompatibility are preferable, and sodium alginate is most preferable.
  • the membrane constituting the second bag-shaped structure is preferably a selective permeable membrane capable of blocking a substance having a molecular weight of 500 kDa or more, more preferably a molecular weight of 100 kDa or more, still more preferably a molecular weight of 80 kDa or more, and particularly preferably a molecular weight of 50 kDa or more. is there.
  • the membrane of sodium alginate microcapsules used in Examples described later can block substances of 500 kDa or more for 24 hours or more, and can block substances of 150 kDa or more for 2 hours or more.
  • all of the plurality of second bag-shaped structures may contain cells, or at least a part of the plurality of second bag-shaped structures does not contain cells.
  • the proportion of the second bag-shaped structure that does not contain cells is preferably 50% or less, more preferably 40% or less, and further preferably 30% or less.
  • the cells contained in the second bag-shaped structure are not particularly limited, but cells producing a useful substance are preferable.
  • Useful substances include hormones (insulin etc.), cytokines (interferon, interleukin, tumor necrosis factor, colony stimulating factor, growth factor etc.), enzymes (lysosomal disease related enzymes etc.), neurotransmitters (dopamine etc.), antibodies, Examples include, but are not limited to, antigens and other physiologically active substances (proteins, peptides, etc.).
  • Cells that produce useful substances may be non-transformed cells such as pancreatic cells ( ⁇ cells, etc.), skin cells, chondrocytes, hepatocytes, kidney cells, etc., or genes that encode useful substances and biosynthesis of useful substances.
  • the cells may be a transformed cell into which a gene involved in is introduced. Further, the cells may be cells derived from a living body, or cells derived from embryonic stem cells or induced pluripotent stem cells. Among the above, insulin-secreting cells are preferable as the cells.
  • the cells may be cell aggregates.
  • a cell aggregate is a cell mass formed by assembling a plurality of cells.
  • Pancreatic islets can be used as an example of a cell aggregate.
  • the average number of cell aggregates included in one second bag-shaped structure is 1.0 or more and 5.0 or less.
  • the number is preferably 1.0 or more and 4.0 or less, more preferably 1.0 or more and 3.0 or less, and 1.0 or more and 2.0 or less. It is particularly preferable that The average is calculated without including the number of the second bag-shaped structures in which the cell aggregates are not included.
  • the second bag-shaped structure may include mesenchymal stem cells in addition to insulin-secreting cells.
  • the mesenchymal stem cells may be encapsulated preferably as cell aggregates, and more preferably as cell structures containing mesenchymal stem cells.
  • the cell structure containing mesenchymal stem cells will be described later in this specification.
  • Leaf stem cells may be included.
  • the mesenchymal stem cells may be encapsulated as a cell aggregate or may be encapsulated as a cell structure containing mesenchymal stem cells. The cell structure containing mesenchymal stem cells will be described later in this specification.
  • the second bag-shaped structure containing cells can be produced by suspending cells in a polymer solution.
  • a bag-shaped structure containing the pancreatic islets can be produced by suspending the pancreatic islets in a polymer solution.
  • a method for producing a bag-shaped structure containing a pancreatic islet which comprises suspending the pancreatic islet in a polymer solution of 0.5 to 4% by mass.
  • a manufacturing method is provided, wherein the volume is 0.02 to 2.0 ⁇ L.
  • the concentration of the polymer solution for suspending the pancreatic islets may be 0.5 to 4% by mass, preferably 1.0 to 3% by mass, and more preferably 1.5 to 2.5% by mass.
  • the volume of the polymer solution for one pancreatic islet is 0.01 to 2.0 ⁇ L, preferably 0.05 to 0.5 ⁇ L, more preferably 0.07 to 0.2 ⁇ L.
  • the cell transplantation kit of the present invention is a cell structure containing a polymer block having biocompatibility and cells, and the plurality of polymer blocks are arranged in a gap between the plurality of cells. Cellular structures can further be included.
  • the biocompatible polymer block and cells are By three-dimensionally arranging cells in a mosaic pattern, a three-dimensional cell structure in which cells are uniformly present in the structure is formed.
  • the “cell gap” does not have to be a space closed by the cells to be constructed. Instead, it may be sandwiched between cells. It should be noted that it is not necessary that all cells have a gap, and there may be a place where cells are in contact with each other.
  • the gap distance between cells through the polymer block that is, the gap distance when selecting a cell and the cell existing at the shortest distance from the cell is not particularly limited, but it depends on the size of the polymer block. Preferably, the preferred distance is also within the preferred size range of the polymer block.
  • the polymer blocks are sandwiched between cells, but it is not necessary for cells to be present between all polymer blocks, and there may be points where the polymer blocks are in contact with each other.
  • the distance between the polymer blocks through cells that is, the distance when the polymer block and the polymer block existing in the shortest distance from the polymer block are selected is not particularly limited, but the cell used Is preferably the size of a cell mass when 1 to several are collected, for example, 10 ⁇ m or more and 1000 ⁇ m or less, preferably 10 ⁇ m or more and 100 ⁇ m or less, and more preferably 10 ⁇ m or more and 50 ⁇ m or less.
  • the polymer constituting the biocompatible polymer block is not particularly limited as long as it has an affinity for the living body and is decomposed in the living body, but is preferably composed of a biodegradable material. ..
  • the biodegradable material include polypeptide, polylactic acid, polyglycolic acid, PLGA (polylactic-co-glycolic acid), hyaluronic acid, glycosaminoglycan, proteoglycan, chondroitin, cellulose, agarose, carboxymethylcellulose. At least one material selected from the group of: chitin and chitosan.
  • a polypeptide is particularly preferable.
  • polypeptide is not particularly limited as long as it has biocompatibility, for example, gelatin, collagen, elastin, fibronectin, pronectin, laminin, tenascin, fibrin, fibroin, entactin, thrombospondin, and retronectin are preferred, and most preferably Preferred are gelatin, collagen and atelocollagen.
  • gelatin for use in the present invention natural gelatin or recombinant gelatin is preferable. More preferably, it is a recombinant gelatin.
  • the type of cells in the cell structure is not particularly limited, but somatic stem cells are preferable.
  • somatic stem cells for example, mesenchymal stem cells (MSCs), hematopoietic stem cells, amniotic cells, cord blood cells, bone marrow-derived cells (for example, bone marrow-derived interstitial MSCs), myocardial stem cells, adipose-derived stem cells, or neural stem cells are used. can do.
  • MSCs mesenchymal stem cells
  • hematopoietic stem cells amniotic cells
  • cord blood cells for example, bone marrow-derived interstitial MSCs
  • myocardial stem cells adipose-derived stem cells
  • adipose-derived stem cells or neural stem cells.
  • adipose-derived mesenchymal stem cells are further preferable.
  • the mesenchymal stem cells refer to somatic stem cells present in mesenchymal tissues and have the ability to differentiate into cells belonging to mesenchymal tissues.
  • Mesenchymal tissues refer to tissues such as bone, cartilage, fat, blood, bone marrow, skeletal muscle, dermis, ligament, tendon and heart.
  • the cell transplantation kit of the present invention may further include a plate-shaped cell non-adhesive material.
  • the plate-shaped non-cell-adhesive material is used as a material for maintaining a space inside the first bag-shaped structure in the step of forming a film around the first bag-shaped structure in vivo. It is for. Silicon is preferred as the cell non-adhesive material.
  • the shape of the cell non-adhesive material may be plate-like, and specific examples thereof include a rectangular parallelepiped and a cylinder, but are not particularly limited.
  • the size of the rectangular parallelepiped can be 0.5 cm to 3 cm in length, 0.5 cm to 3 cm in width, and 0.5 mm to 5 mm in thickness, but is not particularly limited.
  • FIG. 1 shows a schematic diagram showing an operation for transplanting a pancreatic islet using an example of the cell transplant kit of the present invention.
  • a first bag-shaped structure is introduced into a living body, a recipient-derived coating is formed around the first bag-shaped structure introduced into the living body, and then, A plurality of second bag-shaped structures can be placed in the first bag-shaped structure.
  • the first bag-shaped structure containing the cell non-adhesive material may be sewn on the abdominal cavity side of the peritoneum to introduce the first bag-shaped structure into the living body.
  • the first bag-shaped structure In the step of forming a film derived from the recipient around the first bag-shaped structure, at least one of cytokine, mesenchymal stem cells, extracellular matrix and collagen is put in the first bag-shaped structure. May be.
  • the first bag-shaped structure In the step of forming a recipient-derived coating around the first bag-shaped structure, the first bag-shaped structure may be left at the transplant site, but it may be fixed by suturing to muscle or skin. More preferable.
  • the site where the first bag-shaped structure is transplanted can be the abdominal cavity, subcutaneous site or peritoneum of the recipient, but is not particularly limited.
  • the recipient means a living body that undergoes transplantation.
  • the recipient is preferably a mammal, more preferably a human.
  • the donors of pancreatic islets and cells may be the same or different.
  • the islets are heterologous and the cells are allogeneic.
  • mesenchymal stem cells are used as cells, mesenchymal stem cells derived from the same species are preferable.
  • the cell transplant kit of the present invention may be transplanted only once, or may be transplanted twice or more as necessary.
  • the cell transplantation kit of the present invention can be used for treating a disease requiring cell transplantation.
  • treatments for diseases requiring cell transplantation include diabetes treatment using pancreatic cells ( ⁇ cells) or insulin-producing cells, lysosomal disease treatment using cells secreting lysosomal disease-related enzymes, and dopamine-producing cells.
  • Parkinson's disease treatments used, but are not limited thereto.
