JP7266318B2 - Cdca1由来ペプチドおよびそれを含むワクチン - Google Patents
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Description
本発明はまた、本発明のペプチドのいずれか1つをコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。これらのポリヌクレオチドは、本発明のペプチドと同様に、CTL誘導能を有するAPCを誘導するために用いることができ、またはCDCA1を発現するがん細胞に対する免疫応答を誘導するために対象に投与することができる。
本発明の態様を実施または試験するにあたって、本明細書に記載の方法および材料と類似のまたは同等の任意の方法および材料を用いることができるが、好ましい方法、装置、および材料をここに記載する。しかしながら、本発明の材料および方法について記載する前に、本明細書に記載の特定の大きさ、形状、寸法、材料、方法論、プロトコール等は慣例的な実験法および最適化に応じて変更可能であるため、本発明がこれらに限定されないことが理解されるべきである。本記載に使用する専門用語は特定の型または態様のみを説明する目的のためのものであり、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される本発明の範囲を限定することは意図されないことも、また理解されるべきである。
本明細書で用いる「1つの(a)」、「1つの(an)」および「その(the)」という単語は、他に特記されない限り「少なくとも1つの」を意味する。
物質(例えば、ペプチド、抗体、ポリヌクレオチド等)に関して用いる「単離された」および「精製された」という用語は、該物質がそうでなければ天然源中に含まれ得る少なくとも1種の物質を実質的に含まないことを示す。したがって、単離または精製されたペプチドは、そのペプチドが由来する細胞もしくは組織源からの他の細胞材料、例えば糖質、脂質、および他の混入タンパク質を実質的に含まないペプチドを指す。またはペプチドが化学合成される場合には、単離または精製されたペプチドは前駆体物質もしくは他の化学物質を実質的に含まないペプチドを指す。「細胞材料を実質的に含まない」という用語は、それが単離された細胞または組換え産生された細胞の細胞成分から、ペプチドが分離されたペプチドの調製物を含む。したがって、細胞材料を実質的に含まないペプチドは、約30%、20%、10%、または5%、3%、2%または1%(乾燥重量ベース)未満の他の細胞材料を含有する、ペプチドの調製物を包含する。ペプチドを組換え産生する場合、単離または精製されたペプチドは、培養培地も実質的に含まず、培養培地を実質的に含まないペプチドは、培養培地をペプチド調製物の容量の約20%、10%、または5%、3%、2%または1%(乾燥重量ベース)未満で含有する、ペプチドの調製物を包含する。ペプチドを化学合成によって生成する場合、単離または精製されたペプチドは、前駆体物質および他の化学物質を実質的に含まず、前駆体物質および他の化学物質を実質的に含まないペプチドは、前駆体物質および他の化学物質をペプチド調製物の容量の約30%、20%、10%、5%、3%、2%または1%(乾燥重量ベース)未満で含有する、ペプチドの調製物を包含する。特定のペプチド調製物が単離または精製されたペプチドであることは、例えば、ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)-ポリアクリルアミドゲル電気泳動およびゲルのクーマシーブリリアントブルー染色等の後の単一バンドの出現によって確認することができる。好ましい態様では、本発明のペプチドおよびポリヌクレオチドは単離または精製されている。
HLA-A11およびHLA-A33は、アジア人の中でよく見られるアリルであり(Sette A, Sidney J., Immunogenetics 1999, 50:201-12)、HLA-A03は白人の中でよく見られるアリルである(Cao et al., Hum Immunol. 2001;62(9):1009-30)。そのため、HLA-A11、HLA-A33またはHLA-A03によって拘束されるCDCA1由来のCTL誘導性ペプチドを提供することにより、多くのアジア人または白人に、CDCA1を発現するがんの有効な治療方法を提供することができる。よって、本発明は、HLA-A11、HLA-A33またはHLA-A03拘束性の様式でCTLを誘導し得るCDCA1由来のペプチドを提供する。
1)アラニン(A)、グリシン(G);
2)アスパラギン酸(D)、グルタミン酸(E);
3)アスパラギン(N)、グルタミン(Q);
4)アルギニン(R)、リジン(K);
5)イソロイシン(I)、ロイシン(L)、メチオニン(M)、バリン(V);
6)フェニルアラニン(F)、チロシン(Y)、トリプトファン(W);
7)セリン(S)、スレオニン(T);および
8)システイン(C)、メチオニン(M)(例えば、Creighton,Proteins 1984を参照されたい)。
(a)N末端から2番目のアミノ酸がスレオニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、フェニルアラニンまたはチロシンで置換されている;
(b)N末端から3番目のアミノ酸がロイシン、フェニルアラニン、チロシン、イソロイシンまたはアラニンで置換されている;
(c)N末端から7番目のアミノ酸がロイシン、イソロイシン、チロシン、バリンまたはフェニルアラニンで置換されている;および
(d)C末端のアミノ酸がリジンまたはアルギニンで置換されている。
(a)N末端から2番目のアミノ酸がスレオニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、フェニルアラニンまたはチロシンで置換されている;および
(b)C末端のアミノ酸がリジンまたはアルギニンで置換されている。
(a)N末端から1番目のアミノ酸がアスパラギン酸またはグルタミン酸で置換されている;
(b)N末端から2番目のアミノ酸がフェニルアラニン、チロシン、アラニン、イソロイシン、ロイシンまたはバリンで置換されている;および
(c)C末端のアミノ酸がアルギニンまたはリジンで置換されている。
(a)N末端から2番目のアミノ酸がフェニルアラニン、チロシン、アラニン、イソロイシン、ロイシンもしくはバリンで置換されている;および
(b)C末端のアミノ酸がアルギニンまたはリジンで置換されている。
(a)N末端から2番目のアミノ酸がロイシン、メチオニン、バリン、アラニン、イソロイシン、セリン、またはスレオニンで置換されている;および
(b)C末端のアミノ酸がアルギニン、リジン、チロシン、またはフェニルアラニンで置換されている。
(a)配列番号:3、5~7、9、10、12~14、17、19、21、30、35、38~40、45、53、56、58、27、60、28、67、69および47の中から選択されるアミノ酸配列からなる元のアミノ酸配列に対して、1個、2個、または数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入、および/または付加されたアミノ酸配列からなる候補配列を作成する段階;
(b)(a)で作成した候補配列の中からCDCA1以外のいかなる公知のヒト遺伝子産物とも有意な相同性(配列同一性)を有さない候補配列を選択する段階;
(c)(b)で選択した候補配列からなるペプチドと、APCとを接触させる段階;
(d)(c)のAPCとCD8陽性T細胞とを接触させる段階;および
(e)元のアミノ酸配列からなるペプチドよりも同等かまたはより高いCTL誘導能を有するペプチドを選択する段階。
周知の技法を用いて、本発明のペプチドを調製することができる。例えば、組換えDNA技術または化学合成を用いて、本発明のペプチドを調製することができる。本発明のペプチドは、個々に、または2つもしくはそれ以上のペプチドを含むより長いポリペプチドとして、合成することができる。組換えDNA技術を用いて宿主細胞内で産生させた後、または化学合成した後、宿主細胞または合成反応物から、本発明のペプチドを単離することができる。すなわち、他の宿主細胞タンパク質およびそれらの断片、または他のいかなる化学物質も実質的に含まないように、本発明のペプチドを精製または単離することができる。
(i)Peptide Synthesis, Interscience, New York, 1966;
(ii)The Proteins, Vol. 2, Academic Press, New York, 1976;
(iii)「ペプチド合成」(日本語), 丸善, 1975;
(iv)「ペプチド合成の基礎と実験」(日本語), 丸善, 1985;
(v)「医薬品の開発」(日本語), 続第14巻(ペプチド合成), 広川書店, 1991;
(vi)WO99/67288;および
(vii)Barany G. & Merrifield R.B., Peptides Vol. 2, Solid Phase Peptide Synthesis, Academic Press, New York, 1980, 100-118。
本発明はまた、本発明のペプチドのいずれかをコードするポリヌクレオチドを提供する。これらには、天然CDCA1遺伝子(例えば、GenBankアクセッション番号NM_145697(配列番号:81)またはGenBankアクセッション番号NM_031423(配列番号:83))由来のポリヌクレオチド、およびその保存的に改変されたヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドが含まれる。本明細書において「保存的に改変されたヌクレオチド配列」という語句は、同一のまたは本質的に同一のアミノ酸配列をコードする配列を指す。遺伝暗号の縮重のため、数多くの機能的に同一の核酸が任意の特定のタンパク質をコードする。例えば、コドンGCA、GCC、GCG、およびGCUはすべて、アミノ酸のアラニンをコードする。したがって、あるコドンによってアラニンが指定される任意の位置において、コードされるポリペプチドを変化させることなく、該コドンを前記の対応するコドンのいずれかに変更することができる。そのような核酸の変異は「サイレント変異」であり、保存的に改変された変異の一種である。ペプチドをコードする本明細書中のあらゆる核酸配列は、該核酸のあらゆる可能なサイレント変異をも表す。核酸中の各コドン(通常メチオニンに対する唯一のコドンであるAUG、および通常トリプトファンに対する唯一のコドンであるTGGを除く)を改変して、機能的に同一の分子を得ることができることを、当業者は認識するであろう。したがって、ペプチドをコードする核酸の各サイレント変異は、開示した各配列において非明示的に記載されている。
本発明はさらに、本発明のペプチドとHLA抗原との間に形成された複合体を自身の表面上に提示する、エキソソームと称される細胞内小胞を提供する。エキソソームは、例えば特表平11-510507号およびWO99/03499に詳述されている方法を用いて調製することができ、治療および/または予防の対象となる患者から得られたAPCを用いて調製することができる。本発明のエキソソームは、本発明のペプチドと同様の様式で、ワクチンとして接種することができる。
本発明はまた、HLA抗原と本発明のペプチドとの間に形成される複合体を自身の表面上に提示するAPCを提供する。あるいは、本発明は、HLA抗原と本発明のペプチドとの間に形成された複合体をその細胞表面上に有するAPCを提供する。本発明のAPCは、単離されたAPCであり得る。細胞(APC、CTL等)に関して用いられる場合、「単離された」という用語は、該細胞が他の種類の細胞から分離されていることを指す。本発明のAPCは、治療および/または予防の対象となる患者に由来するAPCから誘導されたものであってもよく、かつ単独で、または本発明のペプチド、エキソソーム、もしくはCTLを含む他の薬物と併用して、ワクチンとして投与することができる。
(a)第1の対象からAPCを回収する段階、
(b)段階(a)のAPCをペプチドと接触させる段階、および
(c)段階(b)のAPCを第2の対象に投与する段階。
(a)HLA-A11(より好ましくはHLA-A*1101)、HLA-A33(より好ましくはHLA-A*3303)およびHLA-A03(より好ましくはHLA-A*0301)の中より選択される少なくとも1つのHLAを発現しているAPCを本発明のペプチドと接触させる段階;
(b)HLA-A11(より好ましくはHLA-A*1101)、HLA-A33(より好ましくはHLA-A*3303)およびHLA-A03(より好ましくはHLA-A*0301)の中より選択される少なくとも1つのHLAを発現しているAPCに、本発明のペプチドをコードするポリヌクレオチドを導入する段階。
本発明のペプチドによって誘導されたCTLは、インビボでCDCA1を発現するがん細胞を標的とする免疫応答を増強するため、本発明のペプチドと同様にワクチンとして用いることができる。したがって本発明は、本発明のペプチドによって誘導または活性化された、CTLを提供する。本発明のCTLは、本発明のペプチドを標的とするCTLであり、本発明のペプチドとHLA抗原との複合体に結合することができるCTLである。該複合体へのCTLの結合は、CTLの細胞表面上に存在するT細胞受容体(TCR)を介して行われる。本発明のCTLは、単離されたCTLであり得る。好ましいCTLは、ヒト由来の単離されたCTLである。また本発明のCTLはそれぞれ異なる本発明のペプチドを標的とするCTLの混合物であってもよい。
(a)CD8陽性T細胞を、HLA-A11(より好ましくはHLA-A*1101)、HLA-A33(より好ましくはHLA-A*3303)またはHLA-A03(より好ましくはHLA-A*0301)と本発明のペプチドとの複合体を自身の表面上に提示するAPCまたはエキソソームとインビトロで接触させる段階;
(b)CD8陽性T細胞に、細胞表面上にHLA-A11(より好ましくはHLA-A*1101)、HLA-A33(より好ましくはHLA-A*3303)またはHLA-A03(より好ましくはHLA-A*0301)により提示された本発明のペプチドに結合し得るTCRの各サブユニットをコードするポリヌクレオチドを導入する段階。
