WO2021014265A1 - Composition destinée à être appliquée sur une barrière biologique externe et son utilisation en dermo-cosmétique et pour le traitement des plantes - Google Patents

Composition destinée à être appliquée sur une barrière biologique externe et son utilisation en dermo-cosmétique et pour le traitement des plantes Download PDF

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WO2021014265A1
WO2021014265A1 PCT/IB2020/056501 IB2020056501W WO2021014265A1 WO 2021014265 A1 WO2021014265 A1 WO 2021014265A1 IB 2020056501 W IB2020056501 W IB 2020056501W WO 2021014265 A1 WO2021014265 A1 WO 2021014265A1
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WO
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composition
aqueous phase
extract
biological barrier
component
Prior art date
Application number
PCT/IB2020/056501
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English (en)
Inventor
Céline Faugeron-Girard
Vincent Gloaguen
Agnès SMITH
Youssef El Hafiane
Charlotte MOINE
Anaïs RAYNAUD
Jean Sainte-Laudy
Original Assignee
Universite De Limoges
Centre National De La Recherche Scientifique
Covertis
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9728—Fungi, e.g. yeasts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N65/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing material from algae, lichens, bryophyta, multi-cellular fungi or plants, or extracts thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations

Definitions

  • the present invention relates to a composition intended to be applied to an external biological barrier and to its use in the field of dermo-cosmetics as well as for the treatment of plants.
  • external biological barrier an envelope of an organism, which constitutes a direct interface between said organism and the external environment and must therefore be protected from any attack by any exogenous agent, while allowing the introduction of active agents.
  • Human or animal skin constitutes the direct interface between man and his environment.
  • the environmental damage it can suffer can be significant such as wounds or burns, but can also be progressive, such as wrinkles.
  • the mechanism of the appearance of wrinkles involves both intrinsic and extrinsic factors.
  • intrinsic factors inducing the formation of wrinkles there are several mechanisms: decrease in hydration; decreased production of collagen III and predominance of more rigid type I collagen; 50% decrease in cell renewal; depletion of keratinocytes due to the reduced ability to migrate to the surface of the epidermis, and the loss of elasticity of elastic fibers.
  • the skin repair process must involve several factors, such as the proliferation of dermis and epidermis cells; synthesis and / or remodeling of the extracellular matrix; protection against free radicals.
  • the plant epidermis is liable to be attacked by pathogens, such as viruses, bacteria, fungi or insects and can then respond to these attacks by development, in particular under the action of so-called elicitor compounds, physiological or metabolic natural defense responses which consist of:
  • Patent application FR 3 057 438 and the patent application filed under number FR 1874070 describe extracts of fungi applicable for the above treatments.
  • the inventors have sought to improve the efficiency of these treatments with known active agents applied to these external biological barriers and have discovered that these active agents can be combined with a film-forming component capable of forming a film of orthosilicic acid condensed on the barrier.
  • external biological barrier which has a protective barrier effect participating in the maintenance of the natural hydration of the external biological barrier.
  • the local condensation of orthosilicic acid is also likely to trap active ingredients by encapsulation in genuine "molecular cages".
  • the inventors then observed, surprisingly, that the active agents which are stabilized in contact with the external biological barrier provide an advantageous delay effect for their regular and controlled penetration into the external biological barrier. It was not clear that the active agents could keep their activity.
  • the present invention therefore firstly relates to a composition
  • a composition comprising:
  • composition being capable of forming, by application in aqueous phase to the external biological barrier and after evaporation of said aqueous phase, a film of condensed orthosilicic acid trapping component (II).
  • the film-forming component (I) can consist of:
  • a dehydration product - such as a lyophilisate - of mineral water defined in b).
  • Component (I) can be mineral water having an Si proportion of at least 25% and a minerality of less than 30 mg / L expressed as SiO 2 .
  • This mineral water can have an Si content of 6 to 9 mg / L expressed as SiO 2 .
  • the film covering the external biological barrier can then have a structure of ferns and / or snowflakes, free of crystals.
  • Mineral water can have a pH of 5 to 6.5.
  • the mineral water can be a natural mineral water having the following composition Calcium 0.9 mg / L Magnesium 0.42 mg / L Sodium 2.80 mg / L Potassium 0.26 mg / L Silica 6.93 mg / L Bicarbonates 3.3 mg / L Chlorides 3.23 mg / L Sulphates 0.65 mg / L Nitrates 3.04 mg / L Nitrites ⁇ 0.01 mg / L Fluorine ⁇ 0.10 mg / L And the following properties:
  • the mineral water is Eau de Treignac.
  • the mineral water is natural Treignac mineral water.
  • the extract (s) (II) can be in aqueous phase or in dehydrated form.
  • the extract (s) (II) can be alkaline extracts.
  • the extract (s) (II) may consist of extracts of edible macroscopic fungi chosen from oyster mushrooms, coulumbles and button mushrooms.
  • the extract (II) can be obtained or likely to be obtained, for example by:
  • the extract (II) can also be obtained or likely to be obtained by:
  • the component (I) can be mineral water as defined in points (a) and (b) above, and the component (II) can be dissolved or dispersed or mixed in component (I), in an amount in particular from 10 mg to 50 g of dry matter of component (II) in 1 L of composition.
  • the composition according to the invention can be in a pulverulent form, for example, lyophilized, formed by the mixture of component (I) in the form of a dehydration product, such as a lyophilisate , mineral water as defined in point (c) above, and component (II) in powder form, the weight ratio of component (I) in powder form to component (II) in powder form pulverulent being in particular between 1/2000 and 10/1.
  • a dehydration product such as a lyophilisate , mineral water as defined in point (c) above
  • component (II) in powder form the weight ratio of component (I) in powder form to component (II) in powder form pulverulent being in particular between 1/2000 and 10/1.
  • the invention also relates to the use of a composition as defined above as an agent for protecting a biological barrier against attack by at least one exogenous agent.
  • the biological barrier can be a plant tissue
  • the exogenous agent (s) can be pathogenic fungi, bacteria, viruses, insects and / or a physical aggressor, such as rain, frost, temperature and environmental stresses
  • the protective agent may be a protective / eliciting / repairing agent of said plant tissue, in particular agronomically useful or ornamental plants, in particular for a preventive treatment against fungal diseases and bacterial diseases, in particular those chosen from the group formed by diseases of fruit preservation, diseases of vines, fruit trees, vegetable crops and cereals, and in particular against mildew ( Plasmopara viticola ), powdery mildew ( Erysiphe necator ), diseases caused by Xanthomonas sp.
  • the present invention also relates to a composition for the protective treatment of a plant biological barrier, characterized in that it consists of a composition as defined above, where appropriate in combination with at least one co-agent chosen from among compatible formulation agents, anti-phytopathogenic agents, in particular chosen from the group formed by fungicidal agents, antibacterial agents, antiviral agents, pesticidal agents and biocontrol agents, nutrients for plants, and agents coating of fruits / vegetables to form a coating wax.
  • co-agent chosen from among compatible formulation agents, anti-phytopathogenic agents, in particular chosen from the group formed by fungicidal agents, antibacterial agents, antiviral agents, pesticidal agents and biocontrol agents, nutrients for plants, and agents coating of fruits / vegetables to form a coating wax.
  • the invention also relates to a process for the protective treatment of a plant biological barrier, characterized by the fact that it consists in applying to the plant biological barrier a composition as defined above:
  • the film-forming component (I) consists of a dehydration product - such as a lyophilisate - of a concentrated mineral water
  • the component (I) at the time of use, being rehydrated by adding d 'demineralized water to reconstitute said aqueous phase.
