WO2020128991A1 - Substance biologiquement active, son procede de fabrication et son utilisation comme agent protecteur d'un tissu biologique - Google Patents

Substance biologiquement active, son procede de fabrication et son utilisation comme agent protecteur d'un tissu biologique Download PDF

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WO2020128991A1
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Julien CELERIER
Charlotte MOINE
Céline Faugeron-Girard
Vincent Gloaguen
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Covertis
Universite De Limoges
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    • A01N65/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing material from algae, lichens, bryophyta, multi-cellular fungi or plants, or extracts thereof
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    • A61K2800/84—Products or compounds obtained by lyophilisation, freeze-drying

Definitions

  • the present invention relates to a biologically active substance obtained from at least one macroscopic edible fungus, its manufacturing process and its use as a protective agent for biological tissue.
  • biological tissue an envelope of an organism, which constitutes a direct interface between said organism and the external environment and must therefore be protected from any attack by any exogenous agent.
  • plant tissues such as the aerial parts of plants, the vine, wheat, fruit, tomatoes, potatoes, etc., as well as human or animal skin.
  • Plant tissues are susceptible to attack by pathogenic agents, such as viruses, bacteria, fungi or insects and can then respond to these attacks by development, in particular under the action of so-called eliciting / repairing compounds.
  • pathogenic agents such as viruses, bacteria, fungi or insects
  • eliciting / repairing compounds such as insects, fungi or insects
  • physiological or metabolic natural defense responses which consist of:
  • Human or animal skin is the direct interface between man and his environment. It must therefore protect it against external aggressions but it also suffers damage linked to this environment. This damage can be significant such as sores or burns, but also slower and "minor” such as wrinkles.
  • the mechanism of appearance of wrinkles involves both intrinsic and extrinsic factors.
  • intrinsic factors inducing the formation of wrinkles, there are several mechanisms: decrease in hydration; decrease in collagen III production and predominance of more rigid type I collagen; 50% decrease in cell renewal; rarefaction of keratinocytes due to the decrease in the capacity for migration to the surface of the epidermis.
  • the body has its own defense system to neutralize free radical damage, but with age, the effectiveness of this system declines and our need for antioxidants increases.
  • the skin repair process must involve several factors, such as the proliferation of dermis and epidermis cells; synthesis and / or reshaping of the extracellular matrix; protection against free radicals.
  • the present inventors sought a biologically active substance advantageously of natural origin and easy to manufacture which can effectively protect any biological tissue, playing in particular the role of elicitors / repairers in the case of plant tissue, and the role of protective cosmetic ingredient. in the case of the skin.
  • the subject of the invention is therefore firstly a biologically active substance obtained or capable of being obtained by:
  • the mushroom or mushrooms to be extracted can be chosen from the group formed by oyster mushrooms, coulumbles and button mushrooms.
  • the base can be chosen from hydroxylated bases, such as sodium hydroxide and potassium hydroxide; the reducing agent (s) may be chosen from alkaline borohydrides, such as sodium or potassium borohydride; and the cation exchange resin can be chosen from resins containing sulphonic, phosphorous, carboxymethyl or carboxylic groups.
  • the biologically active substance may contain, per 100 parts by weight of dry matter:
  • the invention also relates to a process for the production of a biologically active substance, characterized in that it comprises the following successive steps consisting in:
  • step (b) can lead to the elimination of solid particles larger than 1 ⁇ m.
  • step (c) aims to remove the particles of cation exchange resin which could remain in the aqueous phase.
  • sodium hydroxide or potassium hydroxide may be used as the base, and an alkali borohydride, such as sodium or potassium borohydride, as the reducing agent, the reducing agent or agents being used in particular at a rate of 0.05 to 1 g / 100 mL of the aqueous solution of at least one base; and that, for neutralization, at least one ion exchange resin chosen from resins with sulphonic, phosphorous, carboxymethyl or carboxylic groups is used.
  • an alkali borohydride such as sodium or potassium borohydride
  • the alkaline extraction can be carried out by heating the aqueous solution of at least one base, in the presence of at least one reducing agent, at a temperature of 25 to 100 ° C for at least 2 hours with stirring.
  • the invention also relates to a use of a biologically active substance as defined above or prepared by the method as defined above, as a protective agent for a biological tissue against aggression by at minus an exogenous agent.
  • the biological tissue can be a plant tissue
  • the exogenous agent or agents can be pathogenic fungi, bacteria, viruses, insects and / or a physical aggressor such as rain, frost, temperature and environmental stresses
  • the protective agent may be an elicitor / repair agent for said plant tissue, in particular agronomically useful or ornamental plants, in particular for a preventive treatment against cryptogamic diseases and bacterial diseases, in particular those chosen from the group formed by diseases of conservation of fruit, diseases of the vine, fruit trees, vegetable crops and cereals.
  • these cryptogamic and bacterial diseases one can mention:
  • the invention also relates to a composition for protecting a plant tissue, characterized in that it consists of the biologically active substance as defined above or prepared by the process as defined above, obtained by aqueous medium in particular at a concentration of 8 to 140 g / L, where appropriate diluted, where appropriate concentrated or dehydrated or lyophilized,
  • anti-phytopathogenic agents in particular chosen from the group formed by fungicidal agents, antibacterial agents, antiviral agents, pesticidal agents and biocontrol, plant nutrients, and fruit / vegetable coating agents to form a coating wax.
  • the invention also relates to a method for the protective treatment of plant tissue, characterized in that it consists in applying the composition as defined above, when it is in the aqueous phase, in particular with the biologically active substance after dilution 50 to 400 times by spraying on the aerial parts of plants, in the early vegetative stages and / or in the adult and reproductive vegetative stages, in one or in several times, for example up to 40 times, at repeated time intervals , especially every two to thirty days, or by soaking the harvested products, such as picked fruits and vegetables, in said composition in the aqueous phase, or by sprinkling the roots, or when it is in the form of a wax. coating, by coating fruit / vegetables.
  • the invention also relates to a use characterized in that the biological tissue is human or animal skin, the exogenous agent or agents being oxidizing agents, chemicals and / or physical aggressors and the protective agent is an agent cosmetic treatment of the skin, in particular of aged skin comprising wrinkles to be reduced or of young skin having suppleness and elasticity to improve.
  • the invention also relates to a protective treatment composition for human or animal skin, characterized in that it consists of the biologically active substance as defined above or prepared by the process as defined above, in aqueous medium or in powder form, in combination with at least one cosmetic adjuvant to facilitate its distribution on the skin.
  • the invention also relates to a process for the protective treatment of human or animal skin, characterized in that it consists in distributing by spreading or spraying the composition as defined above, in particular in the form of a cream or a solution on the skin area to be treated in order to obtain a protective effect on the skin on each application, in particular at the rate of 0.005 to 100 g of biologically active substance per 100 g of composition.
  • the biological substance of the invention boosts dermal metabolism by increasing the proliferation of fibroblasts and by promoting the synthesis of matrix constituents. This activity on the extracellular matrix promotes the elasticity of the skin and the production of collagen. This action contributes to the smoothing of the microrelief of the skin and to blurring wrinkles.
  • the biological substance of the invention has a protective activity thanks to its antioxidant activity. It restores part of the antioxidant capital and thus limits the damage caused by free radicals.
  • the biological substance of the invention therefore contributes to accelerating this process of tissue repair.
  • Example 1 Preparation of an extract of Pleurotus ostreatus in lyophilized form
  • the raw material consists of whole Pleurotus Ostreatus mushrooms harvested in March. 200 g of dried and ground oyster mushrooms ( ⁇ 10mm) are dispersed in 2L of 2% sodium hydroxide, in the presence of 0.5% (m / v) sodium borohydride. The extraction is carried out at 50 ° C for 8 hours, with mechanical stirring.
  • the clarified extract thus obtained is neutralized by contacting with a cation exchange resin (Purolite C150H).
  • the neutralized extract is clarified by filtration at 1 ⁇ m.
  • a clarified liquid extract is thus obtained, which after lyophilization makes it possible to recover 53 g of a beige-colored powder constituting the extract.
  • Example 2 Preparation of an extract of Pleurotus ostreatus in aqueous phase
  • the raw material consists of whole Pleurotus Ostreatus mushrooms harvested in May. 200 g of dried and ground oyster mushrooms ( ⁇ 10mm) are dispersed in 2L of 2% sodium hydroxide, in the presence of 0.5% (m / v) sodium borohydride. The extraction is carried out at 50 ° C for 8 hours, with mechanical stirring.
  • the clarified extract thus obtained is neutralized by contacting with a cation exchange resin (Purolite C150H).
  • the neutralized extract is clarified by filtration at 1 ⁇ m.
  • a clarified liquid extract is thus obtained containing 34.7 g / L of dry matter constituting the extract.
  • composition of the extract obtained is reported in Table 2 below.
  • the composition results are the average from 2 replicas made with the same raw material.
  • Example 3 Stimulation of the natural defenses of tomatoes with the extract of Example 1
  • the oyster mushroom extract according to Example 1 was tested on plants to evaluate the induction of the defenses of the plant in the context of attack by a pathogen after a preventive treatment with oyster mushroom extract.
  • the model used is a model of tomato plants grown under glass from seedlings made in horticultural soil. The plants are one month old at the time of treatment.
  • the plants are harvested, frozen in liquid nitrogen and stored at -20 ° C before being analyzed.
  • peroxidase activity was evaluated according to the protocol described by JS Shindler, RE Childs, and WG Bardsley. Peroxidase from Human Cervical Mucus: The Isolation and Characterization. Eur. J. Biochem. 65, 325-331 (1976). This enzyme is involved in the regulation of oxidative stress and is classified among PR proteins (Pathogenesis Related proteins).