本発明はまた、細胞表面上にHLA抗原により提示された本発明のペプチドに結合し得るTCRの各サブユニットをコードするポリヌクレオチドを含む組成物、およびそれを使用する方法を提供する。該ポリヌクレオチドは、細胞表面上にHLA抗原により細胞表面上に提示された本発明のペプチドに結合し得るTCRを発現させることにより、CDCA1を発現するがん細胞に対する特異性をCD8陽性T細胞に付与する。当技術分野における公知の方法を用いることにより、本発明のペプチドで誘導されたCTLのTCRサブユニットとしてのα鎖およびβ鎖をコードするポリヌクレオチドを同定することができる(WO2007/032255、およびMorgan et al., J Immunol, 171, 3288 (2003))。例えば、TCRを分析するためにはPCR法が好ましい。分析のためのPCRプライマーは、例えば、次の5'側プライマーに、以下の3'側プライマーを組み合わせて増幅用プライマーセットとすることができるが、これらに限定されない。
5'側プライマー:
5'-Rプライマー(5'-gtctaccaggcattcgcttcat-3')(配列番号:77)
3'側プライマー:
TCRα鎖C領域に特異的:
3-TRa-Cプライマー(5'-tcagctggaccacagccgcagcgt-3')(配列番号:78)
TCRβ鎖C1領域に特異的:
3-TRb-C1プライマー(5'-tcagaaatcctttctcttgac-3')(配列番号:79)、または
TCRβ鎖C2領域に特異的:
3-TRβ-C2プライマー(5'-ctagcctctggaatcctttctctt-3')(配列番号:80)
同定されたポリヌクレオチドをCD8陽性T細胞に導入することによって形成されるTCRは、本発明のペプチドを提示する標的細胞と高い結合力で結合することができ、かつ、本発明のペプチドを提示する標的細胞の効率的な殺傷をインビボおよびインビトロで媒介する。
本発明はまた、以下の中から選択される少なくとも1つの有効成分を含む、組成物または薬学的組成物を提供する:
(a)本発明のペプチド;
(b)本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド;
(c)本発明のAPC;
(d)本発明のエキソソーム;
(e)本発明のCTL。
(a)本発明のペプチド;
(b)本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド;
(c)本発明のAPC;
(d)本発明のエキソソーム;
(e)本発明のCTL。
CDCA1の発現は、正常組織と比較して、がん細胞において、有意に上昇する。そのため、本発明のペプチドまたは該ペプチドをコードするポリヌクレオチドを、がんの治療および/もしくは予防、ならびに/または術後のその再発の予防に用いることができる。したがって本発明は、がんの治療および/もしくは予防、ならびに/または術後のその再発の予防のための薬学的組成物であって、本発明のペプチドまたはポリヌクレオチドの1種類または複数種を有効成分として含む組成物を提供する。あるいは、薬学的組成物として用いるために、本発明のペプチドを、エキソソームまたはAPCの表面上に提示させることができる。加えて、本発明のペプチドのいずれか1つを標的とする本発明のCTLもまた、本発明の薬学的組成物の有効成分として用いることができる。本発明の薬学的組成物は、治療的有効量または薬学的有効量の上記有効成分を含み得る。
本発明の薬学的組成物は、ヒトである対象または患者において、がんを治療および/もしくは予防するため、ならびに/または術後のその再発を予防するために用いることができる。本発明の薬学的組成物は、HLA-A11、HLA-A33およびHLA-A03の中より選択される少なくとも1つのHLAが陽性の対象に対して、好ましく使用することができる。また、本発明の薬学的組成物は、HLA-A11、HLA-A33およびHLA-A03の中より選択される少なくとも1つのHLAならびにCDCA1を発現するがんを治療および/もしくは予防するため、ならびに/または術後のその再発を予防するために、好ましく用いることができる。
(a)本発明のペプチド;
(b)本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド;
(c)本発明のペプチドを自身の表面上に提示するAPC;
(d)本発明のペプチドを自身の表面上に提示するエキソソーム;および
(e)本発明のCTL。
(a)本発明のペプチド;
(b)本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド;
(c)本発明のペプチドを自身の表面上に提示するAPC;
(d)本発明のペプチドを自身の表面上に提示するエキソソーム;および
(e)本発明のCTL。
(a)本発明のペプチド;
(b)本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド;
(c)本発明のペプチドを自身の表面上に提示するAPC;
(d)本発明のペプチドを自身の表面上に提示するエキソソーム;および
(e)本発明のCTL。
(a)本発明のペプチド;
(b)本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド;
(c)本発明のペプチドを自身の表面上に提示するAPC;
(d)本発明のペプチドを自身の表面上に提示するエキソソーム;および
(e)本発明のCTL。
(a)本発明のペプチド;
(b)本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド;
(c)本発明のペプチドを自身の表面上に提示するAPC;
(d)本発明のペプチドを自身の表面上に提示するエキソソーム;および
(e)本発明のCTL。
本発明のペプチドを含む薬学的組成物は、必要であれば、従来の製剤化法によって製剤化することができる。本発明の薬学的組成物は、本発明のペプチドに加えて、医薬品に通常用いられる担体、賦形剤等を特に制限なく必要に応じて含み得る。本発明の薬学的組成物に使用可能な担体の例としては、滅菌水(例えば、注射用水)、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水、トリス緩衝生理食塩水、0.3%グリシン、培養液等が挙げられる。さらに、本発明の薬学的組成物は、必要に応じて、安定剤、懸濁液、保存剤、界面活性剤、溶解補助剤、pH調整剤、凝集抑制剤等を含み得る。本発明の薬学的組成物は、CDCA1を発現するがん細胞に対して特異的な免疫を誘導することができるため、がんの治療または予防の目的に用いることができる。
本発明の薬学的組成物はまた、本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチドを含み得る。本明細書において、「発現可能な形態で」という語句は、ポリヌクレオチドが、細胞に導入された場合に、本発明のペプチドが発現されることを意味する。例示的な態様において、本発明のポリヌクレオチドの配列は、本発明のペプチドの発現に必要な調節エレメントを含む。本発明のポリヌクレオチドには、標的細胞のゲノムへの安定した挿入が達成されるために必要な配列を備えさせることができる(相同組換えカセットベクターの説明に関しては、例えばThomas KR & Capecchi MR, Cell 1987, 51: 503-12を参照されたい)。例えば、Wolff et al., Science 1990, 247: 1465-8;米国特許第5,580,859号;第5,589,466号;第5,804,566号;第5,739,118号;第5,736,524号;第5,679,647号;およびWO98/04720を参照されたい。DNAに基づく送達技術の例には、「naked DNA」、促進された(ブピバカイン、ポリマー、ペプチド媒介性)送達、カチオン性脂質複合体、および粒子媒介性(「遺伝子銃」)または圧力媒介性の送達が含まれる(例えば、米国特許第5,922,687号を参照されたい)。
本発明のペプチドおよびポリヌクレオチドを用いて、APCおよびCTLを誘導することができる。本発明のエキソソームおよびAPCを用いて、CTLを誘導することもできる。本発明のペプチド、ポリヌクレオチド、エキソソーム、およびAPCは、それらのCTL誘導能が阻害されない限り、任意の他の化合物と組み合わせて用いることができる。したがって、本発明のペプチド、ポリヌクレオチド、APCおよびエキソソームのいずれかを含む薬学的組成物を用いて本発明のCTLを誘導することができる。また、本発明のペプチドまたはポリヌクレオチドを含む薬学的組成物を用いて本発明のAPCを誘導することができる。
本発明は、本発明のペプチドまたはポリヌクレオチドを用いて、CTL誘導能を有するAPCを誘導する方法を提供する。
(a)対象からAPCを回収する段階;および
(b)段階(a)のAPCを本発明のペプチドと接触させる段階。
前記APCは特定の種類の細胞に限定されず、リンパ球によって認識されるように自身の細胞表面上にタンパク質性抗原を提示することが知られているDC、ランゲルハンス細胞、マクロファージ、B細胞、および活性化T細胞を用いることができる。DCはAPCの中で最も強力なCTL誘導能を有するため、好ましくはDCを用いることができる。本発明の任意のペプチドを単独で、または本発明の他のペプチドと共に用いることができる。また、本発明のペプチドと、他のCTL誘導性ペプチド(例えば、他のTAA由来のCTL誘導性ペプチド)とを組み合わせて用いることもできる。
(a)対象からAPCを回収する段階;および
(b)本発明のペプチドをコードするポリヌクレオチドを段階(a)のAPCに導入する段階。
段階(b)は、「VI.抗原提示細胞(APC)」の章に上述したように行うことができる。
(a)APCを本発明のペプチドで接触させる段階;
(b)本発明のペプチドをコードするポリヌクレオチドをAPCに導入する段階。
(a)APCを本発明のペプチドで接触させる段階;
(b)本発明のペプチドをコードするポリヌクレオチドをAPCに導入する段階。
本発明の方法によって誘導されたAPCは、CDCA1に特異的なCTL(すなわち本発明のCTL)を誘導することができる。
本発明はまた、本発明のペプチド、ポリヌクレオチド、エキソソーム、またはAPCを用いてCTLを誘導する方法を提供する。本発明はまた、本発明のペプチドとHLA抗原との複合体を認識し得るT細胞受容体(TCR)を形成し得るポリペプチド(すなわち、TCRサブユニット)をコードする1つまたは複数のポリヌクレオチドを使用してCTLを誘導する方法を提供する。好ましくは、CTLを誘導する方法は、以下の中より選択される少なくとも1つの段階を含む:
(a)CD8陽性T細胞を、HLA抗原と本発明のペプチドとの複合体を自身の表面上に提示する抗原提示細胞と接触させる段階;
(b)CD8陽性T細胞を、HLA抗原と本発明のペプチドとの複合体を自身の表面上に提示するエキソソームと接触させる段階;および
(c)本発明のペプチドとHLA抗原との複合体を認識することができるTCRを形成し得るポリペプチドをコードする1つまたは複数のポリヌクレオチドをCD8陽性T細胞に導入する段階。
(a)対象からAPCを回収する段階、
(b)段階(a)のAPCを本発明のペプチドと接触させる段階、および
(c)段階(b)のAPCをCD8陽性T細胞と共培養する段階。
誘導されたCTLは、その後対象に戻してもよい。
(a)CD8陽性T細胞を、HLA抗原と本発明のペプチドとの複合体を自身の表面上に提示するAPCと共培養する段階;
(b)CD8陽性T細胞を、HLA抗原と本発明のペプチドとの複合体を自身の表面上に提示するエキソソームと共培養する段階;および
(c)細胞表面上にHLA抗原により提示された本発明のペプチドに結合し得るTCRの各サブユニットをコードするポリヌクレオチドを含むベクターを、CD8陽性T細胞に導入する段階。
(a)本発明のペプチド;
(b)本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド;
(c)本発明のペプチドを自身の表面上に提示するAPC;および
(d)本発明のペプチドを自身の表面上に提示するエキソソーム。
(a)本発明のペプチド;
(b)本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド;
(c)本発明のペプチドを自身の表面上に提示するAPC;および
(d)本発明のペプチドを自身の表面上に提示するエキソソーム。
(a)本発明のペプチド;
(b)本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド;
(c)本発明のペプチドを自身の表面上に提示するAPC;および
(d)本発明のペプチドを自身の表面上に提示するエキソソーム。
(a)本発明のペプチド;
(b)本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド;
(c)本発明のペプチドを自身の表面上に提示するAPC;および
(d)本発明のペプチドを自身の表面上に提示するエキソソーム。
(a)本発明のペプチド;
(b)本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド;
(c)本発明のペプチドを自身の表面上に提示するAPC;および
(d)本発明のペプチドを自身の表面上に提示するエキソソーム。
さらに本発明は、CDCA1を発現するがんに対する免疫応答を誘導する方法を提供する。適用可能ながんには、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、胆管細胞がん、慢性骨髄性白血病(CML)、食道がん、胃がん、非小細胞肺がん、リンパ腫、骨肉腫、前立腺がん、腎がん、小細胞肺がん、頭頸部がん、軟部組織腫瘍、および大腸がんなどが含まれるが、これらに限定されない。また、がんは、HLA-A11、HLA-A33およびHLA-A03の中より選択される少なくとも1つのHLAを発現していることが好ましい。
(a)本発明のペプチド;
(b)本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド;
(c)本発明のペプチドを自身の表面上に提示するAPC;
(d)本発明のペプチドを自身の表面上に提示するエキソソーム;および
(e)本発明のCTL。
(a)本発明のペプチド;
(b)本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド;
(c)本発明のペプチドを自身の表面上に提示するAPC;
(d)本発明のペプチドを自身の表面上に提示するエキソソーム;および
(e)本発明のCTL。
(a)本発明のペプチド;
(b)本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド;
(c)本発明のペプチドを自身の表面上に提示するAPC;
(d)本発明のペプチドを自身の表面上に提示するエキソソーム;および
(e)本発明のCTL。
(a)本発明のペプチド;