  • the present invention also relates to a composition for the protective treatment of human or animal skin, characterized in that it consists of a composition as defined above, in aqueous media or in powder form in combination with au minus a cosmetic adjuvant.
  • the present invention also relates to a process for the protective treatment of human or animal skin, characterized in that it consists in distributing by spreading or spraying the composition as defined above, in particular in the form of a cream or a solution, on the skin zone to be treated in order to obtain a protective effect on the skin on each application, in particular at a rate of 0.005 to 100 g of mixture of constituents (I) and (II) per 100 g of composition.
  • Example 1 Preparation of a lyophilized extract of Pleurotus ostreatus
  • the raw material is whole Pleurotus ostreatus (oyster mushrooms).
  • the clarified extract thus obtained is neutralized by contacting with a cation exchange resin of sulfonic type.
  • the neutralized extract is clarified by filtration at 1 ⁇ m.
  • a clarified liquid extract is thus obtained, the lyophilization of which is carried out by freezing at -20 ° C. in a polypropylene pot.
  • the frozen extract is then introduced into the Christ alpha 1-4 LSC plus freeze dryer, and left until complete lyophilization. This makes it possible to recover 58 g of a beige powder constituting the extract.
  • composition of the extract obtained is reported in Table 1 below:
  • the quantity of neutral oses is obtained by determination by the phenol sulfuric acid method, according to Dubois et al. (Dubois, Gille, Hamilton, Rebers, Smith, Colorimetric method for determination of sugars and relative substances, Analytical Chemistry 28, 350-356 (1956)).
  • Proteins> 3000 Da are determined by the Bradford method (Bradford, A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding, Analytical Biochemistry 72, 248-254 (1976)) .
  • the quantity of total sugars is calculated by difference with the mineral matter and the total proteins.
  • the number-average molecular mass is determined by size exclusion chromatography (SEC) analysis coupled with light scattering and viscometry.
  • a natural mineral water concentrate from Treignac is prepared by reverse osmosis.
  • the starting Treignac water has the following composition:
  • Reverse osmosis is a membrane separation technology based on diffusion selectivity. A semi-permeable membrane is placed between two compartments containing solutions of different salinity. Osmosis is a natural phenomenon which consists of the migration of water from the less concentrated solution to the more concentrated solution (osmotic flow). When a pressure greater than the osmotic pressure is applied to the more concentrated solution, the water flow is directed in the opposite direction to the osmotic flow.
  • CSM membranes (Customer Satisfaction Membrane) are thin film composite polyamide membranes (TFC).
  • the reverse osmosis device used was manufactured by the elaborate Techniques Industrielles Appliqués (TIA).
  • the model is the BL 200 membrane process.
  • the constitution of the device is as follows:
  • the device Before using the device, it was washed with reverse osmosis water so the conductivity was less than 3 ⁇ S / cm.
  • the stainless steel tank is then filled with natural mineral water from Treignac. Once this tank is full, the reverse osmosis system is put into operation. The water in the stainless steel tank passes through this stainless steel pipe. The operating pressure is measured at this level. The water enters the membrane.
  • the quantity of liquid constituting the permeate is renewed by continuously adding natural mineral water from Treignac directly to the tank. Operation of the device is maintained with recirculation of the concentrate until a volume of concentrate equal to one-eighth of the initial volume of natural mineral water from Treignac is obtained. This is a factor of eight concentration.
  • the concentrate present in the tank is then recovered in a container.
  • the silica determination is carried out by the ammonium molybdate cuvette test HACH Lange LCW 028.
  • Example 2a Preparation of a lyophilisate of concentrated Treignac water
  • Example 3 Preparation of a lyophilisate composition of concentrated Treignac water - lyophilized extract of Pleurotus ostreatus
  • lyophilisates are taken up in 8 mL of ultra-pure water and stirred vigorously in order to homogenize this mixture. This set is then lyophilized in order to obtain a dry, homogeneous and easily quantifiable product.
  • the weight ratio between the amounts of each of the lyophilisates is 1/1.
  • Example 4 Stimulation of the Proliferation of Human Skin Fibroblasts by the Composition of Example 3
  • Example 3 The evaluation of the composition of Example 3 is based on a proliferation test on human skin fibroblasts. These dermal cells are involved in many skin regeneration processes and their proliferation is essential in the event of skin damage.
  • the objective is therefore to assess the impact of the composition obtained according to Example 3 on tissue repair in the skin. This evaluation is carried out in comparison with an untreated control containing only culture medium (DMEM Glutamax + 10% FCS).
  • the active agent obtained according to Example 3 is diluted in a culture medium in order to obtain a stock treatment solution at 2 mg / mL.
  • the operating protocol is as follows:
  • the primary cultures of 44-year-old human skin fibroblasts (PAF 08052) are inoculated in 48-well microplates at a rate of 10,000 cells per well with a volume of culture medium of 500 ⁇ L. Cells adhering to the bottom of the wells for 24 hours. The culture medium is then replaced by the composition according to Example 3 diluted in culture medium and a control without treatment is carried out. Several concentrations are tested at a rate of 500 ⁇ L per well and incubated for 48 hours at 37 ° C. + 5% CO 2 . The cells are then detached with trypsin and then counted on a Malassez slide.
  • results are expressed as percentages of proliferation relative to the untreated control, containing only culture medium.
  • a statistical analysis by nonparametric test of Wilcoxon-Mann-Whitney is carried out on the results in order to determine the significance of the values.
  • the significance stars indicate the degree of significance, ie * p ⁇ 0.05; ** p ⁇ 0.01; *** p ⁇ 0.001.
  • Example 3 The composition of Example 3 between 25 and 1000 ⁇ g / mL induces a significant increase in fibroblast proliferation (1.7 to 2.5 times compared to the untreated control). The mixture therefore promotes the proliferation of fibroblasts, which may contribute to the healing of wounds or to tissue regeneration.
  • Example 5 Impact of each compound independent of the composition of Example 3 and of the latter on the proliferation of human skin fibroblasts
  • the objective is therefore to assess the impact of each of the components of the composition of Example 3 on the proliferation of human skin fibroblasts. This evaluation is carried out in comparison with an untreated control containing only culture medium (DMEM Glutamax + 10% FCS).
  • composition obtained according to Example 3 is diluted in a culture medium in order to obtain a stock treatment solution at 2 mg / mL.
  • the lyophilized extract of oyster mushroom (VOC) obtained according to Example 1 is diluted in the culture medium in order to obtain a stock solution at 1 mg / mL.
  • the concentrated Treignac water lyophilisate (ET) obtained according to Example 2 bis is dissolved in the culture medium in order to obtain a stock solution at 1 mg / mL.
  • the operating protocol is as follows:
  • the primary cultures of 44-year-old human skin fibroblasts (PAF 08052) are inoculated into 48-well microplates at a rate of 10,000 cells per well with a volume of culture medium of 500 ⁇ L, the cells adhering to the bottom of the wells for 24 hours.
  • the culture medium is then replaced by the composition according to Example 3 (COV-ET) or by VOC or by ET, each of the three being diluted in culture medium, and a control without treatment is carried out.
  • COV-ET composition according to Example 3
  • VOC VOC
  • ET a control without treatment is carried out.
  • concentrations are tested at a rate of 500 ⁇ L per well and incubated for 48 hours at 37 ° C. + 5% CO 2 .
  • the cells are then detached with trypsin and then counted on a Malassez slide.
  • results are expressed as a percentage of proliferation relative to the control containing only culture medium relative to the untreated control.
