WO2018079674A1 - 脂質異常症治療が必要な被検者の選別方法及び選別用試薬 - Google Patents

脂質異常症治療が必要な被検者の選別方法及び選別用試薬 Download PDF

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WO2018079674A1
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antibody
hdl
oxidized
reagent
dyslipidemia
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静也 山下
透 大▲浜▼
健志 岡田
瑞季 三浦
有基 片山
典彦 栢原
Original Assignee
国立大学法人大阪大学
協和メデックス株式会社
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    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/095—Sulfur, selenium, or tellurium compounds, e.g. thiols
    • A61K31/10—Sulfides; Sulfoxides; Sulfones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics

Definitions

  • the present invention relates to a screening method for a subject who needs to treat dyslipidemia and a screening reagent.
  • Dyslipidemia is a disease in which serum lipid levels show abnormal values. Depending on the type of lipid that shows abnormal values, “high low density lipoprotein cholesterolemia” (high LDL cholesterolemia), “low high density lipoprotein cholesterol” Are classified into “blood pressure (low HDL cholesterolemia)” and “hypertriglyceridemia”. Recently, changes in the function of high-density lipoprotein (hereinafter referred to as HDL) have been reported as a pathology of dyslipidemia, and HDL in familial CETP (cholesterol ester transfer protein) deficient patients with hyperHDL cholesterolemia Functional abnormality has been reported (see Non-Patent Document 1).
  • HDL high-density lipoprotein
  • HDL is a lipoprotein having a specific gravity of 1.063 to 1.21, and is a lipoprotein having a function of removing excess cholesterol accumulated in peripheral tissues by a reverse cholesterol transfer system and transporting it to the liver.
  • HDL-C cholesterol in HDL
  • HDL-C concentration It was simply thought that high was desirable for the body.
  • Non-patent Document 2 Non-patent Document 2
  • Statins, probucols, etc. are used in clinical settings as therapeutic agents for dyslipidemia.
  • Statins are known to have a slight increase in HDL-C levels and have been reported to have a positive effect on HDL function.
  • dyslipidemia does not improve despite administration of statins.
  • Probucol a cholesterol catabolism promoter, has a strong antioxidant effect and LDL cholesterol lowering effect.
  • Non-Patent Document 4 An immunoassay for lipoproteins has been reported (see Patent Document 1).
  • An object of the present invention is to provide a method and a reagent for efficiently selecting a subject who needs treatment for dyslipidemia.
  • the present inventors have found that a subject who needs treatment for dyslipidemia can be efficiently selected by measuring oxidized HDL in a sample collected from the subject, and completed the present invention.
  • the present invention relates to the following [1] to [17].
  • [1] A method for selecting a subject in need of treatment for dyslipidemia, wherein the concentration of oxidized HDL in a sample collected from the subject is measured.
  • the method according to [1], comprising the following steps (1) to (3): (1) collecting a sample from a subject; (2) a step of measuring the concentration of oxidized HDL in the sample collected in step (1); (3) If the concentration of oxidized HDL measured in step (2) is higher than the oxidized HDL concentration in a healthy person, the subject determines that treatment for dyslipidemia is necessary, and the oxidized HDL in the healthy person If the concentration is lower, the subject determines that treatment for dyslipidemia is not necessary
  • [3] The method according to [1] or [2], wherein the concentration of oxidized HDL is measured by an immunological measurement method.
  • [4] The method according to [3], wherein the immunological assay is performed using an antibody that binds to oxidized phosphatidylcholine or an antibody that binds to phosphocholine and an antibody that binds to high-density lipoprotein. .
  • [5] The method according to [4], wherein the antibody that binds to the high-density lipoprotein is an antibody that binds to the apo A protein.
  • [6] The method according to any one of [1] to [5], wherein the treatment for dyslipidemia is treatment with a therapeutic agent for dyslipidemia.
  • a reagent for screening a subject who needs treatment for dyslipidemia comprising an oxidized HDL measuring reagent.
  • the immunological measurement reagent comprises an antibody that binds to oxidized phosphatidylcholine or an antibody that binds to phosphocholine and an antibody that binds to high-density lipoprotein.
  • the antibody that binds to the high-density lipoprotein is an antibody that binds to the apo A protein.
  • the dyslipidemic agent is a cholesterol catabolism promoter.
  • the reagent according to any one of [10] to [16], wherein the oxidized HDL measurement reagent is a reagent for measuring oxidized HDL in blood.
  • the present invention provides a method and a reagent for efficiently selecting a subject who needs treatment for dyslipidemia.
  • “Probucol ( ⁇ )” on the horizontal axis represents a non-probucol group, and “probucol (+)” represents a probucol group.
  • the vertical axis represents oxidized HDL concentration (unit: U / L).
  • the box portion represents the range from the first quartile to the third quartile, the thick line of the box portion represents the median value, the upper side of the whisker portion is the top tenth percentile, the lower side of the beard portion is Represents the lower 10th percentile. It is a dot plot showing the ratio with respect to the phospholipid (HDL-PL) density
  • HDL-PL phospholipid
  • “Probucol ( ⁇ )” on the horizontal axis represents a non-probucol group, and “probucol (+)” represents a probucol group.
  • the vertical axis represents the ratio of oxidized HDL concentration to phospholipid (HDL-PL) concentration in HDL (unit: U ⁇ dL / mg ⁇ L). It is a box-and-whisker plot showing the ratio of the oxidized HDL concentration to the phospholipid (HDL-PL) concentration in HDL in a group that took probucol and a group that did not take probucol.
  • “Probucol ( ⁇ )” on the horizontal axis represents a non-probucol group, and “probucol (+)” represents a probucol group.
  • the vertical axis represents the ratio of oxidized HDL concentration to phospholipid (HDL-PL) concentration in HDL (unit: U ⁇ dL / mg ⁇ L).
  • the box portion represents the range from the first quartile to the third quartile, the thick line of the box portion represents the median value, the upper side of the whisker portion is the top tenth percentile, the lower side of the beard portion is Represents the lower 10th percentile.
  • the method for screening a subject in need of treatment for dyslipidemia is to measure the concentration of oxidized HDL in a sample collected from the subject. It is a characteristic method.
  • the sample collected from the subject is not particularly limited as long as it is a sample capable of measuring oxidized HDL, and examples thereof include blood. Examples of blood include whole blood, serum, and plasma.
  • oxidized HDL refers to HDL that has an apo A protein, which is an apoprotein that constitutes HDL, and exhibits dysfunction due to oxidation of a lipid moiety that constitutes HDL.
  • measurement of oxidized HDL in a sample collected from a subject includes not only measurement of oxidized HDL concentration in the sample but also measurement of the ratio of oxidized HDL concentration to total HDL concentration in the sample. To do. Total HDL concentration is determined by measuring HDL-specific substances such as apo A protein concentration in HDL, phospholipid (HDL-PL) concentration in HDL, phosphatidylcholine (HDL-PC) concentration in HDL, etc. be able to.
  • HDL-PL phospholipid
  • HDL-PC phosphatidylcholine
  • a method for selecting a subject who needs treatment for dyslipidemia can be performed by a method including the following steps. (1) collecting a sample from a subject; (2) a step of measuring oxidized HDL in the sample collected in step (1) and obtaining a measured value; (3) using a known concentration of oxidized HDL as a sample, obtaining a measured value by the same method as in step (2), and creating a calibration curve indicating the relationship between the oxidized HDL concentration and the measured value; (4) Determine the oxidized HDL concentration in the sample from the measured value obtained in step (2) and the calibration curve indicating the relationship between the oxidized HDL concentration and measured value created in step (3).
  • step (5) If the concentration of oxidized HDL determined in step (4) is greater than or equal to the oxidized HDL concentration in healthy subjects, the subject is required to treat dyslipidemia. Yes, when compared to the criteria that the subject does not require treatment for dyslipidemia if it is below the level of oxidized HDL in healthy individuals; (6) As a result of the comparison in step (5), if the concentration of oxidized HDL in the sample determined in step (4) is equal to or higher than the oxidized HDL concentration in healthy individuals, the subject is dyslipidemic A step of determining that treatment is necessary and determining that the subject does not require treatment for dyslipidemia when the concentration is lower than the oxidized HDL concentration in a healthy person.
  • Examples of the sample collected from the subject in the step (1) include the above-described samples.
  • step (2) any method can be used to measure oxidized HDL in the sample collected in step (1) as long as it can measure oxidized HDL in the sample collected in step (1).
  • it can be performed using a method such as an immunoassay.
  • the immunoassay examples include any known immunoassay, such as radioimmunoassay (RIA), enzyme immunoassay (ELISA), fluorescent immunoassay (FIA), indirect fluorescent antibody method (Indirect Fluorescence assay), Luminescent immunoassay, physicochemical assay [turbidimetric immunoassay (TIA), latex agglutination (LAPIA), microparticle counting immunoagglutination (PCIA)], Western blotting
  • RIA radioimmunoassay
  • ELISA enzyme immunoassay
  • FFA fluorescent immunoassay
  • FIA indirect fluorescent antibody method
  • Luminescent immunoassay physicochemical assay [turbidimetric immunoassay (TIA), latex agglutination (LAPIA), microparticle counting immunoagglutination (PCIA)], Western blotting
  • ELISA method is preferable.
  • a sandwich method, a competitive method, or the like can be used, and a homogenis
  • a specific embodiment of a method for measuring oxidized HDL in the specimen collected in step (1) using an immunoassay is shown below.
  • ⁇ Measurement method 1 A method for measuring oxidized HDL in a specimen collected in step (1), comprising the following steps. (I) reacting the specimen collected in step (1) with a first antibody that binds to oxidized lipoprotein to produce an immune complex of the first antibody and oxidized lipoprotein; (II) reacting the immune complex produced in step (I) with a labeled second antibody in which a label is bound to a second antibody that binds to HDL, to thereby react the first antibody, oxidized lipoprotein and labeled second antibody. Generating an immune complex of the antibody; (III) A step of measuring the amount of label in the immune complex produced in step (II).
  • the antibody either a polyclonal antibody or a monoclonal antibody can be used, but a monoclonal antibody is preferred.
  • the antibodies (first antibody and second antibody) include Fabs obtained by papain treatment of antibodies, F (ab ′) 2 obtained by pepsin treatment, and Fc portions such as Fab ′ obtained by pepsin treatment-reduction treatment. An antibody fragment from which is removed can also be used.
  • Examples of the first antibody that binds to oxidized lipoprotein include an antibody that binds to oxidized phosphatidylcholine, an antibody that binds to phosphocholine, and the like.
  • Examples of antibodies that bind to oxidized phosphatidylcholine include monoclonal antibodies (hereinafter referred to as DLH3 antibodies) produced by the mouse-mouse hybridoma cell line FOH1a / DLH3 (FERM BP-7171).
  • DLH3 antibodies monoclonal antibodies
  • FOH1a / DLH3 DLH3
  • hybridoma KTM-285 hybridoma KTM-285
  • Examples include monoclonal antibody KTM-285, recombinant antibody KTM-2001 produced by transformed cell KTM-2001 (FERM BP-7549), and the like.
  • Examples of the second antibody that binds to HDL include an antibody that binds to the Apo A protein.
  • Examples of the antibody that binds to the Apo A protein include an antibody that binds to the Apo AI protein and an antibody that binds to the Apo AII protein.
  • the reaction temperature in step (I) and step (II) is not particularly limited as long as it is a reaction temperature that enables measurement of oxidized HDL. For example, 0 to 50 ° C. is mentioned, and 4 to 40 ° C. is preferable.
  • the reaction time in step (I) and step (II) is not particularly limited as long as it is a reaction time allowing measurement of oxidized HDL, and is, for example, 1 minute to 72 hours, preferably 5 minutes to 20 hours.
  • Steps (I) to (III) can also be performed in an aqueous medium.
  • the aqueous medium is not particularly limited as long as it is an aqueous medium that enables measurement of oxidized HDL. Examples thereof include deionized water, distilled water, and a buffer solution, and a buffer solution is preferable.
  • the pH of the aqueous medium is, for example, 4 to 10, and when a buffer solution is used as the aqueous medium, it is desirable to use a buffering agent suitable for the set pH.
  • the buffer used for preparing the buffer solution is not particularly limited as long as it has a buffering capacity.
  • a lactate buffer for example, a lactate buffer, a citrate buffer, an acetate buffer, a succinate buffer, a phthalate buffer, a phosphorus Acid buffer, triethanolamine buffer, diethanolamine buffer, lysine buffer, barbitur buffer, imidazole buffer, malate buffer, oxalate buffer, glycine buffer, borate buffer, carbonate buffer, A glycine buffer, a Tris buffer, a Good buffer, etc. are mentioned.
  • good buffer examples include 2-morpholinoethanesulfonic acid (MES) buffer, bis (2-hydroxyethyl) iminotris (hydroxymethyl) methane (Bis-Tris) buffer, and tris (hydroxymethyl) aminomethane (Tris).
