WO2018021848A1 - 히비스커스 추출물을 함유하는 탈모방지 또는 발모촉진용 조성물 - Google Patents
히비스커스 추출물을 함유하는 탈모방지 또는 발모촉진용 조성물 Download PDFInfo
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- A23V2200/318—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on skin health and hair or coat
Definitions
- the present invention was made by the task number R0004737 under the support of the Ministry of Trade, Industry and Energy, the research management agency of the project is the Jeonnam regional project evaluation group, the research project name is "economic cooperation zone industry development project", the research project name is "natural vegetable properties , Hibiscus, etc.) Development of hair loss improvement hair care products using complex extracts ”, The host organization is Damian Co., Ltd., the research period is 2015.10.01 ⁇ 2018.09.30.
- the present invention relates to a hair loss prevention or hair growth promoting composition, and more particularly to a hair loss prevention or hair growth promoting composition containing a hibiscus extract.
- Hair loss patients are rapidly increasing in the modern society, and their concern and concern are intensifying.
- the hair on the scalp of our body grows by 0.3mm every day and grows 15cm a year. It is known that 85% of the whole grows and the remaining 15% stops growing. Falling hair is mainly hair that has stopped growing, and hair loss means an increase in the percentage of hair that has stopped growing. Normally, 80 to 100 hairs fall out per day, but 100 hairs otherwise Abnormalities are lost, the hair growth weakens the growth phase is shortened and the period until the next growth period means that even grown hair does not grow properly.
- Alopecia refers to a condition in which the hair of the body, especially the hair, is insufficient.
- the most common causes of hair loss are genetic predisposition, male hormones, and aging. Others include blood circulation disorders, excessive stress, malnutrition, seborrheic dermatitis, misuse of hair care products, and excessive pigmentation It is also known to work in combination.
- testosterone becomes 5- ⁇ dihydrotestosterone (DHT) by 5-a reductase, which delays protein synthesis of hair follicle cells, increases the proportion of resting hair follicles, and progresses hair loss with age. do.
- DHT dihydrotestosterone
- Hair loss treatment includes oral administration, topical application and hair transplantation.
- FDA-approved drugs include Minoxidil and Finasteride.
- Minoxidi l was developed as a vasodilator for the treatment of hypertension, but as a side effect, hirsutism was reported.
- Finasteride which is used as an oral medicine, is used for the treatment of androgenetic alopecia by inhibiting the activity of 5- ⁇ reductase type ⁇ by lowering the concentration of dihydrotestosterone (DHT), an intermediate metabolite of androgens.
- DHT dihydrotestosterone
- the efficacy of minoxidil and finasteride is not uniform among people, and side effects have been reported.
- treatment for alopecia is not perfect, The demand for effective and safe treatments is not decreasing. Therefore, it is necessary to differentiate research through the development of effective hair loss prevention and treatment using herbal medicines.
- Hibiscus sabdari ffa L. is a plant belonging to the mallow family and grows mainly in the tropics and subtropics. The two and red cup calyxes are consumed not only as cold drinks but also as teas, including high blood pressure, fever, liver disease, inflammation, gallstones and It is effective against obesity. Hibiscus extract has been reported to reduce total lipids, cholesterol and triglycerides, and has been reported to have excellent antihyperlipidemia, antioxidant and anticancer effects.
- the present inventors have made intensive research to overcome the problems of the prior art, and in the case of the hibiscus extract of the present invention, it has been confirmed an excellent hair loss prevention or hair growth promoting effect, and completed the present invention.
- the main object of the present invention is to provide a hair loss prevention or hair growth promoting composition containing a hibiscus extract excellent in hair loss prevention or hair growth promoting effect.
- the present invention provides a composition for preventing hair loss or promoting hair growth using the hibiscus extract as an active ingredient.
- the treatment methods for them are also diversified.
- the development of a complete hair loss treatment method is still insignificant. Accordingly, the inventors of the present invention, while studying effective hair loss prevention and treatment using herbal medicine, found that the hibiscus extract is excellent in hair loss prevention and hair growth promoting effect and completed the present invention.
- the extract can be extracted with any solvent conventionally used, preferably characterized in that extracted with water, lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms or a mixed solvent thereof.
- the extract can be extracted by any extraction method used in the prior art, preferably hibiscus can be extracted by dipping for 2 to 4 hours in a solvent.
- an extraction method using an extraction solvent conventional extraction methods of plants, for example, hot water extraction, reflux cooling extraction, ultrasonic extraction, supercritical extraction and the like can be used.
- the extract may be an ethanol extract, but is not limited thereto.
- the extraction method is not particularly limited and includes, for example, hot water extraction, steam extraction, ultrasonic extraction and reflux extraction.
- the drying step after concentration includes spray drying, hot air drying, freeze drying, vacuum drying, reduced pressure drying, foam drying, high frequency drying, infrared drying, and the like.
- the extract is concentrated to powdered tea of functional tea bags It is characterized by being used as a material.