  • a statistical analysis by Wilcoxon-Mann-Whitney test is carried out on the results in order to determine the significance of the values. The presence of identical letters (a, b, c) indicates that there is no significant difference. Different letters attest to significantly different results at the 5% threshold.
  • Example 3 does indeed have synergistic activity relative to the activity of each of its isolated components. This activity is significantly confirmed, in particular for the concentrations of 300 ⁇ g / mL and 1000 ⁇ g / mL.
  • Example 3 stimulates the proliferation of fibroblasts and may aid in the process of tissue repair.
  • Example 6 Stimulation of the natural defenses of plants
  • Example 3 The composition of Example 3 was also tested on plants to assess the plant's ability to activate its defense reactions in the context of attack by a pathogen.
  • the plants were cultivated in a greenhouse from seedlings made in horticultural soil.
  • the plants are harvested, frozen in liquid nitrogen and stored at -20 ° C before being analyzed.
  • the marker for the defense reactions here is the phenylalanine ammonia lyase (PAL) activity which was assayed according to the protocol described by A. Francini, C. Nali, V. Picchi, G. Lorenzini. Metabolic changes in white clover clones exposed to ozone. Environmental and Experimental Botany 60 (2007) 11–19.
  • PAL phenylalanine ammonia lyase
  • the plants having undergone a pre-treatment with the VOC-ETC combination will have stimulated defenses allowing them to better resist attacks by pathogens; the combination of the two products makes it possible to obtain a stimulation of the defenses superior to that of each of the two products applied in isolation.
  • composition of the invention is obtained in the form of a solution by adding 56.61 mg of lyophilized extract of Pleurotus ostreatus from Example 1 in 300 mL of Treignac water concentrated by reverse osmosis, obtained according to Example 2 .
  • the solution is then stirred by mechanical stirring at 1000 revolutions per minute until the extract has completely dissolved, for a period of about 15 minutes.
  • This solution is then placed in a 300 mL sprayer before being applied to the skin.
  • the SEM image shows fractal structures in the form of ferns that formed on a full film.
  • the very low humidity level created some cracks in the film (visible cracks) allowing the observation support (black) to be seen.
  • composition of the invention is obtained in the form of a solution by adding 10 mg of the lyophilized extract of Pleurotus ostreatus from Example 1 in 500 mL of natural Treignac water.
  • the solution is then stirred by mechanical stirring at 1000 revolutions per minute until the extract has completely dissolved, for a period of about 15 minutes.
  • This solution is then placed in a 500 mL sprayer before being applied to the skin.

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Abstract

L'invention porte sur une composition comportant : I. un constituant filmogène apte à produire un film d'acide orthosilicique condensé après application en phase aqueuse sur une barrière biologique externe et évaporation de la phase aqueuse; et II. au moins un extrait de parois cellulaires de champignons comestibles macroscopiques présentant une activité lorsqu'il est appliqué sur une barrière biologique externe, ladite composition étant apte à former, en application en phase aqueuse sur la barrière biologique externe et après évaporation de ladite phase aqueuse, un film d'acide orthosilicique condensé piégeant le constituant (II).

Description

COMPOSITION DESTINEE A ETRE APPLIQUEE SUR UNE BARRIERE BIOLOGIQUE EXTERNE ET SON UTILISATION EN DERMO-COSMETIQUE ET POUR LE TRAITEMENT DES PLANTES
La présente invention porte sur une composition destinée à être appliquée sur une barrière biologique externe et sur son utilisation dans le domaine de la dermo-cosmétique ainsi que pour le traitement des plantes.
On entend par barrière biologique externe une enveloppe d’un organisme, laquelle constitue une interface directe entre ledit organisme et l’environnement extérieur et doit donc être protégée de toute agression par tout agent exogène, tout en permettant l’introduction d’agents actifs.
Comme barrière biologique externe, on peut donc mentionner aussi bien la peau humaine ou animale que l’épiderme des parties aériennes des plantes, de la vigne, du blé, des fruits, des tomates, des pommes de terre, des graines etc.
La peau humaine ou animale constitue l’interface directe entre l’homme et son environnement. Les dommages liés à l’environnement qu’elle peut subir peuvent être importants tels que des plaies ou des brûlures, mais peuvent aussi être progressifs, tels que les rides.
Le mécanisme d’apparition des rides fait intervenir à la fois des facteurs intrinsèques et extrinsèques. Parmi les facteurs intrinsèques induisant la formation des rides, on retrouve plusieurs mécanismes : diminution de l’hydratation ; diminution de la production de collagène III et prédominance du collagène de type I plus rigide ; diminution de 50% du renouvellement cellulaire ; raréfaction des kératinocytes en raison de la diminution de la capacité de migration vers la surface de l’épiderme, et la perte d’élasticité des fibres élastiques.
De plus, l’agressivité tissulaire des radicaux libres est aujourd’hui bien documentée et l’organisme a son propre système de défense pour les neutraliser, mais, avec l’âge, l’efficacité de ce système décline et notre besoin en anti-oxydants augmente.
A ce vieillissement génétiquement programmé s’ajoutent des facteurs environnementaux qui vont accélérer ce processus : les agressions chimiques, physico-chimiques, climatiques, pathologiques… Les comportements peuvent également largement influer sur l’aspect de notre peau : tabac, alcool, etc. Les dermatologues estiment que 90% du vieillissement cutané est dû à ces facteurs exogènes.
De façon générale, le processus de réparation de la peau doit faire intervenir plusieurs facteurs, tels que la prolifération des cellules du derme et de l’épiderme ; la synthèse et/ou le remodelage de la matrice extracellulaire ; la protection contre les radicaux libres.
L’épiderme végétal est susceptible d’être attaqué par des agents pathogènes, tels que les virus, les bactéries, les champignons ou les insectes et peuvent alors répondre à ces attaques par le développement, en particulier sous l’action de composés dits éliciteurs, de réponses physiologiques ou métaboliques de défense naturelle qui consistent en :
- le renforcement des barrières cellulaires préexistantes par la stimulation de la lignification des parois des cellules végétales ;
- la synthèse par la plante de composés à activité antibiotique, tels que les phytoalexines ;
- la synthèse de protéines enzymatiques pouvant s’attaquer à la paroi des pathogènes, telles que les chitinases ou les glucanases.
En dehors de la protection proprement dite de la peau et des barrières végétales externes, on peut mentionner d’une manière générale tous les traitements et dermo-cosmétiques et tous les traitements appliqués en agriculture.
La demande de brevet FR 3 057 438 et la demande de brevet déposée sous le numéro FR 1874070 décrivent des extraits des champignons applicables pour les traitements ci-dessus.
Les inventeurs ont recherché à améliorer l’efficacité de ces traitements par des agents actifs connus appliqués sur ces barrières biologiques externes et ont découvert que ces agents actifs peuvent être combinés avec un constituant filmogène apte à former un film d’acide orthosilicique condensé sur la barrière biologique externe, lequel présente un effet barrière protecteur participant au maintien de l’hydratation naturelle de la barrière biologique externe. La condensation locale de l’acide orthosilicique est susceptible également de piéger des principes actifs par encapsulation dans de véritables « cages moléculaires ».
Les inventeurs ont alors constaté de façon surprenante que les agents actifs se trouvant stabilisés au contact de la barrière biologique externe procurent un effet retard avantageux pour leur pénétration régulière et maîtrisée dans la barrière biologique externe. Il n’était pas évident que les agents actifs puissent garder leur activité.
