WO2018161808A1 - 维生素组合物在制备用于预防、治疗或延迟阿尔茨海默病的药物中的用途 - Google Patents

维生素组合物在制备用于预防、治疗或延迟阿尔茨海默病的药物中的用途 Download PDF

Info

Publication number
WO2018161808A1
WO2018161808A1 PCT/CN2018/077107 CN2018077107W WO2018161808A1 WO 2018161808 A1 WO2018161808 A1 WO 2018161808A1 CN 2018077107 W CN2018077107 W CN 2018077107W WO 2018161808 A1 WO2018161808 A1 WO 2018161808A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
vitamin
parts
composition
disease
effective amount
Prior art date
Application number
PCT/CN2018/077107
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
周明东
Original Assignee
上海泽生科技开发股份有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 上海泽生科技开发股份有限公司 filed Critical 上海泽生科技开发股份有限公司
Priority to EP18763903.4A priority Critical patent/EP3593805A4/en
Priority to JP2019548652A priority patent/JP7169285B2/ja
Priority to BR112019018652A priority patent/BR112019018652A2/pt
Priority to CA3054972A priority patent/CA3054972A1/en
Priority to US16/491,560 priority patent/US11464797B2/en
Priority to AU2018229920A priority patent/AU2018229920B2/en
Priority to CN201880015481.XA priority patent/CN110520135A/zh
Publication of WO2018161808A1 publication Critical patent/WO2018161808A1/zh
Priority to US17/945,684 priority patent/US20230248756A1/en
Priority to JP2022172956A priority patent/JP2023011769A/ja
Priority to AU2024202678A priority patent/AU2024202678A1/en

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7135—Compounds containing heavy metals
    • A61K31/714—Cobalamins, e.g. cyanocobalamin, i.e. vitamin B12
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid or pantothenic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline 
    • A61K31/353—3,4-Dihydrobenzopyrans, e.g. chroman, catechin
    • A61K31/355—Tocopherols, e.g. vitamin E
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/365—Lactones
    • A61K31/375—Ascorbic acid, i.e. vitamin C; Salts thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A61K31/4188—1,3-Diazoles condensed with other heterocyclic ring systems, e.g. biotin, sorbinil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4415—Pyridoxine, i.e. Vitamin B6
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/455—Nicotinic acids, e.g. niacin; Derivatives thereof, e.g. esters, amides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A61K31/51—Thiamines, e.g. vitamin B1
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A61K31/525—Isoalloxazines, e.g. riboflavins, vitamin B2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia

Definitions

  • vitamins B1, B2, B3, B5, B7, B6, B9, and B12 are involved in the biological oxidation of the body and the physiological metabolism of carbohydrates, fats, and proteins, thereby promoting energy metabolism and production.
  • these vitamins can be used to help treat the symptoms and causes of metabolic-related diseases such as improving blood sugar regulation and promoting fat metabolism.
  • vitamin drugs have extremely high clinical value, and play an extremely important role in the prevention and treatment of energy metabolism diseases, regulation of the nervous system and even delaying the occurrence of AD.
  • the potential value of vitamin drugs in the treatment of energy metabolism and AD is unquestionable. It is of social and clinical significance to regulate the metabolism of energy in the brain and to delay the prevention and reduce the occurrence of AD.
  • the invention in another aspect, relates to a composition
  • a composition comprising an effective amount of a vitamin B, a C-group composition, and other effective amounts of a vitamin family compound.
  • the composition comprises an effective amount of vitamin B1 (thiamine), vitamin B2 (riboflavin), vitamin B3 (nicotinic acid), vitamin B5 (pantothenic acid), vitamin B6, B7 (biological , vitamin C and other effective amounts of vitamin compounds.
  • vitamin B group composition includes all vitamin B compounds or analogs or derivatives thereof, such as vitamin B1 (thiamine), vitamin B2 (riboflavin), vitamin B3 (nicotinic acid), Vitamin B5 (pantothenic acid) and vitamin B6.
  • Figure 1 Group of animals acquired test (D1-D5) on-stage latency
  • This study aimed to investigate the relationship between Alzheimer's disease and energy metabolism in the brain, and further study whether vitamin compound can play a role in the prevention and treatment of Alzheimer's disease by regulating energy metabolism in the brain.
  • Streptozotocin, vitamin BC tablets (Zesheng): The weight ratio of the components contains 100 parts of vitamin B1, 100 parts of vitamin B2, 100 parts of vitamin B3, 100 parts of vitamin B5, 100 parts of vitamin B6, 0.1 parts of B7, 0.4 parts B9, 0.1 part vitamin B12 and 150 parts vitamin C.
  • Solitaire mitochondrial enzyme activity kit (PDH article number MS2103, ⁇ -KGDH article number MS2100, ICDHm article number MS2104, SDH article number MS2102), TAKARA SYBR II, TIANGEN total RNA extraction kit, TOYOBO reverse transcription kit, primer (production synthesis) )
  • Microplate reader Molecular Devices SpectraMax M2
  • the model is an AD animal model (Icv-STZ model) that simulates sporadic AD (SAD). It is successful in the intracerebral glucose/energy metabolism caused by streptozocin (STZ) in the lateral ventricle.
  • SAD sporadic AD
  • STZ streptozocin
  • Various pathological manifestations of SAD were simulated, such as oxidative stress, activation of inflammatory responses, abnormalities of the cholinergic pathway, hyperphosphorylation of tau and aggregation of A ⁇ , and learning and memory dysfunction.
  • This model has a short modeling time and can display some cognitive dysfunction and pathological features of AD within a few weeks. It is a relatively fast and easy to construct AD model, which makes up for the adoption of APP/PS1/tauP301L triple transgenic AD. The time cost of model mice.
  • the specific Icv-STZ model is built as follows:
  • Wistar rats 250-320g Wistar rats were anesthetized, fixed on the brain stereotaxic instrument, the top of the head was depilated, the skin was disinfected, the middle of the head was incision, and the anterior iliac crest was exposed, 0.9 mm after the anterior iliac crest, 1.5 mm to the left and right sides of the midline, and a micro syringe.
  • the needle was inserted vertically from the brain surface by 3.6 mm, and 5 ⁇ l of STZ (3 mg/kg) was slowly injected into the left and right lateral ventricles. The injection time was 8 min, and the needle was left for 2 min, and the needle was slowly withdrawn. All procedures were performed under aseptic conditions, and the skin incision was antibacterial with penicillin to suture the wound.
  • the sham operation group was injected with the same amount of normal saline.
  • mice converted to rat dose 0.5 ⁇
  • CMC-Na solution preparation Weigh 2.0g of CMC-Na powder, slowly add 300ml of ultrapure water, stir it magnetically until completely dissolved, dilute to 400ml, prepare 0.5% clear solution, put it at 4 °C .
  • Vitamin BC tablet dosage
  • vitamin BC tablet suspension Take appropriate amount of vitamin BC tablets, add 0.5% CMC-Na after grinding, shake and mix to form a stable suspension, 1.025 tablets/kg per mouse and 0.516 tablets for rats. /kg, once in the morning and evening.
  • donepezil hydrochloride solution Take appropriate amount of donepezil hydrochloride powder, add 0.5% CMC-Na, shake and mix to form a stable suspension, and give donepezil hydrochloride to 1.025 mg/kg per mouse and 0.516 mg/kg per rat. The solution was administered twice a day, and the donepezil hydrochloride solution was administered in the morning, and an equal volume of 0.5% CMC-Na vitamin BC tablet adjuvant solution was administered in the afternoon.
  • mice and rats were intragastrically administered with a volume of 20 ml/kg and 10 ml/kg body weight respectively, and the normal control and model groups were given a corresponding volume of 0.5% CMC-Na vitamin BC tablet excipient solution by weight.
  • the Morris experimental system consists of a water maze device, an automatic collection of water maze images, and a software analysis system.
  • the Morris water maze unit consists mainly of a pool and a platform with adjustable height and movable position.
  • the water maze experiment is divided into two parts:
  • the pool is divided into 4 quadrants, the platform is placed in one quadrant, and the liquid surface floods the platform 1 cm.
  • Probe training was conducted 1.5 hours and 1 day after the acquired training.
  • the platform was removed before the start of the experiment, and the mice were placed in the water from the opposite side of the original platform quadrant and recorded for 60 s.
  • the spatial memory detection indicators are 1) the time it takes for the animal to cross the platform for the first time; 2) the time it takes for the animal to reach the target quadrant (ie, the quadrant where the platform was originally placed); 3) the number of times the animal enters the target quadrant.
  • Solitaire mitochondrial enzyme activity assay kit weigh about 0.1 g of the cerebral cortex and add 1 ml of reagent one and 10 ul of reagent three, and grind in an ice bath. Centrifuge at 4° and discard the precipitate. The supernatant was transferred to another centrifuge tube, centrifuged at 4°, and the supernatant was discarded. Two reagents of 200 ul and three ul of reagent were added to the precipitate, and ultrasonically disrupted for enzyme activity measurement.
  • TIANGEN total RNA extraction kit weigh about 0.1g of cerebral cortex and add 1ml of lysate RZ, homogenate, place at 15-30 °C for 5min, record 200ul of chloroform, violently shake for 15s, stand at room temperature for 3min, centrifuge at 4 °C, water The phase was transferred to a new tube, mixed with 0.5 volume of absolute ethanol, placed in a adsorption column CR3 at 4 ° C for centrifugation, and the waste liquid was discarded. Add the deproteinized solution, discard the waste liquid after centrifugation, rinse the rinse solution twice, and centrifuge to discard the waste liquid. Add 30-100 ul of RNase-Free ddH 2 O for 2 min at room temperature and centrifuge at 4 °C.
  • the TOYOBO reverse transcription kit was reverse transcribed and its expression was detected by real-time PCR.
  • the multivitamin BC enhances the key pyruvate dehydrogenase (PDH), ⁇ -ketoglutarate dehydrogenase, and mitochondria in the cerebral cortex involved in the Krebs cycle. Citrate dehydrogenase (ICDHm) and succinate dehydrogenase (SDH) activities improve mitochondrial metabolism.
  • PDH pyruvate dehydrogenase
  • ICDHm citrate dehydrogenase
  • SDH succinate dehydrogenase
  • the rats in ICV-STZ model had significantly lower learning and memory ability in the morris water maze test, but after continuous administration of vitamin BC for 2 months, the learning and memory ability of the rats was significantly improved.
  • the key enzyme activity of the cycle is increased, and the expression level of energy metabolism-related mRNA is increased. This drug has a certain effect on the treatment of AD cognitive dysfunction, and it is expected to provide a new class of drugs for AD patients.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