  • the activities are expressed as% of the activity measured for the control (blank of formulation BF).
  • Plants that have undergone a pre-treatment with oyster mushroom extract have stimulated defenses allowing them to better resist attacks by pathogens.
  • the treatments were carried out between 04/26/18 and 06/14/18 with a spray volume ranging from 200 to 300 L / ha depending on the increase in leaf area.
  • the untreated witness receives water sprays; the treatment with Bordeaux mixture consists in applying from flowering the dose equivalent to 750 g Cu / ha (Table 4 below).
  • the oyster mushroom extract obtained according to Example 2 is applied in the form of an aqueous solution formulated with a surfactant and a preservative, the extract is used at a dose of 35 g / ha, either alone or in the program with Bordeaux porridge. A partial control of Bordeaux mixture only is also tested in order to see the contribution of the oyster extract in such a program.
  • Table 4 below shows the processing schedule for the different modalities.
  • the extract of oyster mushroom (Ple) alone therefore allows a reduction in the symptoms of mildew attack by around 78% compared to the control treated with water.
  • the effectiveness of the oyster extract is 68% compared to the partial control of Bordeaux mixture alone.
  • This Ple / BBRSR program makes it possible to obtain an efficiency of 78% in reducing the symptoms caused by downy mildew.
  • the treatments were carried out between 04/26/18 and 07/27/18 with a spray volume ranging from 130 to 200 L / ha depending on the increase in leaf area.
  • the untreated control receives no spray; the treatment with chemical cover consists in applying 3 types of conventional products from stage BBCH 14 (Table 5 below).
  • the oyster mushroom extract obtained according to Example 2 is applied in the form of an aqueous solution formulated with a surfactant and a preservative, the extract is used at a dose of 35 g / ha, either alone or in the program with conventional products and compared to a full conventional program.
  • Table 5 shows the processing schedule for the different modalities.
  • Ple oyster mushroom extract (35 g / L);
  • LBG01F34 Potassium phosphonates (730 g / L);
  • Polyram DF Metiram (700 g / kg);
  • the extract of oyster mushroom (Ple) alone therefore allows a reduction in the symptoms of mildew attack by around 48% compared to the untreated control.
  • Replacing 2 applications of 2 chemicals (LBG 01F34 and Polyram DF) with 3 applications of oyster mushroom extract formulated before flowering makes it possible to obtain levels of protection statistically equivalent to total conventional coverage (Conventional).
  • This Ple / Conv program achieves an 84% efficiency in reducing the symptoms caused by vine downy mildew.
  • the treatments were carried out between 22/03/18 and 03/01/18 with a spray volume of 200 L / ha.
  • the untreated witness receives sprays with water; the treatment with chemical cover consists in applying 2 types of conventional products from stage BBCH 29 (Table 6).
  • the oyster mushroom extract obtained according to Example 2 is applied in the form of an aqueous solution formulated with a surfactant and a preservative, the extract is used at a dose of 35 g / ha, either alone or in the program with conventional products and compared to a full conventional program.
  • Table 6 below shows the processing schedule for the different modalities.
  • Ple oyster mushroom extract (35 g / L) formulated
  • CHEROKEE Propiconazole / Cyproconazole / Chlorothalonil (62.5 / 50/375 g / L);
  • ADEXAR Epoxiconazole / Fluxapyroxad (62.5 / 62.5 g / L);
  • the antioxidant activity was evaluated by the ORAC (Oxygen Radical Antioxidant Capacity) method. It consists in measuring the protection exerted by a given molecule against the oxidation of fluorescein (CAS 518-47-8) by a stable free radical, the AAPH dihydrochloride of (2,2'-azobis (2-amidino-propane) )) (CAS 2997-92-4).
  • ORAC Oxygen Radical Antioxidant Capacity
  • Example 8 Evaluation of the impact of the extract of Example 1 on fibroblastic proliferation
  • the objective is to evaluate the impact of the oyster mushroom extract obtained according to Example 1 on tissue repair in the skin. This evaluation is made in comparison with an untreated witness.
  • the dry oyster mushroom extract obtained according to Example 1, is diluted in the DMEM Glutamax culture medium in order to obtain a treatment mother solution at 1 mg / ml which is then filtered at 0.2 ⁇ m to remove any contamination by microorganisms.
  • the operating protocol is as follows:
  • the primary cultures of 44-year-old human skin fibroblasts (PAF 08052) are seeded in 48-well microplates at the rate of 10,000 cells per well with a volume of culture medium (DMEM glutamax) of 500 ⁇ L. The cells adhere to the bottom of the wells for 24 hours. The culture medium is then replaced by the extract obtained according to Example 1 diluted in culture medium and then filtered, and a control without treatment will be carried out (DMEM glutamax). Several concentrations will be tested at the rate of 500 ⁇ L per well and incubated for 48 hours at 37 ° C. in an atmosphere containing 5% by volume of CO 2 . The cells are then detached with trypsin, then counted on a Malassez slide. The analyzes are carried out on 6 replicates.
  • results are expressed in percentages of proliferation relative to the untreated control.
  • a statistical analysis by Wilcoxon-Mann-Withney test is carried out on the results in order to determine the significance of the values.
  • the significance stars indicate the degree of significance, ie * p ⁇ 0.05; *** p ⁇ 0.001.
  • Example 1 It is found that the extract obtained according to Example 1 promotes the proliferation of fibroblasts significantly compared to the untreated control, and therefore tissue repair with better activity at 250 ⁇ g / ml.
  • Example 9 Evaluation of the impact of the extract of Example 1 on the keratinocyte proliferation
  • the objective is to evaluate the impact of the oyster mushroom extract obtained according to Example 1 on the repair of the epidermis. This evaluation is made in comparison with an untreated witness.
  • the oyster mushroom extract according to Example 1 is diluted in the KGM Gold culture medium in order to obtain a mother treatment solution at 1 mg / ml which is then filtered at 0.2 ⁇ m to remove any contamination by micro -organisms.
  • the operating protocol is as follows:
  • the primary cultures of keratinocytes (NHEK 33228) from human skin (patient aged 43 years) are seeded in 48-well microplates at the rate of 10,000 cells per well with a volume of KGM Gold culture medium of 500 ⁇ L. The cells adhere to the bottom of the wells for 48 hours. The culture medium is then replaced by the extract obtained according to Example 1 diluted in culture medium and filtered; in addition, a control without treatment (culture medium only) will be carried out. Several concentrations will be tested at a rate of 500 ⁇ L per well and incubated for 48 hours at 37 ° C. in an atmosphere enriched with 5% by volume of CO 2 . The tests are carried out in triplicates. The cells are then peeled off with Trypsin-EDTA and then counted on a Malassez slide.
  • results are expressed in percentages relative to the untreated control.
  • a statistical analysis by Wilcoxon-Mann-Withney test is carried out on the results in order to determine the significance of the values.
  • the significance stars indicate the degree of significance, ie * p ⁇ 0.05; ** p ⁇ 0.01.
  • Example 1 promotes the proliferation of keratinocytes significantly compared to the untreated control from 100 ⁇ g / ml with a higher activity at 750 ⁇ g / ml.
  • Example 10 Comparison of the peroxidase activity on tomato after treatment with the extracts according to patent WO 2018/069497 and according to Example 1
  • the controls are treated with the formulation blank or distilled water.
  • the pathogen is inoculated on a leaf by infiltration of a suspension of Botrytis cinerea spores, at the rate of 100,000 conidia per ml of a Tween 80 solution at 0, 05%. It is a strain of Botrytis cinerea (reference UBOCC-A-101100) supplied by the University of Western Brittany.
  • the treated leaves are harvested by removing leaf discs from each plant. These are frozen in liquid nitrogen and stored at -20 ° C before being analyzed.
  • Peroxidase activity was evaluated according to the protocol described by J.S. Shindler, R. E. Childs, and W. G. Bardsley. Peroxidase from Human Cervical Mucus: The Isolation and Characterization. Eur. J. Biochem. 65, 325-331 (1976). This enzyme is involved in the regulation of oxidative stress and is classified among PR proteins (Pathogenesis Related proteins).
  • the specific enzymatic activities are expressed as% of the activity measured for the control (distilled water ED).
  • Table 10 indicates the peroxidase activity extracted from the tomato plants treated by three sprays with:
  • Treatment Peroxidase activity (% of ED control) Distilled water 100 ⁇ 22.76 Formulation blank 118 ⁇ 21.02 Extract 1 132 ⁇ 25.90 Extract 2 (invention) 195 ⁇ 25.07
  • Treatment with the formulation blank does not induce a significant increase in peroxidase activity on tomato plants under these treatment conditions. It is the same for the extract of oyster mushroom 1 although the average activity is higher than that of the control and the white formulation. On the other hand, a strong stimulation of the peroxidase enzymatic activity is observed following the pretreatment of the tomato plants with the extract of oyster mushroom 2; the increase in activity compared to the control is significant (x 1.9) according to the Kruskal Wallis statistical test, as well as compared to treatment with extract 1 (x 1.48).

