WO2020027239A1 - Ｃｄｃａ１由来ペプチドおよびそれを含むワクチン - Google Patents

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祥子 山下
哲郎 引地
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Definitions

  • the present invention relates to the field of biological science, more specifically, to the field of cancer treatment.
  • the present invention relates to a novel peptide effective as a cancer vaccine, a method for treating and / or preventing cancer using the peptide, and a pharmaceutical composition containing the peptide.
  • Cytotoxic T lymphocytes are tumor-associated antigens (tumor-associated antigens) that are presented on major histocompatibility complex (MHC) class I molecules expressed on tumor cell surfaces. It is known to recognize epitope peptides derived from TAA) and then kill tumor cells. To date, many TAAs, including the melanoma antigen (MAGE) family, have been discovered by an immunological approach (Non-Patent Document 1: Boon T, Int J Cancer 1993, 54 (2): 177-80; Non-Patent Document 2: Boon T & van der Bruggen P, J Exp Med Med 1996, 183 (3): 725-9). Immunotherapy targeting these TAAs is currently undergoing clinical development.
  • MHC major histocompatibility complex
  • Non-Patent Document 3 Harris CC, J Natl Cancer Inst 1996, 88 (20): 1442-55;
  • Non-patent document 4 Butterfield LH et al., Cancer Res 1999, 59 (13): 3134-42;
  • Non-patent document 5 Vissers JL et al., Cancer Res 1999, 59 (21
  • Non-patent document 6 van der Burg SH et al., J Immunol 1996, 156 (9) 3308-14;
  • Non-patent document 7 Tanaka F et al., Cancer Res 1997, 57 (20)
  • Non Patent Literature 8 Fujie Tet et al., Int J Cancer 1999, 80 (2): 169-72;
  • Non Patent Literature 9 Kikuchi Met al., Int J Cancer 1999, 81 (3)
  • Non-Patent Document 10 Oiso M et al., In
  • CDCA1 cell division cycle associated 1
  • NUF2, NDC80 kinetochore complex component NUF2, NDC80 kinetochore complex component: Nuf2
  • Reference sequence GeneBank accession number NM_145697 (SEQ ID NO: 44) or GeneBank accession number NM_031423 (SEQ ID NO: 46)
  • CDC2 cyclin, topoisomerase II and other cell cycle genes
  • CDCA1 has been found to be associated with the centromere of mitotic Hela cells and is considered to be a functional homolog of yeast Nuf2 (Non-Patent Document 15: Wigge PA et al., J Cell Biol 2001) , 152 (2): 349-60).
  • CDCA1 was identified as a gene whose expression was enhanced in non-small cell lung cancer by a gene expression profile based on a genome wide cDNA microarray targeting 27,648 genes (Non-Patent Document 16: Hayama et al., Cancer ⁇ Res ⁇ 2006, @ 66 (21): 10339-48; Patent Document 1: WO2007 / 013480; Patent Document 2: WO2005 / 089735).
  • Non-Patent Document 16 While expression of CDCA1 is observed in lung cancer tissues and lung cancer cell lines, almost no expression is observed in 22 normal tissues except testis (Non-Patent Document 16; Patent Document 1). Furthermore, suppression of CDCA1 expression by siRNA results in suppression of cell growth in a lung cancer cell line that expresses CDCA1 (Non-Patent Document 16; Patent Document 1-2). In addition, increased expression of CDCA1 has also been observed in various carcinomas such as cholangiocarcinoma, bladder cancer, and renal cell carcinoma (Non-Patent Document 17: Harao Met et al., Int J Cancer 2008, 123 (11): 2616-25).
  • HLA-A02-restricted CTL epitope peptides derived from CDCA1 Non-patent document 17: Harao et al., Int J Cancer. 2008, 123 (11): 2616-25; Patent document 3: WO2009 / 025117), HLA -A24 restricted CTL epitope peptide (Patent Document 4: WO2009 / 153992), HLA-A11 restricted CTL epitope peptide (Patent Document 5: WO2016 / 021508), HLA-A33 restricted CTL epitope peptide (Patent Document 5: WO2016 / 021508) and an HLA-A03-restricted CTL epitope peptide (Patent Document 5: WO2016 / 021508).
  • Therapeutic effects of these peptides can be expected in cancer patients with HLA-A02, HLA-A24, HLA-A11, HLA-A33 or HLA-A03, but have other HLA types In cancer patients, peptides corresponding to each HLA type are desired.
  • the present invention relates to a peptide capable of inducing a cytotoxic T cell (CTL) that specifically reacts with a CDCA1-expressing cell.
  • CTL cytotoxic T cell
  • APCs antigen-presenting cells
  • HLA human leukocyte antigen
  • CD8-positive T cells they exhibit peptide-specific cytotoxic activity.
  • the indicated CTL is induced.
  • the CDCA1-derived peptides having CTL inducing ability identified so far are HLA-A02 restricted, HLA-A24 restricted, HLA-A11 restricted, HLA-A33 restricted or HLA-A03 restricted peptides. If the antigen-presenting cells do not express these HLA, CTL cannot be induced.
  • HLA-A01 is an HLA allele frequently found in Caucasians (CaoCK et al., Hum Immunol 2001, 62 (9): 1009-30). It is desirable to administer HLA-A01-restricted peptides to HLA-A01-positive cancer patients. Therefore, the present invention relates to a peptide derived from CDCA1 restricted to HLA-A01 and capable of inducing CTL. The results disclosed herein demonstrate that the peptides of the invention are epitope peptides capable of inducing a strong and specific immune response against cancer cells expressing CDCA1 and HLA-A01.
  • CDCA1-derived peptide capable of inducing CTL in an HLA-A01 restricted manner.
  • These peptides can be used to induce CTL in vitro, ex vivo or in vivo, or can be used to administer to a subject for the purpose of inducing an immune response against cancer cells that express CDCA1.
  • Preferred peptides are those comprising an amino acid sequence selected from SEQ ID NOs: 1, 8, 10, 13, 25, 33-35 and 37, more preferably nonapeptides or decapeptides, even more preferably SEQ ID NOs: It is a peptide having an amino acid sequence selected from among 1, 8, 10, 13, 25, 33 to 35 and 37.
  • Peptides of the present invention are peptides in which one, two, or more amino acids have been substituted, deleted, inserted and / or added, as long as the resulting modified peptide retains the CTL inducibility of the original peptide. Is also included.
  • the present invention also provides an isolated polynucleotide encoding any one of the peptides of the present invention. These polynucleotides, like the peptide of the present invention, can be used for inducing APC having CTL inducing ability, or administered to a subject to induce an immune response against a cancer cell expressing CDCA1. be able to.
  • the invention also provides one or more peptides of the invention, one or more polynucleotides encoding one or more peptides of the invention, APCs of the invention, peptides of the invention.
  • Compositions comprising exosomes and / or CTLs of the invention are provided.
  • the composition of the present invention is preferably a pharmaceutical composition.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be used for treating and / or preventing cancer and preventing its recurrence after surgery. It can also be used to induce an immune response to cancer.
  • a peptide of the invention is displayed on the surface of an APC, thereby inducing a CTL targeting the peptide.
  • compositions for inducing CTL comprising one or more peptides of the present invention, one or more polynucleotides encoding one or more peptides of the present invention. It is a further object of the present invention to provide compositions comprising APCs and / or exosomes displaying the peptides of the invention.
  • a method for inducing APC having CTL inducibility comprising contacting APC with one or more peptides of the present invention, or introducing a polynucleotide encoding any one of the peptides of the present invention into APC. It is a further object of the present invention to provide a method comprising the steps of:
  • the present invention also provides a step of co-culturing CD8-positive T cells with APC that presents a complex of the HLA antigen and the peptide of the present invention on its own surface.
  • Co-culture with exosomes presenting their complex on their own surface, or of a T cell receptor (TCR) capable of binding to the peptide of the present invention presented by the HLA antigen on the cell surface Provided is a method for inducing CTL, comprising a step of introducing a vector containing a polynucleotide encoding each subunit into CD8-positive T cells.
  • the present invention further provides an isolated CTL that targets the peptide of the present invention.
  • a method for inducing an immune response against cancer in a subject comprising: a peptide of the present invention or a polynucleotide encoding the peptide, an APC of the present invention, an exosome presenting the peptide of the present invention, and / or a CTL of the present invention. It is another object of the present invention to provide a method comprising administering a composition comprising the composition to the subject.
  • a method for treating and / or preventing cancer in a subject and preventing its recurrence after surgery comprising the steps of: encoding the peptide of the present invention, a polynucleotide encoding the peptide, the APC of the present invention, and the peptide of the present invention; It is another object of the present invention to provide a method comprising administering to a subject an exosome present and / or a CTL of the invention.
  • FIG. 1 is composed of photographs (a) to (j) showing the results of an IFN- ⁇ enzyme-linked immunospot (ELISPOT) assay performed using cells induced with a peptide derived from CDCA1.
  • ELISPOT enzyme-linked immunospot
  • CDCA1-A01-10-66 (SEQ ID NO: 9) (j) is an example of typical negative data in which no peptide-specific IFN- ⁇ production was observed.
  • FIG. 2 shows the limits after induction with CDCA1-A01-10-136 (SEQ ID NO: 8), CDCA1-A01-10-56 (SEQ ID NO: 10) or CDCA1-A01-10-48 (SEQ ID NO: 13). It consists of a series of line graphs (a) to (c) showing IFN- ⁇ production of the CTL clone established by the dilution method. These results indicate peptide-specific IFN- ⁇ production of the CTL clone. In the figure, “+” indicates IFN- ⁇ production of CTL clones against target cells pulsed with the target peptide, and “ ⁇ ” indicates IFN- ⁇ production of CTL clones on target cells not pulsed with any peptide. Is shown. The R / S ratio indicates the ratio of the number of CTL clones that are responding cells (Responder @ cells) to the number of target cells (Stimulator @ cells) that stimulate the cells.
  • FIG. 3 is a line graph showing IFN- ⁇ production of CTL clones against target cells expressing both CDCA1 and HLA-A * 01 : 01.
  • COS7 cells expressing only either HLA-A * 01 : 01 or the full-length CDCA1 gene were used as negative controls.
  • CTL clones established after induction with CDCA1-A01-10-136 SEQ ID NO: 8) showed IFN- ⁇ production on COS7 cells transfected with both CDCA1 and HLA-A * 01: 01 genes (Black rhombus).
  • COS7 cells transfected with either HLA-A * 01 : 01 (triangle) or CDCA1 (open circle) did not show significant IFN- ⁇ production.
  • the words “a”, “an” and “the” mean “at least one” unless otherwise specified.
  • the terms “isolated” and “purified” when used in reference to a substance refer to at least one substance that the substance could otherwise contain in a natural source. Indicates that it is not substantially contained.
  • an isolated or purified peptide refers to a peptide that is substantially free of other cellular material from the cell or tissue source from which the peptide was derived, such as carbohydrates, lipids, and other contaminating proteins.
  • isolated or purified peptide refers to a peptide that is substantially free of precursors or other chemicals.
  • substantially free of cellular material includes preparations of peptides in which the peptides have been separated from the cellular components of the cells from which they were isolated or recombinantly produced.
  • a peptide substantially free of cellular material contains less than about 30%, 20%, 10%, or 5%, 3%, 2% or 1% (dry weight basis) of other cellular material. Preparations of peptides.
  • the isolated or purified peptide is substantially free of culture medium, and the peptide substantially free of culture medium is the culture medium containing about 20% of the volume of the peptide preparation, Include preparations of peptides containing less than 10%, or 5%, 3%, 2% or 1% (dry weight basis).
  • the isolated or purified peptide is substantially free of precursors and other chemicals, and the peptide substantially free of precursors and other chemicals is Preparations of peptides containing less than about 30%, 20%, 10%, 5%, 3%, 2% or 1% (dry weight basis) of precursor substances and other chemicals by volume of the peptide preparation Is included.
  • the particular peptide preparation is an isolated or purified peptide, as indicated by the appearance of a single band after sodium dodecyl sulfate (SDS) -polyacrylamide gel electrophoresis and Coomassie brilliant blue staining of the gel, for example. You can check.
  • the peptides and polynucleotides of the invention are isolated or purified.
  • polypeptide refers to a polymer of amino acid residues.
  • the term applies to non-naturally occurring amino acid polymers as well as non-naturally occurring amino acid polymers containing one or more non-naturally occurring amino acid residues.
  • Unnatural amino acids include amino acid analogs and amino acid mimetics.
  • amino acid refers to naturally occurring amino acids, as well as amino acid analogs and amino acid mimetics that function similarly to naturally occurring amino acids.
  • Naturally occurring amino acids are those encoded by the genetic code, as well as those amino acids that are post-translationally modified in cells, such as hydroxyproline, ⁇ -carboxyglutamic acid, and O-phosphoserine.
  • amino acid analog has the same basic chemical structure (hydrogen, carboxy, amino, and alpha carbon attached to the R group) as a natural amino acid, but has a modified R group or modified backbone Refers to compounds such as homoserine, norleucine, methionine sulfoxide and methionine methylsulfonium.
  • amino acid mimetic refers to a compound that has a structure different from common amino acids, but that has a function similar to an amino acid.
  • the amino acids may be either L-amino acids or D-amino acids, but the peptide of the present invention is preferably a polymer of L-amino acids.
  • polynucleotide oligonucleotide
  • nucleic acid refers to a polymer of nucleotides.
  • composition is intended to include products that contain a specified amount of a particular component, and any products that result directly or indirectly from a combination of a particular amount of a particular component. You.
  • composition refers to the product comprising the active and inactive ingredients, and the combination, complexation, or aggregation of any two or more ingredients It is intended to include any product that results directly or indirectly from the dissociation of one or more components or from other types of reactions or interactions of one or more components.
  • the pharmaceutical compositions of the present invention include any composition made by mixing a compound or cells of the present invention with a pharmaceutically or physiologically acceptable carrier.
  • the phrase "pharmaceutically acceptable carrier” or “physiologically acceptable carrier” includes liquid or solid fillers, diluents, excipients, solvents and encapsulating materials. Without limitation, it refers to a pharmaceutically or physiologically acceptable material, composition, substance, or medium.
  • cancer refers to cancers that overexpress the CDCA1 gene, including bladder cancer, breast cancer, cervical cancer, cholangiocellular carcinoma, chronic myeloid leukemia (CML) ), Esophageal cancer, stomach cancer, non-small cell lung cancer, lymphoma, osteosarcoma, prostate cancer, kidney cancer, small cell lung cancer, head and neck cancer, soft tissue tumor, and colon cancer It is not limited to.
  • the “cancer” is a cancer that expresses CDCA1 and HLA-A01.
  • cytotoxic T lymphocyte cytotoxic T cell
  • CTL cytotoxic T cell
  • HLA-A01 (HLA-A1) refers to HLA-A * 01: 01, HLA-A * 01: 02, HLA-A * 01: 03, HLA-A * 01: 04, etc.
  • HLA-A01 type including the subtype of
  • the phrase "the subject (or patient) HLA antigen is HLA-A01” refers to a subject or patient whose MHC (major histocompatibility complex) class I refers to possessing the HLA-A01 antigen gene as a molecule homozygously or heterozygously, and expressing the HLA-A01 antigen as an HLA antigen in cells of a subject or patient.
  • the treatment will be of clinical benefit, e.
  • a treatment is considered “effective” if it results in delay, alleviation of clinical symptoms of cancer, prolonged survival, suppression of postoperative recurrence, and the like.
  • Effective when the treatment is applied prophylactically, means that the treatment delays or prevents the formation of the cancer or prevents or alleviates the clinical symptoms of the cancer. Efficacy is determined in connection with any known method for diagnosing or treating a particular tumor type.
  • prevention is used herein to refer to any function that reduces the burden of disease mortality or morbidity.
  • Prevention can be at "primary, secondary, and tertiary levels of prevention". Primary prevention avoids disease outbreaks, whereas secondary and tertiary levels of prevention, in addition to preventing disease progression and the appearance of symptoms, restore function and reduce disease-related And work to reduce the adverse effects of pre-existing disease by reducing the complications of the disease.
  • prevention may include a wide range of prophylactic treatments aimed at lessening the severity of the particular disorder, for example, reducing tumor growth and metastasis.
  • the treatment and / or prevention of cancer and / or the prevention of its recurrence after surgery includes inhibiting the growth of cancer cells, regressing or regressing tumors, inducing remission and causing cancer development. Includes any of the following events: suppression, tumor regression, and reduction or inhibition of metastasis, suppression of postoperative recurrence of cancer, and prolongation of survival.
  • Effective treatment and / or prevention of cancer reduces mortality, improves the prognosis of individuals with cancer, reduces levels of tumor markers in the blood, and detects detectable symptoms associated with cancer To relax. For example, alleviation or amelioration of a symptom constitutes effective treatment and / or prevention, including 10%, 20%, 30% or more reduction or stable symptoms.
  • the term “antibody” refers to immunoglobulins and fragments thereof that specifically react with a specified protein or peptide thereof.
  • Antibodies can include human antibodies, primatized antibodies, chimeric antibodies, bispecific antibodies, humanized antibodies, antibodies fused to other proteins or radiolabels, and antibody fragments.
  • the term “antibody” is used in a broad sense herein, and specifically includes intact monoclonal antibodies, polyclonal antibodies, multispecific antibodies formed from two or more intact antibodies (eg, bispecific antibodies). And antibody fragments so long as they exhibit the desired biological activity.
  • An “antibody” can be an antibody of any class (eg, IgA, IgD, IgE, IgG, and IgM).
  • the peptide HLA-A01 is a common HLA allele in Caucasians (Cao et al., Hum Immunol 2001, 62 (9): 1009-30). Therefore, by providing a CDCA1-derived CTL-inducing peptide restricted by HLA-A01, many Caucasians can be provided with an effective treatment method for a CDCA1-expressing cancer. Thus, the present invention provides a CDCA1-derived peptide capable of inducing CTL in an HLA-A01 restricted manner.
  • the peptide of the present invention is a peptide derived from CDCA1 that can induce CTL in an HLA-A01 restricted manner.
  • Peptides capable of inducing CTL in an HLA-A01 restricted manner include peptides having an amino acid sequence selected from SEQ ID NOs: 1, 8, 10, 13, 25, 33-35 and 37.
  • CTLs having cytotoxic activity specific to these peptides By in vitro stimulation of T cells by dendritic cells pulsed with these peptides, CTLs having cytotoxic activity specific to these peptides can be established. The established CTLs show specific cytotoxic activity against target cells pulsed with each peptide.
  • the CDCA1 gene is found on cancer cells such as bladder cancer, breast cancer, cervical cancer, cholangiocellular carcinoma, chronic myelogenous leukemia (CML), esophageal cancer, stomach cancer, non-small cell lung cancer, lymphoma, osteosarcoma, It is overexpressed in cancer cells such as prostate, kidney, small cell lung, head and neck, soft tissue, and colorectal, but is not expressed in most normal organs.
  • CML chronic myelogenous leukemia
  • esophageal cancer esophageal cancer
  • stomach cancer non-small cell lung cancer
  • lymphoma lymphoma
  • osteosarcoma esarcoma
  • Preferred peptides are nonapeptides (peptides consisting of 9 amino acid residues) or decapeptides (peptides consisting of 10 amino acid residues), and those of SEQ ID NOs: 1, 8, 10, 13, 25, 33-35 and 37.
  • a peptide consisting of an amino acid sequence selected from among them is more preferred.
  • a peptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8 is suitable for inducing CTLs that exhibit specific cytotoxic activity against cells expressing HLA-A01 and CDCA1, Can be suitably used for immunotherapy of cancer in.
  • the peptide of the present invention is a peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8.
  • the peptide of the present invention can have additional amino acid residues adjacent to the amino acid sequence of the peptide of the present invention, as long as the resulting peptide retains the ability to induce the original peptide CTL.
  • the additional amino acid residues can be composed of any type of amino acids, as long as they do not impair the CTL inducing ability of the original peptide. Therefore, the peptide of the present invention includes a peptide having an ability to induce CTL, comprising an amino acid sequence selected from SEQ ID NOs: 1, 8, 10, 13, 25, 33 to 35 and 37.
  • Such peptides are, for example, less than about 40 amino acids, often less than about 20 amino acids, and usually less than about 15 amino acids.
  • the peptide of the present invention includes a peptide having a length of 10 amino acids, or 11 to 40 amino acids generated by flanking an additional amino acid with the peptide if the original peptide is a nonapeptide. If the original peptide is a decapeptide, it includes peptides having a length of 11 to 40 amino acids. Such a peptide can be, for example, a peptide of 11-20 amino acids in length, and can be a peptide of 11-15 amino acids in length.
  • Preferred examples of the additional amino acid residue are amino acid residues adjacent to the amino acid sequence of the peptide of the present invention in the full-length amino acid sequence of CDCA1 (for example, SEQ ID NO: 64).
  • the peptide of the present invention is a peptide fragment of CDCA1 comprising an amino acid sequence selected from among SEQ ID NOs: 1, 8, 10, 13, 25, 33 to 35 and 37, and having a CTL-inducing ability. And peptides.
  • modification of one, two or more amino acids in a peptide does not affect the function of the peptide, and may even enhance the desired function of the original peptide.
  • the modified peptide ie, one, two, or several amino acid residues have been modified (ie, substituted, deleted, inserted and / or added) compared to the original reference sequence) Peptides composed of amino acid sequences
  • Peptides composed of amino acid sequences are known to retain the biological activity of the original peptide (Mark et al., Proc Natl Acad Sci USA USA 1984, 81: 5662-6; Zoller and Smith, Nucleic Acids) Res 1982, 10: 6487-500; Dalbadie-McFarland et al., Proc Natl Acad Sci USA 1982, 79: 6409-13).
  • the peptide of the invention comprises one, two or several amino acid sequences relative to an amino acid sequence selected from among SEQ ID NOs: 1, 8, 10, 13, 25, 33-35 and 37. May have a substitution, deletion, insertion and / or addition amino acid sequence, and may be a peptide capable of inducing CTL.
  • Examples of properties of functionally similar amino acid side chains include, for example, hydrophobic amino acids (A, I, L, M, F, P, W, Y, V), hydrophilic amino acids (R, D, N, C, E, Q, G, H, K, S, T), as well as side chains having the following functional groups or features in common: aliphatic side chains (G, A, V, L, I, P); hydroxyl group-containing side chains (S, T, Y); sulfur atom-containing side chains (C, M); carboxylic acid and amide-containing side chains (D, N, E, Q); base-containing side chains (R, K, H); and aromatic containing side chains (H, F, Y, W).
  • hydrophobic amino acids A, I, L, M, F, P, W, Y, V
  • hydrophilic amino acids R, D, N, C, E, Q, G, H, K, S, T
  • side chains having the following functional groups or features in common aliphatic side chains (G,
  • the following eight groups each include amino acids that are recognized in the art as being conservative substitutions for one another: 1) Alanine (A), glycine (G); 2) aspartic acid (D), glutamic acid (E); 3) Asparagine (N), glutamine (Q); 4) Arginine (R), lysine (K); 5) isoleucine (I), leucine (L), methionine (M), valine (V); 6) phenylalanine (F), tyrosine (Y), tryptophan (W); 7) serine (S), threonine (T); and 8) Cysteine (C), methionine (M) (see, eg, Creighton, Proteins 1984).
  • Such conservatively modified peptides are also included in the peptide of the present invention.
  • the peptide of the present invention is not limited to these, and may include non-conservative modifications as long as the modified peptide retains the CTL-inducing ability of the original peptide.
  • the modified peptides do not exclude polymorphic variants, interspecies homologs, and allele-derived CTL-inducible peptides of CDCA1.
  • Alter eg, substitute, delete, insert and / or add
  • a small number eg, one, two, or few
  • a small percentage of amino acids as long as the original peptide retains the ability to induce CTL. can do.
  • severe means 5 or less amino acids, such as 4 or 3 or less.
  • the percentage of amino acids to be modified is preferably 20% or less, more preferably 15% or less, even more preferably 10% or less, or 1-5%.
  • the peptides of the present invention are presented on the surface of cells or exosomes, preferably as a complex with an HLA antigen. Therefore, the peptide of the present invention preferably has a high binding affinity for HLA antigen. Therefore, the peptide may be modified by substitution, deletion, insertion and / or addition of amino acid residues to obtain a modified peptide having improved binding affinity.
  • the second amino acid from the N-terminus and the amino acid at the C-terminus are often anchor residues involved in binding to HLA Class I (Rammensee HG et al.). ., Immunogenetics. 1995, 41 (4): 178-228.).
  • anchor residues having high binding affinity to HLA-A01.
  • HLA-A01 has an auxiliary anchor residue at the second position from the N-terminus, and that the second amino acid from the N-terminus is preferably threonine or serine.
  • the second amino acid from the N-terminus is preferably threonine or serine.
  • the second amino acid from the N-terminus may be replaced with threonine or serine. Therefore, in the amino acid sequence selected from SEQ ID NOs: 1, 8, 10, 13, 25, 33 to 35 and 37, the second amino acid from the N-terminus is substituted with threonine or serine.
  • a peptide having an ability to induce CTL containing an amino acid sequence, wherein the third amino acid is substituted with aspartic acid or glutamic acid and / or the C-terminal amino acid is substituted with tyrosine is included in the peptide of the present invention. .
  • the peptide of the present invention has an amino acid sequence selected from SEQ ID NOs: 1, 8, 10, 13, 25, 33 to 35 and 37, wherein the second amino acid from the N-terminal is threonine or serine. Substituted, the third amino acid from the N-terminus is substituted with aspartic acid or glutamic acid, and / or the C-terminal amino acid is substituted with tyrosine. obtain. That is, the peptide of the present invention is selected from the following (a) to (c) in the amino acid sequence selected from SEQ ID NOs: 1, 8, 10, 13, 25, 33 to 35 and 37.
  • a peptide capable of inducing CTL comprising an amino acid sequence having one or more substitutions: (A) the second amino acid from the N-terminus is substituted with threonine or serine; (B) the third amino acid from the N-terminus has been replaced with aspartic acid or glutamic acid; (C) The C-terminal amino acid has been substituted with tyrosine.
  • the peptide of the present invention comprises the amino acid sequence selected from SEQ ID NOs: 1, 8, 10, 13, 25, 33 to 35 and 37 in the above (a) to (c) It may be a peptide having an ability to induce CTL, which comprises an amino acid sequence in which one or more substitutions are selected.
  • the preferred number of substitutions is one, two or three substitutions selected from the above (a) to (c).
  • the third amino acid from the N-terminal is substituted with aspartic acid or glutamic acid.
  • the third amino acid from the N-terminal is aspartic acid or glutamic acid.
  • the peptide of the present invention has the following amino acid sequence (a) and (b) relative to an amino acid sequence selected from SEQ ID NOs: 1, 8, 10, 13, 25, 33 to 35 and 37. It may be a peptide capable of inducing CTL, comprising a selected amino acid sequence with one or more substitutions: (A) the third amino acid from the N-terminus is substituted with aspartic acid or glutamic acid; and (b) the C-terminal amino acid is substituted with tyrosine.
  • the peptide of the present invention differs from the above (a) to (b) with respect to an amino acid sequence selected from SEQ ID NOs: 1, 8, 10, 13, 25, 33 to 35 and 37. It may be a peptide having an ability to induce CTL, which comprises an amino acid sequence in which one or more substitutions are selected.
  • Substitutions can be introduced not only at the amino acid at the anchor site, but also at the potential T cell receptor (TCR) recognition site of the peptide.
  • TCR T cell receptor
  • Some studies have shown that peptides with amino acid substitutions, such as CAP1, p53 (264-272) , Her-2 / neu (369-377) , or gp100 (209-217) , have comparable activities to the original peptide. Or have better activity (Zaremba et al. Cancer Res. 1997, 57, 4570-7, TK Hoffmann et al. J Immunol. 2002, 168 (3): 1338- 47, SO Dionne et al. Cancer Immunol immunother. 2003, 52: 199-206, and SO Dionne et al. Cancer Immunology, Immunotherapy 2004, 53, 307-14).
  • the present invention also relates to the N-terminal and / or C-terminal of the peptide of the present invention (eg, a peptide consisting of an amino acid sequence selected from among SEQ ID NOs: 1, 8, 10, 13, 25, 33 to 35 and 37). It is contemplated that one, two, or several amino acids can be added to the protein. Such modified peptides that retain the ability to induce CTL are also included in the present invention. For example, a peptide having one, two, or several amino acids added to the N-terminus and / or C-terminus of a peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8 is brought into APC when brought into contact with APC.
  • the peptide of the present invention can be a peptide having one, two, or several amino acids added to either or both of the N-terminus and the C-terminus.
  • the amino acid sequence referred to by each SEQ ID NO includes one, two, or several amino acid substitutions, and N-terminal and C-terminal of the substituted amino acid sequence , An amino acid sequence obtained by adding one, two, or several amino acids to either or both. If the peptide of the invention contains amino acid substitutions, the desired substitution positions are referred to, for example, by SEQ ID NOs: 1, 8, 10, 13, 25, 33-35 and 37, which are included in the peptides of the invention.
  • the amino acid sequence may be one, two or three selected from the second from the N-terminal, the third from the N-terminal, and the C-terminal.
  • the amino acid sequence of the peptide is identical to a portion of the amino acid sequence of an endogenous or exogenous protein having a different function, side effects such as autoimmune disorders and / or allergic symptoms to certain substances may be induced. There is. Therefore, in order to avoid situations where the amino acid sequence of the peptide matches the amino acid sequence of another protein, it is preferable to perform a homology search using available databases. If the homology search reveals that none of the peptides differ by one or two amino acids compared to the peptide of interest, HLA antigens can be used without the risk of such side effects.
  • the subject peptide can be modified to increase its binding affinity and / or to increase its ability to induce CTL.
  • peptide capable of inducing CTL refers to a peptide whose CTL is induced by APC stimulated with the peptide.
  • “Induction of CTL” includes differentiation induction into CTL, induction of CTL activation, induction of CTL proliferation, induction of cytotoxic activity of CTL, induction of target cell lysis by CTL, and increase of CTL IFN- ⁇ production Induction is included.
  • Confirmation of the CTL inducibility is achieved by inducing APCs (eg, B lymphocytes, macrophages, and dendritic cells) bearing HLA antigens, stimulating them with peptides, mixing with CD8-positive T cells, and then targeting target cells. On the other hand, it can be carried out by measuring IFN- ⁇ released by CTL.
  • APCs eg, B lymphocytes, macrophages, and dendritic cells
  • the APC preferably, dendritic cells derived from human peripheral blood mononuclear leukocytes can be used.
  • a transgenic animal prepared to express the HLA antigen can also be used.
  • target cells can be radiolabeled with 51 Cr or the like, and the cytotoxic activity of CTL induced by the peptide can be calculated from the radioactivity released from the target cells.
  • the IFN- ⁇ produced and released by the CTL in the presence of APC stimulated with the peptide is measured, and the inhibition zone on the medium is visualized using an anti-IFN- ⁇ monoclonal antibody, so that the CTL inducibility can be improved. Can be evaluated.
  • the peptides of the present invention can also be linked to other peptides as long as the resulting linking peptide retains CTL inducing ability.
  • suitable peptides linked to the peptides of the present invention include CTL-inducing peptides derived from TAA.
  • the peptides of the present invention can be linked to each other. Suitable linkers that can be used for linkage between peptides are known in the art, for example, AAY (P. M. Daftarian et al., J Trans Trans Med. 2007, 5:26), AAA, NKRK (SEQ ID NO: 48) ) (R. P. M. Sutmuller et al., J Immunol.
  • the peptides can be linked in various configurations (eg, linked, overlapping, etc.), and three or more peptides can be linked.
  • the peptide of the present invention can also be linked to other substances as long as the resulting linking peptide retains the ability to induce CTL.
  • suitable substances to be linked to the peptide of the present invention include, for example, peptides, lipids, sugars or sugar chains, acetyl groups, and natural or synthetic polymers.
  • the peptide of the present invention can be subjected to modifications such as glycosylation, side chain oxidation, or phosphorylation as long as the ability to induce CTL is not impaired. These types of modifications can be made to confer additional functions, such as targeting and delivery functions, or to stabilize the peptide.
  • Peptide stability can be assayed in several ways. For example, stability can be tested using peptidases and various biological media, such as human plasma and serum (see, e.g., Verhoef et al., Eur J Drug Drug Metab Pharmacokin 1986, 11: 291-302). I want to.)
  • the present invention also provides a method for screening or selecting a modified peptide having the same or higher activity compared to the original.
  • the present invention provides a method of screening for a peptide capable of inducing CTL, comprising the following steps: (A) SEQ ID NO: 1, 2, or several amino acids with respect to the original amino acid sequence consisting of an amino acid sequence selected from among 1, 8, 10, 13, 25, 33 to 35 and 37 Creating a candidate sequence consisting of an amino acid sequence in which residues have been substituted, deleted, inserted, and / or added; (B) selecting from the candidate sequences created in (a) candidate sequences that do not have significant homology (sequence identity) with any known human gene product other than CDCA1; (C) contacting the peptide consisting of the candidate sequence selected in (b) with APC; (D) contacting the APC of (c) with CD8-positive T cells; and (e) selecting a peptide having a CTL inducing ability equal to or higher than that of the peptide having the original amino acid sequence.
  • A SEQ ID NO: 1, 2, or several amino acids with respect to the original amino acid sequence consisting of an
  • the peptides consisting of SEQ ID NOs: 1, 8, 10, 13, 25, 33 to 35 and 37 all have HLA-A01-restricted CTL-inducing activity. Therefore, in order to select a cell having the ability to induce CTL from those having modified amino acid sequences, the APC in the step (c) is preferably a cell having HLA-A01.
  • the peptide of the present invention is also described as “CDCA1 peptide” or “CDCA1 polypeptide”.
  • the peptides of the invention can be prepared using well-known techniques.
  • the peptides of the invention can be prepared using recombinant DNA technology or chemical synthesis.
  • the peptides of the present invention can be synthesized individually or as longer polypeptides comprising two or more peptides.
  • the peptide of the invention can be isolated from the host cell or from a synthetic reaction after production in the host cell using recombinant DNA technology or after chemical synthesis. That is, the peptides of the invention can be purified or isolated to be substantially free of other host cell proteins and fragments thereof, or any other chemicals.
  • ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ Peptides of the present invention can include modifications such as glycosylation, side chain oxidation, or phosphorylation, as long as the modifications do not impair the biological activity of the original peptide.
  • modifications include incorporation of D-amino acids or other amino acid mimetics that can be used, for example, to extend the serum half-life of the peptide.
  • the peptide of the present invention can be obtained by chemical synthesis based on the selected amino acid sequence.
  • Examples of conventional peptide synthesis methods that can be adapted for the synthesis include those described in the following literature: (I) Peptide Synthesis, Interscience, New York, 1966; (Ii) The Proteins, Vol.
  • any of the known genetic engineering methods for producing peptides can be adapted to obtain the peptides of the invention (eg, Morrison J, J Bacteriology 1977, 132: 349-51; Clark-Curtiss & Curtiss, Wu et al. Methods in Enzymology 1983, 101: 347-62).
  • an appropriate vector containing a polynucleotide encoding the peptide of the present invention in a form that allows expression thereof is prepared and transformed into an appropriate host cell.
  • the host cell is cultured to produce the peptide of the present invention.
  • the peptide of the present invention can be produced in vitro using an in vitro translation system.
  • polynucleotides that encode any of the peptides of the invention. These include polynucleotides from the native CDCA1 gene (eg, GenBank accession number NM_145697 (SEQ ID NO: 44) or GenBank accession number NM_031423 (SEQ ID NO: 46)), and conservatively modified nucleotide sequences thereof. Polynucleotides. As used herein, the phrase "conservatively modified nucleotide sequence" refers to a sequence that encodes the same or essentially the same amino acid sequence. Due to the degeneracy of the genetic code, many functionally identical nucleic acids encode any particular protein.
  • the codons GCA, GCC, GCG, and GCU all encode the amino acid alanine.
  • the codon can be changed to any of the corresponding codons without changing the encoded polypeptide.
  • Such nucleic acid mutations are "silent mutations" and are a type of conservatively modified mutation. Every nucleic acid sequence herein which encodes a peptide also describes every possible silent variation of the nucleic acid.
  • each codon in a nucleic acid except AUG, which is usually the only codon for methionine, and TGG, which is usually the only codon for tryptophan
  • TGG which is usually the only codon for tryptophan
  • the polynucleotide of the present invention can be composed of DNA, RNA, and derivatives thereof.
  • DNA is suitably composed of bases such as A, T, C, and G, and T is replaced by U in RNA.