La présente invention a donc d’abord pour objet une composition comportant :
  1. un constituant filmogène apte à produire un film d’acide orthosilicique condensé après application en phase aqueuse sur une barrière biologique externe et évaporation de la phase aqueuse ; et
  2. au moins un extrait de parois cellulaires de champignons comestibles macroscopiques présentant une activité lorsqu’il est appliqué sur une barrière biologique externe,
ladite composition étant apte à former, en application en phase aqueuse sur la barrière biologique externe et après évaporation de ladite phase aqueuse, un film d’acide orthosilicique condensé piégeant le constituant (II).
Le constituant (I)
Le constituant filmogène (I) peut être constitué par :
a) une eau minérale présentant
  • une teneur en Si, exprimée en SiO2, inférieure à 30 mg/L, étant notamment de 6 à 9 mg/L ;
  • un résidu sec à 180°C inférieur à 30 mg/L ; et
  • un pH de 5 à 6,5 ; ou
b) l’eau minérale définie en a) à l’état concentré, en particulier concentrée par osmose inverse ; ou
c) un produit de déshydratation – tel qu’un lyophilisat – de l’eau minérale définie en b).
Le constituant (I) peut être une eau minérale présentant une proportion de Si d’au moins 25 % et une minéralité inférieure à30 mg/L exprimée en SiO2. Cette eau minérale peut présenter une teneur en Si de 6 à 9 mg/L exprimée en SiO2. Le film recouvrant la barrière biologique externe pourra alors présenter une structure en fougères et/ou en flocons de neige, exempte de cristaux. L’eau minérale peut avoir un pH de 5 à 6,5.
L’eau minérale peut être une eau minérale naturelle ayant la composition suivante
Calcium 0,9 mg/L
Magnésium 0,42 mg/L
Sodium 2,80 mg/L
Potassium 0,26 mg/L
Silice 6,93 mg/L
Bicarbonates 3,3 mg/L
Chlorures 3,23 mg/L
Sulfates 0,65 mg/L
Nitrates 3,04 mg/L
Nitrites <0,01 mg/L
Fluor <0,10 mg/L
Et les propriétés suivantes :
pH 5,7
Résidu sec à 180°C 22 mg/L
conductivité 27 µS/cm
En particulier, l’eau minérale est l’Eau de Treignac.
Conformément à un mode de réalisation particulièrement préféré, l’eau minérale est l’eau minérale de Treignac naturelle.
Le constituant (II)
Le ou les extraits (II) peuvent se présenter en phase aqueuse ou sous forme déshydratée.
Le ou les extraits (II) peuvent être des extraits alcalins.
Le ou les extraits (II) peuvent consister en extraits de champignons macroscopiques comestibles choisis parmi les pleurotes, les coulemelles et les champignons de Paris.
L’extrait (II) peut être obtenu ou susceptible d’être obtenu par exemple par :
  • extraction alcaline, par une solution aqueuse d’au moins une base en présence d’au moins un agent réducteur, d’au moins un champignon comestible macroscopique réduit en poudre, pour obtenir un mélange ayant une partie liquide contenant les matières extraites solubles et une partie solide formée de particules solides insolubles ;
  • filtration du mélange obtenu pour en retirer la partie solide et clarification éventuelle de la partie liquide ;
  • neutralisation de la partie liquide à l’aide d’au moins une résine échangeuse de cations et filtration/clarification éventuelle de la partie liquide ainsi neutralisée pour obtenir la substance biologiquement active en phase aqueuse ; et
  • traitement de la phase aqueuse obtenue choisi parmi une dilution dans l’eau, une concentration, une déshydratation et une lyophilisation pour obtenir une substance biologiquement active respectivement davantage diluée dans l’eau, en solution aqueuse davantage concentrée, déshydratée sous forme de poudre ou lyophilisée.
Il peut comporter, pour 100 parties en poids de matière sèche :
  • 30 à 75 parties en poids de sucres totaux, dont :
    • 9 à 25 parties en poids de β-glucanes ; et
    • 0,8 à 2,4 parties en poids de glucosamine et/ou de glucosamine acétylée ;
  • 7 à 36 parties en poids de peptides totaux/protéines totales ;
  • le complément étant constitué par des matières minérales,
80 à 100 % des composés organiques ayant notamment une masse en fonction de la taille moléculaire moyenne comprise entre 20 et 45 kDa.
L’extrait (II) peut également être obtenu ou susceptible d’être obtenu par :
  • extraction alcaline d’une poudre de champignons macroscopiques comestibles, puis neutralisation de l’extrait obtenu avant de procéder à sa filtration ;
  • dilution de l’extrait filtré, puis hydrolyse enzymatique par une glycosidase entre 10 et 65°C de l’extrait filtré dilué, l’hydrolyse ainsi pratiquée étant arrêtée en inactivant l’enzyme à une température supérieure à 65°C ;
  • filtration de l’hydrolysat obtenu pour en isoler une fraction active de poids moléculaire inférieur à 100 kDa.
Conformément à un premier mode de réalisation, le constituant (I) peut être de l’eau minérale telle que définie aux points (a) et (b) ci-dessus, et le constituant (II) peut être dissous ou dispersé ou mélangé dans le constituant (I), à raison notamment de 10 mg à 50 g de matière sèche de constituant (II) dans 1 L de composition.
Conformément à un deuxième mode de réalisation, la composition selon l’invention peut se présenter sous une forme pulvérulente, par exemple, lyophilisée, formée par le mélange du constituant (I) sous forme d’un produit de déshydratation, tel qu’un lyophilisat, d’eau minérale telle que définie au point (c) ci-dessus, et du constituant (II) sous une forme pulvérulente, le rapport pondéral du constituant (I) à l’état pulvérulent au constituant (II) à l’état pulvérulent étant notamment compris entre 1/2000 et 10/1.
L’invention porte également sur l’utilisation d’une composition telle que définie ci-dessus comme agent protecteur d’une barrière biologique à l’encontre d’une agression par au moins un agent exogène.
La barrière biologique peut être un tissu végétal, le ou les agents exogènes peuvent être des champignons pathogènes, des bactéries, des virus, des insectes et/ou un agent agresseur physique, tel que la pluie, le gel, la température et les stress environnementaux, et l’agent protecteur peut être un agent protecteur/éliciteur/réparateur dudit tissu végétal, en particulier des plantes agronomiquement utiles ou ornementales, notamment pour un traitement préventif contre les maladies cryptogamiques et les maladies bactériennes, notamment celles choisies dans le groupe formé par les maladies de conservation des fruits, les maladies de la vigne, des arbres fruitiers, des cultures légumières et des céréales, et notamment contre le mildiou (Plasmopara viticola), l’oïdium (Erysiphe necator), les maladies causées par Xanthomonas sp., par Pseudomonas syringae, le feu bactérien (Erwinia amylovora), la pourriture grise (Botrytis cinerea), le mildiou (Phytophthora infestans) de la pomme de terre, la rouille jaune (Septoria sp., Stagonospora nodorum), la fusariose des épis (Fusarium graminearum) du blé et la tavelure du pommier (Venturia inaequalis), les maladies de conservation des pommes (Penicillium expansum), la moniliose (Monilia fructigena), les Gloésporioses (Neofabrea sp., Glomerella sp., Nectria sp.).
La présente invention porte également sur une composition de traitement protecteur d’une barrière biologique végétale, caractérisée par le fait qu’elle consiste en une composition telle que définie ci-dessus, le cas échéant en combinaison avec au moins un co-agent choisi parmi les agents de formulation compatibles, les agents anti-phytopathogènes, notamment choisis dans le groupe formé par les agents fongicides, les agents antibactériens, les agents antiviraux, les agents pesticides et les agents de biocontrôle, les éléments nutritifs pour les plantes, et les agents d’enrobage de fruits/légumes pour former une cire d’enrobage.
