WO2019073999A1

WO2019073999A1 - 細胞内液精製システム、細胞内液精製方法、炎症性腸疾患の予防剤、改善剤または治療剤、あるいは、精子活性化剤、もしくは、化粧品成分を製造する製造方法、炎症性腸疾患の予防剤、改善剤または治療剤、および、精子活性化剤の製造方法

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Publication number: WO2019073999A1
Application number: PCT/JP2018/037699
Authority: WO
Inventors: 山本　徳則; 鈴木　哲; 星野　洋一郎; 祐志堀田; 和哲木村; 哲磨村瀬; 八木　良樹
Original assignee: マイクロニクス株式会社; 佐伯正典
Priority date: 2017-10-13
Filing date: 2018-10-10
Publication date: 2019-04-18

Abstract

細胞内液精製システムは、無菌室と、細胞を含む溶液を収容した第１容器の搬送を行う搬送装置と、細胞の細胞膜を破壊して、溶液中に細胞内液を取り出す細胞膜破壊装置と、溶液から細胞内液の成分を遠心分離する遠心分離機と、遠心分離された細胞内液の前記成分を回収する回収装置とを具備する。

Description

細胞内液精製システム、細胞内液精製方法、炎症性腸疾患の予防剤、改善剤または治療剤、あるいは、精子活性化剤、もしくは、化粧品成分を製造する製造方法、炎症性腸疾患の予防剤、改善剤または治療剤、および、精子活性化剤の製造方法

　本発明は、細胞内液精製システム、細胞内液精製方法、炎症性腸疾患の予防剤、改善剤または治療剤、あるいは、精子活性化剤、もしくは、化粧品成分を製造する製造方法、炎症性腸疾患の予防剤、改善剤または治療剤、および、精子活性化剤の製造方法に関する。

　畜産において、高額で販売される黒毛和種肉用牛の受精卵をホルスタイン種乳用牛の子宮へ移植し、乳用牛から肉用牛を生産する受精卵移植が行われている。この技術によれば、生まれた肉用牛の子牛は高額で販売され、その一方、分娩した乳用牛は泌乳を開始する（即ち、搾乳が可能になる）ことから、まさに一石二鳥である。この技術では、まず肉用牛の雌牛に肉用牛の雄の精液を人工授精し、受精卵を子宮から取り出す。取り出した受精卵は乳用牛の子宮へ移植される。正常な受精卵を移植することが必要となるが、人工受精に供した肉用牛から採取できる正常な受精卵の数は採取毎に大きく異なり、十分な数の正常受精卵が得られない場合もある。

　一方、ホルスタイン種乳牛においては、随時、後継牛を生産する必要があるが、通常の人工授精では雄と雌の子牛の割合がおよそ５０％ずつ生まれる。搾乳できる個体は雌に限られることから（言い換えれば、雄のホルスタイン種子牛は乳用牛としての価値がない)、生まれるホルスタイン種の子牛は雌であることが望まれる。この要望を受け、近年、受精すると受精卵が雌になる精子(Ｘ精子）のみを精液中から選別する方法（受精卵が雄になるＸ精子と受精卵が雌になるＹ精子をフローサイトメーターにより分離し、人工受精用にＸ精子のみを凍結保存する）が開発され、当該方法によって得られる凍結精液（性選別精液）が販売されている。しかし、選別の過程で精子の運動性が低下することから、このような「性選別精液」は通常の凍結精液に比べて受胎率が低いのが現状である。性選別精液の受胎率を向上させる方法が開発されてはいるものの、性選別精液の受胎率は未だ通常の凍結精液の受胎率には達していないのが現状である。

　関連する技術として、特許文献１および特許文献２には、脂肪組織由来幹細胞（Ａｄｉｐｏｓｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ：ＡＤＳＣ、Ａｄｉｐｏｓｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｃｅｌｌｓ：ＡＤＲＣ、Ａｄｉｐｏｓｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ：ＡＴ－ＭＳＣ、ＡＤ－ＭＳＣなどと呼ばれる）を用いて、精子または卵子を活性化する技術が開示されている。

特開２０１５－８２９８７号公報特開２０１６－７１６１号公報

　黒毛和種肉用牛の受精卵移植に際しては、多数の正常受精卵を高率に且つ安定的に採取することが望まれるが、受精卵の採取数低下や採取される数の変動が大きい等、解決すべき点が多々残されている。一方、ホルスタイン種乳牛の性選別精液は、雌子牛（将来牛乳を生産する個体）のみを出産させる目的で作製され、凍結精液として販売されているが、上記の通り、通常の凍結精液よりも受胎率が低く、受胎率向上が強く求められている。

　また、ウシに限らず、他の家畜の人工授精に関しても、精子の運動率や受胎率の向上が要望されている。例えば、夏の室内温度上昇のために、いわゆる夏季不妊症と呼ばれるブタ精子の運動率低下が毎年夏季に発生し、人工授精用精液の供給に不安定性を来している。一方、現代社会において不妊症に悩む夫婦は多く、その対処法（治療法）に対するニーズは大きい。不妊症の中でも、主たる原因が男性側に認められるものは男性不妊症と呼ばれる。男性不妊症の一つとして、陰嚢静脈逆流または鬱滞により精巣温度が上昇し、精子運動率が低下する精索静脈瘤の病態がある。

　そこで、本発明は、畜産分野や医療分野等における上記の要望に応え、受精卵移植または生殖医療を含む畜産分野および医療分野等の発展、向上に貢献することを目的とする。また、本発明のより具体的な目的の一例は、精子または卵子等の生細胞の活性化、または、炎症性腸疾患等の予防、治療または改善に寄与する細胞内液の精製システム、および、精製方法等を提供することである。

　いくつかの実施形態における細胞内液精製システムは、無菌室と、細胞を含む溶液を収容した第１容器の搬送を行う搬送装置と、前記細胞の細胞膜を破壊して、前記溶液中に細胞内液を取り出す細胞膜破壊装置と、前記溶液から前記細胞内液の成分を遠心分離する遠心分離機と、遠心分離された前記細胞内液の前記成分を回収する回収装置とを具備する。

　いくつかの実施形態における細胞内液精製方法は、細胞内液精製システムを用いた細胞内液精製方法である。前記細胞内液精製システムは、細胞膜破壊装置と、遠心分離機と、回収装置とを具備する。前記細胞内液精製方法は、前記細胞膜破壊装置によって、溶液中に存在する細胞の細胞膜を破壊する工程と、前記遠心分離機によって、前記溶液から細胞内液の成分を遠心分離する工程と、前記回収装置により、遠心分離された前記細胞内液の前記成分を回収する工程とを具備する。

　いくつかの実施形態における炎症性腸疾患の予防剤、改善剤または治療剤、あるいは、精子活性化剤を製造する製造方法は、細胞内液精製システムを用いて炎症性腸疾患の予防剤、改善剤または治療剤、あるいは、精子活性化剤、もしくは、化粧品成分を製造する製造方法である。前記細胞内液精製システムは、細胞膜破壊装置と、遠心分離機と、回収装置とを具備する。前記製造方法は、前記細胞膜破壊装置によって、溶液中に存在する細胞の細胞膜を破壊する工程と、前記遠心分離機によって、前記溶液から細胞内液の成分を遠心分離する工程と、前記回収装置により、遠心分離された前記細胞内液の成分を回収する工程とを具備する。前記細胞膜破壊装置によって破壊される前記細胞は、幹細胞である。

　いくつかの実施形態における炎症性腸疾患の予防剤、改善剤または治療剤は、幹細胞の細胞膜を破壊することによって得られる細胞内液を有効成分として含む炎症性腸疾患の予防剤、改善剤または治療剤である。

　いくつかの実施形態における精子活性化剤の製造方法は、幹細胞の細胞膜を破壊することによって細胞内液を取り出す工程と、前記細胞内液を出荷容器に収容する工程とを具備する。前記出荷容器には、１ｍｌあたり、１３万個以上の幹細胞（ｉＰＳ細胞を除く。）から取り出された細胞内液が含まれているか、１ｍｌあたり、幹細胞（ｉＰＳ細胞を除く。）の細胞内液由来の蛋白質が０．０３４μｇ以上含まれているか、１ｍｌあたり、１３０万個以上のｉＰＳ細胞から取り出された細胞内液が含まれているか、あるいは、１ｍｌあたり、ｉＰＳ細胞の細胞内液由来の蛋白質が０．３２μｇ以上含まれている。

　本発明のいくつかの実施形態により、精子または卵子等の生細胞の活性化に寄与する細胞内液の精製システム、および、精製方法を提供することができる。また、炎症性腸疾患等の予防、改善または治療、あるいは、精子の活性化に貢献することができる。

図１は、第１の実施形態における細胞内液精製システムの一例を示す模式図である。図２は、細胞膜破壊装置の一例を模式的に示す概略断面図である。図３は、細胞膜破壊装置の他の一例を模式的に示す概略断面図である。図４は、回収装置の一例を模式的に示す概略断面図である。図５Ａは、攪拌装置の一例を模式的に示す概略断面図である。図５Ｂは、攪拌装置の他の一例を模式的に示す概略断面図である。図６は、固液分離装置の一例を模式的に示す概略断面図である。図７は、第１容器の一例を示す模式的に示す概略断面図である。図８は、出荷容器の一例を示す模式的に示す概略断面図である。図９は、第２の実施形態における細胞内液精製システムの一例を示す模式図である。図１０は、無菌エアの循環流路の一例を模式的に示す図である。図１１は、実施形態における細胞内液精製方法の一例を示すフローチャートである。図１２は、第３の実施形態における細胞内液精製システムの一例を示す模式図である。図１３は、細胞膜破壊装置の一例を模式的に示す概略断面図である。図１４は、牛の幹細胞を凍結・解凍処理することにより得られる細胞内液中の牛の精子の直線移動速度の経時変化、人の幹細胞を超音波破砕処理することにより得られる細胞内液中の牛の精子の直線移動速度の経時変化、および、ＰＢＳ溶液中の牛の精子の直線移動速度の経時変化を示すグラフ（実験データ）である。図１５は、第１群のマウス（細胞内液を投与されたマウス）の生存率、および、第２群のマウス（ＰＢＳを投与されたマウス）の生存率を示すグラフである。図１６は、第１群のマウス（細胞内液を投与されたマウス）の体重の変化、および、第２群のマウス（ＰＢＳを投与されたマウス）の体重の変化を示すグラフである。図１７は、ＤＡＩ（Ｄｉｓｅａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎｄｅｘ）の詳細と、第１群のマウス（細胞内液を投与されたマウス）のＤＡＩ、および、第２群のマウス（ＰＢＳを投与されたマウス）のＤＡＩを示すグラフである。図１８は、実験で用いられたマウスの腸管の長さを示す図面代用写真である。図１９は、第１群のマウス（細胞内液を投与されたマウス）の腸管の長さの平均値、および、第２群のマウス（ＰＢＳを投与されたマウス）の腸管の長さの平均値を示すグラフである。図２０は、第１群のマウス（細胞内液を投与されたマウス）の組織学的評価、および、第２群のマウス（ＰＢＳを投与されたマウス）の組織学的評価を示すグラフである。図２１Ａは、染色された標本（マウスの腸管）の図面代用写真（顕微鏡写真）である。図２１Ｂは、染色された標本（マウスの腸管）の図面代用写真（顕微鏡写真）である。図２２は、第１群に属するマウス（細胞内液を投与されたマウス）の腸管、および、第２群に属するマウス（ＰＢＳを投与されたマウス）の腸管について、たんぱく質解析を行った結果を示すグラフである。図２３は、精子の運動率（精子全体に占める運動している精子の割合）の時間変化を示すグラフである。図２４は、ＶＳＬ（Ｖｅｌｏｃｉｔｙ　ｓｔｒａｉｇｈｔ　ｌｉｎｅ）の時間変化を示すグラフである。図２５は、ＡＤＳＣ由来の細胞内液の濃度と、精子運動率の変化との関係を示すグラフである。図２６は、実験開始から６時間後における、ＡＤＳＣ由来の細胞内液の濃度と、精子運動率との関係を示すグラフである。図２７は、ｉＰＳ由来の細胞内液の濃度と、精子運動率の変化との関係を示すグラフである。図２８は、実験開始から６時間後における、ｉＰＳ由来の細胞内液の濃度と、精子運動率との関係を示すグラフである。図２９は、ＡＤＳＣ由来の細胞内液の濃度と、ＶＳＬの変化との関係を示すグラフである。図３０は、実験開始から６時間後におけるＶＳＬと、ＡＤＳＣ由来の細胞内液の濃度との関係を示すグラフである。図３１は、ｉＰＳ由来の細胞内液の濃度と、ＶＳＬの変化との関係を示すグラフである。図３２は、実験開始から６時間後におけるＶＳＬと、ｉＰＳ由来の細胞内液の濃度との関係を示すグラフである。図３３は、実施形態における細胞内液精製システムの一例を示す模式図である。図３４は、粉末化装置の一例を模式的に示す図である。

　以下、実施形態における細胞内液精製システム１、細胞内液精製方法、炎症性腸疾患の予防剤、改善剤または治療剤、あるいは、精子活性化剤、もしくは、化粧品成分を製造する製造方法、炎症性腸疾患の予防剤、改善剤または治療剤、および、精子活性化剤の製造方法に関して、添付図面を参照して説明する。なお、以下の説明において、同じ機能を有する部材、部位については、同一の符号が付され、同一の符号が付されている部材、部位について、繰り返しの説明は省略される。

　実施形態における細胞内液精製システム１および細胞内液精製方法は、「脂肪組織由来幹細胞（ＡＤＳＣ：ａｄｉｐｏｓｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌ。なお、「ＡＤＳＣ」は、「ＡＳＣ」とも呼ばれる。）」の細胞内液（特に、フィルタ処理後の細胞内液であるろ液）がｉｎ　ｖｉｔｒｏにおいて精子または卵子等の生細胞を活性化するという驚くべき知見に基づく。なお、本願の発明者は、骨髄幹細胞、歯髄幹細胞、臍帯血幹細胞、ｉＰＳ細胞等についても、その細胞内液（特に、フィルタ処理後の細胞内液であるろ液）がｉｎ　ｖｉｔｒｏにおいて精子等の生細胞を活性化することを確認している。

（用語の定義）
　本明細書において「脂肪組織由来幹細胞（ＡＤＳＣ）」とは、脂肪組織に含まれる体性幹細胞のことをいうが、多能性を維持している限りにおいて、当該体性幹細胞の培養（継代培養を含む）により得られる細胞も「脂肪組織由来幹細胞（ＡＤＳＣ）」に該当するものとする。通常、ＡＤＳＣは、生体から分離された脂肪組織を出発材料とし、細胞集団（脂肪組織に由来する、ＡＤＳＣ以外の細胞を含む）を構成する細胞として「単離された状態」に調製される。ここでの「単離された状態」とは、その本来の環境（即ち生体の一部を構成した状態）から取り出された状態、即ち人為的操作によって本来の存在状態と異なる状態で存在していることを意味する。尚、ＡＤＳＣはＡＤＲＣ（Ａｄｉｐｏｓｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｃｅｌｌｓ）、ＡＴ－ＭＳＣ（Ａｄｉｐｏｓｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ)、ＡＤ－ＭＳＣ（Ａｄｉｐｏｓｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ)等とも呼ばれる。本明細書では以下の用語、即ち、脂肪組織由来幹細胞、ＡＤＳＣ、ＡＤＲＣ、ＡＴ－ＭＳＣ、ＡＤ－ＭＳＣを相互に置換可能に使用する。

（第１の実施形態）
　図１乃至図８を参照して、第１の実施形態における細胞内液精製システム１Ａについて説明する。図１は、第１の実施形態における細胞内液精製システム１Ａの一例を示す模式図である。図２は、細胞膜破壊装置４の一例を模式的に示す概略断面図である。図３は、細胞膜破壊装置４の他の一例を模式的に示す概略断面図である。図４は、回収装置７の一例を模式的に示す概略断面図である。図５Ａは、攪拌装置８の一例を模式的に示す概略断面図である。図５Ｂは、攪拌装置８の他の一例を模式的に示す概略断面図である。図６は、固液分離装置９の一例を模式的に示す概略断面図である。図７は、第１容器Ｃ１の一例を示す模式的に示す概略断面図である。図８は、出荷容器Ｃの一例を示す模式的に示す概略断面図である。