  • a first bag-shaped structure composed of a film having pores having an average pore diameter of 0.2 mm or less is introduced into a living body, and the periphery of the first bag-shaped structure introduced into the living body To form a coating film derived from the recipient, and then in the first bag-shaped structure, a plurality of second bag having an average major axis larger than the average pore size of the pores of the first bag-shaped structure.
  • a first bag-shaped structure comprising a membrane having pores with an average pore diameter of 0.2 mm or less, for use in the treatment of a disease requiring cell transplantation;
  • a plurality of second bag-shaped structures having an average major axis larger than the average pore diameter of the pores of the structure, at least a part of the plurality of second bag-shaped structures, cells.
  • An encapsulation, combination with a plurality of second bag-like structures is provided.
  • a first bag-like bag made of a membrane having pores with an average pore diameter of 0.2 mm or less for use in the manufacture of a cell transplantation therapeutic kit and for treating a disease requiring cell transplantation.
  • Example 1 Performance evaluation of xenogeneic islet transplantation using the first bag-shaped structure made of nylon (1) Preparation of the first bag-shaped structure Nylon mesh cut into a circle with a diameter of 2 cm and having an average pore diameter of 40 ⁇ m Two sheets of (CORNING, Falcon (registered trademark) 40 ⁇ m cell strainer) were stacked, and three sides were heated and sealed using a tea bag sealer (T-230K) manufactured by Fuji Impulse Co., Ltd. to form a space inside.
  • CORNING Falcon (registered trademark) 40 ⁇ m cell strainer
  • the first bag-shaped structure prepared in (1) above was intraperitoneally transplanted into a 6-week-old Balb/c mouse. At the time of transplantation, the two ends of the first bag-shaped structure were sewn to the abdominal wall to fix the position, and a coating derived from the recipient was formed around the first bag-shaped structure.
  • streptozotocin manufactured by Wako
  • streptozotocin was intraperitoneally administered in an amount of 250 mg/kg per mouse. ..
  • an individual with a blood glucose level of 300 mg/dL was used as a diabetic onset mouse, and was used as a cell transplant recipient.
  • pancreatic islets Isolation of pancreatic islets isolated from Wistar rats with a 1.8% sodium alginate solution (manufactured by BUCHI) at a ratio of 0.06 to 0.1 ⁇ L per pancreatic islet Suspend in solution to fit.
  • the pancreatic islets were uniformly dispersed by repeating the movement of the entire suspension between two syringes.
  • Encapsulator B-395 Pro manufactured by BUCHI the stirrer was added dropwise into 100 mM calcium chloride under stirring to obtain sodium alginate microencapsulated pancreatic islets.
  • the alginic acid capsule was coated with 0.05 mass% poly-L-Lysyn for 2 minutes.
  • mADSC Mouse adipose-derived mesenchymal stem cells
  • D-MEM medium Dulbecco's modified Eagle medium
  • FBS fetal bovine serum
  • EZSPHERE® dish Type 903 spheroid well diameter 800 ⁇ m, spheroid well depth 300 ⁇ m, spheroid well number up to about 1,200
  • Wells were seeded on a culture surface having a depression on the bottom surface and having a side outer wall portion standing on the periphery of the culture surface (manufactured by AGC Technoglass). The dish was allowed to stand at 37° C. for 48 hours in a CO 2 incubator to obtain about 1,200 uniform cell structures.
  • Comparative Example 1 As Comparative Example 1, an experiment was performed by performing the same operation as in (8) of Example 1 except that the sodium alginate microcapsule was not applied. As a result, the average blood glucose level was 280.8 mg/dL (SD: 182.7) at 7 days after transplantation, 310.6 mg/dL (SD: 144.7) at 14 days, and 421 mg/dL (SD: at 21 days). 145.1) and 28 days later, it was 366 mg/dL (SD:152.5), and it was found that the blood glucose level could not be controlled at 7 days. The body weight was 101.4% (SD: 1.9) at 28 days when the body weight on the day of transplantation was 100%.
  • the average blood glucose level was 130 mg/dL (SD:80.6) at 7 days after transplantation, 14 days 286 mg/dL (SD: 121.8), 21 days 314.8 mg/dL (SD: 138.1), 28 days later 371 mg/dL (SD: 132.2), 7 days or more Since the control of blood glucose level was confirmed, it was shown that the structure of the first bag-shaped structure and sodium alginate microencapsulation is useful for exerting a therapeutic effect.