  • MES 2-morpholinoethanesulfonic acid
  • Bis-Tris bis (2-hydroxyethyl) iminotris (hydroxymethyl) methane
  • Tris tris (hydroxymethyl) aminomethane
  • Buffer N- (2-acetamido) iminodiacetic acid (ADA) buffer, piperazine-N, N′-bis (2-ethanesulfonic acid) (PIPES) buffer, 2- [N- (2-acetamido) Amino] ethanesulfonic acid (ACES) buffer, 3-morpholino-2-hydroxypropanesulfonic acid (MOPSO) buffer, 2- [N, N-bis (2-hydroxyethyl) amino] ethanesulfonic acid (BES) buffer Agent, 3-morpholinopropanesulfonic acid (MOPS) buffer, 2- ⁇ N- [tris (hydroxy Til) methyl] amino ⁇ ethanesulfonic acid (TES) buffer, N- (2-hydroxyethyl) -N ′-(2-sulfoethyl) piperazine (HEPES) buffer, 3- [N, N-bis (2- Hydroxyethyl) amino] -2-hydroxypropanesulfonic acid (DIPS
  • the concentration of the buffer solution is not particularly limited as long as it is suitable for measurement, but is preferably 0.001 to 2.0 mol / L, more preferably 0.005 to 1.0 mol / L, and particularly preferably 0.01 to 0.1 mol / L.
  • Process (I) and process (II) can also be performed simultaneously.
  • a cleaning step may or may not be provided between step (I) and step (II), it is preferable to provide a cleaning step.
  • a cleaning step may or may not be provided between step (II) and step (III), but it is preferable to provide a cleaning step.
  • the first antibody may or may not be immobilized on an insoluble carrier, but is preferably immobilized.
  • the insoluble carrier after the step (I) is washed so that the first antibody produced in the step (I) and the immune complex of the component to be measured are unreacted. It can be separated from the components (component derived from the specimen, excess first antibody, etc.).
  • the first antibody, oxidized HDL and labeled second antibody produced in step (II) are washed by washing the insoluble carrier after step (II).
  • the immune complex can be separated from unreacted components (such as excess labeled second antibody).
  • the washing solution includes phosphate buffered saline [10 mmol / L phosphate buffer containing 0.15 mol / L sodium chloride, pH 7.2 (hereinafter referred to as PBS)], PBS containing a surfactant, Examples of the aqueous medium are as follows.
  • the surfactant include nonionic surfactants such as Tween 20.
  • the insoluble carrier is not particularly limited as long as it is an insoluble carrier capable of measuring oxidized HDL.
  • Preferred materials for the insoluble carrier include polystyrene, polycarbonate, polyvinyl toluene, polypropylene, polyethylene, polyvinyl chloride, nylon, polymethacrylate, gelatin, agarose, cellulose, nitrocellulose, cellulose acetate, cellulose acetate, polyethylene terephthalate, and other polymer materials, Examples thereof include glass, ceramics, magnetic particles and metals.
  • Preferable shapes of the insoluble carrier include tubes, beads, plates, fine particles such as latex, sticks, and the like, and a 96-well / sheet polystyrene microtiter plate is preferable.
  • the first antibody may be directly immobilized on an insoluble carrier or indirectly immobilized on an insoluble carrier.
  • an indirect immobilization method for example, a solution of a biotinylated first antibody is added to an insoluble carrier on which avidin is immobilized, and the first antibody is made into an insoluble carrier via specific binding between biotin and avidin.
  • the immobilization method examples include a method in which a solution of the first antibody is added to an insoluble carrier on which Fc is immobilized, and the first antibody is immobilized on the insoluble carrier by the interaction between Fc and the first antibody. Furthermore, the first antibody may be immobilized on an insoluble carrier by a covalent bond via a linker.
  • the linker include a molecule that can be covalently bonded to both the functional group of the first antibody and the functional group held on the surface of the insoluble carrier, and the like, which can react with the functional group of the first antibody.
  • a molecule having one reactive group and the second reactive group capable of reacting with the functional group held on the surface of the insoluble carrier in the same molecule is preferable.
  • the first reactive activity Molecules in which the group and the second reactive group are different are particularly preferred.
  • the functional group of the first antibody and the functional group held on the surface of the insoluble carrier include carboxyl group, amino group, glycidyl group, sulfhydryl group, hydroxyl group, amide group, imino group, and N-hydroxysuccinimide (NHS) group. And a maleimide group.
  • Examples of the reactive group in the linker include aryl azide, carbodiimide, hydrazide, aldehyde, hydroxymethylphosphine, imide ester, isocyanate, isothiocyanate, maleimide, N-hydroxysuccinimide (NHS) ester, pentafluorophenyl (PFP) ester, psoralen,
  • Examples include groups such as pyridyl disulfide and vinyl sulfone.
  • ⁇ Measurement method 2 (I) reacting the specimen collected in step (1) with a first antibody that binds to HDL to produce an immune complex of the first antibody and HDL; (II) reacting the immune complex produced in step (I) with a labeled second antibody in which a label is bound to a second antibody that binds to oxidized lipoprotein, to thereby react the first antibody, oxidized lipoprotein and labeled Generating an immune complex of a second antibody; (III) A step of measuring the amount of label in the immune complex produced in step (II).
  • the antibody either a polyclonal antibody or a monoclonal antibody can be used, but a monoclonal antibody is preferred.
  • the antibodies (first antibody and second antibody) include Fabs obtained by papain treatment of antibodies, F (ab ′) 2 obtained by pepsin treatment, and Fc portions such as Fab ′ obtained by pepsin treatment-reduction treatment. An antibody fragment from which is removed can also be used.
  • Examples of the first antibody that binds to HDL include an antibody that binds to the Apo A protein.
  • Examples of the antibody that binds to the Apo A protein include an antibody that binds to the Apo AI protein and an antibody that binds to the Apo AII protein.
  • Examples of the second antibody that binds to oxidized lipoprotein include an antibody that binds to oxidized phosphatidylcholine, an antibody that binds to phosphocholine, and the like.
  • Examples of antibodies that bind to oxidized phosphatidylcholine include monoclonal antibodies produced by the mouse-mouse hybridoma cell line FOH1a / DLH3 (FERM BP-7171).
  • Hybridoma KTM-285 (FERM BP-7589) is produced. And monoclonal antibody KTM-285, recombinant antibody KTM-2001 produced by transformed cell KTM-2001 (FERM BP-7549), and the like.
  • the reaction temperature in step (I) and step (II) is not particularly limited as long as it is a reaction temperature that enables measurement of oxidized HDL.
  • a reaction temperature a reaction temperature that enables measurement of oxidized HDL.
  • the reaction time in step (I) and step (II) is not particularly limited as long as it is a reaction time allowing measurement of oxidized HDL, and is, for example, 1 minute to 72 hours, preferably 5 minutes to 20 hours.
  • Steps (I) to (III) can also be performed in an aqueous medium.
  • the aqueous medium is not particularly limited as long as it is an aqueous medium that enables measurement of oxidized HDL, and examples thereof include the aforementioned aqueous medium.
  • Process (I) and process (II) can also be performed simultaneously.
  • a cleaning step may or may not be provided between step (I) and step (II), it is preferable to provide a cleaning step.
  • a cleaning step may or may not be provided between step (II) and step (III), but it is preferable to provide a cleaning step.
  • the first antibody may or may not be immobilized on an insoluble carrier, but is preferably immobilized. When the first antibody is immobilized on an insoluble carrier, the insoluble carrier after the step (I) is washed, so that the immune complex of the first antibody produced in the step (I) and the component to be measured is unreacted. It can be separated from the components (component derived from the specimen, excess first antibody, etc.).
  • the first antibody when the first antibody is immobilized on an insoluble carrier, the first antibody, oxidized HDL and labeled second antibody produced in step (II) are washed by washing the insoluble carrier after step (II).
  • the immune complex can be separated from unreacted components (such as excess labeled second antibody).
  • the washing solution includes phosphate buffered saline [10 mmol / L phosphate buffer containing 0.15 mol / L sodium chloride, pH 7.2 (hereinafter referred to as PBS)], PBS containing a surfactant, Examples of the aqueous medium are as follows.
  • the surfactant include nonionic surfactants such as Tween 20.
  • the insoluble carrier is not particularly limited as long as it is an insoluble carrier capable of measuring oxidized HDL.
  • examples of preferable materials for the insoluble carrier include the materials described above.
  • Examples of the method for immobilizing the first antibody on the insoluble carrier include the aforementioned immobilization method.
  • Examples of the labeling substance for labeling the second antibody in the measuring method 1 and the measuring method 2 include enzymes, fluorescent substances, luminescent substances, radioisotopes, biotin, digoxigenin, polypeptides containing tag sequences, metal colloid particles, colored latex particles Etc.
  • Examples of the enzyme include alkaline phosphatase, peroxidase, galactosidase, glucuronidase, luciferase and the like.
  • Examples of the fluorescent substance include FITC (fluorescein isothiocyanate), RITC (rhodamine B-isothiocyanate), and the like.
  • fluorescent substances include, for example, quantumdot (Science, 281, 2016-2018, 1998), phycobiliproteins such as phycoerythrin, GFP (Green fluorescent Protein), RFP (Red fluorescent Protein), YFP (Yellow fluorescent Protein), BFP Examples thereof include fluorescent proteins such as (Blue fluorescent Protein).
  • the light-emitting substance include acridinium and its derivatives, ruthenium complex compounds, and lophine. Further, as the ruthenium complex compound, those shown in Clin. Chem. 37, 9, 1534-1539, 1991, which emits light electrochemically together with an electron donor, are preferable.
  • the radioisotope include 3 H, 14 C, 35 S, 32 P, 125 I, and 131 I.
  • Polypeptides containing tag sequences include FLAG peptide (FLAG tag, Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys), polyhistidine (His tag, His His His His His), myc epitope peptide (myc tag, Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu), hemagglutinin epitope peptide (HA tag, Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala) and the like.
  • the labeling of the second antibody can be performed by a reaction that causes a covalent bond between the functional group of the second antibody and the functional group of the labeling substance through or without a linker.
  • the functional group include a carboxyl group, an amino group, a glycidyl group, a sulfhydryl group, a hydroxyl group, an amide group, an imino group, an N-hydroxysuccinimide (NHS) ester group, a maleimide group, an isocyanate group, and an isothiocyanate group. It is possible to cause a condensation reaction between these functional groups.
  • Examples of the bonding method without using a linker include a method using a carbodiimide compound such as EDC. In this case, it is also possible to use an active ester such as NHS or a derivative thereof. Further, the condensation reaction between the isothiocyanate group and the amino group is preferable because it does not require any other reagent and proceeds only by mixing under neutral to weakly alkaline conditions.
  • Examples of the linker include those having in the molecule both a reactive group capable of reacting with the functional group of the second antibody and a reactive group capable of reacting with the functional group of the labeling substance.
  • a molecule having a first reactive group capable of reacting with an amino acid residue of a second antibody and a second reactive group capable of reacting with a functional group of a labeling substance in the same molecule is particularly preferable.
  • the reactive group in the linker include the aforementioned reactive group.
  • Examples of the method for chemically binding the radioisotope to the second antibody include the method described in the literature (Antibody Immunoconj. Radiopharm., 3, 60, 1990).
  • the labeling substance is a polypeptide such as an enzyme, avidin, a fluorescent protein, a phycobiliprotein, or a polypeptide containing a tag sequence
  • a known genetic recombination technique Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd Edition, Cold Spring) According to Harbor Laboratory Press, 2001
  • an expression vector containing a DNA encoding a fusion protein of a labeling substance and an antibody is prepared, the expression vector is introduced into a suitable host, and the host is cultured.
  • DNA encoding the fusion protein can be obtained by cloning the DNA encoding the antibody and the labeling substance by PCR or the like, and ligating each DNA by ligase reaction.
  • the labeling substance is a coloring substance, that is, a substance that absorbs light of a certain wavelength
  • a spectrophotometer, a multiwell plate reader, or the like can be used.
  • the labeling substance is a fluorescent substance, a fluorometer, a fluorescent multiwell plate reader, or the like can be used.
  • the labeling substance is a luminescent substance, a luminescence photometer, a luminescent multiwell plate reader, or the like can be used.
  • the labeling substance is a radioisotope
  • the amount of radioisotope can be measured with a scintillation counter, a ⁇ -well counter or the like for the radioactivity.
  • measuring the amount of label means measuring the enzyme activity.
  • the amount of labeling can be measured by reacting an enzyme substrate with the enzyme and measuring the produced substance.
  • the enzyme is a peroxidase
  • the peroxidase activity can be measured by, for example, an absorbance method, a fluorescence method, a luminescence method, or the like.
  • a method for measuring peroxidase activity by an absorbance method for example, a reaction of peroxidase with a combination of hydrogen peroxide and an oxidative coloring chromogen as its substrate is performed, and the absorbance of the reaction solution is measured using a spectrophotometer, a multiwell plate reader, etc. The method etc. which measure by are mentioned.