维生素组合物在制备用于预防、治疗或延迟阿尔茨海默病的药物中的用途。所述组合物包括维生素B族组合物或其类似物或衍生物或维生素C或其类似物或衍生物或维生素B族组合物或其类似物或衍生物与维生素C或其类似物或衍生物的组合。

Description

[根据细则37.2由ISA制定的发明名称]　维生素组合物在制备用于预防、治疗或延迟阿尔茨海默病的药物中的用途 技术领域
本发明涉及一种维生素组合物，尤其是一种通过促进能量代谢治疗阿尔茨海默病的复合维生素B、C组合物。该组合物适用于预防、治疗或延迟阿尔茨海默病，改善学习记忆能力和认知功能障碍。
背景技术
阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease,AD)是通常发生于65岁以上老年人，以进行性认知功能下降和行为损害为特征的中枢神经系统退行性疾病，是老年期痴呆的最常见类型。目前，阿尔茨海默病的发病机制尚不完全明确，代谢障碍可能是引起阿尔茨海默病的病因之一。糖是机体内主要的代谢来源，糖代谢异常会引起一系列组织功能受损，其中以葡萄糖为主要能量来源的脑组织极易受糖代谢异常的影响。大量研究发现，AD患者存在着代谢功能异常，同时脑代谢率降低也是AD最早期的病理表现之一，其改变早于任何神经精神测试所能发现的功能障碍。影像学检查显示AD病人的脑萎缩与代谢障碍及其他生理异常同时出现，并随着疾病的进展代谢异常会逐渐恶化。研究也发现，糖代谢异常导致的潜在机制可能与高血糖的直接毒性、低血糖导致大脑的能量供应不足、胰岛素抵抗及胰岛素信号转导异常和胰岛素降解酶基因异常等有关。通过FDG-PET葡萄糖代谢显像已经证实，在痴呆发生之前数年便能观测到额颞叶、顶叶及扣带回皮层的葡萄糖代谢速率下降，说明脑内糖代谢障碍与AD的发病密切相关，可能是AD发生发展的一个原因，因此通过改善脑能量代谢有望能预防及降低AD的发生。
葡萄糖酵解及三羧酸循环是机体内葡萄糖产能(ATP)的主要代谢途径。这两种能量代谢途径的完整反应需要各种代谢酶的参与，而这些代谢酶的活性则依赖于辅酶的参与。丙酮酸脱氢酶是线粒体基质内的多酶复合物，该酶是催化丙酮酸氧化脱羧成乙酰辅酶A的关键酶，PDH所催化的反应过程连接了糖酵解，柠檬酸循环以及ATP形成。线粒体柠檬酸脱氢酶是三羧酸循环中的限速酶，催化异柠檬酸的氧化脱羧反应生成α-酮戊二酸，在催化反应中脱下的H +将NAD +还原成NADH，是三羧酸循环中第一次生成CO 2的步骤，也是不可逆反应，是三羧酸循环中重要的限速步骤。α-酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)位于线粒体基质内参与是三羧酸循环的限速酶，对于维持脑组织氧化还原的恒定极为重要，α-酮戊二酸脱氢酶活性改变与神经退行性疾病密切相关。琥珀酸脱氢酶是三羧酸循环中的第六个酶，该酶直接连在电子传递链上的，以琥珀酸脱氢酶、黄素腺嘌呤二核苷酸、细胞色素和3个Fe-S蛋白为主要组分构成了线粒体复合体Ⅱ，在糖代谢及氧化呼吸链中起重要作用。SDH存在于线粒体内膜，是线粒体内膜的标志酶，它的活性高低反映了组织物质代谢状态及线粒体功能。SDHA是琥珀酸脱氢酶一个亚基，编码黄素蛋白。作为参与三羧酸循环的关键酶，琥珀酸脱氢酶是反映线粒体功能的标志酶之一，其活性一般可作为评价三羧酸循环运行程度的指标。ATP5B编码ATP合成酶的一个亚单位，参与线粒体中的氢离子转运。ATP合成酶是一类线粒体中的合成酶，是 生物体能量代谢的关键酶。
维生素是一系列人体代谢中必不可少的有机化合物，主要作用为维持和调节机体正常代谢的重要物质。它们是生物体所需要的微量营养成分，一般无法由生物体自己生产，需要通过饮食等手段获得。维生素不能像糖类、蛋白质及脂肪那样可以产生能量，组成细胞，但是它们对生物体的新陈代谢起调节作用，维持人体的健康。
目前已知许多维生素参与了代谢过程中的反应，是机体生化反应中不可或缺的重要元素。维生素中的B族维生素是推动体内代谢，把糖、脂肪、蛋白质等转化成热量时不可缺少的物质，它们多数以辅酶形式参与了代谢过程。机体内一旦发生维生素B缺乏，细胞功能会马上降低，引起代谢障碍。其中一些B族维生素成员如维生素B1甚至被称为精神性的维生素，这是因为它对神经组织和精神状态有良好的影响。在糖代谢过程中B族维生素成员包括B1，B2，B3，B5，B6，B7和B12直接参与了糖酵解及三羧酸循环中。一旦这些维生素缺乏势必引起该代谢途径障碍，引发一系列与代谢障碍相关的疾病发生。研究发现维生素B1，B2，B3，B5，B6，B7和B12除了直接参与了能量代谢过程，它们也参与了AD的发病机理如降低淀粉样蛋白(beta amyloid,Aβ)的产生、促进同型半胱氨酸(Homocystein,Hcy)的代谢、降低肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF-α)的水平及协助神经递质的合成相关。因此，这些B维生素成员可能通过调控脑内的能量代谢水平，从而影响AD发生、发展的病理病程，拟或是AD的潜在治疗手段之一。
除了B族维生素，临床研究也发现，补充一些脂溶性维生素如维生素D，E和K，能够降低代谢综合征风险、降低空腹血糖水平、诱导胰岛素分泌及增加脑内糖代谢。除此之外，它们也降低了AD动物脑内Aβ及TNF-α水平及改善AD病人的认知功能。说明这类维生素能同时作用于能量代谢及神经功能，也提示两者之间可能存在因果关系。因此通过摄取这些维生素，可能调节AD病人脑内的能量代谢从而改善AD症状。微量元素是机体内不可或缺的成分之一，一些微量元素也被报道参与能量代谢及AD的进程。临床研究发现，AD病人脑内镁元素水平明显较低，较多的镁摄取降低罹患AD的风险。动物研究显示，大鼠缺氧10min后，CA1区ATP水平仅为正常时的16％，而经镁离子处理过的脑片ATP水平为正常脑片的32％，认为镁能显著改善缺氧时所导致的CA1区ATP下降。因此通过调控脑内镁水平可能起到预防脑内能量代谢产物ATP的不足，从而改善脑内神经功能及作用。
通过以往基础研究的发现，维生素在保持机体健康及预防疾病方面的益处已经逐渐得到证实。而在临床应用上，各种维生素不仅可作为主要或辅助治疗药物，还可作为膳食补充剂来促进健康、预防疾病。在神经疾病方面，维生素B1、B3、B6、B9、B12、C和E等维生素起到促进神经发育、同型半胱氨酸代谢(高同型半胱氨酸为AD的危险因素之一)，调节神经递质的合成、防止恶性贫血所导致的神经功能病变、改善精神神经障碍等作用，对于维持神经组织的健康尤为重要。在临床应用上，这些维生素对治疗神经系统反应疾病(干性脚气病)、周围神经炎疾病、降低氧化应激(AD的可能发病因素)等有显著疗效。
能量代谢方面，维生素B1、B2、B3、B5、B7、B6、B9、B12参与了机体的生物氧化及 碳水化合物、脂肪、蛋白质的生理代谢过程，从而促进能量代谢及产生。而在临床应用上，这些维生素可用于辅助治疗代谢相关疾病的症状及病因如改善血糖调节和促进脂肪代谢等功能。有鉴于此，可见维生素药物其临床应用价值极高，在防治能量代谢疾病及调节神经系统乃至延缓AD的发生中都起到极其重要的作用。结合临床应用及基础研究结果，维生素药物在治疗能量代谢及AD的潜在价值不容置疑，围绕维生素调节脑内能量代谢从而起到延缓预防及降低AD发生的研究具有其社会及临床意义。
