WO2020001415A1 - 作为trk抑制剂的杂环化合物 - Google Patents

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WO2020001415A1
WO2020001415A1 PCT/CN2019/092653 CN2019092653W WO2020001415A1 WO 2020001415 A1 WO2020001415 A1 WO 2020001415A1 CN 2019092653 W CN2019092653 W CN 2019092653W WO 2020001415 A1 WO2020001415 A1 WO 2020001415A1
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hydrogen
halogen
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孔祥龙
周超
郑之祥
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北京诺诚健华医药科技有限公司
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    • C07B2200/07—Optical isomers

Definitions

  • the present invention relates to compounds, pharmaceutical compositions containing them, and their use as TRK inhibitors. More specifically, the present invention provides novel compounds as TRK inhibitors, pharmaceutical compositions containing such compounds, and methods of using the compounds to treat or prevent related diseases mediated by TRK, such as tumors. The invention also relates to a method for preparing the compounds described below.
  • TRK Tropomyosin receptor receptor kinase
  • TRK A, B, and C which are encoded by NTRK1, NTRK2, and NTRK3, respectively.
  • neurotrophic factors and TRK proteins leads to receptor dimerization, phosphorylation and activation of downstream signaling pathways, including Ras / MAPK, PI3K / AKT, and PLC ⁇ pathways, thereby regulating cell proliferation, differentiation, metabolism, and apoptosis (BrönGM , Minturn JE, Ho R, et al. Clinical Research (2009, 15, 3244-50).
  • Genomics analysis of kinase fusion confirms the presence of NTRK gene fusions in a variety of cancers: for example, glioma, hepatobiliary liver cancer, papillary thyroid cancer, colon cancer, non-small cell lung cancer, head and neck squamous cell carcinoma, pancreatic cancer , Sarcoma and melanoma (Khotskaya, YBet. Pharmacology & Therapeutics, 2017, 173, 58-66).
  • TRK inhibitors can treat various tumors of NTRK fusion protein, which has huge potential and broad market prospects. 38 (76%) patients treated with the TRK inhibitor larotrectinib (LOXO-101) in early clinical trials achieved objective remission.
  • NTRK mutations such as the mutations of NTRK1, G595R and G667C (Russo, M. et al Cancer Discovery, 2016, 6 (1), 36-44). Therefore, it is necessary to develop a TRK inhibitor that has high activity, small side effects, and is effective for TRK mutations.
  • An object of the present invention is to provide a compound represented by formula I, an isomer, a prodrug, a solvate, a stable isotope derivative thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, which can be used as a TRK inhibitor.
  • L 1 is selected from -NR 6 C (O)-, -NR 6 CON (R 7 )-, -NR 6 S (O) m- , and -NR 6 S (O) m N (R 7 )-, where NR 6 is connected to the nitrogen-containing heteroaryl substituted with R 1 , R 2 , R 3 , preferably, L 1 is selected from -NR 6 C (O)-and -NR 6 CON (R 7 )-, where NR 6 is connected to the nitrogen-containing heteroaryl substituted with R 1 , R 2 , and R 3 ; L 1 is most preferably selected from NR 6 CON (R 7 )-, wherein NR 6 is connected to the substituted R 1 , R 2 , R 3 substituted nitrogen-containing heteroaryl linkage;
  • L 2 is selected from C1-C8 alkylene, C2-C8 alkenylene, C2-C8 alkynylene, and C3-C8 cycloalkylene, wherein the alkylene, alkenylene, alkynylene, and cycloalkylene may be optionally substituted with one or more of G1, L 2 is preferably selected from optionally substituted with one or more of G1 and C1-C6 alkylene C2-C6 alkenylene group, L 2 is more preferably selected from optionally C1-C4 alkylene substituted with one or more G1;
  • L 3 is selected from chemical single bonds, -O- and -N (R x )-, L 3 is preferably selected from chemical single bonds and -O-, and L 3 is most preferably selected from -O-;
  • R 1 , R 2 , and R 3 are each independently selected from hydrogen, halogen, cyano, C1-C8 alkyl, C3-C8 ring group, 3-8 membered heterocyclic group, aryl group, heteroaryl group, aldehyde group,- NR 8 R 9 , -C (O) R 10 , carboxyl, alkenyl, alkynyl, -OR 10 , -OC (O) NR 8 R 9 , -C (O) OR 10 , -C (O) NR 8 R 9 , -NR 11 C (O) R 10 , -NR 11 C (O) NR 8 R 9 , -S (O) mR 10 , -NR 11 S (O) mR 10 , -SR 10 , -S ( O) mNR 8 R 9 and -NR 11 S (O) mNR 8 R 9 , wherein the alkyl, cyclic, heterocyclic, aryl or hetero
  • R 4 is selected from hydrogen, halogen, cyano, C1-C8 alkyl, C3-C8 ring, 3-8 membered heterocyclyl, aryl, heteroaryl, aldehyde, -C (O) R 10 , carboxyl , Alkenyl, alkynyl, -OR 10 , -NR 8 R 9 -OC (O) NR 8 R 9 , -C (O) OR 10 , -C (O) NR 8 R 9 , -NR 8 C (O ) R 10 , -NR 10 C (O) NR 8 R 9 , -S (O) mR 10 , -NR 8 S (O) mR 10 , -SR 10 , -S (O) mNR 8 R 9 and -NR 10 S (O) mNR 8 R 9 , preferably R 4 is selected from hydrogen, halogen, more preferably R 4 is hydrogen or fluorine;
  • R 5 is selected from hydrogen, halogen, cyano, C1-C8 alkyl, C3-C8 ring, 3-8 membered heterocyclyl, aryl, heteroaryl, aldehyde, -C (O) R 10 , carboxyl , Alkenyl, alkynyl, -OR 10 , -NR 8 R 9 -OC (O) NR 8 R 9 , -C (O) OR 10 , -C (O) NR 8 R 9 , -NR 8 C (O ) R 10 , -NR 10 C (O) NR 8 R 9 , -S (O) mR 10 , -NR 8 S (O) mR 10 , -SR 10 , -S (O) mNR 8 R 9 and -NR 10 S (O) mNR 8 R 9 , preferably R 5 is selected from hydrogen, halogen, C1-C6 alkyl and C3-C6 ring group, more preferably R
  • R 6 , R 7 , and R x are each independently selected from hydrogen, C1-C8 alkyl, C1-C8 haloalkyl, heteroalkyl, C3-C8 ring, 3-8 membered monocyclic heterocyclic group, and monocyclic hetero Aryl, monocyclic aryl, alkenyl and alkynyl, preferably R 6 , R 7 , R x are each independently selected from hydrogen, C1-C6 alkyl and C1-C6 haloalkyl, and more preferably R 6 , R 7 , R x is independently selected from hydrogen, C1-C4 alkyl and C1-C4 haloalkyl; still more preferably R 6, R 7, R x is independently selected from hydrogen and C1-C4 alkyl;
  • G1 is selected from halogen, cyano, C1-C8 alkyl, C3-C8 ring group, 3-8 membered heterocyclic group, aryl group, heteroaryl group, aldehyde group, -NR 8 R 9 , -C (O) R 10 , carboxyl, alkenyl, alkynyl, -OR 10 , -OC (O) NR 8 R 9 , -C (O) OR 10 , -C (O) NR 8 R 9 , -NR 11 C (O) R 10 , -NR 11 C (O) NR 8 R 9 , -S (O) mR 10 , -NR 11 S (O) mR 10 , -SR 10 , -S (O) mNR 8 R 9 and -NR 11 S (O) mNR 8 R 9 , preferably G1 is selected from halogen, C1-C6 alkyl, -OR 10 , -NR 8 R 9
  • R 8 , R 9 , R 10 , R 11 , R 12 , R 13 , R 14 , R 15 , R 16 are each independently selected from hydrogen, C1-C8 alkyl, C1-C8 haloalkyl, heteroalkyl, C3 -C8 ring group, 3-8 membered monocyclic heterocyclic group, monocyclic heteroaryl group, monocyclic aryl group, alkenyl group and alkynyl group; R 8 and R 9 , R 13 and R 14 may form 3-7 membered Heterocyclyl
  • a compound represented by Formula I an isomer, a prodrug, a solvate, a stable isotope derivative thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof is provided, wherein:
  • L 1 is selected from -NR 6 C (O)-, -NR 6 CON (R 7 )-, -NR 6 S (O) m- , and -NR 6 S (O) m N (R 7 )-, where NR 6 is connected to the nitrogen-containing heteroaryl group substituted with R 1 , R 2 , and R 3 ;
  • L 2 is selected from the group consisting of C1-C6 alkylene, C2-C6 alkenylene, C2-C6 alkynylene, and C3-C6 cycloalkylene, wherein the alkylene, alkenylene, alkynylene, and cycloalkylene Optionally replaced by one or more G1;
  • L 3 is selected from a chemical single bond and -O-;
  • R 1 , R 2 , and R 3 are each independently selected from hydrogen, halogen, C1-C6 alkyl, C3-C6 ring group, 3-6 membered heterocyclic group, aryl group, and heteroaryl group, wherein the alkyl group, ring , Heterocyclyl, aryl or heteroaryl are optionally substituted with one or more substituents selected from the group consisting of halogen, cyano, C1-C6 alkyl, C3-C6 ring, and 3-6 membered heterocyclyl ;
  • R 4 is selected from hydrogen, halogen, -NR 8 R 9 , -OR 10 ;
  • R 5 is selected from hydrogen, halogen, C1-C6 alkyl, and C3-C6 ring group;
  • R 6 and R 7 are each independently selected from hydrogen, C1-C6 alkyl, and C1-C6 haloalkyl;
  • G1 is selected from halogen, C1-C6 alkyl, -NR 8 R 9 , -OR 10 , wherein the alkyl is optionally substituted by one or more substituents selected from halogen, -NR 11 R 12 , -OR 16 Replace
  • R 8 , R 9 , R 10 , R 11 , R 12 and R 16 are each independently selected from hydrogen, C1-C6 alkyl and C1-C6 haloalkyl;
  • a compound represented by Formula I an isomer, a prodrug, a solvate, a stable isotope derivative thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof is provided; wherein:
  • L 1 is selected from -NR 6 C (O)-and -NR 6 CON (R 7 )-, wherein NR 6 is connected to the nitrogen-containing heteroaryl group substituted with R 1 , R 2 , R 3 ;
  • L 2 is selected from the group consisting of C1-C6 alkylene, C2-C6 alkenylene, C2-C6 alkynylene, and C3-C6 cycloalkylene, wherein the alkylene, alkenylene, alkynylene, and cycloalkylene Optionally replaced by one or more G1;
  • L 3 is selected from a chemical single bond and -O-;
  • R 1 , R 2 , and R 3 are each independently selected from hydrogen, halogen, C1-C4 alkyl, C4-C6 ring group, and 4-6 membered heterocyclic group, wherein the alkyl group, ring group, and heterocyclic group are optionally Substituted with one or more substituents selected from halogen;
  • R 4 is selected from hydrogen, halogen, -NR 8 R 9 , -OR 10 ;
  • R 5 is selected from hydrogen, halogen, C1-C6 alkyl, and C3-C6 ring group;
  • R 6 and R 7 are each independently selected from hydrogen, C1-C6 alkyl, and C1-C6 haloalkyl;
  • G1 is selected from halogen, C1-C6 alkyl, -NR 8 R 9 , -OR 10 , wherein the alkyl is optionally substituted by one or more substituents selected from halogen, -NR 11 R 12 , -OR 16 Replace
  • R 8 , R 9 , R 10 , R 11 , R 12 and R 16 are each independently selected from hydrogen, C1-C6 alkyl and C1-C6 haloalkyl;
  • a compound represented by Formula I an isomer, a prodrug, a solvate, a stable isotope derivative thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof is provided; wherein:
  • L 1 is selected from -NR 6 CON (R 7 )-, wherein NR 6 is connected to the nitrogen-containing heteroaryl group substituted with R 1 , R 2 , R 3 ;
  • L 2 is selected from the group consisting of C1-C4 alkylene, C2-C4 alkenylene, C2-C4 alkynylene, and C3-C4 cycloalkylene, wherein the alkylene, alkenylene, alkynylene, and cycloalkylene Optionally replaced by one or more G1;
  • L 3 is selected from a chemical single bond and -O-;
  • R 1, R 2, R 3 are each independently selected from hydrogen, halogen and C1-C4 alkyl, wherein said alkyl is optionally substituted with one or more substituents selected from halo substituents;
  • R 4 is selected from hydrogen, halogen, -NR 8 R 9 , -OR 10 ;
  • R 5 is selected from hydrogen, halogen, C1-C6 alkyl, and C3-C6 ring group;
  • R 6 and R 7 are each independently selected from hydrogen, C1-C6 alkyl, and C1-C6 haloalkyl;
  • G1 is selected from halogen, C1-C6 alkyl, -NR 8 R 9 , -OR 10 , wherein the alkyl is optionally substituted by one or more substituents selected from halogen, -NR 11 R 12 , -OR 16 Replace
  • R 8 , R 9 , R 10 , R 11 , R 12 and R 16 are each independently selected from hydrogen, C1-C6 alkyl and C1-C6 haloalkyl;
  • a compound represented by Formula I an isomer, a prodrug, a solvate, a stable isotope derivative thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof is provided; wherein:
  • L 1 is selected from -NR 6 CON (R 7 )-, wherein NR 6 is connected to the nitrogen-containing heteroaryl group substituted with R 1 , R 2 , R 3 ;
  • L 2 is selected from C1-C4 alkylene and C2-C4 alkenylene, wherein said alkylene and alkenylene are optionally substituted by one or more G1;
  • L 3 is selected from a chemical single bond and -O-;
  • R 1, R 2, R 3 are each independently selected from hydrogen, halogen and C1-C4 alkyl, wherein said alkyl is optionally substituted with one or more substituents selected from halo substituents;
  • R 4 is selected from hydrogen, halogen, -NR 8 R 9 , -OR 10 ;
  • R 5 is selected from hydrogen, halogen, C1-C4 alkyl, and C3-C6 ring group;
  • R 6 and R 7 are each independently selected from hydrogen, C1-C4 alkyl, C1-C4 haloalkyl;
  • G1 is selected from halogen, C1-C4 alkyl, -NR 8 R 9 , -OR 10 , wherein the alkyl is optionally substituted by one or more substituents selected from halogen, -NR 11 R 12 , -OR 16 Replace
  • R 8 , R 9 , R 10 , R 11 , R 12 and R 16 are each independently selected from hydrogen, C1-C4 alkyl and C1-C4 haloalkyl;
  • a compound represented by Formula I an isomer, a prodrug, a solvate, a stable isotope derivative thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof is provided; wherein:
  • L 1 is selected from -NR 6 CON (R 7 )-, wherein NR 6 is connected to the nitrogen-containing heteroaryl group substituted with R 1 , R 2 , R 3 ;
  • L 2 is selected from C1-C4 alkylene, wherein said alkylene is optionally substituted by one or more G1;
  • L 3 is selected from -O-;
  • R 1, R 2, R 3 are each independently selected from hydrogen, halogen and C1-C4 alkyl, wherein said alkyl is optionally substituted with one or more substituents selected from halo substituents;
  • R 4 is selected from hydrogen, halogen, -NR 8 R 9 , -OR 10 ;
  • R 5 is selected from hydrogen, halogen and C1-C4 alkyl
  • R 6 and R 7 are each independently selected from hydrogen, C1-C4 alkyl, C1-C4 haloalkyl;
  • G1 is selected from halogen, C1-C4 alkyl, -NR 8 R 9 , -OR 10 , wherein the alkyl is optionally substituted by one or more substituents selected from halogen, -NR 11 R 12 , -OR 16 Replace
  • R 8 , R 9 , R 10 , R 11 , R 12 and R 16 are each independently selected from hydrogen, C1-C4 alkyl and C1-C4 haloalkyl;
  • a compound represented by Formula I an isomer, a prodrug, a solvate, a stable isotope derivative thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof is provided; wherein:
  • L 1 is selected from -NR 6 CON (R 7 )-, wherein NR 6 is connected to the nitrogen-containing heteroaryl group substituted with R 1 , R 2 , R 3 ;
  • L 2 is selected from C1-C4 alkylene, wherein said alkylene is optionally substituted by one or more G1;
  • L 3 is selected from -O-;
  • R 1 , R 2 , and R 3 are each independently selected from hydrogen and halogen;
  • R 4 is selected from hydrogen and halogen
  • R 5 is selected from hydrogen, halogen, and C1-C4 alkyl, and is located in the para position of L 3 ;
  • R 6 and R 7 are each independently selected from hydrogen and C1-C4 alkyl
  • G1 is selected from halogen, C1-C4 alkyl, wherein said alkyl is optionally substituted with one or more substituents selected from halogen, -NR 11 R 12 , -OR 16 ;
  • R 11 , R 12 and R 16 are each independently selected from hydrogen, C1-C4 alkyl and C1-C4 haloalkyl;
  • a compound represented by the general formula I an isomer, a prodrug, a solvate, a stable isotope derivative thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof is provided;
  • the compound is selected from:
  • the invention further relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a compound or an isomer thereof, a prodrug, a solvate, a stable isotope derivative, or a pharmaceutically acceptable compound thereof described in any one of the foregoing embodiments.
  • the present invention also relates to a compound or an isomer thereof, a prodrug, a solvate, a stable isotope derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to any one of the embodiments of the present invention, or a compound according to the present invention.
  • a pharmaceutical composition in the preparation of a medicament, wherein the medicament is used to treat or prevent a TRK-mediated disease, such as cancer, especially malignant hematopathy, lung cancer, breast cancer, ovarian cancer, prostate cancer, pancreatic cancer, brain glue Plasmoma.
  • the present invention also relates to a method for treating or preventing a TRK-mediated disease, such as a tumor, particularly malignant hematological disease, lung cancer, breast cancer, ovarian cancer, prostate cancer, pancreatic cancer, and glioma, which comprises administering A patient in need thereof is provided with a therapeutically effective amount of a compound or an isomer thereof, a prodrug, a solvate, a stable isotope derivative, or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to any one of the embodiments of the present invention, or the Pharmaceutical composition.
  • a TRK-mediated disease such as a tumor, particularly malignant hematological disease, lung cancer, breast cancer, ovarian cancer, prostate cancer, pancreatic cancer, and glioma
  • Another aspect of the present invention relates to a compound represented by the general formula (I), or an isomer, prodrug, solvate, stable isotope derivative, or pharmaceutically acceptable thereof, according to any one of the embodiments of the present invention.
  • Salt, or pharmaceutical composition which is used to treat or prevent TRK-mediated diseases, such as tumors, especially malignant hematological diseases, lung cancer, breast cancer, ovarian cancer, prostate cancer, pancreatic cancer, glioma.
  • Another aspect of the present invention relates to a compound represented by general formula (I) or a tautomer, meso, Racemates, enantiomers, diastereomers, mixtures thereof, and pharmaceutically acceptable salts thereof.