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Abstract

La substance biologiquement active est obtenue ou susceptible d'être obtenue par extraction alcaline, par une solution aqueuse d'au moins une base en présence d'au moins un agent réducteur, d'au moins un champignon comestible macroscopique réduit en poudre, pour obtenir un mélange ayant une partie liquide contenant les matières extraites solubles et une partie solide formée de particules solides insolubles; filtration du mélange obtenu pour en retirer la partie solide et clarification éventuelle de la partie liquide; neutralisation de la partie liquide à l'aide d'au moins une résine échangeuse de cations et filtration/clarification éventuelle de la partie liquide ainsi neutralisée pour obtenir la substance biologiquement active en phase aqueuse; et traitement de la phase aqueuse obtenue choisi parmi une dilution dans l'eau, une concentration, une déshydratation et une lyophilisation pour obtenir une substance biologiquement active respectivement davantage diluée dans l'eau, en solution aqueuse davantage concentrée, déshydratée sous forme de poudre ou lyophilisée.

Description

SUBSTANCE BIOLOGIQUEMENT ACTIVE, SON PROCEDE DE FABRICATION ET SON UTILISATION COMME AGENT PROTECTEUR D’UN TISSU BIOLOGIQUE
La présente invention porte sur une substance biologiquement active obtenue à partir d’au moins un champignon comestible macroscopique, sur son procédé de fabrication et sur son utilisation comme agent protecteur d’un tissu biologique.
On entend par tissu biologique une enveloppe d’un organisme, laquelle constitue une interface directe entre ledit organisme et l’environnement extérieur et doit donc être protégée de toute agression par tout agent exogène.
Comme tissu biologique, on peut donc mentionner aussi bien les tissus végétaux, tels que les parties aériennes des plantes, la vigne, le blé, les fruits, les tomates, les pommes de terre, etc., que la peau humaine ou animale.
Les tissus végétaux sont susceptibles d’être attaqués par des agents pathogènes, tels que les virus, les bactéries, les champignons ou les insectes et peuvent alors répondre à ces attaques par le développement, en particulier sous l’action de composés dits éliciteurs/réparateurs, de réponses physiologiques ou métaboliques de défense naturelle qui consistent en :
  • le renforcement des barrières cellulaires préexistantes par la stimulation de la lignification des parois des cellules végétales ;
  • la synthèse par la plante de composés à activité antibiotique, tels que les phytoalexines ;
  • la synthèse de protéines enzymatiques pouvant s’attaquer à la paroi des pathogènes, telles que les chitinases ou les glucanases.
La peau humaine ou animale constitue l’interface directe entre l’homme et son environnement. Elle doit donc le protéger contre les agressions extérieures mais elle subit également des dommages liés à cet environnement. Ces dommages peuvent être importants tels que des plaies ou des brûlures, mais aussi plus lents et « mineurs » tels que les rides.
Le mécanisme d’apparition des rides fait intervenir à la fois des facteurs intrinsèques et extrinsèques. Parmi les facteurs intrinsèques induisant la formation des rides, on retrouve plusieurs mécanismes : diminution de l’hydratation ; diminution de la production de collagène III et prédominance du collagène de type I plus rigide ; diminution de 50% du renouvellement cellulaire ; raréfaction des kératinocytes en raison de la diminution de la capacité de migration vers la surface de l’épiderme.
De plus, l’organisme a son propre système de défense pour neutraliser les dommages liés aux radicaux libres, mais, avec l’âge, l’efficacité de ce système décline et notre besoin en anti-oxydants augmente.
A ce vieillissement génétiquement programmé s’ajoutent des facteurs environnementaux qui vont accélérer ce processus : les agressions climatiques, pathologiques… Les comportements peuvent également largement influer sur l’aspect de la peau : tabac, alcool, etc. Les dermatologues estiment que 90% du vieillissement cutané est dû à ces facteurs exogènes.
De façon générale, le processus de réparation de la peau doit faire intervenir plusieurs facteurs, tels que la prolifération des cellules du derme et de l’épiderme ; la synthèse et/ou le remodelage de la matrice extracellulaire ; la protection contre les radicaux libres.
Les présents inventeurs ont recherché une substance biologiquement active avantageusement d’origine naturelle et facile à fabriquer qui puisse protéger efficacement tout tissu biologique, jouant notamment le rôle d’éliciteurs/réparateurs dans le cas du tissu végétal, et le rôle d’ingrédient cosmétique protecteur dans le cas de la peau.
Cette recherche leur a permis de découvrir une substance biologique issue d’un champignon comestible macroscopique dont ils ont démontré les propriétés protectrices pour tous ces tissus biologiques.
L’invention a donc d’abord pour objet une substance biologiquement active obtenue ou susceptible d’être obtenue par :
  • extraction alcaline, par une solution aqueuse d’au moins une base en présence d’au moins un agent réducteur, d’au moins un champignon comestible macroscopique réduit en poudre, pour obtenir un mélange ayant une partie liquide contenant les matières extraites solubles et une partie solide formée de particules solides insolubles ;
  • filtration du mélange obtenu pour en retirer la partie solide et clarification éventuelle de la partie liquide ;
  • neutralisation de la partie liquide à l’aide d’au moins une résine échangeuse de cations et filtration/clarification éventuelle de la partie liquide ainsi neutralisée pour obtenir la substance biologiquement active en phase aqueuse ; et
  • traitement de la phase aqueuse obtenue choisi parmi une dilution dans l’eau, une concentration, une déshydratation et une lyophilisation pour obtenir une substance biologiquement active respectivement davantage diluée dans l’eau, en solution aqueuse davantage concentrée, déshydratée sous forme de poudre ou lyophilisée.
Le ou les champignons soumis à l’extraction peuvent être choisis dans le groupe formé par les pleurotes, les coulemelles et les champignons de Paris.
La base peut être choisie parmi les bases hydroxylées, telles que l’hydroxyde de sodium et l’hydroxyde de potassium ; le ou les agents réducteurs peuvent être choisis parmi les borohydrures alcalins, tels que le borohydrure de sodium ou de potassium ; et la résine échangeuse de cations peut être choisie parmi les résines à groupements sulfoniques, phosphore, carboxyméthyle, carboxyliques.
La substance biologiquement active peut comporter, pour 100 parties en poids de matière sèche :
  • 30 à 75 parties en poids de sucres totaux, dont :
    • 9 à 25 parties en poids de β-glucanes ; et
    • 0,8 à 2,4 parties en poids de glucosamine et/ou de glucosamine acétylée ;
  • 7 à 36 parties en poids de peptides totaux/protéines totales ;
  • le complément étant constitué par des matières minérales,
80 à 100 % des composés organiques ayant notamment une masse en fonction de la taille moléculaire moyenne comprise entre 20 et 45 kDa.
L’invention porte également sur un procédé de fabrication d’une substance biologiquement active, caractérisé par le fait qu’il comporte les étapes successives suivantes consistant à :
  1. conduire une extraction alcaline, par une solution aqueuse d’au moins une base en présence d’au moins un agent réducteur, d’au moins un champignon comestible macroscopique réduit en poudre, pour obtenir un mélange ayant une partie liquide contenant les matières extraites solubles et une partie solide formée de particules solides insolubles ;
  2. filtrer le mélange obtenu pour en retirer la partie solide en faisant éventuellement suivre par une clarification ;
  3. neutraliser la partie liquide à l’aide d’au moins une résine échangeuse de cations en faisant éventuellement suivre par une filtration/clarification de la partie liquide ainsi neutralisée pour obtenir la substance biologiquement active en phase aqueuse ; et
  4. facultativement, conduire un traitement ultérieur de la phase aqueuse obtenue, choisi parmi une dilution dans l’eau, une concentration, une déshydratation et une lyophilisation pour obtenir une substance biologiquement active respectivement davantage diluée dans l’eau, en solution aqueuse davantage concentrée, déshydratée sous forme de poudre ou lyophilisée.
La ou les opérations de l’étape (b) peuvent conduire à éliminer les particules solides de taille supérieure à 1 µm.
La filtration/clarification éventuelle de l’étape (c) vise à éliminer les particules de résine échangeuse de cations qui pourraient subsister dans la phase aqueuse.
On peut utiliser un champignon choisi dans le groupe formé par les pleurotes, les coulemelles et les champignons de Paris, la poudre de champignon représentant notamment 5 à 15 % en poids de la solution aqueuse d’au moins une base.
Pour l’extraction alcaline, on peut utiliser de l’hydroxyde de sodium ou de l’hydroxyde de potassium comme base, et un borohydrure alcalin, tel que le borohydrure de sodium ou de potassium, comme agent réducteur, le ou les agents réducteurs étant utilisés notamment à raison de 0,05 à 1 g/100 mL de la solution aqueuse d’au moins une base ; et que, pour la neutralisation, on utilise au moins une résine échangeuse d’ions choisie parmi les résines à groupements sulfoniques, phosphore, carboxyméthyle, carboxyliques.
On peut conduire l’extraction alcaline en chauffant la solution aqueuse d’au moins une base, en présence d’au moins un agent réducteur, à une température de 25 à 100°C pendant au moins 2 heures sous agitation.
L’invention porte également sur une utilisation d’une substance biologiquement active telle que définie ci-dessus ou préparée par le procédé tel que défini ci-dessus, comme agent protecteur d’un tissu biologique à l’encontre d’une agression par au moins un agent exogène.