目前，一项3期临床研究(NCT00235716)发现，长期摄取(6-48月)维生素E能有效改善轻度认知障碍(MCI)病人的认知功能；另一项2期临床研究(NCT01320527)结果也发现复合维生素(B9，B12，E及其他营养元素)也同样对MCI病人的认知及情绪调节有利，提示在认知功障碍初期给予维生素的治疗具有一定的AD治疗作用。
综上所述，基础及临床研究已发现①B族维生素(B1，B2，B3，B5，B6，B7和B12)、②脂溶性维生素(D,E,K)及③微量元素(镁离子)都具有调控代谢及参与神经功能保护的作用，同时及早的维生素治疗也有利于AD的改善。但至今还没有一个维生素类药物在临床上用于治疗AD。
目前临床上用于治疗AD的药物主要为乙酰胆碱酯酶抑制剂及NMDA受体拮抗剂，以上药物通过改变脑内神经递质水平来抑制认知功能的减弱，但目前已知这些药物只能延缓6-12月的症状恶化。
本发明制备了一种包含以上部分或所有元素的复合维生素药物，望通过早期脑内能量代谢的调控和干预，起到改善、防治AD的效果。本发明的能量代谢药物尝试通过从根源上改善脑内能量代谢从而改善神经和认知功能，其作用机制与传统的改善神经递质药物只治标不治本不同，具有明显的优越性；同时，本发明公布的药物相对安全，其在改善脑内能量代谢的的同时对机体也无明显副作用，可视为一种较温和的治疗手段。因此，本发明的能量代谢药物可能在治疗AD中起到重要的作用，为AD的治疗提供一种创新药物。
阿尔茨海默病已成为一个全球性的挑战，给21世纪的家庭和社会带来巨大的经济负担。据报道，2016年美国因阿尔茨海默病造成的经济损失约为2360亿美元。目前临床上用于治疗AD的药物主要为乙酰胆碱酯酶抑制剂及NMDA受体拮抗剂，以上药物通过改变脑内神经递质水平来抑制认知功能的减弱，但这些药物只能延缓6-12月的症状恶化。，而无法完全阻断AD的进程，成为AD治疗的最大问题。本发明涉及的能量代谢药物为一种新型的AD治疗药物，在动物实验中我们发现该药物能有效改善动物的认知水平，其相关作用机制可能与能量代谢相关，与目前以上市药物完全不同。预计成药后，该药物的使用者能覆盖大量的AD病人，市场前景广阔。
发明内容
A.发明概述
本发明涉及一种维生素组合物，尤其是一种通过促进能量代谢治疗阿尔茨海默病的复合 维生素B、C组合物。该组合物适用于预防、治疗或延迟阿尔茨海默病，改善学习记忆能力和认知功能障碍。本发明中所指的维生素包括其相应的类似物或衍生物，如维生素B1是指硫胺素或其类似物或衍生物；维生素B2是指核黄素或其类似物或衍生物；维生素B3是指烟酸或其类似物或衍生物；维生素B5是指泛酸或其类似物或衍生物；维生素B6是指吡哆醇或其类似物或衍生物；维生素B7是生物素或其类似物或衍生物；维生素B9是指叶酸或其类似物或衍生物；维生素B12是指氰钴胺或其类似物或衍生物；维生素C是指抗坏血酸或其类似物或衍生物；等等。在一个优选实施方案中，复合维生素BC族组合物是包含维生素B1(硫胺素)、维生素B2(核黄素)、维生素B3(烟酸)、维生素B5(泛酸)、维生素B6、B7(生物素)、维生素C的组合物。在一个更优选的实施方案中，复合维生素BC族组合物是包含维生素B1(硫胺素)、维生素B2(核黄素)、维生素B3(烟酸)、维生素B5(泛酸)、维生素B6、B7(生物素)，B9(叶酸)、、维生素C、酒石酸氢胆碱、肌醇的组合物。在另一个更优选的实施方案中，维生素B族组合物是包含维生素B1(硫胺素)、维生素B2(核黄素)、维生素B3(烟酸)、维生素B5(泛酸)、维生素B6、维生素B12、B9(叶酸)、B7(生物素)、维生素C、酒石酸氢胆碱、肌醇和对氨基苯甲酸的组合物。
另一方面，本发明提供了一种组合物，该组合物包括有效量的维生素B族、维生素C族组合物以及药学上可接受的载体。在一个优选的实施方案中，该组合物包括有效量的维生素B1(硫胺素)、维生素B2(核黄素)、维生素B3(烟酸)、维生素B5(泛酸)、维生素B6、B7(生物素)、维生素C以及药学上可接受的载体。在一个更优选的实施方案中，该组合物包括有效量的维生素B1(硫胺素)、维生素B2(核黄素)、维生素B3(烟酸)、维生素B5(泛酸)、维生素B6、B9(叶酸)、B7(生物素)、维生素C、酒石酸氢胆碱、肌醇以及药学上可接受的载体。在另一个更优选的实施方案中，该组合物包括有效量的维生素B1(硫胺素)、维生素B2(核黄素)、维生素B3(烟酸)、维生素B5(泛酸)、维生素B6、维生素B12、B9(叶酸)、B7(生物素)、维生素C、酒石酸氢胆碱、肌醇、对氨基苯甲酸以及药学上可接受的载体。
另一方面，本发明涉及一种组合物，该组合物包括有效量的维生素B、C族组合物以及有效量的预防、治疗或延迟阿尔茨海默病的药物。在一个优选的实施方案中，该组合物包括有效量的维生素B1(硫胺素)、维生素B2(核黄素)、维生素B3(烟酸)、维生素B5(泛酸)、维生素B6、B7(生物素)、维生素C以及有效量的预防、治疗或延迟阿尔茨海默病的药物。在一个更优选的实施方案中，该组合物包括有效量的维生素B1(硫胺素)、维生素B2(核黄素)、维生素B3(烟酸)、维生素B5(泛酸)、维生素B6、B9(叶酸)、B7(生物素)、维生素C、酒石酸氢胆碱、肌醇以及有效量的预防、治疗或延迟阿尔茨海默病的药物。在另一个更优选的实施方案中，该组合物包括有效量的维生素B1(硫胺素)、维生素B2(核黄素)、维生素B3(烟酸)、维生素B5(泛酸)、维生素B6、维生素B12、叶酸、生物素、维生素C、酒石酸氢胆碱、肌醇、对氨基苯甲酸以及有效量的预防、治疗或延迟阿尔茨海默病的药物。
另一方面，本发明涉及一种组合物，该组合物包括有效量的维生素B、C族组合物以及其 他有效量的维生素族化合物。在一个优选的实施方案中，该组合物包括有效量的维生素B1(硫胺素)、维生素B2(核黄素)、维生素B3(烟酸)、维生素B5(泛酸)、维生素B6、B7(生物素)、维生素C以及其他有效量的维生素族化合物。在一个更优选的实施方案中，该组合物包括有效量的维生素B1(硫胺素)、维生素B2(核黄素)、维生素B3(烟酸)、维生素B5(泛酸)、维生素B6、B9(叶酸)、B7(生物素)、维生素C、酒石酸氢胆碱、肌醇以及其他有效量的维生素族化合物。在另一个更优选的实施方案中，该组合物包括有效量的维生素B1(硫胺素)、维生素B2(核黄素)、维生素B3(烟酸)、维生素B5(泛酸)、维生素B6、维生素B12、B9(叶酸)、B7(生物素)、维生素C、酒石酸氢胆碱、肌醇、对氨基苯甲酸以及其他有效量的维生素族化合物。所述其他维生素族化合物包括维生素A、维生素D、维生素E、维生素K等。
另一方面，本发明涉及一种组合物，该组合物包括有效量的维生素B、C族组合物以及其他有效量的微量元素。在一个优选的实施方案中，该组合物包括有效量的维生素B1(硫胺素)、维生素B2(核黄素)、维生素B3(烟酸)、维生素B5(泛酸)、维生素B6、B7(生物素)、维生素C以及其他有效量的维生素族化合物。在一个更优选的实施方案中，该组合物包括有效量的维生素B1(硫胺素)、维生素B2(核黄素)、维生素B3(烟酸)、维生素B5(泛酸)、维生素B6、B9(叶酸)、B7(生物素)、维生素C、酒石酸氢胆碱、肌醇以及其他有效量的维生素族化合物。在另一个更优选的实施方案中，该组合物包括有效量的维生素B1(硫胺素)、维生素B2(核黄素)、维生素B3(烟酸)、维生素B5(泛酸)、维生素B6、维生素B12、B9(叶酸)、B7(生物素)、维生素C、酒石酸氢胆碱、肌醇、对氨基苯甲酸以及其他有效量的维生素族化合物。所述其他微量元素铁、镁、锌等。