  • a polynucleotide of the invention may encode a plurality of peptides of the invention with or without intervening amino acid sequences.
  • an intervening amino acid sequence can provide a cleavage site for a polynucleotide or translated peptide (eg, an enzyme recognition sequence).
  • the polynucleotide may include any additional sequences to the coding sequence encoding the peptide of the invention.
  • the polynucleotide may be a recombinant polynucleotide containing regulatory sequences required for expression of the peptide, or may be an expression vector (eg, a plasmid) having a marker gene or the like.
  • such recombinant polynucleotides can be prepared by manipulating the polynucleotides by conventional recombination techniques, for example using polymerases and endonucleases.
  • the polynucleotide of the present invention can be produced by any of the recombinant techniques and the chemical synthesis techniques.
  • a polynucleotide can be made by inserting it into an appropriate vector, which can be expressed when transfected into competent cells.
  • polynucleotides can be amplified using PCR techniques or expression in a suitable host (see, for example, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York, 1989).
  • Beaucage SL & Iyer RP Tetrahedron 1992, 48: 2223-311; Matthes et al., EMBO J 1984, 3: 801-5, may be used to synthesize polynucleotides. it can.
  • Exosomes The present invention further provides intracellular vesicles, called exosomes, that present the complex formed between the peptide of the invention and the HLA antigen on its own surface. Exosomes can be prepared, for example, using the methods detailed in JP-A-11-510507 and WO 99/03499, and prepared using APCs obtained from patients to be treated and / or prevented. can do. The exosomes of the invention can be vaccinated in the same manner as the peptides of the invention.
  • HLA-A01 eg, HLA-A * 01: 01
  • HLA-A * 01: 01 is an HLA allele frequently found in Caucasians, and this type of HLA antigen is considered suitable for treating Caucasian patients.
  • antigens that have a high level of binding affinity for a particular HLA antigen or are mediated through a particular HLA antigen by pre-examining the type of HLA antigen in the patient in need of treatment Appropriate selection of a peptide having the ability to induce CTL by presentation is possible.
  • the exosome of the present invention presents a complex of the peptide of the present invention and HLA-A01 on its surface.
  • the peptide of the present invention is an amino acid selected from SEQ ID NOs: 1, 8, 10, 13, 25, 33 to 35 and 37. It is preferably a peptide having a sequence or a modified peptide thereof, and a peptide consisting of an amino acid sequence selected from SEQ ID NOs: 1, 8, 10, 13, 25, 33 to 35 and 37 or a modified peptide thereof Is more preferred.
  • the present invention also provides an APC that displays on its surface a complex formed between an HLA antigen and a peptide of the present invention.
  • the present invention provides an APC having on its cell surface a complex formed between an HLA antigen and a peptide of the present invention.
  • the APC of the present invention can be an isolated APC.
  • isolated refers to the cells being separated from other types of cells.
  • the APC of the present invention may be derived from APC derived from a patient to be treated and / or prevented, and may be used alone or other drugs containing the peptide, exosome, or CTL of the present invention. Can be administered in combination with a vaccine.
  • the APC of the present invention is not limited to a particular type of cell, but is a cell known to present proteinaceous antigens on its cell surface to be recognized by lymphocytes, such as dendritic cells : DC), Langerhans cells, macrophages, B cells, and activated T cells. Since DC is a representative APC having the strongest CTL-inducing action among APCs, DC can be preferably used as the APC of the present invention.
  • APCs of the invention can be obtained, for example, by inducing DCs from peripheral blood monocytes and then stimulating them in vitro, ex vivo or in vivo with a peptide of the invention.
  • APC presenting the peptide of the present invention is induced in the subject. Therefore, the APC of the present invention can be obtained by administering the peptide of the present invention to a subject and then collecting the APC from the subject.
  • the APC of the present invention can be obtained by contacting APC recovered from a subject with the peptide of the present invention.
  • Administering the APC of the present invention to a subject alone or in combination with another drug containing the peptide, exosome, or CTL of the present invention to induce an immune response against a CDCA1-expressing cancer cell in the subject can do.
  • ex vivo administration may include the following steps: (A) recovering the APC from the first subject; (B) contacting the APC of step (a) with the peptide; and (c) administering the APC of step (b) to a second subject.
  • the first subject and the second subject may be the same individual or different individuals.
  • the HLA of the first subject and the second subject are preferably of the same type.
  • the APC obtained by the above step (b) can be a vaccine for treating and / or preventing cancer.
  • a The APC of the present invention obtained by the above method has CTL inducing ability.
  • CTL inducibility refers to the ability of APC to induce CTL when contacted with CD8 positive T cells.
  • the CTLs induced by the APC of the present invention are CDCA1-specific CTLs and exhibit specific cytotoxic activity against CDCA1-expressing cells.
  • APC of the present invention can also be prepared by introducing a polynucleotide encoding the peptide of the present invention into APC in vitro in addition to the above-mentioned method.
  • the polynucleotide to be introduced may be in the form of DNA or RNA.
  • methods of introduction include, without limitation, various methods conventionally practiced in the art, such as lipofection, electroporation, and the calcium phosphate method. More specifically, Cancer Res. 1996, 56: 5672-7; J. Immunol 1998, 161: 5607-13; J. Exp. Med. 1996, 184: 465-72; and JP Patent Publication No. 2000-509281. Such a method can be used.
  • the polynucleotide encoding the peptide of the present invention undergoes transcription, translation, and the like in the cell, and the resulting peptide is processed by MHC class I, and passed through the presentation pathway.
  • the peptides of the invention are displayed on the cell surface of the APC.
  • the APC of the present invention displays a complex formed between HLA-A01 (more preferably, HLA-A * 01: 01) and a peptide of the present invention on its cell surface.
  • HLA-A01 more preferably, HLA-A * 01: 01
  • the peptide of the present invention is an amino acid selected from SEQ ID NOs: 1, 8, 10, 13, 25, 33 to 35 and 37. It is preferably a peptide having a sequence or a modified peptide thereof, and more preferably a peptide consisting of an amino acid sequence selected from SEQ ID NOs: 1, 8, 10, 13, 25, 33 to 35 and 37.
  • the APC of the present invention is preferably an APC derived by a method comprising the steps described in the following (a) or (b): (A) contacting an APC expressing HLA-A01 (more preferably HLA-A * 01: 01) with a peptide of the present invention; (B) a step of introducing a polynucleotide encoding the peptide of the present invention into APC expressing HLA-A01 (more preferably, HLA-A * 01: 01).
  • the peptide of the present invention that is brought into contact with APC expressing HLA-A01 is a peptide having an amino acid sequence selected from SEQ ID NOs: 1, 8, 10, 13, 25, 33 to 35 and 37, or a modification thereof. It is preferably a peptide, and more preferably a peptide consisting of an amino acid sequence selected from SEQ ID NOs: 1, 8, 10, 13, 25, 33 to 35 and 37.
  • the present invention there is also provided use of the peptide of the present invention for producing a pharmaceutical composition for inducing APC having CTL inducing ability.
  • the present invention provides a method or a process for producing a pharmaceutical composition for inducing APC having CTL inducing ability.
  • the present invention also provides the peptide of the present invention for inducing APC having CTL inducing ability.
  • the CTL induced by the peptide of the present invention can be used as a vaccine in the same manner as the peptide of the present invention in order to enhance an immune response targeting a CDCA1-expressing cancer cell in vivo. Accordingly, the present invention provides a CTL induced or activated by the peptide of the present invention.
  • the CTL of the present invention is a CTL targeting the peptide of the present invention, and is a CTL capable of binding to a complex of the peptide of the present invention and an HLA antigen. The binding of CTL to the complex is performed via a T cell receptor (TCR) present on the cell surface of CTL.
  • TCR T cell receptor
  • the CTL of the present invention can be an isolated CTL.
  • the CTL of the present invention comprises (1) administering the peptide of the present invention to a subject, or (2) subjecting APC and CD8-positive T cells derived from the subject or peripheral blood mononuclear cells (PBMC) to PBMC. Stimulating in vitro with a peptide of the invention, or (3) contacting CD8 positive T cells or PBMCs in vitro with APCs or exosomes that present a complex of an HLA antigen and a peptide of the invention on its own surface Or (4) introducing into a CD8-positive T cell a vector containing a polynucleotide encoding each subunit of a T cell receptor (TCR) capable of binding to the peptide of the present invention presented by the HLA antigen on the cell surface Can be obtained by:
  • the exosomes and APC used in the method (2) or (3) can be prepared by the methods described in the chapters “V. exosomes” and “VI. Antigen presenting cells (APC)”, respectively.
  • the CTL of the present invention can be administered alone to a patient to be treated and / or prevented, or used in combination with another drug containing the peptide of the present invention, APC or exosome for the purpose of modulating the effect. Can be administered.
  • the CTL of the present invention may be a CTL derived from CD8-positive T cells derived from a patient to which the CTL is administered.
  • the CTL of the present invention acts specifically on target cells presenting the peptide of the present invention, for example, the same peptide used to induce the CTL of the present invention.
  • the target cell may be a cell that expresses CDCA1 endogenously, such as a cancer cell, or a cell that has been transfected with the CDCA1 gene.
  • Cells that present the peptide on the cell surface upon stimulation by the peptide of the present invention may also be targets for attack by the CTL of the present invention.
  • the target cells of the CTL of the present invention are preferably HLA-A01 (more preferably, HLA-A * 01: 01) positive cells.
  • the CTLs of the present invention specifically target cells expressing both HLA-A01 (more preferably, HLA-A * 01: 01) and CDCA1.
  • HLA-A01 more preferably, HLA-A * 01: 01
  • CDCA1 CDCA1.
  • targeting a CTL with a cell means that the CTL recognizes a cell presenting a complex of HLA and the peptide of the present invention on the cell surface, and damages the cell. To show activity.
  • specifically targeting means that CTL exhibits cytotoxic activity against the cell but does not exhibit cytotoxic activity against other cells.
  • the term "recognize a cell” refers to a complex of HLA present on the cell surface and a peptide of the present invention that binds through its TCR and is specific for the cell. It indicates that it exhibits a high cytotoxic activity. Therefore, the CTL of the present invention preferably contains a TCR on the complex formed between HLA-A01 (more preferably HLA-A * 01: 01) displayed on the cell surface and the peptide of the present invention. Is a CTL that can bind through
  • the CTL of the present invention is preferably a CTL induced by a method comprising the steps described in the following (a) or (b): (A) contacting CD8-positive T cells in vitro with an APC or exosome that presents a complex of HLA-A01 (more preferably HLA-A * 01: 01) and a peptide of the invention on its own surface ; (B) a polynucleotide encoding each subunit of the TCR capable of binding to the peptide of the present invention presented on the cell surface by HLA-A01 (more preferably HLA-A * 01: 01) on CD8-positive T cells The stage of introducing.
  • T cell receptor The invention also provides compositions comprising a polynucleotide encoding each subunit of the TCR capable of binding to a peptide of the invention presented on a cell surface by an HLA antigen, and methods of using the same.
  • the polynucleotide expresses a TCR capable of binding to the peptide of the present invention presented on the cell surface by an HLA antigen on the cell surface, thereby increasing the specificity for a CDCA1-expressing cancer cell to a CD8-positive T cell.
  • Polynucleotides encoding ⁇ and ⁇ chains as TCR subunits of CTLs induced by the peptides of the invention can be identified using methods known in the art (WO2007 / 032255, and Morgan et al., J Immunol, 2003, 171, 3288).
  • a PCR method is preferred for analyzing TCR.
  • the PCR primers for the analysis include, for example, a 5′-R primer (5′-gtctaccaggcattcgcttcat-3 ′) (SEQ ID NO: 40) as a 5′-side primer and a TCR ⁇ chain C region as a 3′-side primer.
  • 3-TRa-C primer (5'-tcagctggaccacagccgcagcgt-3 ') (SEQ ID NO: 41), 3-TRb-C1 primer (5'-tcagaaatcctttctctcttgac-3') specific to TCR ⁇ chain C1 region No. 42) or a 3-TRb-C2 primer (5′-ctagcctctggaatcctttctctttt-3 ′) specific to the TCR ⁇ chain C2 region (SEQ ID NO: 43), but is not limited thereto.
  • a TCR formed by introducing the identified polynucleotide into a CD8-positive T cell can bind to a target cell presenting the peptide of the present invention with high avidity, and present the peptide of the present invention. Mediates efficient killing of target cells in vivo and in vitro.
  • the polynucleotide encoding each subunit of the TCR can be incorporated into a suitable vector, for example, a retroviral vector. These vectors are well-known in the art.
  • the polynucleotides or vectors containing them in a form capable of expressing them can be introduced into CD8-positive T cells, for example, CD8-positive T cells from a patient.
  • the present invention provides a ready-made technology that allows the rapid and easy generation of modified T cells with superior cancer cell killing properties by rapid modification of the patient's own T cells (or T cells from another subject).
  • a specific TCR specifically refers to a complex of the peptide of the present invention and the HLA antigen presented on the surface of a target cell when the TCR is present on the surface of a CD8-positive T cell. It is a TCR that can recognize and confer specific cytotoxic activity on target cells. Specific recognition of the complex can be confirmed by any known method, and preferred examples thereof include HLA multimer staining analysis using HLA molecules and the peptide of the present invention, and ELISPOT assay. By performing the ELISPOT assay, it can be confirmed that T cells into which the polynucleotide has been introduced specifically recognize target cells by TCR, and that signals are transmitted intracellularly.
  • the TCR When the TCR is present on the surface of CD8-positive T cells, it is also confirmed by a known method that the TCR can impart target cell-specific cytotoxic activity to CD8-positive T cells. Can be. Preferred methods include, for example, measuring cytotoxic activity against target cells, such as by a chromium release assay.
  • the present invention also relates to each subunit of TCR that binds to a peptide having an amino acid sequence selected from, for example, SEQ ID NOs: 1, 8, 10, 13, 25, 33 to 35, and 37 in the context of HLA-A01.
  • CTLs prepared by transducing CD8-positive T cells with a polynucleotide encoding
  • Transduced CTLs can home in vivo and can be grown by well known in vitro culture methods (eg, Kawakami et al., JmmImmunol., 1989, 142, 3452-61).
  • the CTL of the present invention can be used to form an immunogenic composition useful for treating or preventing a disease in a patient in need of treatment or prevention, the contents of which are incorporated herein by reference. See WO2006 / 031221).
  • compositions or a pharmaceutical composition comprising at least one active ingredient selected from: (A) the peptide of the present invention; (B) a polynucleotide encoding the peptide of the present invention in an expressible form; (C) APC of the present invention; (D) an exosome of the present invention; (E) CTL of the present invention.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may contain, in addition to the above-mentioned active ingredients, carriers, excipients, and the like usually used for pharmaceuticals, if necessary, without any particular limitation.
  • carriers that can be used in the pharmaceutical composition of the present invention include sterilized water, physiological saline, phosphate buffer, culture solution and the like.
  • the present invention also provides a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising at least one active ingredient selected from the following (a) to (e) and a pharmaceutically acceptable carrier: (A) the peptide of the present invention; (B) a polynucleotide encoding the peptide of the present invention in an expressible form; (C) APC of the present invention; (D) an exosome of the present invention; (E) CTL of the present invention.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may contain a stabilizer, a suspension, a preservative, a surfactant, a solubilizer, a pH adjuster, an aggregation inhibitor, and the like, if necessary.
  • CDCA1 expression is significantly elevated in cancer cells as compared to normal tissues. Therefore, the peptide of the present invention or the polynucleotide encoding the peptide can be used for treating and / or preventing cancer and / or preventing its recurrence after surgery. Therefore, the present invention provides a pharmaceutical composition for treating and / or preventing cancer and / or preventing its recurrence after surgery, wherein one or more of the peptides or polynucleotides of the present invention are effective.
  • a composition comprising as an ingredient is provided.
  • a peptide of the invention can be displayed on the surface of an exosome or APC for use as a pharmaceutical composition.
  • the CTL of the present invention which targets any one of the peptides of the present invention can also be used as an active ingredient of the pharmaceutical composition of the present invention.
  • the pharmaceutical compositions of the invention may contain a therapeutically or pharmaceutically effective amount of the active ingredients.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can also be used as a vaccine.
  • the phrase “vaccine” also referred to as “immunogenic composition” refers to a composition that has the function of inducing an immune response that, when inoculated into an animal, results in an antitumor effect. Point. Accordingly, the pharmaceutical compositions of the present invention can be used to induce an immune response that produces an anti-tumor effect.
  • the immune response induced by the peptide, polynucleotide, APC, CTL and pharmaceutical composition of the present invention is not particularly limited as long as it is an immune response that produces an antitumor effect. CTL induction, and induction of cytotoxic activity specific to cancer cells.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be used for treating and / or preventing cancer and / or preventing its recurrence after surgery in a human subject or patient.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be preferably used for HLA-A01-positive subjects.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be preferably used for treating and / or preventing cancer expressing HLA-A01 and CDCA1, and / or for preventing its recurrence after surgery.
  • the present invention also provides the use of an active ingredient selected from the following in the manufacture of a pharmaceutical composition for treating or preventing HLA-A01 and CDCA1-expressing cancer: (A) the peptide of the present invention; (B) a polynucleotide encoding the peptide of the present invention in an expressible form; (C) an APC that presents the peptide of the invention on its own surface; (D) an exosome that presents the peptide of the present invention on its surface; and (e) a CTL of the present invention.
  • an active ingredient selected from the following in the manufacture of a pharmaceutical composition for treating or preventing HLA-A01 and CDCA1-expressing cancer: (A) the peptide of the present invention; (B) a polynucleotide encoding the peptide of the present invention in an expressible form; (C) an APC that presents the peptide of the invention on its own surface; (D) an exosome that presents the peptide of the present invention on its surface; and
  • the present invention further provides an active ingredient selected from the following for use in treating or preventing cancer expressing HLA-A01 and CDCA1: (A) the peptide of the present invention; (B) a polynucleotide encoding the peptide of the present invention in an expressible form; (C) an APC that presents the peptide of the invention on its own surface; (D) an exosome that presents the peptide of the present invention on its surface; and (e) a CTL of the present invention.
  • the present invention further provides a method or step for producing a pharmaceutical composition for treating or preventing cancer expressing HLA-A01 and CDCA1, wherein at least one selected from the following:
  • a method or process comprising formulating the active ingredient and a pharmaceutically or physiologically acceptable carrier: (A) the peptide of the present invention; (B) a polynucleotide encoding the peptide of the present invention in an expressible form; (C) an APC that presents the peptide of the invention on its own surface; (D) an exosome that presents the peptide of the present invention on its surface; and (e) a CTL of the present invention.
  • the present invention is also a method or step for producing a pharmaceutical composition for treating or preventing cancer expressing HLA-A01 and CDCA1, wherein the method or step is selected from:
  • a method or process comprising mixing the active ingredient with a pharmaceutically or physiologically acceptable carrier: (A) the peptide of the present invention; (B) a polynucleotide encoding the peptide of the present invention in an expressible form; (C) an APC that presents the peptide of the invention on its own surface; (D) an exosome that presents the peptide of the present invention on its surface; and (e) a CTL of the present invention.
  • the present invention also provides a method for treating or preventing a cancer expressing HLA-A01 and CDCA1, comprising administering to a subject at least one active ingredient selected from the following: Provide a method that includes: (A) the peptide of the present invention; (B) a polynucleotide encoding the peptide of the present invention in an expressible form; (C) an APC that presents the peptide of the invention on its own surface; (D) an exosome that presents the peptide of the present invention on its surface; and (e) a CTL of the present invention.
  • a peptide having an amino acid sequence selected from among SEQ ID NOs: 1, 8, 10, 13, 25, 33 to 35 and 37 is an HLA-A01-restricted peptide capable of inducing a strong and specific immune response.
  • a pharmaceutical composition of the present invention comprising at least one of the peptides having an amino acid sequence selected from among SEQ ID NOs: 1, 8, 10, 13, 25, 33 to 35 and 37 has HLA as an HLA antigen Particularly suitable for administration to a subject having -A01 (eg, HLA-A * 01: 01).
  • compositions comprising the targeted CTL (ie the CTL of the present invention). That is, a pharmaceutical composition comprising an active ingredient related to a peptide having an amino acid sequence selected from among SEQ ID NOs: 1, 8, 10, 13, 25, 33 to 35 and 37 is a subject having HLA-A01 (Ie, HLA-A01 positive subjects).
  • the pharmaceutical composition of the present invention is a pharmaceutical composition comprising a peptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8.
  • the cancer treated and / or prevented by the pharmaceutical composition of the present invention is not particularly limited as long as it expresses CDCA1, and various cancers, bladder cancer, breast cancer, cervical cancer, and bile duct cells are included.
  • Cancer chronic myelogenous leukemia (CML), esophageal cancer, gastric cancer, non-small cell lung cancer, lymphoma, osteosarcoma, prostate cancer, renal cancer, small cell lung cancer, head and neck cancer, soft tissue tumor, and colon Including
  • the pharmaceutical composition of the present invention comprises, in addition to the aforementioned active ingredients, other peptides having the ability to induce CTLs against cancer cells (eg, other TAA-derived peptides CTL-inducing peptides), It may include other polynucleotides encoding the peptide, other cells displaying the other peptide, and the like.
  • other peptides having the ability to induce CTLs against cancer cells eg, other TAA-derived peptides CTL-inducing peptides
  • It may include other polynucleotides encoding the peptide, other cells displaying the other peptide, and the like.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can also optionally contain other therapeutic substances as active ingredients, as long as the antitumor effect of the active ingredient such as the peptide of the present invention is not inhibited.
  • a pharmaceutical composition of the present invention can optionally include an anti-inflammatory composition, an analgesic, a chemotherapeutic agent, and the like.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be administered sequentially or simultaneously with one or more other pharmaceutical compositions. it can.
  • the dosage of the pharmaceutical compositions of the present invention and other pharmaceutical compositions will depend, for example, on the type of pharmaceutical composition used, the disease to be treated, and the schedule and route of administration.
  • compositions of the present invention may also include other components conventional in the art, given the type of formulation. Should.
  • the present invention also provides a product or a kit containing the pharmaceutical composition of the present invention.
  • the product or kit of the invention can include a container containing the pharmaceutical composition of the invention.
  • suitable containers include, but are not limited to, bottles, vials, and test tubes.
  • the container may be formed from various materials such as glass or plastic.
  • a label may be attached to the container, and the label can describe a disease or disease state in which the pharmaceutical composition of the present invention is to be used.
  • the label may also indicate directions for administration and the like.
  • the product or kit of the present invention may further include, in addition to the container containing the pharmaceutical composition of the present invention, optionally, a second container containing a pharmaceutically acceptable diluent.
  • the products or kits of the present invention may further include other materials desirable from a commercial and user standpoint, such as other buffers, diluents, filters, needles, syringes, and inserts with instructions for use. May be included.
  • compositions of the present invention can be presented in a pack or dispenser device which can contain one or more unit dosage forms containing the active ingredient.
  • the pack may for example comprise metal or plastic foil, such as a blister pack.
  • the pack or dispenser device may be accompanied by instructions for administration.
  • composition Containing Peptide as Active Ingredient can be formulated, if necessary, by a conventional formulation method.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may contain, in addition to the peptide of the present invention, carriers, excipients, and the like usually used for pharmaceuticals, if necessary, without any particular limitation.
  • carriers that can be used in the pharmaceutical compositions of the present invention include sterile water (eg, water for injection), saline, phosphate buffer, phosphate buffered saline, Tris buffered saline, 0.3% Glycine, culture solution and the like can be mentioned.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may contain a stabilizer, a suspension, a preservative, a surfactant, a solubilizer, a pH adjuster, an aggregation inhibitor, and the like, if necessary. Since the pharmaceutical composition of the present invention can induce specific immunity against cancer cells expressing CDCA1, it can be used for the purpose of treating or preventing cancer.
  • the pharmaceutical compositions of the present invention may be pharmaceutically or physiologically acceptable, such as sterile water (eg, water for injection), saline, phosphate buffer, phosphate buffered saline, Tris buffered saline, and the like.
  • sterile water eg, water for injection
  • saline phosphate buffer
  • phosphate buffered saline Tris buffered saline
  • the peptide solution is dissolved in a water-soluble carrier to be added, if necessary, after adding a stabilizer, a suspension, a preservative, a surfactant, a dissolution aid, a pH adjuster, an aggregation inhibitor, and the like. It can be prepared by sterilization.
  • the method for sterilizing the peptide solution is not particularly limited, but is preferably performed by filtration sterilization.
  • the filtration sterilization can be performed using, for example, a filtration sterilization filter having a pore size of 0.22 ⁇ m or less.
  • the peptide solution after sterilization by filtration can be administered to a subject as, for example, but not limited to, an injection.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be prepared as a freeze-dried preparation by freeze-drying the peptide solution.
  • the lyophilized preparation is prepared by filling the peptide solution prepared as described above into an appropriate container such as an ampoule, a vial, or a plastic container, performing lyophilization, and after repressurization, enclosing the container with a sterilized and washed rubber stopper. Can be prepared.
  • the lyophilized formulation is pharmaceutically or physiologically acceptable prior to administration, such as sterile water (eg, water for injection), saline, phosphate buffer, phosphate buffered saline, Tris buffered saline, and the like. After re-dissolving in a water-soluble carrier, it can be administered to a subject.
  • Preferred examples of the pharmaceutical composition of the present invention include such an injection of a peptide solution sterilized by filtration and a lyophilized preparation obtained by freeze-drying the peptide solution.
  • a kit containing such a lyophilized preparation and a reconstituted liquid is also included in the present invention.
  • the present invention also includes a kit including a container containing a lyophilized preparation as a pharmaceutical composition of the present invention and a container containing a re-dissolved liquid thereof.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can also contain a combination of two or more of the peptides of the present invention.
  • the combination of peptides may be in the form of a cocktail in which the peptides are mixed, or the peptides may be linked together using standard techniques.
  • the peptides may be chemically linked or expressed as a single fusion polypeptide sequence.
  • APCs eg, DCs
  • APCs are removed from a subject and then stimulated with a peptide of the invention to obtain an APC that displays any of the peptides of the invention on its cell surface.
  • APCs can be administered again to a subject to induce CTL in the subject and, as a result, increase the aggressiveness against cancer cells that express CDCA1.
  • compositions of the present invention may also include adjuvants known to efficiently establish cellular immunity.
  • An adjuvant refers to a compound that, when administered together (or sequentially) with an immunologically active antigen, enhances the immune response to the antigen.
  • a known adjuvant described in a document such as Clin ⁇ Microbiol ⁇ Rev ⁇ 1994, # 7: ⁇ 277-89 can be used.
  • Suitable adjuvants include aluminum salts (aluminum phosphate, aluminum hydroxide, aluminum oxyhydroxide, etc.), alum, cholera toxin, salmonella toxin, incomplete Freund's adjuvant (IFA), complete Freund's adjuvant (CFA), ISCOMatrix Lipopolysaccharides (MPL, RC529, etc.), GM-CSF and other immunostimulatory cytokines, oligodeoxynucleotides containing CpG motifs (such as CpG7909), oil-in-water emulsions, saponins or derivatives thereof (such as QS21), lipid A or derivatives thereof , GLA, E6020, etc.), lipopeptide, lactoferrin, flagellin, double-stranded RNA or derivatives thereof (poly IC, etc.), bacterial DNA, imidazoquinoline (imiquimod, R848, etc.), C-type lectin ligand (trehalose
  • the adjuvants can be usually added to an antigen having immunological activity (that is, the peptide of the present invention) in an amount effective to enhance or enhance its immunogenicity.
  • the adjuvant may be contained in a kit containing the pharmaceutical composition of the present invention in a separate container from the pharmaceutical composition containing the peptide of the present invention.
  • the adjuvant and the pharmaceutical composition may be administered to the subject sequentially or may be mixed immediately prior to administration to the subject.
  • a kit comprising such a pharmaceutical composition comprising the peptide of the present invention and an adjuvant is also provided by the present invention.
  • the kit can further contain a reconstituted liquid.
  • the present invention also provides a kit comprising a container containing the pharmaceutical composition of the present invention and a container containing an adjuvant.
  • the kit may further include a container containing the re-dissolved solution, if necessary.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be prepared as an emulsion.
  • the emulsion can be prepared, for example, by mixing and stirring the peptide solution prepared as described above and an oily adjuvant.
  • the peptide solution may be redissolved after lyophilization.
  • the emulsion may be either a W / O emulsion or an O / W emulsion, but is preferably a W / O emulsion in order to obtain a high immune response enhancing effect.
  • IFA can be preferably used as an oily adjuvant, but is not limited thereto.
  • the preparation of the emulsion may be performed immediately before administration to the subject, in which case the pharmaceutical composition of the invention may be provided as a kit comprising the peptide solution of the invention and an oily adjuvant.
  • the kit can further contain a reconstituted liquid.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is a liposome preparation encapsulating the peptide of the present invention, a granule preparation in which the peptide is bound to beads having a diameter of several micrometers, or a preparation in which the lipid is bound to the peptide. Is also good.
  • the peptides of the invention may also be administered in the form of a pharmaceutically acceptable salt.
  • the salt include salts with alkali metals (such as lithium, potassium and sodium), salts with alkaline earth metals (such as calcium and magnesium), and salts with other metals (such as copper, iron, zinc and manganese).
  • a pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically acceptable salt of the peptide of the present invention is also encompassed by the present invention.
  • the “peptide of the present invention” includes not only a peptide in a free form but also a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • the pharmaceutical compositions of the present invention may further include a component that stimulates CTL.
  • Lipids have been identified as substances capable of stimulating CTL in vivo against viral antigens.
  • a palmitic acid residue can be attached to the ⁇ -amino and ⁇ -amino groups of a lysine residue and then linked to a peptide of the invention.
  • the lipidated peptide can then be administered directly in the form of micelles or particles, incorporated into liposomes, or emulsified in adjuvant.
  • CTLs can be used to stimulate CTLs (see, for example, Deres et al., Nature 1989, 342: 561-4).
  • P3CSS tripalmitoyl-S-glycerylcysteinyl-seryl-serine
  • Examples of methods of administering the peptide or pharmaceutical composition of the present invention include oral, intradermal, subcutaneous, intramuscular, intraosseous, peritoneal and intravenous injection, and the like, as well as systemic administration or local administration near the target site. Including, but not limited to.
  • a preferred method of administration includes subcutaneous injection near the lymph nodes, such as the axilla or inguinal region. Dosing can be performed by a single dose or can be boosted by multiple doses.
  • the peptide of the present invention is a therapeutically or pharmaceutically effective amount for treating cancer or a therapeutically or pharmaceutically effective amount for inducing immunity (more specifically, CTL) against a CDCA1-expressing cancer cell. Can be administered to a subject.
  • the dose of the peptide of the present invention can be appropriately adjusted depending on the disease to be treated, the age and weight of the patient, the administration method, etc., and is usually 0.001 mg to 1000 mg, for example, 0.01 mg for each peptide of the present invention. It can be 100100 mg, for example 0.1 mg to 30 mg, for example 0.1 mg to 10 mg, for example 0.5 mg to 5 mg.
  • the administration interval can be once every several days to several months, for example, once a week. Those skilled in the art can appropriately select an appropriate dose.
  • a pharmaceutical composition of the invention comprises a therapeutically effective amount of a peptide of the invention and a pharmaceutically or physiologically acceptable carrier.
  • a pharmaceutical composition of the invention comprises a therapeutically effective amount of a peptide of the invention, a pharmaceutically or physiologically acceptable carrier, and an adjuvant.
  • the pharmaceutical composition of the present invention contains 0.001 mg to 1000 mg, preferably 0.01 mg to 100 mg, more preferably 0.1 mg to 30 mg, still more preferably 0.1 mg to 10 mg, for example, 0.5 mg to 5 mg of the peptide of the present invention. Can be.
  • the peptide of the present invention may contain the peptide of the present invention in an amount of 0.001 mg / ml to 1000 mg / ml, preferably 0.01 mg / ml to 100 mg / ml, more preferably 0.1 mg / ml. ml to 30 mg / ml, more preferably 0.1 mg / ml to 10 mg / ml, such as 0.5 mg / ml to 5 mg / ml.
  • 0.1 to 5 ml preferably 0.5 ml to 2 ml of the pharmaceutical composition of the present invention can be administered to a subject by injection.
  • the present invention comprises administering to a subject a therapeutically effective amount of a peptide of the present invention or a pharmaceutical composition of the present invention, for treating and / or preventing cancer, and / or post-surgical treatment thereof.
  • Methods are provided for preventing recurrence.
  • the peptide of the present invention is usually 0.001 mg to 1000 mg, for example, 0.01 mg to 100 mg, for example, 0.1 mg to 30 mg, for example, 0.1 mg to 10 mg, and for example, 0.5 mg to 5 mg is administered to a subject in one administration. can do.
  • a peptide of the invention is administered to a subject with an adjuvant.
  • the administration interval can be once every few days to several months, preferably once every few days to once a month, for example, once a week or once every two weeks. be able to.
  • CDCA1 peptide of the present invention has an HLA-A01-restricted CTL-inducing action. That is, the therapeutic effect is also effective in HLA-A01-positive subjects. Therefore, in a preferred embodiment of the present invention, an HLA-A01-positive subject can be selected in advance before administration of the CDCA1 peptide of the present invention. Furthermore, since the therapeutic effect of CDCA1 of the present invention is CDCA1 specific, it is also a desirable condition that the subject cancer expresses CDCA1.
  • the method for treating cancer of the present invention comprises, prior to the administration of the CDCA1 peptide, a step of selecting a subject that is HLA-A01 positive and a step of selecting a subject that has a cancer that expresses CDCA1. Can be included.
  • composition containing a polynucleotide as an active ingredient may also contain a polynucleotide encoding the peptide of the present invention in an expressible form.
  • the phrase "in an expressible form” means that when the polynucleotide is introduced into a cell, the peptide of the invention is expressed.
  • the sequence of the polynucleotide of the present invention contains regulatory elements necessary for the expression of the peptide of the present invention.
  • the polynucleotides of the present invention can be provided with sequences necessary to achieve stable insertion into the genome of the target cell (for a description of homologous recombination cassette vectors, see, for example, Thomas KR & Capecchi MR, Cell 1987, 51: 503-12). See, e.g., Wolff et al., Science 1990, 247: 1465-8; U.S. Patent Nos. 5,580,859; 5,589,466; 5,804,566; 5,739,118; 5,736,524; 5,679,647; and WO 98/04720. I want to be.
  • DNA-based delivery technologies include “naked DNA”, enhanced (bupivacaine, polymer, peptide-mediated) delivery, cationic lipid complexes, and particle-mediated (“gene gun”) or pressure-mediated Delivery is included (see, eg, US Pat. No. 5,922,687).
  • the peptide of the present invention can be expressed by a viral vector or a bacterial vector.
  • expression vectors include attenuated virus hosts such as vaccinia virus or fowlpox virus.
  • vaccinia virus can be used as a vector for expressing the peptide of the present invention.
  • the recombinant vaccinia virus Upon introduction into a host, the recombinant vaccinia virus expresses an immunogenic peptide, thereby eliciting an immune response.
  • Vaccinia vectors and methods useful for immunization protocols are described, for example, in US Pat. No. 4,722,848.
  • Another vector is BCG (Bacillus Calmette-Guerin).
  • the BCG vector is described in Stover et al., Nature 1991, 351: 456-60.
  • Other vectors that are useful for therapeutic administration or immunization are evident, such as adenovirus and adeno-associated virus vectors, retroviral vectors, Salmonella typhi vectors, detoxified anthrax toxin vectors, and the like. . See, for example, Shata et al., Mol Med Today 2000, 6: 66-71; Shedlock et al., J Leukoc Biol 2000, 68: 793-806; Hippet al., In Vivo 2000, 14: 571-85. I want to be.
  • Delivery of the polynucleotide of the present invention into a patient may be direct, in which case the patient can be directly exposed to the vector carrying the polynucleotide of the present invention.
  • it may be indirect, in which case the cells are first transformed in vitro with a vector carrying the polynucleotide of the invention, and then the cells are transplanted into a patient.
  • the method of administration may be oral, intradermal, subcutaneous, intravenous injection, etc., and systemic administration or local administration near the target site is used. Dosing can be performed by a single dose or can be boosted by multiple doses.
  • the polynucleotide of the present invention may be a therapeutically or pharmaceutically effective amount for treating cancer or a therapeutically or pharmaceutically effective amount for inducing immunity (more specifically, CTL) against cancer cells expressing CDCA1.
  • the amount can be administered to the subject.
