WO2016148324A1 - 태양광 차단 기능성 물질 스크리닝 방법 및 태양광 차단 효능 평가 방법 - Google Patents

태양광 차단 기능성 물질 스크리닝 방법 및 태양광 차단 효능 평가 방법 Download PDF

Info

Publication number
WO2016148324A1
WO2016148324A1 PCT/KR2015/002659 KR2015002659W WO2016148324A1 WO 2016148324 A1 WO2016148324 A1 WO 2016148324A1 KR 2015002659 W KR2015002659 W KR 2015002659W WO 2016148324 A1 WO2016148324 A1 WO 2016148324A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
blue
hbd
sunlight
sunscreen
violet light
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/KR2015/002659
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
김형준
최민식
정지용
박주열
이태룡
신동욱
손의동
채민정
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Amorepacific Corp
Original Assignee
Amorepacific Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Amorepacific Corp filed Critical Amorepacific Corp
Priority to CN201580080137.5A priority Critical patent/CN107850602B/zh
Priority to US15/559,348 priority patent/US10533992B2/en
Priority to PCT/KR2015/002659 priority patent/WO2016148324A1/ko
Priority to JP2017547424A priority patent/JP6594992B2/ja
Publication of WO2016148324A1 publication Critical patent/WO2016148324A1/ko
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/19—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing inorganic ingredients
    • A61K8/27—Zinc; Compounds thereof
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/30—Zinc; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/19—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing inorganic ingredients
    • A61K8/29—Titanium; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/33—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing oxygen
    • A61K8/37—Esters of carboxylic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/49—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds
    • A61K8/494—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with more than one nitrogen as the only hetero atom
    • A61K8/4966—Triazines or their condensed derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q17/00—Barrier preparations; Preparations brought into direct contact with the skin for affording protection against external influences, e.g. sunlight, X-rays or other harmful rays, corrosive materials, bacteria or insect stings
    • A61Q17/04—Topical preparations for affording protection against sunlight or other radiation; Topical sun tanning preparations
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6881—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids from skin
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2440/00—Post-translational modifications [PTMs] in chemical analysis of biological material
    • G01N2440/26—Post-translational modifications [PTMs] in chemical analysis of biological material nitrosylation

