WO2018012262A1 - メタボリックシンドローム抑制剤 - Google Patents

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WO2018012262A1
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oil
inhibitor
metabolic syndrome
fat
weight
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PCT/JP2017/023332
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尚二 松本
紗希 西村
眞善 境野
貴稔 山下
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株式会社Ｊ－オイルミルズ
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Publication date
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    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs

Definitions

  • the present invention relates to a metabolic syndrome inhibitor, and more particularly to a metabolic syndrome inhibitor containing soybean hypocotyl oil as an active ingredient.
  • Body fat includes subcutaneous fat that accumulates under the skin and visceral fat that accumulates around the viscera in the intestine and abdominal cavity. When visceral fat accumulates excessively and lifestyle-related diseases such as hypertension, diabetes, and dyslipidemia develop in a complex manner, metabolic syndrome is diagnosed.
  • the current diagnostic criteria for metabolic syndrome are: (I) visceral fat obesity in which the abdominal circumference exceeds a reference value (male 85 cm, female 90 cm), And, (Ii) The following abnormalities: (1) A neutral fat value of 150 mg / dL or more and / or an HDL-cholesterol value of less than 40 mg / dL, (2) The systolic blood pressure is 130 mmHg or higher and / or the diastolic blood pressure is 85 mmHg or higher, and (3) fasting blood glucose is 110 mg / dL or higher.
  • Plant sterols are known to inhibit the absorption of cholesterol in the gastrointestinal tract and to lower blood cholesterol levels. Cholesterol is taken up by small intestinal epithelial cells after solubilizing by forming micelles with bile acids. Plant sterols also form micelles with bile acids as well. Since there is a limit to the dissolution of sterols in micelles, the coexisting plant sterol competitively inhibits the micelle formation of cholesterol (Non-patent Documents 1 and 2). Utilizing this mechanism of action, it has been proposed to use plant sterols as a body cholesterol reducing agent.
  • Patent Document 5 discloses a lipid metabolism improving agent in a patient with hyperlipidemia resistant to cholesterol synthesis inhibitors, which contains diglyceride or diglyceride and plant sterols as active ingredients.
  • Patent Document 6 discloses a body cholesterol reducing agent containing, as an active ingredient, fats and oils obtained from soybean raw materials having a germ concentration of 15% by weight or more.
  • JP 2000-309533 A JP 2005-095186 A JP2012-171916 JP2007-55951A JP2015-15425 WO01 / 032032
  • An object of the present invention is to provide a metabolic syndrome inhibitor capable of suppressing metabolic syndrome by ingestion in the same manner as the above-described conventional technology.
  • soybean hypocotyl oil has an action of suppressing the accumulation of body fat, particularly visceral fat, and an effect of suppressing blood neutral fat elevation, and can therefore be used to suppress metabolic syndrome
  • the present invention provides a metabolic syndrome inhibitor containing soybean hypocotyl oil as an active ingredient.
  • the present invention and the invention of Patent Document 6 are common in that soybean hypocotyl oil is an active ingredient.
  • the use of the invention of Patent Document 6 is to reduce the body cholesterol concentration.
  • Patent Document 6 which only describes the action of lowering cholesterol in the body does not teach a metabolic syndrome inhibitor which is an application of the present invention.
  • the metabolic syndrome inhibitor is particularly a body fat accumulation inhibitor and / or a blood neutral fat increase inhibitor.
  • the body fat accumulation inhibitor is in particular a visceral fat accumulation inhibitor.
  • the metabolic syndrome inhibitor preferably contains 1 to 100% by weight of the soybean hypocotyl oil.
  • the present invention also provides an oil and fat composition for suppressing metabolic syndrome, which contains the metabolic syndrome inhibitor.
  • the present invention also provides a food for suppressing metabolic syndrome, which contains the metabolic syndrome inhibitor or is cooked using the inhibitor.
  • the present invention also provides a method for producing a metabolic syndrome inhibitor, which comprises adding soybean hypocotyl oil as an active ingredient.
  • the present invention also provides a method for producing a food for inhibiting metabolic syndrome, which comprises adding a metabolic syndrome inhibitor containing soybean hypocotyl oil as an active ingredient to cooking.
  • the metabolic syndrome inhibitor of the present invention comprising soy hypocotyl oil as an active ingredient, it exhibits efficacy as a body fat accumulation inhibitor (especially a visceral fat accumulation inhibitor) and / or a blood neutral fat increase inhibitor.
  • a body fat accumulation inhibitor especially a visceral fat accumulation inhibitor
  • a blood neutral fat increase inhibitor especially a visceral fat accumulation inhibitor
  • Soybean hypocotyl oil is known to have a blood cholesterol lowering effect.
  • the metabolic syndrome inhibitor of the present invention is superior to conventional metabolic syndrome inhibitors in that it improves or prevents visceral fat obesity and dyslipidemia associated with blood cholesterol and / or neutral fat at the same time. Excellent.
  • the metabolic syndrome inhibitor of the present invention is a disease that develops due to progression of metabolic syndrome, such as arteriosclerosis, diabetic retinopathy, diabetic gangrene, diabetic nephropathy, renal failure, nephrosclerosis, uremia, angina pectoris Prevention of myocardial infarction, stroke, cerebral infarction, etc. can be greatly expected.
  • the metabolic syndrome inhibitor of the present invention it is not necessary to request a dietary restriction from a human.
  • fats and oils are foods that stimulate human taste, restricting fats and oils in foods to reduce lipid energy makes the human diet unpleasant.
  • the metabolic syndrome inhibitor of the present invention contains fats and oils as an active ingredient, it is possible to suppress metabolic syndrome while maintaining a rich human diet.
  • the feed efficiency was lower in the feed intake group containing the soybean hypocotyl oil mixture of Example 1. Since the amount of food intake is higher in the test oil group, it can be said that it is difficult to gain weight even with the same amount of food intake. It is a figure which shows the mesenteric fat weight at the time of dissection of 2 groups of FIG.
  • the mesenteric fat of the group fed with the soy hypocotyl oil blended oil of Example 1 is about 50% less than that of the soybean oil blended group of Comparative Example 1. It is a figure which shows the epididymis fat weight at the time of dissection of 2 groups of FIG.
  • the epididymal fat weight of the group fed with soybean hypocotyl oil blended feed of Example 1 was reduced by about 37% compared to the group of soybean oil blended feed of Comparative Example 1. It is a figure which shows the perirenal fat weight at the time of dissection of 2 groups of FIG.
  • the perirenal fat weight of the group fed with the soy hypocotyl oil blended feed of Example 1 is about 60% less than that of the group of the soy oil blended feed of Comparative Example 1.
  • the rear abdominal wall fat weight of the group fed with the soy hypocotyl oil blended feed of Example 1 was reduced by about 34% compared to the group of the soybean oil blended feed of Comparative Example 1.
  • FIG. 8 is a graph showing the visceral fat weight (total of the above-mentioned four fat regions) obtained from FIGS.
  • the visceral fat weight of the group fed with soybean hypocotyl oil blended feed of Example 1 was reduced by about 39% compared to the group of soybean oil blended feed of Comparative Example 1. It is the figure which calculated
  • required the visceral fat rate ( visceral fat weight / body weight) from FIG.2 and FIG.8. It was found that the visceral fat percentage of the group fed with the soy hypocotyl oil blended feed of Example 1 was significantly reduced as compared with the group fed with the soy oil blended feed. It is a figure which shows the liver weight at the time of dissection of 2 groups of FIG.
  • liver weight There was no significant difference in liver weight between the group fed with the soy hypocotyl oil blended feed of Example 1 and the group fed with the soybean oil blended feed of Comparative Example 1. It is the figure which calculated
  • required the liver ratio ( liver weight / body weight) from FIG.2 and FIG.10. There was no difference in the liver ratio between the soybean hypocotyl oil blended feed intake group of Example 1 and the soybean oil blended feed intake group of Comparative Example 1. It is a figure which shows the thigh muscle weight at the time of dissection of 2 groups of FIG. The thigh muscle weight was significantly higher in the group fed with the soy hypocotyl oil blended feed of Example 1 than in the group fed with the soybean oil blended feed of Comparative Example 1.
  • the metabolic syndrome inhibitor of the present invention contains soybean hypocotyl oil as an active ingredient.
  • Soybean seeds round soybeans
  • Soybean seeds are composed of cotyledons (about 90% by weight), seed coats (about 8% by weight) and hypocotyls (about 2% by weight).
  • Soybean hypocotyl oil is an oil that is extracted and refined from a raw material with an increased proportion of hypocotyl in soybean seeds.
  • the raw material obtained by increasing the proportion of hypocotyl usually contains 15 to 80% by weight of hypocotyl.