　第１の実施形態における細胞内液精製システム１Ａは、無菌室２と、搬送装置３と、細胞膜破壊装置４と、遠心分離機６と、回収装置７とを具備する。

（無菌室２）
　無菌室２は、細菌およびウイルスが存在しない環境、あるいは、細菌およびウイルスの数が少ない環境が人工的に維持された室である。図１に記載の例では、無菌室２は、壁部材２０によって規定されている。無菌室２内には、少なくとも、搬送装置３と、細胞膜破壊装置４と、遠心分離機６と、回収装置７とが配置される。

　第１の実施形態において、無菌室２は、無菌室内とその周囲環境との生物学的な隔離状態を維持するアイソレータによって構成されていてもよいし、ＧＭＰ（Ｇｏｏｄ　Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ）に準拠したクリーンルームであるＣＰＣ（Ｃｅｌｌ　Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　Ｃｅｎｔｅｒ）によって構成されていてもよい。

（搬送装置３）
　搬送装置３は、細胞を含む溶液を収容した第１容器Ｃ１の搬送を行う搬送装置である。搬送装置３は、アーム部３１と、第１容器を把持する把持部３２を備えたロボット装置３０であることが好ましい。把持部３２は、近接および離間可能な一対の把持片（例えば、一対の指部材）によって構成されていてもよいし、真空吸着部等の吸着部によって構成されていてもよい。なお、搬送装置３は、ロボット装置３０に限定されない。搬送装置３は、例えば、Ｘ軸、Ｙ軸、Ｚ軸の３軸方向に沿って把持部３２を移動させる３軸移動機構を備えた搬送装置であってもよい。また、図１に記載の例では、ロボット装置３０は、６個の軸（または、６個の関節）を備えた６軸ロボット装置であるが、代替的に、ロボット装置３０は、３軸ロボット装置、４軸ロボット装置、５軸ロボット装置、７軸ロボット装置、あるいは、８軸以上の軸を備えたロボット装置であってもよい。

　図１に記載の例では、搬送装置３は、把持部３２（換言すれば、第１容器Ｃ１）を、細胞膜破壊装置４と遠心分離機６との間で移動させることが可能であり、また、把持部３２を遠心分離機６と、回収装置７との間で移動させることが可能である。

　搬送装置３（例えば、ロボット装置３０のアーム部３１または把持部３２）には、動画または静止画を撮像可能なカメラ３６が装着されていることが好ましい。搬送装置３がカメラ３６を備える場合、第１容器Ｃ１を受け入れる収容部の位置をカメラ３６からの情報に基づいて特定することができる。例えば、遠心分離機６には、容器収容部６１が設けられているが、容器収容部６１の停止位置は、回転軸ＡＸまわりで変化する。搬送装置３がカメラ３６を備える場合、容器収容部６１の停止位置が変化する場合であっても、搬送装置３は、確実に、第１容器Ｃ１を容器収容部６１に挿入することが可能である。

（細胞膜破壊装置４）
　細胞膜破壊装置４は、細胞の細胞膜を破壊する装置である。細胞膜破壊装置４は、例えば、細胞を含む溶液を凍結および解凍することにより細胞膜を破壊する装置である。代替的に、細胞膜破壊装置４は、超音波を用いて細胞膜を破壊する超音波破壊装置であってもよく、細胞を含む溶液に高圧を付与することにより細胞膜を破壊する装置（例えば、フレンチプレスまたはホモジナイザー）であってもよい。

　図２を参照して、細胞膜破壊装置４の一例について説明する。図２に記載の例では、細胞膜破壊装置４Ａは、凍結装置４１と解凍装置４２とを備える。凍結装置４１は、温度が摂氏０度以下の第１液Ｌ１を収容する冷却容器４１０を備える。第１液Ｌ１の融点は、０℃以下か、マイナス１０℃以下か、あるいは、マイナス２０℃以下である。第１液Ｌ１は、液体窒素であってもよい。

　解凍装置４２は、温度が摂氏０度（０℃）よりも高い第２液Ｌ２を収容する加温容器４２０を備える。第２液Ｌ２の温度は、０℃よりも高く、蛋白質が破壊される温度よりも低い。第２液Ｌ２の温度は、例えば、４℃以上５０℃以下、あるいは、４℃以上４５℃以下である。第２液Ｌ２は、例えば、水（０℃以上５０℃以下の水、０℃以上６０℃以下の水、あるいは、０℃以上７０℃以下の水）である。解凍装置４２は、第２液Ｌ２の温度を調節する加熱装置４２１を備えていてもよい。

　搬送装置３（より具体的には、把持部３２）が、細胞Ｔを含む溶液Ｌ０を収容した第１容器Ｃ１を、冷却容器４１０内に搬送することにより、溶液Ｌ０（および、細胞Ｔ内の細胞内液）が凍結される（凍結工程）。他方、搬送装置３（より具体的には、把持部３２）が、細胞Ｔを含む溶液Ｌ０を収容した第１容器Ｃ１を、冷却容器４１０から加温容器４２０内に搬送することにより、凍結した溶液Ｌ０（および、細胞Ｔ内の凍結細胞内液）が解凍される（解凍工程）。

　一般的な細胞凍結保存装置では、細胞が凍結されても細胞膜が破壊されないように、細胞内液の成分が調整されている。これに対し、第１の実施形態では、細胞膜の破壊を防ぐための細胞内液の成分調整が行われていないため、凍結および解凍に伴う細胞内液の膨張および収縮により、細胞Ｔの細胞膜が破壊される。換言すれば、上述の凍結工程および解凍工程を実行することにより、細胞Ｔの細胞膜が破壊される。こうして、溶液Ｌ０中に細胞内液が取り出される。

　なお、状態の良い細胞ほど、凍結および解凍により、細胞膜が破壊されにくい。このため、状態の良い細胞を破壊して、当該細胞から細胞内液を取り出すために、上述の凍結工程および解凍工程は、２回以上、より好ましくは、３回以上繰り返して実行されることが好ましい。凍結工程および解凍工程を繰り返し実行することにより、細胞膜のダメージが蓄積され、状態の良い細胞の細胞膜を破壊することが可能となる。

　図１に記載の例では、細胞内液精製システム１Ａは、搬送装置３（例えば、ロボット装置３０）の動作を制御する制御装置１０を具備し、搬送装置３と制御装置１０とが、有線または無線を介して、信号伝達可能に構成されている。そして、制御装置１０は、細胞膜破壊装置４Ａが、第１容器Ｃ１内の溶液Ｌ０の凍結と、凍結した溶液Ｌ０の解凍とを複数回繰り返し実行するように搬送装置３に制御信号を送信する。搬送装置３（例えば、ロボット装置３０）は、当該制御信号に基づいて、第１容器Ｃ１を、凍結装置４１（冷却容器４１０）と解凍装置４２（加温容器４２０）との間で移動させる。こうして、凍結工程および解凍工程が繰り返し実行される。

　なお、細胞膜破壊装置４Ａは、複数の冷却容器４１０および複数の加温容器４２０を備えていてもよい。この場合、細胞膜破壊装置４Ａは、複数の第１容器Ｃ１について、溶液Ｌ０を同時に凍結することができ、また、複数の第１容器Ｃ１について、凍結溶液を同時に解凍することができる。

　図３を参照して、細胞膜破壊装置４の他の一例について説明する。図３に記載の例では、細胞膜破壊装置４Ｂは、ペルチェ素子４４を備える。そして、当該ペルチェ素子４４が、凍結装置として機能するとともに解凍装置として機能する。ペルチェ素子４４では、電流を第１方向に流すと、ペルチェ素子４４の第１領域から第２領域に熱が移動し（換言すれば、第１領域４４０が冷却され）、電流を第１方向と反対の方向である第２方向に流すと、ペルチェ素子４４の第２領域から第１領域に熱が移動する（換言すれば、第１領域４４０が加熱される）。

　図３に記載の細胞膜破壊装置４Ｂについて、より具体的に説明する。図３に記載の例では、細胞膜破壊装置４Ｂは、融点が０℃よりも低い第１液Ｌ１を収容する温度調整容器４３（冷却兼加温容器）と、第１液Ｌ１の冷却および加温を行うペルチェ素子４４とを含む。図３に記載の例では、ペルチェ素子４４の第１領域４４０が、第１液Ｌ１に対向するように配置されている。なお、第１液Ｌ１の融点は、０℃以下か、マイナス１０℃以下か、あるいは、マイナス２０℃以下である。また、熱伝導性を良くする観点から、温度調整容器４３の内面、すなわち、第１液Ｌ１との接触面は、金属によって構成されていることが好ましい。

　図３に記載の例では、搬送装置３（より具体的には、把持部３２）が、細胞Ｔを含む溶液Ｌ０を収容した第１容器Ｃ１を、温度調整容器４３（冷却兼加温容器）内に搬送する。また、ペルチェ素子４４に、第１方向の電流を流すことにより、ペルチェ素子４４の第１領域４４０が冷却される。その結果、第１液Ｌ１の温度が０℃以下になり、溶液Ｌ０（および、細胞Ｔ内の細胞内液）が凍結される（凍結工程）。続いて、ペルチェ素子４４に、第２方向の電流を流すことにより、ペルチェ素子４４の第１領域４４０が加熱される。その結果、第１液Ｌ１の温度が０℃より高くなり、凍結した溶液Ｌ０（および、細胞Ｔ内の凍結細胞内液）が解凍される（解凍工程）。

　上述の凍結工程および解凍工程は、２回以上、より好ましくは、３回以上繰り返して実行されることが好ましい。凍結工程および解凍工程を繰り返し実行することにより、細胞膜のダメージが蓄積され、状態の良い細胞の細胞膜を破壊することが可能となる。

　図３に記載の例では、細胞内液精製システム１Ａは、細胞膜破壊装置４Ｂ（より具体的には、ペルチェ素子４４）の動作を制御する制御装置１０を具備し、制御装置１０と細胞膜破壊装置４Ｂとが、有線または無線を介して、信号伝達可能に構成されている。そして、制御装置１０は、細胞膜破壊装置４Ｂ（ペルチェ素子４４）が、第１容器Ｃ１内の溶液Ｌ０の凍結と、凍結した溶液Ｌ０の解凍とを複数回繰り返し実行するように細胞膜破壊装置４Ｂに制御信号を送信する。細胞膜破壊装置４Ｂは、当該制御信号に基づいて、ペルチェ素子４４に流れる電流の方向を繰り返し反転させる。こうして、凍結工程および解凍工程が繰り返し実行される。

　細胞膜破壊装置４Ｂがペルチェ素子４４を含む場合、凍結工程と解凍工程との間に、第１容器Ｃ１を凍結装置４１と解凍装置４２との間で搬送する必要がない。このため、搬送装置３による第１容器Ｃ１の搬送アルゴリズムを簡略化することが可能である。また、搬送装置３は、第１容器Ｃ１を凍結装置４１と解凍装置４２との間で搬送する必要がないため、凍結工程および解凍工程の実行中に、搬送装置３は、他の任意の作業を実行することができる。

　また、図３に記載の例では、凍結専用の冷却容器４１０と、解凍専用の加温容器４２０とを別々に用意する必要がない。このため、細胞膜破壊装置４Ｂをコンパクトにすることが可能となる。

　なお、図３に記載の例では、温度調整容器４３（冷却兼加温容器）内に、融点が０℃よりも低い第１液Ｌ１が収容されている。代替的に、温度調整容器４３内には、第１液Ｌ１が収容されていなくてもよい。この場合、ペルチェ素子４４が、直接的に、第１容器Ｃ１を冷却または加温するようにすればよい。

　細胞膜破壊装置４Ｂは、複数の温度調整容器４３（冷却兼加温容器）を備えていてもよい。この場合、細胞膜破壊装置４Ｂは、複数の第１容器Ｃ１の冷却または加温を並行して実施することができる。

（細胞膜破壊装置４によって破壊される細胞）
　第１の実施形態において、細胞膜破壊装置４によって破壊される細胞は、ＡＤＳＣ、骨髄幹細胞、歯髄幹細胞、臍帯血幹細胞、ｉＰＳ細胞等の幹細胞である。ＡＤＳＣは、脂肪基質からの幹細胞の分離、洗浄、濃縮、培養等の工程を経て調製される。ＡＤＳＣの調製法は特に限定されない。例えば公知の方法（Fraser JK et al. (2006)，Fat tissue: an underappreciated source of stem cells for biotechnology. Trends in Biotechnology; Apr;24(4):150-4．Epub 2006 Feb 20. Review.; Zuk PA et al. (2002)，Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. Molecular Biology of the Cell; Dec;13(12):4279-95.; Zuk PA et al. (2001)，Multilineage cells from human adipose tissue: implications for cell-based therapies. Tissue Engineering; Apr;7(2):211-28.等が参考になる）に従ってＡＤＳＣを調製することができる。

（遠心分離機６）
　図１を参照して、遠心分離機６について説明する。遠心分離機６は、細胞膜破壊装置４によって取り出された細胞内液の成分を溶液Ｌ０から遠心分離する装置である。

　搬送装置３（例えば、ロボット装置３０）は、第１容器Ｃ１を、細胞膜破壊装置４（例えば、加温容器４２０または温度調整容器４３）から、遠心分離機６に向けて搬送する。細胞膜破壊装置４から遠心分離機６への第１容器Ｃ１の搬送は、制御装置１０から搬送装置３に送信される制御信号に基づいて行われてもよい。搬送装置３（例えば、ロボット装置３０）は、遠心分離機６の容器収容部６１に、第１容器Ｃ１を挿入する。

　図１に記載の遠心分離機６は、４つの容器収容部６１を備え、４つの第１容器Ｃ１内の溶液について、同時に遠心分離処理可能である。代替的に、遠心分離機６が備える容器収容部６１の数は、１個、２個、３個、あるいは、５個以上であってもよい。遠心分離機は、容器収容部６１内に収容された第１容器Ｃ１を、回転軸ＡＸまわりに回転させる。遠心分離機６の回転動作は、制御装置１０によって制御されてもよい。なお、遠心分離機６としては、例えば、公知の装置が採用される。

　遠心分離機６は、冷却装置付きの遠心分離機であってもよい。遠心分離機６が冷却装置を備える場合、遠心分離処理中の溶液Ｌ０の温度を好適な温度に維持することが可能である。

（回収装置７）
　図４を参照して、回収装置７について説明する。回収装置７は、遠心分離機６によって遠心分離された、細胞内液の成分Ｓを回収する装置である。

　遠心分離機６によって、人工的に加速度が付与されることにより、第１容器Ｃ１内の内容物のうち比重の大きな成分が下方に移動し、比重の小さな成分が上方に移動する。比重の大きな成分は、例えば、細胞膜の破砕片ＴＣ、細胞膜の破壊前に細胞を包んでいた溶液Ｌ０（例えば、細胞の培養液等）等である。他方、比重の小さな成分は、例えば、蛋白質を含む細胞内液である。

　回収装置７の回収部７１は、第１容器Ｃ１に対して相対的に上下動する。回収部７１が下降位置にあるとき、第１容器Ｃ１内の細胞内液の成分Ｓを回収部７１の内部に回収することが可能である。回収部７１の先端には、先端チップ７１ａが装着されるようにしてもよい。先端チップ７１ａは、例えば、中空筒部材である。

　図４に記載の例では、回収装置７は、ピペッターである。回収装置７（ピペッター）は、筒状の回収部７１と、ピストン７２と、ピストンに直接的または間接的に連結されたピストン操作部７３とを備える。ピストン操作部７３は、例えば、搬送装置３（例えば、ロボット装置３０）が備える可動部３４によって操作される。可動部３４は、例えば、制御装置１０から搬送装置３に送信される制御信号に基づいて、ピストン操作部７３を操作する。代替的に、回収装置７自体が、アクチュエータ７４を備える場合には、制御装置１０がアクチュエータ７４に制御信号を送信することにより、アクチュエータ７４が、ピストン操作部７３を操作するようにしてもよい。

　回収装置７による細胞内液の成分Ｓの回収動作の一例について説明する。図４に記載の例では、第１容器Ｃ１は、載置台（第２載置台１００）によって支持されている。遠心分離機６から載置台（第２載置台１００）への第１容器Ｃ１の搬送は、搬送装置３（例えば、ロボット装置３０）により行われる。