  • Typical compounds of the invention include, but are not limited to:
  • the compound represented by general formula (I) of the present invention is a TRK inhibitor. Therefore, the compound represented by general formula (I) of the present invention can be used to treat or prevent TRK-mediated diseases, such as tumors, especially malignant hematopathy, lung cancer, and breast cancer. , Ovarian cancer, prostate cancer, pancreatic cancer, glioma.
  • the present invention further relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising the compound represented by the general formula (I) or an isomer thereof, a prodrug, a solvate, a stable isotope derivative, or a pharmacy thereof according to the present invention.
  • Another aspect of the present invention relates to a compound represented by the general formula (I) or an isomer thereof, a prodrug, a solvate, a stable isotope derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or the pharmaceutical composition described above.
  • a TRK-mediated disease such as a tumor, especially malignant hematological disease, lung cancer, breast cancer, ovarian cancer, prostate cancer, pancreatic cancer, and glioma.
  • Another aspect of the present invention relates to a compound represented by the general formula (I) or a tautomer, meso, racemate, enantiomer, diastereomer, a mixture form thereof, And a pharmaceutically acceptable salt thereof, or the use of the pharmaceutical composition in the manufacture of a medicament for treating and / or preventing tumors.
  • the medicament may be any pharmaceutical dosage form, including but not limited to tablets, capsules, solutions, lyophilized preparations, injections.
  • the pharmaceutical preparation of the present invention may be administered in the form of a dosage unit containing a predetermined amount of an active ingredient per dosage unit.
  • a dosage unit may contain, for example, 0.5 mg to 1 g, preferably 1 mg to 700 mg, particularly preferably 5 mg to 300 mg of a compound of the present invention, or a drug depending on the condition to be treated, the method of administration and the age, weight and condition of the patient.
  • the formulation may be administered in the form of a dosage unit containing a predetermined amount of the active ingredient per dosage unit.
  • Preferred dosage unit formulations are those containing the daily or divided dose or active fraction thereof as indicated above.
  • this type of pharmaceutical preparation can be prepared using methods known in the pharmaceutical art.
  • the pharmaceutical formulations of the present invention may be suitable for administration by any desired suitable method, such as by oral (including oral or sublingual), rectal, nasal, topical (including oral, sublingual or transdermal), vaginal or parenteral (Including subcutaneous, intramuscular, intravenous or intradermal) methods.
  • suitable methods such as by oral (including oral or sublingual), rectal, nasal, topical (including oral, sublingual or transdermal), vaginal or parenteral (Including subcutaneous, intramuscular, intravenous or intradermal) methods.
  • Such formulations can be prepared using all methods known in the pharmaceutical art, for example, by combining the active ingredient with one or more excipients or one or more adjuvants.
  • the present invention also relates to a method for treating or preventing a TRK-mediated disease, such as a tumor, particularly malignant hematological disease, lung cancer, breast cancer, ovarian cancer, prostate cancer, pancreatic cancer, and glioma, which comprises administering
  • a patient in need thereof has a therapeutically effective amount of a compound of the present invention, or an isomer thereof, a prodrug, a solvate, a stable isotope derivative or a pharmaceutically acceptable salt, or a pharmaceutical composition of the present invention.
  • Another aspect of the present invention relates to a compound represented by the general formula (I), or an isomer thereof, a prodrug, a solvate, a stable isotope derivative or a pharmaceutically acceptable salt, or a pharmaceutical composition,
  • TRK-mediated diseases such as tumors, especially malignant hematological diseases, lung cancer, breast cancer, ovarian cancer, prostate cancer, pancreatic cancer, and gliomas.
  • Another aspect of the present invention relates to a compound represented by general formula (I) or a tautomer, meso, racemate, enantiomer, Diastereomers, mixtures thereof, and pharmaceutically acceptable salts thereof.
  • the present invention also provides a method for preparing the compound.
  • R 1 , R 2 , and R 3 are each independently selected from hydrogen, halogen, and C1-C4 alkyl;
  • R 4 is selected from hydrogen, halogen, -NR 8 R 9 , -OR 10 ;
  • R 5 is selected from hydrogen, halogen, C1-C4 alkyl, and C3-C6 ring group;
  • R 17 is selected from hydrogen, C1-C4 alkyl
  • L 2 is independently selected from C1-C4 alkylene, wherein the alkylene is optionally substituted with one or more halogen, C1-C4 alkyl, -OR 10 , -NR 8 R 9 , wherein The alkyl group is optionally substituted with one or more substituents selected from halogen, -NR 11 R 12 , -OR 16 ;
  • R 8 , R 9 , R 10 , R 11 , R 12 and R 16 are each independently selected from hydrogen, C1-C4 alkyl and C1-C4 haloalkyl;
  • substitution reaction is performed in a solvent such as n-butanol or N, N-dimethylacetamide, and N, N-diisopropylethylamine or 1,8-diazabicycloundec-7-ene is added ( DBU), etc., under 60-80 ° C - microwave or oil bath heating conditions; the reaction gives compound (II);
  • LG 1 is a halogen such as Cl, Br, I or a leaving group such as OTf, OTs, OMs.
  • the substitution reaction is performed in a solvent such as acetonitrile, and a base such as cesium carbonate is added.
  • the microwave or oil bath heating conditions are used at 50-100 ° C Proceed; the reaction gives compound (III);
  • LG 2 is a halogen such as Cl, Br, I or a leaving group such as OTf, OTs, OMs, etc.
  • the substitution reaction is performed in a solvent such as N, N-dimethylformamide, and a base such as sodium hydride is added at 0 ⁇ Carried out at 25 ° C; the reaction yields compound (IV);
  • the reduction reaction of the nitro group uses zinc powder as a reducing agent; a saturated ammonium chloride solution is added, and the reaction is performed in a solvent such as dichloromethane at 0 to 25 ° C; the reaction obtains the compound (V);
  • the deprotection reaction of tert-butoxycarbonyl group uses trifluoroacetic acid as the acid; in a solvent such as dichloromethane, the reaction is performed at 0 to 25 ° C; the reaction obtains compound (VI);
  • the reaction of diamine (VI) to urea uses N, N′-carbonyldiimidazole or N, N′-carbonylbis (1,2,4-triazole). Sometimes a base such as triethylamine is added. , N-dimethylformamide and other solvents, at 20-50 ° C room temperature or oil bath heating conditions; the reaction to obtain compound (VII).
  • Cx-Cy means the range of the number of carbon atoms, where x and y are integers, for example, a C3-C8 ring group represents a ring group having 3-8 carbon atoms, and a C0-C2 alkyl group Represents an alkyl group having 0 to 2 carbon atoms, where CO alkyl group means a chemical single bond.
  • alkyl refers to saturated aliphatic hydrocarbon groups, including straight and branched chain groups of 1 to 20 carbon atoms, which may be, for example, 1 to 18 carbon atoms, 1 to 12 carbon atoms, Linear and branched chain groups of 1 to 8 carbon atoms, 1 to 6 carbon atoms, or 1 to 4 carbon atoms.
  • Non-limiting examples include methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, tert-butyl, sec-butyl, n-pentyl, 1,1-dimethylpropyl, 1 2,2-dimethylpropyl, 2,2-dimethylpropyl, 1-ethylpropyl, 2-methylbutyl, 3-methylbutyl, n-hexyl, 1-ethyl-2- Methylpropyl, 1,1,2-trimethylpropyl, 1,1-dimethylbutyl, 1,2-dimethylbutyl, 2,2-dimethylbutyl, 1,3 -Dimethylbutyl, 2-ethylbutyl, and various branched isomers thereof.
  • Alkyl may be optionally substituted or unsubstituted.
  • alkenyl refers to a straight-chain, branched-chain hydrocarbon group containing at least one carbon-carbon double bond, which may include 2 to 20 carbon atoms, for example, may be 2 to 18 carbon atoms, 2 to 12 A straight and branched chain group of carbon atoms, 2 to 8 carbon atoms, 2 to 6 carbon atoms, or 2 to 4 carbon atoms. Among them, 1-3 carbon-carbon double bonds may be present, and preferably 1 carbon-carbon double bond is present.
  • C2-4 alkenyl refers to an alkenyl group having 2-4 carbon atoms. Including vinyl, propenyl, butenyl, buten-2-yl, 2-methylbutenyl. The alkenyl group may be substituted.
  • alkynyl refers to a straight-chain, branched-chain hydrocarbon group containing at least one carbon-carbon triple bond, which may include 2 to 20 carbon atoms, such as 2 to 18 carbon atoms, 2 to 12 Straight-chain and branched-chain groups of two carbon atoms, two to eight carbon atoms, two to six carbon atoms, or two to four carbon atoms. Among them, 1-3 carbon-carbon triple bonds may be present, and preferably 1 carbon-carbon triple bond is present.
  • C2-4 alkynyl refers to an alkynyl group having 2-4 carbon atoms. Non-limiting examples include ethynyl, propynyl, butynyl and butyn-2-yl, 3-methylbutynyl.
  • alkylene As used herein, the terms “alkylene,” “alkenylene,” and “alkynylene” refer to substituted or unsubstituted alkyl, alkenyl, and alkynyl groups having a core of two terminal monovalent groups, respectively. Produced by removing one hydrogen atom from each carbon atom of two terminal carbon atoms; said “alkylene”, “alkenylene”, “alkynylene” usually has 1-8 carbon atoms, preferably 1-6 carbon atoms, more preferably 1-4 carbon atoms.
  • alkylene include substituted or unsubstituted methylene, ethylene, propylene, butylene, etc .
  • alkenylene include substituted or unsubstituted vinylene Groups, propenylene, butenylene, etc .
  • alkynylene include substituted or unsubstituted ethynylene, propynylene, butynylene and the like;
  • cyclic group refers to a fully carbon saturated or partially unsaturated monocyclic or polycyclic cyclic hydrocarbon group, which includes 3 to 12 ring atoms, and may be, for example, 3 to 12, 3 to 10, 3 to 8 or 3 to 6 ring atoms, or may be a 3, 4, 5, 6-membered ring.
  • monocyclic ring groups include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclopentenyl, cyclohexyl, cyclohexenyl, cyclohexadienyl, cycloheptyl, cycloheptatrienyl , Cyclooctyl, etc.
  • a cyclic group may be substituted or unsubstituted.
  • cyclylene refers to a substituted or unsubstituted cyclic group having a core of two terminal monovalent groups, and the cyclic group has the definition previously described.
  • cycloalkylene include cyclopropylene, cyclobutylene, cyclopentylene, cyclopentenyl, cyclohexylene, cyclohexenyl, cyclohexadienyl, Cycloheptyl, cycloheptatrienyl, cyclooctylene and the like. Cycloylene may be substituted or unsubstituted.
  • heterocyclyl refers to a saturated or partially unsaturated monocyclic, bicyclic, or polycyclic cyclic hydrocarbon group, which includes 3 to 20 ring atoms, such as 3 to 16, 3 to 12, 3 To 10, 3 to 8 or 3 to 6 ring atoms, one or more of which are selected from heteroatoms of nitrogen, oxygen or S (O) m (where m is an integer from 0 to 2), but excluding The ring part of -OO-, -OS- or -SS-, and the remaining ring atoms are carbon.
  • the heterocyclyl ring contains 3 to 10 ring atoms, more preferably 3 to 8 ring atoms, even more preferably 3 to 6 ring atoms. Most preferably, it is a 5- or 6-membered ring, of which 1 to 4 are heteroatoms, more preferably 1 to 3 are heteroatoms, and most preferably 1 to 2 are heteroatoms.
  • monocyclic heterocyclyl include pyrrolidinyl, piperidinyl, piperazinyl, morpholinyl, thiomorpholinyl, homopiperazinyl, and the like.
  • Bicyclic and polycyclic heterocyclic groups include spiro, fused and bridged heterocyclic groups.
  • “Spiroheterocyclyl” refers to a 5- to 20-membered polycyclic heterocyclic group that shares one atom (called a spiro atom) between single rings, where one or more ring atoms are selected from nitrogen, oxygen, or S (O) m (Where m is an integer of 0 to 2) and the remaining ring atoms are carbon. These can contain one or more double bonds, but none of the rings have a completely conjugated ⁇ -electron system. It is preferably 6 to 14 yuan, and more preferably 7 to 10 yuan.
  • Spiro groups are classified into monospiroheterocyclyl, bisspiroheterocyclyl, or polyspiroheterocyclyl based on the number of spiro atoms in common between the rings, preferably monospirocyclyl and bisspirocyclyl. More preferably, it is 4 yuan / 4 yuan, 4 yuan / 5 yuan, 4 yuan / 6 yuan, 5 yuan / 5 yuan, or 5 yuan / 6 yuan single spirocyclic group.
  • Non-limiting examples of spiro groups include
  • “Fused heterocyclyl” refers to a 5- to 20-membered polycyclic heterocyclic group in which each ring in the system shares an adjacent pair of atoms with other rings in the system.
  • One or more rings may contain one or more bicyclic groups. Bond, but none of the rings have a completely conjugated ⁇ -electron system in which one or more ring atoms are selected from nitrogen, oxygen or heteroatoms of S (O) m (where m is an integer from 0 to 2), and the remaining ring atoms are carbon. It is preferably 6 to 14 yuan, and more preferably 7 to 10 yuan.
  • the number of constituent rings it can be divided into bicyclic, tricyclic, tetracyclic or polycyclic fused heterocyclic groups, preferably bicyclic or tricyclic, more preferably 5-membered / 5-membered or 5-membered / 6-membered bicyclic fused heterocyclic groups.
  • fused heterocyclyls include
  • the heterocyclyl ring may be fused to an aryl, heteroaryl or cycloyl ring, wherein the ring connected to the parent structure is a heterocyclic group, and non-limiting examples include:
  • Heterocyclyl can be optionally substituted or unsubstituted.
  • aryl refers to a full-carbon monocyclic or fused polycyclic (that is, a ring sharing adjacent pairs of carbon atoms) group containing 6 to 14 carbon ring atoms, having a conjugated pi-electron system Polycyclic (ie its ring with adjacent pairs of carbon atoms) groups.
  • Aryl may be monocyclic or polycyclic (ie, may contain more than one ring). In the case of polycyclic aromatic rings, only one ring in the polycyclic ring system is required to be an aromatic ring, and the remaining rings may be saturated, partially saturated or unsaturated rings.
  • Aryl is preferably 6 to 10 membered, such as phenyl and naphthyl, and most preferably phenyl.
  • the aryl ring may be fused to a heteroaryl, heterocyclic or cycloyl ring, wherein the ring connected to the parent structure is an aryl ring, and non-limiting examples include:
  • Aryl may be substituted or unsubstituted.
  • arylene refers to a substituted or unsubstituted aryl group having two monovalent group cores, respectively, and the definition of the aryl group is the same as described above.
  • Non-limiting examples of arylene are phenylene, naphthylene, and the like.
  • the arylene may be optionally substituted or unsubstituted.
  • heteroaryl refers to a heteroaromatic system containing 1 to 4 heteroatoms, 5 to 14 ring atoms, where heteroatoms include oxygen, sulfur, and nitrogen. Heteroaryl is preferably 5 to 10 members.
  • heteroaryl ring may be fused to an aryl, heterocyclic or cycloyl ring, wherein the ring connected to the parent structure is a heteroaryl ring, and non-limiting examples include:
  • Heteroaryl groups can be optionally substituted or unsubstituted.
  • heteroarylene refers to a substituted or unsubstituted heteroaryl group having two monovalent group cores, respectively, and the definition of heteroaryl is the same as described above.
  • Non-limiting examples of heteroarylene such as furanyl, thienylene, pyridinyl, pyrrolidinyl, N-alkylpyrrolidinyl, pyrimidinyl, pyrimidinyl, imidazolyl, tetrazole , Oxazolyl, isoxazolyl, and the like.
  • Heteroarylene may be optionally substituted or unsubstituted.
  • Halogen means fluorine, chlorine, bromine or iodine.
  • Haloalkyl refers to an alkyl substituent in which at least one hydrogen is replaced by a halogen group.
  • Typical halogen groups include chlorine, fluorine, bromine and iodine.
  • Examples of haloalkyl include fluoromethyl, fluoroethyl, chloromethyl, chloroethyl, 1-bromoethyl, difluoromethyl, trifluoromethyl, and 1,1,1-trifluoroethyl. It should be recognized that if a substituent is substituted with more than one halogen group, those halogen groups may be the same or different (unless stated otherwise).
  • Aldol refers to -CHO.
  • Carboxy means -COOH.
  • Cyano refers to -CN.
  • Heteroalkyl refers to a stable straight or branched chain hydrocarbon group consisting of a specified number of carbon atoms and at least one heteroatom selected from oxygen, nitrogen, and sulfur, wherein nitrogen and sulfur atoms can be optionally oxidized and nitrogen atoms can be Optionally, quaternization, heteroatoms of oxygen, nitrogen, and sulfur can be located at any internal position of the heteroalkyl group, or at the position where the alkyl group is connected to the rest of the molecule. Two or more heteroatoms can be independent. It can also be continuous.
  • heterocyclic group optionally substituted with alkyl group means that alkyl group may but need not exist, and this description includes the case where heterocyclic group is substituted with alkyl group and the case where heterocyclic group is not substituted with alkyl group .
  • Substituted refers to one or more hydrogen atoms in a group, preferably up to 5 and more preferably 1 to 3 hydrogen atoms independently of one another by a corresponding number of substituents. It goes without saying that the substituents are only in their possible chemical positions, and those skilled in the art can determine (by experiment or theory) possible or impossible substitutions without undue effort. For example, an amino or hydroxyl group with free hydrogen may be unstable when combined with a carbon atom having an unsaturated (eg, olefinic) bond.
  • the substituents include, but are not limited to, the aforementioned substituents.
  • “Pharmaceutical composition” means a mixture containing one or more of the compounds described herein or a physiological / pharmaceutically acceptable salt or prodrug thereof with other chemical components, and other components such as physiological / pharmaceutically acceptable carriers And excipients.
  • the purpose of the pharmaceutical composition is to promote the administration to the organism, which is beneficial to the absorption of the active ingredient and then exerts the biological activity.
  • the "room temperature” in the present invention means 15-30 ° C.
  • the compounds of the invention may also be present as isomers, prodrugs, solvates or stable isotopic derivatives thereof.
  • isomers, prodrugs, solvates or stable isotope derivatives generally have similar activities as the compounds of the present invention or their pharmaceutically acceptable salts, and are therefore also encompassed by the present invention Within the scope of protection.
  • stable isotopic derivatives include: isotopically substituted derivatives in which any hydrogen atom in formula I is replaced by 1-5 deuterium atoms, and any carbon atom in formula I is replaced by 1-3 carbons 14 An isotope-substituted derivative obtained by atom substitution or an isotope-substituted derivative obtained by replacing any oxygen atom in Formula I with 1-3 oxygen 18 atoms.
  • “Pharmaceutically acceptable salts” according to the present invention are discussed in Berge, et al., “Pharmaceutically acceptable salts", J. Pharm. Sci., 66, 1-19 (1977), and for medicinal chemists It is obvious that the salt is substantially non-toxic and can provide the required pharmacokinetic properties, palatability, absorption, distribution, metabolism or excretion.
  • the pharmaceutically acceptable salts of the present invention can be synthesized by general chemical methods.