  • the fats and oils extracted and purified from the raw materials thus obtained usually contain 1500 to 6150 mg / 100 g of unsaponifiable matter, 100 to 4000 mg / 100 g of total ⁇ 7 sterol, and 50 to 400 mg / 100 g of avenasterol.
  • the method of selecting hypocotyls from raw whole soybeans and extracting and refining soybean hypocotyl oil therefrom is based on conventional methods.
  • An example is outlined below.
  • soybean seeds are heated to 40 to 80 ° C., for example.
  • a general-purpose crushing device having at least one function of impact action, shearing action, compression / compression action, and friction action, the dried material is peeled, cracked, coarsely crushed or crushed, thereby allowing the cotyledons Separate the seed coat and hypocotyl.
  • Impact means impact mill, jaw crusher, stamp mill, jet mill, hammer mill, pin mill, rotating mill, planetary mill, etc .; shear means: cutter mill, stone mortar, etc .; compression / compression means, roller mill A roll crusher, a pressure roll, a ring mill, and the like; and a stream mill or the like is used as the friction means.
  • the separated mixture of seeds, cotyledons and hypocotyls is subjected to separation means such as a vibrating sieve, a rotary sieve, an air classifier, etc., and the hypocotyls are concentrated by removing seed coats and cotyledons from the mixture.
  • separation means such as a vibrating sieve, a rotary sieve, an air classifier, etc.
  • the hypocotyls are concentrated by removing seed coats and cotyledons from the mixture.
  • an under-sieving fraction obtained by passing through a 7-mesh sieve is further collected, and a fraction sandwiched between 10 to 14-mesh sieves is collected.
  • the fraction thus obtained usually contains 15 to 80% by weight of hypocotyl.
  • the fraction containing the hypocotyl obtained in the above step is heated, for example, at a temperature of 40 to 100 ° C. for a few seconds to about 60 minutes, and then compacted into flakes, which are brought into contact with an organic solvent such as n-hexane.
  • an organic solvent such as n-hexane.
  • soybean crude oil is obtained by subjecting crude crude oil to any one or more of degumming, deoxidation, decolorization and deodorization, preferably degumming, deoxidation, decolorization and deodorization.
  • the soybean hypocotyl oil may be commercially available.
  • composition of soybean hypocotyl oil and soybean oil is shown in Table 1.
  • total sterol means the sum of six sterols consisting of ⁇ -sitosterol, campesterol, stigmasterol, ⁇ 7-stigmasterenol, avenasterol, and citrostadienol.
  • total ⁇ 7 sterol means the total of three sterols consisting of ⁇ 7-stigmastenol, avenasterol, and citrostadienol.
  • soybean hypocotyl oil is characterized by a higher proportion of linoleic acid and linolenic acid, a higher amount of total sterols, and a higher proportion of total ⁇ 7 sterols compared to soybean oil.
  • the metabolic syndrome inhibitor containing soybean hypocotyl oil as an active ingredient exerts a remarkable effect as a body fat accumulation inhibitor and visceral fat accumulation inhibitor. It is preferable to contain 4000 mg / 100 g, particularly 50 to 400 mg / 100 g of avenasterol.
  • the base oil for diluting soybean hypocotyl oil may be added to the inhibitor of the present invention as long as the effects of the present invention are not inhibited.
  • Base oil will not be specifically limited if it is an edible oil and fat.
  • Examples of base oils include palm kernel oil, palm oil, palm oil, corn oil, cottonseed oil, soybean oil, rapeseed oil, rice oil, sunflower oil, safflower oil, cacao butter, hypocotyl oil other than soybean hypocotyl oil (for example, Vegetable oils such as wheat hypocotyl oil, rice hypocotyl oil, and rapeseed hypocotyl oil), and animal oils such as lard and fish oil.
  • processed oils and fats such as these fractionated oils (the middle melting point of palm oil, the fractionated soft oil of palm oil, the fractionated hard oil of palm oil, etc.), the transesterified oil, and the hydrogenated oil and fat can be used.
  • these edible fats and oils can use 1 type (s) or 2 or more types.
  • additives can be added to the inhibitor of the present invention.
  • additives include lecithin, monoglycerin fatty acid ester, organic acid monoglyceride, sorbitan fatty acid ester, propylene glycol fatty acid ester, sucrose fatty acid ester, polyglycerin fatty acid ester, polysorbate, etc .; milk flavor, butter flavor, cheese flavor Flavors such as spearmint oil, clove oil, peppermint oil; acetaldehyde, benzaldehyde, butyraldehyde, citral, neral, decanal, ethyl vanillin, vanillin , Butyraldehyde, hexanal and other aldehydes; spices; tocopherols, L-ascorbic acids (eg Antioxidants such as L-ascorbyl palmitate), butylhydroxyanisole (BHA), butylhydroxytoluene (BHT), tertiary butylhydroquino
  • the content of soybean hypocotyl oil in the inhibitor of the present invention is usually 1 to 100% by weight, preferably 3 to 100% by weight, particularly preferably 5 to 100% by weight.
  • the oil content (total of soy hypocotyl oil and base oil) in the inhibitor of the present invention is usually 1 to 100% by weight, preferably 3 to 100% by weight.
  • the form of the inhibitor of the present invention can be liquid, emulsion (water-in-oil (W / O) type or oil-in-water (O / W) type), solid (powder, granules, flakes, blocks, etc.).
  • the inhibitor of the present invention preferably consists of a liquid or an emulsion.
  • the inhibitor of the present invention can be prepared by an appropriate method depending on the form.
  • a liquid or solid inhibitor can be obtained by mixing soybean hypocotyl oil together with an appropriate base oil and additives. Depending on the choice of base oil, it can be adjusted to liquid or solid.
  • An inhibitor in the form of an emulsion can be obtained, for example, by stirring and mixing a mixture containing soybean hypocotyl oil, edible fat (base oil), emulsifier, other additives and water with an emulsifier.
  • the oil content of the emulsion is usually 10 to 90% by weight.
  • Powder and granule inhibitors can be obtained, for example, by further dry-pulverizing an emulsion obtained by stirring and mixing soybean hypocotyl oil with an edible fat (base oil), an emulsifier, a powdered base material and water. can get.
  • base oil an edible fat
  • emulsifier an emulsifier
  • a powdered base material a powdered base material and water.
  • dry powdering include spray drying of emulsions.
  • the present invention particularly provides an oil and fat composition for inhibiting metabolic syndrome comprising the metabolic syndrome inhibitor of the present invention.
  • the base oil of the oil / fat composition is not particularly limited as long as it is an oil / fat used for food. Such fats and oils are the same as those exemplified for the base oil of the inhibitor.
  • the base oil of the oil and fat composition may be the same as or different from the base oil of the inhibitor. Preferred are soybean oil, rapeseed oil, corn oil, palm oil, rice oil, olive oil and sesame oil.
  • the oil and fat composition of the present invention can be blended with those exemplified as additives for the above-mentioned inhibitor, which is a general edible oil and fat.
  • the content of the inhibitor in the oil and fat composition of the present invention is usually 1 to 100% by weight, preferably 3 to 100% by weight, particularly preferably 5 to 100% by weight as soybean hypocotyl oil. is there.
  • the oil content (total of soybean hypocotyl oil and base oil) in the oil and fat composition of the present invention is usually 50 to 100% by weight, preferably 60 to 100% by weight, more preferably 80 to 100% by weight, and still more preferably 90 to 100% by weight.
  • the present invention also provides food for metabolic syndrome suppression (including feed).
  • foods for suppressing metabolic syndrome include foods containing the inhibitor (hereinafter referred to as processed foods) or foods prepared using the inhibitor (hereinafter referred to as cooked foods).
  • processed foods and cooked foods include tempura, fried chicken, okonomiyaki, chijimi, hot cake, donut, adjusted milk powder, roux (curry, stew, hayashi, etc.), instant cooked food and drink (instant noodles, instant soup, Instant miso soup, instant coffee, instant cocoa, etc.), retort food (curry, stew, pasta sauce, soup, etc.), refrigerated / frozen food (doughnut, fried potato, fried chicken, croquette, minced pork cutlet, tonkatsu, fried fish, squid rings, onion Rings, gratin, pizza, fried rice, pilaf, udon, ramen, meat buns, dumplings, etc.), processed meat products (ham, bacon, sausage, hamburger, grilled pork, seasoned meat, roast beef, steak, etc.), processed fishery products (fish sausage) , Kamaboko, mentaiko, green onion, salt, shrimp , Etc.), seasonings (miso, sauce, tomato
  • the processed food can be produced by a conventional method according to the food used and its form, except that the inhibitor of the present invention is added.