  • the dose of the polynucleotide in a suitable carrier, or the dose of the polynucleotide in cells transformed with the polynucleotide encoding the peptide of the present invention depends on the disease to be treated, the age, weight, administration method, etc. of the patient. It can be adjusted as appropriate, usually from 0.001 mg to 1000 mg, for example from 0.01 mg to 100 mg, for example from 0.1 mg to 30 mg, for example from 0.1 mg to 10 mg, for example from 0.5 mg to 5 mg.
  • the dosing interval can be once every few days to once every few months, for example once a week. Those skilled in the art can appropriately select an appropriate dose.
  • APCs and CTLs can be induced using the peptides and polynucleotides of the invention.
  • CTLs can also be induced using the exosomes and APCs of the present invention.
  • the peptide, polynucleotide, exosome, and APC of the present invention can be used in combination with any other compound as long as their CTL-inducing ability is not inhibited. Therefore, the CTL of the present invention can be induced using a pharmaceutical composition containing any of the peptide, polynucleotide, APC and exosome of the present invention.
  • the APC of the present invention can be induced using a pharmaceutical composition containing the peptide or polynucleotide of the present invention.
  • the present invention provides a method for inducing APC having CTL inducibility using the peptide or polynucleotide of the present invention.
  • the method of the invention comprises contacting an APC with a peptide of the invention in vitro, ex vivo, or in vivo.
  • a method of contacting an APC with the peptide ex vivo may include the following steps: (A) recovering APC from the subject; and (b) contacting the APC of step (a) with a peptide of the invention.
  • the APC is not limited to a particular type of cells, DC, Langerhans cells, macrophages, B cells, and DCs that are known to present proteinaceous antigens on their cell surface as recognized by lymphocytes Activated T cells can be used. Since DC has the strongest CTL inducing ability among APCs, DC can be preferably used.
  • Any peptide of the invention can be used alone or with other peptides of the invention. Further, the peptide of the present invention can be used in combination with another CTL-inducing peptide (for example, another TAA-derived CTL-inducing peptide).
  • the method of the present invention may include administering a peptide of the present invention to a subject.
  • the polynucleotide of the present invention is administered to a subject in an expressible form, the peptide of the present invention is expressed in vivo, which comes into contact with APC in vivo, and as a result, APC having high CTL inducing ability is obtained. Induced in the body of the subject.
  • the present invention may also include the step of administering a polynucleotide of the present invention to a subject.
  • the present invention may also include a step of introducing the polynucleotide of the present invention into APC to induce APC having CTL inducibility.
  • the method may include the following steps: (A) recovering APC from the subject; and (b) introducing a polynucleotide encoding the peptide of the present invention into the APC of step (a).
  • Step (b) can be performed as described above in the section "VI. Antigen Presenting Cells (APC)".
  • the present invention provides a method for inducing APC capable of inducing CTL, comprising the following steps (a) or (b): (A) contacting APC with the peptide of the present invention; (B) a step of introducing a polynucleotide encoding the peptide of the present invention into APC.
  • the present invention also provides a method for preparing APC having CTL inducing ability, comprising the following steps (a) or (b): (A) contacting APC with the peptide of the present invention; (B) a step of introducing a polynucleotide encoding the peptide of the present invention into APC.
  • the above methods can be performed in vitro, ex vivo, or in vivo, but are preferably performed in vitro or ex vivo.
  • the APC used in the above method may be from a subject for whom the administration of the induced APC is to be administered, or may be from a different subject.
  • the HLA type of the subject and the donor must be the same.
  • the HLA type of the subject and the donor is preferably HLA-A01 (more preferably, HLA-A * 01: 01).
  • the APC used in the above method is preferably an APC expressing HLA-A01 (more preferably, HLA-A * 01: 01).
  • APC can be prepared by separating PBMC from blood collected from a donor by specific gravity centrifugation or the like, and then using a known method from the PBMC.
  • the present invention also provides a pharmaceutical composition for inducing APC capable of inducing CTL, comprising the peptide of the present invention or a polynucleotide encoding the peptide.
  • the present invention further provides use of the peptide of the present invention or a polynucleotide encoding the peptide in the production of a pharmaceutical composition for inducing APC having CTL inducing ability.
  • the present invention further provides a peptide of the present invention or a polynucleotide encoding the peptide for use in inducing APC having CTL inducing ability.
  • the present invention further provides a method or process for producing a pharmaceutical composition for inducing APC, comprising the step of pharmaceutically or physiologically combining a peptide of the present invention or a polynucleotide encoding the peptide.
  • a method or process is provided that comprises formulating an acceptable carrier.
  • the present invention also relates to a method or a process for producing a pharmaceutical composition for inducing APC having CTL inducibility, comprising the steps of: providing a peptide of the present invention or a polynucleotide encoding the peptide; A method or process is provided that comprises mixing with a pharmaceutically or physiologically acceptable carrier.
  • APC induced by the method of the present invention can induce CTL specific for CDCA1 (ie, the CTL of the present invention).
  • the present invention also provides a method for inducing CTL using the peptide, polynucleotide, exosome, or APC of the present invention.
  • a method of the invention can include administering a peptide, polynucleotide, APC, or exosome of the invention to a subject.
  • CTLs can be induced by using them in vitro or ex vivo.
  • the method of the invention may include the following steps: (A) collecting APCs from the subject; (B) contacting the APC of step (a) with the peptide of the present invention, and (c) co-culturing the APC of step (b) with CD8-positive T cells. The induced CTL may then be returned to the subject.
  • the APC co-cultured with the CD8-positive T cell is obtained by introducing the polynucleotide encoding the peptide of the present invention into the APC as described above in the section “VI. Antigen presenting cell (APC)”. Can also be prepared.
  • APC Antigen presenting cell
  • the APC used in the method of the present invention is not limited to this, and any APC that presents a complex of the HLA antigen and the peptide of the present invention on its own surface can be used.
  • an exosome that presents a complex of the HLA antigen and the peptide of the present invention on its own surface can be used instead of such APC. That is, the method of the present invention may include a step of co-culturing an exosome displaying a complex of the HLA antigen and the peptide of the present invention on its surface.
  • exosomes can be prepared by the methods described above in the section “V. Exosomes”.
  • CTL can be induced by introducing a vector containing a polynucleotide encoding each subunit of TCR capable of binding to the peptide of the present invention presented on the cell surface by the HLA antigen into CD8-positive T cells. it can. Such transduction can be performed as described above in the section "VIII. T cell receptor (TCR)".
  • the present invention provides a method of inducing CTL, comprising the step selected from: (A) co-culturing CD8-positive T cells with APC that presents a complex of the HLA antigen and the peptide of the present invention on its own surface; (B) co-culturing CD8-positive T cells with exosomes that present a complex of the HLA antigen and the peptide of the invention on its surface; and (c) a book presented by the HLA antigen on the cell surface.
  • the above methods can be performed in vitro, ex vivo, or in vivo, but are preferably performed in vitro or ex vivo.
  • the APC or exosome used in the above method, and the CD8-positive T cells may be derived from a subject to whom the administration of the induced CTL is scheduled, or may be derived from a different subject. Good.
  • the recipient and the donor must be of the same HLA type.
  • the administration subject and the donor The HLA type is preferably HLA-A01 (more preferably HLA-A * 01: 01).
  • the APC or exosome used in the above-mentioned method comprises HLA-A01 (more preferably HLA-A * 01: 01) and the peptide of the present invention (SEQ ID NOs: 1, 8, 10, 13, 25, 33 to 35).
  • the induced CTLs show specific cytotoxic activity against cells presenting a complex of HLA-A01 and the peptide of the present invention (for example, HLA-A01-positive cells expressing CDCA1). .
  • the present invention also provides a composition or a pharmaceutical composition for inducing CTL, comprising at least one active ingredient selected from: (A) the peptide of the present invention; (B) a polynucleotide encoding the peptide of the present invention in an expressible form; (C) an APC that presents the peptide of the present invention on its own surface; and (d) an exosome that presents the peptide of the present invention on its own surface.
  • the present invention also provides the use of an active ingredient selected from among the following in the manufacture of a composition or a pharmaceutical composition for inducing CTL: (A) the peptide of the present invention; (B) a polynucleotide encoding the peptide of the present invention in an expressible form; (C) an APC that presents the peptide of the present invention on its own surface; and (d) an exosome that presents the peptide of the present invention on its own surface.
  • an active ingredient selected from among the following in the manufacture of a composition or a pharmaceutical composition for inducing CTL: (A) the peptide of the present invention; (B) a polynucleotide encoding the peptide of the present invention in an expressible form; (C) an APC that presents the peptide of the present invention on its own surface; and (d) an exosome that presents the peptide of the present invention on its own surface.
  • the present invention further provides an active ingredient selected from the following for use in inducing CTL: (A) the peptide of the present invention; (B) a polynucleotide encoding the peptide of the present invention in an expressible form; (C) an APC that presents the peptide of the present invention on its own surface; and (d) an exosome that presents the peptide of the present invention on its own surface.
  • the present invention further provides a method or process for producing a composition or a pharmaceutical composition for inducing CTL, comprising the steps of: Provide a method or process comprising formulating with an acceptable carrier: (A) the peptide of the present invention; (B) a polynucleotide encoding the peptide of the present invention in an expressible form; (C) an APC that presents the peptide of the present invention on its own surface; and (d) an exosome that presents the peptide of the present invention on its own surface.
  • the present invention also relates to a method or a process for producing a composition or a pharmaceutical composition for inducing CTL, wherein the active ingredient selected from the following is pharmaceutically or physiologically selected.
  • the present invention further provides a method for inducing an immune response against a CDCA1-expressing cancer.
  • Applicable cancers include bladder, breast, cervical, cholangiocellular, chronic myelogenous leukemia (CML), esophagus, gastric, non-small cell lung, lymphoma, osteosarcoma, and prostate Cancer, kidney cancer, small cell lung cancer, head and neck cancer, soft tissue tumor, colorectal cancer, and the like.
  • the cancer expresses HLA-A01.
  • the present invention also provides a method for inducing an immune response against a cancer cell expressing CDCA1.
  • CDCA1 is found to be overexpressed in various cancers as described above. Therefore, when an immune response to a CDCA1-expressing cancer cell is induced, the proliferation of the cancer cell is consequently inhibited. Therefore, the present invention also provides a method for inhibiting the growth of a CDCA1-expressing cancer cell.
  • the method of the present invention is particularly suitable for inhibiting the growth of cancer cells expressing CDCA1 and HLA-A01.
  • the method of the invention may comprise the step of administering a composition comprising any of the peptides of the invention or a polynucleotide encoding them.
  • the methods of the invention also contemplate the administration of exosomes or APCs displaying any of the peptides of the invention.
  • exosomes and APCs that can be used in the methods of the invention to induce an immune response include the aforementioned “V. exosomes”, “VI. Antigen presenting cells (APCs)”, and “X. Methods Using Exosomes, APCs, and CTLs "in (1) and (2).
  • the present invention also relates to a pharmaceutical composition or vaccine for inducing an immune response against a cancer expressing CDCA1 and HLA-A01, comprising an active ingredient selected from the following: Provide a pharmaceutical composition or vaccine: (A) the peptide of the present invention; (B) a polynucleotide encoding the peptide of the present invention in an expressible form; (C) an APC that presents the peptide of the invention on its own surface; (D) an exosome that presents the peptide of the present invention on its surface; and (e) a CTL of the present invention.
  • a pharmaceutical composition or vaccine for inducing an immune response against a cancer expressing CDCA1 and HLA-A01, comprising an active ingredient selected from the following: Provide a pharmaceutical composition or vaccine: (A) the peptide of the present invention; (B) a polynucleotide encoding the peptide of the present invention in an expressible form; (C) an APC that presents the peptide of the invention
  • the present invention further provides a pharmaceutical composition or vaccine for inducing an immune response against a cancer cell expressing CDCA1 and HLA-A01, which comprises an active ingredient selected from the following: Provide a composition or vaccine: (A) the peptide of the present invention; (B) a polynucleotide encoding the peptide of the present invention in an expressible form; (C) an APC that presents the peptide of the invention on its own surface; (D) an exosome that presents the peptide of the present invention on its surface; and (e) a CTL of the present invention.
  • a composition or vaccine for inducing an immune response against a cancer cell expressing CDCA1 and HLA-A01, which comprises an active ingredient selected from the following: Provide a composition or vaccine: (A) the peptide of the present invention; (B) a polynucleotide encoding the peptide of the present invention in an expressible form; (C) an APC that presents the peptide of the invention on its own
  • the present invention further provides a pharmaceutical composition or vaccine for inhibiting the growth of cancer cells expressing CDCA1 and HLA-A01, wherein the pharmaceutical composition comprises an active ingredient selected from the following: Providing goods or vaccines: (A) the peptide of the present invention; (B) a polynucleotide encoding the peptide of the present invention in an expressible form; (C) an APC that presents the peptide of the invention on its own surface; (D) an exosome that presents the peptide of the present invention on its surface; and (e) a CTL of the present invention.
  • the pharmaceutical composition comprises an active ingredient selected from the following: Providing goods or vaccines: (A) the peptide of the present invention; (B) a polynucleotide encoding the peptide of the present invention in an expressible form; (C) an APC that presents the peptide of the invention on its own surface; (D) an exosome that presents the peptide of the present invention on its surface; and (e
  • the present invention also relates to the use of an active ingredient selected from the following in the manufacture of a pharmaceutical composition or vaccine for inducing an immune response against a cancer expressing CDCA1 and HLA-A01.
  • an active ingredient selected from the following in the manufacture of a pharmaceutical composition or vaccine for inducing an immune response against a cancer expressing CDCA1 and HLA-A01.
  • the present invention further provides the use of an active ingredient selected from the following in the manufacture of a pharmaceutical composition or vaccine for inducing an immune response against a cancer cell expressing CDCA1 and HLA-A01. : (A) the peptide of the present invention; (B) a polynucleotide encoding the peptide of the present invention in an expressible form; (C) an APC that presents the peptide of the invention on its own surface; (D) an exosome that presents the peptide of the present invention on its surface; and (e) a CTL of the present invention.
  • the present invention further provides the use of an active ingredient selected from the following in the manufacture of a pharmaceutical composition or vaccine for inhibiting the growth of cancer cells expressing CDCA1 and HLA-A01: (A) the peptide of the present invention; (B) a polynucleotide encoding the peptide of the present invention in an expressible form; (C) an APC that presents the peptide of the invention on its own surface; (D) an exosome that presents the peptide of the present invention on its surface; and (e) a CTL of the present invention.
  • an active ingredient selected from the following in the manufacture of a pharmaceutical composition or vaccine for inhibiting the growth of cancer cells expressing CDCA1 and HLA-A01: (A) the peptide of the present invention; (B) a polynucleotide encoding the peptide of the present invention in an expressible form; (C) an APC that presents the peptide of the invention on its own surface; (D) an exosome that presents the peptide of
  • the present invention also relates to a method or a process for producing a pharmaceutical composition for inducing an immune response against a cancer expressing CDCA1 and HLA-A01, wherein the peptide of the present invention is used together with a pharmaceutically acceptable carrier.
  • Methods are provided that can include mixing or formulating.
  • the present invention comprises administering to a subject a vaccine or a pharmaceutical composition comprising an active ingredient selected from the following, expressing CDCA1 and HLA-A01 at a disease site of a disease mediated by angiogenesis.
  • a vaccine or a pharmaceutical composition comprising an active ingredient selected from the following, expressing CDCA1 and HLA-A01 at a disease site of a disease mediated by angiogenesis.
  • cancer expressing CDCA1 and HLA-A01 can be treated by administering the peptide, polynucleotide, APC, exosome and / or CTL of the present invention.
  • an immune response to a CDCA1-expressing cancer can be induced by administering the peptide, polynucleotide, APC, exosome and / or CTL of the present invention.
  • cancers include bladder, breast, cervical, cholangiocellular, chronic myelogenous leukemia (CML), esophageal, gastric, non-small cell lung, lymphoma, osteosarcoma, Examples include, but are not limited to, prostate cancer, kidney cancer, small cell lung cancer, head and neck cancer, soft tissue tumor, and colon cancer.
  • CML chronic myelogenous leukemia
  • esophageal gastric, non-small cell lung, lymphoma, osteosarcoma
  • gastric gastric
  • non-small cell lung lymphoma
  • osteosarcoma examples include, but are not limited to, prostate cancer, kidney cancer, small cell lung cancer, head and neck cancer, soft tissue tumor, and colon cancer.
  • an immune response against cancer cells expressing CDCA1 and HLA-A01 can be induced.
  • the expression level of CDCA1 at the disease site to be treated is enhanced before administering a vaccine or a pharmaceutical composition containing the above active ingredient.
  • it is also desirable to confirm that the subject to be treated is HLA-A01 positive. That is, in a preferred embodiment of the present invention, a subject having HLA-A01-positive and CDCA1-expressing cancer can be selected, and the vaccine or pharmaceutical composition of the present invention can be administered to the selected subject.
  • the invention provides a method of treating a cancer expressing CDCA1 and HLA-A01 in a patient in need thereof, such a method comprising the following steps: i) measuring the expression level of CDCA1 in a biological sample collected from a disease site of an HLA-A01-positive subject having cancer; ii) identifying a subject having a cancer that expresses CDCA1 based on the expression level of CDCA1 measured in i); and iii) at least selected from the group consisting of the above (a) to (e) Administering one component to a subject having a cancer that overexpresses CDCA1 compared to a normal control.
  • the present invention also includes at least one active ingredient selected from the group consisting of the above (a) to (e) for administration to an HLA-A01-positive subject having a cancer expressing CDCA1.
  • a vaccine or pharmaceutical composition is provided.
  • the present invention further provides a method of identifying or selecting a subject to be treated with at least one active ingredient selected from the group consisting of the above (a) to (e), and such a method includes the following steps: : i) measuring the expression level of CDCA1 in a biological sample collected from a diseased site of a HLA-A01-positive subject having cancer; ii) identifying a subject having a CDCA1-expressing cancer based on the CDCA1 expression level measured in i); and iii) identifying or selecting the subject identified in ii) as a subject that can be treated with at least one active ingredient selected from the group consisting of (a) to (e) above.
  • a biological sample collected from a subject for measuring the expression level of CDCA1 in the above method is not particularly limited, but, for example, a tissue sample containing cancer cells collected by a biopsy or the like can be preferably used.
  • the expression level of CDCA1 in a biological sample can be measured by a known method, for example, a method of detecting a transcript of the CDCA1 gene by a probe or a PCR method (for example, cDNA microarray method, Northern blot method, RT-PCR method). And the like, and a method for detecting the translation product of the CDCA1 gene using an antibody or the like (for example, Western blotting, immunostaining, etc.) can be used.
  • the biological sample may be a blood sample.
  • the blood level of an antibody against CDCA1 may be measured, and the expression level of CDCA1 in a diseased site may be evaluated based on the blood level.
  • Measurement of the blood level of the antibody against CDCA1 can be performed by a known method. For example, enzyme immunoassay (EIA) using CDCA1 protein or the peptide of the present invention as an antigen, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and radioimmunoassay (RIA) can be used.
  • EIA enzyme immunoassay
  • ELISA enzyme-linked immunosorbent assay
  • RIA radioimmunoassay
  • the expression level of CDCA1 at the disease site may be evaluated by detecting CTL specific for the peptide of the present invention.
  • the measurement of the CTL level specific to the peptide of the present invention can be performed, for example, by separating PBMC from blood collected from a subject and measuring the cytotoxic activity on target cells pulsed with the peptide of the present invention. it can.
  • the cytotoxic activity can be measured, for example, by the amount of interferon ⁇ released.
  • a complex of the peptide of the present invention and HLA described below can also be used for measuring the CTL level.
  • the determination as to whether or not the cancer of the subject expresses CDCA1 may be made by comparison with the measurement result of the same type of biomaterial collected from the subject without cancer.
  • the level in a biological sample collected from a subject having cancer is increased as compared with the level of a measurement target in a biological material of the same type collected from a subject without cancer (normal control level). If so, it can be determined that the cancer of the subject having the cancer expresses CDCA1.
  • an HLA-A01-positive subject is selected as an administration subject of an active ingredient related to a peptide having an amino acid sequence selected from SEQ ID NOs: 1, 8, 10, 13, 25, 33 to 35, and 37. Is preferred.
  • the HLA of the subject can be confirmed by immunologically detecting the HLA on the cell surface collected from the subject using an HLA-A01-specific antibody.
  • the HLA of the subject can be determined by analyzing the genetic information of genomic DNA and mRNA obtained from cells collected from the subject.
  • an effective treatment can be expected if the subject is HLA-A01 positive. That is, a subject having HLA-A01 homozygously or heterozygously can be a subject of administration.
  • the present invention also provides a complex of the peptide of the present invention and HLA.
  • the complex of the present invention may be a monomer or a multimer.
  • the number of polymerizations is not particularly limited, and the multimer having an arbitrary number of polymerizations can be used. Examples include, but are not limited to, tetramers, pentamers, hexamers, and the like. Also, dextramers (WO2002 / 072631) and streptamers (Knabel M et al., Nat Med. 2002; 8 (6): 631-7.) Are included in the multimer of the present invention.
  • the complex of the peptide of the present invention and HLA can be prepared according to a known method (for example, Altman JD et al., Science. 1996, 274 (5284): 94-6, WO2002 / 072631, WO2009 / 003492). , Knabel M et al., Nat Med. 2002; 8 (6): 631-7.).
  • the complex of the present invention can be used, for example, for quantification of CTL specific for the peptide of the present invention.
  • a blood sample is collected from a subject to which the pharmaceutical composition of the present invention has been administered, CD4 negative cells are prepared after separating PBMCs, and the complex of the present invention bound with a fluorescent dye and the CD4 negative cells are separated. Make contact.
  • the ratio of CTLs specific to the peptide of the present invention can be measured by analysis by flow cytometry.
  • the effect of the pharmaceutical composition of the present invention to induce an immune response can be measured. Can be monitored.
  • Antibodies The invention further provides antibodies that bind to a peptide of the invention.
  • Preferred antibodies specifically bind to a peptide of the invention and do not bind (or bind weakly) to non-peptides of the invention.
  • the binding specificity of the antibody can be confirmed by an inhibition test. That is, if the binding between the antibody to be analyzed and the full-length CDCA1 polypeptide is inhibited in the presence of the peptide of the present invention, this indicates that the antibody specifically binds to the peptide of the present invention.
  • Antibodies against the peptides of the invention can be used in assays for the diagnosis and prognosis of disease, in selecting subjects for administration of the pharmaceutical compositions of the invention, and in monitoring the pharmaceutical compositions of the invention.
  • the invention also provides various immunological assays for detecting and / or quantifying the peptide of the invention or fragments thereof.
  • immunological assays include, but are not limited to, radioimmunoassay, immunochromatography, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), enzyme-linked immunofluorescence assay (ELIFA), and the like. Performed within a variety of immunological assay formats well known in the art.
  • the antibodies of the present invention can be used in immunological imaging methods that can detect diseases that express CDCA1, examples of which include radioscintigraphic imaging methods using the labeled antibodies of the present invention. , But is not limited to this.
  • Such assays are used clinically in the detection, monitoring, and prognosis of CDCA1-expressing cancers, examples of which include bladder cancer, breast cancer, cervical cancer, bile duct cancer Cell carcinoma, chronic myeloid leukemia (CML), esophageal cancer, stomach cancer, non-small cell lung cancer, lymphoma, osteosarcoma, prostate cancer, renal cancer, small cell lung cancer, head and neck cancer, soft tissue tumor, and Includes, but is not limited to, colorectal cancer.
  • CML chronic myeloid leukemia
  • the antibody of the present invention can be used in any form such as a monoclonal antibody or a polyclonal antibody.
  • Antiserum obtained by immunizing an animal such as a rabbit with the peptide of the present invention polyclonal antibodies of all classes, and monoclonal antibodies It may further include antibodies, human antibodies, and chimeric and humanized antibodies produced by genetic recombination.
  • the peptide of the present invention or a fragment thereof used as an antigen for obtaining an antibody can be obtained by chemical synthesis or by genetic engineering based on the amino acid sequence disclosed herein.
  • the peptide used as the immunizing antigen may be the peptide of the present invention or a fragment of the peptide of the present invention.
  • the peptide may be bound or linked to a carrier to enhance immunogenicity.
  • a carrier keyhole limpet hemocyanin (KLH) is well known. Methods for coupling KLH to peptides are also well known in the art.
  • Any mammal can be immunized with the antigen, but it is preferable to consider the compatibility with the parent cell used for cell fusion when preparing a monoclonal antibody.
  • rodent Rodentia
  • lagomorph lagomorph
  • Primate Prior animals
  • Rodents include, for example, mice, rats, and hamsters.
  • Lagomorpha include, for example, rabbits.
  • Primates include, for example, monkeys from the Catarhini (Old World Monkey), such as cynomolgus monkeys (Macaca fascicularis), rhesus monkeys, baboons, and chimpanzees.
  • ⁇ Methods for immunizing animals with an antigen are known in the art. Intraperitoneal or subcutaneous injection of antigen is a standard method for immunizing mammals. More specifically, the antigen is diluted and suspended with an appropriate amount of phosphate buffered saline (PBS), physiological saline or the like. If desired, the antigen suspension can be mixed with an appropriate amount of a standard adjuvant, such as Freund's complete adjuvant, emulsified and then administered to the mammal. Thereafter, it is preferable to administer the antigen mixed with an appropriate amount of Freund's incomplete adjuvant several times every 4 to 21 days. For immunization, a suitable carrier may be used. After immunization as described above, the sera can be tested for increasing amounts of the desired antibody by standard methods.
  • PBS phosphate buffered saline
  • physiological saline physiological saline
  • the antigen suspension can be mixed with an appropriate amount of a standard adjuvant, such as Freund's complete adju
  • a polyclonal antibody against the peptide of the present invention can be prepared by collecting blood from a mammal in which an increase in the desired antibody level in serum has been confirmed after immunization, and separating the serum from the blood by any conventional method. It can.
  • the polyclonal antibody may be a serum containing the polyclonal antibody, or a fraction containing the polyclonal antibody may be isolated from the serum.
  • the immunoglobulin G or M is separated from the fraction that recognizes only the peptide of the present invention, for example, by using an affinity column to which the peptide of the present invention is bound, and further separating this fraction using a protein A or protein G column. It can be purified and prepared.
  • immune cells are collected from the mammal and subjected to cell fusion.
  • the immune cells used for cell fusion can preferably be obtained from the spleen.
  • a mammalian myeloma cell preferably a myeloma cell which has acquired characteristics for selecting a fused cell by a drug can be used.
  • ⁇ Immune cells and myeloma cells can be fused according to a known method, for example, the method of Milstein et al. (Galfreand Milstein, Methods Enzymol 73: 1981, 3-46).
  • Hybridomas obtained by cell fusion can be selected by culturing them in a standard selection medium such as HAT medium (medium containing hypoxanthine, aminopterin and thymidine). Cell culture typically continues in HAT medium for a period of time sufficient to kill all other cells (non-fused cells) except the desired hybridoma (eg, days to weeks). Thereafter, standard limiting dilutions can be performed to screen and clone hybridoma cells producing the desired antibody.
  • HAT medium medium containing hypoxanthine, aminopterin and thymidine
  • human lymphocytes such as lymphocytes infected with EB virus
  • a peptide, cells expressing the peptide, or a lysate thereof Immunization can also be performed in vitro.
  • the immunized lymphocytes are fused with an infinitely dividing human myeloma cell, such as U266, to obtain a hybridoma that produces a desired human antibody capable of binding to the peptide (Japanese Patent Application Laid-Open No. H10-163,837). 63-17688).
  • the obtained hybridoma is transplanted into the peritoneal cavity of a mouse to extract ascites.
  • the obtained monoclonal antibody can be purified by, for example, ammonium sulfate precipitation, a protein A or protein G column, DEAE ion exchange chromatography, or an affinity column to which the peptide of the present invention is bound.
  • immune cells that produce antibodies can be immortalized with oncogenes and used to prepare monoclonal antibodies.
  • the monoclonal antibodies thus obtained can also be prepared recombinantly using genetic engineering techniques (see, for example, Borrebaeck and Larrick, Therapeutic Monoclonal Antibodies, published in the UK by MacMillan Publishers LTD (1990). Want).
  • a recombinant antibody is prepared by cloning DNA encoding the antibody from an immune cell such as an antibody-producing hybridoma or an immunized lymphocyte, inserting the clone into an appropriate vector, and introducing the clone into a host cell.
  • an immune cell such as an antibody-producing hybridoma or an immunized lymphocyte
  • the present invention also provides a recombinant antibody prepared as described above.
  • the antibody of the present invention may be an antibody fragment or a modified antibody as long as it binds to the peptide of the present invention.
  • the antibody fragment may be a Fab, F (ab ') 2 , Fv, or a single-chain Fv (scFv) in which Fv fragments from the heavy and light chains are linked by a suitable linker (Huston et al. al., Proc Natl Acad Sci USA 1988, 85: 5879-83). More specifically, an antibody fragment can be prepared by treating an antibody with an enzyme such as papain or pepsin.
  • a gene encoding an antibody fragment can be constructed, inserted into an expression vector, and expressed in a suitable host cell (eg, Co et al., J Immunol 1994, 152: 2968-76; Better and Horwitz). , Methods Enzymol 1989, 178: 476-96; Pluckthun and Skerra, Methods Enzymol 1989, 178: 497-515; Lamoyi, Methods Enzymol 1986, 121: 652-63; Rousseaux et al., Methods Enzymol 1986, 121: 663-. 9; Bird and Walker, Trends Biotechnol 1991, 9: 132-7).
  • a suitable host cell eg, Co et al., J Immunol 1994, 152: 2968-76; Better and Horwitz.
  • Antibodies can be modified by conjugation with various molecules, such as polyethylene glycol (PEG).
  • PEG polyethylene glycol
  • the present invention provides such modified antibodies.
  • a modified antibody can be obtained by chemically modifying an antibody. These modifications are routine in the art.
  • the antibody of the present invention may be a chimeric antibody between a variable region derived from a non-human antibody and a constant region derived from a human antibody, or a complementarity-determining region (CDR) derived from a non-human antibody; Can be obtained as a humanized antibody containing a framework region (FR) and a constant region derived from E. coli.
  • CDR complementarity-determining region
  • Such antibodies can be prepared according to known techniques. Humanization can be accomplished by replacing the corresponding sequence of a human antibody with the CDR sequence of a non-human antibody (see, for example, Verhoeyen et al., ⁇ Science 1988, 239: 1534-6 ⁇ ). Accordingly, such humanized antibodies are chimeric antibodies in which substantially less than a human variable domain has been replaced by the corresponding sequence from a non-human species.
  • Fully human antibodies containing human variable regions in addition to human framework and constant regions can also be used.
  • Such antibodies can be made using various techniques known in the art. For example, in vitro methods include the use of recombinant libraries of human antibody fragments displayed on bacteriophage (e.g., Hoogenboom & Winter, J. Mol. Biol. 1991, 227: 381).
  • human antibodies can be produced by introducing a human immunoglobulin locus into a transgenic animal, eg, a mouse, in which the endogenous immunoglobulin gene has been partially or completely inactivated. This approach is described, for example, in U.S. Patent Nos. 6,150,584, 5,545,807; 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; 5,661,016.
  • the antibody obtained as described above may be purified until it becomes homogeneous.
  • antibody separation and purification can be performed according to separation and purification methods used for general proteins. For example, appropriately select and combine the use of column chromatography, such as, but not limited to, affinity chromatography, filters, ultrafiltration, salting out, dialysis, SDS polyacrylamide gel electrophoresis, and isoelectric focusing This allows the antibody to be separated and isolated (Antibodies: A Laboratory, Manual. Ed Harlow and David Lane, Cold Spring Harbor Laboratory (1988)).
  • Protein A columns and protein G columns can be used as affinity columns.
  • Exemplary Protein A columns to be used include, for example, Hyper ⁇ ⁇ ⁇ D, POROS, and Sepharose F.F. (Pharmacia).
  • Exemplary chromatography includes, in addition to affinity chromatography, for example, ion exchange chromatography, hydrophobic chromatography, gel filtration, reverse phase chromatography, adsorption chromatography, and the like (Strategies for Protein Purification and Characterization: A Laboratory Course Manual. Ed. Daniel R. Marshak et al., Cold Spring Harbor Laboratory Press (1996). Chromatographic procedures can be performed by liquid phase chromatography such as HPLC and FPLC.
  • ELISA enzyme-linked immunosorbent assay
  • EIA enzyme-linked immunosorbent assay
  • RIA radioimmunoassay
  • IF immunofluorescence
  • the antibody of the present invention is immobilized on a plate, the peptide of the present invention is added to the plate, and then a sample containing a desired antibody such as a culture supernatant of antibody-producing cells or a purified antibody is added. Next, a secondary antibody that recognizes the primary antibody and is labeled with an enzyme such as alkaline phosphatase is added, and the plate is incubated.
  • a desired antibody such as a culture supernatant of antibody-producing cells or a purified antibody
  • an enzyme substrate such as p-nitrophenyl phosphate is added to the plate, and the absorbance is measured to evaluate the antigen binding activity of the sample.
  • an enzyme substrate such as p-nitrophenyl phosphate
  • the absorbance is measured to evaluate the antigen binding activity of the sample.
  • a fragment of a peptide such as a C-terminal or N-terminal fragment may be used as an antigen.
  • BIAcore (Pharmacia) may be used to evaluate the activity of the antibody of the present invention.
  • the method of the present invention can be performed as described above. Detection or measurement.
  • an antibody of the invention can be used to detect a peptide of the invention present in a subject's blood sample (eg, a serum sample).
  • a subject's blood sample eg, a serum sample
  • an antibody of the present invention present in a subject's blood sample eg, a serum sample
  • the result of measuring the peptide of the present invention or the antibody of the present invention in a blood sample of a subject may be useful for selecting a subject to be administered with the pharmaceutical composition of the present invention or monitoring the effect of the pharmaceutical composition of the present invention. it can.
  • the present invention also provides a vector comprising a polynucleotide encoding the peptide of the present invention and a host cell into which the vector has been introduced.
  • the vectors of the present invention can be used to maintain the polynucleotide of the present invention in a host cell, to express a peptide of the present invention in a host cell, or to administer the polynucleotide of the present invention for gene therapy. .
  • Escherichia coli is a host cell and the vector is amplified in Escherichia coli (eg, JM109, DH5 ⁇ , HB101, or XL1-Blue) to produce large quantities
  • the vector may be referred to as an “origin of replication” for amplification in E. coli.
  • a marker gene for selecting transformed Escherichia coli for example, a drug resistance gene selected by a drug such as ampicillin, tetracycline, kanamycin, chloramphenicol, etc.
  • M13-based vectors, pUC-based vectors, pBR322, pBluescript, pCR-Script, and the like can be used.
  • an expression vector can be used.
  • an expression vector to be expressed in E. coli needs to have the above characteristics in order to amplify in E. coli.
  • Escherichia coli such as JM109, DH5 ⁇ , HB101, or XL1-Blue is used as a host cell
  • the vector is a promoter capable of efficiently expressing a desired gene in Escherichia coli, for example, a lacZ promoter (Ward et al., Nature 1989).
  • the vector may include a signal sequence for peptide secretion.
  • An exemplary signal sequence that causes the peptide to be secreted into the periplasm of E. coli is the pelB signal sequence (Lei et al., J Bacteriol. 1987, 169: 4379).
  • Means for introducing the vector into the target host cell include, for example, the calcium chloride method and the electroporation method.
  • mammalian-derived expression vectors eg, pcDNA3 (Invitrogen), and pEGF-BOS (Nucleic Acids Res 1990, 18 (17): 5322), pEF, pCDM8), insect cell-derived expression vectors (Eg, “Bac-to-BAC baculovirus expression system” (GIBCO BRL), pBacPAK8), plant-derived expression vectors (eg, pMH1, pMH2), animal virus-derived expression vectors (eg, pHSV, pMV, pAdexLcw) , A retrovirus-derived expression vector (eg, pZIpneo), a yeast-derived expression vector (eg, “Pichia Expression Kit” (Invitrogen), pNV11, SP-Q01), and Bacillus subtilis-derived expression vector Vectors (eg, pPL608, pKTH50) can be used to produce the polypeptides of the invention
  • the vector In order for the vector to be expressed in animal cells such as CHO, COS, or NIH3T3 cells, the vector must have a promoter required for expression in such cells, for example, the SV40 promoter (Mulligan et al., Nature 1979, 277: 108 ), The MMLV-LTR promoter, the EF1 ⁇ promoter (Mizushima et al., Nucleic Acids Res. 1990, 18: 5322), a CMV promoter and the like, and preferably a marker gene for selecting a transformant (eg, a drug (eg, Neomycin, a drug resistance gene selected by G418).