- the term 'functional tea bag tea' of the present invention is a tea (Tea) which has enhanced specific functions, such as digestion, skin soothing effect, and bronchial improvement, and specifically, tea leaf or branched tea or cotton, nylon sieve It refers to a car with a certain function in the back pocket.
- tea tea
- bronchial improvement a tea which has enhanced specific functions, such as digestion, skin soothing effect, and bronchial improvement, and specifically, tea leaf or branched tea or cotton, nylon sieve It refers to a car with a certain function in the back pocket.
- the hibiscus or hair growth promoting function was strengthened and concentrated by hibiscus tea bag.
- the extract is characterized in that it is used as a material of functional shampoos and treatments.
- the hibiscus extract showed an excellent or similar level of wool capacity than the positive control, the skin tissue
- the number of hair follicles increased similarly to the positive control.
- the enzyme activity is increased when the hibiscus extract is treated.
- the hibiscus extract was confirmed to increase the expression of the hair growth factor.
- hibiscus extract is suitable as an antioxidant that helps the blood circulation of the scalp and reduces the free radicals that break down proteins, thereby reducing DHT, the main cause of hair loss.
- the hibiscus extract of the present invention may exhibit hair loss prevention or hair growth promoting effects (see Experimental Examples 1 to 6).
- the hibiscus extract of the present invention does not exhibit cytotoxicity and is safe as a teabag tea material and a cosmetic material.
- the extract is characterized in that it comprises 0.01 to 40% by weight relative to the total weight of the composition. This was set in the weight range in consideration of the stabilization of each palatability and product formulation during development from functional tea bag tea products to functional shampoos and treatment products. In the case of shampoos and treatments, the formulation may not be stabilized and the formulation may not be formed when it exceeds the increase range.
- the composition containing the hibiscus extract of the present invention is safe because it does not exhibit cytotoxicity, has an excellent antioxidant effect, increases enzyme expression and hair growth factor expression which helps hair formation, as well as in vivo. Since promoting hair growth, hair loss improvement or hair growth promoting effect is excellent, can be used as a tea bag tea composition or functional hair products for hair loss improvement or hair growth promotion.
- 1 is a view showing the results of measuring the antioxidant capacity (DPPH) of hibiscus extract.
- SOD antioxidant capacity
- 3 is a view showing the results of measuring the dermal papilla cell proliferation capacity of the hibiscus extract.
- 4 is a diagram illustrating a method of deriving a K value using Photoshop.
- 5 is a view showing the results of measuring the wool capacity in vivo (0 day).
- 6 is a view showing the results of measuring the wool capacity in vivo (7 days).
- 7 is a view showing the results of measuring the wool capacity in vivo (10 days).
- 8 is a view showing the results of measuring the wool capacity in vivo (14 days).
- 9 is a view showing the results of measuring the wool capacity in vivo (21 days).
- 10 is a diagram showing the results of the visual evaluation of wool ability.
- FIG. 12 is a diagram showing the results of evaluation of the wool ability in the tissue of the skin.
- FIG. 13 is a view showing the result of counting the number of hair follicles of the skin tissue.
- Fig. 15 shows the result of measuring Y-GT enzyme activity.
- FIG. 16 shows the results of measuring changes in VEGF, a hair growth factor.
- FIG. 17 shows the results of measuring changes in IGF-1, a hair growth factor.
- FIG. Fig. 18 shows the results of measuring changes in TGF- ⁇ ⁇ , the hair growth factor.
- the hibiscus used in this experiment was calyx imported from Sudan, Africa The raw material dried as a product was used. After adding 80 L of purified water to 10 kg of the raw material which was not pulverized, the resultant was extracted at 95 ° C. for the first 3 hours and the second 3 hours. Thereafter, the mixture was concentrated to 25 brix at 60 ° C.
- Example 2 Preparation of Hibiscus Alcohol Extract
- DPPH 2,2-diphenyl_l-pycryl-hydrazyl
- DPPH 2,2-diphenyl-l-pycryl-hydrazyl
- HFDPC Human follicle dermal cells
- the dorsal hair of 6-week-old mice whose hair growth cycle was at rest was shaved with animalclipper (Panasonic ER1431p, Japan), and the remaining hair was removed secondarily with a hair removal cream beat (veet, Reckitt Benckiser. France).
- the test drug was applied for 3 weeks after 3 days of second epilation.
- the skin tissue was cut out into fine sections under ice-cooling, and a certain amount was weighed, and then 4 times the phosphate buffer solution (PBS) of the skin tissue was added to make a homogenate using a homogenizer. After that, homogenate The centrifuge was centrifuged at 12,000 rpm for 20 minutes at 4 ° C. The supernatant was analyzed by alkaline phosphatase (ALP) and ⁇ -glutamyl transpeptidase (Y-GT) using an automatic biochemical analyzer. The results are shown in FIGS. 14 and 15.
- ALP alkaline phosphatase
- Y-GT ⁇ -glutamyl transpeptidase
- ALP enzymes are known as angiogenesis indicators of hair growth and induce wool by feeding the capillaries. ALP enzymes show high activity during the hair growth phase and greatly decrease during the resting phase.