  • the preparation of a salt can be prepared by reacting a free base or an acid with an equivalent chemical equivalent or an excess of an acid (inorganic or organic acid) or base in a suitable solvent or solvent composition.
  • prodrug in the present invention refers to a compound that is converted into the original active compound after being metabolized in the body.
  • a prodrug is an inactive substance or is less active than the active parent compound, but can provide convenient handling, administration, or improved metabolic properties.
  • the “isomer” in the present invention means that the compound of the formula (I) of the present invention may have asymmetric centers and racemates, racemic mixtures and single diastereomers. All these isomers, including Both stereoisomers and geometric isomers are included in the present invention.
  • the geometric isomers include cis-trans isomers.
  • the present invention includes any polymorphic form of the compound or its salt, as well as any hydrate or other solvate.
  • tumor includes benign and malignant tumors, such as cancer.
  • cancer includes various tumors mediated by TRK, including, but not limited to, hematological malignancies, lung cancer, breast cancer, ovarian cancer, prostate cancer, pancreatic cancer, and glioma.
  • terapéuticaally effective amount refers to an amount that includes a compound of the invention that is effective to treat or prevent a related disease mediated by TRK.
  • the structures of all compounds of the present invention can be identified by nuclear magnetic resonance ( 1 H NMR) and / or mass spectrometric detection (MS).
  • MS Low resolution mass spectrometry
  • the thin-layer silica gel board is Yantai Huanghai HSGF254 or Qingdao Ocean GF254 silica gel board.
  • Column chromatography generally uses Yantai Yellow Sea 100-200 or 200-300 mesh silica gel as the carrier.
  • Preparative liquid chromatography using Waters SQD2 mass spectrometry-oriented high pressure liquid chromatography separator, XBridge-C18; 30X 150mm preparative column, 5um; Method 1: acetonitrile-water (0.2% formic acid), flow rate 25mL / min; method 2: acetonitrile-water (0.8% ammonium bicarbonate), flow rate 25mL / min;
  • the known starting materials of the present invention can be synthesized by or in accordance with methods known in the art, or can be purchased from Acros Organics, Aldrich Chemical Company, Accela Chemical Biotech Inc. Latin Chemicals, Shanghai Myrel Chemicals, Blackwell Chemicals, Anai and Chemicals.
  • the solvents used in the reaction are anhydrous solvents.
  • anhydrous tetrahydrofuran is commercially available tetrahydrofuran
  • sodium block is used as a water removal agent
  • benzophenone is used as an indicator
  • the solution is refluxed to the solution under the protection of argon. It is blue-violet, collected by distillation, and stored at room temperature under the protection of argon.
  • Other anhydrous solvents were purchased from Analy Chemicals and Blackwell Chemical. All anhydrous solvents must be transferred and used under the protection of argon unless otherwise specified.
  • reaction is performed under an argon atmosphere or a nitrogen atmosphere.
  • An argon or nitrogen atmosphere means that a reaction flask is connected to an argon or nitrogen balloon with a volume of about 1 L.
  • the hydrogen atmosphere means that a reaction balloon is connected to a hydrogen gas balloon with a volume of about 1 L.
  • the hydrogenation reaction is usually evacuated and charged with hydrogen, and the operation is repeated 3 times.
  • reaction temperature is room temperature, and the temperature range is 15 ° C-30 ° C.
  • the monitoring of the reaction progress in the examples uses thin layer chromatography (TLC).
  • TLC thin layer chromatography
  • the developing systems used in the reaction are A: dichloromethane and methanol; B: petroleum ether and ethyl acetate.
  • the volume ratio of the solvent is based on The polarity of the compounds is adjusted.
  • the eluent system for column chromatography and the eluent system for thin-layer chromatography used to purify compounds include A: dichloromethane and methanol systems; B: petroleum ether and ethyl acetate systems. It can be adjusted by different polarities. It can also be adjusted by adding a small amount of triethylamine and acidic or alkaline reagents.
  • the target compound was 5-((2R, 4S) -2- (2-(((S)- 1-aminopropane-2-yl) oxo) -5-fluoropyridin-3-yl) -4-fluoropyrrolidin-1-yl) pyrazolo [1,5-a] pyrimidin-3-amine 1f ( 73 mg, 0.19 mmol, as a yellow oil), crude;
  • reaction solution was diluted with water (30 mL), and the mixture was extracted with dichloromethane (50 mL ⁇ 3).
  • the organic phases were combined and dried over anhydrous sodium sulfate, filtered to remove the desiccant, desolvated under reduced pressure, and purified on a silica gel column (petroleum ether: acetic acid).
  • Ethyl ester 19: 1 to 3: 2) to give the target compound (2-((5-fluoro-3-((2R, 4S) -4-fluoro-1- (3-nitropyrazolo [1,5 -a] pyrimidin-5-yl) pyrrolidin-2-yl) pyridin-2-yl) oxy) ethyl) tert-butyl carbamate 2b (0.11 g, 0.20 mmol, yellow solid), yield: 30% ;
  • Dissolve magnesium shavings (3.30g, 136.00mmol) in dry tetrahydrofuran (200mL), add diisobutylaluminum hydride (0.3mL, 1M tetrahydrofuran solution), stir at 50 ° C for 15 minutes, and then 2- (2-bromo A solution of ethyl) -1,3-dioxane (26.50 g, 60 mmol) in tetrahydrofuran (50 mL) was added dropwise to the above solution, and stirred at 50 ° C for 1 hour.
  • reaction solution was cooled to -40 ° C, and (R) -N-((5-fluoro-2-methoxypyridin-3-yl) methylene) -2-methylpropane-2-sulfinamide 4b was added dropwise. (17.50 g, 68.00 mmol) in tetrahydrofuran (50 mL), and stirred at -40 ° C for 1 hour.
  • the aqueous phase was adjusted to a pH of about 13 with a 40% aqueous sodium hydroxide solution, and extracted with dichloromethane (200 ⁇ 3).
  • the organic phase was washed with brine (100 mL), dried over anhydrous Na 2 SO 4 and filtered, and dried to obtain ( R) -5-fluoro-2-methoxy-3- (pyrrolidin-2-yl) pyridine 4d (9.00 g, bright yellow oil), yield 86%;
  • HTRF time-resolved fluorescence
  • the reaction buffer contains the following components: the kit comes with an enzyme reaction buffer (1 ⁇ ), 5mM MgCl 2 , 1mM DTT; human recombinant TRKA protein is commissioned to Tsinghua University protein purification and identification platform for expression purification, diluted with reaction buffer 3ng / ⁇ l kinase solution; substrate reaction solution includes 0.23 ⁇ M biotin-labeled tyrosine kinase substrate and 8.4 ⁇ M ATP diluted with reaction buffer; detection buffer includes 0.1ng / ⁇ l Eu3 + diluted with reaction buffer Labeled cage antibody and 14.375nM streptavidin-labeled XL665.
  • the compound was dissolved and diluted to 100 or 10 ⁇ M in 100% DMSO, and then a 4-fold serial dilution with DMSO was performed to a minimum concentration of 6.1 or 0.61 nM, and each concentration point was diluted 40-fold with a reaction buffer.
  • the IC50 value of the compound was calculated from the 8 concentration points using XLfit (ID Business Solutions Ltd., UK) software through the following formula:
  • Y is the inhibition percentage
  • X is the logarithmic value of the concentration of the test compound
  • Bottom is the maximum inhibition percentage
  • Top is the minimum inhibition percentage
  • slope factor is the slope coefficient of the curve.
  • the experimental method is outlined as follows:
  • the in vitro activity of TRKA G595R was determined by measuring the phosphorylation level of the substrate in the kinase reaction using the HTRF kinase detection kit (Cisbio, Cat. No. 62TK0PEC).
  • the reaction buffer contains the following components: the kit comes with an enzyme reaction buffer (1 ⁇ ), 5mM MgCl 2 , 1mM DTT; human recombinant TRKA G595R protein (Cat. No.
  • reaction buffer Dilute to 0.25ng / ⁇ l of kinase solution; substrate reaction solution includes 0.51 ⁇ M biotin-labeled tyrosine kinase substrate and 2.9 ⁇ M ATP diluted with reaction buffer; detection buffer includes 0.15ng diluted with reaction buffer / ⁇ l Eu3 + labeled cage antibody and 31.875nM streptavidin labeled XL665.
  • the compound was dissolved and diluted to 1 mM or 100 ⁇ M in 100% DMSO, and then a 4-fold serial dilution with DMSO was performed to a minimum concentration of 61 or 6.1 nM, and each concentration point was diluted 40-fold with a reaction buffer.
  • the ratio of 665/620 has a positive correlation with the degree of substrate phosphorylation, thereby detecting the activity of TRKA and G595R kinase.
  • the group without TRKA and G595R kinase protein was used as a negative control (100% inhibition), and the group with TRKA and G595R kinase protein but was not added as a positive control (0% inhibition).
  • the percentage inhibition of TRKA G595R activity of a compound can be calculated using the following formula:
  • Percent inhibition 100-100 * (signal value at specific concentration of test compound-negative control signal value) / (positive control signal value-negative control signal value)
  • the IC50 value of the compound was calculated from the 8 concentration points using XLfit (ID Business Solutions Ltd., UK) software through the following formula:
  • Y is the inhibition percentage
  • X is the logarithmic value of the concentration of the test compound
  • Bottom is the maximum inhibition percentage
  • Top is the minimum inhibition percentage
  • slope factor is the slope coefficient of the curve.
  • the experimental method is outlined as follows:
  • the in vitro activity of TRKA G667C was determined by detecting the level of substrate phosphorylation in the kinase reaction.
  • the reaction buffer contains the following components: the kit comes with an enzyme reaction buffer (1 ⁇ ), 5mM MgCl 2 , 1mM DTT; human recombinant TRKA G667C protein (Cat. No.
  • reaction buffer 0.09ng / ⁇ l of kinase solution
  • substrate reaction solution includes 0.21 ⁇ M biotin-labeled tyrosine kinase substrate diluted with reaction buffer and 2.7 ⁇ M ATP
  • detection buffer includes diluted with reaction buffer to 0.1ng / ⁇ l Eu3 + labeled cage antibody and 13.125nM streptavidin labeled XL665.
  • the compound was dissolved and diluted to 200 ⁇ M in 100% DMSO, and then serially diluted 4 times with DMSO to a minimum concentration of 12.2 nM, and each concentration point was diluted 40 times with reaction buffer.
  • the ratio of 665/620 has a positive correlation with the degree of substrate phosphorylation, thereby detecting the activity of TRKA G667C kinase.
  • the group without TRKA and G667C kinase protein was used as a negative control (100% inhibition), and the group with TRKA and G667C kinase protein but was not added as a positive control (0% inhibition).
  • the percentage inhibition of TRKA G667C activity of a compound can be calculated using the following formula:
  • Percent inhibition 100-100 * (signal value at specific concentration of test compound-negative control signal value) / (positive control signal value-negative control signal value)
  • the IC50 value of the compound was calculated from the 8 concentration points using XLfit (ID Business Solutions Ltd., UK) software through the following formula:
  • Y is the inhibition percentage
  • X is the logarithmic value of the concentration of the test compound
  • Bottom is the maximum inhibition percentage
  • Top is the minimum inhibition percentage
  • slope factor is the slope coefficient of the curve.
  • the effect of the compounds of the present invention on the proliferation of KM12 cells was evaluated using a luminescent cell viability test experiment.
  • the experimental method is outlined as follows:
  • the luminescence signal generated in the test is directly proportional to the number of viable cells in the culture medium To detect the cell proliferation status of KM12.
  • KM12 cells purchased from Shanghai Xinyu Biological Company were cultured in IMDM complete medium (Thermofisher, 12440053) containing 10% FBS (GBICO, 10099-141) and 100 units / mL penicillin mixed solution (Thermofisher, 15140122).
  • IMDM complete medium Thermofisher, 12440053
  • FBS GBICO, 10099-141
  • penicillin mixed solution 100 units / mL penicillin mixed solution
  • the compound was dissolved in 100% DMSO and diluted to 1 mM, followed by a 4-fold serial dilution with DMSO to a minimum concentration of 0.061 ⁇ M, and each concentration point was diluted 50-fold with IMDM medium. If the compound is very low IC 50 values, the concentration of the starting compound can be reduced. Add 3 ⁇ l of the diluted compound to each well and mix by gentle centrifugation. Among them, the medium without cells was used as a negative control (100% inhibition), and the 0.2% DMSO group was used as a positive control (0% inhibition). The 384-well plate was placed in a 37 ° C, 5% CO 2 incubator to continue incubation. After 96 hours, it was removed and placed at room temperature for 30 minutes.
  • the CTG reagent was also removed and equilibrated to room temperature. 15 ⁇ l of CTG reagent was added to each well and placed on a shaker. Gently shake for 5 minutes to ensure that the cells are fully lysed, leave for 10 minutes to stabilize the cold light signal, and then read the cold light signal with EnVision (Perkin Elmer).
  • EnVision Perkin Elmer
  • a T 0 control was set at the same time, including a blank control containing only culture medium and a control with cells added, and the difference between the two was set as a T 0 control, which was obtained by adding a CTG reagent before adding the drug.
  • the percentage of compound that inhibits KM12 cell proliferation can be calculated using the following formula:
  • Percent inhibition 100-100 * ⁇ [(signal compound -Signal negative control) -T 0 Control] / [(signal -Signal positive control negative control) -T 0 Control] ⁇
  • the compound IC 50 value was calculated from the 8 concentration points using XLfit (ID Business Solutions Ltd., UK) software through the following formula:
  • Y is the inhibition percentage
  • Bottom is the bottom plateau of the curve (the bottom plateau value of the S-shaped curve)
  • Top is the top plateau of the curve (the top plateau of the S-shaped curve)
  • X is the relative concentration of the test compound. Value.
  • the compounds of the embodiments of the present invention can effectively inhibit the activity of TRKA and TR595 kinases mutated by G595R and G667C, and can be used to treat various cancers caused by NTRK gene fusion: for example, glioma, hepatobiliary type Liver cancer, papillary thyroid cancer, colon cancer, non-small cell lung cancer, head and neck squamous cell carcinoma, pancreatic cancer, sarcoma, and melanoma (Khotskaya, YBetal. Pharmacology & Therapeutics, 2017, 173, 58-66). Some compounds can also effectively inhibit the proliferation of KM12 colon cancer cells. It has strong inhibitory effect on colon cancer caused by NTRK gene fusion.