  • the inhibitor of the present invention is added, for example, to the inside or surface of a foodstuff, in a batter liquid, in a blender liquid, in a pickle liquid, or in a tumbling liquid.
  • the amount of the inhibitor of the present invention added to the processed food is usually 1 to 90% by weight, preferably 1 to 85% by weight, more preferably 1 to 80% by weight, as the content of soybean hypocotyl oil. %, Particularly preferably 1 to 75% by weight.
  • the above-mentioned cooked food can be cooked or manufactured by a conventional method without using the materials to be used or special conditions other than cooking or manufacturing using the inhibitor of the present invention.
  • Examples of food preparation methods include fried tempura, french fries, fried chicken, croquettes, minced cutlet, tonkatsu, fried fish, squid rings, onion rings, beef, pork, chicken, fried rice, pilaf, vegetables, fish, fried noodles And the like, boil meat, vegetables, fish, beans, etc., pour over meat, vegetables, fish, beans, pizza, ramen, udon, etc., apply to bread, confectionery, etc., put on bread, confectionery, etc.
  • the above-described metabolic syndrome inhibitor of the present invention suppresses metabolic syndrome, particularly suppression of body fat accumulation, suppression of visceral fat accumulation, And / or effective in suppressing blood neutral fat elevation.
  • soybean hypocotyl oil and soybean hypocotyl oil mixed oil were prepared and used as test samples.
  • a manufacturing method is shown below.
  • the soybean seeds were heated at 80 ° C. for 45 minutes and pulverized to a size of less than 1 ⁇ 2 with a crusher to obtain a mixture of cotyledons, seed coats and hypocotyls.
  • the obtained mixture was subjected to an air classifier to remove the seed coat, and a cotyledon and hypocotyl mixture was obtained.
  • the fraction on the 7-mesh sieve was removed using a sieving machine, and the fraction sandwiched between 10-14 mesh sieves was further fractionated to obtain the hypocotyl fraction (soybean Hypocotyl 40% by weight) was obtained.
  • the hypocotyl fraction was heated to 60 ° C., made into flakes with a crusher, and the oil was extracted with n-hexane to obtain a miscella.
  • Crude crude oil was obtained by removing residual n-hexane from the obtained miscella at 60 to 80 ° C. under reduced pressure.
  • 0.1% phosphoric acid was added to the crude crude oil, the mixture was stirred at 70 ° C. for 15 minutes, distilled water was added, and the mixture was stirred at 70 ° C. for 30 minutes and then centrifuged to remove the gum content (degumming). Next, 0.1% phosphoric acid was added, and the mixture was stirred at 75 ° C.
  • soybean hypocotyl oil mixture 50 parts by weight of the soybean hypocotyl oil and 50 parts by weight of soybean oil (product name: soybean white oil NS, manufactured by J-Oil Mills) were mixed to obtain a soybean hypocotyl oil mixed oil.
  • Example 1 Efficacy evaluation of metabolic syndrome inhibitor by animal test and cell test Soy hypocotyl oil, which is an active ingredient of the metabolic syndrome inhibitor of the present invention, suppresses body fat accumulation, visceral fat and blood The inhibitory effect on the increase in sex fat was examined in animal tests. Furthermore, the component which exerts on the body fat accumulation suppression effect and visceral fat suppression effect of soybean hypocotyl oil was examined by a cell test.
  • composition of Table 3 by mixing for 15 minutes with a kitchen aid mixer (KSM5, manufactured by FM Corporation), a feed for preliminary breeding, a feed containing soybean oil (Comparative Example 1), and a soybean hypocotyl oil mixed oil A formulated feed (Example 1) was prepared.
  • KSM5 kitchen aid mixer
  • Example 1 soybean hypocotyl oil mixed oil
  • mice Animal administration test Seven-week-old male C57BL / 6J mice were purchased from Nippon Charles River Co., Ltd. and preliminarily reared for 6 days using a pre-feeding feed. After preliminary breeding, the animals were divided into 6 groups per group so that there was no difference in the average body weight of each group. After the grouping, a test diet consisting of a soybean hypocotyl oil mixed oil blended feed or a soybean oil blended feed was fed for 12 weeks. During the preliminary breeding period and the test food intake breeding period, the animals were raised in an environment of a temperature of 23 ° C. ⁇ 2 ° C., a humidity of 40 to 60%, a light period of 7:30 to 19:30, and a dark period of 19:30 to 7:30. The feed was free to eat and the water was free to drink. During the breeding period, body weight was measured once a week. During the breeding period, blood neutral fat was measured every 2 weeks.
  • the fasting started at 17:00 the day before the last intake of the test meal. On the final day, laparotomy was performed under deep anesthesia with sodium pentobarbital, and epididymal fat, mesenteric fat, perirenal fat, retroabdominal wall fat, liver, and thigh muscles were removed and weighed.
  • Body weight, blood neutral fat level, epididymal fat, mesenteric fat, perirenal fat, retroabdominal wall fat, visceral fat weight (sum of the above four fats), visceral fat rate ( visceral fat weight / body weight)
  • FIGS. 1 to 13 those in which a significant difference was confirmed are indicated by * or **. Note that * indicates that the risk factor (p value) is less than 0.05, and ** indicates that the risk factor (p value) is less than 0.01.
  • Results of comparing food intake during the test are shown in FIG.
  • the black bar graph represents the soybean oil blended feed intake group
  • the white bar graph represents the soybean hypocotyl oil blended feed intake group.
  • the amount of feed consumed during the test period was greater in the soybean hypocotyl oil-blended oil-blended feed intake group of Example 1 than in the soybean oil-blended feed intake group of Comparative Example 1.
  • FIG. 2 shows the body weight increase inhibitory effect of the soy hypocotyl oil blended feed intake group ( ⁇ ⁇ ⁇ ) and the soy oil blended feed intake group ( ⁇ ⁇ ⁇ ). As shown in FIG. 2, weight gain was significantly suppressed in the feed intake group containing soybean hypocotyl oil.
  • the feed efficiency was lower in the soy hypocotyl oil mixed oil-blended feed intake group than in the soybean oil-blended feed intake group. Since the soy hypocotyl oil blended feed intake group has more food intake, it can be said that the soy hypocotyl oil blended feed is less likely to gain weight even if the same amount is fed.
  • FIGS. 4-7 show the weights of various fats at the time of dissection
  • FIG. 8 shows the sum of the visceral fat weights at the four fats at the time of dissection
  • FIG. 9 shows the visceral fat ratio shown by visceral fat weight / body weight at the time of dissection. As shown in FIGS. 4 to 9, it was found that the visceral fat weight and the visceral fat ratio of the group fed with the soy hypocotyl oil mixed feed were significantly decreased as compared with the group fed with the soy oil blended feed.
  • the thigh muscle weight and muscle ratio were significantly higher in the group fed with the soy hypocotyl oil mixed feed than in the group fed with the soy oil blended feed.
  • FIG. 14 shows the measured values of blood neutral fat in the soybean hypocotyl oil-mixed feed-containing group (- ⁇ -) and soybean oil-containing feed-intake group (- ⁇ -) during the breeding period.
  • the blood triglyceride level of the group fed with the soy hypocotyl oil mixed oil (-x-) was lower than that of the group fed with the soy oil blended feed (- ⁇ -).
  • the components of soybean hypocotyl oil have a blood cholesterol lowering effect.
  • soybean hypocotyl oil has an inhibitory effect on blood neutral fat elevation. Therefore, it has been found that the metabolic syndrome inhibitor of the present invention simultaneously improves or prevents visceral fat obesity and dyslipidemia associated with abnormalities in blood cholesterol and / or blood neutral fat.
  • soybean hypocotyl oil (unsaponifiable matter content 4710 mg / 100 g) was obtained in the same manner as the soybean hypocotyl oil used in the animal test.
  • Table 4 shows the results of plant sterol analysis of soybean hypocotyl oil.
  • the unsaponifiable matter was obtained from the soybean hypocotyl oil by the following procedure.
  • 3 g of the above-mentioned soybean hypocotyl oil was precisely weighed in a 300 mL conical stoppered flask, and 25 mL of 2 mol / L potassium hydroxide / ethanol solution and 25 mL of 0.05 g / mL gallic acid / ethanol solution were added.
  • Two boiling stones were added to the Erlenmeyer flask, connected to a Soxhlet extractor cooling pipe in which cooling water was circulated, and heated for 1 hour on water vapor generated in a water bath to carry out a saponification reaction.
  • the saponification reaction solution was transferred to a 500 mL separatory funnel, and the saponification reaction solution remaining in the Erlenmeyer flask was washed with 100 mL of hot water and transferred to a separatory funnel. 50 mL of pure water at room temperature was added, and the mixture was allowed to stand and cool until it reached room temperature. The Erlenmeyer flask was washed with 100 mL of diethyl ether and placed in a separatory funnel. The separatory funnel was capped, shaken vigorously for 1 minute, and allowed to stand until it was separated into two layers, an aqueous layer and diethyl ether.