(b)本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド;
(c)本発明のペプチドを自身の表面上に提示するAPC;
(d)本発明のペプチドを自身の表面上に提示するエキソソーム;および
(e)本発明のCTL。
(a)本発明のペプチド;
(b)本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド;
(c)本発明のペプチドを自身の表面上に提示するAPC;
(d)本発明のペプチドを自身の表面上に提示するエキソソーム;および
(e)本発明のCTL。
(a)本発明のペプチド;
(b)本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド;
(c)本発明のペプチドを自身の表面上に提示するAPC;
(d)本発明のペプチドを自身の表面上に提示するエキソソーム;および
(e)本発明のCTL。
(a)本発明のペプチド;
(b)本発明のペプチドを発現可能な形態でコードするポリヌクレオチド;
(c)本発明のペプチドを自身の表面上に提示するAPC;
(d)本発明のペプチドを自身の表面上に提示するエキソソーム;および
(e)本発明のCTL。
i)がんを有する対象の疾患部位から採取された生体試料中のCDCA1の発現レベルを測定する段階;
ii)i)で測定されたCDCA1の発現レベルに基づいて、CDCA1を発現するがんを有する対象を特定する段階;および
iii)上記の(a)~(e)からなる群より選択される少なくとも1つの成分を、正常対照と比較してCDCA1を過剰発現するがんを有する対象に投与する段階。
i)がんを有する対象の疾患部位から採取された生体試料中のCDCA1の発現レベルを測定する段階;
ii)i)で測定されたCDCA1の発現レベルに基づいて、CDCA1を発現するがんを有する対象を特定する段階;および
iii)ii)で特定された対象を、上記の(a)~(e)からなる群より選択される少なくとも1つの有効成分で治療され得る対象として特定または選択する段階。
生体試料中のCDCA1の発現レベルは公知の方法で測定することができ、例えば、CDCA1遺伝子の転写産物をプローブやPCR法により検出する方法(例えば、cDNAマイクロアレイ法、ノーザンブロット法、RT-PCR法など)、CDCA1遺伝子の翻訳産物を抗体等により検出する方法(例えば、ウェスタンブロット法、免疫染色法など)等を用いることができる。また、生体試料は血液試料であってもよく、この場合には、CDCA1またはその断片に対する抗体の血中レベルを測定し、該血中レベルに基づいて疾患部位におけるCDCA1の発現レベルを評価してもよい。CDCA1に対する抗体の血中レベルの測定は公知の方法を用いて行うことができ、例えば、CDCA1タンパク質や本発明のペプチドを抗原として用いた酵素免疫測定法(EIA)、酵素結合免疫吸着測定法(ELISA)、および放射免疫測定法(RIA)等を用いることができる。
本発明はさらに、本発明のペプチドに結合する抗体を提供する。好ましい抗体は本発明のペプチドに特異的に結合し、本発明のペプチドではないものには結合しない(または弱く結合する)。別の態様において、そのような抗体は、HLA分子との関連でペプチドを認識する抗体、すなわちペプチド-MHC複合体に結合する抗体を含み得る。抗体の結合特異性は、阻害試験で確認することができる。すなわち、分析する抗体と全長CDCA1ポリペプチドとの間の結合が、本発明のペプチドの存在下で阻害される場合、この抗体が本発明のペプチドに特異的に結合することが示される。本発明のペプチドに対する抗体は、疾患の診断および予後診断のアッセイ、ならびに本発明の薬学的組成物の投与対象の選択および本発明の薬学的組成物のモニタリングにおいて使用され得る。
例えば、本発明の抗体は、対象の血液試料(例えば血清試料)中に存在する本発明のペプチドを検出するために用いることもできる。あるいは、逆に、対象の血液試料(例えば血清試料)中に存在する本発明の抗体を、本発明のペプチドを用いて検出することもできる。対象の血液試料中において本発明のペプチドまたは本発明の抗体を測定した結果は、本発明の薬学的組成物の投与対象の選択、または本発明の薬学的組成物の効果のモニタリングに役立てることができる。そのほか、たとえばワクチンとして投与するペプチドに対する抗体を有する患者は、ワクチンに対する応答性が高い場合があることが報告されている。したがって、本発明のペプチドは、当該ペプチドをワクチンとして投与したときに、応答性の高い患者の抗体を指標とすることによって選択するためのイムノアッセイ用抗原として利用することができる。
本発明はまた、本発明のペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むベクターおよび該ベクターが導入された宿主細胞を提供する。本発明のベクターは、宿主細胞中に本発明のポリヌクレオチドを保持するため、宿主細胞に本発明のペプチドを発現させるため、または遺伝子治療用に本発明のポリヌクレオチドを投与するために使用され得る。
[1]以下の群より選択されるアミノ酸配列を含む、細胞傷害性T細胞(CTL)誘導能を有する15アミノ酸未満のペプチド:
(a)配列番号:3、5~7、9、10、12~14、17、19、21、30、35、38~40、45、53、56、58、27、60、28、67、69および47からなる群より選択されるアミノ酸配列;および
(b)配列番号:3、5~7、9、10、12~14、17、19、21、30、35、38~40、45、53、56、58、27、60、28、67、69および47からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して、1個、2個、または数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入および/または付加されているアミノ酸配列。
[2]以下の(i)~(iii)からなる群より選択される、[1]に記載のペプチド:
(i)配列番号:3、5~7、9、10、12~14、17、19、21、30、35、38~40、45、53、56および58からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して以下の(a)~(d)からなる群より選択される1個以上の置換がされたアミノ酸配列を含むペプチド:
(a)N末端から2番目のアミノ酸が、スレオニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、フェニルアラニンおよびチロシンからなる群より選択されるアミノ酸に置換されている;
(b)N末端から3番目のアミノ酸が、ロイシン、フェニルアラニン、チロシン、イソロイシンおよびアラニンからなる群より選択されるアミノ酸に置換されている;
(c)N末端から7番目のアミノ酸が、ロイシン、イソロイシン、チロシン、バリンおよびフェニルアラニンからなる群より選択されるアミノ酸に置換されている;および
(d)C末端のアミノ酸が、リジンおよびアルギニンからなる群より選択されるアミノ酸に置換されている。
(ii)配列番号:27、3、60、28、5、67および69からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して以下の(a)~(c)からなる群より選択される1個以上の置換がされたアミノ酸配列を含むペプチド:
(a)N末端から1番目のアミノ酸が、アスパラギン酸およびグルタミン酸からなる群より選択されるアミノ酸に置換されている;
(b)N末端から2番目のアミノ酸が、フェニルアラニン、チロシン、アラニン、イソロイシン、ロイシンおよびバリンからなる群より選択されるアミノ酸に置換されている;および
(c)C末端のアミノ酸が、アルギニンおよびリジンからなる群より選択されるアミノ酸に置換されている;
(iii)配列番号:7、38および47からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して以下の(a)~(b)からなる群より選択される1個以上の置換がされたアミノ酸配列を含むペプチド:
(a)N末端から2番目のアミノ酸が、ロイシン、メチオニン、バリン、アラニン、イソロイシン、セリンおよびスレオニンからなる群より選択されるアミノ酸に置換されている;および
(b)C末端のアミノ酸が、アルギニン、リジン、チロシンおよびフェニルアラニンからなる群より選択されるアミノ酸に置換されている。
[3]配列番号:3、5~7、9、10、12~14、17、19、21、30、35、38~40、45、53、56、58、27、60、28、67、69および47からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる、[1]に記載のペプチド。
[4][1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドをコードする、ポリヌクレオチド。
[5]薬学的に許容される担体と、以下の(a)~(e)からなる群より選択される少なくとも1つの成分とを含む組成物:
(a)[1]~[3]のいずれか一項に記載の1種類もしくは複数種のペプチド;
(b)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドを発現可能な形態でコードする1種類もしくは複数種のポリヌクレオチド;
(c)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示する抗原提示細胞(APC);
(d)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示するエキソソーム;および
(e)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドを標的とするCTL。
[6]前記成分が以下の(a)~(d)からなる群より選択される少なくとも1つの成分であり、CTLを誘導するための組成物である、[5]に記載の組成物:
(a)[1]~[3]のいずれか一項に記載の1種類もしくは複数種のペプチド;
(b)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドを発現可能な形態でコードする1種類もしくは複数種のポリヌクレオチド;
(c)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示する抗原提示細胞(APC);および
(d)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示するエキソソーム。
[7]薬学的組成物である、[5]に記載の組成物。
[8](i)がんの治療、(ii)がんの予防、および(iii)がんの術後の再発の予防からなる群より選択される1以上の用途のための薬学的組成物である、[7]に記載の組成物。
[9]がんに対する免疫応答を誘導するための、[7]に記載の組成物。
[10]がんが、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、胆管細胞がん、慢性骨髄性白血病(CML)、食道がん、胃がん、非小細胞肺がん、リンパ腫、骨肉腫、前立腺がん、腎がん、小細胞肺がん、頭頸部がん、軟部組織腫瘍、および大腸がんからなる群より選択される、[8]または[9]に記載の組成物。
[11]HLA-A11、HLA-A33およびHLA-A03からなる群より選択される少なくとも1つのHLAが陽性である対象への投与のために製剤化される、[5]~[10]のいずれか一項に記載の組成物。
[12]以下からなる群より選択される段階を含む、CTL誘導能を有するAPCを誘導する方法:
(a)APCを、[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドとインビトロ、エクスビボ、またはインビボで接触させる段階;および
(b)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドをコードするポリヌクレオチドをAPCに導入する段階。
[13]以下の(a)~(c)からなる群より選択される段階を含む、CTLを誘導する方法:
(a)CD8陽性T細胞を、HLA抗原と[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドとの複合体を自身の表面上に提示するAPCと共培養する段階;
(b)CD8陽性T細胞を、HLA抗原と[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドとの複合体を自身の表面上に提示するエキソソームと共培養する段階;および
(c)細胞表面上にHLA抗原により提示された[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドに結合し得るT細胞受容体(TCR)の各サブユニットをコードするポリヌクレオチドをCD8陽性T細胞に導入する段階。
[14]HLA抗原と[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドとの複合体を自身の表面上に提示するAPC。
[15][12]に記載の方法によって誘導される、[14]に記載のAPC。
[16][1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドを標的とするCTL。
[17][13]に記載の方法によって誘導される、[16]に記載のCTL。
[18]以下の(a)~(e)からなる群より選択される少なくとも1つの成分を対象に投与する段階を含む、がんに対する免疫応答を誘導する方法:
(a)[1]~[3]のいずれか一項に記載の1種類もしくは複数種のペプチド;
(b)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドを発現可能な形態でコードする1種類もしくは複数種のポリヌクレオチド;
(c)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示する抗原提示細胞(APC);
(d)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示するエキソソーム;および
(e)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドを標的とするCTL。
[19]以下の(a)~(e)からなる群より選択される少なくとも1つの成分を対象に投与する段階を含む、がんを治療および/もしくは予防する、ならびに/または術後のその再発を予防する方法:
(a)[1]~[3]のいずれか一項に記載の1種類もしくは複数種のペプチド;