  • the body weight was 106.6% (SD: 2.9) at 28 days when the body weight on the day of transplantation was 100%, which was higher than that in Comparative Example 1.
  • the average blood glucose level was 106.2 mg/dL (SD: 33.0) at 7 days after transplantation, and 186.2 mg/dL (SD at 14 days). : 103.4), 226.4 mg/dL (SD: 105.7) after 21 days, and 245.8 mg/dL (SD: 86.8) after 28 days. Even after 28 days from the transplantation, the average blood glucose level was less than 250 mg/dL, which showed that it had a stronger blood glucose level normalizing action.
  • the body weight was 115.8% (SD: 2.92) at 28 days when the body weight on the day of transplantation was 100%, which was higher than that in Comparative Example 1 and (8) in Examples. It turned out to have a function.
  • pancreatic islets in the cell structure (-) group, pancreatic islets with necrosis in the central part or the whole were observed.
  • the cell structure (+) group a large number of viable islets in which the nucleus was dyed to the center were observed (FIG. 7).
  • the inflammatory reaction in the cell structure (-) group, many inflammatory immune cells were present around the capsule, but in the cell structure (+) group, almost no inflammatory system cells were found around the capsule ( (Fig. 8).
  • Table 2 shows the results of tissue sample observation.
  • the number of insulin-positive regions was set to 0: ⁇ , 1 to 4: ⁇ , and 5 to ⁇ : the number of detected insulin-positive regions per sample.
  • the number of pancreatic islets in which the nucleus was stained per specimen was 0: ⁇ , 1-4: ⁇ , 5: ⁇ .
  • the area of the area of inflammatory cells occupying the tissue sample of the specimen was 0 to less than 20%: ⁇ , 20 to less than 50%: ⁇ , and 50 to 100%: ⁇ .

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Abstract

本発明の課題は、移植細胞による高い治療効果を発揮できる細胞移植キット、上記細胞移植キットにおいて使用する袋状構造物の製造方法、および上記細胞移植キットを含む糖尿病治療剤を提供することである。本発明によれば、平均孔径０．２ｍｍ以下の空孔を有する膜からなる第一の袋状構造物と、上記第一の袋状構造物の空孔の平均孔径よりも大きい平均長径を有する複数個の第二の袋状構造物とを含む、細胞移植キットであって、上記複数個の第二の袋状構造物のうちの少なくとも一部が、細胞を内包している、細胞移植キットが提供される。本発明によれば、上記細胞移植キットにおいて使用する袋状構造物の製造方法が提供される。本発明によれば、上記細胞移植キットを含む糖尿病治療剤が提供される。

Description

細胞移植キット、袋状構造物の製造方法、および糖尿病治療剤
　本発明は、細胞の移植による特定疾患の治療において有用である細胞移植キットに関する。本発明はさらに、上記細胞移植キットにおいて使用する袋状構造物の製造方法および上記細胞移植キットを含む糖尿病治療剤に関する。
　膵島移植の方法としては、経門脈肝臓内移植が現在の主流である。しかし、経門脈肝臓内移植により移植された膵島の多くは、免疫反応によって短時間で死滅してしまうので、十分な移植効果を得るためには複数回の移植が必要となる。また、血管内に移植することから、塞栓や出血といった問題が避けられず、摘出も容易ではないことが問題となっている。上記の問題を解決するために他の移植部位の探索が行われている。しかしながら門脈移植以外の移植部位、特に皮下では、血流が少なく、膵島の生着率が他部位と比べて低いという課題があった。そこで血流豊富な移植部位を膵島の移植前に作製することで膵島の生着率を高めることが試みられている。
　非特許文献１には、血管床を作製することにより、移植した細胞の生着性を向上させることが記載されている。特許文献１には、宿主の体内に細胞を植え込むためのデバイスであって、近位端部および遠位端部を有する少なくとも１つのチャンバーを含む多孔質足場と、少なくとも１つのチャンバー内、および／または、多孔質足場の少なくとも一部内に配置されるように構成された少なくとも１つの取り外し可能なプラグとを含み、多孔質足場は、ポリプロピレンメッシュを含むデバイスが記載されている。特許文献２には、組織中埋め込まれる新生血管床形成用用具であって、埋め込まれた際に新生血管床形成用用具の周囲に毛細血管で覆われた空隙を作成することが可能な用具が記載されている。特許文献２に記載の用具は、毛細血管の豊富な組織を作成するために用いる用具である。
　膵島移植のもう一つの課題はドナー不足である。その対策として異種膵島を用いた膵島移植の研究が盛んに行われている。しかしながら、異種膵島移植の実現には膵島を異種免疫拒絶反応から保護する必要がある。膵島移植に限らず、細胞移植における免疫拒絶の対策として、ヒドロゲルなどを用いた免疫隔離膜の研究が進められている。非特許文献２には、アルギン酸カプセルにより細胞を免疫隔離することが記載されている。
特開２０１８－４３０１３号公報 特開２０００－１７８１８０号公報
Ｕｅｍａｔｓｕ　ＳＳ（２０１８）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．１０２（３）：３８７-３９５ Ｓｔｅｐｈａｎ，Ｓ　ｅｔ　ａｌ．（２００５）Ｄｉａｂｅｔｅｓ．５４（３）：６８７－６９３．
　本発明は、移植細胞による高い治療効果を発揮できる細胞移植キット、並びに上記細胞移植キットにおいて使用する袋状構造物の製造方法および上記細胞移植キットを含む糖尿病治療剤を提供することを課題とする。
　本発明者は上記課題を解決するために鋭意検討した結果、血管および免疫細胞が入ってきづらい微小な孔を持つ袋状構造物を生体に予め移植しておくことにより細胞の移植部位を事前に作製し、次いで、上記移植部位にマイクロカプセル化した細胞を移植することにより、異種細胞を生着させ、治療効果を発揮できることを見出した。本発明は上記知見に基づいて完成したものである。
　即ち、本発明によれば、以下の発明が提供される。
＜１＞　平均孔径０．２ｍｍ以下の空孔を有する膜からなる第一の袋状構造物と、上記第一の袋状構造物の空孔の平均孔径よりも大きい平均長径を有する複数個の第二の袋状構造物とを含む、細胞移植キットであって、上記複数個の第二の袋状構造物のうちの少なくとも一部が、細胞を内包している、細胞移植キット。
＜２＞　第一の袋状構造物の材料が、ナイロン、ポリスルホン、ポリテトラフルオロエチレン、ポリウレタン、ポリエステル、塩化ビニル、ポリカーボネート、アクリル、ステンレス、チタン、シリコン、または２－メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリンを含む、＜１＞に記載の細胞移植キット。
＜３＞　第一の袋状構造物の材料が、ナイロンまたはポリスルホンを含む、＜１＞または＜２＞に記載の細胞移植キット。
＜４＞　第二の袋状構造物の材料が、多糖ヒドロゲル、ポリペプチド、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、乳酸・グリコール酸コポリマー、ヒアルロン酸、グリコサミノグリカン、プロテオグリカン、コンドロイチン、セルロース、アガロース、カルボキシメチルセルロース、キチン、キトサン、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸カルシウム、アルギン酸カリウム、アルギン酸バリウム、アルギネート、ポリリジンの層状マトリックス、ポリオルニチンの層状マトリックス、光重合ポリマー、ポリアクリレート、ヒドロキシエチルメタクリレート、メチルメタクリレート、シリコン、ポリエーテルスルホンメンブレン 、アクリロニトリル－コ－塩化ビニル またはこれらの組み合わせを含む、＜１＞から＜３＞の何れか一に記載の細胞移植キット。
＜５＞　第二の袋状構造物の材料が、アルギン酸ナトリウムを含む、＜１＞から＜４＞の何れか一に記載の細胞移植キット。
＜６＞　上記複数個の第二の袋状構造物のうちの少なくとも一部は、細胞を内包していない、＜１＞から＜５＞の何れか一に記載の細胞移植キット。
＜７＞　第二の袋状構造物のうち細胞を内包していないものの割合が５０％以下である、＜１＞から＜６＞の何れか一に記載の細胞移植キット。
＜８＞　細胞が、細胞集合体である、＜１＞から＜７＞の何れか一に記載の細胞移植キット。