  • Table 5 shows the results of plant sterol analysis in 14.65 mg of the unsaponifiable matter.
  • the obtained abenasterol solution was passed through the column again to obtain a high concentration abenasterol solution.
  • the solvent was removed from the obtained high-concentration abenasterol solution using a rotary evaporator. It was dried at 60 ° C. for 30 minutes with a vacuum dryer to obtain an abenasterol fraction.
  • the abenasterol purity of the abenasterol fraction was 87.2% by weight. Citrostadienol was not detected from the abenasterol fraction.
  • Test solution preparation method 4 Add 100 ⁇ L of dimethyl sulfoxide (DMSO) to 147 mg of unsaponifiable matter, or add 259.65 ⁇ L of dimethyl sulfoxide (DMSO) to 1.0716 mg of abenasterol fraction, and ultrasonicate for 1 minute. Treatment was performed to obtain a test solution.
  • the test solution of unsaponifiable matter (avenasterol concentration 1.41 mg / ml) is referred to as the unsaponifiable product group
  • the test solution of abenasterol abenasterol concentration 3.60 mg / ml
  • abenasterol fraction group is referred to as the abenasterol fraction group.
  • test solution of each group was diluted 1000-fold with the medium described in the following cell test and sonicated for 1 minute to obtain a test solution-added medium.
  • the oil red O staining solution was removed, and 0.5 mL of 60% isopropanol was added to each well and allowed to stand for 1 minute. 60% isopropanol was removed, and the inside of the well was washed with 0.5 mL of PBS. Microscopic observation was performed at a magnification of 200 times, and visceral fat cells stained with fat droplets were recorded as images on a computer recording device.
  • the unsaponifiable product group and the avenasterol group significantly suppressed fat accumulation in adipocytes as compared with the control group. Therefore, one of the active ingredients in the unsaponifiable matter is likely to be avenasterol.
  • the metabolic syndrome inhibitor containing soybean hypocotyl oil as an active ingredient preferably contains ⁇ 7 sterol, particularly avenasterol, in order to exert a body fat accumulation inhibition effect and a visceral fat accumulation inhibition effect. It was confirmed.

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Abstract

【課題】内臓脂肪や体脂肪の蓄積を抑制することによりメタボリックシンドロームを改善又は予防することの可能なメタボリックシンドローム抑制剤である。 【解決手段】本発明のメタボリックシンドローム抑制剤は、大豆胚軸油を有効成分として含む。メタボリックシンドローム抑制剤は、特に体脂肪蓄積抑制剤及び／又は血中中性脂肪上昇抑制剤である。体脂肪蓄積抑制は、特に内臓脂肪蓄積抑制剤である。

Description

メタボリックシンドローム抑制剤
　本発明は、メタボリックシンドローム抑制剤に関し、より詳細には大豆胚軸油を有効成分とするメタボリックシンドローム抑制剤に関する。
　食材の変化やその摂取過多による脂質エネルギー摂取比率の増大と運動不足になりがちな生活による摂取エネルギーの消費減少とがあいまって、体脂肪が必要以上に蓄積したいわゆる肥満の人数が増大している。体脂肪には、皮膚の下に蓄積される皮下脂肪、及び腸や腹腔内の内臓の周囲に蓄積される内臓脂肪がある。内臓脂肪が過度に蓄積し、高血圧、糖尿病、脂質異常症等の生活習慣病が複合的に発症すると、メタボリックシンドロームと診断される。
　現在のメタボリックシンドロームの診断基準は、
（ｉ）腹囲が基準値（男性８５ｃｍ、女性９０ｃｍ）を超える内臓脂肪型肥満であって、
かつ、
（ｉｉ）以下の異常：
（１）中性脂肪値が１５０ｍｇ／ｄＬ以上、及び／又はＨＤＬ－コレステロール値が４０ｍｇ／ｄＬ未満、
（２）収縮期血圧が１３０ｍｍＨｇ以上、及び／又は拡張期血圧が８５ｍmＨｇ以上、並びに
（３）空腹時血糖が１１０ｍｇ／ｄＬ以上
の少なくとも二つが当てはまることである。
　メタボリックシンドロームの罹患者は、動脈硬化が進行しやすく、その結果、心筋梗塞や脳梗塞のような重篤な疾患にかかり易い。これらの疾患を予防する観点から、メタボリックシンドロームの予防及び解消が重要である。
　メタボリックシンドロームの予防に際しては、一般に、運動不足を解消するとともに、脂質エネルギー摂取比率を下げるような食生活の改善、例えばダイエット、脂肪の少ない食品の摂取や脂肪をなるべく使わない調理方法に注意が向けられる。
　生活習慣を是正するのではなく、安全な体脂肪低減剤を経口摂取することにより、体脂肪を低減することも提案されている。例えば、ジオキサビシクロ〔３．３．０〕オクタン誘導体（特許文献１）、茶カテキン（特許文献２）、カテキン及びカカオポリフェノール（特許文献３）、アスパラガス抽出物（特許文献４）等を有効成分として含む体脂肪低減剤や体脂肪燃焼剤が提案されている。
　植物ステロール類は、消化管でのコレステロールの吸収を阻害し、血中コレステロール濃度低下作用を示すことが知られている。コレステロールは、胆汁酸とミセルを形成して可溶化した後、小腸上皮細胞に取り込まれる。植物ステロール類もまた、同様に胆汁酸とミセルを形成する。ステロールのミセルへの溶解には限界があるため、共存した植物ステロールがコレステロールのミセル形成を競合的に阻害する（非特許文献１及び２）。この作用機序を利用して、植物ステロール類を体内コレステロール低減化剤として使用することが提案されている。例えば、特許文献５には、ジグリセリド又はジグリセリドと植物性ステロール類を有効成分とするコレステロール合成阻害薬抵抗性高脂血症患者における脂質代謝改善剤が開示されている。特許文献６には、胚芽濃度が１５重量％以上占める大豆原料から得られる油脂を有効成分として含有する体内コレステロール低減化剤が開示されている。
