WO2015123748A1 - "NOVOS COMPOSTOS DERIVADOS DE 6,7-DIHIDRO-3H-OXAZOLO [3,4-a] PIRAZINA-5,8-DIONA " - Google Patents

"NOVOS COMPOSTOS DERIVADOS DE 6,7-DIHIDRO-3H-OXAZOLO [3,4-a] PIRAZINA-5,8-DIONA " Download PDF

Info

Publication number
WO2015123748A1
WO2015123748A1 PCT/BR2015/000023 BR2015000023W WO2015123748A1 WO 2015123748 A1 WO2015123748 A1 WO 2015123748A1 BR 2015000023 W BR2015000023 W BR 2015000023W WO 2015123748 A1 WO2015123748 A1 WO 2015123748A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
compounds
phenyl
dihydro
dione
pyrazine
Prior art date
Application number
PCT/BR2015/000023
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Sérgio Luiz SACURAI
Carlos Eduardo Da Costa Touzarim
Fabiano Travanca TOLEDO
Bruno Artur de SOUSA
Original Assignee
Biolab Sanus Farmaceutica Ltda
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority to KR1020167026361A priority Critical patent/KR102408431B1/ko
Priority to PL15752140T priority patent/PL3133072T3/pl
Priority to CA2940225A priority patent/CA2940225C/en
Priority to BR112016019609-0A priority patent/BR112016019609B1/pt
Priority to ES15752140T priority patent/ES2734063T3/es
Priority to EP15752140.2A priority patent/EP3133072B1/en
Application filed by Biolab Sanus Farmaceutica Ltda filed Critical Biolab Sanus Farmaceutica Ltda
Priority to JP2016570147A priority patent/JP6636463B2/ja
Priority to MX2016010912A priority patent/MX369840B/es
Priority to AU2015221431A priority patent/AU2015221431B2/en
Publication of WO2015123748A1 publication Critical patent/WO2015123748A1/pt
Priority to IL247330A priority patent/IL247330B/en
Priority to ZA2016/06522A priority patent/ZA201606522B/en

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D498/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/42—Oxazoles
    • A61K31/424—Oxazoles condensed with heterocyclic ring systems, e.g. clavulanic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4985—Pyrazines or piperazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/02—Drugs for disorders of the urinary system of urine or of the urinary tract, e.g. urine acidifiers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/04—Drugs for disorders of the urinary system for urolithiasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/10—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for impotence
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings

Definitions

  • the present invention relates to novel compounds derived from 6,7-dihydro-3H-oxazolo [3,4-a] pyrazine-5,8-dione, the mixture of these derivatives (in any proportion), including salts thereof.
  • the present invention also encompasses pharmaceutical compositions comprising said novel compounds of 7,7-dihydro-3,7-oxazolo [3,4-a] pyrazine-5,8-dione, the mixture of these derivatives (in any proportion). ), including pharmaceutically acceptable salts, solvates, hydrates, prodrugs and esters thereof; enantiomers and / or diastereoisomers of the compounds in their individual separate forms and / or in the forms of racemic mixtures or non-racemic enantiomeric excess mixtures in any proportions; medicaments comprising said compounds and / or derivatives, as well as the use of the compounds and / or derivatives as an enzyme inhibitor.
  • phosphodiesterase more specifically as a phosphodiesterase type 5 (PDE-5) enzyme inhibitor; and the use of the compounds and / or derivatives in the treatment of erectile dysfunction, tissue relaxation disorders and / or conditions that are treatable with phosphodiesterase inhibitors, more specifically.
  • PDE-5 inhibitor The present invention also discloses a method of treating erectile dysfunction, tissue relaxation disorders and / or conditions treatable with phosphodiesterase inhibitors, more specifically as PDE-5 inhibitors, using the novel compounds derived from 6D.
  • the present invention describes compounds called 3- (benzo [d] [1,3] dioxol-5-yl) -7- (2-hydroxyethyl) -1- (1 H -indol-3-yl). ) -6,7-dihydro-3'-oxazolo [3,4-a] pyrazine-5,8-dione (BL-230); and 3- (benzo [d] [1,3] dioxol-5-yl) -7- ((S) 1-hydroxypropan-2-yl) -1- (1 H -indol-3-yl) -6,7 -dihydro-3H-oxazolo [3,4-a] pyrazine-5,8-dione (BL-236).
  • Phosphodiesterase inhibitor compounds are the principal agents used in medical practice for the treatment and / or prevention of erectile dysfunction, disorders and / or conditions treatable with tissue relaxation and other diseases treatable with phosphodiesterase inhibitors. In the case of erectile dysfunction, PDE-5 inhibitors are the most widely used in medical practice.
  • Erectile dysfunction more commonly known as sexual impotence, is one of the diseases that most impairs a man's quality of life. For a long time, erectile dysfunction has haunted men without much possibility of effective treatment. Prior to the 1970s, almost all cases of erectile dysfunction were considered to result from psychological causes, and treatments consisted of empirical administration of testosterone or referral to a psychiatrist. The development of new treatments, such as inflatable penile prostheses, developed in 1973 and the emergence of intracavernous injections in the early 1980s, were important milestones in the history of modern erectile dysfunction treatments. The first oral treatment, based on sildenafil citrate (active ingredient of the drug Viagra ® ) was launched in 1998, and was an important milestone for the treatment of erectile dysfunction.
  • sildenafil citrate active ingredient of the drug Viagra ®
  • cGMP-PDE inhibitors more specifically PDE-5 inhibitors.
  • the precursor of these compounds was 5- [2-ethoxy-5- (4-methylpiperazinylsulfonyl) phenyl] -1-methyl-3-n-propyl-1,6-dihydro-7H-pyrazolo [4,3-d] pyrimidine -7-one, or sildenafil, with vasodilatory properties and enhancing the effects of nitric oxide.
  • the sildenafil molecule was originally described in US5250534.
  • tissue relaxing compounds have been used to promote relaxation of various tissues with the focus on treating or acting as an adjunct to treatment, procedure or surgery related to lithiasis (Korkes, F. et al, J Bras Nefrol. (2009) 31 (1): 55), prostate enlargement (eg, benign prostatic hyperplasia, prostatitis) (WO 9911279) and urethral constriction (Van der wasf et al, BJU International (2002) 90: 588) .
  • Other treatable tissue relaxation disorders and / or conditions are known and described in the prior art.
  • PDE-5 inhibitors have been used to block cGMP degradation to prolong the effects of nitric oxide (NO) on various tissues, for example to maintain NO-induced relaxation of the airways and vessels (Barnes, PJ). , et al. (1995) and to maintain tissue NO-induced protection (Duffin, R., et al., Br J Pharmacol. (2008) 153 (4): 623).
  • NO nitric oxide
  • disorders treatable with phosphodiesterase inhibitors especially PDE-5
  • pulmonary hypertension commercially treated with sildenafil citrate
  • bronchitis chronic asthma
  • hypertension EP 758653, US 7569572
  • Raynaud's disease Ghofrani HA, et al., Nat Rev Drug Discov. 2006, 5: 689
  • onset of right lateral heart failure Ghofrani et al. (2003) AJRCCM 167 (8): 1139
  • neurogenesis and functional recovery after stroke Zhang et al. (2002) Stroke 33: 2675-2680
  • coronary artery relaxation Halcox et al.
  • phosphodiesterase inhibitor compounds More specifically as PDE-5 inhibitors, for novel treatments of erectile dysfunction, disorders and / or conditions treatable with tissue relaxation and other diseases treatable with Phosphodiesterases, the researchers of the present invention have developed new compounds derived from 6,7-dihydro-3'-oxazolo [3,4-a] pyrazine-5,8-dione, object of the present invention, which have phosphodiesterase inhibiting activity, including PDE-5 inhibition.
  • the present invention aims to provide novel compounds derived from 6,7-dihydro-3H-oxazolo [3,4-a] pyrazine-5,8-dione, mixture of these derivatives (in any proportion), including salts, pharmaceutically acceptable solvates, hydrates, prodrugs and esters; the enantiomers and / or diastereoisomers of the compounds in their individual separate forms and / or in the forms of racemic mixtures or non-racemic enantiomeric excess mixtures in any proportions.
  • Another aspect of the present invention is the use of the compounds of 6,7-dihydro-3H-oxazolo [3,4-a] pyrazine-5,8-dione, object of the present invention, for curative and / or prophylactic treatment.
  • erectile dysfunction, tissue relaxation disorders and / or conditions that are treatable with phosphodiesterase inhibitors, specifically PDE-5 inhibitors.
  • the present invention is also intended to provide pharmaceutical compositions comprising an effective amount of one of the novel compounds of 6,7-dihydro-3-oxazolo [3, -a] pyrazine-5,8-dione, or mixture such derivatives (in any proportion), including their pharmaceutically acceptable salts, solvates, hydrates, prodrugs and esters; Enantiomers and / or diastereoisomers of the compounds in their individual separate forms and / or in the forms of racemic mixtures or non-racemic mixtures with enantiomeric excess in any proportions.
  • compositions comprising at least one of the new compounds derived from 6,7-dihydro-3H-oxazolo [3,4-a] pyrazine-5,8-dione, selected from: 3- (benzo [d ] [1,3] dioxol-5-yl) -7- (2-hydroxyethyl) -1- (1 H -indol-3-yl) -6,7-dihydro-3H-oxazolo [3,4-a] pyrazine -5,8-dione
  • a further object of the present invention is to provide a medicament comprising a therapeutically effective amount of one of the novel compounds of 6,7-dihydro-3H-oxazolo [3,4-a] pyrazine-5,8-dione to mixtures thereof.
  • such derivatives in any proportion, including their pharmaceutically acceptable salts, solvates, hydrates, prodrugs and esters; the enantiomers and / or diastereoisomers of the compounds in their individual separate forms and / or in the forms of racemic mixtures or non-racemic enantiomeric excess mixtures in any proportions.
  • medicaments comprising at least one of the novel compounds derived from
  • Figure 1 shows the 1 H NMR spectrum for characterization of the compound obtained in example 1 (BL-230).
  • Figure 2 shows the 13 C NMR spectrum for characterization of the compound obtained in example 1 (BL-230).
  • Figure 3 shows the EMAR spectrum for characterization of the compound obtained in example 1 (BL-230).
  • Figure 4 shows the 1 H NMR spectrum for characterization of the compound obtained in example 2 (BL-236).
  • Figure 5 shows the 13 C NMR spectrum for characterization of the compound obtained in example 2 (BL-236).
  • Figure 6 shows the EMAR spectrum for characterization of the compound obtained in example 2 (BL-236).
  • Figure 7 shows a graph of phenylephrine-induced contraction (PE) and the effect of DMSO (vehicle negative control) on rabbit cavernous bodies.
  • Figure 8 shows a graph of phenylephrine-induced contraction (PE) and the relaxing effect of tadalafil on rabbit cavernous bodies.
  • Figure 9 shows a graph of phenylephrine-induced contraction (PE) and the relaxing effect of compound BL-230 on rabbit cavernous bodies.
  • Figure 10 shows a graph of phenylephrine (PE) induced contraction and the relaxing effect of compound BL-236 on rabbit cavernous bodies.
  • Figure 11 shows a dose response curve graph, with percent relaxation in rabbit corpus cavernosum following administration of compound BL-230 and tadalafil.
  • Figure 12 shows a bar graph showing the relaxation percentage of the rabbit corpus cavernosum when administered BL-230, tadalafil and DMSO (vehicle).
  • Figure 13 shows a bar graph showing the relaxation percentage of the rabbit corpus cavernosum when administered BL-236, tadalafil and DMSO (vehicle).
  • Figure 14 shows the percentage inhibition of phosphodiasterase enzymes observed in the presence of compound BL-230.
  • Figure 15 shows the percentage inhibition of phosphodiasterase enzymes observed in the presence of compound BL-236.
  • the present invention describes novel compounds useful for the treatment of diseases treatable with phosphodiesterase inhibitors, mainly with PDE-5 inhibition, such as erectile dysfunction, disorders and / or conditions treatable with tissue relaxation and other conditions. diseases treatable with phosphodiesterase inhibitors.
  • the compounds of the present invention relate to the novel compounds derived from 6,7-dihydro-3'-oxazolo [3,4-a] pyrazine-5,8-dione, represented by formula (I):
  • R 1 is an aromatic group, an aromatic group containing one or more heteroatoms, phenyl, phenol, 3-methoxy-4-phenol, methylene-3,-dioxoxyphenyl, 2-methoxyphenyl, 3-methoxyphenyl, 4- methoxyphenyl, 3,4-dimethoxyphenyl, 2-halo-phenyl, 3-halo-phenyl, 4-halo-phenyl, furyl; pyridine, bicyclic aromatic, bicyclic aromatic containing one or more heteroatoms;
  • R 2 is aryl, heteroaryl, bicycloaryl, CH 2 (CH 2 ) n R 3 , CH 2 (CH 2 ) n N 4 R 5 , CHR 6 CH 2 OH, CH 2 CH (OH) R 7 , CH 2 ( CH 2 ) OR 8 , CH 2 (CH 2 ) n SR 9 , carboxylate salts, sulfonate salts or quaternary ammonium salts;
  • R 3 is OH, NH 2 , NH 3 + , S (O) Me, SO 3 H, CO 2 H, Cl, carboxylate salts, sulfonate salts or quaternary ammonium salts;
  • R 4 is hydrogen, methyl, ethyl, propyl, i-propyl, butyl, sec-butyl, tert-butyl, phenyl. benzyl or quaternary ammonium salts;
  • R 5 is hydrogen, methyl, ethyl, propyl, i-propyl, butyl, sec-butyl, tert-butyl, phenyl, benzyl or quaternary ammonium salts;
  • R 6 is ⁇ . ) -Me, (R) - Et, (R) -I-Prop, (R) -i-But, (R) -phenyl, (R) -CH 2 SH, (R) -CH 2 CH 2 SCH 3 , (R) -benzyl, (R) -sec-But, (S) -Me, (S) -Et,
  • R 7 is (23 ⁇ 4) -Me, (-) -Et; (i ⁇ ) - prop ( ⁇ ) -i-prop ⁇ R) -phenyl, R ⁇ ) ⁇ benzyl (S) -Me, (S) -Et; (S) -Prop, (S) -1-Prop, (S) -phenyl or (S) -benzyl;
  • R8 is Ci-6 alkyl, C 2 - 6 alkenyl, C 2 -e alkynyl, phenyl or benzyl;
  • R9 is Ci-6 alkyl, C 2 -e alkenyl, C2 -s alkynyl, phenyl or benzyl;
  • n is a number from 0 to 4.
  • the compounds of formula (I) may contain one or more chiral centers, thus there may be enantiomers and / or diastereoisomers.
  • a chiral center is evidenced with an asterisk (*) in the description of formula (I). Therefore, the present invention also encompasses enantiomers and / or diastereoisomers of the compounds of formula (I) in their separate individual forms and / or in the forms of racemic mixtures or non-racemic enantiomeric excess mixtures in any proportions.
  • the compounds of formula (I) may exist in two tautomeric forms, and the invention includes one or more tautomeric forms and mixtures thereof (in any proportion).
  • salts of the compounds of formula (I) are formed by the addition of pharmaceutically acceptable acids.
  • Some examples of salts include, but are not limited to the salts of: nitrate, hydrochloride, hydrobromide, sulfate or bisulfate, phosphate, hydrogen phosphate, acetate, benzoate, succinate, fumarate, maleate, lactate, citrate, tartrate, gluconate, metasulfonate benzenesulfonate and p-toluenesulfonate.
  • the compounds of formula (I) may be used in pharmaceutically acceptable metal salts, in particular alkali metal salts with bases, such as sodium and potassium salts.
  • the present invention describes the novel compounds derived from 6,7-dihydro-3-oxazolo [3,4-a] pyrazine-5,8-dione, represented by the formula (D:
  • R 1 is methylene-3-4-dioxiphenyl; - R 2 is CH 2 (CH 2 ) n R 3 or CHR 6 CH 2 OH;
  • R 6 is (S) -Me
  • novel compounds derived from 6,7-dihydro-3H-oxazolo [3,4-a] pyrazine-5,8-dione are represented by the following formulas:
  • compound (b) is prepared by reacting compound (a) in the presence of a solution of dry pyridine (Py) in tetrahydrofuran (THF) and chloride solution. chloroacetyl. After completion of reaction to intermediate formation
  • (BL-236) according to the present invention can be obtained using the compounds (E) -methyl 2- ((benzo [d] [1,3] dioxol-5-ylmethylene) amino) -3- (1H -indol-3-yl) -3-oxopropanoate, described by chemical structure (a); methyl 2- (benzo [d] [1,3] dioxy-5-yl) -3- (2-chloroacetyl) -5- (N-indol-3-yl) -2,3-dihydrooxazole-4-carboxylate described by chemical structure (b) and the amine (S) -2-aminopropan-1-ol described by chemical structure (d).
  • compound (b) is prepared by reacting compound (a) in the presence of a solution of dry pyridine (Py) in tetrahydrofuran (THF) and chloride solution. chloroacetyl. After completion of the reaction to form intermediate (b), it is added to the ethyl alcohol medium, and (S) -2-aminopropan-1-ol (d), at the end of the reaction, ethanol and water are added, resulting in obtaining of the compound of Formula (III) as illustrated in Scheme [2]:
  • compositions i.e. an appropriate dosage form, wherein said composition comprises as an active ingredient an effective amount of one or more compounds of formula (I), including salts, solvates, hydrates thereof, pharmaceutically acceptable prodrugs and esters; the enantiomers and / or diastereoisomers of the compounds in their separate individual forms and / or in the forms of racemic mixtures or non-racemic enantiomeric excess mixtures in any proportions.
  • formula (I) including salts, solvates, hydrates thereof, pharmaceutically acceptable prodrugs and esters
  • compositions of the present invention comprise as active ingredient the novel compounds, which are represented by the following formulas: - Formula (II):
  • PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS may be prepared by methods well known in the art.
  • Remington's Pharmaceutical Sciences or similar sources of information may be used to prepare a pharmaceutical formulation suitable for carrying the compound of the invention.
  • PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS of the present invention may be administered orally, topically, injectably, nasally and rectally.
  • the particular mode selected will depend on the compounds present in the composition.
  • PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS for oral administration may be presented, but not limited to: powders, granules, capsules, tablets, effervescent tablets, chewable tablets, coated tablets, pills, gels, gums. chewable, films, solutions, syrups, elixirs, suspensions, emulsions, and others.
  • the present invention also contemplates PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS comprising a therapeutically effective amount of one or more compounds of formula (I), and / or their pharmaceutically acceptable salts, solvates, hydrates, prodrugs, and esters; enantiomers and / or diastereoisomers of the compounds in their individual separate forms and / or in the forms of racemic mixtures or non-racemic enantiomeric excess mixtures in any proportions; and one or more pharmaceutically acceptable excipients.
  • PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS comprising a therapeutically effective amount of one or more compounds of formula (I), and / or their pharmaceutically acceptable salts, solvates, hydrates, prodrugs, and esters; enantiomers and / or diastereoisomers of the compounds in their individual separate forms and / or in the forms of racemic mixtures or non-racemic enantiomeric excess mixtures in any proportions; and one or more pharmaceutically acceptable excipients.
  • PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS comprising as active ingredient at least one of the following compounds selected from the group consisting of:
  • COMPOUNDS described in the present invention including pharmaceutically acceptable salts, solvates, hydrates, prodrugs, and esters thereof; the enantiomers and / or diastereoisomers of the compounds in their individual forms separated and / or in the form of racemic mixtures or non-racemic enantiomeric excess mixtures in any proportions; they are employed for the treatment and / or prophylaxis of erectile dysfunction, tissue relaxation disorders and / or conditions that are treatable with phosphodiesterase inhibitors, such as PDE-5.
  • Disorders treatable with PDE inhibitors may be lithiasis, prostatic hyperplasia, pulmonary hypertension, ureteral constriction, female sexual dysfunction, and / or male sexual dysfunction, but not limited to just these examples.
  • the present invention contemplates PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS comprising the compounds described in the present invention, including pharmaceutically acceptable salts, solvates, hydrates, prodrugs, and esters thereof; enantiomers and / or diastereoisomers of the compounds in their individual separate forms and / or in the forms of racemic mixtures or non-racemic enantiomeric excess mixtures in any proportions; they are employed for the treatment and / or prophylaxis of erectile dysfunction, tissue relaxation disorders and / or conditions that are treatable with phosphodiesterase inhibitors, such as PDE-5.
  • Disorders treatable with PDE inhibitors may be lithiasis, prostatic hyperplasia, pulmonary hypertension, ureteral constriction, female sexual dysfunction, and / or male sexual dysfunction, but not limited to just these examples.
  • the present invention describes a METHOD OF TREATMENT AND / OR PREVENTION of dysfunctions associated with phosphodiesterase activity by administering an effective dose of at least one of the novel compounds of 6,7-dihydro-3H-oxazole [3,4].
  • Disorders treatable with PDE inhibitors may be erectile dysfunction, lithiasis, prostatic hyperplasia, pulmonary hypertension, ureteral constriction, female sexual dysfunction, and / or male sexual dysfunction, but not limited to just these examples.
  • the present invention also discloses a method of treating and / or preventing erectile dysfunction, tissue relaxation disorders and / or conditions treatable with phosphodiesterase inhibitors such as PDE-5 by administering effective dose.
  • phosphodiesterase inhibitors such as PDE-5
  • the mixture of these derivatives in any proportion, including their salts, solvates, hydrates pharmaceutically acceptable prodrugs and esters; the enantiomers and / or diastereoisomers of the compounds in their individual separate forms and / or in the forms of racemic mixtures or non-racemic enantiomeric excess mixtures in any proportions.
  • EXAMPLE 1 Preparation of the compound of formula II called 3- (benzo [d] [1,3] dioxol-5-yl) -7- (2-hydroxyethyl) -1- (1H-indol-3-yl) -6 , 7-dihydro-3 H-oxazolo [3,4-a] irazine-5,8-dione (BL-230).
  • reaction mixture was reacted for 4 hours at room temperature. environment, resulting in the formation of intermediate (b).
  • ethyl alcohol (42 mL) and compound (c) called 2-aminoethanol (39.3 g, 644.0 mmol) were added to the medium and the mixture stirred for a period of 16 h.
  • 250 mL of ethanol and 100 mL of water were added to the medium.
  • the system was subjected to vacuum distillation and excess solvent removed until product precipitation.
  • the flask was cooled to room temperature and then cooled to 0 to 5 ° C.
  • EXAMPLE 2 Preparation of the compound of formula (III) named 3- (benzo [d] [1,3] dioxol-5yl) -7- ((S) 1-hydroxypropan-2-yl) -1- (1H-indole -3-yl) -6,7-dihydro-3H-oxazolo [3,4-a] pyrazine-5,8-dione (BL-236).
  • New Zealand White rabbits (2 - 3.5 kg) were used to obtain penile tissue, which was excised and transferred to an ice cold Krebs solution.
  • Four strips of the corpora cavernosa (CC) of the penile tissue of New Zealand White rabbits were used for the study.
  • the strips were mounted in 10 ml tissue incubation chambers containing Krebs solution at 37 ° C, pH 7.3 to 7.5; continuously bubbled with a mixture of 95% oxygen (0 2 ) and 5% carbon dioxide (CO 2 ⁇ .
  • An initial tension of 10 mN was applied to the tissues followed by a 60 minute stabilization period.
  • (isometric force) were obtained using isometric transducers (ADInstruments, Australia) and recorded on a PowerLab 4/30 data acquisition system (Chart software, version 7.3.7, ADInstruments, MA, USA for BL-230, and version 7 , 0 ADInstruments, MA for BL-236).
  • Cumulative concentration response curves of the BL-230 and tadalafil compounds were obtained on pre-contracted rabbit cavernous body strips with 1 ⁇ PE.
  • compound BL-230 produced dose-dependent relaxation similar to that observed for tadalafil (0.001 - 10 ⁇ ) in the contraction caused by phenylephrine.
  • Figures 12 and 13 also illustrate the relaxation observed with compounds BL-230, BL-236 and tadalafil, where it can be observed ( Figures 12 and 13) that BL-230 was able to induce 78.47% relaxation of the rabbit corpus cavernosum, BL-236 induced 93.05%, while tadalafil induced cavernous body relaxation around 100%.
  • DMSO presented non-significant relaxation, around 20.
  • EXAMPLE 4 In vitro preclinical study to evaluate the phosphodiesterase inhibition profile (PDE) by the compounds BL-230 of formula (II) and BL-236 of formula (III).
  • test compound reference compound or water (control) were mixed with 0.07U of PDE1B enzyme in a buffer containing 44.4 mM Trishydroxymethyl hydrochloride. aminomethane (Tris-HCl), 5.28 mM Magnesium chloride (MgCl 2 ), 0.88 mM calcium chloride (CaCl 2 ), 2.64 mM dithiothreitol (DTT) and 0.198 U calmodulin and 0, 044% polysorbate 20 (Tween ® 20) (pH 7.8). Then the reaction was initiated by the addition of 240 nM cGMP substrate and the mixture was incubated for 30 minutes at room temperature. For basal control measurements, the enzyme was omitted from the reaction mixture.
  • Tris-HCl Trishydroxymethyl hydrochloride. aminomethane
  • MgCl 2 Magnesium chloride
  • CaCl 2 calcium chloride
  • DTT dithiothreitol
  • Tween ® 20 0.198 U calmodulin
  • Fluorescence acceptor labeled Dye2 cGMP
  • fluorescence donor europium cryptate labeled anti-cGMP antibody
  • IBMX 3-isobutyl-1-methylxanthine
  • test compound reference compound or water (control) were mixed with the enzyme (the enzymes and their amounts used are described in Table 1) in a buffer containing 44.4 mM Tris-HCl, 5.28 mM MgCl 2 , 2.64 mM DTT and 0.044% Tween ® 20 (pH 7.8). Then the reaction was initiated by the addition of 40 nM cA P substrate and the mixture was incubated for 30 minutes at room temperature. For basal control measurements, the enzyme was omitted from the reaction mixture. The fluorescence acceptor (labeled Dye2 cAMP) and fluorescence donor (europium crate labeled anti-cAMP antibody) were added in the presence of 1 mM IBMX.
  • Table 1 List of Enzymes and their respective standard PDE inhibitor reference compounds.
  • test compound, reference compound or water (control) were mixed with 0.7U of PDE3B enzyme in a buffer containing 50 mM Tris-HCl, 6 mM MgCl 2 , 3 mM DTT and 0.05 ⁇ M. % Tween ® 20 (pH 7.8). Then, the reaction was initiated by the addition of 40 nM cAMP substrate and the mixture was incubated for 30 minutes at 22 ° C. For basal control measurements, the enzyme was omitted from the reaction mixture.
  • the fluorescence acceptor (labeled Dye2 cAMP) and the fluorescence donor (europium crate labeled anti-cAMP antibody) were added in the presence of 1 mM IBMX.
  • the reference standard inhibitor compound used was milrinone, which was tested in each assay at various concentrations to obtain an inhibition curve from which its IC 50 value was calculated.
  • test compound reference compound or the water (control) were mixed with 2 0.75CJ of PDE4D in balanced saline Hanks buffer (HBSS) (Invitrogen) supplemented el, 5 mM MgCl 2, 0.1 % bovine serum albumin (BSA). Then the reaction was initiated by the addition of 40 nM cAMP substrate and the mixture is incubated for 15 minutes at 37 ° C. For basal control measurements, the enzyme was omitted from the reaction mixture.
  • the fluorescence acceptor (labeled Dye2 cAMP) and the fluorescence donor (europium crypto-labeled anti-cA P antibody) were added in the presence of 1 mM IBMX.
  • Test compound, reference compound or water (control) were added to a buffer containing 40 m Tris- HCl (pH 7.8), 3 mM MgCl 2 , 1.4 mM DTT, 0.21 % BSA, 200 mM. ammonium chloride (NH 4 C1), 1 ⁇ cGMP and 0.1 pCi [ 3 H ⁇ cGMP. Then the reaction was started by adding the enzyme (final value depending on insulation efficiency) and the mixture was incubated for 60 minutes at 2.2 ° C. For basal control measurements, the enzyme was omitted from the reaction mixture. In sequence the incubation SPA beads were added.
  • BL-230 and BL-236 are strong PDE5 inhibitors, with BL-230 showing 90% inhibition and BL-236 showing 86% inhibition ( Figures 14 and 15 respectively).
  • test compound (. reference compound or water (control) were added to a buffer containing 40 mM Tris HCl (pH 7.8), 3 mM MgCl 2 / 1.4 mM DTT, 0.21% BSA, 200 mM NH 4 C1, 2 uM cGMP and 0.05 ⁇ [ 3 H] cG P. Then, the reaction was started by addition of the enzyme (final value, depending on the efficiency of isolation) and the mixture was incubated for 60 minutes at 22 ° C. For basal control measurements, the enzyme was omitted from the reaction mixture. In sequence the incubation SPA beads were added.
  • results obtained showing inhibition (or stimulation) greater than 50% are indicative of strong effect.
  • results showing inhibition (or stimulation) between 25% and 50% are indicative of weak or moderate effect.
  • Results with inhibition (or stimulation) of less than 25% are not considered Significantly, and mainly, are attributed to the signal variability around the control.