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Abstract

本发明涉及化合物、含有其的药物组合物、以及它们的制备方法，和其作为TRK抑制剂的用途。所述化合物为式I所示的化合物，或其药学上可接受的盐、前药、溶剂化合物、多晶型体、异构体、稳定同位素衍生物。本发明还涉及所述化合物用于治疗或预防由TRK介导的相关疾病例如肿瘤的用途以及应用其治疗所述疾病的方法。

Description

作为TRK抑制剂的杂环化合物 技术领域
本发明涉及化合物、含有其的药物组合物和其作为TRK抑制剂的用途。更具体说，本发明提供了新的作为TRK抑制剂的化合物、含有这种化合物的药物组合物和应用所述化合物治疗或预防由TRK介导的相关疾病的方法，所述相关疾病例如肿瘤。本发明还涉及制备下文所描述的化合物的方法。
背景技术
TRK(Tropomyosin receptor kinase，原肌球蛋白受体激酶)是存在于多种组织中神经营养受体的酪氨酸激酶，在细胞增值和成活过程中活化多种下游过程。TRK原癌基因家族有三个成员：TRK A、B和C，分别通过NTRK1、NTRK2、NTRK3编码。神经营养因子和TRK蛋白的结合导致受体二聚化、磷酸化和下游的信号通路激活，包括Ras/MAPK、PI3K/AKT和PLCγ通路，从而调节细胞增殖、分化、代谢、凋亡(Brodeur G.M.，Minturn J.E.，Ho R，et al.Clinical Cancer Research，2009，15，3244-50)。激酶融合的基因组学分析确认NTRK基因融合出现在多种癌症中：例如胶质瘤、肝胆管型肝癌、乳头状甲状腺癌、结肠癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、胰腺癌、肉瘤和黑色素瘤(Khotskaya，Y.B.et al.Pharmacology&Therapeutics，2017，173，58-66)。研究和开发TRK抑制剂可以治疗NTRK融合蛋白的各种肿瘤，具有巨大的潜力和广阔的市场前景。在早期临床试验中用TRK抑制剂larotrectinib(LOXO-101)治疗的38名(76％)患者的病情得到客观缓解。其中6名(12％)患者病情完全缓解，用现有的手段检测不到肿瘤存在。在这些患者中，有30名患者的病情缓解时间超过一年(2017年美国临床肿瘤学会年会)。但是，持续给药出现的靶标突变使得肿瘤产生耐药性。临床上已出现NTRK突变的病例，如NTRK1 G595R和G667C的突变(Russo，M.等Cancer Discovery，2016，6(1)，36-44)。因此，有必要研发活性高，副作用小，并且对TRK突变有效的TRK抑制剂。
发明内容
本发明的目的在于提供一种可用作TRK抑制剂的如式I所示的化合物、其异构体、前药、溶剂合物、稳定的同位素衍生物或其药学上可接受的盐：
Figure PCTCN2019092653-appb-000001
其中：
L 1选自-NR 6C(O)-、-NR 6CON(R 7)-、-NR 6S(O) m-和-NR 6S(O) mN(R 7)-，其中NR 6与所述被R 1、R 2、R 3取代的含氮杂芳基连接，优选地，L 1选自-NR 6C(O)-和-NR 6CON(R 7)-，其中NR 6与所述被R 1、R 2、R 3取代的含氮杂芳基连接；L 1最优选选自NR 6CON(R 7)-，其中NR 6与所述被R 1、R 2、R 3取代的含氮杂芳基连接；
L 2选自C1-C8亚烷基、C2-C8亚烯基、C2-C8亚炔基和C3-C8亚环基，其中所述亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚环基任选可被一个或多个G1所取代，L 2优选选自任选被一个或多个G1所取代的C1-C6亚烷基和C2-C6亚烯基，L 2更优选选自任选被一个或多个G1所取代的C1-C4亚烷基；
L 3选自化学单键、-O-和-N(R x)-，L 3优选选自化学单键和-O-，L 3最优选选自-O-；
R 1、R 2、R 3各自独立选自氢、卤素、氰基、C1-C8烷基、C3-C8环基、3-8元杂环基、芳基、杂芳基、醛基、-NR 8R 9、-C(O)R 10、羧基、烯基、炔基、-OR 10、-OC(O)NR 8R 9、-C(O)OR 10、-C(O)NR 8R 9、-NR 11C(O)R 10、-NR 11C(O)NR 8R 9、-S(O)mR 10、-NR 11S(O)mR 10、-SR 10、-S(O)mNR 8R 9和-NR 11S(O)mNR 8R 9，其中所述烷基、环基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个选自卤素、氰基、C1-C8烷基、C3-C8环基、3-8元杂环基、-OR 12、-NR 13R 14、-OC(O)NR 13R 14、-C(O)OR 12、-C(O)R 12、-C(O)NR 13R 14、-NR 15C(O)R 12、-NR 15C(O)NR 13R 14、-S(O)mR 12、-NR 15S(O)mR 12、-SR 12、-S(O)mNR 13R 14和-NR 15S(O)mNR 13R 14的取代基所取代，优选R 2、R 3均为氢；更优选R 1、R 2、R 3均为氢；
R 4选自氢、卤素、氰基、C1-C8烷基、C3-C8环基、3-8元杂环基、芳基、杂芳基、醛基、-C(O)R 10、羧基、烯基、炔基、-OR 10、-NR 8R 9-OC(O)NR 8R 9、-C(O)OR 10、-C(O)NR 8R 9、-NR 8C(O)R 10、-NR 10C(O)NR 8R 9、-S(O)mR 10、-NR 8S(O)mR 10、-SR 10、-S(O)mNR 8R 9和-NR 10S(O)mNR 8R 9，优选R 4选自氢、卤素，更优选R 4为氢或氟；
R 5选自氢、卤素、氰基、C1-C8烷基、C3-C8环基、3-8元杂环基、芳基、杂芳基、醛基、-C(O)R 10、羧基、烯基、炔基、-OR 10、-NR 8R 9-OC(O)NR 8R 9、-C(O)OR 10、-C(O)NR 8R 9、-NR 8C(O)R 10、-NR 10C(O)NR 8R 9、-S(O)mR 10、-NR 8S(O)mR 10、-SR 10、-S(O)mNR 8R 9和-NR 10S(O)mNR 8R 9，优选R 5选自氢、卤素、C1-C6烷基和C3-C6环基，更优选R 5选自氢、卤素、C1-C4烷基和C3-C6环基，进一步优选R 5选自氢和卤素；最优选R 5选自氟；
R 6、R 7、R x各自独立地选自氢、C1-C8烷基、C1-C8卤代烷基、杂烷基、C3-C8环基、3-8元单环杂环基、单环杂芳基、单环芳基、烯基和炔基，优选R 6、R 7、R x各自独立地选自氢、C1-C6烷基和C1-C6卤代烷基，进一步优选R 6、R 7、R x各自独立地选自氢、C1-C4烷基和C1-C4卤代烷基；更进一步优选R 6、R 7、R x各自独立地选自氢和C1-C4烷基；
G1选自卤素、氰基、C1-C8烷基、C3-C8环基、3-8元杂环基、芳基、杂芳基、醛基、-NR 8R 9、-C(O)R 10、羧基、烯基、炔基、-OR 10、-OC(O)NR 8R 9、-C(O)OR 10、-C(O)NR 8R 9、-NR 11C(O)R 10、-NR 11C(O)NR 8R 9、-S(O)mR 10、-NR 11S(O)mR 10、-SR 10、-S(O)mNR 8R 9和-NR 11S(O)mNR 8R 9，优选G1选自卤素，C1-C6烷基，-OR 10、-NR 8R 9；更优选G1选自卤素，C1-C4烷基，-OR 10、-NR 8R 9；其中所述烷基任选被一个或多个选自卤素、-OR 16、-NR 13R 14的取代基所取代；当两个G1位于同一个碳原子上或者相邻碳原子上时，这两个G1任选与其连接的碳原子一起形成3-8元环基，优选形成3-6元环烷基，所形成的环烷基任选被一个或多个选自卤素，OR 16、-NR 13R 14的取代基所取代；
R 8、R 9、R 10、R 11、R 12、R 13、R 14、R 15、R 16各自独立地选自氢、C1-C8烷基、C1-C8卤代烷基、杂烷基、C3-C8环基、3-8元单环杂环基、单环杂芳基、单环芳基、烯基和炔基；R 8和R 9、R 13和R 14可以形成3-7元的杂环基；
且m为1或2；
其中所述化合物不包括下列化合物(1)至(7)：
Figure PCTCN2019092653-appb-000002
在本发明一个优选的实施方案中，提供如通式I所示的化合物、其异构体、前药、溶剂合物、稳定的同位素衍生物或其药学上可接受的盐，其中：
L 1选自-NR 6C(O)-、-NR 6CON(R 7)-、-NR 6S(O) m-和-NR 6S(O) mN(R 7)-，其中NR 6与所述被R 1、R 2、R 3取代的含氮杂芳基连接；
L 2选自C1-C6亚烷基、C2-C6亚烯基、C2-C6亚炔基和C3-C6亚环基，其中所述亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚环基任选可被一个或多个G1所取代；
L 3选自化学单键和-O-；
R 1、R 2、R 3各自独立选自氢、卤素、C1-C6烷基、C3-C6环基、3-6元杂环基、芳基和杂芳基，其中所述烷基、环基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个选自卤素、氰基、C1-C6烷基、C3-C6环基和3-6元杂环基的取代基所取代；
R 4选自氢、卤素、-NR 8R 9、-OR 10；
R 5选自氢、卤素、C1-C6烷基和C3-C6环基；
R 6、R 7各自独立地选自氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基；
G1选自卤素、C1-C6烷基、-NR 8R 9、-OR 10，其中所述烷基任选被一个或多个选自卤素、-NR 11R 12、-OR 16的取代基所取代；
R 8、R 9、R 10、R 11、R 12和R 16各自独立地选自氢、C1-C6烷基和C1-C6卤代烷基；
且m为1或2；
其中所述化合物不包括下列化合物(1)至(7)：
Figure PCTCN2019092653-appb-000003
在本发明的另一个优选实施方案中，提供如通式I所示的化合物、其异构体、前药、溶剂合物、稳定的同位素衍生物或其药学上可接受的盐；其中：
L 1选自-NR 6C(O)-和-NR 6CON(R 7)-，其中NR 6与所述被R 1、R 2、R 3取代的含氮杂芳基连接；
L 2选自C1-C6亚烷基、C2-C6亚烯基、C2-C6亚炔基和C3-C6亚环基，其中所述亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚环基任选可被一个或多个G1所取代；
L 3选自化学单键和-O-；
R 1、R 2、R 3各自独立选自氢、卤素、C1-C4烷基、C4-C6环基和4-6元杂环基，其中所述烷基、环基和杂环基任选被一个或多个选自卤素的取代基所取代；
R 4选自氢、卤素、-NR 8R 9、-OR 10；
R 5选自氢、卤素、C1-C6烷基和C3-C6环基；
R 6、R 7各自独立地选自氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基；
G1选自卤素、C1-C6烷基、-NR 8R 9、-OR 10，其中所述烷基任选被 一个或多个选自卤素、-NR 11R 12、-OR 16的取代基所取代；
R 8、R 9、R 10、R 11、R 12和R 16各自独立地选自氢、C1-C6烷基和C1-C6卤代烷基；
其中所述化合物不包括下列化合物(1)至(7)：
Figure PCTCN2019092653-appb-000004
在本发明的另一个优选实施方案中，提供如通式I所示的化合物、其异构体、前药、溶剂合物、稳定的同位素衍生物或其药学上可接受的盐；其中：
L 1选自-NR 6CON(R 7)-，其中NR 6与所述被R 1、R 2、R 3取代的含氮杂芳基连接；
L 2选自C1-C4亚烷基、C2-C4亚烯基、C2-C4亚炔基和C3-C4亚环基，其中所述亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚环基任选可被一个或多个G1所取代；
L 3选自化学单键和-O-；
R 1、R 2、R 3各自独立地选自氢、卤素和C1-C4烷基，其中所述烷基任选被一个或多个选自卤素的取代基所取代；
R 4选自氢、卤素、-NR 8R 9、-OR 10；
R 5选自氢、卤素、C1-C6烷基和C3-C6环基；
R 6、R 7各自独立地选自氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基；
G1选自卤素、C1-C6烷基、-NR 8R 9、-OR 10，其中所述烷基任选被一个或多个选自卤素、-NR 11R 12、-OR 16的取代基所取代；
R 8、R 9、R 10、R 11、R 12和R 16各自独立地选自氢、C1-C6烷基和C1-C6卤代烷基；
其中所述化合物不包括下列化合物(1)至(5)：
Figure PCTCN2019092653-appb-000005
在本发明的另一个优选实施方案中，提供如通式I所示的化合物、其异构体、前药、溶剂合物、稳定的同位素衍生物或其药学上可接受的盐；其中：
L 1选自-NR 6CON(R 7)-，其中NR 6与所述被R 1、R 2、R 3取代的含氮杂芳基连接；
L 2选自C1-C4亚烷基和C2-C4亚烯基，其中所述亚烷基和亚烯基任选可被一个或多个G1所取代；
L 3选自化学单键和-O-；
R 1、R 2、R 3各自独立地选自氢、卤素和C1-C4烷基，其中所述烷基任选被一个或多个选自卤素的取代基所取代；
R 4选自氢、卤素、-NR 8R 9、-OR 10；
R 5选自氢、卤素、C1-C4烷基和C3-C6环基；
R 6、R 7各自独立地选自氢、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基；
G1选自卤素、C1-C4烷基、-NR 8R 9、-OR 10，其中所述烷基任选被一个或多个选自卤素、-NR 11R 12、-OR 16的取代基所取代；
R 8、R 9、R 10、R 11、R 12和R 16各自独立地选自氢、C1-C4烷基和C1-C4卤代烷基；
其中所述化合物不包括下列化合物(1)至(5)：
Figure PCTCN2019092653-appb-000006
在本发明的另一个优选实施方案中，提供如通式I所示的化合物、其异构体、前药、溶剂合物、稳定的同位素衍生物或其药学上可接受的盐；其中：
L 1选自-NR 6CON(R 7)-，其中NR 6与所述被R 1、R 2、R 3取代的含氮杂芳基连接；
L 2选自C1-C4亚烷基，其中所述亚烷基任选可被一个或多个G1所取代；
L 3选自-O-；
R 1、R 2、R 3各自独立地选自氢、卤素和C1-C4烷基，其中所述烷基任选被一个或多个选自卤素的取代基所取代；
R 4选自氢、卤素、-NR 8R 9、-OR 10；；
R 5选自氢、卤素和C1-C4烷基；
R 6、R 7各自独立地选自氢、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基；
G1选自卤素、C1-C4烷基、-NR 8R 9、-OR 10，其中所述烷基任选被一个或多个选自卤素、-NR 11R 12、-OR 16的取代基所取代；
R 8、R 9、R 10、R 11、R 12和R 16各自独立地选自氢、C1-C4烷基和C1-C4卤代烷基；
其中所述化合物不包括下列化合物(1)至(4)：
Figure PCTCN2019092653-appb-000007
在本发明的另一个优选实施方案中，提供如通式I所示的化合物、其异构体、前药、溶剂合物、稳定的同位素衍生物或其药学上可接受的盐；其中：
L 1选自-NR 6CON(R 7)-，其中NR 6与所述被R 1、R 2、R 3取代的含氮杂芳基连接；
L 2选自C1-C4亚烷基，其中所述亚烷基任选可被一个或多个G1所取代；
L 3选自-O-；
R 1、R 2、R 3各自独立地选自氢和卤素；
R 4选自氢和卤素；
R 5选自氢、卤素和C1-C4烷基，位于L 3的对位；
R 6、R 7各自独立地选自氢和C1-C4烷基；
G1选自卤素、C1-C4烷基，其中所述烷基任选被一个或多个选自卤素、-NR 11R 12、-OR 16的取代基所取代；
R 11、R 12和R 16各自独立地选自氢、C1-C4烷基和C1-C4卤代烷基；
其中所述化合物不包括下列化合物(1)至(4)：
Figure PCTCN2019092653-appb-000008
在本发明的另一个优选实施方案中，提供如通式I所示的化合物、其异构体、前药、溶剂合物、稳定的同位素衍生物或其药学上可接受的盐；其特征在于所述的化合物选自：
Figure PCTCN2019092653-appb-000009
本发明进一步涉及一种药物组合物，所述药物组合物包括前文任意一个实施方案中所述的化合物或其异构体、前药、溶剂合物、稳定的同位素衍生物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂。
本发明还涉及根据本发明任意一个实施方案中所述的化合物或其异构体、前药、溶剂合物、稳定的同位素衍生物或其药学上可接受的盐、或根据本发明所述的药物组合物在制备药物中的用途，其中所述药物用于治疗或者预防TRK介导的疾病，例如癌症，尤其是恶性血液病、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、脑胶质瘤。
本发明还涉及一种治疗或者预防TRK介导的疾病(例如肿瘤，尤其是恶性血液病、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、脑胶质瘤)的方法，其包括给予有需要的患者治疗有效量的本发明任意一个实施方案中所述的化合物或其异构体、前药、溶剂合物、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐、或本发明所述的药物组合物。
本发明的另一方面涉及本发明任意一个实施方案中所述的通式(I)所示的化合物、或其异构体、前药、溶剂合物、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐、或药物组合物，其用于治疗或者预防TRK介导的疾病，例如肿瘤，尤其是恶性血液病、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、脑胶质瘤。
本发明的另一方面涉及作为治疗和/或预防肿瘤等疾病的本发明任意一个实施方案中所述的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、及其可药用的盐。
本发明的典型化合物包括，但并不限于：
Figure PCTCN2019092653-appb-000010
Figure PCTCN2019092653-appb-000011
以及它们的异构体、前药、溶剂合物、稳定的同位素衍生物或其药学上可接受的盐。
本发明通式(I)所示化合物为TRK抑制剂，因此本发明通式(I)所示化合物可用于治疗或者预防TRK介导的疾病，例如肿瘤，尤其是恶性血液病、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、脑胶质瘤。
本发明进一步涉及一种药物组合物，所述药物组合物包含本发明所述的通式(I)所示化合物或其异构体、前药、溶剂合物、稳定的同位素衍生物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂。
本发明另一方面涉及通式(I)所示的化合物或其异构体、前药、溶剂合物、稳定的同位素衍生物或其药学上可接受的盐、或所述的药物组合物在制备药物中的用途，其中所述药物用于治疗或者预防TRK介导的疾病，例如肿瘤，尤其是恶性血液病、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、脑胶质瘤。
本发明的另一方面涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、及其可药用的盐，或所述药物组合物在制备治疗和/或预防肿瘤的药物中的用途。
根据本发明，所述药物可以是任何药物剂型，包括但不限于片剂、胶囊剂、溶液剂、冻干制剂、注射剂。
本发明的药物制剂可以以每剂量单位包含预定量的活性成分的剂量单位形式给药。这种单位可根据治疗的病症、给药方法和患者的年龄、体重和状况包含例如0.5毫克至1克，优选1毫克至700毫克，特 别优选5毫克至300毫克的本发明的化合物，或药物制剂可以以每剂量单位包含预定量的活性成分的剂量单位形式给药。优选剂量单位制剂是包含如上指示的日剂量或分剂量或其相应分数的活性成分的那些。此外，可以使用制药领域中公知的方法制备这种类型的药物制剂。
本发明药物制剂可适于通过任何所需的合适方法给药，例如通过经口(包括口腔或舌下)、直肠、经鼻、局部(包括口腔、舌下或经皮)、阴道或肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内或皮内)方法给药。可以使用制药领域中已知的所有方法通过例如将活性成分与一种或多种赋形剂或一种或多种辅助剂合并来制备这样的制剂。
本发明还涉及一种治疗或者预防TRK介导的疾病(例如肿瘤，尤其是恶性血液病、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、脑胶质瘤)的方法，其包括给予有需要的患者治疗有效量的本发明所述的化合物或其异构体、前药、溶剂合物、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐、或本发明所述的药物组合物。
本发明的另一方面涉及通式(I)所示的化合物、或其异构体、前药、溶剂合物、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐、或药物组合物，其用于治疗或者预防TRK介导的疾病，例如肿瘤，尤其是恶性血液病、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、脑胶质瘤。
本发明的另一方面涉及作为治疗和/或预防肿瘤等疾病的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、其混合物形式、及其可药用的盐。
制备流程
本发明还提供制备所述化合物的方法。
流程1
Figure PCTCN2019092653-appb-000012
相应地，各取代基定义如下：
R 1、R 2、R 3各自独立选自氢、卤素和C1-C4烷基；
R 4选自氢、卤素、-NR 8R 9、-OR 10；
R 5选自氢、卤素、C1-C4烷基和C3-C6环基；
R 17选自氢、C1-C4烷基；
L 2独立地选自C1-C4亚烷基、其中所述亚烷基任选可被一个或多个卤素、C1-C4烷基、-OR 10、-NR 8R 9所取代，其中所述烷基任选被一个或多个选自卤素、-NR 11R 12、-OR 16的取代基所取代；
R 8、R 9、R 10、R 11、R 12和R 16各自独立地选自氢、C1-C4烷基和C1-C4卤代烷基；
第一步：
取代反应在正丁醇或者N，N-二甲基乙酰胺等溶剂中进行，加入N，N-二异丙基乙胺或者1，8-二氮杂二环十一碳-7-烯(DBU)等，在60～80℃ -微波或油浴加热条件下进行；反应得到化合物(II)；
第二步：
LG 1为Cl，Br，I等卤素或OTf，OTs，OMs等离去基团，取代反应在乙腈等溶剂中进行，加入碱如碳酸铯等，在50～100℃微波或油浴 加热条件下进行；反应得到化合物(III)；
第三步：
LG 2为Cl，Br，I等卤素或OTf，OTs，OMs等离去基团，取代反应在N，N-二甲基甲酰胺等溶剂中进行，同时加入碱如氢化钠等，在0～25℃条件下进行；反应得到化合物(IV)；
第四步：
硝基的还原反应使用锌粉作为还原剂；加入饱和的氯化铵溶液，反应在二氯甲烷等溶剂中，在0～25℃条件下进行；反应得到化合物(V)；
第五步：
叔丁氧羰基的脱保护反应使用三氟乙酸作为酸；在二氯甲烷等溶剂中，反应在0～25℃条件下进行；反应得到化合物(VI)；
第六步：
二胺(VI)成脲的反应使用N，N′-羰基二咪唑或者N，N′-羰基二(1，2，4-三氮唑)，有时加入碱如三乙胺等，反应在N，N-二甲基甲酰胺等溶剂中进行，在20～50℃室温或油浴加热条件下进行；反应得到化合物(VII)。
具体实施方式
定义
除非有相反陈述，否则下列用在说明书和权利要求书中的术语具有下述含义。
在本文中使用的表示方式“Cx-Cy”表示碳原子数的范围，其中x和y均为整数，例如C3-C8环基表示具有3-8个碳原子的环基，C0-C2烷基表示具有0-2个碳原子的烷基，其中C0烷基是指化学单键。
在本文中，术语“烷基”指饱和的脂族烃基团，包括1至20个碳原子的直链和支链基团，例如可以是1至18个碳原子、1至12个碳原子、1至8个碳原子、1至6个碳原子或1至4个碳原子的直链和支链基团。非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1，1-二甲基丙基、1，2-二甲基丙基、2，2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1，1，2-三甲基丙基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2-乙基丁基、及其各种支链异构体等。烷 基可以是任选取代的或未取代的。
在本文中，术语“烯基”指含有至少1个碳碳双键的直链、支链烃基，其可包括2至20个碳原子，例如可以是2至18个碳原子、2至12个碳原子、2至8个碳原子、2至6个碳原子或2至4个碳原子的直链和支链基团。其中可以存在1-3个碳碳双键，优选存在1个碳碳双键。术语“C2-4烯基”是指具有2-4个碳原子的烯基。包括乙烯基、丙烯基、丁烯基、丁烯-2-基、2-甲基丁烯基。所述的烯基可以被取代。