本发明的复合维生素BC族组合物的剂型可以为口嚼片，但不限于此，本发明组合物还可加入制备不同剂型时所需的各种常规辅料，如崩解剂、润滑剂、粘合剂、抗氧剂、络合剂等药用载体，以常规的制剂方法制成任何一种常用的口服剂型，如分散片、颗粒剂、胶囊剂、口服液等其他剂型。
本发明的复合维生素BC族组合物，其各组份的重量配比可有多种选择，其均对能量代谢有相应的促进作用，可用于预防、治疗或延迟阿尔茨海默病。在某些实施方案中，其可包含如下重量配比的组份：30-300份维生素B1，30-300份维生素B2，30-300份维生素B3，30-300份维生素B5，30-300份维生素B6，0.01-1份B7(生物素)，0.01-2份B9(叶酸)，0.01-1份B12，50-500份维生素C。在一个优选实施方案中，维生素B族组合物包含如下重量配比的组份：100份维生素B1，100份维生素B2，100份维生素B3，100份维生素B5，100份维生素B6，0.1份生物素，0.4份叶酸，0.1份B12和150份维生素C。在一个优选实施方案中，维生素B族组合物包含如下重量配比的组份：10份维生素B1，15份维生素B2，25份维生素B3，110份维生素B5，10份维生素B6和0.1份生物素和150份维生素C。在一个更优选的实施方案中，维生素B族组合物包含如下重量配比的组份：10份维生素B1，15份维生素B2，25份维生素B3，110份维生素B5，10份维生素B6，0.1份生物素，0.4份叶酸，250份 酒石酸氢胆碱，250份肌醇和150份维生素C。在一个更优选的实施方案中，维生素B族组合物包含如下重量配比的组份：10份维生素B1，15份维生素B2，25份维生素B3，110份维生素B5，10份维生素B6，0.1份生物素，0.4份叶酸，250份酒石酸氢胆碱，0.025份维生素B12和150份维生素C。在另一个更优选的实施方案中，维生素B族组合物包含如下重量配比的组份：10份维生素B1，15份维生素B2，25份维生素B3，110份维生素B5，10份维生素B6，0.1份生物素，0.4份叶酸，250份酒石酸氢胆碱，250份肌醇，0.025份维生素B12，50份对氨基苯甲酸和150份维生素C。
B.定义
除另有定义，这里使用的所有科技术语与本发明所属技术领域的普通技术人员理解含义相同。所有专利文献、专利申请文献、公开的专利文献和其它出版物均作为参考。如本节阐述的定义与上述参考文献所述的定义不一致或相反时，以本节阐述的定义为准。
除非在上下文中明确表明，在此所用“一个”的意思是“至少一个”或“一个或多于一个”。
术语“份”，特别是涉及一个给定的量，是指正负偏差在10％以内的量。
此处所使用的术语“包含(comprises)”、“包含(comprising)”、“包括(includes)”、“包括(including)”、“含有(contains)”、“含有(containing)”及其任何变体旨在涵盖非独占性的包含物，例如包含、包括或含有一种元素或一列表的元素的过程、方法、加工产品或物质的组合物不仅包括那些元素还可能包括没有明确地列出的或该过程、方法、加工产品或物质的组合物的固有的其它元素。
此处所用的术语“维生素B族组合物”包括所有的维生素B化合物或其类似物或衍生物，如维生素B1(硫胺素)、维生素B2(核黄素)、维生素B3(烟酸)、维生素B5(泛酸)和维生素B6等。
此处所用的术语“类似物”是指结构大致相同、并具有相同生物活性但可以有不同程度活性的任何两个以上分子或者是其中片段。所用术语“衍生物”是指化合物中的氢原子或原子团被其他原子或原子团取代而衍生的较复杂的化合物。
附图说明
图1：各组动物获得性试验(D1-D5)上台潜伏期
图2：各组动物在目标象限滞留时间(1为目标象限)
图3：各组动物在目标象限游泳距离(1为目标象限)
图4：大脑皮层能量代谢相关酶活性水平
图5：大脑皮层能量代谢相关酶基因表达水平
具体实施方式
实施例1复合维生素对ICV-STZ拟AD模型大鼠的治疗作用
1.研究目的
本研究旨在探讨阿尔茨海默病与脑内能量代谢的关系，进一步研究维生素复方是否能通过调控脑内能量代谢起到防治阿尔茨海默病的作用。
2.试验材料
2.1试剂
链脲佐菌素、维生素BC片(泽生):重量配比的组份含100份维生素B1，100份维生素B2，100份维生素B3，100份维生素B5，100份维生素B6，0.1份B7，0.4份B9，0.1份维生素B12和150份维生素C。液体镁元素、维生素(D、E、K)。水合氯醛。索莱宝线粒体酶活试剂盒(PDH货号MS2103,α-KGDH货号MS2100，ICDHm货号MS2104，SDH货号MS2102),TAKARA SYBR II,TIANGEN总RNA提取试剂盒，TOYOBO逆转录试剂盒，引物(生工合成)
2.2实验仪器与设备
1.动物行为学检测设备：大鼠Morris水迷宫
2.动物行为学录像及分析软件
3.大小鼠数显脑立体定位仪
4.大小鼠脑立体定位注射泵
5.大小鼠颅骨钻
6.全自动组织匀浆仪：上海净信实业发展有限公司JXFSTPRP-24
7.超声波细胞破碎机：宁波新芝生物科技有限公司JY92-IIDN
8.恒温水浴锅：上海平轩科学仪器有限公司DK-8D
9.台式离心机：Thermo Scientific FRESCO17
10.酶标仪：Molecular Devices SpectraMax M2
11.PCR仪：BIORAD CFX-ConnectTM Real-Time System
Thermal Cycler Block 5020
2.3实验动物
雄性Wistar大鼠(250-320g)
3.试验设计与方法
3.1.大鼠脑室注射链脲佐菌素-AD模型的制备(在体诱导脑内糖代谢异常)
该模型为一种模拟散发性AD(Sporadic AD,SAD)的AD动物模型(Icv-STZ模型)，通过侧脑 室给予链脲佐菌素(Streptozocin,STZ)致脑内糖/能量代谢障碍，成功模拟了SAD的各种病理表现，如氧化应激，炎症反应的激活，胆碱能通路的异常，tau的过度磷酸化和Aβ的聚集，以及学习与记忆功能障碍。这种模型造模时间较短，几周内就能表现出AD的一些认知功能障碍及病理特征，为一种相对较快易构建的AD模型，弥补了采用APP/PS1/tauP301L三重转基因AD模型小鼠的时间成本问题。因此，本项目拟在繁育三转基因动物模型的同时，构建Icv-STZ模型，通过同样的治疗手段、检测方法验证维生素调控能量代谢及防治AD的作用，期望通过不同模型反复论证维生素的疗效。
具体的Icv-STZ模型的构建步骤如下：
250-320g Wistar大鼠麻醉后，固定于脑立体定位仪上，头顶部去毛，消毒皮肤，头顶部正中切口，暴露前囟，于前囟后0.9mm，中线左右侧1.5mm处，微量注射器自脑表面垂直进针3.6mm，向左右侧侧脑室缓慢注入5μl STZ(3mg/kg)，注射时间8min,留针2min，缓慢退针。所有操作均在无菌条件下进行，皮肤切开处用青霉素抗菌，缝合伤口。假手术组注射等量生理盐水。
3.2 Icv-STZ模型大鼠分组及给药
Icv-STZ模型造模后，修养一周，后开始进行灌胃给药，周期为2个月。大鼠分为四组：正常对照、模型、治疗及阳性药物组，每组20只，具体分组见下表：