　次に、搬送装置３の把持部３２が、回収装置７を把持する。搬送装置３が、回収装置７を把持した把持部３２を先端チップ７１ａに近づけることにより、回収装置７の回収部７１に、先端チップ７１ａが装着される。先端チップ７１ａは、例えば、カテラン針等の中空針である。なお、回収装置７の回収部７１に、先端チップ７１ａが予め装着されていてもよく、あるいは、回収部７１と先端チップ７１ａとが一体成形されていてもよい。この場合、回収部７１の先端に先端チップ７１ａを装着する装着動作は省略される。

　続いて、搬送装置３が把持部３２を下降させることにより、先端チップ７１ａの先端が、第１容器Ｃ１の上清液Ｌ５内に挿入される。

　その後、ピストン操作部７３が、可動部３４またはアクチュエータ７４によって操作されることにより、上清液Ｌ５（より具体的には、細胞内液の成分Ｓ）が、回収部７１内に回収される。

　続いて、搬送装置３が把持部３２を上昇させることにより、先端チップ７１ａの先端が、第１容器Ｃ１から離脱する。

　次に、回収装置７が、第１容器Ｃ１とは別の第２容器Ｃ２上に移動される。当該移動は、搬送装置３が回収装置７を移動させることにより行われる。

　続いて、ピストン操作部７３が、可動部３４またはアクチュエータ７４によって操作されることにより、上清液Ｌ５（より具体的には、細胞内液の成分）が、第２容器Ｃ２内に吐出される。こうして、上清液Ｌ５（より具体的には、細胞内液の成分）が、第２容器Ｃ２内に回収される。

　第２容器Ｃ２内の上清液Ｌ５（より具体的には、細胞内液の成分）は、その後、第３容器Ｃ３等の出荷容器に分注される。当該分注は、例えば、任意の分注装置を用いて実行される。代替的に、第２容器Ｃ２を出荷容器として用いてもよい。この場合、第２容器Ｃ２内の上清液Ｌ５を第３容器Ｃ３に分注する工程は不要である。

　第１の実施形態における細胞内液精製システム１Ａによって回収された上清液Ｌ５（より具体的には、細胞内液の成分Ｓ）は、精子、卵子等の生細胞を活性化させることが可能である。より具体的には、細胞内液精製システム１Ａによって回収された上清液Ｌ５（より具体的には、細胞内液の成分Ｓ）を含む出荷容器を畜産業者あるいは医療業者に納めることにより、畜産業者あるいは医療業者は、上清液Ｌ５（より具体的には、細胞内液の成分Ｓ）を利用して、精子、卵子等の生細胞を活性化させることが可能である。例えば、上清液Ｌ５（より具体的には、細胞内液の成分Ｓ）を、精子、卵子等の生細胞と共存させることにより、精子、卵子等の生細胞を活性化させることが可能である。

　第１の実施形態における細胞内液精製システム１Ａは、無菌室と、第１容器の搬送を行う搬送装置と、細胞膜破壊装置と、遠心分離機と、回収装置とを備える。このため、無菌室内で、自動的に効率よく、細胞内液を精製することが可能である。細胞のサイズは極めて小さいため、１つの細胞から回収できる細胞内液の量は少ない。第１の実施形態では、細胞内液の精製が効率的に行われるため、人手による精製と比較して、多量の細胞内液の精製が可能である。また、細胞膜の破壊処理、溶液の遠心分離処理、および、細胞内液の回収処理が自動的に行われるため、回収される細胞内液の品質が向上し、かつ、品質が安定化する。よって、畜産業者あるいは医療業者は、第１の実施形態における細胞内液精製システム１Ａによって回収された細胞内液を用いて、より確実に、精子、卵子等の生細胞を活性化させることが可能となる。

　さらに、第１の実施形態では、細胞内液の精製の完全自動化が可能である。細胞内液の精製は、長時間の作業を必要とする。細胞内液の精製が完全自動化される場合、作業者の作業負担が大幅に軽減される。

（攪拌装置８）
　第１の実施形態における細胞内液精製システム１Ａは、無菌室２内に攪拌装置８を備えていてもよい。攪拌装置８は、第１容器Ｃ１内の細胞を含む溶液Ｌ０を攪拌する装置である。攪拌装置８は、図５Ａに示されるように、振動装置８１が第１容器Ｃ１に振動を付与することにより、溶液Ｌ０を攪拌する装置であってもよいし、第１容器Ｃ１内に挿入された攪拌棒等の攪拌部材を移動させることにより溶液Ｌ０を攪拌する装置であってもよい。代替的に、攪拌装置８は、図５Ｂに示されるように、溶液Ｌ０の回収動作と吐出動作とを繰り返し実行するピペッター８２であってもよい。

　図１に記載の例では、攪拌装置８は、細胞膜破壊装置４とは独立して設けられている。このため、搬送装置３（例えば、ロボット装置３０）は、細胞膜破壊装置４と、攪拌装置８との間で、第１容器Ｃ１を搬送する必要がある。代替的に、細胞膜破壊装置４自体に攪拌装置（例えば、振動装置８１）が設けられてもよい。この場合、細胞膜破壊装置４は、細胞膜の破壊機能と、攪拌機能の両方を備えることとなる。攪拌装置８による攪拌動作は、制御装置１０によって制御されてもよい。

　攪拌装置８による溶液Ｌ０の攪拌タイミングの一例について説明する。攪拌装置８による攪拌動作は、例えば、上述の凍結工程の前に実行される。第１容器Ｃ１内の溶液Ｌ０中において、細胞Ｔは、溶液Ｌ０と細胞Ｔとの間の比重の差などに起因して、密集する傾向がある。この場合、凍結工程による細胞膜の破壊（特に、状態のよい細胞Ｔの細胞膜の破壊）が阻害されるおそれがある。これに対し、凍結工程の前に、攪拌装置８によって溶液Ｌ０を攪拌すれば、溶液Ｌ０内の細胞Ｔが効果的に分散される。その結果、凍結工程における細胞膜の破壊効果が向上する。

　攪拌装置８による攪拌工程は、溶液Ｌ０の一回目の凍結前に実行されてもよい。代替的に、あるいは、付加的に、攪拌装置８による攪拌工程は、溶液Ｌ０の二回目以降の凍結前（すなわち、再凍結工程の前）に実行されてもよい。再凍結工程の前に攪拌工程が実行される場合、細胞膜が破壊されていない細胞Ｔと、溶液Ｌ０と、破壊された細胞膜から取り出された細胞内液とが、効果的に混合される。さらに付加的に、攪拌装置８による攪拌工程は、最後の解凍工程と、遠心分離機６による遠心分離工程との間に実行されてもよい。

（固液分離装置９）
　第１の実施形態における細胞内液精製システム１Ａは、無菌室２内に固液分離装置９を備えていてもよい。固液分離装置９は、回収装置７によって回収された細胞内液の成分Ｓを、ろ液と固形物とに分離する。

　図６を参照して、固液分離装置９の一例について説明する。図６に記載の例では、固液分離装置９は、回収装置７（例えば、ピペッター）の先端部に装着可能なフィルタ部材９０を含む。また、フィルタ部材９０は、回収装置７（例えば、ピペッター）の先端部に着脱自在な装着部９１と、フィルタ部材９０の内部に配置されたフィルタ９２とを備える。

　フィルタ部材９０は、回収装置７が、細胞内液の成分Ｓを、回収部７１に回収した後に、回収部７１の先端に装着される。なお、回収部７１の先端に、先端チップ７１ａが装着されている場合には、回収部７１の先端から先端チップ７１ａが取り外された後に、フィルタ部材９０が回収部７１の先端に装着される。

　回収部７１の先端から先端チップ７１ａを取り外す作業、および／または、回収部７１の先端にフィルタ部材９０を装着する作業は、例えば、搬送装置３（例えば、ロボット装置３０）を用いて実行される。先端チップ７１ａの取り外しは、例えば、先端チップ７１ａの移動が制限された状態で、回収部７１を把持する把持部３２を先端チップ７１ａから離間する方向に移動させればよい。また、フィルタ部材９０の装着は、例えば、回収部７１を把持する把持部３２をフィルタ部材９０に近づけることにより実行すればよい。

　図６に記載の例では、回収装置７から、上清液Ｌ５（より具体的には、細胞内液の成分Ｓ）が吐出される時に、細胞内液の成分Ｓがろ液と固形物とに分離される。より具体的には、ピストン操作部７３が、可動部３４またはアクチュエータ７４によって操作されることにより、ろ液が、第２容器Ｃ２内に吐出される。他方、固形物は、フィルタ９２によって捕捉される。

　上清液Ｌ５中の固形物は、精子、卵子等の生細胞の活性化には不要な成分である。当該固形物が、精子、卵子等の生細胞の活性化を阻害する可能性もある。これに対して、細胞内液精製システム１Ａが、固液分離装置９を備える場合には、不要成分が排除された高品質な上清液Ｌ５を第２容器Ｃ２内に回収することが可能である。

　なお、フィルタ９２は、例えば、セルロースアセテート製のフィルタである。また、フィルタ９２の孔径は、例えば、１μｍ、０．５μｍ、あるいは、０．２μｍ以下である。　　換言すれば、フィルタ９２は、１μｍ、０．５μｍ、あるいは、０．２μｍよりも径の大きな粒子を捕捉するフィルタである。

（第１容器Ｃ１）
　図７に示されるように、第１容器Ｃ１は、蓋部材ＣＰ１（例えば、ねじ付きキャップ）を装着可能な容器であることが好ましい。第１容器Ｃ１は、蓋部材ＣＰ１が装着された状態で、無菌室２内に搬入され、第１容器Ｃ１の使用時に、蓋部材ＣＰ１が第１容器Ｃ１から取り外されるようにしてもよい。なお、第１容器Ｃ１から蓋部材ＣＰ１を取り外す作業は、ロボット装置３０または任意の蓋開閉装置を用いて実行される。ロボット装置による蓋部材の取り外しは、例えば、特開２０１５－１１２７０４号の要約欄、特開２００５－３３３８２４号の６２段落にも記載されているように公知であるため、蓋部材の取り外し方法についての詳細な説明は省略する。

　第１容器Ｃ１としては、市販されている容器を使用することが可能である。なお、第１容器Ｃ１内の溶液Ｌ０には、遠心処理が施されるため、第１容器Ｃ１は、遠沈管であることが好ましい。また、第１容器Ｃ１は、内容物の視認が可能なように、透明な材料（例えば、ガラスまたは透明樹脂）によって形成されていることが好ましい。

（出荷容器Ｃ）
　上述の第２容器Ｃ２または第３容器Ｃ３が出荷容器Ｃに対応する。図８に示されるように、出荷容器Ｃは、蓋部材ＣＰ（例えば、ねじ付きキャップ）を装着可能な容器である。出荷容器Ｃは、蓋部材ＣＰが装着された状態で、無菌室２内に搬入され、出荷容器Ｃの使用時に、蓋部材ＣＰが出荷容器Ｃから取り外される。また、出荷容器Ｃに、細胞内液の成分（例えば、ろ液）が収容された後、出荷容器Ｃには、蓋部材ＣＰが装着される。なお、出荷容器Ｃから蓋部材ＣＰを取り外す作業、および、出荷容器Ｃに蓋部材ＣＰを装着する作業は、ロボット装置３０または任意の蓋開閉装置を用いて実行される。ロボット装置による蓋部材の取り外しおよび装着は、例えば、特開２０１５－１１２７０４号の要約欄、特開２００５－３３３８２４号の６２段落および６５段落にも記載されているように公知であるため、蓋部材の取り外し方法および蓋部材の装着方法についての詳細な説明は省略する。出荷容器Ｃは、剛性容器、例えば、バイアル瓶である。各出荷容器Ｃには、例えば、１０ｍｌ以下あるいは５ｍｌ以下の細胞内液（または、細胞内液のろ液）が収容される。

（第２の実施形態）
　図９および図１０を参照して、第２の実施形態における細胞内液精製システム１Ｂについて説明する。図９は、第２の実施形態における細胞内液精製システム１Ｂの一例を示す模式図である。図１０は、無菌エアの循環流路の一例を模式的に示す図である。

　第２の実施形態における細胞内液精製システム１Ｂは、無菌室２、搬送装置３、細胞膜破壊装置４、遠心分離機６、および、回収装置７を含む。これらの構成は、第１の実施形態において説明済みであるため、これらの構成についての繰り返しとなる説明は省略する。第２の実施形態における細胞内液精製システム１Ｂは、攪拌装置８および／または固液分離装置９を備えていてもよい。攪拌装置８および固液分離装置９については、第１の実施形態において説明済みであるため、これらの構成についての繰り返しとなる説明は省略する。したがって、第２の実施形態において、明示的に説明しなかったとしても、第１の実施形態において説明済みの事項を第２の実施形態に適用できることは言うまでもない。

　第２の実施形態における細胞内液精製システム１Ｂは、第１パスボックス１１０、第２パスボックス１２０、除菌システム１３０、第１載置台１４０、分注装置１５０、消耗品載置台１６０、および、出庫ボックス１７０のうちの少なくとも１つを備える。

（第１パスボックス１１０）
　第１パスボックス１１０は、細胞Ｔ、試薬、または、培地等を含む物品が通過する空間ＳＰ１を規定する。第１パスボックス１１０は、無菌室２に隣接配置される。第１パスボックス１１０は、外側すなわち無菌室２から遠い側に第１扉１１１を備え、内側すなわち無菌室２に隣接する側に第２扉１１２を備える。そして、第１扉１１１および第２扉１１２が閉鎖された状態において、第１パスボックス１１０は、閉空間を規定する。

　第１扉１１１を介して第１パスボックス１１０内に搬入される容器（細胞Ｔ、試薬、または、培地を収容する容器）等の物品は、第１パスボックス１１０内で除菌された後、無菌室２内に搬送される。第１パスボックス１１０内の物品（容器等）は、無菌室２内の第１載置台１４０上に搬送されてもよい。第１パスボックス１１０から無菌室内への物品の搬送は、搬送装置３（ロボット装置３０）によって行われてもよいし、他の搬送装置によって行われてもよい。

（第２パスボックス１２０）
　第２パスボックス１２０は、空容器（例えば、第２容器Ｃ２、第３容器Ｃ３）、フィルタ部材９０、回収装置７（または、回収装置７の交換部品）、先端チップ７１ａ等の消耗品が通過する空間ＳＰ２を規定する。第２パスボックス１２０は、無菌室２に隣接配置される。第２パスボックス１２０は、外側すなわち無菌室２から遠い側に第１扉１２１を備え、内側すなわち無菌室２に隣接する側に第２扉１２２を備える。そして、第１扉１２１および第２扉１２２が閉鎖された状態において、第２パスボックス１２０は、閉空間を規定する。

　第１扉１２１を介して第２パスボックス１２０内に搬入される消耗品（例えば、空容器、フィルタ部材９０、回収装置７、先端チップ７１ａ等）は、第２パスボックス１２０内で除菌された後、無菌室２内に搬送される。第２パスボックス１２０内の消耗品は、無菌室２内の消耗品載置台１６０上に搬送されてもよい。第２パスボックス１２０から無菌室内への消耗品の搬送は、搬送装置３（ロボット装置３０）によって行われてもよいし、他の搬送装置によって行われてもよい。

　図９に記載の例では、第２パスボックス１２０と、無菌室２と、第１パスボックス１１０とが一直線上に配置されている。代替的に、第２パスボックス１２０と無菌室２とを結ぶ直線と、第１パスボックス１１０と無菌室２とを結ぶ直線との間のなす角度が１８０度以外の角度（例えば、９０度）であってもよい。

（除菌システム１３０）
　除菌システム１３０は、少なくとも一つの除菌ガス供給装置１３１（例えば、第１の除菌ガス供給装置１３１ａ）、排気口１３４、および、ダクト１３５を備える。代替的にあるいは付加的に、除菌システム１３０は、第２の除菌ガス供給装置１３１ｂおよび／または第３の除菌ガス供給装置１３１ｃを備えていてもよい。

　第１の除菌ガス供給装置１３１ａは、過酸化水素含有ガス等の除菌ガスを供給する装置である。図９に記載の例では、第１の除菌ガス供給装置１３１ａは、無菌室２内に配置されている。図９に記載の例では、第１の除菌ガス供給装置１３１ａから供給される除菌ガスは、無菌室内を除菌可能である。