  • the oxidative coloring chromogen include a leuco chromogen and an oxidative coupling coloring chromogen.
  • the leuco chromogen is a substance that is converted into a pigment by itself in the presence of a peroxide active substance such as hydrogen peroxide and peroxidase.
  • a peroxide active substance such as hydrogen peroxide and peroxidase.
  • CCAP tetramethylbenzidine
  • o-phenylenediamine 10-N-carboxymethylcarbamoyl-3,7-bis (dimethylamino) -10H-phenothiazine
  • CCAP 10-N-methylcarbamoyl-3,7- Bis (dimethylamino) -10H-phenothiazine
  • MCDP 10-N-methylcarbamoyl-3,7- Bis (dimethylamino) -10H-phenothiazine
  • DA-64 4,4′-bis (dimethylamino) )
  • Diphenylamine bis [3-bis (4-chlorophenyl) methyl-4-dimethylaminopheny
  • the oxidative coupling chromogen is a substance that forms a dye by oxidative coupling of two compounds in the presence of a peroxide active substance such as hydrogen peroxide and peroxidase.
  • a peroxide active substance such as hydrogen peroxide and peroxidase.
  • the combination of the two compounds include a combination of a coupler and an aniline (Trinder reagent), a combination of a coupler and a phenol.
  • the coupler include 4-aminoantipyrine (4-AA) and 3-methyl-2-benzothiazolinone hydrazine.
  • anilines include N- (3-sulfopropyl) aniline, N-ethyl-N- (2-hydroxy-3-sulfopropyl) -3-methylaniline (TOOS), N-ethyl-N- (2-hydroxy -3-Sulfopropyl) -3,5-dimethylaniline (MAOS), N-ethyl-N- (2-hydroxy-3-sulfopropyl) -3,5-dimethoxyaniline (DAOS), N-ethyl-N- (3-sulfopropyl) -3-methylaniline (TOPS), N- (2-hydroxy-3-sulfopropyl) -3,5-dimethoxyaniline (HDAOS), N, N-dimethyl-3-methylaniline, N , N-di (3-sulfopropyl) -3,5-dimethoxyaniline, N-ethyl-N- (3-sulfopropyl) -3-methoxyaniline (
  • a fluorescence method for example, reacting peroxidase with a combination of its substrate hydrogen peroxide and a fluorescent substance, and measuring the intensity of fluorescence generated by a fluorometer, a fluorescent multiwell plate reader, etc. And the like.
  • the fluorescent substance include 4-hydroxyphenylacetic acid, 3- (4-hydroxyphenyl) propionic acid, and coumarin.
  • the luminescent substance include a luminol compound and a lucigenin compound.
  • alkaline phosphatase activity can be measured by, for example, a luminescence method.
  • a luminescence method examples include a method in which alkaline phosphatase and its substrate are reacted and the luminescence intensity of the produced luminescence is measured with a luminescence intensity meter, a luminescence multiwell plate reader, or the like.
  • alkaline phosphatase substrates examples include 3- (2′-spiroadamantane) -4-methoxy-4- (3′-phosphoryloxy) phenyl-1,2-dioxetane disodium salt (AMPPD), 2-chloro- 5- ⁇ 4-methoxyspiro [1,2-dioxetane-3,2 ′-(5′-chloro) tricyclo [3.3.1.1 3.7 ] decane] -4-yl ⁇ phenyl phosphate disodium salt ( CDP-Star TM ), 3- ⁇ 4-methoxyspiro [1,2-dioxetane-3,2 ′-(5′-chloro) tricyclo [3.3.1.1 3.7 ] decane] -4′-yl ⁇ Phenylphosphate disodium salt (CSPD TM ), 9-[(phenyloxy) (phosphoryloxy) methylidene] -10-methylacridan disodium, 9-[(4
  • ⁇ -D-galactosidase activity can be measured by, for example, an absorbance method (colorimetric method), a luminescence method, or a fluorescence method.
  • an absorbance method colorimetric method
  • a luminescence method luminescence method
  • a fluorescence method a method of measuring ⁇ -D-galactosidase activity by the absorbance method (colorimetric method)
  • ⁇ -D-galactosidase and its substrate are reacted, and the absorbance of the reaction solution is measured with a spectrophotometer, a multiwell plate reader or the like. And the like.
  • Examples of the substrate for ⁇ -D-galactosidase in the method for measuring ⁇ -D-galactosidase activity by an absorbance method include o-nitrophenyl- ⁇ -D-galactopyranoside.
  • a method for measuring ⁇ -D-galactosidase activity by a luminescence method for example, a method in which ⁇ -D-galactosidase and its substrate are reacted and the luminescence intensity of the reaction solution is measured with a luminescence intensity meter, a luminescence multiwell plate reader or the like Etc.
  • Examples of the substrate for ⁇ -D-galactosidase in the method for measuring ⁇ -D-galactosidase activity by the luminescence method include galacton-plus (Galacton-Plus, manufactured by Applied Biosystems) or an analogous compound thereof. Can be mentioned.
  • a method of measuring ⁇ -D-galactosidase activity by a fluorescence method for example, a method of reacting ⁇ -D-galactosidase and its substrate and measuring the fluorescence of the reaction solution with a fluorometer, a fluorescent multiwell plate reader or the like Etc.
  • Examples of the substrate for ⁇ -D-galactosidase in the method for measuring ⁇ -D-galactosidase activity by a fluorescence method include 4-methylumbelliferyl- ⁇ -D-galactopyranoside.
  • the luciferase activity can be measured by, for example, a luminescence method.
  • the method for measuring luciferase activity by the luminescence method include a method of reacting luciferase with its substrate and measuring the luminescence intensity of the reaction solution with a luminescence intensity meter, a luminescence multiwell plate reader, or the like.
  • the luciferase substrate include luciferin and coelenterazine.
  • steps (I) and (II) in measurement method 1 and steps (I) and (II) in measurement method 2 are carried out using metal ions, salts, saccharides, antiseptics. It can be carried out in the presence of an agent, protein, protein stabilizer, surfactant and the like.
  • the metal ion include magnesium ion, manganese ion, zinc ion and the like.
  • the salts include sodium chloride and potassium chloride.
  • the saccharide include mannitol and sorbitol.
  • preservatives include sodium azide, antibiotics (streptomycin, penicillin, gentamicin, etc.), Bioace, Procrine 300, Proxel GXL, and the like.
  • the protein examples include bovine serum albumin (BSA), fetal bovine serum (FBS), casein, block ace (Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd.) and the like.
  • the protein stabilizer examples include peroxidase stabilizing buffer (Peroxidase Stabilizing Buffer, manufactured by DakoCytomation), polyethylene glycol (PEG) and the like.
  • surfactant include a nonionic surfactant, a cationic surfactant, an anionic surfactant, and an amphoteric surfactant.
  • step (3) a calibration curve showing the relationship between the oxidized HDL concentration and the measured value is measured by the above-described method for measuring oxidized HDL using a standard product having a known oxidized HDL concentration as a sample. It can be created from the obtained measured value and the oxidized HDL concentration.
  • step (4) the oxidized HDL concentration in the sample collected in step (1) is measured by the above-described method for measuring oxidized HDL using the sample, and the measured value and the calibration curve described above are measured. And can be determined from
  • Step (5) when the concentration of oxidized HDL in the sample determined in the step (4) is equal to or higher than the oxidized HDL concentration in a healthy person, the patient needs treatment for dyslipidemia, and in the healthy person If it is less than the oxidized HDL concentration, the patient is compared to the criteria that dyslipidemia treatment is not necessary.
  • Step (6) when the oxidized HDL concentration in the sample determined in the step (4) is equal to or higher than the oxidized HDL concentration in a healthy person as a result of the comparison in the step (5), the subject is When it is determined that treatment for dyslipidemia is necessary and the concentration is lower than the oxidized HDL concentration in a healthy person, the subject determines that treatment for dyslipidemia is not necessary.
  • the oxidized HDL concentration in a healthy person in the present invention is, for example, 30 U / L, and the ratio of the oxidized HDL concentration to the total HDL-PL concentration is, for example, 0.22 U ⁇ dL / mg ⁇ L.
  • the unit “U / L” is defined as 1 U / L oxidized HDL, which is an oxidized HDL obtained by copper oxidation of 1 mg / L HDL-PL.
  • the treatment for dyslipidemia in the present invention is not particularly limited as long as it is a treatment that reduces oxidized HDL of a subject, and examples thereof include treatment with a therapeutic agent for dyslipidemia.
  • the therapeutic agent for dyslipidemia is not particularly limited as long as it is a therapeutic agent that lowers the oxidized HDL of a subject, and examples thereof include a cholesterol catabolism promoter.
  • examples of cholesterol catabolism promoters include probucol and the like.
  • a screening reagent for a subject in need of treatment for dyslipidemia of the present invention is a reagent characterized by containing an oxidized HDL measuring reagent.
  • the reagent for screening a subject in need of treatment for dyslipidemia of the present invention can be used in the method for screening a subject in need of treatment for dyslipidemia of the present invention.
  • the reagent for screening a subject in need of treatment for dyslipidemia of the present invention when the oxidized HDL concentration in the sample collected from the subject is equal to or higher than the oxidized HDL concentration in a healthy person, The subject is in need of treatment for dyslipidemia, and if it is less than the oxidized HDL concentration in healthy subjects, there is a standard table that describes the criteria that the subject does not need treatment for dyslipidemia. It may be included.
  • the oxidized HDL measuring reagent in the screening reagent for a subject who needs treatment for dyslipidemia of the present invention is a reagent used in the aforementioned method for measuring oxidized HDL.
  • the oxidized HDL measuring reagent is not particularly limited as long as it is a reagent capable of measuring oxidized HDL in a specimen, and examples thereof include an immunological measuring reagent.
  • Examples of the immunological measurement reagent include reagents based on the above-described immunological measurement method. Specific embodiments of the oxidized HDL measuring reagent based on the immunoassay are shown below.
  • Measurement reagent 1 An oxidized HDL measuring reagent comprising a first antibody that binds to oxidized lipoprotein and a labeled second antibody in which a label is bound to a second antibody that binds to HDL.
  • Measurement reagent 2 An oxidized HDL measurement reagent comprising a first antibody that binds to HDL and a labeled second antibody in which a label is bound to a second antibody that binds to oxidized lipoprotein.
  • Examples of antibodies that bind to HDL, antibodies that bind to oxidized lipoprotein, and labeled antibodies include the above-described antibodies that bind to HDL, antibodies that bind to oxidized lipoprotein, and labels in labeled antibodies, respectively. It is done.
  • the first antibody that binds to the oxidized lipoprotein may or may not be immobilized on an insoluble carrier, but is preferably immobilized.
  • the insoluble carrier include the aforementioned insoluble carrier.
  • the first antibody that binds to HDL may or may not be immobilized on an insoluble carrier, but is preferably immobilized.
  • Examples of the insoluble carrier include the aforementioned insoluble carrier.
  • the oxidized HDL measurement reagent may contain the aforementioned aqueous medium, metal ions, salts, saccharides, preservatives, proteins, protein stabilizers, surfactants, and the like.
  • examples of a method for selecting a subject who needs treatment for dyslipidemia using an oxidized HDL measurement reagent include a method comprising the following steps. (1) collecting a sample from a subject; (2) A step of measuring the oxidized HDL in the sample collected in step (1) using an oxidized HDL measuring reagent and obtaining a measured value; (3) using a known concentration of oxidized HDL as a sample, obtaining a measured value by the same method as in step (2), and creating a calibration curve indicating the relationship between the oxidized HDL concentration and the measured value; (4) Determine the oxidized HDL concentration in the sample from the measured value obtained in step (2) and the calibration curve indicating the relationship between the oxidized HDL concentration and measured value created in step (3).
  • step (4) If the concentration of oxidized HDL determined in step (4) is greater than or equal to the oxidized HDL concentration in healthy subjects, the patient needs dyslipidemia treatment, Comparing to criteria that if the HDL level in healthy individuals is less than the HDL level, the patient does not require treatment for dyslipidemia; (6) As a result of the comparison in step (5), if the concentration of oxidized HDL in the sample determined in step (4) is equal to or higher than the oxidized HDL concentration in healthy individuals, the subject is dyslipidemic A step of determining that treatment is necessary and determining that the subject does not require treatment for dyslipidemia when the concentration is lower than the oxidized HDL concentration in a healthy person.
  • Examples of the specimen include the above-described specimen.
  • Measurement of oxidized HDL in the sample collected in step (1) is performed using an oxidized HDL measuring reagent.
  • Examples of the oxidized HDL measuring reagent include the aforementioned oxidized HDL measuring reagent.
  • a calibration curve indicating the relationship between the oxidized HDL concentration and the measured value can be created by the method described above.
  • the oxidized HDL concentration in the specimen collected in step (1) can be determined by the above-described method or the like.
  • Examples of the oxidized HDL concentration in a healthy person compared with the determined oxidized HDL concentration include the aforementioned oxidized HDL concentration in a healthy person.