＜９＞　細胞集合体が膵島である、＜８＞に記載の細胞移植キット。
＜１０＞　細胞集合体を内包している第二の袋状構造物について、１個の第二の袋状構造物に内包される細胞集合体の平均個数が１．０個以上５．０個以下である、＜８＞または＜９＞に記載の細胞移植キット。
＜１１＞　第一の袋状構造物の空孔の平均孔径が５０μｍ以下である、＜１＞から＜１０＞の何れか一に記載の細胞移植キット。
＜１２＞　第一の袋状構造物の空孔の平均孔径が１μｍ以下である、＜１＞から＜１１＞の何れか一に記載の細胞移植キット。
＜１３＞　第一の袋状構造物の内部に間葉系幹細胞を含む、＜１＞から＜１２＞の何れか一に記載の細胞移植キット。
＜１４＞　生体親和性を有する高分子ブロックと細胞とを含む細胞構造体であって、複数個の前記細胞間の隙間に複数個の前記高分子ブロックが配置されている細胞構造体をさらに含む、＜１＞から＜１３＞の何れか一に記載の細胞移植キット。
＜１５＞　前記細胞構造体を第一の袋状構造物と第二の袋状構造物との間に含む、＜１４＞に記載の細胞移植キット。
＜１６＞　前記細胞構造体に含まれる細胞が間葉系幹細胞である、＜１４＞または＜１５＞に記載の細胞移植キット。
＜１７＞　板状の細胞非接着性材料をさらに含む、＜１＞から＜１６＞の何れか一に記載の細胞移植キット。
＜１８＞　第一の袋状構造物を生体内に導入し、生体内に導入された第一の袋状構造物の周囲にレシピエント由来の被膜を形成させ、その後、第一の袋状構造物の中に、複数個の第二の袋状構造物を入れる、＜１＞から＜１７＞の何れか一に記載の細胞移植キット。
＜１９＞　細胞非接着性材料を包含した第一の袋状構造物を、腹膜の腹腔側に縫い合わせることにより、第一の袋状構造物を生体内に導入する、＜１８＞に記載の細胞移植キット。
＜２０＞　＜１＞から＜１９＞の何れか一に記載の細胞移植キットを含む、糖尿病治療剤。
＜２１＞　糖尿病の治療における使用のための＜１＞から＜１９＞の何れか一に記載の細胞移植キット。
＜２２＞　膵島を０．５～４質量％の高分子溶液に懸濁することを含む、膵島を内包した袋状構造物の製造方法であって、膵島１個に対する高分子溶液の容量が０．０１～２．０μＬである、製造方法。 
　本発明の細胞移植キットによれば、移植細胞による高い治療効果を発揮することができる。本発明の袋状構造物の製造方法によれば、上記した本発明の細胞移植キットにおいて使用するのに適した袋状構造物を製造することができる。
図１は、本発明の細胞移植キットの一例を用いて膵島を移植する場合の操作を示す模式図である。 図２は、第一の袋状構造物を移植した４週間後の様子を示す。 図３は、膵島を移植する際の様子を示す。 図４は、ナイロン製の第一の袋状構造物を用いた異種膵島移植における血糖値推移を示す。 図５は、ナイロン製の第一の袋状構造物を用いた異種膵島移植における体重推移を示す。 図６は細胞構造体（＋）群および細胞構造体（－）群の移植4週後の組織切片の免疫染色像を示す。 図７は細胞構造体（＋）群および細胞構造体（－）群の移植4週後の組織切片のＨＥ染色像を示す。 図８は細胞構造体（＋）群および細胞構造体（－）群の移植4週後のマイクロカプセル周囲の組織切片のＨＥ染色像を示す。
　以下、本発明を実施するための形態を、詳細に説明する。本明細書において「～」は、その前後に記載される数値をそれぞれ最小値および最大値として含む範囲を示すものとする。
　本発明の細胞移植キットは、平均孔径０．２ｍｍ以下の空孔を有する膜からなる第一の袋状構造物と、上記第一の袋状構造物の空孔の平均孔径よりも大きい平均長径を有する複数個の第二の袋状構造物とを含み、複数個の第二の袋状構造物のうちの少なくとも一部が、細胞を内包している。本発明の構成によれば、細胞の生着性が高く、かつ移植された細胞を免疫拒絶から保護することができる。また、袋状構造物を使用するため、異常時の摘出、並びに細胞の追加または入れ替えが容易であり、より長期の治療効果が得られる。本発明によれば、異種ドナー細胞を用いた門脈投与以外の移植部位での細胞移植治療を実現することができる。
＜第一の袋状構造物＞
　第一の袋状構造物は、平均孔径０．２ｍｍ以下の空孔を有する膜からなる。
　第一の袋状構造物の空孔の平均孔径は、第二の袋状構造物の平均長径よりも小さければよく、好ましくは第二の袋状構造物の短径よりも小さく、より好ましくは第二の袋状構造物の短径の５０％以下である。
　第一の袋状構造物は、平均孔径０．２ｍｍ以下の空孔を有し、好ましくは平均孔径５０μｍ以下の空孔を有し、より好ましくは平均孔径２０μｍ以下の空孔を有し、さらに好ましくは平均孔径１μｍ以下の空孔を有し、特に好ましくは平均孔径０．０５μｍ以下の空孔を有する。
　空孔の平均孔径が０．２ｍｍ以下であることにより、第一の袋状構造物内に結合組織、血管および免疫細胞の侵入が助長されないようになる。
　第一の袋状構造物の平均孔径の測定方法としては、孔を連続して５０個以上選択し、それぞれの孔径を測定し、平均値を算出して平均孔径とすることができる。また、ＡＳＴＭ　Ｆ３１６－８０により測定することができる。
　第一の袋状構造物の開孔率は、特に限定されないが、２５％～８５％が好ましく、４０％から７５％がより好ましい。
　開孔率とは、袋状構造物の全表面における孔部の占める面積の割合を示す。
　開孔率は、光学顕微鏡、あるいは走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）を用いて膜の厚み方向から垂直に撮影した膜の表面あるいは断面図の画像における開口部と膜材料の面積比を算出することで測定可能である。
　第一の袋状構造物の孔径は、より均一であることが好ましい。しかしながら、第一の袋状構造物が厚み方向への孔径分布を有する場合、膜の厚み方向の孔径の比較は、膜断面の走査型電子顕微鏡（Ｓｃａｎｎｉｎｇ　Ｅｌｅｃｔｒｏｎ　Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ：ＳＥＭ）撮影写真を膜の厚み方向に分割して行なうものとする。分割数は膜の厚みから適宜選択できる。分割数は少なくとも５以上とし、分割幅の大きさは、膜における厚み方向の幅の大きさを意味し、写真での幅の大きさを意味するものではない。膜の厚み方向の孔径の比較において、孔径は、各区分の平均孔径として比較される。各区分の平均孔径は、例えば、膜断面図の各区分の５０個の孔の平均値であればよい。
　第一の袋状構造物は、免疫隔離のために用いられる。免疫隔離は免疫拒絶反応の防止方法である。一般的には、免疫隔離は移植の際のレシピエントの免疫拒絶反応を防止する方法の一つである。ここで、免疫拒絶反応は、移植される細胞に対するレシピエントの拒絶反応である。免疫隔離により、レシピエントの免疫拒絶反応から細胞が隔離される。免疫拒絶反応としては、細胞性免疫応答によるものおよび液性免疫応答によるものが挙げられる。
　第一の袋状構造物は酸素、水、グルコース等の栄養分は透過させ、免疫拒絶反応に関与する免疫細胞等の透過を阻止する選択透過性の膜であることが好ましい。免疫細胞としては、マクロファージ、樹状細胞、好中球、好酸球、好塩基球、ナチュラルキラー細胞、各種Ｔ細胞、Ｂ細胞、その他リンパ球が挙げられる。
　第一の袋状構造物は、用途に応じ、免疫グロブリン（ＩｇＭまたはＩｇＧ等）および補体のような高分子量タンパク質の透過を阻止することが好ましく、インスリンなどの比較的低分子量の生理活性物質を透過させることが好ましい。
　第一の袋状構造物の選択透過性は用途に応じて調整すればよい。第一の袋状構造物は、例えば、分子量５００ｋＤａ以上、１００ｋＤａ以上、８０ｋＤａ以上、または５０ｋＤａ以上などの物質を遮断する選択透過性の膜であればよい。例えば、第一の袋状構造物は、抗体の中で最も小さいＩｇＧ（分子量約１６０ｋＤａ）の透過を阻止できることが好ましい。また、第一の袋状構造物は、球体としてのサイズとして直径５００ｎｍ以上、１００ｎｍ以上、５０ｎｍ以上、または１０ｎｍ以上などの物質を遮断する選択透過性の膜であればよい。
　第一の袋状構造物は生体適合性が高い材料がよく、炎症反応をより惹起しない材料が好ましい。第一の袋状構造物の材料としては、ナイロン、ポリスルホン、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）、ポリウレタン、ポリエステル、塩化ビニル、ポリカーボネート、アクリル、ステンレス、チタン、シリコン、または２－メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）が好ましく、ナイロンまたはポリスルホンがより好ましい。
　第一の袋状構造物の内部には、サイトカインを含ませていてもよく、抗炎症作用を有する物質を含ませてもよい。
　第一の袋状構造物の内部には、細胞を含ませてもよく、細胞構造体を含ませてもよい。
　第一の袋状構造物を構成する膜の厚みは、特に限定されないが、１０μｍ～５００μｍであることが好ましい。第一の袋状構造物を構成する膜の厚みの下限は、２０μｍ以上でもよく、３０μｍ以上でもよい。第一の袋状構造物を構成する膜の厚みの上限は、４００μｍ以下でもよく、３００μｍ以下でもよく、２５０μｍ以下でもよく、２００μｍ以下でもよく、１００μｍ以下でもよい。
　第一の袋状構造物の表面には、細胞外マトリックス、コラーゲン、ラミニンまたはビトロネクチンなどの細胞接着性物質をコーティングしてもよい。第一の袋状構造物の表面には、細胞非接着コート剤をコーティングしてもよい。
　第一の袋状構造物の形状は、長方形であってもよく、楕円状であってもよい。
　第一の袋状構造物は、多孔質膜から構成されていてもよい。
　多孔質膜は複数の孔を有する膜をいう。孔は例えば膜断面の走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）撮影画像または透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）撮影画像で確認することができる。
　好ましくは、多孔質膜は、孔径が最小となる層状の緻密部位を内部に有し、この緻密部位から多孔質膜の少なくとも一方の表面に向かって厚み方向で孔径が連続的に増加している。孔径は、後述する区分の平均孔径で判断するものとする。
　多孔質膜が孔径分布を有することにより、第一の袋状構造物は、寿命を向上させることができる。実質的に異なる孔径の膜を用いて多段階の濾過を行なったような効果が得られ、膜の劣化を防止することができるからである。
　孔径は電子顕微鏡によって得られた膜断面の写真から測定すればよい。多孔質膜はミクロトーム等により切断し、断面が観察できる薄膜の切片として、多孔質膜断面の写真を得ることができる。