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Abstract

A presente invenção se refere a novos derivados de 6,7-dihidro-3H-oxazolo [3,4-a] pirazina-5,8-diona ou a uma mistura destes. A presente invenção também contempla composições farmacêuticas que compreendendo uma quantidade eficaz de um dos ditos novos compostos que são objeto da presente invenção, assim com o uso dos ditos compostos e/ou derivados como um inibidor de enzimas fosfodiesterase e o uso dos compostos e/ou derivados no tratamento da disfunção erétil, de transtornos e/ou condições tratáveis com relaxantes de tecido e os transtornos tratáveis com inibidores de fosfodiesterase, mas especificamente com inibidores de PDE-5. Um objetivo adicional da presente invenção é prover um medicamento que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um dos novos compostos e um método de tratamento utilizando novos compostos.

Description

"NOVOS COMPOSTOS DERIVADOS DE 6 , 7-DIHIDRO-3H-OXAZOLO [3 , 4- a] PIRAZINA-5 , 8-DIONA"
CAMPO DA INVENÇÃO
[0001] A presente invenção se refere a novos compostos derivados de 6, 7-dihidro-3H-oxazolo [3, 4-a] pirazina-5, 8-diona, a mistura desses derivados (em qualquer proporção) , incluindo seus sais, solvatos, hidratos, pró-drogas e ésteres farmaceuticamente aceitáveis; os enantiômeros e/ou diastereoisômeros dos compostos nas suas formas individuais separadas e/ou nas formas de misturas racêmicas ou misturas não-racêmicas com excesso enantiomérico em quaisquer proporções; aos processos para a preparação dos referidos compostos e/ou derivados.
[0002] A presente invenção também abrange as composições farmacêuticas compreendendo os referidos novos compostos derivados de 6, 7-dihidro-3i7-oxazolo [3, 4-a] pirazina-5, 8-diona, a mistura desses derivados (em qualquer proporção) , incluindo seus sais, solvatos, hidratos, pró-drogas e ésteres farmaceuticamente aceitáveis; os enantiômeros e/ou diastereoisômeros dos compostos nas suas formas individuais separadas e/ou nas formas de misturas racêmicas ou misturas não-racêmicas com excesso enantiomérico em quaisquer proporções; medicamentos compreendendo os referidos compostos e/ou derivados, assim quanto ao uso dos compostos e/ou derivados como inibidor da enzima . fosfodiesterase, mais especificamente como inibidor da enzima fosfodiesterase de tipo 5 (PDE-5); e ao uso dos compostos e/ou derivados no tratamento de disfunção erétil, desordens e/ou condições tratáveis com relaxamento de tecidos e desordens tratáveis com inibidores de fosfodiesterase, mais especificamente . inibidor da PDE-5. [0003] A presente invenção também descreve um método de tratamento de disfunção erétil, desordens e/ou condições tratáveis com relaxamento de tecidos e desordens tratáveis com inibidores de fosfodiesterase, mais especificamente como inibidores da PDE-5, usando os novos compostos derivados de 6, 7-dihidro-3fí-oxazolo [3, 4-a] pirazina-5, 8-diona, mistura desses derivados (em qualquer proporção) , incluindo seus sais, solvatos, hidratos, pró-drogas e ésteres farmaceuticamente aceitáveis; os enantiômeros e/ou diastereoisômeros dos compostos nas suas formas individuais separadas e/ou nas formas de misturas racêmicas ou misturas não-racêmicas com excesso enantiomérico em quaisquer proporções.
[0004] Em particular, a presente invenção descreve os compostos denominados 3- (benzo [d] [1, 3] dioxol-5-il) -7- (2- hidroxietil) -1- ( lfí-indol-3-il) -6, 7-dihidro-3fí-oxazolo [3,4- a] pirazina-5 , 8-diona (BL-230) ; e 3- (benzo [d] [ 1 , 3 ] dioxol-5-il ) - 7- ( (S) l-hidroxipropan-2-il) -1- (lfí-indol-3-il) -6, 7-dihidro-3H- oxazolo [3, 4-a] pirazina-5, 8-diona (BL-236) .
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[0005] Os compostos inibidores de fosfodiesterases são os principais agentes utilizados na clinica médica para o tratamento e/ou prevenção de disfunção erétil, desordens e/ou condições tratáveis com relaxamento de tecidos e outras doenças tratáveis com inibidores de fosfodiesterases . No caso da disfunção erétil, os inibidores de PDE-5 são os mais utilizados na clinica médica.
[0006] A disfunção erétil, mais comumente conhecida como impotência sexual é uma das doenças que mais prejudica a qualidade de vida de um homem. Durante muito tempo, a disfunção erétil assombrou os homens sem muita possibilidade de tratamento efetivo. [0007] Antes dos anos 1970, a quase totalidade dos casos de disfunção erétil era considerada como resultante de causas psicológicas, e os tratamentos consistiam na administração empírica de testosterona ou encaminhamento para um psiquiatra. O desenvolvimento de novos tratamentos, como a próteses penianas infláveis, desenvolvida em 1973 e o surgimento de injeções intracavernosas, no inicio de 1980, foram marcos importantes para a história dos tratamentos modernos de disfunção erétil. O primeiro tratamento de uso oral, à base de citrato de sildenafila (princípio ativo do medicamento Viagra®) foi lançando em 1998, e foi um marco importante para o tratamento de disfunção erétil.
[0008] O tratamento oral é mais aceito pelo homem e surgiu de pesquisa clínica sobre o uso de inibidores de cGMP-PDE, mais especificamente inibidores da PDE-5. O precursor desses compostos era a 5- [2-etoxi-5- (4-metilpíperazinilsulfonil) fenil] -l-metil-3-n-propil-l, 6-dihidro-7H-pirazolo [4,3- d] pirimidina-7-ona, ou sildenafila, com propriedades vasodilatadoras e que potencializa os efeitos do óxido nítrico. A molécula de sildenafila foi originalmente descrita na patente americana US5250534.
[0009] Posteriormente, outros compostos inibidores da enzima PDE-5 foram desenvolvidos e são citados em grande número de publicações da literatura técnica, bem como em publicações de patentes. Dentre os compostos conhecidos destacamos: a molécula do vardenafila, princípio ativo do medicamento Levitra®, descrito originalmente na patente US3635178; a tadalafila, princípio ativo do medicamento Cialis®, descrito originalmente na patente americana US5859006; e o composto BL- 106, ainda não comercializado, descrito originalmente na patente americana US8338432 e desenvolvido pela mesma equipe de pesquisadores da presente invenção. [0010] Estudos disponíveis relatam que alguma forma de disfunção sexual afeta 10-52% dos homens. 0 estudo realizado por Feldman e seus colaboradores demonstraram que 52% dos homens entre as idades de 40 e 70 têm disfunção erétil de graus leve, moderada e grave. Entre as idades de 40 e 70, a prevalência de disfunção erétil leve permanece relativamente constante, porém a prevalência de disfunção erétil moderada e grave aumenta em cada década, com o total combinado de aumento evoluindo de cerca de 40% na idade de 40 anos a quase 70% aos 70 anos (Feldman HA, Goldstein I, Hatzichristou DG, et al. Impotence and its medicai and psychosocial correlates : results of the Massachusetts Male Aging Study. J Urol 1994/151 : 54-61) .
[0011] Adicionalmente, os pesquisadores verificaram que compostos relaxantes de tecido têm sido usados para promover o relaxamento de vários tecidos com o foco em tratar ou atuar como adjuvante no tratamento, procedimento ou cirurgia relacionada à litíase (Korkes, F. et al, J Bras Nefrol. (2009) 31(1): 55), aumento de próstata (por exemplo, hiperplasia prostática benigna, prostatite) (WO 9911279) e constrição uretral (Van der werf et al, BJU International (2002) 90:588). Outras desordens e/ou condições tratáveis de relaxamento de tecido são conhecidas e descritas no estado da técnica.
[0012] Inibidores de PDE-5 tem sido usados para bloquear a degradação de cGMP para prolongar os efeitos do óxido nítrico (NO) em vários tecidos, por exemplo, para manter o relaxamento induzido por NO das vias aéreas e vasos (Barnes, P. J., et al., (1995) e para manter a proteção induzida por NO de tecido (Duffin, R., et al., Br J Pharmacol. (2008) 153(4): 623). Tais ações nos tecidos mostram-se como benéficas para o tratamento de diversas desordens - que sejam desordens tratáveis com inibidores de fosfodiesterases, principalmente da PDE-5, incluindo hipertensão pulmonar (comercialmente tratado com citrato de sildenafila) ; bronquite; asma crónica; hipertensão (EP 758653, US 7569572); doença de Raynaud (Ghofrani H.A., et al., Nat Rev Drug Discov. 2006, 5:689); início de falha cardíaca lateral direita (Ghofrani et al. (2003) AJRCCM 167(8): 1139); neurogênese e recuperação funcional pós-derrame (Zhang et al. (2002) Stroke 33: 2675-2680); relaxação arterial coronária (Halcox et al. (2002) J Am Coll Cardiol 40: 1232); desordens de excitação sexual feminina {Nehra et al. (2001) World J Urol. 19(1): 115); angina e falha cardíaca congestiva (Reffelmann et al., Circ. (2003) 108(2) :239) . Outras desordens tratáveis com inibidores da PDE-5 são conhecidas e descritas no estado da técnica.
[0013] Frente a este cenário e buscando novas alternativas de compostos inibidores de fosfodiesterases , mais especificamente como inibidores da PDE-5, para novos tratamentos da disfunção erétil, desordens e/ou condições tratáveis com relaxamento de tecidos e outras doenças tratáveis com inibidores de fosfodiesterases , os pesquisadores da presente invenção desenvolveram novos compostos derivados de 6, 7-díhidro-3fí-oxazolo [3, 4-a] pirazina-5, 8-diona, objeto da presente invenção, os quais apresentam atividade inibidora das enzimas fosfodiesterases, incluindo a inibição da PDE-5.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[0014] A. presente invenção visa fornecer novos compostos derivados de 6, 7-dihidro-3H-oxazolo [3, 4-a] pirazina-5, 8-diona, mistura desses derivados (em qualquer proporção) , incluindo seus sais, solvatos, hidratos, pró-drogas e ésteres farmaceuticamente aceitáveis; os enantiômeros e/ou diastereoisômeros dos compostos nas suas formas individuais separadas e/ou nas formas de misturas racêmicas ou misturas não-racêmicas com excesso enantiomérico em quaisquer proporções. Mais especificamente os compostos denominados 3- (benzo[d] [1, 3] dioxol-5-il) -7- (2-hidroxietil) -1- ( lH-indol-3- il) -6, 7-dihidro-3fi-oxazolo [3, 4-a] pirazina-5, 8-diona (BL-230) ; e 3-{benzo[d] [1, 3] dioxol-5il) -7- ( <S) l-hidroxipropan-2-il) -1- (lH-indol-3-il) -6, 7-dihidro-3H-oxazolo [3, 4-a] pirazina-5 , 8- diona (BL-236) ; e/ou a mistura desses compostos (em qualquer proporção) .
[0015] Outro aspecto da presente invenção é o uso dos compostos derivados de 6, 7-dihidro-3H-oxazolo [3, -a] pirazina- 5, 8-diona, objeto da presente invenção, para tratamento curativos e/ou profiláticos da disfunção erétil, desordens e/ou condições tratáveis com relaxamento de tecidos e desordens tratáveis com inibidores de fosfodiesterases, mais especificamente com inibidores da PDE-5.
[0016] Também é o objetivo da presente invenção fornecer processos para a preparação dos novos compostos derivados de 6, 7-dihidro-3i-oxazolo [3, 4-a] pirazina-5, 8-diona, objeto da presente invenção. Em particular, os processos para a preparação dos compostos 3- (benzo [d] [1, 3] dioxol-5-il) -7- (2- hidroxietil) -1- ( lH-indol-3-il ) -6, 7-dihidro-3H-oxazolo [3,4- a] pirazina-5 , 8-diona (BL-230); e 3- (benzo [d] [ 1 , 3] dioxol-5-il) - 7- ( (S) l-hidroxipropan-2-il) -1- (lff-indol-3-il) -6, 7-dihidro-3H- oxazolo [3, 4-a] pirazina-5, 8-diona (BL-236); e/ou as misturas desses compostos (em qualquer proporção) .
[0017] Além disso, a presente invenção também visa fornecer composições farmacêuticas compreendendo uma quantidade efetiva de um dos novos compostos derivados de 6, 7-dihidro-3Jí- oxazolo [3, -a] pirazina-5, 8-diona, ou mistura desses derivados (em qualquer proporção) , incluindo seus sais, solvatos, hidratos, pró-drogas e ésteres farmaceuticamente aceitáveis; OS enantiômeros e/ou diastereoisômeros dos compostos nas suas formas individuais separadas e/ou nas formas de misturas racêmicas ou misturas não-racêmicas com excesso enant iomérico em quaisquer proporções. [0018] Em particular, composições farmacêuticas compreendendo pelo menos um dos novos compostos derivados de 6, 7-dihidro-3H-oxazolo [3, 4-a] pirazina-5, 8-diona, selecionados entre: 3- (benzo [d] [1, 3] dioxol-5-il) -7- (2-hidroxietil) -1- (lff- indol-3-il) -6, 7-dihidro-3H-oxazolo [3, 4-a] pirazina-5, 8-diona
(BL-230); e 3- (benzo [d] [1, 3] dioxol-5-il) -7- { (S) 1- hidroxipropan-2-íl) -1- ( lH-indol-3-il) -6, 7-dihidro-3#- oxazolo [3, 4-a] pirazina-5, 8-diona ( BL-236) ; ou mistura desses derivados (em qualquer proporção) , incluindo seus sais, solvatos, hidratos, pró-drogas e ésteres farmaceuticamente aceitáveis; os enantiômeros e/ou diastereoisômeros dos compostos nas suas formas individuais separadas e/ou nas formas de misturas racêmicas ou misturas não-racêmicas com excesso enantiomérico em quaisquer proporções.
[0019] Um objetivo adicional da presente invenção é fornecer um medicamento compreendendo uma quantidade terapeuticamente efetiva de um dos novos compostos derivados de 6, 7-dihidro-3H- oxazolo [ 3, -a] pirazina-5 , 8-diona, a misturas desses derivados (em qualquer proporção) , incluindo seus sais, solvatos, hidratos, pró-drogas e ésteres farmaceuticamente aceitáveis; os enantiômeros e/ou diastereoisômeros dos compostos nas suas formas individuais separadas e/ou nas formas de misturas racêmicas ou misturas não-racêmicas com excesso enantiomérico em quaisquer proporções. Em particular, medicamentos compreendendo pelo menos um dos novos compostos derivados de
6.7-dihidro-3H-oxazolo [3, 4-a] pirazina-5, 8-diona, selecionados entre: 3- {benzo [d] [1, 3] dioxol-5-il} -7- (2-hidroxietil) -1- (1H- indol-3-il ) -6, 7-dihidro-3H-oxazolo [3, 4-a]pirazina-5, 8-diona
( BL-230); e 3- (benzo [d] [1, 3] dioxol-5il) -7- ( (S) 1-hidroxipropan- 2-il) -1- (lií-indol-3-il) -6, 7-dihidro-3fí-oxazolo [3, 4-a] irazina-
5.8-diona (BL-236); e/ou a mistura desses compostos (em qualquer proporção) . BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS
[0020] A Figura 1 mostra o espectro RMN do 1H para caracterização do composto obtido no exemplo 1 (BL-230) .
[0021] A Figura 2 mostra o espectro RMN do 13C para caracterização do composto obtido no exemplo 1 (BL-230) .