　除菌ガスによる除菌後、無菌室２内には、無菌エアが供給される。無菌エアの供給は、例えば、無菌エアの流路に配置されたファン１３６を用いて行われる（図１０を参照）。無菌室２内に無菌エアを供給することにより除菌ガスはパージされる。

　図１０に記載の例では、無菌エアの循環流路が、無菌室２と、無菌室の排気口１３４、および、ダクト１３５によって構成されている。循環流路には、ファン１３６に加えて、ＨＥＰＡフィルタ（Ｈｉｇｈ　Ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ　Ｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ　Ａｉｒ　Ｆｉｌｔｅｒ）等のフィルタ１３７が配置される。なお、除菌ガスをパージする際には、循環流路に配置されたバルブ（図示されず）が開状態とされ、循環流路から循環流路外に除菌ガスが排出される。

　第２の除菌ガス供給装置１３１ｂは、過酸化水素含有ガス等の除菌ガスを供給する装置である。図９に記載の例では、第２の除菌ガス供給装置１３１ｂは、第１パスボックス１１０内に配置されている。図９に記載の例では、第２の除菌ガス供給装置１３１ｂから供給される除菌ガスは、第１パスボックス１１０内の物品を除菌する。除菌ガスによる除菌後、第１パスボックス１１０内には、無菌エアが供給される。第１パスボックス１１０内に無菌エアを供給することにより除菌ガスはパージされる。除菌ガスは、無菌室２の排気口１３４からパージされてもよいし、第１パスボックス１１０に設けられた排気口１１４からパージされてもよい。第１パスボックス１１０に吸気口および排気口１１４が設けられる場合には、第１扉１１１および第２扉１１２が閉鎖された状態で、第１パスボックス１１０内を独立して除菌することが可能である。

　第３の除菌ガス供給装置１３１ｃは、過酸化水素含有ガス等の除菌ガスを供給する装置である。図９に記載の例では、第３の除菌ガス供給装置１３１ｃは、第２パスボックス１２０内に配置されている。図９に記載の例では、第３の除菌ガス供給装置１３１ｃから供給される除菌ガスは、第２パスボックス１２０内の物品を除菌する。除菌ガスによる除菌後、第２パスボックス１２０内には、無菌エアが供給される。第２パスボックス１２０内に無菌エアを供給することにより除菌ガスはパージされる。除菌ガスは、無菌室２の排気口１３４からパージされてもよいし、第２パスボックス１２０に設けられた排気口１２４からパージされてもよい。第２パスボックス１２０に吸気口および排気口１２４が設けられる場合には、第１扉１２１および第２扉１２２が閉鎖された状態で、第２パスボックス１２０内を独立して除菌することが可能である。

（第１載置台１４０）
　第１載置台１４０は、容器（細胞Ｔ、試薬、または、培地を収容する容器）等の物品を載置するための台である。例えば、細胞Ｔおよび培地を収容する容器Ｅ１が第１載置台１４０に載置され、当該容器Ｅ１内に、試薬容器Ｅ２から取り出された試薬が投入されてもよい。当該試薬は、例えば、容器の壁から細胞Ｔを剥離するトリプシン等の酵素である。なお、試薬の投入は、搬送装置３（例えば、ロボット装置３０）を用いて実行されてもよいし、他の装置を用いて実行されてもよい。

（分注装置１５０）
　分注装置１５０は、容器Ｅ１内の溶液、すなわち、細胞Ｔを含む溶液を、第１容器Ｃ１に分注する装置である。分注装置１５０は、多連式の分注装置１５０ａであってもよい。多連式の分注装置は、１つの溶液注入口と、複数の溶液注出口とを備える。多連式の分注装置１５０ａを用いることにより、容器Ｅ１内の溶液を、複数の第１容器Ｃ１に効率的に分注することが可能である。多連式の分注装置１５０ａ自体は公知であるため、多連式の分注装置についての詳細な説明は省略する。なお、第１容器Ｃ１を分注装置１５０（例えば、多連式の分注装置１５０ａ）の溶液注出口の下方に搬送する作業は、例えば、搬送装置３（例えば、ロボット装置３０）を用いて実行される。また、容器Ｅ１内の溶液を分注装置１５０（例えば、多連式の分注装置１５０ａ）に注入する作業は、搬送装置３（例えば、ロボット装置３０）を用いて実行されてもよいし、他の装置を用いて実行されてもよい。

　なお、図９には、２個の分注装置１５０が図示されているが、細胞内液精製システム１Ｂが備える分注装置１５０の数は、１個あるいは３個以上であってもよい。

（消耗品載置台１６０）
　消耗品載置台１６０は、消耗品（例えば、空容器、フィルタ部材９０、回収装置７、先端チップ７１ａ等）を載置するための台である。第２パスボックス１２０内に供給される消耗品は、除菌後に、搬送装置３（例えば、ロボット装置３０）あるいは他の搬送装置を用いて、消耗品載置台１６０上に搬送される。

（出庫ボックス１７０）
　出庫ボックス１７０は、無菌室２内における作業で精製された細胞内液（より具体的には、細胞内液を収容した出荷容器、または、細胞内液のろ液を収容した出荷容器）を出庫するためのボックスである。出庫ボックス１７０は、出庫口として機能する。出庫ボックス１７０は、内扉である第１出庫扉１７１、および、外扉である第２出庫扉１７２を備えることが好ましい。代替的に、あるいは、付加的に、出庫ボックス１７０は、無菌室２内における作業で発生した廃棄物を無菌室外に排出するために使用されてもよい。出庫ボックス１７０への出荷容器または廃棄物の搬送は、例えば、搬送装置３（例えば、ロボット装置３０）を用いて行われる。

　第２の実施形態における細胞内液精製システム１Ｂは、第１の実施形態における細胞内液精製システム１Ａと同様の効果を奏する。加えて、細胞内液精製システム１Ｂが、パスボックス（１１０、１２０）、および、除菌システム１３０を備える場合には、無菌室２に搬入される物品の除菌が可能となり、無菌室２内の無菌状態がより確実に維持される。また、細胞内液精製システム１Ｂが、２つのパスボックス（１１０、１２０）を備える場合には、無菌室に搬入される物品の種類（例えば、細胞Ｔを収納する容器、試薬、消耗品等）に応じて、使用するパスボックスを好適に選択可能である。例えば、搬入頻度の高い消耗品を、第２パスボックス１２０を用いて無菌室内に搬入し、搬入頻度の低い物品（例えば、細胞Ｔを収納する容器、試薬）を、第１パスボックス１１０を用いて無菌室内に搬入するようにしてもよい。また、除菌システム１３０が、第１パスボックス１１０に隣接配置される第１載置台１４０、および／または、第２パスボックス１２０に隣接配置される消耗品載置台１６０を備える場合、無菌室内に搬入された物品を、搬送装置３（例えば、ロボット装置３０）がピックアップする作業が容易となる。なお、図９に示されるように、平面視で、細胞膜破壊装置４と、遠心分離機６と、少なくとも１つの載置台（１４０、１６０）とが、搬送装置３を囲むように配置されている場合、搬送装置３による搬送経路が短くなり、搬送効率が向上する。また、細胞内液精製システム１Ｂが、多連式の分注装置１５０ａを備える場合には、第１容器Ｃ１への溶液Ｌ０の分配効率、および／または、第２容器Ｃ２から第３容器Ｃ３への上清液Ｌ５（あるいは、ろ液）の分配効率が向上する。

（細胞内液精製方法）
　図１乃至図１１を参照して、実施形態における細胞内液精製方法について説明する。図１１は、実施形態における細胞内液精製方法の一例を示すフローチャートである。

　実施形態における細胞内液精製方法は、例えば、上述のいずれかの実施形態における細胞内液精製システム１を用いて行われる。

　第１ステップＳＴ１において、細胞Ｔを含む溶液Ｌ０を収容した第１容器Ｃ１が準備される。

　溶液Ｌ０は、例えば、細胞Ｔ、培地（より具体的には、液体培地）、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ－）等を含む。溶液Ｌ０を第１容器Ｃ１に収容する工程は、例えば、トリプシン等の酵素を培養容器（例えば、容器Ｅ１）に投入して、培養容器に付着した細胞Ｔを培養容器から剥離する工程（工程Ａ）と、工程Ａの実行後、培養容器内の細胞Ｔおよび培地を、第１容器Ｃ１に移し替える工程（工程Ｂ）とを含んでいてもよい。なお、工程Ｂは、培養容器内の細胞Ｔおよび培地を、分注装置１５０を用いて、複数の第１容器Ｃ１に分注することにより実行されてもよい。

　上述の工程Ａおよび工程Ｂは、細胞内液の精製を行うための無菌室２で実行されることが好ましいが、工程Ｂ、または、工程Ａおよび工程Ｂが、細胞内液の精製を行うための無菌室２外で実行されてもよい。

　なお、第１ステップＳＴ１の実行前または実行後に、無菌室２、第１パスボックス１１０および第２パスボックス１２０が、除菌ガス供給装置１３１を用いて除菌されることが好ましい。

　第１ステップＳＴ１において、各第１容器Ｃ１には、例えば、２５ｍｌ程度（例えば、１０ｍｌ以上５０ｍｌ以下）の溶液Ｌ０が収容される。また、各第１容器Ｃ１には、２．５×１０^７個程度（例えば、１．０×１０^６個以上１．０×１０^９個以下）の細胞（例えば、ＡＤＳＣ、ｉＰＳ細胞等の幹細胞）が含まれる。

　第１ステップＳＴ１において、第１容器Ｃ１には、培地および細胞Ｔ以外の物質、例えば、試薬が投入されてもよい。

　第２ステップＳＴ２において、第１容器Ｃ１が、細胞膜破壊装置４に搬送される。当該搬送は、無菌室２内の搬送装置３（例えば、ロボット装置３０）によって実行される。

　第３ステップＳＴ３において、細胞膜破壊装置４によって、溶液Ｌ０中に存在する細胞Ｔの細胞膜が破壊される。

　第３ステップＳＴ３は、例えば、溶液Ｌ０を凍結し、その後、凍結した溶液Ｌ０を解凍することにより実行されてもよい。溶液Ｌ０の凍結（１回目の凍結）は、第１容器Ｃ１を上述の冷却容器４１０内に配置することにより行われてもよいし、上述のペルチェ素子４４を用いて第１容器Ｃ１を冷却することにより行われてもよい。

　凍結した溶液Ｌ０の解凍（１回目の解凍）は、第１容器Ｃ１を上述の加温容器４２０内に配置することにより行われてもよいし、上述のペルチェ素子４４を用いて第１容器Ｃ１を加温することにより行われてもよい。解凍後の溶液Ｌ０の温度は、０℃より高く６０℃以下（例えば、４℃）である。

　解凍後、第１容器Ｃ１は、暫くの間（すなわち、完全な解凍状態が得られるまでの時間、例えば、１０分以上８時間以下、あるいは、１０分以上５時間以下）解凍状態に維持される。

　続いて、溶液Ｌ０の２回目の凍結が実行される。２回目の凍結は、１回目の凍結と同様の手順で実行される。

　なお、２回目の凍結前に、溶液Ｌ０が攪拌されることが好ましい。当該攪拌は、無菌室２内の攪拌装置８を用いて実行される。細胞膜破壊装置４が攪拌装置８を備える場合には、攪拌は、第１容器Ｃ１が細胞膜破壊装置４によって支持された状態で実行される。他方、攪拌装置８が細胞膜破壊装置４とは別に設けられる場合には、第１容器Ｃ１が攪拌装置８に搬送された後に、攪拌が実行される。当該搬送は、無菌室２内の搬送装置３（例えば、ロボット装置３０）によって実行される。

　溶液Ｌ０の攪拌により、複数の細胞Ｔが、溶液Ｌ０中で分散する。その結果、２回目の凍結工程において、細胞膜が破壊され易くなる。なお、１回目の凍結前にも、攪拌装置８による攪拌が実行されてもよい。

　続いて、凍結した溶液Ｌ０の２回目の解凍が実行される。２回目の解凍は、１回目の解凍と同様の手順で実行される。

　２回目の解凍後、第１容器Ｃ１は、暫くの間（すなわち、完全な解凍状態が得られるまでの時間、例えば、１０分以上８時間以下、あるいは、１０分以上５時間以下）解凍状態に維持される。

　凍結工程は、３回以上実行されてもよい。この場合、Ｎ回目（Ｎは３以上の自然数）の凍結工程は、１回目の凍結と同様の手順で実行すればよい。また、解凍工程は、３回以上実行されてもよい。この場合、Ｎ回目（Ｎは３以上の自然数）の解凍工程は、１回目の解凍と同様の手順で実行すればよい。

　１つの溶液Ｌ０に対して、複数回の凍結工程と、複数回の解凍工程とを実行することにより、状態の良い細胞の細胞膜を含む複数の細胞膜がより確実に破壊される。

　第４ステップＳＴ４において、第１容器Ｃ１が、無菌室２内の遠心分離機６に搬送される。当該搬送は、無菌室２内の搬送装置３（例えば、ロボット装置３０）によって実行される。搬送装置３（例えば、ロボット装置３０）がカメラ３６を備える場合、カメラ３６から送信される画像データに基づいて、制御装置１０は、遠心分離機６の容器収容部６１の位置を特定する。そして、制御装置１０は、容器収容部６１の位置に応じた制御信号を搬送装置３（例えば、ロボット装置３０）に送信する。その結果、搬送装置３（例えば、ロボット装置３０）は、第１容器Ｃ１を、遠心分離機６の容器収容部６１内に搬送する。

　なお、第４ステップＳＴ４の直前に、攪拌装置８による攪拌が実行されてもよい。この場合、搬送装置３（例えば、ロボット装置３０）は、細胞膜破壊装置４から攪拌装置８に第１容器Ｃ１を搬送し、その後（攪拌後）、攪拌装置８から遠心分離機６に第１容器Ｃ１を搬送する。なお、細胞膜破壊装置４が攪拌装置８を備える場合には、細胞膜破壊装置４から攪拌装置８に第１容器Ｃ１を搬送する工程は省略される。

　第５ステップＳＴ５において、遠心分離機６によって、溶液Ｌ０から細胞内液の成分が遠心分離される。なお、遠心分離機６の回転数は、例えば、１３００ｒｐｍ程度（例えば、８００ｒｐｍ以上３０００ｒｐｍ以下）である。また、遠心分離機６による遠心処理時間は、例えば、１０分程度（５分以上３０分以下）である。また、遠心分離機６の容器収容部６１内に配置される第１容器Ｃ１内の溶液Ｌ０の温度は、例えば、４℃程度（例えば、２℃以上２０℃以下）である。

　遠心分離工程の実行により、細胞内液の成分（上清液）が、細胞膜の破壊片または培地等から分離される。

　第６ステップＳＴ６において、第１容器Ｃ１が、無菌室２内の載置台（例えば、図４に記載の第２載置台１００）に搬送される。当該搬送は、無菌室２内の搬送装置３（例えば、ロボット装置３０）によって実行される。なお、第６ステップＳＴ６の実行前、実行中、あるいは、実行後に、第１容器Ｃ１から蓋部材ＣＰ１が取り外される。蓋部材ＣＰ１の取り外しは、ロボット装置３０または任意の蓋開閉装置によって実行される。

　第７ステップＳＴ７において、回収装置７により、遠心分離された細胞内液の成分が回収される。第７ステップＳＴ７は、搬送装置３（例えば、ロボット装置３０）が回収装置７を把持した状態で実行されてもよい。また、第７ステップＳＴ７の実行前、または、実行後に、回収装置７（より具体的には、回収部７１）の先端に、先端チップ７１ａが装着されてもよい。

　細胞内液の成分の回収工程は、例えば、先端チップ７１ａの先端を、第１容器Ｃ１の上清液Ｌ５内に挿入する工程（工程Ｃ）と、上清液Ｌ５（より具体的には、細胞内液の成分）を回収部７１内に回収する工程（工程Ｄ）と、先端チップ７１ａの先端を、第１容器Ｃ１から離脱させる工程（工程Ｅ）とを含む。