  • a promoter required for expression in such cells, for example, the SV40 promoter (Mulligan et al., Nature 1979, 277: 108 ), The MMLV-LTR promoter, the EF1 ⁇ promoter (Mizushima et al., Nucleic Acids Res. 1990, 18: 5322),
  • a peptide having an ability to induce cytotoxic T cells (CTL) of less than 15 amino acids comprising an amino acid sequence selected from the following group: (A) an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 1, 8, 10, 13, 25, 33-35 and 37; and (b) SEQ ID NOs: 1, 8, 10, 13, 25, 33- An amino acid sequence in which one, two, three, or several amino acids have been substituted, deleted, inserted and / or added to an amino acid sequence selected from the group consisting of 35 and 37.
  • [3] The peptide according to [1], comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 1, 8, 10, 13, 25, 33 to 35, and 37.
  • [4] A polynucleotide that encodes the peptide according to any one of [1] to [3].
  • a composition comprising a pharmaceutically acceptable carrier and at least one component selected from the group consisting of the following (a) to (e): (A) one or more peptides according to any one of [1] to [3]; (B) one or more polynucleotides encoding the peptide of any one of [1] to [3] in an expressible form; (C) an antigen-presenting cell (APC) that presents a complex of the peptide according to any one of [1] to [3] and an HLA antigen on its own cell surface; (D) an exosome that presents the complex of the peptide according to any one of [1] to [3] and the HLA antigen on its own cell surface; and (e) any of [1] to [3] A CTL targeting the peptide according to claim 1.
  • APC antigen-presenting cell
  • APC antigen presenting cell
  • composition according to [5] which is a pharmaceutical composition.
  • a pharmaceutical composition for one or more uses selected from the group consisting of (i) treating cancer, (ii) preventing cancer, and (iii) preventing postoperative recurrence of cancer.
  • Cancer is bladder, breast, cervical, cholangiocellular, chronic myeloid leukemia (CML), esophageal, gastric, non-small cell lung, lymphoma, osteosarcoma, prostate [8] or the composition of [9], wherein the composition is selected from the group consisting of renal cancer, small cell lung cancer, head and neck cancer, soft tissue tumor, and colon cancer.
  • CML chronic myeloid leukemia
  • esophageal gastric
  • non-small cell lung lymphoma
  • osteosarcoma prostate
  • the composition according to any one of [5] to [10], which is formulated for administration to an HLA-A01-positive subject.
  • a method for inducing APC capable of inducing CTL comprising a step selected from the group consisting of: (A) contacting the APC with the peptide according to any one of [1] to [3] in vitro, ex vivo, or in vivo; and (b) any one of [1] to [3]. Introducing a polynucleotide encoding the peptide according to 1 into APC.
  • a method for inducing CTL comprising a step selected from the group consisting of the following (a) to (c): (A) co-culturing CD8-positive T cells with APC that presents a complex of the HLA antigen and the peptide according to any one of [1] to [3] on its own surface, (B) co-culturing CD8-positive T cells with an exosome that presents a complex of the HLA antigen and the peptide according to any one of [1] to [3] on its surface, and (c) A) CD8-positive polynucleotide encoding each subunit of the T cell receptor (TCR) capable of binding to the peptide according to any one of [1] to [3] presented on the cell surface by an HLA antigen Introducing into T cells.
  • TCR T cell receptor
  • a method for inducing an immune response to cancer comprising the step of administering to a subject at least one component selected from the group consisting of the following (a) to (e): (A) one or more peptides according to any one of [1] to [3]; (B) one or more polynucleotides encoding the peptide of any one of [1] to [3] in an expressible form; (C) an antigen-presenting cell (APC) that presents a complex of the peptide according to any one of [1] to [3] and an HLA antigen on its own cell surface; (D) an exosome that presents the complex of the peptide according to any one of [1] to [3] and the HLA antigen on its own cell surface; and (e) any of [1] to [3] A CTL targeting the peptide according to claim 1.
  • APC antigen-presenting cell
  • D an exosome that presents the complex of the peptide according to any one of [1] to [3] and the
  • APC antigen-presenting cell
  • D an exosome that presents the complex of the peptide
  • a method for screening a peptide capable of inducing CTL comprising the following steps: (A) SEQ ID NO: 1, 2, or several amino acids with respect to the original amino acid sequence consisting of an amino acid sequence selected from among 1, 8, 10, 13, 25, 33 to 35 and 37 Creating a candidate sequence consisting of an amino acid sequence in which residues have been substituted, deleted, inserted, and / or added; (B) selecting candidate sequences that do not have significant homology (sequence identity) with any known human gene product other than CDCA1 from the candidate sequences created in (a); (C) contacting the peptide consisting of the candidate sequence selected in (b) with APC; (D) contacting the APC of (c) with CD8-positive T cells; and (e) selecting a peptide having a CTL inducing ability equal to or higher than that of the peptide having the original amino acid sequence.
  • [22] Use of at least one active ingredient selected from the group consisting of the following (a) to (e) in the manufacture of a composition for inducing an immune response against cancer: (A) one or more peptides according to any one of [1] to [3]; (B) one or more polynucleotides encoding the peptide of any one of [1] to [3] in an expressible form; (C) an antigen-presenting cell (APC) that presents a complex of the peptide according to any one of [1] to [3] and an HLA antigen on its own cell surface; (D) an exosome that presents the complex of the peptide according to any one of [1] to [3] and the HLA antigen on its own cell surface; and (e) any of [1] to [3] A CTL targeting the peptide according to claim 1.
  • a CTL antigen-presenting cell
  • a CTL targeting the peptide according to claim 1.
  • [24] Use of at least one component selected from the group consisting of the following (a) to (e) to induce an immune response to cancer: (A) one or more peptides according to any one of [1] to [3]; (B) one or more polynucleotides encoding the peptide of any one of [1] to [3] in an expressible form; (C) an antigen-presenting cell (APC) that presents a complex of the peptide according to any one of [1] to [3] and an HLA antigen on its own cell surface; (D) an exosome that presents the complex of the peptide according to any one of [1] to [3] and the HLA antigen on its own cell surface; and (e) any of [1] to [3] A CTL targeting the peptide according to claim 1.
  • a CTL antigen-presenting cell
  • [25] Use of at least one component selected from the group consisting of (a) to (e) for treating and / or preventing cancer and / or preventing its recurrence after surgery: (A) one or more peptides according to any one of [1] to [3]; (B) one or more polynucleotides encoding the peptide of any one of [1] to [3] in an expressible form; (C) an antigen-presenting cell (APC) that presents a complex of the peptide according to any one of [1] to [3] and an HLA antigen on its own cell surface; (D) an exosome that presents a complex of the peptide according to any one of [1] to [3] and an HLA antigen on its own cell surface; and (e) any of [1] to [4] A CTL targeting the peptide according to claim 1.
  • APC antigen-presenting cell
  • D an exosome that presents a complex of the peptide according to any one of [1]
  • a method for inducing cytotoxic activity against a CDCA1-expressing cell comprising a step of administering to a subject at least one component selected from the group consisting of the following (a) to (e): (A) one or more peptides according to any one of [1] to [3]; (B) one or more polynucleotides encoding the peptide of any one of [1] to [3] in an expressible form; (C) an antigen-presenting cell (APC) that presents a complex of the peptide according to any one of [1] to [3] and an HLA antigen on its own cell surface; (D) an exosome that presents the complex of the peptide according to any one of [1] to [3] and the HLA antigen on its own cell surface; and (e) any of [1] to [3] A CTL targeting the peptide according to claim 1.
  • APC antigen-presenting cell
  • D an exosome that presents the complex of the peptide according to any one of
  • a lyophilized preparation comprising one or more peptides according to any one of [1] to [3].
  • a pharmaceutical composition prepared by a method comprising dissolving one or more peptides according to any one of [1] to [3] in a water-soluble carrier and sterilizing by filtration. .
  • An emulsion comprising one or more of the peptides according to any one of [1] to [3], a water-soluble carrier, and an oil-based adjuvant.
  • a container containing a lyophilized preparation containing the peptide according to any one of [1] to [3], a container containing an adjuvant, and a reconstituted liquid for the lyophilized preparation are A kit that contains the stored containers.
  • the kit of the present invention preferably further comprises an HLA-A01 detection reagent.
  • C1R Materials and methods C1R, a cell line HLA-A and HLA-B negative human B lymphoblastoid cell line, and COS7, an African green monkey kidney cell line, were purchased from ATCC.
  • HLA-A * 01:01 of constantly expressing target cells prepared HLA-A * 01:01 steady expressing C1R cells (C1R-A01) was used as a cell to stimulate CTL .
  • the cDNA encoding the HLA-A * 01 : 01 gene was amplified by PCR and incorporated into an expression vector.
  • C1R cells transfected with the HLA-A * 01: 01 gene expression vector were selectively cultured in a medium containing G418 (Invitrogen) for 2 weeks. After diluting the G418-resistant C1R cell suspension, the cells were seeded on a 96-well plate, and selectively cultured in a medium containing G418 for 30 days.
  • the expression of HLA-A * 01: 01 in C1R cells was confirmed by flow cytometry analysis.
  • CDCA1-derived peptides HLA-A * 01 The 8mer, 9mer and 10mer peptides derived from CDCA1 that are expected to bind to the binding prediction server ⁇ NetMHC 3.2 '' (www.cbs.dtu.dk/services/NetMHC -3.2 /) (Buus et al., Tissue Antigens. 2003, 62 (5): 378-84; Nielsen et al., Protein Sci.
  • Peptide Synthesis Peptides were chemically synthesized by the American Peptide Company (Sunnyvale, CA) according to standard solid-phase synthesis methods and purified by reverse-phase high-performance liquid chromatography (HPLC). HPLC and mass spectroscopy guaranteed the quality of the peptide (> 90% purity). The peptide was dissolved in dimethylsulfoxide (final concentration: 20 mg / ml) and stored at -80 ° C.
  • DCs Monocyte-derived dendritic cells
  • CTLs cytotoxic T lymphocytes
  • HLA human leukocyte antigen
  • AIM-V medium Invitrogen
  • MP Biomedicals 2% ABS / AIM-V medium
  • DCs differentiated from monocytes by cytokines were pulsed with 20 ⁇ g / ml of each synthetic peptide (37 ° C., 3 hours). Peptide pulses were performed in AIM-V medium.
  • CD8 positive T cells were further stimulated with peptide-pulsed DC.
  • DC was prepared fresh before use by the same method as above.
  • IFN- ⁇ production of CD8-positive T cells against peptide-pulsed C1R-A01 was confirmed by enzyme-linked immunospot (ELISPOT) assay (Tanaka H et al., Br).
  • ELISPOT enzyme-linked immunospot
  • CTL expansion procedure reported by Riddell et al. (Walter EA et al., N Engl J Med 1995, 333 (16): 1038-44; Riddell SR et al., Nat Med 1996, 2 (2): 216-23). CTLs were expanded using a method similar to In tissue culture flasks (FALCON), CTLs with two types of human B lymphoblastoid cell lines (5 ⁇ 10 6 each) treated with mitomycin C and anti-CD3 antibody (BD biosciences, final concentration: 40 ng / ml) was cultured in 5% ABS / AIM-V medium (culture volume 25 ml / flask).
  • FALCON In tissue culture flasks
  • IL-2 was added to the culture (IL-2 final concentration 120 IU / ml).
  • the medium was replaced with a 5% ABS / AIM-V medium containing 60 IU / ml of IL-2 (final concentration of IL-2: 30 IU / ml)
  • IL-2 final concentration 120 IU / ml final concentration of IL-2: 30 IU / ml
  • CTLs were seeded at 1 / well or 10 / well in a 96-well round bottom microplate (Corning).
  • CTLs were cultured in 5% ABS / AIM-V medium (culture volume 150 ⁇ l / well).
  • IFN- ⁇ ELISPOT assay Confirmation of IFN- ⁇ production Confirmation of peptide-specific IFN- ⁇ production of CTL induced using the peptide was performed by IFN- ⁇ ELISPOT assay and IFN- ⁇ ELISA. C1R-A01 pulsed with peptide was prepared as target cells. IFN- ⁇ ELISPOT assay and IFN- ⁇ ELISA were performed according to the procedure recommended by the assay kit manufacturer.
  • Table 1a derived from CDCA1, Table 1b and Table 1c are "NetMHC 3.2" by HLA-A * 01:01 bonds derived CDCA1 predicted to 8 mer, 9mer And 10-mer peptides are shown in descending order of binding affinity.
  • Tables 2a and 2b show the 9mer and 10mer peptides from CDCA1 predicted to bind to HLA-A * 01: 01 by "BIMAS” in order of increasing binding score.
  • Tables 3a and 3b show the 9mer and 10mer peptides derived from CDCA1 predicted to bind to HLA-A * 01: 01 by "SYFPEITHI" in order of decreasing binding score.
  • the number of Start Position in each table indicates the number of the first amino acid of the peptide as counted from the N-terminus of the CDCA1 protein.
  • a total of 39 peptides having the potential for HLA-A * 01 : 01 binding ability were selected as epitope peptide candidates.
  • CDCA1-derived peptide-specific CTL were induced according to the protocol described in “Materials and Methods”. Peptide-specific IFN- ⁇ production was measured by IFN- ⁇ ELISPOT assay (FIG. 1).
  • HLA-A * 01 01- restricted CDCA1-derived peptide-specific CTL clone IFN- ⁇ Well showing specific IFN- ⁇ production against CDCA1-A01-10-136 (SEQ ID NO: 8) in ELISPOT assay No. # 2 (FIG. 1g), well # 6 (FIG. 1h) and CDCA1-A01-10-48 (sequence) showing specific IFN- ⁇ production for CDCA1-A01-10-56 (SEQ ID NO: 10)
  • a CTL clone was established by limiting dilution from the cells of well number # 6 (FIG. 1i) that showed specific IFN- ⁇ production for No. 13).
  • CDCA1-A01-10-136 SEQ ID NO: 8
  • CDCA1-A01-10-56 SEQ ID NO: 10
  • CDCA1-A01-10-48 SEQ ID NO: 13
  • COS7 cells expressing both CDCA1 and HLA-A * 01 : 01 were prepared as target cells.
  • COS7 cells expressing either CDCA1 or HLA-A * 01 : 01 were prepared as negative control cells.
  • the CDCA1-A01-10-136 (SEQ ID NO: 8) -specific CTL clone showed IFN- ⁇ production on COS7 cells that expressed both CDCA1 and HLA-A * 01: 01 (FIG.
  • CDCA1-A01-10-136 (SEQ ID NO: 8) is a peptide generated by antigen processing, is presented on the cell surface together with the HLA-A01 molecule, and is recognized by CTL. Was done. This result suggests that CDCA1-A01-10-136 (SEQ ID NO: 8) is useful as a cancer vaccine for cancer patients with increased CDCA1 expression. .
  • CDCA1-A01-8-138 Homology analysis of antigen peptides CDCA1-A01-8-138 (SEQ ID NO: 1), CDCA1-A01-9-290 (SEQ ID NO: 25), CDCA1-A01-9-130 (SEQ ID NO: 33), CDCA1- A01-9-246 (SEQ ID NO: 34), CDCA1-A01-9-268 (SEQ ID NO: 35), CDCA1-A01-9-288 (SEQ ID NO: 37), CDCA1-A01-10-136 (SEQ ID NO: : 8), CDCA1-A01-10-56 (SEQ ID NO: 10) and CDCA1-A01-10-48 (SEQ ID NO: 13) can induce CTLs that exhibit peptide-specific IFN- ⁇ production confirmed.
  • CDCA1-A01-8-138 (SEQ ID NO: 1), CDCA1-A01-9-290 (SEQ ID NO: 25), CDCA1-A01-9-130 (SEQ ID NO: 33), CDCA1-A01-9- 246 (SEQ ID NO: 34), CDCA1-A01-9-268 (SEQ ID NO: 35), CDCA1-A01-9-288 (SEQ ID NO: 37), CDCA1-A01-10-136 (SEQ ID NO: 8),
  • the BLAST algorithm http: // blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi was used to analyze the homology of the peptide sequences.
  • CDCA1-A01-8-138 (SEQ ID NO: 1), CDCA1-A01-9-290 (SEQ ID NO: 25), CDCA1-A01-9-130 (SEQ ID NO: 33), CDCA1-A01-9 -246 (SEQ ID NO: 34), CDCA1-A01-9-268 (SEQ ID NO: 35), CDCA1-A01-9-288 (SEQ ID NO: 37), CDCA1-A01-10-136 (SEQ ID NO: 8) , CDCA1-A01-10-56 (SEQ ID NO: 10) and CDCA1-A01-10-48 (SEQ ID NO: 13) were found only in CDCA1.
  • the present invention provides a novel HLA-A01-restricted epitope peptide derived from CDCA1, which induces a strong and specific anti-tumor immune response, and thus has applicability to a wide variety of cancer types.
  • the peptides, compositions, APCs, and CTLs of the present invention may be used to express CDCA1-expressing cancers, such as bladder cancer, breast cancer, cervical cancer, cholangiocellular carcinoma, chronic myelogenous leukemia (CML), esophageal cancer , Gastric cancer, non-small cell lung cancer, lymphoma, osteosarcoma, prostate cancer, kidney cancer, small cell lung cancer, head and neck cancer, soft tissue tumor, and colon cancer.
  • CDCA1-expressing cancers such as bladder cancer, breast cancer, cervical cancer, cholangiocellular carcinoma, chronic myelogenous leukemia (CML), esophageal cancer , Gastric cancer, non-small cell lung cancer, lymphoma, osteosarcoma, prostate

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Abstract

本発明は、細胞傷害性T細胞誘導能を有するCDCA1由来のエピトープペプチドを提供する。本発明はまた、該ペプチドをコードするポリヌクレオチド、該ペプチドを提示する抗原提示細胞および該ペプチドを標的とする細胞傷害性T細胞、ならびに該抗原提示細胞または該CTLを誘導する方法を提供する。本発明はさらに、これらを有効成分として含む組成物および薬学的組成物を提供する。さらに本発明は、本発明のペプチド、ポリヌクレオチド、抗原提示細胞、細胞傷害性T細胞、または本発明の薬学的組成物を用いて、がんを治療および／もしくは予防する、ならびに／または術後のその再発を予防する方法を提供する。また、がんに対する免疫応答を誘導する方法を提供する。

Description

ＣＤＣＡ１由来ペプチドおよびそれを含むワクチン
　本発明は、生物科学の分野、より具体的にはがん治療の分野に関する。特に本発明は、がんワクチンとして有効な新規ペプチド、該ペプチドを用いたがんの治療および予防のいずれかまたは両方のための方法、ならびに該ペプチドを含む薬学的組成物に関する。
　細胞傷害性Ｔリンパ球(cytotoxic T lymphocyte: CTL)は、腫瘍細胞表面に発現する主要組織適合複合体（Major histocompatibility complex: MHC）クラスＩ分子上に提示される腫瘍関連抗原(tumor-associated antigen:TAA)由来のエピトープペプチドを認識し、次いで腫瘍細胞を殺傷することが知られている。これまで、メラノーマ抗原（MAGE）ファミリーをはじめとする多くのTAAが、免疫学的アプローチによって発見されてきた（非特許文献1：Boon T, Int J Cancer 1993, 54(2):177-80；非特許文献2：Boon T & van der Bruggen P, J Exp Med 1996, 183(3):725-9）。これらTAAを標的とした免疫療法が、現在臨床開発の過程にある。
　複数のTAAにおいて、CTLに認識され得るエピトープペプチドが同定されており、様々ながん腫に対する免疫療法への応用が期待されている（非特許文献3：Harris CC, J Natl Cancer Inst 1996, 88(20):1442-55；非特許文献4：Butterfield LH et al., Cancer Res 1999, 59(13):3134-42；非特許文献5：Vissers JL et al., Cancer Res 1999, 59(21):5554-9；非特許文献6：van der Burg SH et al., J Immunol 1996, 156(9)3308-14；非特許文献7：Tanaka F et al., Cancer Res 1997, 57(20):4465-8；非特許文献8：Fujie T et al., Int J Cancer 1999, 80(2):169-72；非特許文献9：Kikuchi M et al., Int J Cancer 1999, 81(3):459-66；非特許文献10：Oiso M et al., Int J Cancer 1999, 81(3):387-94）。現在までに、これらのTAA由来CTLエピトープペプチドを使用したがん免疫療法の臨床試験がいくつか報告されているが、残念ながら多くの臨床試験において、奏効率は決して高いものではない（非特許文献11：Belli F et al., J Clin Oncol 2002, 20(20):4169-80；非特許文献12：Coulie PG et al., Immunol Rev 2002, 188:33-42；非特許文献13：Rosenberg SA et al., Nat Med 2004, 10(9):909-15）。したがって、がん免疫療法に適用可能な新規エピトープペプチドの同定が依然として必要とされている。
　CDCA1（細胞分裂周期関連物1（cell division cycle associated 1）；NUF2, NDC80動原体複合体構成要素（NUF2, NDC80 kinetochore complex component）：Nuf2とも記載される。；参照配列：GeneBankアクセッション番号NM_145697（配列番号：44）またはGeneBankアクセッション番号NM_031423（配列番号：46））は、CDC2、サイクリン、トポイソメラーゼIIおよび他の細胞周期遺伝子と共発現する遺伝子のメンバーとして同定された（非特許文献14：Walker et al., Curr Cancer Drug Targets 2001, 1(1):73-83）。CDCA1は有糸分裂中のHela細胞のセントロメアと関連があることが見いだされており、酵母Nuf2の機能的相同体と考えられている（非特許文献15：Wigge PA et al., J Cell Biol 2001, 152(2):349-60）。一方、CDCA1は27,648個の遺伝子を対象としたゲノムワイドcDNAマイクロアレイに基づく遺伝子発現プロファイルにより、非小細胞肺がんにおいて発現の亢進が認められる遺伝子として同定された（非特許文献16：Hayama et al., Cancer Res 2006, 66(21):10339-48；特許文献1：WO2007/013480；特許文献2：WO2005/089735）。肺がん組織および肺がん細胞株においてCDCA1の発現が認められる一方で、精巣を除く22の正常組織にはほとんど発現が認められない（非特許文献16；特許文献1）。さらに、siRNAによるCDCA1の発現抑制の結果、CDCA1を発現する肺がん細胞株における細胞増殖抑制が引き起こされる（非特許文献16；特許文献1-2）。また、CDCA1の発現亢進は胆管細胞がん、膀胱がん、腎細胞がんなど様々ながん腫においても認められている（非特許文献17：Harao M et al., Int J Cancer 2008, 123(11):2616-25）。
　最近では、CDCA1由来のHLA-A02拘束性CTLエピトープペプチド（非特許文献17：Harao et al., Int J Cancer. 2008, 123(11):2616-25；特許文献3：WO2009/025117）、HLA-A24拘束性CTLエピトープペプチド（特許文献4：WO2009/153992）、HLA-A11拘束性CTLエピトープペプチド（特許文献5：WO2016/021508）、HLA-A33拘束性CTLエピトープペプチド（特許文献5：WO2016/021508）およびHLA-A03拘束性CTLエピトープペプチド（特許文献5：WO2016/021508）が同定されている。これらのペプチドによる治療効果は、HLA-A02型、HLA-A24型、HLA-A11型、HLA-A33型またはHLA-A03型を有するがん患者においては期待できるが、それ以外のHLA型を有するがん患者においては各HLA型に応じたペプチドが望まれる。
WO2007/013480 WO2005/089735 WO2009/025117 WO2009/153992 WO2016/021508