(b)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドを発現可能な形態でコードする1種類もしくは複数種のポリヌクレオチド;
(c)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示する抗原提示細胞(APC);
(d)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示するエキソソーム;および
(e)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドを標的とするCTL。
[20][1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドに結合する抗体。
[21]CTL誘導能を有するペプチドをスクリーニングする方法であって、以下の段階を含む方法:
(a)配列番号:3、5~7、9、10、12~14、17、19、21、30、35、38~40、45、53、56、58、27、60、28、67、69および47からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる元のアミノ酸配列に対して、1個、2個、または数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入、および/または付加されたアミノ酸配列からなる候補配列を作成する段階;
(b)(a)で作成した候補配列の中からCDCA1以外のいかなる公知のヒト遺伝子産物とも有意な相同性(配列同一性)を有さない候補配列を選択する段階;
(c)(b)で選択した候補配列からなるペプチドと、APCとを接触させる段階;
(d)(c)のAPCとCD8陽性T細胞とを接触させる段階;および
(e)元のアミノ酸配列からなるペプチドよりも同等かまたはより高いCTL誘導能を有するペプチドを選択する段階。
[22]がんに対する免疫応答を誘導するための組成物の製造における、以下の(a)~(e)からなる群より選択される少なくとも1つの有効成分の使用:
(a)[1]~[3]のいずれか一項に記載の1種類もしくは複数種のペプチド;
(b)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドを発現可能な形態でコードする1種類もしくは複数種のポリヌクレオチド;
(c)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示する抗原提示細胞(APC);
(d)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示するエキソソーム;および
(e)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドを標的とするCTL。
[23]がんの治療および/もしくは予防、ならびに/または術後のその再発の予防のための薬学的組成物の製造における、以下の(a)~(e)からなる群より選択される少なくとも1つの成分の使用:
(a)[1]~[3]のいずれか一項に記載の1種類もしくは複数種のペプチド;
(b)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドを発現可能な形態でコードする1種類もしくは複数種のポリヌクレオチド;
(c)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示する抗原提示細胞(APC);
(d)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示するエキソソーム;および
(e)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドを標的とするCTL。
[24]がんに対する免疫応答を誘導するための、以下の(a)~(e)からなる群より選択される少なくとも1つの成分の使用:
(a)[1]~[3]のいずれか一項に記載の1種類もしくは複数種のペプチド;
(b)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドを発現可能な形態でコードする1種類もしくは複数種のポリヌクレオチド;
(c)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示する抗原提示細胞(APC);
(d)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示するエキソソーム;および
(e)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドを標的とするCTL。
[25]がんを治療および/もしくは予防する、ならびに/または術後のその再発を予防するための、以下の(a)~(e)からなる群より選択される少なくとも1つの成分の使用:
(a)[1]~[3]のいずれか一項に記載の1種類もしくは複数種のペプチド;
(b)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドを発現可能な形態でコードする1種類もしくは複数種のポリヌクレオチド;
(c)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示する抗原提示細胞(APC);
(d)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示するエキソソーム;および
(e)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドを標的とするCTL。
[26]以下の(a)~(e)からなる群より選択される少なくとも1つの成分を対象に投与する段階を含む、CDCA1を発現する細胞に対する細胞傷害活性を誘導する方法:
(a)[1]~[3]のいずれか一項に記載の1種類もしくは複数種のペプチド;
(b)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドを発現可能な形態でコードする1種類もしくは複数種のポリヌクレオチド;
(c)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示する抗原提示細胞(APC);
(d)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示するエキソソーム;および
(e)[1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドを標的とするCTL。
[27][1]~[3]のいずれか一項に記載の1種類もしくは複数種のペプチドを含む凍結乾燥製剤。
[28][1]~[3]のいずれか一項に記載の1種類もしくは複数種のペプチドを水溶性の担体に溶解し、ろ過滅菌することを含む方法で調製された、薬学的組成物。
[29][1]~[3]のいずれか一項に記載の1種類もしくは複数種のペプチドと水溶性の担体とを含む水溶液であって、ろ過滅菌された水溶液。
[30][1]~[3]のいずれか一項に記載の1種類もしくは複数種のペプチド、水溶性の担体、および油性アジュバントを含むエマルション。
[31][5]~[11]のいずれか一項に記載の組成物が収容されている容器、およびアジュバントが収容されている容器を含むキット。
[32][1]~[3]のいずれか一項に記載のペプチドを含む凍結乾燥製剤が収納されている容器、アジュバントが収納されている容器、および凍結乾燥製剤のための再溶解液が収納されている容器を含むキット。
なお、本明細書において引用された全ての先行技術文献は、参照として本明細書に組み入れられる。
材料および方法
細胞株
HLA-AおよびHLA-B陰性ヒトBリンパ芽球様細胞株であるC1R、ならびにアフリカミドリザル腎細胞株であるCOS7は、ATCCから購入した。
HLA-A*1101を安定的に発現するC1R(C1R-A11)は、刺激細胞として使用された。HLA-A*1101のオープンリーディングフレームをコードするcDNAはPCRで増幅され、発現ベクターへクローニングされた。C1R細胞は発現ベクターで形質転換され、その後、G418(Invitrogen)を用いて2週間選択された。G418選択細胞はG418が添加された培養培地を含む96ウェルプレートのウェルへ蒔かれ、さらに30日培養された。外来性HLA-A*1101のC1R細胞における発現はフローサイトメトリー解析で確認された。
HLA-A*1101分子に結合するCDCA1由来の9merおよび10merのペプチドを、結合予測サーバー「NetMHC 3.2」(www.cbs.dtu.dk/services/NetMHC/) (Buus et al., Tissue Antigens. 2003 Nov, 62(5):378-84; Nielsen et al., Protein Sci. 2003 May, 12(5):1007-17, Bioinformatics. 2004 Jun 12:20(9):1388-97)を用いて予測した。
これらのペプチドは、Biosynthesis(Lewisville,Texas)により、標準的な固相合成法に従って合成し、逆相高速液体クロマトグラフィー(HPLC)によって精製した。該ペプチドの純度(>90%)および同一性は、それぞれ分析用HPLCおよび質量分析によって分析した。ペプチドはジメチルスルホキシドに20mg/mlで溶解し、-80℃で保存した。
単球由来の樹状細胞(DC)を抗原提示細胞として使用し、ヒト白血球抗原(HLA)上に提示されたペプチドに対する細胞傷害性Tリンパ球(CTL)応答を誘導した。他所に記載されているように、DCはインビトロで作製した(Nakahara S et al.,Cancer Res 2003,63(14):4112-8)。具体的には、Ficoll-Paque plus(Pharmacia)溶液によって健常なボランティア(HLA-A*1101陽性)から単離した末梢血単核細胞を、プラスチック製の組織培養ディッシュ(Becton Dickinson)へ付着させることによって分離し、それらを単球画分として濃縮した。2%の加熱不活化した自己血清(AS)を含むAIM-V培地(Invitrogen)中、1000 IU/mlの顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(R&D System)および1000 IU/mlのインターロイキン(IL)-4(R&D System)の存在下で、単球が濃縮された集団を培養した。7日間の培養後、サイトカインで誘導したDCに、AIM-V培地中で37℃で3時間、3μg/mlのβ2-ミクログロブリンの存在下で20μg/mlの各合成ペプチドをパルスした。作製された細胞は、自身の細胞表面上にCD80、CD83、CD86、およびHLAクラスIIなどのDC関連分子を発現しているようであった(データは示さず)。次いで、ペプチドパルスしたこれらのDCをX線照射(20Gy)によって不活化し、CD8 Positive Isolation Kit(Dynal)を用いた陽性選択によって得られた自己CD8+T細胞と1:20の比率で混合した。これらの培養物を48ウェルプレート(Corning)中に播種した。各ウェルは、0.5mlのAIM-V/2%AS培地中に、1.5 x 104個のペプチドパルスしたDC、3 x 105個のCD8+T細胞および10ng/mlのIL-7(R&D System)を含むようにした。3日後、これらの培養物に、IL-2(CHIRON)を最終濃度20IU/mlまで添加した。7日目および14日目に、ペプチドパルスした自己DCでT細胞をさらに刺激した。DCは上記と同一の方法によって毎回調製した。21日目に、3回目のペプチド刺激後、ペプチドパルスしたC1R-A11細胞に対してCTLをヒト インターフェロン(IFN)-γ 酵素結合免疫スポット(ELISPOT)アッセイにて試験した(Tanaka H et al., Br J Cancer 2001, 84(1): 94-9; Umano Y et al., Br J Cancer 2001, 84(8): 1052-7; Uchida N et al., Clin Cancer Res 2004, 10(24): 8577-86; Suda T et al., Cancer Sci 2006, 97(5): 411-9; Watanabe T et al., Cancer Sci 2005, 96(8): 498-506)。
Riddellら(Walter EA et al., N Engl J Med 1995, 333(16): 1038-44; Riddell SR et al., Nat Med 1996, 2(2): 216-23)によって記載されている方法と類似の方法を使用して、CTLを培養下で増殖させた。CTLを、5 x 106個細胞/フラスコのマイトマイシンCによって処理された2種類のヒトBリンパ芽球様細胞株、および40ng/mlの抗CD3抗体とともに、総量25mlの5%AS含有AIM-V(AIM-V/5%AS)培地中で共培養した。培養開始1日後に、120IU/mlのIL-2を該培養物に添加した。5、8および11日目に、30IU/mlのIL-2を含む新鮮なAIM-V/5%AS培地を、該培養物に添加した(Tanaka H et al., Br J Cancer 2001, 84(1): 94-9; Umano Y et al., Br J Cancer 2001, 84(8): 1052-7, Uchida N et al., Clin Cancer Res 2004, 10(24): 8577-86; Suda T et al., Cancer Sci 2006, 97(5): 411-9, Watanabe T et al., Cancer Sci 2005, 96(8): 498-506)。
96丸底マイクロタイタープレート(Nalge Nunc International)においてCTL 0.3個、1個、および3個細胞/ウェルとなるように、希釈を行った。CTLを、1 x 104個細胞/ウェルのマイトマイシンCによって処理された2種類のヒトBリンパ芽球様細胞株、30ng/mlの抗CD3抗体、および125IU/mlのIL-2とともに、総量150μl/ウェルのAIM-V/5%AS培地中で培養した。10日後、50μl/ウェルのIL-2を、IL-2の最終濃度が125IU/mlに達するように該培地に添加した。14日目にCTL活性を試験し、上記と同一の方法を使用してCTLクローンを増殖させた(Uchida N et al., Clin Cancer Res 2004, 10(24): 8577-86; Suda T et al., Cancer Sci 2006, 97(5): 411-9; Watanabe T et al., Cancer Sci 2005, 96(8)): 498-506)。