　工程Ｃは、例えば、搬送装置３が把持部３２を下降させることにより実行される。また、工程Ｄは、例えば、回収装置７のピストン操作部７３が、可動部３４またはアクチュエータ７４によって操作されることにより実行される。また、工程Ｅは、例えば、搬送装置３が把持部３２を上昇させることにより実行される。

　第８ステップＳＴ８において、上清液Ｌ５（より具体的には、細胞内液の成分）が、第２容器Ｃ２内に収容される。

　第８ステップＳＴ８は、例えば、回収装置７を、第１容器とは別の第２容器Ｃ２上に移動する工程（工程Ｆ）と、上清液Ｌ５（より具体的には、細胞内液の成分）を第２容器Ｃ２内に吐出する工程（工程Ｇ）とを含む。

　工程Ｆは、例えば、搬送装置３（例えば、ロボット装置３０）が把持部３２を移動させることにより実行される。また、工程Ｇは、例えば、回収装置７のピストン操作部７３が、可動部３４またはアクチュエータ７４によって操作されることにより実行される。

　なお、第８ステップＳＴ８の実行前に、回収装置７（より具体的には、回収部７１）の先端に、固液分離装置９（フィルタ部材９０）が装着されてもよい。この場合、第２容器Ｃ２内には、上清液Ｌ５のろ液が回収されることとなる。なお、回収装置７の先端に、固液分離装置９（フィルタ部材９０）を装着する工程は、例えば、回収装置７の先端から先端チップ７１ａを取り外す工程の後に実行される。

　第９ステップＳＴ９において、第２容器Ｃ２内の上清液Ｌ５（より具体的には、細胞内液の成分）が、第３容器Ｃ３等の出荷容器Ｃに分注される。なお、第２容器Ｃ２を出荷容器Ｃとして用いる場合には、第９ステップＳＴ９は省略される。

　第１０ステップＳＴ１０において、上清液Ｌ５（より具体的には、細胞内液の成分）を収容した出荷容器Ｃに蓋部材ＣＰが装着される。なお、出荷容器Ｃに蓋部材ＣＰが装着された後、１個または複数の出荷容器Ｃが出庫用容器に収容されてもよい。出庫用容器は、剛性容器（例えば、蓋付きの剛性容器）、または、袋（例えば、チャック等により封緘可能な袋）である。出荷容器Ｃが、出庫用容器に収容されることにより、出荷容器Ｃの外面が清潔に保たれる。また、複数の出荷容器Ｃが出庫用容器に収容される場合には、複数の出荷容器Ｃをまとめて取り扱うことができるため（例えば、複数の出荷容器Ｃをまとめて搬送できるため）、便利である。

　第１１ステップＳＴ１１において、出荷容器Ｃ（または、出荷容器Ｃを収容した出庫用容器）は、出庫ボックス１７０を通って、無菌室２外に搬出される。なお、無菌室２外への出庫に際しては、例えば、第１に、第１出庫扉１７１が開放され、第２に、出荷容器Ｃまたは出庫用容器が、出庫ボックス１７０内に移動され、第３に、第１出庫扉１７１が閉鎖され、第４に、第２出庫扉１７２が開放され、第５に、出荷容器Ｃまたは出庫用容器が、出庫ボックス１７０から取り出される。この場合、出荷容器Ｃまたは出庫用容器の出庫に際して、無菌室２内の無菌雰囲気が維持される。なお、出荷容器Ｃは、出荷容器Ｃ内の細胞内液（または、細胞内液のろ液）が凍結状態で無菌室２から出庫されてもよいし、出荷容器Ｃ内の細胞内液（または、細胞内液のろ液）が液体状態で無菌室２から出庫されてもよい。

　上述の細胞内液精製方法では、精子、卵子等の生細胞を活性化させることが可能な細胞内液が効率的に精製される。また、上述の細胞内液精製方法では、細胞膜の破壊処理、溶液の遠心分離処理、および、細胞内液の回収処理が自動的に行われるため、回収される細胞内液の品質が向上し、かつ、品質が安定化する。また、細胞膜の破壊処理、溶液の遠心分離処理、および、細胞内液の回収処理が無菌室内で行われるため、細胞内液がこれらの処理中に汚染されない。

（第３の実施形態）
　図１２および図１３を参照して、第３の実施形態における細胞内液精製システム１Ｃについて説明する。図１２は、第３の実施形態における細胞内液精製システム１Ｃの一例を示す模式図である。図１３は、細胞膜破壊装置４Ｃの一例を模式的に示す概略断面図である。

　第３の実施形態における細胞内液精製システム１Ｃは、細胞膜破壊装置４Ｃが、凍結装置４１および解凍装置４２の代わりに、超音波発振素子４６（図１３を参照）を含む点で、第２の実施形態における細胞内液精製システム１Ｂとは異なる。その他の点では、第３の実施形態における細胞内液精製システム１Ｃは、第２の実施形態における細胞内液精製システム１Ｂと同様である。よって、第３の実施形態では、細胞膜破壊装置４Ｃを中心に説明し、その他の構成についての繰り返しとなる説明は省略する。なお、第３の実施形態において、明示的に説明しなかったとしても、第１の実施形態または第２の実施形態において説明済みの事項を第３の実施形態に適用できることは言うまでもない。

　図１２に示されるように、第３の実施形態における細胞内液精製システム１Ｃでは、搬送装置３（より具体的には、ロボット装置３０）によるアプローチが可能な位置に細胞膜破壊装置４Ｃが配置される。より具体的には、搬送装置３は、搬送装置３の把持部３２によって把持された第１容器Ｃ１を、細胞膜破壊装置４Ｃに移載可能である。また、搬送装置３は、細胞膜破壊装置４Ｃによる処理が完了した後、第１容器Ｃ１を細胞膜破壊装置４Ｃから取り出し可能である。

　図１３を参照して、細胞膜破壊装置４Ｃの一例について説明する。細胞膜破壊装置４Ｃは、超音波発振素子４６の振動によって生成される超音波を第１容器Ｃ１内の溶液Ｌ０に伝達することにより、溶液Ｌ０中の細胞Ｔの細胞膜を破壊する。

　図１３に記載の例では、細胞膜破壊装置４Ｃは、細胞Ｔを含む溶液Ｌ０を収容した第１容器Ｃ１を受容する受容部４７（より具体的には、受容容器４７ａ）と、超音波発振素子４６と、冷却装置４８とを含む。

　図１３に記載の例では、細胞膜破壊装置４Ｃの受容部４７は、上部開口ＯＰを有する。そして、第１容器Ｃ１が、当該上部開口ＯＰを介して、受容部４７内に挿入される。図１３に記載の例では、受容部４７は、２個の第１容器Ｃ１を同時に受け入れ可能である。代替的に、受容部４７は、１個の第１容器Ｃ１のみを受け入れ可能であってもよいし、３個以上の第１容器Ｃ１を同時に受け入れ可能であってもよい。図１３に記載の例では、受容部４７（より具体的には、受容容器４７ａ）内に、超音波伝達媒体Ｌ６（例えば、水等の液体）が配置されている。

　図１３に記載の例では、超音波発振素子４６は、受容部４７に接触配置されている。超音波発振素子４６の振動により生成される超音波は、超音波伝達媒体Ｌ６および第１容器Ｃ１を介して、第１容器Ｃ１内の溶液Ｌ０に伝達される。なお、超音波発振素子４６の振動は、第１容器Ｃ１または溶液Ｌ０に直接的に伝達されてもよい。すなわち、超音波発振素子４６を受容部４７に接触配置するのに代えて、超音波発振素子４６が、第１容器Ｃ１および／または溶液Ｌ０に接触配置されてもよい。この場合、受容部４７内の超音波伝達媒体Ｌ６は省略されてもよい。

　図１３に示されるように、細胞膜破壊装置４Ｃは、第１容器Ｃ１内の溶液Ｌ０に接触配置される共振チップ４９を備えていてもよい。共振チップ４９は、溶液Ｌ０中を伝播する超音波との相互作用により共振する。その結果、細胞Ｔの細胞膜の破壊作用が強化される。なお、図１３に記載の例では、共振チップ４９は、第１容器Ｃ１に装着される蓋部材ＣＰ３に取り付けられている。共振チップ４９の材質は、例えば、金属であり、共振チップ４９の形状は例えば、棒形状である。なお、共振チップ４９は、必要に応じて採用される任意付加的な構成である。よって、第３の実施形態において、共振チップ４９が省略されてもよい。

　図１３に記載の例では、細胞膜破壊装置４Ｃは、第１容器Ｃ１内の溶液Ｌ０の温度上昇を防止または抑制する冷却装置４８を備える。細胞膜破壊装置４Ｃが冷却装置４８を備える場合には、超音波照射に伴う溶液Ｌ０の温度上昇が、効果的に防止または抑制される。

　図１３に記載の例では、冷却装置４８は、超音波伝達媒体Ｌ６に接するように配置され、冷却装置４８は、超音波伝達媒体Ｌ６を冷却することにより、間接的に、第１容器Ｃ１内の溶液Ｌ０の温度上昇を防止または抑制する。代替的に、冷却装置４８は、第１容器Ｃ１に接触配置されてもよい。

　冷却装置４８の種類に特に制限はないが、冷却装置４８は、例えば、ペルチェ素子である。代替的に、冷却装置４８は、熱交換器を用いて冷媒（超音波伝達媒体Ｌ６、または、超音波伝達媒体Ｌ６との間で熱交換可能な流体）を冷却する装置であってもよい。更に代替的に、冷却装置４８は、氷水を収容した容器であってもよい。

　図１３に記載の例では、超音波発振素子４６および／または冷却装置４８と、制御装置１０とが信号伝達可能に接続されている。当該接続は、有線による接続であってもよいし、無線による接続であってもよい。

　制御装置１０は、超音波発振素子４６に制御信号を送信し、超音波発振素子４６の発振状態と、超音波発振素子４６の発振停止状態とを切り替える。また、制御装置１０は、超音波発振素子４６の発振出力（例えば、１５０ワット、２００ワット、２５０ワット等）を切り替え可能であってもよい。

　また、制御装置１０は、冷却装置４８に制御信号を送信し、冷却装置の作動状態と、冷却装置の非作動状態とを切り替える。

　第３の実施形態における細胞内液精製システム１Ｃは、第１の実施形態における細胞内液精製システム１Ａまたは第２の実施形態における細胞内液精製システム１Ｂと同様の効果を奏する。また、超音波を用いて細胞膜を破壊する場合、当該超音波による溶液Ｌ０の攪拌効果が期待できる。このため、第３の実施形態においては、別途、溶液Ｌ０を攪拌する攪拌装置８を用意する必要がない（もちろん、第３の実施形態における細胞内液精製システム１Ｃが攪拌装置８を備えることは排除されない）。

（第３の実施形態における細胞内液精製方法）
　第３の実施形態における細胞内液精製方法は、上述の細胞内液精製システム１Ｃを用いて行われる細胞内液精製方法である。

　第３の実施形態における細胞内液精製方法における第１ステップＳＴ１、第２ステップＳＴ２、第４ステップＳＴ４乃至第１１ステップＳＴ１１は、図１１を参照して説明された上述の第１ステップＳＴ１、第２ステップＳＴ２、第４ステップＳＴ４乃至第１１ステップＳＴ１１とそれぞれ同様である。よって、第３の実施形態における細胞内液精製方法では、第３ステップＳＴ３Ａ、すなわち、溶液Ｌ０中の細胞の細胞膜を破壊する工程を中心に説明し、その他の工程についての繰り返しとなる説明は省略する。

　第３ステップＳＴ３Ａでは、超音波によって、溶液Ｌ０中の細胞の細胞膜が破壊される（超音波破砕される）。

　より具体的には、図１３に示されるように、細胞膜破壊装置４Ｃの受容部４７に第１容器Ｃ１が受容された状態で、第１容器Ｃ１内の溶液Ｌ０に超音波が照射される。超音波を生成する超音波発振素子４６の振動数（発振周波数）は、例えば、１０ｋＨｚ以上１００ｋＨｚ以下、あるいは、１５ｋＨｚ以上５０ｋＨｚ以下である。超音波発振素子４６の発振と超音波発振素子４６の発振停止とを１サイクルとするとき、第１容器Ｃ１内の溶液Ｌ０中の細胞の細胞膜を破壊する工程は、上記１サイクルを複数回（例えば、１０回以上１００回以下）繰り返すことにより実行されることが好ましい。例えば、超音波発振素子４６の１回の連続発振時間が１０秒であり、超音波発振素子４６の発振停止時間が２０秒である時、１サイクルに要する時間は３０秒である。このため、上記１サイクルを１０回以上１００回以下繰り返す場合には、溶液Ｌ０中の細胞の細胞膜を破壊する工程に要する時間は、３００秒以上３０００秒以下となる。

　上述の第３ステップＳＴ３Ａは、冷却装置４８を作動させた状態で実行されることが好ましい。冷却装置４８の作動により、第１容器Ｃ１内の溶液Ｌ０の温度上昇が防止または抑制される。第３ステップＳＴ３Ａの実行中、溶液Ｌ０の温度は、蛋白質の変質温度以下に維持されることが好ましく、より好ましくは、細胞中の酵素が非活性状態である温度に維持されることが好ましい。より具体的には、溶液Ｌ０の温度は、６０℃以下、４０℃以下、あるいは、２０℃以下に維持されることが好ましい。例えば、第３ステップＳＴ３Ａの実行中、溶液Ｌ０の温度は、０℃以上１０℃以下の温度に維持される。

（実験結果１）
　図１４を参照して、実験結果１について説明する。

　実験１では、各溶液（第１の溶液Ｘ、第２の溶液Ｙ、第３の溶液Ｚ）中における牛の精子の直線移動速度の経時変化が観察された。第１の溶液Ｘは、上述の第３ステップＳＴ３、第５ステップＳＴ５、第７ステップＳＴ７を実行することにより得られた溶液であり、牛の幹細胞を凍結・解凍処理することにより得られた細胞内液である。第２の溶液Ｙは、上述の第３ステップＳＴ３Ａ、第５ステップＳＴ５、第７ステップＳＴ７を実行することにより得られた溶液であり、人の幹細胞を超音波破砕処理することにより得られた細胞内液である。また、第３の溶液Ｚは、ＰＢＳ溶液であり、第３の溶液Ｚ中における牛の精子の直線移動速度の経時変化が、比較例として用いられた。

　図１４から把握されるように、実施形態における細胞内液精製システム１または細胞内液精製方法によって得られた細胞内液（第１の溶液Ｘ、および、第２の溶液Ｙ）を、精子保存溶液として用いた場合、４．５時間経過後においても、精子の直線移動速度、換言すれば、精子の活動状態が好適に維持された。他方、比較例における溶液（第３の溶液Ｚ）を精子保存溶液として用いた場合、４．５時間経過後には、精子の直線移動速度、換言すれば、精子の活動状態が大幅に低下した。

（実験結果２）
　図１５乃至図２２を参照して、実験結果２について説明する。

　実験２では、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎）に対する細胞内液の投与の有効性の検証が行われた。

　具体的には、実験用動物として、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス８～９週齢オス（日本ＳＬＣ株式会社）が用いられた。実験２では、２．５％ＤＳＳ（ｄｅｘｔｒａｎ　ｓｕｌｆａｔｅ　ｓｏｄｉｕｍ）（ＭＰ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ社）を給水皿に入れて、自由飲水状態とし、上記マウスが、５日間継続して上記２．５％ＤＳＳを飲水することにより、急性腸炎モデルを作成した。急性腸炎モデルのマウスを、第１群（Ｇｒｏｕｐ　１）と第２群（Ｇｒｏｕｐ　２）とに分け、第１群を細胞内液を投与する投薬群、第２群をＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）を投与するコントロール群とした。

　第１群のマウスに投与される細胞内液としては、脂肪組織由来幹細胞の一種である脂肪由来間葉系幹細胞の細胞膜を破壊することによって得られた細胞内液が使用された。細胞内液の精製は、上述の細胞内液精製システム１を用いて行われた（なお、第１容器Ｃ１等の搬送は、手動で行われた）。より具体的には、細胞膜破壊装置４によって、溶液中に存在する幹細胞の細胞膜が破壊され、遠心分離機６によって溶液から細胞内液の成分が遠心分離され、回収装置７により遠心分離された細胞内液の成分が回収された。そして、回収された細胞内液が、第１群のマウスに投与される細胞内液として使用された。第１群のマウスには、２．５％ＤＳＳの自由飲水を開始してから３日目、４日目、５日目に、それぞれ、細胞内液０．２ｍｌ（ＡＤＳＣ２０万個分の細胞内液に相当）が注射針を用いて腹腔内に直接投与された。なお、６日目以降は、第１群のマウスには、ＤＳＳ溶液は与えられず、また、細胞内液の投与も行われなかった。