Definitions

  • the contents described herein relate to a method of measuring the sunscreen function by changing the expression of a specific gene in skin cells, specifically, a method of screening a sunscreen functional material or a method of evaluating sunscreen efficacy.
  • Solar light (solar energy) is composed of radio waves, microwaves, infrared rays, visible rays, ultraviolet rays, X-rays, and ⁇ -rays from the longest wavelength of light. And as the negative effects of sunlight on skin are known, many products have been developed to protect the skin from sunlight.
  • the proportion of ultraviolet light in the sunlight is very small and the sunlight is occupied more by the electromagnetic waves in the other wavelength range, but the blocking effect of most sunlight having a wavelength other than the UV blocking effect through the SPF and PA There is a problem that can not be confirmed.
  • sunscreen products have a very low sunscreen function against visible light including a blue / violet light region having a wavelength of 400 to 500 nm, which induces the most skin damage among the visible light.
  • no blocking indexes for evaluating the blocking efficacy of blue / violet light are not set.
  • Patent Document 1 Domestic Patent Publication No. 10-0151635
  • One aspect of the present invention provides a method for screening a sunscreen material by measuring the blocking function of sunlight, specifically blue / violet light, or a method for evaluating the sunscreen efficacy that can evaluate the sunscreen efficacy. I would like to.
  • another aspect of the present invention is to provide a composition that can block blue / violet light by the above method.
  • AMPs antimicrobial peptides
  • the reduction of one or more reductions in the amount of expression of the antimicrobial peptide in the skin cells and the amount of S-nitrosylated protein produced by the subject material has a sunscreen function
  • It provides a method for measuring the sunscreen function further comprises the step of screening the sunscreen functional material determined to be.
  • one embodiment of the present invention is one of the expression amount of the antimicrobial peptide in the skin cells and the production amount of S-nitrosylated protein by blue / violet light of 400 ⁇ 500nm wavelength in sunlight It provides a composition for blocking sun, comprising a substance that suppresses the above reduction as an active ingredient.
  • the measurement method according to the present invention revealed that when sunlight is irradiated to the skin, the expression level of antimicrobial peptides (AMPs) and the production amount of S-nitrosylation protein in skin cells are reduced.
  • AMPs antimicrobial peptides
  • the measurement method according to the present invention can discriminate even the blocking of blue / violet light of 400-500 nm wavelength, which induces the most skin damage among visible light. It is possible to provide a more detailed sunscreen efficacy evaluation results, and it is possible to index the sunscreen degree using this.
  • the present invention includes a material determined to have a solar blocking function as an active ingredient as an active ingredient, it is possible to block from blue / violet light of 400 ⁇ 500 nm wavelength to differentiate from the existing UV blocking composition A composition of use may be provided.
  • Figures 1a to 1g is the expression of each gene (Relative mRNA Level) of the antibacterial peptides HBD-1, HBD-2, HBD-3, LL-37, Psoriasin, Dermcidin, RNase7 used as an embodiment of the present invention
  • a graph comparing blue / violet light before irradiation (cont.) And after irradiation (Blue) is shown.
  • UV ultraviolet rays
  • HBD-1, HBD-2, HBD-3, Psoriasin, Dermcidin, RNase7 used as an embodiment of the present invention
  • the graphs show the comparison of the changes before and after irradiation (UV) and irradiation intensity.
  • 3A to 3G illustrate HBD-1, HBD-2, HBD-3, when poly I: C and Flagellin were treated to induce viral or bacterial infection in human normal keratinous skin cells. Changes in the expression levels of LL-37, lysine, dummyidine, and RNase7 genes were compared between blue / violet light irradiation (cont.) And post-irradiation (Blue).
  • Figures 4a to 4g are treated with Poly I: C to induce the infection of viruses, bacteria in human normal keratinous skin cells, PTIO and nitric oxide scavenger (Nitric Oxide scavenger) Changes in the expression levels of HBD-1, HBD-2, HBD-3, LL-37, thyrasine, dummyidine, and RNase7 genes after treatment with low NAC, ROS scavenger, were investigated before blue / violet light irradiation. -) And graph after irradiation (Blue) are shown.
  • Figure 5 shows the result of comparing the change in the amount of production of S-nitrosylated protein (SNO-protiens) when blue / violet light irradiation on human normal keratinous skin cells (SDS-PAGE gel appearance).
  • SNO-protiens S-nitrosylated protein
  • Figure 6 shows the results of comparing the change in the amount of production of S-nitrosylated protein (SNO-protiens) when UV light is irradiated to human normal keratin skin cells (SDS-PAGE gel appearance).
  • SNO-protiens S-nitrosylated protein
  • FIG. 7A to 7G illustrate HBD-1, HBD-2, HBD-3, LL-37, Psoriasin, and Drmicidin of Examples 1 to 3 when blue / violet light was irradiated (Blue). , And shows a graph comparing each expression level of RNase7.
  • Figure 8 shows the results of comparing the change in the amount of production of S-nitrosylated protein (SNO-protiens) of Examples 1 and 3 when the blue / violet light (irradiation of SDS-PAGE gel) will be.
  • the term "sunlight” is the concept of the broadest including all wavelengths of sunlight such as radio waves, microwaves, infrared rays, visible rays, X-rays and ⁇ -rays as well as ultraviolet rays.
  • skin cell means a cell of a tissue covering an animal's body surface, and includes not only tissues covering a body surface such as a face or a body, but also cells present in the scalp and hair. Is the concept.
  • One embodiment of the present invention is one or more of the amount of expression of antimicrobial peptides (AMPs) in the skin cells reduced by sunlight irradiation and the amount of production of S-nitrosylation protein (S-Nitrosylation), It provides a method for measuring solar blocking function comprising the step of measuring the change by.
  • AMPs antimicrobial peptides
  • S-Nitrosylation S-nitrosylation protein
  • the result of measuring the change, when the reduction of one or more reduction in the amount of the expression of the antimicrobial peptides and the amount of S-nitrosylated protein in the skin cells by the target material is the sunscreen function It provides a method for measuring the sunscreen function further comprises the step of screening the sunscreen functional material to determine that there is.
  • the sunlight irradiated in the method for measuring the sunscreen function of the present invention includes a blue / violet light (Blue / Violet light) of 400 ⁇ 500nm wavelength.
  • the sunlight may further include ultraviolet rays of 290 ⁇ 400nm wavelength.
  • the sunlight specifically, blue / violet light of 400 ⁇ 500nm wavelength reduces the amount of expression of the antimicrobial peptides (AMPs).
  • the blue / violet light is a cytokine (cytokine) and related genes, proteins as RANTES (Human CCL5), CCL 2 (Chemokine ligand 2), IL-6 (Interleukin-6), IL-8 (Interleukin- 8), TNF- ⁇ (Tumor necrosis factor- ⁇ ), COX-2 (Cyclooxygenase-2) can reduce the amount of expression.
  • RANTES Human CCL5
  • CCL 2 Chemokine ligand 2
  • IL-6 Interleukin-6
  • IL-8 Interleukin- 8
  • TNF- ⁇ Tuor necrosis factor- ⁇
  • COX-2 Cyclooxygenase-2
  • the antimicrobial peptide is a protein having a small molecular weight, and has an antimicrobial activity that prevents infection by pathogens such as bacteria, viruses and fungi.
  • the antimicrobial peptides have been reported to induce angiogenesis, wound healing and chemotaxis, and are structurally characterized as having both positive and hydrophilic and hydrophobic sites.
  • the antimicrobial peptides are HBD-1 (Human beta-defensin-1, ACCESSION NP_005209, VERSION NP_005029.1 GI: 4885181), HBD-2 (Human beta-defensin-2, ACCESSION NP_004933, VERSION NP_004933 .1 GI: 4826692), HBD-3 (Human beta-defensin-3, ACCESSION AAG02237, VERSION AAG02237.1 GI: 49931627), LL-37 (Cathelicidin-37, ACCESSION NP_004336, VERSION NP_004336.3 GI: 348041314) Surrey Asosin (Psoriasin, ACCESSION AAA60210, VERSION AAA60210.1 GI: 190668), dummyidin (Dermcidin, ACCESSION NP_444513, VERSION NP_4445
  • HBD Human beta-defensin
  • HBD-2 Human beta-defensin
  • HBD-3 LL (Cathelicidin) -37
  • Suryacin Psoriasin
  • Dermcidin, ribonuclease (RNase) 7 is a congenital immune factor present in the skin's respiratory tract eye conjunctiva, killing or inhibiting gram positive / negative bacteria and fungal viruses. They are present in the secretions of sweat glands and sebaceous glands in addition to keratinocytes, secreted and deposited on the skin surface through sweat and sebum, contributing to the formation of antimicrobial barriers.
  • the antimicrobial peptides have a characteristic of increasing expression level when irradiated with UV light as opposed to blue / violet irradiation.
  • Expression characteristics of the antimicrobial peptides against ultraviolet rays are Glaser R. et al. UV-B radiation induces the expression of antimicrobial peptides in human keratinocytes in vitro and in vivo, J Allergy Clin Immunol. 2009 May; 123 (5): 1117-23. Which is hereby incorporated by reference in its entirety.
  • S-nitrosylation (S-Nitrosylation) protein is increased in the amount of UV irradiation, but according to another embodiment of the present invention, the sunlight, specifically, blue / violet light of the wavelength of 400 ⁇ 500nm is the S- Reduces the production of S-Nitrosylation proteins.
  • nitric oxide which is associated with many functions in vivo, can react with active cysteine residues to produce protein S-nitrosylation, and protein S-nitrosylation, like protein phosphorylation, is a protein activity. It can regulate cell signaling.
  • the blue / violet light undergoes normal nitrosylation in vivo, i.e., de-nitrosylation to remove nitric oxide from the protein that is S-nitrosylated as described above. Can be induced.
  • antimicrobial peptides AMPs
  • the expression level of the gene of the antimicrobial peptide or the protein of S-nitrosylation may be, for example, reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) and northern blot analysis, enzyme-linked immunosorbent assay (enzyme-linked immunosorbent). assay (ELISA), radioimmunoassay (RIA), sandwich assay, western blot, immunoblot, immunohistochemical staining, Biotin-switch assay And combinations thereof.
  • RT-PCR reverse transcriptase polymerase chain reaction
  • ELISA enzyme-linked immunosorbent assay
  • RIA radioimmunoassay
  • sandwich assay western blot
  • immunoblot immunohistochemical staining
  • Biotin-switch assay And combinations thereof enzyme-linked immunosorbent assay
  • the method according to the invention comprises applying a subject material to a solar transmissive material, and placing skin cells underneath the solar transmissive material before measuring the change.
  • the method may further include irradiating sunlight on the material.
  • the solar transmissive material may be used as long as it has a property of being able to apply the material to be measured while transmitting sunlight, ie, the ultraviolet ray or blue / violet light.
  • a quartz plate or a target may be used.
  • a band pass filter or the like that transmits only a light ray region may be used, but is not limited thereto.
  • the target material is a material for evaluating the sunscreen efficacy, and any material applied to human skin is not limited to products or formulations including the same, such as cosmetics, drugs, fibers, and the like.
  • the skin cells used in the method for measuring the sunscreen function of the present invention may use all human or animal-derived skin cells, for example, keratinocytes, fibroblasts And melanocytes such as Merkel cells, but are not limited thereto.
  • the skin immunity is lowered and various skin problems, diseases, etc. occur, and thus the skin moisturizing ability is increased. Degraded and accelerated aging is not good for skin care.
  • the method for measuring the sunscreen function of the present invention by screening and developing a sunscreen functional material that can block blue / violet light, to prevent the negative effects of the skin induced by the blue / violet light as described above can do.
  • the degree of blocking efficacy of the blue / violet light can be objectively evaluated, it is also possible to index it.
  • an active ingredient to block the blue / violet light of 400 ⁇ 500nm wavelength in sunlight specifically blue / violet light (Blue / Violet light) can provide a sunscreen composition comprising a substance that inhibits changes in one or more of the expression of the antimicrobial peptide in the skin cells and the amount of S-nitrosylated protein produced as an active ingredient have.
  • the antimicrobial peptides are HBD (Human beta-defensin) -1, HBD-2, HBD-3, LL (Cathelicidin) -37, Pryriasin, Dermcidin and Ribonuclease
  • HBD Human beta-defensin
  • HBD-2 Human beta-defensin
  • HBD-3 HBD-3
  • LL Cathelicidin
  • Pryriasin Dermcidin
  • Ribonuclease One or more of (RNase) 7 can be exemplified.
  • the active ingredient of the composition may be a target material of which the solar blocking function is measured by the method for measuring solar blocking function according to the embodiments of the present invention described above.
  • the active ingredient may include, for example, one or more of titanium oxide (TiO 2 ), zinc oxide (ZnO), and tinasolve, and may be used without limitation as long as it is a component that blocks sunlight contained in sunscreen products. have.
  • test examples examples and comparative examples.
  • test examples, examples and comparative examples are provided only for the purpose of illustration in order to facilitate understanding of the present invention, and the scope and scope of the present invention is not limited by the following test examples, examples and comparative examples.
  • the experiment to measure the change in the amount of expression of the antimicrobial peptide when irradiated to the skin cells of blue / violet light (Blue / Violet light) of 400 ⁇ 500nm wavelength was carried out as follows.
  • human epidermal neonatal keratinocyte cells used in the present invention are commercially secured and recommended methods, which are purchased from Lonza, Inc., Walkersville, MD, Subcultured and incubated in a CO 2 incubator (CO 2 incubator) at 37 °C, 5% CO 2 conditions. Cell cultures were cultured according to Lonza's instructions.
  • KBM-2 (Clonetics CC-3103) medium
  • KGM-2 Bullet Kit Bovine pituitary extract
  • hEGF human epidermal growth factor
  • Insulin insulin
  • hydro 0.5 ml of Cortison 0.5 ml of Transferrin
  • 0.5 ml of Epinephrine 0.5 ml of Epinephrine
  • 0.5 ml of Gentamycin Sulfate + Amphofericin-B (GA-1000) were used. .
  • RT Superscript Reverse Transcriptase
  • the experiment to measure the change in the amount of expression of the antimicrobial peptide when irradiated to the skin cells of blue / violet light (Blue / Violet light) of 400 ⁇ 500nm wavelength was carried out as follows.
  • human epidermal neonatal keratinocyte cells used in the present invention are commercially secured and recommended methods, which are purchased from Lonza, Inc., Walkersville, MD, Subcultured and incubated in a CO 2 incubator (CO 2 incubator) at 37 °C, 5% CO 2 conditions. Cell cultures were cultured according to Lonza's instructions.
  • KBM-2 (Clonetics CC-3103) medium
  • KGM-2 Bullet Kit Bovine pituitary extract
  • hEGF human epidermal growth factor
  • Insulin insulin
  • hydro 0.5 ml of Cortison 0.5 ml of Transferrin
  • 0.5 ml of Epinephrine 0.5 ml of Epinephrine
  • 0.5 ml of Gentamycin Sulfate + Amphofericin-B (GA-1000) were used. .
  • RT Superscript Reverse Transcriptase
  • 3A to 3G show HBD-1, HBD-2, HBD-3, and LL-37 treated with Poly I: C and flagellin to induce viral and bacterial infections in human normal keratinous skin cells. Changes in the expression levels of, lysine, dummyidine, and RNase7 genes were compared between blue / violet light irradiation (cont.) And post-irradiation (Blue). As shown in FIG. 3, when the antimicrobial peptides HBD-1, HBD-2, HBD-3, LL-37, thyrasine, dummyidine, and RNase7 were increased by Poly I: C and flagellin, blue / By irradiation of violet light it can be confirmed that the expression amount of each gene is reduced.
  • the experiment to measure the change in the amount of expression of the antimicrobial peptide when irradiated to the skin cells of blue / violet light (Blue / Violet light) of 400 ⁇ 500nm wavelength was carried out as follows.
  • human epidermal neonatal keratinocyte cells used in the present invention are commercially secured and recommended methods, which are purchased from Lonza, Inc., Walkersville, MD, Subcultured and incubated in a CO 2 incubator (CO 2 incubator) at 37 °C, 5% CO 2 conditions. Cell cultures were cultured according to Lonza's instructions.
  • KBM-2 (Clonetics CC-3103) medium
  • KGM-2 Bullet Kit Bovine pituitary extract
  • hEGF human epidermal growth factor
  • Insulin insulin
  • hydro 0.5 ml of Cortison 0.5 ml of Transferrin
  • 0.5 ml of Epinephrine 0.5 ml of Epinephrine
  • 0.5 ml of Gentamycin Sulfate + Amphofericin-B (GA-1000) were used. .
  • nitric oxide scavenger PTIO (4-Carboxyphenyl) -4,4,5,5-tetramethylimidazoline-1-oxyl-3-oxide potassium salt
  • reactive oxygen species scavenger Low NAC N-Acetyl-L-cysteine
  • RT Superscript Reverse Transcriptase
  • the experiment to measure the change in the amount of production of S-nitrosylation protein when the blue / violet light (Blue / Violet light) of 400 ⁇ 500nm wavelength to the skin cells It carried out as follows.
  • human epidermal neonatal keratinocyte cells used in the present invention are commercially secured and recommended methods, which are purchased from Lonza, Inc., Walkersville, MD, Subcultured and incubated in a CO 2 incubator (CO 2 incubator) at 37 °C, 5% CO 2 conditions. Cell cultures were cultured according to Lonza's instructions.
  • KBM-2 (Clonetics CC-3103) medium
  • KGM-2 Bullet Kit Bovine pituitary extract
  • hEGF human epidermal growth factor
  • Insulin insulin
  • hydro 0.5 ml of Cortison 0.5 ml of Transferrin
  • 0.5 ml of Epinephrine 0.5 ml of Epinephrine
  • 0.5 ml of Gentamycin Sulfate + Amphofericin-B (GA-1000) were used. .
  • the cultured cells were irradiated with 400 to 500 nm of blue / violet light at 10, 30 and 60 J / cm 2 , respectively, and the culture medium of human normal keratinous skin cells was removed, and 2 ml of phosphate buffered saline (PBS) was used. After washing the cells with a biotin-switch assay for detecting protein S-nitrosylation. Specifically, the washed cells were lysed with HENTS solution (HEPES, Triton X100, SDS, protease inhibitor, EDTA) for 10 minutes and only the supernatant was taken.
  • HENTS solution HPES, Triton X100, SDS, protease inhibitor, EDTA
  • Precipitate protein with acetone dissolve in HENS solution, reduce the input for correction by 5%, add 20 ⁇ l of avidin-agarose beads (Pierce), and react for 12 hours at 4 °C. I was. After washing the beads five times with neutralization solution (HEPES, EDTA, NaCl, Triton X 100), put the sample buffer (boiling) and boil and perform SDS-PAGE with the input (input). Thereafter, silver-stained (S-Nitrosylation) protein was identified by SDS-PAGE gel through silver staining, which is shown in FIG. 5.
  • neutralization solution HPES, EDTA, NaCl, Triton X 100
  • SNO-proteins S-nitrosylated proteins in vivo are increased as the intensity of blue / violet light irradiation increases as compared with the control (cont) that does not irradiate blue / violet light. It can be seen that the decrease.
  • the UV and blue / violet light transmission degree of the target material was measured as follows.
  • the sunscreen formulations of Examples 1 to 3 as the subject material were prepared according to conventional methods in the following composition (unit: wt%).
  • Example 2 TiO 2 2 2 2 ZnO 2 2 2 Octyl methoxy cinnamate (OMC) 7 7 7 Ethylhexyl Salicylate - 3 3 Tinosorb S 3 - 3 Cetiol CC 5.00 5.00 5.00 Nomcort-HK-G 1.50 1.50 1.50 Ozokerite 1.00 1.00 1.00 Abil EM90 1.50 1.50 1.50 Crill-6 0.50 0.50 0.50 Benton 27VCG 1.40 1.40 1.40 DC 2-9040 3.00 3.00 3.00 DC 345 3.00 3.00 3.00 Finsolv TN 20.00 20.00 20.00 20.00 Distilled water 42.73 42.73 39.73 EDTA.2Na 0.02 0.02 0.02 NaCl 1.00 1.00 1.00 glycerin 5.00 5.00 5.00 Polyethylene (PE) 0.30 0.30 0.30 Sensiva SC50 0.05 0.05 0.05 total 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00
  • the SPF and PA clinical index of Examples 1 to 3 and the transmittance of blue / violet light were measured, respectively, and the results are shown in Table 3 below.
  • the transmittance of blue / violet light is applied to the sunscreen formulations of Examples 1 to 3 in an amount of 2 mg / cm 2 on the band pass filter, respectively, and then irradiated with a light source including a blue / violet light region and then transmitted blue / violet / light.
  • the violet light wavelength range 400-500 nm
  • SPF-290S sunscreen analyzer system which is a spectrophotometer.
  • SPF (skin erythema) and PA (skin blackening) confirmation experiments by ultraviolet rays were conducted according to the method of the Sunscreen Test Method Food and Drug Administration (KFDA).
  • human epidermal neonatal keratinocyte cells used in the present invention are commercially secured and recommended methods, which are purchased from Lonza, Inc., Walkersville, MD, Subcultured and incubated in a CO 2 incubator (CO 2 incubator) at 37 °C, 5% CO 2 conditions. Cell cultures were cultured according to Lonza's instructions.
  • KBM-2 (Clonetics CC-3103) medium
  • KGM-2 Bullet Kit Bovine pituitary extract
  • hEGF human epidermal growth factor
  • Insulin insulin
  • hydro 0.5 ml of Cortison 0.5 ml of Transferrin
  • 0.5 ml of Epinephrine 0.5 ml of Epinephrine
  • 0.5 ml of Gentamycin Sulfate + Amphofericin-B (GA-1000) were used. .
  • RT Superscript Reverse Transcriptase
  • S-nitrosylation according to a material having a sun blocking function when irradiating blue / violet light (Blue / Violet light) of 400 ⁇ 500nm wavelength to the skin cells was carried out as follows.
  • human epidermal neonatal keratinocyte cells used in the present invention are commercially secured and recommended methods, which are purchased from Lonza, Inc., Walkersville, MD, Subcultured and incubated in a CO 2 incubator (CO 2 incubator) at 37 °C, 5% CO 2 conditions. Cell cultures were cultured according to Lonza's instructions.
  • KBM-2 (Clonetics CC-3103) medium
  • KGM-2 Bullet Kit Bovine pituitary extract
  • hEGF human epidermal growth factor
  • Insulin insulin
  • hydro 0.5 ml of Cortison 0.5 ml of Transferrin
  • 0.5 ml of Epinephrine 0.5 ml of Epinephrine
  • 0.5 ml of Gentamycin Sulfate + Amphofericin-B (GA-1000) were used. .
  • the culture medium of human normal keratinous skin cells is then removed, the cells are washed with 2 ml of Phosphate Buffered Saline (PBS), and then biotin-switch assay for protein S-nitrosylation detection. switch assay).
  • PBS Phosphate Buffered Saline
  • biotin-switch assay for protein S-nitrosylation detection. switch assay.
  • the washed cells were lysed with HENTS solution (HEPES, Triton X100, SDS, protease inhibitor, EDTA) for 10 minutes and only the supernatant was taken. Protein quantification was performed at 600 ⁇ g / 200 ⁇ l using HEN (HEPES, protease inhibitor, EDTA) solution.
  • MMTS (Sigma) was added to 10 mM and reacted at 50 ° C. for 15 minutes. After protein precipitation with acetone, it was dissolved in 50mM Ascorbic Acid (Sigma) HENS solution (HEPES, SDS, protease inhibitor, EDTA) containing 1mM HPDP-Biotin (Sierite) by reacting at 37 °C for 1 hour. Biotin was bound to the cyclized cysteine. Precipitate protein with acetone, dissolve in HENS solution, reduce the input for correction by 5%, add 20 ⁇ l of avidin-agarose beads (Pierce), and react for 12 hours at 4 °C. I was.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Cosmetics (AREA)