特異的CTL活性を調べるために、IFN-γ ELISPOTアッセイおよびIFN-γ酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)を実施した。具体的には、ペプチドパルスしたC1R‐A11(1 x 104個細胞/ウェル)を刺激細胞として調製した。誘導したCTL、すなわちCTL株およびCTLクローンを応答細胞として使用した。IFN-γ ELISPOTアッセイおよびIFN-γ ELISAは、製造業者の手順に従って実施した。
標的遺伝子またはHLA-A*1101のオープンリーディングフレームをコードするcDNAをPCRによって増幅した。PCR増幅産物を発現ベクターにクローニングした。製造業者の推奨する手順に従ってリポフェクタミン2000(Invitrogen)を使用して、標的遺伝子およびHLAの陰性細胞株であるCOS7に標的遺伝子の発現ベクターおよびHLA-A*1101の発現ベクターのいずれかまたは両方をトランスフェクトした。トランスフェクションから2日後、トランスフェクトした細胞をベルセン(Invitrogen)を用いて回収し、CTL活性アッセイのための標的細胞(5 x 104個細胞/ウェル)として使用した。
CDCA1由来のHLA-A * 1101結合ペプチドの予測
表1aおよび表1bは、HLA-A*1101への結合が予測されたCDCA1由来の9merペプチドおよび10merペプチドを結合親和性の高い順に示す。HLA-A*1101結合能を有する可能性のある合計58種のペプチドを、エピトープペプチドを決定するために選択し、調べた。
CDCA1由来のペプチドに対するCTLを、「材料および方法」に記載したプロトコールに従って作製した。IFN-γ ELISPOTアッセイによって、ペプチド特異的なCTL活性を測定した(図1)。CDCA1-A11-9-123(配列番号:3)を用いたウェル番号#7(a)、CDCA1-A11-9-105(配列番号:5)を用いたウェル番号#8(b)、CDCA1-A11-9-419(配列番号:6)を用いたウェル番号#1(c)、CDCA1-A11-9-219(配列番号:7)を用いたウェル番号#4(d)、CDCA1-A11-9-439(配列番号:9)を用いたウェル番号#2(e)、CDCA1-A11-9-343(配列番号:10)を用いたウェル番号#2(f)、CDCA1-A11-9-21(配列番号:12)を用いたウェル番号#8(g)、CDCA1-A11-9-157(配列番号:13)を用いたウェル番号#3(h)、CDCA1-A11-9-244(配列番号:14)を用いたウェル番号#7(i)、CDCA1-A11-9-213(配列番号:17)を用いたウェル番号#6(j)、CDCA1-A11-9-335(配列番号:19)を用いたウェル番号#7(k)、CDCA1-A11-9-25(配列番号:21)を用いたウェル番号#4(l)、CDCA1-A11-10-339(配列番号:30)を用いたウェル番号#3(m)、CDCA1-A11-10-452(配列番号:35)を用いたウェル番号#2(n)、CDCA1-A11-10-400(配列番号:38)を用いたウェル番号#7(o)、CDCA1-A11-10-289(配列番号:39)を用いたウェル番号#6(p)、CDCA1-A11-10-203(配列番号:40)を用いたウェル番号#5(q)、CDCA1-A11-10-156(配列番号:45)を用いたウェル番号#2(r)、CDCA1-A11-10-340(配列番号:53)を用いたウェル番号#2(s)、CDCA1-A11-10-106(配列番号:56)を用いたウェル番号#4(t)およびCDCA1-A11-10-358(配列番号:58)を用いたウェル番号#2(u)におけるCTLは、対照ウェルと比較して強力なIFN-γ産生を示した。一方、表1aおよび表1bに示される他のペプチドは、HLA-A*1101との結合活性を有する可能性があるにもかかわらず、それらのペプチドでの刺激によっては、特異的なCTL活性が測定されなかった。典型的な陰性データの例であるが、CDCA1-A11-10-391(配列番号:33)で刺激したCTLからは特異的IFN-γ産生が観察されなかった(v)。結果としてCDCA1に由来する21種のペプチドが、強力なCTLを誘導することができるペプチドとして選択されることが示された。
IFN-γ ELISPOTアッセイにてペプチド特異的CTL活性を示したCDCA1-A11-9-123(配列番号:3)を用いたウェル番号#7(a)、CDCA1-A11-9-105(配列番号:5)を用いたウェル番号#8(b)、CDCA1-A11-9-419(配列番号:6)を用いたウェル番号#1(c)、CDCA1-A11-9-219(配列番号:7)を用いたウェル番号#4(d)、CDCA1-A11-9-439(配列番号:9)を用いたウェル番号#4(e)、CDCA1-A11-9-157(配列番号:13)を用いたウェル番号#3(f)、CDCA1-A11-9-25(配列番号:21)を用いたウェル番号#4(g)、CDCA1-A11-10-339(配列番号:30)を用いたウェル番号#3(h)、CDCA1-A11-10-358(配列番号:58)を用いたウェル番号#2(i)におけるCTLを増殖させ、CTL株を樹立した。これらのCTL株のCTL活性をIFN-γ ELISAによって測定した(図2)。これらのCTL株は、ペプチドをパルスしなかった標的細胞と比較して、対応するペプチドをパルスした標的細胞に対して強力なIFN-γ産生を示した。さらに、上記の「材料および方法」の章に記載された通りCTL株から限界希釈によってCTLクローンを樹立し、ペプチドをパルスしたC1R-A11に対するCTLクローンからのIFN-γ産生をIFN-γ ELISAによって測定した。CDCA1-A11-9-105(配列番号:5)(a)、CDCA1-A11-9-419(配列番号:6)(b)およびCDCA1-A11-9-219(配列番号:7)(c)で刺激したCTLクローンから強力なIFN-γ産生が観察された(図3)。
CDCA1-A11-9-219(配列番号:7)に対して樹立されたCTLクローンを、CDCA1およびHLA-A*1101分子を発現する標的細胞を認識する能力に関して調べた。全長CDCA1およびHLA-A*1101遺伝子の両方をトランスフェクトしたCOS7細胞(CDCA1およびHLA-A*1101遺伝子を発現する標的細胞の特異的モデル)を標的細胞として調製した。全長CDCA1またはHLA-A*1101のいずれかをトランスフェクトしたCOS7細胞を対照として調製した。CDCA1-A11-9-219(配列番号:7)で刺激したCTLクローンが、CDCA1およびHLA-A*1101の両方を発現するCOS7細胞に対して強力なCTL活性を示した(図4)。一方、対照細胞に対して有意な特異的CTL活性は検出されなかった。これらのデータにより、CDCA1-A11-9-219(配列番号:7)が、CDCA1の内因的プロセシングにより生じるペプチドであり、かつHLA-A*1101分子とともに標的細胞上に提示されてCTLによって認識されることが明確に実証された。これらの結果は、CDCA1-A11-9-219(配列番号:7)が、CDCA1を発現するがんを有する患者に対するがんワクチンとして適している可能性を示している。
CDCA1-A11-9-123(配列番号:3)、CDCA1-A11-9-105(配列番号:5)、CDCA1-A11-9-419(配列番号:6)、CDCA1-A11-9-219(配列番号:7)、CDCA1-A11-9-439(配列番号:9)、CDCA1-A11-9-343(配列番号:10)、CDCA1-A11-9-21(配列番号:12)、CDCA1-A11-9-157(配列番号:13)、CDCA1-A11-9-244(配列番号:14)、CDCA1-A11-9-213(配列番号:17)、CDCA1-A11-9-335(配列番号:19)、CDCA1-A11-9-25(配列番号:21)、CDCA1-A11-10-339(配列番号:30)CDCA1-A11-10-452(配列番号:35)、CDCA1-A11-10-400(配列番号:38)、CDCA1-A11-10-289(配列番号:39)、CDCA1-A11-10-203(配列番号:40)、CDCA1-A11-10-156(配列番号:45)、CDCA1-A11-10-340(配列番号:53)、CDCA1-A11-10-106(配列番号:56)およびCDCA1-A11-10-358(配列番号:58)で刺激したCTLは、有意かつ特異的なCTLの活性を示した。これらの結果は、CDCA1-A11-9-123(配列番号:3)、CDCA1-A11-9-105(配列番号:5)、CDCA1-A11-9-419(配列番号:6)、CDCA1-A11-9-219(配列番号:7)、CDCA1-A11-9-439(配列番号:9)、CDCA1-A11-9-343(配列番号:10)、CDCA1-A11-9-21(配列番号:12)、CDCA1-A11-9-157(配列番号:13)、CDCA1-A11-9-244(配列番号:14)、CDCA1-A11-9-213(配列番号:17)、CDCA1-A11-9-335(配列番号:19)、CDCA1-A11-9-25(配列番号:21)CDCA1-A11-10-339(配列番号:30)、CDCA1-A11-10-452(配列番号:35)、CDCA1-A11-10-400(配列番号:38)、CDCA1-A11-10-289(配列番号:39)、CDCA1-A11-10-203(配列番号:40)、CDCA1-A11-10-156(配列番号:45)、CDCA1-A11-10-340(配列番号:53)、CDCA1-A11-10-106(配列番号:56)およびCDCA1-A11-10-358(配列番号:58)の配列が、ヒト免疫系を感作することが知られている他の分子に由来するペプチドと相同であるという事実に起因する可能性がある。この可能性を排除するために、BLASTアルゴリズム(blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)を用いて、これらのペプチドの配列をクエリーとして相同性解析を行った。その結果、CDCA1-A11-9-123(配列番号:3)、CDCA1-A11-9-105(配列番号:5)、CDCA1-A11-9-419(配列番号:6)、CDCA1-A11-9-219(配列番号:7)、CDCA1-A11-9-439(配列番号:9)、CDCA1-A11-9-343(配列番号:10)、CDCA1-A11-9-21(配列番号:12)、CDCA1-A11-9-157(配列番号:13)、CDCA1-A11-9-244(配列番号:14)、CDCA1-A11-9-213(配列番号:17)、CDCA1-A11-9-335(配列番号:19)、CDCA1-A11-9-25(配列番号:21)CDCA1-A11-10-339(配列番号:30)、CDCA1-A11-10-452(配列番号:35)、CDCA1-A11-10-400(配列番号:38)、CDCA1-A11-10-289(配列番号:39)、CDCA1-A11-10-203(配列番号:40)、CDCA1-A11-10-156(配列番号:45)、CDCA1-A11-10-340(配列番号:53)、CDCA1-A11-10-106(配列番号:56)およびCDCA1-A11-10-358(配列番号:58)の配列に対して有意な相同性を有する配列は認められなかった。したがって、本発明者らの知る限りでは、これらのペプチドが、他の関連のない分子に対して意図しない免疫応答を引き起こす可能性はほとんどないと考えられる。結論として、CDCA1由来の新規HLA-A11拘束性エピトープペプチドが同定された。さらに、CDCA1由来のエピトープペプチドは、がん免疫療法に適用し得ることが示された。
材料および方法
細胞株
HLA-AおよびHLA-B陰性ヒトBリンパ芽球様細胞株であるC1R、ならびにアフリカミドリザル腎細胞株であるCOS7は、ATCCから購入した。
HLA-A*3303を安定的に発現するC1R(C1R-A33)は、刺激細胞として使用された。HLA-A*3303のオープンリーディングフレームをコードするcDNAはPCRで増幅され、発現ベクターへクローニングされた。C1R細胞は発現ベクターで形質転換され、その後、G418(Invitrogen)を用いて2週間選択された。G418選択細胞はG418が添加された培養培地を含む96ウェルプレートのウェルへ蒔かれ、さらに30日培養された。外来性HLA-A*3303のC1R細胞における発現はフローサイトメトリー解析で確認された。
HLA-A*3303分子に結合するCDCA1由来の9merおよび10merのペプチドを、結合予測サーバー「NetMHC pan2.8」(www.cbs.dtu.dk/services/NetMHCpan/) (Nielsen et al., PLoS One. 2007;29;2(8):e796; Hoof et al., Immunogenetics. 2009;61(1): 1-13)を用いて予測した。
ペプチドは、Biosynthesis(Lewisville,Texas)により、標準的な固相合成法に従って合成し、逆相高速液体クロマトグラフィー(HPLC)によって精製した。該ペプチドの純度(>90%)および同一性は、それぞれ分析用HPLCおよび質量分析によって分析した。ペプチドはジメチルスルホキシドに20mg/mlで溶解し、-80℃で保存した。