L’invention porte également sur un procédé de traitement protecteur d’une barrière biologique végétale, caractérisé par le fait qu’il consiste à appliquer sur la barrière biologique végétale une composition telle que définie ci-dessus :
  • par pulvérisation, telle que brumisation, sur les parties aériennes des plantes, aux stades végétatifs précoces et/ou aux stades végétatifs adultes et reproducteurs, en une fois ou en plusieurs fois, par exemple jusqu’à 40 fois, à des intervalles de temps répétés, notamment tous les deux à trente jours, la composition étant appliquée en phase aqueuse, dans laquelle le mélange des constituants (I) et (II) est présent à raison notamment de 0,1 à 50 g de matière sèche /L ; ou
  • par trempage des produits récoltés, tels que fruits et légumes cueillis, dans ladite composition en phase aqueuse ; ou
  • par arrosage de racines par ladite composition en phase aqueuse ; ou
  • par enrobage de fruits/légumes, ladite composition en phase aqueuse ayant été placée sous la forme d’une cire d’enrobage,
et dans le cas où le constituant filmogène (I) est constitué par un produit de déshydratation - tel qu’un lyophilisat - d’une eau minérale concentrée, le constituant (I), au moment de l’emploi, étant réhydraté par ajout d’une eau déminéralisée pour reconstituer ladite phase aqueuse.
La présente invention porte également sur une composition de traitement protecteur de la peau humaine ou animale, caractérisée par le fait qu’elle consiste en une composition telle que définie ci-dessus, en milieux aqueux ou à l’état de poudre en combinaison avec au moins un adjuvant cosmétique.
La présente invention porte également sur un procédé de traitement protecteur de la peau humaine ou animale, caractérisé par le fait qu’il consiste à répartir par étalement ou pulvérisation la composition telle que définie ci-dessus, notamment sous forme de crème ou de solution, sur la zone de peau à traiter pour obtenir sur la peau un effet protecteur à chaque application, notamment à raison de 0,005 à 100 g de mélange des constituants (I) et (II) pour 100 g de composition.
Les exemples suivants illustrent la présente invention sans toutefois en limiter la portée. Dans ces Exemples, les pourcentages sont en poids sauf indication contraire, et les abréviations suivantes ont été utilisées :
  • DMEM : Milieu de Eagle modifié par Dulbecco ;
  • SVF : Sérum de veau fœtal ;
  • COV : extrait lyophilisé de Pleurotus ostreatus obtenu à l’Exemple 1 ;
  • ET : lyophilisat d’eau de Treignac concentrée obtenu à l’Exemple 2 bis
  • ETC : Eau de Treignac concentrée obtenue à l’Exemple 2.
Exemple 1 : Préparation d’un extrait lyophilisé de Pleurotus ostreatus
La matière première est constituée de champignons Pleurotus ostreatus (pleurotes) entiers.
200 g de Pleurotes entiers séchés et broyés (<10mm) sont dispersés dans 2L de soude à 2 %, en présence de borohydrure de sodium à 0,5 %. L'extraction est réalisée à 50°C pendant 8 heures, sous agitation mécanique.
Par filtration à 200µm, on élimine la fraction insoluble dans NaOH/NaBH4. Le surnageant obtenu est ensuite clarifié par filtrations en profondeur successives jusqu’à 1µm.
L’extrait clarifié ainsi obtenu est neutralisé par mise en contact avec une résine échangeuse de cations de type sulfonique.
L'extrait neutralisé est clarifié par filtration à 1µm.
On obtient ainsi un extrait liquide clarifié dont la lyophilisation se fait par congélation à -20°C dans un pot en polypropylène. L’extrait ainsi congelé est ensuite introduit dans le lyophilisateur Christ alpha 1-4 LSC plus, et laissé jusqu’à totale lyophilisation. Celle-ci permet de récupérer 58 g d'une poudre couleur beige constituant l'extrait.
La composition de l’extrait obtenu est rapportée dans le Tableau 1 ci-après :
Composés majoritaires dans l’extrait Pourcentages (% m/m)
Sucres totaux (7) 45,0
dont oses neutres (1) 29,2
dont β-glucanes (2) 13,6
dont glucosamine (3) 2,1
Protéines totales (4) 30,1
dont protéines > 3000 Da (5) 7,8
Matière minérale (6) 24,9
Mn (kDa) (8) 25kDa<<35kDa
pour >95% des composés organiques de l’extrait
(1) La quantité d’oses neutres est obtenue par dosage par la méthode phénol acide sulfurique, selon Dubois et al. (Dubois, Gille, Hamilton, Rebers, Smith, Colorimetric method for determination of sugars and relative substances, Analytical Chemistry 28, 350-356 (1956)).
(2) Les β-glucanes sont dosés par un kit d’analyse (K-YBGL 09/14, Megazyme).
(3) La quantification de la glucosamine est effectuée par dosage par le MBTH selon Smith et al. (Smith & Gilkerson : Quantitation of glycosaminoglycan hexosamine using 3-methyl-2-benzothiazolone hydrazone hydrochloride, Analytical Biochemistry 98, 478-480 (1979)).
(4) La quantité de protéines totales est évaluée avec un dosage d’azote par Kjeldahl dont la valeur obtenue est multipliée par 6,25.
(5) Les protéines > 3000 Da sont dosées par la méthode Bradford (Bradford, A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding, Analytical Biochemistry 72, 248-254 (1976)).
(6) La matière minérale est quantifiée à la suite d’une calcination à 650°C.
(7) La quantité de sucres totaux est calculée par différence avec la matière minérale et les protéines totales.
(8) La masse moléculaire moyenne en nombre est déterminée par analyse en chromatographie d’exclusion stérique (SEC) couplée à la diffusion de la lumière et la viscosimétrie.
Exemple 2 : Préparation d’eau de Treignac concentrée
On prépare, par osmose inverse, un concentrat d’eau minérale naturelle de Treignac.
L’eau de Treignac de départ a la composition suivante :
Calcium 0,9 mg/L
Magnésium 0,42 mg/L
Sodium 2,80 mg/L
Potassium 0,26 mg/L
Silice 6,93 mg/L
Bicarbonates 3,3 mg/L
Chlorures 3,23 mg/L
Sulfates 0,65 mg/L
Nitrates 3,04 mg/L
Nitrites < 0,01 mg/L
Fluor < 0,10 mg/L
dans les conditions suivantes : pression de 106Pa (10 bar) et réfrigération par de l’eau du robinet à 12°C.
Principe de l’osmose inverse
L’osmose inverse est une technologie membranaire de séparation basée sur la sélectivité par diffusion. Une membrane semi-perméable est placée entre deux compartiments contenant des solutions de salinité différente. L’osmose est un phénomène naturel qui consiste en la migration de l’eau de la solution la moins concentrée vers la solution la plus concentrée (flux osmotique). Lorsque l’on applique une pression supérieure à la pression osmotique sur la solution la plus concentrée, le flux d’eau est dirigé en sens inverse du flux osmotique.
Caractéristique des membranes
Les membranes CSM (Customer satisfaction Membrane) sont des membranes polyamide en composite à couche mince (thin film composite, TFC).
Caractéristique de l’appareil d’osmose inverse utilisé
L’appareil d’osmose inverse utilisé a été fabriqué par la Société Techniques Industrielles Appliquées (TIA). Le modèle est le BL 200 procédé membranaire.
La constitution de l’appareil est la suivante :
A) cuve en acier inoxydable d’un volume de 45 L (diamètre de 31,5 cm et hauteur de 57 cm) ;
B) pompe CAT Pumps 311 ; et
C) support pour mise en place de la membrane.