特開２０００－３０９５３３ 特開２００５－０９５１８６ 特開２０１２－１７１９１６ 特開２００７－５５９５１ 特開２０１５－１５４２５ ＷＯ０１／０３２０３２
日本食品分析センター、「植物ステロールについて」、Ｖｏｌ．２　Ｎｏ．５７　Ｎｏｖ．　２００６ 石崎等、「ラットにおける大豆胚芽由来ステロールと大豆ステロールのコレステロール上昇抑制効果の比較」、日本栄養・食糧学会誌、Ｖｏｌ．５８、（２００５）Ｎｏ．１、ｐ１１－１６
　本発明の目的は、上記従来技術と同様に、経口摂取によってメタボリックシンドロームを抑制することの可能なメタボリックシンドローム抑制剤を提供することにある。
　本発明者等は、大豆胚軸油には、体脂肪、特に内臓脂肪の蓄積を抑制する作用と血中中性脂肪上昇抑制作用があり、したがって、メタボリックシンドロームの抑制に使用できることを発見し、本発明を完成させた。すなわち、本発明は、大豆胚軸油を有効成分として含むメタボリックシンドローム抑制剤を提供する。本発明と特許文献６の発明とは、大豆胚軸油を有効成分とする点で共通する。しかし、特許文献６の発明の用途は、体内コレステロール濃度の低減化である。上記した体内コレステロール低減の作用機序が、自ずと体脂肪や内臓脂肪の蓄積抑制や血中中性脂肪の上昇抑制につながるわけでない。したがって、体内コレステロール低下作用を述べただけの特許文献６は、本願発明の用途であるメタボリックシンドローム抑制剤を教示していない。
　前記メタボリックシンドローム抑制剤は、特に体脂肪蓄積抑制剤及び／又は血中中性脂肪上昇抑制剤である。
　前記体脂肪蓄積抑制剤は、特に内臓脂肪蓄積抑制剤である。
　前記メタボリックシンドローム抑制剤は、前記大豆胚軸油を１～１００重量％含有することが好ましい。
　本発明は、また、前記メタボリックシンドローム抑制剤を含有するメタボリックシンドローム抑制用油脂組成物を提供する。
　本発明は、また、前記メタボリックシンドローム抑制剤を含有する、又は該抑制剤を用いて調理された、メタボリックシンドローム抑制用食品を提供する。
　本発明は、また、メタボリックシンドローム抑制剤の製造方法であって、大豆胚軸油を有効成分として添加することを含む、前記メタボリックシンドローム抑制剤の製造方法を提供する。
　本発明は、また、大豆胚軸油を有効成分として含むメタボリックシンドローム抑制剤を食材に添加して調理することからなる、メタボリックシンドローム抑制用食品の製造方法を提供する。
　大豆胚軸油を有効成分とする本発明のメタボリックシンドローム抑制剤によれば、体脂肪蓄積抑制剤（特に、内臓脂肪蓄積抑制剤）及び／又は血中中性脂肪上昇抑制剤としての効能を発揮し、その結果として、メタボリックシンドロームの改善又は予防が可能になる。大豆胚軸油は血中コレステロール低下作用を有することが知られている。本発明のメタボリックシンドローム抑制剤は、内臓脂肪型肥満症と、血中のコレステロール及び／又は中性脂肪と関連する脂質異常症とを同時に改善又は防止する点で、従来のメタボリックシンドローム抑制剤よりも優れる。本発明のメタボリックシンドローム抑制剤は、メタボリックシンドロームの進行によって発症する疾患、例えば動脈硬化症、糖尿病性網膜症、糖尿病性壊疽、糖尿病性腎症、腎不全、腎硬化症、尿毒症、狭心症、心筋梗塞、脳卒中、脳梗塞等の予防が大いに期待できる。
　本発明のメタボリックシンドローム抑制剤によれば、ヒトに食事制限を要求しなくてよい。特に、油脂は、ヒトの味覚を刺激する食材であることから、脂質エネルギーの削減のために食品中の油脂を制限すると、ヒトの食生活を味気なくさせる。一方、本発明のメタボリックシンドローム抑制剤は、油脂を有効成分とするため、ヒトの食生活を豊かに維持しながら、メタボリックシンドロームの抑制が可能となる。
本発明に従って大豆胚軸油混合油を配合した食品（飼料）のマウスへの摂餌量を、大豆油配合飼料と比較した図である。試験期間中の飼料摂餌量は、比較例１の大豆油配合飼料摂取群よりも、実施例１の大豆胚軸油混合油配合飼料摂取群の方が多かった。 図１の２群において、体重上昇抑制効果、すなわち体脂肪蓄積抑制効果を示す図である。実施例１の大豆胚軸油混合油配合飼料の摂取によって体重上昇が有意に抑制された。 図１及び２から飼料効率（＝体重増加量／摂餌量）を求めた図である。飼料効率は、実施例１の大豆胚軸油混合油配合飼料摂取群の方が低かった。摂餌量は試験油群の方が多いことから、同量の摂餌量でも体重増加し難いといえる。 図１の２群の解剖時の腸管膜脂肪重量を示す図である。実施例１の大豆胚軸油混合油配合飼料摂取群の腸管膜脂肪は、比較例１の大豆油配合飼料群よりも約５０％減少している。 図１の２群の解剖時の精巣上体脂肪重量を示す図である。実施例１の大豆胚軸油混合油配合飼料摂取群の精巣上体脂肪重量は、比較例１の大豆油配合飼料群よりも約３７％減少している。 図１の２群の解剖時の腎周囲脂肪重量を示す図である。実施例１の大豆胚軸油混合油配合飼料摂取群の腎周囲脂肪重量は、比較例１の大豆油配合飼料群よりも約６０％減少している。 図１の２群の解剖時の後腹壁脂肪重量を示す図である。実施例１の大豆胚軸油混合油配合飼料摂取群の後腹壁脂肪重量は、比較例１の大豆油配合飼料群よりも約３４％減少している。 図４～７から内臓脂肪重量（上記脂肪４部位の合計）を求めた図である。実施例１の大豆胚軸油混合油配合飼料摂取群の内臓脂肪重量は、比較例１の大豆油配合飼料群よりも約３９％減少している。 図２及び図８から内臓脂肪率（＝内臓脂肪重量／体重）を求めた図である。実施例１の大豆胚軸油混合油配合飼料摂取群の内臓脂肪率は、大豆油配合飼料群よりも有意に減少することが判明した。 図１の２群の解剖時の肝臓重量を示す図である。実施例１の大豆胚軸油混合油配合飼料摂取群と比較例１の大豆油配合飼料摂取群とで肝臓重量に有意な差はなかった。 図２及び図１０から肝臓比率（＝肝臓重量／体重）を求めた図である。実施例１の大豆胚軸油混合油配合飼料摂取群と比較例１の大豆油配合飼料摂取群とで肝臓比率に差はなかった。 図１の２群の解剖時の大腿筋重量を示す図である。大腿筋重量は、実施例１の大豆胚軸油混合油配合飼料摂取群の方が比較例１の大豆油配合飼料摂取群よりも有意に高かった。 図２及び図１２から筋肉率（＝大腿筋重量／体重）を求めた図である。筋肉率は、実施例１の大豆胚軸油混合油配合飼料摂取群の方が比較例１の大豆油配合飼料摂取群よりも有意に高かった。 図１の２群の飼育期間中の血中中性脂肪（ＴＧ）の測定値を示す。実施例１の大豆胚軸油混合油配合飼料摂取群（－×－）のＴＧは、比較例１の大豆油配合飼料摂取群（－▲－）と比べて低く推移した。 細胞試験において、対照群（ＤＭＳＯ）の脂肪滴面積値に対する不鹸化物群及びアベナステロール群の脂肪滴面積値の相対値の結果を示す図である。不鹸化物群及びアベナステロール群は、対照群と比較して、脂肪細胞への脂肪蓄積を有意に抑制した。
　本発明のメタボリックシンドローム抑制剤（以下、本発明の抑制剤という）は、有効成分として大豆胚軸油を含む。大豆種子（丸大豆）は、子葉（約９０重量％）、種皮（約８重量％）及び胚軸（約２重量％）で構成されている。大豆胚軸油は、大豆種子中の胚軸の割合を高めた原料から抽出・精製される油脂である。胚軸の割合を高めて得られる原料は、通常、１５～８０重量％の胚軸が含まれる。こうして得られる原料から抽出・精製される油脂は、通常、不鹸化物を１５００～６１５０ｍｇ/１００ｇ含み、総Δ７ステロールを１００～４０００ｍｇ/１００ｇ含み、アベナステロールを５０～４００ｍｇ/１００ｇ含む。
　原料丸大豆中から胚軸を選別し、そこから大豆胚軸油を抽出・精製する方法は、常法に基づく。その一例を以下に概説する。まず、大豆種子を例えば４０～８０℃に加熱する。次に、衝撃作用、せん断作用、圧縮・圧扁作用、及び摩擦作用の少なくとも一種の機能を有する汎用の粉砕装置を用いて、乾燥物を剥離、割砕、粗砕又は粉砕することにより、子葉、種皮及び胚軸を分離する。衝撃手段には、インパクトミル、ジョークラッシャー、スタンプミル、ジェットミル、ハンマーミル、ピンミル、回転ミル、遊星ミル等；せん断手段には、カッターミル、石臼等；圧縮・圧扁手段には、ローラーミル、ロールクラッシャー、圧扁ロール、リングミル等；そして摩擦手段には、ストリームミル等が用いられる。