表1.Icv-STZ模型大鼠分组(n＝20/组)
分组 治疗药物
正常对照(Icv-生理盐水注射) 溶剂
模型(Icv-STZ注射) 溶剂
维生素治疗(Icv-STZ注射) 维生素复方
阳性药物治疗(Icv-STZ注射) 多奈哌齐
3.3 Icv-STZ动物模型的验证
为了确认Icv-STZ大鼠造模的稳定性及可靠性，在进行正式给药实验的同时，另设2组动物即正常对照组(Icv-生理盐水)及模型组(Icv-STZ注射)，每组各20只，在造模完成后1个月及2个月后分别进行行为学检测
I.复合BC片转换成小鼠剂量＝(÷60kg×12.3小鼠系数×5倍剂量)
II.复合BC片转换成大鼠剂量＝(÷60kg×6.2大鼠系数×5倍剂量)
III.大鼠转换成小鼠剂量＝1.98×；小鼠转换成大鼠剂量＝0.5×
IV.动物皮下给药剂量转换成灌胃给药剂量＝3×。
表2.复合维生素BC片成份及给药剂量表
Figure PCTCN2018077107-appb-000001
3.4.试剂配制
a)0.5％CMC-Na溶液配制:称取CMC-Na粉末2.0g，缓慢加入300ml超纯水，磁力搅拌至完全溶解，定容到400ml，配制成0.5％的澄清溶液，置于4℃备用。
维生素BC片给药剂量：
小鼠剂量：1片BC片÷60kg×12.3小鼠系数×5倍剂量＝1.025片/kg
大鼠剂量：1片BC片÷60kg×6.2大鼠系数×5倍剂量＝0.516片/kg
b)维生素BC片混悬液配制：取适量维生素BC片，研磨后加入0.5％CMC-Na，振荡混匀，形成稳定的混悬液，按每只小鼠1.025片/kg及大鼠0.516片/kg，早晚各1次给药。
阳性对照药-盐酸多奈哌齐给药剂量：
小鼠剂量：临床给药剂量(5mg/天)÷60kg×12.3小鼠系数＝1.025mg/kg
大鼠剂量：临床给药剂量(5mg/天)÷60kg×6.2大鼠系数＝0.516mg/kg
c)盐酸多奈哌齐溶液配制：取适量盐酸多奈哌齐粉末，加入0.5％CMC-Na，震荡混匀，形成稳定的混悬液，按每只小鼠1.025mg/kg及大鼠0.516mg/kg给予盐酸多奈哌齐溶液，一天给药两次，上午给予盐酸多奈哌齐溶液，下午给予等体积0.5％CMC-Na维生素BC片辅料溶液。
3.5.给药方法：小鼠及大鼠灌胃给药体积分别为20ml/kg及10ml/kg体重，正常对照及模型 组按体重给予相应体积0.5％CMC-Na维生素BC片辅料溶液。
3.6行为学检测
Morris水迷宫(Morris Water Maze)
主要用来评价动物空间学习与参考记忆。啮齿类动物在水中有强烈的逃生动机，并试图逃离水环境。学会逃避水环境的过程体现动物的学习能力；根据周围环境对水中安全的地方(平台)进行空间定位，有目的地游往平台，体现动物的空间参考记忆能力。Morris实验系统由水迷宫装置、水迷宫图像自动采集和软件分析系统组成。Morris水迷宫装置主要由水池和一个可调节高度和可移动位置的站台所组成。
水迷宫实验分为两部分：
1).获得性训练
将水池分为4个象限，将平台放置于一个象限内，液面淹过平台1cm。将动物头朝池壁放入水中，放入位置随机取4个不同方向的起始位置之一。记录动物找到并爬上平台时间(逃避潜伏期)，检测动物的学习能力。若动物超过60s仍未找到平台，则引导动物到平台。让动物在平台上停留10s后将动物取出，在远红外灯下烘干后放回饲养笼直到下一轮实验。每只小鼠每天训练4次，连续训练5天(或更长，取决于模型组学习情况，模型平均潜伏期<20s才算训练成功)。
2).探查训练：
获得性训练后1.5小时和1天后进行探查训练。实验开始前将平台撤除，小鼠由原先平台象限的对侧放入水中，开始记录60s。空间记忆的检测指标为1)动物首次穿过平台所需的时间；2)动物在目标象限(即原先放置平台的象限)所花的时间；3)进入目标象限的次数。
3.7线粒体酶活性检测
1)脑组织取样
10％水合氯醛，深麻AD大鼠，断头快速剥离脑组织，取所需大脑皮层，放入洁净且预冷的2mL离心管中，称重后迅速放入液氮速冻，后统一收集并放入-80℃冰箱保存。
2)提取线粒体酶
使用索莱宝线粒体酶活性检测试剂盒，称取约0.1g大脑皮层加入1ml试剂一和10ul试剂三，冰浴研磨。4°离心，弃沉淀。上清液移至另一离心管，4°离心，弃上清液。在沉淀中加入试剂二200ul和试剂三2ul，超声波破碎，用于酶活测定。
3.8能量代谢相关mRNA检测
1)脑组织取样
10％水合氯醛，深麻AD大鼠，断头快速剥离脑组织，取所需大脑皮层，放入洁净且预冷的2mL离心管中，称重后迅速放入液氮速冻，后统一收集并放入-80℃冰箱保存。
2)mRNA表达
使用TIANGEN总RNA提取试剂盒，称取约0.1g大脑皮层加入1ml裂解液RZ后匀浆，15-30℃放置5min，记入200ul氯仿，剧烈震荡15s，室温放置3min，4℃离心，将水相转移至新管中，加入0.5倍体积无水乙醇混匀，放入吸附柱CR3 4℃离心，弃废液。加入去蛋白液，离心后弃废液，漂洗液漂洗两次，离心弃废液。加30-100ul RNase-Free ddH 2O室温放2min，4℃离心。TOYOBO逆转录试剂盒逆转录后用荧光定量PCR检测其表达。
4.试验结果
在Morris水迷宫获得性训练阶段(D1-D5)，以动物找到隐藏平台时间长短作为空间记忆的检测指标，上台潜伏期越短说明记忆能越好。实验结果如图1所示，随着训练次数的增加，各组动物上台潜伏期明显减短，说明学习记忆能力随着反复训练会出现改善。模型动物于D1至D5的学习记忆能力明显差于正常对照动物。而在给予能量代谢药(复合维生素BC)治疗后，模型动物学习记忆显著性提高，表明复合维生素B C能有效改善痴呆动物的学习记忆能力。
探查实验中，将动物由原先平台象限的对侧放入水中。记录动物在目标象限(原先放置隐藏平台的象限)所花的时间和游泳距离，以此作为空间记忆的检测指标。动物记忆能力越好，其所在目标象限时间及游泳距离将越长。实验结果如图2和图3所示，正常对照动物在目标象限-象限1(原隐藏平台象限)时间及游泳距离明显较其他组长，说明其记忆水平最好。与模型组比较，VBC治疗组动物在目标象限时间及游泳距离长于模型组，进一步证明连续2个月的VBC治疗能有效的改善痴呆动物的记忆能力。
线粒体酶活性检测实验中，实验结果如图4所示，复合维生素BC提高了大脑皮层参与三羧酸循环的关键丙酮酸脱氢酶(PDH)、α-酮戊二酸脱氢酶、线粒体异柠檬酸脱氢酶(ICDHm)和琥珀酸脱氢酶(SDH)活性,改善了线粒体代谢功能。
能量代谢相关mRNA检测结果显示模型动物大脑皮层SDHA和ATP5B基因表达均低于正常组，实验结果如图5所示，复合维生素BC和联合用药提高了SDHA和ATP5B表达，改善了线粒体代谢功能，从而改善认知功能。
5.结论
ICV-STZ造模后的大鼠在morris水迷宫实验中学习记忆能力明显降低，但在连续给予2个月复合维生素BC后，大鼠的学习记忆能力显著提高，大鼠脑内的三羧酸循环的关键酶活性提高，能量代谢相关mRNA的表达水平提高。说明该药物对治疗AD认知功能障碍有一定的疗效，有望为AD病人提供一类新型药物。
为了更清楚地描述和理解本发明，我们通过举例的方式详细描述了本发明，但显而易见的是，本技术领域中普通技术人员可以在不背离权利要求的精神和范围的前提下，对本发明做出适当的改变或修改。