[0022] A Figura 3 mostra o espectro EMAR para caracterização do composto obtido no exemplo 1 (BL-230) .
[0023] A Figura 4 mostra o espectro RMN do 1H para caracterização do composto obtido no exemplo 2 (BL-236) .
[0024] A Figura 5 mostra o espectro RMN do 13C para caracterização do composto obtido no exemplo 2 (BL-236) .
[0025] A Figura 6 mostra o espectro EMAR para caracterização do composto obtido no exemplo 2 (BL-236) .
[0026] A Figura 7 mostra um gráfico da contração induzida pela fenilefrina (PE) e do efeito de DMSO (veiculo - controle negativo) em corpos cavernosos de coelho.
[0027] A Figura 8 mostra um gráfico da contração induzida pela fenilefrina (PE) e do efeito relaxante de tadalafila em corpos cavernosos de coelho.
[0028] A Figura 9 mostra um gráfico da contração induzida pela fenilefrina (PE) e do efeito relaxante do composto BL-230 em corpos cavernosos de coelho.
[0029] A Figura 10 mostra um gráfico da contração induzida pela fenilefrina (PE) e do efeito relaxante do composto BL-236 em corpos cavernosos de coelho.
[0030] A Figura 11 mostra um gráfico de curva dose-resposta, com a porcentagem de relaxamento em corpo cavernoso de coelho após administração do composto BL-230 e tadalafila.
[0031] A figura 12 mostra um gráfico de barras com a porcentagem de relaxamento do corpo cavernoso de coelho quando administrado BL-230, tadalafila e DMSO (veiculo) . [0032] A Figura 13 mostra um gráfico de barras com a porcentagem de relaxamento do corpo cavernoso de coelho quando administrado BL-236, tadalafila e DMSO (veiculo) .
[0033] A Figura 14 mostra a porcentagem de inibição das enzimas fosfodiasterases observada na presença do composto BL- 230.
[0034] A Figura 15 mostra a porcentagem de inibição das enzimas fosfodiasterases observada na presença do composto BL- 236.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[0035] A presente invenção descreve novos compostos úteis para o tratamento de doenças tratáveis com inibidores de fosfodiesterase, principalmente com a inibição da PDE-5, como por exemplo, a disfunção erétil, desordens e/ou condições tratáveis com relaxamento de tecidos e outras doenças tratáveis com inibidores de fosfodiesterases . Os compostos da presente invenção referem-se aos novos compostos derivados de 6, 7-dihidro-3fr-oxazolo [3, 4-a] piraziná-5, 8-diona, representadas pela fórmula (I) :
Figure imgf000011_0001
onde:
- R1 é um grupo aromático, um grupo aromático contendo um ou mais heteroátomos, grupos fenil, fenol, 3-metoxi-4-fenol, metileno-3, -dioxifenil, 2-metoxifenil, 3-metoxifenil, 4- metoxifenil , 3, 4-dimetoxifenil, 2-halo-fenil, 3-halo-fenil , 4- halo-fenil, furil; piridínico, aromático biciclico, aromático bicíclico contendo um ou mais heteroátomos;
- R2 é arila, heteroarila, bicicloarila, CH2(CH2)nR3, CH2 (CH2)nN 4R5, CHR6CH2OH, CH2CH(OH)R7, CH2(CH2)OR8, CH2 (CH2) nSR9, sais do carboxilato, sais do sulfonato ou sais quaternários de amónio;
- R3 é OH, NH2, NH3 +, S(0)Me, S03H, C02H, Cl, sais do carboxilato, sais do sulfonato ou sais quaternários de amónio;
- R4 é hidrogénio, metil, etil, propil, i-propil, butil, sec- butil, terc-butil, fenil, . benzil ou sais quaternários de amónio;
- R5 é hidrogénio, metil, etil, propil, i-propil, butil, sec- butil, terc-butil, fenil, benzil ou sais quaternários de amónio;
- R6 é {. )-Me, (i?)-Et, (R) -i-Prop, (J¾)-i-But, (R) -fenil, (R)- CH2SH, (R) -CH2CH2SCH3, (R) -benzil, {R) -sec-But , (S)-Me, (S)-Et,
(S)-í-Prop, (S)-i-But, (S) -fenil, (S)-CH2SH, ( S) -CH2CH2SCH3,
(S}-benzil7 (S) -sec-But ou CH20H;
- R7 é (2¾)-Me, (- )-Et; (i^)-Prop, (Λ) -i-Prop, {R) -fenil, {R)~ benzil, (S)-Me, (S)-Et; (S)-Prop, (S)-i-Prop, (S) -fenil ou (S) -benzil ;
- R8 é Ci-6 alquil, C2-6 alquenil, C2-e alquinil, fenil ou benzil;
- R9 é Ci-6 alquil, C2-e alquenil, C2-s alquinil, fenil ou benzil;
- n é um número compreendido entre 0 e 4;
a mistura desses derivados (em qualquer proporção) , incluindo seus sais, solvatos, hidratos, pró-drogas e ésteres farmaceuticamente aceitáveis.
[0036] Os compostos de fórmula (I) podem conter um ou mais centros quirais, podem assim existir enantiômeros e/ou diastereoisomeros. Em particular, um centro quiral é evidenciado com um asterisco {*) na descrição da fórmula (I) . Portanto, a presente invenção também abrange os enantiômeros e/ou diastereoisômeros dos compostos de fórmula (I) nas suas formas individuais separadas e/ou nas formas de misturas racêmicas ou misturas não-racêmicas com excesso enantiomérico em quaisquer proporções.
[0037] Os compostos de fórmula (I) podem existir sob duas formas tautoméricas, e a invenção inclui uma ou mais formas tautoméricas e misturas dessas formas (em qualquer proporção) .
[0038] Os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos de fórmula (I) são formados pela adição de ácidos farmaceuticamente aceitáveis. Alguns exemplos de sais incluem, porém, não estão limitados aos sais de: nitrato, cloridrato, bromoidrato, sulfato ou bissulfato, fosfato, hidrogeno- fosfato, acetato, benzoato, succinato, fumarato, maleato, lactato, citrato, tartarato, gluconato, metassulfonato, benzenossulfonato e p-toluenossulfonato . Os compostos da fórmula (I) podem ser usados em sais de metais farmaceuticamente aceitáveis, em particular, sais de metais alcalinos com bases, como por exemplo, os sais de sódio e potássio .
[0039] Em uma concretização especifica, a presente invenção descreve os novos compostos derivados de 6, 7-dihidro-3fí- oxazolo [3, 4-a] pirazina-5, 8-diona, representados pela fórmula (D :
Figure imgf000013_0001
- R1 é metileno-3-4-dioxifenil ; - R2 é CH2(CH2)nR3 ou CHR6CH2OH;
- R3 é OH;
- R6 é (S) -Me;
- n é igual a 1;
a mistura desses derivados (em qualquer proporção) , incluindo seus sais, solvatos, hidratos, pró-drogas e ésteres farmaceuticamente aceitáveis; os enantiômeros e/ou diastereoisômeros dos compostos nas suas formas individuais separadas e/ou nas formas de misturas racêmicas ou misturas não-racêmicas com excesso enantiomérico em quaisquer proporções .
[0040] Em uma concretização mais especifica, os novos compostos derivados de 6, 7-dihidro-3H-oxazolo [ 3 , 4-a] pirazina- 5,8-diona, estão representados pelas seguintes fórmulas:
- Fórmula (II) :
Figure imgf000014_0001
denominado 3-{benzo[d] [1, 3] dioxol-5-il) -7- (2-hidroxietil ) -1- (lH-indol-3-il) -6, 7-dihidro-3H-oxazolo [3, 4-a] pirazina-5, 8- diona (BL-230) ; e
- Fórmula (III) :
Figure imgf000015_0001
denominado 3- (benzo [d] [ 1 , 3] dioxol-5-il } -7- ( ( S ) 1-hidroxipropan- 2-il) -1- ( lff-indol-3-il ) -6, 7-dihidro-3i?-oxazolo [3, 4-a] pirazina- 5,8-diona (BL-236) ;
ou a mistura desses derivados (em qualquer proporção) , incluindo seus sais, solvatos, hidratos, pró-drogas, e ésteres farmaceuticamente aceitáveis; os enant iômeros e/ou d astereoisômeros dos compostos nas suas formas individuais separadas e/ou nas formas de misturas racêmicas ou misturas não-racêmicas com excesso enantiomérico em quaisquer proporções .
[0041] Em outra concretização da presente invenção, refere- se ao PROCESSO DE SÍNTESE do composto de fórmula (II), denominado 3- (benzo [d] [1, 3] dioxol-5-il) -7- ( 2-hidroxietil ) -1- (lfí-indol-3-il) -6, 7-dihidro-3H-oxazolo [3, 4-a] pirazina-5, 8- diona (BL-230) , o qual pode ser obtido utilizando os compostos (E) -metil 2- ( (benzo [d] [1,3] dioxol-5-ilmetileno) amino) -3- (1H- indol-3-il) -3-oxopropanoato, descrito pela estrutura química (a); metil 2- (benzo [d] [1, 3] dioxol-5-il) -3- (2-cloroacetil) -5- (lH-indol-3-il) -2, 3-dihidrooxazolo- -carboxilato descrito pela estrutura química (b) e a amina 2-aminoetanol descrita pela estrutura química (c) .
Figure imgf000016_0001
[0042] Para a síntese do composto de fórmula (II) , o composto (b) é preparado através da reação do composto (a) na presença de uma solução de piridina seca (Py) em tetrahidrofurano (THF) e solução de cloreto de cloroacetila . Depois de finalizada a reação para formação do intermediário
(b) , este é adicionado ao meio com álcool etílico e 2- aminoetanol (c) , no final da reação é adicionado etanol e água, resultando na obtenção do composto de Fórmula (II), como ilustrado no Esquema [1]:
Figure imgf000016_0002
[0043] Já o composto de fórmula (III) , denominado 3- (benzo [d] [1, 3] dioxol-5-il) -7- ( (S) l-hidroxipropan-2-il ) -1- (1H- indol-3-il) -6, 7-dihidro-3íf-oxazolo [3, 4-a] irazina-5 , 8-diona
(BL-236) , de acordo com a presente invenção, pode ser obtido utilizando os compostos (E)-metil 2- ( (benzo [d] [1, 3] dioxol-5- ilmetileno)amino) -3- (lH-indol-3-il) -3-oxopropanoato, descrito pela estrutura química (a) ; metil 2- (benzo [d] [1, 3] díoxol-5- il) -3- (2-cloroacetil ) -5- ( lJJ-indol-3-il) -2, 3-dihidrooxazolo-4- carboxilato descrito pela estrutura química (b) e a amina (S)~ 2-aminopropan-l-ol descrita pela estrutura química (d) .
Figure imgf000017_0001
[0044] Para a síntese do composto de fórmula (III), o composto (b) é preparado através da reação do composto (a) na presença de uma solução de piridina seca (Py) em tetrahidrofurano (THF) e solução de cloreto de cloroacetila . Depois de finalizada a reação para formação do intermediário (b) , este é adicionado ao meio álcool etílico ,e { S) -2- aminopropan-l-ol (d) , no final da reação é adicionado etanol e água, resultando na obtenção do composto de Fórmula (III), como ilustrado no Esquema [2] :
Figure imgf000017_0002
[0045] A presente invenção também contempla composições farmacêuticas, ou seja, uma forma apropriada de dosagem, onde a composição citada compreende como ingrediente ativo uma quantidade efetiva de um ou mais compostos da fórmula (I), incluindo seus sais, solvatos, hidratos, pró-drogas e ésteres farmaceuticamente aceitáveis; os enantiômeros e/ou diastereoisômeros dos compostos nas suas formas individuais separadas e/ou nas formas de misturas racêmicas ou misturas não racêmicas com excesso enantiomérico em quaisquer proporções .
[0046] Preferencialmente, as composições da presente invenção compreendem como ingrediente ativo os novos compostos, que estão representados pelas seguintes fórmulas: - Fórmula ( II) :
Figure imgf000018_0001
denominado 3-(benzo[d] [1, 3] dioxol-5-il) -7- (2-hidroxietíl) -1- (lH-indol-3-il) -6, 7-dihidro-3H-oxazolo [3, 4-a] pirazina-5, 8- diona (BL-230) ; e
- Fórmula (III) :
Figure imgf000019_0001
denominado 3- {benzo [d] [1,3] dioxol-5-il) -7- ( (S) 1-hidroxipropan- 2-il) -1- (ltf-indol-3-il) -6, 7-dihidro-3fí"-oxazolo [3, 4-a] pirazina- 5, 8-diona (BL-236) ;
ou a mistura desses derivados (em qualquer proporção) , incluindo seus sais, solvatos, hidratos, pró-drogas e ésteres farmaceuticamente aceitáveis; os enant iômeros e/ou diastereoisõmeros dos compostos nas suas formas individuais separadas e/ou nas formas de misturas racêmicas ou misturas não-racêmicas com excesso enant iomérico em quaisquer proporções .
[0047] As COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS podem ser preparadas por métodos bem conhecidos pelo estado da técnica. Apropriadamente, Remington' s Pharmaceutical Sciences ou fontes similares de informação podem ser usadas para preparar uma formulação farmacêutica adequada para veicular o composto da invenção .
[0048] As COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS da presente invenção podem ser administradas por via oral, tópica, injetável, nasal e retal. O modo particular selecionado dependerá dos compostos presentes na composição.
[0049] As COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS para administração oral podem ser apresentadas, mas não limitadas, à: pós, grânulos, cápsulas, comprimidos, comprimidos efervescentes, comprimidos mastigáveis, comprimidos revestidos, pílulas, géis, gomas mastigáveis, filmes, soluções, xaropes, elixires, suspensões, emulsões, e outros.
[0050] A presente invenção também contempla COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS compreendendo uma quantidade terapeut icamente efetiva de um ou mais compostos da fórmula (I), e/ou de seus sais, solvatos, hidratos, pró-drogas, e ésteres farmaceuticamente aceitáveis; os enantiômeros e/ou diastereoisômeros dos compostos nas suas formas individuais separadas e/ou nas formas de misturas racêmicas ou misturas não-racêmicas com excesso enantiomérico em quaisquer proporções; e um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis.
[0051] Em particular, COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS compreendendo como principio ativo pelo menos um dos seguintes compostos selecionados do grupo constituxdo por:
(a) 3- (benzo [d] [ 1, 3 ] dioxol-5-il ) -7- (2-hidroxietil) -1- ( 1H- indol-3-il ) -6, 7-dihidro-3H-oxazolo [3, -a] pirazina-5, 8-diona
(BL-230), descrito na fórmula (II),
(b) 3- (benzo [d] [1, 3] dioxol-5-il) -7- ( (S) l-hidroxipropan-2- il) -1- ( lH-indol-3-il) -6, 7-dihidro-3Jí-oxazolo [3, 4-a] pirazina-
5, 8-diona (BL-236) descrito na fórmula (III);
a mistura desses compostos em qualquer proporção, incluindo seus sais, solvatos, hidratos, pró-drogas, e ésteres farmaceuticamente aceitáveis; os enantiômeros e/ou diastereoisômeros dos compostos nas suas formas individuais separadas e/ou nas formas de misturas racêmicas ou misturas não-racêmicas com excesso enantiomérico em quaisquer proporções; e um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis .
[0052] Os COMPOSTOS descritos na presente invenção, incluindo seus sais, solvatos, hidratos, pró-drogas, e ésteres farmaceuticamente aceitáveis; os enantiômeros e/ou diastereoisômeros dos compostos nas suas formas individuais separadas e/ou nas formas de misturas racêmicas ou misturas não-racêmicas com excesso enantiomérico em quaisquer proporções; são empregados para o tratamento e/ou profilaxia de disfunção erétil, desordens e/ou condições tratáveis com relaxamento de tecidos e desordens tratáveis com inibidores de fosfodiesterases , como por exemplo, da PDE-5. As desordens tratáveis com inibidores de PDE podem ser litiase, hiperplasia prostática, hipertensão pulmonar, constrição ureteral, disfunção sexual feminina e/ou disfunção sexual masculina, mas não limitada à somente esses exemplos.