在本文中，术语“炔基”是指含有至少1个碳碳三键的直链、支链烃基，其可包括2至20个碳原子，例如可以是2至18个碳原子、2至12个碳原子、2至8个碳原子、2至6个碳原子或2至4个碳原子的直链和支链基团。其中可以存在1-3个碳碳三键，优选存在1个碳碳三键。术语“C2-4炔基”是指具有2-4个碳原子的炔基。非限制性实例包括乙炔基、丙炔基、丁炔基和丁炔-2-基、3-甲基丁炔基。
在本文中，术语“亚烷基”、“亚烯基”、“亚炔基”分别指具有两个端部单价基团核心的取代或未取代的烷基、烯基和炔基，其是从两个端部碳原子的每个碳原子上除去一个氢原子所产生的；所述“亚烷基”、“亚烯基”、“亚炔基”通常具有1-8个碳原子，优选1-6个碳原子，更优选具有1-4个碳原子。“亚烷基”的非限制性实例包括取代或未取代的亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基等；“亚烯基”的非限制性实例包括取代或未取代的亚乙烯基、亚丙烯基、亚丁烯基等；“亚炔基”的非限制性实例包括取代或未取代的亚乙炔基、亚丙炔基、亚丁炔基等；
在本文中，术语“环基”指全碳饱和或部分不饱和单环或多环环状烃基，其包括3至12个环原子，例如可以是3至12个、3至10个、3至8个或3至6个环原子，或者可以是3、4、5、6元环。单环环基的非限制性实例包含环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等。环基可以是取代的或未取代的。
在本文中，术语“亚环基”指具有两个端部单价基团核心的取代或未取代的环基，环基具有前文所述定义。“亚环基”的非限制性实例包含亚环丙基、亚环丁基、亚环戊基、亚环戊烯基、亚环己基、亚环己烯基、亚环己二烯基、亚环庚基、亚环庚三烯基、亚环辛基等。亚 环基可以是取代的或未取代的。
在本文中，术语“杂环基”指饱和或部分不饱和单环、双环或多环环状烃基，其包括3至20个环原子，例如可以是3至16个、3至12个、3至10个、3至8个或3至6个环原子，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。优选包括3至12个环原子，其中1～4个是杂原子，更优选杂环基环包含3至10个环原子、更优选包括3至8个环原子，进一步优选3至6个环原子，最优选5元环或6元环，其中1～4个是杂原子，更优选1～3个是杂原子，最优选1～2个是杂原子。单环杂环基的非限制性实例包含吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基等。双环和多环杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基。
“螺杂环基”指5至20元，单环之间共用一个原子(称螺原子)的多环杂环基团，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基，优选为单螺环基和双螺环基。更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺环基。螺环基的非限制性实例包含
Figure PCTCN2019092653-appb-000013
“稠杂环基”指5至20元，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对原子的多环杂环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠杂环基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环稠杂环基。稠杂环基的非限制性实例包含
Figure PCTCN2019092653-appb-000014
所述杂环基环可以稠合于芳基、杂芳基或环基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基，非限制性实例包含：
Figure PCTCN2019092653-appb-000015
等。杂环基可以是任选取代的或未取代的。
在本文中，术语“芳基”是指含有6至14个碳环原子的全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，具有共轭的π电子体系的多环(即其带有相邻对碳原子的环)基团。芳基可以是单环或多环的(即，可以含有一个以上的环)。在多环芳环的情况下，只要求多环系统中的一个环是芳香环，而其余的环可以是饱和、部分饱和或不饱和环。芳基优选为6至10元的，例如苯基和萘基，最优选苯基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，非限制性实例包含：
Figure PCTCN2019092653-appb-000016
芳基可以是取代的或未取代的。
在本文中，术语“亚芳基”是指分别具有两个单价基团核心的取代或未取代的芳基，芳基的定义同前文所述。亚芳基的非限制性实例如亚苯基、亚萘基等。亚芳基可以是任选取代的或未取代的。
在本文中，术语“杂芳基”指包含1至4个杂原子、5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子包括氧、硫和氮。杂芳基优选为5至10元。更优选是5元或6元，例如呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑 基等，所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，非限制性实例包含：
Figure PCTCN2019092653-appb-000017
杂芳基可以是任选取代的或未取代的。
在本文中，术语“亚杂芳基”是指分别具有两个单价基团核心的取代或未取代的杂芳基，杂芳基的定义同前文所述。亚杂芳基的非限制性实例如亚呋喃基、亚噻吩基、亚吡啶基、亚吡咯基、N-烷基亚吡咯基、亚嘧啶基、亚吡嗪基、亚咪唑基、亚四唑基、亚噁唑基、亚异噁唑基等。亚杂芳基可以是任选取代的或未取代的。
“卤素”指氟、氯、溴或碘。
“卤代烷基”是指至少一个氢被卤素基团代替的烷基取代基。典型的卤素基团包括氯、氟、溴和碘。卤代烷基的例子包括氟甲基、氟乙基、氯甲基、氯乙基、1-溴乙基、二氟甲基、三氟甲基和1，1，1-三氟乙基。应该认识到，如果取代基被一个以上的卤素基团取代，则那些卤素基团可以相同或不同(除非另有说明)。
“醛基”是指-CHO。
″羧基″是指-COOH。
“氰基”指-CN。
“杂烷基”是指稳定的直链或者支链烃基，由指定数目的碳原子和至少一个选自氧，氮，硫的杂原子组成，其中氮，硫原子可以任选氧化，氮原子可以任选季胺化，杂原子氧，氮，硫可位于杂烷基的任意内部位置，也可以位于烷基与分子余下部分相连的位置，两个或两个以上的杂原子可以是独立的，也可以是连续的。
“任选”或“任选地”意味着随后所描述的事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。
“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻， 取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
所述取代基包括但不限于前文所述的各取代基。
“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
本发明所述“室温”是指15-30℃。
本发明的化合物也可以存在为其异构体、前药、溶剂合物或稳定的同位素衍生物。本领域技术人员将理解，这些异构体、前药、溶剂合物或稳定的同位素衍生物通常具有与本发明的化合物或其药学上可接受的盐具有相似的活性，因而也涵盖在本发明的保护范围内。
本发明所述，“稳定的同位素衍生物”包括：式I中任意的氢原子被1-5个氘原子取代得到的同位素取代衍生物、式I中任意的碳原子被1-3个碳14原子取代得到的同位素取代衍生物或式I中任意的氧原子被1-3个氧18原子取代得到的同位素取代衍生物。
本发明所述的“药学上可接受的盐”在Berge，et al.，“Pharmaceutically acceptable salts”，J.Pharm.Sci.，66，1-19(1977)中有讨论，并对药物化学家来说是显而易见，所述的盐是基本上无毒性的，并能提供所需的药代动力学性质、适口性、吸收、分布、代谢或排泄等。
本发明药学上可接受的盐可通过一般的化学方法合成。
一般情况下，盐的制备可以通过游离碱或酸与等化学当量或者过量酸(无机酸或有机酸)或碱在合适的溶剂或溶剂组合物中反应制得。
本发明所述的“前药”是指化合物在体内代谢后转换成原始活性化合物。代表性地讲，前药为非活性物质，或者比活性母体化合物活性小，但可以提供方便的操作、给药或者改善代谢特性。
本发明所述“异构体”是指本发明的式(I)化合物可以有不对称中心和外消旋体、外消旋混合物和单个非对映异构体，所有这些异构体，包括立体异构体、几何异构体均包含在本发明中。所述几何异构 体包括顺反异构体。
本发明包括所述化合物或其盐的任何多晶型物以及任何水合物或其它溶剂合物。
在本文中，术语“肿瘤”包括良性肿瘤和恶性肿瘤，例如癌症。
在本文中，术语“癌症”包括TRK介导的的各种肿瘤，包括但不限于恶性血液病、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、脑胶质瘤。
在本文中，术语“治疗有效量”是指包括可有效治疗或预防由TRK介导的相关疾病的本发明化合物的量。
实施例
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
本发明所有化合物的结构可通过核磁共振( 1H NMR)和/或质谱检测(MS)鉴定。
1H NMR化学位移(δ)以ppm记录(单位：10 -6PPM)。NMR通过Bruker AVANCE-400光谱仪进行。合适的溶剂是氘代氯仿(CDCl 3)，氘代甲醇(CD 3OD)，氘代二甲亚砜(DMSO-d 6)，四甲基硅烷作为内标(TMS)。
低分辨率质谱(MS)由Agilent 1260HPLC/6120质谱仪测定，使用Agilent ZORBAX XDB-C18，4.6×50mm，3.5μm，梯度洗脱条件一：0：95％溶剂A1和5％溶剂B1、1-2：5％溶剂A1和95％溶剂B1；2.01-2.50：95％溶剂A1和5％溶剂B1。百分数为某一溶剂占总溶剂体积的体积百分数。溶剂A1：0.01％甲酸水溶液；溶剂B1：0.01％甲酸的乙腈溶液；百分数为溶质占溶液的体积百分数。
薄层硅胶板是烟台黄海HSGF254或青岛海洋GF254硅胶板。柱层析一般使用烟台黄海100-200或200-300目硅胶作为载体。
制备液相色谱(prep-HPLC)使用Waters SQD2质谱导向高压液相色谱分离仪，XBridge-C18；30X 150mm制备柱，5um；方法一：乙腈-水(0.2％甲酸)，流速25mL/分钟；方法二：乙腈-水(0.8％碳酸氢铵)，流速25mL/分钟；
本发明的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买自Acros Organics，Aldrich Chemical Company，韶远化学科技(Accela ChemBio Inc)、上海毕得医药、上海阿拉丁化学、上海迈瑞尔化学、百灵威化学、安耐及化学等公司。
实施例中如无特殊说明，反应所用溶剂均为无水溶剂，其中无水四氢呋喃使用市售四氢呋喃，以钠块为除水剂，以二苯甲酮作为指示剂，氩气保护下回流至溶液呈蓝紫色，蒸馏收集，氩气保护下室温储存，其他无水溶剂购自安耐及化学及百灵威化学，所有无水溶剂的转移和使用如无特殊说明，均需在氩气保护下进行。
实施例中如无特殊说明，反应均在氩气氛或氮气氛下进行。
氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气或氮气气球。
氢气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气气球。
氢化反应通常抽真空，充入氢气，反复操作3次。
实施例中如无特殊说明，反应的温度为室温，温度范围是15℃-30℃。
实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(TLC)，反应所使用的展开剂的体系有A：二氯甲烷和甲醇体系；B：石油醚和乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节。
纯化化合物采用的柱层析的洗脱剂的体系和薄层色谱法的展开剂的体系包括A：二氯甲烷和甲醇体系；B：石油醚和乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺和酸性或碱性试剂等进行调节。
中间体1(INT 1)的合成
Figure PCTCN2019092653-appb-000018
第一步
(S)-N-((R)-1-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)丁-3-烯-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺1-3
将5-氟-2-甲氧基尼古丁醛1-1(2.50g，16.10mmol)溶解在四氢呋喃(35mL)中，搅拌下依次加入铟粉(2.40g，20.90mmol)、(S)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2.33g，19.30mmol)和四乙氧基钛(5.50g，24.20mmol)，在70℃搅拌2小时，冷却到0℃，然后再加3-溴丙烯1-2(3.10g，26.00mmol)，加完后在70℃反应16小时。冰浴冷却，加入150mL水淬灭，过滤，滤液用二氯甲烷萃取(200mL×3)，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，硅胶柱纯化(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶0～1∶1)得到(S)-N-((R)-1-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)丁-3-烯-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺1-3(4.60g，黄色油状物)，产率95.2％；
MS m/z(ESI)：301[M+1]；
1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ7.91(d，J＝3.2Hz，1H)，7.36-7.33(m，1H)，5.74-5.66(m，1H)，5.20-5.15(m，2H)，4.77-4.73(m，1H)，3.95(s，3H)，3.78-3.75(m，1H)，2.70-2.65(m，1H)，2.48-2.43(m，1H)，1.23(s，9H)；
第二步
(R)-1-(5-氟-2-甲氧苯基)丁-3-烯-1-胺盐酸盐1-4
将(S)-N-((R)-1-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)丁-3-烯-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺1-3(4.60g，15.30mmol)溶解在氯化氢的二氧六环溶液(4M，25mL)和甲醇(25mL)中，室温搅拌2小时，反应完毕。旋干得到(R)-1-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)丁-3-烯-1-胺盐酸盐1-4(5g，白色固体)，粗品，理论产量3.56g；
MS m/z(ESI)：197[M+1]；
第三步
(R)-N-(1-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)丁-3-烯-1-基)乙酰胺1-5
将(R)-1-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)丁-3-烯-1-胺盐酸盐1-4(3.56g，15.30mmol)溶解在二氯甲烷(50mL)中，搅拌下加入三乙胺(3.86g，38.00mmol)，室温搅拌5分钟，然后加入乙酸酐(2.34g，23.00mmol)室温搅拌3小时，加入30mL饱和碳酸氢钠水溶液淬灭，二氯甲烷萃取(50mL×3)，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干得到(R)-N-(1-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)丁-3-烯-1-基)乙酰胺1-5(3.46g，黄色固体)，产率95.0％；
MS m/z(ESI)：239[M+1]；
1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ7.90(d，J＝2.8Hz，1H)，7.23-7.21(m，1H)，6.19(d，J＝7.6Hz，1H)，5.68-5.58(m，1H)，5.13-5.07(m，2H)，5.06-5.04(m，1H)，3.98(s，3H)，2.56-2.53(m，2H)，2.01(s，3H)；
第四步
(5R)-5-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)吡咯烷-3-基乙酸酯1-6
将(R)-N-(1-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)丁-3-烯-1-基)乙酰胺1-5(3.46g，14.50mmol)溶解在四氢呋喃(80mL)和水(20mL)中，搅拌下加入碘(11.08g，43.60mmol)，室温搅拌18小时。加入100mL饱和的亚硫酸钠和碳酸氢钠水溶液搅拌0.5小时，乙酸乙酯萃取(100mL×3)，合并有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干，得到(5R)-5-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)吡咯烷-3-基乙酸酯1-6(3.68g，黄色固体)，粗品；
MS m/z(ESI)：255[M+1]；
第五步
(2R)-4-乙酰氧基-2-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯1-7
将(5R)-5-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)吡咯烷-3-基乙酸酯1-6(3.68g，14.50mmol)溶解在四氢呋喃(15mL)和水(15mL)中。搅拌下加入氢氧化钠水溶液(1M，10mL)和二碳酸二叔丁酯(4.16g，18.90mmol)，室温搅拌18小时，加入100mL水稀释，乙酸乙酯萃取(80mL×3)，合并有机相用水(100mL×2)和饱和食盐水(100mL×2)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干，得到((2R)-4-乙酰氧基-2-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯1-7(6.0g，黄色固体)，粗品；
MS m/z(ESI)：377[M+23]；
第六步
(2R)-2-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯1-8
将((2R)-4-乙酰氧基-2-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯1-7(5.13g，14.50mmol)溶解在甲醇(40mL)中，搅拌下加入氢氧化钠水溶液(1M，20mL)，室温搅拌2小时，加入100mL水稀释，乙酸乙酯萃取(100mL×3)，合并有机相用水(100mL×2)和饱和食盐水(100mL×2)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干，硅胶柱纯化(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶0～1∶1)得到(2R)-2-(5-氟-2-甲氧基吡啶-基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯1-8(2.45g，黄色固体)，三步总收率54.1％；
MS m/z(ESI)：335[M+23]；
1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ7.87(d，J＝7.6Hz，1H)，7.38-7.14(m，1H)，5.12-4.93(m，1H)，4.49-4.41(m，1H)，3.93(s，3H)，3.75-3.52(m，2H)，2.53-2.41(m，1H)，1.98-1.91(m，1H)，1.46(s，4H)，1.18(s，5H)；
第七步
(R)-2-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)-4-羰基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯1-9
将(2R)-2-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯1-8(2.45g，7.85mmol)溶解在二氯甲烷(40mL)中，在室温加入戴斯-马丁氧化剂(4.16g，9.82mmol)，室温搅拌18小时，加入50mL二氯甲烷稀释，依次用饱和亚硫酸钠水溶液(30mL)，饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干，得到(R)-2-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)-4-羰基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯1-9(2.40g，黄色油状物)，产率99.0％；
MS m/z(ESI)：333[M+23]；
1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ7.93(s，1H)，7.27-7.25(m，1H)，5.27-5.17(m，1H)，4.00-3.85(m，2H)，3.89(s，3H)，3.09-3.02(m，1H)，2.58-2.54(m，1H)，1.45(s，4H)，1.38(s，5H)；
第八步
(2R，4R)-2-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯1-10
将(R)-2-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)-4-羰基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯1-9(2.40g，7.70mmol)溶解在甲醇(15mL)中，在-78℃加入硼氢化钠(0.29g，7.70mmol)，在-78℃搅拌1小时，加入10mL氯化铵饱和水溶液淬灭，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相用水(100mL×2)和饱和食盐水(100mL×2)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干，得到(2R，4R)-2-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯1-10(2.27g，黄色油状物)，收率93.7％；
MS m/z(ESI)：335[M+23]；
1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ7.85(s，1H)，7.35-7.27(m，1H)，5.06-4.98(m，1H)，4.50-4.47(m，1H)，3.93(s，3H)，3.76-3.75(m，1H)，3.62-3.59(m，1H)，2.55-2.53(m，1H)，1.97-1.94(m，1H)，1.96-1.92(m，1H)，1.47(s，4H)，1.24(s，5H)；
第九步
(2R，4S)-4-氟-2-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯1-11
将(2R，4R)-2-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯1-10(2.27g，7.30mmol)溶解在二氯甲烷(45mL)中，在-78℃加入二乙胺基三氟化硫(2.94g，18.25mmol)，慢慢回到室温搅拌16小时，加入15mL碳酸氢钠饱和水溶液淬灭，二氯甲烷萃取(50mL×3)，合并有机相用水(100mL×2)和饱和食盐水(100mL×2)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干，硅胶柱纯化(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶0～15∶1)得到(2R，4S)-4-氟-2-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯1-11(1.40g，无色油)，产率51.8％；
MS m/z(ESI)：337[M+23]；
1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ7.89(s，0.6H)，7.87(s，0.4H)， 7.26-7.21(m，1H)，5.28-5.03(m，2H)，4.13-4.08(m，1H)，3.95(s，3H)，3.71-3.59(m，1H)，2.78-2.73(m，1H)，1.98-1.81(m，1H)，1.46(s，3H)，1.21(s，6H)；
第十步
5-氟-3-((2R，4S)-4-氟吡咯烷-2-基)-2-甲氧基吡啶盐酸盐1-12