- the modern control minoxidil 155.25 ⁇ 32.84 U / L
- sigma minoxidil 156.8 ⁇ 7.6
- U / L showed a significant increase
- hibiscus integer (120.3 ⁇ 24.4 U / L
- hibiscus alcohol 106.25 ⁇ 15.65 U / L
- yGT is involved in oxidative stress in vivo, glutathione metabolism and amino acid and peptide hop number and secretion through cell membrane. It is expressed in cells with high proliferation and division, shows high activity during hair growth, and greatly decreases during resting period. .
- the positive control group modern drug minoxidil (37.25 ⁇ 13.86 U / L) and sigma minoxidil (39.67 ⁇ 9.87 U / L), were significantly increased compared to the negative control group (2.75 ⁇ 1.25 U / L).
- VEGF Vascular endothelial growth factor
- IGF insulin like growth factor
- TGF— ⁇ transforming growth factor beta 1
- TM Total RNA extraction kit (iNtRON Biotechnology, Korea) and then extract the mRNA, TaqMan RNA-to-Ct TM 1—Step Kit using extract and primer (insulin like growth factorl (IGF-l), transforming growth factor beta KTGF - ⁇ ) and vascular endothelial growth factor (VEGF) and repeat at 40 ° C for 15 minutes at 48 ° C, 10 minutes once at 95 ° C, 15 seconds at 95 ° C, and 1 minute at 60 ° C on a StepOne machine. The threshold cycle value was measured. The results are shown in FIGS. 16 and 18.
- IGF-l insulin like growth factorl
- beta KTGF - ⁇ transforming growth factor beta KTGF - ⁇
- VEGF vascular endothelial growth factor
- IGF-1 insulin like growth factor-1
- a hair growth factor present in the skin is known to inhibit hair cell follicle cell death by promoting functional activity of hair.
- Transforming growth factor beta KTGF- ⁇ is a factor that impedes hair growth during the hair growth phase.
- TGF- ⁇ mRNA in the skin tissue on day 21
- the hibiscus purified water and hibiscus alcohol used as test drugs showed high antioxidant effect and significantly increased the proliferation rate of dermal papilla cells.
- the wool ability was significantly higher, especially 3% sigma minoxidil, which was used as a positive control in the macroscopic and histological (hair follicle) evaluation of the Hibiscus alcohol group. It exhibited a similar degree of wool capacity.
- These hair capacities are thought to shorten the time of hair regrowth in the hair growth cycle by ALP, ⁇ -GT and VEGF, which are involved in angiogenesis in skin tissues, which influence hair growth in C57BL / 6J.
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Abstract
본 발명은 히비스커스 추출물을 함유하는 탈모방지 또는 발모촉진용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따르면, 본원발명 히비스커스 추출물을 함유하는 조성물은 세포독성을 나타내지 않아 안전하며, 항산화 효과가 우수하며, 모발 형성에 도움을 주는 효소 활성 및 모발성장인자 발현을 증가시킬 뿐만 아니라 in vivo에서 발모를 촉진하므로, 탈모 개선 또는 발모촉진 효과가 우수하여 탈모개선 또는 발모촉진용 티백차 조성물 또는 기능성 헤어제품으로 이용될 수 있다.
Description
【명세서】
【발명의 명칭】
히비스커스 추출물을 함유하는 탈모방지 또는 발모촉진용 조성물 【기술분야】
본 발명은 대한민국 산업통상자원부 지원 하에 과제번호 R0004737에 의해 이루어진 것으로서, 상기 과제의 연구관리전문기관은 전남지역사업평가단, 연구사업명은 "경제협력권산업육성사업" , 연구과제명은 "천연식물성 (암라, 히비스커스 등) 복합추출물을 활용한 탈모개선 헤어 케어 제품 개발" , 주관기관은 농업회사법인 (주)다미안, 연구기간은 2015.10.01 ~ 2018.09.30이다. 본 발명은 탈모방지 또는 발모촉진용 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 히비스커스 추출물을 함유하는 탈모방지 또는 발모촉진용 조성물에 관한 것이다.
【배경기술】
현대사회로 가면서 탈모환자가급격히 증가하고 있으며, 그에 대한 관심과 고민도 점점 더 심화되고 있다. 우리 몸의 두피에 있는 머리카락은 매일 0.3mm씩 자라 1년에 총 15cm가자라며, 전체의 85% 정도가 성장하고 나머지 15%는 성장을 멈추는 것으로 알려져 있다. 빠지는 머리카락은 주로 성장을 멈춘 머리카락인데, 탈모는 빠지는 대상이 되는 성장을 멈춘 머리카락의 비율이 늘어남을 의미한다. 정상의 경우, 머리카락은 하루에 80~100개가 빠지지만 그렇지 않은 경우 100개
이상이 빠지며, 모모세포의 힘이 약해지면서 성장기가 짧아지고 다음 성장기까지의 기간이 길어지면서 자라난 모발조차 제대로 성장하지 못하는 것을 의미한다 .