Le tissu biologique peut être un tissu végétal, le ou les agents exogènes peuvent être des champignons pathogènes, des bactéries, des virus, des insectes et/ou un agent agresseur physique tel que la pluie, le gel, la température et les stress environnementaux, et l’agent protecteur peut être un agent éliciteur/réparateur dudit tissu végétal, en particulier des plantes agronomiquement utiles ou ornementales, notamment pour un traitement préventif contre les maladies cryptogamiques et les maladies bactériennes, notamment celles choisies dans le groupe formé par les maladies de conservation des fruits, les maladies de la vigne, des arbres fruitiers, des cultures légumières et des céréales. A titre d’exemples de ces maladies cryptogamiques et bactériennes, on peut mentionner :
  • le mildiou (Plasmopara viticola) ;
  • l’oïdium (Erysiphe necator) ;
  • les maladies causées par Xanthomonas sp., par Pseudomonas syringae ;
  • le feu bactérien (Erwinia amylovora) ;
  • la pourriture grise (Botrytis cinerea) ;
  • le mildiou (Phytophthora infestans) de la pomme de terre ;
  • la rouille jaune (Septoria sp., Stagonospora nodorum) ;
  • la fusariose des épis (Fusarium graminearum) du blé et la tavelure du pommier (Venturia inaequalis) ;
  • les maladies de conservation des pommes (Penicillium expansum) ;
  • la moniliose (Monilia fructigena) ;
  • les Gloésporioses (Neofabrea sp., Glomerella sp., Nectria sp.).
L’invention porte également sur une composition de traitement protecteur d’un tissu végétal, caractérisée par le fait qu’elle consiste en la substance biologiquement active telle que définie ci-dessus ou préparée par le procédé tel que défini ci-dessus, obtenu en milieu aqueux notamment à une concentration de 8 à 140 g/L, le cas échéant diluée, le cas échéant concentrée ou déshydratée ou lyophilisée,
le cas échéant en combinaison avec au moins l’un parmi les agents de formulation compatibles, les agents anti-phytopathogènes, notamment choisis dans le groupe formé par les agents fongicides, les agents antibactériens, les agents antiviraux, les agents pesticides et les agents de biocontrôle, les éléments nutritifs pour les plantes, et les agents d’enrobage de fruits/légumes pour former une cire d’enrobage.
L’invention porte également sur un procédé de traitement protecteur d’un tissu végétal, caractérisé par le fait qu’il consiste à appliquer la composition telle que définie ci-dessus, lorsqu’elle est en phase aqueuse notamment avec la substance biologiquement active après dilution 50 à 400 fois par pulvérisation sur les parties aériennes des plantes, aux stades végétatifs précoces et/ou aux stades végétatifs adultes et reproducteurs, en une fois ou en plusieurs fois, par exemple jusqu’à 40 fois, à des intervalles de temps répétés, notamment tous les deux à trente jours, ou encore par trempage des produits récoltés, tels que fruits et légumes cueillis, dans ladite composition en phase aqueuse, ou encore par arrosage de racines, ou lorsqu’elle est sous forme d’une cire d’enrobage, par enrobage de fruits/légumes.
L’invention porte également sur une utilisation caractérisée par le fait que le tissu biologique est la peau humaine ou animale, le ou les agents exogènes étant des agents oxydants, des produits chimiques et/ou des agresseurs physiques et l’agent protecteur est un agent de traitement cosmétique de la peau, notamment d’une peau âgée comportant des rides à réduire ou d’une peau jeune ayant une souplesse et une élasticité à améliorer.
L’invention porte également sur une composition de traitement protecteur de la peau humaine ou animale, caractérisée par le fait qu’elle consiste en la substance biologiquement active telle que définie ci-dessus ou préparée par le procédé tel que défini ci-dessus, en milieu aqueux ou à l’état de poudre, en combinaison avec au moins un adjuvant cosmétique pour faciliter sa répartition sur la peau.
L’invention porte également sur un procédé de traitement protecteur de la peau humaine ou animale, caractérisé par le fait qu’il consiste à répartir par étalement ou pulvérisation la composition telle que définie ci-dessus, notamment sous forme de crème ou de solution sur la zone de peau à traiter pour obtenir sur la peau un effet protecteur à chaque application, notamment à raison de 0,005 à 100 g de substance biologiquement active pour 100 g de composition.
La substance biologique de l’invention dynamise le métabolisme dermique en augmentant la prolifération des fibroblastes et en favorisant la synthèse des constituants matriciels. Cette activité sur la matrice extracellulaire favorise l’élasticité de la peau et la production de collagène. Cette action contribue au lissage du microrelief de la peau et à estomper les rides.
Cette diminution du microrelief, cumulée avec l’activité de stimulation de synthèse de la matrice extracellulaire, contribue à l’obtention de l’effet tenseur observable avec la substance biologique de l’invention.
De plus, la substance biologique de l’invention a une activité protectrice grâce à son activité anti-oxydante. Elle permet de restaurer une partie du capital anti-oxydant et ainsi de limiter les dommages causés par les radicaux libres.
Du fait de ses propriétés sur la prolifération cellulaire, la synthèse de matrice extracellulaire et la protection contre les radicaux libres, la substance biologique de l’invention contribue donc à accélérer ce processus de réparation tissulaire.
Les Exemples suivants illustrent la présente invention sans toutefois en limiter la portée. Dans ces exemples, les pourcentages sont en poids sauf indication contraire.
Exemple 1 : Préparation d’un extrait de Pleurotus ostreatus sous forme lyophilisée
La matière première est constituée de champignons Pleurotus Ostreatus entiers récoltés en mars. 200 g de Pleurotes séchés et broyés (<10mm) sont dispersés dans 2L de soude à 2 %, en présence de borohydrure de sodium à 0,5 % (m/v). L'extraction est réalisée à 50°C pendant 8 heures, sous agitation mécanique.
Par filtration à 200µm, on élimine la fraction insoluble dans NaOH/NaBH4. Le filtrat obtenu est ensuite clarifié par filtrations en profondeur successives jusqu’à 1µm.
L’extrait clarifié ainsi obtenu est neutralisé par mise en contact avec une résine échangeuse de cations (Purolite C150H).
L’extrait neutralisé est clarifié par filtration à 1µm.
On obtient ainsi un extrait liquide clarifié, qui après lyophilisation permet de récupérer 53 g d'une poudre de couleur beige constituant l’extrait.
La composition de l’extrait obtenu est rapportée dans le Tableau 1 ci-après
Composés majoritaires dans l’extrait Pourcentages (% m/m)
Sucres totaux (7) 45,0
dont oses neutres (1) 29,2
dont β-glucanes (2) 13,6
dont glucosamine (3) 2,1
Protéines totales (4) 30,1
dont protéines > 3000 Da (5) 7,8
Matière minérale (6) 24,9
Mn (kDa) (8) 25kDa<<35kDa
pour >95% des composés organiques de l’extrait
  1. La quantité d’oses neutres est obtenue par dosage par la méthode phénol acide sulfurique, selon Dubois et al. (Dubois, Gille, Hamilton, Rebers, Smith, Colorimetric method for determination of sugars and relative substances, Analytical Chemistry 28, 350-356 (1956)).
  2. Les β-glucanes sont dosés par un kit d’analyse (K-YBGL 09/14, Megazyme).
  3. La quantification de la glucosamine est effectuée par dosage par le MBTH selon Smith et al. (Smith & Gilkerson : Quantitation of glycosaminoglycan hexosamine using 3-methyl-2-benzothiazolone hydrazone hydrochloride, Analytical Biochemistry 98, 478-480 (1979)).
  4. La quantité de protéines totales est évaluée avec un dosage d’azote par Kjeldahl dont la valeur obtenue est multipliée par 6,25.
  5. Les protéines > 3000 Da sont dosées par la méthode Bradford (Bradford, A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding, Analytical Biochemistry 72, 248-254 (1976)).
  6. La matière minérale est quantifiée à la suite d’une calcination à 650°C.
  7. La quantité de sucres totaux est calculée par différence avec la matière minérale et les protéines totales.
  8. Les tailles moléculaires moyennes sont déterminées par analyse en chromatographie d’exclusion stérique couplée à la diffusion de la lumière et la viscosimétrie.
Exemple 2 : Préparation d’un extrait de Pleurotus ostreatus en phase aqueuse
La matière première est constituée de champignons Pleurotus Ostreatus entiers récoltés en mai. 200 g de Pleurotes séchés et broyés (<10mm) sont dispersés dans 2L de soude à 2 %, en présence de borohydrure de sodium à 0,5 % (m/v). L’extraction est réalisée à 50°C pendant 8 heures, sous agitation mécanique.
Par filtration à 200µm, on élimine la fraction insoluble dans NaOH/NaBH4. Le filtrat obtenu est ensuite clarifié par filtrations en profondeur successives jusqu’à 1µm.
L’extrait clarifié ainsi obtenu est neutralisé par mise en contact avec une résine échangeuse de cations (Purolite C150H). L’extrait neutralisé est clarifié par filtration à 1µm. On obtient ainsi un extrait liquide clarifié contenant 34,7 g/L de matière sèche constituant l'extrait.
La composition de l’extrait obtenu est rapportée dans le Tableau 2 ci-après. Les résultats de composition sont la moyenne issue de 2 réplicas réalisés avec la même matière première.
Composés Pourcentages
Sucres totaux (7) 51,8 ± 2,7
dont oses neutres (1) 27,6 ± 1,3
dont β-glucanes (2) 15,8 ± 2,8
dont glucosamine (3) 1,6 ± 0,1
Protéines totales (4) 22,7 ± 3,6
dont protéines > 3000 Da (5) 7,1 ± 0,9
Matière minérale (6) 25,5± 0,9
Mn (kDa) (8) 25kDa<<35kDa
pour >95% des composés organiques de l’extrait
Exemple 3 : Stimulation des défenses naturelles des tomates avec l’extrait de l’Exemple 1
L’extrait de pleurote selon l’Exemple 1 a été testé sur des plantes pour évaluer l’induction des défenses de la plante dans le contexte de l’attaque par un pathogène après un traitement préventif par l’extrait de pleurote.