Abstract

본 발명의 태양광 차단 기능 측정방법은 태양광 조사에 의해 감소하는 피부 세포 내 항균성 펩티드(antimicrobial peptides, AMPs)의 발현량 및 S-나이트로실레이션(S-Nitrosylation)된 단백질의 생성량 중 하나 이상의, 대상 물질에 의한 변화를 측정함으로써, 기존에 육안평가를 통해 자외선 차단정도를 평가하던 방법과 달리 정확하고 객관적으로 태양광 차단 정도를 측정 및 판단할 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 측정방법은 자외선 차단 지수만을 제공하던 기존의 태양광 차단 효능 평가 방법과 달리 가시광선 중 가장 피부 손상을 가장 많이 유도하는 400~500 nm 파장의 블루/바이올렛 라이트의 차단여부까지 판별할 수 있으며, 보다 세분화된 태양광 차단 효능 평가 결과를 제공할 수 있다. 나아가 이를 이용해 태양광 차단 정도를 지수화할 수 있으며, 정상피부를 블루/바이올렛 라이트로부터 보호하는 태양광 차단용 조성물을 제공할 수 있다.

Description

태양광 차단 기능성 물질 스크리닝 방법 및 태양광 차단 효능 평가 방법
본 명세서에 기재된 내용은 피부 세포에서 특정 유전자의 발현변화를 통해 태양광 차단 기능을 측정하는 방법, 구체적으로 태양광 차단 기능성 물질을 스크리닝 방법 또는 태양광 차단 효능을 평가하는 방법에 관한 것이다.
태양광(태양에너지)은 빛의 파장이 긴 쪽에서부터 차례로 라디오파, 초단파, 적외선, 가시광선, 자외선, X선 및 γ선 등으로 이루어진다. 그리고 태양광의 피부에 대한 부정적인 영향이 알려지면서, 이러한 태양광으로부터 피부를 보호하기 위한 많은 제품이 개발되었다.
그러나, 상술한 바와 같이 태양광에는 여러 다양한 파장의 전자기파들이 존재함에도, 현재 대부분의 태양광 차단 효능은 자외선을 얼마나 효과적으로 차단할 수 있는 지로만 판단되고 있다. 이에 따라 태양광 차단 제품의 효능 평가도 자외선 차단정도를 평가하는 지표인, "SPF(sun protection factor)"라 명명되는 UVB 영역(290~320 nm)이 유도하는 홍반(erythema) 및 "PA(Protection of UVA)"로 명명되는 UVA 영역(320~400 nm)이 유도하는 흑화(Persistent Pigment Darkening) 현상을 실험자가 육안으로 관찰하는 방법을 통해서만 이루어지고 있다. 즉, 실제로 태양광에서 자외선이 차지하는 비중은 매우 적으며 태양광은 다른 파장영역의 전자기파들이 더 많은 비중을 차지하고 있음에도, 상기 SPF와 PA를 통한 자외선 차단효능 외에 다른 파장을 갖는 대부분의 태양광의 차단 효능을 확인할 수 없다는 문제가 있다.
실제로 시판되는 대부분의 태양광 차단 제품들의 경우 상기와 같은 SPF와 PA로 표시되는 자외선 차단지수에만 초점을 맞추어 개발되어 왔고, 그 결과 가시광선에 대한 태양광 차단, 또는 이를 이용하는 기술의 개발은 미흡한 실정이다.
또한, 상기와 같은 태양광 차단 제품들은 가시광선 중 가장 피부 손상을 가장 많이 유도하는 400~500 nm 파장의 블루/바이올렛 라이트 영역을 포함하는 가시광선에 대한 태양광 차단 기능이 매우 미흡함에도, 현재 상기 블루/바이올렛 라이트의 차단 효능을 평가할 수 있는 어떠한 차단 지표도 설정되어 있지 않아 이를 확인할 수 없다는 문제가 있다.
[선행기술문헌]
[특허문헌]
(특허문헌 1) 국내 등록특허공보 제10-0151635호
본 발명의 일측면은 태양광, 구체적으로 블루/바이올렛 라이트의 차단 기능을 측정하여 태양광 차단 기능 물질을 스크리닝할 수 있는 방법, 또는 태양광 차단 효능을 평가할 수 있는 태양광 차단 효능 평가 방법을 제공하고자 한다. 또한, 본 발명의 다른 일 측면은 상기 방법에 의해 블루/바이올렛 라이트를 차단할 수 있는 조성물을 제공하고자 한다.
상기의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 일 구현예는,
태양광 조사에 의해 감소하는 피부 세포 내 항균성 펩티드(antimicrobial peptides, AMPs)의 발현량 및 S-나이트로실레이션(S-Nitrosylation)된 단백질의 생성량 중 하나 이상의, 대상 물질에 의한 변화를 측정하는 단계를 포함하는 태양광 차단 기능 측정 방법을 제공한다.
본 발명의 일 구현예는 상기 변화를 측정한 결과, 대상물질에 의해 피부 세포 내 항균성 펩티드의 발현량 및 S-나이트로실레이션된 단백질의 생성량 중 하나 이상의 감소가 억제되면 태양광 차단 기능이 있는 것으로 판정하는 태양광 차단 기능성 물질 스크리닝 단계를 더 포함하는 태양광 차단 기능 측정 방법을 제공한다.
본 발명의 다른 일 구현예는 상기 변화를 측정한 결과, 대상물질에 의해 상기 항균성 펩티드의 발현량 및 S-나이트로실레이션된 단백질의 생성량 중 하나 이상의 감소 억제 정도가 클수록 태양광 차단 기능이 높은 것으로 판정하는 태양광 차단 효능 평가 단계를 더 포함하는 태양광 차단 기능 측정 방법을 제공한다.
또한, 본 발명의 일 구현예는 태양광 중 400~500nm 파장의 블루/바이올렛 라이트(Blue/Violet light)에 의한 피부 세포 내 항균성 펩티드의 발현량 및 S-나이트로실레이션된 단백질의 생성량 중 하나 이상의 감소를 억제시키는 물질을 유효성분으로 포함하는, 태양광 차단용 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 측정방법은 태양광이 피부에 조사되면 피부 세포 내 항균성 펩티드(antimicrobial peptides, AMPs)의 발현량 및 S-나이트로실레이션(S-Nitrosylation)된 단백질의 생성량이 감소하게 됨을 밝혀내고 이를 대상물질의 태양광 차단 기능을 측정하기 위한 파라미터로 이용함으로써, 기존에 육안평가를 통해 자외선 차단정도를 평가하던 방법과 달리 정확하고 객관적으로 태양광 차단 정도를 측정 및 판단할 수 있다. 본 발명에 따른 측정방법은 자외선 차단 지수만을 제공하던 기존의 태양광 차단 효능 평가 방법과 달리 가시광선 중 가장 피부 손상을 가장 많이 유도하는 400~500 nm 파장의 블루/바이올렛 라이트의 차단 여부까지 판별할 수 있으며, 보다 세분화된 태양광 차단 효능 평가 결과를 제공할 수 있고, 이를 이용해 태양광 차단 정도를 지수화하는 것이 가능하다.
또한, 본 발명은 상기와 같은 방법으로 태양광 차단 기능이 있는 것으로 판단된 물질을 유효성분으로 포함함으로써, 기존의 자외선 차단용 조성물과 차별화되어 400~500 nm 파장의 블루/바이올렛 라이트까지 차단할 수 있는 용도의 조성물을 제공할 수 있다.
도 1a 내지 도 1g는 본 발명의 일 구현예로서 사용되는 항균성 펩티드인 HBD-1, HBD-2, HBD-3, LL-37, Psoriasin, Dermcidin, RNase7의 각 유전자 발현량(Relative mRNA Level)의 블루/바이올렛 라이트 조사전(cont.)과 조사후(Blue)를 비교한 그래프를 나타낸 것이다.
도 2a 내지 도 2f는 본 발명의 일 구현예로서 사용되는 항균성 펩티드인 HBD-1, HBD-2, HBD-3, Psoriasin, Dermcidin, RNase7의 각 유전자 발현량(Relative mRNA Level)의 UV(자외선) 조사전(cont.)과 조사후(UV), 그리고 조사강도에 따른 변화를 비교한 그래프를 나타낸 것이다.
도 3a 내지 도 3g는 사람정상각질피부세포에 바이러스, 박테리아의 감염상황을 유도하기 위해 Poly I:C와 플라젤린(Flagellin)을 처리한 경우의 각 HBD-1, HBD-2, HBD-3, LL-37, 서라이아신, 더미시딘, RNase7 유전자 발현량 변화를 블루/바이올렛 라이트 조사전(cont.)과 조사후(Blue)로 비교한 그래프를 나타낸 것이다.
도 4a 내지 도 4g는 사람정상각질피부세포에 바이러스, 박테리아의 감염상황을 유도하기 위해 Poly I:C를 처리하고, 이와 더불어 산화 질소 스캐빈저(Nitric Oxide scavenger)인 PTIO과 활성산소종 스캐빈저(ROS scavenger)인 NAC를 각각 처리하였을 때의 각 HBD-1, HBD-2, HBD-3, LL-37, 서라이아신, 더미시딘, RNase7 유전자 발현량 변화를 블루/바이올렛 라이트 조사전(-)과 조사후(Blue)로 비교한 그래프를 나타낸 것이다.
도 5는 사람정상각질피부세포에 블루/바이올렛 라이트 조사한 경우 S-나이트로실레이션된 단백질(SNO-protiens)의 생성량 변화를 비교한 결과(SDS-PAGE 겔의 모습)를 나타낸 것이다.
도 6은 사람정상각질피부세포에 자외선을 조사한 경우 S-나이트로실레이션된 단백질(SNO-protiens)의 생성량 변화를 비교한 결과(SDS-PAGE 겔의 모습)를 나타낸 것이다.
도 7a 내지 도 7g는 블루/바이올렛 라이트를 조사한 경우(Blue) 실시예 1 내지 3의 HBD-1, HBD-2, HBD-3, LL-37, 서라이아신(Psoriasin), 더미시딘(Dermcidin), RNase7의 각 발현량을 비교한 그래프를 나타낸 것이다.
도 8은 블루/바이올렛 라이트(Blue light)를 조사한 경우 실시예 1 및 3의 S-나이트로실레이션된 단백질(SNO-protiens)의 생성량 변화를 비교한 결과(SDS-PAGE 겔의 모습)을 나타낸 것이다.
본 명세서에서 "태양광(sunlight)"이라 함은 자외선뿐만 아니라 라디오파, 초단파, 적외선, 가시광선, X선 및 γ선 등 태양광의 모든 파장을 포함하는 최광의의 개념이다. 또한, 본 명세서에서 "피부세포"라 함은, 동물의 체표를 덮는 조직의 세포를 의미하는 것으로서, 얼굴 또는 몸 등의 체표를 덮는 조직뿐만 아니라, 두피와 모발에 존재하는 세포를 포함하는 최광의의 개념이다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명의 일 구현예는 태양광 조사에 의해 감소하는 피부 세포 내 항균성 펩티드(antimicrobial peptides, AMPs)의 발현량 및 S-나이트로실레이션(S-Nitrosylation)된 단백질의 생성량 중 하나 이상의, 대상 물질에 의한 변화를 측정하는 단계를 포함하는 태양광 차단 기능 측정 방법을 제공한다.
또한, 본 발명의 일 구현예는 상기 변화를 측정한 결과, 대상물질에 의해 피부 세포 내 항균성 펩티드의 발현량 및 S-나이트로실레이션된 단백질의 생성량 중 하나 이상의 감소가 억제되면 태양광 차단 기능이 있는 것으로 판정하는 태양광 차단 기능성 물질 스크리닝 단계를 더 포함하는 태양광 차단 기능 측정 방법을 제공한다.
본 발명의 다른 일 구현예는 상기 변화를 측정한 결과, 대상물질에 의해 상기 항균성 펩티드의 발현량 및 S-나이트로실레이션된 단백질의 생성량 중 하나 이상의 감소 억제정도가 클수록 태양광 차단 기능이 높은 것으로 판정하는 태양광 차단 효능 평가 단계를 더 포함하는 태양광 차단 기능 측정 방법을 제공한다.
일 구현예에 따른 본 발명의 태양광 차단 기능 측정 방법에서 조사되는 상기 태양광은 400~500nm 파장의 블루/바이올렛 라이트(Blue/Violet light)를 포함한다. 또한, 상기 태양광은 290~400nm 파장의 자외선을 더 포함할 수 있다.
일 구현예 따르면, 상기 태양광, 구체적으로 400~500nm 파장의 블루/바이올렛 라이트는 상기 항균성 펩티드(AMPs)의 발현량을 감소시킨다. 또한, 상기 블루/바이올렛 라이트는 각종 사이토카인(cytokine) 및 이와 관련된 유전자, 단백질로서 RANTES(Human CCL5), CCL 2(Chemokine ligand 2), IL-6(Interleukin-6), IL-8(Interleukin-8), TNF-α(Tumor necrosis factor-α), COX-2(Cyclooxygenase-2) 등의 발현량을 감소시킬 수 있다.
구체적으로 상기 항균성 펩티드는 작은 분자량을 가진 단백질로, 박테리아, 바이러스 및 곰팡이와 같은 병원균에 의한 감염을 예방하는 항균 활성을 갖는다. 상기 항균성 펩티드는 혈관신생, 창상치유 및 화학주성을 유도하는 것으로 보고되고 있으며, 양전하를 띠면서 친수성 및 소수성 부위를 동시에 가지고 있는 구조적인 특징이 있다. 일 구현예로서 상기 항균성 펩티드(AMPs)는 HBD-1(Human beta-defensin-1, ACCESSION NP_005209, VERSION NP_005029.1 GI: 4885181), HBD-2(Human beta-defensin-2, ACCESSION NP_004933, VERSION NP_004933.1 GI: 4826692), HBD-3(Human beta-defensin-3, ACCESSION AAG02237, VERSION AAG02237.1 GI: 49931627), LL-37(Cathelicidin-37, ACCESSION NP_004336, VERSION NP_004336.3 GI: 348041314) 서라이아신(Psoriasin, ACCESSION AAA60210, VERSION AAA60210.1 GI: 190668), 더미시딘(Dermcidin, ACCESSION NP_444513, VERSION NP_444513.1 GI: 16751921) 및 리보핵산가수분해효소 7(RNase 7, ACCESSION CAC84458, VERSION CAC84458.1 GI: 40643235) 중 하나 이상을 포함할 수 있다.
일 구현예에 따른 본 발명의 태양광 차단 기능 측정 방법에 사용되는 상기 HBD(Human beta-defensin)-1, HBD-2, HBD-3, LL(Cathelicidin)-37, 서라이아신(Psoriasin), 더미시딘(Dermcidin), 리보핵산가수분해효소(RNase) 7은 선천 면역 인자로서 피부 소화기 호흡기 안구 결막에 존재, 그람 양/음성세균과 진균 바이러스를 죽이거나 성장을 억제. 이들은 각질형성세포 이외에 피부의 땀샘과 피지 선의 분비물에 존재하며 땀과 피지를 통하여 피부 표면으로 분비되고 침착되어 항균 장벽 형성에 기여한다. 또한, 상기 항균성 펩티드들은 자외선 조사시에는 블루/바이올렛 조사시와 반대로 발현량이 증가하는 특성을 가지고 있다. 상기 자외선에 대한 항균성 펩티드의 발현특성은 Glaser R. et al. UV-B radiation induces the expression of antimicrobial peptides in human keratinocytes in vitro and in vivo, J Allergy Clin Immunol. 2009 May;123(5):1117-23. 에 기재되어 있으며, 상기 문헌은 그 전체가 본 명세서에 참고로서 통합된다.
S-나이트로실레이션(S-Nitrosylation)된 단백질은 자외선 조사시 발현량이 증가하지만, 본 발명의 다른 일 구현예 따르면, 상기 태양광, 구체적으로 400~500nm 파장의 블루/바이올렛 라이트는 상기 S-나이트로실레이션(S-Nitrosylation)된 단백질의 생성량을 감소시킨다. 구체적으로, 생체내의 많은 기능과 연관된 질소 (nitric oxide)는 활성 시스테인 잔기와 반응하여 단백질 S-나이트로실레이션을 생성할 수 있고, 단백질 인산화 과정처럼 단백질 S-나이트로실레이션은 단백질 활성 등의 세포 신호전달을 조절할 수 있다. 그리고 상기 블루/바이올렛 라이트는 생체내 정상적으로 나이트로실레이션, 즉 상기와 같이 S-나이트로실레이션되어 있는 단백질에서 산화질소(Nitric Oxide)를 떼어내는 디-나이트로실레이션(De-Nitrosylation)을 유도할 수 있다. 그리고, 블루/바이올렛 라이트에 의해 상기와 같이 S-나이트로실레이션된 단백질의 생성량이 감소되면, 항균성 펩티드(AMPs)도 감소될 수 있다.
상기 항균성 펩티드의 유전자 또는 S-나이트로실레이션의 단백질의 발현 수준은 예를 들어 역전사 중합효소 연쇄반응(RT-PCR) 및 노던 블롯(northern blot) 분석, 효소결합 면역흡착 분석법(enzyme-linked immunosorbent assay; ELISA), 방사선 면역측정법(radioimmunoassay; RIA), 샌드위치 측정법, 웨스턴 블롯(western blot), 면역 블롯(immuneblot), 면역조직화학염색법(immunohistochemical staining), 비오틴-스위치 어세이(Biotin-switch assay) 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 방법에 의해 측정될 수 있다.
또한, 일 구현예로서 본 발명에 따른 방법은 상기 변화를 측정하는 단계 이전에, 대상 물질을 태양광 투과성 물질에 도포하는 단계, 및 피부 세포를 상기 태양광 투과성 물질 하부에 위치시킨 후 태양광 투과성 물질 상부에 태양광을 조사하는 단계를 더 포함할 수 있다.
상기 태양광 투과성 물질은 태양광, 즉, 상기 자외선 또는 블루/바이올렛 라이트를 투과시키면서 측정 대상 물질의 도포가 가능한 물성을 지닌 것이면 모두 사용이 가능하며, 예를 들면 석영판(Quartz Plate) 또는 목표로 하는 광선영역만 투과시키는 대역(帶域)통과필터(Band pass filter) 등을 사용할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 이때 상기 대상 물질은 태양광 차단 효능을 평가하고자 하는 물질로서, 사람의 피부에 적용하는 물질이면 화장품, 약품, 섬유 등과 같이 이를 포함하는 제품이나 제형에 제한되지 않고 모두 포함한다.
일 구현예에 따른 본 발명의 태양광 차단 기능 측정 방법에서 사용되는 상기 피부 세포는 인간 또는 동물 유래 피부 세포를 모두 사용할 수 있으며, 예를 들면, 각질분화형성세포(Keratinocytes), 섬유아세포(fibroblast) 및 머켈세포(Merkel cell)와 같은 멜라닌형성세포(Melanocytes) 중 하나 이상을 사용할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
상기와 같이 피부 세포 내 항균성 펩티드의 발현량 및/또는 S-나이트로실레이션된 단백질의 생성량이 감소할 경우, 피부 면역력이 저하되어 각종 피부 트러블, 질병 등이 발생할 뿐만 아니라, 이로 인해 피부 보습능이 저하되고 노화가 촉진되어 피부 미용에도 좋지 않다. 그러나 본 발명의 태양광 차단 기능 측정 방법에 따르면 블루/바이올렛 라이트를 차단할 수 있는 태양광 차단 기능성 물질을 스크리닝하고, 이를 개발함으로써, 상기와 같은 블루/바이올렛 라이트에 의해 유도되는 피부의 부정적인 효과들을 방지할 수 있다. 본 발명에 따르면 블루/바이올렛 라이트를 차단 효능 정도를 객관적으로 평가할 수 있으므로, 이를 지수화하는 것도 가능하다. 나아가, 상기와 같은 본 발명에 따른 스크리닝 및 효능 평가 방법을 사용하여 블루/바이올렛 라이트를 차단하는데 유용한 물질들을 발굴하고 이를 피부에 적용할 경우, 항균성 펩티드의 감소가 차단되므로 자연면역감소도 차단되어 면역력을 증가시킬 수 있을 것이다.
또한, 본 발명의 다른 일 구현예는 블루/바이올렛 라이트로 인한 항균성 펩티드 양의 감소를 방지하기 위하여, 태양광 중 400~500nm 파장의 블루/바이올렛 라이트를 차단하는 유효성분, 구체적으로 블루/바이올렛 라이트(Blue/Violet light)에 의한 피부 세포 내 항균성 펩티드의 발현량 및 S-나이트로실레이션된 단백질의 생성량 중 하나 이상의 변화를 억제시키는 물질을 유효성분으로 포함하는 태양광 차단용 조성물을 제공할 수 있다. 구체적으로, 상기 항균성 펩티드는 HBD(Human beta-defensin)-1, HBD-2, HBD-3, LL(Cathelicidin)-37, 서라이아신(Psoriasin), 더미시딘(Dermcidin) 및 리보핵산가수분해효소(RNase) 7 중 하나 이상을 예로 들 수 있다. 상기 조성물의 유효성분은 상술된 본 발명의 구현예들에 따른 태양광 차단 기능 측정 방법에 의해 태양광 차단 기능이 측정된 대상 물질일 수 있다. 상기 유효성분은 예를 들어 티타늄옥사이드(TiO2), 징크옥사이드(ZnO) 및 티나솔브 중 1종 이상을 포함할 수 있으며, 이외 선스크린 제품에 포함되는 태양광을 차단하는 성분이라면 제한없이 사용할 수 있다.
이하, 시험예, 실시예 및 비교예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 이들 시험예, 실시예 및 비교예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 하기 시험예, 실시예 및 비교예에 의해 제한되는 것은 아니다.
[시험예 1]
본 발명의 일 구현예로서, 400~500nm 파장의 블루/바이올렛 라이트(Blue/Violet light)를 피부세포에 조사시 항균성 펩티드의 발현량 변화를 측정하는 실험을 하기와 같이 실시하였다.
먼저, 본 발명에서 사용하는 사람정상각질피부세포(Human epidermal neonatal keratinocyte cells)는 상용적으로 확보되어 권장하는 방법으로, 론자사(Lonza, Inc. 미국 메릴랜드주 워커스빌(Walkersville) 소재)에서 구입하여 계대배양한 후 CO2 배양기(CO2 incubator)에서 37℃, 5% CO2 조건 하에서 배양하였다. 세포 배양액은 론자사의 지침서에 따라 배양하였다. 500 ml의 KBM-2(Clonetics CC-3103) 배지에 KGM-2 불렛 키트(Bullet kit: BPE(Bovine pituitary extract) 2 ml, hEGF(human epidermal growth factor) 0.5 ml, 인슐린(Insulin) 0.5 ml, 하이드로코티손(Hydrocortisone) 0.5 ml, 트랜스페린(Transferrin) 0.5 ml, 에피네프린(Epinephrine) 0.5 ml, 및 젠타마이신 설페이트+암포페리신-B(Gentamycin Suflate + Amphofericin-B: GA-1000) 0.5 ml을 첨가하여 사용하였다.
그 다음, 상기 사람정상각질피부세포가 배양된 배지에 400~500 nm의 블루/바이올렛 라이트(10 J/cm2)를 조사한 다음 사람정상각질피부세포의 배양액을 제거하고, 2 ml의 인산염 완충액(Phosphate Buffered Saline, PBS)으로 세포를 세척한 다음, 이후 트리졸 시약(Trizol reagent, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)을 사용하여 세포 내의 RNA를 분리하였다.
분리된 RNA를 키아젠사의 RNA 키트(QIAGEN RNeasy kt, QIAGEN, Valencia, CA)로 한번 더 정제한 후, 애질런트사의 바이오어낼라이저 2100 모델 기기(Agilent 2100 BioAnalyzer, Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA)를 사용하여 RNA의 질(quality)을 확인하였다. 인비트로젠사의 역전사키트(Superscript Reverse Transcriptase (RT) kit, Invitrogen, Carlsbad, CA)를 이용하여 상기 RNA로부터 cDNA를 합성하였고, 이를 실시간 역전사 중합 효소 연쇄반응(Q-RT-PCR: real time-reverse transcription polymerase chain reaction)을 통해 정량적으로 분석하였다.
HBD-1, HBD-2, HBD-3, LL-37, 서라이아신, 더미시딘, RNase7의 각 발현 패턴 변화를 어플라이드바이오시스템사의 택맨 유전자 발현 시스템(TaqMan® gene expression assay kit, Applied Biosystems, Foster City, CA)을 이용하여 블루/바이올렛 라이트가 유도하는 피부의 유전자 변화를 실시간 PCR 로 평가하였으며, 그 결과를 도 1a 내지 도 1g에 나타내었다. 이때, 각 유전자 증폭을 위해 사용한 프라이머는 하기 표 1과 같다.
표 1
유전자 명칭 프라이머
HBD-1 Hs00608345_m1
HBD-2 Hs00175474_m1
HBD-3 Hs00218678_m1
LL-37 Hs00189038_m1
서라이아신(Psoriasin) Hs00161488_m1
더미시딘(Dermcidin) Hs00364976_m1
RNase7 Hs00922963_s1
그 결과, 도 1a 내지 도 1g에 나타난 바와 같이 선천면역 유전자, 즉 항균성 펩티드인 HBD-1, HBD-2, HBD-3, LL-37, Psoriasin, Dermcidin, RNase7 모두 블루/바이올렛 라이트 조사전(cont.)보다 조사후(Blue)에서 각 유전자 발현량(Relative mRNA Level)이 감소함을 알 수 있다. 이는, 블루/바이올렛 라이트 대신에 자외선(10, 30mJ)을 조사한 것을 제외하고는 상기 실험과 동일한 조건 및 방법으로 실시한 실험결과, 자외선 조사시에는 생체내의 HBD-1, HBD-2, HBD-3, Psoriasin, Dermcidin 및 RNase7의 발현량이 조사강도의 증가에 따라 증가한 것과 대비되는 결과이다(도 2a 내지 도 2f 참조). 이는 같은 태양광이어도 그 파장에 따라 피부에 대하여 다르게 작용하며, 상기와 같은 항균성 펩티드들을 블루/바이올렛 라이트 차단 기능을 측정하고 그 효능을 평가하기 위한 지표로 사용할 수 있음을 의미한다.
[시험예 2]
본 발명의 일 구현예로서, 400~500nm 파장의 블루/바이올렛 라이트(Blue/Violet light)를 피부세포에 조사시 항균성 펩티드의 발현량 변화를 측정하는 실험을 하기와 같이 실시하였다.
먼저, 본 발명에서 사용하는 사람 정상 각질 피부세포(Human epidermal neonatal keratinocyte cells)는 상용적으로 확보되어 권장하는 방법으로, 론자사(Lonza, Inc. 미국 메릴랜드주 워커스빌(Walkersville) 소재)에서 구입하여 계대배양한 후 CO2 배양기(CO2 incubator)에서 37℃, 5% CO2 조건 하에서 배양하였다. 세포 배양액은 론자사의 지침서에 따라 배양하였다. 500 ml의 KBM-2(Clonetics CC-3103) 배지에 KGM-2 불렛 키트(Bullet kit: BPE(Bovine pituitary extract) 2 ml, hEGF(human epidermal growth factor) 0.5 ml, 인슐린(Insulin) 0.5 ml, 하이드로코티손(Hydrocortisone) 0.5 ml, 트랜스페린(Transferrin) 0.5 ml, 에피네프린(Epinephrine) 0.5 ml, 및 젠타마이신 설페이트+암포페리신-B(Gentamycin Suflate + Amphofericin-B: GA-1000) 0.5 ml을 첨가하여 사용하였다.
그 다음, 상기 사람정상각질피부세포가 배양된 배지에 400~500 nm의 블루/바이올렛 라이트(10 J/cm2)를 조사한 다음 사람정상각질피부세포의 배양액을 제거하고, 2 ml의 인산염 완충액(Phosphate Buffered Saline, PBS)으로 세포를 세척한 다음, 이후 트리졸 시약(Trizol reagent, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)을 사용하여 세포 내의 RNA를 분리하였다.
이때, 상기 블루/바이올렛 라이트(10 J/cm2) 조사 전과 후로 바이러스, 박테리아의 감염상황을 유도하기 위해 Poly I:C와 플라젤린(Flagellin, invivogen, San Diego, California, USA)를 처리하였다.
그 다음, 분리된 RNA를 키아젠사의 RNA 키트(QIAGEN RNeasy kt, QIAGEN, Valencia, CA)로 한번 더 정제한 후, 애질런트사의 바이오어낼라이저 2100 모델 기기(Agilent 2100 BioAnalyzer, Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA)를 사용하여 RNA의 질(quality)을 확인하였다. 인비트로젠사의 역전사키트(Superscript Reverse Transcriptase (RT) kit, Invitrogen, Carlsbad, CA)를 이용하여 상기 RNA로부터 cDNA를 합성하였고, 이를 실시간 역전사 중합 효소 연쇄반응(Q-RT-PCR: real time-reverse transcription polymerase chain reaction)을 통해 정량적으로 분석하였다.
HBD-1, HBD-2, HBD-3, LL-37, 서라이아신, 더미시딘, RNase7의 각 발현 패턴 변화를 어플라이드바이오시스템사의 택맨 유전자 발현 시스템(TaqMan® gene expression assay kit, Applied Biosystems, Foster City, CA)을 이용하여 블루/바이올렛 라이트가 유도하는 피부의 유전자 변화를 실시간 PCR로 평가하였으며, 그 결과를 도 3a 내지 도 3g에 나타내었다. 이때, 각 유전자 증폭을 위해 사용한 프라이머는 상기 표 1과 같다.
도 3a 내지 도 3g는 사람정상각질피부세포에 바이러스, 박테리아의 감염상황을 유도하기 위해 Poly I:C와 플라젤린을 처리한 경우의 각 HBD-1, HBD-2, HBD-3, LL-37, 서라이아신, 더미시딘, RNase7 유전자 발현량 변화를 블루/바이올렛 라이트 조사전(cont.)과 조사후(Blue)로 비교한 결과를 나타낸 것이다. 도 3에 나타난 바와 같이 Poly I:C와 플라젤린에 의해 항균성 펩티드인 상기 HBD-1, HBD-2, HBD-3, LL-37, 서라이아신, 더미시딘, RNase7이 증가되었을 때, 블루/바이올렛 라이트의 조사로 상기 각 유전자의 발현량이 감소되는 것을 확인할 수 있다. 이러한 증감은 통계적으로 유의하였으며, 통계는 양측 스튜던트 t 테스트로 검증하였으며, p 값이 0.05 이하일 때 유의적인 차이가 있다고 표시하였다. 이는 상기와 같은 항균성 펩티드들을 블루/바이올렛 라이트 차단 기능을 측정하고 그 효능을 평가하기 위한 지표로 사용할 수 있음을 의미한다.
[시험예 3]
본 발명의 일 구현예로서, 400~500nm 파장의 블루/바이올렛 라이트(Blue/Violet light)를 피부세포에 조사시 항균성 펩티드의 발현량 변화를 측정하는 실험을 하기와 같이 실시하였다.
먼저, 본 발명에서 사용하는 사람 정상 각질 피부세포(Human epidermal neonatal keratinocyte cells)는 상용적으로 확보되어 권장하는 방법으로, 론자사(Lonza, Inc. 미국 메릴랜드주 워커스빌(Walkersville) 소재)에서 구입하여 계대배양한 후 CO2 배양기(CO2 incubator)에서 37℃, 5% CO2 조건 하에서 배양하였다. 세포 배양액은 론자사의 지침서에 따라 배양하였다. 500 ml의 KBM-2(Clonetics CC-3103) 배지에 KGM-2 불렛 키트(Bullet kit: BPE(Bovine pituitary extract) 2 ml, hEGF(human epidermal growth factor) 0.5 ml, 인슐린(Insulin) 0.5 ml, 하이드로코티손(Hydrocortisone) 0.5 ml, 트랜스페린(Transferrin) 0.5 ml, 에피네프린(Epinephrine) 0.5 ml, 및 젠타마이신 설페이트+암포페리신-B(Gentamycin Suflate + Amphofericin-B: GA-1000) 0.5 ml을 첨가하여 사용하였다.
그 다음, 상기 사람정상각질피부세포가 배양된 배지에 400~500 nm의 블루/바이올렛 라이트(10 J/cm2)를 조사한 다음 사람정상각질피부세포의 배양액을 제거하고, 2 ml의 인산염 완충액(Phosphate Buffered Saline, PBS)으로 세포를 세척한 다음, 이후 트리졸 시약(Trizol reagent, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)을 사용하여 세포 내의 RNA를 분리하였다.
이때, 상기 블루/바이올렛 라이트(10 J/cm2) 조사 전과 후로 바이러스, 박테리아의 감염상황을 유도하기 위해 Poly I:C를 처리하였다. 이와 더불어, 산화 질소 스캐빈저(Nitric oxide scavenger)인 PTIO(2-(4-Carboxyphenyl)-4,4,5,5-tetramethylimidazoline-1-oxyl-3-oxide potassium salt)과 활성산소종 스캐빈저인 NAC(N-Acetyl-L-cysteine)를 각각 처리하였다(Sigma, St. Louis, MO, USA).
그 다음, 분리된 RNA를 키아젠사의 RNA 키트(QIAGEN RNeasy kt, QIAGEN, Valencia, CA)로 한번 더 정제한 후, 애질런트사의 바이오어낼라이저 2100 모델 기기(Agilent 2100 BioAnalyzer, Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA)를 사용하여 RNA의 질(quality)을 확인하였다. 인비트로젠사의 역전사키트(Superscript Reverse Transcriptase (RT) kit, Invitrogen, Carlsbad, CA)를 이용하여 상기 RNA로부터 cDNA를 합성하였고, 이를 실시간 역전사 중합 효소 연쇄반응(Q-RT-PCR: real time-reverse transcription polymerase chain reaction)을 통해 정량적으로 분석하였다.
HBD-1, HBD-2, HBD-3, LL-37, 서라이아신, 더미시딘, RNase7의 각 발현 패턴 변화를 어플라이드바이오시스템사의 택맨 유전자 발현 시스템(TaqMan® gene expression assay kit, Applied Biosystems, Foster City, CA)을 이용하여 블루/바이올렛 라이트가 유도하는 피부의 유전자 변화를 실시간 PCR로 평가하였으며, 그 결과를 도 4a 내지 도 4g에 나타내었다. 이때, 각 유전자 증폭을 위해 사용한 프라이머는 상기 표 1과 같다.
그 결과, 도 4a 내지 도 4g에 나타난 바와 같이 상기 HBD-1, HBD-2, HBD-3, LL-37, 서라이아신, 더미시딘, RNase7의 발현량이 Poly I:C에 의해 증가되었을 때 블루/바이올렛 라이트 조사에 의해 감소되는 것을, 처리한 두 스캐빈저 중 산화 질소 스캐빈저인 PTIO을 처리한 군에서는 블루/바이올렛 라이트 조사에도 항균성 펩티드(AMPs)들의 발현량이 감소되지 않았다. 이는 블루/바이올렛 라이트가 S-나이트로실레이션 생성 및 항균성 펩티드(AMPs)의 발현 조절에 관여함을 의미한다.
[시험예 4]
본 발명의 일 구현예로서, 400~500nm 파장의 블루/바이올렛 라이트(Blue/Violet light)를 피부세포에 조사시 S-나이트로실레이션(S-Nitrosylation)된 단백질의 생성량 변화를 측정하는 실험을 하기와 같이 실시하였다.
먼저, 본 발명에서 사용하는 사람정상각질피부세포(Human epidermal neonatal keratinocyte cells)는 상용적으로 확보되어 권장하는 방법으로, 론자사(Lonza, Inc. 미국 메릴랜드주 워커스빌(Walkersville) 소재)에서 구입하여 계대배양한 후 CO2 배양기(CO2 incubator)에서 37℃, 5% CO2 조건 하에서 배양하였다. 세포 배양액은 론자사의 지침서에 따라 배양하였다. 500 ml의 KBM-2(Clonetics CC-3103) 배지에 KGM-2 불렛 키트(Bullet kit: BPE(Bovine pituitary extract) 2 ml, hEGF(human epidermal growth factor) 0.5 ml, 인슐린(Insulin) 0.5 ml, 하이드로코티손(Hydrocortisone) 0.5 ml, 트랜스페린(Transferrin) 0.5 ml, 에피네프린(Epinephrine) 0.5 ml, 및 젠타마이신 설페이트+암포페리신-B(Gentamycin Suflate + Amphofericin-B: GA-1000) 0.5 ml을 첨가하여 사용하였다.
상기 배양세포에 400~500 nm의 블루/바이올렛 라이트를 각각 10, 30, 60 J/cm2로 조사한 다음 사람정상각질피부세포의 배양액을 제거하고, 2 ml의 인산염 완충액(Phosphate Buffered Saline, PBS)으로 세포를 세척한 다음, 단백질 S-나이트로실레이션 검출을 위한 비오틴-스위치 어세이(Biotin-switch assay)를 수행하였다. 구체적으로, 상기 세척된 세포를 HENTS용액(HEPES, Triton X100, SDS, protease inhibitor, EDTA)으로 10분간 용해시켜 상등액만 취하였다. 단백질 정량 후 HEN(HEPES, protease inhibitor, EDTA) 용액을 이용하여 600ug/200ul 로 맞추었다. S-나이트로실레이션 되지 않은 시스테인(cystein)의 반응을 막기위해 MMTS(Sigma)를 10mM이 되도록 추가한 후 50℃에서 15분간 반응시켰다. 아세톤으로 단백질 침전 후, 1mM HPDP-비오틴(Pierce)이 포함된 50mM 아스코르빈산(Sigma) HENS용액(HEPES, SDS, protease inhibitor, EDTA)에 녹여 37℃에서 1시간 동안 반응시킴으로써 S-나이트로실레이션된 시스테인에 비오틴을 결합시켰다. 아세톤으로 단백질 침전 후, HENS용액으로 녹이고, 보정을 위한 투입(input)을 5% 덜어둔 뒤, 아비딘-아가로스 비드(avidin-agarose bead, Pierce)를 각각 20㎕씩 가해 4℃에서 12시간 반응시켰다. 비드를 neutralization 용액(HEPES, EDTA, NaCl, Triton X 100)으로 5회 씻은 후 샘플 버퍼(sample buffer)를 넣고 끓인 뒤 투입(input)과 함께 SDS-PAGE를 수행한다. 그 후 은 염색(Silver staining)을 통해 나이트로실레이션 (S-Nitrosylation) 된 단백질을 SDS-PAGE 겔로 확인하였고, 이를 도 5에 나타내었다.
그 결과, 도 5에 나타난 바와 같이 블루/바이올렛 라이트를 조사하지 않은 대조군(cont)와 비교할 때, 블루/바이올렛 라이트 조사 강도가 증가할수록 생체내의 S-나이트로실레이션된 단백질(SNO-proteins)가 감소함을 확인할 수 있다.
이는, 블루/바이올렛 라이트 대신에 자외선(20mJ)을 조사한 것을 제외하고는 상기 실험과 동일한 조건 및 방법으로 실시한 실험결과, 자외선 조사시에는 생체내의 S-나이트로실레이션된 단백질(SNO-proteins)가 증가한 것과 대비되는 결과이다(도 6 참조). 이는 같은 태양광이어도 그 파장에 따라 피부에 대하여 다르게 작용하며, 상기와 같은 S-나이트로실레이션된 단백질의 생성량을 블루/바이올렛 라이트 차단 기능을 측정하고 그 효능을 평가하기 위한 지표로 사용할 수 있음을 의미한다.
[시험예 5]
본 발명의 일 구현예에 따라 측정 대상 물질의 피부세포에 대한 태양광 차단 기능을 측정하기에 앞서, 대상 물질의 자외선 및 블루/바이올렛 라이트 투과정도를 하기와 같이 측정하였다.
본 실험에 앞서, 대상 물질로서 실시예 1 내지 3의 태양광 차단 제형을 하기의 조성으로 통상적인 방법에 따라 제조하였다(단위: 중량%).
표 2
성분 실시예1 실시예2 실시예3
TiO2 2 2 2
ZnO 2 2 2
OMC(octyl methoxy cinnamate) 7 7 7
에틸헥실 살리실레이트 (Ethylhexyl Salicylate) - 3 3
티노소브 S(Tinosorb S) 3 - 3
세티올 CC(Cetiol CC) 5.00 5.00 5.00
놈콧-HK-G(Nomcort-HK-G) 1.50 1.50 1.50
지랍(Ozokerite) 1.00 1.00 1.00
아빌 EM90(Abil EM90) 1.50 1.50 1.50
크릴-6(Crill-6) 0.50 0.50 0.50
벤톤 27VCG(Bentone 27VCG) 1.40 1.40 1.40
DC 2-9040 3.00 3.00 3.00
DC 345 3.00 3.00 3.00
핀솔브 TN(Finsolv TN) 20.00 20.00 20.00
증류수 42.73 42.73 39.73
EDTA.2Na 0.02 0.02 0.02
NaCl 1.00 1.00 1.00
글리세린 5.00 5.00 5.00
폴리에틸렌(PE) 0.30 0.30 0.30
센시바 SC50(Sensiva SC50) 0.05 0.05 0.05
총 합계 100.00 100.00 100.00
그 다음, 상기 실시예 1~3의 각 SPF 및 PA 임상지수, 및 블루/바이올렛 라이트의 투과율을 각각 측정하였으며, 그 결과를 하기 표 3에 각각 나타내었다. 이때, 블루/바이올렛 라이트의 투과율은 실시예 1~3의 태양광 차단 제형을 각각 대역통과필터 위에 2 mg/㎠의 양으로 도포한 후 블루/바이올렛 라이트 영역을 포함한 광원을 조사하고 투과되는 블루/바이올렛 라이트 파장영역(400~500 nm)을 분광광도계(Spectrophotometer)인 SPF-290S 자외선차단제 분석 시스템(Sunscreen Analyzer System)으로 측정하였다. 자외선에 의한 SPF (피부홍반) 및 PA (피부흑화) 확인 실험은 자외선 차단제 실험법 식품의약품안전처(KFDA)의 방법대로 실시하였다
표 3
시험물질 SPF PA Blue/Violet 차단률 (%)
실시예1 30 +++ 51.3 %
실시예2 30 ++ 15.4 %
실시예3 30 +++ 56.4 %
상기 표 3의 결과로부터, 실시예 1-3의 태양광 차단 제형들은 자외선에 대하여 거의 동일한 SPF 및 PA를 나타낸 반면, 블루/바이올렛 라이트의 투과율에 있어서는 큰 차이를 가짐을 알 수 있다. 이는 동일한 자외선 차단 효능을 갖는 태양광 차단 제품들 간에도 가시광선 중 400~500nm의 파장영역을 갖는 블루/바이올렛 라이트의 차단 효능은 각각 다를 수 있으므로, 자외선 차단 지수가 곧 태양광의 전반적인 차단 기능 보유 또는 차단 효능 정도를 포괄적으로 의미할 수는 없음을 의미한다.
[시험예 6]
본 발명의 일 구현예로서, 400~500nm 파장의 블루/바이올렛 라이트(Blue/Violet light)를 피부세포에 조사시 태양광 차단 기능을 갖는 물질에 따른 항균성 펩티드의 발현량 변화를 측정하는 실험을 하기와 같이 실시하였다.
먼저, 본 발명에서 사용하는 사람정상각질피부세포(Human epidermal neonatal keratinocyte cells)는 상용적으로 확보되어 권장하는 방법으로, 론자사(Lonza, Inc. 미국 메릴랜드주 워커스빌(Walkersville) 소재)에서 구입하여 계대배양한 후 CO2 배양기(CO2 incubator)에서 37℃, 5% CO2 조건 하에서 배양하였다. 세포 배양액은 론자사의 지침서에 따라 배양하였다. 500 ml의 KBM-2(Clonetics CC-3103) 배지에 KGM-2 불렛 키트(Bullet kit: BPE(Bovine pituitary extract) 2 ml, hEGF(human epidermal growth factor) 0.5 ml, 인슐린(Insulin) 0.5 ml, 하이드로코티손(Hydrocortisone) 0.5 ml, 트랜스페린(Transferrin) 0.5 ml, 에피네프린(Epinephrine) 0.5 ml, 및 젠타마이신 설페이트+암포페리신-B(Gentamycin Suflate + Amphofericin-B: GA-1000) 0.5 ml을 첨가하여 사용하였다.
그 다음, 상기 시험예 5에서 사용한 실시예 1-3의 태양광 차단 제형을 대역통과필터 위에 2 mg/㎠ 도포한 후 그 하부에 사람정상각질피부세포를 위치시킨 다음, 태양광 차단이 도포된 부위의 위쪽에서 400~500 nm의 블루/바이올렛 라이트를 0, 30 J/㎠의 세기로 각각 조사하였다. 그 다음 사람정상각질피부세포의 배양액을 제거하고, 2 ml의 인산염 완충액(Phosphate Buffered Saline, PBS)으로 세포를 세척한 다음, 이후 트리졸 시약(Trizol reagent, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)을 사용하여 세포 내의 RNA를 분리하였다.
분리된 RNA를 키아젠사의 RNA 키트(QIAGEN RNeasy kt, QIAGEN, Valencia, CA)로 한번 더 정제한 후, 애질런트사의 바이오어낼라이저 2100 모델 기기(Agilent 2100 BioAnalyzer, Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA)를 사용하여 RNA의 질(quality)을 확인하였다. 인비트로젠사의 역전사키트(Superscript Reverse Transcriptase (RT) kit, Invitrogen, Carlsbad, CA)를 이용하여 상기 RNA로부터 cDNA를 합성하였고, 이를 실시간 역전사 중합 효소 연쇄반응(Q-RT-PCR: real time-reverse transcription polymerase chain reaction)을 통해 정량적으로 분석하였다.
HBD-1, HBD-2, HBD-3, LL-37, 서라이아신, 더미시딘, RNase7의 각 발현 패턴 변화를 어플라이드바이오시스템사의 택맨 유전자 발현 시스템(TaqMan® gene expression assay kit, Applied Biosystems, Foster City, CA)을 이용하여 블루/바이올렛 라이트가 유도하는 피부의 유전자 변화를 실시간 PCR로 평가하였으며, 그 결과를 도 7에 나타내었다. 이때, 각 유전자 증폭을 위해 사용한 프라이머는 상기 표 1과 같다.
그 결과, 도 7a 내지 도 7g에 나타난 바와 같이, 블루/바이올렛 라이트를 조사한 경우(Blue) 실시예 1 내지 3의 HBD-1, HBD-2, HBD-3, LL-37, 서라이아신, 더미시딘, RNase7의 각 발현량이 감소하였으나, 실시예 1-3의 블루/바이올렛 라이트 차단 효능에 따라 그 감소정도가 각각 차이가 있었다. 이는 상기와 같은 항균성 펩티드 발현량을 블루/바이올렛 라이트 차단 효능을 평가하기 위한 지표로 사용할 수 있음을 의미한다.
[시험예 7]
본 발명의 일 구현예로서, 400~500nm 파장의 블루/바이올렛 라이트(Blue/Violet light)를 피부세포에 조사시 조사시 태양광 차단 기능을 갖는 물질에 따른 S-나이트로실레이션(S-Nitrosylation)된 단백질의 생성량 변화를 측정하는 실험을 하기와 같이 실시하였다.
먼저, 본 발명에서 사용하는 사람정상각질피부세포(Human epidermal neonatal keratinocyte cells)는 상용적으로 확보되어 권장하는 방법으로, 론자사(Lonza, Inc. 미국 메릴랜드주 워커스빌(Walkersville) 소재)에서 구입하여 계대배양한 후 CO2 배양기(CO2 incubator)에서 37℃, 5% CO2 조건 하에서 배양하였다. 세포 배양액은 론자사의 지침서에 따라 배양하였다. 500 ml의 KBM-2(Clonetics CC-3103) 배지에 KGM-2 불렛 키트(Bullet kit: BPE(Bovine pituitary extract) 2 ml, hEGF(human epidermal growth factor) 0.5 ml, 인슐린(Insulin) 0.5 ml, 하이드로코티손(Hydrocortisone) 0.5 ml, 트랜스페린(Transferrin) 0.5 ml, 에피네프린(Epinephrine) 0.5 ml, 및 젠타마이신 설페이트+암포페리신-B(Gentamycin Suflate + Amphofericin-B: GA-1000) 0.5 ml을 첨가하여 사용하였다.
그 다음, 상기 시험예 4에서 사용한 실시예 1 및 3의 태양광 차단 제형을 대역통과필터 위에 2 mg/㎠ 도포한 후 그 하부에 사람정상각질피부세포를 위치시킨 다음, 태양광 차단이 도포된 부위의 위쪽에서 400~500 nm의 블루/바이올렛 라이트를 30 J/㎠의 세기로 각각 조사하였다.
그 다음 사람정상각질피부세포의 배양액을 제거하고, 2 ml의 인산염 완충액(Phosphate Buffered Saline, PBS)으로 세포를 세척한 다음, 단백질 S-나이트로실레이션 검출을 위한 비오틴-스위치 어세이(Biotin-switch assay)를 수행하였다. 구체적으로, 상기 세척된 세포를 HENTS용액(HEPES, Triton X100, SDS, protease inhibitor, EDTA)으로 10분간 용해시켜 상등액만 취하였다. 단백질 정량 후 HEN(HEPES, protease inhibitor, EDTA) 용액을 이용하여 600㎍/200㎕로 맞추었다. S-나이트로실레이션 되지 않은 시스테인(cystein)의 반응을 막기위해 MMTS(Sigma)를 10mM이 되도록 추가한 후 50℃에서 15분간 반응시켰다. 아세톤으로 단백질 침전 후, 1mM HPDP-비오틴(Pierce)이 포함된 50mM 아스코르빈산(Sigma) HENS용액(HEPES, SDS, protease inhibitor, EDTA)에 녹여 37℃에서 1시간 동안 반응시킴으로써 S-나이트로실레이션된 시스테인에 비오틴을 결합시켰다. 아세톤으로 단백질 침전 후, HENS용액으로 녹이고, 보정을 위한 투입(input)을 5% 덜어둔 뒤, 아비딘-아가로스 비드(avidin-agarose bead, Pierce)를 각각 20㎕씩 가해 4℃에서 12시간 반응시켰다. 비드를 neutralization 용액(HEPES, EDTA, NaCl, Triton X 100)으로 5회 씻은 후 샘플 버퍼(sample buffer)를 넣고 끓인 뒤 투입(input)과 함께 SDS-PAGE를 수행한다. 그 후 은 염색(Silver staining)을 통해 나이트로실레이션 (S-Nitrosylation) 된 단백질을 SDS-PAGE 겔로 확인하였고, 이를 도 8에 나타내었다.
그 결과, 도 8에 나타난 바와 같이 블루/바이올렛 라이트를 조사하지 않은 대조군(cont)와 비교할 때, 실시예 1 및 3의 태양광 차단 효능의 차이에 의해 생체내의 S-나이트로실레이션된 단백질(SNO-proteins) 생성량도 차이가 나타남을 알 수 있다. 이는 상기와 같은 S-나이트로실레이션된 단백질의 생성량을 블루/바이올렛 라이트 차단 효능을 평가하기 위한 지표로 사용할 수 있음을 의미한다.

Claims (13)

  1. 태양광 조사에 의해 감소하는 피부 세포 내 항균성 펩티드(antimicrobial peptides, AMPs)의 발현량 및 S-나이트로실레이션(S-Nitrosylation)된 단백질의 생성량 중 하나 이상의, 대상 물질에 의한 변화를 측정하는 단계를 포함하는 태양광 차단 기능 측정 방법.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 변화를 측정한 결과, 대상물질에 의해 피부 세포 내 항균성 펩티드의 발현량 및 S-나이트로실레이션된 단백질의 생성량 중 하나 이상의 감소가 억제되면 태양광 차단 기능이 있는 것으로 판정하는 태양광 차단 기능성 물질 스크리닝 단계를 더 포함하는 태양광 차단 기능 측정 방법.
  3. 제 1 항에 있어서, 상기 변화를 측정한 결과, 대상물질에 의해 상기 항균성 펩티드의 발현량 및 S-나이트로실레이션된 단백질의 생성량 중 하나 이상의 감소 억제정도가 클수록 태양광 차단 기능이 높은 것으로 판정하는 태양광 차단 효능 평가 단계를 더 포함하는 태양광 차단 기능 측정 방법.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 태양광은 400~500nm 파장의 블루/바이올렛 라이트(Blue/Violet light)를 포함하는 태양광 차단 기능 측정 방법.
  5. 제 4 항에 있어서, 상기 태양광은 290~400nm 파장의 자외선을 더 포함하는 태양광 차단 기능 측정 방법.
  6. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항균성 펩티드는 HBD(Human beta-defensin)-1, HBD-2, HBD-3, LL(Cathelicidin)-37, 서라이아신(Psoriasin), 더미시딘(Dermcidin) 및 리보핵산가수분해효소(RNase) 7 중 하나 이상인 태양광 차단 기능 측정 방법.
  7. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변화를 측정하는 단계 이전에,
    대상 물질을 태양광 투과성 물질에 도포하는 단계; 및
    피부 세포를 상기 태양광 투과성 물질 하부에 위치시킨 후 태양광 투과성 물질 상부에 태양광을 조사하는 단계를 더 포함하는 태양광 차단 기능 측정 방법.
  8. 제 7 항에 있어서, 상기 태양광 투과성 물질은 석영판(Quartz Plate) 또는 대역(帶域)통과필터(Band pass filter)인 태양광 차단 기능 측정 방법.
  9. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 피부 세포는 각질분화형성세포(Keratinocytes), 섬유아세포(fibroblast) 및 멜라닌형성세포(Melanocytes) 중 하나 이상인 태양광 차단 기능 측정 방법.
  10. 태양광 중 400~500nm 파장의 블루/바이올렛 라이트(Blue/Violet light)에 의한 피부 세포 내 항균성 펩티드의 발현량 및 S-나이트로실레이션된 단백질의 생성량 중 하나 이상의 감소를 억제시키는 물질을 유효성분으로 포함하는, 태양광 차단용 조성물.
  11. 제 10 항에 있어서, 상기 유효성분은 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항의 태양광 차단 기능 측정 방법에 의해 태양광 차단 기능이 측정된 대상 물질인, 태양광 차단용 조성물.
  12. 제 10 항에 있어서, 상기 유효성분은 티타늄옥사이드(TiO2), 징크옥사이드(ZnO) 및 티나솔브 중 1종 이상인 태양광 차단용 조성물.
  13. 제 10 항에 있어서, 상기 항균성 펩티드는 HBD(Human beta-defensin)-1, HBD-2, HBD-3, LL(Cathelicidin)-37, 서라이아신(Psoriasin), 더미시딘(Dermcidin) 및 리보핵산가수분해효소(RNase) 7 중 하나 이상인 태양광 차단용 조성물.
PCT/KR2015/002659 2015-03-19 2015-03-19 태양광 차단 기능성 물질 스크리닝 방법 및 태양광 차단 효능 평가 방법 Ceased WO2016148324A1 (ko)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201580080137.5A CN107850602B (zh) 2015-03-19 2015-03-19 防晒功能材料筛选方法及防晒效果评价方法
US15/559,348 US10533992B2 (en) 2015-03-19 2015-03-19 Method for screening for sunlight protection functional material and method for evaluating sunlight protection effect
PCT/KR2015/002659 WO2016148324A1 (ko) 2015-03-19 2015-03-19 태양광 차단 기능성 물질 스크리닝 방법 및 태양광 차단 효능 평가 방법
JP2017547424A JP6594992B2 (ja) 2015-03-19 2015-03-19 太陽光遮断機能性物質スクリーニング方法および太陽光遮断効能評価方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/KR2015/002659 WO2016148324A1 (ko) 2015-03-19 2015-03-19 태양광 차단 기능성 물질 스크리닝 방법 및 태양광 차단 효능 평가 방법