탈모증 (脫毛症, Baldness)란, 신체의 털, 특히 머리카락이 부족한 상태를 말한다. 탈모의 가장 큰 원인으로는 유전적인 소인과 남성호르몬, 그리고 노화현상으로 알려져 있고, 그 밖에 혈액순환장애, 과다한 스트레스, 영양불균형, 지루성 피부염, 모발 관리제품의 잘못된 사용이나 과다한 염색 탈색 둥의 미용관리도 복합적으로 작용하는 것으로 알려져 있다. 유전적인 소인이 있는 사람의 모낭에서 테스토스테론이 5- a reductase에 의해 5- α dihydrotestosterone(DHT)으로 되며, 이에 의해 모낭세포의 단백 합성이 지연되어 휴지기 모낭의 비율이 증가하며 나이가 들면서 탈모가 진행된다. 국소적으로 두피의 전두부 및 두정부의 모발이 연모로 변하여 점차 가늘어지고 길이가 짧아지며 모낭이 소형화되면서 미만성으로 소실되어 가는 것을 특징으로 한다.
탈모에 대한 치료는 경구복용법, 국소도포, 모발이식술을 이용하고 있으며 FDA의 허가를 취득한 약물로 Minoxidi l과 Finasteride가 있다. Minoxidi l은 고혈압 치료를 위한 혈관 확장제로 개발되었으나 부작용으로 다모증이 보고되면서 발모제로 개발되었다. 내복약으로 사용되는 Finasteride는 5- α reductase type Π의 활성을 억제함으로써 안드로젠의 중간 대사체인 dihydrotestosterone(DHT)의 농도를 낮추는 기전을 통하여 남성형 탈모의 치료에 이용되고 있다. 그러나 Minoxidi l과 Finaster ide의 효능은 사람마다 일률적이지 않고, 부작용들이 보고되고 있다. 현재 탈모증에 대한 치료는 완벽하지 않으며,
효과적이고 안전한 치료법에 대한 수요는 줄지 않고 있다. 따라서 한약재를 이용한 효과적인 탈모 예방 및 치료 물질의 개발을 통한 차별화 된 연구가 필요한실정이다.
히비스커스 (Hibiscus sabdari ffa L. )은 아욱과에 속하는 식물로서 열대와 아열대 지방에서 주로 자라며, 두¾고 붉은 컵 모양의 꽃받침은 냉 음료뿐만 아니라 차로 음용되는데 고혈압, 발열, 간질환, 염증, 담석 및 비만에 효과가 있다. 히비스커스 추출물은 총 지질과 콜레스테를, 중성지방의 감소 효과가 보고되었으며, 고지혈증 예방과 항산화 효과, 항암 효과가 탁월한 것으로 보고되고 있다.
이에, 본 발명자들은 상기 종래기술들의 문제점들을 극복하기 위하여 예의 연구노력한 결과, 본원발명의 히비스커스 추출물의 경우, 우수한 탈모방지 또는 발모촉진 효과를 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.
【발명의 상세한 설명】
【기술적 과제】
따라서, 본 발명의 주된 목적은 탈모방지 또는 발모촉진 효과가 우수한 히비스커스 추출물을 함유하는 탈모방지 또는 발모촉진용 조성물을 제공하는데 있다.
【기술적 해결방법】
본 발명의 한 양태에 따르면, 본 발명은 히비스커스 추출물을 유효성분으로 하는 탈모방지 또는 발모촉진용 조성물을 제공한다.
현대사회로 가면서 탈모환자가 급격히 증가하면서 그에 대한 치료방법 또한 다양해지고 있다. 하지만, 완벽한 탈모증 치료방법에 대한 개발은 여전히 미미한 실정이다. 이에, 본 발명자들은 한약재를 이용한 효과적인 탈모 예방 및 치료물질을 연구하던 중, 히비스커스 추출물이 탈모방지 및 발모촉진 효과가 우수하다는 것을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명에 있어서, 추출물은 종래에 사용되어진 어떠한 용매로도 추출할 수 있으며, 바람직하게는 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 흔합용매로 추출한 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 추출물은 종래에 사용되어진 어떠한 추출방법으로 추출할 수 있으며, 바람직하게는 히비스커스를 용매에 2 내지 4시간 동안 침적하여 추출할 수 있다. 추출용매를 이용한 추출방법으로는 통상적인 식물의 추출방법 예를들면, 열수 추출, 환류냉각 추출, 초음파 추출, 초임계 추출 등의 방법을 사용할 수 있다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 제조방법에서, 상기 추출물은 에탄올 추출물일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 추출하는 유기용매에 따라 약재의 유효성분의 추출 정도와 손실 정도가 차이날 수 있으므로, 알맞은 유기용매를 선택하여 사용하도록 한다. 추출방법은 특별히 제한되지 않고 예를 들어 열수 추출, 넁침 추출, 초음파 추출 및 환류 추출 둥이 있다. 추출액을 농축할 경우에는 감압농축, 역삼투압 농축 등의 방법이 사용될 수 있다. 농축 후 건조 단계는 분무건조, 열풍건조, 동결건조, 진공건조, 감압건조, 포말건조, 고주파건조, 적외선건조 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 있어서, 상기 추출물은 농축 분말화하여 기능성 티백차의
소재로 사용되는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 상기 용어 '기능성 티백차' 란, 소화기능개선, 피부진정효과, 기관지개선 등의 특정 기능이 강화된 차 (Tea)로서, 구체적으로는, 차잎 내지 분차를 거친 목면이나 여지, 나일론 체 등의 주머니에 넣은 특정 기능이 강화된 차를 일컫는다. 본 발명에서는 탈모방지 또는 발모촉진 기능이 강화된 히비스커스를 농축 및 분말화하여 티백화하였다.