[0053] Adicionalmente, a presente invenção contempla COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS compreendendo os compostos descritos na presente invenção, incluindo seus sais, solvatos, hidratos, pró-drogas, e ésteres farmaceuticamente aceitáveis; os enantiômeros e/ou diastereoisômeros dos compostos nas suas formas individuais separadas e/ou nas formas de misturas racêmicas ou misturas não-racêmicas com excesso enantiomérico em quaisquer proporções; são empregados para o tratamento e/ou profilaxia de disfunção erétil, desordens e/ou condições tratáveis com relaxamento de tecidos e desordens tratáveis com inibidores de fosfodiesterases, como por exemplo, da PDE-5. As desordens tratáveis com inibidores de PDE podem ser litiase, hiperplasia prostática, hipertensão pulmonar, constrição ureteral, disfunção sexual feminina e/ou disfunção sexual masculina, mas não limitada à somente esses exemplos.
[0054] Em particular, os compostos 3- (benzo [d] [1, 3] dioxol-5- il) -7- (2-hidroxietil) -1- (lff-indol-3-il) -6, 7-dihidro-3H- oxazolo [3 , 4-a] pirazina-5, 8-diona (BL-230) descrito na fórmula (II), e 3- (benzo [d] [1, 3] dioxol-5-il) -7- ( (S) l-hidroxipropan-2- il) -1- ( lH-indol-3-il) -6, 7-dihidro-3íf-oxazolo [3, 4-a] pirazina- 5, 8-diona (BL-236) descrito na fórmula (III); ou a mistura desses derivados (em qualquer proporção), incluindo seus sais, solvatos, hidratos, pró-drogas, e ésteres farmaceuticamente aceitáveis; os enantiômeros e/ou diastereoisômeros dos compostos nas suas formas individuais separadas e/ou nas formas de misturas racêmicas ou misturas nâo-racêmicas com excesso enantiomérico em quaisquer proporções.
[0055] Adicionalmente, a presente invenção descreve um METÓDO DE TRATAMENTO E/OU PREVENÇÃO de disfunções associadas à atividade das fosfodiesterases, administrando dose efetiva de pelo menos um dos novos compostos derivados de 6, 7-dihidro-3H- oxazolo [ 3 , 4-a] pirazina-5 , 8-diona, a mistura desses derivados {em qualquer proporção) , incluindo seus sais, solvatos, hidratos, pró-drogas e ésteres farmaceuticamente aceitáveis; os enantiômeros e/ou diastereoisômeros dos compostos nas suas formas individuais separadas e/ou nas formas de misturas racêmicas ou misturas não-racêmicas com excesso enantiomérico em quaisquer proporções. As desordens tratáveis com inibidores de PDE podem ser disfunção erétil, litiase, hiperplasia prostática, hipertensão pulmonar, constrição ureteral, disfunção sexual feminina e/ou disfunção sexual masculina, mas não limitada à somente esses exemplos.
[0056] A presente invenção também descreve um MÉTODO DE TRATAMENTO E/OU PREVENÇÃO de disfunção erétil, desordens e/ou condições tratáveis com relaxamento de tecidos e desordens tratáveis com inibidores de fosfodiesterases, como por exemplo, da PDE-5, administrando dose efetiva de pelo menos um dos novos compostos derivados de 6, 7-dihidro-3H-oxazolo [3, 4- a] pirazina-5, 8-diona, a mistura desses derivados (em qualquer proporção) , incluindo seus sais, solvatos, hidratos, pró- drogas e ésteres farmaceuticamente aceitáveis; os enantiômeros e/ou diastereoisômeros dos compostos nas suas formas individuais separadas e/ou nas formas de misturas racêmicas ou misturas não-racêmicas com excesso enantiomérico em quaisquer proporções . [0057] Em particular, os compostos 3- (benzo [d] [ 1 , 3] dioxol-5- il) -7- (2-hidroxietil) -1- (lH-indol-3-il) -6, 7-dihidro-3H- oxazolo [3, 4-a] pirazina-5, 8-diona (BL-230 - fórmula II); e 3- (benzo [d] [1, 3] dioxol-5-il) -7- ( (S) l-hidroxipropan-2-il) -1- (lff- indol-3-il) -6, 7-dihidro-3fí-oxazolo [3, 4-a] pirazina-5, 8-diona (BL-236 - fórmula III}; ou mistura desses derivados (em qualquer proporção) , incluindo seus sais, solvatos, hidratos, pró-drogas e ésteres farmaceuticamente aceitáveis; os enantiômeros e/ou diastereoisômeros dos compostos nas suas formas individuais separadas e/ou nas formas de misturas racêmicas ou misturas não-racêmicas com excesso enantiomérico em quaisquer proporções.
EXEMPLOS :
[0058] Os exemplos a seguir, descritos detalhadamente, ilustram a presente invenção sem, todavia, limitar seu escopo de proteção, e que várias modificações, à luz das mesmas, serão sugestivas aos especialistas na técnica. Tais realizações equivalentes devem estar incluídas dentro do escopo e alcance das reivindicações que acompanham.
EXEMPLO 1 : Preparação do composto de fórmula II denominado 3- <benzo[d] [1 , 3] dioxol-5-il) -7- (2-hidroxietil) -1- (lH-indol-3- il) -6, 7-dihidro-3íT-oxazolo [3, 4-a] irazina-5, 8-diona (BL-230) .
[0059] Em um balão de 500 mL munido de agitação mecânica, funil de adição e tubo secante contendo CaCl2 foram adicionados o composto (a) (10,20 g, 28,0 mmol) e uma solução de piridina seca (11,3 mL} em 102 mL de tetrahidrofurano (THF) seco, a qual foi agitada por 30 minutos. A esta suspensão foi adicionado lentamente, aproximadamente por 2 horas, uma solução de cloreto de cloroacetila {2,9 mL, 36,4 mmol)
(reagente 2) em 30 mL de THF seco. Após a adição, a mistura reacional foi reagida por um período de 4 horas à temperatura ambiente, resultando na formação do intermediário (b) . Ao término deste período, o álcool etílico (42 mL) e o composto (c) denominado 2-aminoetanol (39,3 g, 644,0 mmol) foram adicionados ao meio e a mistura agitada por um período de 16 h. Ao final deste tempo foram adicionados ao meio 250 mL de etanol e 100 mL de água. O sistema foi submetido à destilação a vácuo e o excesso de solvente removido até a precipitação do produto. O balão foi resfriado à temperatura ambiente, e em seguida, resfriado a temperatura entre 0 e 5°C. O sistema resfriado foi mantido sob agitação por 2 horas à temperatura entre 0 e 5°C. A suspensão resultante foi filtrada a vácuo e o precipitado lavado com 100 mL de etanol. O sólido foi colocado em um balão de 250 mL e adicionou-se 60 mL de etanol e a mistura foi agitada por um período de 30 minutos. Terminado esse período o sólido foi filtrado e seco a vácuo resultando na formação do produto de fórmula (II), conforme o esquema [1] abaixo .
[0060] Esquema [1] : Síntese do composto 3-
(benzo [d] [1, 3] dioxol-5-il) -7- (2-hidroxietil) -1- { ltf-indol-3- il ) -6, 7-dihidro-3H-oxazolo [ 3, 4-a] pírazina-5 , 8-diona (BL-230) .
Figure imgf000024_0001
[0061] 0 composto obtido por esse processo apresenta nome IUPAC 3- (benzo [d] [1, 3] dioxol-5-íl) -7- (2-hidroxietil} -1- (1H- indol-3-il) -6, 7-dihidro-3tf-òxazolo [ 3 , 4-a] pírazina-5 , 8-diona, (BL-230), estrutura química descrita pela fórmula (II):
Figure imgf000025_0001
e apresenta as seguintes características: fórmula molecular: C23Hi9 306; sólido amarelo; Ponto de fusão 254-258°C, RMN 1H (500 MHz, (CD3)2SO): δ 11.87 (ls, IH) , 8.96 {ls, IH), 7.85 (d, J = 10.0 Hz, IH), 7.47 (d, J = 10.0 Hz, IH), 7.18-7.05 (m, 5H) , 6.98 (d, J = 10.0 Hz, IH), 6.05 (s, 2H) , 4.84-4.32 (m, IH), 4.28 (dd, J = 30.0 Hz, J = 15.0 Hz, 2H) , 3.65-3.61 (m, 2H) , 3.50-3.45 (m, 2H) (Figura 1); RMN 13C (125 MHz, (CD3)2SO): 5159.1, 157.2, 148.8, 148.1, 148.0, 136.3, 131.5, 131.3,
125.7, 122.7, 121.8, 121.1, 120.9, 112.7, 108.8, 107.0, 105.4,
102.8, 101.9, 90.8, 58.9, 52.9, 48.2 (Figura 2}; EMAR (El) m/z calculado para C23H19N3O6: [433.1274] + encontrado: 434.1336 [M+H]+ (Figura 3) .
EXEMPLO 2 : Preparação do composto de fórmula (III) denominado 3- (benzo [d] [1 , 3] dioxol-5il) -7- ( (S) l-hidroxipropan-2-il) -1- (1H- indol-3-il) -6, 7-dihidro-3H-oxazolo [3 , 4-a]pirazina-5 , 8-diona (BL-236) .
[0062] Em um balão de 500 mL munido de agitação mecânica, funil de adição e tubo secante contendo CaCl2 foram adicionados o composto (a) (10,20 g, 28,0 mmol) e uma solução de piridina seca (11,3 mL) em 102 mL de tetrahidrofurano (THF) seco, a qual foi agitada por 30 minutos. A esta suspensão foi adicionado lentamente, aproximadamente por 2 horas, uma solução de cloreto de cloroacetila (2,9 mL, 36,4 mmol) (reagente 2) em 30 mL de THF seco. Após a adição, a mistura reacional foi reagida por um período de 4 horas à temperatura ambiente, resultando na formação do intermediário (b) . Ao término deste período, o álcool etílico (42 mL) e o composto (d) denominado ( S) -2-aminopropan-l-ol (48,4 g, 644,0 mmol) foram adicionados ao meio e a mistura agitada por um período de 16 h. Ao final deste tempo foram adicionados ao meio 250 mL de etanol e 100 mL de água. O sistema foi submetido à destilação a vácuo e o excesso de solvente removido até a precipitação do produto. O balão foi resfriado à temperatura ambiente, e em seguida, resfriado a temperatura entre 0 e 5°C. 0 sistema resfriado foi mantido sob agitação por 2 horas a temperatura entre 0 e 5°C. A suspensão resultante foi filtrada a vácuo e o precipitado lavado com 100 mL de etanol. O sólido foi colocado em um balão de 250 mL e adicionou-se 60 mL de etanol e a mistura foi agitada por um período de 30 minutos. Terminado esse período o sólido foi filtrado e seco a vácuo resultando na formação do produto de fórmula (III), conforme o esquema [2] abaixo.
[0063] Esquema [2] : Síntese do composto 3-
(benzo[d] [1, 3] dioxol-5-il) -7- ( (S) l-hidroxipropan-2-il ) -1- ( 1H- indol-3-il) -6, 7-dihidro-3H-oxazolo [3, 4-a] pirazina-5, 8-diona
(BL-236) .
Figure imgf000026_0001
[0064] O composto obtido por esse processo apresenta nome IUPAC 3- (benzo[d] [ 1, 3] dioxol-5-il) -7- ( (S) l-hidroxipropan-2-il) - 1- ( lH-indol-3-il) -6, 7 -dihidro-3H-oxazolo [3, 4-a] pirazina-5 , 8- diona, (BL-236) , estrutura química descrita pela fórmula (III) :
Figure imgf000027_0001
e apresenta as seguintes características: fórmula molecular: C24H21 3O6; sólido amarelo; Ponto de Fusão 235-239 °C, RMN XH (300 MHz , (CD3)2SO): δ 11.87 (d, J = 3.0 Hz, 1Ή) , 8.98 (d, J = 3.0 Hz, IH), 7.87 (d, J = 9.0 Hz, IH), 7.47 (d, J = 9.0 Hz, IH), 7.14-7.06 (m, 5H) , 6.98 (d, J = 9.0 Hz, IH), 6.04 (s, 2H) , 4.85 (t, J = 6.0 Hz, IH), 4.67-4.60 (m, IH) , 4.07 (dd, J = 21.0 Hz, J = 18.0 Hz, 2H) , 3.59-3.52 (m, IH), 3.51-3,40 (m, IH), 1.07 (d, J = 6.0 Hz, 3H) (Figura 4); RMN 13C, 75 MHz , (CD3)2SO, δ 159.5, 157.5, 148.8, 148.1, 148.0, 136,3, 131.6, 131,3, 125.7, 122.6, 121.8, 121,0, 120.9, 112.8, 108.8, 107.0, 105.7, 102.8, 101.9, 90.7, 61.9, 49.9, 46.5, 13.7 (Figura 5) ; EMAR (El) m/z calculado para [C24H21 3O6] + : 447.1430, encontrado: 470.1325 [M+Na]+ (Figura 6).
EXEMPLO 3 : Avaliação do efeito relaxante dos compostos BL-230 e BL-236 em corpo cavernoso isolado de coelhos
Tecido
[0065] Para esse estudo, coelhos New Zealand White (2 - 3,5 kg) foram utilizados para obtenção de tecido peniano, que foi extirpado e transferido para uma solução de Krebs gelada. Para o estudo foram utilizados 4 tiras do corpo cavernoso (CC) do tecido peniano de coelhos New Zealand White.
Registro da tensão Isométrica .
[0066] As tiras foram montadas em câmaras de incubação de tecido de 10 ml contendo solução Krebs a 37 °C, pH entre 7,3 a 7,5; continuamente borbulhada com uma mistura de 95% de oxigénio (02) e 5% de gás carbónico (C02} . Aos tecidos foram aplicados uma tensão inicial de 10 mN, seguido de um período de estabilização de 60 minutos. As mudanças de tensão (força isométrica) foram obtidas utilizando transdutores isométricos (ADInstruments, Austrália) e registradas em um sistema de aquisição de dados PowerLab 4/30 (Chart software, version 7.3.7, ADInstruments, MA, USA para o BL-230, e version 7,0 ADInstruments, MA para o BL-236) .
[0067] Analisando os dados obtidos, é possível observar que: (a) 1 μΜ de fenilefrina ( PE ) foi capaz de induzir contração sustentada em tecido do corpo cavernoso de coelhos, conforme pode ser observados nas Figuras 7 a 10; (b) a administração de dimetilsulfóxido (DMSO) , veículo utilizado para solubilizar os compostos, não induziu relaxamento do tecido (Figura 7); (c) a administração 1 μΜ de tadalafila resultou em relaxamento do tecido (Figura 8); (d) os compostos BL-230 e BL-236, na concentração de 1 μΜ, produziram relaxamento do tecido de forma semelhante ao de tadalafila na mesma concentração (Figuras 9 e 10, respectivamente) .
[0068] Curvas cumulativas de resposta à concentração dos compostos BL-230 e tadalafila (0,001 - 10 μΜ) foram obtidas em tiras de corpo cavernoso de coelho pré-contraídos com 1 μΜ PE. Como pode ser observado na Figura 11, o composto BL-230 produziu relaxamento dose dependente semelhante ao observado para a tadalafila (0,001 - 10 μΜ) na contração causada pela fenilefrina. Adicionalmente, as Figuras 12 e 13 também ilustram o relaxamento observado com os compostos BL-230, BL- 236 e a tadalafila, onde é possível observar (Figura 12 e 13) , que o BL-230 foi capaz de induzir 78,47% de relaxamento do corpo cavernoso de coelho, o BL-236 induziu 93,05%, enquanto a tadalafila induziu relaxamento no corpo cavernoso em torno de 100%. Por outro lado, o DMSO apresentou relaxamento não significativo, em torno de 20.
[0069] Os resultados obtidos demonstram que os compostos BL- 230 e BL236 produzem relaxamento em tecidos de corpos cavernosos de coelhos.
EXEMPLO 4 : Estudo pré-clinico xn vitro para avaliar o perfil de inibição de fosfodiesterases (PDE) pelos compostos BL-230 de fórmula (II) e BL-236 de fórmula (III) .
[0070] Estes estudos foram realizados para avaliar o perfil de inibição de 13 tipos de fosfodiesterases (PDE) humanas, pelos compostos BL-230 e BL-236. Mais especificamente o perfil de inibição da PDE1B, PDE2Ai, PDE3A, PDE3B, PDE4AiA, PDE4Bi, PDE4D2, PDE5, PDE6, PDE7A, PDE8A1, PDE10A2 e PDE11A4. Para estes estudos foram realizados ensaios enzimáticos já conhecidos e padronizados pelo estado da técnica.
4.1: Atividade dos efeitos dos compostos BL-230 e BL-236 sobre a atividade da enzima PDE1B.
[0071] Os efeitos dos compostos BL-230 e BL-236 sobre a atividade das enzimas PDE1B humana foram quantificados através da medição da produção de guanosina 5' -monofosfato (5'GMP) a partir de monofosfato cíclico de guanosina (cGMP) , utilizando enzima recombinante humano expressa em células Sf9 e o método de detecção foi utilizando HTRF® {Homogeneous Time Resolved Fluorescence Technology) .
