WO2019244965A1 - ペメトレキセドナトリウム注射用溶液製剤、並びにその製造方法 - Google Patents

ペメトレキセドナトリウム注射用溶液製剤、並びにその製造方法 Download PDF

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WO2019244965A1
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WO
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pemetrexed
solution
injection
less
mobile phase
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PCT/JP2019/024427
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綾美 関口
義寛 今井
弘毅 酒向
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日本化薬株式会社
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    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
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    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Definitions

  • the present invention relates to an injectable solution formulation containing pemetrexed sodium which has suppressed coloring during storage, a method for producing the same, and a pemetrexed disodium-containing raw material for preparing the injectable solution formulation.
  • Pemetrexed sodium (chemical name: N- [4- [2- (2-amino-4-oxo-4,7-dihydro-1H-pyrrolo [2,3-d] pyrimidin-5-yl) ethyl] benzoyl] L Glutamate disodium) is a therapeutic agent for malignant pleural mesothelioma and unresectable advanced / recurrent non-small cell lung cancer, and is commercially available as a lyophilized product under the trade name of Alimta (registered trademark).
  • the formulation is used by adding a physiological saline solution at the time of administration, dissolving the solution, extracting a necessary amount of the solution, appropriately diluting with a physiological saline solution, and intravenously administering the solution.
  • lyophilized preparations have excellent storage stability, but require a complicated dissolution step when used. For this reason, in the medical field, there is a demand for a solution preparation which does not require a complicated dissolution step and can be diluted and administered immediately. Therefore, there is also a need for a pemetrexed sodium formulation which is highly convenient for an injectable solution formulation.
  • pemetrexed sodium has low solution stability, undergoes oxidative degradation in an aqueous solution, and that the solution is gradually colored during storage.
  • a method of strictly controlling the oxygen concentration and dissolved oxygen in a vial, and a method of adding an antioxidant to a composition Have been reported.
  • Patent Literature 1 discloses a pemetrexed sodium solution preparation having an oxygen partial pressure of 0.2% or less, in which vacuum degassing, distillation degassing, nitrogen bubbling, membrane degassing, and catalyst resin degassing methods are used. Is described. Also, a formulation using an antioxidant is known, and Patent Document 2 describes an aqueous pemetrexed formulation using monothioglycerol, cysteine, or thioglycolic acid as an antioxidant.
  • Patent Document 3 discloses a pemetrexed solution formulation containing an antioxidant selected from lipoic acid, dihydrolipoic acid, methionine or a mixture thereof, and a chelating agent selected from lactobionic acid, tribasic sodium citrate or a mixture thereof. It has been described.
  • US Pat. No. 5,077,064 describes a pemetrexed solution formulation containing an antioxidant selected from citric acid and cysteine.
  • US Pat. No. 5,077,064 describes a pemetrexed solution formulation containing cysteine, arginine and propylene glycol.
  • U.S. Patent No. 6,059,064 describes a pemetrexed solution formulation containing cysteine and thioglycerin.
  • Patent Document 7 describes a pemetrexed solution formulation containing acetylcysteine and sodium citrate. It is described that these injectable solution preparations containing pemetrexed sodium as an active ingredient can mainly suppress the generation of related substances during storage and can also suppress the coloring of the solution.
  • An object of the present invention is to provide an injectable solution preparation containing pemetrexed disodium as an active ingredient, which suppresses coloring during storage.
  • the present invention has found that the composition and content of the analogous substance contained in the pemetrexed sodium disodium-containing raw material for preparing the pemetrexed sodium injection solution preparation affect the coloring of the solution during storage of the solution preparation. It is based on That is, by using pemetrexed disodium with a controlled content of a specific analog in a drug substance for preparing a formulation, the discoloration is suppressed, and an injection solution formulation of pemetrexed sodium having excellent storage stability is provided. is there.
  • the first invention of the present application is a method for producing a pemetrexed sodium solution for injection described in the following [1] to [7].
  • a method for producing an injectable solution formulation containing pemetrexed disodium as an active ingredient (1) a step of preparing a solution for injection using a raw material containing disodium pemetrexed; and (2) filling the solution for injection with a container for preparation, and preparing the rubber in an atmosphere having an oxygen concentration of 1% by volume or less in a void portion.
  • the raw material contains, at 0.10% or less, a component having a relative retention time (RRT) of 0.41 ⁇ 0.03, which is determined based on the retention time (RT) of pemetrexed in HPLC analysis,
  • RRT relative retention time
  • the conditions of the HPLC analysis are the following analysis conditions, Production method.
  • coloring is performed by using a pemetrexed disodium-containing raw material in which an analogous substance whose RRT is detected at 0.41 ⁇ 0.03 is controlled to 0.10% or less. And a solution preparation for injection in which is suppressed.
  • the raw material containing disodium pemetrexed contains a component having a relative retention time (RRT) of 0.34 ⁇ 0.03 as an index based on the retention time of pemetrexed in HPLC analysis at 0.05% or less, [1].
  • RRT relative retention time
  • Sodium pemetrexed reacts sensitively to the presence of oxygen, resulting in coloration of the solution.
  • the rubber stopper which is the sealing material of the vial of the formulation for injection, also has oxygen permeability, and the permeated oxygen adversely affects the coloration of pemetrexed sodium in the solution and the generation of related substances.
  • a pemetrexed sodium injection solution formulation in which coloring is suppressed and generation of related substances is suppressed under storage conditions in a wide temperature range of 5 ° C. to room temperature or more by using a specific sealing material. Can be.
  • reducing the number of voids is preferable because the amount of oxygen in the preparation can be reduced.
  • the pemetrexed sodium solution preparation produced by the present invention is characterized in that the content of related substances is small even under storage and the coloring of the solution is suppressed. That is, it is characterized by the following related substance profiles of [6] and [7].
  • the injectable solution preparation containing pemetrexed disodium as an active ingredient is characterized in that the component having a relative retention time (RRT) of 1.07 ⁇ 0.03 using the retention time (RT) of pemetrexed in HPLC analysis as an index is 0%.
  • the production method according to any one of [1] to [5], which contains 0.05% or less.
  • Any one of [1] to [6], wherein the injectable solution preparation containing pemetrexed disodium as an active ingredient contains the compound represented by the formula (IX) or a salt thereof at 0.05% or less.
  • the production method according to one of the above.
  • the compound represented by the formula (IX) is a compound known as one of pemetrexed analogs (also referred to as a Keto-Amine compound), and is detected by HPLC analysis at RRT 0.94 ⁇ 0.03. Component.
  • the present invention also includes a pemetrexed sodium solution preparation in which coloring during storage is suppressed. That is, it is a solution preparation having an analogous substance profile described in the following [8] and [9].
  • the present invention also includes a raw material containing disodium pemetrexed, which is a raw material for producing a pemetrexed sodium solution preparation whose coloring has been suppressed during storage. That is, it is a pemetrexed disodium-containing raw material having an analogous substance profile described in the following [10] and [11].
  • a pemetrexed disodium-containing material used for the production of a solution for injection of a pharmaceutical which has a relative retention time (RRT) of 0.41 ⁇ 0, based on the retention time (RT) of pemetrexed in HPLC analysis.
  • RRT relative retention time
  • a pemetrexed disodium-containing raw material for an injectable solution formulation, which contains the component No. 03 at 0.10% or less and the conditions of the HPLC analysis are the following analysis conditions.
  • the invention [10] is a use of a pemetrexed disodium-containing raw material including a specific analog in the production of an injectable solution preparation containing pemetrexed disodium as an active ingredient, wherein the specific analog is pemetrexed disodium in HPLC analysis.
  • the present invention also relates to the use of a pemetrexed disodium-containing raw material in which a component having a relative retention time (RRT) of 0.41 ⁇ 0.03 using the retention time (RT) as an index is 0.10% or less.
  • RRT relative retention time
  • the invention [11] is a use of a pemetrexed disodium-containing raw material including a specific analog in the production of an injectable solution formulation containing pemetrexed disodium as an active ingredient, wherein the specific analog is pemetrexed disodium in HPLC analysis.
  • a component having a relative retention time (RRT) of 0.41 ⁇ 0.03 using the retention time (RT) as an index is 0.10% or less, and a component having an RRT of 0.34 ⁇ 0.03 is 0.05%.
  • the invention also relates to the use of a raw material containing disodium pemetrexed, which is described below.
  • the present invention suppresses discoloration of a solution during storage of the solution formulation by focusing on the structure and content of related substances contained in the pemetrexed disodium-containing raw material for preparing a solution formulation for injection of pemetrexed sodium.
  • a possible method can be provided.
  • Example 1 is an HPLC chart of a pemetrexed disodium drug substance used in a solution formulation for injection according to Example 1. It is a HPLC chart of the solution formulation for injections which concerns on Example 4 (A; at the time of a test start, B; 60 degreeC and analysis after two weeks). 6 is an HPLC chart of a solution formulation for injection according to Comparative Example 2 (A; at the start of the test, B; at 60 ° C., after 2 weeks). It is an LC-MS spectrum of the component of HPLC analysis with a relative retention time (RRT) of 0.34 (upper figure: positive mode, lower figure: negative mode). It is an LC-MS spectrum of a component having a relative retention time (RRT) of 0.41 in HPLC analysis (upper figure: positive mode, lower figure: negative mode).
  • RRT relative retention time
  • the present invention provides an injection for pemetrexed sodium containing pemetrexed sodium, which suppresses coloring and has excellent storage stability by applying a pemetrexed disodium-containing raw material in which the content of a specific analogous substance is controlled as a drug substance for preparing a solution formulation. It provides a solution formulation. The details will be described below.
  • the pemetrexed disodium in the present invention is N- [4- [2- (2-amino-4-oxo-4,7-dihydro-1H-pyrrolo [2,3-d] pyrimidin-5-yl) by the chemical name.
  • [Ethyl] benzoyl] disodium L-glutamate which is known as an active ingredient of an antimetabolite antitumor agent, can be used without any particular problem as long as it has a suitable quality as a drug substance.
  • the pemetrexed disodium may be anhydrous, may be a hydrate or any solvate. As hydrates, 2.5 hydrate and 7 hydrate are known and can be used without particular limitation.
  • JP-T-2003-530321 describes a method for preparing pemetrexed disodium heptahydrate.
  • the method for producing pemetrexed disodium of the present invention is not particularly limited, and a pemetrexed disodium in which the composition of analogous substances and the content thereof are controlled is produced by applying a purification step as appropriate according to a known method. be able to. Preferably, it can be obtained according to the method of the following first to fourth steps.
  • all operations in the production process should be performed under a nitrogen stream, and the oxygen content should be controlled.
  • the treatment under basic conditions, it is preferable to maintain low-temperature conditions. That is, it is preferable to perform the oxygen atmosphere at 5 v / v% or less, more preferably at 2 v / v%, throughout the manufacturing process.
  • the treatment is preferably performed at 15 ° C. or lower, more preferably at 10 ° C. or lower.
  • pemetrexed disodium has slightly poor physical properties, and is particularly known to produce analogous substances mainly via an oxidation reaction in a solution state such as an aqueous solution. Even in the process of producing a pemetrexed disodium-containing raw material (also referred to as pemetrexed disodium drug substance), the production of these analogs is inevitable, and even after a purification step, a plurality of analogs can be separated by high performance liquid chromatography (HPLC). Is detected by HPLC.
  • the main analogous substances contained in the pemetrexed disodium-containing raw material are components having a relative retention time (RRT) of 0.34 ⁇ 0.03, which indicates the retention time (RT) of pemetrexed in HPLC analysis, and 0.41%.
  • HPLC analysis conditions for analyzing the purity of pemetrexed disodium and related substances are as follows.
  • Detector UV absorption spectrophotometer (measuring wavelength: 228 nm)
  • Mobile phase liquid feeding The concentration gradient is controlled by changing the mixing ratio of mobile phases A and B as shown in Table 2.
  • Flow rate 1.0 mL / min
  • Area measurement range 32 minutes after sample solution injection
  • Related substance measurement method Chromatogram peak area percentage excluding blank peaks from elution time 0 to 32 minutes
  • the relative retention time (RRT) 0 indicating the retention time (RT) of pemetrexed in HPLC analysis of the raw material containing disodium pemetrexed is used.
  • RRT relative retention time
  • the component of RRT 0.41 ⁇ 0.03 preferably has a content of 0.075% or less, more preferably 0.05% or less.
  • a component having a relative retention time (RRT) of 0.41 ⁇ 0.03 is 0.10% or less, and an RRT of 0.34 ⁇
  • the content of RRT 0.34 ⁇ 0.03 is preferably 0.03% or less, more preferably 0.02% or less.
  • the structures of the components having an RRT of 0.41 ⁇ 0.03 and the components having an RRT of 0.34 ⁇ 0.03 have not been identified. Since these components have properties that gradually disappear during storage of the solution preparation for injection, they are assumed to be precursors of the coloring components.
  • LC-MS measurement conditions for detecting a component of RRT 0.41 ⁇ 0.03 and a component of 0.34 ⁇ 0.03 are performed, for example, under the following analysis conditions.