Le modèle utilisé est un modèle de plants de tomates cultivées sous serre à partir de semis réalisés dans du terreau horticole. Les plants sont âgés d’un mois au moment du traitement.
Ils subissent d’abord un pré-traitement consistant en 3 applications sous forme de pulvérisations foliaires du produit à tester. Ces applications sont réalisées à 2 jours d’intervalle et jusqu’à ruissellement. Puis 7 jours après la première application, le pathogène est inoculé sous forme d’une infiltration au niveau d’une feuille d’une suspension de spores de Botrytis cinerea, à raison de 100 000 conidies par mL d’une solution de Tween 80 à 0,05 %. Il s’agit d’une souche de Botrytis cinerea (référence UBOCC-A-101100) fournie par l’Université de Bretagne Occidentale.
A nouveau 7 jours plus tard, les plants sont récoltés, congelés dans l’azote liquide et conservés à -20 °C avant d’être analysés.
L’activité peroxydase a été évaluée selon le protocole décrit par J.S. Shindler, R. E. Childs, et W. G. Bardsley. Peroxidase from Human Cervical Mucus: The Isolation and Characterization. Eur. J. Biochem. 65, 325-331 (1976). Cette enzyme intervient dans la régulation du stress oxydatif et est classée parmi les PR protéines (Pathogenesis Related proteins).
Deux produits ont été appliqués sur les plants, à savoir :
  • BF : le blanc de formulation correspondant à une solution connue par l’homme du métier par exemple une composition constituée d’un tensio-actif associé à un conservateur, celui-ci est préparé dans l’eau distillée ;
  • Extrait de pleurote obtenu selon l’Exemple 1 (35 g matière sèche /L) dilué dans du BF.
Le Tableau 3 ci-après indique les activités peroxydase quantifiées chez des plants de tomate ayant subi un pré-traitement :
  • soit par le blanc de formulation ;
  • soit par l’extrait de pleurote (Exemple 1).
Les activités sont exprimées en % de l’activité mesurée pour le témoin (blanc de formulation BF). Les étoiles correspondent à des résultats significativement différents au seuil de 1 % (Test de Kruskal Wallis, moyenne, n=27). Les résultats sont la moyenne de 3 expériences indépendantes.
Activité de stimulation des défenses naturelles sur tomate Peroxydase (% d’activité)
Blanc de formulation 100
Extrait de pleurote formulé 161,9**
Les résultats montrés sur le Tableau 3, attestent, d’un effet de l’extrait de pleurote sur le marqueur peroxydase d’une amplitude de + 61,9 % par rapport au témoin.
Ainsi, les plants ayant subi un pré-traitement par l’extrait de pleurote ont des défenses stimulées leur permettant de mieux résister aux attaques par les pathogènes.
Exemple 4 : Efficacité de l'extrait de pleurote de l’Exemple 2 sur la réduction des symptômes liés au mildiou ( Plasmopara viticola ) sur la vigne au cours d'un essai plein champ
Un essai plein champ a été conduit sur la vigne (Vitis vinifera), cépage Merlot, au cours de l'année 2018 dans le Sud-Ouest de la France, en vue de déterminer l'efficacité de l'extrait de pleurote de l’Exemple 2 en protection vis-à-vis du mildiou (Plasmopara viticola), seul ou en programme avec la bouillie bordelaise BBRSR Dispers NC (UPL EUROPE LTD ; 750 g Cu/ha). Sur la parcelle expérimentale, 4 micro-parcelles par condition de traitement ont été réparties statistiquement.
Les traitements ont été réalisés entre le 26/04/18 et le 14/06/18 avec un volume de pulvérisation allant de 200 à 300 L/ha en fonction de l’augmentation de la surface foliaire. Le témoin non traité reçoit des pulvérisations d’eau ; le traitement par la bouillie bordelaise consiste à appliquer à partir de la floraison la dose équivalente à 750 g Cu/ha (Tableau 4 ci-après). L'extrait de pleurote obtenu selon l’Exemple 2 est appliqué sous forme de solution aqueuse formulée avec un tensio-actif et un conservateur, l’extrait est utilisé à une dose de 35 g/ha, soit seul, soit en programme avec de la bouillie bordelaise. Un témoin partiel de bouillie bordelaise seule est également testé afin de voir l’apport de l’extrait de pleurote dans un tel programme.
Le Tableau 4 ci-après montre le calendrier de traitement pour les différentes modalités.
Traitement No. Traitement A
Dose
kg ou L /ha		 B
Dose
kg ou L /ha		 C
Dose
kg ou L /ha		 D
Dose
kg ou L /ha		 E
Dose
kg ou L /ha		 F
Dose
kg ou L /ha		 G
Dose
kg ou L /ha		 H
Dose
kg ou L /ha
Stade application BBCH 14 BBCH 53 BBCH 55 BBCH 57 BBCH 57 BBCH 57 BBCH 65 BBCH 71
Volume de pulvérisation 200 L/ha 250 L/ha 250 L/ha 300 L/ha 300 L/ha 300 L/ha 300 L/ha 300 L/ha
1 Non traité
(eau)		 - - - - - - - -
2 Ple 1 1 1 1 1 1 1 1
3 BBRSR DISPERSS 3,75 3,75 3,75
4
 Ple 1 1 1 1 1
BBRSR DISPERSS 3,75 3,75 3,75
BBRSR  : bouillie bordelaise ;
Ple  : extrait de pleurote ;
-  : traitement à l’eau.
du dessin annexé montre l’intensité de maladie (%) sur des grappes de vignes attaquées par du mildiou après traitement (ou non) par l'extrait de pleurote, ainsi qu'en programme avec de la bouillie bordelaise (extrait pleurote/BBRSR). Les notations présentées sur la Figure 1 ont été réalisées le 13 juin au stade BBCH 71. L’intensité des attaques est estimée par la surface des grappes attaquées par la maladie.
L'extrait de pleurote (Ple) seul permet donc une réduction des symptômes d'attaque par le mildiou de l’ordre de 78% par rapport au témoin traité à l’eau. En programme avec la bouillie bordelaise l’apport d’efficacité de l’extrait de pleurote est de 68% par rapport au témoin partiel de bouillie bordelaise seule. Ce programme Ple/BBRSR permet d’obtenir une efficacité de 78% sur la réduction des symptômes provoqués par le mildiou de la vigne.
Exemple 5 : Efficacité de l'extrait de pleurote de l’Exemple 2 sur la réduction des symptômes liés au mildiou ( Plasmopara viticola ) sur la vigne au cours d'un essai plein champ
Un essai plein champ a été conduit sur la vigne (Vitis vinifera), cépage Melon, au cours de l'année 2018 dans le Nord-Ouest de la France, en vue de déterminer l'efficacité de l'extrait de pleurote de l’Exemple 2 en protection vis-à-vis du mildiou (Plasmopara viticola), seul ou en programme avec une couverture chimique (Tableau 5 de traitements ci-après). Sur la parcelle expérimentale, 4 micro-parcelles par condition de traitement ont été réparties statistiquement.
Les traitements ont été réalisés entre le 26/04/18 et le 27/07/18 avec un volume de pulvérisation allant de 130 à 200 L/ha en fonction de l’augmentation de la surface foliaire. Le témoin non traité ne reçoit aucune pulvérisation ; le traitement par la couverture chimique consiste à appliquer 3 types de produits conventionnels à partir du stade BBCH 14 (Tableau 5 ci-après). L'extrait de pleurote obtenu selon l’exemple 2 est appliqué sous forme de solution aqueuse formulée avec un tensio-actif et un conservateur, l’extrait est utilisé à une dose de 35 g/ha, soit seul, soit en programme avec des produits conventionnels et en comparaison avec un programme conventionnel complet.
Le Tableau 5 montre le calendrier de traitement pour les différentes modalités.
Figure pctxmlib-appb-T000001
Ple : extrait de pleurote (35 g/L) ;
LBG01F34  : Phosphonates de potassium (730 g/L) ;
Polyram DF  : Metiram (700 g/kg) ;
Mikal Flash  : Fosetyl / Folpet (500/250 g/kg) ;
Dithane Neotec : Mancozeb (750 g/kg).
du dessin annexé montre l’intensité de maladie (%) sur des grappes de vignes attaquées par du mildiou, après traitement (ou non) par l'extrait de pleurote, ainsi qu'en programme avec une couverture conventionnelle (extrait pleurote/Conv). Les notations présentées sur la Figure 2 ont été réalisées le 24 juillet 2018 au stade BBCH 79. L’intensité des attaques est estimée par la surface des grappes attaquées par la maladie.
L'extrait de pleurote (Ple) seul permet donc une réduction des symptômes d'attaque par le mildiou de l’ordre de 48% par rapport au témoin non traité. Le remplacement de 2 applications de 2 produits chimiques (LBG 01F34 et Polyram DF) par 3 applications d’extrait de pleurote formulé avant la floraison permet d’obtenir des niveaux de protection statistiquement équivalents à la couverture conventionnelle totale (Conventionnel). Ce programme Ple/Conv permet d’obtenir une efficacité de 84% sur la réduction des symptômes provoqués par le mildiou de la vigne.
Exemple 6 : Efficacité de l'extrait de pleurote de l’Exemple 2 sur la réduction des symptômes liés à la septoriose ( Septoria tritici ) du blé au cours d'un essai plein champ
Un essai plein champ a été conduit sur du blé tendre (Triticum aestivum), variété Advisor au cours de l'année 2018 dans le Nord-Ouest de la France, en vue de déterminer l'efficacité de l'extrait de pleurote de l’Exemple 2 en protection vis-à-vis de la septoriose du blé tendre (Septoria tritici), seul ou en programme avec une couverture chimique (Cf Tableau 6 de traitements). Sur la parcelle expérimentale, 5 micro-parcelles par condition de traitement ont été réparties statistiquement.