본 발명에 있어서, 상기 추출물은 기능성 샴푸 및 트리트먼트의 소재로 사용되는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 실험예에 따르면, 본 발명의 히비스커스 추출물의 양모능을 확인하기 위하여 in vivo 실험을 통해 확인한 결과, 히비스커스 추출물은 양성 대조군에 비해 양모능이 우수하거나 유사한 수준의 효과를 나타내었으며, 피부의 조직학적 변화에서도 모낭수가 양성 대조군과 유사하게 증가한 것을 확인하였다. 또한, 모발 형성에 도움을 주는 효소 활성도를 측정한 결과, 히비스커스 추출물을 처리할 경우 효소활성이 증가되는 것을 확인하였다. 뿐만 아니라 히비스커스 추출물은 모발성장인자의 발현을 증가시키는 것을 확인할 수 있었다. 더욱이, 두피의 혈액순환을 돕고 단백질을 파괴하는 활성산소를 줄여줘 탈모의 주원인인 DHT를 감소하는데 큰 효과를 주는 항산화물질로서 히비스커스 추출물이 적합하다는 것을 확인할 수 있었다. 이러한 결과를 종합해 볼 때, 본 발명의 히비스커스 추출물이 탈모방지 또는 발모촉진 효과를 나타낼 수 있음을 알 수 있다 (실험예 1 내지 6 참조) .
또한, 본 발명의 히비스커스 추출물은 세포독성을 나타내지 않아 티백차 소재 및 화장품 소재로 안전하다.
본 발명에 있어서, 상기 추출물은 조성물 총 중량 대비 0.01 내지 40중량 %로 포함되는 것을 특징으로 한다. 이는 기능성 티백차 제품으로부터 기능성샴푸 및 트리트먼트 제품으로 개발시 각각의 기호도 및 제품 제형의 안정화를 고려하여 중량범위를 설정하였다. 샴푸 및 트리트먼트의 경우 증량범위 외 초과시 제형이 안정화되지 못하고 제형형성이 불가 할수 있다.
【유리한 효과】
이상 설명한 바와 같이, 본 발명의 히비스커스 추출물을 함유하는 조성물은 세포독성을 나타내지 않아 안전하며, 항산화 효과가 우수하며, 모발 형성에 도움을 주는 효소 활성 및 모발성장인자 발현을 증가시킬 뿐만 아니라 in vivo에서 발모를 촉진하므로, 탈모 개선 또는 발모촉진 효과가 우수하여 탈모개선 또는 발모촉진용 티백차 조성물 또는 기능성 헤어제품으로 이용될 수 있다.
【도면의 간단한 설명】
도 1은 히비스커스 추출물의 항산화능 (DPPH)을 측정한 결과를 나타내는 도면이다.
도 2는 히비스커스 추출물의 항산화능 (SOD)을 측정한 결과를 나타내는 도면이다.
도 3은 히비스커스 추출물의 모유두 세포 증식능을 측정한 결과를 나타내는 도면이다.
도 4는 포토샵을 이용하여 K값을 도출하는 방법을 나타내는 도면이다.
도 5는 in vivo에서 양모능을 측정한 결과를 나타내는 도면이다 (0 day) . 도 6은 in vivo에서 양모능을 측정한 결과를 나타내는 도면이다 (7 day) . 도 7은 in vivo에서 양모능을 측정한 결과를 나타내는 도면이다 (10 day) . 도 8은 in vivo에서 양모능을 측정한 결과를 나타내는 도면이다 (14 day) . 도 9은 in vivo에서 양모능을 측정한 결과를 나타내는 도면이다 (21 day) . 도 10은 양모능의 육안평가에 대한 결과를 나타내는 도면이다.
도 11은 양모능의 K값평가에 대한 결과를 나타내는 도면이다.
도 12는 피부의 조직에서 양모능을 평가한 결과를 나타내는 도면이다.
도 13은 피부조직의 모낭수를 개수한 결과를 나타내는 도면이다.
도 14는 ALP 효소 활성을 측정한 결과를 나타내는 도면이다.