Boon T, Int J Cancer 1993, 54(2):177-80 Boon T & van der Bruggen P, J Exp Med 1996, 183(3):725-9 Harris CC, J Natl Cancer Inst 1996, 88(20):1442-55 Butterfield LH et al., Cancer Res 1999, 59(13):3134-42 Vissers JL et al., Cancer Res 1999, 59(21):5554-9 van der Burg SH et al., J Immunol 1996, 156(9):3308-14 Tanaka F et al., Cancer Res 1997, 57(20):4465-8 Fujie T et al., Int J Cancer 1999, 80(2):169-72 Kikuchi M et al., Int J Cancer 1999, 81(3):459-66 Oiso M et al., Int J Cancer 1999, 81(3):387-94 Belli F et al., J Clin Oncol 2002, 20(20):4169-80 Coulie PG et al., Immunol Rev 2002, 188:33-42 Rosenberg SA et al., Nat Med 2004, 10(9):909-15 Walker et al., Curr Cancer Drug Targets 2001,1(1):73-83 Wigge PA et al., J Cell Biol 2001,152(2):349-60 Hayama et al., Cancer Res 2006,66(21):10339-48 Harao et al., Int J Cancer 2008,123(11):2616-25
　本発明は、CDCA1発現細胞に対して特異的に反応する細胞傷害性T細胞（CTL）を誘導し得るペプチドに関する。これらのペプチドが、ヒト白血球抗原（human leukocyte antigen：HLA）によって抗原提示細胞（antigen-presenting cell：APC）上に提示され、CD8陽性T細胞に認識されると、ペプチド特異的な細胞傷害活性を示すCTLが誘導される。これまでに同定されているCTL誘導能を有するCDCA1由来ペプチドは、HLA-A02拘束性、HLA-A24拘束性、HLA-A11拘束性、HLA-A33拘束性またはHLA-A03拘束性のペプチドであり、抗原提示細胞がこれらのHLAを発現していない場合、CTLを誘導することができない。そのため、これらのHLAを有さないがん患者（対象）に対して免疫療法を行う場合には、従来のペプチドは適さない。HLA-A01は、白人に高頻度で認められるHLAアリルである（Cao K et al., Hum Immunol 2001, 62(9):1009-30）。HLA-A01陽性のがん患者に対しては、HLA-A01拘束性のペプチドを投与することが望まれる。よって、本発明は、HLA-A01拘束性のCDCA1由来ペプチドであって、CTL誘導能を有するペプチドに関する。本明細書に開示された結果から、本発明のペプチドが、CDCA1およびHLA-A01を発現するがん細胞に対する強力かつ特異的な免疫応答を誘導し得るエピトープペプチドであることが実証される。
　したがって、HLA-A01拘束性の様式で、CTLを誘導し得るCDCA1由来のペプチドを提供することは、本発明の1つの目的である。これらのペプチドは、CTLをインビトロ、エクスビボまたはインビボで誘導するために用いることができ、または、CDCA1を発現するがん細胞に対する免疫応答を誘導する目的で対象に投与するために用いることができる。好ましいペプチドは配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37より選択されるアミノ酸配列を含むものであり、より好ましくはノナペプチドまたはデカペプチドであり、さらに好ましくは、配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37の中より選択されるアミノ酸配列からなるペプチドである。
　本発明のペプチドは、結果として生じる改変ペプチドが元のペプチドのCTL誘導能を保持する限り、1個、2個、またはそれ以上のアミノ酸が置換、欠失、挿入および／または付加されているペプチドも包含する。
　本発明はまた、本発明のペプチドのいずれか1つをコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。これらのポリヌクレオチドは、本発明のペプチドと同様に、CTL誘導能を有するAPCを誘導するために用いることができ、またはCDCA1を発現するがん細胞に対する免疫応答を誘導するために対象に投与することができる。
　本発明はまた、本発明の1種類もしくは複数種のペプチド、本発明の1種類もしくは複数種のペプチドをコードする1種類もしくは複数種のポリヌクレオチド、本発明のAPC、本発明のペプチドを提示するエキソソーム、および／または本発明のCTLを含む組成物を提供する。本発明の組成物は好ましくは薬学的組成物である。本発明の薬学的組成物は、がんの治療および／または予防、ならびに術後のその再発の予防のために用いることができる。またがんに対する免疫応答を誘導するために用いることができる。対象に投与した場合、本発明のペプチドは、APCの表面上に提示され、それにより該ペプチドを標的とするCTLが誘導される。したがって、CTLを誘導するための組成物であって、本発明の1種類もしくは複数種のペプチド、本発明の1種類もしくは複数種のペプチドをコードする1種類もしくは複数種のポリヌクレオチド、本発明のAPC、および／または本発明のペプチドを提示するエキソソームを含む組成物を提供することは、本発明のさらなる目的である。
　CTL誘導能を有するAPCを誘導する方法であって、APCを本発明の1種類もしくは複数種のペプチドと接触させる段階、または本発明のペプチドのいずれか1つをコードするポリヌクレオチドをAPCに導入する段階を含む方法を提供することは、本発明のさらなる目的である。
　本発明はまた、CD8陽性T細胞を、HLA抗原と本発明のペプチドとの複合体を自身の表面上に提示するAPCと共培養する段階、CD8陽性T細胞を、HLA抗原と本発明のペプチドとの複合体を自身の表面上に提示するエキソソームと共培養する段階、または細胞表面上にHLA抗原により提示された本発明のペプチドに結合し得るT細胞受容体（T cell receptor：TCR）の各サブユニットをコードするポリヌクレオチドを含むベクターをCD8陽性T細胞に導入する段階を含む、CTLを誘導する方法を提供する。
　HLA抗原と本発明のペプチドとの複合体を自身の表面上に提示する単離されたAPCを提供することは、本発明のさらに別の目的である。本発明はさらに、本発明のペプチドを標的とする単離されたCTLを提供する。これらのAPCおよびCTLは、CDCA1を発現するがんに対する免疫療法に用いることができる。
　対象においてがんに対する免疫応答を誘導する方法であって、本発明のペプチドまたは該ペプチドをコードするポリヌクレオチド、本発明のAPC、本発明のペプチドを提示するエキソソーム、および／または本発明のCTLを含む組成物を該対象に投与する段階を含む方法を提供することは、本発明の別の目的である。さらに、対象においてがんを治療および／または予防、ならびに術後のその再発を予防する方法であって、本発明のペプチド、該ペプチドをコードするポリヌクレオチド、本発明のAPC、本発明のペプチドを提示するエキソソーム、および／または本発明のCTLを該対象に投与する段階を含む方法を提供することは、本発明の別の目的である。
　上記に加え、本発明の他の目的および特徴は、添付の図表および実施例と併せて以下の詳細な説明を読むことによって、より十分に明らかになる。しかしながら、前述の発明の概要および以下の詳細な説明はいずれも例示的な態様であり、本発明または本発明のその他の代替的な態様を限定するものではないことが理解されるべきである。特に、本発明をいくつかの特定の態様を参照して本明細書において説明するが、その説明は本発明を例証するものであり、本発明を限定するものとして構成されていないことが理解されよう。添付の特許請求の範囲によって記載される本発明の精神および範囲から逸脱することなく、当業者は様々な変更および適用に想到することができる。同様に、本発明のその他の目的、特徴、利益、および利点は、本概要および以下に記載する特定の態様から明らかになり、当業者には容易に明白になるであろう。そのような目的、特徴、利益、および利点は、添付の実施例、データ、図表、およびそれらから引き出されるあらゆる妥当な推論と併せて上記から、単独で、または本明細書に組み入れられる参考文献を考慮して、明らかになるであろう。
図1は、CDCA1由来ペプチドで誘導した細胞を用いて実施したIFN-γ酵素結合免疫スポット（ELISPOT）アッセイの結果を示す写真（a）～（ｊ）から構成される。図中、「＋」は、目的のペプチドをパルスした標的細胞に対するIFN-γ産生を示し、「－」は、いずれのペプチドもパルスしていない標的細胞に対するIFN-γ産生を示す（陰性対象）。CDCA1-A01-8-138（配列番号：1）を用いたウェル番号#1（a）、CDCA1-A01-9-290（配列番号：25）を用いたウェル番号#7（b）、CDCA1-A01-9-130（配列番号：33）を用いたウェル番号#5（c）、CDCA1-A01-9-246（配列番号：34）を用いたウェル番号#7（d）、CDCA1-A01-9-268（配列番号：35）を用いたウェル番号#1（e）、CDCA1-A01-9-288（配列番号：37）を用いたウェル番号#3（f）、CDCA1-A01-10-136（配列番号：8）を用いたウェル番号#2（g）、CDCA1-A01-10-56（配列番号：10）を用いたウェル番号#6（h）およびCDCA1-A01-10-48（配列番号：13）を用いたウェル番号#6（i）において、陰性対照と比較してペプチド特異的なIFN-γ産生が認められた。写真上、四角で囲まれた反応を示した細胞から、CTLクローンを樹立した。対照的に、ペプチド特異的なIFN-γ産生が認められなかった典型的な陰性データの例として、CDCA1-A01-10-66（配列番号：9）（j）を示す。
図2は、CDCA1-A01-10-136（配列番号：8）、CDCA1-A01-10-56（配列番号：10）またはCDCA1-A01-10-48（配列番号：13）による誘導後、限界希釈法によって樹立されたCTLクローンのIFN-γ産生を示す一連の折れ線グラフ（a）～（c）から構成される。これらの結果は、CTLクローンのペプチド特異的なIFN-γ産生を示している。図中、「＋」は、目的のペプチドをパルスした標的細胞に対するCTLクローンのIFN-γ産生を示し、「－」は、いずれのペプチドもパルスしていない標的細胞に対するCTLクローンのIFN-γ産生を示す。R/S比は、応答細胞（Responder cells）であるCTLクローンの細胞数と、それを刺激する標的細胞（Stimulator cells）の細胞数の比を示す。
図3は、CDCA1およびHLA-A*01:01の両方を発現させた標的細胞に対するCTLクローンのIFN-γ産生を示す折れ線グラフである。HLA-A*01:01または全長CDCA1遺伝子のいずれか一方のみを発現させたCOS7細胞を陰性対照とした。CDCA1-A01-10-136（配列番号：8）による誘導後に樹立されたCTLクローンは、CDCA1およびHLA-A*01:01遺伝子の両方を導入したCOS7細胞に対してIFN-γ産生を示した（黒菱形）。一方、HLA-A*01:01（三角）またはCDCA1（白丸）のいずれか一方を導入したCOS7細胞に対しては、有意なIFN-γ産生を示さなかった。
　本発明の態様を実施または試験するにあたって、本明細書に記載の方法および材料と類似のまたは同等の任意の方法および材料を用いることができるが、好ましい方法、装置、および材料をここに記載する。しかしながら、本発明の材料および方法について記載する前に、本明細書に記載の特定の大きさ、形状、寸法、材料、方法論、プロトコール等は慣例的な実験法および最適化に応じて変更可能であるため、本発明がこれらに限定されないことが理解されるべきである。本記載に使用する専門用語は特定の型または態様のみを説明する目的のためのものであり、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される本発明の範囲を限定することは意図されないことも、また理解されるべきである。
Ｉ．定義
　本明細書で用いる「1つの（a）」、「1つの（an）」および「その（the）」という単語は、他に特記されない限り「少なくとも１つの」を意味する。
　物質（例えば、ペプチド、抗体、ポリヌクレオチド等）に関して用いる「単離された」および「精製された」という用語は、該物質がそうでなければ天然源中に含まれ得る少なくとも1種の物質を実質的に含まないことを示す。したがって、単離または精製されたペプチドは、そのペプチドが由来する細胞もしくは組織源からの他の細胞材料、例えば糖質、脂質、および他の混入タンパク質を実質的に含まないペプチドを指す。またはペプチドが化学合成される場合には、単離または精製されたペプチドは前駆体物質もしくは他の化学物質を実質的に含まないペプチドを指す。「細胞材料を実質的に含まない」という用語は、それが単離された細胞または組換え産生された細胞の細胞成分から、ペプチドが分離されたペプチドの調整物を含む。したがって、細胞材料を実質的に含まないペプチドは、約30%、20%、10%、または5%、3%、2%または1%（乾燥重量ベース）未満の他の細胞材料を含有する、ペプチドの調製物を包含する。ペプチドを組換え産生する場合、単離または精製されたペプチドは、培養培地も実質的に含まず、培養培地を実質的に含まないペプチドは、培養培地をペプチド調製物の容量の約20%、10%、または5%、3%、2%または1%（乾燥重量ベース）未満で含有する、ペプチドの調製物を包含する。ペプチドを化学合成によって生成する場合、単離または精製されたペプチドは、前駆体物質および他の化学物質を実質的に含まず、前駆体物質および他の化学物質を実質的に含まないペプチドは、前駆体物質および他の化学物質をペプチド調製物の容量の約30%、20%、10%、5%、3%、2%または1%（乾燥重量ベース）未満で含有する、ペプチドの調製物を包含する。特定のペプチド調製物が単離または精製されたペプチドであることは、例えば、ドデシル硫酸ナトリウム（SDS）－ポリアクリルアミドゲル電気泳動およびゲルのクーマシーブリリアントブルー染色等の後の単一バンドの出現によって確認することができる。好ましい態様では、本発明のペプチドおよびポリヌクレオチドは単離または精製されている。
　「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」という用語は、本明細書で互換的に用いられ、アミノ酸残基のポリマーを指す。本用語は、天然型アミノ酸ポリマーのほか、1個もしくは複数個の非天然型アミノ酸残基を含む非天然型アミノ酸ポリマーにも適用される。非天然型アミノ酸には、アミノ酸類似体およびアミノ酸模倣体などが含まれる。
　本明細書で用いる「アミノ酸」という用語は、天然アミノ酸、ならびに天然アミノ酸と同様に機能するアミノ酸類似体およびアミノ酸模倣体を指す。天然アミノ酸とは、遺伝暗号によってコードされるアミノ酸、および細胞内で翻訳後に修飾されたアミノ酸（例えば、ヒドロキシプロリン、γ-カルボキシグルタミン酸、およびO-ホスホセリンなど）である。「アミノ酸類似体」という語句は、天然アミノ酸と同じ基本化学構造（水素、カルボキシ基、アミノ基、およびＲ基に結合したα炭素）を有するが、修飾されたR基または修飾された骨格を有する化合物（例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシドおよびメチオニンメチルスルホニウムなど）を指す。「アミノ酸模倣体」という語句は、一般的なアミノ酸とは異なる構造を有するが、アミノ酸と同様の機能を有する化合物を指す。アミノ酸はL-アミノ酸またはD-アミノ酸のいずれであってもよいが、本発明のペプチドは、L-アミノ酸のポリマーであることが好ましい。
　「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」、および「核酸」という用語は、本明細書において互換的に用いられ、ヌクレオチドのポリマーを指す。
　本明細書で使用する「組成物」という用語は、特定量の特定成分を含む生成物、および特定量の特定成分の組み合わせから直接または間接的に生じる任意の生成物を包含することが意図される。組成物が薬学的組成物である場合には、組成物という用語は、有効成分および不活性成分とを含む生成物、ならびに任意の2つもしくはそれ以上の成分の組み合わせ、複合体形成、もしくは凝集から、1つもしくは複数の成分の解離から、または1つもしくは複数の成分の他の種類の反応もしくは相互作用から直接または間接的に生じる任意の生成物を包含することが意図される。したがって、本発明の薬学的組成物は、本発明の化合物または細胞と薬学的または生理学的に許容される担体とを混合することにより作製される任意の組成物を包含する。本明細書で使用する「薬学的に許容される担体」または「生理学的に許容される担体」という語句は、液体もしくは固体の増量剤、希釈剤、賦形剤、溶媒および封入材料を含むがこれらに限定されない、薬学的または生理学的に許容される材料、組成物、物質、または媒体を意味する。
　特記しない限り、「がん」という用語は、CDCA1遺伝子を過剰発現するがんを指し、その例としては、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、胆管細胞がん、慢性骨髄性白血病（CML）、食道がん、胃がん、非小細胞肺がん、リンパ腫、骨肉腫、前立腺がん、腎がん、小細胞肺がん、頭頸部がん、軟部組織腫瘍、および大腸がんなどが含まれるが、これらに限定されない。また、例示的な態様において、「がん」は、CDCA1とHLA-A01を発現するがんである。
　特記しない限り、「細胞傷害性Tリンパ球」、「細胞傷害性T細胞」、および「CTL」という用語は本明細書において互換的に用いられ、特に別段の定めのない限り、非自己細胞（例えば、腫瘍／がん細胞、ウイルス感染細胞）を認識し、そのような細胞の死滅を誘導することができるTリンパ球の亜群を指す。
　特記しない限り、「HLA-A01（HLA-A1）」という用語は、HLA-A*01:01、HLA-A*01:02、HLA-A*01:03、HLA-A*01:04などのサブタイプを含むHLA-A01型を指す。
　対象または患者との関連において、本明細書で使用される「対象の（または患者の）HLA抗原はHLA-A01である」という表現は、対象または患者がMHC（主要組織適合複合体）クラスＩ分子としてのHLA-A01抗原遺伝子をホモ接合的またはヘテロ接合的に保有し、かつHLA-A01抗原が対象または患者の細胞においてHLA抗原として発現されることを指す。
　本発明の方法および組成物ががんの「治療」との関連において有用である限り、治療が臨床的利点、例えば対象におけるがんの大きさ、広がり、もしくは転移能の減少、がんの進行遅延、がんの臨床症状の緩和、生存期間の延長、術後再発の抑制等をもたらす場合に、治療は「有効である」とみなされる。治療を予防的に適用する場合、「有効な」とは、治療によって、がんの形成が遅延されるもしくは妨げられるか、またはがんの臨床症状が妨げられるもしくは緩和されることを意味する。有効性は、特定の腫瘍の種類を診断または治療するための任意の公知の方法と関連して決定される。
　本発明の方法および組成物ががんの「予防」との関連において有用である限り、「予防」という用語は本明細書において、疾患による死亡率または罹患率の負荷を軽減させる任意の働きを含む。予防は、「第一次、第二次、および第三次の予防レベル」で行われ得る。第一次の予防は疾患の発生を回避するのに対し、第二次および第三次レベルの予防は、疾患の進行および症状の出現を予防することに加え、機能を回復させ、かつ疾患関連の合併症を減少させることによって、既存の疾患の悪影響を低下させることを目的とした働きを包含する。あるいは、予防は、特定の障害の重症度を緩和すること、例えば腫瘍の増殖および転移を減少させることを目的とした広範囲の予防的治療を含み得る。
　本発明との関連において、がんの治療および／もしくは予防、ならびに／または術後のその再発の予防は、がん細胞の増殖阻害、腫瘍の退行または退縮、寛解の誘導およびがんの発生の抑制、腫瘍退縮、ならびに転移の低減または阻害、がんの術後の再発抑制、および生存期間の延長などの事象のいずれかを含む。がんの効果的な治療および／または予防は、死亡率を減少させ、がんを有する個体の予後を改善し、血中の腫瘍マーカーのレベルを低下させ、かつがんに伴う検出可能な症状を緩和する。例えば、症状の軽減または改善は効果的な治療および／または予防を構成し、10%、20%、30%、もしくはそれ以上の軽減もしくは症状が安定した状態を含む。
　本発明との関連において、「抗体」という用語は、指定のタンパク質またはそのペプチドと特異的に反応する免疫グロブリンおよびその断片を指す。抗体には、ヒト抗体、霊長類化抗体、キメラ抗体、二重特異性抗体、ヒト化抗体、他のタンパク質または放射標識と融合させた抗体、および抗体断片が含まれ得る。さらに、本明細書において「抗体」は広義で使用され、具体的にはインタクトなモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、2以上のインタクトな抗体から形成される多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）を包含し、また所望の生物活性を示す限り、抗体断片を包含する。「抗体」は、いずれのクラス（例えば、IgA、IgD、IgE、IgG、およびIgM）の抗体であってもよい。
　特記しない限り、本明細書で使用する技術用語および科学用語はすべて、本発明が属する技術分野の当業者によって共通して理解されている用語と同じ意味を有する。
ＩＩ．ペプチド
　HLA-A01は、白人の中でよく見られるHLAアリルである（Cao et al., Hum Immunol 2001, 62(9): 1009-30）。そのため、HLA-A01によって拘束されるCDCA1由来のCTL誘導性ペプチドを提供することにより、多くの白人に、CDCA1を発現するがんの有効な治療方法を提供することができる。よって、本発明は、HLA-A01拘束性の様式でCTLを誘導し得るCDCA1由来のペプチドを提供する。
　本発明のペプチドは、HLA-A01拘束性の様式でCTLを誘導し得るCDCA1由来のペプチドである。HLA-A01拘束性の様式でCTLを誘導し得るペプチドとしては、配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37の中より選択されるアミノ酸配列を有するペプチドが挙げられる。
　これらのペプチドでパルスした樹状細胞によるT細胞のインビトロでの刺激により、これらのペプチドに特異的な細胞傷害活性を有するCTLが樹立され得る。樹立されたCTLは、各ペプチドをパルスした標的細胞に対して特異的細胞傷害活性を示す。
　CDCA1遺伝子は、がん細胞、例えば、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、胆管細胞がん、慢性骨髄性白血病（CML）、食道がん、胃がん、非小細胞肺がん、リンパ腫、骨肉腫、前立腺がん、腎がん、小細胞肺がん、頭頸部がん、軟部組織腫瘍、および大腸がんなどのがん細胞で過剰発現しているが、ほとんどの正常器官では発現しないため、免疫療法のための優れた標的である。したがって本発明のペプチドは、がんの免疫療法のために好適に用いることができる。好ましいペプチドは、ノナペプチド（アミノ酸残基9個からなるペプチド）またはデカペプチド（アミノ酸残基10個からなるペプチド）であり、配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37の中より選択されるアミノ酸配列からなるペプチドがより好ましい。例えば、配列番号：8に記載のアミノ酸配列を有するペプチドは、HLA-A01とCDCA1とを発現する細胞に対して特異的な細胞傷害活性を示すCTLの誘導に適しており、HLA-A01陽性患者におけるがんの免疫療法のために好適に使用することができる。より好ましい態様では、本発明のペプチドは、配列番号：8のアミノ酸配列からなるペプチドである。
　本発明のペプチドは、結果として生じるペプチドが元のペプチドCTL誘導能を保持する限り、本発明のペプチドのアミノ酸配列に付加的なアミノ酸残基を隣接させることができる。付加的なアミノ酸残基は、それらが元のペプチドのCTL誘導能を損なわない限り、任意の種類のアミノ酸から構成され得る。したがって本発明のペプチドは、配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37の中より選択されるアミノ酸配列を含む、CTL誘導能を有するペプチドを包含する。そのようなペプチドは、例えば約40アミノ酸未満であり、多くの場合には約20アミノ酸未満であり、通常は約15アミノ酸未満である。したがって、本発明のペプチドは、元のペプチドがノナペプチドであれば、当該ペプチドに付加的なアミノ酸を隣接させることによって生じる10アミノ酸長、または11～40アミノ酸長のペプチドを包含する。また、元のペプチドが、デカペプチドであれば、11～40アミノ酸長のペプチドを包含する。そのようなペプチドは、例えば、11～20アミノ酸長のペプチドであることができ、11～15アミノ酸長のペプチドであることができる。付加的なアミノ酸残基の好ましい例は、CDCA1の全長アミノ酸配列（例えば、配列番号：64）において本発明のペプチドのアミノ酸配列に隣接するアミノ酸残基である。したがって、本発明のペプチドは、配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37の中より選択されるアミノ酸配列を含む、CDCA1のペプチド断片であって、CTL誘導能を有するペプチドを包含する。
　一般的に、あるペプチド中の1個、2個、またはそれ以上のアミノ酸の改変は該ペプチドの機能に影響を及ぼさず、場合によっては元のペプチドの所望の機能を増強することさえある。実際に、改変ペプチド（すなわち、元の参照配列と比較して、1個、2個、または数個のアミノ酸残基が改変された（すなわち、置換、欠失、挿入および／または付加された）アミノ酸配列から構成されるペプチド）は、元のペプチドの生物活性を保持することが知られている（Mark et al., Proc Natl Acad Sci USA 1984, 81: 5662-6；Zoller and Smith, Nucleic Acids Res 1982, 10: 6487-500；Dalbadie-McFarland et al., Proc Natl Acad Sci USA 1982, 79: 6409-13）。したがって、一態様において、本発明のペプチドは、配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37の中より選択されるアミノ酸配列に対して1個、2個、または数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入および／または付加されたアミノ酸配列を含み、かつCTL誘導能を有するペプチドであり得る。
　当業者は、元のアミノ酸側鎖の特性の保存をもたらす傾向がある、単一のアミノ酸またはわずかな割合のアミノ酸を変更する、アミノ酸配列に対する個々の置換を認識することができる。したがって、それらはしばしば「保存的置換」または「保存的改変」と称され、「保存的置換」または「保存的改変」によるタンパク質の改変は、元のタンパク質と類似の機能を有する改変タンパク質を生じ得る。機能的に類似しているアミノ酸を提示する保存的置換の表は、当技術分野において周知である。機能的に類似しているアミノ酸側鎖の特性の例には、例えば、疎水性アミノ酸（A、I、L、M、F、P、W、Y、V）、親水性アミノ酸（R、D、N、C、E、Q、G、H、K、S、T）、ならびに以下の官能基または特徴を共通して有する側鎖が含まれる：脂肪族側鎖（G、A、V、L、I、P）；ヒドロキシル基含有側鎖（S、T、Y）；硫黄原子含有側鎖（C、M）；カルボン酸およびアミド含有側鎖（D、N、E、Q）；塩基含有側鎖（R、K、H）；および芳香族含有側鎖（H、F、Y、W）。加えて、以下の8群はそれぞれ、相互に保存的置換であるとして当技術分野で認められているアミノ酸を含む：
1）アラニン（A）、グリシン（G）；
2）アスパラギン酸（D）、グルタミン酸（E）；
3）アスパラギン（N）、グルタミン（Q）；
4）アルギニン（R）、リジン（K）；
5）イソロイシン（I）、ロイシン（L）、メチオニン（M）、バリン（V）；
6）フェニルアラニン（F）、チロシン（Y）、トリプトファン（W）；
7）セリン（S）、スレオニン（T）；および
8）システイン（C）、メチオニン（M）（例えば、Creighton，Proteins 1984を参照されたい）。
　このような保存的改変ペプチドもまた、本発明のペプチドに包含される。しかしながら、本発明のペプチドはこれらに限定されず、改変ペプチドが元のペプチドのCTL誘導能を保持する限り、非保存的な改変を含み得る。さらに、改変ペプチドは、CDCA1の多型変異体、種間相同体、および対立遺伝子由来のCTL誘導可能なペプチドを排除しない。
　元のペプチドのCTL誘導能を保持する限り、少数の（例えば、1個、2個、または数個の）またはわずかな割合のアミノ酸を改変する（すなわち、置換、欠失、挿入および／または付加する）ことができる。本明細書において、「数個」という用語は、5個またはそれ未満のアミノ酸、例えば4個もしくは3個またはそれ未満を意味する。改変するアミノ酸の割合は、好ましくは20%もしくはそれ未満、より好ましくは15%もしくはそれ未満、さらにより好ましくは10%もしくはそれ未満、または1～5%である。
　免疫療法との関連で用いられた場合、本発明のペプチドは、好ましくはHLA抗原との複合体として、細胞またはエキソソームの表面上に提示される。したがって、本発明のペプチドは、HLA抗原に対する高い結合親和性を有することが好ましい。そのため、アミノ酸残基の置換、欠失、挿入および／または付加によってペプチドを改変して、結合親和性が改善された改変ペプチドを得てもよい。HLA抗原への結合によって提示されるペプチドの配列の規則性は既知であることから（Falk et al., Immunogenetics 1994, 40 232-41; Chujoh, et al., Tissue Antigens 1998,  52: 501-9; Takiguchi et al., Tissue Antigens 2000, 55: 296-302.）、そのような規則性に基づいた改変を本発明のペプチドに導入することができる。
　例えば、HLA Class Iに対する結合性を有するペプチドでは、一般に、N末端から2番目のアミノ酸およびC末端のアミノ酸がHLA Class Iへの結合に関与するアンカー残基であることが多い（Rammensee HG et al., Immunogenetics. 1995, 41(4):178-228.）。例えば、HLA-A01では、N末端から3番目のアミノ酸としてアスパラギン酸およびグルタミン酸が、C末端のアミノ酸としてチロシンが、HLA-A01に対する結合親和性が高いアンカー残基として知られている。さらに、HLA-A01では、N末端から2番目の位置に補助的なアンカー残基を有し、N末端から2番目のアミノ酸としてはスレオニンおよびセリンが好ましいことが知られている。（Kubo,R.T Journal of Immunology 1994, 152:3913-24、Gambacorti-Passerini,C.Clinical Cancer Research 1997, 3:675-83、Falk,K.Immunogenetics 1994;40:238-41）。そのため、HLA-A01結合親和性を増大させるためには、N末端から3番目のアミノ酸をアスパラギン酸もしくはグルタミン酸で置換すること、および／またはC末端のアミノ酸をチロシンで置換することが望ましい可能性がある。さらに、N末端から2番目のアミノ酸をスレオニンもしくはセリンで置換することが望ましい可能性がある。したがって、配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37の中から選択されるアミノ酸配列において、Ｎ末端から2番目のアミノ酸がスレオニンもしくはセリンで置換されている、N末端から3番目のアミノ酸がアスパラギン酸もしくはグルタミン酸で置換されている、および／またはC末端のアミノ酸がチロシンで置換されている、アミノ酸配列を含むCTL誘導能を有するペプチドは、本発明のペプチドに包含される。好ましい態様では、本発明のペプチドは、配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37の中から選択されるアミノ酸配列において、N末端から2番目のアミノ酸がスレオニンもしくはセリンで置換されている、N末端から3番目のアミノ酸がアスパラギン酸もしくはグルタミン酸で置換されている、および／またはC末端のアミノ酸がチロシンで置換されている、アミノ酸配列からなるCTL誘導能を有するペプチドであり得る。すなわち、本発明のペプチドは、配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37の中から選択されるアミノ酸配列において、以下の（a）～（c）の中より選択される1以上の置換を有するアミノ酸配列を含む、CTL誘導能を有するペプチドを包含する：
（a）N末端から2番目のアミノ酸がスレオニンまたはセリンで置換されている；
（b）N末端から3番目のアミノ酸がアスパラギン酸またはグルタミン酸で置換されている；
（c）C末端のアミノ酸がチロシンで置換されている。
　好ましい態様では、本発明のペプチドは、配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37の中から選択されるアミノ酸配列に対して、上記（a）～（c）の中より選択される1以上の置換がされたアミノ酸配列からなる、CTL誘導能を有するペプチドであり得る。本発明において、好ましい置換の数は、上記（a）～（c）の中より選択される1個、2個または3個の置換である。
　また、本発明のペプチドは、配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37の中から選択されるアミノ酸配列において、N末端から3番目のアミノ酸がアスパラギン酸もしくはグルタミン酸で置換されている、および／またはC末端のアミノ酸がチロシンで置換されている、アミノ酸配列を含むCTL誘導能を有するペプチドであり得る。好ましくは、本発明のペプチドは、配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37の中から選択されるアミノ酸配列において、N末端から3番目のアミノ酸がアスパラギン酸もしくはグルタミン酸で置換されている、および／またはC末端のアミノ酸がチロシンで置換されている、アミノ酸配列からなるCTL誘導能を有するペプチドであり得る。すなわち、本発明のペプチドは、配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37の中から選択されるアミノ酸配列に対して、以下の（a）および（b）の中より選択される1以上の置換がされたアミノ酸配列を含む、CTL誘導能を有するペプチドであり得る：
（a）N末端から3番目のアミノ酸がアスパラギン酸またはグルタミン酸で置換されている；および
（b）C末端のアミノ酸がチロシンで置換されている。
　好ましい態様では、本発明のペプチドは、配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37の中から選択されるアミノ酸配列に対して、上記（a）～（b）の中より選択される1以上の置換がされたアミノ酸配列からなる、CTL誘導能を有するペプチドであり得る。
　アンカー部位のアミノ酸においてだけでなく、ペプチドの潜在的なＴ細胞受容体（TCR）認識部位においても、置換を導入することができる。いくつかの研究は、例えばCAP1、p53（264-272）、Her-2/neu（369-377）、またはgp100（209-217）など、アミノ酸置換を有するペプチドが元のペプチドと同等の活性を有するかまたはより優れた活性を有し得ることを実証している（Zaremba et al. Cancer Res. 1997, 57, 4570-7、T. K. Hoffmann et al. J Immunol. 2002,168(3):1338-47、S. O. Dionne et al. Cancer Immunol immunother. 2003, 52: 199-206、およびS. O. Dionne et al. Cancer Immunology, Immunotherapy 2004, 53, 307-14）。
　本発明はまた、本発明のペプチド（例えば、配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37の中から選択されるアミノ酸配列からなるペプチド）のN末端および／またはC末端に、1個、2個、または数個のアミノ酸を付加することができることを企図する。CTL誘導能を保持するそのような改変ペプチドもまた、本発明に含まれる。例えば、配列番号：8に記載のアミノ酸配列からなるペプチドのN末端および／またはC末端に1個、2個、または数個のアミノ酸が付加されたペプチドは、APCに接触させると、APC内に取り込まれてプロセッシングを受け、配列番号：8に記載のアミノ酸配列からなるペプチドとなる。その後、抗原提示経路を経て、APCの細胞表面に提示さることにより、CTLを誘導し得る。すなわち本発明のペプチドは、N末端およびC末端の、いずれか、または両方に1個、2個、または数個のアミノ酸が付加されたペプチドであることができる。
　さらに本発明の別の態様においては、各配列番号によって参照されるアミノ酸配列中に、1個、2個、あるいは数個のアミノ酸の置換を含み、かつ当該置換アミノ酸配列のN末端およびC末端の、いずれか、または両方に、1個、2個、または数個のアミノ酸を付加したアミノ酸配列からなるペプチドを提供する。
　本発明のペプチドがアミノ酸の置換を含む場合、望ましい置換位置は、たとえば、本発明のペプチド中に含まれている、配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37によって参照されるアミノ酸配列の、N末端から2番目、N末端から3番目、およびC末端から選択される1個、2個、あるいは3個であることができる。
　しかしながら、ペプチドのアミノ酸配列が、異なる機能を有する内因性または外因性タンパク質のアミノ酸配列の一部と同一である場合、自己免疫障害および／または特定の物質に対するアレルギー症状などの副作用が誘発される可能性がある。したがって、ペプチドのアミノ酸配列が他のタンパク質のアミノ酸配列と一致する状況を回避するために、利用可能なデータベースを用いて相同性検索を行うことが好ましい。相同性検索から、対象ペプチドと比較して1個または2個のアミノ酸が異なるペプチドさえも存在しないことが明らかになった場合には、そのような副作用の危険を伴うことなしに、HLA抗原とのその結合親和性を増大させるため、および／またはそのCTL誘導能を増大させるために、該対象ペプチドを改変することができる。
　本発明のペプチドの1個、2個、または数個のアミノ酸が改変されたペプチドは、元のペプチドのCTL誘導能を保持し得ると予測されるが、改変ペプチドに関してCTL誘導能を確認することが好ましい。本明細書において「CTL誘導能を有するペプチド」とは、そのペプチドで刺激されたAPCによって、CTLが誘導されるペプチドを指す。「CTLの誘導」には、CTLへの分化誘導、CTL活性化の誘導、CTL増殖の誘導、CTLの細胞傷害活性の誘導、CTLによる標的細胞の溶解の誘導、およびCTLのIFN-γ産生増加の誘導が含まれる。
　CTL誘導能の確認は、HLA抗原を保有するAPC（例えば、Bリンパ球、マクロファージ、および樹状細胞）を誘導し、ペプチドで刺激した後、CD8陽性T細胞と混合し、その後、標的細胞に対してCTLによって放出されたIFN-γを測定することにより行うことができる。APCは、好ましくは、ヒト末梢血単核白血球由来の樹状細胞を使用することができる。反応系として、HLA抗原を発現するように作製されたトランスジェニック動物を用いることもできる。また、例えば、標的細胞を51Cr等で放射標識し、標的細胞から放出された放射活性からペプチドで誘導されたCTLの細胞傷害活性を算出することができる。あるいは、ペプチドで刺激したAPCの存在下で、CTLによって産生および放出されたIFN-γを測定し、抗IFN-γモノクローナル抗体を用いて培地上の阻止帯を可視化することによって、CTL誘導能を評価することができる。
　上記の改変に加えて、本発明のペプチドは、結果として生じる連結ペプチドがCTL誘導能を保持する限り、他のペプチドに連結させることもできる。本発明のペプチドと連結させる適切なペプチドの例としては、TAAに由来するCTL誘導性ペプチドが挙げられる。また、本発明のペプチド同士を連結させることもできる。ペプチド間の連結に使用できる適切なリンカーは当技術分野で公知であり、例えばAAY（P. M. Daftarian et al., J Trans Med. 2007, 5:26）、AAA、NKRK（配列番号：48）（R. P. M. Sutmuller et al., J Immunol. 2000, 165: 7308-15）、またはK（S. Ota et al., Can Res.2002, 62, 1471-6、K. S. Kawamura et al., J Immunol. 2002, 168: 5709-15）のようなリンカーを使用することができる。ペプチドは、様々な配置（例えば、連鎖状、重複など）で連結することができ、3つ以上のペプチドを連結することもできる。
　本発明のペプチドはまた、結果として生じる連結ペプチドがCTL誘導能を保持する限り、他の物質に連結させることもできる。本発明のペプチドと連結させる適切な物質の例としては、例えば、ペプチド、脂質、糖もしくは糖鎖、アセチル基、および天然もしくは合成のポリマー等が挙げられる。本発明のペプチドは、CTL誘導能が損なわれない限り、糖鎖付加、側鎖酸化、またはリン酸化などの修飾を行うこともできる。このような種類の修飾を行って、付加的な機能（例えば、標的化機能および送達機能）を付与すること、またはペプチドを安定化することができる。
　例えば、ペプチドのインビボ安定性を高めるために、D-アミノ酸、アミノ酸模倣体、または非天然アミノ酸を導入することが当技術分野において公知であり、この概念を本発明のペプチドに適合させることもできる。ペプチドの安定性は、いくつかの方法でアッセイすることができる。例えば、ペプチダーゼ、ならびにヒトの血漿および血清などの様々な生体媒質を用いて、安定性を試験することができる（例えば、Verhoef et al., Eur J Drug Metab Pharmacokin 1986, 11: 291-302を参照されたい）。
　さらに、上述したように、1個、2個、または数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入および／または付加された改変ペプチドの中から、元のペプチドと比較して同じかまたはそれよりも高い活性を有するものをスクリーニングまたは選択することができる。したがって本発明はまた、元のものと比較して同じかまたはそれよりも高い活性を有する改変ペプチドをスクリーニングまたは選択する方法を提供する。具体的には、本発明は、CTL誘導能を有するペプチドをスクリーニングする方法であって、以下の段階を含む方法を提供する：
（a）配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37の中から選択されるアミノ酸配列からなる元のアミノ酸配列に対して、1個、2個、または数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入、および／または付加されたアミノ酸配列からなる候補配列を作成する段階；
（b）（a）で作成した候補配列の中からCDCA1以外のいかなる公知のヒト遺伝子産物とも有意な相同性（配列同一性）を有さない候補配列選択する段階；
（c）（b）で選択した候補配列からなるペプチドと、APCとを接触させる段階；
（d）（c）のAPCとCD8陽性T細胞とを接触させる段階；および
（e）元のアミノ酸配列からなるペプチドよりも同等かまたはより高いCTL誘導能を有するペプチドを選択する段階。
　本発明において、配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37からなるペプチドは、いずれもHLA-A01拘束性のCTL誘導作用を有している。したがって、そのアミノ酸配列を改変したものの中からCTL誘導能を有するものを選択するためには、上記工程(c)のAPCは、HLA-A01を有する細胞であることが望ましい。
　本明細書において、本発明のペプチドはまた、「CDCA1ペプチド」または「CDCA1ポリペプチド」とも記載される。
ＩＩＩ．本発明のペプチドの調製
　周知の技法を用いて、本発明のペプチドを調製することができる。例えば、組換えDNA技術または化学合成を用いて、本発明のペプチドを調製することができる。本発明のペプチドは、個々に、または2つもしくはそれ以上のペプチドを含むより長いポリペプチドとして、合成することができる。組換えDNA技術を用いて宿主細胞内で産生させた後、または化学合成した後、宿主細胞または合成反応物から、本発明のペプチドを単離することができる。すなわち、他の宿主細胞タンパク質およびそれらの断片、または他のいかなる化学物質も実質的に含まないように、本発明のペプチドを精製または単離することができる。
　本発明のペプチドは、修飾によって元のペプチドの生物活性が損なわれない限り、糖鎖付加、側鎖酸化、またはリン酸化などの修飾を含み得る。他の例示的な修飾には、例えば当該ペプチドの血清半減期を延長させるために用いることができる、D-アミノ酸または他のアミノ酸模倣体の取り込みが含まれる。