　膜の厚み方向の孔径の比較は、膜断面のＳＥＭ撮影写真を膜の厚み方向に分割して行なうものとする。分割数は膜の厚みから適宜選択できる。分割数は少なくとも５以上とし、例えば２００μｍ厚の膜では後述する表面Ｘから２０分割して行う。なお、分割幅の大きさは、膜における厚み方向の幅の大きさを意味し、写真での幅の大きさを意味するものではない。膜の厚み方向の孔径の比較において、孔径は、各区分の平均孔径として比較される。各区分の平均孔径は、例えば、膜断面図の各区分の５０個の孔の平均値であればよい。この場合の膜断面図は例えば８０μｍ幅（表面と平行な方向において８０μｍの距離）で得てもよい。このとき、孔が大きく、５０個測定できない区分については、その区分でとれる数だけ測定したものであればよい。また、このとき、孔が大きくその区分に収まるものでない場合は、ほかの区分にわたってその孔の大きさを計測する。
　孔径が最小となる層状の緻密部位は、上記膜断面の区分のうちで平均孔径が最小となる区分に相当する多孔質膜の層状の部位をいう。緻密部位は１つの区分に相当する部位からなっていても、２つ、３つなどの、平均孔径が最小となる区分の１．１倍以内の平均孔径を有する複数の区分に相当する部位からなっていてもよい。緻密部位の厚みは、０.５μｍ～５０μｍであればよく、０.５μｍ～３０μｍであることが好ましい。
　本明細書において、緻密部位の平均孔径を多孔質膜の最小孔径とする。多孔質膜の最小孔径は、０．０２μｍ～１．５μｍであることが好ましく、０．０２μｍ～１．３μｍであることがより好ましい。このような多孔質膜の最小孔径で少なくとも通常の細胞の透過を阻止することができるからである。ここで、緻密部位の平均孔径はＡＳＴＭ　Ｆ３１６－８０により測定したものとする。
　多孔質膜は、緻密部位を内部に有する。内部とは膜の表面に接していないことを意味し、「緻密部位を内部に有する」とは、緻密部位が、膜のいずれかの表面にもっとも近い区分ではないことを意味する。免疫隔離膜においては、緻密部位を内部に有する構造の多孔質膜を用いることにより、同じ緻密部位を表面に接して有する多孔質膜を用いた場合よりも、透過させることが意図された物質の透過性が低下しにくい。いかなる理論にも拘泥するものではないが、緻密部位が内部にあることによりタンパク質の吸着が起こりにくくなっているためと考えられる。
　緻密部位は、多孔質膜の厚みの中央部位よりもいずれか一方の表面側に偏っていることが好ましい。具体的には、緻密部位が多孔質膜のいずれか一方の表面から多孔質膜の厚みの５分の２以内の距離にあることが好ましく、３分の１以内の距離にあることがより好ましく、４分の１以内の距離にあることがさらに好ましい。この距離は上述の膜断面写真において判断すればよい。本明細書において、緻密部位がより近い側の多孔質膜の表面を「表面Ｘ」という。
　多孔質膜においては緻密部位から少なくともいずれか一方の表面に向かって厚み方向で孔径が連続的に増加している。多孔質膜において、緻密部位から表面Ｘに向かって厚み方向で孔径が連続的に増加していてもよく、緻密部位から表面Ｘと反対側の表面に向かって厚み方向で孔径が連続的に増加していてもよく、緻密部位から多孔質膜のいずれの表面に向かうときも厚み方向で孔径が連続的に増加していてもよい。これらのうち、少なくとも緻密部位から表面Ｘと反対側の表面に向かって厚み方向で孔径が連続的に増加していることが好ましく、緻密部位から多孔質膜のいずれの表面に向かうときも厚み方向で孔径が連続的に増加していることがより好ましい。「厚み方向で孔径が連続的に増加」とは、厚み方向に隣り合う区分の間の平均孔径の差異が、最大平均孔径（最大孔径）と最小平均孔径（最小孔径）の差異の５０％以下、好ましくは４０％以下、より好ましくは３０％以下となるように増加していることをいう。「連続的に増加」は、本質的には、減少がなく一律に増加することを意味するものであるが、減少している部位が偶発的に生じていてもよい。例えば、区分を表面から２つずつ組み合わせたときに、組み合わせの平均値が、一律に増加（表面から緻密部位に向かう場合は一律に減少）している場合は、「緻密部位から膜の表面に向かって厚み方向で孔径が連続的に増加している」と判断できる。
　厚み方向で孔径が連続的に増加する多孔質膜の構造は、例えば後述する製造方法により実現することができる。
　第一の袋状構造物においては、多孔質膜の表面Ｘが内部側にあることが好ましい。すなわち、多孔質膜の緻密部位が、第一の袋状構造物の内部により近くなるように、多孔質膜が配置されていることが好ましい。表面Ｘを第一の袋状構造物の内部側にすることにより、生理活性物質の透過性をより高くすることができる。
　多孔質膜は、一般的にはポリマーを含む。多孔質膜は本質的にポリマーから構成されていることが好ましい。
　多孔質膜を形成するポリマーは生体適合性であることが好ましい。ここで、「生体適合性」とは、無毒性、非アレルギー誘発性を含む意味であるが、ポリマーが生体内において被包化される性質を含むものではない。
　ポリマーは数平均分子量（Ｍｎ）が１，０００～１０，０００，０００であるものが好ましく、５，０００～１，０００，０００であるものがより好ましい。
　ポリマーの例としては、熱可塑性または熱硬化性のポリマーが挙げられる。ポリマーの具体的な例としては、ポリスルホン、セルロースアシレート、ニトロセルロース、スルホン化ポリスルホン、ポリエーテルスルホン、ポリアクリロニトリル、スチレン－アクリロニトリルコポリマー、スチレン－ブタジエンコポリマー、エチレン－酢酸ビニルコポリマーのケン化物、ポリビニルアルコール、ポリカーボネート、オルガノシロキサン－ポリカーボネートコポリマー、ポリエステルカーボネート、オルガノポリシロキサン、ポリフェニレンオキシド、ポリアミド、ポリイミド、ポリアミドイミド、ポリベンズイミダゾール、エチレンビニルアルコール共重合体、ポリテトラフルオロエチレン（PTFE）等を挙げることができる。これらは、溶解性、光学的物性、電気的物性、強度、弾性等の観点から、ホモポリマーであってもよいし、コポリマーやポリマーブレンド、ポリマーアロイとしてもよい。
　これらのうち、ポリスルホン、セルロースアシレートが好ましく、ポリスルホンがより好ましい。
　多孔質膜はポリマー以外の他の成分を添加剤として含んでいてもよい。
　上記添加剤としては、食塩、塩化リチウム、硝酸ナトリウム、硝酸カリウム、硫酸ナトリウム、塩化亜鉛等の無機酸の金属塩、酢酸ナトリウム、ギ酸ナトリウム等の有機酸の金属塩、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン等の高分子、ポリスチレンスルホン酸ナトリウム、ポリビニルベンジルトリメチルアンモニウムクロライド等の高分子電解質、ジオクチルスルホコハク酸ナトリウム、アルキルメチルタウリン酸ナトリウム等のイオン系界面活性剤等を挙げることができる。添加剤は多孔質構造のための膨潤剤として作用していてもよい。
　多孔質膜は単一の層として1つの組成物から形成された膜であることが好ましく、複数層の積層構造ではないことが好ましい。
　多孔質膜の製造方法は、上述の構造の多孔質膜が形成できる限り、特に限定されず、通常のポリマー膜形成方法をいずれも用いることができる。ポリマー膜形成方法としては延伸法および流延法などが挙げられる。
　例えば、流延法においては、製膜原液に用いる溶媒の種類および量や流延後の乾燥方法を調節することにより上述の構造を有する多孔質膜を作製することができる。
　流延法による多孔質膜の製造は、例えば以下（１）～（４）をこの順で含む方法で行なうことができる。
（１）ポリマー、必要に応じて添加剤、および必要に応じて溶媒を含む製膜原液を溶解状態で支持体上に流延する。
（２）流延された液膜の表面に調温湿風を当てる。
（３）調温湿風を当てた後に得られる膜を凝固液に浸漬する。
（４）必要に応じて支持体を剥離する。
　調温湿風の温度は、４℃～６０℃、好ましくは１０℃～４０℃であればよい。調温湿風の相対湿度は、３０％～７０％、好ましくは４０％～５０％であればよい。調温湿風の絶対湿度は、１．２～６０５ｇ／ｋｇ空気であることが好ましく、２．４～３００ｇ／ｋｇ空気であることがより好ましい。調温湿風は、０.１ｍ／秒～１０ｍ／秒の風速で０.１秒間～３０秒間、好ましくは１秒間～１０秒間、当てていればよい。
　緻密部位の平均孔径および位置は、調温湿風中に含まれる水分濃度、調温湿風を当てる時間によって制御することができる。なお、緻密部位の平均孔径は、製膜原液中の含有水分量によっても制御することができる。
　上記のように液膜の表面に調温湿風を当てることによって、溶媒の蒸発の制御を行い、液膜の表面から内部に向かってコアセルベーションを起こすことができる。この状態でポリマーの溶解性が低いがポリマーの溶媒に相溶性を有する溶媒を収容する凝固液に浸漬することによって、上記のコアセルベーション相を微細孔として固定させ微細孔以外の細孔も形成することができる。
　上記の凝固液に浸漬する過程において凝固液の温度は－１０℃～８０℃であればよい。この間で温度を変化させることによって、緻密部位より支持体面側におけるコアセルベーション相の形成から凝固に至るまでの時間を調節し、支持体面側の表面に至るまでの孔径の大きさを制御することが可能である。凝固液の温度を高くすると、コアセルベーション相の形成が早くなり凝固に至るまでの時間が長くなるため、支持体面側へ向かう孔径は大きくなりやすい。一方、凝固液の温度を低くすると、コアセルベーション相の形成が遅くなり凝固に至るまでの時間が短くなるため、支持体面側へ向かう孔径は大きくなりにくい。
　支持体としては、プラスチックフィルムまたはガラス板を用いればよい。プラスチックフィルムの材料の例としては、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）などのポリエステル、ポリカーボネート、アクリル樹脂、エポキシ樹脂、ポリウレタン、ポリアミド、ポリオレフィン、セルロース誘導体、シリコーンなどが挙げられる。支持体としてはガラス板またはＰＥＴが好ましく、ＰＥＴがより好ましい。