　次に、分離された種子、子葉及び胚軸の混合物を、振動篩、回転篩、風力分級機等の分離手段にかけて、混合物から種皮及び子葉を除去することにより胚軸を濃縮する。例えば、７メッシュの篩にかけて得られる篩下画分を、さらに、１０～１４メッシュの篩に挟まれる画分を分取する。こうして得られる画分には、通常、１５～８０重量％の胚軸が含まれる。
　上記工程で得られる胚軸を含む画分を、例えば４０～１００℃の温度で数秒間～約６０分間加熱後、圧扁してフレークとし、このフレークをｎ－ヘキサン等の有機溶媒と接触させて、粗原油を得る。さらに、粗原油を常法による脱ガム、脱酸、脱色及び脱臭のいずれか一つ以上、好ましくは脱ガム、脱酸、脱色、脱臭の工程にかけて大豆胚軸油を得る。上記大豆胚軸油は、市販されているものでもよい。
　大豆胚軸油及び大豆油の組成の一例を表１に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　本明細書において、「総ステロール」とは、β－シトステロール、カンペステロール、スチグマステロール、Δ７－スチグマステノール、アベナステロール、及びシトロスタジエノールからなる６種のステロールの合計を意味する。一方、「総Δ７ステロール」とは、Δ７－スチグマステノール、アベナステロール、及びシトロスタジエノールからなる３種のステロールの合計を意味する。上表に示すとおり、大豆胚軸油は、大豆油と比べて、リノール酸及びリノレン酸の割合が高く、総ステロール量が高く、しかも総Δ７ステロールの割合が高いことが特徴的である。
　後述の細胞試験の結果から、大豆胚軸油を有効成分とするメタボリックシンドローム抑制剤は、体脂肪蓄積抑制剤及び内臓脂肪蓄積抑制剤として顕著な効果を発揮するために、総Δ７ステロールを１００～４０００ｍｇ/１００ｇ含み、特にアベナステロールを５０～４００ｍｇ/１００ｇ含むことが好ましい。
　本発明の抑制剤には、本発明の効果を阻害しない限り、大豆胚軸油を希釈するためのベース油を添加してもよい。ベース油は、食用油脂であれば特に限定されない。ベース油の例として、パーム核油、パーム油、ヤシ油、コーン油、綿実油、大豆油、菜種油、米油、ヒマワリ油、サフラワー油、カカオ脂、大豆胚軸油以外の胚軸油（例えば小麦胚軸油、米胚軸油、及び菜種胚軸油）等の植物油脂、ラード、魚油等の動物油脂等が挙げられる。また、これらの分別油（パーム油の中融点部、パーム油の分別軟質油、パーム油の分別硬質油等）、エステル交換油、水素添加油脂等の加工した油脂を使用できる。また、これらの食用油脂は、１種又は２種以上を使用することができる。
　本発明の抑制剤には、各種添加剤を配合できる。添加剤の例には、レシチン、モノグリセリン脂肪酸エステル、有機酸モノグリセリド、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリソルベート等の乳化剤；ミルクフレーバー、バターフレーバー、チーズフレーバー、ヨーグルトフレーバー、コーヒーフレーバー、紅茶フレーバー、シナモンフレーバー、カモミールフレーバー等のフレーバー類；スペアミント油、チョウジ油、ペパーミント油等の香味油；アセトアルデヒド、ベンズアルデヒド、ブチルアルデヒド、シトラール、ネラール、デカナール、エチルバニリン、バニリン、ブチルアルデヒド、ヘキサナール等のアルデヒドからなる香味剤；香辛料；トコフェロール、Ｌ－アスコルビン酸類（例えばＬ－アスコルビン酸パルミテート）、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ターシャルブチルヒドロキノン（ＴＢＨＱ）、カテキン、リグナン、γ－オリザノール等の酸化防止剤；シリコーン等の消泡剤；ＤＨＡ、ＥＰＡ等の脂肪酸、ビタミンＡ、ビタミンＤ、コエンザイムＱ等の生理活性物質等が挙げられる。
　本発明の抑制剤中の大豆胚軸油の含有量は、通常、1～１００重量％であり、好ましくは３～１００重量％であり、特に好ましくは５～１００重量％である。
　本発明の抑制剤中の油分（大豆胚軸油及びベース油の合計）は、通常、１～１００重量％であり、好ましくは、３～１００重量％である。
　本発明の抑制剤の形態は、液状、エマルジョン（油中水（Ｗ／Ｏ）型又は水中油（Ｏ／Ｗ）型）、固形（粉末、顆粒、フレーク状、ブロック状等）であり得る。本発明の抑制剤は、好ましくは液状又はエマルジョンからなる。
　本発明の抑制剤は、形態に応じて、適宜の方法により調製することができる。例えば、液状又は固形の抑制剤は、大豆胚軸油を、適宜のベース油及び添加剤とともに混合することにより得られる。ベース油の選択により、液状又は固形に調整することができる。
　エマルジョン形態の抑制剤は、例えば、大豆胚軸油、食用油脂（ベース油）、乳化剤、その他の添加剤及び水を含む混合物を乳化機等で撹拌混合することにより得られる。エマルジョンの油分は、通常、１０～９０重量％である。
　粉末や顆粒の抑制剤は、例えば、大豆胚軸油を、食用油脂（ベース油）、乳化剤、粉末化基材及び水を含む混合物を撹拌混合して得られるエマルジョンをさらに乾燥粉末化することにより得られる。乾燥粉末化は、例えば、エマルジョンの噴霧乾燥等が挙げられる。
　本発明は、特に、本発明のメタボリックシンドローム抑制剤を含むメタボリックシンドローム抑制用油脂組成物を提供する。油脂組成物のベース油は、食品用に使用される油脂であれば特に制限がない。そのような油脂は、上記抑制剤のベース油に例示したものと同様である。油脂組成物のベース油は、前記抑制剤のベース油と同一でも異なっていてもよい。好ましくは、大豆油、菜種油、コーン油、パーム油、米油、オリーブ油及びごま油である。
　本発明の油脂組成物には、食用油脂として汎用の前記抑制剤の添加剤として例示したものが配合できる。
　本発明の油脂組成物中の抑制剤の含有量は、大豆胚軸油として、通常、１～１００重量％であり、好ましくは３～１００重量％であり、特に好ましくは５～１００重量％である。
　本発明の油脂組成物中の油分（大豆胚軸油及びベース油の合計）は、通常、５０～１００重量％、好ましくは６０～１００重量％、より好ましくは８０～１００重量％、さらに好ましくは９０～１００重量％である。
　本発明は、また、メタボリックシンドローム抑制用食品（飼料を含む）を提供する。メタボリックシンドローム抑制用食品には、該抑制剤を含有する食品（以下、加工食品という）、又は該抑制剤を用いて調理された食品（以下、調理食品という）が挙げられる。
　上記加工食品及び調理食品の具体例としては、天ぷら、唐揚げ、お好み焼き、チヂミ、ホットケーキ、ドーナツ、調整粉乳、ルー（カレー、シチュー、ハヤシ等）、即席調理飲食品（即席麺、即席スープ、即席味噌汁、インスタントコーヒー、インスタントココア等）、レトルト食品（カレー、シチュー、パスタソース、スープ等）、冷蔵・冷凍食品（ドーナツ、フライドポテト、唐揚げ、コロッケ、メンチカツ、トンカツ、魚フライ、イカリング、オニオンリング、グラタン、ピザ、チャーハン、ピラフ、うどん、ラーメン、肉まん、餃子等）、食肉加工品（ハム、ベーコン、ソーセージ、ハンバーグ、焼き豚、味付肉、ローストビーフ、ステーキ等）、水産加工品（魚肉ソーセージ、かまぼこ、明太子、ねぎとろ、塩から、シュリンプペースト等）、調味料（味噌、ソース、トマトソース、シーズニングソース、マヨネーズ、ドレッシング、ポン酢、風味油、中華料理の素、鶏ガラスープの素、ブイヨン、鍋つゆ等）、製菓・製パン類（ポテトチップス、チョコレート、クッキー、ケーキ、パイ、ビスケット、クラッカー、グミ、チューインガム、ヌガー、タフィー、キャラメル、キャンデー、錠菓、パン、デニッシュ等）、菓子材料（チョコレートスプレッド、チョコレートコーティング剤、杏仁豆腐の素、プリンの素、ゼリーの素のようなデザートミックス等）、サプリメント（錠剤、カプセル、固形、液状、粉末等）、健康食品（清涼飲料、青汁、シリアル、バー等）、乳製品（乳飲料、発酵乳飲料、バター、クリーム、プロセスチーズ、チーズ入り加工食品等）、乳製品代替品（マーガリン、ショートニング、ファットスプレッド、クリーミングパウダー、コーヒークリーム、ホイップクリーム等）、冷菓（アイスクリーム、ゼリー、プリン等）等が挙げられる。