  • the content of the component having a RRT of 0.41 ⁇ 0.03 and the component having an RRT of 0.34 ⁇ 0.03 in the raw material containing disodium pemetrexed, but containing other related substances It is more preferable to use a small amount. That is, it is preferable to use a raw material containing 98.50% or more of disodium pemetrexed as pemetrexed as the content based on the area percentage in the HPLC analysis. More preferably, pemetrexed has a purity of 99.00% or more, and particularly preferably 99.50% or more. That is, the raw material is preferably a pemetrexed disodium-containing material having a total analog content of less than 1.50%, more preferably less than 1.00%, particularly preferably less than 0.50%.
  • the pemetrexed disodium-containing raw material according to the present invention further comprises a component having a relative retention time (RRT) of 0.94 ⁇ 0.03 (formula IX, Keto-Amine derivative), which indicates the retention time (RT) of pemetrexed in HPLC analysis. ) And / or a component of 1.14 ⁇ 0.03 (Formula X, Keto-Formamide) may be included, and may be characterized together with its content.
  • RRT relative retention time
  • the component having an RRT of 0.94 ⁇ 0.03 is 0.10% or less, and / or the component having an RRT of 1.14 ⁇ 0.03 (formula X, Keto-Amine) -Formamide) is 0.10% or less. More preferably, a component having an RRT of 0.94 ⁇ 0.03 (formula IX, Keto-Amine body) is 0.05% or less, and / or a component having an RRT of 1.14 ⁇ 0.03 (formula X, Keto-Formamide) is 0.05% or less.
  • Still other related substances include components having an RRT of 0.69 ⁇ 0.03 and 0.70 ⁇ 0.03 (Formula VI, Keto-Pemetrexd), and / or a compound having an RRT of 0.91 ⁇ 0.03.
  • a component (Formula VIII, Oxidateve @ Dimer) may be included.
  • components of 0.69 ⁇ 0.03 and 0.70 ⁇ 0.03 are 0.10% or less, and / or components of 0.91 ⁇ 0.03 (Formula VIII) , Oxidateve @ Dimer) is 0.10% or less.
  • the components of 0.69 ⁇ 0.03 and 0.70 ⁇ 0.03 are 0.01% or more and 0.075% or less, and / or 0.91 ⁇ 0. 0.03% or less (Formula VIII, Oxidateve @ Dimer).
  • Other related substances include a component having an RRT of 0.55 ⁇ 0.03 (formula V, ⁇ -Hydroxy Lactone form) and a component having an RRT of 0.83 ⁇ 0.03 (formula VII, N-Me form). It may be.
  • the component of 0.55 ⁇ 0.03 (Formula V, ⁇ -Hydroxy @ Lactone form) has a content of 0.10% or less, more preferably 0.05% or less.
  • the component of 0.83 ⁇ 0.03 (formula VII, N-Me form) has a content of 0.10% or less, more preferably 0.05% or less.
  • the first step of the injectable solution preparation of pemetrexed sodium of the present invention is to prepare a solution of the pemetrexed disodium-containing material using the pemetrexed disodium-containing material satisfying the above-mentioned analogous substance profile as a drug substance.
  • the solvent for preparing the solution can be used without any particular limitation as long as it is acceptable as a solvent for parenteral administration.
  • water, ethanol, polysorbate 80, macrogol, glycerin, polyoxyethylene hydrogenated castor oil and the like may be used, and these may be used alone or in a mixed solvent of two or more.
  • the solvent is preferably of a quality that allows parenteral administration.
  • Particularly preferred solvents are water-containing solvents containing water as a main component. An embodiment using only water as the solvent may be used.
  • the concentration of pemetrexed in the solution preparation for injection of the present invention is set to 5 mg / mL or more and 50 mg / mL or less. More preferably, the pemetrexed concentration is 10 mg / mL or more and 40 mg / mL or less.
  • the temperature for preparing the solution is not particularly limited, but it is preferable to prepare the solution at 60 ° C. or lower in consideration of the stability of pemetrexed.
  • the solution preparation of the present invention may contain an additive acceptable as a pharmaceutical. Any additive can be used without particular limitation as long as it can be administered parenterally.
  • the types of additives may include antioxidants, buffers, pH adjusters, tonicity agents, chelating agents, and stabilizers.
  • the antioxidant is an additive used to suppress the decomposition of the active ingredient due to oxidation.
  • examples include ascorbic acid, cysteine, sodium sulfite, sodium bisulfite, sodium pyrosulfite, alpha thioglycerin, citric acid, sodium thioglycolate, sodium edetate, methionine, tocopherol, butylhydroxyanisole, dibutylhydroxytoluene, and the like.
  • Buffers are additives used to keep the pH constant. For example, citrate, phosphate, acetate and the like are used.
  • the pH adjuster is an additive used to adjust the pH within a set range.
  • hydrochloric acid, sodium hydroxide, acetic acid and its salts, phosphoric acid and its salts, citric acid and its salts, tartaric acid and its salts, etc. are used.
  • Isotonic agents are additives used to approximate the osmotic pressure of serum. Examples include sodium chloride, calcium chloride, magnesium chloride, glycerin, fructose, xylitol, sorbitol, trehalose, nicotinamide, glucose, purified sucrose, mannitol, macrogol and the like.
  • a chelating agent is an additive that forms a complex with a metal ion to indirectly suppress decomposition due to the presence of the metal ion.
  • examples include disodium ethylenediaminetetraacetate, citric acid and its salts, tartaric acid and its salts, gluconic acid and its salts, and the like.
  • Stabilizers are used for various purposes such as suppression of decomposition of active ingredients and stabilization of particles.
  • the solution preparation for injection of the present invention is prepared by preparing a solution of a raw material containing disodium pemetrexed, filling the solution into a container for preparation, and sealing the container with a rubber stopper in an atmosphere having an oxygen concentration of 1% by volume or less in the void portion.
  • Process. Since the present invention is an injectable solution preparation, it is filled aseptically in a preparation container, and the atmosphere is controlled to an atmosphere having an oxygen concentration of 1% by volume or less, and sealed with a highly airtight rubber stopper. It is prepared as a formulation.
  • the shape of the container to be used is not particularly limited as long as it can be sealed with a rubber stopper or the like, but a vial shape is preferable.
  • Examples of the material of the container include soda lime glass, borosilicate glass, cyclic polyolefin polymer, and cyclic polyolefin copolymer.
  • a vial in which elution of glass components is suppressed is preferable to use.
  • a vial filled with water and sealed is subjected to high-pressure steam sterilization at 121 ° C. for 1 hour, and is preferably a vial in which silicon eluted into water is 1 ppm or less.
  • a glass vial in which the elution of silicon is suppressed it is preferable to use a container that has been subjected to a surface treatment for the purpose of suppressing the elution of glass components.
  • Vial vials are examples of vials that suppress elution of glass components.
  • a borosilicate glass vial internally treated with silica As an example of the vial internally treated with silica, a silicate vial (manufactured by Fuji Glass Co., Ltd.) may be mentioned.
  • a highly deoxygenated solution preparation for injection can be prepared.
  • the material of the rubber stopper it is preferable to use a butyl rubber stopper and a butyl rubber stopper laminated with a fluororesin.
  • These sealable containers are preferably packaging materials that have been sterilized by an appropriate method for both the container and the rubber stopper.
  • the oxygen concentration in the void of the container of the preparation is 1% or less.
  • the oxygen concentration in the void of the container can be measured by an oxygen concentration measuring device using an oxygen sensor.
  • an oxygen sensor For example, by using an oximeter (MicroxTX3, manufacturer: PreSens) connected to a needle type oxygen sensor and bringing the oxygen sensor of the oximeter into contact with the solution of the solution for injection, the sealed state according to the present invention. Can be measured.
  • the void portion (head space) in the vial of the preparation for injection of the present invention is filled with an inert gas such as nitrogen or argon.
  • an inert gas such as nitrogen or argon.
  • the oxygen partial pressure in the headspace correlates with the dissolved oxygen concentration in the formulation solution. Therefore, by removing the oxygen in the head space, the dissolved oxygen concentration of the pemetrexed solution can be reduced, which is effective for securing storage stability.
  • an inert gas such as nitrogen or argon was directly injected into a container filled with the solution, and a certain amount of the inert gas was injected. Later, a method of sealing the container with a rubber stopper or the like may be used. By using this method, the concentration of void oxygen in the container can be controlled to 1.0% by volume or less.
  • a container filled with the solution for injection according to the present invention is installed in a closed space, and the pressure in the space is reduced to a level not lower than the vapor pressure of the drug solution at an arbitrary temperature, and then inert gas such as nitrogen or argon is removed. It is also possible to use a method of injecting the mixture until the pressure reaches atmospheric pressure, leaving the mixture to stand for several hours, and then sealing it with a rubber stopper or the like. By using this method, the concentration of void oxygen in the container can be controlled to 1.0% by volume or less.
  • the volume of the space (headspace) other than the filled solution in the container also affects the stability of pemetrexed.
  • the ratio of the volume of the head space portion to the filled volume increases, the amount of oxygen in the container increases, and the oxidative decomposition of pemetrexed proceeds more easily. Therefore, it is preferable that the volume of the head space in the container is small.
  • the ratio of the volume of the headspace is preferably 70% or less, more preferably 60% or less, with respect to the volume of the container.
  • a rubber stopper which is a sealing material for a vial of an injection preparation, also has oxygen permeability, and that the permeated oxygen causes discoloration and similarity of pemetrexed sodium in the solution. It has been found that it has an adverse effect on substance formation. In other words, in the preparation of a sodium pemetrexed solution preparation, it is important to select a rubber stopper as a sealing material, and by adopting a rubber stopper having a low temperature dependency with respect to oxygen permeability, solution coloring and / or generation of related substances is performed.
  • the rubber stopper used for the solution preparation for injection has a highly suppressed oxygen permeation.
  • those whose oxygen permeability does not change with temperature are preferred.
  • it is necessary to use a rubber stopper in which the amount of oxygen that permeates into the space of the container through the rubber stopper during storage at 60 ° C. for two weeks is 0.0013 mmol or less. More preferably, under the same conditions, a rubber stopper having an oxygen permeation amount of 0.0010 mmol or less, more preferably a rubber stopper having 0.0008 mmol or less.
  • oxygen permeation amount of the rubber stopper is calculated according to the following method.
  • Oxygen permeation amount (mmol) increase amount of oxygen (% by volume) / 100 ⁇ volume volume in container (mL) / (0.082 ⁇ (273 + temperature (° C.)))
  • Oxygen increase (volume%) void oxygen concentration (vol%) after storage at 60 ° C for 2 weeks-pore oxygen concentration (vol%) immediately after production
  • any material may be selected as long as it is equal to or less than the above-mentioned oxygen transmission amount, but it is preferable to use a butyl rubber stopper, and a butyl rubber stopper laminated with a fluororesin. . More specifically, a rubber stopper made of a material laminated with D713 and D777 fluororesins manufactured by Daikyo Seiko Co., Ltd. is preferable.
  • the thickness of the rubber stopper if the same material is generally used, the thicker the thickness, the lower the oxygen permeation amount.
  • the minimum thickness of the portion in contact with the liquid is 1.5 mm or more, more preferably 2 mm or more.
  • the inner diameter of the container is preferably 20 mm or less, more preferably 15 mm or less.
  • the rubber stopper has a very slight oxygen permeability. Therefore, by reducing the oxygen concentration in the periphery of the container, the permeation of oxygen into the preparation container can be suppressed and the stability of the solution preparation for injection can be ensured. In particular, the storage stability of the injection solution preparation can be reliably ensured by arranging it in an atmosphere having an oxygen concentration of 1% by volume or less. As a specific method of placing the solution for injection in an atmosphere having an oxygen concentration of 1% by volume or less, put the container in an oxygen-blocking bag and fill the inside of the bag with an inert gas such as nitrogen or argon. Sealing and the like can be mentioned.
  • the oxygen concentration inside the bag is preferably 1% by volume or less, more preferably 0.5% by volume or less. Also, by inserting an oxygen absorber into the space between the container for the solution preparation for injection and the oxygen-barrier bag, and sealing, the oxygen inside the bag is absorbed, and the stability can be further improved. .
  • the oxygen concentration inside the oxygen-blocking bag can be reduced by one volume by applying a deoxidizer according to the oxygen adsorption capacity to the oxygen content corresponding to the internal volume of the bag. %, Preferably 0.5% by volume or less.
  • the oxygen permeability of the oxygen barrier properties of the bag is preferably at most 1mL / m 2 ⁇ 24hr ⁇ atm , more preferably not more than 0.5mL / m 2 ⁇ 24hr ⁇ atm , more preferably 0.2 mL / m is 2 ⁇ 24hr ⁇ atm or less.
  • the material of the oxygen barrier film used for the oxygen barrier bag is aluminum foil, nylon, polyvinylidene chloride, ethylene / vinyl alcohol copolymer, inorganic vapor-deposited film (for example, alumina vapor-deposited polyethylene terephthalate, silica vapor-deposited) Polyethylene terephthalate).
  • oxygen scavenger examples include ironless self-reactive oxygen scavengers such as Ageless S, SP, ZP, Z-PKC, and ZJ-PT manufactured by Mitsubishi Gas Chemical Company, and Nippon Kayaku Food Techno Co., Ltd. Modulin S and the like.