　製膜原液は溶媒を含んでいてもよい。溶媒は使用するポリマーに応じて、使用するポリマーの溶解性が高い溶媒（以下、「良溶媒」ということがある）を用いればよい。良溶媒は、凝固液に浸漬した場合速やかに凝固液と置換されるものが好ましい。溶媒の例としては、ポリマーがポリスルホン等の場合、Ｎ－メチル－２－ピロリドン、ジオキサン、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミドあるいはこれらの混合溶媒が挙げられ、ポリマーがポリアクリロニトリル等の場合、ジオキサン、Ｎ－メチル－２－ピロリドン、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシドあるいはこれらの混合溶媒が挙げられ、ポリマーがポリアミド等の場合にはジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミドあるいはこれらの混合溶媒が挙げられ、ポリマーがセルロースアセテート等の場合はアセトン、ジオキサン、テトラヒドロフラン、Ｎ－メチル－２－ピロリドンあるいはこれらの混合溶媒が挙げられる。
　製膜原液は良溶媒のほか、ポリマーの溶解性が低いがポリマーの溶媒に相溶性を有する溶媒（以下、「非溶媒」ということがある）を用いることが好ましい。非溶媒としては、水、セルソルブ類、メタノール、エタノール、プロパノール、アセトン、テトラヒドロフラン、ポリエチレングリコール、グリセリン等が挙げられる。これらのうち、水を用いることが好ましい。
　製膜原液としてのポリマー濃度は、５質量％以上３５質量％以下、好ましくは１０質量％以上３０質量％以下であればよい。３５質量％以下であることにより、得られる多孔質膜に十分な透過性（例えば水の透過性）を与えることができ、５質量％以上とすることにより選択的に物質を透過させる多孔質膜の形成を担保することができる。添加剤の添加量は添加によって製膜原液の均一性が失われることが無い限り特に制限は無いが、通常溶媒に対して０．５質量％以上１０質量％以下である。製膜原液が非溶媒と良溶媒とを含む場合、非溶媒の良溶媒に対する割合は、混合液が均一状態を保てる範囲であれば特に制限はないが、１．０質量％～５０質量％が好ましく、２．０質量％～３０質量％がより好ましく、３．０質量％～１０質量％がさらに好ましい。
　凝固液としては、用いられるポリマーの溶解度が低い溶媒を用いることが好ましい。このような溶媒の例としては、水、メタノール、エタノール、ブタノールなどのアルコール類；エチレングリコール、ジエチレングリコールなどのグリコール類；エーテル、ｎ－ヘキサン、ｎ－ヘプタン等の脂肪族炭化水素類；グリセリン等のグリセロール類などが挙げられる。好ましい凝固液の例としては、水、アルコール類またはこれらの２種以上の混合物が挙げられる。これらのうち、水を用いることが好ましい。
　凝固液への浸漬の後、使用した凝固液とは異なる溶媒で洗浄を行なうことも好ましい。洗浄は、溶媒に浸漬することにより行なうことができる。洗浄溶媒としてはジエチレングリコールが好ましい。洗浄溶媒としてジエチレングリコールを用い、膜を浸漬するジエチレングリコールの温度および浸漬時間のいずれか一方または双方を調節することにより、多孔質膜中のＮ元素の分布を調節できる。特に、多孔質膜の製膜原液にポリビニルピロリドンを用いる場合において、ポリビニルピロリドンの膜への残量を制御することができる。ジエチレングリコールでの洗浄の後さらに、水で洗浄してもよい。
　多孔質膜の製膜原液としては、ポリスルホンおよびポリビニルピロリドンをＮ－メチル－２－ピロリドンに溶解して水を加えてなる製膜原液が好ましい。
　多孔質膜の製造方法については、特開平４－３４９９２７号公報、特公平４－６８９６６号公報、特開平０４－３５１６４５号公報、特開２０１０－２３５８０８号公報等を参照することができる。
＜第二の袋状構造物＞
　第二の袋状構造物は、第一の袋状構造物の空孔の平均孔径よりも大きい平均長径を有している。複数個の第二の袋状構造物のうちの少なくとも一部は、細胞を内包している。
　平均長径は、作製した第２の袋状構造物を50個以上含んだ培養皿をBZ-Xオールインワン傾向顕微鏡（KEYENCE）あるいはCell3imager（島津製作所）で撮影し、ImageJで撮影した画像から測定可能である。
　第二の袋状構造物の材料としては、好ましくは、多糖ヒドロゲル、ポリペプチド、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、乳酸・グリコール酸コポリマー、ヒアルロン酸、グリコサミノグリカン、プロテオグリカン、コンドロイチン、セルロース、アガロース、カルボキシメチルセルロース、キチン、キトサン、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸カルシウム、アルギン酸カリウム、アルギン酸バリウム、アルギネート、ポリリジンの層状マトリックス、ポリオルニチンの層状マトリックス、光重合ポリマー、ポリアクリレート、ヒドロキシエチルメタクリレート、メチルメタクリレート、シリコン（シリコンカプセル、シリコンナノカプセル）、ポリエーテルスルホンメンブレン、アクリロニトリル－コ－塩化ビニルまたはこれらの組み合わせである。上記の中でも、生体適合性を有するものが好ましく、アルギン酸ナトリウムが最も好ましい。
　第二の袋状構造物を構成する膜は、好ましくは分子量５００ｋＤａ以上、より好ましくは分子量１００ｋＤａ以上、さらに好ましくは分子量８０ｋＤａ以上、特に好ましくは分子量５０ｋＤａ以上の物質を遮断できる選択透過性の膜である。なお、後記の実施例で使用したアルギン酸ナトリウムマイクロカプセルの膜は、５００ｋＤＡ以上の物質を２４時間以上遮断することができ、１５０ｋＤａ以上の物質を２時間以上遮断することができる。
　本発明においては、複数個の第二の袋状構造物の全てが細胞を内包してもよいし、複数個の第二の袋状構造物の少なくとも一部が、細胞を内包していなくてもよい。
　第二の袋状構造物のうち細胞を内包していないものの割合は５０％以下であることが好ましく、４０％以下であることがより好ましく、３０％以下であることがさらに好ましい。
　第二の袋状構造物に内包される細胞は特に限定されるものではないが、有用物質を産生する細胞が好ましい。有用物質としては、ホルモン（インスリン等）、サイトカイン（インターフェロン、インターロイキン、腫瘍壊死因子、コロニー刺激因子、成長因子等）、酵素（ライソゾーム病関連酵素など）、神経伝達物質（ドーパミン等）、抗体、抗原、その他の生理活性物質（タンパク質、ペプチド等）を挙げることができるが、これらに限定されない。有用物質を産生する細胞としては、膵臓細胞（β細胞など）、皮膚細胞、軟骨細胞、肝細胞、腎細胞等の非形質転換細胞でもよいし、有用物質をコードする遺伝子や有用物質の生合成に関与する遺伝子を導入した形質転換細胞でもよい。また、細胞は、生体由来の細胞でもよいし、胚性幹細胞または人工多能性幹細胞から誘導した細胞でもよい。
　上記の中でも、細胞としては、インスリン分泌細胞が好ましい。
　細胞は、細胞集合体でもよい。細胞集合体とは、複数個の細胞が集合した細胞塊である。
　細胞集合体の一例としては、膵島を使用することができる。
　第二の袋状構造物が細胞集合体を内包している場合、１個の第二の袋状構造物に内包される細胞集合体の平均個数は１．０個以上５．０個以下であることが好ましく、１．０個以上４．０個以下であることがより好ましく、１．０個以上３．０個以下であることがさらに好ましく、１．０個以上２．０個以下であることが特に好ましい。平均は細胞集合体が内包されていない第二の袋状構造物の数は含まずに計算をする。
　第二の袋状構造物には、インスリン分泌細胞以外に、間葉系幹細胞が内包されていてもよい。間葉系幹細胞は、好ましくは細胞集合体として内包されていてもよいし、より好ましくは間葉系幹細胞を含む細胞構造体として内包されていてもよい。間葉系幹細胞を含む細胞構造体については、本明細書において後記する。
　第一の袋状構造物と第二の袋状構造物との間（即ち、第一の袋状構造物の中であって、かつ第二の袋状構造物の外の空間）には間葉系幹細胞が内包されていてもよい。間葉系幹細胞は、細胞集合体として内包されていてもよいし、あるいは間葉系幹細胞を含む細胞構造体として内包されていてもよい。間葉系幹細胞を含む細胞構造体については、本明細書において後記する。
　細胞を内包した第二の袋状構造物は、細胞を高分子溶液に懸濁することによって製造することができる。細胞として膵島を使用する場合には、膵島を高分子溶液に懸濁することによって、膵島を内包した袋状構造物を製造することができる。本発明によれば、膵島を０．５～４質量％の高分子溶液に懸濁することを含む、膵島を内包した袋状構造物の製造方法であって、膵島１個に対する高分子溶液の容量が０．０２～２．０μＬである、製造方法が提供される。膵島を懸濁する際の高分子溶液の濃度は、０．５～４質量％であればよく、１．０～３質量％が好ましく、１．５～２．５質量％がより好ましい。膵島１個に対する高分子溶液の容量は０．０１～２．０μＬであり、０．０５～０．５μＬが好ましく、０．０７～０．２μＬがより好ましい。
＜細胞構造体＞
　本発明の細胞移植キットには、生体親和性を有する高分子ブロックと細胞とを含む細胞構造体であって、複数個の上記細胞間の隙間に複数個の上記高分子ブロックが配置されている細胞構造体をさらに含めることができる。
　生体親和性を有する高分子ブロックと細胞とを用いて、複数個の細胞の隙間に複数個の高分子ブロックをモザイク状に３次元的に配置させることによって、生体親和性高分子ブロックと細胞とがモザイク状に３次元配置されることにより、構造体中で細胞が均一に存在する細胞３次元構造体が形成される。
　細胞構造体は、複数個の細胞の隙間に複数個の高分子ブロックが配置されているが、ここで、「細胞の隙間」とは、構成される細胞により、閉じられた空間である必要はなく、細胞により挟まれていればよい。なお、すべての細胞に隙間がある必要はなく、細胞同士が接触している箇所があってもよい。高分子ブロックを介した細胞の隙間の距離、即ち、ある細胞とその細胞から最短距離に存在する細胞を選択した際の隙間距離は特に制限されるものではないが、高分子ブロックの大きさであることが好ましく、好適な距離も高分子ブロックの好適な大きさの範囲である。
　また、高分子ブロックは、細胞により挟まれた構成となるが、すべての高分子ブロック間に細胞がある必要はなく、高分子ブロック同士が接触している箇所があってもよい。細胞を介した高分子ブロック間の距離、即ち、高分子ブロックとその高分子ブロックから最短距離に存在する高分子ブロックを選択した際の距離は特に制限されるものではないが、使用される細胞が１～数個集まった際の細胞の塊の大きさであることが好ましく、例えば、１０μｍ以上１０００μｍ以下であり、好ましくは１０μｍ以上１００μｍ以下であり、より好ましくは１０μｍ以上５０μｍ以下である。