　第２群のマウスには、２．５％ＤＳＳの自由飲水を開始してから３日目、４日目、５日目に、それぞれ、ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）０．２ｍｌが注射針を用いて腹腔内に直接投与された。なお、６日目以降は、第２群のマウスには、ＤＳＳ溶液は与えられず、また、ＰＢＳの投与も行われなかった。

　図１５は、第１群のマウスの生存率、および、第２群のマウスの生存率を示すグラフである。生存率は、Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ　ｍｅｔｈｏｄを用いて計算された。図１５から把握されるように、実験開始（すなわち、ＤＳＳ溶液の飲水開始）から１２日目における第１群のマウスの生存率は、７５％（１６個体中、１２個体が生存）であった。他方、実験開始から１２日目における第２群のマウスの生存率は、４６．７％（１５個体中、７個体が生存）であった。細胞内液が投与された第１群のマウスでは、ＰＢＳが投与された第２群のマウスよりも生存率が高い傾向が確認された。

　図１６は、第１群のマウスの体重の変化、および、第２群のマウスの体重の変化を示すグラフである。図中、実線は、評価時点で生存している第１群のマウスの体重変化の平均値を示しており、破線は、評価時点で生存している第２群のマウスの体重変化の平均値を示している。なお、図中、「Ｐ」は、Ｌｏｇ－Ｒａｎｋ　ｔｅｓｔにおけるＰ値を示す。Ｌｏｇ－Ｒａｎｋ　ｔｅｓｔでは、Ｐ値が０．０５以下であるときに、２つの比較対象には有意な差があるとされている。図１６から把握されるように、実験開始から７日目におけるＰ値は０．０２６であり、実験開始から１１日目におけるＰ値は０．０２８であった。第１群のマウスでは、第２群のマウスと比較して、有意に体重減少が抑制されることがわかった。体重減少は、炎症性腸疾患において、重視されている指標である。細胞内液の投与は、体重減少の抑制、換言すれば、炎症性腸疾患の改善に有効であることがわかった。

　図１７は、第１群のマウスのＤＡＩ（Ｄｉｓｅａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎｄｅｘ）、および、第２群のマウスのＤＡＩを示すグラフである。図１７の左側のグラフは、実験開始から８日目時点でのＤＡＩを示すグラフであり、図１７の右側のグラフは、実験開始から９日目時点でのＤＡＩを示すグラフである。また、図１７の下側のテーブルは、ＤＡＩのスコアの評価項目を示すテーブルである。図１７のグラフにおいて、各群におけるＤＡＩの評価値として、評価時点で生存しているマウスのＤＡＩの平均値が採用された。また、図中、「Ｐ」は、Ｌｏｇ－Ｒａｎｋ　ｔｅｓｔにおけるＰ値を示す。第１群のマウスでは、第２群のマウスと比較して、有意にＤＡＩの評価値が低いことがわかった。換言すれば、細胞内液の投与は、ＤＡＩの評価値の改善、換言すれば、炎症性腸疾患の改善に有効であることがわかった。

　図１８は、実験で用いられたマウスの腸管の長さを示す図面代用写真である。図１８の写真は、炎症極期にあたる実験開始から７日目におけるマウスから取り出された腸管の写真である。なお、図１８において、「Ａ」は、第１群のマウスの腸管を示し、「Ｂ」は、第２群のマウスの腸管を示し、「Ｃ」は、２．５％ＤＳＳの自由飲水が行われなかったマウス（換言すれば、炎症性腸疾患を有さないマウス）の腸管を示している。

　図１９は、第１群のマウスの腸管の長さの平均値、および、第２群のマウスの腸管の長さの平均値を示すグラフである。また、図中、「Ｐ」は、Ｌｏｇ－Ｒａｎｋ　ｔｅｓｔにおけるＰ値を示す。

　図１８、および、図１９から把握されるように、第１群のマウスでは、第２群のマウスと比較して、有意に腸管短縮が抑制されることがわかった。換言すれば、細胞内液の投与は、腸管短縮の抑制、換言すれば、炎症性腸疾患の改善に有効であることがわかった。

　図２０は、第１群のマウスの組織学的評価（Ｈｉｓｔｌｏｇｉｃａｌ　ｓｃｏｒｅ）、および、第２群のマウスの組織学的評価（Ｈｉｓｔｌｏｇｉｃａｌ　ｓｃｏｒｅ）を示すグラフである。組織学的評価は、炎症極期にあたる実験開始から７日目にマウスを解剖して顕微鏡観察することにより行った。より具体的には、解剖時に直腸から盲腸をロール状にし、１０％中性緩衝ホルマリン溶液に浸し、パラフィン包埋後、ヘマトキシリン・エオジン染色した。組織学的評価は、図２０の下側に示されるテーブルを用いて、染色された標本を評価することにより行われた。第１群の平均Ｈｉｓｔｌｏｇｉｃａｌ　ｓｃｏｒｅは第２群に比して有意に低かった。

　図２０から把握されるように、第１群のマウスでは、第２群のマウスと比較して、組織学的炎症が軽度であった。なお、図中、「Ｐ」は、Ｌｏｇ－Ｒａｎｋ　ｔｅｓｔにおけるＰ値を示す。

　図２１は、上述の染色された標本の顕微鏡写真である。図２１Ａは、第１群に属するマウスの腸管の顕微鏡写真である。図２１Ａの下側の写真は、図２１Ａの上側の写真における領域ＡＲ１を拡大したものである。図２１Ａの下側の写真から、粘膜内に高度の炎症細胞の浸潤が認められた。しかし、第１群に属するマウス（細胞内液が投与されたマウス）では、Ｃｒｙｐｔ　ａｂｓｃｅｓｓは認められず、また、粘膜下層および筋層での炎症は認められなかった。

　図２１Ｂは、第２群に属するマウスの腸管の顕微鏡写真である。図２１Ｂの下側の写真は、図２１Ｂの上側の写真における領域ＡＲ２を拡大したものである。図２１Ｂの下側の写真から、潰瘍形成が認められた（矢印Ａ１で示される部分を参照。）。また、第２群に属するマウス（ＰＢＳが投与されたマウス）では、粘膜下層においても高度の炎症細胞の浸潤が認められた（領域ＡＲ３を参照。）。

　図２２は、第１群に属するマウスの腸管、および、第２群に属するマウスの腸管について、たんぱく質解析を行った結果を示すグラフである。図２２の左上のグラフは、腸管の再生促進を制御するタンパク質であるＰ３８の量を示すグラフであり、図２２の右上のグラフは、腸管の再生促進を制御するタンパク質であるＳＴＡＴ５の量を示すグラフであり、図２２の下側のグラフは、腸管の再生促進を制御するタンパク質であるＳＴＡＴ３の量を示すグラフである。

　図２２から、第１群に属するマウスでは、第２群に属するマウスと比較して、腸管の再生促進を制御するタンパク質（Ｐ３８、ＳＴＡＴ５、ＳＴＡＴ３）が、より多く作成され、腸管の再生が活性化されていたことが把握される。

　上述の実験２から、幹細胞の細胞膜を破壊することによって得られる細胞内液が、炎症性腸疾患の改善剤または治療剤として有効であることが判明した。また、幹細胞の細胞膜を破壊することによって得られる細胞内液を服用すれば、炎症性腸疾患の予防効果があることは明白である。

　なお、実験２では、１回の細胞内液の投与量（０．２ｍｌ）中に、ＡＤＳＣ２０万個分の幹細胞の細胞内液が含まれていた。よって、１回の細胞内液の投与量中に、２０万個分以上の幹細胞の細胞内液が含まれていれば、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎）の予防、改善、または、治療効果が期待される。このため、細胞内液の出荷容器Ｃには、２０万個分以上の幹細胞（より具体的には、ＡＤＳＣ）の細胞内液が含まれていることが好ましい。

　１ｍｌあたり１．０×１０^７個分のＡＤＳＣ由来の細胞内液を含む溶液の蛋白濃度は、約２．６２μｇ／ｍｌである。換言すれば、ＡＤＳＣ２０万個分の細胞内液を含む溶液には、ＡＤＳＣ由来の蛋白質が、０．０５２μｇ（０．２×１０^６／１．０×１０^７×２．６２＝０．５２４）含まれている。よって、１回の細胞内液の投与量中に、０．０５２μｇ以上のＡＤＳＣ由来の蛋白質が含まれていれば、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎）の予防、改善、または、治療効果が期待される。

　実験２では、３回の細胞内液が投与されている。よって、ＡＤＳＣ６０万個分以上の幹細胞の細胞内液が投与されると、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎）の予防、改善、または、治療効果があると言える。換言すれば、０．１６μｇ（０．５２４×３＝０．１５７）以上のＡＤＳＣ由来の蛋白質を含む細胞内液が投与されると、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎）の予防、改善、または、治療効果があると言える。

　細胞内液の腸内への投与は、例えば、細胞内液を封入したカプセルをヒトまたは動物が飲み込むことにより実行される。この場合、カプセルは、胃では溶解せず、腸で溶解するカプセルであることが好ましい。代替的に、細胞内液の腸内への投与は、内視鏡、カテーテル等の挿入管を、腸内に挿入し、当該挿入管から細胞内液を吐出させることにより実行されてもよい。

（実験結果３）
　図２３乃至図３２を参照して、実験結果３について説明する。実験３では、ｉＰＳ細胞を破壊することにより得られる細胞内液の精子活性効果と、脂肪組織由来幹細胞を破壊することにより得られる細胞内液の精子活性効果との比較が行われた。

　実験では、ヒトのｉＰＳ細胞を破壊することにより得られる細胞内液が使用された。ｉＰＳ細胞から細胞内液を精製した手順は、以下のとおりである。

（１）ｉＰＳ細胞として、ヒトｉＰＳ細胞６１０Ｂ１（臍帯血由来）が使用された。
（２）ｉＰＳ細胞の培養は、Ｃｅｌｌａｒｔｉｓ（登録商標）　ＤＥＦ－ＣＳ　５００　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｓｙｓｔｅｍ（タカラバイオ株式会社製）を用いて行われた。培養後、培養容器から培養培地が除去され、培養容器がＰＢＳ（－）で２回洗浄され、その後、培養容器がＴｒｙｐＬＥ　ｓｅｌｅｃｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）１ｍｌで５分間処理され、さらに、回収された溶液が１０００ｒｐｍで５分間遠心分離処理された。遠心分離処理後に回収されたｉＰＳ細胞は、新たな培養容器上に５．０×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｃｍ^２となるように播種された。なお、新たな培養容器には、予め、Ｃｅｌｌａｒｔｉｓ（登録商標）　ＤＥＦ－ＣＳ　ＣＯＡＴ－１（タカラバイオ株式会社製）がコーティングされた。
（３）ｐａｓｓａｇｅ（継代）１８、２０の時に、細胞内液精製用にｉＰＳ細胞が回収された。より具体的には、培養容器から培養培地が除去され、培養容器がＰＢＳ（－）で２回洗浄され、その後、培養容器がＴｒｙｐＬＥ　ｓｅｌｅｃｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）１ｍｌで５分間処理され、さらに、回収された溶液が１０００ｒｐｍで５分間遠心分離処理された。遠心分離処理後に回収されたｉＰＳ細胞は、１．０×１０^７個／ｍｌとなるようにＰＢＳ（－）で懸濁され、摂氏マイナス３０度で凍結保存された。一晩以上放置後に、凍結保存されたｉＰＳ細胞含有溶液は、摂氏４度で解凍された。当該凍結および解凍により、ｉＰＳ細胞の細胞膜が破壊された。その後、ｉＰＳ細胞の細胞膜を破壊することにより得られた細胞内液を含む溶液が、遠心分離処理され、遠心分離処理後の上清液が回収された。回収された上清液は、孔径が０．２μｍのシリンジフィルタを用いて濾過処理され、当該濾過により細胞内液が得られた。細胞内液は、使用時まで、摂氏マイナス８０度で凍結保存された。

　実験３は、黒毛和種牛の凍結融解精液５０μｌ（精子濃度は、約１０^８個／ｍｌ）と、溶液Ａ乃至溶液Ｃ４のうちのいずれか５０μｌとを混合して、混合液を摂氏３７度に維持することにより行われた。溶液Ａは、ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）５０μｌであった。また、溶液Ｂ１乃至Ｂ４は、ウシの脂肪組織由来幹細胞（ＡＤＳＣ）の細胞内液５０μｌであった。なお、溶液Ｂ１には、１ｍｌあたり１００万個分の細胞内液が含まれていた（換言すれば、５０μｌ中、５万個分の細胞内液が含まれていた。）。溶液Ｂ２には、１ｍｌあたり５０万個分の細胞内液が含まれていた（換言すれば、５０μｌ中、２．５万個分の細胞内液が含まれていた。）。溶液Ｂ３には、１ｍｌあたり３０万個分の細胞内液が含まれていた（換言すれば、５０μｌ中、１．５万個分の細胞内液が含まれていた。）。溶液Ｂ４には、１ｍｌあたり１０万個分の細胞内液が含まれていた（換言すれば、５０μｌ中、０．５万個分の細胞内液が含まれていた。）。なお、１ｍｌに含まれる細胞内液の濃度を調整する（低くする）ために、ＰＢＳが希釈液として加えられた。また、溶液Ｃ１乃至Ｃ４は、上述のヒトｉＰＳ細胞の細胞膜を破壊することにより得られた細胞内液５０μｌであった。なお、溶液Ｃ１には、１ｍｌあたり１０００万個分の細胞内液が含まれていた（換言すれば、５０μｌ中、５０万個分の細胞内液が含まれていた。）。溶液Ｃ２には、１ｍｌあたり５００万個分の細胞内液が含まれていた（換言すれば、５０μｌ中、２５万個分の細胞内液が含まれていた。）。溶液Ｃ３には、１ｍｌあたり３００万個分の細胞内液が含まれていた（換言すれば、５０μｌ中、１５万個分の細胞内液が含まれていた。）。溶液Ｃ４には、１ｍｌあたり１００万個分の細胞内液が含まれていた（換言すれば、５０μｌ中、５万個分の細胞内液が含まれていた。）。

　黒毛和種牛の凍結融解精液５０μｌと、溶液Ａ乃至溶液Ｃ４のうちのいずれか５０μｌとを混合してから各所定時間経過後に、混合液から精子を取り出し、取り出された精子の運動を顕微鏡に接続したビデオカメラを用いて録画した。そして、録画データをコンピュータを用いて解析することにより、精子の運動率（精子全体に占める運動している精子の割合）、および、ＶＳＬ（Ｖｅｌｏｃｉｔｙ　ｓｔｒａｉｇｈｔ　ｌｉｎｅ）を算出した。なお、ＶＳＬは、精子が１秒間に移動した始点と終点とを結んだ線分の長さを意味する。

　図２３は、精子の運動率（精子全体に占める運動している精子の割合）の時間変化を示すグラフである。図２３から、溶液Ｂ１（ウシの脂肪組織由来幹細胞の細胞内液含有溶液）および溶液Ｃ１（ヒトのｉＰＳ細胞の細胞内液を高濃度で含有する溶液）では、精子の運動率の低下が抑制されることが把握される。

　図２４は、ＶＳＬ（Ｖｅｌｏｃｉｔｙ　ｓｔｒａｉｇｈｔ　ｌｉｎｅ）の時間変化を示すグラフである。図２４から、溶液Ｂ１（ウシの脂肪組織由来幹細胞の細胞内液含有溶液）および溶液Ｃ１（ヒトのｉＰＳ細胞の細胞内液を高濃度で含有する溶液）では、精子の直線移動速度の低下が抑制されることが把握される。