　選択されたアミノ酸配列に基づいた化学合成によって、本発明のペプチドを得ることができる。該合成に適合させることのできる従来のペプチド合成法の例には、以下のような文献に記載の方法が含まれる：
（ｉ）Peptide Synthesis, Interscience, New York, 1966；
（ｉｉ）The Proteins, Vol. 2, Academic Press, New York, 1976；
（ｉｉｉ）「ペプチド合成」（日本語）, 丸善, 1975；
（ｉｖ）「ペプチド合成の基礎と実験」（日本語）, 丸善, 1985；
（ｖ）「医薬品の開発」（日本語）, 続第１４巻（ペプチド合成）, 広川書店, 1991；
（ｖｉ）WO99/67288；および
（ｖｉｉ）Barany G. & Merrifield R.B., Peptides Vol. 2, Solid Phase Peptide Synthesis, Academic Press, New York, 1980, 100-118。
　あるいは、ペプチドを産生するための任意の公知の遺伝子工学的方法を適合させて、本発明のペプチドを得ることもできる（例えば、Morrison J, J Bacteriology 1977, 132: 349-51；Clark-Curtiss & Curtiss, Wu et al. Methods in Enzymology 1983, 101: 347-62）。例えば、最初に、本発明のペプチドを発現可能な形態で（例えば、プロモーター配列に相当する調節配列の下流に）コードするポリヌクレオチドを含む適切なベクターを調製し、適切な宿主細胞に形質転換する。次いで、該宿主細胞を培養して、本発明のペプチドを産生させる。あるいは、インビトロ翻訳系を用いて、本発明のペプチドをインビトロで作製することもできる。
ＩＶ．ポリヌクレオチド
　本発明はまた、本発明のペプチドのいずれかをコードするポリヌクレオチドを提供する。これらには、天然CDCA1遺伝子（例えば、GenBankアクセッション番号NM_145697（配列番号：44）またはGenBankアクセッション番号NM_031423（配列番号：46））由来のポリヌクレオチド、およびその保存的に改変されたヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドが含まれる。本明細書において「保存的に改変されたヌクレオチド配列」という語句は、同一のまたは本質的に同一のアミノ酸配列をコードする配列を指す。遺伝暗号の縮重のため、数多くの機能的に同一の核酸が任意の特定のタンパク質をコードする。例えば、コドンGCA、GCC、GCG、およびGCUはすべて、アミノ酸のアラニンをコードする。したがって、あるコドンによってアラニンが指定される任意の位置において、コードされるポリペプチドを変化させることなく、該コドンを前記の対応するコドンのいずれかに変更することができる。そのような核酸の変異は「サイレント変異」であり、保存的に改変された変異の一種である。ペプチドをコードする本明細書中のあらゆる核酸配列は、該核酸のあらゆる可能なサイレント変異をも表す。核酸中の各コドン（通常メチオニンに対する唯一のコドンであるAUG、および通常トリプトファンに対する唯一のコドンであるTGGを除く）を改変して、機能的に同一の分子を得ることができることを、当業者は認識するであろう。したがって、ペプチドをコードする核酸の各サイレント変異は、開示した各配列において非明示的に記載されている。
　本発明のポリヌクレオチドは、DNA、RNA、およびそれらの誘導体から構成され得る。DNAはA、T、C、およびGなどの塩基から適切に構成され、RNAではTはUに置き換えられる。
　本発明のポリヌクレオチドは、介在するアミノ酸配列を間に伴って、または伴わずに、本発明の複数のペプチドをコードし得る。例えば、介在するアミノ酸配列は、ポリヌクレオチドまたは翻訳されたペプチドの切断部位（例えば、酵素認識配列）を提供し得る。さらに、ポリヌクレオチドは、本発明のペプチドをコードするコード配列に対する任意の付加的配列を含み得る。例えば、ポリヌクレオチドは、ペプチドの発現に必要な調節配列を含む組換えポリヌクレオチドであってよく、またはマーカー遺伝子等を有する発現ベクター（例えば、プラスミド）であってもよい。一般に、例えばポリメラーゼおよびエンドヌクレアーゼを用いる従来の組換え技法によりポリヌクレオチドを操作することによって、そのような組換えポリヌクレオチドを調製することができる。
　組換え技法および化学合成技法のいずれを用いても、本発明のポリヌクレオチドを作製することができる。例えば、適切なベクターに挿入することによってポリヌクレオチドを作製することができ、これはコンピテント細胞にトランスフェクトした場合に発現され得る。あるいは、PCR技法または適切な宿主内での発現を用いて、ポリヌクレオチドを増幅することもできる（例えば、Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York, 1989を参照されたい）。あるいは、Beaucage SL & Iyer RP, Tetrahedron 1992, 48: 2223-311；Matthes et al., EMBO J 1984, 3: 801-5に記載されている固相技法を用いて、ポリヌクレオチドを合成することもできる。
Ｖ．エキソソーム
　本発明はさらに、本発明のペプチドとHLA抗原との間に形成された複合体を自身の表面上に提示する、エキソソームと称される細胞内小胞を提供する。エキソソームは、例えば特表平11-510507号およびWO99/03499に詳述されている方法を用いて調製することができ、治療および／または予防の対象となる患者から得られたAPCを用いて調製することができる。本発明のエキソソームは、本発明のペプチドと同様の様式で、ワクチンとして接種することができる。
　前記複合体中に含まれるHLA抗原の型は、治療および／または予防を必要とする対象のものと一致しなければならない。例えばHLA-A01（例えば、HLA-A*01:01）は、白人に高頻度で認められるHLAアリルであり、このHLA抗原の型は白人患者の治療に適していると考えられる。典型的には、臨床において、治療を必要とする患者のHLA抗原の型を予め調べることにより、特定のHLA抗原に対して高レベルの結合親和性を有する、または特定のHLA抗原を介した抗原提示によるCTL誘導能を有するペプチドの適切な選択が可能となる。
　本発明のエキソソームは、本発明のペプチドとHLA-A01との複合体をその表面上に提示する。本発明のペプチドと複合体を形成するHLAがHLA-A01である場合、本発明のペプチドは、配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37の中から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドまたはその改変ペプチドであることが好ましく、配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37の中から選択されるアミノ酸配列からなるペプチドまたはその改変ペプチドであることがより好ましい。
ＶＩ．抗原提示細胞（APC）
　本発明はまた、HLA抗原と本発明のペプチドとの間に形成される複合体を自身の表面上に提示するAPCを提供する。あるいは、本発明は、HLA抗原と本発明のペプチドとの間に形成された複合体をその細胞表面上に有するAPCを提供する。本発明のAPCは、単離されたAPCであり得る。細胞（APC、CTL等）に関して用いられる場合、「単離された」という用語は、該細胞が他の種類の細胞から分離されていることを指す。本発明のAPCは、治療および／または予防の対象となる患者に由来するAPCから誘導されたものであってもよく、かつ単独で、または本発明のペプチド、エキソソーム、もしくはCTLを含む他の薬物と併用して、ワクチンとして投与することができる。
　本発明のAPCは特定の種類の細胞に限定されず、リンパ球によって認識されるように自身の細胞表面上にタンパク質性抗原を提示することが知られている細胞、例えば樹状細胞（dendric cell：DC）、ランゲルハンス細胞、マクロファージ、B細胞、および活性化T細胞が含まれる。DCは、APCの中で最も強力なCTL誘導作用を有する代表的なAPCであるため、DCは本発明のAPCとして好ましく使用され得る。
　例えば、末梢血単球からDCを誘導し、次にそれらをインビトロ、エクスビボ、またはインビボで本発明のペプチドで刺激することによって、本発明のAPCを得ることができる。本発明のペプチドを対象に投与した場合、本発明のペプチドを提示するAPCが該対象の体内で誘導される。したがって、本発明のAPCは、本発明のペプチドを対象に投与した後、該対象からAPCを回収することによって得ることができる。あるいは、本発明のAPCは、対象から回収されたAPCを本発明のペプチドと接触させることによって得ることもできる。
　対象において、CDCA1を発現するがん細胞に対する免疫応答を誘導するために、本発明のAPCを単独で、または本発明のペプチド、エキソソーム、もしくはCTLを含む他の薬剤と併用して、対象に投与することができる。例えば、エクスビボ投与は以下の段階を含み得る：
（a）第1の対象からAPCを回収する段階、
（b）段階（a）のAPCをペプチドと接触させる段階、および
（c）段階（b）のAPCを第2の対象に投与する段階。
　第1の対象と第2の対象は同一の個体であってもよく、または異なる個体であってもよい。第1の対象と第2の対象が異なる個体である場合、第1の対象と第2の対象のHLAは同一の型であることが好ましい。上記の段階（b）によって得られたAPCは、がんを治療および／または予防するためのワクチンとなり得る。
　上記のような方法によって得られた、本発明のAPCは、CTL誘導能を有する。APCに関して用いられる「CTL誘導能」という用語は、CD8陽性T細胞と接触させたときに、CTLを誘導することができるAPCの能力を指す。本発明のAPCによって誘導されたCTLは、CDCA1に特異的なCTLであり、CDCA1発現細胞に対して特異的な細胞傷害活性を示す。
　本発明のAPCは、上記の方法に加え、本発明のペプチドをコードするポリヌクレオチドをインビトロでAPCに導入することによって調製することもできる。導入するポリヌクレオチドは、DNAまたはRNAの形態であってよい。導入の方法の例には、特に限定されることなく、リポフェクション、エレクトロポレーション、およびリン酸カルシウム法などの、当分野において従来より実施されている様々な方法が含まれる。より具体的には、Cancer Res 1996, 56: 5672-7；J Immunol 1998, 161: 5607-13;J Exp Med 1996, 184: 465-72；公表特許公報第2000-509281号に記載されているような方法を用いることができる。本発明のペプチドをコードするポリヌクレオチドをAPCに導入することによって、該ポリヌクレオチドは細胞内で転写、翻訳等を受け、次いで、生じたペプチドはMHCクラスIによってプロセシングされて、提示経路を経て本発明のペプチドがAPCの細胞表面に提示される。
　好ましい態様において、本発明のAPCは、HLA-A01（より好ましくはHLA-A*01:01）と本発明のペプチドとの間に形成される複合体を、自身の細胞表面上に提示しているAPCである。本発明のペプチドと複合体を形成するHLAがHLA-A01である場合、本発明のペプチドは、配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37の中から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドまたはその改変ペプチドであることが好ましく、配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37の中から選択されるアミノ酸配列からなるペプチドであることがより好ましい。
　また、本発明のAPCは、好ましくは、以下の（a）または（b）に記載される段階を含む方法によって誘導されるAPCである：
（a）HLA-A01（より好ましくはHLA-A*01:01）を発現しているAPCを本発明のペプチドと接触させる段階；
（b）HLA-A01（より好ましくはHLA-A*01:01）を発現しているAPCに、本発明のペプチドをコードするポリヌクレオチドを導入する段階。
　HLA-A01を発現しているAPCと接触させる本発明のペプチドは、配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37の中から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドまたはその改変ペプチドであることが好ましく、配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37の中から選択されるアミノ酸配列からなるペプチドであることがより好ましい。
　また、本発明によれば、CTL誘導能を有するAPCを誘導する薬学的組成物を製造するための本発明のペプチドの使用が提供される。加えて、本発明は、CTL誘導能を有するAPCを誘導する薬学的組成物を製造するための方法または工程を提供する。さらに、本発明はまた、CTL誘導能を有するAPCを誘導するための本発明のペプチドを提供する。
ＶＩＩ．細胞傷害性Ｔリンパ球（CTL）
　本発明のペプチドによって誘導されたCTLは、インビボでCDCA1を発現するがん細胞を標的とする免疫応答を増強するため、本発明のペプチドと同様にワクチンとして用いることができる。したがって本発明は、本発明のペプチドによって誘導または活性化された、CTLを提供する。本発明のCTLは、本発明のペプチドを標的とするCTLであり、本発明のペプチドとHLA抗原との複合体に結合することができるCTLである。該複合体へのCTLの結合は、CTLの細胞表面上に存在するT細胞受容体（TCR）を介して行われる。本発明のCTLは、単離されたCTLであり得る。
　本発明のCTLは、（1）本発明のペプチドを対象に投与すること、または（2）対象由来のAPC、およびCD8陽性T細胞、もしくは末梢血単核球（peripheral blood mononuclear cell：PBMC）をインビトロで本発明のペプチドで刺激すること、または（3）CD8陽性T細胞もしくはPBMCを、HLA抗原と本発明のペプチドとの複合体を自身の表面上に提示するAPCもしくはエキソソームとインビトロで接触させること、または（4）細胞表面上にHLA抗原により提示された本発明のペプチドに結合し得るT細胞受容体（TCR）の各サブユニットをコードするポリヌクレオチドを含むベクターをCD8陽性T細胞に導入すること、によって得ることができる。上記（2）または（3）の方法で使用されるエキソソームおよびAPCは、それぞれ「Ｖ．エキソソーム」および「ＶＩ．抗原提示細胞（APC）」の章に記載の方法によって調製することができ、上記（4）の方法の詳細は「ＶＩＩＩ．T細胞受容体（TCR）」の章において記載する。
　本発明のCTLは、治療および／または予防の対象となる患者に対して、単独で投与することができ、または効果を調節する目的で本発明のペプチド、APCもしくはエキソソームを含む他の薬物と併用して投与することができる。また、本発明のCTLは、該CTLの投与対象となる患者に由来するCD8陽性T細胞から誘導されたCTLであり得る。本発明のCTLは、本発明のペプチド、例えば本発明のCTLの誘導に用いたものと同一のペプチドを提示する標的細胞に対して特異的に作用する。標的細胞は、がん細胞のようにCDCA1を内因的に発現する細胞、またはCDCA1遺伝子をトランスフェクトした細胞であってよい。本発明のペプチドによる刺激によって該ペプチドを細胞表面上に提示する細胞もまた、本発明のCTLの攻撃の標的となり得る。また、本発明のCTLの標的細胞は、好ましくは、HLA-A01（より好ましくはHLA-A*01:01）陽性の細胞である。
　好ましい態様において、本発明のCTLは、HLA-A01（より好ましくはHLA-A*01:01）とCDCA1の両方を発現している細胞を特異的に標的とする。本明細書において、CTLが細胞を「標的とする」とは、HLAと本発明のペプチドとの複合体を細胞表面に提示している細胞をCTLが認識して、該細胞に対して細胞傷害活性を示すことをいう。また、「特異的に標的とする」とは、CTLが該細胞に対して細胞傷害活性を示すが、それ以外の細胞に対しては傷害活性を示さないことをいう。また、CTLとの関連では、「細胞を認識する」という用語は、細胞表面に提示されるHLAと本発明のペプチドとの複合体にそのTCRを介して結合し、該細胞に対して特異的な細胞傷害活性を示すことを指す。したがって、本発明のCTLは、好ましくは、細胞表面上に提示されたHLA-A01（より好ましくはHLA-A*01:01）と本発明のペプチドとの間に形成される複合体に、TCRを介して結合することができるCTLである。
　また、本発明のCTLは、好ましくは、以下の（a）または（b）に記載される段階を含む方法によって誘導されたCTLである：
（a）CD8陽性T細胞を、HLA-A01（より好ましくはHLA-A*01:01）と本発明のペプチドとの複合体を自身の表面上に提示するAPCまたはエキソソームとインビトロで接触させる段階；
（b）CD8陽性T細胞に、細胞表面上にHLA-A01（より好ましくはHLA-A*01:01）により提示された本発明のペプチドに結合し得るTCRの各サブユニットをコードするポリヌクレオチドを導入する段階。
ＶＩＩＩ．T細胞受容体（TCR）
　本発明はまた、細胞表面上にHLA抗原により提示された本発明のペプチドに結合し得るTCRの各サブユニットをコードするポリヌクレオチドを含む組成物、およびそれを使用する方法を提供する。該ポリヌクレオチドは、細胞表面上にHLA抗原により細胞表面上に提示された本発明のペプチドに結合し得るTCRを発現させることにより、CDCA1を発現するがん細胞に対する特異性をCD8陽性T細胞に付与する。当技術分野における公知の方法を用いることにより、本発明のペプチドで誘導されたCTLのTCRサブユニットとしてのα鎖およびβ鎖をコードするポリヌクレオチドを同定することができる（WO2007/032255、およびMorgan et al., J Immunol, 2003, 171, 3288）。例えば、TCRを分析するためにはPCR法が好ましい。分析のためのPCRプライマーは、例えば、5’側プライマーとしての5’-Rプライマー（5'-gtctaccaggcattcgcttcat-3'）（配列番号：40）、および3’側プライマーとしての、TCRα鎖C領域に特異的な3-TRa-Cプライマー（5'-tcagctggaccacagccgcagcgt-3'）（配列番号：41）、TCRβ鎖C1領域に特異的な3-TRb-C1プライマー（5'-tcagaaatcctttctcttgac-3'）（配列番号：42）、またはTCRβ鎖C2領域に特異的な3-TRb-C2プライマー（5'-ctagcctctggaatcctttctctt-3'）（配列番号：43）であってよいが、これらに限定されない。同定されたポリヌクレオチドをCD8陽性T細胞に導入することによって形成されるTCRは、本発明のペプチドを提示する標的細胞と高い結合力で結合することができ、かつ、本発明のペプチドを提示する標的細胞の効率的な殺傷をインビボおよびインビトロで媒介する。
　TCRの各サブユニットをコードするポリヌクレオチドは、適切なベクター、例えばレトロウイルスベクターに組み込むことができる。これらのベクターは、当技術分野において周知である。該ポリヌクレオチドまたはそれらを発現可能な形態で含むベクターを、CD8陽性T細胞、例えば患者由来のCD8陽性T細胞に導入することができる。本発明は、患者自身のT細胞（または別の対象由来のT細胞）の迅速な改変により、優れたがん細胞殺傷特性を有する改変Ｔ細胞を迅速かつ容易に作製することを可能にする既成の組成物を提供する。
　本明細書において、特異的TCRとは、該TCRがCD8陽性T細胞の表面上に存在する場合に、標的細胞表面上に提示された本発明のペプチドとHLA抗原との複合体を特異的に認識して、標的細胞に対する特異的な細胞傷害活性を付与し得るTCRである。上記複合体の特異的認識は任意の公知の方法によって確認することができ、その好ましい例には、HLA分子および本発明のペプチドを用いるHLA多量体染色分析、ならびにELISPOTアッセイ法が含まれる。ELISPOTアッセイを行うことにより、上記ポリヌクレオチドを導入したT細胞がTCRによって標的細胞を特異的に認識すること、およびシグナルが細胞内で伝達されることを確認することができる。上記TCRがCD8陽性T細胞表面上に存在する場合に、該TCRが、CD8陽性T細胞に対して、標的細胞特異的な細胞傷害活性を付与し得るという確認もまた、公知の方法によって行うことができる。好ましい方法には、例えば、クロム放出アッセイ法などにより標的細胞に対する細胞傷害活性を測定することが含まれる。
　また、本発明は、HLA-A01との関連では、例えば配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドに結合するTCRの各サブユニットをコードするポリヌクレオチドを、CD8陽性T細胞に形質導入することによって調製されるCTLを提供する。
　形質導入されたCTLは、インビボでホーミングすることができ、かつ周知のインビトロ培養法によって増殖させることができる（例えば、Kawakami et al., J Immunol., 1989, 142, 3452-61）。本発明のCTLは、治療または予防を必要としている患者における疾患の治療または予防に有用な免疫原性組成物を形成するために使用することができる（その内容が参照により本明細書に組み入れられるWO2006/031221を参照されたい）。
ＩＸ．薬学的組成物
　本発明はまた、以下の中から選択される少なくとも1つの有効成分を含む、組成物または薬学的組成物を提供する：
（a）本発明のペプチド；
（b）本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド；
（c）本発明のAPC；
（d）本発明のエキソソーム；
（e）本発明のCTL。
　本発明の薬学的組成物は、上記の有効成分に加えて、医薬品に通常用いられる担体、賦形剤等を特に制限なく必要に応じて含み得る。本発明の薬学的組成物に使用可能な担体の例としては、滅菌水、生理食塩水、リン酸緩衝液、培養液等が挙げられる。したがって、本発明はまた、以下の（a）～（e）から選択される少なくとも1つの有効成分と薬学的に許容される担体とを含む、薬学的組成物を提供する：
（a）本発明のペプチド；
（b）本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド；
（c）本発明のAPC；
（d）本発明のエキソソーム；
（e）本発明のCTL。
　さらに、本発明の薬学的組成物は、必要に応じて、安定剤、懸濁液、保存剤、界面活性剤、溶解補助剤、pH調整剤、凝集抑制剤等を含み得る。
　CDCA1の発現は、正常組織と比較して、がん細胞において、有意に上昇する。そのため、本発明のペプチドまたは該ペプチドをコードするポリヌクレオチドを、がんの治療および／もしくは予防、ならびに／または術後のその再発の予防に用いることができる。したがって本発明は、がんの治療および／もしくは予防、ならびに／または術後のその再発の予防のための薬学的組成物であって、本発明のペプチドまたはポリヌクレオチドの1種類または複数種を有効成分として含む組成物を提供する。あるいは、薬学的組成物として用いるために、本発明のペプチドを、エキソソームまたはAPCの表面上に提示させることができる。加えて、本発明のペプチドのいずれか1つを標的とする本発明のCTLもまた、本発明の薬学的組成物の有効成分として用いることができる。本発明の薬学的組成物は、治療的有効量または薬学的有効量の上記有効成分を含み得る。
　本発明の薬学的組成物はまた、ワクチンとして使用され得る。本発明との関連において、「ワクチン」（「免疫原性組成物」とも称される）という語句は、動物に接種した際に、抗腫瘍作用をもたらす免疫応答を誘導する機能を有する組成物を指す。したがって、本発明の薬学的組成物は、抗腫瘍作用をもたらす免疫応答を誘導するために用いることができる。本発明のペプチド、ポリヌクレオチド、APC、CTLおよび薬学的組成物によって誘導される免疫応答は、抗腫瘍作用をもたらす免疫応答であれば特に限定されないが、例示的には、がん細胞に特異的なCTLの誘導、およびがん細胞に特異的な細胞傷害活性の誘導を含む。
　本発明の薬学的組成物は、ヒトである対象または患者において、がんを治療および／もしくは予防するため、ならびに／または術後のその再発を予防するために用いることができる。本発明の薬学的組成物は、HLA-A01陽性の対象に対して、好ましく使用することができる。また、本発明の薬学的組成物は、HLA-A01およびCDCA1を発現するがんを治療および／もしくは予防するため、ならびに／または術後のその再発を予防するために、好ましく用いることができる。
　別の態様において、本発明はまた、HLA-A01およびCDCA1を発現するがんを治療または予防するための薬学的組成物の製造における、以下の中より選択される有効成分の使用を提供する：
（a）本発明のペプチド；
（b）本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド；
（c）本発明のペプチドを自身の表面上に提示するAPC；
（d）本発明のペプチドを自身の表面上に提示するエキソソーム；および
（e）本発明のCTL。
　あるいは、本発明はさらに、HLA-A01およびCDCA1を発現するがんの治療または予防において用いるための、以下の中より選択される有効成分を提供する：
（a）本発明のペプチド；
（b）本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド；
（c）本発明のペプチドを自身の表面上に提示するAPC；
（d）本発明のペプチドを自身の表面上に提示するエキソソーム；および
（e）本発明のCTL。
　あるいは、本発明はさらに、HLA-A01およびCDCA1を発現するがんを治療または予防するための薬学的組成物を製造するための方法または工程であって、以下の中より選択される少なくとも1つの有効成分と、薬学的にまたは生理学的に許容される担体とを製剤化する段階を含む方法または工程を提供する：
（a）本発明のペプチド；
（b）本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド；
（c）本発明のペプチドを自身の表面上に提示するAPC；
（d）本発明のペプチドを自身の表面上に提示するエキソソーム；および
（e）本発明のCTL。
　別の態様において、本発明はまた、HLA-A01およびCDCA1を発現するがんを治療または予防するための薬学的組成物を製造するための方法または工程であって、以下の中より選択される有効成分を薬学的にまたは生理学的に許容される担体と混合する段階を含む方法または工程を提供する：
（a）本発明のペプチド；
（b）本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド；
（c）本発明のペプチドを自身の表面上に提示するAPC；
（d）本発明のペプチドを自身の表面上に提示するエキソソーム；および
（e）本発明のCTL。
　別の態様において、本発明はまた、HLA-A01およびCDCA1を発現するがんを治療または予防するための方法であって、以下の中より選択される少なくとも1つの有効成分を対象に投与する段階を含む方法を提供する：
（a）本発明のペプチド；
（b）本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド；
（c）本発明のペプチドを自身の表面上に提示するAPC；
（d）本発明のペプチドを自身の表面上に提示するエキソソーム；および
（e）本発明のCTL。
　本発明において、配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37の中より選択されるアミノ酸配列を有するペプチドは、強力かつ特異的な免疫応答を誘導し得るHLA-A01拘束性エピトープペプチドとして見出された。したがって、配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37の中から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドの少なくとも1つを含む本発明の薬学的組成物は、HLA抗原としてHLA-A01（例えば、HLA-A*01:01）を有する対象への投与に特に適している。同じことが、これらのペプチドのいずれかをコードするポリヌクレオチド（すなわち、本発明のポリヌクレオチド）、これらのペプチドを提示するAPCまたはエキソソーム（すなわち、本発明のAPCまたはエキソソーム）、およびこれらのペプチドを標的とするCTL（すなわち、本発明のCTL）を含む薬学的組成物にも当てはまる。すなわち、配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37の中から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドに関連する有効成分を含む薬学的組成物は、HLA-A01を有する対象（すなわち、HLA-A01陽性の対象）への投与に適している。より好ましい態様では、本発明の薬学的組成物は、配列番号：8のアミノ酸配列を有するペプチドを含む薬学的組成物である。
　本発明の薬学的組成物によって治療および／または予防されるがんは、CDCA1を発現するがんであれば特に限定されず、各種がん、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、胆管細胞がん、慢性骨髄性白血病（CML）、食道がん、胃がん、非小細胞肺がん、リンパ腫、骨肉腫、前立腺がん、腎がん、小細胞肺がん、頭頸部がん、軟部組織腫瘍、および大腸がんなどを含む。
　本発明の薬学的組成物は、前述の有効成分に加えて、がん細胞に対してCTLを誘導する能力を有するその他のペプチド（例えば他のTAA由来のペプチドCTL誘導性ペプチド）、該その他のペプチドをコードするその他のポリヌクレオチド、該その他のペプチドを提示するその他の細胞等を含み得る。
　本発明の薬学的組成物は、本発明のペプチドなどの上記有効成分の抗腫瘍効果が阻害されない限り、その他の治療物質もまた有効成分として任意に含み得る。例えば、本発明の薬学的組成物は、抗炎症組成物、鎮痛剤、化学療法薬等を任意に含み得る。本発明の薬学的組成物自体にその他の治療物質を含めることに加えて、本発明の薬学的組成物を、1つまたは複数のその他の薬学的組成物と連続してまたは同時に投与することもできる。本発明の薬学的組成物およびその他の薬学的組成物の投与量は、例えば、使用する薬学的組成物の種類、治療する疾患、ならびに投与のスケジュールおよび経路に依存する。
　本明細書において具体的に言及される成分に加えて、本発明の薬学的組成物は、製剤の種類を考慮して、当技術分野において慣例的なその他の成分も含み得ることが理解されるべきである。
　本発明はまた、本発明の薬学的組成物を含む製品またはキットを提供する。本発明の製品またはキットは、本発明の薬学的組成物を収容した容器を含み得る。適切な容器の例としては、ボトル、バイアル、および試験管が挙げられるが、これらに限定されない。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成され得る。容器には、ラベルが貼付されていてもよく、ラベルには、本発明の薬学的組成物が使用されるべき疾患または疾患の状態を記載することができる。ラベルはまた、投与等に関する指示も示し得る。
　本発明の製品またはキットは、本発明の薬学的組成物を収容した容器に加えて、任意で、薬学的に許容される希釈剤を収容した第2の容器をさらに含み得る。本発明の製品またはキットは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、注射針、シリンジ、および使用説明を記載した添付文書などの、商業上の観点および使用者の観点から望ましいその他の材料をさらに含み得る。
　必要に応じて、有効成分を含む1つまたは複数の単位剤形を含み得るパックまたはディスペンサー装置にて、本発明の薬学的組成物を提供することができる。該パックは、例えば、ブリスターパックのように金属ホイルまたはプラスチックホイルを含み得る。パックまたはディスペンサー装置には、投与に関する説明書が添付され得る。
（1）有効成分としてペプチドを含む薬学的組成物
　本発明のペプチドを含む薬学的組成物は、必要であれば、従来の製剤化法によって製剤化することができる。本発明の薬学的組成物は、本発明のペプチドに加えて、医薬品に通常用いられる担体、賦形剤等を特に制限なく必要に応じて含み得る。本発明の薬学的組成物に使用可能な担体の例としては、滅菌水（例えば、注射用水）、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水、トリス緩衝生理食塩水、0.3%グリシン、培養液等が挙げられる。さらに、本発明の薬学的組成物は、必要に応じて、安定剤、懸濁液、保存剤、界面活性剤、溶解補助剤、pH調整剤、凝集抑制剤等を含み得る。本発明の薬学的組成物は、CDCA1を発現するがん細胞に対して特異的な免疫を誘導することができるため、がんの治療または予防の目的に用いることができる。
　例えば、本発明の薬学的組成物は、滅菌水（例えば、注射用水）、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水、トリス緩衝生理食塩水等の薬学的または生理学的に許容される水溶性の担体に溶解し、必要に応じて、安定剤、懸濁液、保存剤、界面活性剤、溶解補助剤、pH調整剤、凝集抑制剤等を添加した後、該ペプチド溶液を滅菌することにより調製することができる。ペプチド溶液の滅菌方法は、特に限定されないが、ろ過滅菌により行うことが好ましい。ろ過滅菌は、例えば、0.22μm以下の孔径のろ過滅菌フィルターを用いて行うことができる。ろ過滅菌後のペプチド溶液は、これに限定されないが、例えば、注射剤として対象に投与することができる。また、本発明の薬学的組成物は、上記ペプチド溶液を凍結乾燥することにより、凍結乾燥製剤として調製してもよい。凍結乾燥製剤は、上記のように調製したペプチド溶液をアンプル、バイアル、またはプラスチック容器等の適切な容器に充填した後、凍結乾燥を行い、復圧後に滅菌洗浄したゴム栓等で容器を封入することにより調製することができる。凍結乾燥製剤は、投与前に、滅菌水（例えば、注射用水）、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水、トリス緩衝生理食塩水等の薬学的または生理学的に許容される水溶性の担体に再溶解した後、対象に投与することができる。本発明の薬学的組成物の好ましい例には、このようなろ過滅菌されたペプチド溶液の注射剤、および該ペプチド溶液を凍結乾燥した凍結乾燥製剤が含まれる。さらに、このような凍結乾燥製剤と再溶解液とを含むキットもまた本発明に包含される。また、本発明の薬学的組成物である凍結乾燥製剤が収容されている容器と、その再溶解液が収納されている容器とを含むキットもまた本発明に包含される。
　本発明の薬学的組成物は、本発明のペプチドの2種類またはそれ以上の種類の組み合わせを含むこともできる。ペプチドの組み合わせは、ペプチドが混合されたカクテルの形態をとってよく、または標準的な技法を用いてペプチドを互いに結合させてもよい。例えば、ペプチドを化学的に結合させても、または単一の融合ポリペプチド配列として発現させてもよい。本発明のペプチドを投与することによって、該ペプチドはHLA抗原によってAPC上に高密度で提示され、次いで、提示されたペプチドと該HLA抗原との間に形成された複合体に対して特異的に反応するCTLが誘導される。あるいは、対象からAPC（例えば、DC）を取り出し、次に本発明のペプチドにより刺激して、本発明のペプチドのいずれかを自身の細胞表面上に提示するAPCを得る。これらのAPCを対象に再度投与して、該対象においてCTLを誘導し、結果として、CDCA1を発現するがん細胞に対する攻撃性を増大させることができる。
　本発明の薬学的組成物は、細胞性免疫を効率的に確立することが知られているアジュバントもまた含み得る。アジュバントとは、免疫学的活性を有する抗原と共に（または連続して）投与した場合に、該抗原に対する免疫応答を増強する化合物を指す。アジュバントとしては、例えばClin Microbiol Rev 1994, 7: 277-89等の文献に記載されている公知のものを使用することができる。適切なアジュバントの例には、アルミニウム塩（リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、オキシ水酸化アルミニウム等）、ミョウバン、コレラ毒素、サルモネラ毒素、不完全フロイントアジュバント（IFA）、完全フロイントアジュバント（CFA）、ISCOMatrix、GM-CSFその他の免疫刺激性サイトカイン、CpGモチーフを含むオリゴデオキシヌクレオチド（CpG7909等）、水中油型エマルション、サポニンもしくはその誘導体（QS21等）、リピドAもしくはその誘導体等のリポ多糖（MPL、RC529、GLA、E6020等）、リポペプチド、ラクトフェリン、フラジェリン、二本鎖RNAもしくはその誘導体（ポリIC等）、バクテリアDNA、イミダゾキノリン（イミキモド（Imiquimod）、R848等）、C型レクチンリガンド（トレハロースジベヘン酸（trehalose-6,6'-dibehenate：TDB）等）、CD1dリガンド（α-ガラクトシルセラミド等）、スクアレンエマルション（MF59、AS03、AF03等）、PLGA等が含まれるが、これらに限定されない。これらのアジュバントは、通常、免疫学的活性を有する抗原（すなわち本発明のペプチド）に対して、その免疫原性の増強あるいは強化に有効な量を配合することができる。アジュバントは、本発明の薬学的組成物を含むキットにおいて、本発明のペプチドを含む薬学的組成物とは別の容器に収容されていてもよい。この場合、該アジュバントと該薬学的組成物は、連続して対象に投与されてもよく、対象への投与直前に混合されてもよい。このような本発明のペプチドを含む薬学的組成物とアジュバントとを含むキットもまた、本発明によって提供される。本発明の薬学的組成物が凍結乾燥製剤である場合には、該キットはさらに再溶解液を含むことができる。また、本発明は、本発明の薬学的組成物が収容されている容器と、アジュバントが収納されている容器とを含むキットを提供する。該キットは、必要に応じて、再溶解液が収納されている容器をさらに含み得る。
　アジュバントとして油性アジュバントを用いる場合には、本発明の薬学的組成物は、エマルションとして調製されてもよい。エマルションは、例えば、上記のように調製したペプチド溶液と油性アジュバントとを混合・攪拌することにより調製することができる。ペプチド溶液は、凍結乾燥後に再溶解したものであってもよい。エマルションは、W/O型エマルションおよびO/W型エマルションのいずれであってもよいが、高い免疫応答増強効果を得るためにはW/O型エマルションであることが好ましい。油性アジュバントとしてはIFAを好ましく用いることができるが、これに限定されない。エマルションの調製は対象に投与される直前に行われてもよく、この場合には、本発明の薬学的組成物は、本発明のペプチド溶液および油性アジュバントを含むキットとして提供されてもよい。本発明の薬学的組成物が凍結乾燥製剤である場合には、該キットはさらに再溶解液を含むことができる。
　さらに、本発明の薬学的組成物は、本発明のペプチドを封入したリポソーム製剤、直径数マイクロメートルのビーズにペプチドが結合している顆粒製剤、またはペプチドに脂質が結合している製剤であってもよい。
　本発明の別の態様において、本発明のペプチドはまた、薬学的に許容される塩の形態で投与してもよい。塩の好ましい例には、アルカリ金属（リチウム、カリウム、ナトリウムなど）との塩、アルカリ土類金属との塩（カルシウム、マグネシウムなど）、その他の金属（銅、鉄、亜鉛、マンガンなど）との塩、有機塩基との塩、アミンとの塩、有機酸（酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、シュウ酸、安息香酸、メタンスルホン酸など）との塩、および無機酸（塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸など）との塩が含まれる。したがって、本発明のペプチドの薬学的に許容される塩を含む薬学的組成物もまた、本発明に包含される。また「本発明のペプチド」には、遊離体のペプチドのほか、その薬学的に許容される塩も包含される。
　いくつかの態様において、本発明の薬学的組成物は、CTLを刺激する成分をさらに含み得る。脂質は、ウイルス抗原に対してインビボでCTLを刺激し得る物質として同定された。例えば、パルミチン酸残基をリジン残基のεアミノ基およびαアミノ基に付着させ、次に本発明のペプチドに連結させることができる。次いで、脂質付加したペプチドを、ミセルもしくは粒子の状態で直接投与するか、リポソーム中に取り込ませて投与するか、またはアジュバント中に乳化させて投与することができる。CTL応答の脂質による刺激の別の例として、適切なペプチドに共有結合している場合、トリパルミトイル-S-グリセリルシステイニル-セリル-セリン（P3CSS）などの大腸菌（E.coli）リポタンパク質を用いてCTLを刺激することができる（例えば、Deres et al., Nature 1989, 342: 561-4を参照されたい）。
　本発明のペプチドまたは薬学的組成物の投与方法の例には、経口、皮内、皮下、筋肉内、骨内、腹膜および静脈内注射等、ならびに全身投与または標的部位の近傍への局所投与が含まれるが、これらに限定されない。好ましい投与方法としては、腋窩または鼠頸部等のリンパ節近傍への皮下注射が挙げられる。投与は、単回投与によって行うこともできるし、または複数回投与によってブーストすることもできる。本発明のペプチドは、がんを治療するための治療的もしくは薬学的有効量またはCDCA1を発現するがん細胞に対する免疫（より具体的にはCTL）を誘導するための治療的もしくは薬学的有効量で、対象に投与することができる。本発明のペプチドの用量は、治療される疾患、患者の年齢、体重、投与方法等に応じて適宜調整することができ、これは各本発明のペプチドに関して、通常0.001mg～1000mg、例えば0.01mg～100mg、例えば0.1mg～30mg、例えば0.1mg～10mgであり、例えば0.5mg～5mgであることができる。また、投与間隔は数日～数ヶ月に1度であることができ、例えば週に1回の間隔で投与することができる。当業者は、適切な用量を適宜選択することができる。
　好ましい態様において、本発明の薬学的組成物は、治療的有効量の本発明のペプチドと、薬学的または生理学的に許容される担体を含む。別の態様では、本発明の薬学的組成物は、治療的有効量の本発明のペプチド、薬学的または生理学的に許容される担体、およびアジュバントを含む。本発明の薬学的組成物は、本発明のペプチドを、0.001mg～1000mg、好ましくは0.01mg～100mg、より好ましくは0.1mg～30mg、さらに好ましくは0.1mg～10mg、例えば0.5mg～5mg含むことができる。また、本発明の薬学的組成物が注射剤である場合には、本発明のペプチドを、0.001mg/ml～1000mg/ml、好ましくは0.01mg/ml～100mg/ml、より好ましくは0.1mg/ml～30mg/ml、さらに好ましくは0.1mg/ml～10mg/ml、例えば0.5mg/ml～5mg/mlの濃度で含むことができる。この場合、例えば、0.1～5ml、好ましくは0.5ml～2mlの本発明の薬学的組成物を、注射により対象に投与することができる。
　または、本発明は、治療的有効量の本発明のペプチドまたは本発明の薬学的組成物を対象に投与することを含む、がんを治療および／もしくは予防するため、ならびに／または術後のその再発を予防するための方法を提供する。本発明のペプチドは、上記のとおり、通常0.001mg～1000mg、例えば0.01mg～100mg、例えば0.1mg～30mg、例えば0.1mg～10mgであり、例えば0.5mg～5mgを1回の投与において対象に投与することができる。好ましい態様においては、本発明のペプチドは、アジュバントとともに対象に投与される。また、投与間隔は、数日～数ヶ月に1度、好ましくは数日～1か月に1度の間隔であることができ、例えば、週に1回または2週に1回の間隔であることができる。
　本発明のCDCA1ペプチドは、HLA-A01拘束性のCTL誘導作用を備える。つまり、その治療効果も、HLA-A01陽性の対象において有効である。したがって、本発明の好ましい態様においては、本発明のCDCA1ペプチドの投与に先立って、予め、HLA-A01陽性の対象を選択することができる。更に、本発明のCDCA1の治療効果がCDCA1特異的であることから、対象のがんがCDCA1を発現していることも望ましい条件となる。すなわち本発明のがんの治療方法は、CDCA1ペプチドの投与に先立って、HLA-A01陽性である対象を選択する工程と、CDCA1を発現しているがんを有している対象を選択する工程を含むことができる。
（2）有効成分としてポリヌクレオチドを含む薬学的組成物
　本発明の薬学的組成物はまた、本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチドを含み得る。本明細書において、「発現可能な形態で」という語句は、ポリヌクレオチドが、細胞に導入された場合に、本発明のペプチドが発現されることを意味する。例示的な態様において、本発明のポリヌクレオチドの配列は、本発明のペプチドの発現に必要な調節エレメントを含む。本発明のポリヌクレオチドには、標的細胞のゲノムへの安定した挿入が達成されるために必要な配列を備えさせることができる（相同組換えカセットベクターの説明に関しては、例えばThomas KR & Capecchi MR, Cell 1987, 51: 503-12を参照されたい）。例えば、Wolff et al., Science 1990, 247: 1465-8；米国特許第5,580,859号;第5,589,466号;第5,804,566号;第5,739,118号;第5，736,524号;第5,679,647号;およびWO98/04720を参照されたい。DNAに基づく送達技術の例には、「naked DNA」、促進された（ブピバカイン、ポリマー、ペプチド媒介性）送達、カチオン性脂質複合体、および粒子媒介性（「遺伝子銃」）または圧力媒介性の送達が含まれる（例えば、米国特許第5,922,687号を参照されたい）。