Les conditions opératoires pour la tenue de cet essai sont les suivantes :
• Pression : 106 Pa (10 bar)
• Réfrigération : eau du robinet (température de 12 °C)
Réalisation de l’essai
Avant l’utilisation de l’appareil, ce dernier a été lavé à l’aide d’eau osmosée donc la conductivité était inférieure à 3 μS/cm. La cuve en acier inoxydable est ensuite remplie d’eau minérale naturelle de Treignac. Une fois cette cuve remplie, le système d’osmose inverse est mis en fonctionnement. L’eau présente dans la cuve en acier inoxydable transite par ce tuyau également en acier inoxydable. La mesure de la pression de fonctionnement est assurée à ce niveau. L’eau pénètre dans la membrane.
La quantité de liquide constituant le perméat est renouvelée par addition d’eau minérale naturelle de Treignac en continu directement dans la cuve. Le fonctionnement de l’appareil est maintenu avec recirculation du concentrat jusqu’à l’obtention d’un volume de concentrat égal au huitième du volume initial d’eau minérale naturelle de Treignac. Il s’agit d’une concentration par un facteur huit.
Le concentrat présent dans la cuve est ensuite récupéré dans un container.
Dosage de la silice
Le dosage de la silice est pratiqué par le test au molybdate d’ammonium en cuve HACH Lange LCW 028.
La très faible minéralité de l’eau minérale naturelle de Treignac (22 mg de résidu sec à 180°C en moyenne) permet d’obtenir, selon le procédé décrit, une eau osmosée faiblement minéralisée, ayant la même portion de minéraux que l’eau d’origine mais contenant de 55 à 65 mg de silice/L (exprimés en SiO2)
Exemple 2 bis : Préparation d’un lyophilisat d’eau de Treignac concentrée
Dans un pot en polypropylène, 300 mL d’eau de Treignac concentrée sont congelés à -20°C. L’eau ainsi congelée est ensuite introduite dans le lyophilisateur Christ alpha 1-4 LSC plus, et laissée jusqu’à totale lyophilisation. Celle-ci permet de récupérer 56,61 mg de résidu sec. Le stockage du résidu obtenu se fait dans un récipient hermétique lui-même stocké dans un dessiccateur afin d’éviter toute réhydratation.
Exemple 3 : Préparation d’une composition lyophilisat d’eau de Treignac concentrée – extrait lyophilisé de Pleurotus ostreatus
Afin de préparer un actif à visée cosmétique, 10 mg du lyophilisat d’extrait de pleurote obtenu selon l’Exemple 1 sont ajoutés à 10 mg de lyophilisat d’eau de Treignac concentrée préparé selon l’Exemple 2 bis.
Ces lyophilisats sont repris dans 8 mL d’eau ultra-pure et agités vigoureusement afin d’homogénéiser ce mélange. Cet ensemble est ensuite lyophilisé afin d’obtenir un produit sec, homogène et facilement quantifiable. Le rapport pondéral entre les quantités de chacun des lyophilisats est de 1/1.
Exemple 4 : Stimulation de la prolifération de fibroblastes de peau humaine par la composition de l’Exemple 3
L’évaluation de la composition de l’Exemple 3 repose sur un test de prolifération sur les fibroblastes de peau humaine. Ces cellules du derme interviennent dans de nombreux processus de régénération cutanée et leur prolifération est indispensable en cas de lésion cutanée.
L’objectif est donc d’évaluer l’impact de la composition obtenue selon l’Exemple 3 sur la réparation tissulaire au niveau de la peau. Cette évaluation se fait en comparaison avec un témoin non traité contenant uniquement du milieu de culture (DMEM Glutamax + 10% SVF).
L’actif obtenu selon l’Exemple 3 est dilué dans un milieu de culture afin d’obtenir une solution-mère de traitement à 2 mg/mL. Le protocole opératoire est le suivant :
Les cultures primaires de fibroblastes de peau humaine de 44 ans (PAF 08052) sont ensemencées dans des microplaques à 48 puits à raison de 10 000 cellules par puits avec un volume de milieu de culture de 500 µL. Les cellules adhérant au fond des puits pendant 24 heures. Le milieu de culture est ensuite remplacé par la composition selon l’Exemple 3 diluée dans du milieu de culture et un témoin sans traitement est réalisé. Plusieurs concentrations sont testées à raison de 500 µL par puits et incubées 48 heures à 37°C + 5% de CO2. Les cellules sont ensuite décollées à la trypsine puis comptées sur lame de Malassez.
Les résultats sont exprimés en pourcentages de prolifération par rapport au témoin non traité, contenant seulement du milieu de culture. Une analyse statistique par test non paramétrique de Wilcoxon-Mann-Whitney est réalisée sur les résultats afin de déterminer la significativité des valeurs. Les étoiles de significativité indiquent le degré de significativité soit * p<0,05 ; ** p <0,01 ; *** p <0,001.
Les résultats sont rapportés sur la Figure 1 du dessin annexé.
La composition de l’Exemple 3 entre 25 et 1 000 µg/mL induit une augmentation significative de la prolifération des fibroblastes, (de 1,7 à 2,5 fois plus par rapport au témoin non traité). Le mélange favorise donc la prolifération des fibroblastes, ce qui peut contribuer à la cicatrisation de plaies ou à la régénération tissulaire.
Exemple 5 : Impact de chaque composé indépendant de la composition de l’Exemple 3 et de cette dernière sur la prolifération de fibroblastes de peau humaine
L’objectif est donc d’évaluer l’impact de chacun des composants de la composition de l’Exemple 3 sur la prolifération des fibroblastes de peau humaine. Cette évaluation se fait en comparaison avec un témoin non traité contenant uniquement du milieu de culture (DMEM Glutamax + 10% SVF).
La composition obtenue selon l’Exemple 3 est diluée dans un milieu de culture afin d’obtenir une solution-mère de traitement à 2 mg/mL.
L’extrait lyophilisé de pleurote (COV) obtenu selon l’Exemple 1 est dilué dans le milieu de culture afin d’obtenir une solution-mère à 1 mg/mL.
Le lyophilisat d’eau de Treignac concentrée (ET) obtenue selon l’Exemple 2 bis est solubilisé dans le milieu de culture afin d’obtenir une solution-mère à 1 mg/mL.
Tous les échantillons dilués subissent une filtration stérilisante afin d’assurer la stérilité de l’expérimentation.
Le protocole opératoire est le suivant :
Les cultures primaires de fibroblastes de peau humaine de 44 ans (PAF 08052) sont ensemencées dans des microplaques à 48 puits à raison de 10 000 cellules par puits avec un volume de milieu de culture de 500 µL, les cellules adhérant au fond des puits pendant 24 heures. Le milieu de culture est ensuite remplacé par la composition selon l’Exemple 3 (COV-ET) ou par COV ou par ET, chacun des trois étant dilué dans du milieu de culture, et un témoin sans traitement est réalisé. Plusieurs concentrations sont testées à raison de 500 µL par puits et incubées 48 heures à 37°C + 5% de CO2. Les cellules sont ensuite décollées à la trypsine puis comptées sur lame de Malassez.
Les résultats sont exprimés en pourcentage de prolifération par rapport au témoin contenant seulement du milieu de culture par rapport au témoin non traité. Une analyse statistique par test de Wilcoxon-Mann-Whitney est réalisée sur les résultats afin de déterminer la significativité des valeurs. La présence de lettres identiques (a, b, c) indique l’absence de différence significative. Des lettres différentes attestent de résultats significativement différents au seuil de 5%.
Les résultats sont rapportés sur la Figure 2 du dessin annexé.