  • a subject who needs treatment for dyslipidemia can be selected by comparing the determined oxidized HDL concentration with the oxidized HDL concentration in a healthy person.
  • Example 1 Determination of oxidized HDL concentration in serum collected from subject (1) Reagent for measuring oxidized HDL An oxidized HDL measuring reagent containing the following DLH3 antibody-immobilized plate and peroxidase-labeled anti-apo AI antibody solution was prepared.
  • Peroxidase-labeled anti-apo AI antibody solution Peroxidase Labeling Kit-NH 2 (manufactured by Dojindo Laboratories) was used to label anti-apo AI mouse monoclonal antibody (Abnova) with peroxidase according to the protocol attached to the kit, and peroxidase-labeled anti-apo AI Antibodies were prepared.
  • the average oxidized HDL concentration in the serum obtained from each subject in the group who did not take probucol was 30.0 ⁇ 8.1 U / L, whereas probucol was taken.
  • the average oxidized HDL concentration in the serum obtained from each subject in the selected group was 18.7 ⁇ 6.6 U / L, which was more significant in the group taking probucol than in the group not taking probucol
  • the oxidized HDL concentration in the serum was low (P ⁇ 0.05). In this way, since the oxidized HDL concentration was significantly different between the probucol group and the non-administration group, it became clear that probucol, a cholesterol catabolism-promoting agent, has the effect of reducing the oxidized HDL concentration. It was.
  • Probucol is one of the therapeutic agents for dyslipidemia. Therefore, if a subject having a high oxidized HDL concentration is selected and a therapeutic drug for dyslipidemia is administered to the subject, the oxidized HDL can be reduced, and a therapeutic effect for dyslipidemia can be expected.
  • the serum derived from the same patient from the oxidized HDL concentration in the serum obtained from each patient in the patient group (39 patients) taking probucol determined in (4) above and the “HDL-PL concentration determined in the above” The ratio of oxidized HDL concentration to HDL-PL concentration (oxidized HDL / HDL-PL) was determined.
  • the group that did not take the same probucol as in (4) above was collected from the same subject in the group that did not take probucol.
  • the ratio of oxidized HDL concentration in serum to HDL-PL concentration (oxidized HDL / HDL-PL) was determined. The results are shown in FIG.
  • the average value of oxidized HDL / HDL-PL in the serum obtained from each subject in the group who did not take probucol was 0.224 ⁇ 0.0490.0U ⁇ dL / mg ⁇ L.
  • the mean value of oxidized HDL / HDL-PL in the serum obtained from each subject in the group taking probucol was 0.206 ⁇ 0.045 U ⁇ dL / mg ⁇ L, and probucol was not taken Compared with the other groups, the group taking probucol significantly decreased serum HDL / HDL-PL (P ⁇ 0.05).
  • oxidized HDL / HDL-PL was significantly different between probucol and non-administration groups, so probucol, a cholesterol catabolism-promoting drug, may have an effect of reducing oxidized HDL concentration. It became clear. Probucol is one of the therapeutic agents for dyslipidemia. Therefore, if a subject having a high oxidized HDL concentration is selected and a therapeutic drug for dyslipidemia is administered to the subject, the oxidized HDL can be reduced, and a therapeutic effect for dyslipidemia can be expected.
  • the screening method for a subject who needs treatment for dyslipidemia and a reagent for screening a subject who needs treatment for dyslipidemia of the present invention are useful in clinical diagnosis.

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Abstract

脂質異常症治療が必要な被検者を効率的に選別するための方法、及び、試薬を提供する。被検者より採取した検体中の酸化高密度リポ蛋白の濃度を測定することを特徴とする、脂質異常症治療が必要な被検者の選別方法；酸化高密度リポ蛋白測定試薬を含有することを特徴とする、脂質異常症治療が必要な被検者の選別用試薬。本発明の選別方法及び選別用試薬は、臨床診断において有用である。

Description

脂質異常症治療が必要な被検者の選別方法及び選別用試薬
　本発明は、脂質異常症治療が必要な被検者の選別方法及び選別用試薬に関する。
　本願は、２０１６年１０月３１日に、日本に出願された特願２０１６－２１３８７２号に基づき優先権を主張し、その内容をここに援用する。
　脂質異常症は、血清脂質値が異常値を示す病気であり、異常値を示す脂質の種類によって「高低密度リポ蛋白コレステロール血症（高LDLコレステロール血症）」、「低高密度リポ蛋白コレステロール血症（低HDLコレステロール血症）」、及び、「高トリグリセライド血症」に分類される。
　近年、脂質異常症の病態として、高密度リポ蛋白（以下、HDLと記す）機能の変化が報告されており、高HDLコレステロール血症を呈する家族性CETP（コレステロールエステル転送蛋白）欠損患者におけるHDLの機能異常が報告されている（非特許文献１参照）。
　HDLは、比重1.063～1.21のリポ蛋白質であり、コレステロール逆転送系により、末梢組織に蓄積した余剰なコレステロールを取り去り、肝臓に運び処理する働きを持つリポ蛋白である。多くの疫学調査から、HDL中のコレステロール（以下、HDL-Cと記す）は動脈硬化の負の危険因子であることが判明し、HDL-Cは善玉コレステロールと呼ばれる様になり、HDL-C濃度が高いことが身体には望ましい、と単純に考えられていた。
　ところが、CETPの阻害剤の様なHDL-C濃度を高める薬が動脈硬化に有効ではない、との知見が得られたことから、HDL-C濃度というHDLの量的要因だけでは動脈硬化等の心血管系疾患をうまく説明できないことが明らかとなり、HDLによるコレステロールの引き抜き能というHDLの質的要因が動脈硬化等の心血管系疾患に関与していることが報告されている（非特許文献２参照）。
　脂質異常症の治療薬として、スタチンやプロブコール等が、臨床の現場で使用されている。スタチンは、HDL-C濃度を軽度に上昇させる作用があることが知られており、また、HDL機能にも好影響を与えることが報告されている。しかしながら、スタチンの投与にもかかわらず、脂質異常症が改善されない場合も知られている。コレステロール異化促進剤であるプロブコールは、強い抗酸化作用とLDLコレステロール低下作用を有する。家族性高コレステロール血症ヘテロ接合体患者において、プロブコール投与群では非投与群と比較して、心血管イベントの発症率が有意に低いことが報告されている（非特許文献３参照）。
　近年、酸化高密度リポ蛋白質（以下、酸化HDLという）や酸化低密度リポ蛋白質等の酸化リポ蛋白質と粥状硬化病巣の進展との関連性が指摘されており（非特許文献４参照）、酸化リポ蛋白質の免疫学的測定法が報告されている（特許文献１参照）。
国際公開第2003/006989号
The Lipid, Vol.25(3), p.36-50 (2014). New England J Medicine, Vol.367, p.2089-2099 (2012). J AtherosclerThromb, Vol.15(3), p.292-303(2008). New England J Medicine, Vol.320, p.915-924(1989).
　本発明の目的は、脂質異常症治療が必要な被検者を効率的に選別するための方法及び試薬を提供することにある。
　本発明者らは、被検者より採取した検体中の酸化HDLを測定することにより、脂質異常症の治療が必要な被検者を効率的に選択できることを見出し、本発明を完成させた。
　すなわち、本発明は以下の［１］～［１７］に関する。
［１］被検者より採取した検体中の酸化HDLの濃度を測定することを特徴とする、脂質異常症治療が必要な被検者の選別方法。
［２］以下（１）～（３）の工程を含む、［１］記載の方法。
（１）被検者から検体を採取する工程；
（２）工程（１）で採取した検体中の酸化HDLの濃度を測定する工程；
（３）工程（２）で測定した酸化HDLの濃度が、健常人における酸化HDL濃度よりも高い場合は、当該被検者は脂質異常症治療が必要であると判定し、健常人における酸化HDL濃度よりも低い場合は、当該被検者は脂質異常症治療が必要でないと判定する工程
［３］前記酸化HDLの濃度の測定が、免疫学的測定法により行われる［１］又は［２］記載の方法。
［４］前記免疫学的測定法が、酸化ホスファチジルコリンに結合する抗体、又は、ホスホコリンに結合する抗体と、高密度リポ蛋白質に結合する抗体とを用いて行われる方法である［３］記載の方法。
［５］前記高密度リポ蛋白質に結合する抗体が、アポＡ蛋白質に結合する抗体である［４］記載の方法。
［６］前記脂質異常症治療が、脂質異常症治療薬による治療である［１］～［５］のいずれかに記載の方法。
［７］前記脂質異常症治療薬が、コレステロール異化促進薬である［６］記載の方法。
［８］前記コレステロール異化促進薬が、プロブコールである［７］記載の方法。
［９］前記検体が、血液である［１］～［８］のいずれか１つに記載の方法。
［１０］酸化HDL測定試薬を含有することを特徴とする、脂質異常症治療が必要な被検者の選別用試薬。
［１１］前記酸化HDL測定試薬が、免疫学的測定試薬である［１０］記載の試薬。
［１２］前記免疫学的測定試薬が、酸化ホスファチジルコリンに結合する抗体、又は、ホスホコリンに結合する抗体と、高密度リポ蛋白質に結合する抗体とを含む試薬である［１１］記載の試薬。