　生体親和性高分子ブロックを構成する高分子は、生体に親和性を有するものであれば、生体内で分解されるか否かは特に限定されないが、生分解性材料で構成されることが好ましい。生分解性材料としては、具体的にはポリペプチド、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ＰＬＧＡ（ポリ乳酸－co－グリコール酸）、ヒアルロン酸、グリコサミノグリカン、プロテオグリカン、コンドロイチン、セルロース、アガロース、カルボキシメチルセルロース、キチン、および、キトサンの群から選択される少なくとも１つの材料である。上記の中でも、ポリペプチドが特に好ましい。ポリペプチドの種類は生体親和性を有するものであれば特に限定されないが、例えば、ゼラチン、コラーゲン、エラスチン、フィブロネクチン、プロネクチン、ラミニン、テネイシン、フィブリン、フィブロイン、エンタクチン、トロンボスポンジン、レトロネクチンが好ましく、最も好ましくはゼラチン、コラーゲン、アテロコラーゲンである。本発明で用いるためのゼラチンとしては、天然ゼラチン、又はリコンビナントゼラチンが好ましい。さらに好ましくは、リコンビナントゼラチンである。
　細胞構造体の詳細および好ましい態様については、ＷＯ２０１１／１０８５１７号公報、特開２０１４－１２１１４号公報、ＷＯ２０１４／１３３０８１号公報、特開２０１５－１３４１９３号公報およびＷＯ２０１５／１９０４３０号公報に記載されており、上記文献の内容は全て引用により本明細書に取り込むものとする。
　細胞構造体における細胞の種類は特に限定されないが、好ましくは体性幹細胞である。
　体性幹細胞としては、例えば、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、造血幹細胞、羊膜細胞、臍帯血細胞、骨髄由来細胞（例えば、骨髄由来間ＭＳＣ等）、心筋幹細胞、脂肪由来幹細胞、または神経幹細胞を使用することができる。上記の中でも、間葉系幹細胞が好ましく、脂肪由来間葉系幹細胞または骨髄由来間葉系幹細胞がより好ましく、脂肪由来間葉系幹細胞がさらに好ましい。なお、間葉系幹細胞とは間葉系組織に存在する体性幹細胞をいい、間葉系組織に属する細胞への分化能を有する。間葉系組織とは、骨、軟骨、脂肪、血液、骨髄、骨格筋、真皮、靭帯、腱、心臓等の組織をいう。
＜板状の細胞非接着性材料＞
　本発明の細胞移植キットは、板状の細胞非接着性材料をさらに含んでいてもよい。板状の細胞非接着性材料は、生体内において第一の袋状構造物の周囲に被膜を形成させる工程において、第一の袋状構造物の内部に空間を維持するための材料として使用するためのものである。細胞非接着性材料としては、シリコンが好ましい。
　細胞非接着性材料の形状としては、板状であればよく、具体的には直方体または円柱などが挙げられるが、特に限定されない。直方体の大きさとしては、縦０．５ｃｍ～３ｃｍ、横０．５ｃｍ～３ｃｍ、および厚さ０．５ｍｍ～５ｍｍ程度にすることができるが、特に限定されない。
＜使用方法＞
　本発明の細胞移植キットの一例を用いて膵島を移植する場合の操作を示す模式図を図１に示す。
　細胞移植キットの使用方法としては、第一の袋状構造物を生体内に導入し、生体内に導入された第一の袋状構造物の周囲にレシピエント由来の被膜を形成させ、その後、第一の袋状構造物の中に、複数個の第二の袋状構造物を入れることができる。
　本発明の一例においては、細胞非接着性材料を包含した第一の袋状構造物を、腹膜の腹腔側に縫い合わせることにより、第一の袋状構造物を生体内に導入してもよい。
　第一の袋状構造物の周囲にレシピエント由来の被膜を形成させる工程において、第一の袋状構造物内に、サイトカイン、間葉系幹細胞、細胞外マトリックスおよびコラーゲンのうちの少なくとも一種を入れてもよい。
　第一の袋状構造物に周囲にレシピエント由来の被膜を形成させる工程において、第一の袋状構造物は移植部位に静置すればよいが、筋肉または皮膚への縫合により固定することがより好ましい。
　第一の袋状構造物を移植する部位としては、レシピエントの腹腔、皮下または腹膜を挙げることができるが、特には限定されない。
　レシピエントとは、移植を受ける生体を意味する。レシピエントは哺乳動物であることが好ましく、ヒトであることがより好ましい。
　本発明において、膵島および細胞のドナーとしては同種でもよく、異種でもよい。好ましくは、膵島は異種由来であり、細胞は同種由来である。特に、細胞として間葉系幹細胞を使用する場合には、同種由来の間葉系幹細胞が好ましい。
　本発明の細胞移植キットの移植回数は、１回だけ移植してもよいし、必要に応じ２回以上の移植を行うこともできる。
　本発明の細胞移植キットは、細胞移植を必要とする疾患の治療のために使用することができる。細胞移植を必要とする疾患の治療としては、例えば、膵臓細胞（β細胞）またはインスリン産生細胞を用いた糖尿病治療、ライソゾーム病関連酵素を分泌する細胞を用いたライソゾーム病治療、およびドーパミン産生細胞を使ったパーキンソン病治療などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
＜各種の用途＞
　本発明によれば、平均孔径０．２ｍｍ以下の空孔を有する膜からなる第一の袋状構造物を、生体内に導入し、生体内に導入された第一の袋状構造物の周囲にレシピエント由来の被膜を形成させ、その後、第一の袋状構造物の中に、上記第一の袋状構造物の空孔の平均孔径よりも大きい平均長径を有する複数個の第二の袋状構造物であって、上記複数個の第二の袋状構造物のうちの少なくとも一部が、細胞を内包している、複数個の第二の袋状構造物を入れる工程を含む、細胞移植方法が提供される。
　本発明によれば、細胞移植を必要とする疾患の治療において使用するための、平均孔径０．２ｍｍ以下の空孔を有する膜からなる第一の袋状構造物と、上記第一の袋状構造物の空孔の平均孔径よりも大きい平均長径を有する複数個の第二の袋状構造物であって、上記複数個の第二の袋状構造物のうちの少なくとも一部が、細胞を内包している、複数個の第二の袋状構造物との組み合わせが提供される。
　本発明によれば、細胞移植治療キットの製造のための、細胞移植を必要とする疾患の治療において使用するための、平均孔径０．２ｍｍ以下の空孔を有する膜からなる第一の袋状構造物と、上記第一の袋状構造物の空孔の平均孔径よりも大きい平均長径を有する複数個の第二の袋状構造物であって、上記複数個の第二の袋状構造物のうちの少なくとも一部が、細胞を内包している、複数個の第二の袋状構造物との組み合わせの使用が提供される。
　以下の実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は実施例によって限定されるものではない。
＜実施例１＞ナイロン製の第一の袋状構造物を用いた異種膵島移植の性能評価
（１）第一の袋状構造物の作製
　直径２ｃｍの円状に切り出した平均孔径４０μｍのナイロンメッシュ（ＣＯＲＮＩＮＧ，　Ｆａｌｃｏｎ（登録商標）４０μｍセルストレーナー）を２枚重ね、富士インパルス社製茶袋シーラー（Ｔ－２３０Ｋ）を用いて内部に空間ができるように３辺を加熱しシールした。その後、縦１ｃｍ、横１ｃｍおよび厚さ１ｍｍのシリコンを、シールされていない残りの１辺から挿入した後に、シリコンを挿入した辺を、上記シーラーで封止し、第一の袋状構造物を作製した。
（２）第一の袋状構造物の周囲への被膜形成
　上記（１）で作製した第一の袋状構造物を６週齢のＢａｌｂ／ｃマウスの腹腔内に移植した。移植時は、第一の袋状構造物の端部２か所を腹壁に縫い付けて位置を固定し、第一の袋状構造物周囲へのレシピエント由来の被膜を形成させた。
（３）糖尿病マウスの作製
　上記（２）において第一の袋状構造物を移植してから３週間後に、ストレプトゾトシン（Ｗａｋｏ社製）をマウス１匹あたり２５０ｍｇ／ｋｇの量で腹腔内に投与した。ストレプトゾトシンの投与１週間後に血糖値が３００ｍｇ／ｄＬの個体を糖尿病発症マウスとして、細胞移植のレシピエントとした。
（４）ラット膵島分離
　Ｗｉｓｔａｒラットを用意し、１ｍｇ／ｍＬ　Ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ　ｔｙｐｅ　Ｖ（Ｓｉｇｍａ社製）を膵管から注入し、膵臓を膨化し摘出した。摘出した膵臓を３７℃で消化後、Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（コスモバイオ社製）１０ｍLとＨＢＳＳ（Ｗａｋｏ）１０ｍＬを用いて９００ｇ、２０分間の密度勾配遠心により膵島を純化した。
（５）アルギン酸ナトリウムマイクロカプセル化膵島の作製
　Ｗｉｓｔａｒラットから単離した膵島を１．８％濃度のアルギン酸ナトリウム溶液（ＢＵＣＨＩ社製）で膵島１個に対して０．０６～０．１μＬの比に収まるよう溶液に懸濁した。懸濁液全体を、シリンジ２本間で移動することを繰り返すことにより均一に膵島を分散した。ＢＵＣＨＩ社製Ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｏｒ　Ｂ－３９５　Ｐｒｏを用いてスターラーを攪拌している１００ｍＭ塩化カルシウム中に滴下しアルギン酸ナトリウムマイクロカプセル化膵島を得た。アルギン酸カプセルは０．０５質量％ｐｏｌｙ－Ｌ－Ｌｙｓｙｎで２分間コートした。
（６）アルギン酸ナトリウムカプセル化膵島の評価
　作製したカプセルの１０％を抽出し、Ｃｅｌｌ３ｉＭａｇｅｒ（島津製作所）で画像を撮影しＩｍａｇｅＪで画像解析を行った。空のカプセルの割合は、画面内の全カプセル量と空のカプセルをカウントして算出した。カプセルの平均膵島数は画面内の全膵島数と、膵島が入ったカプセル数をカウントして算出した。作製したカプセル中、膵島が含まれない空のカプセルは２６．４％だった。１カプセルあたりの平均膵島数は１．７０個だった。
（７）細胞構造体の作製
　マウス脂肪由来間葉系幹細胞（ｍＡＤＳＣ）を１０％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）含有のＤ－ＭＥＭ培地（ダルベッコ改変イーグル培地）に懸濁し、そこに生体親和性高分子ブロック（５３－１０６μｍ）（特開２０１５－１３４１９３号公報の実施例２に記載のもの）を加えて、最終的にｍＡＤＳＣ（１．２×１０６ｃｅｌｌｓ）と生体親和性高分子ブロック（０．２５ｍｇ）が４ｍＬの培地に懸濁された状態で、細胞非接着性の３５ｍｍディッシュであるＥＺＳＰＨＥＲＥ（登録商標）ディッシュＴｙｐｅ９０３（スフェロイドウェル口径８００μｍ、スフェロイドウェル深さ３００μｍ、スフェロイドウェル数～約１，２００ウェル。底面が窪み部を有する培養面であり、培養面の周縁に立設される側外壁部を有する。ＡＧＣテクノグラス製）に播種した。上記ディッシュをＣＯ2インキュベーターで３７℃で４８時間静置することで、約１，２００個の均一な細胞構造体を取得した。