  • the injectable solution preparation of pemetrexed sodium capable of suppressing solution coloring during storage of the present invention has a relative retention time (RRT) of 1.07 ⁇ 0, which indicates the retention time (RT) of pemetrexed in HPLC analysis during the storage period. .03 can be suppressed. Further, the formation of the compound (keto-amine) represented by the formula (IX) having an RRT of 0.94 ⁇ 0.03 can be suppressed.
  • RRT relative retention time
  • the component having an RRT of 1.07 ⁇ 0.03 is 0.05% or less (area percentage). Preferably it is 0.03% or less, more preferably less than 0.01%.
  • the content of the compound represented by the formula (IX) (RRT; 0.94 ⁇ 0.03, keto-amine) is 0.05% or less (area percentage), more preferably 0.1%. 03% or less.
  • the pemetrexed sodium injection solution preparation of the present invention can suppress the generation of all related substances during the storage period. Specifically, when the solution preparation is stored at 60 ° C. for 2 weeks, the total content of related substances is 0.70% or less (area percentage), and more preferably 0.50% or less.
  • the solution formulation for injection of pemetrexed sodium of the present invention can suppress coloring of the solution during the storage period.
  • a solution preparation of pemetrexed sodium usually gradually shows a yellow color during storage and changes to a clear yellow clear solution with the lapse of time, but the solution preparation is visually colorless to a very slight yellow coloration range. Can be maintained in a clear solution state.
  • the b * value by a colorimeter is used as an index for evaluating the coloring of the solution preparation
  • the b * value of the solution preparation of the present invention is ⁇ 30 or less.
  • the b * value represents chromaticity. A positive value indicates a yellow direction, a negative value indicates a blue direction, and a value closer to zero indicates a colorless solution.
  • the solution formulation of the present invention preferably has a b * value of ⁇ 20 or less, more preferably ⁇ 15 or less. That is, when the solution preparation according to the present invention is stored at 60 ° C. for 2 weeks, the b * value measured by a colorimeter is ⁇ 30 or less, preferably ⁇ 20 or less, more preferably ⁇ 15 or less. .
  • the pemetrexed injectable solution preparation of the present invention can be produced by the general steps in the production of injectable solution preparations as shown in the following steps.
  • the present invention is not limited to the following manufacturing method.
  • Step (a) A raw material containing disodium pemetrexed and, if necessary, a pharmaceutically acceptable additive are weighed and dissolved in a suitable solvent.
  • Step (b) If necessary, a pharmaceutically acceptable pH adjuster is added to the solution.
  • Step (c) If necessary, make up the solution of step (b) with a pharmaceutically acceptable solvent to fill the final volume.
  • Step (d) The solution of step (c) is sterilized by filtration.
  • Step (e) The solution obtained in step (d) is filled into a pharmaceutically acceptable container.
  • Step (f) If necessary, purge the inside of the container with a pharmaceutically acceptable inert gas.
  • Step (g) The container is stoppered with a rubber stopper, and sealed with an aluminum cap if necessary.
  • Step (h) Perform pharmaceutically acceptable terminal sterilization as needed.
  • an inert gas can be blown into the mixture during the steps (a) to (c).
  • the solution preparation for injection can be produced.
  • the solution preparation for injection can be stored in an oxygen-blocking bag and sealed together with an optional oxygen scavenger, whereby an adverse effect due to oxygen can be further suppressed.
  • the inside of the oxygen-blocking bag may be sealed after blowing an inert gas.
  • Flow rate 1.0 mL / min
  • Area measurement range Mobile phase liquid supply for 32 minutes after sample solution injection: Concentration gradient control by changing the mixing ratio of mobile phases A and B as shown in Table 4.
  • Example 1 Production of Raw Material Containing Pemetrexed Disodium Used for Injection Solution Formulation (1) 4- [2- (2-amino-4-oxo-4,7-dihydro-1H-pyrrolo [2,3- d] Pyrimidin-5-yl) ethyl] benzoic acid (4.0 kg), N, N-dimethylformamide (18.9 kg) and N-methylmorpholine (3.0 kg) were charged at 10 ° C. under a nitrogen atmosphere. After cooling to 2, 2-chloro-4,6-dimethoxy-1,3,5-triazine (2.6 kg) was charged and stirred. Diethyl L-glutamate hydrochloride (3.5 kg) was added and reacted at 25 ° C.
  • the reaction solution was poured into a mixture of 15% saline (40.0 kg) and ethyl acetate (36.0 kg), stirred, and then separated.
  • the separated aqueous layer was extracted with ethyl acetate (18.0 kg), and the extract was mixed with the separated ethyl acetate layer.
  • the mixed ethyl acetate layer was heated to 50 ° C., and a solution of p-toluenesulfonic acid monohydrate (3.0 kg) in ethanol (31.6 kg) was added dropwise to precipitate crystals. After cooling to 25 ° C., the precipitated crystals were filtered and washed with ethanol. The obtained crystals were dried at 50 ° C.
  • the activated carbon was filtered, and the activated carbon was washed with purified water. After the filtrate was heated to 50 ° C., ethanol (114.4 kg) was added dropwise to precipitate crystals. After cooling to 5 ° C., the precipitated crystals were filtered and washed with a mixture of ethanol and purified water. The obtained crystals were dried at 50 ° C. under reduced pressure to give N- ⁇ 4- [2- (2-amino-4-oxo-4,7-dihydro-1H-pyrrolo [2,3-d] pyrimidin-5-yl].
  • Ethyl] benzoyl ⁇ -L-glutamate disodium hemihydrate (pemetrexed disodium hemihydrate hydrate) was obtained (yield 4.9 kg).
  • Pemetrexed disodium salt hemihydrate obtained as Example 1 had a purity of 99.80% (area percentage) by HPLC analysis.
  • the component of RRT 0.34 was 0.02% (area percentage), and the component of RRT 0.41 was 0.05% (area percentage).
  • Table 6 summarizes the results of HPLC analysis including other related substances.
  • FIG. 1 shows the chromatographic chart.
  • Example 2 Production of Raw Material Containing Pemetrexed Disodium Used in Injection Solution Formulation
  • pemetrexed disodium disodium hemihydrate was obtained.
  • the obtained pemetrexed disodium hemihydrate had a purity of 99.83% (area percentage) by HPLC analysis.
  • the component of RRT 0.34 was 0.00% (area percentage), and the component of RRT 0.41 was 0.01% (area percentage).
  • Table 6 summarizes the results of HPLC analysis including other related substances.
  • Example 3 Production of Raw Material Containing Pemetrexed Disodium Used in Solution Formulation for Injection
  • Pemetrexed disodium disodium hemihydrate was obtained by the same production method as in Example 1.
  • the obtained pemetrexed disodium hemihydrate had a purity of 99.90% (area percentage) by HPLC analysis.
  • the component of RRT 0.34 was 0.01% (area percentage), and the component of RRT 0.41 was 0.01% (area percentage).
  • Table 6 summarizes the results of HPLC analysis including other related substances.
  • Comparative Example 1 Preparation of Raw Material Containing Pemetrexed Disodium Used in Solution Formulation for Injection
  • Pemetrexed disodium disodium hemihydrate was obtained by the same production method as in Example 1. It was stored in an air atmosphere at a temperature of 40 ° C. for one and a half months to obtain pemetrexed disodium hemihydrate of Comparative Example 1.
  • Pemetrexed disodium hemihydrate in Comparative Example 1 had an HPLC purity of 99.65%.
  • the component of RRT 0.34 was 0.05% (area percentage), and the component of RRT 0.41 was 0.13% (area percentage).
  • Table 6 summarizes the results of HPLC analysis including other related substances.
  • Example 4 Production of solution formulation for injection Pemetrexed disodium hemihydrate of Example 1 (component of RRT 0.34; 0.02%, component of RRT 0.41; 0.05%) 2719 mg (pemetrexed) Was dissolved in 87.28 mL of water for injection (25 mg / mL as a total of 90 mL pemetrexed). This solution was subjected to aseptic filtration using a membrane filter having a pore size of 0.22 ⁇ m, and 4 mL of the filtered solution was filled into a borosilicate glass vial (manufactured by Fuji Glass Co., Ltd.) having a capacity of 10 mL and an inner diameter of 12.5 mm.
  • a borosilicate glass vial manufactured by Fuji Glass Co., Ltd.
  • Example 5 Preparation of Injectable Solution Formulation Using the pemetrexed disodium hemihydrate of Example 2 (RRT 0.34 component; 0.00%, RRT 0.41 component; 0.01%). In the same manner as in Example 4, the solution preparation for injection of Example 5 was prepared.
  • Example 1 Storage stability test of solution for injection at 60 ° C
  • the solution formulations for injection of Examples 4 and 5 and Comparative Example 2 were stored at 60 ° C for 2 weeks. Each formulation was evaluated for coloration (b * value, visual evaluation), and related substances derived from pemetrexed.
  • Table 8 shows the results of coloration and evaluation of analogs derived from pemetrexed in each preparation.
  • the HPLC charts at the start of the test (A) and after two weeks at 60 ° C. (B) in Example 4 and Comparative Example 2 are shown in FIGS. 2 and 3.
  • Comparative Example 2 had a higher content of compound (IX) and markedly increased coloring as compared with Examples 4 and 5. This is because the raw material containing disodium pemetrexed used in Comparative Example 2 had a high content of analogous substances of RRT0.34 and RRT0.41, and this component increased the coloring of the injectable solution preparation containing pemetrexed during the storage period. It is considered.
  • Example 6 Preparation of Injectable Solution Formulation Pemetrexed Purity 98.55% (Area Percentage), RRT 0.34 Component; 0.01%, RRT 0.41 Component; 0.01% Pemetrexed Disodium 2.5 1960 mg of hydrate (1625 mg as pemetrexed) was dissolved in 63.04 mL of water for injection (total volume 65 mL). This solution was subjected to aseptic filtration using a membrane filter having a pore size of 0.22 ⁇ m, and 4 mL of the filtered solution was filled into a borosilicate glass vial (manufactured by Fuji Glass Co., Ltd.) having a capacity of 10 mL and an inner diameter of 12.5 mm.
  • a borosilicate glass vial manufactured by Fuji Glass Co., Ltd.
  • Comparative Example 3 Production of Injectable Solution Formulation
  • Pemetrexed disodium hemihydrate used in Example 6 was stored at 40 ° C. for one and a half months under an air atmosphere, and the raw material containing pemetrexed disodium was used. The procedure of Example 6 was repeated, except for using the same, to prepare a solution preparation for injection of Comparative Example 3.
  • the raw material containing disodium pemetrexed used in Comparative Example 3 (the pemetrexed disodium salt hemihydrate 2.5 months after storage at a temperature of 40 ° C. for one and a half months in the air) has a component of RRT 0.34 of 0.1%.
  • the component of RRT 0.41 was 0.53% (area percentage) and the component of RRT 0.41 was 0.13% (area percentage).
  • Example 2 Storage stability test of solution for injection at 60 ° C The solution formulations for injection of Example 6 and Comparative Example 3 were stored at 60 ° C for 2 weeks. Each formulation was evaluated for coloring (b * value, visual evaluation) and pemetrexed-derived analogs. Table 9 shows the evaluation results of the coloring and pemetrexed-related analogs of each preparation.
  • Comparative Example 3 As compared with Example 6, the compound (IX) was present at a higher content, and the coloring was greatly increased. This is because the pemetrexed disodium used in Comparative Example 3 was stored at a temperature of 40 ° C. for one and a half months, so that the amount of related substances of RRT0.34 and RRT0.41 was increased. It is considered that the coloring of the dye increased during the storage period. From the above verification results, by using the pemetrexed disodium salt-containing raw material in which the related substances of RRT 0.34 ⁇ 0.03 and RRT 0.41 ⁇ 0.03 were suppressed, the storage period of the injectable solution preparation containing pemetrexed was reduced. It became clear that the coloring in the inside could be greatly suppressed.