単球由来の樹状細胞(DC)を抗原提示細胞として使用し、ヒト白血球抗原(HLA)上に提示されたペプチドに対する細胞傷害性Tリンパ球(CTL)応答を誘導した。他所に記載されているように、DCはインビトロで作製した(Nakahara S et al.,Cancer Res 2003,63(14):4112-8)。具体的には、Ficoll-Paque plus (Pharmacia)溶液によって健常なボランティア(HLA-A*3303陽性)から単離した末梢血単核細胞を、プラスチック製の組織培養ディッシュ(Becton Dickinson)へ付着させることによって分離し、それらを単球画分として濃縮した。2%の加熱不活化した自己血清(AS)を含むAIM-V培地(Invitrogen)中、1000 IU/mlの顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(R&D System)および1000 IU/mlのインターロイキン(IL)-4(R&D System)の存在下で、単球が濃縮された集団を培養した。7日間の培養後、サイトカインで誘導したDCに、AIM-V培地中で37℃で3時間、3μg/mlのβ2-ミクログロブリンの存在下で20μg/mlの各合成ペプチドをパルスした。作製された細胞は、自身の細胞表面上にCD80、CD83、CD86、およびHLAクラスIIなどのDC関連分子を発現しているようであった(データは示さず)。次いで、ペプチドパルスしたこれらのDCをX線照射(20Gy)によって不活化し、CD8 Positive Isolation Kit(Dynal)を用いた陽性選択によって得られた自己CD8+T細胞と1:20の比率で混合した。これらの培養物を48ウェルプレート(Corning)中に播種した。各ウェルは、0.5mlのAIM-V/2%AS培地中に、1.5 x 104個のペプチドパルスしたDC、3 x 105個のCD8+T細胞および10ng/mlのIL-7(R&D System)を含むようにした。3日後、これらの培養物に、IL-2(CHIRON)を最終濃度20IU/mlまで添加した。7日目および14日目に、ペプチドパルスした自己DCでT細胞をさらに刺激した。DCは上記と同一の方法によって毎回調製した。21日目に、3回目のペプチド刺激後、ペプチドパルスしたC1R-A33細胞に対してCTLをヒト インターフェロン(IFN)-γ 酵素結合免疫スポット(ELISPOT)アッセイにて試験した(Tanaka H et al., Br J Cancer 2001, 84(1): 94-9; Umano Y et al., Br J Cancer 2001, 84(8): 1052-7; Uchida N et al., Clin Cancer Res 2004, 10(24): 8577-86; Suda T et al., Cancer Sci 2006, 97(5): 411-9; Watanabe T et al., Cancer Sci 2005, 96(8): 498-506)。
Riddellら(Walter EA et al., N Engl J Med 1995, 333(16): 1038-44; Riddell SR et al., Nat Med 1996, 2(2): 216-23)によって記載されている方法と類似の方法を使用して、CTLを培養下で増殖させた。CTLを、5 x 106個細胞/フラスコのマイトマイシンCによって処理された2種類のヒトBリンパ芽球様細胞株、および40ng/mlの抗CD3抗体とともに総量25mlの5%AS含有AIM-V(AIM-V/5%AS)培地中で共培養した。培養開始1日後に、120IU/mlのIL-2を該培養物に添加した。5、8および11日目に、30IU/mlのIL-2を含む新鮮なAIM-V/5%AS培地を、該培養物に添加した(Tanaka H et al., Br J Cancer 2001, 84(1): 94-9; Umano Y et al., Br J Cancer 2001, 84(8): 1052-7, Uchida N et al., Clin Cancer Res 2004, 10(24): 8577-86; Suda T et al., Cancer Sci 2006, 97(5): 411-9, Watanabe T et al., Cancer Sci 2005, 96(8): 498-506)。
96丸底マイクロタイタープレート(Nalge Nunc International)においてCTL 0.3個、1個、および3個細胞/ウェルとなるように、希釈を行った。CTLを、1 x 104個細胞/ウェルのマイトマイシンCによって処理された2種類のヒトBリンパ芽球様細胞株、30ng/mlの抗CD3抗体、および125IU/mlのIL-2とともに、総量150μl/ウェルのAIM-V/5%AS培地中で培養した。10日後、50μl/ウェルのIL-2を、IL-2の最終濃度が125IU/mlに達するように該培地に添加した。14日目にCTL活性を試験し、上記と同一の方法を使用してCTLクローンを増殖させた(Uchida N et al., Clin Cancer Res 2004, 10(24): 8577-86; Suda T et al., Cancer Sci 2006, 97(5): 411-9; Watanabe T et al., Cancer Sci 2005, 96(8)): 498-506)。
特異的CTL活性を調べるために、IFN-γ ELISPOTアッセイおよびIFN-γ酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)を実施した。具体的には、ペプチドパルスしたC1R‐A33(1 x 104個細胞/ウェル)を刺激細胞として調製した。誘導したCTL、すなわちCTL株およびCTLクローンを応答細胞として使用した。IFN-γ ELISPOTアッセイおよびIFN-γ ELISAは、製造業者の手順に従って実施した。
標的遺伝子またはHLA-A*3303のオープンリーディングフレームをコードするcDNAをPCRによって増幅した。PCR増幅産物を発現ベクターにクローニングした。製造業者の推奨する手順に従ってリポフェクタミン2000(Invitrogen)を使用して、標的遺伝子およびHLAの陰性細胞株であるCOS7に標的遺伝子の発現ベクターおよびHLA-A*3303の発現ベクターのいずれかまたは両方をトランスフェクトした。トランスフェクションから2日後、トランスフェクトした細胞をベルセン(Invitrogen)を用いて回収し、CTL活性アッセイのための標的細胞(5 x 104個細胞/ウェル)として使用した。
CDCA1由来のHLA-A * 3303結合ペプチドの予測
表2aおよび表2bは、HLA-A*3303への結合が予測されたCDCA1由来の9merペプチドおよび10merペプチドを結合親和性の高い順に示す。HLA-A*3303結合能を有する可能性のある合計32種のペプチドを、エピトープペプチドを決定するために選択し、調べた。
CDCA1由来のペプチドに対するCTLを、「材料および方法」に記載したプロトコールに従って作製した。IFN-γ ELISPOTアッセイによって、ペプチド特異的なCTL活性を測定した(図5)。CDCA1-A33-9-43(配列番号:27)を用いたウェル番号#2(a)、CDCA1-A33-9-123(配列番号:3)を用いたウェル番号#1(b)、CDCA1-A33-9-108(配列番号:60)を用いたウェル番号#3(c)、CDCA1-A33-9-261(配列番号:28)を用いたウェル番号#2(d)、CDCA1-A33-9-105(配列番号:5)を用いたウェル番号#6(e)、CDCA1-A33-10-10(配列番号:67)を用いたウェル番号#8(f)およびCDCA1-A33-10-260(配列番号:69)を用いたウェル番号#5(g)におけるCTLは、対象と比較して強力なIFN-γ産生を示した。一方、表2aおよび表2bに示される他のペプチドは、HLA-A*3303との結合活性を有する可能性があるにもかかわらず、それらのペプチドでの刺激によっては、特異的なCTL活性が測定されなかった。典型的な陰性データの例ではあるが、CDCA1-A33-10-122(配列番号:68)で刺激したCTLからは特異的IFN-γ産生が観察されなかった(h)。結果としてCDCA1に由来する7種のペプチドを、強力なCTLを誘導することができるペプチドとして選択した。
IFN-γ ELISPOTアッセイにおいてペプチド特異的CTL活性を示したCDCA1-A33-9-43(配列番号:27)を用いたウェル番号#2(a)、CDCA1-A33-9-123(配列番号:3)を用いたウェル番号#1(b)、CDCA1-A33-10-10(配列番号:67)を用いたウェル番号#8(c)およびCDCA1-A33-10-260(配列番号:69)を用いたウェル番号#5(d)におけるCTLを増殖させ、CTL株を樹立した。これらのCTL株のCTL活性をIFN-γ ELISAによって測定した(図6)。これらのCTL株は、ペプチドをパルスしなかった標的細胞と比較して、対応するペプチドをパルスした標的細胞に対して強力なIFN-γ産生を示した。さらに、上記の「材料および方法」の章に記載された通りCTL株から限界希釈によってCTLクローンを樹立し、ペプチドをパルスしたC1R-A33に対するCTLクローンからのIFN-γ産生をIFN-γ ELISAによって測定した。CDCA1-A33-9-43(配列番号:27)(a)、およびCDCA1-A33-9-123(配列番号:3)(b)で刺激したCTLクローンから強力なIFN-γ産生が観察された(図7)。
CDCA1-A33-9-43(配列番号:27)に対して樹立されたCTLクローンを、CDCA1およびHLA-A*3303分子を発現する標的細胞を認識する能力に関して調べた。全長CDCA1およびHLA-A*3303遺伝子の両方をトランスフェクトしたCOS7細胞(CDCA1およびHLA-A*3303遺伝子を発現する標的細胞の特異的モデル)を標的細胞として調製した。全長CDCA1またはHLA-A*3303のいずれかをトランスフェクトしたCOS7細胞を対照として調製した。CDCA1-A33-9-43(配列番号:27)で刺激したCTLクローンが、CDCA1およびHLA-A*3303の両方を発現するCOS7細胞に対して強力なCTL活性を示した(図8)。一方、対照細胞に対して有意な特異的CTL活性は検出されなかった。これらのデータにより、CDCA1-A33-9-43(配列番号:27)が、CDCA1の内因的プロセシングにより生じるペプチドであり、かつHLA-A*3303分子とともに標的細胞上に提示されてCTLによって認識されることが明確に実証される。これらの結果は、CDCA1-A33-9-43(配列番号:27)が、CDCA1を発現するがんを有する患者に対するがんワクチンとして適している可能性を示している。
CDCA1-A33-9-43(配列番号:27)、CDCA1-A33-9-123(配列番号:3)、CDCA1-A33-9-108(配列番号:60)、CDCA1-A33-9-261(配列番号:28)、CDCA1-A33-9-105(配列番号:5)、CDCA1-A33-10-10(配列番号:67)およびCDCA1-A33-10-260(配列番号:69)の配列が、ヒト免疫系を感作することが知られている他の分子に由来するペプチドと相同であるという事実に起因する可能性がある。この可能性を排除するために、BLASTアルゴリズム(blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)を用いて、これらのペプチドの配列をクエリーとして相同性解析を行った。その結果、CDCA1-A33-9-43(配列番号:27)、CDCA1-A33-9-123(配列番号:3)、CDCA1-A33-9-108(配列番号:60)、CDCA1-A33-9-261(配列番号:28)、CDCA1-A33-9-105(配列番号:5)、CDCA1-A33-10-10(配列番号:67)およびCDCA1-A33-10-260(配列番号:69)の配列に対して有意な相同性を有する配列は認められなかった。したがって、本発明者らの知る限りでは、これらのペプチドが、他の関連のない分子に対して意図しない免疫応答を引き起こす可能性はほとんどないと考えられる。結論として、CDCA1由来の新規HLA-A33拘束性エピトープペプチドが同定された。さらに、CDCA1由来のエピトープペプチドはがん免疫療法に適用し得ることが示された。
材料および方法
細胞株
HLA-AおよびHLA-B陰性ヒトBリンパ芽球様細胞株であるC1R、ならびにアフリカミドリザル腎細胞株であるCOS7は、ATCCから購入した。
HLA-A*0301を安定的に発現するC1R(C1R-A03)は、刺激細胞として使用された。HLA-A*0301のオープンリーディングフレームをコードするcDNAはPCRで増幅され、発現ベクターへクローニングされた。C1R細胞は発現ベクターで形質転換され、その後、G418(Invitrogen)を用いて2週間選択された。G418選択細胞はG418が添加された培養培地を含む96ウェルプレートのウェルへ蒔かれ、さらに30日培養された。外来性HLA-A*0301のC1R細胞における発現はフローサイトメトリー解析で確認された。
HLA-A*0301分子に結合するCDCA1由来の9merおよび10merのペプチドを、結合予測サーバー「NetMHC 3.2」(www.cbs.dtu.dk/services/NetMHC/) (Buus et al., Tissue Antigens. 2003 Nov, 62(5):378-84; Nielsen et al., Protein Sci. 2003 May, 12(5):1007-17, Bioinformatics. 2004 Jun 12:20(9):1388-97)を用いて予測した。
ペプチドは、Biosynthesis(Lewisville,Texas)により、標準的な固相合成法に従って合成し、逆相高速液体クロマトグラフィー(HPLC)によって精製した。該ペプチドの純度(>90%)および同一性は、それぞれ分析用HPLCおよび質量分析によって分析した。ペプチドはジメチルスルホキシドに20mg/mlで溶解し、-80℃で保存した。