　ウイルスベクターまたは細菌ベクターによって、本発明のペプチドを発現させることもできる。発現ベクターの例には、ワクシニアウイルスまたは鶏痘ウイルスなどの弱毒化ウイルス宿主が含まれる。例えば、本発明のペプチドを発現させるためのベクターとして、ワクシニアウイルスを使用することができる。宿主に導入すると、組換えワクシニアウイルスは免疫原性ペプチドを発現し、それによって免疫応答を誘発する。免疫化プロトコールに有用なワクシニアベクターおよび方法は、例えば米国特許第4,722,848号に記載されている。別のベクターはBCG（カルメット・ゲラン桿菌）である。BCGベクターは、Stover et al., Nature 1991, 351: 456-60に記載されている。治療的な投与または免疫化に有用である多種多様な他のベクター、例えばアデノウイルスベクターおよびアデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、チフス菌（Salmonella typhi）ベクター、無毒化炭疽毒素ベクター等が明らかである。例えば、Shata et al., Mol Med Today 2000, 6: 66-71；Shedlock et al., J Leukoc Biol 2000, 68: 793-806；Hipp et al., In Vivo 2000, 14: 571-85を参照されたい。
　本発明のポリヌクレオチドの患者内への送達は、直接的であってもよく、この場合には本発明のポリヌクレオチドを保有するベクターに患者を直接曝露することができる。または間接的であってもよく、この場合にはまずインビトロで細胞を本発明のポリヌクレオチドを保有するベクターで形質転換し、次いで該細胞を患者内に移植する。これら2つのアプローチはそれぞれ、インビボおよびエクスビボの遺伝子治療として公知である。
　遺伝子治療の方法の一般的な総説に関しては、Goldspiel et al., Clinical Pharmacy 1993, 12: 488-505；Wu and Wu, Biotherapy 1991, 3: 87-95；Tolstoshev, Ann Rev Pharmacol Toxicol 1993, 33: 573-96；Mulligan, Science 1993, 260: 926-32；Morgan & Anderson, Ann Rev Biochem 1993, 62: 191-217；Trends in Biotechnology 1993, 11(5): 155-215を参照されたい。本発明にも用いることのできる、組換えDNA技術の分野において一般に公知の方法は、Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY, 1993；およびKrieger, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY, 1990に記載されている。投与方法は、経口、皮内、皮下、静脈内注射等であってよく、全身投与または標的部位の近傍への局所投与が使用される。投与は、単回投与によって行うこともできるし、または複数回投与によってブーストすることもできる。本発明のポリヌクレオチドは、がんを治療するための治療的もしくは薬学的有効量またはCDCA1を発現するがん細胞に対する免疫（より具体的にはCTL）を誘導するための治療的もしくは薬学的有効量で、対象に投与することができる。適切な担体中のポリヌクレオチドの用量、または本発明のペプチドをコードするポリヌクレオチドで形質転換された細胞中のポリヌクレオチドの用量は、治療される疾患、患者の年齢、体重、投与方法等に応じて適宜調整することができ、これは通常0.001mg～1000mg、例えば0.01mg～100mg、例えば、0.1mg～30mg、例えば0.1mg～10mg、例えば0.5mg～5mgであることができる。投与間隔は数日に1度～数ヶ月に1度であることができ、例えば週に1回の間隔で投与することができる。当業者は、適切な用量を適宜選択することができる。
Ｘ．ペプチド、エキソソーム、APC、およびCTLを用いる方法
　本発明のペプチドおよびポリヌクレオチドを用いて、APCおよびCTLを誘導することができる。本発明のエキソソームおよびAPCを用いて、CTLを誘導することもできる。本発明のペプチド、ポリヌクレオチド、エキソソーム、およびAPCは、それらのCTL誘導能が阻害されない限り、任意の他の化合物と組み合わせて用いることができる。したがって、本発明のペプチド、ポリヌクレオチド、APCおよびエキソソームのいずれかを含む薬学的組成物を用いて本発明のCTLを誘導することができる。また、本発明のペプチドまたはポリヌクレオチドを含む薬学的組成物を用いて本発明のAPCを誘導することができる。
（1）APCを誘導する方法
　本発明は、本発明のペプチドまたはポリヌクレオチドを用いて、CTL誘導能を有するAPCを誘導する方法を提供する。
　本発明の方法は、APCを本発明のペプチドとインビトロ、エクスビボ、またはインビボで接触させる段階を含む。例えば、APCを該ペプチドとエクスビボで接触させる方法は、以下の段階を含み得る：
（a）対象からAPCを回収する段階；および
（b）段階（a）のAPCを本発明のペプチドと接触させる段階。
　前記APCは特定の種類の細胞に限定されず、リンパ球によって認識されるように自身の細胞表面上にタンパク質性抗原を提示することが知られているDC、ランゲルハンス細胞、マクロファージ、B細胞、および活性化T細胞を用いることができる。DCはAPCの中で最も強力なCTL誘導能を有するため、好ましくはDCを用いることができる。本発明の任意のペプチドを単独で、または本発明の他のペプチドと共に用いることができる。また、本発明のペプチドと、他のCTL誘導性ペプチド（例えば、他のTAA由来のCTL誘導性ペプチド）とを組み合わせて用いることもできる。
　一方、本発明のペプチドを対象に投与した場合、APCは該ペプチドとインビボで接触し、結果的に、高いCTL誘導能を有するAPCが該対象の体内で誘導される。したがって本発明の方法は、本発明のペプチドを対象に投与する段階を含み得る。同様に、本発明のポリヌクレオチドを発現可能な形態で対象に投与した場合、本発明のペプチドがインビボで発現し、これがAPCとインビボで接触し、結果的に、高いCTL誘導能を有するAPCが該対象の体内で誘導される。したがって本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドを対象に投与する段階を含み得る。
　本発明はまた、CTL誘導能を有するAPCを誘導するために、本発明のポリヌクレオチドをAPCに導入する段階を含み得る。例えば、本方法は以下の段階を含み得る：
（a）対象からAPCを回収する段階；および
（b）本発明のペプチドをコードするポリヌクレオチドを段階（a）のAPCに導入する段階。
段階（b）は、「ＶＩ．抗原提示細胞（APC）」の章に上述したように行うことができる。
　したがって、一態様において、本発明は、以下の（a）または（b）の段階を含む、CTL誘導能を有するAPCを誘導する方法を提供する：
（a）APCを本発明のペプチドで接触させる段階；
（b）本発明のペプチドをコードするポリヌクレオチドをAPCに導入する段階。
　また、本発明は、以下の（a）または（b）の段階を含む、CTL誘導能を有するAPCを調製する方法を提供する：
（a）APCを本発明のペプチドで接触させる段階；
（b）本発明のペプチドをコードするポリヌクレオチドをAPCに導入する段階。
　上記の方法は、インビトロ、エクスビボ、またはインビボのいずれでも行うことができるが、インビトロまたはエクスビボで行うことが好ましい。上記方法で使用されるAPCは、誘導されたAPCの投与が予定されている対象に由来するものであってもよいが、異なる対象に由来するものであってもよい。投与が予定されている対象とは異なる対象（ドナー）に由来するAPCを使用する場合、投与対象者とドナーのHLA型は、同一である必要がある。本発明の方法において、本発明のペプチドとして配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37の中から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドまたはその改変ペプチドを使用する場合、投与対象者とドナーのHLA型は、いずれもHLA-A01（より好ましくはHLA-A*01:01）であることが好ましい。あるいは、上記の方法で使用するAPCは、HLA-A01（より好ましくはHLA-A*01:01）を発現しているAPCであることが好ましい。APCは、ドナーから採取された血液から比重遠心分離法等によりPBMCを分離した後、該PBMCから公知の方法を用いて調製することができる。
　別の態様において、本発明はまた本発明のペプチドまたは該ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、CTL誘導能を有するAPCを誘導するための薬学的組成物を提供する。
　あるいは、本発明はさらに、CTL誘導能を有するAPCを誘導するするための薬学的組成物の製造における、本発明のペプチドまたは該ペプチドをコードするポリヌクレオチドの使用を提供する。
　あるいは、本発明はさらに、CTL誘導能を有するAPCの誘導において用いるための、本発明のペプチドまたは該ペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。
　あるいは、本発明はさらに、APCを誘導するための薬学的組成物を製造するための方法または工程であって、本発明のペプチドまたは該ペプチドをコードするポリヌクレオチドと、薬学的にまたは生理学的に許容される担体とを製剤化する段階を含む方法または工程を提供する。
　別の態様において、本発明はまた、CTL誘導能を有するAPCを誘導するための薬学的組成物を製造するための方法または工程であって、本発明のペプチドまたは該ペプチドをコードするポリヌクレオチドを薬学的にまたは生理学的に許容される担体と混合する段階を含む方法または工程を提供する。
　本発明の方法によって誘導されたAPCは、CDCA1に特異的なCTL（すなわち本発明のCTL）を誘導することができる。
（2）CTLを誘導する方法
　本発明はまた、本発明のペプチド、ポリヌクレオチド、エキソソーム、またはAPCを用いてCTLを誘導する方法を提供する。
　本発明のペプチド、ポリヌクレオチド、エキソソーム、またはAPCを対象に投与すると、該対象の体内でCTLが誘導され、CDCA1を発現するがん細胞を標的とする免疫応答の強度が増強される。したがって本発明の方法は、本発明のペプチド、ポリヌクレオチド、APC、またはエキソソームを対象に投与する段階を含み得る。
　あるいは、それらをインビトロまたはエクスビボで用いることによってCTLを誘導することもできる。例えば、本発明の方法は以下の段階を含み得る：
（a）対象からAPCを回収する段階、
（b）段階（a）のAPCを本発明のペプチドと接触させる段階、および
（c）段階（b）のAPCをCD8陽性T細胞と共培養する段階。
　誘導されたCTLは、その後対象に戻してもよい。
　上記の段階（c）においてCD8陽性T細胞と共培養するAPCは、「ＶＩ．抗原提示細胞（APC）」の章に上述したように、本発明のペプチドをコードするポリヌクレオチドをAPCに導入することによって調製することもできる。しかしながら、本発明の方法で用いられるAPCはこれに限定されず、HLA抗原と本発明のペプチドとの複合体を自身の表面上に提示する任意のAPCを用いることができる。
　本発明の方法では、そのようなAPCの代わりに、HLA抗原と本発明のペプチドとの複合体を自身の表面上に提示するエキソソームを用いることもできる。すなわち、本発明の方法は、HLA抗原と本発明のペプチドとの複合体を自身の表面上に提示するエキソソームとを共培養する段階を含み得る。そのようなエキソソームは、「Ｖ．エキソソーム」の章に上述した方法によって調製することができる。
　さらに、細胞表面上にHLA抗原により提示された本発明のペプチドに結合し得るTCRの各サブユニットをコードするポリヌクレオチドを含むベクターをCD8陽性T細胞に導入することによって、CTLを誘導することもできる。そのような形質導入は、「ＶＩＩＩ．T細胞受容体（TCR）」の章に上述したように行うことができる。
　したがって、一態様において、本発明は、以下の中より選択される段階を含む、CTLを誘導する方法を提供する：
（a）CD8陽性T細胞を、HLA抗原と本発明のペプチドとの複合体を自身の表面上に提示するAPCと共培養する段階；
（b）CD8陽性T細胞を、HLA抗原と本発明のペプチドとの複合体を自身の表面上に提示するエキソソームと共培養する段階；および
（c）細胞表面上にHLA抗原により提示された本発明のペプチドに結合し得るTCRの各サブユニットをコードするポリヌクレオチドを含むベクターを、CD8陽性T細胞に導入する段階。
　上記の方法は、インビトロ、エクスビボ、またはインビボのいずれでも行うことができるが、インビトロまたはエクスビボで行うことが好ましい。上記方法で使用されるAPCもしくはエキソソーム、およびCD8陽性T細胞は、誘導されたCTLの投与が予定されている対象に由来するものであってもよいが、異なる対象に由来するものであってもよい。投与が予定されている対象とは異なる対象（ドナー）に由来するAPCもしくはエキソソーム、およびCD8陽性T細胞を使用する場合、投与対象者とドナーのHLA型は、同一である必要がある。例えば、本発明のペプチドとして配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37の中から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドまたはその改変ペプチドを用いる場合、投与対象者とドナーのHLA型は、いずれもHLA-A01（より好ましくはHLA-A*01:01）であることが好ましい。あるいは、上記の方法で使用するAPCまたはエキソソームは、HLA-A01（より好ましくはHLA-A*01:01）と本発明のペプチド（配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37の中から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドまたはその改変ペプチド）との複合体を自身の表面上に提示するAPCまたはエキソソームであることが好ましい。この場合、誘導されたCTLは、HLA-A01と本発明のペプチドとの複合体を提示する細胞（例えば、CDCA1を発現するHLA-A01陽性細胞）に対して、特異的な細胞傷害活性を示す。
　別の態様において、本発明はまた、以下の中より選択される少なくとも1つの有効成分を含む、CTLを誘導するための組成物または薬学的組成物を提供する：
（a）本発明のペプチド；
（b）本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド；
（c）本発明のペプチドを自身の表面上に提示するAPC；および
（d）本発明のペプチドを自身の表面上に提示するエキソソーム。
　別の態様において、本発明はまた、CTLを誘導するための組成物または薬学的組成物の製造における、以下の中より選択される有効成分の使用を提供する：
（a）本発明のペプチド；
（b）本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド；
（c）本発明のペプチドを自身の表面上に提示するAPC；および
（d）本発明のペプチドを自身の表面上に提示するエキソソーム。
　あるいは、本発明はさらに、CTLの誘導において用いるための、以下の中より選択される有効成分を提供する：
（a）本発明のペプチド；
（b）本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド； 
（c）本発明のペプチドを自身の表面上に提示するAPC；および
（d）本発明のペプチドを自身の表面上に提示するエキソソーム。
　あるいは、本発明はさらに、CTLを誘導するための組成物または薬学的組成物を製造するための方法または工程であって、以下の中より選択される有効成分と、薬学的にまたは生理学的に許容される担体とを製剤化する段階を含む方法または工程を提供する：
（a）本発明のペプチド；
（b）本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド；
（c）本発明のペプチドを自身の表面上に提示するAPC；および
（d）本発明のペプチドを自身の表面上に提示するエキソソーム。
　別の態様において、本発明はまた、CTLを誘導するための組成物または薬学的組成物を製造するための方法または工程であって、以下の中より選択される有効成分を薬学的にまたは生理学的に許容される担体と混合する段階を含む方法または工程を提供する：
（a）本発明のペプチド；
（b）本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド；
（c）本発明のペプチドを自身の表面上に提示するAPC；および
（d）本発明のペプチドを自身の表面上に提示するエキソソーム。
ＸＩ．免疫応答を誘導する方法
　さらに本発明は、CDCA1を発現するがんに対する免疫応答を誘導する方法を提供する。適用可能ながんには、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、胆管細胞がん、慢性骨髄性白血病（CML）、食道がん、胃がん、非小細胞肺がん、リンパ腫、骨肉腫、前立腺がん、腎がん、小細胞肺がん、頭頸部がん、軟部組織腫瘍、および大腸がんなどが含まれるが、これらに限定されない。また、がんは、HLA-A01を発現していることが好ましい。
　本発明はまた、CDCA1を発現するがん細胞に対する免疫応答を誘導する方法を提供する。CDCA1は、上記のような各種のがんにおいて、過剰発現していることが認められる。そのため、CDCA1を発現するがん細胞に対する免疫応答が誘導されると、その結果として、がん細胞の増殖が阻害される。したがって、本発明はまた、CDCA1を発現するがん細胞の増殖を阻害する方法も提供する。本発明の方法は特に、CDCA1とHLA-A01を発現するがん細胞の増殖阻害に適している。
　本発明の方法は、本発明のペプチドのいずれかまたはそれらをコードするポリヌクレオチドを含む組成物を投与する段階を含み得る。本発明の方法はまた、本発明のペプチドのいずれかを提示するエキソソームまたはAPCの投与を企図する。詳細については、「ＩＸ．薬学的組成物」の項、特に本発明の薬学的組成物のワクチンとしての使用について記載している部分を参照されたい。加えて、免疫応答を誘導するために本発明の方法に使用することができるエキソソームおよびAPCは、前記の「Ｖ．エキソソーム」、「ＶＩ．抗原提示細胞（APC）」、ならびに「Ｘ．ペプチド、エキソソーム、APC、およびCTLを用いる方法」の（1）および（2）の項において詳述されている。
　別の態様において、本発明はまた、CDCA1とHLA-A01を発現するがんに対する免疫応答を誘導するための薬学的組成物またはワクチンであって、以下の中より選択される有効成分を含む、薬学的組成物またはワクチンを提供する：
（a）本発明のペプチド；
（b）本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド；
（c）本発明のペプチドを自身の表面上に提示するAPC；
（d）本発明のペプチドを自身の表面上に提示するエキソソーム；および
（e）本発明のCTL。
　あるいは、本発明はさらに、CDCA1とHLA-A01を発現するがん細胞に対する免疫応答を誘導するための薬学的組成物またはワクチンであって、以下の中より選択される有効成分を含む、薬学的組成物またはワクチンを提供する：
（a）本発明のペプチド；
（b）本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド；
（c）本発明のペプチドを自身の表面上に提示するAPC；
（d）本発明のペプチドを自身の表面上に提示するエキソソーム；および
（e）本発明のCTL。
　あるいは、本発明はさらに、CDCA1とHLA-A01を発現するがん細胞の増殖を阻害するための薬学的組成物またはワクチンであって、以下の中より選択される有効成分を含む、薬学的組成物またはワクチンを提供する：
（a）本発明のペプチド；
（b）本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド；
（c）本発明のペプチドを自身の表面上に提示するAPC；
（d）本発明のペプチドを自身の表面上に提示するエキソソーム；および
（e）本発明のCTL。
　別の態様において、本発明はまた、CDCA1とHLA-A01を発現するがんに対する免疫応答を誘導するための薬学的組成物またはワクチンの製造における、以下の中より選択される有効成分の使用を提供する：
（a）本発明のペプチド；
（b）本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド；
（c）本発明のペプチドを自身の表面上に提示するAPC；
（d）本発明のペプチドを自身の表目状に提示するエキソソーム；および
（e）本発明のCTL。
　あるいは、本発明はさらに、CDCA1とHLA-A01を発現するがん細胞に対する免疫応答を誘導するための薬学的組成物またはワクチンの製造における、以下の中より選択される有効成分の使用を提供する：
（a）本発明のペプチド；
（b）本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド；
（c）本発明のペプチドを自身の表面上に提示するAPC；
（d）本発明のペプチドを自身の表面上に提示するエキソソーム；および
（e）本発明のCTL。
　あるいは、本発明はさらに、CDCA1とHLA-A01を発現するがん細胞の増殖を阻害するための薬学的組成物またはワクチンの製造における、以下の中より選択される有効成分の使用を提供する：
（a）本発明のペプチド；
（b）本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド；
（c）本発明のペプチドを自身の表面上に提示するAPC；
（d）本発明のペプチドを自身の表面上に提示するエキソソーム；および
（e）本発明のCTL。
　本発明はまた、CDCA1とHLA-A01を発現するがんに対する免疫応答を誘導する薬学的組成物を製造するための方法または工程であって、本発明のペプチドを薬学的に許容される担体と共に混合または製剤化する段階を含み得る方法を提供する。
　あるいは、本発明は、以下の中より選択される有効成分を含むワクチンまたは薬学的組成物を対象に投与する段階を含む、血管新生により媒介される疾患の疾患部位においてCDCA1とHLA-A01を発現するがん細胞の増殖を阻害するための方法、またはがんに対する免疫応答を誘導する方法を提供する：
（a）本発明のペプチド；
（b）本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド；
（c）本発明のペプチドを自身の表面上に提示するAPC；
（d）本発明のペプチドを自身の表面上に提示するエキソソーム；および
（e）本発明のCTL。
　本発明との関連において、本発明のペプチド、ポリヌクレオチド、APC、エキソソームおよび／またはCTLを投与することにより、CDCA1とHLA-A01を発現するがんを治療することができる。あるいは、本発明のペプチド、ポリヌクレオチド、APC、エキソソームおよび／またはCTLを投与することにより、CDCA1を発現するがんに対する免疫応答を誘導することができる。そのようながんの例には、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、胆管細胞がん、慢性骨髄性白血病（CML）、食道がん、胃がん、非小細胞肺がん、リンパ腫、骨肉腫、前立腺がん、腎がん、小細胞肺がん、頭頸部がん、軟部組織腫瘍、および大腸がんなどが含まれるが、これらに限定されない。また、本発明の本発明のペプチド、ポリヌクレオチド、APC、エキソソームおよび／またはCTLを投与することにより、CDCA1とHLA-A01を発現するがん細胞に対する免疫応答を誘導することができる。したがって、上記の有効成分を含むワクチンまたは薬学的組成物を投与する前に、治療する対象の疾患部位におけるCDCA1の発現レベルが増強されているかどうかを確認することが好ましい。同様に、治療の対象が、HLA-A01陽性であることを確認するのも望ましい。すなわち本発明は、好ましい態様において、HLA-A01陽性で、CDCA1を発現するがんを有する対象を選択し、選択された対象に本発明のワクチンあるいは薬学的組成物を投与することができる。
　したがって一態様において、本発明は、CDCA1とHLA-A01を発現するがんの治療を必要とする患者において該がんを治療する方法を提供し、そのような方法は以下の段階を含む：
ｉ）がんを有するHLA-A01陽性の対象の疾患部位から採取された生体試料中のCDCA1の発現レベルを測定する段階；
ii）i）で測定されたCDCA1の発現レベルに基づいて、CDCA1を発現するがんを有する対象を特定する段階；および
ｉｉｉ）上記の（a）～（e）からなる群より選択される少なくとも1つの成分を、正常対照と比較してCDCA1を過剰発現するがんを有する対象に投与する段階。
　あるいは、本発明はまた、CDCA1を発現するがんを有するHLA-A01陽性の対象に投与するための、上記の（a）～（e）からなる群より選択される少なくとも1つの有効成分を含むワクチンまたは薬学的組成物を提供する。本発明はさらに、上記の（a）～（e）からなる群より選択される少なくとも1つの有効成分で治療する対象を特定または選択する方法を提供し、そのような方法は以下の段階を含む：
i）がんを有するHLA-A01陽性の対象の疾患部位から採取された生体試料中のCDCA1の発現レベルを測定する段階；
ii）i）で測定されたCDCA1の発現レベルに基づいて、CDCA1を発現するがんを有する対象を特定する段階；および
iii）ii）で特定された対象を、上記の（a）～（e）からなる群より選択される少なくとも1つの有効成分で治療され得る対象として特定または選択する段階。
　上記の方法においてCDCA1の発現レベルを測定するために対象から採取される生体試料は特に限定されないが、例えば、生検等により採取されたがん細胞を含む組織試料を好ましく用いることができる。生体試料中のCDCA1の発現レベルは公知の方法で測定することができ、例えば、CDCA1遺伝子の転写産物をプローブやPCR法により検出する方法（例えば、cDNAマイクロアレイ法、ノーザンブロット法、RT-PCR法など）、CDCA1遺伝子の翻訳産物を抗体等により検出する方法（例えば、ウェスタンブロット法、免疫染色法など）等を用いることができる。また、生体試料は血液試料であってもよく、この場合には、CDCA1に対する抗体の血中レベルを測定し、該血中レベルに基づいて疾患部位におけるCDCA1の発現レベルを評価してもよい。CDCA1に対する抗体の血中レベルの測定は公知の方法を用いて行うことができ、例えば、CDCA1タンパク質や本発明のペプチドを抗原として用いた酵素免疫測定法（EIA）、酵素結合免疫吸着測定法（ELISA）、および放射免疫測定法（RIA）等を用いることができる。また、本発明のペプチドに特異的なCTLを検出することにより、疾患部位におけるCDCA1の発現レベルを評価してもよい。本発明のペプチドに特異的なCTLレベルの測定は、例えば、対象から採取された血液からPBMCを分離し、本発明のペプチドをパルスした標的細胞に対する細胞傷害活性を測定することにより、行うことができる。細胞傷害活性の測定は、例えばインターフェロンγの放出量などにより測定することができる。また、下記に記載する本発明のペプチドとHLAとの複合体も、CTLレベルの測定に用いることができる。なお、対象の有するがんがCDCA1を発現しているか否かの判断は、がんを有しない対象から採取された同種の生体材料における測定結果との比較により行ってもよい。すなわち、がんを有しない対象から採取された同種の生体材料における測定対象物のレベル（正常対照レベル）と比較して、がんを有する対象から採取された生体試料における該レベルが上昇している場合には、がんを有する対象のがんはCDCA1を発現していると判断することができる。
　好ましい態様では、上記の（a）～（e）からなる群より選択される少なくとも1つの有効成分を投与する前に、対象のHLA型を確認することが好ましい。例えば、配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37の中から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドに関連する有効成分の投与対象としては、HLA-A01陽性の対象を選択することが好ましい。対象のHLAは、対象から採取した細胞表面のHLAをHLA-A01特異抗体により免疫学的に検出して確認することができる。あるいは、対象から採取した細胞から得たゲノムDNAやmRNAの遺伝子情報の解析によって対象のHLAを決定することもできる。本発明においては、対象がHLA-A01陽性であれば有効な治療が期待できる。すなわち、HLA-A01をホモであるいはヘテロで有する対象を投与の対象とすることができる。
　本発明はまた、本発明のペプチドとHLAとの複合体を提供する。前記本発明の複合体は、単量体であっても多量体であってもよい。本発明の複合体が多量体である場合、重合数は特に限定されず、任意の重合数の多量体であることができる。例としては、四量体、五量体、六量体等が挙げられるが、これらに限定されない。また、デキストラマー（WO2002/072631）、ストレプタマー（Knabel M et al., Nat Med. 2002;8(6):631-7.）もまた本発明の多量体に包含される。本発明のペプチドとHLAとの複合体は、公知の方法に従って調製することができる（例えば、Altman JD et al., Science.1996,274(5284):94-6、WO2002/072631、WO2009/003492、Knabel M et al., Nat Med. 2002;8(6):631-7.等）。本発明の複合体は、例えば、本発明のペプチドに特異的なCTLの定量に用いることができる。例えば、本発明の薬学的組成物を投与した対象から血液試料を採取し、PBMCを分離した後CD4陰性細胞を調整し、蛍光色素を結合させた本発明の複合体と該CD4陰性細胞とを接触させる。その後、フローサイトメトリーで解析することにより、本発明のペプチドに特異的なCTLの割合を測定することができる。例えば、本発明の薬学的組成物の投与前、投与中、および／または投与後に、本発明のペプチドに特異的なCTLを測定することにより、本発明の薬学的組成物による免疫応答誘導効果をモニタリングすることができる。
ＸＩＩ．抗体
　本発明はさらに、本発明のペプチドに結合する抗体を提供する。好ましい抗体は本発明のペプチドに特異的に結合し、本発明のペプチドではないものには結合しない（または弱く結合する）。抗体の結合特異性は、阻害試験で確認することができる。すなわち、分析する抗体と全長CDCA1ポリペプチドとの間の結合が、本発明のペプチドの存在下で阻害される場合、この抗体が本発明のペプチドに特異的に結合することが示される。本発明のペプチドに対する抗体は、疾患の診断および予後診断のアッセイ、ならびに本発明の薬学的組成物の投与対象の選択および本発明の薬学的組成物のモニタリングにおいて使用され得る。
　本発明はまた、本発明のペプチドもしくはその断片を検出および／または定量するための様々な免疫学的アッセイ法を提供する。そのような免疫学的アッセイ法は、放射免疫測定法、免疫クロマトグラフ法、酵素結合免疫吸着測定法（ELISA）、酵素結合免疫蛍光測定法（ELIFA）等を含むがこれらに限定されない、当技術分野で周知の様々な免疫学的アッセイ形式の範囲内で行われる。
　本発明の抗体は、CDCA1を発現する疾患を検出し得る免疫学的画像化法に用いることができ、その例には、本発明の標識抗体を使用する放射性シンチグラフィー画像化法が含まれるが、これに限定されない。そのようなアッセイ法は、CDCA1を発現するがんの検出、モニタリング、および予後診断において臨床的に使用され、そのようながんの例には、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、胆管細胞がん、慢性骨髄性白血病（CML）、食道がん、胃がん、非小細胞肺がん、リンパ腫、骨肉腫、前立腺がん、腎がん、小細胞肺がん、頭頸部がん、軟部組織腫瘍、および大腸がんなどが含まれるが、これらに限定されない。
　本発明の抗体は、例えばモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体などの任意の形態で用いることができ、ウサギなどの動物を本発明のペプチドで免疫することにより得られる抗血清、すべてのクラスのポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体、ヒト抗体、ならびに遺伝子組換えにより作製されたキメラ抗体およびヒト化抗体をさらに含み得る。
　抗体を得るための抗原として用いられる本発明のペプチドもしくはその断片は、本明細書に開示するアミノ酸配列に基づいて、化学合成により、または遺伝子工学的手法により得ることができる。
　免疫抗原として用いられるペプチドは、本発明のペプチドまたは本発明のペプチドの断片であってよい。また、免疫原性を高めるために、ペプチドを担体と結合または連結させてもよい。担体として、キーホールリンペットヘモシアニン（KLH）が周知である。KLHとペプチドを結合する方法もまた、当技術分野において周知である。
　任意の哺乳動物を前記抗原で免疫することができるが、モノクローナル抗体を作製する場合には、細胞融合に用いられる親細胞との適合性を考慮に入れることが好ましい。一般に、齧歯目（Rodentia）、ウサギ目（Lagomorpha）、または霊長目（Primate）の動物を使用することができる。齧歯目科の動物には、例えばマウス、ラット、およびハムスターが含まれる。ウサギ目科の動物には、例えばウサギが含まれる。霊長目科の動物には、例えばカニクイザル（Macaca fascicularis）、アカゲザル、マントヒヒ、およびチンパンジーなどの狭鼻下目（Catarrhini）（旧世界ザル）のサルが含まれる。
　動物を抗原で免疫する方法は、当技術分野で公知である。抗原の腹腔内注射または皮下注射は、哺乳動物を免疫するための標準的な方法である。より具体的には、抗原を適量のリン酸緩衝食塩水（PBS）、生理食塩水等で希釈し、懸濁させる。必要に応じて、抗原懸濁液を、フロイント完全アジュバントなどの適量の標準的アジュバントと混合し、乳化した後、哺乳動物に投与することができる。その後、適量のフロイント不完全アジュバントと混合した抗原を、4～21日ごとに数回投与することが好ましい。免疫化には、適切な担体を用いてもよい。上記のように免疫した後、血清を、所望の抗体の量の増加に関して標準的方法で調べることができる。
　本発明のペプチドに対するポリクローナル抗体は、免疫後に血清中の所望の抗体レベルの上昇が確認された哺乳動物から血液を回収し、任意の従来法により血液から血清を分離することによって、調製することができる。ポリクローナル抗体はポリクローナル抗体を含む血清であってもよく、またポリクローナル抗体を含む画分を該血清から単離してもよい。免疫グロブリンGまたはMは、本発明のペプチドのみを認識する画分から、例えば、本発明のペプチドを結合させたアフィニティーカラムを用いた上で、この画分をプロテインAまたはプロテインGカラムを用いてさらに精製して、調製することができる。
　モノクローナル抗体を調製するには、免疫後に血清中の所望の抗体レベルの上昇を確認した上で、哺乳動物から免疫細胞を回収し、細胞融合に供する。細胞融合に用いる免疫細胞は、好ましくは脾臓から得ることができる。上記の免疫細胞と融合させるもう一方の親細胞には、例えば、哺乳動物の骨髄腫細胞、好ましくは薬物による融合細胞の選択のための特性を獲得した骨髄腫細胞を用いることができる。
　公知の方法、例えば、Milstein et al.（Galfre and Milstein, Methods Enzymol 73: 1981, 3-46）の方法に従って、上記の免疫細胞と骨髄腫細胞を融合させることができる。
　細胞融合によって得られたハイブリドーマは、それらをHAT培地（ヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジンを含む培地）などの標準的な選択培地中で培養することによって選択することができる。細胞培養は典型的に、HAT培地中で、所望のハイブリドーマを除く他のすべての細胞（非融合細胞）が死滅するのに十分な期間（例えば数日間から数週間）にわたって継続する。その後、標準的な限界希釈を行い、所望の抗体を産生するハイブリドーマ細胞をスクリーニングおよびクローニングすることができる。
　ハイブリドーマを調製するために非ヒト動物を抗原で免疫する上記の方法に加えて、EBウイルスに感染したリンパ球などのヒトリンパ球を、ペプチド、ペプチドを発現している細胞、またはそれらの溶解物でインビトロにおいて免疫することもできる。次いで、免疫後のリンパ球を、U266などの無限に分裂可能なヒト由来骨髄腫細胞と融合させて、該ペプチドに結合し得る所望のヒト抗体を産生するハイブリドーマを得ることができる（特開昭63-17688号）。
　続いて、得られたハイブリドーマをマウスの腹腔内に移植し、腹水を抽出する。得られたモノクローナル抗体は、例えば、硫酸アンモニウム沈殿、プロテインAもしくはプロテインGカラム、DEAEイオン交換クロマトグラフィー、または本発明のペプチドを結合させたアフィニティーカラムにより精製することができる。
　あるいは、免疫したリンパ球などの、抗体を産生する免疫細胞をがん遺伝子によって不死化し、モノクローナル抗体の調製に用いることもできる。
　このようにして得られるモノクローナル抗体は、遺伝子操作技法を用いて組換えにより調製することもできる（例えば、MacMillan Publishers LTD (1990)により英国で刊行された、Borrebaeck and Larrick, Therapeutic Monoclonal Antibodiesを参照されたい）。例えば、抗体をコードするDNAを、抗体を産生するハイブリドーマまたは免疫化リンパ球などの免疫細胞からクローニングし、適切なベクターに挿入した上で、宿主細胞に導入して、組換え抗体を調製することができる。本発明はまた、上記のようにして調製された組換え抗体を提供する。
　さらに、本発明の抗体は、本発明のペプチドに結合する限り、抗体の断片または修飾抗体であってもよい。例えば、抗体断片は、Fab、F（ab'）2、Fv、またはH鎖およびL鎖由来のFv断片が適切なリンカーによって連結されている一本鎖Fv（scFv）であってよい（Huston et al., Proc Natl Acad Sci USA 1988, 85: 5879-83）。より具体的には、抗体断片は、抗体をパパインまたはペプシンなどの酵素で処理することにより作製することができる。あるいは、抗体断片をコードする遺伝子を構築し、発現ベクターに挿入し、適切な宿主細胞内で発現させることができる（例えば、Co et al., J Immunol 1994,152: 2968-76 ；Better and Horwitz, Methods Enzymol 1989,178: 476-96 ；Pluckthun and Skerra, Methods Enzymol 1989,178: 497-515；Lamoyi, Methods Enzymol 1986, 121: 652-63；Rousseaux et al., Methods Enzymol 1986,121: 663-9；Bird and Walker, Trends Biotechnol 1991,9: 132-7を参照されたい）。
　抗体は、ポリエチレングリコール（PEG）などの様々な分子との結合によって修飾することができる。本発明は、そのような修飾抗体を提供する。修飾抗体は、抗体を化学的に修飾することによって得ることができる。これらの修飾法は、当技術分野で慣例的である。
　あるいは、本発明の抗体は、非ヒト抗体に由来する可変領域とヒト抗体に由来する定常領域との間のキメラ抗体として、または非ヒト抗体に由来する相補性決定領域（CDR）と、ヒト抗体に由来するフレームワーク領域（FR）および定常領域とを含むヒト化抗体として得ることもできる。そのような抗体は、公知の技術に従って調製することができる。ヒト化は、非ヒト抗体のCDR配列でヒト抗体の対応する配列を置換することによって行うことができる（例えば、Verhoeyen et al., Science 1988,239:1534-6 を参照されたい）。したがって、そのようなヒト化抗体は、実質的に完全には満たないヒト可変ドメインが、非ヒト種由来の対応する配列によって置換されたキメラ抗体である。
　ヒトのフレームワーク領域および定常領域に加えて、ヒト可変領域をも含む完全なヒト抗体を用いることもできる。そのような抗体は、当技術分野で公知の様々な技法を用いて作製することができる。例えば、インビトロの方法には、バクテリオファージ上に提示されたヒト抗体断片の組換えライブラリーの使用が含まれる（例えば、Hoogenboom & Winter, J. Mol. Biol.1991, 227: 381）。同様に、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を、内因性免疫グロブリン遺伝子が部分的または完全に不活性化されたトランスジェニック動物、例えばマウスに導入することによって、ヒト抗体を作製することもできる。このアプローチは、例えば米国特許第6,150,584号、第5,545,807号；第5,545,806号；第5,569,825号；第5,625,126号；第5,633,425号；第5,661,016号に記載されている。
　上記のようにして得られた抗体は、均一になるまで精製してもよい。例えば、一般的なタンパク質に対して用いられる分離法および精製法に従って、抗体の分離および精製を行うことができる。例えば、これらに限定されないが、アフィニティークロマトグラフィーなどのカラムクロマトグラフィー、フィルター、限外濾過、塩析、透析、SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動、および等電点電気泳動の使用を適切に選択しかつ組み合わせることにより、抗体を分離および単離することができる（Antibodies: A Laboratory Manual. Ed Harlow and David Lane, Cold Spring Harbor Laboratory (1988)）。プロテインAカラムおよびプロテインGカラムをアフィニティーカラムとして使用することができる。用いられるべき例示的なプロテインAカラムには、例えば、Hyper D、POROS、およびSepharose F.F.（Pharmacia）が含まれる。
　例示的なクロマトグラフィーには、アフィニティークロマトグラフィー以外に、例えば、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、ゲル濾過、逆相クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー等が含まれる（Strategies for Protein Purification and Characterization: A Laboratory Course Manual. Ed Daniel R. Marshak et al., Cold Spring Harbor Laboratory Press (1996)）。クロマトグラフィー手順は、HPLCおよびFPLCなどの液相クロマトグラフィーによって行うことができる。
　例えば、吸光度の測定、酵素結合免疫吸着測定法（ELISA）、酵素免疫測定法（EIA）、放射免疫測定法（RIA）、および／または免疫蛍光法（IF）を用いて、本発明の抗体の抗原結合活性を測定することができる。ELISAの場合、本発明の抗体をプレート上に固定化し、本発明のペプチドを該プレートに添加し、次に抗体産生細胞の培養上清または精製抗体といった所望の抗体を含む試料を添加する。次いで、一次抗体を認識し、アルカリホスファターゼなどの酵素で標識された二次抗体を添加し、プレートをインキュベートする。続いて洗浄後に、p-ニトロフェニルリン酸などの酵素基質を該プレートに添加し、吸光度を測定して、試料の抗原結合活性を評価する。抗体の結合活性を評価するために、C末端またはN末端断片などのペプチドの断片を抗原として用いてもよい。本発明の抗体の活性を評価するために、BIAcore（Pharmacia）を用いてもよい。
　本発明の抗体を本発明のペプチドを含むと考えられる試料に対して曝露し、該抗体と該ペプチドとによって形成される免疫複合体を検出または測定することにより、上記のような方法によって本発明のペプチドの検出または測定が可能になる。
　例えば、本発明の抗体は、対象の血液試料（例えば血清試料）中に存在する本発明のペプチドを検出するために用いることもできる。あるいは、逆に、対象の血液試料（例えば血清試料）中に存在する本発明の抗体を、本発明のペプチドを用いて検出することもできる。対象の血液試料中において本発明のペプチドまたは本発明の抗体を測定した結果は、本発明の薬学的組成物の投与対象の選択、または本発明の薬学的組成物の効果のモニタリングに役立てることができる。
ＸＩＩＩ．ベクターおよび宿主細胞
　本発明はまた、本発明のペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むベクターおよび該ベクターが導入された宿主細胞を提供する。本発明のベクターは、宿主細胞中に本発明のポリヌクレオチドを保持するため、宿主細胞に本発明のペプチドを発現させるため、または遺伝子治療用に本発明のポリヌクレオチドを投与するために使用され得る。