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Abstract

医療現場において、凍結乾燥製剤より、煩雑な溶解工程が不要で希釈してすぐ投与できる等で利便性が高い溶液形態のＲＴＵ（Ｒｅａｄｙ－ｔｏ－ｕｓｅ）製剤が求められている。本発明の課題は、保存期間中で、類縁物質の生成を抑制すると共に溶液着色が抑制されたペメトレキセドを含む注射用溶液製剤を提供することにある。本発明によれば、ペメトレキセド２ナトリウムを有効成分として含有する注射用溶液製剤の製造方法であって、（１）ペメトレキセド２ナトリウム含有原料を用いて注射用溶液を調製する工程、および （２）前記注射用溶液を製剤用容器に充填して、空隙部分の酸素濃度が１体積％以下の雰囲気でゴム栓により密栓する工程、を含み、前記原料が、ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間（ＲＴ）を指標とした相対保持時間（ＲＲＴ）が０．４１±０．０３の成分を０．１０％以下で含有する、製造方法が提供される。

Description

ペメトレキセドナトリウム注射用溶液製剤、並びにその製造方法
　本発明は、保存下において着色を抑制したペメトレキセドナトリウムを含有する注射用溶液製剤及びその製造方法、並びに注射用溶液製剤を調製するためのペメトレキセド２ナトリウム含有原料に関する。
　ペメトレキセドナトリウム（化学名：Ｎ－［４－［２－（２－アミノ－４－オキソ－４，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－イル）エチル］ベンゾイル］Ｌ－グルタミン酸　２ナトリウム）は、悪性胸膜中皮腫及び切除不能な進行・再発の非小細胞肺癌の治療剤であり、アリムタ（ＡＬＩＭＴＡ　登録商標）という商品名で凍結乾燥製剤として市販されている。該製剤は、投与時に生理食塩液を加えて溶解し、必要量の溶液を抜き取り、適宜、生理食塩液にて希釈して静脈内投与して用いられている。
　一般的に凍結乾燥製剤は保存安定性に優れるものの、用時に煩雑な溶解工程が必要である。このため医療現場においては、煩雑な溶解工程が不要で、希釈してすぐ投与できる溶液製剤が求められている。したがって、ペメトレキセドナトリウム製剤も、利便性が高い注射用溶液製剤に対する要望がある。
　しかしながら、ペメトレキセドナトリウムは溶液安定性が低く、水溶液において酸化分解を受けること、また、保存中に徐々に溶液の着色が見られることが知られている。安定性を確保したペメトレキセドナトリウムの注射用溶液製剤を調製するために、これまでに、バイアル内の酸素濃度及び溶存酸素を厳密に制御すること、また、抗酸化剤を添加した組成物とする方法が報告されている。
　例えば特許文献１は、酸素分圧が０．２％以下のペメトレキセドナトリウム溶液製剤を開示しており、減圧脱気、蒸留脱気、窒素バブリング、膜脱気や触媒樹脂脱気方法が用いられることを記載している。
　また、抗酸化剤を用いる処方も知られており、特許文献２は抗酸化剤としてモノチオグリセロール、システイン又はチオグリコール酸を用いたペメトレキセド水溶液製剤を記載している。特許文献３はリポ酸、ジヒドロリポ酸、メチオニン又はこれらの混合物から選択される抗酸化剤、及びラクトビオン酸、三塩基性クエン酸ナトリウム又はこれらの混合物から選択されるキレート剤を含有するペメトレキセド溶液製剤が記載している。特許文献４は、クエン酸及びシステインから選択される抗酸化剤を含むペメトレキセド溶液製剤を記載している。特許文献５は、システイン、アルギニン及びプロピレングリコールを含有するペメトレキセド溶液製剤を記載している。特許文献６は、システイン及びチオグリセリンを含有するペメトレキセド溶液製剤を記載している。特許文献７はアセチルシステイン及びクエン酸ナトリウムを含有するペメトレキセド溶液製剤を記載している。
　これらのペメトレキセドナトリウムを有効成分とする注射用溶液製剤は、保存下において、類縁物質の生成を抑制できることを主眼とし、併せて溶液の着色を抑制できることが記載されている。
国際公開２０１２／１２１５２３号 特表２００３－５２１５１８号公報 特表２０１３－５４０１０４号公報 特開２０１４－２３７６０７号公報 国際公開２０１５／１９３５１７号 国際公開２０１５／１４５９１１号 特表２０１６－５１８４０４号公報
　ペメトレキセドナトリウムの注射用溶液製剤は、保存下において、徐々に類縁物質の増加が認められること、また溶液の着色が認められてくることが知られている。特に、溶液の着色は目視で認識でき、着色した製剤は医療現場において不良品と見なされることがある。これまでに、保存安定性を確保したペメトレキセドナトリウム溶液製剤として、溶存酸素を含めた溶液製剤中の酸素濃度を厳密に管理すること、及び／又は抗酸化剤等の添加剤を用いることが検討されてきた。これらはペメトレキセドナトリウムの分解を抑制し、類縁物質の生成を抑制することを主眼と方法である。しかしながら、類縁物質の量と着色との関係について相関を示すデータはなく、類縁物質を低減しても着色を抑制することはできず、類縁物質の量と着色の関係については不明であった。
　本発明の課題は、保存下において着色を抑制した、ペメトレキセド２ナトリウムを有効成分とする注射用溶液製剤を提供することにある。
　本発明は、ペメトレキセドナトリウム注射用溶液製剤を調製するためのペメトレキセド２ナトリウム含有原料に含まれる類縁物質の構成及び含有量が、当該溶液製剤の保存下における溶液の着色に影響を与えることを見出したことに基づくものである。すなわち、特定の類縁物質の含有量を制御したペメトレキセド２ナトリウムを製剤調製用原薬に使用することにより、着色を抑制し、保存安定性に優れたペメトレキセドナトリウムの注射用溶液製剤を提供するものである。
　本願発明は以下の［１］～［７］に記載のペメトレキセドナトリウムの注射用溶液製剤の製造方法を第１の発明とする。
［１］　ペメトレキセド２ナトリウムを有効成分として含有する注射用溶液製剤の製造方法であって、
（１）ペメトレキセド２ナトリウム含有原料を用いて注射用溶液を調製する工程、および
（２）前記注射用溶液を製剤用容器に充填して、空隙部分の酸素濃度が１体積％以下の雰囲気でゴム栓により密栓する工程、を含み、
前記原料が、ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間（ＲＴ）を指標とした相対保持時間（ＲＲＴ）が０．４１±０．０３の成分を０．１０％以下で含有し、
前記ＨＰＬＣ分析の条件が、以下に示す分析条件である、
製造方法。
［ＨＰＬＣ分析条件］
測定波長：２２８ｎｍ
カラム：Ｃ８カラム，１５０×４．６ｍｍ，３．５μｍ
カラム温度：３０℃
移動相Ａ：２５ｍＭ　リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝９７／３
移動相Ｂ：２５ｍＭ　リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝３０／７０
移動相の濃度勾配制御（移動相Ａの濃度（ｖｏｌ％）勾配（注入後の時間））：１００→７５（０－２０分）、７５→０（２０－３２分）、残部は移動相Ｂである。
流量：１．０ｍＬ／分
面積測定範囲：試料溶液注入後３２分間
　すなわち、ペメトレキセドナトリウムの注射用溶液製剤を調製するに当たり、ＲＲＴが０．４１±０．０３に検出される類縁物質が０．１０％以下に制御されたペメトレキセド２ナトリウム含有原料を用いることにより、着色が抑制された注射用溶液製剤を製造できるものである。
［２］　ペメトレキセド２ナトリウム含有原料が、ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間を指標とした相対保持時間（ＲＲＴ）が０．３４±０．０３の成分を０．０５％以下で含有する、［１］に記載の製造方法。
　更に、ＲＲＴが０．３４±０．０３で検出される類縁物質にも着目し、この成分が０．０５％以下に制御したペメトレキセド２ナトリウム含有原料を用いることが好ましい。
［３］　ペメトレキセド２ナトリウム含有原料が、ＨＰＬＣ純度が９８．５０％以上である［１］又は［２］に記載の製造方法。
　ペメトレキセド２ナトリウム含有原料は、他の類縁物質の含有量が少なく、極力高純度であることが好ましい。
　ペメトレキセドナトリウムは酸素の存在に鋭敏に反応して溶液の着色をもたらす。特に、ペメトレキセドの溶液製剤を調製するに当たり、注射用製剤のバイアル瓶の封止材料であるゴム栓にも酸素透過性があり、その透過酸素が溶液中のペメトレキセドナトリウムの着色や類縁物質生成に悪影響を及ぼすことを見出した。すなわち、ペメトレキセドナトリウム溶液製剤の調製において、封止材料であるゴム栓の選択が重要であり、酸素透過性について温度依存性が低いゴム栓を採用することで溶液着色及び／又は、類縁物質生成を抑制することができる。
［４］　６０℃の温度条件下で２週間の保存期間中に容器内へ透過する酸素量が０．００１３ｍｍｏｌ以下であるゴム栓を用いて密栓する、［１］～［３］の何れか一に記載の製造方法。
［５］　製剤用容器の容積から、前記注射用溶液の体積を除いた容器の空隙部分の容積が、容器の容積に対して６０％以下である、［１］～［４］の何れか一に記載の製造方法。
　特定の封止材料を用いることで、５℃～室温以上の広範な温度範囲における保存条件において、着色が抑制され、且つ類縁物質の生成が抑制されたペメトレキセドナトリウムの注射用溶液製剤を提供することができる。また、空隙部分が少なくすることにより、製剤内の酸素量を減じることができ好ましい。
　本発明で製造されるペメトレキセドナトリウム溶液製剤は、保存下においても類縁物質含有量が少なく、溶液着色が抑制されていることを特徴とする。すなわち、以下の［６］及び［７］の類縁物質プロファイルを特徴とする。
［６］　ペメトレキセド２ナトリウムを有効成分として含有する注射用溶液製剤が、ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間（ＲＴ）を指標とした相対保持時間（ＲＲＴ）が１．０７±０．０３の成分を０．０５％以下で含有する、［１］～［５］の何れか一に記載の製造方法。
［７］　ペメトレキセド２ナトリウムを有効成分として含有する注射用溶液製剤が、式（ＩＸ）で表される化合物又はその塩を０．０５％以下で含有する、［１］～［６］の何れか一に記載の製造方法。
　なお、式（ＩＸ）で表される化合物は、ペメトレキセド類縁物の１つとして知られている化合物（Keto-Amine体とも称する。）であり、ＨＰＬＣ分析でＲＲＴ０．９４±０．０３に検出される成分である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
　本発明は保存下において着色が抑制されたペメトレキセドナトリウム溶液製剤をも包含する。すなわち、以下の［８］及び［９］に記載の類縁物質プロファイルを備える溶液製剤である。
［８］　ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間（ＲＴ）を指標とした相対保持時間（ＲＲＴ）が１．０７±０．０３の成分が０．０５％以下で含有する、ペメトレキセド２ナトリウムを有効成分として含有する注射用溶液製剤であって、前記ＨＰＬＣ分析の条件が以下に示す分析条件である、注射用溶液製剤。
［ＨＰＬＣ分析条件］
測定波長：２２８ｎｍ
カラム：Ｃ８カラム，１５０×４．６ｍｍ，３．５μｍ
カラム温度：３０℃
移動相Ａ：２５ｍＭ　リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝９７／３
移動相Ｂ：２５ｍＭ　リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝３０／７０
移動相の濃度勾配制御（移動相Ａの濃度（ｖｏｌ％）勾配（注入後の時間））：１００→７５（０－２０分）、７５→０（２０－３２分）、残部は移動相Ｂである。
流量：１．０ｍＬ／分
面積測定範囲：試料溶液注入後３２分間
［９］　式（ＩＸ）で表される化合物を０．０５％以下で含有する、［８］に記載の注射用溶液製剤。式（ＩＸ）で表される化合物は、ＨＰＬＣ分析でＲＲＴ０．９４±０．０３に検出される成分である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
　本発明は、保存下において着色が抑制されたペメトレキセドナトリウム溶液製剤を製造するための原料である、ペメトレキセド２ナトリウム含有原料も包含する。すなわち、以下の［１０］及び［１１］に記載の類縁物質プロファイルを備えるペメトレキセド２ナトリウム含有原料である。
［１０］　医薬品の注射用溶液製剤の製造に用いられるペメトレキセド２ナトリウム含有原料であって、ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間（ＲＴ）を指標とした相対保持時間（ＲＲＴ）が０．４１±０．０３の成分を０．１０％以下で含有し、前記ＨＰＬＣ分析の条件が以下に示す分析条件である、注射用溶液製剤用ペメトレキセド２ナトリウム含有原料。
［ＨＰＬＣ分析条件］
測定波長：２２８ｎｍ
カラム：Ｃ８カラム，１５０×４．６ｍｍ，３．５μｍ
カラム温度：３０℃
移動相Ａ：２５ｍＭ　リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝９７／３
移動相Ｂ：２５ｍＭ　リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝３０／７０