単球由来の樹状細胞(DC)を抗原提示細胞として使用し、ヒト白血球抗原(HLA)上に提示されたペプチドに対する細胞傷害性Tリンパ球(CTL)応答を誘導した。他所に記載されているように、DCはインビトロで作製した(Nakahara S et al.,Cancer Res 2003,63(14):4112-8)。具体的には、Ficoll-Paque plus (Pharmacia)溶液によって健常なボランティア(HLA-A*0301陽性)から単離した末梢血単核細胞を、プラスチック製の組織培養ディッシュ(Becton Dickinson)へ付着させることによって分離し、それらを単球画分として濃縮した。2%の加熱不活化した自己血清(AS)を含むAIM-V培地(Invitrogen)中、1000 IU/mlの顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(R&D System)および1000 IU/mlのインターロイキン(IL)-4(R&D System)の存在下で、単球が濃縮された集団を培養した。7日間の培養後、サイトカインで誘導したDCに、AIM-V培地中で37℃で3時間、3μg/mlのβ2-ミクログロブリンの存在下で20μg/mlの各合成ペプチドをパルスした。作製された細胞は、自身の細胞表面上にCD80、CD83、CD86、およびHLAクラスIIなどのDC関連分子を発現しているようであった(データは示さず)。次いで、ペプチドパルスしたこれらのDCをX線照射(20Gy)によって不活化し、CD8 Positive Isolation Kit(Dynal)を用いた陽性選択によって得られた自己CD8+T細胞と1:20の比率で混合した。これらの培養物を48ウェルプレート(Corning)中に播種した。各ウェルは、0.5mlのAIM-V/2%AS培地中に、1.5 x 104個のペプチドパルスしたDC、3 x 105個のCD8+T細胞および10ng/mlのIL-7(R&D System)を含むようにした。3日後、これらの培養物に、IL-2(CHIRON)を最終濃度20IU/mlまで添加した。7日目および14日目に、ペプチドパルスした自己DCでT細胞をさらに刺激した。DCは上記と同一の方法によって毎回調製した。21日目に、3回目のペプチド刺激後、ペプチドパルスしたC1R-A03に対してCTLをヒト インターフェロン(IFN)-γ 酵素結合免疫スポット(ELISPOT)アッセイにて試験した(Tanaka H et al., Br J Cancer 2001, 84(1): 94-9; Umano Y et al., Br J Cancer 2001, 84(8): 1052-7; Uchida N et al., Clin Cancer Res 2004, 10(24): 8577-86; Suda T et al., Cancer Sci 2006, 97(5): 411-9; Watanabe T et al., Cancer Sci 2005, 96(8): 498-506)。
Riddellら(Walter EA et al., N Engl J Med 1995, 333(16): 1038-44; Riddell SR et al., Nat Med 1996, 2(2): 216-23)によって記載されている方法と類似の方法を使用して、CTLを培養下で増殖させた。CTLを、5 x 106個細胞/フラスコのマイトマイシンCによって処理された2種類のヒトBリンパ芽球様細胞株、および40ng/mlの抗CD3抗体とともに、総量25mlの5%AS含有AIM-V(AIM-V/5%AS)培地中で共培養した。培養開始1日後に、120IU/mlのIL-2を該培養物に添加した。5、8および11日目に、30IU/mlのIL-2を含む新鮮なAIM-V/5%AS培地を、該培養物に添加した(Tanaka H et al., Br J Cancer 2001, 84(1): 94-9; Umano Y et al., Br J Cancer 2001, 84(8): 1052-7, Uchida N et al., Clin Cancer Res 2004, 10(24): 8577-86; Suda T et al., Cancer Sci 2006, 97(5): 411-9, Watanabe T et al., Cancer Sci 2005, 96(8): 498-506)。
96丸底マイクロタイタープレート(Nalge Nunc International)においてCTL 0.3個、1個、および3個細胞/ウェルとなるように、希釈を行った。CTLを、1 x 104個細胞/ウェルのマイトマイシンCによって処理された2種類のヒトBリンパ芽球様細胞株、30ng/mlの抗CD3抗体、および125IU/mlのIL-2とともに、総量150μl/ウェルのAIM-V/5%AS培地中で培養した。10日後、50μl/ウェルのIL-2を、IL-2の最終濃度が125IU/mlに達するように該培地に添加した。14日目にCTL活性を試験し、上記と同一の方法を使用してCTLクローンを増殖させた(Uchida N et al., Clin Cancer Res 2004, 10(24): 8577-86; Suda T et al., Cancer Sci 2006, 97(5): 411-9; Watanabe T et al., Cancer Sci 2005, 96(8)): 498-506)。
特異的CTL活性を調べるために、IFN-γ ELISPOTアッセイおよびIFN-γ酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)を実施した。具体的には、ペプチドパルスしたC1R‐A03(1 x 104個細胞/ウェル)を刺激細胞として調製した。誘導したCTL、すなわちCTL株およびCTLクローンを応答細胞として使用した。IFN-γ ELISPOTアッセイおよびIFN-γ ELISAは、製造業者の手順に従って実施した。
標的遺伝子またはHLA-A*0301のオープンリーディングフレームをコードするcDNAをPCRによって増幅した。PCR増幅産物を発現ベクターにクローニングした。製造業者の推奨する手順に従ってリポフェクタミン2000(Invitrogen)を使用して、標的遺伝子およびHLAの陰性細胞株であるCOS7に標的遺伝子の発現ベクターおよびHLA-A*0301の発現ベクターのいずれかまたは両方をトランスフェクトした。トランスフェクションから2日後、トランスフェクトした細胞をベルセン(Invitrogen)を用いて回収し、CTL活性アッセイのための標的細胞(5 x 104個細胞/ウェル)として使用した。
CDCA1由来のHLA-A * 0301結合ペプチドの予測
表3aおよび表3bは、HLA-A*0301への結合が予測されたCDCA1由来の9merペプチドおよび10merペプチドを結合親和性の高い順に示す。HLA-A*0301結合能を有する可能性のある合計24種のペプチドを、エピトープペプチドを決定するために選択し、調べた。
CDCA1由来のペプチドに対するCTLを、「材料および方法」に記載したプロトコールに従って作製した。IFN-γ ELISPOTアッセイによって、ペプチド特異的なCTL活性を測定した(図9)。CDCA1-A03-9-219(配列番号:7)を用いたウェル番号#3(a)、CDCA1-A03-10-400(配列番号:38)を用いたウェル番号#1(b)およびCDCA1-A03-10-257(配列番号:47)を用いたウェル番号#2(c)におけるCTLは、対照と比較して強力なIFN-γ産生を示した。一方、表3aおよび表3bに示される他のペプチドは、HLA-A*0301との結合活性を有する可能性があるにもかかわらず、それらのペプチドでの刺激によっては、特異的なCTL活性が測定されなかった。典型的な陰性データの例であるが、CDCA1-A03-9-343(配列番号:10)で刺激したCTLからは特異的IFN-γ産生が観察されなかった(d)。結果として、CDCA1に由来する3種のペプチドを、強力なCTLを誘導することができるペプチドとして選択した。
IFN-γ ELISPOTアッセイにてペプチド特異的CTL活性を示したCDCA1-A03-9-219(配列番号:7)を用いたウェル番号#3(a)、CDCA1-A03-10-400(配列番号:38)を用いたウェル番号#1(b)およびCDCA1-A03-10-257(配列番号:47)を用いたウェル番号#2(c)におけるCTLを増殖させ、CTL株を樹立した。これらのCTL株のCTL活性をIFN-γ ELISAによって測定した(図10)。これらのCTL株は、ペプチドをパルスしなかった標的細胞と比較して、対応するペプチドをパルスした標的細胞に対して強力なIFN-γ産生を示した。さらに、上記の「材料および方法」の章に記載された通りCTL株から限界希釈によってCTLクローンを樹立し、ペプチドをパルスしたC1R-A03に対するCTLクローンからのIFN-γ産生をIFN-γ ELISAによって測定した。CDCA1-A03-9-219(配列番号:7)(a)、CDCA1-A03-10-400(配列番号:38)(b)およびCDCA1-A03-10-257(配列番号:47)(c)で刺激したCTLクローンから強力なIFN-γ産生が観察された(図11)。
CDCA1-A03-9-219(配列番号:7)(a)およびCDCA1-A03-10-400(配列番号:38)(b)に対して樹立されたCTLクローンを、CDCA1およびHLA-A*0301分子を発現する標的細胞を認識する能力に関して調べた。全長CDCA1およびHLA-A*0301遺伝子の両方をトランスフェクトしたCOS7細胞(CDCA1およびHLA-A*0301遺伝子を発現する標的細胞の特異的モデル)を標的細胞として調製した。全長CDCA1またはHLA-A*0301のいずれかをトランスフェクトしたCOS7細胞を対照として調製した。CDCA1-A03-9-219(配列番号:7)(a)およびCDCA1-A03-10-400(配列番号:38)(b)で刺激したCTLクローンが、CDCA1およびHLA-A*0301の両方を発現するCOS7細胞に対して強力なCTL活性を示した(図12)。一方、対照細胞に対して有意な特異的CTL活性は検出されなかった。これらのデータにより、CDCA1-A03-9-219(配列番号:7)およびCDCA1-A03-10-400(配列番号:38)が、CDCA1の内因的プロセシングにより生じるペプチドであり、かつHLA-A*0301分子とともに標的細胞上に提示されてCTLによって認識されることが明確に実証される。これらの結果は、CDCA1-A03-9-219(配列番号:7)およびCDCA1-A03-10-400(配列番号:38)が、CDCA1を発現するがんを有する患者に対するがんワクチンとして適している可能性を示している。
CDCA1-A03-9-219(配列番号:7)、CDCA1-A03-10-400(配列番号:38)およびCDCA1-A03-10-257(配列番号:47)で刺激したCTLは、有意かつ特異的なCTL活性を示した。この結果は、CDCA1-A03-9-219(配列番号:7)、CDCA1-A03-10-400(配列番号:38)およびCDCA1-A03-10-257(配列番号:47)の配列が、ヒト免疫系を感作することが知られている他の分子に由来するペプチドと相同であるという事実に起因する可能性がある。この可能性を排除するために、BLASTアルゴリズム(blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)を用いて、これらのペプチドの配列をクエリーとして相同性解析を行った。その結果、CDCA1-A03-9-219(配列番号:7)、CDCA1-A03-10-400(配列番号:38)およびCDCA1-A03-10-257(配列番号:47)の配列に対して有意な相同性を有する配列は認められなかった。したがって、本発明者らの知る限りでは、これらのペプチドが、他の関連のない分子に対して意図しない免疫応答を引き起こす可能性はほとんどないと考えられる。結論として、本発明者は、CDCA1由来の新規HLA-A03拘束性エピトープペプチドが同定された。さらに、CDCA1由来のエピトープペプチドは、がん免疫療法に適用し得ることが示された。
エマルション製剤の調製
ペプチドを注射用水または滅菌生理食塩水に1.0~10.0mg/mlとなるように溶解し、シリンジに採取する。これを注射用水または生理食塩水と等量のIFAを充填したシリンジとコネクタにより連結し、連結した2本のシリンジのシリンジプランジャを交互に押圧することによって撹拌する。数分間撹拌した後、ドロップテスト法により、エマルションの完成を評価する。ドロップテスト法は、撹拌したサンプル1滴を水面上に滴下することによって行うことができる。水面上に滴下したサンプルが直ちに水中に拡散しない場合にはエマルション完成と評価し、ただちに水中に拡散する場合にはエマルション未完成と評価する。エマルション未完成と評価された場合には、さらに撹拌を行ってエマルションを完成させる。完成したエマルションは、皮下注射により、がん患者に投与することができる。投与対象のがん患者としては、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、胆管細胞がん、慢性骨髄性白血病(CML)、食道がん、胃がん、非小細胞肺がん、リンパ腫、骨肉腫、前立腺がん、腎がん、小細胞肺がん、頭頸部がん、軟部組織腫瘍、または大腸がん等に罹患している患者を選択することができる。
ペプチドを注射用水に1.0~10.0mg/mlとなるように溶解し、ろ過滅菌を行う。これを滅菌バイアルに充填し、滅菌したゴム栓を半打栓する。このバイアルを凍結乾燥した後、全打栓およびアルミキャップの巻き締めを行うことにより、凍結乾燥製剤を作成する。使用の際には、バイアルに注射用水または滅菌生理食塩水を注入して凍結乾燥粉末を再溶解する。シリンジを用いてバイアル中の再溶解液を採取し、採取した再溶解液と等量のIFAを充填したシリンジとコネクタにより連結する。連結した2本のシリンジのシリンジプランジャを交互に押圧することによって撹拌する。数分間撹拌した後、ドロップテスト法により、エマルションの完成を評価する。完成したエマルションは、皮下注射により、がん患者に投与することができる。投与対象のがん患者としては、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、胆管細胞がん、慢性骨髄性白血病(CML)、食道がん、胃がん、非小細胞肺がん、リンパ腫、骨肉腫、前立腺がん、腎がん、小細胞肺がん、頭頸部がん、軟部組織腫瘍、または大腸がん等に罹患している患者を選択することができる。
Claims (16)
- 配列番号:38のアミノ酸配列からなるペプチド。
- 配列番号:38のアミノ酸配列に対して以下の(a)~(b)からなる群より選択される1または2個の置換がされたアミノ酸配列からなる細胞傷害性T細胞(CTL)誘導能を有するペプチド:
(a)N末端から2番目のアミノ酸が、ロイシン、メチオニン、バリン、アラニン、セリンおよびスレオニンからなる群より選択されるアミノ酸に置換されている;および
(b)C末端のアミノ酸が、アルギニン、チロシンおよびフェニルアラニンからなる群より選択されるアミノ酸に置換されている。 - 請求項1または2に記載のペプチドをコードする、ポリヌクレオチド。
- 薬学的に許容される担体と、以下の(a)~(e)からなる群より選択される少なくとも1つの成分とを含む組成物:
(a)請求項1または2に記載の1種類もしくは複数種のペプチド;
(b)請求項1または2に記載のペプチドを発現可能な形態でコードする1種類もしくは複数種のポリヌクレオチド;
(c)請求項1または2に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示する抗原提示細胞(APC);
(d)請求項1または2に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示するエキソソーム;および