도 15는 Y ?GT효소 활성을 측정한 결과를 나타내는 도면이다.
도 16은 모발성장인자인 VEGF 변화를 측정한 결과를 나타내는 도면이다. 도 17은 모발성장인자인 IGF-1 변화를 측정한 결과를 나타내는 도면이다. 도 18은 모발성장인자인 TGF-β Ι 변화를 측정한 결과를 나타내는 도면이다.
【발명의 실시를 위한 형태】
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이므로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다. 실시예 1: 히비스커스 정수추출물의 제조
본 실험에서 사용된 히비스커스는 아프리카 수단에서 수입한 꽃받침
제품으로 건조된 원재료를 이용하였다. 분쇄하지 않은 원료 10kg에 정수 80L를 첨가한 후, 95°C에서 1차 3시간, 2차 3시간으로 추출하였다. 이후, 60°C에서 25 brix가 될 때까지 농축하였다. 실시예 2: 히비스커스 주정 추출물의 제조
히비스커스 주정 추출물 또한 아프리카 수단에서 수입한 제품으로 분쇄하지 않은 원료 10kg에 주정 80L를 첨가한 후, 95°C에서 1차 3시간, 2차 3시간으로 추출하였다. 이후, 60°C에서 25 brix가 될 때까지 농축하였다. 실험예 1: 항산화능 측정
히비스커스 추출물의 항산화능을 평가하기 위하여 DPPH(2,2-diphenyl_l- pycryl-hydrazyl ) 및 Superoxide를 측정하였다.
DPPH(2,2-diphenyl-l- pycryl-hydrazyl )는 매우 안정한 수용성 free radical로 520nm에서 특징적인 광홉수를 나타내는 보라색의 화합물이며 항산화물질과 만나게 되면 radical이 소거되면서 DPPH의 고유색인 보라색이 엷어지는 특성이 있기 때문에 이 색차를 비색 정량하여 radical 소거능을 측정하였다. 구체적으로, DPPH를 MeOH에 녹여 DPPH 용액을 제조한 후, 준비된 DPPH 용액에 히비스커스 시료 (히비스커스 시료는 추출 농축 후 동결건조기 (일신바이오베이스, FDS850)를 활용하여 24시간 동안 동결건조를 수행하고 분말화하였으며, 이에 대한 수율은 표 1에 나타내었다. ) 을 1 : 1로 섞은 후 차광, 실온에서 30분간 방치 하였다가 520 nm에서 흡광도를 측정하였다. 또한, 양성 대조군으로는 50 μ Μ ascorbic acid를 사용하였다.
결과 값은 하기 식 1를 통해 산출하였으며, 그 결과는 도 1에 나타내었다.
[식 1 ]
Hydiwtyl ½d,l ca¼hgin 咖^ (짜^ 讓
衡 瞎 의擔翻;
그 결과, 도 1 에서 나타나는 바와 같이, 본 발명의 히비스커스 추출물에서 농도 의존적인 항산화능을 나타내었다. 모든 추출물 500; «g/mL (히비스커스 정수; 76.5± 3.6%, 히비스커스 주정; 79.8± 1.4%) 에서 양성대조군인 Vitamin C 50μΜ와유사한 항산화효과를 나타내었다. 또한, Superoxide 의 측정은 Superoxide 가 포착활성이 있는 물질이 존재 시 H202 로 잔환시키는 반웅을 촉매하는 pyrogallol 의 산화속도가 낮아지는 원리를 이용하여 S이 Xsuperoxide dismutase) 활성을 측정하였다. 시험에는 SOD assay kit (Dojindo Molecular Technologies, Rockville.USA)를 사용하였으며, 흡광도 측정은 ELISA reader 를 이용하였다. 구체적으로는, 먼저 시료를 10 ug/ 50 ^g/mL, 100 ^g/mL, 500 / g/mL 의 농도별로 회석하여 96
well plate 에 20 ^씩 분주한후, WST working solution을 200 ^와 enzyme working solution 을 20 ^를 넣고 37°C에서 20 분간 incubation 한 후 450nm 에서 홉광도를 측정하였다. 양성 대조군으로는 500 ; ug/mL trolox 를 사용하였다. 결과 값은 하기 식 2 를 통해 산출하였으며, 그 결과는 도 2 에 나타내었다.
[식 2]
Supe oxicfe radical scavenging ratio ^^&^^
mm wm ^ m^ 氣시 ..문¾횅¥의憲纏:. 그 결과, 도 2에서 나타나는 바와 같이, 본 발명의 히비스커스 추출물에서 항산화능이 농도 의존적으로 증가하였으며 음성 대조군 대비 유의적 차이를 나타내는 것을 확인하였다. 실험예 2: 모유두세포증식능확인
인간 모유두 세포 [Human follicle dermal cell, (HFDPC)]를 이용하였다. 구체적으로, 세포는 96-well 플레이트 (96-well plates)에 1χ 104 의 세포수로 24 시간 배양 후 96-well 플레이트는 회석된 화합물을 포함하는 배지를 첨가하여 1 일 동안배양한후, MTT 시약을 활용하여 세포 증식능을 측정하였다. 그 결과는 도 3에 나타내었다.