将化合物叔丁基(2R，4S)-4-氟-2-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)吡咯烷-1-羧酸酯1-11(1.40g，4.46mmol)溶于氯化氢甲醇溶液(4M，20mL)中，室温下搅拌过夜。减压旋蒸去除溶剂，得到目标化合物5-氟-3-((2R，4S)-4-氟吡咯烷-2-基)-2-甲氧基吡啶盐酸盐1-12(1.12g，4.46mmol，黄色固体)，产率：100％；
MS m/z(ESI)：215[M+1]；
第十一步
5-氟-3-((2R，4S)-4-氟吡咯烷-2-基)吡啶-2-酚盐酸盐INT1
将化合物5-氟-3-((2R，4S)-4-氟吡咯烷-2-基)-2-甲氧基吡啶盐酸盐1-12(1.12g，4.46mmol)溶于乙腈(40mL)，慢慢滴加三甲基碘硅烷(1.8g，9.92mmol)。在50℃下搅拌一小时，减压旋蒸去除溶剂，用水淬灭反应物，水相用乙酸乙酯(30mL×2)反萃去除杂质，浓缩水相得到目标化合物5-氟-3-((2R，4S)-4-氟吡咯烷-2-基)吡啶-2-酚盐酸盐INT1(0.95g，4.02mmol，红褐色油状)，收率90.1％；
MS m/z(ESI)：201[M+1]；
1H NMR(400MHz，CD 3OD)δ7.83(s，1H)，7.62(s，1H)，4.94-4.86(m，1H)，3.82-3.86(m，z，1H)，3.65-3.70(m，2H)，2.63-2.47(m，2H)。
实施例1
(2 2R，2 4S，5S)-2 4，3 5-二氟-5-甲基-4-氧杂-7，9-二氮杂-1(5，3)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3(3，2)-吡啶-2(1，2)-吡咯烷环壬烷-8-酮
Figure PCTCN2019092653-appb-000019
第一步
(R)-(2-羟基丙基)氨基甲酸叔丁酯
将(R)-1-氨基丙烷-2-醇1c-1(1.11g，14.80mmol)溶解于15mL四氢呋喃中，缓慢加入二碳酸二叔丁酯(3.55g，16.30mmol)，加完后室温搅拌反应30分钟。反应结束后直接旋干，得到(R)-(2-羟基丙基)氨基甲酸叔丁酯1c-2(2.60g，无色液体)，粗品；
1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ3.28-3.25(m，1H)，3.04-2.97(m，1H)，2.29-2.27(m，1H)，1.45(s，9H)，1.18(d，J＝6.4Hz，3H)；
第二步
(R)-1-((叔丁氧基羰基)氨基)丙烷-2-基-4-甲基苯磺酸酯
将(R)-(2-羟基丙基)氨基甲酸叔丁酯1c-2(3.90g，22.00mmol)溶解于二氯甲烷(40mL)中，加入三乙胺(3.50g，34.50mmol)，对 甲基苯磺酰氯(4.18g，22.00mmol)和N，N-二甲基-4-氨基吡啶(0.39g，3.20mmol)，加完后30℃搅拌反应18h。反应液用饱和食盐水洗涤(30mL×3)，无水硫酸钠干燥，浓缩得到(R)-1-((叔丁氧基羰基)氨基)丙烷-2-基-4-甲基苯磺酸酯1c(7.00g，黄色油状物，冷却后成黄色固体)，粗品；
MS m/z(ESI)：352[M+23]；
第三步
5-氟-3-((2R，4S)-4-氟-1-(3-硝基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)吡咯烷-2-基)吡啶-2-酚1b
将化合物5-氟-3-((2R，4S)-4-氟吡咯烷-2-基)吡啶-2-酚盐酸盐INT1(0.50g，2.00mmol)，5-氯-3-硝基吡唑并[1，5-a]嘧啶1a(0.40g，2.00mmol)溶于正丁醇(25mL)中，加入N，N-二异丙基乙胺(0.78g，6.00mmol)，40℃搅拌3小时。冷却到室温，过滤，固体干燥得到目标化合物5-氟-3-((2R，4S)-4-氟-1-(3-硝基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)吡咯烷-2-基)吡啶-2-酚1b(0.66g，1.82mmol，黄色固体)，收率91％；
MS m/z(ESI)：363[M+1]；
第四步
((S)-2-((5-氟-3-((2R，4S)-4-氟-1-(3-硝基吡唑[1，5-a]嘧啶-5-基)吡咯烷-2-基)吡啶-2-基)氧基)异丙基)氨基甲酸叔丁酯1d
将化合物5-氟-3-((2R，4S)-4-氟-1-(3-硝基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)吡咯烷-2-基)吡啶-2-酚1b(0.25g，0.69mmol)，(R)-1-((叔丁氧基羰基)氨基)丙烷-2-基-4-甲基苯磺酸酯(0.68g，2.10mmol)溶于乙腈(15.0mL)，加入碳酸铯(0.68g，2.10mmol)，80℃下搅拌3小时。冷却到室温，减压脱溶，制备硅胶板纯化(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1)得到目标化合物((S)-2-((5-氟-3-((2R，4S)-4-氟-1-(3-硝基吡唑[1，5-a]嘧啶-5-基)吡咯烷-2-基)吡啶-2-基)氧基)异丙基)氨基甲酸叔丁酯1d(0.10g，0.19mmol，黄色固体)，产率：28％；
MS m/z(ESI)：542[M+23]；
1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ8.50(s，0.5H)，8.41(s，0.5H)，8.29(d，J＝8.0Hz，0.5H)，8.21(d，J＝8.0Hz，0.5H)，7.92(s，0.5H)，7.84(s，0.5H)，7.77-7.74(m，0.5H)，7.12-7.11(m，0.5H)，6.36(d，J＝8.0Hz，0.5H)，6.20(d，J＝8.0Hz，0.5H)，5.40-5.55(m，1H)，5.42-5.27(m，1H)，4.79-4.76 (m，1H)，4.21-4.11(m，1H)，4.04-3.95(m，1H)，3.94-3.90(m，1H)，3.51-3.48(m，1H)，2.70-2.52(m，1H)，2.26-2.06(m，1H)，1.44(d，J＝6.0Hz，3H)；
第五步
((S)-2-((5-氟-3-((2R，4S)-4-氟-1-(3-胺基吡唑[1，5-a]嘧啶-5-基)吡咯烷-2-基)吡啶-2-基)氧基)异丙基)氨基甲酸叔丁酯1e
将化合物((S)-2-((5-氟-3-((2R，4S)-4-氟-1-(3-硝基吡唑[1，5-a]嘧啶-5-基)吡咯烷-2-基)吡啶-2-基)氧基)异丙基)氨基甲酸叔丁酯1d(0.10g，0.19mm0l)溶于甲醇/二氯甲烷(5.0mL/5.0mL)，加入饱和氯化铵(5.0mL)和锌粉(0.18g，2.80mmol)，室温下搅拌1小时。用二氯甲烷(10mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥。减压脱溶得到目标化合物((S)-2-((5-氟-3-((2R，4S)-4-氟-1-(3-胺基吡唑[1，5-a]嘧啶-5-基)吡咯烷-2-基)吡啶-2-基)氧基)异丙基)氨基甲酸叔丁酯1e(93mg，0.19mmol，黄色油状)，产率：99％；
MS m/z(ESI)：490[M+1]；
第六步
5-((2R，4S)-2-(2-(((S)-1-氨基丙烷-2-基)氧代)-5-氟吡啶-3-基)-4-氟吡咯烷-1-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-胺1f
将化合物((S)-2-((5-氟-3-((2R，4S)-4-氟-1-(3-胺基吡唑[1，5-a]嘧啶-5-基)吡咯烷-2-基)吡啶-2-基)氧基)异丙基)氨基甲酸叔丁酯1e(93mg，0.19mmol)溶于二氯甲烷(5.0mL)，室温下加入三氟乙酸(2.0mL)，室温下搅拌1小时。减压去除溶剂，用二氯甲烷(5.0mL)稀释，加入三乙胺中和体系，减压脱溶得到目标化合物5-((2R，4S)-2-(2-(((S)-1-氨基丙烷-2-基)氧代)-5-氟吡啶-3-基)-4-氟吡咯烷-1-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-胺1f(73mg，0.19mmol，黄色油状)，粗品；
MS m/z(ESI)：390[M+1]；
第七步
(2 2R，2 4S，5S)-2 4，3 5-二氟-5-甲基-4-氧杂-7，9-二氮杂-1(5，3)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3(3，2)-吡啶-2(1，2)-吡咯烷环壬烷-8-酮
将化合物5-((2R，4S)-2-(2-(((S)-1-氨基丙烷-2-基)氧代)-5-氟吡啶-3-基)-4-氟吡咯烷-1-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-胺1f(73mg，0.19mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(3.0mL)，加入N，N-羰基二咪唑(62mg，0.38 mmol)，室温下搅拌1小时。减压去除溶剂，制备硅胶板纯化(二氯甲烷∶甲醇＝20∶1)得到目标化合物(2 2R，2 4S，5S)-2 4，3 5-二氟-5-甲基-4-氧杂-7，9-二氮杂-1(5，3)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3(3，2)-吡啶-2(1，2)-吡咯烷环壬烷-8-酮1(11mg，0.03mmol，黄色固体)，产率：14％；
MS m/z(ESI)：416[M+1]；
1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ8.25(d，J＝8.0Hz，1H)，7.88(s，1H)，7.64-7.62(m，1H)，7.59(s，1H)，7.14-7.11(m，1H)，6.35(s，1H)，6.20(d，J＝8.0Hz，1H)，5.68-5.61(m，1H)，5.60-5.52(m，1H)，4.23-4.14(m，1H)，4.04-3.98(m，1H)，3.88-3.83(m，1H)，3.03-2.84(m，2H)，2.26-2.06(m，2H)，1.44(d，J＝6.4Hz，3H)。
实施例2
(2 2R，2 4S)-2 4，3 5-二氟-4-氧杂-7，9-二氮杂-1(5，3)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3(3，2)-吡啶-2(1，2)-吡咯烷环壬烷-8-酮
Figure PCTCN2019092653-appb-000020
第一步
(2-((5-氟-3-((2R，4S)-4-氟-1-(3-硝基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)吡咯烷 -2-基)吡啶-2-基)氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯2b
将化合物5-氟-3-((2R，4S)-4-氟-1-(3-硝基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)吡咯烷-2-基)吡啶-2-酚1b(0.25g，0.70mmol)和碳酸铯(0.65g，2.00mmol)加入乙腈(10mL)中，50℃油浴中搅拌10分钟，加入(2-溴乙基)氨基甲酸叔丁酯2a(0.22g，1.00mmol)，温度升至70℃搅拌过夜。冷却，反应液用水(30mL)稀释，混合物以二氯甲烷(50mL×3)萃取，有机相合并以无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压脱溶，硅胶柱纯化(石油醚∶乙酸乙酯＝19∶1～3∶2)得到目标化合物(2-((5-氟-3-((2R，4S)-4-氟-1-(3-硝基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)吡咯烷-2-基)吡啶-2-基)氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯2b(0.11g，0.20mmol，黄色固体)，产率：30％；
MS m/z(ESI)：506[M+1]；
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.51(s，0.5H)，8.42(s，0.5H)，8.28-8.27(m，1H)，7.94(s，0.5H)，7.84(s，0.5H)，7.75-7.74(m，0.5H)，7.14-7.12(m，0.5H)，6.39-6.38(m，0.5H)，6.10-6.08(m，0.5H)，5.57(s，1H)，5.52-5.51(m，0.5H)，5.31-5.29(m，0.5H)，4.92-4.76(m，1.5H)，4.53-4.34(m，2.5H)，4.15-3.95(m，2H)，3.15-3.12(m，0.5H)，2.75-2.75(m，0.5H)，2.68-2.55(m，1H)，1.55(s，9H)；
第二步
(2-((5-氟-3-((2R，4S)-4-氟-1-(3-胺基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)吡咯烷-2-基)吡啶-2-基)氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯2c
将化合物(2-((5-氟-3-((2R，4S)-4-氟-1-(3-硝基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)吡咯烷-2-基)吡啶-2-基)氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯2b(40mg，0.08mmol)，二氯甲烷(2.0mL)，甲醇(2.0mL)，饱和氯化铵水溶液(4.0mL)和锌粉(65mg，1.00mmol)混合，室温搅拌30分钟。加入二氯甲烷(30mL×2)萃取，有机相用水洗(30mL×3)，无水硫酸钠干燥，减压脱溶，得到目标化合物(2-((5-氟-3-((2R，4S)-4-氟-1-(3-胺基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)吡咯烷-2-基)吡啶-2-基)氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯2c(40mg，0.08mmol，黄色固体)，粗品；
MS m/z(ESI)：476[M+1]；
第三步
5-((2R，4S)-2-(2-(2-氨基乙氧基)-5-氟吡啶-3-基)-4-氟吡咯烷-1-基) 吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-胺三氟乙酸盐2d
将化合物(2-((5-氟-3-((2R，4S)-4-氟-1-(3-胺基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)吡咯烷-2-基)吡啶-2-基)氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯2c(40mg，0.08mmol)溶于二氯甲烷(1.0mL)，加入三氟乙酸(1.0mL)，室温搅拌1小时。反应液减压脱溶，得到目标化合物5-((2R，4S)-2-(2-(2-氨基乙氧基)-5-氟吡啶-3-基)-4-氟吡咯烷-1-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-胺三氟乙酸盐2d(30mg，0.08mmol，黄色固体)，粗品；
MS m/z(ESI)：376[M+1]；
第四步
(2 2R，2 4S)-2 4，3 5-二氟-4-氧杂-7，9-二氮杂-1(5，3)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3(3，2)-吡啶-2(1，2)-吡咯烷环壬烷-8-酮
将化合物5-((2R，4S)-2-(2-(2-氨基乙氧基)-5-氟吡啶-3-基)-4-氟吡咯烷-1-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-胺三氟乙酸盐2d(30mg，0.08mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(1mL)，加入三乙胺(0.2mL)和N，N′-羰基二咪唑(10mg，0.06mmol)，室温中搅拌1小时。反应液以乙酸乙酯(50mL×3)萃取，饱和氯化钠溶液(5mL×3)洗涤，有机相减压脱溶，制备硅胶板纯化(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)得到目标化合物(2 2R，2 4S)-2 4，3 5-二氟-4-氧杂-7，9-二氮杂-1(5，3)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3(3，2)-吡啶-2(1，2)-吡咯烷环壬烷-8-酮2(8.0mg，黄色固体)，产率：25％；
MS m/z(ESI)：402[M+1]；
1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ8.24(d，J＝7.6Hz，1H)，7.92-7.88(m，1H)，7.58(s，1H)，7.41-7.39(m，1H)，7.15-7.13(m，1H)，6.21(d，J＝7.6Hz，1H)，6.20-6.16(m，1H)，5.67-5.42(m，2H)，4.18-3.88(m，5H)，3.29-3.28(m，1H)，2.89-2.86(m，1H)，2.06-2.03(m，1H)。
实施例3
(2 2R，2 4S)-2 4，3 5-二氟-7-甲基-4-氧杂-7，9-二氮杂-1(5，3)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3(3，2)-吡啶-2(1，2)-吡咯烷环壬烷-8-酮
Figure PCTCN2019092653-appb-000021
第一步
(2-((5-氟-3-((2R，4S)-4-氟-1-(3-硝基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)吡咯烷-2-基)吡啶-2-基)氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯3b
将化合物(2-((5-氟-3-((2R，4S)-4-氟-1-(3-硝基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)吡咯烷-2-基)吡啶-2-基)氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯2b(20mg，0.14mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(2mL)中，向其中加入钠氢(12mg，0.3mmol，60％，矿物油分散)，室温条件下搅拌10分钟。加入碘甲烷3a(42mg，0.3mmol)并在室温条件下搅拌30分钟。加入乙酸乙酯(10mL×3)萃取，水洗(10mL×3)，有机相用无水硫酸钠干燥，减压脱溶，得到(2-((5-氟-3-((2R，4S)-4-氟-1-(3-硝基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)吡咯烷-2-基)吡啶-2-基)氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯3b(61mg，0.12mmol，黄色固体)。产物不经纯化直接用于下一步反应；
MS m/z(ESI)：520[M+1]；
第二步
(2-((5-氟-3-((2R，4S)-4-氟-1-(3-胺基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)吡咯烷 -2-基)吡啶-2-基)氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯3c
将化合物(2-((5-氟-3-((2R，4S)-4-氟-1-(3-硝基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)吡咯烷-2-基)吡啶-2-基)氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯3b(60mg，0.12mmol)，二氯甲烷(2.0mL)，甲醇(2.0mL)，饱和氯化铵水溶液(4.0mL)和锌粉(0.13g，2.00mmol)混合，室温搅拌30分钟。加入二氯甲烷(30mL×2)萃取，有机相用水洗(30mL×3)，无水硫酸钠干燥，减压脱溶，得到目标化合物(2-((5-氟-3-((2R，4S)-4-氟-1-(3-胺基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)吡咯烷-2-基)吡啶-2-基)氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯3c(60mg，0.12mmol，黄色固体)，粗品。
MS m/z(ESI)：490[M+1]；
1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ8.03-8.02(m，1H)，7.82-7.78(m，1H)，7.56(s，1H)，7.11-7.08(m，1H)，5.72-5.67(m，1H)，5.31-5.22(m，2H)，4.15-3.48(m，6H)，2.88(s，3H)，2.82-2.78(m，1H)，2.18-2.13(m，1H)，1.25(s，9H)；
第三步
5-((2R，4S)-4-氟-2-(5-氟-2-(2-(甲基氨基)乙氧基)吡啶-3-基)吡咯烷-1-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-胺三氟乙酸盐3d
将化合物(2-((5-氟-3-((2R，4S)-4-氟-1-(3-胺基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)吡咯烷-2-基)吡啶-2-基)氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯3c(60mg，0.12mmol)溶于二氯甲烷(1.0mL)，加入三氟乙酸(1.0mL)，室温搅拌1小时。反应液减压脱溶，得到目标化合物5-((2R，4S)-4-氟-2-(5-氟-2-(2-(甲基氨基)乙氧基)吡啶-3-基)吡咯烷-1-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-胺三氟乙酸盐3d(40mg，0.10mmol，黄色固体)，粗品；
MS m/z(ESI)：390[M+1]；
第四步
(2 2R，2 4S)-2 4，3 5-二氟-7-甲基-4-氧杂-7，9-二氮杂-1(5，3)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3(3，2)-吡啶-2(1，2)-吡咯烷环壬烷-8-酮3
将化合物5-((2R，4S)-4-氟-2-(5-氟-2-(2-(甲基氨基)乙氧基)吡啶-3-基)吡咯烷-1-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-胺三氟乙酸盐3d(40mg，0.10mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(1mL)，加入三乙胺(0.2mL)和N，N′-羰基二咪唑(16mg，0.10mmol)，室温中搅拌1小时。反应液以乙酸乙酯(50mL×3)萃取，饱和氯化钠溶液(50mL×3)洗涤，有 机相减压脱溶，制备硅胶板纯化(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)得到目标化合物(2 2R，2 4S)-2 4，3 5-二氟-7-甲基-4-氧杂-7，9-二氮杂-1(5，3)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3(3，2)-吡啶-2(1，2)-吡咯烷环壬烷-8-酮3(6.7mg，白色固体)，产率：21％；
MS m/z(ESI)：416[M+1]；
1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ8.22(d，J＝7.6Hz，1H)，7.82-7.80(m，2H)，7.16-7.14(m，1H)，6.14(d，J＝7.6Hz，1H)，5.74-5.52(m，3H)，4.15-3.48(m，6H)，3.08(s，3H)，2.82-2.78(m，1H)，2.27-2.23(m，1H)。
实施例4
(2 2R，5S)-3 5-氟-5-甲基-4-氧杂-8，10-二氮杂-1(5，3)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3(3，2)-吡啶-2(1，2)-吡咯烷环癸烷-9-酮4
Figure PCTCN2019092653-appb-000022
第一步
(R)-3-羟基丁基-4-甲基苯磺酸酯4g-2
将(3R)-1，3-丁二醇4g-1(2.00g，22.22mmol)溶解于20mL二氯甲烷中，加入三乙胺(3.37g，33.33mmol)，然后在-20℃缓慢加入对甲基苯磺酰氯(4.46g，23.33mmol)，加完后室温搅拌反应16小时。加水50mL稀释，用二氯甲烷(30mL×3)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤(30mL×3)，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，残余物用柱层析纯化(石油醚∶乙酸乙酯＝100∶0～1∶1)，得到(R)-3-羟基丁基-4-甲基苯磺酸酯4g-2(3.80g，黄色液体)，产率：70％；
