WO2015093495A1

WO2015093495A1 - ＴＧＦ－β１遺伝子発現制御のための一本鎖核酸分子

Info

Publication number: WO2015093495A1
Application number: PCT/JP2014/083312
Authority: WO
Inventors: 雅彦黒田; エステバンガバザ; 小林　哲; 忠明大木; 智洋濱崎; 志織加藤; 松本　貴博
Original assignee: 株式会社ボナック; 国立大学法人三重大学; 学校法人東京医科大学
Priority date: 2013-12-16
Filing date: 2014-12-16
Publication date: 2015-06-25

Abstract

　本発明は、ＴＧＦ－β１遺伝子の発現を抑制する一本鎖核酸分子であって、領域（Ｘ）、リンカー領域（Ｌｘ）および領域（Ｘｃ）のみからなり、前記リンカー領域（Ｌｘ）が、ピロリジン骨格およびピペリジン骨格の少なくとも一方を含む非ヌクレオチド構造を有し、かつ前記領域（Ｘ）および前記領域（Ｘｃ）の少なくとも一方が、ＴＧＦ－β１遺伝子の発現を抑制する発現抑制配列を含むことを特徴とする核酸分子、並びに該一本鎖核酸分子を含む、肺線維症または急性肺傷害の治療用薬学的組成物を提供する。

Description

ＴＧＦ－β１遺伝子発現制御のための一本鎖核酸分子

　本発明は、ＴＧＦ－β１遺伝子の発現を抑制する核酸分子、それを含む組成物およびその用途に関する。

　肺線維症は、過剰なコラーゲンと他の細胞マトリックスの蓄積により肺組織が線維化する疾患である。肺線維症の中でも特発性肺線維症は、中間生存期間が平均3年、5年生存率が２０～４０％の慢性難治性疾患である。

　急性肺傷害は、急性呼吸障害の一種であり、肺浸潤陰影を示す急性呼吸不全である。急性肺傷害の病態は、肺毛細血管内皮細胞および肺胞壁細胞障害が原因となる透過性亢進による肺水腫である。この間質性肺水腫、肺胞性肺水腫および肺虚脱によって、死腔換気率が増大し、低酸素血症が発生する。

　肺線維症や急性肺傷害については、効果的な治療法がないのが現状であり、有効な治療薬の開発が望まれている。肺線維症や急性肺傷害の発症には、ＴＧＦ－β１の発現が関与していることが報告されていることから、この遺伝子発現を抑制する試みがなされている（特許文献１－５、非特許文献１－７）。

　遺伝子の発現を抑制する技術として、例えば、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）が知られている。ＲＮＡ干渉による遺伝子の発現抑制は、例えば、短い二本鎖のＲＮＡ分子を、細胞等に投与することによって、実施されるのが一般的である。前記二本鎖のＲＮＡ分子は、通常、ｓｉＲＮＡ（ｓｍａｌｌ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ　ＲＮＡ）と呼ばれる。前記ＴＧＦ－β１遺伝子の発現について、ｓｉＲＮＡの研究が行われているが、より効果的な核酸分子の提供が望まれている。

国際公開第２００７／１０９０９７号国際公開第２００３／０３５０８３号特開２００７－１１９３９６号特表２００９－５１６５１７号国際公開第２０１２／０５０１８１号

Ｗａｎｇら、Ｊ　Ｐｌａｓｔ　Ｒｅｃｏｎｓｔｒ　Ａｅｓｔｈｅｔ　Ｓｕｒｇ、１１９３－１１９９、６０、２００７Ｈｗａｎｇら、Ｅｘｐ　Ｍｏｌ　ｐａｔｈｏｌ、４８－５４、８１、２００６Ｔａｋａｂａｔａｋｅら、Ｇｅｎｅ　Ｔｈｅｒ、９６５－９７３、１２、２００５Ｘｕら、Ｈｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙ　Ｐａｎｃｒｅａｔ　Ｄｉｓ　Ｉｎｔ、３００－３０８、２００９Ｌｉｕら、Ｂｉｏｔｈｅｃｈｎｏｌ　Ｌｅｔｔ、１６０９－１６１５、２７、２００５ Gabazzaら、Am　J　Respir　Cell　Mol　Biol.　３９７－４０６、４６、２０１２Ｈａｍａｓａｋｉら、ＰＬｏＳ　ＯＮＥ、　７（８）、ｅ４２６５５、ｄｏｉ：１０．１３７１、２０１２

　そこで、本発明は、肺線維症や急性肺傷害等のