WO2017049530A1 - 一种尿液对羟基苯丙氨酸代谢物检测试剂的制备方法 - Google Patents

一种尿液对羟基苯丙氨酸代谢物检测试剂的制备方法 Download PDF

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扈晓佳
梅宗泉
胡梦丽
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    • G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
    • G01N21/77—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator
    • G01N21/78—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator producing a change of colour

Definitions

  • the invention relates to the field of detection reagents, in particular to a preparation method of a urine p-hydroxyphenylalanine metabolite detection reagent.
  • the invention aims at the preparation of a urine p-hydroxyphenylalanine metabolite detection reagent with high sensitivity, simple operation, high accuracy and low cost in view of the deficiencies of the prior art.
  • the invention adopts the following technical scheme: a preparation method of a urine p-hydroxyphenylalanine metabolite detection reagent, which comprises the following steps:
  • the above preparation method of a urine p-hydroxyphenylalanine metabolite detecting reagent, the temperature of the mixture of the A solution, the B solution, the C solution, the D solution, and the A solution, the B solution, the C solution and the D solution are all Between 10-15 degrees Celsius.
  • a solution is prepared as follows: 20-25 g copper is dissolved in 250 ml of 0.5-1 M nitrous acid solution, and After the copper is completely dissolved, a solution A is prepared.
  • the preparation method of the urine p-hydroxyphenylalanine metabolite detecting reagent the preparation process of the C solution As follows: 15-25 g of nickel was dissolved in 250 ml of a 2-3 M sulfuric acid solution, and after the mercury was completely dissolved, a C solution was prepared.
  • step (5) the A solution, the B solution, the C solution and the D solution are mixed at a mass ratio of 1:1:1:1. .
  • the method for preparing a urine p-hydroxyphenylalanine metabolite detecting reagent wherein the sodium metabisulfite accounts for 0.2-0.5% by mass of the urine p-hydroxyphenylalanine metabolite detecting reagent.
  • the detection method is as follows: taking 3 ml of urine of the subject, dropping into 0.5 ml of detection reagent, shaking and standing for 3 min, the detection standard is: white/yellow precipitate or no precipitation, negative, red precipitate appears Positive, set the colorimetric plate according to the depth of the red. The darker the color, the more the metabolite content of p-hydroxyphenylalanine, the more serious the tumor may be. The color level 0 is a negative result.
  • the detection rate of the detection reagent of the present invention for liver cancer patients is about 95%, which is higher than the existing detection reagents.
  • the detection reagent of the present invention does not cause false positives, and is superior to the existing detection reagents.

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Abstract

一种尿液对羟基苯丙氨酸代谢物检测试剂的制备方法，包括如下步骤：制备0.2-1g/ml的亚硝酸铜溶液，作为A溶液；制备0.1-1g/ml的硝酸钴溶液，作为B溶液；制备0.15-1g/ml的硫酸镍溶液，作为C溶液；制备30%的双氧水溶液，作为D溶液；百分比指过氧化氢占水溶液的质量百分比；将A溶液、B溶液、C溶液、D溶液以质量比为1:（0.5-1）:（1-1.5）:1混合后，加入焦亚硫酸钠，搅拌均匀并制成淡绿色的尿液对羟基苯丙氨酸代谢物检测试剂。该方法采用A溶液、B溶液、C溶液、D溶液以最优质量比和最佳浓度混合并且加上焦亚硫酸钠以制成检测试剂，灵敏度高，假阳性率和假阴性率低，且操作简单成本低。

Description

一种尿液对羟基苯丙氨酸代谢物检测试剂的制备方法 技术领域
本发明涉及检测试剂领域，具体涉及一种尿液对羟基苯丙氨酸代谢物检测试剂的制备方法。
背景技术
恶性肿瘤是世界性疾病，也是人类最凶恶的杀手之一，全世界每年死于癌症的人数为800万左右。多年来，国内外许多专家学者对恶性肿瘤的早期发现和诊断进行了多方面的研究探讨，多种肿瘤标志物相继应用于对癌症病人的临床诊断并取得了一定的效果，但它们存在着操作繁琐、成本投入高、准确度易受多种因素影响等缺点。并且这些方法大多都是有创性的，这对于疾病的大规模筛查不利。因此，建立一种快速的无创肿瘤筛查方法更能适应大规模人群的健康筛查。随着代谢组学的兴起，已从寻找单一生物标志物转向寻找特异性的一组标志物群，从而开创肿瘤诊断方法研究的新途径。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供了一种灵敏度高、操作简单、准确度高、成本较低的尿液对羟基苯丙氨酸代谢物检测试剂的制备方法。
本发明采用以下技术方案：一种尿液对羟基苯丙氨酸代谢物检测试剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)制备0.2-1g/ml的亚硝酸铜溶液，作为A溶液；
(2)制备0.1-1g/ml的硝酸钴溶液，作为B溶液；
(3)制备0.15-1g/ml的硫酸镍溶液，作为C溶液；
(4)制备30％的双氧水溶液，作为D溶液；百分比指过氧化氢占水溶液的质量百分比；
(5)将A溶液、B溶液、C溶液、D溶液以质量比为1:(0.5-1):(1-1.5)：1混合后，加入焦亚硫酸钠，搅拌均匀并制成淡绿色的尿液对羟基苯丙氨酸代谢物检测试剂。
前述的一种尿液对羟基苯丙氨酸代谢物检测试剂的制备方法，A溶液、B溶液、C溶液、D溶液以及A溶液、B溶液、C溶液和D溶液的混合液的温度均为10-15摄氏度之间。
前述的一种尿液对羟基苯丙氨酸代谢物检测试剂的制备方法，所述的A溶液的制备过程如下：将20--25g铜溶于250ml的0.5-1M的亚硝酸溶液中，待铜完全溶解后，制成A溶液。
前述的一种尿液对羟基苯丙氨酸代谢物检测试剂的制备方法，所述的B溶液的制备过程如下：将10--25g钴溶于250ml的2-3M的硝酸溶液中，待铜完全溶解后，制成B溶液。
前述的一种尿液对羟基苯丙氨酸代谢物检测试剂的制备方法，所述的C溶液的制备过程 如下：将15--25g镍溶于250ml的2-3M的硫酸溶液中，待汞完全溶解后，制成C溶液。
前述的一种尿液对羟基苯丙氨酸代谢物检测试剂的制备方法，在步骤(5)中，A溶液、B溶液、C溶液、D溶液以质量比为1:1:1：1混合。
前述的一种尿液对羟基苯丙氨酸代谢物检测试剂的制备方法，焦亚硫酸钠占尿液对羟基苯丙氨酸代谢物检测试剂的质量百分比为0.2-0.5％。
本发明采用A溶液、B溶液、C溶液、D溶液以最优质量比和最佳浓度混合并且加上焦亚硫酸钠以制成检测试剂，灵敏度高，假阳性率和假阴性率低，且操作简单成本低；采用的亚硝酸浓度较低且配制温度也较低，以使得亚硝酸盐更为稳定，进而提高检测准确度和灵敏度。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步详细介绍。
制备实施例1
(1)制备亚硝酸铜溶液，作为A溶液；将20g铜溶于250ml的1M的亚硝酸溶液中，待铜完全溶解后，制成A溶液；
(2)制备硝酸钴溶液，作为B溶液；将20g钴溶于250ml的2M的硝酸溶液中，待铜完全溶解后，制成B溶液；
(3)制备硫酸镍溶液，作为C溶液；将20g镍溶于250ml的2M的硫酸溶液中，待汞完全溶解后，制成C溶液；
(4)制备30％的双氧水溶液，作为D溶液；过氧化氢质量为75g；
(5)将A溶液、B溶液、C溶液、D溶液以质量比为1:1:1：1混合后，加入焦亚硫酸钠，搅拌均匀并制成淡绿色的检测试剂。焦亚硫酸钠占尿液对羟基苯丙氨酸代谢物检测试剂的质量百分比为0.2％。A溶液、B溶液、C溶液、D溶液以及A溶液、B溶液、C溶液和D溶液的混合液的温度均为10-15摄氏度之间。
制备实施例2
(1)制备亚硝酸铜溶液，作为A溶液；将20g铜溶于250ml的1M的亚硝酸溶液中，待铜完全溶解后，制成A溶液；
(2)制备硝酸钴溶液，作为B溶液；将15g钴溶于250ml的2M的硝酸溶液中，待铜完全溶解后，制成B溶液；
(3)制备硫酸镍溶液，作为C溶液；将15g镍溶于250ml的2M的硫酸溶液中，待汞完全溶解后，制成C溶液；
(4)制备30％的双氧水溶液，作为D溶液；过氧化氢质量为75g；
(5)将A溶液、B溶液、C溶液、D溶液以质量比为1:0.5:1.5：1混合后，加入焦亚硫酸钠，搅拌均匀并制成淡绿色的检测试剂。焦亚硫酸钠占尿液对羟基苯丙氨酸代谢物检测试剂的质量百分比为0.3％。A溶液、B溶液、C溶液、D溶液以及A溶液、B溶液、C溶液和D溶液的混合液的温度均为10-15摄氏度之间。
制备实施例3
(1)制备亚硝酸铜溶液，作为A溶液；将20g铜溶于250ml的1M的亚硝酸溶液中，待铜完全溶解后，制成A溶液；
(2)制备硝酸钴溶液，作为B溶液；将25g钴溶于250ml的2M的硝酸溶液中，待铜完全溶解后，制成B溶液；
(3)制备硫酸镍溶液，作为C溶液；将25g镍溶于250ml的2M的硫酸溶液中，待汞完全溶解后，制成C溶液；
(4)制备30％的双氧水溶液，作为D溶液；过氧化氢质量为75g；
(5)将A溶液、B溶液、C溶液、D溶液以质量比为1:1:1.2：1混合后，加入焦亚硫酸钠，搅拌均匀并制成淡绿色的检测试剂。焦亚硫酸钠占尿液对羟基苯丙氨酸代谢物检测试剂的质量百分比为0.25％。A溶液、B溶液、C溶液、D溶液以及A溶液、B溶液、C溶液和D溶液的混合液的温度均为10-15摄氏度之间。
对比例1
(1)制备亚硝酸铜溶液，作为A溶液；将20g铜溶于250ml的1M的亚硝酸溶液中，待铜完全溶解后，制成A溶液；
(2)制备硝酸钴溶液，作为B溶液；将25g钴溶于250ml的2M的硝酸溶液中，待铜完全溶解后，制成B溶液；
(3)制备硫酸镍溶液，作为C溶液；将25g镍溶于250ml的2M的硫酸溶液中，待汞完全溶解后，制成C溶液；
(4)将A溶液、B溶液、C溶液以质量比为1:1:1.2：1混合后，加入焦亚硫酸钠，搅拌均匀并制成淡绿色的检测试剂。焦亚硫酸钠占尿液对羟基苯丙氨酸代谢物检测试剂的质量百分比为0.25％。A溶液、B溶液、C溶液以及A溶液、B溶液、C溶液的混合液的温度均为10-15摄氏度之间。
对比例2
(1)制备亚硝酸铜溶液，作为A溶液；将20g铜溶于250ml的1M的亚硝酸溶液中，待铜完全溶解后，制成A溶液；
(2)制备硝酸钴溶液，作为B溶液；将25g钴溶于250ml的2M的硝酸溶液中，待铜完全溶解后，制成B溶液；
(3)制备硫酸镍溶液，作为C溶液；将25g镍溶于250ml的2M的硫酸溶液中，待汞完全溶解后，制成C溶液；
(4)制备30％的双氧水溶液，作为D溶液；过氧化氢质量为75g；
(5)将A溶液、B溶液、C溶液、D溶液以质量比为1:1:1.2：1混合后，搅拌均匀并制成淡绿色的检测试剂。A溶液、B溶液、C溶液、D溶液以及A溶液、B溶液、C溶液和D溶液的混合液的温度均为10-15摄氏度之间。
取100个确诊的肝癌病人尿液样本、以及10个无癌症样本(即阴性样本)，分别用制备实施例1-3和对比例1-2进行尿液对羟基苯丙氨酸代谢物检测，检测结果如下表1和表2。
检测方法为：取被检者尿液3ml，滴入0.5ml的检测试剂中，摇匀，静置3min，检测标准是：出现白色/黄色沉淀或者不出现沉淀者，为阴性，出现红色沉淀者为阳性，根据红色的深浅设置比色板，颜色越深说明对羟基苯丙氨酸代谢物含量越多，肿瘤可能越严重。其中颜色等级0为阴性结果。
表1对肝癌病人的检测结果
Figure PCTCN2015090541-appb-000001
表2对阴性样本的检测结果
Figure PCTCN2015090541-appb-000002
由表1可知，本发明的检测试剂对肝癌病人的检出率为95％左右，高于现有的检测试剂。由表2可知，本发明的检测试剂不会造成假阳性，也优于现有的检测试剂。
需要说明的是，以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所做的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (7)

  1. 一种尿液对羟基苯丙氨酸代谢物检测试剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
    (1)制备0.2-1g/ml的亚硝酸铜溶液，作为A溶液；
    (2)制备0.1-1g/ml的硝酸钴溶液，作为B溶液；
    (3)制备0.15-1g/ml的硫酸镍溶液，作为C溶液；
    (4)制备30％的双氧水溶液，作为D溶液；百分比指过氧化氢占水溶液的质量百分比；
    (5)将A溶液、B溶液、C溶液、D溶液以质量比为1:(0.5-1):(1-1.5)：1混合后，加入焦亚硫酸钠，搅拌均匀并制成淡绿色的尿液对羟基苯丙氨酸代谢物检测试剂。
  2. 根据权利要求1所述的一种尿液对羟基苯丙氨酸代谢物检测试剂的制备方法，其特征在于，
    A溶液、B溶液、C溶液、D溶液以及A溶液、B溶液、C溶液和D溶液的混合液的温度均为10-15摄氏度之间。
  3. 根据权利要求1所述的一种尿液对羟基苯丙氨酸代谢物检测试剂的制备方法，其特征在于，所述的A溶液的制备过程如下：将20--25g铜溶于250ml的0.5-1M的亚硝酸溶液中，待铜完全溶解后，制成A溶液。
  4. 根据权利要求1所述的一种尿液对羟基苯丙氨酸代谢物检测试剂的制备方法，其特征在于，所述的B溶液的制备过程如下：将10--25g钴溶于250ml的2-3M的硝酸溶液中，待铜完全溶解后，制成B溶液。
  5. 根据权利要求1所述的一种尿液对羟基苯丙氨酸代谢物检测试剂的制备方法，其特征在于，所述的C溶液的制备过程如下：将15--25g镍溶于250ml的2-3M的硫酸溶液中，待汞完全溶解后，制成C溶液。
  6. 根据权利要求1所述的一种尿液对羟基苯丙氨酸代谢物检测试剂的制备方法，其特征在于，在步骤(5)中，A溶液、B溶液、C溶液、D溶液以质量比为1:1:1：1混合。
  7. 根据权利要求1所述的一种尿液对羟基苯丙氨酸代谢物检测试剂的制备方法，其特征在于，焦亚硫酸钠占尿液对羟基苯丙氨酸代谢物检测试剂的质量百分比为0.2-0.5％。
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