MTT assay를 통한 모유두세포 증식능 측정 결과, 양성대조군으로 사용한 minoxidil 을 제외한 모든 농도에서 세포 증식능이 증가하였으며 유의적 차이를
보였다. 또한, 히비스커스 정수, 주정 추출물의 경우 농도 의존적으로 세포 증식능이 증가하였으며 유의적 차이를 보이는 것을 확인하였다. 실험예 3: C57BL/6J마우스의 성장기 모낭유도 평가
모발성장주기가 휴지기인 6 주령의 마우스의 등쪽 털을 animalclipper (Panasonic ER1431p, Japan)로 깎아내고, 제모크림 비트 (veet, Reckitt Benckiser.France)로 나머지 털을 2 차에 거쳐 제거하였다. 시험약물은 2 차 제모 3일 후부터 3주간도포하였다.
구체적으로, 시험약물의 도포는 마우스를 ethyl ether 마취하고 시험대에 테이프로 고정시킨 후 수행하였다. 마우스가 시험물질을 핥아먹지 못하도록 도포 후 5분간 고정상태 유지하도록 하였다. 양모의 육안적 평가를 위해 0, 7, 10, 14, 21 일에 ethyl ether 마취 후 각 개체 및 그룹 간 사진촬영을 진행하였으며, 판정기준은 양모정도에 따라 0- 19% (-), 20-39 (±), 40-59% (+ ), 60-79% (+ + ), 0- 100% (+ + + )로 평가하였다. 또한, 양모에 대한 수치화된 결과를 얻기 위해 포토샵 프로그램을 이용하여 이미지의 검정색을 나타내는 K 값을 도출하였다. 포토샵을 이용설정한 눈금선에 마우스의 등부분을 위치하게 하여 K값을 데이터화하였다 (도 4). 그 결과를 도 5 내지 도 11에 나타내었다.
양모에 대한 데이터를 수치화 하기위해 총 7 인이 참여 하여 양모 정도를 0 - 4 점으로 평가하였다. 21 일째 모든 시험약물그룹은 음성대조군 보다 높은 양모 효과를 나타내며, 특히 히비스커스 정수 도포 그룹에서 양성대조군으로 사용한 미녹시딜과 유사한 양모효과를 나타냄을 확인하였다 (도 5 내지 10 참조).
또한, 양모의 정도를 명암 (어두운 정도 / 검정색), K 값으로 확인한 결과 7일째 히비스커스 주정 (19.2± 3.4)이 음성대조군 대비 유의적 증가를 나타내었다. 10 일째는 모든 시험약물에서 음성 대조군 (8.9± 1.3) 대비 모두 유의적 증가를 나타내었다. 14 일째부터는 히비스커스 주정 (71.1± 2.2)이 시그마 미녹시딜 (73.8± 2.4)과 유사한 정도의 양모능을 나타내었으며, 시험 종료인 21 일째는 히비스커스 주정 (74.4士 1.2)에서 시그마 미녹시딜 (74.1±1.3)과 유사한 양모능을 나타내는 것을 확인하였다 (도 11 참조). 실험예 4: 조직학적 관찰
동물 시험 개시 10, 21 일 후, 고정한 피부조직을 hematoxylinandeosin(H&E) 염색한 후 100 배율에서 광학현미경으로 5mm2 면적에 대한모낭수를 계수하였으며, 그 결과는 도 12 및 도 13에 나타내었다. 피부조직의 모낭수를 개수한 결과, 모든 시험약물에서 시간 경과에 따라 조직 모낭수가 증가되었다. 21 일째 모든 시험약물의 조직 모낭수는 음성대조군 (42± 11)과 비교 했을때 유의적 차이를 보였으며, 시그마 미녹시딜 조직 모낭수 (120.4士 15.5)는 3배, 현대약품 미녹시딜 (76.2士 8.4) 및 히비스커스 주정 (88.8±14.2)에서는 2배의 모낭이 관찰되었다. 실험예 5: 피부조직의 효소 활성도측정
피부조직을 절취하여 빙냉하에서 미세절편으로 만들고, 그 중 일정량을 칭량한후, 피부조직의 4 배량의 인산완층용액 (phosphatebuffersolution, PBS)을 가하여 파쇄기 (homogenizer)를 이용하여 균질액을 만들었다. 이 후, 균질액을
원심분리기를 이용하여 4°C에서 12,000rpm으로 20분간 원심분리하여 상층액을 자동생화학 분석기를 이용하여 alkaline phosphatase(ALP)및 γ-glutamyl transpeptidase(Y-GT)를 분석하였다. 그 결과를 도 14 및 15에 나타내었다.