　上記加工食品は、本発明の抑制剤を添加する以外は、使用する食材やその形態に応じて常法により製造することができる。
　本発明の抑制剤は、例えば食材の内部や表面、バッター液内、ブレンダー液内、ピックル液内、タンブリング液内等に添加される。
　本発明の抑制剤の加工食品への添加量は、大豆胚軸油の含有量として、通常、１～９０重量％でよく、好ましくは１～８５重量％であり、より好ましくは１～８０重量％であり、特に好ましくは１～７５重量％である。
　上記調理食品は、本発明の抑制剤を用いて調理又は製造する以外、使用する素材や特別な条件を必要とせず、常法により調理又は製造することができる。
　食品の調理方法の具体例としては、てんぷら、フライドポテト、唐揚げ、コロッケ、メンチカツ、トンカツ、魚フライ、イカリング、オニオンリング等を揚げる、牛肉、豚肉、鶏肉、チャーハン、ピラフ、野菜、魚、焼きそば等を炒める、肉、野菜、魚、豆等を煮る、肉、野菜、魚、豆、ピザ、ラーメン、うどん等にかける、パン、菓子等にぬる、パン、菓子等につける等が挙げられる。
　上記した本発明のメタボリックシンドローム抑制剤、それを含む油脂組成物や食品、又は該抑制剤を用いて調理された食品は、メタボリックシンドロームの抑制、特に体脂肪蓄積の抑制、内臓脂肪蓄積の抑制、及び／又は血中中性脂肪上昇の抑制に有効である。
　以下に、本発明の実施例及び比較例を示すが、本発明は、これらに限定されるものではない。
（試験試料）
　本実施例では、大豆胚軸油及び大豆胚軸油混合油を作製して、試験試料とした。作製方法を以下に示す。
（大豆胚軸油の作製方法）
　大豆種子を８０℃、４５分間加熱し、粗砕機で１／２未満の大きさに粉砕することにより、子葉、種皮及び胚軸の混合物を得た。得られた混合物を、風力分級機にかけて種皮を除き、子葉及び胚軸混合物を得た。得られた子葉及び胚軸混合物を、篩分機を用いて、７メッシュ篩上画分を取り除き、さらに１０～１４メッシュの篩に挟まれる画分を分取することで、胚軸画分（大豆胚軸４０重量％）を得た。
　上記胚軸画分を６０℃に加温して、圧扁機でフレークにし、ｎ－ヘキサンで油分を抽出してミセラを得た。得られたミセラから減圧下、６０～８０℃で残留するｎ－ヘキサンを除去して粗原油を得た。粗原油にリン酸０．１％を添加後、７０℃で１５分撹拌し、蒸留水を添加して７０℃で３０分撹拌後遠心分離し、ガム分を除いた（脱ガム）。次にリン酸０．１％添加後、７５℃で１５分撹拌し、水酸化ナトリウム水溶液を添加して２０分撹拌後、遠心分離した。次に５％相当量の蒸留水を加え、８０℃で１分間洗浄し、遠心分離をした（脱酸）。次に、活性白土を２％添加し、減圧下、８０℃で３０分間撹拌後、濾過した（脱色）。次いで、１８０℃で３０分間水蒸気蒸留（蒸気量２％）する（脱臭）ことにより大豆胚軸油を得た。
（大豆胚軸油混合油の作製方法）
　前記大豆胚軸油５０重量部と、大豆油（製品名：大豆白絞油ＮＳ、株式会社Ｊ－オイルミルズ社製）５０重量部とを混合して、大豆胚軸油混合油を得た。
〔実施例１〕動物試験及び細胞試験によるメタボリックシンドローム抑制剤の有効性評価
　本発明のメタボリックシンドローム抑制剤の有効成分である大豆胚軸油の体脂肪蓄積抑制作用、内臓脂肪抑制作用及び血中中性脂肪上昇抑制作用を動物試験で調べた。さらに、大豆胚軸油の体脂肪蓄積抑制及び内臓脂肪抑制作用に及ぼす成分を細胞試験により調べた。
Ａ．動物試験
（１）飼料の準備
　飼料に配合するメタボリックシンドローム抑制剤として、大豆胚軸油混合油を使用した。また、比較のため、大豆油（不鹸化物含有量４３０ｍｇ／１００ｇ）を用意した。上記二種類の油脂の植物ステロール分析を実施した。油中の植物ステロール濃度とステロール組成の結果を表２に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
　表３の組成に従って、キッチンエイドミキサー（ＫＳＭ５、株式会社エフエムアイ社製）にて１５分間混合することにより、予備飼育用飼料、大豆油配合飼料（比較例１）、及び大豆胚軸油混合油配合飼料（実施例１）を調製した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
（２）動物投与試験
　７週齢の雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを日本チャールズリバー株式会社より購入し、予備飼育用飼料を用いて６日間予備飼育した。予備飼育後、群ごとの平均体重に差が生じないように１群６匹に群分けした。群分け後、大豆胚軸油混合油配合飼料又は大豆油配合飼料からなる試験食を１２週間、摂餌した。予備飼育期間及び試験食摂取飼育期間中、温度２３℃±２℃、湿度４０～６０％、明期７：３０～１９：３０、暗期１９：３０～７：３０の環境下で飼育した。また、飼料は自由摂食とし、そして水は自由飲水とした。飼育期間中、体重を週１回、測定した。また、飼育期間中、２週毎に血中中性脂肪を測定した。
　試験食摂取最終前日の１７時に絶食を開始した。最終日にペントバルビタールナトリウムによる深麻酔下で開腹し、精巣上体脂肪、腸間膜脂肪、腎周囲脂肪、後腹壁脂肪、肝臓、及び大腿筋を摘出し、それらの重量測定を行った。体重、血中中性脂肪値、精巣上体脂肪、腸間膜脂肪、腎周囲脂肪、後腹壁脂肪、内臓脂肪重量（前記４脂肪の合算値）、内臓脂肪率（＝内臓脂肪重量／体重）、肝臓、肝臓比率（＝肝臓重量/体重）、大腿筋、筋肉率（＝大腿筋重量／体重）について統計処理をした（対応のないt検定）。図１～図１３のうち、有意差が確認されたものは、*もしくは**で示した。なお、*は危険率(p値)が０．０５未満であることを、**は危険率(p値)が０．０１未満であることを示す。
　試験中の摂餌量を比較した結果を図１に示す。黒色の棒グラフは、大豆油配合飼料摂取群、そして白色の棒グラフは、大豆胚軸油混合油配合飼料摂取群を示す。図１に示すとおり、試験期間中の飼料摂餌量は、実施例１の大豆胚軸油混合油配合飼料摂取群の方が比較例１の大豆油配合飼料摂取群よりも多かった。
　図２に、大豆胚軸油混合油配合飼料摂取群（－×－）及び大豆油配合飼料摂取群（－▲－）の体重上昇抑制効果を示す。図２に示すとおり、大豆胚軸油混合油配合飼料摂取群では、体重上昇が有意に抑制された。
　図１及び２から飼料効率（＝体重増加量／摂餌量）を求めた結果を、図３に示す。図３に示すとおり、飼料効率は、大豆胚軸油混合油配合飼料摂取群の方が大豆油配合飼料摂取群よりも低かった。大豆胚軸油混合油配合飼料摂取群の方が、摂餌量が多いことから、大豆胚軸油混合油配合飼料は、同じ量摂餌しても、体重が増加し難いといえる。
　図４～７に解剖時の各種脂肪重量、そして、図８に解剖時の上記脂肪４部位の内臓脂肪重量の合計を示す。図９には、解剖時の内臓脂肪重量／体重で示す内臓脂肪率を示す。図４～９に示すとおり、大豆胚軸油混合油配合飼料摂取群の内臓脂肪重量及び内臓脂肪率は、大豆油配合飼料摂取群に比べて有意に減少することが判明した。
　大豆胚軸油混合油配合飼料摂取群及び大豆油配合飼料摂取群の解剖時の肝臓重量及び肝臓比率（＝肝臓重量／体重）を、それぞれ図１０及び図１１に示す。肝臓重量と肝臓比率は、両群の間に有意な差がなかった。
　大豆胚軸油混合油配合飼料摂取群及び大豆油配合飼料摂取群の解剖時の大腿筋重量及び筋肉率（＝大腿筋重量／体重）を、それぞれ図１２及び図１３に示す。大腿筋重量と筋肉率は、大豆胚軸油混合油配合飼料摂取群の方が大豆油配合飼料摂取群より有意に高かった。
　大豆胚軸油混合油配合飼料摂取群は、摂餌量が多いにもかかわらず、大豆油配合飼料摂取群よりも体重の増加が抑えられている（図１～３）。大豆胚軸油混合油配合飼料摂取群は、体脂肪や内臓脂肪の蓄積を有意に抑制する（図４～９）。一方で、大豆胚軸油混合油配合飼料摂取群は、臓器や筋肉を減少させない（図１０～１３）。したがって、図２に示した本発明の抑制剤による体重増加抑制の効果は、体脂肪及び内臓脂肪の蓄積の抑制に基づくといえる。
　図１４に、飼育期間中の大豆胚軸油混合油配合飼料摂取群（－×－）及び大豆油配合飼料摂取群（－▲－）の血中中性脂肪の測定値を示す。大豆胚軸油混合油配合飼料摂取群（－×－）の血中中性脂肪値は、大豆油配合飼料摂取群（－▲－）に比べて低く推移した。従来、大豆胚軸油の成分には、血中コレステロール低下作用があることが判明している。今回、大豆胚軸油には、血中中性脂肪上昇抑制作用があることも判明した。したがって、本発明のメタボリックシンドローム抑制剤は、内臓脂肪型肥満と、血中コレステロール及び／又は血中中性脂肪の異常と関連する脂質異常症とを同時に改善又は防止することが判明した。