　図２３および図２４から、溶液Ｂ１（ウシの脂肪組織由来幹細胞の細胞内液含有溶液）および溶液Ｃ１（ヒトのｉＰＳ細胞の細胞内液を高濃度で含有する溶液）では、精子の生存時間の延長と、精子の運動の活性化（精子の運動特性の低下の抑制）とが実現されることが把握された。なお、ｉＰＳ細胞を破壊することにより得られる細胞内液を用いた場合、脂肪組織由来幹細胞を破壊することにより得られる細胞内液と同濃度（細胞１００万個／ｍｌ相当）では、十分な効果が得られず、その１０倍の濃度（細胞１０００万個／ｍｌ相当）では、十分な効果が得られるという驚くべき結果が得られた。

　そこで、次に、精子の生存時間の延長、および／または、精子の運動の活性化（精子の運動特性の低下の抑制）の効果が得られる細胞内液の濃度（臨界濃度）について検証した。

　図２５は、ＡＤＳＣ由来の細胞内液の濃度と、精子運動率の変化との関係を示すグラフである。図２５から、溶液Ｂ４、すなわち、ＡＤＳＣの濃度が「細胞１０万個／ｍｌ」相当では、ＰＢＳと比較して、精子の生存時間の延長の効果が十分に得られないことがわかった。他方、溶液Ｂ１乃至Ｂ３、すなわち、ＡＤＳＣの濃度が「細胞３０万個／ｍｌ」相当以上では、ＰＢＳと比較して、精子の生存時間が長くなることが確認された。

　図２６は、実験開始から６時間後における、ＡＤＳＣ由来の細胞内液の濃度と、精子運動率との関係を示すグラフである。図２６から、ＡＤＳＣの濃度が「細胞１３万個／ｍｌ」相当以上では、ＰＢＳ（図中の「Ａ」で示される黒三角を参照。）と比較して、精子の生存時間が長くなることが把握される。また、ＡＤＳＣの濃度が「細胞３０万個／ｍｌ」相当以上では、比較的高い精子運動率（５％以上）が実現されることがわかった。

　図２７は、ｉＰＳ由来の細胞内液の濃度と、精子運動率の変化との関係を示すグラフである。図２７から、溶液Ｃ４、すなわち、ｉＰＳの濃度が「細胞１００万個／ｍｌ」相当では、ＰＢＳと比較して、精子の生存時間の延長の効果が十分に得られないことがわかった。他方、溶液Ｃ１乃至Ｃ３、すなわち、ｉＰＳの濃度が「細胞３００万個／ｍｌ」相当以上では、ＰＢＳと比較して、精子の生存時間が長くなることが確認された。

　図２８は、実験開始から６時間後における、ｉＰＳ由来の細胞内液の濃度と、精子運動率との関係を示すグラフである。図２８から、ｉＰＳの濃度が「細胞１３０万個／ｍｌ」相当以上では、ＰＢＳ（図中の「Ａ」で示される黒三角を参照。）と比較して、精子の生存時間が長くなることが把握される。また、ｉＰＳの濃度が「細胞３００万個／ｍｌ」相当以上では、比較的高い精子運動率（５％以上）が実現されることがわかった。

　図２９は、ＡＤＳＣ由来の細胞内液の濃度と、ＶＳＬの変化との関係を示すグラフである。図２９から、溶液Ｂ１乃至Ｂ４の全てにおいて、ＰＢＳと比較して、ＶＳＬの低下が抑制されることが確認された。

　図３０は、実験開始から６時間後におけるＶＳＬと、ＡＤＳＣ由来の細胞内液の濃度との関係を示すグラフである。図３０から、ＡＤＳＣの濃度が高くなると、ＶＳＬの低下がより抑制される傾向が確認された。なお、ＡＤＳＣの濃度が「細胞２３万個／ｍｌ」相当以上では、ＰＢＳ（ＶＳＬ：約２１μｍ／ｓｅｃ）と比較して、ＶＳＬが１．２倍以上（ＶＳＬ：２５μｍ／ｓｅｃ以上）となっている。

　図３１は、ｉＰＳ由来の細胞内液の濃度と、ＶＳＬの変化との関係を示すグラフである。図３１から、溶液Ｃ１乃至Ｃ４の全てにおいて、ＰＢＳと比較して、ＶＳＬの低下が抑制されることが確認された。

　図３２は、実験開始から６時間後におけるＶＳＬと、ｉＰＳ由来の細胞内液の濃度との関係を示すグラフである。図３２において、ｉＰＳの濃度が「細胞１５０万個／ｍｌ」相当以上では、ＰＢＳ（ＶＳＬ：約２１μｍ／ｓｅｃ）と比較して、ＶＳＬが１．２倍以上（ＶＳＬ：２５μｍ／ｓｅｃ以上）となっている。

　以上の実験結果から、精子の生存時間を長くするためには、ＡＤＳＣの濃度を、「細胞１３万個／ｍｌ」相当以上、より好ましくは、「細胞３０万個／ｍｌ」相当以上にすればよく、精子の運動特性（ＶＳＬ）の維持のためには、ＡＤＳＣの濃度を、「細胞２３万個／ｍｌ」相当以上、より好ましくは、「細胞３０万個／ｍｌ」相当以上にすればよいことがわかった。１ｍｌあたり１．０×１０^７個分のＡＤＳＣ由来の細胞内液を含む溶液の蛋白濃度は、約２．６２μｇ／ｍｌである。よって、精子の生存時間を長くするためには、ＡＤＳＣの細胞内液由来の蛋白濃度を、０．０３４μｇ／ｍｌ以上、より好ましくは、０．０７９μｇ／ｍｌ以上にすればよく、精子の運動特性（ＶＳＬ）の維持のためには、ＡＤＳＣの細胞内液由来の蛋白濃度を、０．０６０μｇ／ｍｌ以上、より好ましくは、０．０７９μｇ／ｍｌ以上にすればよい。なお、上述の実験結果において、細胞内液（５０μｌ）は、精液（５０μｌ）で２倍に希釈されている。よって、精液と細胞内液との混合液中では、ＡＤＳＣの濃度を、「細胞６．５万個／ｍｌ」相当以上（または、ＡＤＳＣの細胞内液由来の蛋白濃度を、０．０１７μｇ／ｍｌ以上）、より好ましくは、「細胞１５万個／ｍｌ」相当以上（または、ＡＤＳＣの細胞内液由来の蛋白濃度を、０．０３９μｇ／ｍｌ以上）にすればよく、精子の運動特性（ＶＳＬ）の維持のためには、ＡＤＳＣの濃度を、「細胞１１．５万個／ｍｌ」相当以上（または、ＡＤＳＣの細胞内液由来の蛋白濃度を、０．０３０μｇ／ｍｌ以上）、より好ましくは、「細胞１５万個／ｍｌ」相当以上（または、ＡＤＳＣの細胞内液由来の蛋白濃度を、０．０３９μｇ／ｍｌ以上）にすればよい。

　また、上述の実験結果から、精子の生存時間を長くするためには、ｉＰＳの濃度を、「細胞１３０万個／ｍｌ」相当以上、より好ましくは、「細胞３００万個／ｍｌ」相当以上にすればよく、精子の運動特性（ＶＳＬ）の維持のためには、ｉＰＳの濃度を、「細胞１５０万個／ｍｌ」相当以上、より好ましくは、「細胞３００万個／ｍｌ」相当以上にすればよいことがわかった。１ｍｌあたり１．０×１０^７個分のｉＰＳ由来の細胞内液を含む溶液の蛋白濃度は、約２．４４μｇ／ｍｌである。よって、精子の生存時間を長くするためには、ｉＰＳの細胞内液由来の蛋白濃度を、０．３２μｇ／ｍｌ以上、より好ましくは、０．７３μｇ／ｍｌ以上にすればよく、精子の運動特性（ＶＳＬ）の維持のためには、ｉＰＳの細胞内液由来の蛋白濃度を、０．３７μｇ／ｍｌ以上、より好ましくは、０．７３μｇ／ｍｌ以上にすればよい。なお、上述の実験結果において、細胞内液（５０μｌ）は、精液（５０μｌ）で２倍に希釈されている。よって、精液と細胞内液との混合液中では、ｉＰＳの濃度を、「細胞６５万個／ｍｌ」相当以上（または、ｉＰＳの細胞内液由来の蛋白濃度を、０．１６μｇ／ｍｌ以上）、より好ましくは、「細胞１５０万個／ｍｌ」相当以上（または、ｉＰＳの細胞内液由来の蛋白濃度を、０．３７μｇ／ｍｌ以上）にすればよく、精子の運動特性（ＶＳＬ）の維持のためには、ｉＰＳの濃度を、「細胞７５万個／ｍｌ」相当以上（または、ｉＰＳの細胞内液由来の蛋白濃度を、０．１８μｇ／ｍｌ以上）、より好ましくは、「細胞１５０万個／ｍｌ」相当以上（または、ｉＰＳの細胞内液由来の蛋白濃度を、０．３７μｇ／ｍｌ以上）にすればよい。

　上述の実験結果を考慮すると、精子活性化剤（換言すれば、精子の生存時間あるいは運動特性の維持のための溶液）としての細胞内液には、１ｍｌあたり、１３万個以上、２３万個以上、あるいは、３０万個以上の幹細胞（例えば、ＡＤＳＣ）から取り出された細胞内液が含まれていることが好ましい。換言すれば、精子活性化剤としての細胞内液において、幹細胞（例えば、ＡＤＳＣ）の細胞内液由来の蛋白濃度は、０．０３４μｇ／ｍｌ以上、０．０６０μｇ／ｍｌ以上、あるいは、０．０７９μｇ／ｍｌ以上であることが好ましい。また、精子活性化剤（換言すれば、精子の生存時間あるいは運動特性の維持のための溶液）には、１ｍｌあたり、１３０万個以上、１５０万個以上、あるいは、３００万個以上のｉＰＳ細胞から取り出された細胞内液が含まれていてもよい。換言すれば、精子活性化剤としての細胞内液において、ｉＰＳ細胞の細胞内液由来の蛋白濃度は、０．３２μｇ／ｍｌ以上、０．３７μｇ／ｍｌ以上、あるいは、０．７３μｇ／ｍｌ以上であってもよい。

　牛の人工受精では、一般的に０．２ｍｌ以上１．０ｍｌ以下の精液が使用される。よって、精子の生存時間あるいは運動特性の維持のために、精液を０．５ｍｌ程度の細胞内液と混合すればよい。よって、出荷容器Ｃには、例えば、０．５ｍｌ程度（例えば、０．２ｍｌ以上１．０ｍｌ以下）の細胞内液が収容されていればよい。もちろん、出荷容器Ｃには、１．０ｍｌ以上の細胞内液が収容されていても構わない。

　なお、幹細胞の直径（サイズ）からみて、１ｍｌあたり、１．９×１０^１２個分以上の幹細胞由来の細胞内液を含む細胞内液を作製することは物理的に不可能である。よって、細胞内液の濃度の上限値は、１ｍｌあたり１．９×１０^１２個分の幹細胞（例えば、ＡＤＳＣ細胞またはｉＰＳ細胞）の細胞内液である。

　精子活性の従来技術としては、乳牛の性選別精液中にキサンチン誘導体とピルビン酸とを添加する方法が使用されている。これらの添加物は、化学物質である。当該従来技術を除いて、人工授精用の凍結精液に関して、精子の運動性を高める活性化剤の添加は実用化されていない。

　これに対し、上述の実施形態では、化学物質ではない幹細胞（例えば、脂肪組織由来幹細胞、ｉＰＳ細胞）の細胞内液を用いて精子の活性化（精子の運動特性の低下の抑制）を図っている。よって、当該活性化技術を用いることによって得られる受精卵から育った家畜を食用の家畜とした場合、食品の安全性が確保される。また、安全性が高いことから、当該活性化技術をヒトの人工授精用の精子の活性化に用いることも期待できる。

　上述の精子の活性化（精子の運動特性の低下の抑制）は、例えば、体外において実行される。精子の活性化方法は、精液と、幹細胞の細胞膜を破壊することによって得られる細胞内液とを用意する工程と、精液と細胞内液とを混合する混合工程とを具備する。精液は、例えば、凍結精液を融解することにより準備される。精液は、希釈液により希釈化された希釈済の精液であってもよい。細胞内液は、例えば、上述の細胞内液精製システム１を用いて精製されることにより準備される。混合工程後の混合液（精液と細胞内液との混合液）には、１ｍｌあたり、６．５万個相当以上、１１．５万個相当以上、あるいは、１５万個相当以上の幹細胞（ｉＰＳ細胞を除く。）から取り出された細胞内液が含まれていることが好ましい。代替的に、あるいは、付加的に、混合工程後の混合液（精液と細胞内液との混合液）には、１ｍｌあたり、６５万個相当以上、７５万個相当以上、あるいは、１５０万個相当以上のｉＰＳ細胞から取り出された細胞内液が含まれていてもよい。

　上述の精子の活性化（精子の運動特性の低下の抑制）は、精液を採取する工程と、採取された精液を希釈液によって希釈する工程と、希釈済の精液に凍害防止剤を添加する工程と、凍害防止剤が添加された精液を凍結保存する凍結保存工程とを含んでいてもよい。そして、上述の混合工程（精液と細胞内液とを混合する工程）は、精液の採取後、凍害防止剤が添加された精液を凍結保存する前に実行されてもよい。代替的に、上述の混合工程（精液と細胞内液とを混合する工程）は、上述の凍結保存工程によって凍結保存された精液が解凍された後に、解凍精液と細胞内液とを混合することにより実行されてもよい。さらに代替的に、上述の混合工程は、メスの家畜の子宮に、精液と、細胞内液とを別々に注入することにより行われても構わない。

　上述の実験では、細胞内液の精製は自動的に行われていない。しかし、上述の細胞内液（例えば、溶液Ｂ１乃至溶液Ｃ４）の精製は、実施形態における細胞内液精製システム１を用いて行われてもよいことは言うまでもない。例えば、上述の細胞内液（例えば、溶液Ｂ１乃至溶液Ｃ４）を精製する方法は、細胞膜破壊装置４によって、溶液中に存在する細胞の細胞膜を破壊する工程と、遠心分離機６によって、溶液から細胞内液の成分を遠心分離する工程と、回収装置７により、遠心分離された細胞内液の成分を回収する工程とを含んでいてもよい。

　上述の炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎）の予防剤、改善剤または治療剤、あるいは、精子の活性化剤は、例えば、出荷容器Ｃ内に封入された状態で提供される。

　本発明は上記各実施形態に限定されず、本発明の技術思想の範囲内において、各実施形態は適宜変形又は変更され得ることは明らかである。また、各実施形態で用いられる種々の技術は、技術的矛盾が生じない限り、他の実施形態にも適用可能である。さらに、各実施形態における任意付加的な構成は、適宜省略可能である。

　例えば、上述の実施形態では、無菌室２内に、１つの搬送装置（例えば、１つのロボット装置）が配置される例について説明された。代替的に、無菌室２内には、複数の搬送装置（例えば、複数のロボット装置）が配置されてもよい。この場合、無菌室２内における物品（例えば、第１容器Ｃ１等）の搬送は、複数の搬送装置によって分担して行われるようにしてもよい。

　また、上述の実施形態では、細胞膜破壊装置４に支持される第１容器Ｃ１と、遠心分離機６によって支持される第１容器Ｃ１と、攪拌装置８によって支持される第１容器Ｃ１とが同一の容器である例が説明された。代替的に、各装置に支持される第１容器は、互いに異なる容器であってもよい。すなわち、細胞膜破壊処理および遠心分離処理を含む一連の作業において、１つの第１容器内の溶液Ｌ０が、別の第１容器に移し替えられてもよい。

　また、上述の実施形態における細胞内液精製システムまたは細胞内液精製方法で精製された細胞内液（あるいは、細胞内液のろ液）は、精子、卵子等の生細胞を活性化させる用途の他に、ＥＤ（Ｅｒｅｃｔｉｌｅ　Ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ）の治療、間質性膀胱炎の治療、あるいは、潰瘍性大腸炎の治療等に用いられてもよい。

　更に、上述の実施形態では、細胞内液精製システムが、凍結装置４１および解凍装置４２を備える細胞膜破壊装置（４Ａ；４Ｂ）、および、超音波発振素子４６を備える細胞膜破壊装置４Ｃのうちのいずれか一方を備える例について説明された。代替的に、実施形態における細胞内液精製システムは、凍結装置４１および解凍装置４２を備える細胞膜破壊装置（４Ａ；４Ｂ）、および、超音波発振素子４６を備える細胞膜破壊装置４Ｃの両方を備えていてもよい。