La composition de l’Exemple 3 a bien une activité synergique par rapport à l’activité de chacun de ses composants isolés. Cette activité est confirmée de façon significative notamment pour les concentrations de 300 µg/mL et 1 000 µg/mL.
La composition de l’Exemple 3 stimule la prolifération des fibroblastes et peut contribuer au processus de réparation tissulaire.
Exemple 6 : Stimulation des défenses naturelles des plantes
La composition de l’Exemple 3 a également été testée sur des plantes pour évaluer les capacités de la plante à activer ses réactions de défense dans le contexte de l’attaque par un pathogène.
Les plantes ont été cultivées sous serre à partir de semis réalisés dans du terreau horticole.
Elles subissent d’abord un pré-traitement consistant en trois applications sous forme de pulvérisations foliaires du produit à tester. Elles sont réalisées à 2 jours d’intervalle et jusqu’à ruissellement. Puis 7 jours après la première application, le pathogène est inoculé sous forme de dépôt d’une suspension de spores de Botrytis cinerea, à raison de 100 000 conidies par mL d’une solution de Tween 80 à 0,05 %. Il s’agit d’une souche de Botrytis cinerea (référence UBOCC-A-101100) fournie par l’Université de Bretagne Occidentale.
A nouveau 7 jours plus tard, les plantes sont récoltées, congelées dans l’azote liquide et conservées à -20 °C avant d’être analysées.
Pour les plantes de pomme de terre, c’est l’activité peroxydase qui a été évaluée selon le protocole décrit par J.S. Shindler, R. E. Childs, And W. G. Bardsley. Peroxidase from Human Cervical Mucus: The Isolation and Characterization. Eur. J. Biochem. 65, 325-331 (1976). Cette enzyme intervient dans la régulation du stress oxydatif et est classée parmi les PR protéines (« pathogenesis related proteins »).
Quatre produits ont été appliqués sur les plantes. Il s’agit de :
  • BF : blanc de formulation correspondant à une solution préparée dans l’eau distillée du tensio-actif associé au conservateur ;
  • BF + ETC : blanc de formulation BF préparé dans l’eau de Treignac concentrée selon l’Exemple 2 ;
  • COV + BF, à raison de 350 mg de matière sèche/L ;
  • COV + ETC : COV tel que ci-dessus pour lequel l’eau distillée est remplacée par de l’eau de Treignac concentrée selon l’Exemple 2.
Les activités peroxydase quantifiées chez des plantes de pomme de terre ayant subi un pré-traitement par les quatre produits ci-dessus sont exprimées en % de l’activité mesurée pour le témoin (blanc de formulation BF). Les barres portant des lettres différentes (a, b) correspondent à des résultats significativement différents au seuil de 5 % (Test de Kruskal Wallis, moyenne +/- ES, n=12) (ES : erreur-standard)
Les résultats sont rapportés sur la Figure 3 du dessin annexé.
Concernant le modèle de pomme de terre (plantes âgées de 2 mois), un effet bénéfique de l’association ETC – COV est observé pour l’activité peroxydase qui est souvent un marqueur très sensible des réactions de défense de la plante. L’activité est augmentée de 73 % par comparaison avec le témoin (BF) contre + 54 % pour COV seul ou + 25 % pour ETC seul.
L’expérience a été renouvelée avec des plants de tomate de variété Marmande (plantes âgées d’un mois). Le marqueur des réactions de défense est ici l’activité phénylalanine ammonia lyase (PAL) qui a été dosée suivant le protocole décrit par A. Francini, C. Nali, V. Picchi, G. Lorenzini. Metabolic changes in white clover clones exposed to ozone. Environmental and Experimental Botany 60 (2007) 11–19.
Les activités « Phenylalanine Ammonia Lyase » (PAL) quantifiées chez des plantes de tomate ayant subi un pré-traitement par les quatre mêmes produits que ci-dessus : BF ; BF+ETC ; COV dilué dans BF ; et COV+ETC sont exprimées en % de l’activité mesurée pour le témoin (blanc de formulation BF). Les barres portant des lettres différentes (a, b) correspondent à des résultats significativement différents au seuil de 5 % (Test de Kruskal Wallis, moyenne +/- ES, n=12)
Les résultats sont rapportés sur la Figure 4 du dessin annexé.
Les résultats attestent dans ce cas aussi d’un effet bénéfique COV-ETC sur le marqueur PAL, révélant l’intérêt de l’association (+ 21 % par rapport au témoin contre + 12 % pour COV seul).
Ainsi, les plants ayant subi un pré-traitement par l’association COV-ETC auront des défenses stimulées leur permettant de mieux résister aux attaques par les pathogènes ; l’association des deux produits permet d’obtenir une stimulation des défenses supérieure à celle de chacun des deux produits appliqués isolément.
Exemple 7 : Préparation d’une pulvérisation à base d’une composition de l’invention
La composition de l’invention est obtenue sous forme de solution par ajout de 56,61 mg d’extrait lyophilisé de Pleurotus ostreatus de l’Exemple 1 dans 300 mL d’eau de Treignac concentrée par osmose inverse, obtenue selon l’Exemple 2.
La solution est ensuite agitée par agitation mécanique à 1000 tours par minute jusqu’à totale dissolution de l’extrait, soit une durée d’environ 15 minutes. Cette solution est ensuite déposée dans un brumisateur de 300 mL avant d’être appliquée sur la peau.
Pour observer le comportement physique de cette solution, une étude par observation au microscope électronique à balayage a été effectuée en utilisant un support inerte pour déposer une goutte de la composition selon l’invention. La goutte est ensuite séchée sous une lampe permettant d’observer le film formé par la composition de l’invention après évaporation de l’eau.
Cette photographie au MEB est reproduite sur la Figure 5.
L’image obtenue au MEB montre des structures fractales en forme de fougères qui se sont formées sur un film complet. Le taux d’humidité très bas a engendré quelques craquelures du film (fissures visibles) permettant d’apercevoir le support d’observation (noir).
Cette image montre bien la présence d’un film complet recouvrant la totalité de la zone d’observation. Cette observation atteste donc de l’effet filmogène de la composition.
Exemple 8 : Préparation d’une pulvérisation à base d’une composition de l’invention
La composition de l’invention est obtenue sous forme de solution par ajout de 10 mg de l’extrait lyophilisé de Pleurotus ostreatus de l’Exemple 1 dans 500 mL d’eau de Treignac naturelle.
La solution est ensuite agitée par agitation mécanique à 1000 tours par minute jusqu’à totale dissolution de l’extrait, soit une durée d’environ 15 minutes. Cette solution est ensuite déposée dans un brumisateur de 500 mL avant d’être appliquée sur la peau.

Claims (16)

  1. – Composition comportant :
    1. un constituant filmogène apte à produire un film d’acide orthosilicique condensé après application en phase aqueuse sur une barrière biologique externe et évaporation de la phase aqueuse ; et
    2. au moins un extrait de parois cellulaires de champignons comestibles macroscopiques présentant une activité lorsqu’il est appliqué sur une barrière biologique externe,
    ladite composition étant apte à former, en application en phase aqueuse sur la barrière biologique externe et après évaporation de ladite phase aqueuse, un film d’acide orthosilicique condensé piégeant le constituant (II).
  2. – Composition selon la revendication 1, caractérisée par le fait que le constituant filmogène (I) est constitué par :
    a) une eau minérale présentant
    • une teneur en Si, exprimée en SiO2, inférieure à 30 mg/L, étant notamment de 6 à 9 mg/L ;
    • un résidu sec à 180°C inférieur à 30 mg/L ; et
    • un pH de 5 à 6,5 ; ou
    b) l’eau minérale définie en a) à l’état concentré, en particulier concentrée par osmose inverse ; ou
    c) un produit de déshydratation – tel qu’un lyophilisat – de l’eau minérale définie en b).