(e)請求項1または2に記載のペプチドを標的とするCTL。 - 前記成分が以下の(a)~(d)からなる群より選択される少なくとも1つの成分であり、CTLを誘導するための組成物である、請求項4に記載の組成物:
(a)請求項1または2に記載の1種類もしくは複数種のペプチド;
(b)請求項1または2に記載のペプチドを発現可能な形態でコードする1種類もしくは複数種のポリヌクレオチド;
(c)請求項1または2に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示する抗原提示細胞(APC);および
(d)請求項1または2に記載のペプチドとHLA抗原との複合体を自身の細胞表面上に提示するエキソソーム。 - 薬学的組成物である、請求項4に記載の組成物。
- (i)がんの治療、(ii)がんの予防、および(iii)がんの術後の再発の予防からなる群より選択される1以上の用途のための、請求項6に記載の組成物。
- がんに対する免疫応答を誘導するための、請求項6に記載の組成物。
- がんが、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、胆管細胞がん、慢性骨髄性白血病(CML)、食道がん、胃がん、非小細胞肺がん、リンパ腫、骨肉腫、前立腺がん、腎がん、小細胞肺がん、頭頸部がん、軟部組織腫瘍、および大腸がんからなる群より選択される、請求項7または8に記載の組成物。
- HLA-A03が陽性である対象への投与のために製剤化される、請求項4~9のいずれか一項に記載の組成物。
- 以下からなる群より選択される段階を含む、CTL誘導能を有するAPCをインビトロで誘導する方法:
(a)APCを、請求項1または2に記載の1種類もしくは複数種のペプチドとインビトロで接触させる段階;および
(b)請求項1または2に記載のペプチドをコードするポリヌクレオチドをAPCに導入する段階。 - 以下からなる群より選択される段階を含む、CTLをインビトロで誘導する方法:
(a)CD8陽性T細胞を、HLA抗原と請求項1または2に記載のペプチドとの複合体を自身の表面上に提示するAPCと共培養する段階;
(b)CD8陽性T細胞を、HLA抗原と請求項1または2に記載のペプチドとの複合体を自身の表面上に提示するエキソソームと共培養する段階;および
(c)細胞表面上にHLA抗原により提示された請求項1または2に記載のペプチドに結合し得るT細胞受容体(TCR)の各サブユニットをコードするポリヌクレオチドをCD8陽性T細胞に導入する段階。 - HLA抗原と請求項1または2に記載のペプチドとの複合体を自身の表面上に提示するAPC。
- 請求項1または2に記載のペプチドを標的とするCTL。
- CTL誘導能を有するペプチドをスクリーニングする方法であって、以下の段階を含む方法:
(a)配列番号:38のアミノ酸配列からなる元のアミノ酸配列に対して、1個、または2個のアミノ酸残基が置換されたアミノ酸配列からなる候補配列を作成する段階;
(b)(a)で作成した候補配列の中からCDCA1以外のいかなる公知のヒト遺伝子産物とも有意な相同性(配列同一性)を有さない候補配列を選択する段階;
(c)(b)で選択した候補配列からなるペプチドと、HLA-A03を発現しているAPCとを接触させる段階;
(d)(c)のAPCとCD8陽性T細胞とを接触させる段階;および
(e)元のアミノ酸配列からなるペプチドよりも同等かまたはより高いCTL誘導能を有するペプチドを選択する段階。 - 請求項1または2に記載の1種類もしくは複数種のペプチド、水溶性の担体、および油性アジュバントを含むエマルション。
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Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2009025117A1 (ja) | 2007-08-20 | 2009-02-26 | Oncotherapy Science, Inc. | Cdca1ペプチド及びこれを含む薬剤 |
WO2009153992A1 (en) | 2008-06-19 | 2009-12-23 | Oncotherapy Science, Inc. | Cdca1 epitope peptides and vaccines containing the same |
WO2010037395A2 (en) | 2008-10-01 | 2010-04-08 | Dako Denmark A/S | Mhc multimers in cancer vaccines and immune monitoring |
WO2014010229A1 (en) | 2012-07-10 | 2014-01-16 | Oncotherapy Science, Inc. | Cdca1 epitope peptides for th1 cells and vaccines containing the same |
Family Cites Families (32)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4722848A (en) | 1982-12-08 | 1988-02-02 | Health Research, Incorporated | Method for immunizing animals with synthetically modified vaccinia virus |
GB8823869D0 (en) | 1988-10-12 | 1988-11-16 | Medical Res Council | Production of antibodies |
US5703055A (en) | 1989-03-21 | 1997-12-30 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery |
US6150584A (en) | 1990-01-12 | 2000-11-21 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
US5625126A (en) | 1990-08-29 | 1997-04-29 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
US5633425A (en) | 1990-08-29 | 1997-05-27 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
EP0814159B1 (en) | 1990-08-29 | 2005-07-27 | GenPharm International, Inc. | Transgenic mice capable of producing heterologous antibodies |
US5661016A (en) | 1990-08-29 | 1997-08-26 | Genpharm International Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes |
US5545806A (en) | 1990-08-29 | 1996-08-13 | Genpharm International, Inc. | Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
US5804566A (en) | 1993-08-26 | 1998-09-08 | The Regents Of The University Of California | Methods and devices for immunizing a host through administration of naked polynucleotides with encode allergenic peptides |
US5679647A (en) | 1993-08-26 | 1997-10-21 | The Regents Of The University Of California | Methods and devices for immunizing a host against tumor-associated antigens through administration of naked polynucleotides which encode tumor-associated antigenic peptides |
US5739118A (en) | 1994-04-01 | 1998-04-14 | Apollon, Inc. | Compositions and methods for delivery of genetic material |
US5736524A (en) | 1994-11-14 | 1998-04-07 | Merck & Co.,. Inc. | Polynucleotide tuberculosis vaccine |
US5922687A (en) | 1995-05-04 | 1999-07-13 | Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Intracellular delivery of nucleic acids using pressure |
US5853719A (en) | 1996-04-30 | 1998-12-29 | Duke University | Methods for treating cancers and pathogen infections using antigen-presenting cells loaded with RNA |
CA2262006A1 (en) | 1996-07-26 | 1998-02-05 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Method and reagents for genetic immunization |
FR2766205B1 (fr) | 1997-07-16 | 2002-08-30 | Inst Nat Sante Rech Med | Nouveau procede de sensibilisation de cellules presentatrices d'antigene et nouveaux moyens pour la mise en oeuvre du procede |
ATE236930T1 (de) * | 1997-08-25 | 2003-04-15 | Suntory Ltd | Wespe pompilid neuropeptide |
ES2294844T3 (es) | 1998-06-25 | 2008-04-01 | Green Peptide Co., Ltd. | Peptidos antigenicos tumorales derivados de ciclofilina b. |
ES2747357T3 (es) | 2001-03-14 | 2020-03-10 | Dako Denmark As | Construcciones de moléculas MHC y sus usos para el diagnóstico y terapia |
WO2005029067A2 (en) | 2003-09-24 | 2005-03-31 | Oncotherapy Science, Inc. | Method of diagnosing breast cancer |
EP2184609A3 (en) | 2004-03-24 | 2010-08-04 | Oncotherapy Science, Inc. | Compositions and methods for treating lung cancer |
WO2006031221A1 (en) | 2004-09-13 | 2006-03-23 | Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Compositions comprising t cell receptors and methods of use thereof |
EP2311983A1 (en) | 2005-02-10 | 2011-04-20 | Oncotherapy Science, Inc. | Method of treating bladder cancer using siRNA |
EP2295602B1 (en) | 2005-07-27 | 2012-07-11 | Oncotherapy Science, Inc. | Method of prognosing cancers |
CN101283106A (zh) | 2005-07-27 | 2008-10-08 | 肿瘤疗法科学股份有限公司 | 小细胞肺癌的诊断方法 |
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WO2007032255A1 (ja) | 2005-09-13 | 2007-03-22 | Mie University | T細胞レセプター及び該レセプターをコードする核酸 |
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WO2009153992A1 (en) | 2008-06-19 | 2009-12-23 | Oncotherapy Science, Inc. | Cdca1 epitope peptides and vaccines containing the same |
WO2010037395A2 (en) | 2008-10-01 | 2010-04-08 | Dako Denmark A/S | Mhc multimers in cancer vaccines and immune monitoring |
WO2014010229A1 (en) | 2012-07-10 | 2014-01-16 | Oncotherapy Science, Inc. | Cdca1 epitope peptides for th1 cells and vaccines containing the same |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
Hum. Immunol., 2001, Vol.62, No.9, pp.1009-1030 |
Immunogenetics, 1999, Vol.50, pp.201-212 |
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