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2016148324A1 true WO2016148324A1 (ko) 2016-09-22

Family

ID=56919084

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/KR2015/002659 Ceased WO2016148324A1 (ko) 2015-03-19 2015-03-19 태양광 차단 기능성 물질 스크리닝 방법 및 태양광 차단 효능 평가 방법

Country Status (4)

Country Link
US (1) US10533992B2 (ko)
JP (1) JP6594992B2 (ko)
CN (1) CN107850602B (ko)
WO (1) WO2016148324A1 (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111684265A (zh) * 2018-02-05 2020-09-18 株式会社资生堂 对于向皮肤的外在损伤的防御效果的评价方法

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108956606A (zh) * 2018-07-09 2018-12-07 广东蓝堡生物科技有限公司 一种防晒护肤品防晒功效的检测方法
WO2020200936A1 (en) * 2019-03-29 2020-10-08 Unilever N.V. Pollution protection factor of cosmetic compositions
KR102811142B1 (ko) 2021-04-07 2025-05-22 더 프록터 앤드 갬블 캄파니 자외선 이미징 시스템 및 방법

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR0151635B1 (ko) * 1994-02-09 1998-10-15 쟝-마리 까제 태양광 차단 화장품 조성물, 이의 제조방법 및 용도
KR20010065136A (ko) * 1999-12-29 2001-07-11 성재갑 자외선의 반복 노출에 의한 피부 광노화를 평가하는 방법및 피부 광노화를 조절하는 물질을 평가하는 방법
US20020197633A1 (en) * 2001-05-09 2002-12-26 Jones Brian C. Evaluation of ultraviolet radiation damage to skin using new gene markers, methods and compositions related thereto
US20130072572A1 (en) * 2010-02-09 2013-03-21 Zhenyu Huang New Signaling Molecule Involved in Ultraviolet Damage to Skin
KR20130037229A (ko) * 2010-09-17 2013-04-15 가부시키가이샤 시세이도 자외선 방어 효과의 평가방법, 평가장치 및 기록매체
US20130324476A1 (en) * 2010-09-24 2013-12-05 L'oreal Cosmetic use of dermicidin, and analogues or fragments thereof
KR20150064579A (ko) * 2013-12-03 2015-06-11 (주)아모레퍼시픽 태양광 차단 기능성 물질 스크리닝 방법 및 태양광 차단 효능 평가 방법

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003212745A (ja) * 2002-01-24 2003-07-30 Shiseido Co Ltd 日焼け止め化粧料
DE102004020060B3 (de) * 2004-04-20 2005-06-02 Coty B.V. Kosmetisches Verfahren zur Behandlung der Haut mit Sonnenprodukten und Sonnenprodukt-Kombination
FR2918269B1 (fr) 2007-07-06 2016-11-25 Oreal Composition de protection solaire contenant l'association d'un polymere semi-cristallin et de particules de latex creuses.
FR2926720B1 (fr) * 2008-01-24 2011-09-09 Jean Noel Thorel Composition cosmetique destinee a bloquer la pigmentation de la peau induite par les rayonnements uv
FR2940613B1 (fr) 2008-12-30 2012-09-21 Oreal Association de monosaccharides avec des filtres solaires et son utilisation en cosmetique
JP5893013B2 (ja) * 2010-06-25 2016-03-23 大塚製薬株式会社 光曝露による皮膚細胞異常化の抑制剤
KR101784998B1 (ko) 2010-11-30 2017-10-16 (주)아모레퍼시픽 특정 유전자의 발현 변화를 통해 선스크린 효능을 평가하는 방법
JP2013166132A (ja) 2012-02-16 2013-08-29 Sharp Corp 紫外線光源装置
JP5864312B2 (ja) * 2012-03-13 2016-02-17 株式会社島津製作所 Ｓ−ニトロソ物質の質量分析法

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR0151635B1 (ko) * 1994-02-09 1998-10-15 쟝-마리 까제 태양광 차단 화장품 조성물, 이의 제조방법 및 용도
KR20010065136A (ko) * 1999-12-29 2001-07-11 성재갑 자외선의 반복 노출에 의한 피부 광노화를 평가하는 방법및 피부 광노화를 조절하는 물질을 평가하는 방법
US20020197633A1 (en) * 2001-05-09 2002-12-26 Jones Brian C. Evaluation of ultraviolet radiation damage to skin using new gene markers, methods and compositions related thereto
US20130072572A1 (en) * 2010-02-09 2013-03-21 Zhenyu Huang New Signaling Molecule Involved in Ultraviolet Damage to Skin
KR20130037229A (ko) * 2010-09-17 2013-04-15 가부시키가이샤 시세이도 자외선 방어 효과의 평가방법, 평가장치 및 기록매체
US20130324476A1 (en) * 2010-09-24 2013-12-05 L'oreal Cosmetic use of dermicidin, and analogues or fragments thereof
KR20150064579A (ko) * 2013-12-03 2015-06-11 (주)아모레퍼시픽 태양광 차단 기능성 물질 스크리닝 방법 및 태양광 차단 효능 평가 방법

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ANTAL, ATTILA S. ET AL.: "Impact of Vitamin D3 on Cutaneous Immunity and Antimicrobial Peptide Expression", DERMATO-ENDOCRINOLOGY, vol. 3, no. 1, 2011, pages 18 - 22, XP055311364 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111684265A (zh) * 2018-02-05 2020-09-18 株式会社资生堂 对于向皮肤的外在损伤的防御效果的评价方法
CN111684265B (zh) * 2018-02-05 2024-03-29 株式会社资生堂 对于向皮肤的外在损伤的防御效果的评价方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN107850602A (zh) 2018-03-27
US10533992B2 (en) 2020-01-14
JP2018513677A (ja) 2018-05-31
JP6594992B2 (ja) 2019-10-23
CN107850602B (zh) 2019-10-22
US20180113121A1 (en) 2018-04-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Howell et al. Cathelicidin deficiency predisposes to eczema herpeticum
Brauchle et al. Keratinocyte growth factor is highly overexpressed in inflammatory bowel disease
ES2353360T5 (es) Combinaciones de péptidos para vacunas contra la alergia a los gatos
Du et al. Mechanism of Corilagin interference with IL-13/STAT6 signaling pathways in hepatic alternative activation macrophages in schistosomiasis-induced liver fibrosis in mouse model
Liang et al. Diallyl Trisulfide can induce fibroblast-like synovial apoptosis and has a therapeutic effect on collagen-induced arthritis in mice via blocking NF-κB and Wnt pathways
Schaumann et al. Potential immune modularly role of glycine in oral gingival inflammation
WO2016148324A1 (ko) 태양광 차단 기능성 물질 스크리닝 방법 및 태양광 차단 효능 평가 방법
Oktay et al. Periodontitis in rats induces systemic oxidative stress that is controlled by bone‐targeted antiresorptives
Kim et al. Macrophage inflammatory protein 3α deficiency in atopic dermatitis skin and role in innate immune response to vaccinia virus
Reti et al. Thymosin beta4 is cytoprotective in human gingival fibroblasts
Rovira-Diaz et al. The impact of helminth coinfection on innate and adaptive immune resistance and disease tolerance during toxoplasmosis
Wang et al. Effect of toll-like receptor 4/myeloid differentiation factor 88 inhibition by salvianolic acid B on neuropathic pain after spinal cord injury in mice
Di Cianni et al. The impact of environmental factors on aetiopathogenesis and clinical manifestations of Behçet’s syndrome
KR20120059672A (ko) 특정 유전자의 발현 변화를 통해 선스크린 효능을 평가하는 방법
Wang et al. Interleukin‐17A potentiates interleukin‐13‒induced eotaxin‐3 production by human nasal epithelial cells from patients with allergic rhinitis
Wang et al. Serum cytokine profiles predict response to systemic glucocorticoid in active vitiligo
KR102102321B1 (ko) 태양광 차단 기능성 물질 스크리닝 방법 및 태양광 차단 효능 평가 방법
KR102087187B1 (ko) 피부 개선용 키트
Lee et al. Translocation of nuclear factor-κB on corneal epithelial cells induced by ultraviolet B irradiation
WO2024238485A1 (en) Treating a type i interferon upregulation or aberrant il-33 upregulation disease or condition with polyomavirus
Liu et al. Oral administration of LfcinB alleviates DSS-induced colitis by improving the intestinal barrier and microbiota
Wu et al. Interferon-Lambda 1 Inhibits
WO2019066124A1 (ko) 저선량률 저준위 방사선 조사된 쥐 흉선 림프종 세포에서 발굴된 텔로미어 조절 유전자군과 그 검출방법
Vibriani et al. Blue Light Exposure Disrupts Circadian Rhythms and Accelerates Skin Photoaging through Coordinated Cellular and Molecular Mechanisms
Cao et al. Schwann Cell‐Derived Extracellular Vesicles MFG‐E8 Alleviates Neuropathic Pain After Peripheral Nerve Injury Through Inhibiting Ferroptosis in Dorsal Root Ganglion Neurons by Regulating the PPARγ/p53/SAT1/ALOX15 Pathway

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 15885627

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2017547424

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 15559348

Country of ref document: US

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 15885627

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1