［１３］前記高密度リポ蛋白質に結合する抗体が、アポＡ蛋白質に結合する抗体である［１２］記載の試薬。
［１４］前記脂質異常症治療が、脂質異常症治療薬による治療である［１０］～［１３］のいずれか１つに記載の試薬。
［１５］前記脂質異常症治療薬が、コレステロール異化促進薬である［１４］記載の試薬。
［１６］前記コレステロール異化促進薬が、プロブコールである［１５］記載の試薬。
［１７］前記酸化HDL測定試薬が、血液中の酸化HDLを測定するための試薬である、［１０］～［１６］のいずれか１つに記載の試薬。
　本発明により、脂質異常症治療が必要な被検者を効率的に選別するための方法及び試薬が提供される。
プロブコールを内服した群、及び、プロブコールを内服しなかった群における各被験者の酸化HDL濃度を示すドットプロットである。横軸の“probucol(-)”は、プロブコール非内服群を表し、“probucol(+)”は、プロブコール内服群を表す。縦軸は、酸化HDL濃度（単位：U/L）を表す。 プロブコールを内服した群、及び、プロブコールを内服しなかった群における各被験者の酸化HDL濃度を示す箱ひげ図である。横軸の“probucol(-)”は、プロブコール非内服群を表し、“probucol(+)”は、プロブコール内服群を表す。縦軸は、酸化HDL濃度（単位：U/L）を表す。箱部分は、第１四分位数から第３四分位数の範囲を表し、箱部分の太線は中央値を表し、ひげ部分の上側は、上位１０パーセンタイルを、ひげ部分の下側は、下位１０パーセンタイルを表す。 プロブコールを内服した群、及び、プロブコールを内服しなかった群における酸化HDL濃度の、HDL中のリン脂質(HDL-PL)濃度に対する比を表すドットプロットである。横軸の“probucol(-)”は、プロブコール非内服群を表し、“probucol(+)”は、プロブコール内服群を表す。縦軸は、酸化HDL濃度のHDL中のリン脂質(HDL-PL)濃度に対する比（単位：U・dL/mg・L）を表す。 プロブコールを内服した群、及び、プロブコールを内服しなかった群における酸化HDL濃度の、HDL中のリン脂質(HDL-PL)濃度に対する比を表す箱ひげ図である。横軸の“probucol(-)”は、プロブコール非内服群を表し、“probucol(+)”は、プロブコール内服群を表す。縦軸は、酸化HDL濃度のHDL中のリン脂質(HDL-PL)濃度に対する比（単位：U・dL/mg・L）を表す。箱部分は、第１四分位数から第３四分位数の範囲を表し、箱部分の太線は中央値を表し、ひげ部分の上側は、上位１０パーセンタイルを、ひげ部分の下側は、下位１０パーセンタイルを表す。
１．脂質異常症治療が必要な被検者の選別方法
　本発明の、脂質異常症治療が必要な被検者の選別方法は、被検者より採取した検体中の酸化HDLの濃度を測定することを特徴とする方法である。
　本発明において、被検者より採取された検体としては、酸化HDLが測定され得る検体であれば特に制限はなく、例えば血液等が挙げられる。血液としては、例えば全血、血清、血漿等が挙げられる。
　本発明において、酸化HDLとは、HDLを構成するアポ蛋白質であるアポＡ蛋白質を有し、HDLを構成する脂質部分の酸化により機能不全を呈するHDLをいう。
　本発明において、被検者より採取した検体中の酸化HDLの測定とは、当該検体中の酸化HDL濃度の測定のみならず、当該検体における酸化HDL濃度の全HDL濃度に対する割合の測定をも包含する。全HDL濃度は、HDL中のアポＡ蛋白質濃度、HDL中のリン脂質(HDL-PL)濃度、ＨＤＬ中のホスファチジルコリン (HDL-PC)濃度等のHDLに特異的な物質を測定することによって決定することができる。
　本発明において、脂質異常症治療が必要な被検者の選別方法は、以下の工程を含む方法により行うことができる。
（１）被検者から検体を採取する工程；
（２）工程（１）で採取した検体中の酸化HDLを測定し、測定値を得る工程；
（３）既知濃度の酸化HDLを検体として用いて、工程（２）と同様の方法により測定値を得て、酸化HDL濃度と測定値との間の関係を示す検量線を作成する工程；
（４）工程（２）で得られた測定値と、工程（３）で作成した酸化HDL濃度と測定値との間の関係を示す検量線とから、当該検体中の酸化HDL濃度を決定する工程；
（５）工程（４）で決定された酸化HDLの濃度を、当該検体中の酸化HDLの濃度が健常人における酸化HDL濃度以上の場合には、当該被検者は脂質異常症治療が必要であり、健常人における酸化HDL濃度未満の場合は、当該被検者は脂質異常症治療が必要でない、という基準と比較する工程；
（６）工程（５）での比較の結果、工程（４）で決定された当該検体中の酸化HDLの濃度が健常人における酸化HDL濃度以上の場合には、当該被検者は脂質異常症治療が必要であると判定し、健常人における酸化HDL濃度未満の場合は、当該被検者は脂質異常症治療が必要でないと判定する工程。
＜工程（１）＞
　工程（１）において、被検者より採取された検体としては、前述の検体等が挙げられる。
＜工程（２）＞
　工程（２）において、工程（１）で採取された検体中の酸化HDLの測定は、工程（１）で採取された検体中の酸化HDLを測定し得る方法であれば、如何なる方法を用いて行うことができ、例えば免疫学的測定法等の方法を用いて行うことができる。免疫学的測定法としては、任意の公知の免疫学的測定方法が挙げられ、例えば放射免疫測定法(RIA)、酵素免疫測定法(ELISA)、蛍光免疫測定法(FIA)、間接蛍光抗体法(Indirect Fluorescence assay)、発光免疫測定法(Luminescent immunoassay)、物理化学的測定法［比濁免疫測定法(TIA)、ラテックス凝集法(LAPIA)、微粒子計数免疫凝集測定法(PCIA)］、ウェスタンブロッティング法等が挙げられ、ELISA法が好ましい。免疫学的測定法においては、サンドイッチ法、競合法等を用いることができ、また、ホモジアニス法、ヘテロジニアス法等も用いることができる。
　免疫学的測定法を用いた、工程（１）で採取された検体中の酸化HDLの測定方法の具体的態様を以下に示す。
・測定方法１
以下の工程を含有する、工程（１）で採取された検体中の酸化HDLの測定方法。
(Ｉ)工程（１）で採取された検体と、酸化リポ蛋白質に結合する第１抗体とを反応させて、第１抗体と酸化リポ蛋白質の免疫複合体を生成させる工程；
(ＩＩ)工程(Ｉ)で生成した免疫複合体と、HDLに結合する第２抗体に標識が結合した標識化第２抗体とを反応させて、第１抗体、酸化リポ蛋白質及び標識化第２抗体の免疫複合体を生成させる工程；
(ＩＩＩ)工程(ＩＩ)で生成した免疫複合体中の標識量を測定する工程。
　抗体（第１抗体、第２抗体）としては、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体のいずれも使用できるが、モノクローナル抗体が好ましい。また、抗体（第１抗体、第２抗体）としては、抗体をパパイン処理により得られるFab、ペプシン処理により得られるF(ab’)2、ペプシン処理－還元処理により得られるFab’等のFc部分を除去した抗体フラグメントも使用できる。
　酸化リポ蛋白質に結合する第１抗体としては、例えば酸化ホスファチジルコリンに結合する抗体、ホスホコリンに結合する抗体等が挙げられる。酸化ホスファチジルコリンに結合する抗体としては例えば、マウス－マウスハイブリドーマセルラインＦＯＨ１ａ／ＤＬＨ３（ＦＥＲＭ　ＢＰ－７１７１）によって産生されるモノクローナル抗体（以下、ＤＬＨ３抗体と記す）等が挙げられる。ホスホコリンに結合する抗体としては、例えばＴ－１５抗体[J. Exp. Med., Vol. 132, p.737-751 (1970).]、ハイブリドーマＫＴＭ－２８５（ＦＥＲＭ　ＢＰ－７５８９）により生産されるモノクローナル抗体ＫＴＭ－２８５、形質転換細胞ＫＴＭ－２００１（ＦＥＲＭ　ＢＰ－７５４９）により生産される遺伝子組換え抗体ＫＴＭ－２００１などが挙げられる。
　HDLに結合する第２抗体としては、例えばアポＡ蛋白質に結合する抗体等が挙げられる。アポＡ蛋白質に結合する抗体としては、例えばアポＡＩ蛋白質に結合する抗体、アポＡＩＩ蛋白質に結合する抗体等が挙げられる。
　工程(Ｉ)及び工程(ＩＩ)における反応温度としては、酸化HDLの測定を可能とする反応温度であれば特に制限はなく、例えば0～50℃が挙げられ、4℃～40℃が好ましい。工程(Ｉ)及び工程(ＩＩ)における反応時間としては、酸化HDLの測定を可能とする反応時間であれば特に制限はなく、例えば1分間～72時間であり、5分間～20時間が好ましい。
　工程(Ｉ)～(ＩＩＩ)は、水性媒体中で行うこともできる。水性媒体としては、酸化HDLの測定を可能とする水性媒体であれば特に制限はなく、例えば脱イオン水、蒸留水、緩衝液等が挙げられ、緩衝液が好ましい。水性媒体のｐＨは、例えば４～１０であり、水性媒体として緩衝液を用いる場合には、設定するｐＨに適した緩衝剤を用いることが望ましい。緩衝液の調製に使用される緩衝剤としては、緩衝能を有するものならば特に限定されないが、例えば乳酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤、酢酸緩衝剤、コハク酸緩衝剤、フタル酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、トリエタノールアミン緩衝剤、ジエタノールアミン緩衝剤、リジン緩衝剤、バルビツール緩衝剤、イミダゾール緩衝剤、リンゴ酸緩衝剤、シュウ酸緩衝剤、グリシン緩衝剤、ホウ酸緩衝剤、炭酸緩衝剤、グリシン緩衝剤、トリス緩衝剤、グッド緩衝剤等が挙げられる。
　グッド緩衝剤としては、例えば２－モルホリノエタンスルホン酸（ＭＥＳ）緩衝剤、ビス（２－ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン（Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ）緩衝剤、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉｓ）緩衝剤、Ｎ－（２－アセトアミド）イミノ二酢酸（ＡＤＡ）緩衝剤、ピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス（２－エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）緩衝剤、２－［Ｎ－（２－アセトアミド）アミノ］エタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）緩衝剤、３－モルホリノ－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）緩衝剤、２－［Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）アミノ］エタンスルホン酸（ＢＥＳ）緩衝剤、３－モルホリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）緩衝剤、２－｛Ｎ－［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］アミノ｝エタンスルホン酸（ＴＥＳ）緩衝剤、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）－Ｎ’－（２－スルホエチル）ピペラジン（ＨＥＰＥＳ）緩衝剤、３－［Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）アミノ］－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＤＩＰＳＯ）緩衝剤、２－ヒドロキシ－３－｛［Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル］アミノ｝プロパンスルホン酸（ＴＡＰＳＯ）緩衝剤、ピペラジン－Ｎ，Ｎ’－ビス（２－ヒドロキシプロパン－３－スルホン酸）（ＰＯＰＳＯ）緩衝剤、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）－Ｎ’－（２－ヒドロキシ－３－スルホプロピル）ピペラジン（ＨＥＰＰＳＯ）緩衝剤、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）－Ｎ’－（３－スルホプロピル）ピペラジン（ＥＰＰＳ）緩衝剤、トリシン［Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチルグリシン］緩衝剤、ビシン［Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）グリシン］緩衝剤、３－［Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル］アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）緩衝剤、２－（Ｎ－シクロヘキシルアミノ）エタンスルホン酸（ＣＨＥＳ）緩衝剤、３－（Ｎ－シクロヘキシルアミノ）－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＣＡＰＳＯ）緩衝剤、３－（Ｎ－シクロヘキシルアミノ）プロパンスルホン酸（ＣＡＰＳ）緩衝剤等が挙げられる。
　緩衝液の濃度は測定に適した濃度であれば特に制限はされないが、0.001～2.0mol/Lが好ましく、0.005～1.0mol/Lがより好ましく、0.01～0.1mol/Lが特に好ましい。
　工程(Ｉ)と工程(ＩＩ)とは同時に行うこともできる。工程(Ｉ)と工程(ＩＩ)との間には、洗浄工程を設けても、設けなくてもよいが、洗浄工程を設けることが好ましい。また、工程(ＩＩ)と工程(ＩＩＩ)との間には、洗浄工程を設けても、設けなくてもよいが、洗浄工程を設けることが好ましい。第１抗体は不溶性担体に固定化されていなくても、固定化されていてもよいが、固定化されていることが好ましい。第１抗体が不溶性担体に固定化されている場合、工程(Ｉ)後の不溶性担体を洗浄することにより、工程(Ｉ)で生成した第１抗体と測定対象成分の免疫複合体を、未反応成分（検体由来の成分、過剰の第１抗体等）から分離することができる。同様に、第１抗体が不溶性担体に固定化されている場合、工程(ＩＩ)後の不溶性担体を洗浄することにより、工程(ＩＩ)で生成した第１抗体、酸化HDL及び標識化第２抗体の免疫複合体を、未反応成分（過剰の標識化第２抗体等）から分離することができる。洗浄液としては、リン酸緩衝化生理食塩水［0.15mol/L塩化ナトリウムを含有する10mmol/L リン酸緩衝液、pH7.2（以下、ＰＢＳと記す）］、界面活性剤を含有するＰＢＳ、前述の水性媒体等をあげることができる。当該界面活性剤としては、例えばツイーン(Tween)２０等の非イオン性界面活性剤等が挙げられる。