[0072] 0 composto teste, o composto referência ou a água (controle) foram misturados com 0.07U da enzima PDE1B em um tampão contendo 44,4 mM de cloridrato de Tris-hidroximetil aminometano (Tris-HCl) , 5,28 mM de Cloreto de magnésio (MgCl2) , 0,88 mM de cloreto de cálcio (CaCl2) , 2,64 mM de ditiotreitol (DTT) e 0,198 U de calmodulin e 0, 044% de polissorbato 20 (Tween® 20) (pH 7,8). Em seguida, a reação foi iniciada pela adição de 240 nM do substrato cGMP e a mistura foi incubada durante 30 minutos à temperatura ambiente. Para medições do controle basal, a enzima foi omitida da mistura da reação. O aceptor de fluorescência (Dye2 cGMP marcado) e o doador de fluorescência (anticorpo anti-cGMP marcado com criptato de európio) foram adicionados, na presença de 1 mM de 3-isobutil- 1-metilxantina (IBMX) . Após 60 minutos, a transferência de fluorescência correspondente ao montante de cGMP residual foi medido a Aex=337 nm, Aem=620 nm e Xem=665 nm, utilizando um leitor de microplacas (RubyStar, BMG) . A atividade da enzima foi determinada pela divisão do sinal medido a 665 nm, pelo sinal medido a 620 nm (razão) . Os resultados foram expressos como uma porcentagem de inibição da atividade da enzima controle. 0 composto inibidor padrão de referência utilizado foi o calmidazolium, o qual foi testado em cada ensaio a várias concentrações para obter uma curva de inibição a partir do qual o seu valor de IC50 foi calculado.
[0073] Para este ensaio os pesquisadores utilizaram como base os ensinamentos descritos por Bender (BENDER, A.T. and BEAVO, J.A. (2006) , Cyclic nucleotide phosphodiesterases : Molecular regulation to clinicai use, Pharmacol. Rev. , 58: 488).
[0074] De. acordo com os resultados obtidos, foi possível verificar (Figuras 14 e 15) que os compostos BL-230 e BL-236, respectivamente, não inibiram a atividade das enzimas PDE1B . 4.2: Atividade dos efeitos dos compostos BL-230 e BL-236 sobre a atividade das enzimas PDE2Ai, PDE3A, PDE4Ai¾, PDE4Bi, PDE7A, PDE8A1, PDEIOA2 e PDEIIA4.
[0075] Os efeitos dos compostos BL-230 e BL-236 sobre a atividade das enzimas PDE2Ai, PDE3A, PDE4AiA, PDE4Bi, PDE7A, PDE8A1, PDEIOA2 e PDEIIA4 humana foram quantificados através da medição da produção de adenosina 5' -monofosfato (5'AMP) a partir de monofosfato cíclico de adenosina (cAMP) , utilizando enzima recombinante humano expressa em células Sf9 e o método de detecção foi utilizando HTRF®.
[0076] O composto teste, o composto referência ou a água (controle) foram misturados com a enzima (as enzimas e suas quantidade utilizadas estão descritas na Tabela 1) em um tampão contendo 44,4 mM de Tris-HCl, 5,28 mM de MgCl2, 2,64 mM de DTT e 0,044% de Tween® 20 (pH 7,8) . Em seguida, a reação foi iniciada pela adição de 40 nM do substrato cA P e a mistura foi incubada durante 30 minutos à temperatura ambiente. Para medições de controle basal, a enzima foi omitida da mistura de reação. O aceptor de fluorescência (Dye2 cAMP marcado) e doador de fluorescência (anticorpo anti-cAMP marcado com criptato de európio) foram adicionados, na presença de 1 mM de IBMX. Após 60 minutos, a transferência de fluorescência correspondente ao montante de cAMP residual foi medido a Àex=337 nm, Aem=620 nm e Àem=665 nm, utilizando um leitor de microplacas (RubyStar, BMG) . A atividade da enzima foi determinada pela divisão do sinal medido a 665 nm, pelo sinal medido a 620 nm (razão) . Os resultados foram expressos como uma porcentagem de inibição da atividade da enzima controle. Os compostos inibidores padrões de referência utilizados para cada uma das enzimas utilizadas estão descritos na tabela 1, os quais foram testados em cada ensaio a várias- concentrações para obter uma curva de inibição a partir do qual o seu valor de IC50 foi calculado.
[0077] Para este ensaio os pesquisadores utilizaram como base os ensinamentos descritos por: Bender (BENDER, A.T. and BEAVO, J.A. (2006) , Cyclic nucleotide phosphodíesterases : Molecular regulation to clinicai use, Pharmacol. Rev., 58: 488 [PDE2Aie PDE3A] ) ; Saldou (SALDOU, N . , et al. (1998), Comparison of recombinant human PDE4 isoforms : interaction with substrate and inhibitors, Celi Signal., 10: 427.[PDE4AiA e PDE4Bi] ; Smith (SMITH, S.J., el al. (2004), Discovery of BRL 50481 [N,N- dimethylsulfonamido)~4-methyl-nitrobenzene], a selective inhibitor of phosphodiesterase 7: In vitro studies in human monocytes, lung macrophages, and CD8+ T-lymphocytes, Mol. Pharm., 66: 1679. [PDE7A] ) ; Fisher (FISHER, D. A. , et al. (1998), Isolation and characterizatíon of PDE8A, a novel human cAMP-specific phosphodiesterase, Biochem. , 246: 570. [PDE8A1] ) ; Soderling. (SODERLING, S.H., et al. (1999), Isolation and characterizatíon of a dual-substrate phosphodiesterase gene family: PDE10A, Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 96:7071 [PDE10A2] ) ; e Fa cett (FAWCETT, L., et al. (2000), Molecular cloning and characterizatíon of a distinct human phosphodiesterase gene family: PDEllA, Proc. Natl. Acad. Sei., 97: 3702. [PDE11A4].
Tabela 1 : Lista de Enzimas e seus respectivos compostos referência de inibidor padrão das PDE' s .
Figure imgf000032_0001
PDE10A2 0,25U de PDEIOA2 Papaverina
PDEHA4 1U de PDEIIA4 Papaverina
[0078] De acordo com os resultados obtidos, foi possível verificar (Figuras 14 e 15) que os compostos BL230 e BL-236, respectivamente, não inibiram a atividade das enzimas PDE2AX , PDE3A, PDE4AIA, PDE4Bi, PDE7A e PDE8A1. Enquanto que os compostos BL230 e BL-236 inibiram em 75% e 80%, respectivamente, a atividade da enzima PDEIIA4. E adicionalmente, é possível observar que o composto BL-230 foi capaz de inibir em 35% a atividade da enzima PDE10A2.
4.3: Atividade dos efeitos dos compostos BL-230 e BL-236 sobre a atividade da enzima PDE3B.
[0079] Os efeitos dos compostos BL-230 e BL-236 sobre a atividade da enzima PDE3B humana foi quantificada através da medição da produção de 5'A P a partir de cAMP, utilizando enzima recombinante humano expressa em células Sf9 e o método de detecção foi utilizando HTRF®.
[0080] O composto teste, o composto referência ou a água (controle) foram misturados com 0,7U da enzima PDE3B em um tampão contendo 50 mM de Tris-HCl, 6 mM de MgCl2, 3 mM de DTT e 0,05% de Tween® 20 (pH 7,8). Em seguida, a reação foi iniciada pela adição de 40 nM do substrato cAMP e a mistura foi incubada durante 30 minutos à 22 °C. Para medições de controle basal, a enzima foi omitida da mistura de reação. O aceptor de fluorescência (Dye2 cAMP marcado) e o doador de fluorescência (anticorpo anti-cAMP marcado com criptato de európio) foram adicionados, na presença de 1 mM de IBMX. Após 60 minutos, a transferência de fluorescência correspondente ao montante de cAMP residual foi medido a Àex=337 nm, Xem=620 nm e em=665 nm, utilizando um leitor de microplacas (RubyStar, BMG) . A atividade da enzima foi determinada pela divisão do sinal medido a 665 nm, pelo sinal medido a 620 nm (razão) . Os resultados foram expressos como uma porcentagem de inibição da atividade da enzima controle. 0 composto inibidor padrão de referência utilizado foi a milrinona, o qual foi testado em cada ensaio a várias concentrações para obter uma curva de inibição a partir do qual o seu valor de IC50 foi calculado.
[0081] Para este ensaio os pesquisadores utilizaram como base os ensinamentos descritos por Bender {BENDER, A.T. and BEAVO, J.A. (2006) , Cyclic nucleotíde phosphodiesterases : Molecular regulation to clinicai use, Pharmacol. Rev., 58: 488)
[0082] De acordo com os resultados obtidos, foi possível verificar (Figuras 14 e 15) que os compostos BL230 e BL-236, respectivamente, não inibiram a atividade das enzimas PDE3B.
4.4: Atividade dos efeitos dos compostos BL-230 e BL-236 sobre a atividade da enzima PDE4D2.
[0083] Os efeitos dos compostos BL-230 e BL-236 sobre a atividade da enzima PDE4D2 humana foram quantificados através da medição da produção de 5 ΆΜΡ a partir de cAMP utilizando uma enzima recombinante humano expressa em células Sf9 e o método de detecção utilizando foi o HTRF®.
[0084] O composto teste, o composto de referência ou água (controle) foram misturados com 0.75CJ de PDE4D2 em tampão de Solução salina balanceada de Hanks (HBSS) (Invitrogen) complementado, e l,5mM de MgCl2, 0,1% de albumina do soro bovino (BSA) . Em seguida, a reação foi iniciada pela adição de 40 nM do substrato cAMP e a mistura é incubada durante 15 minutos à 37 °C. Para medições de controle basal, a enzima foi omitida da mistura de reação. O aceptor de fluorescência (Dye2 cAMP marcado) e o doador de fluorescência (anticorpo anti-cA P marcado com críptato de európio) foram adicionados, na presença de 1 mM de IBMX.. Após 60 minutos a temperatura ambiente, a transferência de fluorescência correspondente ao montante de cAMP .residual foi medido a Aex=337 nm, Aem=620 nm e Aem=665 nm, utilizando um leitor de microplacas (Envision, Perkin Élmer) . A atividade da enzima foi determinada pela divisão do sinal medido a 665 nm, pelo sinal medido a 620 nm (razão) . Os resultados foram expressos como uma porcentagem de inibição da atividade da enzima controle. O composto inibidor padrão de referência utilizado foi o rolipram, o qual foi testado em cada ensaio a várias concentrações para obter uma curva de inibição a partir do qual o seu valor de IC5o foi calculado.
[0085] Para este ensaio os pesquisadores utilizaram como base os ensinamentos descritos por Saldou, (SALDOU, N., et al. (1998), Comparison of recombinant human PDE4 ísoforms: interaction with substrate and inhibitors, Celi Signal., 10: 427).
[0086] De acordo com os resultados obtidos, foi possível verificar (Figuras 14 e 15) que o composto BL-230 inibiu 55% a atividade da enzima PDE4D2, enquanto que o composto BL-236 não apresentou efeito inibitório para esta enzima.
4.5: Atividade dos efeitos dos compostos BL-230 e BL-236 sobre a atividade das enzimas PDE5.
[0087] Os efeitos dos compostos BL-230 e BL-236 sobre a atividade da enzima PDE5 humana foram quantificados através da medição da produção de 5 ' GMP a partir de cGMP utilizando uma enzima isolada a partir de plaquetas humanas de Cerep e o método de detecção utilizado foi o ensaio de proximidade de cintilação (SPA) .
[0088] O composto teste, o composto referência ou a água (controle) foram adicionados a um tampão contendo 40 m Tris- HC1 (pH 7,8), 3 mM de MgCl2, 1,4 mM de DTT, 0,21% de BSA, 200 mM. de cloreto de amónio (NH4C1) , 1 μΜ de cGMP e- 0,1 pCi de [3H}cGMP. Em seguida, a reação foi iniciada pela adição da enzima (valor final, dependendo da eficiência do isolamento) e a mistura foi incubada por 60 minutos a 2.2 °C. Para medições de controle basal, a enzima foi omitida da mistura de reação. Em sequencia foram adicionadas as esferas SPA de incubação. Após 20 min a 22 °C, sob agitação, a quantidade de [3H]5'GMP foi quantificada com um contador de cintilações (Topcount, Packard) . Os resultados foram expressos como uma porcentagem de inibição da atividade da enzima controle. 0 composto inibidor padrão de referência utilizado foi o dipiridamol, o qual foi testado em cada ensaio a várias concentrações para obter uma curva de inibição a partir do qual o seu valor de IC5o foi calculado.
[0089] Para este ensaio os pesquisadores utilizaram como base os ensinamentos descritos por eishaar, (WEISHAAR, R.E., et al. (1986), Multiple molecular forms of cyclic nucleotide phosphodiesterase in cardiac and smooth muscle and in platelets, Biochem. Pharmacol., 35:787).
[0090] De acordo com os resultados obtidos os pesquisadores verificaram que os compostos BL-230 e BL-236 são fortes inibidores da PDE5, sendo que o BL-230 apresentou 90% de inibição e o BL-236 apresentou 86% de inibição (Figuras 14 e 15 respectivamente) .
4.6: Atividade dos efeitos dos compostos BL-230 e BL-236 sobre a atividade da enzima PDE6.
[0091] Os efeitos dos compostos BL-230 e BL-236 sobre a atividade da enzima PDE6 humana foram quantificados através da medição da produção de 5'GMP a partir de cGMP, utilizando uma enzima isolada a partir de retina bovina da Cerep e o método de detecção utilizado foi o ensaio de proximidade de cintilação
(SPA) .
[0092] O composto teste, . o composto referência ou a água (controle) foram adicionados a um tampão contendo 40 mM Tris- HC1 (pH 7,8), 3 mM de MgCl2/ 1,4 mM de DTT, 0,21% de BSA, 200 mM de NH4C1, 2 uM de cGMP e 0,05 μθί de [3H]cG P. Em seguida, a reação foi iniciada pela adição da enzima (valor final, dependendo da eficiência do isolamento) e a mistura foi incubada por 60 minutos a 22 °C. Para medições de controle basal, a enzima foi omitida da mistura de reação. Em sequencia foram adicionadas as esferas SPA de incubação. Após 20 minutos a 22 °C, sob agitação, a quantidade de [3H]5'GMP foi quantificada com um contador de cintilações (Topcount, Packard) . Os resultados foram expressos como uma porcentagem de inibição da atividade da enzima controle. O composto inibidor padrão de referência utilizado foi o zaprinaste, o qual foi testado em cada ensaio a várias concentrações para obter uma curva de inibição a partir do qual o seu valor de IC50 foi calculado.
[0093] Para este ensaio os pesquisadores utilizaram como base os ensinamentos descritos por Ballard, (BALLARD, A. S., et al. (1998), Effects of Sildenafil on the relaxation of human corpus cavernosum tissue in vitro and on the activities of cyclic nucleotide phosphodiesterase isozymes, J. Urol., 159: 2164) .
[0094] De acordo com os resultados obtidos os pesquisadores verificaram que os compostos BL-230 e BL-236 são fortes inibidores da PDE6, sendo que o BL-230 apresentou 85% de inibição e o BL-236 apresentou 90% de inibição (Figuras 14 e 15 respectivamente) .
[0095] Independente dos testes utilizados, os resultados obtidos que mostram uma inibição (ou estimulação) superior a 50% são indicativos de efeito forte. Os resultados que mostram uma inibição (ou estimulação) entre 25 % e 50% são indicativos de efeito fraco ou moderado. Os resultados com inibição (ou estimulação) inferiores a 25% .não ..são considerados significativos, e principalmente, são atribuídos à variabilidade do sinal em torno do controle.