Les traitements ont été réalisés entre le 22/03/18 et le 03/05/18 avec un volume de pulvérisation de 200 L/ha. Le témoin non traité reçoit des pulvérisations avec de l’eau ; le traitement par la couverture chimique consiste à appliquer 2 types de produits conventionnels à partir du stade BBCH 29 (Tableau 6). L'extrait de pleurote obtenu selon l’Exemple 2 est appliqué sous forme de solution aqueuse formulée avec un tensio-actif et un conservateur, l’extrait est utilisé à une dose de 35 g/ha, soit seul, soit en programme avec des produits conventionnels et en comparaison avec un programme conventionnel complet.
Le Tableau 6 ci-après montre le calendrier de traitement pour les différentes modalités.
Trt No. Traitement T0
Dose
kg ou L /ha		 T1
Dose
kg ou L /ha		 T2
Dose
kg ou L /ha
Stade application BBCH 29 32 39
Volume de pulvérisation 200 L/ha 200 L/ha 200 L/ha
1 Non traité
(eau)		 - - -
2 CHEROKEE 2
ADEXAR 2
3 COV17-01 1 1 1
4 COV17-01 1 1
ADEXAR 2
Ple : extrait de pleurote (35 g/L) formulé ;
CHEROKEE : Propiconazole / Cyproconazole / Chlorothalonil (62,5/50/375 g/L) ;
ADEXAR : Epoxiconazole / Fluxapyroxad (62,5/62,5 g/L) ;
- : traitement à l’eau.
du dessin annexé montre l’intensité de maladie (%) sur la feuille F1 de blé tendre attaquée par la septoriose après traitement (ou non) par l'extrait de pleurote, ainsi qu'en programme avec une couverture conventionnelle (Ple/Conv). Les notations présentées sur la Figure 3 ont été réalisées le 18 juin 2018 au stade BBCH 75. L’intensité des attaques est estimée par la surface des feuilles attaquées par la maladie.
L'extrait de pleurote (Ple) seul permet donc une réduction des symptômes d'attaque par la septoriose de l’ordre de 50% par rapport au témoin traité à l’eau. Le remplacement d’une application de produit chimique (Cherokee) par 2 applications d’extrait de pleurote formulé permet d’obtenir des niveaux de protection statistiquement équivalents à la couverture conventionnelle totale (Conventionnel). Ce programme Ple/Conv permet d’obtenir une efficacité de 95,5% sur la réduction des symptômes provoqués par la septoriose du blé.
Exemple 7 : Activité anti-oxydante des extraits des Exemples 1 et 2
Principe :
L’évaluation de l’activité anti-oxydante a été réalisée par la méthode ORAC (Oxygen Radical Antioxidant Capacity). Elle consiste à mesurer la protection exercée par une molécule donnée contre l’oxydation de la fluorescéine (CAS 518-47-8) par un radical libre stable, l’AAPH dichlorhydrate de (2,2'-azobis (2-amidino-propane)) (CAS 2997-92-4).
Les résultats, rapportés dans le Tableau 7 ci-après, sont exprimés par rapport à la protection exercée par un anti-oxydant de référence, le Trolox (CAS 53188-07-1).
Gamme étalon : Solution-mère de Trolox à 0,002M (25 mg dans 50 ml de tampon phosphate).
Dilution des échantillons : réalisées dans le tampon phosphate à pH 7,4.
Espèce Activité en µmol équivalent Trolox/g
Extrait selon l’exemple 1 179 ± 9
Extrait selon l’exemple 2 144 ± 7
On constate que la réalisation de l’extrait selon l’invention permet d’obtenir une activité anti-oxydante.
Exemple 8 : Evaluation de l’impact de l’extrait de l’Exemple 1 sur la prolifération fibroblastique
L’objectif est d’évaluer l’impact de l’extrait de pleurote obtenu selon l’Exemple 1 sur la réparation tissulaire au niveau de la peau. Cette évaluation se fait en comparaison avec un témoin non traité.
L’extrait de pleurote sec, obtenu selon l’Exemple 1, est dilué dans le milieu de culture DMEM Glutamax afin d’obtenir une solution-mère de traitement à 1 mg/mL qui est ensuite filtrée à 0,2 µm pour éliminer toute contamination par des micro-organismes.
Le protocole opératoire est le suivant :
Les cultures primaires de fibroblastes de peau humaine de 44 ans (PAF 08052) sont ensemencées dans des microplaques à 48 puits à raison de 10 000 cellules par puits avec un volume de milieu de culture (DMEM glutamax) de 500 µL. Les cellules adhèrent au fond des puits pendant 24 heures. Le milieu de culture est ensuite remplacé par l’extrait obtenu selon l’Exemple 1 dilué dans du milieu de culture puis filtré, et un témoin sans traitement sera réalisé (DMEM glutamax). Plusieurs concentrations seront testées à raison de 500 µL par puits et incubées 48 heures à 37°C dans une atmosphère contenant 5% en volume de CO2. Les cellules sont ensuite décollées à la trypsine, puis comptées sur lame de Malassez. Les analyses sont réalisées sur 6 réplicats.
Les résultats, indiqués dans le Tableau 8 ci-après, sont exprimés en pourcentages de prolifération par rapport au témoin non traité. Une analyse statistique par test de Wilcoxon-Mann-Withney est réalisée sur les résultats afin de déterminer la significativité des valeurs. Les étoiles de significativité indiquent le degré de significativité soit * p<0,05 ; *** p <0,001.
Concentration extrait Pourcentage de prolifération
Témoin non traité 100,0
50 µg/mL 133,5 ***
200 µg/mL 127,5 *
250 µg/mL 161,9 ***
450 µg/mL 125,0 *
650 µg/mL 133,3 *
750 µg/mL 133,3 *
900 µg/mL 137,5 *
On constate que l’extrait obtenu selon l’Exemple 1 favorise la prolifération des fibroblastes de façon significative par rapport au témoin non traité, et donc la réparation tissulaire avec une meilleure activité à 250 µg/mL.
Exemple 9 : Evaluation de l’impact de l’extrait de l’Exemple 1 sur la prolifération kératinocytaire
L’objectif est d’évaluer l’impact de l’extrait de pleurote obtenu selon l’Exemple 1 sur la réparation de l’épiderme. Cette évaluation se fait en comparaison avec un témoin non traité.
L’extrait de pleurote selon l’Exemple 1 est dilué dans le milieu de culture KGM Gold afin d’obtenir une solution-mère de traitement à 1 mg/mL qui est ensuite filtrée à 0,2 µm pour éliminer toute contamination par des micro-organismes.
Le protocole opératoire est le suivant :
Les cultures primaires de kératinocytes (NHEK 33228) de peau humaine (patient âgé de 43 ans) sont ensemencées dans des microplaques à 48 puits à raison de 10 000 cellules par puits avec un volume de milieu de culture KGM Gold de 500 µL. Les cellules adhèrent au fond des puits pendant 48 heures. Le milieu de culture est ensuite remplacé par l’extrait obtenu selon l’Exemple 1 dilué dans du milieu de culture et filtré ; de plus, un témoin sans traitement (uniquement milieu de culture) sera réalisé. Plusieurs concentrations seront testées à raison de 500 µL par puits et incubées 48 heures à 37°C dans une atmosphère enrichie par 5% en volume de CO2. Les tests sont réalisés en triplicats. Les cellules sont ensuite décollées à la Trypsine-EDTA puis comptées sur lame de Malassez.
Les résultats, indiqués dans le Tableau 9 ci-après, sont exprimés en pourcentages par rapport au témoin non traité. Une analyse statistique par test de Wilcoxon-Mann-Withney est réalisée sur les résultats afin de déterminer la significativité des valeurs. Les étoiles de significativité indiquent le degré de significativité soit * p<0,05 ; ** p <0,01.
Concentration extrait Pourcentage de prolifération
Témoin non traité 100,0
50 µg/mL 90,0
100 µg/mL 140,0 *
300 µg/mL 150,0 **
750 µg/mL 160,0 *
On constate que l’extrait selon l’Exemple 1 favorise la prolifération des kératinocytes de façon significative par rapport au témoin non traité à partir de 100 µg/mL avec une plus forte activité à 750 µg/mL.
Exemple 10 : Comparaison de l’activité peroxydase sur tomate après traitement par les extraits selon le brevet WO 2018/069497 et selon l’Exemple 1
On a montré la stimulation des défenses chez la tomate par les différents extraits de pleurote en présence de Botrytis cinerea :
  • le premier extrait (Extrait 1) correspond à l’extrait obtenu selon le brevet WO 2018/069497 à partir de Pleurotus ostreatus ;
  • le second extrait (Extrait 2) est obtenu selon le procédé décrit dans l’Exemple 1 à partir de Pleurotus ostreatus ;
  • les deux extraits sont testés dans un même essai en comparaison avec les co-formulants seuls (Blanc de formulation) et un témoin contenant uniquement de l’eau distillée (ED) ;
  • le modèle utilisé est un modèle de plants de tomates Marmande cultivés sous serre à partir de semis réalisés dans du terreau horticole. Les plants sont âgés d’un mois au moment du traitement.