　不溶性担体としては、酸化HDLの測定を可能とする不溶性担体であれば特に制限はない。不溶性担体の好ましい素材としてはポリスチレン、ポリカーボネート、ポリビニルトルエン、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリ塩化ビニル、ナイロン、ポリメタクリレート、ゼラチン、アガロース、セルロース、ニトロセルロース、セルロースアセテート、酢酸セルロース、ポリエチレンテレフタレート等の高分子素材、ガラス、セラミックス、磁性粒子や金属等が挙げられる。不溶性担体の好ましい形状としてはチューブ、ビーズ、プレート、ラテックス等の微粒子、スティック等が挙げられ、９６ウェル／枚のポリスチレン製マイクロタイタープレート等が好ましい。
　第１抗体の不溶性担体への固定化方法としては、物理学的結合を利用した方法、化学的結合を利用した方法、及び、これらの併用等、公知の方法が用いられる。物理学的結合としては、例えば静電的結合、水素結合、疎水結合等が挙げられる。化学的結合としては、例えば共有結合、配位結合等が挙げられる。
　第１抗体は、直接、不溶性担体に固定化してもよいし、間接的に不溶性担体に固定化してもよい。間接的な固定化方法としては、例えばアビジンを固定化した不溶性担体に、ビオチン化した第１抗体の溶液を添加し、ビオチンとアビジンとの特異的結合を介して、第１抗体を不溶性担体に固定化する方法、Fcを固定化した不溶性担体に、第１抗体の溶液を添加し、Fcと第１抗体との相互作用により、第１抗体を不溶性担体に固定化する方法が挙げられる。さらに、第１抗体は、リンカーを介した共有結合により不溶性担体に固定化してもよい。リンカーとしては、例えば、第１抗体の官能基と不溶性担体がその表面に保持している官能基の両者と共有結合できる分子等が挙げられ、第１抗体の官能基と反応することができる第１の反応活性基と、不溶性担体がその表面に保持している官能基と反応することができる第２の反応活性基とを同一分子内に持つ分子が好ましく、その中でも、第１の反応活性基と第２の反応活性基が異なる基である分子が特に好ましい。第１抗体の官能基および不溶性担体がその表面に保持している官能基としては、カルボキシル基、アミノ基、グリシジル基、スルフヒドリル基、水酸基、アミド基、イミノ基、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）基、マレイミド基等が挙げられる。リンカーにおける反応活性基としては、アリールアジド、カルボジイミド、ヒドラジド、アルデヒド、ヒドロキシメチルホスフィン、イミドエステル、イソシアネート、イソチオシアネート、マレイミド、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステル、ペンタフルオロフェニル（ＰＦＰ）エステル、ソラレン、ピリジルジスルフィド、ビニルスルホン等の基が挙げられる。
・測定方法２
(Ｉ)工程（１）で採取された検体と、HDLに結合する第１抗体とを反応させて、第１抗体とHDLの免疫複合体を生成させる工程；
(ＩＩ)工程(Ｉ)で生成した免疫複合体と、酸化リポ蛋白質に結合する第２抗体に標識が結合した標識化第２抗体とを反応させて、第１抗体、酸化リポ蛋白質及び標識化第２抗体の免疫複合体を生成させる工程；
(ＩＩＩ)工程(ＩＩ)で生成した免疫複合体中の標識量を測定する工程。
　抗体（第１抗体、第２抗体）としては、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体のいずれも使用できるが、モノクローナル抗体が好ましい。また、抗体（第１抗体、第２抗体）としては、抗体をパパイン処理により得られるFab、ペプシン処理により得られるF(ab’)2、ペプシン処理－還元処理により得られるFab’等のFc部分を除去した抗体フラグメントも使用できる。
　HDLに結合する第１抗体としては、例えばアポＡ蛋白質に結合する抗体等が挙げられる。アポＡ蛋白質に結合する抗体としては、例えばアポＡＩ蛋白質に結合する抗体、アポＡＩＩ蛋白質に結合する抗体等が挙げられる。酸化リポ蛋白質に結合する第２抗体としては、例えば酸化ホスファチジルコリンに結合する抗体、ホスホコリンに結合する抗体等が挙げられる。
　酸化ホスファチジルコリンに結合する抗体としては例えば、マウス－マウスハイブリドーマセルラインＦＯＨ１ａ／ＤＬＨ３（ＦＥＲＭ　ＢＰ－７１７１）によって産生されるモノクローナル抗体等が挙げられる。ホスホコリンに結合する抗体としては、例えばＴ－１５抗体[J. Exp. Med., Vol. 132, p.737-751 (1970).]、ハイブリドーマＫＴＭ－２８５（ＦＥＲＭ　ＢＰ－７５８９）により生産されるモノクローナル抗体ＫＴＭ－２８５、形質転換細胞ＫＴＭ－２００１（ＦＥＲＭ　ＢＰ－７５４９）により生産される遺伝子組換え抗体ＫＴＭ－２００１などが挙げられる。
　工程(Ｉ)及び工程(ＩＩ)における反応温度としては、酸化HDLの測定を可能とする反応温度であれば特に制限はなく、例えば0～50℃が挙げられ、4℃～40℃が好ましい。工程(Ｉ)及び工程(ＩＩ)における反応時間としては、酸化HDLの測定を可能とする反応時間であれば特に制限はなく、例えば1分間～72時間であり、5分間～20時間が好ましい。
　工程(Ｉ)～(ＩＩＩ)は、水性媒体中で行うこともできる。水性媒体としては、酸化HDLの測定を可能とする水性媒体であれば特に制限はなく、例えば前述の水性媒体等が挙げられる。
　工程(Ｉ)と工程(ＩＩ)とは同時に行うこともできる。工程(Ｉ)と工程(ＩＩ)との間には、洗浄工程を設けても、設けなくてもよいが、洗浄工程を設けることが好ましい。また、工程(ＩＩ)と工程(ＩＩＩ)との間には、洗浄工程を設けても、設けなくてもよいが、洗浄工程を設けることが好ましい。第１抗体は不溶性担体に固定化されていなくても、固定化されていてもよいが、固定化されていることが好ましい。第１抗体が不溶性担体に固定化されている場合、工程(Ｉ)後の不溶性担体を洗浄することにより、工程(Ｉ)で生成した第１抗体と測定対象成分の免疫複合体を、未反応成分（検体由来の成分、過剰の第１抗体等）から分離することができる。同様に、第１抗体が不溶性担体に固定化されている場合、工程(ＩＩ)後の不溶性担体を洗浄することにより、工程(ＩＩ)で生成した第１抗体、酸化HDL及び標識化第２抗体の免疫複合体を、未反応成分（過剰の標識化第２抗体等）から分離することができる。洗浄液としては、リン酸緩衝化生理食塩水［0.15mol/L塩化ナトリウムを含有する10mmol/L リン酸緩衝液、pH7.2（以下、ＰＢＳと記す）］、界面活性剤を含有するＰＢＳ、前述の水性媒体等をあげることができる。当該界面活性剤としては、例えばTween 20等の非イオン性界面活性剤等が挙げられる。
　不溶性担体としては、酸化HDLの測定を可能とする不溶性担体であれば特に制限はない。不溶性担体の好ましい素材としては、例えば前述の素材等が挙げられる。
　第１抗体の不溶性担体への固定化方法としては、例えば前述の固定化方法等が挙げられる。
　測定方法１及び測定方法２における第２抗体を標識する標識物質としては、例えば酵素、蛍光物質、発光物質、放射性同位元素、ビオチン、ジゴキシゲニン、タグ配列を含むポリペプチド、金属コロイド粒子、着色ラテックス粒子等が挙げられる。酵素としては、例えば、アルカリホスファターゼ、ペルオキシダーゼ、ガラクトシダーゼ、グルクロニダーゼ、ルシフェラーゼ等が挙げられる。蛍光物質としては、例えば、FITC（フルオレッセイン　イソチオシアネート）、RITC（ローダミンＢ－イソチオシアネート）等が挙げられる。その他の蛍光物質として、例えばquantumdot（Science, 281, 2016-2018, 1998）、フィコエリスリン等のフィコビリ蛋白質、GFP（Green fluorescent Protein）、RFP（Red fluorescent Protein）、YFP（Yellow fluorescent Protein）、BFP（Blue fluorescent Protein）等の蛍光を発する蛋白質が挙げられる。発光物質としては、例えば、アクリジニウムおよびその誘導体、ルテニウム錯体化合物、ロフィン等が挙げられる。またルテニウム錯体化合物としては、電子供与体と共に電気化学的に発光する、Clin. Chem. 37, 9, 1534-1539, 1991に示されたものが好ましい。放射性同位元素としては、例えば、3H、14C、35S、32P、125I、131I等が挙げられる。タグ配列を含むポリペプチドとしては、FLAGペプチド（FLAGタグ、Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys）、ポリヒスチジン（Hisタグ、His His His His His His）、mycエピトープペプチド（mycタグ、Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu）、ヘマグルチニンエピトープペプチド（HAタグ、Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala）等が挙げられる。
　第２抗体の標識化は、第２抗体の官能基と標識物質の官能基との間で、リンカーを介してまたは介さず共有結合を生じる反応によって行うことができる。官能基としては、カルボキシル基、アミノ基、グリシジル基、スルフヒドリル基、水酸基、アミド基、イミノ基、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステル基、マレイミド基、イソシアネート基、イソチオシアネート基等が挙げられる。この官能基同士の間で縮合反応を行わせることが可能である。
　リンカーを介さない結合方法としては例えば、EDC等のカルボジイミド化合物を用いる方法等が挙げられる。この場合、NHSまたはその誘導体等の活性エステルを使用することも可能である。また、イソチオシアネート基とアミノ基の間の縮合反応は、他の試薬を必要とせず、中性～弱アルカリ性の条件で混合するだけで進行するため、好ましい。
　リンカーとしては、例えば、第２抗体の官能基と反応することができる反応活性基と、標識物質の官能基と反応することができる反応活性基の両方の反応活性基を分子内に有するものが挙げられ、第２抗体のアミノ酸残基と反応することができる第１の反応活性基と、標識物質の官能基と反応することができる第２の反応活性基とを同一分子内に有する分子が好ましく、その中でも、第１の反応活性基と第２の反応活性基とが異なる基である分子が特に好ましい。リンカーにおける反応活性基としては、例えば前述の反応活性基が挙げられる。
　放射性同位元素を第２抗体に化学的に結合させる方法としては、例えば文献（Antibody Immunoconj. Radiopharm., 3, 60, 1990）記載の方法が挙げられる。
　標識物質が酵素、アビジン、蛍光を発する蛋白質、フィコビリ蛋白質、タグ配列を含むポリペプチド等のポリペプチドである場合には、公知の遺伝子組換え技術（Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001）に従って、標識物質と抗体の融合蛋白質をコードするＤＮＡを含む発現ベクターを作製し、発現ベクターを適当な宿主に導入して、宿主を培養することにより製造することができる。融合蛋白質をコードするDNAは、抗体および標識物質をそれぞれコードするDNAをPCR等でクローニングし、それぞれのDNAをリガーゼ反応で連結することにより得ることができる。
　標識量の測定は、標識物質に応じて適切な方法を選択することができる。標識物質が発色物質、すなわち、ある波長の光を吸収する物質の場合には、分光光度計やマルチウェルプレートリーダー等を用いることができる。標識物質が蛍光物質の場合には、蛍光光度計や蛍光マルチウェルプレートリーダー等を用いることができる。標識物質が発光物質の場合には、発光光度計や発光マルチウェルプレートリーダー等を用いることができる。標識物質が放射性同位元素である場合、放射性同位元素の量は、放射活性をシンチレーションカウンター、γ－ウェルカウンター等により測定することができる。
　標識が酵素である場合、標識量の測定とは、酵素活性を測定することを意味する。酵素の基質を当該酵素と反応させ、生成した物質を測定することにより、標識量を測定することができる。酵素がペルオキシダーゼである場合には、例えば吸光度法、蛍光法、発光法等によりペルオキシダーゼ活性を測定することができる。吸光度法によりペルオキシダーゼ活性を測定する方法としては、例えばペルオキシダーゼとその基質である過酸化水素および酸化発色型色原体の組み合わせとを反応させ、反応液の吸光度を分光光度計やマルチウェルプレートリーダー等で測定する方法等が挙げられる。酸化発色型色原体としては、例えばロイコ型色原体、酸化カップリング発色型色原体等が挙げられる。
　ロイコ型色原体は、過酸化水素およびペルオキシダーゼ等の過酸化活性物質の存在下、単独で色素へ変換される物質である。具体的には、テトラメチルベンジジン、ｏ－フェニレンジアミン、１０－Ｎ－カルボキシメチルカルバモイル－３，７－ビス（ジメチルアミノ）－１０Ｈ－フェノチアジン（ＣＣＡＰ）、１０－Ｎ－メチルカルバモイル－３，７－ビス（ジメチルアミノ）－１０Ｈ－フェノチアジン（ＭＣＤＰ）、Ｎ－（カルボキシメチルアミノカルボニル）－４，４’－ビス（ジメチルアミノ）ジフェニルアミン ナトリウム塩（ＤＡ－６４）、４，４’－ビス（ジメチルアミノ）ジフェニルアミン、ビス〔３－ビス（４－クロロフェニル）メチル－４－ジメチルアミノフェニル〕アミン（ＢＣＭＡ）、１０－Ｎ－（カルボキシメチルアミノカルボニル）－３，７－ビス（ジメチルアミノ）－１０Ｈ－フェノチアジン ナトリウム塩（ＤＡ－６７）等が挙げられる。