1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ7.87-7.76(m，2H)，7.44-7.30(m，2H)，4.33-4.16(m，1H)，4.15-4.07(m，1H)，4.03-3.88(m，1H)，2.45(s，3H)，1.90-1.78(m，1H)，1.76-1.63(m，1H)，1.22(d，J＝5.2Hz，3H)；
第二步
(R)-4-氨基丁烷-2-醇4g-3
将(R)-3-羟基丁基-4-甲基苯磺酸酯4g-2(3.50g，14.34mmol)溶解于氨水(25％，50mL)中，100℃搅拌反应3h。冷却到室温，浓缩得到(R)-4-氨基丁烷-2-醇4g-3(1.28g，14.34mmol)粗品；
MS m/z(ESI)：90[M+1]；
第三步
(R)-(3-羟基丁基)氨基甲酸叔丁酯4g-4
将(R)-4-氨基丁烷-2-醇4g-3(1.28g，14.34mmol)溶解于30mL四氢呋喃中，加入三乙胺(2.20g，21.51mmol)，然后缓慢加入二碳酸二叔丁酯(3.30g，15.06mmol)，加完后室温搅拌反应1小时。反应结束后直接旋干，得到(R)-(3-羟基丁基)氨基甲酸叔丁酯4g-4(2.71g，无色液体)，粗品；
1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ4.95-4.82(m，1H)，3.93-3.76(m，1H)，3.55-3.34(m，1H)，3.21-2.97(m，2H)，1.68-1.48(m，2H)，1.44(s，9H)，1.23(d，J＝5.2Hz，3H)；
第四步
(R)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁烷-2-基-4-甲基苯磺酸酯4g
将(R)-(3-羟基丁基)氨基甲酸叔丁酯4g-4(0.38g，2.01mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)中，加入三乙胺(0.30g，3.01mmol)，对甲 苯磺酰氯(0.36g，1.91mmol)和N，N-二甲基-4-氨基吡啶(25mg，0.20mmol)，加完后30℃搅拌反应18h。反应液加50mL二氯甲烷稀释，混合物用饱和食盐水洗涤(30mL×3)，无水硫酸钠干燥，残余物用柱层析纯化(石油醚∶乙酸乙酯＝100∶0～65∶35)，得到(R)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁烷-2-基-4-甲基苯磺酸酯4g(0.10g，黄色油状物)，产率15％；
MS m/z(ESI)：366[M+Na]；
第五步
(R)-N-((5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)亚甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺4b
将5-氟-2-甲氧基吡啶3-甲醛4a(10.00g，64.5mmol)溶解在二氯甲烷(120mL)中，依次加入碳酸铯(42.00g，129.00mmol)和(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(8.26g，67.70mmol)，加完后30℃下反应4小时。反应结束后过滤，滤液直接旋干得到(R)-N-((5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)亚甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺4b(17.50g，黄色油)，不经过进一步提纯直接投下一步；
MS m/z(ESI)：259[M+1]；
1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ8.88(s，1H)，8.16(s，1H)，7.98(d，J＝8.0Hz，1H)，4.01(s，3H)，1.27(s，9H)；
第六步
(R)-N-((R)-3-(1，3-二噁烷-2-基)-1-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)丙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺4c
将镁屑(3.30g，136.00mmol)溶解在干燥的四氢呋喃(200mL)中，加入二异丁基氢化铝(0.3mL，1M四氢呋喃溶液)，在50℃搅拌15分钟，然后2-(2-溴乙基)-1，3-二噁烷(26.50g，60mmol)的四氢呋喃(50mL)溶液滴加上面溶液中，在50℃搅拌1小时。反应液冷却到-40℃，滴加(R)-N-((5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)亚甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺4b(17.50g，68.00mmol)的四氢呋喃(50mL)溶液，在-40℃搅拌1小时。慢慢回到室温，搅拌1小时，用柠檬酸水溶液(10％)淬灭，甲基叔丁基醚(400mL)萃取，有机相用饱和碳酸氢钠水溶液和水洗涤，干燥过滤，旋干得到(R)-N-((R)-3-(1，3-二噁烷-2-基)-1-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)丙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺4c(20.0 g，白色固体)，产率79％；
MS m/z(ESI)：375[M+1]；
1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ7.89(s，1H)，7.30(d，J＝8.0Hz，1H)，4.52-4.50(m，1H)，4.35-4.33(m，1H)，4.18-4.16(m，1H)，4.10-4.08(m，2H)，3.95(s，3H)，3.77-3.70(m，2H)，2.07-2.04(m，2H)，1.90-1.85(m，1H)，1.73-1.69(m，1H)，1.55-1.52(m，1H)，1.35-1.32(m，1H)，1.21(s，9H)；
第七步
(R)-5-氟-2-甲氧基-3-(吡咯烷-2-基)吡啶4d
将(R)-N-((R)-3-(1，3-二噁烷-2-基)-1-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)丙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺4c(20.00g，53.48mmol)溶解在三氟乙酸(100mL)和水(10mL)中，在20℃下搅拌1小时。然后三乙基硅烷(80mL)加到上述混合液，在20℃搅拌16小时，蒸干溶剂，残余物溶于水(300mL)，用甲基叔丁醚(300mL)萃取。水相用40％的氢氧化钠水溶液调pH大约到13，用二氯甲烷(200×3)萃取，有机相用食盐水(100mL)洗，无水Na 2SO 4干燥过滤，旋干得到(R)-5-氟-2-甲氧基-3-(吡咯烷-2-基)吡啶4d(9.00g，亮黄色油)，产率86％；
MS m/z(ESI)：197[M+1]；
1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ7.83(s，1H)，7.57(d，J＝8.8Hz，1H)，4.31-4.29(m，1H)，3.93(s，3H)，3.15-3.11(m，1H)，3.07-3.00(m，1H)，2.28-2.25(m，1H)，1.85-1.80(m，2H)，1.57-1.55(m，1H)；
第八步
(R)-5-氟-3-(吡咯烷-2-基)吡啶-2-酚4e
将(R)-5-氟-2-甲氧基-3-(吡咯烷-2-基)吡啶4d(1.20g，11.0mmol)溶解在乙腈(20mL)中，加入碘化钾(3.70g，44.0mmol)，然后滴加三甲基氯硅烷(2.30g，22.0mmol)，在50℃下搅拌24小时。过滤，滤液浓缩得固体，用二氯甲烷∶甲醇＝5∶1洗涤，过滤，滤液旋干得到(R)-5-氟-3-(吡咯烷-2-基)吡啶-2-酚4e(1.6g，粗产物，黄色固体)；
MS m/z(ESI)：183[M+1]；
1H NMR(400MHz，DMSO-d 6)δ9.23(s，1H)，8.61(s，1H)，7.83-7.81(m，1H)，7.76(d，J＝2.0Hz，1H)，4.48-4.44(m，1H)，3.25-3.17(m，2H)，2.22-2.18(m，1H)，2.09-2.07(m，2H)，1.93-1.91(m，1H)；
第九步
(R)-5-氟-3-(1-(3-硝基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)吡咯烷-2-基)吡啶-2-酚4f
参照实施例1的第一步，用(R)-5-氟-3-(吡咯烷-2-基)吡啶-2-酚4e代替5-氟-3-((2R，4S)-4-氟吡咯烷-2-基)吡啶-2-酚盐酸盐INT1得到目标产物(R)-5-氟-3-(1-(3-硝基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)吡咯烷-2-基)吡啶-2-酚4f；
MS m/z(ESI)：345[M+1]；
1H NMR(400MHz，DMSO-d 6)δ8.82(d，J＝8.0Hz，0.44H)，8.64(d，J＝8.0Hz，0.56H)，8.63(s，0.56H)，8.56(s，0.44H)，7.56-7.55(m，0.56H)，7.45-7.44(m，0.44H)，7.29-7.27(m，1H)，6.75(d，J＝8.0Hz，0.44H)，6.14(d，J＝8.0Hz，0.56H)，5.40(d，J＝8.0Hz，0.44H)，5.07(d，J＝8.0Hz，0.56H)，4.05-3.95(m，2H)，3.81-3.75(m，1H)，3.62-3.55(m，1H)，2.41-2.35(m，1H)，2.26-2.15(m，1H)，1.95-1.90(m，1H)；
第十步
((S)-3-((5-氟-3-((R)-1-(3-硝基-6，7-二氢吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)吡咯烷-2-基)吡啶-2-基)氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯4h
参照实施例1的第二步，用(R)-5-氟-3-(1-(3-硝基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)吡咯烷-2-基)吡啶-2-酚4f代替5-氟-3-((2R，4S)-4-氟-1-(3-硝基吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)吡咯烷-2-基)吡啶-2-酚1b得到目标产物((S)-3-((5-氟-3-((R)-1-(3-硝基-6，7-二氢吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)吡咯烷-2-基)吡啶-2-基)氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯4h；
MS m/z(ESI)：516[M+1]；
第十一步
((S)-3-((5-氟-3-((R)-1-(3胺基-6，7-二氢吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)吡咯烷-2-基)吡啶-2-基)氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯
参照实施例1的第三步，用((S)-3-((5-氟-3-((R)-1-(3-硝基-6，7-二氢吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)吡咯烷-2-基)吡啶-2-基)氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯4h代替((S)-2-((5-氟-3-((2R，4S)-4-氟-1-(3-硝基吡唑[1，5-a]嘧啶-5-基)吡咯烷-2-基)吡啶-2-基)氧基)异丙基)氨基甲酸叔丁酯1c得到目标产物((S)-3-((5-氟-3-((R)-1-(3胺基-6，7-二氢吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)吡咯烷-2-基)吡啶-2-基)氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯4i；
MS m/z(ESI)：488[M+1]；
第十二步
5-((R)-2-(2-(((S)-4-氨基丁烷-2-基)氧代)-5-氟吡啶-3-基)吡咯烷-1-基)-6，7-二氢吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-胺三氟乙酸盐4j
参照实施例1的第四步，用((S)-3-((5-氟-3-((R)-1-(3胺基-6，7-二氢吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基)吡咯烷-2-基)吡啶-2-基)氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯4i代替((S)-2-((5-氟-3-((2R，4S)-4-氟-1-(3-胺基吡唑[1，5-a]嘧啶-5-基)吡咯烷-2-基)吡啶-2-基)氧基)异丙基)氨基甲酸叔丁酯1d得到目标产物5-((R)-2-(2-(((S)-4-氨基丁烷-2-基)氧代)-5-氟吡啶-3-基)吡咯烷-1-基)-6，7-二氢吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-胺三氟乙酸盐4j；
MS m/z(ESI)：386[M+1]；
第十三步
(2 2R，5S)-3 5-氟-5-甲基-4-氧杂-8，10-二氮杂-1(5，3)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3(3，2)-吡啶-2(1，2)-吡咯烷环癸烷-9-酮4
参照实施例1的第五步，用5-((R)-2-(2-(((S)-4-氨基丁烷-2-基)氧代)-5-氟吡啶-3-基)吡咯烷-1-基)-6，7-二氢吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-胺三氟乙酸盐4j代替5-((2R，4S)-2-(2-(((S)-1-氨基丙烷-2-基)氧代)-5-氟吡啶-3-基)-4-氟吡咯烷-1-基)吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-胺1e得到目标产物(2 2R，5S)-3 5-氟-5-甲基-4-氧杂-8，10-二氮杂-1(5，3)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3(3，2)-吡啶-2(1，2)-吡咯烷环癸烷-9-酮4(11.8mg，0.031mmol，浅黄色固体)；产率：31％；
MS m/z(ESI)：412[M+1]；
1H NMR(400MHz，CDCl 3)δ8.18(d，J＝7.8Hz，1H)，7.93-7.82(m，1H)，7.53(s，1H)，7.04-6.95(m，1H)，6.21(d，J＝7.8Hz，1H)，5.83(s，1H)，5.41-5.23(m，2H)，4.00-3.84(m，1H)，3.76-3.60(m，1H)，3.57-3.45(m，1H)，3.29-3.16(m，1H)，2.56-2.35(m，2H)，2.32-2.13(m，2H)，2.09-1.97(m，1H)，1.96-1.82(m，2H)，1.50(d，J＝5.2Hz，3H)。
生物学实验
TRKA的活性抑制测试
使用体外激酶检测实验评估本发明的化合物对TRKA活性的影响实验方法概述如下：
使用均相时间分辨荧光(HTRF)激酶检测试剂盒(Cisbio，货号62TK0PEC)，通过检测激酶反应中底物的磷酸化水平来测定TRKA的 体外活性。反应缓冲液包含以下组分：试剂盒自带酶反应缓冲液(1×)、5mM MgCl 2、1mM DTT；人源重组TRKA蛋白委托清华大学蛋白纯化和鉴定平台表达纯化，用反应缓冲液稀释成3ng/μl的激酶溶液；底物反应溶液包括用反应缓冲液稀释成0.23μM生物素标记的酪氨酸激酶底物和8.4μM ATP；检测缓冲液包括用反应缓冲液稀释成0.1ng/μl Eu3+标记的笼状抗体和14.375nM链霉亲和素标记的XL665。
将化合物在100％DMSO中溶解稀释至100或10μM，然后用DMSO进行4倍的系列稀释至最低浓度为6.1或0.61nM，每个浓度点再使用反应缓冲液稀释40倍。
向384孔检测板(Corning，货号4512)中添加4μl化合物溶液和2μl TRKA激酶溶液，混合均匀后室温孵育15分钟。随后加入4μl底物反应溶液，将反应混合物在室温孵育60分钟。随后加入与反应等体积的10μl检测缓冲液，混合均匀并在室温条件下静置30分钟后，用Envision读板机(Perkin Elmer)在620nm和665nm波长下检测反应进程。665/620的比值与底物的磷酸化程度呈正相关性，从而检测出TRKA激酶的活性。该实验中，未加TRKA激酶蛋白组作为阴性对照(100％抑制)，加TRKA激酶蛋白但是未加化合物组作为阳性对照(0％抑制)。化合物对TRKA活性抑制百分比可以用以下公式计算：
化合物IC50值由8个浓度点用XLfit(ID Business Solutions Ltd.，UK)软件通过以下公式计算：
Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((logIC50-X)*slope factor))
其中Y为抑制百分比，X为待测化合物浓度的对数值，Bottom为最大抑制百分比，Top为最小抑制百分比，slope factor为曲线斜率系数。
TRKA G595R的活性抑制测试
使用体外激酶检测实验评估本发明的化合物对TRKA G595R活性的影响
实验方法概述如下：
使用HTRF激酶检测试剂盒(Cisbio，货号62TK0PEC)，通过检测激酶反应中底物的磷酸化水平来测定TRKA G595R的体外活性。反应缓冲液包含以下组分：试剂盒自带酶反应缓冲液(1×)、5mM MgCl 2、1mM DTT；人源重组TRKA G595R蛋白(货号N16-12BG)购自SignalChem Lifesciences)，用反应缓冲液稀释成0.25ng/μl的激酶溶 液；底物反应溶液包括用反应缓冲液稀释成0.51μM生物素标记的酪氨酸激酶底物和2.9μM ATP；检测缓冲液包括用反应缓冲液稀释成0.15ng/μl Eu3+标记的笼状抗体和31.875nM链霉亲和素标记的XL665。
将化合物在100％DMSO中溶解稀释至1mM或100μM，然后用DMSO进行4倍的系列稀释至最低浓度为61或6.1nM，每个浓度点再使用反应缓冲液稀释40倍。
向384孔检测板(Corning，货号4512)中添加4μl化合物溶液和2μl TRKA G595R激酶溶液，混合均匀后室温孵育15分钟。随后加入4μl底物反应溶液，将反应混合物在室温孵育60分钟。随后加入与反应等体积的10μl检测缓冲液，混合均匀并在室温条件下静置30分钟后，用Envision读板机(Perkin Elmer)在620nm和665nm波长下检测反应进程。665/620的比值与底物的磷酸化程度呈正相关性，从而检测出TRKA G595R激酶的活性。该实验中，未加TRKA G595R激酶蛋白组作为阴性对照(100％抑制)，加TRKA G595R激酶蛋白但是未加化合物组作为阳性对照(0％抑制)。化合物对TRKA G595R活性抑制百分比可以用以下公式计算：
抑制百分比＝100-100*(待测化合物特定浓度下信号值-阴性对照信号值)/(阳性对照信号值-阴性对照信号值)
化合物IC50值由8个浓度点用XLfit(ID Business Solutions Ltd.，UK)软件通过以下公式计算：
Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((logIC50-X)*slope factor))
其中Y为抑制百分比，X为待测化合物浓度的对数值，Bottom为最大抑制百分比，Top为最小抑制百分比，slope factor为曲线斜率系数。
TRKA G667C的活性抑制测试
使用体外激酶检测实验评估本发明的化合物对TRKA G667C活性的影响
实验方法概述如下：
使用HTRF激酶检测试剂盒(Cisbio，货号62TK0PEC)，通过检测激酶反应中底物的磷酸化水平来测定TRKA G667C的体外活性。反应缓冲液包含以下组分：试剂盒自带酶反应缓冲液(1×)、5mM MgCl 2、1mM DTT；人源重组TRKA G667C蛋白(货号N16-12CG购自SignalChem Lifesciences)，用反应缓冲液稀释成0.09ng/μl的激酶溶 液；底物反应溶液包括用反应缓冲液稀释成0.21μM生物素标记的酪氨酸激酶底物和2.7μM ATP；检测缓冲液包括用反应缓冲液稀释成0.1ng/μl Eu3+标记的笼状抗体和13.125nM链霉亲和素标记的XL665。
将化合物在100％DMSO中溶解稀释至200μM，然后用DMSO进行4倍的系列稀释至最低浓度为12.2nM，每个浓度点再使用反应缓冲液稀释40倍。
向384孔检测板(Corning，货号4512)中添加4μl化合物溶液和2μl TRKA G667C激酶溶液，混合均匀后室温孵育15分钟。随后加入4μl底物反应溶液，将反应混合物在室温孵育60分钟。随后加入与反应等体积的10μl检测缓冲液，混合均匀并在室温条件下静置30分钟后，用Envision读板机(Perkin Elmer)在620nm和665nm波长下检测反应进程。665/620的比值与底物的磷酸化程度呈正相关性，从而检测出TRKA G667C激酶的活性。该实验中，未加TRKA G667C激酶蛋白组作为阴性对照(100％抑制)，加TRKA G667C激酶蛋白但是未加化合物组作为阳性对照(0％抑制)。化合物对TRKA G667C活性抑制百分比可以用以下公式计算：
抑制百分比＝100-100*(待测化合物特定浓度下信号值-阴性对照信号值)/(阳性对照信号值-阴性对照信号值)
化合物IC50值由8个浓度点用XLfit(ID Business Solutions Ltd.，UK)软件通过以下公式计算：
Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((logIC50-X)*slope factor))
其中Y为抑制百分比，X为待测化合物浓度的对数值，Bottom为最大抑制百分比，Top为最小抑制百分比，slope factor为曲线斜率系数。
KM12细胞半数有效抑制浓度GI50的测定
使用发光细胞活力测试实验评估本发明的化合物对KM12细胞增殖的影响。
实验方法概述如下：
使用CellTilter-Glo(CTG)检测试剂盒，通过采用一种独特的、稳定性荧光素酶检测有活力细胞代谢的指示剂ATP，试验中产生的发光信号和培养基中的有活力细胞数呈正比，从而检测KM12的细胞增殖状况。
KM12 cell(购自上海信裕生物公司)培养在IMDM完全培养基 (Thermofisher，12440053)中含10％FBS(GBICO，10099-141)和100units/mL青链霉素混合液(Thermofisher，15140122)，当细胞在培养容器中覆盖率达80-90％时，用0.25％胰酶(含EDTA)(Thermofisher，25200056)消化吹散后种植于白色384孔板(Thermofisher，164610)，每孔加27μl IMDM完全培养基，其中含1000细胞，然后将384孔板置于含5％CO 2的培养箱中37℃培养过夜。化合物在100％DMSO中溶解并稀释至1mM，之后用DMSO进行4倍的系列稀释至最低浓度为0.061μM，每个浓度点再使用IMDM培养基稀释50倍。如果化合物IC 50值非常低，可以降低化合物的起始浓度。每孔加入3μl稀释后的化合物，轻轻离心混匀。其中，不加细胞的培养基作为阴性对照(100％抑制)，加0.2％DMSO组作为阳性对照(0％抑制)。该384孔板置于37℃，5％CO 2的培养箱中继续培养，96小时后取出于室温放置30分钟，CTG试剂也取出平衡至室温，每孔加15μl CTG试剂，置于摇床上轻轻摇动5分钟以确保细胞裂解充分，放置10分钟使冷光信号稳定，然后用EnVision(Perkin Elmer)读取冷光信号。另外为矫正细胞数，同时设置T 0对照，包括仅含培养基的空白对照和加细胞的对照，两者的差值设为T 0对照，在加药前通过加CTG试剂检测获得。
化合物对KM12细胞增殖抑制的百分比可以用以下公式计算：
抑制百分比＝100-100*{[(signal 化合物-Signal 阴性对照)-T 0对照]/[(signal 阳性对 照-Signal 阴性对照)-T 0对照]}
化合物IC 50值由8个浓度点用XLfit(ID Business Solutions Ltd.，UK)软件通过以下公式计算：
Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC 50-X)*slope factor))
其中Y为抑制百分比，Bottom为the bottom plateau of the curve(S型曲线的底部平台值)，Top为the top plateau of the curve(S型曲线的顶部平台值)，X为待测化合物浓度的对数值。
生物实验的结果见下表1.