Claims (10)

  1. 一种维生素组合物在制备预防、治疗或延迟阿尔茨海默病的药物方面的用途。
  2. 根据权利要求1所述的用途，其中所述维生素组合物包括维生素B族组合物或其类似物或衍生物。
  3. 根据权利要求1所述的用途，其中所述维生素组合物包括维生素C或其类似物或衍生物。
  4. 根据权利要求1所述的用途，其中所述维生素组合物包括维生素B族组合物或其类似物或衍生物和维生素C或其类似物或衍生物。
  5. 根据权利要求1或2所述的用途，其中所述维生素组合物还包括酒石酸氢胆碱。
  6. 根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于所述药物包括有效量的维生素B、C族组合物以及药学上可接受的载体。
  7. 根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于所述药物包括有效量的维生素B、C族组合物以及有效量的预防、治疗或延迟阿尔茨海默病的药物。
  8. 根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于所述药物包括有效量的维生素B、C族组合物以及其他有效量的维生素类化合物。
  9. 根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于所述药物包括有效量的维生素B、C族组合物以及其他有效量的微量元素。
  10. 根据权利要求2所述的用途，其特征在于所述药物包含如下重量配比的组份：100份维生素B1，100份维生素B2，100份维生素B3，100份维生素B5，100份维生素B6，0.1份B7，0.4份B9，0.1份维生素B12和150份维生素C。
PCT/CN2018/077107 2017-03-07 2018-02-24 维生素组合物在制备用于预防、治疗或延迟阿尔茨海默病的药物中的用途 WO2018161808A1 (zh)