　酸化カップリング発色型色原体は、過酸化水素およびペルオキシダーゼ等の過酸化活性物質の存在下、２つの化合物が酸化的カップリングして色素を生成する物質である。２つの化合物の組み合わせとしては、カプラーとアニリン類（トリンダー試薬）との組み合わせ、カプラーとフェノール類との組み合わせ等が挙げられる。カプラーとしては、例えば４－アミノアンチピリン（４－ＡＡ）、３－メチル－２－ベンゾチアゾリノンヒドラジン等が挙げられる。アニリン類としては、Ｎ－（３－スルホプロピル）アニリン、Ｎ－エチル－Ｎ－（２－ヒドロキシ－３－スルホプロピル）－３－メチルアニリン（ＴＯＯＳ）、Ｎ－エチル－Ｎ－（２－ヒドロキシ－３－スルホプロピル）－３，５－ジメチルアニリン（ＭＡＯＳ）、Ｎ－エチル－Ｎ－（２－ヒドロキシ－３－スルホプロピル）－３，５－ジメトキシアニリン（ＤＡＯＳ）、Ｎ－エチル－Ｎ－（３－スルホプロピル）－３－メチルアニリン（ＴＯＰＳ）、Ｎ－（２－ヒドロキシ－３－スルホプロピル）－３，５－ジメトキシアニリン（ＨＤＡＯＳ）、Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－メチルアニリン、Ｎ，Ｎ－ジ（３－スルホプロピル）－３，５－ジメトキシアニリン、Ｎ－エチル－Ｎ－（３－スルホプロピル）－３－メトキシアニリン、Ｎ－エチル－Ｎ－（３－スルホプロピル）アニリン、Ｎ－エチル－Ｎ－（３－スルホプロピル）－３，５－ジメトキシアニリン、Ｎ－（３－スルホプロピル）－３，５－ジメトキシアニリン、Ｎ－エチル－Ｎ－（３－スルホプロピル）－３，５－ジメチルアニリン、Ｎ－エチル－Ｎ－（２－ヒドロキシ－３－スルホプロピル）－３－メトキシアニリン、Ｎ－エチル－Ｎ－（２－ヒドロキシ－３－スルホプロピル）アニリン、Ｎ－エチル－Ｎ－（３－メチルフェニル）－Ｎ’－サクシニルエチレンジアミン（ＥＭＳＥ）、Ｎ－エチル－Ｎ－（３－メチルフェニル）－Ｎ’－アセチルエチレンジアミン、Ｎ－エチル－Ｎ－（２－ヒドロキシ－３－スルホプロピル）－４－フルオロ－３，５－ジメトキシアニリン（Ｆ－ＤＡＯＳ）等が挙げられる。フェノール類としては、フェノール、４－クロロフェノール、３－メチルフェノール、３－ヒドロキシ－２，４，６－トリヨード安息香酸（ＨＴＩＢ）等が挙げられる。
　蛍光法によりペルオキシダーゼ活性を測定する方法としては、例えばペルオキシダーゼとその基質である過酸化水素および蛍光物質の組み合わせとを反応させ、蛍光光度計や蛍光マルチウェルプレートリーダー等で生成した蛍光の強度を測定する方法等が挙げられる。当該蛍光物質としては、例えば４－ヒドロキシフェニル酢酸、３－（４－ヒドロキシフェニル）プロピオン酸、クマリン等が挙げられる。
　発光法によるペルオキシダーゼ活性を測定する方法としては、例えばペルオキシダーゼとその基質である過酸化水素および発光物質の組み合わせとを反応させ、発光強度計や発光マルチウェルプレートリーダー等で生成した発光の強度を測定する方法等が挙げられる。当該発光物質としては、例えばルミノール化合物、ルシゲニン化合物等が挙げられる。
　酵素がアルカリホスファターゼである場合には、例えば発光法等によりアルカリホスファターゼ活性を測定することができる。発光法によりアルカリホスファターゼ活性を測定する方法としては、例えばアルカリホスファターゼとその基質とを反応させ、生成した発光の発光強度を発光強度計や発光マルチウェルプレートリーダー等で測定する方法等が挙げられる。アルカリホスファターゼの基質としては、例えば３－（２’－スピロアダマンタン）－４－メトキシ－４－（３’－ホスホリルオキシ）フェニル－１，２－ジオキセタン・二ナトリウム塩（ＡＭＰＰＤ）、２－クロロ－５－｛４－メトキシスピロ［１，２－ジオキセタン－３，２’－（５’－クロロ）トリシクロ［３．３．１．１3.7］デカン］－４－イル｝フェニルホスフェート・二ナトリウム塩（ＣＤＰ－ＳｔａｒＴＭ）、３－｛４－メトキシスピロ［１，２－ジオキセタン－３，２’－（５’－クロロ）トリシクロ［３．３．１．１3.7］デカン］－４’－イル｝フェニルホスフェート・二ナトリウム塩（ＣＳＰＤＴＭ）、9-［（フェニルオキシ）（ホスホリルオキシ）メチリデン］-10-メチルアクリダン・二ナトリウム、9-［（4-クロロフェニルチオ）（ホスホリルオキシ）メチリデン］-10-メチルアクリダン・二ナトリウム（ＬｕｍｉｇｅｎＴＭ　ＡＰＳ－５）等が挙げられる。
　酵素がβ－Ｄ－ガラクトシダーゼである場合には、例えば吸光度法（比色法）、発光法または蛍光法等によりβ－Ｄ－ガラクトシダーゼ活性を測定することができる。吸光度法（比色法）によりβ－Ｄ－ガラクトシダーゼ活性を測定する方法としては、β－Ｄ－ガラクトシダーゼとその基質とを反応させ、反応液の吸光度を分光光度計やマルチウェルプレートリーダー等で測定する方法等が挙げられる。吸光度法（比色法）によりβ－Ｄ－ガラクトシダーゼ活性を測定する方法における、β－Ｄ－ガラクトシダーゼの基質としては、例えばｏ－ニトロフェニル－β－Ｄ－ガラクトピラノシド等が挙げられる。発光法によりβ－Ｄ－ガラクトシダーゼ活性を測定する方法としては、例えばβ－Ｄ－ガラクトシダーゼとその基質とを反応させ、反応液の発光度を発光強度計や発光マルチウェルプレートリーダー等で測定する方法等が挙げられる。発光法によりβ－Ｄ－ガラクトシダーゼ活性を測定する方法における、β－Ｄ－ガラクトシダーゼの基質としては、例えばガラクトン－プラス［Galacton-Plus、アプライドバイオシステムズ（Applied Biosystems）社製］またはその類似化合物等が挙げられる。蛍光法によりβ－Ｄ－ガラクトシダーゼ活性を測定する方法としては、例えばβ－Ｄ－ガラクトシダーゼとその基質とを反応させ、反応液の蛍光度を蛍光光度計や蛍光マルチウェルプレートリーダー等で測定する方法等が挙げられる。蛍光法によりβ－Ｄ－ガラクトシダーゼ活性を測定する方法における、β－Ｄ－ガラクトシダーゼの基質としては、例えば４－メチルウンベリフェリル－β－Ｄ－ガラクトピラノシド等が挙げられる。
　酵素がルシフェラーゼである場合には、例えば発光法等によりルシフェラーゼ活性を測定することができる。発光法によりルシフェラーゼ活性を測定する方法としては、例えばルシフェラーゼとその基質とを反応させ、反応液の発光度を発光強度計や発光マルチウェルプレートリーダー等で測定する方法等が挙げられる。ルシフェラーゼの基質としては、例えばルシフェリン、セレンテラジン等が挙げられる。
　酸化HDLの測定方法において、抗原抗体反応、すなわち、測定方法１における工程(Ｉ)及び工程(ＩＩ)、測定方法２における工程(Ｉ)及び工程(ＩＩ)を、金属イオン、塩類、糖類、防腐剤、蛋白質、蛋白質安定化剤、界面活性剤等の共存下で行うことができる。金属イオンとしては、例えばマグネシウムイオン、マンガンイオン、亜鉛イオン等が挙げられる。塩類としては、例えば塩化ナトリウム、塩化カリウム等が挙げられる。糖類としては、例えばマンニトール、ソルビトール等が挙げられる。防腐剤としては、例えばアジ化ナトリウム、抗生物質（ストレプトマイシン、ペニシリン、ゲンタマイシン等）、バイオエース、プロクリン３００、プロキセル（Proxel）ＧＸＬ等が挙げられる。蛋白質としては、例えばウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、カゼイン、ブロックエース（大日本製薬社製）等が挙げられる。蛋白質安定化剤としては、例えばペルオキシダーゼ安定化緩衝液［Peroxidase Stabilizing Buffer、ダコサイトメーション（DakoCytomation）社製］、ポリエチレングリコール (PEG) 等が挙げられる。界面活性剤としては、例えば非イオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、アニオン性界面活性剤、両性界面活性剤等が挙げられる。
＜工程（３）＞
　工程（３）において、酸化HDL濃度と測定値との間の関係を示す検量線は、既知濃度の酸化HDL濃度を有する標準品を検体として用いて、前述の酸化HDLの測定方法により測定を行い、得られた測定値と酸化HDL濃度とから作成することができる。
＜工程（４）＞
　工程（４）において、工程（１）で採取された検体中の酸化HDL濃度は、当該検体を用いて、前述の酸化HDLの測定方法により測定を行い、得られた測定値と上述の検量線とから決定することができる。
＜工程（５）＞
　工程（５）において、工程（４）で決定された当該検体中の酸化HDLの濃度が健常人における酸化HDL濃度以上の場合には、当該患者は脂質異常症治療が必要であり、健常人における酸化HDL濃度未満の場合には、当該患者は脂質異常症治療が必要でない、という基準と比較する。
＜工程（６）＞
　工程（６）において、工程（５）での比較の結果、工程（４）で決定された当該検体中の酸化HDLの濃度が健常人における酸化HDL濃度以上の場合には、当該被検者は脂質異常症治療が必要であると判定し、健常人における酸化HDL濃度未満の場合は、当該被検者は脂質異常症治療が必要でないと判定する。
　本発明における健常人における酸化HDL濃度としては、例えば30 U/Lであり、酸化HDL濃度の全HDL-PL濃度に対する割合としては、例えば0.22 U・dL/mg・Lである。なお、ここでの単位“U/L”とは、1 mg/LのHDL-PLを銅酸化して得られる酸化HDLを1 U/L酸化HDLとして定義されるものである。
　本発明における脂質異常症治療とは、被検者の酸化HDLを低下させる治療であれば特に制限はなく、例えば脂質異常症治療薬による治療等が挙げられる。脂質異常症治療薬としては、被検者の酸化HDLを低下させる治療薬であれば特に制限はなく、例えばコレステロール異化促進薬等が挙げられる。コレステロール異化促進薬としては、例えばプロブコール等が挙げられる。
２．脂質異常症治療が必要な被検者の選別用試薬
　本発明の、脂質異常症治療が必要な被検者の選別用試薬は、酸化HDL測定試薬を含有することを特徴とする試薬である。本発明の脂質異常症治療が必要な被検者の選別用試薬は、本発明の、脂質異常症治療が必要な被検者の選別方法に用いることができる。また、本発明の、脂質異常症治療が必要な被検者の選別用試薬には、さらに、被検者より採取された検体中の酸化HDL濃度が健常人における酸化HDL濃度以上の場合には、当該被検者は脂質異常症治療が必要であり、健常人における酸化HDL濃度未満の場合には、当該被検者は脂質異常症治療が必要ではない、という基準が記載された基準表が含まれていてもよい。
　本発明の、脂質異常症治療が必要な被検者の選別用試薬における酸化HDL測定試薬は、前述の酸化HDLの測定方法に使用される試薬である。酸化HDL測定試薬としては、検体中の酸化HDLを測定し得る試薬であれば特に制限はなく、例えば免疫学的測定試薬等が挙げられる。免疫学的測定試薬としては、例えば前述の免疫学的測定方法に基づく試薬等が挙げられる。
　免疫学的測定法に基づいた、酸化HDL測定試薬の具体的態様を以下に示す。
・測定試薬１
　酸化リポ蛋白質に結合する第１抗体、及び、HDLに結合する第２抗体に標識が結合した標識化第２抗体を含む酸化HDL測定試薬。
・測定試薬２
　HDLに結合する第１抗体、及び、酸化リポ蛋白質に結合する第２抗体に標識が結合した標識化第２抗体を含む酸化HDL測定試薬。
　HDLに結合する抗体、酸化リポ蛋白質に結合する抗体、標識化抗体中の標識としては、例えば前述のHDLに結合する抗体、酸化リポ蛋白質に結合する抗体、標識化抗体中の標識等がそれぞれ挙げられる。
　測定試薬１において、酸化リポ蛋白質に結合する第１抗体は不溶性担体に固定化されていても、固定化されていなくてもよいが、固定化されていることが好ましい。不溶性担体としては、例えば前述の不溶性担体等が挙げられる。測定試薬２において、HDLに結合する第１抗体は不溶性担体に固定化されていても、固定化されていなくてもよいが、固定化されていることが好ましい。不溶性担体としては、例えば前述の不溶性担体等が挙げられる。
　酸化HDL測定試薬には、前述の水性媒体、金属イオン、塩類、糖類、防腐剤、蛋白質、蛋白質安定化剤、界面活性剤等が含まれていてもよい。
　本発明において、酸化HDL測定試薬を用いて、脂質異常症治療が必要な被検者を選別する方法としては、例えば以下の工程を含有する方法等が挙げられる。
（１）被検者から検体を採取する工程；
（２）工程（１）で採取した検体中の酸化HDLを、酸化HDL測定試薬を用いて測定し、測定値を得る工程；
（３）既知濃度の酸化HDLを検体として用いて、工程（２）と同様の方法により測定値を得て、酸化HDL濃度と測定値との間の関係を示す検量線を作成する工程；
（４）工程（２）で得られた測定値と、工程（３）で作成した酸化HDL濃度と測定値との間の関係を示す検量線とから、当該検体中の酸化HDL濃度を決定する工程；
（５）工程（４）で決定された酸化HDLの濃度が、当該検体中の酸化HDLの濃度が健常人における酸化HDL濃度以上の場合には、当該患者は脂質異常症治療が必要であり、健常人における酸化HDL濃度未満の場合には、当該患者は脂質異常症治療が必要でない、という基準と比較する工程；
（６）工程（５）での比較の結果、工程（４）で決定された当該検体中の酸化HDLの濃度が健常人における酸化HDL濃度以上の場合には、当該被検者は脂質異常症治療が必要であると判定し、健常人における酸化HDL濃度未満の場合は、当該被検者は脂質異常症治療が必要でないと判定する工程。
　検体としては、例えば前述の検体等が挙げられる。工程（１）で採取された検体中の酸化HDLの測定は、酸化HDL測定試薬を用いて行われる。酸化HDL測定試薬としては、例えば前述の酸化HDL測定試薬等が挙げられる。酸化HDL濃度と測定値との間の関係を示す検量線は、前述の方法等により作成することができる。工程（１）で採取された検体中の酸化HDL濃度は、前述の方法等により決定することができる。決定された酸化HDL濃度と比較される健常人における酸化HDL濃度としては、前述の健常人における酸化HDL濃度等が挙げられる。決定された酸化HDL濃度と健常人における酸化HDL濃度との比較により、脂質異常症治療が必要な被検者を選別することができる。