Claims

REIVINDICAÇÕES
1. COMPOSTO derivado de 6, 7-dihidro-3fi-oxazolo [3 , 4- a] pirazina-5, 8-diona, caracterizado por apresentar a fórmula (D
Figure imgf000039_0001
onde :
- R1 é um grupo aromático, um grupo aromático contendo um ou mais heteroátomos , grupos fenil, fenol, 3-metoxi-4-fenol, metileno-3, 4-dioxifenil, 2-metoxifenil, 3-metoxifenil , 4- raetoxifenil , 3, 4-dimetoxifenil, 2-halo-fenil , 3-halo-fenil, 4-halo-fenil , furil; piridinico, aromático biciclico, aromático biciclico contendo um ou mais heteroátomos;
R2 é arila, heteroarila, bicicloarila, CH2(CH2)nR3, CH2 (CH2) nNR4R5, CHR6CH2OH, CH2CH(OH)R7, CH2(CH2)OR8, CH2 (CH2) nSR9, sais do carboxilato, sais do sulfonato ou sais quaternários de amónio;
- R3 é OH, NH2, NH3 +, S(0)Me, S03H, C02H, Cl, sais do carboxilato, sais do sulfonato ou sais quaternários de amónio;
- R4 é hidrogénio, metil, etil, propil, i-propil, butil, sec- butil, terc-butil, fenil, benzil ou sais quaternários de amónio;
- R5 é hidrogénio, metil, etil, propil, i-propil, butil, sec- butil, terc-butil, fenil, benzil ou sais quaternários de amónio;
- R6 é (fí)-Me, (Í -Et, (i?)-í-Prop, (R)-i-But, {R) -fenil, {R)~ CH2SH, (J?) -CH2CH2SCH3, (R) -benzil, (R) -sec-But, (S)-Me, (S)- Et, (S)-i-Prop, (S)-i-But, (S)-fenil, (S)-CH2SH, (5)- CH2CH2SCH3, (S) -benzil, (S)-sec-But ou CH2OH;
- R7 é (2?) -Me, (J?)-Et; (R) -Prop, (R) -i-Prop, (i?)-fenil, (J¾) - benzil, (S)-Me, (S)-Et; (S)-Prop, (S)-i-Prop, (S)-fenil ou (S) -benzil;
- R8 é C1-6 alquil, C2-e alquenil, C2-6 alquinil, fenil ou benzil ;
- R9 é Cx-6 alquil, C2_6 alqueníl, C2-6 alquinil, fenil ou benzil;
- n é um número compreendido entre 0 e 4;
a mistura desses derivados, seus sais, solvatos, hidratos, pró-drogas e ésteres farmaceuticamente aceitáveis; e seus enantiômeros e/ou diastereoisômeros nas suas formas individuais separadas e/ou nas formas de misturas racêmícas ou misturas não-racêmicas com excesso enantiomérico em quaisquer proporções.
2. COMPOSTO de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por R1 ser metileno-3-4-dioxifenil ; R2 ser CH2(CH2)nR3 ou CHR6CH2OH; R3 ser OH; R6 ser (S)-Me; e n ser igual a 1.
3. COMPOSTO de acordo com a reivindicação 2, caracterizado por ser o 3- (benzo [d] [ 1 , 3 ] dioxol-5-il ) -7- ( 2-hidroxietil ) -1- ( lií-indol-3-il } -6, 7-dihidro-3fí-oxazolo [3, 4-a] pirazina-5, 8- diona, representado pela fórmula (II):
Figure imgf000040_0001
4. COMPOSTO de acordo com a reivindicação 2, caracterizado por ser o 3- (benzo [d] [1, 3] dioxol-5-il) -7- { (S) 1-hidroxipropan- 2-il) -1- (lF-indol-3-il) -6, 7-dihídro-3H-oxazolo [3, 4- a] pirazina-5, 8-diona, representado pela fórmula (III):
Figure imgf000041_0001
5. COMPOSTO de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 4, caracterizado por apresentar atividade inibidora das enzimas fosfosdiesterases .
6. COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS caracterizada por compreender uma quantidade terapeuticamente efetiva de um ou mais compostos descritos na reivindicação 1; e um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis.
7. COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS de acordo com a reivindicação 6, caracterizado por compreender como ingrediente ativo pelo menos um dos seguintes compostos selecionados do grupo constituído por:
(a) 3-(benzo[d] [1, 3] dioxol-5-il) -7- (2-hidroxietil) -1- (lH-indol-3-il) -6, 7-dihidro-3fí-oxazolo [3, 4-a] pirazina- 5, 8-diona, de fórmula (II),
(b) 3- (benzo [d] [1, 3] dioxol-5-il) -7- ( (S) 1-hidroxipropan- 2-il) -1- (lfí-indol-3-il) -6, 7-dihidro-3fí-oxazolo [3, 4- a] irazina-5, 8-diona, de fórmula (III), ou
a mistura desses compostos em qualquer proporção, incluindo seus sais, solvatos, hidratos, pró-drogas, e ésteres farmaceuticamente aceitáveis; os enantiômeros e/ou diastereoisômeros dos compostos nas suas formas individuais separadas e/ou nas formas de misturas racêmicas ou misturas não-racêmicas com excesso enantiomérico em quaisquer proporções; e um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis .
8. COMPOSIÇÕES FARMACÊU ICAS, de acordo com as reivindicações 6 a 7, caracterizada por ser para administração oral, tópica, injetável, nasal e retal.
9. USO dos compostos definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado por ser para a inibição de enzimas fosfodiesterases .
10. USO dos compostos definidos em qualquer das reivindicações 1 a 4, caracterizado por ser o preparo de composições farmacêuticas para tratamento e/ou profilaxia de disfunção erétil, desordens e/ou condições tratáveis com relaxamento de tecidos e desordens tratáveis com inibidores de fosfodiesterases .
11. USO de acordo com a reivindicação 10, caracterizado por ser para o tratamento ou prevenção de litiase, hiperplasia prostática, hipertensão pulmonar, constrição ureteral, disfunção sexual feminina e/ou disfunção sexual masculina.
12. USO da composição farmacêutica definida em qualquer uma das reivindicações 6 a 8, caracterizado por ser para o tratamento de disfunção erétil, desordens e/ou condições tratáveis com relaxamento de tecidos e desordens tratáveis com inibidores de fosfodiasterases .
13. METÓDO DE TRATAMENTO E/OU PREVENÇÃO de disfunções associadas a atividade das fosfodiesterases, caracterizado pela administração de quantidade efetiva de pelo menos um dos compostos definidos na reivindicação 1.
14. MÉTODO de acordo com as reivindicações 13, caracterizado por ser para o tratamento e/ ou profilaxia de disfunção erétil, litíase, hiperplasia prostática, hipertensão pulmonar, constrição ureteral, disfunção sexual feminina e/ou disfunção sexual masculina.
15. MÉTODO DE TRATAMENTO E/OU PREVENÇÃO de disfunção erétil, desordens e/ou condições tratáveis com relaxamento de tecidos e desordens tratáveis com inibidores de fosfodiasterases, caracterizado por administrar uma quantidade efetiva de pelo menos um dos compostos definidos na reivindicação 1.
16. PROCESSO DE SÍNTESE dos compostos de fórmula (11) e (III}, conforme descritos nas reivindicações 3 e 4, caracterizado por compreender a formação do intermediário metil 2-(benzo[d] [1, 3] dioxol-5-il) -3- (2-cloroacetil) -5- (1H- indol-3-il) -2, 3-dihidrooxazolo-4-carboxilato (b) , preparado através da reação do composto (E) -metil 2- ( (benzo [d] [1,3] dioxol-5-ilmetileno) amino) -3- { lfí-indol-3-il ) - 3-oxopropanoato (a) , na presença de uma solução de piridina seca (Py) em tetrahidrofurano (THF} e solução de cloreto de cloroacetila .
17. PROCESSO DE SÍNTESE, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pela formação do composto (II) ocorrer pela adição de álcool etílico e 2-aminoetanol (c) ao meio de reação do intermediário (b) .
18. PROCESSO DE SÍNTESE, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pela formação do composto (III) ocorrer pela adição de álcool etílico e ( S) -2-aminopropan-l-ol (d) ao meio de reação do intermediário (b) .
PCT/BR2015/000023 2014-02-24 2015-02-24 "NOVOS COMPOSTOS DERIVADOS DE 6,7-DIHIDRO-3H-OXAZOLO [3,4-a] PIRAZINA-5,8-DIONA " WO2015123748A1 (pt)