移動相の濃度勾配制御（移動相Ａの濃度（ｖｏｌ％）勾配（注入後の時間））：１００→７５（０－２０分）、７５→０（２０－３２分）、残部は移動相Ｂである。
流量：１．０ｍＬ／分
面積測定範囲：試料溶液注入後３２分間
　前記発明［１０］は、ペメトレキセド２ナトリウムを有効成分とする注射用溶液製剤の製造における特定類縁物質を包含するペメトレキセド２ナトリウム含有原料の使用であって、前記特定類縁物質は、ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間（ＲＴ）を指標とした相対保持時間（ＲＲＴ）が０．４１±０．０３の成分を０．１０％以下である、ペメトレキセド２ナトリウム含有原料の使用、という発明でもある。
［１１］　ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間を指標とした相対保持時間（ＲＲＴ）が０．３４±０．０３の成分を０．０５％以下で含有する、［１０］に記載の注射用溶液製剤用ペメトレキセド２ナトリウム含有原料。
　前記発明［１１］は、ペメトレキセド２ナトリウムを有効成分とする注射用溶液製剤の製造における特定類縁物質を包含するペメトレキセド２ナトリウム含有原料の使用であって、前記特定類縁物質は、ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間（ＲＴ）を指標とした相対保持時間（ＲＲＴ）が０．４１±０．０３の成分を０．１０％以下であり、ＲＲＴが０．３４±０．０３の成分を０．０５％以下である、ペメトレキセド２ナトリウム含有原料の使用、という発明でもある。
　本発明は、ペメトレキセドナトリウムの注射用溶液製剤を調製するためのペメトレキセド２ナトリウム含有原料に含まれる類縁物質の構成及びその含有量に着目することにより、当該溶液製剤の保存下において溶液の着色を抑制できる方法を提供することができる。特に、５℃～室温以上の広範な温度範囲における保存条件において、溶液の着色が抑制されたペメトレキセドを含む注射用溶液製剤を提供することができる。
実施例１に係る注射用溶液製剤に用いるペメトレキセド２ナトリウム原薬のＨＰＬＣチャートである。 実施例４に係る注射用溶液製剤のＨＰＬＣチャートである（Ａ；試験開始時、Ｂ；６０℃、２週間後の分析）。 比較例２に係る注射用溶液製剤のＨＰＬＣチャートである（Ａ；試験開始時、Ｂ；６０℃、２週間後の分析）。 ＨＰＬＣ分析の相対保持時間（ＲＲＴ）０．３４の成分のＬＣ－ＭＳスペクトルである（上図：ポジティブモード、下図：ネガティブモード）。 ＨＰＬＣ分析の相対保持時間（ＲＲＴ）０．４１の成分のＬＣ－ＭＳスペクトル）である（上図：ポジティブモード、下図：ネガティブモード）。
　本発明は、特定の類縁物質の含有量を制御したペメトレキセド２ナトリウム含有原料を溶液製剤調製用の原薬として適用することにより、着色を抑制し、保存安定性に優れたペメトレキセドナトリウムを含む注射用溶液製剤を提供するものである。以下にその詳細を説明する。
［注射用溶液製剤に用いるペメトレキセド２ナトリウム含有原料］
　本発明におけるペメトレキセド２ナトリウムは、化学名でＮ－［４－［２－（２－アミノ－４－オキソ－４，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－イル）エチル］ベンゾイル］Ｌ－グルタミン酸　２ナトリウムであり、代謝拮抗性抗腫瘍剤の有効成分として知られており、医薬品用原薬として適当な品質の物であれば特に問題なく用いることができる。当該ペメトレキセド２ナトリウムは無水物であっても良く、水和物や任意の溶媒和物であっても良い。水和物としては２．５水和物や７水和物が知られており、特に限定なく用いることができる。
　ペメトレキセド２ナトリウムの製造方法は多くの先行技術文献が存在しており、例えば特表２００３‐５３０３２１号公報にペメトレキセド２ナトリウム７水和物の調製方法が記載されている。本発明のペメトレキセド２ナトリウムの製造方法は特に限定されるものではなく、公知の方法に従い、これに適宜、精製工程を適用することにより、類縁物質組成及びその含量を制御したペメトレキセド２ナトリウムを製造することができる。好ましくは以下の第１～４工程による方法に従い得ることができる。
［第１工程］アミド化反応
　式（ＩＩ）で表される化合物と、グルタミン酸ジエチルを縮合反応に付して、式（ＩＩＩ）で表されるペメトレキセドのジエチルエステルを合成する工程。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
［第２工程］加水分解反応
　ペメトレキセドのジエチルエステル（ＩＩＩ）を加水分解して、ペメトレキセド２酸（ＩＶ）とする工程。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
［第３工程］精製工程
　ペメトレキセド２酸（ＩＶ）をジメチルスルホキシド及びエタノールから再結晶してペメトレキセド２酸（ＩＶ）のＤＭＳＯ和物を取得する工程。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
［第４工程］ナトリウム塩調製工程
　ペメトレキセド２酸（ＩＶ）のＤＭＳＯ和物を水酸化ナトリウム溶液に溶解し、ペメトレキセド２ナトリウム（Ｉ）を取得する工程、により得られる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
　本製造工程では、特定の類縁物質の含有量を抑制したペメトレキセド２ナトリウムを取得するための好ましい条件として、製造工程の全ての操作を窒素気流下にて行い、酸素含量を制御して実施すること、及び／又は塩基性条件下の処理を行う際には、低温条件を維持することが好ましい。すなわち、製造工程中に亘り、好ましくは酸素雰囲気を５ｖ／ｖ％以下、より好ましくは２ｖ／ｖ％で行うことが好ましい。また各工程において塩基性条件下で処理を行う際には、１５℃以下に制御して行うことが好ましく、１０℃以下に制御して行うことがより好ましい。
　ペメトレキセド２ナトリウムは安定性がやや乏しい物性であることが知られており、特に水溶液等の溶液状態において主として酸化反応を経由する類縁物質を生成することが知られている。ペメトレキセド２ナトリウム含有原料（ペメトレキセド２ナトリウム原薬ともいう）を製造する過程においても、これらの類縁物質の生成は不可避であり、精製工程を経ても複数種類の類縁物質が高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により検出される。
　ペメトレキセド２ナトリウム含有原料に含有している主な類縁物質としては、ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間（ＲＴ）を指標した相対保持時間（ＲＲＴ）が０．３４±０．０３の成分、０．４１±０．０３の成分、０．５５±０．０３の成分（式Ｖ、α-Hydroxy Lactone体とも称する。）、０．６９±０．０３及び０．７０±０．０３の成分（式ＶＩ、Keto-Pemetrexdとも称する。）、０．８３±０．０３の成分（式ＶＩＩ、N-Me体とも称する。）、０．９１±０．０３の成分（式ＶＩＩＩ、Oxidateve Dimerとも称する。）、０．９４±０．０３の成分（式ＩＸ、Keto-Amine体とも称する。）、１．０７±０．０３の成分、１．１２±０．０３の成分、１．１４±０．０３の成分（式Ｘ、Keto-Formamide体とも称する。）、１．１７±０．０３の成分、等が挙げられる。主たる類縁物質とそのＨＰＬＣ分析でのＲＲＴ値について表１にまとめた。医薬品の製造グレードであるペメトレキセド２ナトリウム含有原料には、これらの類縁物質の１種類以上が共存している。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000009
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
　本発明における、ペメトレキセド２ナトリウムの純度及び類縁物質分析のためのＨＰＬＣ分析条件は、以下のものである。
［ＨＰＬＣ分析条件］
検出器：紫外吸光光度計（測定波長：２２８ｎｍ）
カラム：Ｚｏｒｂａｘ　ＳＢ－Ｃ８，１５０×４．６ ｍｍ，３．５μｍ（Ａｇｉｌｅｎｔ社製）
カラム温度：３０℃付近の一定温度
移動相Ａ：２５ｍＭ リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝９７／３
移動相Ｂ：２５ｍＭ リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝３０／７０
移動相の送液：移動相Ａ及びＢの混合比を表２のように変えて濃度勾配制御する。
流量：１．０ｍＬ／分 
面積測定範囲：試料溶液注入後３２分間
類縁物質測定法：溶出時間０～３２分までのブランクピークを除いたクロマトグラムピーク面積百分率
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000011
　本発明の溶液着色が抑制されたペメトレキセドナトリウムの注射用溶液製剤を調製するためには、ペメトレキセド２ナトリウム含有原料において、ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間（ＲＴ）を指標した相対保持時間（ＲＲＴ）０．４１±０．０３の成分に着目し、その含有量が０．１％以下のペメトレキセド２ナトリウムを用いることである。すなわち当該注射用溶液製剤の溶液着色は、前記ＲＲＴ０．４１±０．０３の成分の含有に起因するものであり、該成分の含有量を制御することにより、保存下における溶液着色を抑制することができる。ＲＲＴ０．４１±０．０３の成分は０．０７５％以下の含有量であることが好ましく、さらに好ましくは０．０５％以下である。
　本発明のより好ましい態様は、ペメトレキセド２ナトリウム含有原料において、相対保持時間（ＲＲＴ）が０．４１±０．０３の成分が０．１０％以下の含有量であり、且つＲＲＴが０．３４±０．０３の成分が０．０５％以下の含有量である、ペメトレキセド２ナトリウムを用いることである。ＲＲＴ０．３４±０．０３の成分は０．０３％以下の含有量であることが好ましく、さらに好ましくは０．０２％以下である。
　なお、前記ＲＲＴが０．４１±０．０３の成分、並びに０．３４±０．０３の成分の構造は未同定である。これらの成分は当該注射用溶液製剤の保存下において、徐々に消失する物性であることから、着色性成分の前駆体と想定される。
　ＲＲＴ０．４１±０．０３の成分は、高速液体クロマトグラム－質量分析計（ＬＣ－ＭＳ）による分析で、ｍ／ｚ＝４７８（［Ｍ＋Ｈ］＋）が検出される成分である。また、ＲＲＴ０．３４±０．０３の成分も、同様のＬＣ－ＭＳ分析でｍ／ｚ＝４７８（［Ｍ＋Ｈ］＋）が検出される成分である。
　ＲＲＴ０．４１±０．０３の成分、及び０．３４±０．０３の成分を検出するためのＬＣ－ＭＳ測定条件は、例えば以下の分析条件で行われる。
［ＬＣ－ＭＳ分析］
移動相流量: ０．２　ｍＬ/ｍｉｎ
移動相Ａ：０．１％ギ酸溶液
移動相Ｂ：０．１％ギ酸アセトニトリル溶液
移動相の送液：移動相Ａ及びＢの混合比を表３に記載のように変えて濃度勾配制御する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000012
カラム：Ｚｏｒｂａｘ　ＳＢ－Ｃ８，１５０×４．６ ｍｍ，３．５ μｍ（Ａｇｉｌｅｎｔ社製）
イオン化モード：ＥＳＩ（＋／－）
スキャン範囲：ｍ／ｚ　３５０－９００
　本発明において、ペメトレキセド２ナトリウム含有原料のＲＲＴが０．４１±０．０３の成分、ＲＲＴ０．３４±０．０３の成分の含有量を制御することが肝要であるが、その他の類縁物質の含有量が少ないものを用いることがより好ましい。すなわち、前記ＨＰＬＣ分析における面積百分率に基づく含有量として、ペメトレキセドとして９８．５０％以上のペメトレキセド２ナトリウム含有原料を用いることが好ましい。より好ましくはペメトレキセドが９９．００％以上の純度であり、９９．５０％以上の純度であることが殊更好ましい。すなわち、総類縁物質含量が１．５０％より少ないペメトレキセド２ナトリウム含有原料であることが好ましく、１．００％より少ないことがより好ましく、０．５０％より少ないことが殊更好ましい。
　本発明に係るペメトレキセド２ナトリウム含有原料は、更に、ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間（ＲＴ）を指標した相対保持時間（ＲＲＴ）が０．９４±０．０３の成分（式ＩＸ、Keto-Amine体）、及び／又は１．１４±０．０３の成分（式Ｘ、Keto-Formamide体）の成分が含まれることがあり、その含有量と併せて特徴付けることもできる。好ましくは、ＲＲＴが０．９４±０．０３の成分（式ＩＸ、Keto-Amine体）が０．１０％以下、及び／又は、ＲＲＴが１．１４±０．０３の成分（式Ｘ、Keto-Formamide体）が０．１０％以下である。より好ましくは、ＲＲＴが０．９４±０．０３の成分（式ＩＸ、Keto-Amine体）が０．０５％以下、及び／又は、ＲＲＴが１．１４±０．０３の成分（式Ｘ、Keto-Formamide体）が０．０５％以下である。
　また、更なる他の類縁物質としては、ＲＲＴが０．６９±０．０３及び０．７０±０．０３の成分（式ＶＩ、Keto-Pemetrexd）、並びに／若しくは０．９１±０．０３の成分（式ＶＩＩＩ、Oxidateve Dimer）が含まれることがある。好ましくは、０．６９±０．０３及び０．７０±０．０３の成分（式ＶＩ、Keto-Pemetrexd）が０．１０％以下、並びに／若しくは０．９１±０．０３の成分（式ＶＩＩＩ、Oxidateve Dimer）が０．１０％以下である。より好ましくは、０．６９±０．０３及び０．７０±０．０３の成分（式ＶＩ、Keto-Pemetrexd）が０．０１％以上で０．０７５％以下、並びに／若しくは０．９１±０．０３の成分（式ＶＩＩＩ、Oxidateve Dimer）が０．０１％以上で０．０７５％以下である。