　以下、実施例により本発明を説明するが、本発明はこの実施例に限定されるものではない。
［実施例１］
被検者より採取された血清中の酸化HDL濃度の決定
（１）酸化HDL測定試薬
　以下の、DLH3抗体固定化プレート、ペルオキシダーゼ標識化抗アポＡＩ抗体溶液を含有する酸化HDL測定試薬を調製した。
＜DLH3抗体固定化プレート＞
　96ウエルマイクロプレート（ヌンク社製）の各ウェルに、特開平7-238098に記載の方法で作製したDLH3抗体の10μg/mL Tris-HCl緩衝液(pH8.0)溶液を、100μL/ウェルとなるように加えて、4℃ で16時間インキュベートし、次いで、Tris-HCl緩衝液溶液を除去し、1%(w/v)BSAを含むTris-HCl緩衝液(pH8.0)を各ウェルに350μLを加えて25℃で2時間インキュベートすることによりブロッキングし、その後、0.05%(w/v)Tween20を含むPBS(pH7.4)で4回洗浄し、DLH3抗体が固定化されたプレートを調製した。
＜ペルオキシダーゼ標識化抗アポＡＩ抗体溶液＞
　Peroxidase Labeling Kit - NH2 (同仁化学研究所社製)を用いて、当該キットに添付されたプロトコールに従って、抗アポＡＩマウスモノクローナル抗体 (Abnova社製)をペルオキシダーゼで標識し、ペルオキシダーゼ標識化抗アポＡＩ抗体を調製した。
（２）検量線の作成１～酸化HDL濃度と測定値（吸光度）との間の関係を示す検量線
　HDL-PLを、硫酸銅を用いて酸化して得られた2 mU/L、4 mU/L、8 mU/Lの各濃度の酸化HDLの反応緩衝液［0.1 g/L Tween 20、48 g/L PEG6000及び10 g/L BSAを含有するPBS(pH7.4）］溶液、並びに、反応緩衝液（酸化HDL濃度：0 U/L）を標準溶液として用いた。なお、ここで、1mU/Lの酸化HDLとは、1μg/LのHDL-PLを銅酸化して得られる酸化HDLを意味する。
　上記（１）で調製したDLH3抗体固定化プレートの各ウェルに、各標準溶液100μLを添加し、37℃で2時間反応を行った（１次反応）。１次反応後のプレートの各ウェルを、0.05% Tween 20を含むリン酸緩衝生理食塩水(PBST)で洗浄した後、各ウェルに、上記（１）で調製したペルオキシダーゼ標識化抗アポＡＩ抗体溶液100μLを添加し、37℃で1時間反応を行った（２次反応）。２次反応後のプレートの各ウェルをPBSTで洗浄した後、各ウェルに、TMB(3,3',5,5'-テトラメチルベンジジン)水溶液を100μL添加し、37℃で20分間反応を行い、0.5 mol/L 硫酸50μLを添加し反応を停止した（発色反応）。発色反応で得られた反応液の450 nmでの吸光度を測定し、酸化HDL濃度と吸光度との間の関係を示す検量線を作成した。
（３）検量線の作成２～リン脂質濃度と測定値（吸光度）との間の関係を示す検量線
　リン脂質測定用キット「デタミナーＬ　ＰＬ」（協和メデックス社製）を用いて、当該キットの添付文書に記載の方法に従って、デタミナー標準血清脂質測定用（協和メデックス社製）を標準品として用いて測定を行い、リン脂質濃度と測定値（吸光度）との間の関係を示す検量線を作成した。
（４）被検者より採取した血清中の酸化HDLの測定～プロブコール内服群とプロブコール非内服群との比較
　大阪大学医学部附属病院通院中の患者で、脂質異常症の患者について、プロブコールを内服した群（39名）とプロブコールを内服しなかった群（138名）とに分けた。
上記（２）における標準溶液の代わりに、プロブコールを内服した群（39名）の各被検者より得られた血清を用いる以外は、上記（２）と同様の方法により測定を行い、各被検者より得られた血清に対する吸光度を測定した。測定した吸光度と上記（２）で作成した検量線とから、各被検者より採取した血清中の酸化HDL濃度を決定した。同様に、プロブコールを内服しなかった群（138名）の各被検者より採取した血清中の酸化HDL濃度を決定した。結果を図１に示す。
　図１から明らかな様に、プロブコールを内服しなかった群の各被検者より得られた血清中の平均酸化HDL濃度は、30.0±8.1 U/Lであったのに対して、プロブコールを内服した群の各被検者より得られた血清中の平均酸化HDL濃度は、18.7±6.6 U/Lであり、プロブコールを内服しなかった群に比較して、プロブコールを内服した群の方が有意に、血清中の酸化HDL濃度が低かった(P<0.05)。この様に、プロブコール内服群と非内服群との間で、酸化HDL濃度が有意に異なっていたことから、コレステロール異化促進薬であるプロブコールが酸化HDL濃度を低減させる作用があることが明らかとなった。プロブコールは脂質異常症の治療薬の１つである。従って、酸化HDL濃度が高い被検者を選別し、当該被検者に対して、脂質異常症の治療薬を投与すれば、酸化HDLを低減でき、脂質異常症の治療効果が期待できる。
（５）被検者より採取した血清中の酸化HDL及びHDL-PLの測定～プロブコール内服群とプロブコール非内服群との比較
　上記（４）と同じプロブコールを内服した群（39名）について、DCM(Designated Comparison Method)に従って、各被検者より採取された血清からHDL分画を分離し、分離したHDL分画中のリン脂質を「デタミナーＬ　ＰＬ」（協和メデックス社製）を用いて測定した。測定により得られた測定値（吸光度）と、上記（３）で作成した検量線とから、HDL-PL濃度を決定した。
　上記（４）で決定した、プロブコールを内服した患者群（39名）の各患者より得られた血清中の酸化HDL濃度と、上記で決定した」HDL-PL濃度とから、同一患者由来の血清における酸化HDL濃度のHDL-PL濃度に対する比(酸化HDL/HDL-PL)を決定した。
　同様に、上記（４）と同じプロブコールを内服した群の代わりに、上記（４）と同じプロブコールを内服しなかった群を用いて、プロブコールを内服しなかった群の同一被検者より採取した血清中酸化HDL濃度のHDL-PL濃度に対する比(酸化HDL/HDL-PL)を決定した。結果を図２に示す。
　図２から明らかな様に、プロブコールを内服しなかった群の各被検者より得られた血清における酸化HDL/HDL-PLの平均値は、0.224±0.049 U・dL/mg・Lであったのに対して、プロブコールを内服した群の各被検者より得られた血清における酸化HDL/HDL-PLの平均値は、0.206±0.045 U・dL/mg・Lであり、プロブコールを内服しなかった群に比較して、プロブコールを内服した群の方が有意に、血清における酸化HDL/HDL-PLが低かった(P<0.05)。この様に、プロブコール内服群と非内服群との間で、酸化HDL/HDL-PLが有意に異なっていたことから、コレステロール異化促進薬であるプロブコールが酸化HDL濃度を低減させる作用があることが明らかとなった。プロブコールは脂質異常症の治療薬の１つである。従って、酸化HDL濃度が高い被検者を選別し、当該被検者に対して、脂質異常症の治療薬を投与すれば、酸化HDLを低減でき、脂質異常症の治療効果が期待できる。
　本発明の、脂質異常症治療が必要な被検者の選別方法、及び、脂質異常症治療が必要な被検者の選別用試薬は、臨床診断において有用である。

Claims (17)

  1. 　被検者より採取した検体中の酸化高密度リポ蛋白質（以下、酸化HDLという）の濃度を測定することを特徴とする、脂質異常症治療が必要な被検者の選別方法。
  2. 　以下（１）～（３）の工程を含む、請求項１記載の方法。
    （１）被検者から検体を採取する工程；
    （２）工程（１）で採取した検体中の酸化HDLの濃度を測定する工程；
    （３）工程（２）で測定した酸化HDLの濃度が、健常人における酸化HDL濃度よりも高い場合は、当該被検者は脂質異常症治療が必要であると判定し、健常人における酸化HDL濃度よりも低い場合は、当該被検者は脂質異常症治療が必要でないと判定する工程
  3. 　前記酸化HDLの濃度の測定が、免疫学的測定法により行われる請求項１又は２記載の方法。
  4. 　前記免疫学的測定法が、酸化ホスファチジルコリンに結合する抗体、又は、ホスホコリンに結合する抗体と、高密度リポ蛋白質に結合する抗体とを用いて行われる方法である請求項３記載の方法。
  5. 　前記高密度リポ蛋白質に結合する抗体が、アポＡ蛋白質に結合する抗体である請求項４記載の方法。
  6. 　前記脂質異常症治療が、脂質異常症治療薬による治療である請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。
  7. 　前記脂質異常症治療薬が、コレステロール異化促進薬である請求項６記載の方法。
  8. 　前記コレステロール異化促進薬が、プロブコールである請求項７記載の方法。
  9. 　前記検体が、血液である請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。
  10. 　酸化高密度リポ蛋白質測定試薬（以下、酸化HDL測定試薬という）を含有することを特徴とする、脂質異常症治療が必要な被検者の選別用試薬。
  11. 　前記酸化HDL測定試薬が、免疫学的測定試薬である請求項１０記載の試薬。
  12. 　前記免疫学的測定試薬が、酸化ホスファチジルコリンに結合する抗体、又は、ホスホコリンに結合する抗体と、高密度リポ蛋白質に結合する抗体とを含む試薬である請求項１１記載の試薬。
  13. 　前記高密度リポ蛋白質に結合する抗体が、アポＡ蛋白質に結合する抗体である請求項１２記載の試薬。
  14. 　前記脂質異常症治療が、脂質異常症治療薬による治療である請求項１０～１３のいずれか１項に記載の試薬。
  15. 　前記脂質異常症治療薬が、コレステロール異化促進薬である請求項１４記載の試薬。
  16. 　前記コレステロール異化促進薬が、プロブコールである請求項１５記載の試薬。
  17. 　前記酸化HDL測定試薬が、血液中の酸化HDLを測定するための試薬である、請求項１０～１６のいずれか１項に記載の試薬。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021200797A1 (ja) * 2020-03-30 2021-10-07 国立大学法人信州大学 変性ｈｄｌの定量方法、及びそれに用いる分析用試薬

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH08304395A (ja) * 1995-04-28 1996-11-22 Betsuseru Res Lab:Kk ヒト酸化リポタンパク質の測定法
JPH0933525A (ja) * 1995-07-21 1997-02-07 Yamasa Shoyu Co Ltd 酸化ｈｄｌの測定法及びキット
JP2003279571A (ja) * 2002-03-20 2003-10-02 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 炎症性疾患検出方法、検出薬、およびその予防治療薬探索方法
JP2003529775A (ja) * 2000-03-31 2003-10-07 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 高密度リポタンパク質の機能アッセイ
JP2009513953A (ja) * 2005-10-14 2009-04-02 インスティトュート デ カーディオロジー デ モントリオール 生物試料の酸化ストレスのバイオマーカを検出する方法
JP2015010879A (ja) * 2013-06-27 2015-01-19 中野 恵正 機能不全ｈｄｌの測定方法、機能不全ｈｄｌ測定用キット、並びに、生活習慣病の検出方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH08304395A (ja) * 1995-04-28 1996-11-22 Betsuseru Res Lab:Kk ヒト酸化リポタンパク質の測定法
JPH0933525A (ja) * 1995-07-21 1997-02-07 Yamasa Shoyu Co Ltd 酸化ｈｄｌの測定法及びキット
JP2003529775A (ja) * 2000-03-31 2003-10-07 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 高密度リポタンパク質の機能アッセイ
JP2003279571A (ja) * 2002-03-20 2003-10-02 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 炎症性疾患検出方法、検出薬、およびその予防治療薬探索方法
JP2009513953A (ja) * 2005-10-14 2009-04-02 インスティトュート デ カーディオロジー デ モントリオール 生物試料の酸化ストレスのバイオマーカを検出する方法
JP2015010879A (ja) * 2013-06-27 2015-01-19 中野 恵正 機能不全ｈｄｌの測定方法、機能不全ｈｄｌ測定用キット、並びに、生活習慣病の検出方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MARIN, M. T. ET AL.: "Oxidized HDL and LDL in adolescents with type 2 diabetes compared to normal weight and obese peers", JOURNAL OF DIABETES AND ITS COMPLICATIONS, vol. 29, no. 5, July 2015 (2015-07-01), pages 679 - 685, XP055502110 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021200797A1 (ja) * 2020-03-30 2021-10-07 国立大学法人信州大学 変性ｈｄｌの定量方法、及びそれに用いる分析用試薬

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