Priority Applications (11)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL15752140T PL3133072T3 (pl) 2014-02-24 2015-02-24 Nowe związki będące pochodnymi 6,7-dihydro-3H-oksazolo[3,4-a]pirazyno-5,8-dionu
CA2940225A CA2940225C (en) 2014-02-24 2015-02-24 6,7-dihydro-3h-oxazolo[3,4-a]pyrazine-5,8-dione derivative compounds
BR112016019609-0A BR112016019609B1 (pt) 2014-02-24 2015-02-24 Composto derivado de 6,7-dihidro-3h-oxazolo[3,4- a]pirazina-5,8-diona, composições farmacêuticas, uso dos compostos,processo de síntese dos compostos de fórmula (ii) e (iii)
ES15752140T ES2734063T3 (es) 2014-02-24 2015-02-24 Nuevos compuestos derivados de 6,7-dihidro-3H-oxazolo[3,4-a]piracina-5,8-diona
EP15752140.2A EP3133072B1 (en) 2014-02-24 2015-02-24 Novel 6,7-dihydro-3h-oxazolo[3,4-a]pyrazine-5,8-dione derivative compounds
KR1020167026361A KR102408431B1 (ko) 2014-02-24 2015-02-24 새로운 6,7-디하이드로-3H-옥사졸로[3,4-a]피라진-5,8-디온 유도체 화합물
JP2016570147A JP6636463B2 (ja) 2014-02-24 2015-02-24 新規な６，７−ジヒドロ−３Ｈ−オキサゾロ［３，４−ａ］ピラジン−５，８−ジオン誘導体化合物
MX2016010912A MX369840B (es) 2014-02-24 2015-02-24 Nuevos compuestos derivados de 6, 7-dihidro-3h-oxazolo [3, 4-a] pirazina-5, 8-diona.
AU2015221431A AU2015221431B2 (en) 2014-02-24 2015-02-24 Novel 6,7-dihydro-3H-oxazolo[3,4-a]pyrazine-5,8-dione derivative compounds
IL247330A IL247330B (en) 2014-02-24 2016-08-17 New derivatives of 6, 7 dihydro-3h-oxazolo[3, 4, –a] pyrazine-5, 8 dione
ZA2016/06522A ZA201606522B (en) 2014-02-24 2016-09-21 Novel 6,7-dihydro-3h-oxazolo[3,4-a]pyrazine-5,8-dione derivative compounds

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201461943825P 2014-02-24 2014-02-24
US61/943,825 2014-02-24

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2015123748A1 true WO2015123748A1 (pt) 2015-08-27

Family

ID=53877456

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/BR2015/000023 WO2015123748A1 (pt) 2014-02-24 2015-02-24 "NOVOS COMPOSTOS DERIVADOS DE 6,7-DIHIDRO-3H-OXAZOLO [3,4-a] PIRAZINA-5,8-DIONA "

Country Status (19)

Country Link
US (1) US9359378B2 (pt)
EP (1) EP3133072B1 (pt)
JP (1) JP6636463B2 (pt)
KR (1) KR102408431B1 (pt)
AR (1) AR099523A1 (pt)
AU (1) AU2015221431B2 (pt)
BR (1) BR112016019609B1 (pt)
CA (1) CA2940225C (pt)
CL (1) CL2016002125A1 (pt)
ES (1) ES2734063T3 (pt)
HU (1) HUE044993T2 (pt)
IL (1) IL247330B (pt)
MX (1) MX369840B (pt)
PL (1) PL3133072T3 (pt)
PT (1) PT3133072T (pt)
TR (1) TR201910896T4 (pt)
UY (1) UY36010A (pt)
WO (1) WO2015123748A1 (pt)
ZA (1) ZA201606522B (pt)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021007636A1 (pt) * 2019-07-15 2021-01-21 Biolab Sanus Farmaceutica Ltda Estereoisômeros do composto 3-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-7-(1-hidroxipropan-2-il)-1-(1 h-indol-3-il)-6,7-dihidro-3 h-oxazol[3,4-a]pirazina-5,8-diona e seu uso como antitumoral e inibidor da enzima fosfodiesterase

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BRPI0903803A2 (pt) * 2009-09-30 2011-06-07 Biolab Sanus Farmaceutica Ltda composto, isÈmero do composto, processo de sua preparação, composto intermediário, composição farmacêutica; medicamento, uso dos compostos e método de tratamento
US20110195976A1 (en) * 2008-09-30 2011-08-11 Biolab Sanus Farmaceutica Ltda. Compounds derived from 2-(3-methylenedioxy)-benzoyl indol
US8338432B2 (en) * 2010-08-13 2012-12-25 Biolab Sanus Farmaceutica Ltda. Derivatives of 6,7-dihydro-3H-oxazolo[3,4-a]pyrazine-5,9-dione as PDE-5 inhibitors

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002098877A1 (en) * 2001-06-05 2002-12-12 Lilly Icos Llc Pyrazino 1',2':1,6 pyrido 3,4-b indole1,4-dione derivatives
AR045950A1 (es) * 2003-10-09 2005-11-16 Speedel Experimenta Ag Compuestos derivados de piperazina, composiciones farmaceuticas que los contienen y su uso en la fabricacion de medicamentos.

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110195976A1 (en) * 2008-09-30 2011-08-11 Biolab Sanus Farmaceutica Ltda. Compounds derived from 2-(3-methylenedioxy)-benzoyl indol
BRPI0903803A2 (pt) * 2009-09-30 2011-06-07 Biolab Sanus Farmaceutica Ltda composto, isÈmero do composto, processo de sua preparação, composto intermediário, composição farmacêutica; medicamento, uso dos compostos e método de tratamento
US8338432B2 (en) * 2010-08-13 2012-12-25 Biolab Sanus Farmaceutica Ltda. Derivatives of 6,7-dihydro-3H-oxazolo[3,4-a]pyrazine-5,9-dione as PDE-5 inhibitors

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ALAIN DAUGAN ET AL.: "The Discovery of Tadalafil: A Novel and Highly Selective PDE5 Inhibitor. 1: 5,6,11,11a- Tetrahydro-1H-imidazo[1',5':1,6]pyrido[3,4-b]indole-1,3(2H)-dione Analogues", J. MED. CHEM., vol. 46, no. 21, 2003, pages 4525 - 4532, XP002335512, ISSN: 0022-2623 *
ALAIN DAUGAN ET AL.: "The Discovery of Tadalafil: A Novel and Highly Selective PDE5 Inhibitor. 2: 2,3,6,7,12,12a-hexahydropyrazino[1',2':1,6]pyrido[3,4- b]indole-1,4-dione Analogues", J. MED. CHEM., vol. 46, no. 21, 2003, pages 4533 - 4542, XP008052656, ISSN: 0022-2623 *
See also references of EP3133072A4 *
TERENCE BEGHYN ET AL.: "PDE5 inhibitors: An original access to novel potent arylated analogues of tadalafil", BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS, vol. 17, no. 3, 2007, pages 789 - 792, XP005835940 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021007636A1 (pt) * 2019-07-15 2021-01-21 Biolab Sanus Farmaceutica Ltda Estereoisômeros do composto 3-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-7-(1-hidroxipropan-2-il)-1-(1 h-indol-3-il)-6,7-dihidro-3 h-oxazol[3,4-a]pirazina-5,8-diona e seu uso como antitumoral e inibidor da enzima fosfodiesterase
US20220296590A1 (en) * 2019-07-15 2022-09-22 Biolab Sanus Farmaceutica Ltda Stereoisomers of the compound 3-(benzo[d][1,3]dioxol-5-yl)-7-(1-hydroxypropan-2-yl)-1-(1h-indol-3-yl)-6,7-dihydro-3h-oxazol[3,4-a]pyrazine-5,8-dione and use thereof as an antitumor agent and phosphodiesterase enzyme inhibitor

Also Published As

Publication number Publication date
KR20160116028A (ko) 2016-10-06
CA2940225C (en) 2021-12-28
AU2015221431A1 (en) 2016-09-29
TR201910896T4 (tr) 2019-08-21
ES2734063T3 (es) 2019-12-04
JP6636463B2 (ja) 2020-01-29
US20150239903A1 (en) 2015-08-27
IL247330B (en) 2020-10-29
JP2017506263A (ja) 2017-03-02
MX369840B (es) 2019-11-22
EP3133072A4 (en) 2017-08-09
KR102408431B1 (ko) 2022-06-13
AR099523A1 (es) 2016-07-27
PL3133072T3 (pl) 2019-10-31
EP3133072B1 (en) 2019-05-01
ZA201606522B (en) 2018-04-25
CL2016002125A1 (es) 2016-12-30
UY36010A (es) 2015-09-30
EP3133072A1 (en) 2017-02-22
IL247330A0 (en) 2016-09-29
CA2940225A1 (en) 2015-08-27
AU2015221431A8 (en) 2016-11-24
MX2016010912A (es) 2016-11-30
BR112016019609A2 (pt) 2017-08-22
BR112016019609B1 (pt) 2022-06-14
AU2015221431B2 (en) 2018-04-19
PT3133072T (pt) 2019-07-26
US9359378B2 (en) 2016-06-07
HUE044993T2 (hu) 2019-11-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2645371T3 (es) Compuestos orgánicos
ES2626006T3 (es) Derivados de 6-cicloalquil-1,5-dihidro-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-ona y su uso como inhibidores de PDE9A
ES2448567T3 (es) Derivados de la tienotriazoldiazepina activos en apo A
TWI585089B (zh) Novel condensed pyrimidine compounds or salts thereof
KR101811938B1 (ko) FAK/Pyk2 억제제인 2,4-디아미노-6,7-디히드로-5H-피롤로[2,3]피리미딘 유도체
US20040048849A1 (en) Cyclin-dependent kinase (cdk) and glycolene synthase kinase-3 (gsk-3) inhibitors
CN106456580B (zh) 作为蛋白质脱乙酰酶抑制剂和蛋白质脱乙酰酶-蛋白质激酶双重抑制剂的杂环异羟肟酸及其使用方法
KR20140095477A (ko) 마크로시클릭 lrrk2 키나제 억제제
ES2267831T3 (es) Derivados de piridoindol condensado.
TW201043632A (en) Quinoxaline compounds
JP2014505091A (ja) ６−シクロブチル−１，５−ジヒドロ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン誘導体及びｐｄｅ９ａ阻害剤としてのその使用
ES2691650T3 (es) 3-(quinolin-6-il-tio)-[1,2,4]-triazolo-[4,3-a]-piridinas 6-sustituidas como inhibidores de tirosina quinasa c-Met
ES2770047T3 (es) Compuestos de azetidiniloxifenilpirrolidina
EP2253632A1 (en) Pyrazolopyramidinone derivatives, their preparation and their use
JP2006525966A (ja) ６−シクリルメチル−および６−アルキルメチル置換ピラゾロピリミジン類
WO1999043678A1 (fr) Medicaments et prophylaxie contre la maladie de parkinson
ES2800433T3 (es) Derivado de la triazolopirazinona útil como inhibidor de la pde1 humana
ES2269401T3 (es) Derivados de piracino(1&#39;2&#39;:1,6)pirido(3,4-b)indol.
JP5277303B2 (ja) ６−シクリルメチル−および６−アルキルメチル置換ピラゾロピリミジン類
ES2271080T3 (es) Derivados de indol como inhibidores de pde5.
WO2015123748A1 (pt) &#34;NOVOS COMPOSTOS DERIVADOS DE 6,7-DIHIDRO-3H-OXAZOLO [3,4-a] PIRAZINA-5,8-DIONA &#34;
WO2014152135A1 (en) Polymorphs and salts of a compound
BR112013003225B1 (pt) Composto de fórmula (i), ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, composição farmacêutica, uso da composição farmacêutica, uso do composto e método para preparar o composto
ES2286291T3 (es) Compustos tetraciclicos como inhibidores de pde5.
WO2011058112A1 (en) Fused bicyclic pyrazole derivatives as kinase inhibitors

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 15752140

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 247330

Country of ref document: IL

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2940225

Country of ref document: CA

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: MX/A/2016/010912

Country of ref document: MX

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2016570147

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

REG Reference to national code

Ref country code: BR

Ref legal event code: B01A

Ref document number: 112016019609

Country of ref document: BR

REEP Request for entry into the european phase

Ref document number: 2015752140

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2015752140

Country of ref document: EP

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 20167026361

Country of ref document: KR

Kind code of ref document: A

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2015221431

Country of ref document: AU

Date of ref document: 20150224

Kind code of ref document: A

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 112016019609

Country of ref document: BR

Kind code of ref document: A2

Effective date: 20160824