Priority Applications (10)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP18763903.4A EP3593805A4 (en) 2017-03-07 2018-02-24 USE OF A VITAMIN COMPOSITION IN THE PREPARATION OF A MEDICINAL PRODUCT FOR THE PREVENTION, TREATMENT OR DELAY OF ALZHEIMER'S DISEASE
JP2019548652A JP7169285B2 (ja) 2017-03-07 2018-02-24 アルツハイマー病を予防し、治療し、又は遅延させるための薬物の調製におけるビタミン組成物の使用
BR112019018652A BR112019018652A2 (pt) 2017-03-07 2018-02-24 uso de composição de vitaminas
CA3054972A CA3054972A1 (en) 2017-03-07 2018-02-24 Use of vitamin composition in preparing drug for preventing, treating, or delaying alzheimer's disease
US16/491,560 US11464797B2 (en) 2017-03-07 2018-02-24 Use of vitamin composition in preparing drug for preventing, treating, or delaying Alzheimer's disease
AU2018229920A AU2018229920B2 (en) 2017-03-07 2018-02-24 Use of vitamin composition in preparing drug for preventing, treating, or delaying Alzheimer's disease
CN201880015481.XA CN110520135A (zh) 2017-03-07 2018-02-24 维生素组合物在制备用于预防、治疗或延迟阿尔茨海默病的药物中的用途
US17/945,684 US20230248756A1 (en) 2017-03-07 2022-09-15 Use of vitamin composition in preparing drug for preventing, treating, or delaying alzheimer's disease
JP2022172956A JP2023011769A (ja) 2017-03-07 2022-10-28 アルツハイマー病を予防し、治療し、又は遅延させるための薬物の調製におけるビタミン組成物の使用
AU2024202678A AU2024202678A1 (en) 2017-03-07 2024-04-24 Use of vitamin composition in preparing drug for preventing, treating, or delaying Alzheimer's disease

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710131111.XA CN108567792A (zh) 2017-03-07 2017-03-07 一种治疗阿尔茨海默病的复合维生素组合物
CN201710131111.X 2017-03-07

Related Child Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
US16/491,560 A-371-Of-International US11464797B2 (en) 2017-03-07 2018-02-24 Use of vitamin composition in preparing drug for preventing, treating, or delaying Alzheimer's disease
US17/945,684 Continuation US20230248756A1 (en) 2017-03-07 2022-09-15 Use of vitamin composition in preparing drug for preventing, treating, or delaying alzheimer's disease

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2018161808A1 true WO2018161808A1 (zh) 2018-09-13

Family

ID=63448062

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/CN2018/077107 WO2018161808A1 (zh) 2017-03-07 2018-02-24 维生素组合物在制备用于预防、治疗或延迟阿尔茨海默病的药物中的用途

Country Status (8)

Country Link
US (2) US11464797B2 (zh)
EP (1) EP3593805A4 (zh)
JP (2) JP7169285B2 (zh)
CN (2) CN108567792A (zh)
AU (2) AU2018229920B2 (zh)
BR (1) BR112019018652A2 (zh)
CA (1) CA3054972A1 (zh)
WO (1) WO2018161808A1 (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP7442874B2 (ja) * 2019-08-02 2024-03-05 シャンハイ、レイジング、ファーマシューティカル、カンパニー、リミテッド アルツハイマー病における標的としてのｔｐｋの使用
KR102275981B1 (ko) * 2020-03-31 2021-07-13 고려은단주식회사 섬쑥부쟁이 추출물과 비타민 b 복합체의 혼합물을 포함하는 인지기능 개선용 조성물

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102843922A (zh) * 2010-05-13 2012-12-26 尼特罗米加公司 硝基脂肪酸–认知减退的神经保护和/或抑制
CN104039318A (zh) * 2011-10-31 2014-09-10 N·V·努特里奇亚 改善认知
CN104922164A (zh) * 2014-12-12 2015-09-23 中国医科大学 一种治疗阿尔茨海默病的药物复合制剂