  3. – Composition selon la revendication 2, caractérisée par le fait que l’eau minérale est l’eau minérale de Treignac naturelle.
  4. - Composition selon l’une des revendications 1 à 3, caractérisée par le fait que le ou les extraits (II) se présentent en phase aqueuse ou sous forme déshydratée.
  5. – Composition selon l’une des revendications 1 à 4, caractérisée par le fait que le ou les extraits (II) sont des extraits alcalins.
  6. – Composition selon l’une des revendications 1 à 5, caractérisée par le fait que le ou les extraits (II) consistent en extraits de champignons macroscopiques comestibles choisis parmi les pleurotes, les coulemelles et les champignons de Paris.
  7. - Composition selon la revendication 6, caractérisée par le fait qu’un extrait (II) est obtenu ou susceptible d’être obtenu par :
    • extraction alcaline, par une solution aqueuse d’au moins une base en présence d’au moins un agent réducteur, d’au moins un champignon comestible macroscopique réduit en poudre, pour obtenir un mélange ayant une partie liquide contenant les matières extraites solubles et une partie solide formée de particules solides insolubles ;
    • filtration du mélange obtenu pour en retirer la partie solide et clarification éventuelle de la partie liquide ;
    • neutralisation de la partie liquide à l’aide d’au moins une résine échangeuse de cations et filtration/clarification éventuelle de la partie liquide ainsi neutralisée pour obtenir la substance biologiquement active en phase aqueuse ; et
    • traitement de la phase aqueuse obtenue choisi parmi une dilution dans l’eau, une concentration, une déshydratation et une lyophilisation pour obtenir une substance biologiquement active respectivement davantage diluée dans l’eau, en solution aqueuse davantage concentrée, déshydratée sous forme de poudre ou lyophilisée.
  8. - Composition selon la revendication 6, caractérisée par le fait qu’un extrait (II) est obtenu ou susceptible d’être obtenu par :
    • extraction alcaline d’une poudre de champignons macroscopiques comestibles, puis neutralisation de l’extrait obtenu avant de procéder à sa filtration ;
    • dilution de l’extrait filtré, puis hydrolyse enzymatique par une glycosidase entre 10 et 65°C de l’extrait filtré dilué, l’hydrolyse ainsi pratiquée étant arrêtée en inactivant l’enzyme à une température supérieure à 65°C ;
    • filtration de l’hydrolysat obtenu pour en isoler une fraction active de poids moléculaire inférieur à 100 kDa.
  9. – Composition selon l’une des revendications 2 à 8, caractérisée par le fait que le constituant (I) est de l’eau minérale telle que définie aux points (a) et (b) de la revendication 2, et le constituant (II) est dissous ou dispersé ou mélangé dans le constituant (I), à raison notamment de 10 mg à 50 g de matière sèche de constituant (II) dans 1 L de composition.
  10. – Composition selon l’une des revendications 2 à 8, caractérisée par le fait qu’elle se présente sous une forme pulvérulente, par exemple, lyophilisée, formée par le mélange du constituant (I) sous forme d’un produit de déshydratation, tel qu’un lyophilisat, d’eau minérale telle que définie au point (c) de la revendication 2, et du constituant (II) sous une forme pulvérulente, le rapport pondéral du constituant (I) à l’état pulvérulent au constituant (II) à l’état pulvérulent étant notamment compris entre 1/2000 et 10/1.
  11. – Utilisation d’une composition telle que définie à l’une des revendications 1 à 10 comme agent protecteur d’une barrière biologique à l’encontre d’une agression par au moins un agent exogène.
  12. – Utilisation selon la revendication 11, caractérisée par le fait que la barrière biologique est un tissu végétal, le ou les agents exogènes sont des champignons pathogènes, des bactéries, des virus, des insectes et/ou un agent agresseur physique, tel que la pluie, le gel, la température et les stress environnementaux, et l’agent protecteur est un agent protecteur/éliciteur/réparateur dudit tissu végétal, en particulier des plantes agronomiquement utiles ou ornementales, notamment pour un traitement préventif contre les maladies cryptogamiques et les maladies bactériennes, notamment celles choisies dans le groupe formé par les maladies de conservation des fruits, les maladies de la vigne, des arbres fruitiers, des cultures légumières et des céréales, et notamment contre le mildiou (Plasmopara viticola), l’oïdium (Erysiphe necator), les maladies causées par Xanthomonas sp., par Pseudomonas syringae, le feu bactérien (Erwinia amylovora), la pourriture grise (Botrytis cinerea), le mildiou (Phytophthora infestans) de la pomme de terre, la rouille jaune (Septoria sp., Stagonospora nodorum), la fusariose des épis (Fusarium graminearum) du blé et la tavelure du pommier (Venturia inaequalis), les maladies de conservation des pommes (Penicillium expansum), la moniliose (Monilia fructigena), les Gloésporioses (Neofabrea sp., Glomerella sp., Nectria sp.).
  13. – Composition de traitement protecteur d’une barrière biologique végétale, caractérisée par le fait qu’elle consiste en une composition telle que définie à l’une des revendications 1 à 10, le cas échéant en combinaison avec au moins un co-agent choisi parmi les agents de formulation compatibles, les agents anti-phytopathogènes, notamment choisis dans le groupe formé par les agents fongicides, les agents antibactériens, les agents antiviraux, les agents pesticides et les agents de biocontrôle, les éléments nutritifs pour les plantes, et les agents d’enrobage de fruits/légumes pour former une cire d’enrobage.
  14. – Procédé de traitement protecteur d’une barrière biologique végétale, caractérisé par le fait qu’il consiste à appliquer sur la barrière biologique végétale une composition selon la revendication 13 :
    • par pulvérisation, telle que brumisation, sur les parties aériennes des plantes, aux stades végétatifs précoces et/ou aux stades végétatifs adultes et reproducteurs, en une fois ou en plusieurs fois, par exemple jusqu’à 40 fois, à des intervalles de temps répétés, notamment tous les deux à trente jours, la composition étant appliquée en phase aqueuse, dans laquelle le mélange des constituants (I) et (II) est présent à raison notamment de 0,1 à 50 g de matière sèche /L ; ou
    • par trempage des produits récoltés, tels que fruits et légumes cueillis, dans ladite composition en phase aqueuse ; ou
    • par arrosage de racines par ladite composition en phase aqueuse ; ou
    • par enrobage de fruits/légumes, ladite composition en phase aqueuse ayant été placée sous la forme d’une cire d’enrobage,
    et dans le cas où le constituant filmogène (I) est constitué par un produit de déshydratation - tel qu’un lyophilisat - d’une eau minérale concentrée, le constituant (I), au moment de l’emploi, étant réhydraté par ajout d’une eau déminéralisée pour reconstituer ladite phase aqueuse.
  15. – Composition de traitement protecteur de la peau humaine ou animale, caractérisée par le fait qu’elle consiste en une composition telle que définie à l’une des revendications 1 à 10, en milieux aqueux ou à l’état de poudre en combinaison avec au moins un adjuvant cosmétique.
  16. – Procédé de traitement protecteur de la peau humaine ou animale, caractérisé par le fait qu’il consiste à répartir par étalement ou pulvérisation la composition telle que définie à la revendication 15, notamment sous forme de crème ou de solution, sur la zone de peau à traiter pour obtenir sur la peau un effet protecteur à chaque application, notamment à raison de 0,005 à 100 g de mélange des constituants (I) et (II) pour 100 g de composition.
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