A t=0, les plantes subissent un traitement par pulvérisation foliaire du produit à tester (une pulvérisation jusqu’à ruissellement d’une solution aqueuse). L’opération est renouvelée à t=2 jours et t=5 jours. Les témoins sont traités par le blanc de formulation ou de l’eau distillée.
A t=7 jours après la première application, le pathogène est inoculé au niveau d’une feuille par infiltration d’une suspension de spores de Botrytis cinerea, à raison de 100 000 conidies par mL d’une solution de Tween 80 à 0,05 %. Il s’agit d’une souche de Botrytis cinerea (référence UBOCC-A-101100) fournie par l’Université de Bretagne Occidentale.
A t=14 jours, les feuilles traitées, différentes de celles inoculées, sont récoltées en prélevant des disques foliaires sur chaque plante. Ces derniers sont congelés dans l’azote liquide et conservés à -20 °C avant d’être analysés.
L’activité peroxydase a été évaluée selon le protocole décrit par J.S. Shindler, R. E. Childs, et W. G. Bardsley. Peroxidase from Human Cervical Mucus: The Isolation and Characterization. Eur. J. Biochem.65, 325-331 (1976). Cette enzyme intervient dans la régulation du stress oxydatif et est classée parmi les PR protéines (Pathogenesis Related proteins).
Les activités enzymatiques spécifiques sont exprimées en % de l’activité mesurée pour le témoin (eau distillée ED).
Le Tableau 10 indique l’activité peroxydase extraite des plants de tomates traités par trois pulvérisations avec :
  • l’extrait de pleurote 1 (35 g matière sèche /L) dilué dans du BF ;
  • l’extrait de pleurote 2(35 g matière sèche /L) dilué dans du BF ;
  • l’eau distillée (témoin) ; ou
  • le blanc de formulation ;
puis inoculés par Botrytis cinerea.
Traitement Activité peroxydase (% du témoin ED)
Eau distillée 100 ± 22,76
Blanc de formulation 118 ± 21,02
Extrait 1 132 ± 25,90
Extrait 2 (invention) 195 ± 25,07
Le traitement par le blanc de formulation n’induit pas d’augmentation significative de l’activité de la peroxydase sur les plants de tomates dans ces conditions de traitement. Il en est de même pour l’extrait de pleurote 1 bien que l’activité moyenne soit supérieure à celle du témoin et du blanc de formulation. En revanche, une forte stimulation de l’activité enzymatique peroxydase est observée à la suite du prétraitement des plants de tomate par l’extrait de pleurote 2 ; l’augmentation de l’activité par rapport au témoin est significative (x 1,9) selon le test statistique Kruskal Wallis, ainsi que par rapport au traitement par l’extrait 1 (x 1,48).

Claims (15)

  1. Substance biologiquement active obtenue ou susceptible d’être obtenue par :
    - extraction alcaline, par une solution aqueuse d’au moins une base en présence d’au moins un agent réducteur, d’au moins un champignon comestible macroscopique réduit en poudre, pour obtenir un mélange ayant une partie liquide contenant les matières extraites solubles et une partie solide formée de particules solides insolubles ;
    - filtration du mélange obtenu pour en retirer la partie solide et clarification éventuelle de la partie liquide ;
    - neutralisation de la partie liquide à l’aide d’au moins une résine échangeuse de cations et filtration/clarification éventuelle de la partie liquide ainsi neutralisée pour obtenir la substance biologiquement active en phase aqueuse ; et
    - traitement de la phase aqueuse obtenue choisi parmi une dilution dans l’eau, une concentration, une déshydratation et une lyophilisation pour obtenir une substance biologiquement active respectivement davantage diluée dans l’eau, en solution aqueuse davantage concentrée, déshydratée sous forme de poudre ou lyophilisée.
  2. Substance biologiquement active selon la revendication 1, caractérisée par le fait que le ou les champignons soumis à l’extraction sont choisis dans le groupe formé par les pleurotes, les coulemelles et les champignons de Paris.
  3. Substance biologiquement active selon l’une des revendications 1 et 2, caractérisée par le fait que la base est choisie parmi les bases hydroxylées, telles que l’hydroxyde de sodium et l’hydroxyde de potassium ; le ou les agents réducteurs sont choisis parmi les borohydrures alcalins, tels que le borohydrure de sodium ou de potassium ; et la résine échangeuse de cations est choisie parmi les résines à groupements sulfoniques, phosphore, carboxyméthyle, carboxyliques.
  4. Substance biologiquement active selon l’une des revendications 1 à 3, caractérisée par le fait qu’elle comporte, pour 100 parties en poids de matière sèche :
    - 30 à 75 parties en poids de sucres totaux, dont :
    - 9 à 25 parties en poids de β-glucanes ; et
    - 0,8 à 2,4 parties en poids de glucosamine et/ou de glucosamine acétylée ;
    - 7 à 36 parties en poids de peptides totaux/protéines totales ;
    - le complément étant constitué par des matières minérales,
    80 à 100 % des composés organiques ayant notamment une masse en fonction de la taille moléculaire moyenne comprise entre 20 et 45 kDa.
  5. Procédé de fabrication d’une substance biologiquement active, caractérisé par le fait qu’il comporte les étapes successives suivantes consistant à :
    (a) conduire une extraction alcaline, par une solution aqueuse d’au moins une base en présence d’au moins un agent réducteur, d’au moins un champignon comestible macroscopique réduit en poudre, pour obtenir un mélange ayant une partie liquide contenant les matières extraites solubles et une partie solide formée de particules solides insolubles ;
    (b) filtrer le mélange obtenu pour en retirer la partie solide en faisant éventuellement suivre par une clarification ;
    (c) neutraliser la partie liquide à l’aide d’au moins un résine échangeuse de cations en faisant éventuellement suivre par une filtration/clarification de la partie liquide ainsi neutralisée pour obtenir la substance biologiquement active en phase aqueuse ; et
    (d) facultativement, conduire un traitement ultérieur de la phase aqueuse obtenue, choisi parmi une dilution dans l’eau, une concentration, une déshydratation et une lyophilisation pour obtenir une substance biologiquement active respectivement davantage diluée dans l’eau, en solution aqueuse davantage concentrée, déshydratée sous forme de poudre ou lyophilisée.
  6. Procédé selon la revendication 5, caractérisé par le fait que l’on utilise un champignon choisi dans le groupe formé par les pleurotes, les coulemelles et les champignons de Paris, la poudre de champignon représentant notamment 5 à 15 % en poids de la solution aqueuse d’au moins une base.
  7. Procédé selon l’une des revendications 5 et 6, caractérisé par le fait que, pour l’extraction alcaline, on utilise de l’hydroxyde de sodium ou de l’hydroxyde de potassium comme base, et un borohydrure alcalin, tel que le borohydrure de sodium ou de potassium, comme agent réducteur, le ou les agents réducteurs étant utilisés notamment à raison de 0,05 à 1 g/100 mL de la solution aqueuse d’au moins une base ; et que, pour la neutralisation, on utilise au moins une résine échangeuse d’ions choisie parmi les résines à groupements sulfoniques, phosphore, carboxyméthyle, carboxyliques.
  8. Procédé selon l’une des revendications 5 à 7, caractérisé par le fait que l’on conduit l’extraction alcaline en chauffant la solution aqueuse d’au moins une base, en présence d’au moins un agent réducteur, à une température de 25 à 100°C pendant au moins 2 heures sous agitation.
  9. Utilisation d’une substance biologiquement active telle que définie à l’une des revendications 1 à 4 ou préparée par le procédé tel que défini à l’une des revendications 5 à 8, comme agent protecteur d’un tissu biologique à l’encontre d’une agression par au moins un agent exogène.
  10. Utilisation selon la revendication 9, caractérisée par le fait que le tissu biologique est un tissu végétal, le ou les agents exogènes sont des champignons pathogènes, des bactéries, des virus, des insectes et/ou un agent agresseur physique, tel que la pluie, le gel, la température et les stress environnementaux, et l’agent protecteur est un agent éliciteur/réparateur dudit tissu végétal, en particulier des plantes agronomiquement utiles ou ornementales, notamment pour un traitement préventif contre les maladies cryptogamiques et les maladies bactériennes, notamment celles choisies dans le groupe formé par les maladies de conservation des fruits, les maladies de la vigne, des arbres fruitiers, des cultures légumières et des céréales, et notamment contre le mildiou (Plasmopara viticola), l’oïdium (Erysiphe necator), les maladies causées par Xanthomonas sp., par Pseudomonas syringae, le feu bactérien (Erwinia amylovora), la pourriture grise (Botrytis cinerea), le mildiou (Phytophthora infestans) de la pomme de terre, la rouille jaune (Septoria sp., Stagonospora nodorum), la fusariose des épis (Fusarium graminearum) du blé et la tavelure du pommier (Venturia inaequalis), les maladies de conservation des pommes (Penicillium expansum), la moniliose (Monilia fructigena), les Gloésporioses (Neofabrea sp., Glomerella sp., Nectria sp.).
  11. Composition de traitement protecteur d’un tissu végétal, caractérisée par le fait qu’elle consiste en la substance biologiquement active telle que définie à l’une des revendications 1 à 4 ou préparée par le procédé tel que défini à l’une des revendications 5 à 8, obtenu en milieu aqueux notamment à une concentration de 8 à 140 g/L, le cas échéant diluée, le cas échéant concentrée ou déshydratée ou lyophilisée,
    le cas échéant en combinaison avec au moins l’un parmi les agents de formulation compatibles, les agents anti-phytopathogènes, notamment choisis dans le groupe formé par les agents fongicides, les agents antibactériens, les agents antiviraux, les agents pesticides et les agents de biocontrôle, les éléments nutritifs pour les plantes, et les agents d’enrobage de fruits/légumes pour former une cire d’enrobage.