Ｂ．細胞試験
（１）試験物質の準備
　大豆胚軸油中の植物ステロール成分が内臓脂肪蓄積抑制作用をもたらしているか否かを試験した。動物試験に使用した大豆胚軸油と同様の操作にて大豆胚軸油（不鹸化物含有量４７１０mg／１００g）を得た。大豆胚軸油の植物ステロール分析結果を表４に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
　以下の手順で、上記大豆胚軸油から不鹸化物を取得した。まず、上記大豆胚軸油３ｇを３００ｍＬ共栓付三角フラスコに精秤し、２ｍｏｌ／Ｌ水酸化カリウム／エタノール溶液２５ｍＬ、及び０．０５ｇ／ｍＬ没食子酸／エタノール溶液２５ｍＬを加えた。前記三角フラスコに沸騰石を２個加え、冷却水を循環したソックスレー抽出器冷却管を接続し、ウォーターバスで発生させた水蒸気上で１時間加熱して鹸化反応を行った。
　鹸化反応液を５００ｍＬ容分液ロートに移し、前記三角フラスコ内に残った鹸化反応液を熱水１００ｍＬで共洗いし、分液ロートに移した。常温の純水５０ｍＬを加え、室温になるまで静置、冷却した。ジエチルエーテル１００ｍＬで前記三角フラスコを洗いながら分液ロートに入れた。分液ロートに栓をして１分間激しく振り混ぜ、水層とジエチルエーテルの２層に分離するまで静置した。下層（水層）を抜き取り、純水３０ｍＬを加え、栓をし、水層部で分液ロートの内壁全面を洗うように緩やかに２～３回転させ静置し、２層に分離した後、下層（水層）を抜き取った。再度、分液ロートに純水３０ｍＬを加え、栓をし、水層部によって分液ロートの内壁全面が洗われるように緩やかに２～３回転させ静置し、２層に分離した後、下層（水層）を抜き取った。純水３０ｍＬを加え、十分に振り混ぜた後、２層になるまで静置し、下層（水層）を抜き取った。この操作を、抜き取った下層の水層液がフェノールフタレイン溶液で着色しなくなるまで繰り返した。下層が着色しなくなったら、上層（ジエチルエーテル層）をビーカーに取り、無水硫酸ナトリウムで脱水処理後、ジエチルエーテル溶液を３００ｍＬナスフラスコに移し、ロータリーエバポレーターでジエチルエーテルを除去した。２５～３０ＫＰａの減圧下で、６０℃で３０分間乾燥処理を行った。デシケーター内で放冷後、得られた抽出物を不鹸化物とした。上記取得手順を繰り返し、大豆胚軸油から細胞試験用の不鹸化物を得た。
　上記不鹸化物１４．６５ｍｇ中の植物ステロール分析結果を、表５に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
　以下の手順で、上記不鹸化物からアベナステロール画分を取得した。まず、上記不鹸化物約４０ｍｇをテトラヒドロフラン４ｍLに溶解し、１分間超音波処理を行った。５Ｃ１８ＡＲカラム（２０ｍｍ（Ｉ．Ｄ．）×２５０ｍｍ、粒径５μｍ、Ｗａｔｅｒｓ社製）に不鹸化物溶液１４０μＬを注入し、メタノール：アセトニトリル：テトラヒドロフラン＝１：２：０．１の溶液により、流速２０ｍL／ｍｉｎで流して、アベナステロールを２１０ｎｍの吸光度によって確認しながら分離することにより、アベナステロール溶液を得た。得られたアベナステロール溶液を再度カラムに通過させ、高濃度アベナステロール溶液を得た。得られた高濃度アベナステロール溶液からロータリーエバポレーターを用いて溶媒を除去した。真空乾燥機で６０℃、３０分間乾燥させて、アベナステロール画分を得た。アベナステロール画分のアベナステロール純度は、８７．２重量％であった。アベナステロール画分からシトロスタジエノールは未検出であった。
（２）被験溶液調製法
　４.１４７ｍｇの不鹸化物にジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）１００μＬを加え、又は１.０７１６ｍｇのアベナステロール画分に、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）２５９．６５μＬを加え、１分間超音波処理を行い、被験溶液を得た。不鹸化物の被験溶液(アベナステロール濃度　１．４１ｍｇ／ｍｌ)を不鹸化物群、そして、アベナステロールの被験溶液(アベナステロール濃度　３．６０ｍｇ/ｍｌ)をアベナステロール画分群という。さらに不鹸化物及びアベナステロール画分無添加のＤＭＳＯ（対照群）を用意した。各群の被験溶液をそれぞれ、下記の細胞試験に記載の培地で１０００倍希釈し、１分間超音波処理して、被験溶液添加培地を得た。
（３）細胞試験
　内臓脂肪細胞培養キット（コスモバイオ株式会社製、ＶＡＣ２１）を用いて、添付のプロトコールに準じて細胞試験を実施した。具体的には、３７℃の湯浴中で溶解したラット初代内臓脂肪細胞３．０×１０６ｃｅｌｌｓを２４穴プレートに播種し、キットに添付の培地で４日間予備培養を行った。予備培養後、培地を除去し、被験溶液添加培地１ｍＬで２日間培養し、２日後に培地を除去し、被験溶液添加培地１ｍＬでさらに２日間培養した。
（４）オイルレッドＯ染色
　上記培地を除去して、ウェル内をリン酸緩衝液生理食塩水（ＰＢＳ）０．５ｍＬで洗浄した。１０％ホルマリン溶液０．５ｍＬを各ウェルに添加して室温１０分間固定した。ホルマリンを除去し、ＰＢＳ　０．５ｍＬでウェル内を洗浄した。６０％イソプロパノール０．５ｍＬを各ウェルに添加して室温１分間静置した。６０％イソプロパノールを除去した。オイルレッドＯ染色液（０．３ｇ　Ｏｉｌ　Ｒｅｄ／１００ｍＬイソプロパノール）０．５ｍＬで室温２０分間静置した。オイルレッドＯ染色液を除去し、６０％イソプロパノール０．５ｍＬを各ウェルに添加し、１分間静置した。６０％イソプロパノールを除去し、ＰＢＳ　０．５ｍＬでウェル内を洗浄した。倍率２００倍で顕微鏡観察し、脂肪滴が染色された内臓脂肪細胞をコンピュータの記録装置に画像として記録した。
（５）脂肪滴面積値の解析
　画像処理ソフトウエアImageJ (1.48v) (https://imagej.nih.gov/ij/より入手)を用いて、上記画像のオイルレッドOによって染色された脂肪滴面積値を測定した。細胞試験は３回行い、細胞試験ごとに各群４枚の画像を記録した。細胞試験ごとに、対象群の脂肪滴面積値の平均値を算出し、対照群の脂肪滴面積値の平均値を１としたときの各画像の脂肪滴面積値の相対値（以後、相対値と記載）を算出した。このようにして得た各群１２個の相対値を統計処理した（Ｔｕｋｅｙ－Ｋｒａｍｅｒ　ｔｅｓｔ）。図１５に、対照群に対する不鹸化物群及びアベナステロール群の相対値の結果を示す。また**は危険率(ｐ値)が、０．０１以下であることを示す。
　図１５に示すように、不鹸化物群及びアベナステロール群は、対照群と比較して、脂肪細胞への脂肪蓄積を有意に抑制した。したがって、不鹸化物中の有効成分の一つは、アベナステロールである可能性が高い。
　以上の細胞試験の結果から、大豆胚軸油を有効成分とするメタボリックシンドローム抑制剤は、体脂肪蓄積抑制及び内臓脂肪蓄積抑制効果を発揮するために、Δ７ステロール、特にアベナステロールを含むことが好ましいことが確認された。

Claims (8)

  1. 　大豆胚軸油を有効成分として含むメタボリックシンドローム抑制剤。
  2. 　前記メタボリックシンドローム抑制剤が、体脂肪蓄積抑制剤及び／又は血中中性脂肪上昇抑制剤である、請求項１に記載のメタボリックシンドローム抑制剤。
  3. 　前記体脂肪蓄積抑制剤が、内臓脂肪蓄積抑制剤である、請求項２に記載のメタボリックシンドローム抑制剤。
  4. 　前記大豆胚軸油を１～１００重量％含有する、請求項１に記載のメタボリックシンドローム抑制剤。
  5. 　請求項１に記載のメタボリックシンドローム抑制剤を含有するメタボリックシンドローム抑制用油脂組成物。
  6. 　請求項１に記載のメタボリックシンドローム抑制剤を含有する、又は該抑制剤を用いて調理された、メタボリックシンドローム抑制用食品。
  7. 　メタボリックシンドローム抑制剤の製造方法であって、大豆胚軸油を有効成分として添加することを含む、前記メタボリックシンドローム抑制剤の製造方法。
  8. 　大豆胚軸油を有効成分として含むメタボリックシンドローム抑制剤を食材に添加して調理することからなる、メタボリックシンドローム抑制用食品の製造方法。
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