　その他の類縁物質としては、ＲＲＴが０．５５±０．０３の成分（式Ｖ、α-Hydroxy Lactone体）、及び０．８３±０．０３の成分（式ＶＩＩ、N-Me体）が含まれることもある。０．５５±０．０３の成分（式Ｖ、α-Hydroxy Lactone体）は０．１０％以下の含有量であり、より好ましくは０．０５％以下の含有量である。０．８３±０．０３の成分（式ＶＩＩ、N-Me体）は０．１０％以下の含有量であり、より好ましくは０．０５％以下の含有量である。
［ペメトレキセド２ナトリウムを有効成分とする注射用溶液製剤］
　本発明のペメトレキセドナトリウムの注射用溶液製剤は、前記の類縁物質プロファイルを充たすペメトレキセド２ナトリウム含有原料を原薬として用い、このペメトレキセド２ナトリウム含有原料の溶液を調製することが第１の工程とする。
　当該溶液調製のための溶媒としては、非経口投与用溶媒として許容されるものであれば特に限定されずに用いることができる。例えば、水、エタノール、ポリソルベート８０、マクロゴール類、グリセリン、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油などが挙げられ、これらの単独使用、若しくは２種以上の混合溶媒であっても良い。溶媒としては、非経口投与可能な品質であることが好ましい。特に好ましい溶媒としては、水を主成分とする含水溶媒である。溶媒として水のみを用いる態様であっても良い。
　本発明の注射用溶液製剤におけるペメトレキセドの濃度は５ｍｇ／ｍＬ以上で５０ｍｇ／ｍＬ以下に設定することが好ましい。より好ましくは、ペメトレキセド濃度として１０ｍｇ／ｍＬ以上で４０ｍｇ／ｍＬ以下である。
　また、溶液調製温度は特に限定されるものではないが、ペメトレキセドの安定性を考慮して６０℃以下で調製することが好ましい。
　本発明の溶液製剤は、医薬品として認容される添加剤を含んでいても良い。添加剤としては非経口投与が可能なものであれば、特に限定されず用いることが出来る。添加剤の種類としては、抗酸化剤、緩衝剤、ｐＨ調節剤、等張化剤、キレート剤、安定化剤を含んでいても良い。
　抗酸化剤とは、有効成分の酸化による分解を抑制するために用いられる添加剤である。例えば、アスコルビン酸、システイン、亜硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、アルファチオグリセリン、クエン酸、チオグリコール酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム、メチオニン、トコフェロール、ブチルヒドロキシアニソール、ジブチルヒドロキシトルエンなどがあげられる。
　緩衝剤とは、ｐＨを一定に保つために使用される添加剤である。例えば、クエン酸塩、リン酸塩、酢酸塩などが用いられる。
　ｐＨ調節剤とは、設定したｐＨの範囲内にするために、使用される添加剤である。例えば、塩酸、水酸化ナトリウム、酢酸やその塩、リン酸やその塩、クエン酸やその塩、酒石酸やその塩などが用いられる。
　等張化剤とは、血清の浸透圧に近づけるために使用される添加剤である。例えば、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、グリセリン、果糖、キシリトール、ソルビトール、トレハロース、ニコチンアミド、ブドウ糖、精製白糖、マンニトール、マクロゴールなどがあげられる。
　キレート剤とは、金属イオンと錯体を形成することで、金属イオンの存在による分解を間接的に抑制する添加剤である。例えば、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム、クエン酸やその塩、酒石酸やその塩、グルコン酸やその塩などがあげられる。
　安定化剤は、有効成分の分解抑制、粒子の安定化等種々の目的に応じて使用される。例えば、アセチルトリプトファン、アラニン、アルギニンやその塩、アルブミン、安息香酸やその塩、イノシトール、エタノール、ヒスチジンやその塩、果糖、カルジアミドナトリウム、カルバゾクロムスルホン酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、キシリトール、グリシン、グルタミン酸やその塩、クレアチニン、リン酸二水素ナトリウム、コンドロイチン硫酸ナトリウム、ジエタノールアミン、ジエチレントリアミン五酢酸、シスチン、ジブチルヒドロキシトルエン、臭化カルシウム、精製ゼラチン、精製大豆レシチン、ゼラチン、ソルビタン酸脂肪酸エステル、ソルビタンセスキオレイン酸エステル、ソルビトール、炭酸水素ナトリウム、チオシアン酸カリウム、デキストラン、糖酸カルシウム、トリエタノールアミン、トロメタモール、ナトリウムホルムアルデヒドスルホシレート、ニコチン酸アミド、乳酸、乳糖、尿素、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸メチル、氷酢酸、ブチルヒドロキシアニソール、プロピレングリコール、ベンザルコニウム、ベンジルアルコール、ベンゼトニウム、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンヒマシ油、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、マクロゴール類、マルトース、ピロリン酸ナトリウム、マレイン酸、リン酸やその塩、メグルミン、メタスルホ安息香酸ナトリウム、モノエタノールアミン、リジン塩酸塩、硫酸マグネシウムなどがあげられる。
　本発明に係る溶液製剤は、酸化を受けやすい有効成分を用いた溶液製剤であることから、抗酸化剤を含有することが好ましい。
　本発明の注射用溶液製剤は、ペメトレキセド２ナトリウム含有原料の溶液を調製した後、前記溶液を製剤用容器に充填して、空隙部分の酸素濃度が１体積％以下の雰囲気でゴム栓により密栓する工程、を含む。本発明は注射用溶液製剤であることから、製剤用容器に無菌的に充填され、酸素濃度が１体積％以下の雰囲気に制御して、気密性の高いゴム栓で封止することにより密封充填製剤として調製される。
　使用される容器としては、ゴム栓等で密封可能であれば、バイアル状、シリンジ状等の形状は特に限定されないが、バイアル状の形状が好ましい。容器の材質としては、例えばソーダライムガラス製、ホウケイ酸ガラス製、環状ポリオレフィンポリマー製、環状ポリオレフィンコポリマー製があげられる。
　ペメトレキセドは、二価金属イオンと錯体を形成し、不溶性微粒子を形成することから、ガラス成分の溶出が抑制されたバイアルを使用する方が好ましい。特に水を充填し、封をしたバイアルに対して、１２１℃で高圧蒸気滅菌処理を１時間行った後に水へ溶出するケイ素が１ｐｐｍ以下であるバイアルが好ましい。このようなケイ素の溶出が抑制されたガラスバイアルとしては、ガラス成分の溶出抑制等の目的に応じて表面処理された容器を用いることが好ましい。
　ガラス成分の溶出が抑制されるバイアルとしてＶＩＳＴバイアル（大和特殊硝子（株）製）、ＶＩＡＬＥＸ（ニプロ（株）製）、ｔｙｐｅ１　ｐｌｕｓ（ＳＣＨＯＴＴ（株）製）などが挙げられる。特に、シリカで内面処理したホウケイ酸ガラスバイアルを用いることが好ましい。シリカで内面処理されたバイアルの例として、シリコートバイアル（不二硝子（株）製）が挙げられる。
　これらの容器を用いて、本発明の方法で脱酸素処理を行い、気密性のゴム栓で封止することにより、高度に脱酸素された注射用溶液製剤を調製することができる。ゴム栓の材質としては、ブチルゴム製のもの、さらにフッ素樹脂によりラミネートされたブチルゴム製のゴム栓を使用するのが好ましい。
　これらの封止可能な容器は、容器及びゴム栓共に適当な方法により滅菌処理を施した包材であることが好ましい。
　ペメトレキセドは、主に酸化によって類縁物質を生成することが知られている。従って、本発明の注射用溶液製剤は、溶液中の溶存酸素の濃度を制御する必要がある。該製剤の容器の空隙の酸素濃度が１％以下である。好ましくは、容器の空隙の酸素濃度が０．５％以下の注射用溶液製剤であり、より好ましくは０．３体積％以下の酸素濃度である。
　容器の空隙中の酸素濃度は、酸素センサーを用いた酸素濃度測定器により測定することができる。例えば、ニードル式酸素センサーを接続した酸素濃度計（ＭｉｃｒｏｘＴＸ３、製造元：ＰｒｅＳｅｎｓ社）を用い、当該注射用溶液製剤の溶液に酸素濃度計の酸素センサーを接液させることで、本発明に係る密封状態のバイアル製剤中の酸素濃度を測定することができる。
　なお、本発明の注射用製剤のバイアル中の空隙部分（ヘッドスペース）は、窒素やアルゴン等の不活性ガスが充填されていることが好ましい。ヘッドスペース内の酸素分圧は、製剤溶液中の溶存酸素濃度と相関する。したがって、ヘッドスペース内の酸素を除去することにより、ペメトレキセド溶液の溶存酸素濃度を減少させることができ、保存安定性の確保に有効である。
　本発明の注射用溶液製剤における空隙部分の酸素濃度を制御する方法として、溶液が充填された容器内に、窒素やアルゴン等の不活性ガスを直接注入し、一定量の不活性ガスを注入した後に、容器をゴム栓等で密封する方法が挙げられる。この方法を用いることで、容器内の空隙酸素濃度を１．０体積％以下に制御することが可能となる。
　また、本発明に係る注射用溶液を充填した容器を密閉空間に設置し、空間内を薬液の任意の温度における蒸気圧を下回らない程度まで減圧し、その後、窒素やアルゴン等の不活性ガスを大気圧になるまで注入し、数時間静置した後、ゴム栓等で密栓する方法を用いても良い。この方法を用いることで、容器内の空隙酸素濃度を１．０体積％以下に制御することが可能となる。
　容器中の充填された溶液以外の空間（ヘッドスペース）の体積もペメトレキセドの安定性に影響を及ぼす。充填された体積に対するヘッドスペース部分の体積の割合が大きくなるほど、容器内の酸素量が増加し、ペメトレキセドの酸化分解が進行しやすくなる。従って、容器中のヘッドスペースの体積が少ない方が好ましい。具体的には、ヘッドスペースの体積の割合が容器の容積に対して７０％以下が好ましく、より好ましくは６０％以下である。
　ペメトレキセドは微量な酸素流入によっても鋭敏に反応して溶液の着色をもたらす。本発明者らは、ペメトレキセドの溶液製剤を調製するに当たり、注射用製剤のバイアル瓶の封止材料であるゴム栓にも酸素透過性があり、その透過酸素が溶液中のペメトレキセドナトリウムの着色や類縁物質生成に悪影響を及ぼすことを見出した。すなわち、ペメトレキセドナトリウム溶液製剤の調製において、封止材料であるゴム栓の選択が重要であり、酸素透過性について温度依存性が低いゴム栓を採用することで溶液着色及び／又は、類縁物質生成を抑制することができる。このため、該注射用溶液製剤に用いるゴム栓は、酸素の透過が高度に抑えられたものである必要がある。特に、酸素の透過性が温度によって変化しないものが好ましい。具体的には、６０℃で２週間の保存中にゴム栓を通して容器の空隙内へ透過する酸素の量が０．００１３ｍｍｏｌ以下であるゴム栓を用いる必要がある。より好ましくは同条件において、酸素透過量が０．００１０ｍｍｏｌ以下のゴム栓であり、さらに好ましくは０．０００８ｍｍｏｌ以下のゴム栓である。
　本明細書において、ゴム栓の酸素の透過量は、以下の方法に従い算出する。酸素透過量（ｍｍｏｌ）＝酸素増加量（体積％）÷１００×容器内空隙容積（ｍＬ）÷（０．０８２×（２７３＋温度（℃）））
酸素増加量（体積％）＝６０℃で２週間保存後の空隙酸素濃度（体積％）－製造直後の空隙酸素濃度（体積％）
　前記ゴム栓の材質としては、上記の酸素透過量以下であればどの材質を選択しても良いが、ブチルゴム製のもの、さらにフッ素樹脂によりラミネートされたブチルゴム製のゴム栓を使用するのが好ましい。さらに具体的にあげると、大協精工（株）製のＤ７１３及びＤ７７７のフッ素樹脂によりラミネートされた材質のゴム栓が好ましい。
　ゴム栓の厚さとしては、一般的に同じ材質であれば、厚みがある方が酸素透過量は低下する。好ましいゴム栓の厚さとしては、接液する部分の最小の厚さが１．５ｍｍ以上であり、より好ましくは２ｍｍ以上である。
　また、ゴム栓の接液部分の面積が小さい方が、酸素透過量は低下する。ゴム栓の接液部分の面積は、容器の口内径に依存するため、容器の口内径が小さいほどゴム栓の接液部分の面積が小さくなり、酸素透過量は低下する。従って、容器の口内径は２０ｍｍ以下が好ましく、より好ましくは１５ｍｍ以下である。
　これらの封止可能な容器は、容器及びゴム栓共に適当な方法により滅菌処理を施した包材であることが好ましい。
　本発明において、ゴム栓には極めて僅かではあるが酸素透過性があることが明らかとなった。したがって、当該注射用溶液製剤は、容器の周辺の酸素濃度を低くすることで、製剤容器内に透過する酸素を抑制することができ、安定性を確保させることができる。特に当該注射用溶液製剤は、酸素濃度が１体積％以下の雰囲気に配置することで、確実に保存安定性を確保することができる。
　注射用溶液製剤は、酸素濃度が１体積％以下の雰囲気に配置する具体的な方法としては、容器を酸素遮断性の袋に入れ、袋の内部を窒素やアルゴンなどの不活性ガスで満たして封を行うこと等が挙げられる。この時の袋の内部の酸素濃度は、１体積％以下が好ましく、より好ましくは０．５体積％以下である。また、注射用溶液製剤の容器と酸素遮断性の袋の間の空間に脱酸素剤を挿入し、封をすることで、袋の内部の酸素が吸収され、さらに安定性を向上させることができる。なお、酸素遮断性の袋の内部の酸素濃度は、該袋内容積に相当する酸素含量に対して、酸素吸着能に応じた脱酸素剤を適用することで袋の内部の酸素濃度を１体積％以下、好ましくは０．５体積％以下に調整することができる。