（８）アルギン酸ナトリウムマイクロカプセル化膵島の移植
　上記（３）で作製した糖尿病マウスに第一の袋状構造物を移植してから４週間経過した時点で（図２）、糖尿病マウスを開腹し、被膜に覆われた第一の袋状構造物の１辺を鋏で切り、内部のシリコンを摘出した。シリコンを摘出した後にできた空間に、上記の（５）で得たアルギン酸ナトリウムマイクロカプセル化膵島を移植後、第一の袋状構造物を封止することにより、細胞移植を完了とした（図３）。細胞移植の完了後、マウスの血糖値および体重を経日で観察した。血糖値および体重の推移を図４および図５に示す。
（９）アルギン酸ナトリウムマイクロカプセル化膵島と細胞構造体の移植
　上記（３）で作製した糖尿病マウスに第一の袋状構造物を移植してから４週間経過した時点で（図２）、糖尿病マウスを開腹し、被膜に覆われた第一の袋状構造物の１辺を鋏で切り、内部のシリコンを摘出した。シリコンを摘出した後にできた空間に、上記の（５）で得たアルギン酸ナトリウムマイクロカプセル化膵島と上記（７）で得た細胞構造体を混合して移植後、第一の袋状構造物を封止することにより、細胞移植を完了とした。細胞移植の完了後、マウスの血糖値および体重を経日で観察した。血糖値および体重の推移を図４および図５に示す。
＜比較例１＞
　比較例１として、アルギン酸ナトリウムマイクロカプセル化を施さないこと以外は、実施例１の（８）と同様の操作を施して実験を実施した。
　その結果、血糖値平均が移植７日時点で２８０．８ｍｇ/ｄL（ＳＤ：１８２．７）、１４日で３１０．６ｍｇ／ｄＬ（ＳＤ：１４４．７）、２１日で４２１ｍｇ／ｄＬ（ＳＤ：１４５．１）、２８日後では３６６ｍｇ／ｄＬ（ＳＤ：１５２．５）であり７日時点で血糖値制御ができないことが分かった。体重は移植日の体重を１００％とした場合、２８日時点で１０１．４％（ＳＤ：１．９）であった。
　一方、（８）にて実施した、第一の袋状構造物およびアルギン酸ナトリウムマイクロカプセル化膵島を移植した個体では、血糖値平均が移植７日時点で１３０ｍｇ/ｄL（ＳＤ：８０．６）、１４日で２８６ｍｇ／ｄＬ（ＳＤ：１２１．８）、２１日で３１４．８ｍｇ／ｄＬ（ＳＤ：１３８．１）、２８日後では３７１ｍｇ／ｄＬ（ＳＤ：１３２．２）であり、７日以上の血糖値制御が確認されたことから第一の袋状構造物とアルギン酸ナトリウムマイクロカプセル化の構成が治療効果発揮に有用であることが示された。体重は移植日の体重を１００％とした場合、２８日時点で１０６．６％（ＳＤ：２．９）であり、比較例１よりも増加することが分かった。更に（９）にて実施した、細胞構造体を移植したものでは、血糖値平均が移植７日時点で１０６．２ｍｇ/ｄL（ＳＤ：３３．０）、１４日で１８６．２ｍｇ／ｄＬ（ＳＤ：１０３．４）、２１日で２２６．４ｍｇ／ｄＬ（ＳＤ：１０５．７）、２８日後では２４５．８ｍｇ／ｄＬ（ＳＤ：８６．８）であった。移植２８日後においても、血糖値平均が２５０ｍｇ／ｄＬを下回っていることからより強い血糖値正常化作用を持つことが分かった。体重は移植日の体重を１００％とした場合、２８日時点で１１５．８％（ＳＤ：２．９２）であり、比較例１よりも、また実施例中の（８）よりも高い糖代謝機能を有していることが分かった。
＜比較例２＞
　比較例２として、第一の袋状構造物を用いないこと以外は、実施例１の（８）と同様の操作を施して実験を実施した。
　その結果、第一の袋状構造物を用いない移植（比較例２）では血糖値平均が移植７日時点で１０３．６ｍｇ/ｄL（ＳＤ：１２．９）、１４日で４３２ｍｇ／ｄＬ（ＳＤ：４８．１）、２１日で４７０．２ｍｇ／ｄＬ（ＳＤ：３２．９）、２８日後では４８９ｍｇ／ｄＬ（ＳＤ：６４．８）であった。体重は移植日の体重を１００％とした場合、２８日時点で１０３．９％（ＳＤ：８．２）であった。
　また、測定２回連続で血糖値２５０ｍｇ／ｍＬ以下の状態を完治と判断し、その完治した割合を完治率と定義し、比較例１、比較例２、実施例中の（８）及び（９）について、完治率を計測し、表１に示した。完治率という視点で見た際には、細胞構造体を含む構成が顕著に高い完治率を示すことが分かった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
（組織標本の観察）
　膵島を移植後４週間経過した個体を麻酔下で開腹し、ナイロンメッシュデバイスを被包した組織と縫合した筋肉ごと摘出した。摘出した検体は１０％ホルマリン中性緩衝液（Ｗａｋｏ）で固定した後、パラフィンで包埋し組織標本の切片を作製した。作製した切片にヘマトキシリン・エオジン（ＨＥ）染色と抗インスリン抗体（ａｂｃａｍ）よる免疫染色を行い、組織標本を観察した結果、インスリン陽性領域は、細胞構造体(-)群では僅かに確認された。一方で細胞構造体（＋）群では、多数散見された（図６）。膵島の生存は、細胞構造体(-)群では中心部あるいは全体が壊死した膵島が観察された。一方で細胞構造体（＋）群では中心まで核が染まっている生存した膵島が多数観察された（図７）。炎症反応は、細胞構造体(-)群ではカプセルの周囲に炎症系の免疫細胞が多数存在していたが、細胞構造体(+)群ではカプセル周囲に炎症系細胞はほとんど見られなかった（図８）。
　組織標本観察結果を表２に示す。インスリン陽性領域数は標本検体あたりの検出されたインスリン陽性領域の数が０：×、　１～４：△、　５～：〇とした。膵島生存は標本検体あたりの核が染色された膵島数が０：×、　１～４：△、　５～：〇とした。カプセル周囲の炎症は検体の組織標本に占める炎症細胞の領域の面積が０～２０％未満：〇、　２０～５０％未満：△、　５０～１００％：×とした。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002

Claims (22)

  1. 平均孔径０．２ｍｍ以下の空孔を有する膜からなる第一の袋状構造物と、前記第一の袋状構造物の空孔の平均孔径よりも大きい平均長径を有する複数個の第二の袋状構造物とを含む、細胞移植キットであって、前記複数個の第二の袋状構造物のうちの少なくとも一部が、細胞を内包している、細胞移植キット。
  2. 第一の袋状構造物の材料が、ナイロン、ポリスルホン、ポリテトラフルオロエチレン、ポリウレタン、ポリエステル、塩化ビニル、ポリカーボネート、アクリル、ステンレス、チタン、シリコン、または２－メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリンを含む、請求項１に記載の細胞移植キット。
  3. 第一の袋状構造物の材料が、ナイロンまたはポリスルホンを含む、請求項１または２に記載の細胞移植キット。
  4. 第二の袋状構造物の材料が、多糖ヒドロゲル、ポリペプチド、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、乳酸・グリコール酸コポリマー、ヒアルロン酸、グリコサミノグリカン、プロテオグリカン、コンドロイチン、セルロース、アガロース、カルボキシメチルセルロース、キチン、キトサン、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸カルシウム、アルギン酸カリウム、アルギン酸バリウム、アルギネート、ポリリジンの層状マトリックス、ポリオルニチンの層状マトリックス、光重合ポリマー、ポリアクリレート、ヒドロキシエチルメタクリレート、メチルメタクリレート、シリコン、ポリエーテルスルホンメンブレン、アクリロニトリル－コ－塩化ビニル またはこれらの組み合わせを含む、請求項１から３の何れか一項に記載の細胞移植キット。
  5. 第二の袋状構造物の材料が、アルギン酸ナトリウムを含む、請求項１から４の何れか一項に記載の細胞移植キット。
  6. 前記複数個の第二の袋状構造物のうちの少なくとも一部は、細胞を内包していない、請求項１から５の何れか一項に記載の細胞移植キット。
  7. 第二の袋状構造物のうち細胞を内包していないものの割合が５０％以下である、請求項１から６の何れか一項に記載の細胞移植キット。
  8. 細胞が、細胞集合体である、請求項１から７の何れか一項に記載の細胞移植キット。
  9. 細胞集合体が膵島である、請求項８に記載の細胞移植キット。
  10. 細胞集合体を内包している第二の袋状構造物について、１個の第二の袋状構造物に内包される細胞集合体の平均個数が１．０個以上５．０個以下である、請求項８または９に記載の細胞移植キット。
  11. 第一の袋状構造物の空孔の平均孔径が５０μｍ以下である、請求項１から１０の何れか一項に記載の細胞移植キット。
  12. 第一の袋状構造物の空孔の平均孔径が１μｍ以下である、請求項１から１１の何れか一項に記載の細胞移植キット。
  13. 第一の袋状構造物の内部に間葉系幹細胞を含む、請求項１から１２の何れか一項に記載の細胞移植キット。
  14. 生体親和性を有する高分子ブロックと細胞とを含む細胞構造体であって、複数個の前記細胞間の隙間に複数個の前記高分子ブロックが配置されている細胞構造体をさらに含む、請求項１から１３の何れか一項に記載の細胞移植キット。
  15. 前記細胞構造体を第一の袋状構造物と第二の袋状構造物との間に含む、請求項１４に記載の細胞移植キット。
  16. 前記細胞構造体に含まれる細胞が間葉系幹細胞である、請求項１４または１５に記載の細胞移植キット。
  17. 板状の細胞非接着性材料をさらに含む、請求項１から１６の何れか一項に記載の細胞移植キット。
  18. 第一の袋状構造物を生体内に導入し、生体内に導入された第一の袋状構造物の周囲にレシピエント由来の被膜を形成させ、その後、第一の袋状構造物の中に、複数個の第二の袋状構造物を入れる、請求項１から１７の何れか一項に記載の細胞移植キット。
  19. 細胞非接着性材料を包含した第一の袋状構造物を、腹膜の腹腔側に縫い合わせることにより、第一の袋状構造物を生体内に導入する、請求項１８に記載の細胞移植キット。
  20. 請求項１から１９の何れか一項に記載の細胞移植キットを含む、糖尿病治療剤。
  21. 糖尿病の治療における使用のための請求項１から１９の何れか一項に記載の細胞移植キット。
  22. 膵島を０．５～４質量％の高分子溶液に懸濁することを含む、膵島を内包した袋状構造物の製造方法であって、膵島１個に対する高分子溶液の容量が０．０１～２．０μＬである、製造方法。
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