Figure PCTCN2019092653-appb-000023
注：ND＝未测定。
由上述实验结果可知，本发明的实施例化合物能够有效抑制TRKA以及G595R和G667C突变的TRKA激酶的活性，，可以用于治疗由NTRK基因融合导致的多种癌症：例如胶质瘤、肝胆管型肝癌、乳头状甲状腺癌、结肠癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、胰腺癌、肉瘤和黑色素瘤(Khotskaya，Y.B.et al.Pharmacology&Therapeutics，2017，173，58-66)。部分化合物也能有效抑制KM12结肠癌细胞增殖。对NTRK基因融合导致结肠癌有较强的抑制疗效。
对于本领域技术人员来说，很明显，本公开不局限于上述说明性的实施例，并且在不背离本公开实质特性的条件下，其可以通过其它具体形式来具体实施。因此，期望在各方面都认为这些实施例是说明性的和非限制性的，应参照的是附加的权利要求，而不是上述实施例，且由此在权利要求的等效含义和范围内的所有变化都被包括在其中。

Claims (10)

  1. 一种如式I所示的化合物、其异构体、前药、溶剂合物、稳定的同位素衍生物或其药学上可接受的盐：
    Figure PCTCN2019092653-appb-100001
    其中：
    L 1选自-NR 6C(O)-、-NR 6CON(R 7)-、-NR 6S(O) m-和-NR 6S(O) mN(R 7)-，其中NR 6与所述被R 1、R 2、R 3取代的含氮杂芳基连接，优选地，L 1选自-NR 6C(O)-和-NR 6CON(R 7)-，其中NR 6与所述被R 1、R 2、R 3取代的含氮杂芳基连接；L 1最优选选自NR 6CON(R 7)-，其中NR 6与所述被R 1、R 2、R 3取代的含氮杂芳基连接；
    L 2选自C1-C8亚烷基、C2-C8亚烯基、C2-C8亚炔基和C3-C8亚环基，其中所述亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚环基任选可被一个或多个G1所取代，L 2优选选自任选被一个或多个G1所取代的C1-C6亚烷基和C2-C6亚烯基，L 2更优选选自任选被一个或多个G1所取代的C1-C4亚烷基；
    L 3选自化学单键、-O-和-N(R x)-，L 3优选选自化学单键和-O-，L 3最优选选自-O-；
    R 1、R 2、R 3各自独立选自氢、卤素、氰基、C1-C8烷基、C3-C8环基、3-8元杂环基、芳基、杂芳基、醛基、-NR 8R 9、-C(O)R 10、羧基、烯基、炔基、-OR 10、-OC(O)NR 8R 9、-C(O)OR 10、-C(O)NR 8R 9、-NR 11C(O)R 10、-NR 11C(O)NR 8R 9、-S(O)mR 10、-NR 11S(O)mR 10、-SR 10、-S(O)mNR 8R 9和-NR 11S(O)mNR 8R 9，其中所述烷基、环基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个选自卤素、氰基、C1-C8烷基、C3-C8环基、3-8元杂环基、-OR 12、-NR 13R 14、-OC(O)NR 13R 14、-C(O)OR 12、-C(O)R 12、-C(O)NR 13R 14、-NR 15C(O)R 12、-NR 15C(O)NR 13R 14、-S(O)mR 12、-NR 15S(O)mR 12、-SR 12、-S(O)mNR 13R 14和-NR 15S(O)mNR 13R 14的取代基 所取代，优选R 2、R 3均为氢；更优选R 1、R 2、R 3均为氢；
    R 4选自氢、卤素、氰基、C1-C8烷基、C3-C8环基、3-8元杂环基、芳基、杂芳基、醛基、-C(O)R 10、羧基、烯基、炔基、-OR 10、-NR 8R 9-OC(O)NR 8R 9、-C(O)OR 10、-C(O)NR 8R 9、-NR 8C(O)R 10、-NR 10C(O)NR 8R 9、-S(O)mR 10、-NR 8S(O)mR 10、-SR 10、-S(O)mNR 8R 9和-NR 10S(O)mNR 8R 9，优选R 4选自氢、卤素，更优选R 4为氢或氟；
    R 5选自氢、卤素、氰基、C1-C8烷基、C3-C8环基、3-8元杂环基、芳基、杂芳基、醛基、-C(O)R 10、羧基、烯基、炔基、-OR 10、-NR 8R 9-OC(O)NR 8R 9、-C(O)OR 10、-C(O)NR 8R 9、-NR 8C(O)R 10、-NR 10C(O)NR 8R 9、-S(O)mR 10、-NR 8S(O)mR 10、-SR 10、-S(O)mNR 8R 9和-NR 10S(O)mNR 8R 9，优选R 5选自氢、卤素、C1-C6烷基和C3-C6环基，更优选R 5选自氢、卤素、C1-C4烷基和C3-C6环基，进一步优选R 5选自氢和卤素，最优选R 5选自氟；
    R 6、R 7、R x各自独立地选自氢、C1-C8烷基、C1-C8卤代烷基、杂烷基、C3-C8环基、3-8元单环杂环基、单环杂芳基、单环芳基、烯基和炔基，优选R 6、R 7、R x各自独立地选自氢、C1-C6烷基和C1-C6卤代烷基，进一步优选R 6、R 7、R x各自独立地选自氢、C1-C4烷基和C1-C4卤代烷基，更进一步优选R 6、R 7、Rx各自独立地选自氢和C1-C4烷基；
    G1选自卤素、氰基、C1-C8烷基、C3-C8环基、3-8元杂环基、芳基、杂芳基、醛基、-NR 8R 9、-C(O)R 10、羧基、烯基、炔基、-OR 10、-OC(O)NR 8R 9、-C(O)OR 10、-C(O)NR 8R 9、-NR 11C(O)R 10、-NR 11C(O)NR 8R 9、-S(O)mR 10、-NR 11S(O)mR 10、-SR 10、-S(O)mNR 8R 9和-NR 11S(O)mNR 8R 9，优选G1选自卤素、C1-C6烷基、-OR 10、-NR 8R 9，更优选G1选自卤素、C1-C4烷基、-OR 10、-NR 8R 9，其中所述烷基任选被一个或多个选自卤素、-OR 16、-NR 13R 14的取代基所取代；当两个G1位于同一个碳原子上或者相邻碳原子上时，这两个G1任选与其连接的碳原子一起形成3-8元环基，优选形成3-6元环烷基，所形成的环烷基任选被一个或多个选自卤素，OR 16、-NR 13R 14的取代基所取代；
    R 8、R 9、R 10、R 11、R 12、R 13、R 14、R 15、R 16各自独立地选自氢、C1-C8烷基、C1-C8卤代烷基、杂烷基、C3-C8环基、3-8元单环杂环基、单环杂芳基、单环芳基、烯基和炔基；R 8和R 9、R 13和R 14可以形 成3-7元的杂环基；
    且m为1或2；
    其中所述化合物不包括下列化合物(1)至(7)：
    Figure PCTCN2019092653-appb-100002
  2. 根据权利要求1的化合物、其异构体、前药、溶剂合物、稳定的同位素衍生物或其药学上可接受的盐，
    其中：
    L 1选自-NR 6C(O)-、-NR 6CON(R 7)-、-NR 6S(O) m-和-NR 6S(O) mN(R 7)-，其中NR 6与所述被R 1、R 2、R 3取代的含氮杂芳基连接；
    L 2选自C1-C6亚烷基、C2-C6亚烯基、C2-C6亚炔基和C3-C6亚环基，其中所述亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚环基任选可被一个或多个G1所取代；
    L 3选自化学单键和-O-；
    R 1、R 2、R 3各自独立选自氢、卤素、C1-C6烷基、C3-C6环基、3-6元杂环基、芳基和杂芳基，其中所述烷基、环基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个选自卤素、氰基、C1-C6烷基、C3-C6环基和3-6元杂环基的取代基所取代；
    R 4选自氢、卤素、-NR 8R 9、-OR 10；
    R 5选自氢、卤素、C1-C6烷基和C3-C6环基；
    R 6、R 7各自独立地选自氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基；
    G1选自卤素、C1-C6烷基、-NR 8R 9、-OR 10，其中所述烷基任选被 一个或多个选自卤素、-NR 11R 12、-OR 16的取代基所取代；
    R 8、R 9、R 10、R 11、R 12和R 16各自独立地选自氢、C1-C6烷基和C1-C6卤代烷基；
    且m为1或2；
    其中所述化合物不包括下列化合物(1)至(7)：
    Figure PCTCN2019092653-appb-100003
  3. 根据权利要求1的化合物、其异构体、前药、溶剂合物、稳定的同位素衍生物或其药学上可接受的盐，
    其中：
    L 1选自-NR 6C(O)-和-NR 6CON(R 7)-，其中NR 6与所述被R 1、R 2、R 3取代的含氮杂芳基连接；
    L 2选自C1-C6亚烷基、C2-C6亚烯基、C2-C6亚炔基和C3-C6亚环基，其中所述亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚环基任选可被一个或多个G1所取代；
    L 3选自化学单键和-O-；
    R 1、R 2、R 3各自独立选自氢、卤素、C1-C4烷基、C4-C6环基和4-6元杂环基，其中所述烷基、环基和杂环基任选被一个或多个选自卤素的取代基所取代；
    R 4选自氢、卤素、-NR 8R 9、-OR 10；
    R 5选自氢、卤素、C1-C6烷基和C3-C6环基；
    R 6、R 7各自独立地选自氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基；
    G1选自卤素、C1-C6烷基、-NR 8R 9、-OR 10，其中所述烷基任选被一个或多个选自卤素、-NR 11R 12、-OR 16的取代基所取代；
    R 8、R 9、R 10、R 11、R 12和R 16各自独立地选自氢、C1-C6烷基和C1-C6卤代烷基；
    其中所述化合物不包括下列化合物(1)至(7)：
    Figure PCTCN2019092653-appb-100004
  4. 根据权利要求1的化合物、其异构体、前药、溶剂合物、稳定的同位素衍生物或其药学上可接受的盐，
    其中：
    L 1选自-NR 6CON(R 7)-，其中NR 6与所述被R 1、R 2、R 3取代的含氮杂芳基连接；
    L 2选自C1-C4亚烷基、C2-C4亚烯基、C2-C4亚炔基和C3-C4亚环基，其中所述亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚环基任选可被一个或多个G1所取代；
    L 3选自化学单键和-O-；
    R 1、R 2、R 3各自独立地选自氢、卤素和C1-C4烷基，其中所述烷基任选被一个或多个选自卤素的取代基所取代；
    R 4选自氢、卤素、-NR 8R 9、-OR 10；
    R 5选自氢、卤素、C1-C6烷基和C3-C6环基；
    R 6、R 7各自独立地选自氢、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基；
    G1选自卤素、C1-C6烷基、-NR 8R 9、-OR 10，其中所述烷基任选被 一个或多个选自卤素、-NR 11R 12、-OR 16的取代基所取代；
    R 8、R 9、R 10、R 11、R 12和R 16各自独立地选自氢、C1-C6烷基和C1-C6卤代烷基；
    其中所述化合物不包括下列化合物(1)至(5)：
    Figure PCTCN2019092653-appb-100005
  5. 根据权利要求1的化合物、其异构体、前药、溶剂合物、稳定的同位素衍生物或其药学上可接受的盐，
    其中：
    L 1选自-NR 6CON(R 7)-，其中NR 6与所述被R 1、R 2、R 3取代的含氮杂芳基连接；
    L 2选自C1-C4亚烷基和C2-C4亚烯基，其中所述亚烷基和亚烯基任选可被一个或多个G1所取代；
    L 3选自化学单键和-O-；
    R 1、R 2、R 3各自独立地选自氢、卤素和C1-C4烷基，其中所述烷基任选被一个或多个选自卤素的取代基所取代；
    R 4选自氢、卤素、-NR 8R 9、-OR 10；
    R 5选自氢、卤素、C1-C4烷基和C3-C6环基；
    R 6、R 7各自独立地选自氢、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基；
    G1选自卤素、C1-C4烷基、-NR 8R 9、-OR 10，其中所述烷基任选被一个或多个选自卤素、-NR 11R 12、-OR 16的取代基所取代；
    R 8、R 9、R 10、R 11、R 12和R 16各自独立地选自氢、C1-C4烷基和 C1-C4卤代烷基；
    其中所述化合物不包括下列化合物(1)至(5)：
    Figure PCTCN2019092653-appb-100006
  6. 根据权利要求1的化合物、其异构体、前药、溶剂合物、稳定的同位素衍生物或其药学上可接受的盐，
    其中：
    L 1选自-NR 6CON(R 7)-，其中NR 6与所述被R 1、R 2、R 3取代的含氮杂芳基连接；
    L 2选自C1-C4亚烷基，其中所述亚烷基任选可被一个或多个G1所取代；
    L 3选自-O-；
    R 1、R 2、R 3各自独立地选自氢、卤素和C1-C4烷基，其中所述烷基任选被一个或多个选自卤素的取代基所取代；
    R 4选自氢、卤素、-NR 8R 9、-OR 10；；
    R 5选自氢、卤素和C1-C4烷基；
    R 6、R 7各自独立地选自氢、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基；
    G1选自卤素、C1-C4烷基、-NR 8R 9、-OR 10，其中所述烷基任选被一个或多个选自卤素、-NR 11R 12、-OR 16的取代基所取代；
    R 8、R 9、R 10、R 11、R 12和R 16各自独立地选自氢、C1-C4烷基和C1-C4卤代烷基；
    其中所述化合物不包括下列化合物(1)至(4)：
    Figure PCTCN2019092653-appb-100007
  7. 根据权利要求1所述的化合物、其异构体、前药、溶剂合物、稳定的同位素衍生物或其药学上可接受的盐，
    其中：
    L 1选自-NR 6CON(R 7)-，其中NR 6与所述被R 1、R 2、R 3取代的含氮杂芳基连接；
    L 2选自C1-C4亚烷基，其中所述亚烷基任选可被一个或多个G1所取代；
    L 3选自-O-；
    R 1、R 2、R 3各自独立地选自氢和卤素；
    R 4选自氢和卤素；
    R 5选自氢、卤素和C1-C4烷基，位于L 3的对位；
    R 6、R 7各自独立地选自氢和C1-C4烷基；
    G1选自卤素、C1-C4烷基，其中所述烷基任选被一个或多个选自卤素、-NR 11R 12、-OR 16的取代基所取代；
    R 11、R 12和R 16各自独立地选自氢、C1-C4烷基和C1-C4卤代烷基；
    其中所述化合物不包括下列化合物(1)至(4)：
    Figure PCTCN2019092653-appb-100008
  8. 根据权利要求1所述的化合物、其异构体、前药、溶剂合物、稳定的同位素衍生物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述的化合物选自：
    Figure PCTCN2019092653-appb-100009
  9. 药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1-8任意一项所述的化合物或其异构体、前药、溶剂合物、稳定的同位素衍生物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂。
  10. 根据权利要求1-8任意一项所述的化合物或其异构体、前药、溶剂合物、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐、或根据权利要求9所述的药物组合物在制备药物中的用途，其中所述药物用于治疗或者预防TRK介导的疾病，例如癌症，尤其是恶性血液病、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、脑胶质瘤。
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