　酸素遮断性の袋の酸素透過度は、１ｍＬ／ｍ２・２４ｈｒ・ａｔｍ以下であることが好ましく、より好ましくは０．５ｍＬ／ｍ２・２４ｈｒ・ａｔｍ以下であり、さらに好ましくは０．２ｍＬ／ｍ２・２４ｈｒ・ａｔｍ以下である。酸素遮断性の袋に使用される酸素遮断性のフィルムの材質としては、アルミ箔、ナイロン、ポリ塩化ビニリデン、エチレン・ビニルアルコール共重合体、無機蒸着フィルム（例として、アルミナ蒸着ポリエチレンテレフタレート、シリカ蒸着ポリエチレンテレフタレート等）が用いられる。
　脱酸素剤としては、鉄系自力反応型の脱酸素剤である、三菱ガス化学（株）製のエージレスＳ，ＳＰ、ＺＰ、Ｚ－ＰＫＣ、ＺＪ－ＰＴ、日本化薬フードテクノ（株）製のモデュランＳなどが挙げられる。
　本発明の保存下における溶液着色を抑制できるペメトレキセドナトリウムの注射用溶液製剤は、保存期間中において、ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間（ＲＴ）を指標した相対保持時間（ＲＲＴ）が１．０７±０．０３の成分の生成を抑制できる。また、ＲＲＴが０．９４±０．０３である式（ＩＸ）で表される化合物（keto-amine体）の生成を抑制することができる。これらの類縁物質はペメトレキセド溶液製剤の保存中に増加してくる成分である。これらの成分と溶液着色との相関は明らかではないが、本発明による溶液製剤は、保存下におけるこれらの成分の含有量が少ないことが特徴である。
　具体的には、当該溶液製剤を６０℃で２週間保存した場合において、ＲＲＴが１．０７±０．０３の成分は０．０５％以下（面積百分率）である。好ましくは０．０３％以下であり、より好ましくは０．０１％未満である。また同じ保存条件下で、式（ＩＸ）で表される化合物（ＲＲＴ；０．９４±０．０３、keto-amine体）は０．０５％以下（面積百分率）であり、より好ましくは０．０３％以下である。
　また、本発明のペメトレキセドナトリウムの注射用溶液製剤は、保存期間中において、総類縁物質の生成を抑制できる。具体的には、当該溶液製剤を６０℃で２週間保存した場合において、総類縁物質含有量が０．７０％以下（面積百分率）であり、より好ましくは０．５０％以下である。
　本発明のペメトレキセドナトリウムの注射用溶液製剤は、保存期間中において溶液の着色を抑制できる。ペメトレキセドナトリウムの溶液製剤は、通常、保存中において徐々に黄色を呈し、時間の経過により明らかな黄色澄明溶液に変化するものであるが、当該溶液製剤は目視において無色～極めて僅かな黄色の着色範囲の澄明溶液状態を維持することができる。溶液製剤の着色の評価として色彩色差計によるｂ＊値を指標とすると、本発明の溶液製剤はｂ＊値が±３０以下である。ｂ＊値は色度を表しており、数値がプラスであれば黄色方向、マイナスであれば青色方向を示し、数値がゼロに近い程無色溶液であることを示す。本発明の溶液製剤は、好ましくはｂ＊値±２０以下であり、より好ましくは±１５以下である。すなわち、本発明に係る溶液製剤は、６０℃で２週間保存した場合において、色彩色差計によるｂ＊値が±３０以下であり、好ましくは±２０以下であり、より好ましくは±１５以下である。
　本発明のペメトレキセドの注射用溶液製剤は以下の工程に示すように、注射用溶液製剤の製造における一般的な工程により製造することができる。ただし、本発明が以下の製造方法に限定されるものではない。
工程（ａ）ペメトレキセド２ナトリウム含有原料、並びに必要に応じて製薬上許容可能な添加剤を秤量し、適当な溶媒に溶解させる。
工程（ｂ）必要に応じて、前記溶液に製薬上許容可能なｐＨ調節剤を添加する。
工程（ｃ）必要に応じて工程（ｂ）の溶液に製薬上許容可能な溶媒を補って最終容積を満たす。
工程（ｄ）工程（ｃ）の溶液をろ過滅菌する。
工程（ｅ）工程（ｄ）により得られた溶液を、製薬上許容可能な容器に充填する。
工程（ｆ）必要に応じて製薬上許容可能な不活性ガスにより容器内をパージする。
工程（ｇ）ゴム栓で容器に栓を行い、必要に応じてアルミキャップにより密封する。
工程（ｈ）必要に応じて製薬上許容可能な最終滅菌を行う。
　必要に応じて、工程（ａ）から工程（ｃ）の工程時に混合物に不活性ガスを吹き込むことができる。以上の工程により、本発明に係る注射用溶液製剤を製造することができる。なお、更に、該注射用溶液製剤は、任意の脱酸素剤と共に、酸素遮断性の袋に収納して密封することで、酸素による悪影響をより抑制できる態様とすることができる。この酸素遮断性袋内は不活性ガスを吹き込んだ後、密封してもよい。
　以下に、本発明を実施例により更に説明する。ただし、本発明がこれらの実施例に限定されるものではない。
　ペメトレキセド２ナトリウム塩、注射用溶液製剤の分析は以下のＨＰＬＣ分析の条件で行った。
［ＨＰＬＣ分析］
検出器：紫外吸光光度計（測定波長：２２８ｎｍ）
カラム：Ｚｏｒｂａｘ　ＳＢ－Ｃ８，１５０×４．６ ｍｍ，３．５ μｍ（Ａｇｉｌｅｎｔ社製）
カラム温度：３０℃付近の一定温度
移動相Ａ：２５ｍＭ リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝９７／３
移動相Ｂ：２５ｍＭ リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝３０／７０
流量：１．０ｍＬ／分
面積測定範囲：試料溶液注入後３２分間
移動相の送液：移動相Ａ及びＢの混合比を表４に記載のように変えて濃度勾配制御する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000013
　このＨＰＬＣ分析条件で、ペメトレキセドが溶出する保持時間（ＲＴ）は２０．２分であった。各類縁物質は、これを指標に各溶出成分の相対保持時間（ＲＲＴ）により特定した。
　ＨＰＬＣ分析により、ＲＲＴ０．４１成分及び０．３４成分のＬＣ－ＭＳ分析を以下の条件にて行った。
［ＬＣ－ＭＳ分析］
移動相流量: ０．２　ｍＬ/ｍｉｎ
移動相Ａ：０．１％ギ酸溶液
移動相Ｂ：０．１％ギ酸アセトニトリル溶液
移動相の送液：移動相Ａ及びＢの混合比を以下のように変えて濃度勾配制御する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000014
カラム：Ｚｏｒｂａｘ　ＳＢ－Ｃ８，１５０×４．６ ｍｍ，３．５ μｍ（Ａｇｉｌｅｎｔ社製）
イオン化モード：ＥＳＩ（＋／－）
スキャン範囲：ｍ／ｚ　３５０－９００
［薬液の着色評価］
　薬液の着色について、色彩色差計ＣＲ－５（コニカミノルタ（株）製）にて測定し、ｂ＊値を算出した。ｂ＊値は、色度を表しており、数値がプラスであれば黄色方向、マイナスであれば青色方向を示す。数値が±１５の範囲であれば、目視評価上は着色なしと判断した。
［実施例１］注射用溶液製剤に用いられるペメトレキセド２ナトリウム含有原料の製造
（１）　４－［２－（２－アミノ－４－オキソ－４，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－イル)エチル]安息香酸（４．０　ｋｇ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１８．９ ｋｇ）及びＮ－メチルモルホリン（３．０ｋｇ）を仕込み、窒素雰囲気下、１０℃まで冷却した後、２－クロロ－４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン（２．６　ｋｇ）を仕込み、撹拌した。Ｌ－グルタミン酸ジエチル塩酸塩（３．５　ｋｇ）を加え、２５℃で反応を行った。
　反応液を１５％食塩水（４０．０　ｋｇ）と酢酸エチル（３６．０　ｋｇ）の混合液に投入して撹拌後、分液した。分液後の水層を酢酸エチル（１８．０　ｋｇ）で抽出し、抽出液を分液した酢酸エチル層と混合した。混合した酢酸エチル層を５０℃に加温し、ｐ－トルエンスルホン酸・一水和物（３．０　ｋｇ）のエタノール（３１．６　ｋｇ）溶液を滴下し、結晶を析出させた。２５℃まで冷却した後、析出した結晶をろ過し、エタノールで洗浄した。得られた結晶を５０℃で減圧乾燥し、Ｎ－｛４－［２－（２－アミノ－４－オキソ－４，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－イル）エチル］ベンゾイル｝－Ｌ－グルタミン酸ジエチル　ｐ－トルエンスルホン酸塩を得た（収量７．７　ｋｇ）。
（２）　２ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム溶液（２５．７　ｋｇ）を仕込み、５℃まで冷却後、Ｎ－｛４－［２－（２－アミノ－４－オキソ－４，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－イル）エチル]ベンゾイル｝－Ｌ－グルタミン酸ジエチル　ｐ－トルエンスルホン酸塩の結晶（７．７　ｋｇ）及び精製水（３．１　ｋｇ）を仕込み、窒素雰囲気下、反応を行った。
　希釈した塩酸を滴下し、５０℃にてｐＨを３．０に調整し、結晶を析出させた。この懸濁液を７０℃まで加温し撹拌後、２５℃に冷却して析出した結晶をろ過し、精製水及びエタノールで洗浄した。得られた結晶を５０℃で減圧乾燥し、Ｎ－｛４－［２－（２－アミノ－４－オキソ－４，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－イル）エチル］ベンゾイル｝－Ｌ－グルタミン酸を得た（収量４．９　ｋｇ）。
（３）　Ｎ－｛４－［２－（２－アミノ－４－オキソ－４，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－イル)エチル]ベンゾイル｝－Ｌ－グルタミン酸の結晶（４．９　ｋｇ）及びジメチルスルホキシド（２３．２　ｋｇ）を仕込み、窒素雰囲気下、結晶を溶解した。エタノール（３３．３　ｋｇ）を滴下し結晶を析出させた後、４５℃で撹拌した。５℃まで冷却した後、析出した結晶をろ過し、エタノールで洗浄してＮ－｛４－［２－（２－アミノ－４－オキソ－４，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－イル）エチル］ベンゾイル｝－Ｌ－グルタミン酸　ジメチルスルホキシド溶媒和物の粗結晶を得た。同様の再結晶操作を繰り返し実施後、得られた結晶を５０℃で減圧乾燥し、Ｎ－｛４－［２－（２－アミノ－４－オキソ－４，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－イル)エチル]ベンゾイル｝－Ｌ－グルタミン酸　ジメチルスルホキシド溶媒和物の精製結晶を得た（収量 ６．３　ｋｇ）。
（４）　窒素雰囲気下、０．５ ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム溶液（４０．０　ｋｇ）を仕込んだ後、Ｎ－｛４－［２－（２－アミノ－４－オキソ－４，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－イル）エチル］ベンゾイル｝－Ｌ－グルタミン酸　ジメチルスルホキシド溶媒和物の精製結晶（５．２　ｋｇ）を仕込み、精製水（６．３　ｋｇ）で洗い込んだ。水酸化ナトリウム溶液でｐＨを８．０に調整し、結晶を溶解した後、活性炭を精製水に懸濁して加え、撹拌した。
　活性炭をろ過し、精製水で活性炭を洗浄した。ろ液を５０℃まで加温した後、エタノール（１１４．４ｋｇ）を滴下し、結晶を析出させた。５℃まで冷却した後、析出した結晶をろ過し、エタノールと精製水の混合液で洗浄した。得られた結晶を５０℃で減圧乾燥し、Ｎ－｛４－［２－（２－アミノ－４－オキソ－４，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－イル）エチル］ベンゾイル｝－Ｌ－グルタミン酸二ナトリウム　２．５水和物（ペメトレキセド２ナトリウム　２．５水和物）を得た（収量４．９kg）。
　実施例１として得られたペメトレキセド２ナトリウム塩　２．５水和物は、ＨＰＬＣ分析で純度９９．８０％（面積百分率）であった。
　またＲＲＴ０．３４の成分は０．０２％（面積百分率）、ＲＲＴ０．４１の成分は０．０５％（面積百分率）であった。その他の類縁物質を含めたＨＰＬＣ分析結果を表６にまとめた。また、そのクロマトチャートを図１に示した。
［実施例２］注射用溶液製剤に用いられるペメトレキセド２ナトリウム含有原料の製造
　実施例１と同様の製造方法で、ペメトレキセド２ナトリウム　２．５水和物を得た。得られたペメトレキセド２ナトリウム　２．５水和物は、ＨＰＬＣ分析で純度９９．８３％（面積百分率）であった。
　またＲＲＴ０．３４の成分は０．００％（面積百分率）、ＲＲＴ０．４１の成分は０．０１％（面積百分率）であった。その他の類縁物質を含めたＨＰＬＣ分析結果を表６にまとめた。
［実施例３］注射用溶液製剤に用いられるペメトレキセド２ナトリウム含有原料の製造
　実施例１と同様の製造方法でペメトレキセド２ナトリウム　２．５水和物を得た。得られたペメトレキセド２ナトリウム　２．５水和物はＨＰＬＣ分析で純度９９．９０％（面積百分率）であった。
　またＲＲＴ０．３４の成分は０．０１％（面積百分率）、ＲＲＴ０．４１の成分は０．０１％（面積百分率）であった。その他の類縁物質を含めたＨＰＬＣ分析結果を表６にまとめた。
［比較例１］注射用溶液製剤に用いられるペメトレキセド２ナトリウム含有原料の調製