　大腸菌が宿主細胞であり、ベクターを大腸菌（例えば、JM109、DH5α、HB101、またはXL1-Blue）内で増幅して大量に生成する場合、ベクターは、大腸菌内で増幅するための「複製起点」と、形質転換された大腸菌を選択するためのマーカー遺伝子（例えば、アンピシリン、テトラサイクリン、カナマイシン、クロラムフェニコール等の薬物によって選択される薬物耐性遺伝子）とを有する必要がある。例えば、M13系ベクター、pUC系ベクター、pBR322、pBluescript、pCR-Script等を用いることができる。加えて、pGEM-T、pDIRECT、およびpT7もまた上記のベクターと同様にクローニングのために用いることができる。ベクターを本発明のペプチドの産生に用いる場合には、発現ベクターが使用され得る。例えば、大腸菌内で発現させる発現ベクターは、大腸菌内で増幅するために上記の特徴を有する必要がある。JM109、DH5α、HB101、またはXL1-Blueなどの大腸菌を宿主細胞として用いる場合、ベクターは、大腸菌内で所望の遺伝子を効率的に発現し得るプロモーター、例えば、lacZプロモーター（Ward et al., Nature 1989,341: 544-6 ；FASEB J.1989, 6: 2422-7）、araBプロモーター（Better et al., Science 1988,240: 1041-3）、T7プロモーター等を有する必要がある。この点に関して、例えば、pGEX-5X-1（Pharmacia）、「QIAexpressシステム」（Qiagen）、pEGFP、およびpET（この場合、宿主は好ましくはＴ7 RNAポリメラーゼを発現するBL21である）を上記のベクターの代わりに用いることができる。さらにベクターは、ペプチド分泌のためのシグナル配列を含んでもよい。ペプチドを大腸菌のペリプラズムに分泌させる例示的なシグナル配列は、pelBシグナル配列（Lei et al., J Bacteriol.1987,169: 4379）である。ベクターを標的宿主細胞に導入する手段には、例えば塩化カルシウム法およびエレクトロポレーション法が含まれる。
　大腸菌に加えて、例えば、哺乳動物由来の発現ベクター（例えば、pcDNA3（Invitrogen）、およびpEGF-BOS（Nucleic Acids Res 1990,18(17): 5322）、pEF、pCDM8）、昆虫細胞由来の発現ベクター（例えば、「Bac-to-BACバキュロウイルス発現系」（GIBCO BRL）、pBacPAK8）、植物由来の発現ベクター（例えば、pMH1、pMH2）、動物ウイルス由来の発現ベクター（例えば、pHSV、pMV、pAdexLcw）、レトロウイルス由来の発現ベクター（例えば、pZIpneo）、酵母由来の発現ベクター（例えば、「ピキア（Pichia）発現キット」（Invitrogen）、pNV11、SP-Q01）、および枯草菌（Bacillus subtilis）由来の発現ベクター（例えば、pPL608、pKTH50）を、本発明のポリペプチドの産生に使用することができる。
　ベクターをCHO、COS、またはNIH3T3細胞などの動物細胞内で発現させるためには、ベクターはこのような細胞における発現に必要なプロモーター、例えば、SV40プロモーター（Mulligan et al., Nature 1979,277: 108）、MMLV-LTRプロモーター、EF1αプロモーター（Mizushima et al., Nucleic Acids Res. 1990, 18: 5322）、CMVプロモーター等、および好ましくは形質転換体を選択するためのマーカー遺伝子（例えば、薬物（例えば、ネオマイシン、G418）によって選択される薬物耐性遺伝子）を有する必要がある。これらの特徴を有する公知のベクターの例には、例えばpMAM、pDR2、pBK-RSV、pBK-CMV、pOPRSV、およびpOP13が含まれる。
　上記説明に基づく本発明の態様を以下に例示するが、本発明はこれらに限定されない。
[1]　以下の群より選択されるアミノ酸配列を含む、細胞傷害性T細胞（CTL）誘導能を有する15アミノ酸未満のペプチド：
（a）配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37からなる群より選択されるアミノ酸配列；および
（b）配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して、1個、2個、3個、または数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入および／または付加されているアミノ酸配列。
[2]　配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して、以下の（a）～（c）から選択される1以上（すなわち、1個、2個、または3個）の置換がされたアミノ酸配列を含む、[1]に記載のペプチド：
（a）N末端から2番目のアミノ酸が、スレオニンおよびセリンからなる群より選択されるアミノ酸に置換されている；
（b）N末端から3番目のアミノ酸が、アスパラギン酸およびグルタミン酸からなる群より選択されるアミノ酸に置換されている；および
（c）C末端のアミノ酸が、チロシンに置換されている。
[3]　配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる、[1]に記載のペプチド。
[4]　[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドをコードする、ポリヌクレオチド。
[5]　薬学的に許容される担体と、以下の（a）～（e）からなる群より選択される少なくとも1つの成分とを含む組成物：
（a）[1]～[3]のいずれか一項に記載の1種類もしくは複数種のペプチド；
（b）[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドを発現可能な形態でコードする1種類もしくは複数種のポリヌクレオチド；
（c）[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示する抗原提示細胞（APC）；
（d）[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示するエキソソーム；および
（e）[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドを標的とするCTL。
[6]　前記成分が以下の（a）～（d）からなる群より選択される少なくとも1つの成分であり、CTLを誘導するための組成物である、[5]に記載の組成物：
（a）[1]～[3]のいずれか一項に記載の1種類もしくは複数種のペプチド；
（b）[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドを発現可能な形態でコードする1種類もしくは複数種のポリヌクレオチド；
（c）[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示する抗原提示細胞（APC）；および
（d）[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示するエキソソーム。
[7]　薬学的組成物である、[5]に記載の組成物。
[8]　（i）がんの治療、（ii）がんの予防、および（iii）がんの術後の再発の予防からなる群より選択される1以上の用途ための薬学的組成物である、[7]に記載の組成物。
[9]　がんに対する免疫応答を誘導するための、[7]に記載の組成物。
[10]　がんが、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、胆管細胞がん、慢性骨髄性白血病（CML）、食道がん、胃がん、非小細胞肺がん、リンパ腫、骨肉腫、前立腺がん、腎がん、小細胞肺がん、頭頸部がん、軟部組織腫瘍、および大腸がんからなる群より選択される、[8]または[9]に記載の組成物。
[11]　HLA-A01陽性である対象への投与のために製剤化される、[5]～[10]のいずれか一項に記載の組成物。
[12]　以下からなる群より選択される段階を含む、CTL誘導能を有するAPCを誘導する方法：
（a）APCを、[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドとインビトロ、エクスビボ、またはインビボで接触させる段階、および
（b）[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドをコードするポリヌクレオチドをAPCに導入する段階。
[13]　以下の（a）～（c）からなる群より選択される段階を含む、CTLを誘導する方法：
（a）CD8陽性Ｔ細胞を、HLA抗原と[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドとの複合体を自身の表面上に提示するAPCと共培養する段階、
（b）CD8陽性Ｔ細胞を、HLA抗原と[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドとの複合体を自身の表面上に提示するエキソソームと共培養する段階、および
（c）細胞表面上にHLA抗原により提示された[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドに結合し得るＴ細胞受容体（TCR）の各サブユニットをコードするポリヌクレオチドをCD8陽性Ｔ細胞に導入する段階。
[14]　HLA抗原と[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドとの複合体を自身の表面上に提示するAPC。
[15]　[12]に記載の方法によって誘導される、[14]に記載のAPC。
[16]　[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドを標的とするCTL。
[17]　[13]記載の方法によって誘導される、[16]に記載のCTL。
[18]　以下の（a）～（e）からなる群より選択される少なくとも1つの成分を対象に投与する段階を含む、がんに対する免疫応答を誘導する方法：
（a）[1]～[3]のいずれか一項に記載の1種類もしくは複数種のペプチド；
（b）[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドを発現可能な形態でコードする1種類もしくは複数種のポリヌクレオチド；
（c）[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示する抗原提示細胞（APC）；
（d）[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示するエキソソーム；および
（e）[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドを標的とするCTL。
[19]　以下の（a）～（e）からなる群より選択される少なくとも1つの成分を対象に投与する段階を含む、がんを治療および／もしくは予防する、ならびに／または術後のその再発を予防する方法：
（a）[1]～[3]のいずれか一項に記載の1種類もしくは複数種のペプチド；
（b）[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドを発現可能な形態でコードする1種類もしくは複数種のポリヌクレオチド；
（c）[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示する抗原提示細胞（APC）；
（d）[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示するエキソソーム；および
（e）[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドを標的とするCTL。
[20]　[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドに結合する抗体。
[21]　CTL誘導能を有するペプチドをスクリーニングする方法であって、以下の段階を含む方法：
（a）配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37の中から選択されるアミノ酸配列からなる元のアミノ酸配列に対して、1個、2個、または数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入、および／または付加されたアミノ酸配列からなる候補配列を作成する段階；
（b）（a）で作成した候補配列の中からCDCA1以外のいかなる公知のヒト遺伝子産物とも有意な相同性（配列同一性）を有さない候補配列を選択する段階；
（c）（b）で選択した候補配列からなるペプチドと、APCとを接触させる段階；
（d）（c）のAPCとCD8陽性T細胞とを接触させる段階；および
（e）元のアミノ酸配列からなるペプチドよりも同等かまたはより高いCTL誘導能を有するペプチドを選択する段階。
[22]　がんに対する免疫応答を誘導するための組成物の製造における、以下の（a）～（e）からなる群より選択される少なくとも1つの有効成分の使用：
（a）[1]～[3]のいずれか一項に記載の1種類もしくは複数種のペプチド；
（b）[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドを発現可能な形態でコードする1種類もしくは複数種のポリヌクレオチド；
（c）[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示する抗原提示細胞（APC）；
（d）[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示するエキソソーム；および
（e）[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドを標的とするCTL。
[23]　がんの治療および／もしくは予防、ならびに／または術後のその再発の予防のための薬学的組成物の製造における、以下の（a）～（e）からなる群より選択される少なくとも1つの成分の使用：
（a）[1]～[3]のいずれか一項に記載の1種類もしくは複数種のペプチド；
（b）[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドを発現可能な形態でコードする1種類もしくは複数種のポリヌクレオチド；
（c）[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示する抗原提示細胞（APC）；
（d）[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示するエキソソーム；および
（e）[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドを標的とするCTL。
[24]　がんに対する免疫応答を誘導するための、以下の（a）～（e）からなる群より選択される少なくとも1つの成分の使用：
（a）[1]～[3]のいずれか一項に記載の1種類もしくは複数種のペプチド；
（b）[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドを発現可能な形態でコードする1種類もしくは複数種のポリヌクレオチド；
（c）[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示する抗原提示細胞（APC）；
（d）[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示するエキソソーム；および
（e）[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドを標的とするCTL。
[25]　がんを治療および／もしくは予防する、ならびに／または術後のその再発を予防するための、以下の（a）～（e）からなる群より選択される少なくとも1つの成分の使用：
（a）[1]～[3]のいずれか一項に記載の1種類もしくは複数種のペプチド；
（b）[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドを発現可能な形態でコードする1種類もしくは複数種のポリヌクレオチド；
（c）[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示する抗原提示細胞（APC）；
（d）[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示するエキソソーム；および
（e）[1]～[4]のいずれか一項に記載のペプチドを標的とするCTL。
[26]　以下の（a）～（e）からなる群より選択される少なくとも1つの成分を対象に投与する段階を含む、CDCA1を発現する細胞に対する細胞傷害活性を誘導する方法：
（a）[1]～[3]のいずれか一項に記載の1種類もしくは複数種のペプチド；
（b）[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドを発現可能な形態でコードする1種類もしくは複数種のポリヌクレオチド；
（c）[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示する抗原提示細胞（APC）；
（d）[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示するエキソソーム；および
（e）[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドを標的とするCTL。
[27]　[1]～[3]のいずれか一項に記載の1種類もしくは複数種のペプチドを含む凍結乾燥製剤。
[28]　[1]～[3]のいずれか一項に記載の1種類もしくは複数種のペプチドを水溶性の担体に溶解し、ろ過滅菌することを含む方法で調製された、薬学的組成物。
[29]　[1]～[3]のいずれか一項に記載の1種類もしくは複数種のペプチドと水溶性の担体とを含む水溶液であって、ろ過滅菌された水溶液。
[30]　[1]～[3]のいずれか一項に記載の1種類もしくは複数種のペプチド、水溶性の担体、および油性アジュバントを含むエマルション。
[31]　[5]～[11]のいずれか一項に記載の組成物が収容されている容器、およびアジュバントが収納されている容器を含むキット。
[32]　[1]～[3]のいずれか一項に記載のペプチドを含む凍結乾燥製剤が収納されている容器、アジュバントが収納されている容器、および凍結乾燥製剤のための再溶解液が収納されている容器を含むキット。本発明のキットは、好ましくは、さらに付加的にHLA-A01検出試薬を含む。
　本発明をその特定の態様に関して本明細書において詳細に説明してきたが、前述の説明は事実上、例示的かつ説明的なものであって、本発明およびその好ましい態様を説明することを意図していることが理解されるべきである。当業者は、慣例的な実験を通して、本発明の精神および範囲から逸脱することなく様々な変更および修正がその中でなされ得ることを容易に理解するであろう。したがって本発明は、上記の説明によって規定されるのではなく、添付の特許請求の範囲およびそれらの等価物によって規定されることが意図される。
　以下、実施例を参照して本発明をより詳細に記載する。しかしながら、以下の材料、方法および実施例は、本発明のある形態の作製および使用において当業者を支援するために役立ち得る一方、本発明の局面を説明するためのものにすぎず、したがって本発明の範囲を決して限定することを意図しない。当業者は、本明細書に記載のものと類似または同等の方法および材料を本発明の実施または試験において使用することができる。
材料および方法
細胞株
　HLA-AおよびHLA-B陰性ヒトBリンパ芽球様細胞株であるC1R、ならびにアフリカミドリザル腎細胞株であるCOS7は、ATCCから購入した。
HLA-A * 01:01を定常的に発現する標的細胞の作製
　HLA-A*01:01を定常的に発現するC1R細胞（C1R-A01）は、CTLを刺激するための細胞として使用された。HLA-A*01:01遺伝子をコードするcDNAをPCRで増幅し、発現ベクターに組み込んだ。HLA-A*01:01遺伝子発現ベクターを導入したC1R細胞を、G418（Invitrogen）を含む培地で2週間薬剤選択培養した。G418耐性C1R細胞懸濁液を希釈後、96ウェルプレートへ播種し、G418を含む培地でさらに30日間選択培養した。C1R細胞におけるHLA-A*01:01の発現を、フローサイトメトリー解析で確認した。
CDCA1由来ペプチドの選択
　HLA-A*01:01への結合が期待されるCDCA1由来の8mer、9merおよび10merのペプチドを、結合予測サーバー「NetMHC 3.2」(www.cbs.dtu.dk/services/NetMHC-3.2/) (Buus et al., Tissue Antigens. 2003, 62(5):378-84; Nielsen et al., Protein Sci. 2003, 12(5):1007-17, Lundegaard C et al., Bioinformatics 2008, 24(11):1397-98)、「BIMAS」（http://www-bimas.cit.nih.gov/molbio/hla_bind/）（Parker KC et al., J Immunol 1994, 152(1):163-75）および「SYFPEITHI」（http://www.syfpeithi.de/bin/MHCServer.dll/EpitopePrediction.htm）（Rammensee HG et al., Immunogenetics 1999, 50(3-4):213-9）を用いて決定した。
ペプチドの合成
　ペプチドは、American Peptide Company (Sunnyvale, CA)により、標準的な固相合成法に従って化学的に合成し、逆相高速液体クロマトグラフィー（HPLC）によって精製された。HPLCおよび質量分析法によって該ペプチドの品質（純度90%以上）は保証された。ペプチドはジメチルスルホキシドで溶解し（最終濃度：20mg/ml）、-80℃で保存した。
インビトロでのCTL誘導
　単球由来の樹状細胞（DC）を抗原提示細胞として使用し、ヒト白血球抗原（HLA）上に提示されたペプチドに対する特異的な細胞傷害性Ｔリンパ球（CTL）を誘導した。すでに文献で報告されている通り、DCはインビトロで調製した（Nakahara S et al.,Cancer Res 2003,63(14):4112-8）。具体的には、Ficoll-Paque plus（Pharmacia）溶液によって健常なボランティア（HLA-A*01:01陽性）から採取した末梢血単核細胞（PBMC）を、プラスチック製の組織培養ディッシュ（Corning）へ播き、PBMC中の単球をディッシュへ接着させた後、1000 IU/mlの顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（R&D System）および1000 IU/mlのインターロイキン（IL）-4（R&D System）の存在下で7日間培養した。培地には非働化済みAB型血清（MP Biomedicals）を含むAIM-V培地（Invitrogen）を用いた（2%ABS/AIM-V培地）。サイトカインによって単球から分化誘導されたDCに20μg/mlの各合成ペプチドをパルスした（37℃, 3時間）。ペプチドパルスは、AIM-V培地中で行った。ペプチドをパルスしたこれらのDCをX線照射（20Gy）によって不活化し、CD8 Positive Isolation Kit（Invitrogen）を用いて得られた自己CD8陽性T細胞と1：20の比率（1.5 x 104個のDCと3 x 105個のCD8陽性T細胞）で混合し、48ウェルプレート（Corning）にて培養した。1ウェルあたりの2%ABS/AIM-V 培地量は0.5mlとし、そこへIL-7（R&D System）を添加した（最終濃度10ng/ml）。培養開始から2日後、IL-2（Novartis）を添加した（最終濃度20IU/ml）。培養7日目および培養14日目に、ペプチドをパルスしたDCでCD8陽性T細胞をさらに刺激した。DCは上記と同一の方法によって用時調製した。21日目以降（3回のDC刺激後）、ペプチドをパルスしたC1R-A01に対するCD8陽性T細胞のIFN-γ産生を酵素結合免疫スポット（ELISPOT)アッセイで確認した（Tanaka H et al., Br J Cancer 2001, 84(1):94-9；Umano Y et al., Br J Cancer 2001, 84(8):1052-7； Uchida N et al., Clin Cancer Res 2004, 10(24):8577-86；Suda T et al., Cancer Sci 2006, 97(5):411-9； Watanabe T et al., Cancer Sci 2005, 96(8):498-506）。
CTL増殖手順
　Riddellら（Walter EA et al., N Engl J Med 1995, 333(16): 1038-44; Riddell SR et al., Nat Med 1996, 2(2): 216-23）によって報告されている方法と類似の方法を利用してCTLを増殖させた。組織培養用フラスコ（FALCON）において、マイトマイシンCで処理した2種類のヒトBリンパ芽球様細胞株（各5 x 106個）および抗CD3抗体（BD biosciences, 最終濃度：40ng/ml）とともにCTLを5%ABS/AIM-V培地中で培養した（培養液量25ml/フラスコ）。培養を開始した翌日、IL-2を該培養物に添加した（IL-2最終濃度120IU/ml）。5、8および11日目に、60IU/mｌのIL-2を含む5%ABS/AIM-V培地による培地交換を行った(IL-2最終濃度：30IU/ml)（Tanaka H et al., Br J Cancer 2001, 84(1): 94-9; Umano Y et al., Br J Cancer 2001, 84(8): 1052-7, Uchida N et al., Clin Cancer Res 2004, 10(24): 8577-86; Suda T et al., Cancer Sci 2006, 97(5): 411-9, Watanabe T et al., Cancer Sci 2005, 96(8): 498-506）。
CTLクローンの樹立（限界希釈法）
　インビトロでのCTL誘導後、96穴丸底マイクロプレート（Corning）において、CTLを1個/ウェルまたは10個/ウェルとなるように播種した。マイトマイシンCで処理した2種類のヒトBリンパ芽球様細胞株（各1 x 104個）、抗CD3抗体（最終濃度：30ng/ml）およびIL-2（最終濃度：125IU/ml）とともに、CTLを5%ABS/AIM-V培地中で培養した（培養液量150μl/ウェル）。10日後、500IU/mｌのIL-2を含む5%ABS/AIM-V培地50μlを該培養物に添加した。14日目以降、ELISPOTアッセイにおいてペプチド特異的なIFN-γ産生を示したCTLを先述の方法で増殖させた（Uchida N et al., Clin Cancer Res 2004, 10(24): 8577-86; Suda T et al., Cancer Sci 2006, 97(5): 411-9; Watanabe T et al., Cancer Sci 2005, 96(8）): 498-506）。
IFN-γ産生の確認
　ペプチドを用いて誘導したCTLのペプチド特異的IFN-γ産生を確認するために、IFN-γ ELISPOTアッセイおよびIFN-γ ELISAを実施した。ペプチドをパルスしたC1R‐A01を標的細胞として調製した。IFN-γ ELISPOTアッセイおよびIFN-γ ELISAは、アッセイキット製造業者の推奨する手順に従って実施した。
CDCA1およびHLA-A * 01:01を強制発現させた標的細胞の樹立
　CDCA1またはHLA-A*01:01遺伝子をコードするcDNAをPCRによって増幅した。PCR増幅産物をそれぞれ発現ベクターに組み込んだ。リポフェクタミン2000（Invitrogen）を使用して、製造業者の推奨する手順に従い、HLA陰性細胞株であるCOS7細胞へCDCA1遺伝子発現ベクターおよびHLA-A*01:01遺伝子発現ベクターのいずれかまたは両方を導入した。遺伝子導入の翌日、COS7細胞をベルセン（Invitrogen）を用いて剥離し、標的細胞として使用した。
結果
CDCA1に由来するHLA-A * 01:01結合ペプチドの選択
　表1a、表1bおよび表1cは、「NetMHC 3.2」によってHLA-A*01:01への結合が予測されたCDCA1由来の8mer、9merおよび10merペプチドをそれぞれ結合親和性が高い順に示す。表2aおよび表2bは、「BIMAS」によってHLA-A*01:01への結合が予測されたCDCA1由来の9merおよび10merペプチドを結合スコアが高い順に示す。表3aおよび表3bは「SYFPEITHI」によってHLA-A*01:01への結合が予測されたCDCA1由来の9merおよび10merペプチドを結合スコアが高い順に示す。各表におけるStart Positionの数字は、ペプチドの1番目のアミノ酸がCDCA1タンパクのN末端から数えて何番目にあたるかを示す。HLA-A*01:01結合能を有する可能性のある合計39種のペプチドをエピトープペプチド候補とした。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000006
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000007
HLA-A * 01:01拘束性のCDCA1由来ペプチドによるCTLの誘導
　CDCA1由来ペプチド特異的CTLを、「材料および方法」に記載したプロトコールに従って誘導した。IFN-γ ELISPOTアッセイによって、ペプチド特異的なIFN-γ産生を測定した（図1）。
CDCA1-A01-8-138（配列番号：1）を用いたウェル番号#1（a）、
CDCA1-A01-9-290（配列番号：25）を用いたウェル番号#7（b）、
CDCA1-A01-9-130（配列番号：33）を用いたウェル番号#5（c）、
CDCA1-A01-9-246（配列番号：34）を用いたウェル番号#7（d）、
CDCA1-A01-9-268（配列番号：35）を用いたウェル番号#1（e）、
CDCA1-A01-9-288（配列番号：37）を用いたウェル番号#3（f）、
CDCA1-A01-10-136（配列番号：8）を用いたウェル番号#2（g）、
CDCA1-A01-10-56（配列番号：10）を用いたウェル番号#6（h）および
CDCA1-A01-10-48（配列番号：13）を用いたウェル番号#6（i）において、対照ウェルと比較してペプチド特異的なIFN-γ産生が認められた。一方、表1b、表1c、表2a、表2b、表3aおよび表3bに示されるその他のペプチドに対する特異的なIFN-γ産生は認められなかった。典型的な陰性データの例であるが、CDCA1-A01-10-66（配列番号：9）に対する特異的IFN-γ産生は認められなかった（ｊ）。いずれのペプチドもHLA-A＊01:01へ結合する可能性があったが、結果としてCDCA1に由来する9種のペプチドを、強力なCTL誘導能を有するペプチドとして選択した。
HLA-A * 01:01拘束性CDCA1由来ペプチド特異的なCTLクローンの樹立
　IFN-γ ELISPOTアッセイにおいてCDCA1-A01-10-136（配列番号：8）に対する特異的なIFN-γ産生を示したウェル番号#2（図1g）、CDCA1-A01-10-56（配列番号：10）に対する特異的なIFN-γ産生を示したウェル番号#6（図1h）およびCDCA1-A01-10-48（配列番号：13）に対する特異的なIFN-γ産生を示したウェル番号#6（図1i）の細胞から、限界希釈法によってCTLクローンを樹立した。ELISAによるIFN-γ測定の結果、CDCA1-A01-10-136（配列番号：8）、CDCA1-A01-10-56（配列番号：10）またはCDCA1-A01-10-48（配列番号：13）で刺激されたCTLクローンは、ペプチド特異的なIFN-γ産生を示した（図2）。
CDCA1およびHLA-A ＊ 01:01を発現する標的細胞に対するCTLのIFN-γ産生
　CDCA1およびHLA-A＊01:01を発現する標的細胞に対するCDCA1-A01-10-136（配列番号：8）特異的CTLクローンのIFN-γ産生を検証した。CDCA1およびHLA-A＊01:01の両方を発現させたCOS7細胞を標的細胞として調製した。CDCA1またはHLA-A＊01:01のどちらか一方を発現させたCOS7細胞を陰性対照細胞として調製した。CDCA1-A01-10-136（配列番号：8）特異的CTLクローンは、CDCA1およびHLA-A＊01:01の両方を発現させたCOS7細胞に対するIFN-γ産生を示した（図3）。一方、陰性対照細胞に対する有意なIFN-γ産生は認められなかった。このことから、CDCA1-A01-10-136（配列番号：8）が、抗原プロセシングにより生じるペプチドであり、かつHLA-A01分子とともに細胞表面上に提示され、CTLによって認識されることが明確に実証された。この結果は、CDCA1-A01-10-136（配列番号：8）が、CDCA1の発現が亢進しているがんの患者を対象としたがんワクチンとして、有用であることを示唆するものである。
抗原ペプチドの相同性解析
　CDCA1-A01-8-138（配列番号：1）、CDCA1-A01-9-290（配列番号：25）、CDCA1-A01-9-130（配列番号：33）、CDCA1-A01-9-246（配列番号：34）、CDCA1-A01-9-268（配列番号：35）、CDCA1-A01-9-288（配列番号：37）、CDCA1-A01-10-136（配列番号：8）、CDCA1-A01-10-56（配列番号：10）およびCDCA1-A01-10-48（配列番号：13）は、ペプチド特異的なIFN-γ産生を示すCTLを誘導し得ることが確認された。そこで、CDCA1-A01-8-138（配列番号：1）、CDCA1-A01-9-290（配列番号：25）、CDCA1-A01-9-130（配列番号：33）、CDCA1-A01-9-246（配列番号：34）、CDCA1-A01-9-268（配列番号：35）、CDCA1-A01-9-288（配列番号：37）、CDCA1-A01-10-136（配列番号：8）、CDCA1-A01-10-56（配列番号：10）およびCDCA1-A01-10-48（配列番号：13）の配列が、CDCA1のみに由来することを確認するために、BLASTアルゴリズム（http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）を用いて、ペプチド配列の相同性解析を行った。その結果、CDCA1-A01-8-138（配列番号：1）、CDCA1-A01-9-290（配列番号：25）、CDCA1-A01-9-130（配列番号：33）、CDCA1-A01-9-246（配列番号：34）、CDCA1-A01-9-268（配列番号：35）、CDCA1-A01-9-288（配列番号：37）、CDCA1-A01-10-136（配列番号：8）、CDCA1-A01-10-56（配列番号：10）およびCDCA1-A01-10-48（配列番号：13）の配列は、CDCA1においてのみ認められた。したがって、本発明者らの知る限りでは、これらのペプチドはCDCA1特有のものであり、ヒト免疫系を感作することがすでに知られているようなCDCA1以外の分子に対する意図しない免疫応答を引き起こす可能性はほとんど無いと考えられる。結論として、CDCA1由来の新規HLA-A*01:01拘束性エピトープペプチドが同定され、がん免疫療法に適用され得ることが示された。
　本発明は、強力かつ特異的な抗腫瘍免疫応答を誘導し、したがって幅広いがんの種類に対する適用性を有し得る、CDCA1由来の新規HLA-A01拘束性エピトープペプチドを提供する。本発明のペプチド、組成物、APC、およびCTLは、CDCA1を発現するがん、例えば、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、胆管細胞がん、慢性骨髄性白血病（CML）、食道がん、胃がん、非小細胞肺がん、リンパ腫、骨肉腫、前立腺がん、腎がん、小細胞肺がん、頭頸部がん、軟部組織腫瘍、および大腸がんに対するペプチドワクチンとして使用され得る。
　本明細書において、本発明をその特定の態様に関して詳細に説明しているが、前述の説明は本質的に例示的かつ説明的なものであって、本発明およびその好ましい態様を説明することを意図していることが理解されるべきである。慣例的な実験を通して、当業者は、その境界および限界が添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の精神および範囲から逸脱することなく、様々な変更および改変がその中でなされ得ることを容易に認識する。

Claims (23)

  1. 　以下の群より選択されるアミノ酸配列を含む、細胞傷害性T細胞（CTL）誘導能を有する15アミノ酸未満のペプチド：
    （a）配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37からなる群より選択されるアミノ酸配列；および
    （b）配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して、1個、2個、または数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入および／または付加されているアミノ酸配列。
  2. 　配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して、以下の（a）～（c）から選択される1以上の置換がされたアミノ酸配列を含む、請求項1に記載のペプチド：
    （a）N末端から2番目のアミノ酸が、スレオニンおよびセリンからなる群より選択されるアミノ酸に置換されている；
    （b）N末端から3番目のアミノ酸が、アスパラギン酸およびグルタミン酸からなる群より選択されるアミノ酸に置換されている；および
    （c）C末端のアミノ酸が、チロシンに置換されている。
  3. 　配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる、請求項1に記載のペプチド。
  4. 　請求項1～3のいずれか一項に記載のペプチドをコードする、ポリヌクレオチド。
  5. 　薬学的に許容される担体と、以下の（a）～（e）からなる群より選択される少なくとも1つの成分とを含む組成物：
    （a）請求項1～3のいずれか一項に記載の1種類もしくは複数種のペプチド；
    （b）請求項1～3のいずれか一項に記載のペプチドを発現可能な形態でコードする1種類もしくは複数種のポリヌクレオチド；
    （c）請求項1～3のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示する抗原提示細胞（APC）；
    （d）請求項1～3のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示するエキソソーム；および
    （e）請求項1～3のいずれか一項に記載のペプチドを標的とするCTL。
  6. 　前記成分が以下の（a）～（d）からなる群より選択される少なくとも1つの成分であり、CTLを誘導するための組成物である、請求項5に記載の組成物：
    （a）請求項1～3のいずれか一項に記載の1種類もしくは複数種のペプチド；
    （b）請求項1～3のいずれか一項に記載のペプチドを発現可能な形態でコードする1種類もしくは複数種のポリヌクレオチド；
    （c）請求項1～3のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示する抗原提示細胞（APC）；および
    （d）請求項1～3のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示するエキソソーム。
  7. 　薬学的組成物である、請求項5に記載の組成物。
  8. 　（i）がんの治療、（ii）がんの予防、および（iii）がんの術後の再発の予防からなる群より選択される1以上の用途ための、請求項7に記載の組成物。
  9. 　がんに対する免疫応答を誘導するための、請求項7に記載の組成物。
  10. 　がんが、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、胆管細胞がん、慢性骨髄性白血病（CML）、食道がん、胃がん、非小細胞肺がん、リンパ腫、骨肉腫、前立腺がん、腎がん、小細胞肺がん、頭頸部がん、軟部組織腫瘍、および大腸がんからなる群より選択される、請求項8または9に記載の組成物。
  11. 　HLA-A01陽性である対象への投与のために製剤化される、請求項5～10のいずれか一項に記載の組成物。
  12. 　以下からなる群より選択される段階を含む、CTL誘導能を有するAPCを誘導する方法：
    （a）APCを、請求項1～3のいずれか一項に記載のペプチドとインビトロ、エクスビボ、またはインビボで接触させる段階、および
    （b）請求項1～3のいずれか一項に記載のペプチドをコードするポリヌクレオチドをAPCに導入する段階。
  13. 　以下からなる群より選択される段階を含む、CTLを誘導する方法：
    （a）CD8陽性Ｔ細胞を、HLA抗原と請求項1～3のいずれか一項に記載のペプチドとの複合体を自身の表面上に提示するAPCと共培養する段階、
    （b）CD8陽性Ｔ細胞を、HLA抗原と請求項1～3のいずれか一項に記載のペプチドとの複合体を自身の表面上に提示するエキソソームと共培養する段階、および
    （c）細胞表面上にHLA抗原により提示された請求項1～3のいずれか一項に記載のペプチドに結合し得るＴ細胞受容体（TCR）の各サブユニットをコードするポリヌクレオチドをCD8陽性Ｔ細胞に導入する段階。
  14. 　HLA抗原と請求項1～3のいずれか一項に記載のペプチドとの複合体を自身の表面上に提示するAPC。
  15. 　請求項12に記載の方法によって誘導される、請求項14に記載のAPC。
  16. 　請求項1～3のいずれか一項に記載のペプチドを標的とするCTL。
  17. 　請求項13に記載の方法によって誘導される、請求項16に記載のCTL。
  18. 　以下の（a）～（e）からなる群より選択される少なくとも1つの成分を対象に投与する段階を含む、がんに対する免疫応答を誘導する方法：
    （a）請求項1～3のいずれか一項に記載の1種類もしくは複数種のペプチド；
    （b）請求項1～3のいずれか一項に記載のペプチドを発現可能な形態でコードする1種類もしくは複数種のポリヌクレオチド；
    （c）請求項1～3のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示する抗原提示細胞（APC）；
    （d）請求項1～3のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示するエキソソーム；および
    （e）請求項1～3のいずれか一項に記載のペプチドを標的とするCTL。
  19. 　以下の（a）～（e）からなる群より選択される少なくとも1つの成分を対象に投与する段階を含む、がんを治療および／もしくは予防する、ならびに／または術後のその再発を予防する方法：
    （a）請求項1～3のいずれか一項に記載の1種類もしくは複数種のペプチド；
    （b）請求項1～3のいずれか一項に記載のペプチドを発現可能な形態でコードする1種類もしくは複数種のポリヌクレオチド；
    （c）請求項1～3のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示する抗原提示細胞（APC）；
    （d）請求項1～3のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示するエキソソーム；および
    （e）請求項1～3のいずれか一項に記載のペプチドを標的とするCTL。
  20. 　請求項1～3のいずれか一項に記載のペプチドに結合する抗体。
  21. 　CTL誘導能を有するペプチドをスクリーニングする方法であって、以下の段階を含む方法：
    （a）配列番号：1、8、10、13、25、33～35および37の中から選択されるアミノ酸配列からなる元のアミノ酸配列に対して、1個、2個、または数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入、および／または付加されたアミノ酸配列からなる候補配列を作成する段階；
    （b）（a）で作成した候補配列の中からCDCA1以外のいかなる公知のヒト遺伝子産物とも有意な相同性（配列同一性）を有さない候補配列を選択する段階；
    （c）（b）で選択した候補配列からなるペプチドと、APCとを接触させる段階；
    （d）（c）のAPCとCD8陽性T細胞とを接触させる段階；および
    （e）元のアミノ酸配列からなるペプチドよりも同等かまたはより高いCTL誘導能を有するペプチドを選択する段階。
  22. 　請求項1～3のいずれか一項に記載の1種類もしくは複数種のペプチド、水溶性の担体、および油性アジュバントを含むエマルション。
  23. 　請求項5～11のいずれか一項に記載の組成物が収容されている容器、およびアジュバントが収容されている容器を含むキット。
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