  12. Procédé de traitement protecteur d’un tissu végétal, caractérisé par le fait qu’il consiste à appliquer la composition telle que définie à la revendication 11, lorsqu’elle est en phase aqueuse notamment avec la substance biologiquement active après dilution 50 à 400 fois par pulvérisation sur les parties aériennes des plantes, aux stades végétatifs précoces et/ou aux stades végétatifs adultes et reproducteurs, en une fois ou en plusieurs fois, par exemple jusqu’à 40 fois, à des intervalles de temps répétés, notamment tous les deux à trente jours, ou encore par trempage des produits récoltés, tels que fruits et légumes cueillis, dans ladite composition en phase aqueuse, ou encore par arrosage de racines, ou lorsqu’elle est sous forme d’une cire d’enrobage, par enrobage de fruits/légumes.
  13. Utilisation selon la revendication 9, caractérisée par le fait que le tissu biologique est la peau humaine ou animale, le ou les agents exogènes étant des agents oxydants, des produits chimiques et/ou des agresseurs physiques et l’agent protecteur est un agent de traitement cosmétique de la peau, notamment d’une peau âgée comportant des rides à réduire ou d’une peau jeune ayant une souplesse et une élasticité à améliorer.
  14. Composition de traitement protecteur de la peau humaine ou animale, caractérisée par le fait qu’elle consiste en la substance biologiquement active telle que définie à l’une des revendications 1 à 4 ou préparée par le procédé tel que défini à l’une des revendications 5 à 8, en milieu aqueux ou à l’état de poudre, en combinaison avec au moins un adjuvant cosmétique pour faciliter sa répartition sur la peau.
  15. Procédé de traitement protecteur de la peau humaine ou animale, caractérisé par le fait qu’il consiste à répartir par étalement ou pulvérisation la composition telle que définie à la revendication 14, notamment sous forme de crème ou de solution, sur la zone de peau à traiter pour obtenir sur la peau un effet protecteur à chaque application, notamment à raison de 0,005 à 100 g de substance biologiquement active pour 100 g de composition.
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Citations (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1078094A (zh) * 1993-03-20 1993-11-10 辽宁省出口食用菌研究所 食用菌制备防治植物病毒的农药及工艺
WO1998049331A1 (fr) * 1997-04-29 1998-11-05 Mogen International N.V. Composition antifongique contenant beta-(1,6)-glucanase et hotes comprenant celle-ci
FR2766059A1 (fr) * 1997-07-18 1999-01-22 Goemar Lab Sa Procede pour la stimulation des defenses naturelles de plantes agronomiquement utiles et composition pour la mise en oeuvre de ce procede
CN1345540A (zh) * 2001-08-15 2002-04-24 中国科学院生态环境研究中心 一种真菌子实体提取物用于诱导植物抗病性
EP1690914A1 (fr) * 2003-09-10 2006-08-16 Shiseido Co., Ltd. Antioxydant, agent de blanchiment et preparation pour le soin de la peau a usage externe contenant ces composes
KR20110088907A (ko) * 2010-01-29 2011-08-04 프롬네이처(주) 큰갓버섯 균사체 또는 자실체의 추출물을 유효성분으로 함유하는 항노화 및 피부 주름개선용 조성물
KR20110088915A (ko) * 2010-01-29 2011-08-04 프롬네이처(주) 양송이 균사체 또는 자실체의 추출물을 유효성분으로 함유하는 항노화 및 피부 주름개선용 조성물
WO2011099665A1 (fr) * 2010-02-12 2011-08-18 주식회사 케이씨아이 Composition antimicrobienne contenant des extraits d'ingrédients naturels, antiseptique naturel composite et procédé de fabrication associé
WO2011112179A1 (fr) * 2010-03-08 2011-09-15 Elc Management Llc Compositions et méthodes de traitement de la peau
KR20120131065A (ko) * 2011-05-24 2012-12-04 한국생명공학연구원 아위느타리버섯 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 노화 예방 또는 개선용 조성물
KR20140081982A (ko) * 2012-12-21 2014-07-02 주식회사 뉴메디온 만가닥버섯 자실체 추출물 또는 만가닥버섯 균사체 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물
KR20160097854A (ko) * 2015-02-10 2016-08-18 김선태 해송이버섯 추출물을 이용한 주름개선 및 피부 처짐 개선용 화장료 조성물
CN107913203A (zh) * 2017-12-08 2018-04-17 广东迪美新材料科技有限公司 一种银耳保湿抗皱剂及其制备方法和应用
WO2018069497A1 (fr) 2016-10-14 2018-04-19 Universite De Limoges Procédé d'élicitation d'une plante au moyen d'extraits de champignons macroscopiques comestibles

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100484915C (zh) * 2003-03-21 2009-05-06 浙江大德药业集团有限公司 鲜益母草提取益母草总碱工艺及益母草总碱制剂
CN103044566B (zh) * 2013-01-04 2015-07-01 合肥工业大学 一种竹荪水提残渣中抗氧化剂多糖的制备方法

Patent Citations (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1078094A (zh) * 1993-03-20 1993-11-10 辽宁省出口食用菌研究所 食用菌制备防治植物病毒的农药及工艺
WO1998049331A1 (fr) * 1997-04-29 1998-11-05 Mogen International N.V. Composition antifongique contenant beta-(1,6)-glucanase et hotes comprenant celle-ci
FR2766059A1 (fr) * 1997-07-18 1999-01-22 Goemar Lab Sa Procede pour la stimulation des defenses naturelles de plantes agronomiquement utiles et composition pour la mise en oeuvre de ce procede
CN1345540A (zh) * 2001-08-15 2002-04-24 中国科学院生态环境研究中心 一种真菌子实体提取物用于诱导植物抗病性
EP1690914A1 (fr) * 2003-09-10 2006-08-16 Shiseido Co., Ltd. Antioxydant, agent de blanchiment et preparation pour le soin de la peau a usage externe contenant ces composes
KR20110088915A (ko) * 2010-01-29 2011-08-04 프롬네이처(주) 양송이 균사체 또는 자실체의 추출물을 유효성분으로 함유하는 항노화 및 피부 주름개선용 조성물
KR20110088907A (ko) * 2010-01-29 2011-08-04 프롬네이처(주) 큰갓버섯 균사체 또는 자실체의 추출물을 유효성분으로 함유하는 항노화 및 피부 주름개선용 조성물
WO2011099665A1 (fr) * 2010-02-12 2011-08-18 주식회사 케이씨아이 Composition antimicrobienne contenant des extraits d'ingrédients naturels, antiseptique naturel composite et procédé de fabrication associé
WO2011112179A1 (fr) * 2010-03-08 2011-09-15 Elc Management Llc Compositions et méthodes de traitement de la peau
KR20120131065A (ko) * 2011-05-24 2012-12-04 한국생명공학연구원 아위느타리버섯 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 노화 예방 또는 개선용 조성물
KR20140081982A (ko) * 2012-12-21 2014-07-02 주식회사 뉴메디온 만가닥버섯 자실체 추출물 또는 만가닥버섯 균사체 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물
KR20160097854A (ko) * 2015-02-10 2016-08-18 김선태 해송이버섯 추출물을 이용한 주름개선 및 피부 처짐 개선용 화장료 조성물
WO2018069497A1 (fr) 2016-10-14 2018-04-19 Universite De Limoges Procédé d'élicitation d'une plante au moyen d'extraits de champignons macroscopiques comestibles
CN107913203A (zh) * 2017-12-08 2018-04-17 广东迪美新材料科技有限公司 一种银耳保湿抗皱剂及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BRADFORD: "A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding", ANALYTICAL BIOCHEMISTRY, vol. 72, 1976, pages 248 - 254, XP025650297, DOI: 10.1016/0003-2697(76)90527-3
DATABASE WPI Week 201157, Derwent World Patents Index; AN 2011-K73906, XP002794700 *
DUBOISGILLEHAMILTONREBERSSMITH: "Colo-rimetric method for détermination of sugars and relative substances", ANALYTICAL CHEMISTRY, vol. 28, 1956, pages 350 - 356
J.S. SHINDLERR. E. CHILDSW. G. BARDSLEY: "Peroxidase from Human Cervical Mucus: The Isolation and Characterization", EUR. J. BIOCHEM., vol. 65, 1976, pages 325 - 331
LI SHANGSHANG ET AL: "Purification,in vitroantioxidant andin vivoanti-aging activities of soluble polysaccharides by enzyme-assisted extraction fromAgaricus bisporus", INTERNATIONAL JOURNAL OF BIOLOGICAL MACROMOLECULES, ELSEVIER BV, NL, vol. 109, 21 December 2017 (2017-12-21), pages 457 - 466, XP085346851, ISSN: 0141-8130, DOI: 10.1016/J.IJBIOMAC.2017.12.108 *
NG TZI BUN: "Mushroom proteins related to host defense", BIOSIS, BIOSCIENCES INFORMATION SERVICE, PHILADELPHIA, PA, US, 1 January 2005 (2005-01-01), XP002769700, DOI: 10.1615/INTJMEDMUSHR.V7.I12.210 *
SMITHGILKERSON: "Quantitation of glycosaminoglycan hexosamine using 3-methyl-2-benzothiazolone hydrazone hydrochloride", ANALYTICAL BIOCHEMISTRY, vol. 98, 1979, pages 478 - 480, XP024829521, DOI: 10.1016/0003-2697(79)90170-2

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