　実施例１と同様の製造方法によりペメトレキセド２ナトリウム　２．５水和物を得た。それを大気雰囲気下で、温度４０℃、１箇月半保管したものを比較例１のペメトレキセド２ナトリウム　２．５水和物とした。
　比較例１のペメトレキセド２ナトリウム　２．５水和物は、ＨＰＬＣ純度９９．６５％であった。またＲＲＴ０．３４の成分は０．０５％（面積百分率）、ＲＲＴ０．４１の成分は０．１３％（面積百分率）であった。その他の類縁物質を含めたＨＰＬＣ分析結果を表６にまとめた。
　比較例１のペメトレキセド２ナトリウム２．５水和物含有原料について、ＨＰＬＣ分析におけるＲＲＴ０．３４の成分及びＲＲＴ０．４１の成分を、ＬＣ－ＭＳ分析により質量分析を行ったところ、ＲＲＴ０．３４及びＲＲＴ０．４１は、双方ともポジティブモードでｍ／ｚ＝４７８（［Ｍ＋Ｈ］＋）が検出された。それぞれの成分のＭＳスペクトルデータを図４及び図５に示した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000015
　構造既知の類縁物質（式（Ｖ）～（Ｘ））は以下の通りである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000016
［実施例４］注射用溶液製剤の製造
　実施例１のペメトレキセド２ナトリウム２．５水和物（ＲＲＴ０．３４の成分；０．０２％、ＲＲＴ０．４１の成分；０．０５％）２７１９ｍｇ（ペメトレキセドとして２２５０ｍｇ）を、８７．２８ｍＬの注射用水に溶解した（全量９０ｍＬ　ペメトレキセドとして２５ｍｇ／ｍＬ）。
　この溶液を、孔径０．２２μｍのメンブランフィルターを用いて無菌ろ過を行い、容量１０ｍＬ、口内径１２．５ｍｍのホウケイ酸ガラス製のバイアル（不二硝子（株）製）にろ過した液を４ｍＬ充填し、バイアルの空隙部分の酸素濃度が０．５体積％以下になるよう窒素を注入し、大協精工（株）製のフッ素樹脂によりラミネートされたＤ７１３ブチルゴム栓（厚さ２ｍｍ）で打栓し、アルミキャップにて巻締めを行った。その後、巻締めされたバイアルを、脱酸素剤（日本化薬フードテクノ（株）製、モデュランＳ－５００）と共に、無機蒸着フィルム製の袋（酸素透過度０．２ｍＬ／ｍ２・２４ｈｒ・ａｔｍ以下）に入れて、ヒートシーラーにてシールして二次包装を行い、実施例４のペメトレキセドナトリウムの注射用溶液製剤を調製した。
［実施例５］注射用溶液製剤の製造
　実施例２のペメトレキセド２ナトリウム２．５水和物（ＲＲＴ０．３４の成分；０．００％、ＲＲＴ０．４１の成分；０．０１％）を使用し、実施例４と同様の操作により実施例５の注射用溶液製剤を調製した。
［比較例２］注射用溶液製剤の製造
　医薬品原薬として流通しているペメトレキセド２ナトリウム２．５水和物を購入した。ＨＰＬＣ分析により、ペメトレキセド純度は９９．２５％（面積百分率）、並びにＲＲＴ０．３４の成分が０．０８％（面積百分率）、ＲＲＴ０．４１の成分が０．２２％（面積百分率）であった。その他の類縁物質を含めたＨＰＬＣ分析結果を表７にまとめた。
　このペメトレキセド２ナトリウム２．５水和物　９５２ｍｇ（ペメトレキセドとして７８８ｍｇ）を、３０．５５ｍＬの注射用水に溶解し（全量３１．５ｍＬ）、実施例４と同様の操作を行い、比較例２の注射用溶液製剤を調製した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000017
［試験例１］注射用溶液製剤の６０℃保存安定性試験
　実施例４及び５、並びに比較例２の注射用溶液製剤を、６０℃の条件下にて２週間保存した。各製剤について、着色（ｂ＊値、目視評価）、並びにペメトレキセド由来の類縁物質を評価した。各製剤の、着色並びにペメトレキセド由来の類縁物質の評価結果を表８に示す。また、実施例４及び比較例２における試験開始時（Ａ）及び６０℃２週間後（Ｂ）のＨＰＬＣチャートを、図２及び図３に示した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000018
　比較例２は、実施例４及び５と比較して、化合物（ＩＸ）が高含量で存在し、着色が著しく増加していた。これは、比較例２使用したペメトレキセド２ナトリウム含有原料が、ＲＲＴ０．３４及びＲＲＴ０．４１の類縁物質の含有量が多く、この成分によってペメトレキセドを含む注射用溶液製剤の着色が保存期間中に増加したものと考えられる。
　実施例４及び５のように、ＲＲＴ０．３４及びＲＲＴ０．４１の類縁物質の含有量を低減したペメトレキセド２ナトリウム含有原料を注射用溶液製剤の原薬として使用することで、保存下における着色を大きく抑制できることが明らかとなった。また、総類縁物質量も少なく、化学的安定性に優れた注射用溶液製剤を提供できることが明らかとなった。
［実施例６］注射用溶液製剤の製造
　ペメトレキセド純度９８．５５％（面積百分率）、ＲＲＴ０．３４の成分；０．０１％、ＲＲＴ０．４１の成分；０．０１％のペメトレキセド２ナトリウム２．５水和物　１９６０ｍｇ（ペメトレキセドとして１６２５ｍｇ）を６３．０４ｍＬの注射用水に溶解した（全量６５ｍＬ）。
　この溶液を、孔径０．２２μｍのメンブランフィルターを用いて無菌ろ過を行い、容量１０ｍＬ、口内径１２．５ｍｍのホウケイ酸ガラス製のバイアル（不二硝子（株）製）にろ過した液を４ｍＬ充填し、バイアルの空隙部分の酸素濃度が０．５体積％以下になるよう窒素を注入し、大協精工（株）製のフッ素樹脂によりラミネートされたＤ７１３ブチルゴム栓（厚さ２ｍｍ）で打栓し、アルミキャップにて巻締めを行った。その後、巻締めされたバイアルを脱酸素剤（日本化薬フードテクノ（株）製、モデュランＳ－５００）と共に無機蒸着フィルム製の袋（酸素透過度０．２ｍＬ／ｍ２・２４ｈｒ・ａｔｍ以下）に入れて、ヒートシーラーにてシールして二次包装を行い、実施例６の注射用溶液製剤を調製した。
［比較例３］注射用溶液製剤の製造
　実施例６で使用したペメトレキセド２ナトリウム２．５水和物を、大気雰囲気下で温度４０℃で１箇月半保管した後のものをペメトレキセド２ナトリウム含有原料に使用した以外は、実施例６と同様の操作を行い、比較例３の注射用溶液製剤を調製した。
　なお、比較例３で用いたペメトレキセド２ナトリウム含有原料（大気雰囲気下で温度４０℃で１箇月半保管した後のペメトレキセド２ナトリウム塩２．５水和物）は、ＲＲＴ０．３４の成分は０．０５％（面積百分率）、ＲＲＴ０．４１の成分は０．１３％（面積百分率）であった。
［試験例２］注射用溶液製剤の６０℃保存安定性試験
　実施例６及び比較例３の注射用溶液製剤を、６０℃の条件下にて２週間保存した。各製剤について、着色（ｂ＊値、目視評価）、ペメトレキセド由来の類縁物質を評価した。各製剤の、着色、ペメトレキセド由来の類縁物質の評価結果を表９に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000019
　比較例３については、実施例６と比較して、化合物（ＩＸ）が高含量で存在し、着色が大きく増加した。これは、比較例３で使用したペメトレキセド２ナトリウムは温度４０℃で１箇月半保管したことにより、ＲＲＴ０．３４及びＲＲＴ０．４１の類縁物質量が増加し、この成分によってペメトレキセドを含む注射用溶液製剤の着色が保存期間中に増加したためと考えられる。
　以上の検証結果から、ＲＲＴ０．３４±０．０３及びＲＲＴ０．４１±０．０３の類縁物質が抑制されたペメトレキセド２ナトリウム塩含有原料を使用することで、ペメトレキセドを含む注射用溶液製剤の保存期間中の着色を大きく抑制できることが明らかとなった。

Claims (11)

  1. ペメトレキセド２ナトリウムを有効成分として含有する注射用溶液製剤の製造方法であって、
    （１）ペメトレキセド２ナトリウム含有原料を用いて注射用溶液を調製する工程、および
    （２）前記注射用溶液を製剤用容器に充填して、空隙部分の酸素濃度が１体積％以下の雰囲気でゴム栓により密栓する工程、を含み、
    前記原料が、ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間（ＲＴ）を指標とした相対保持時間（ＲＲＴ）が０．４１±０．０３の成分を０．１０％以下で含有し、
    前記ＨＰＬＣ分析の条件が、以下に示す分析条件である、
    製造方法。
    ［ＨＰＬＣ分析条件］
    測定波長：２２８ｎｍ
    カラム：Ｃ８カラム，１５０×４．６ｍｍ，３．５μｍ
    カラム温度：３０℃
    移動相Ａ：２５ｍＭ　リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝９７／３
    移動相Ｂ：２５ｍＭ　リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝３０／７０
    移動相の濃度勾配制御（移動相Ａの濃度（ｖｏｌ％）勾配（注入後の時間））：１００→７５（０－２０分）、７５→０（２０－３２分）、残部は移動相Ｂである。
    流量：１．０ｍＬ／分
    面積測定範囲：試料溶液注入後３２分間
  2. ペメトレキセド２ナトリウム含有原料が、ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間を指標とした相対保持時間（ＲＲＴ）が０．３４±０．０３の成分を０．０５％以下で含有する、請求項１に記載の製造方法。
  3. ペメトレキセド２ナトリウム含有原料が、ＨＰＬＣ純度が９８．５０％以上である請求項１又は２に記載の製造方法。
  4. ６０℃の温度条件下で２週間の保存期間中に容器内へ透過する酸素量が０．００１３ｍｍｏｌ以下であるゴム栓を用いて密栓する、請求項１～３の何れか一項に記載の製造方法。
  5. 製剤用容器の容積から、前記注射用溶液の体積を除いた容器の空隙部分の容積が、容器の容積に対して６０％以下である、請求項１～４の何れか一項に記載の製造方法。
  6. ペメトレキセド２ナトリウムを有効成分として含有する注射用溶液製剤が、ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間（ＲＴ）を指標とした相対保持時間（ＲＲＴ）が１．０７±０．０３の成分を０．０５％以下で含有する、請求項１～５の何れか一項に記載の製造方法。
  7. ペメトレキセド２ナトリウムを有効成分として含有する注射用溶液製剤が、式（ＩＸ）で表される化合物又はその塩を０．０５％以下で含有する、請求項１～６の何れか一項に記載の製造方法。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
  8. ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間（ＲＴ）を指標とした相対保持時間（ＲＲＴ）が１．０７±０．０３の成分が０．０５％以下で含有する、ペメトレキセド２ナトリウムを有効成分として含有する注射用溶液製剤であって、前記ＨＰＬＣ分析の条件が以下に示す分析条件である、注射用溶液製剤。
    ［ＨＰＬＣ分析条件］
    測定波長：２２８ｎｍ
    カラム：Ｃ８カラム，１５０×４．６ｍｍ，３．５μｍ
    カラム温度：３０℃
    移動相Ａ：２５ｍＭ　リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝９７／３
    移動相Ｂ：２５ｍＭ　リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝３０／７０
    移動相の濃度勾配制御（移動相Ａの濃度（ｖｏｌ％）勾配（注入後の時間））：１００→７５（０－２０分）、７５→０（２０－３２分）、残部は移動相Ｂである。
    流量：１．０ｍＬ／分
    面積測定範囲：試料溶液注入後３２分間
  9. 式（ＩＸ）で表される化合物を０．０５％以下で含有する、請求項８に記載の注射用溶液製剤。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
  10. 医薬品の注射用溶液製剤の製造に用いられるペメトレキセド２ナトリウム含有原料であって、ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間（ＲＴ）を指標とした相対保持時間（ＲＲＴ）が０．４１±０．０３の成分を０．１０％以下で含有し、前記ＨＰＬＣ分析の条件が以下に示す分析条件である、注射用溶液製剤用ペメトレキセド２ナトリウム含有原料。
    ［ＨＰＬＣ分析条件］
    測定波長：２２８ｎｍ
    カラム：Ｃ８カラム，１５０×４．６ｍｍ，３．５μｍ
    カラム温度：３０℃
    移動相Ａ：２５ｍＭ　リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝９７／３
    移動相Ｂ：２５ｍＭ　リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）／アセトニトリル＝３０／７０
    移動相の濃度勾配制御（移動相Ａの濃度（ｖｏｌ％）勾配（注入後の時間））：１００→７５（０－２０分）、７５→０（２０－３２分）、残部は移動相Ｂである。
    流量：１．０ｍＬ／分
    面積測定範囲：試料溶液注入後３２分間
  11. ＨＰＬＣ分析におけるペメトレキセドの保持時間を指標とした相対保持時間（ＲＲＴ）が０．３４±０．０３の成分を０．０５％以下で含有する、請求項１０に記載の注射用溶液製剤用ペメトレキセド２ナトリウム含有原料。
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