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5626884A (en) 1995-08-18 1997-05-06 Lockett; Curtis G. Treatment of sickle cell disease
WO1999064022A1 (en) 1998-06-10 1999-12-16 Crum Albert B Prophylactic and therapeutic nutritional supplement for creation/maintenance of health-protective intestinal microflora and enhancement of the immune system
AU2003218319A1 (en) 2002-03-22 2003-10-13 Doc's Guide, Inc. Multivitamin and mineral nutritional supplement
US20080213395A1 (en) 2004-10-14 2008-09-04 Adventures Plus Pty Ltd Method for the Treatment of Gastrointestinal and Other Disorders with an Admixture of Vitamins
US20060148727A1 (en) 2004-12-01 2006-07-06 Curt Hendrix Folate based composition for neurological and cognitive applications
US20110275591A1 (en) * 2004-12-01 2011-11-10 Concourse Health Sciences Llc Cocktail for modulation of alzheimer's disease
EP2689782B1 (en) 2007-06-26 2020-05-13 N.V. Nutricia Improving memory in subjects with mini-mental state examination of 24-26
JP4206428B1 (ja) 2008-06-09 2009-01-14 正樹 今川 認知症を処置するための組成物及びその利用
KR20110004691A (ko) * 2009-07-08 2011-01-14 대한민국(농촌진흥청장) 뇌기능 개선효과를 가지는 붉나무 추출물을 포함하는 약학조성물 및 건강식품조성물
WO2011121150A1 (es) * 2010-03-31 2011-10-06 Vegenat, S.A. Producto alimenticio enteral u oral especialmente destinado para la nutrición, prevención y mejora de alteraciones neurológicas, neurodegenerativas o trastornos cognitivos
CN103327986B (zh) 2010-07-22 2018-05-25 雷文制药有限公司 包含使用磁偶极子稳定化溶液的治疗或改善疾病并增强表现的方法
KR20130015932A (ko) 2011-08-05 2013-02-14 연세대학교 산학협력단 저용량의 치아졸리딘다이온을 포함하는 알츠하이머 병 치료용 약학조성물
WO2013129931A1 (en) * 2012-03-02 2013-09-06 N.V. Nutricia Method for improving functional synaptic connectivity
EP2882304A1 (en) 2012-08-07 2015-06-17 Buck Institute For Research On Aging Multi-component formulation for improving neurological function
US10894062B2 (en) * 2012-08-10 2021-01-19 Aquavit Pharmaceuticals, Inc. Vitamin supplement compositions for injection
CN110840895A (zh) 2013-07-23 2020-02-28 上海泽生科技开发股份有限公司 使用维生素b组合物促进胃肠系统动力的方法
CN104256652A (zh) 2014-10-08 2015-01-07 李明刚 一种口服复合维生素纳米脂质体
CN111803514A (zh) 2015-06-12 2020-10-23 上海泽生科技开发股份有限公司 使用复合维生素b、c组合物促进胃肠系统动力的方法
CN104856048A (zh) 2015-06-18 2015-08-26 安徽医联大成医药科技有限公司 一种促进肠胃蠕动的食品配方及其制备方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102843922A (zh) * 2010-05-13 2012-12-26 尼特罗米加公司 硝基脂肪酸–认知减退的神经保护和/或抑制
CN104039318A (zh) * 2011-10-31 2014-09-10 N·V·努特里奇亚 改善认知
CN104922164A (zh) * 2014-12-12 2015-09-23 中国医科大学 一种治疗阿尔茨海默病的药物复合制剂

Also Published As

Publication number Publication date
US20200030358A1 (en) 2020-01-30
BR112019018652A2 (pt) 2020-04-07
EP3593805A4 (en) 2020-10-07
CN108567792A (zh) 2018-09-25
AU2024202678A1 (en) 2024-05-16
US20230248756A1 (en) 2023-08-10
CN110520135A (zh) 2019-11-29
AU2018229920B2 (en) 2024-02-08
US11464797B2 (en) 2022-10-11
JP2020509072A (ja) 2020-03-26
EP3593805A1 (en) 2020-01-15
JP2023011769A (ja) 2023-01-24
CA3054972A1 (en) 2018-09-13
JP7169285B2 (ja) 2022-11-10
AU2018229920A1 (en) 2019-10-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20230248756A1 (en) Use of vitamin composition in preparing drug for preventing, treating, or delaying alzheimer&#39;s disease
AU2015309351B2 (en) Composition and medicinal product for reducing body weight and body fat, and use of said product
Deng et al. Metformin Alleviates Autistic‐Like Behaviors Elicited by High‐Fat Diet Consumption and Modulates the Crosstalk Between Serotonin and Gut Microbiota in Mice
Westmark et al. Preclinical testing of the ketogenic diet in fragile X mice
Bottiglieri et al. S-adenosylmethionine
Zhao et al. A randomized, double-blind, controlled trial of add-on therapy in moderate-to-severe Parkinson's disease
CN103040905B (zh) 雪灵芝或其提取物在制备抗衰老的药物或保健食品中的用途
Belayev et al. LAU-0901, a novel platelet-activating factor receptor antagonist, confers enduring neuroprotection in experimental focal cerebral ischemia in the rat
CN1695604A (zh) 防治神经退行疾病、注意力缺陷多动症和抑郁症的药物
CN114432309A (zh) 一种提高烟酰胺磷酸核糖转移酶活性的方法及其组合物
CN114072154A (zh) 用于治疗精神障碍的加波沙朵和锂的组合物
Joshi et al. Impact of increasing one-carbon metabolites on traumatic brain injury outcome using pre-clinical models
CN105982893B (zh) 一种抗抑郁的组合物及其应用
EP4082537A1 (en) Anti-obesity composition containing colchicine and metformin as effective agents
CN110193019B (zh) 具有抗抑郁与抗老年痴呆症功效的组合物及其应用
Carlton 19 Amino Acids and Other
CN108245499B (zh) 大麻二酚与双链脂肪酸类抗癫痫药物的组合物及其用途
CN116265019A (zh) 一种预防和改善老年痴呆症的组合物
Li et al. Dietary nutrients that potentially mitigate autism spectrum disorder and dietary recommendations for children and pregnant women
Diksha et al. Interaction of antipsychotics drugs and caffeine
Chen et al. Anti-aging effects of medicinal plants and their rapid screening using the nematode Caenorhabditis elegans
Viyas et al. Role of Hippophae rhamnoides L. in the Management of Depression by Regulating Hyperhomocysteinemia
WO2022155349A1 (en) Treatment of pathological fatigue with oxaloacetate
KR20240073798A (ko) 란소프라졸, 란소프라졸 n-옥사이드, 란소프라졸 n-옥사이드 대사체, 또는 란소프라졸 n-옥사이드 전구물질을 포함하는 신경계 질환 예방 또는 치료용 조성물
KR20230065583A (ko) 하이칸톤을 포함하는 우울장애 또는 신경염증질환의 예방 또는 치료용 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 18763903

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 3054972

Country of ref document: CA

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2019548652

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

REG Reference to national code

Ref country code: BR

Ref legal event code: B01A

Ref document number: 112019018652

Country of ref document: BR

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2018229920

Country of ref document: AU

Date of ref document: 20180224

Kind code of ref document: A

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2018763903

Country of ref document: EP

Effective date: 20191007

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 112019018652

Country of ref document: BR

Kind code of ref document: A2

Effective date: 20190909