ALP 효소는 모발성장의 혈관형성 지표로 알려져 있으며, 모세혈관으로 영양을 공급함으로써 양모작용을 유도한다. ALP 효소는 모발 성장기 동안은 높은 활성을 나타내고, 휴지기에서는 크게 감소한다. 이러한 피부조직내 ALP 효소를 측정한 결과, 시험물질 도포 10 일 후 음성 대조군 (33± 13 U/L) 대비, 양성대조군인 현대약품 미녹시딜 (155.25± 32.84 U/L), 시그마 미녹시딜 (156.8± 7.6 U/L)은 유의적 증가를 나타내었으며, 히비스커스 정수 (120.3± 24.4 U/L), 히비스커스 주정 (106.25± 15.65 U/L) 추출물에서는 음성 대조군 대비 유의적 증가를 나타내었다.
yGT 는 생체 내 산화적 스트레스와 glutathione 대사 및 세포막을 통한 아미노산과 펩타이드 홉수 및 분비에 관여하며, 증식과 분열이 활발한 세포내에서 많이 발현되고, 모발 성장기 동안은 높은 활성을 나타내고, 휴지기에서는 크게 감소한다. 실험 결과, 시험물질 도포 10 일 후 음성 대조군 (2.75± 1.25 U/L) 대비, 양성대조군인 현대약품 미녹시딜 (37.25±13.86 U/L), 시그마 미녹시딜 (39.67±9.87 U/L)은 유의적 증가를 나타내었으며, 시험약물은 히비스커스 정수 (20士4.59 U/L), 히비스커스주정 (13.5±2.51 U/L)에서 음성대조군 대비 유의적 증가를 나타내었다. 실험예 6: 피부조직 내 모발성장인자측정
1 피부조직 내 모발성장인자인 Vascular endothelial growth factor(VEGF), insulin like growth factor(IGF)-l 및 Transforming growth factor beta 1(TGF— βΐ)을 측정하였다ᅳ 구체적으로, 마우스 피부 조직을 eszy-Blue™ Total RNA extraction kit (iNtRON Biotechnology, Korea)로 mRNA 를 추출 후, TaqMan RNA-to-Ct™ 1— Step Kit 를 사용하여 추출물과 primer (insulin like growth factorl(IGF-l), transforming growth factor beta KTGF-β) 및 vascular endothelial growth factor(VEGF)를 흔합하고 StepOne 기계에서 48 °C에서 15 분, 95 °C에서 10 분 1 회, 95 °C에서 15 초, 60 °C에서 1 분으로 40 회 반복하여 threshold cycle 값을 측정하였다. 그 결과는 도 16 및 도 18 에 나타내었다.
또한, 피부에 존재하는 모발성장 인자인 insulin like growth factor(IGF)- 1 은 모발의 기능적인 활동을 촉진시켜 모낭의 세포사를 저해시킨다고 알려져 있다. 21 일째 피부조직 내 IGF-1 mRNA 을 측정한 결과, 그룹간의 유의적 변화는 관찰되지 않았다 (도 17 참조).
Transforming growth factor beta KTGF-βΙ)은 모발의 성장기 시기에서 모발성장을 방해는 인자이다. 21 일째 피부조직 내 TGF-βΙ mRNA 을 측정한 결과, 그룹간의 유의적 변화는 관찰되지 않았다 (도 18 참조). 결론적으로, 시험 약물로사용한 히비스커스 정수, 히비스커스 주정은 높은 항산화 효과를 나타내었으며, 모유두 세포의 증식률을 유의적으로 증가시켰다. 또한, 양모능이 유의적으로 높게 나타났으며, 특히 히비스커스 주정그룹의 육안적, 조직학적 (모낭수) 평가에서 양성대조군으로 사용한 3% 시그마 미녹시딜과
유사한 정도의 양모능을 나타내었다. 이러한 양모능은 C57BL/6J 에서 모발이 성장에 영향을 주는 물질인 ALP, γ-GT 및 피부조직 내 혈관신생에 관여하는 VEGF 에 의해 모발성장 주기에서 모발 재성장의 시간을 단축시키는 것으로 사료된다.
Claims
【청구항 1】
히비스커스 추출물을 유효성분으로 하는 탈모방지 또는 발모촉진용 조성물.
【청구항 2】
제 1 항에 있어서, 상기 히비스커스 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4 의 저급알코을 또는 이들의 흔합용매로 추출하는 것을 특징으로 하는 탈모방지 또는 발모촉진용 조성물.
【청구항 3】
제 1 항에 있어서, 상기 추출물은 농축 분말화하여 기능성 티백차의 소재로 사용되는 것을 특징으로 하는 탈모방지 또는 발모촉진용조성물.
【청구항 4】
제 1 항에 있어서, 상기 추출물은 기능성 삼푸 또는 트리트먼트의 소재로 사용되는 것을 특징으로 하는 탈모방지 또는 발모촉진용 조성물.
【청구항 5]
제 4항에 있어서, 상기 추출물은 조성물 총 중량 대비 0.01 내지 30중량 ¾로 포함되는 것을 특징으로 하는 탈모방지 또는 발모 촉진용 조성물.
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