　また、実施形態における細胞内液精製システムおよび／または細胞内液精製方法を用いて、生物種Ａの細胞から細胞内液を精製する場合、当該細胞内液は、生物種Ａと同一種の生物の細胞（例えば、精子または卵子）の活性化または活性維持に使用可能であるし、生物種Ａとは異なる生物種の生物の細胞（例えば、精子または卵子）の活性化または活性維持にも使用可能である。より具体的には、実施形態における細胞内液精製システムおよび／または細胞内液精製方法を用いて精製された人細胞由来の細胞内液を、人の細胞（例えば、人の精子または卵子）の活性化または活性維持に使用してもよいし、人以外の細胞の活性化または活性維持に使用してもよい。同様に、実施形態における細胞内液精製システムおよび／または細胞内液精製方法を用いて精製された牛細胞由来の細胞内液を、牛の細胞（例えば、牛の精子または卵子）の活性化または活性維持に使用してもよいし、牛以外の細胞の活性化または活性維持に使用してもよい。

　また、上述の各実施形態において、細胞膜破壊装置４は、細胞Ｔの細胞膜または当該細胞膜の近傍にレーザ光を照射するレーザ照射装置であってもよい。この場合、細胞膜は、レーザ照射装置から照射されるレーザ光によって破壊される。例えば、レーザ光が、第１容器Ｃ１内の溶液Ｌ０に照射されると、溶液Ｌ０中の水分が気化されて気泡（マイクロバブル）が発生する。当該気泡の圧力によって、細胞Ｔの細胞膜が破壊される。なお、レーザ光は、例えば、波長が０．７μｍ以上２．５μｍ以下の近赤外線である。

　また、上述の各実施形態において、細胞内液精製システム１によって精製された細胞内液は、例えば、化粧品成分として利用することもできる。

　また、上述の各実施形態において、細胞内液精製システム１または細胞内液精製方法によって精製された細胞内液は、粉末化装置を用いて粉末化されてもよい。換言すれば、上述の各実施形態において、細胞内液精製システム１は、細胞内液の成分を粉末にする粉末化装置を備えていてもよい。また、上述の各実施形態において、細胞内液精製方法は、細胞内液の成分を粉末にする粉末化工程を備えていてもよい。粉末化工程は、例えば、図１１を用いて説明された第７ステップＳＴ７（回収装置７によって細胞内液の成分を回収する工程）、第８ステップＳＴ８（細胞内液の成分を第２容器に収容する工程）、第９ステップＳＴ９（細胞内液の成分を第３容器等の出荷容器に分注する工程）、または、第１１ステップ１１（出荷容器を無菌室外に搬出する工程）の後に実行される。

　図３３および図３４を用いて粉末化装置５の一例について説明する。

　図３３に記載の例では、細胞内液精製システム１（細胞内液精製システム１Ｄ）は、粉末化装置５を含む。なお、細胞内液精製システム１は、上述の細胞内液精製システム（１Ａ、１Ｂ、１Ｃ）の全ての構成要素を含んでいてもよいし、であってもよいし、上述の細胞内液精製システム（１Ａ、１Ｂ、１Ｃ）のいくつかの構成要素を含んでいてもよい。

　図３３に記載の例では、粉末化装置５は、無菌室２内に配置されている。この場合、粉末化装置５によって製造された粉末を収容した出荷容器Ｃに、蓋部材ＣＰが装着される。当該蓋部材ＣＰの装着は、無菌室２内に配置されたロボット装置３０または無菌室２内に配置された蓋開閉装置を用いて実行される。出荷容器Ｃに蓋部材ＣＰが装着された後、当該出荷容器Ｃは、無菌室２から出庫される。

　代替的に、粉末化装置５は、無菌室２外に配置されていてもよい。この場合、細胞内液の成分を含む上清液Ｌ５（または、上清液Ｌ５のろ液）を収容した出荷容器Ｃが、無菌室２から出庫される。なお、上清液Ｌ５またはろ液は、液体の状態で無菌室２から出庫されてもよいし、凍結された状態で無菌室２から出庫されてもよい。その後、粉末化装置５を用いて、当該上清液Ｌ５または上清液Ｌ５のろ液から粉末（すなわち、細胞内液の成分の粉末）が製造される。

　図３４を参照して、無菌室２内または無菌室２外に配置される粉末化装置５の一例についてより詳細に説明する。粉末化装置５は、例えば、凍結乾燥装置である。凍結乾燥装置は、凍結状態の試料（例えば、上述の上清液Ｌ５）を、大気圧よりも圧力が低い雰囲気内に配置することにより、試料から水分を除去する装置である。より具体的には、凍結状態の試料を、大気圧よりも圧力が低い雰囲気内に配置することにより、試料中の氷が昇華して試料が乾燥される。

　図３４に記載の例では、粉末化装置５は、真空チャンバ５１と、真空ポンプＰとを含む。粉末化装置５は、加熱装置５２、水蒸気除去装置５３、開閉部材５４、棚Ｗ等を含んでいてもよい。

　真空チャンバ５１は、凍結乾燥される対象物が配置される空間を規定する。図３４に記載の例では、真空チャンバ５１内に容器（例えば、出荷容器Ｃ）が配置され、当該容器内に、細胞内液精製システム１で精製された細胞内液の成分（より具体的には、上清液Ｌ５、または、上清液Ｌ５のろ液）が収容されている。なお、上清液Ｌ５、または、上清液Ｌ５のろ液は、凍結状態である。

　真空ポンプＰは、真空チャンバ５１内の圧力を低下させるポンプである。真空ポンプＰと真空チャンバ５１とは排気管５３１等を介して接続される。

　加熱装置５２は、直接的または間接的に容器（例えば、出荷容器Ｃ）を加熱する。図３４に記載の例では、加熱装置５２は、棚Ｗを介して、間接的に容器を加熱する。細胞内液の成分を凍結乾燥する際に、容器（例えば、出荷容器Ｃ）内の氷が昇華する。加熱装置５２は、当該昇華に要するエネルギを容器に供給する。

　水蒸気除去装置５３は、上述の昇華において発生した水蒸気を真空チャンバ５１から除去する。水蒸気除去装置５３は、例えば、排気管５３１と、冷却装置５３３と、冷却装置５３３の冷却部材５３３ａが配置される冷却室５３２とを含む。図３４に記載の例では、排気管５３１は、真空チャンバ５１と冷却室５３２とを接続する管である。また、図３４に記載の例では、冷却装置５３３は、冷却装置本体５３３ｂと、冷却部材５３３ａとを含む。冷却装置本体５３３ｂと冷却部材５３３ａとの間で、冷媒が循環するように構成されてもよい。

　開閉部材５４は、真空チャンバ５１の外部から真空チャンバ５１の内部空間にアクセスするための開口を、閉鎖可能な部材（例えば、扉、または、蓋）である。開閉部材５４が開状態のとき、ロボット装置３０またはその他の搬送装置は、真空チャンバ５１の外部から真空チャンバ５１の内部空間に、容器（例えば、出荷容器Ｃ）を移送可能である。また、開閉部材５４が開状態のとき、ロボット装置３０またはその他の搬送装置は、真空チャンバ５１の内部空間から真空チャンバ５１の外部に、容器（例えば、出荷容器Ｃ）を取り出すことが可能である。

　棚Ｗは、細胞内液精製システム１で精製された細胞内液が収容された容器（例えば、出荷容器Ｃ）を支持する。なお、容器を支持する部材は、棚Ｗ以外の部材（例えば、テーブル等）であってもよい。

　細胞内液精製システム１が、粉末化装置５を備える場合には、細胞内液精製システム１で精製された細胞内液の成分が粉末化される。この場合、細胞内液の成分の保存が容易となる。

　粉末状態の細胞内液の成分は、上述の炎症性腸疾患の予防剤、改善剤または治療剤として使用されてもよい。また、粉末状態の細胞内液の成分は、液体に溶かされることにより、上述の精子活性化剤として使用されてもよい。また、粉末状態の細胞内液の成分は、他の成分と混合されて化粧品として使用されてもよい。

　本出願は、２０１７年１０月１３日に出願された日本国特許出願第２０１７－１９９３２６号、および、２０１８年２月２３日に出願された日本国特許出願第２０１８－３１３２４号を基礎とする優先権を主張し、これらの基礎出願の開示の全てを引用により本出願に取り込む。

１、１Ａ、１Ｂ、１Ｃ、１Ｄ…細胞内液精製システム、２…無菌室、３…搬送装置、４、４Ａ、４Ｂ、４Ｃ…細胞膜破壊装置、５…粉末化装置、６…遠心分離機、７…回収装置、８…攪拌装置、９…固液分離装置、１０…制御装置、２０…壁部材、３０…ロボット装置、３１…アーム部、３２…把持部、３４…可動部、３６…カメラ、４１…凍結装置、４２…解凍装置、４３…温度調整容器、４４…ペルチェ素子、４６…超音波発振素子、４７…受容部、４７ａ…受容容器、４８…冷却装置、４９…共振チップ、５１…真空チャンバ、５２…加熱装置、５３…水蒸気除去装置、５４…開閉部材、６１…容器収容部、７１…回収部、７１ａ…先端チップ、７２…ピストン、７３…ピストン操作部、７４…アクチュエータ、８１…振動装置、８２…ピペッター、９０…フィルタ部材、９１…装着部、９２…フィルタ、１００…第２載置台、１１０…第１パスボックス、１１１…第１扉、１１２…第２扉、１１４…排気口、１２０…第２パスボックス、１２１…第１扉、１２２…第２扉、１２４…排気口、１３０…除菌システム、１３１、１３１ａ、１３１ｂ、１３１ｃ…除菌ガス供給装置、１３４…排気口、１３５…ダクト、１３６…ファン、１３７…フィルタ、１４０…第１載置台、１５０、１５０ａ…分注装置、１６０…消耗品載置台、１７０…出庫ボックス、１７１…第１出庫扉、１７２…第２出庫扉、４１０…冷却容器、４２０…加温容器、４２１…加熱装置、４４０…第１領域、５３１…排気管、５３２…冷却室、５３３…冷却装置、５３３ａ…冷却部材、５３３ｂ…冷却装置本体、ＡＸ…回転軸、Ｃ…出荷容器、Ｃ１…第１容器、Ｃ２…第２容器、Ｃ３…第３容器、ＣＰ、ＣＰ１、ＣＰ３…蓋部材、Ｅ１…容器、Ｅ２…試薬容器、Ｌ０…溶液、Ｌ１…第１液、Ｌ２…第２液、Ｌ５…上清液、Ｌ６…超音波伝達媒体、ＯＰ…上部開口、Ｐ…真空ポンプ、Ｓ…成分、ＳＰ１、ＳＰ２…空間、Ｔ…細胞、ＴＣ…破砕片

Claims

　無菌室と、
　細胞を含む溶液を収容した第１容器の搬送を行う搬送装置と、
　前記細胞の細胞膜を破壊して、前記溶液中に細胞内液を取り出す細胞膜破壊装置と、
　前記溶液から前記細胞内液の成分を遠心分離する遠心分離機と、
　遠心分離された前記細胞内液の前記成分を回収する回収装置と
　を具備する
　細胞内液精製システム。
　前記搬送装置は、前記第１容器を把持する把持部を備えたロボット装置を含む
　請求項１に記載の細胞内液精製システム。
　前記回収装置の操作部は、前記搬送装置の可動部によって操作されるか、あるいは、前記回収装置が備えるアクチュエータによって操作される
　請求項１または２に記載の細胞内液精製システム。
　前記細胞膜破壊装置は、
　　前記溶液を凍結する凍結装置と、
　　凍結した前記溶液を解凍する解凍装置と
　を具備する
　請求項１乃至３のいずれか一項に記載の細胞内液精製システム。
　前記細胞膜破壊装置は、ペルチェ素子を含み、
　前記ペルチェ素子は、前記凍結装置として機能するとともに前記解凍装置として機能する
　請求項４に記載の細胞内液精製システム。
　前記細胞膜破壊装置および前記搬送装置のうちの少なくとも一方の動作を制御する制御装置を更に具備し、
　前記制御装置は、前記細胞膜破壊装置が、前記第１容器内の前記溶液の凍結と、凍結した前記溶液の解凍とを複数回繰り返し実行するように前記細胞膜破壊装置または前記搬送装置に制御信号を送信する
　請求項１乃至５のいずれか一項に記載の細胞内液精製システム。
　前記細胞膜破壊装置は、超音波発振素子を含み、
　前記細胞膜破壊装置は、前記超音波発振素子の振動により生成される超音波を前記第１容器内の前記溶液に伝達することにより、前記細胞の前記細胞膜を破壊する
　請求項１乃至３のいずれか一項に記載の細胞内液精製システム。
　前記細胞を含む前記溶液を攪拌する攪拌装置を更に具備する
　請求項１乃至７のいずれか一項に記載の細胞内液精製システム。
　前記細胞内液の前記成分をろ液と固形物とに分離する固液分離装置を更に具備する
　請求項１乃至８のいずれか一項に記載の細胞内液精製システム。
　前記細胞内液の前記成分を粉末にする粉末化装置を更に具備する
　請求項１乃至９のいずれか一項に記載の細胞内液精製システム。
　細胞内液精製システムを用いた細胞内液精製方法であって、
　前記細胞内液精製システムは、
　　細胞膜破壊装置と、
　　遠心分離機と、
　　回収装置と
　を具備し、
　前記細胞内液精製方法は、
　　前記細胞膜破壊装置によって、溶液中に存在する細胞の細胞膜を破壊する工程と、
　　前記遠心分離機によって、前記溶液から細胞内液の成分を遠心分離する工程と、
　　前記回収装置により、遠心分離された前記細胞内液の前記成分を回収する工程と
　を具備する
　細胞内液精製方法。
　細胞内液精製システムを用いて炎症性腸疾患の予防剤、改善剤または治療剤、あるいは、精子活性化剤、もしくは、化粧品成分を製造する製造方法であって、
　前記細胞内液精製システムは、
　　細胞膜破壊装置と、
　　遠心分離機と、
　　回収装置と
　を具備し、
　前記製造方法は、
　　前記細胞膜破壊装置によって、溶液中に存在する細胞の細胞膜を破壊する工程と、
　　前記遠心分離機によって、前記溶液から細胞内液の成分を遠心分離する工程と、
　　前記回収装置により、遠心分離された前記細胞内液の成分を回収する工程と
　を具備し、
　前記細胞膜破壊装置によって破壊される前記細胞は、幹細胞である
　製造方法。
　幹細胞の細胞膜を破壊することによって得られる細胞内液を有効成分として含む
　炎症性腸疾患の予防剤、改善剤または治療剤。
　１回あたりの細胞内液の投与量が、幹細胞２０万個分以上の細胞内液を含むか、あるいは、
　１回あたりの細胞内液の投与量中に、幹細胞の細胞内液由来の蛋白質が０．０５２μｇ以上含まれている請求項１３に記載の炎症性腸疾患の予防剤、改善剤または治療剤。
　細胞内液の総投与量が、幹細胞６０万個分以上の細胞内液を含むか、あるいは、
　細胞内液の総投与量中に、幹細胞の細胞内液由来の蛋白質が０．１６μｇ以上含まれている
　請求項１３または１４に記載の炎症性腸疾患の予防剤、改善剤または治療剤。
　前記細胞内液が腸で溶解するカプセルに封入された請求項１３乃至１５のいずれか一項に記載の炎症性腸疾患の予防剤、改善剤または治療剤。
　幹細胞の細胞膜を破壊することによって細胞内液を取り出す工程と、
　前記細胞内液を出荷容器に収容する工程と、
　を具備し、
　前記出荷容器には、
　１ｍｌあたり、１３万個以上の幹細胞（ｉＰＳ細胞を除く。）から取り出された細胞内液が含まれているか、
　１ｍｌあたり、幹細胞（ｉＰＳ細胞を除く。）の細胞内液由来の蛋白質が０．０３４μｇ以上含まれているか、
　１ｍｌあたり、１３０万個以上のｉＰＳ細胞から取り出された細胞内液が含まれているか、あるいは、
　１ｍｌあたり、ｉＰＳ細胞の細胞内液由来の蛋白質が０．３２μｇ以上含まれている
　精子活性化剤の製造方法。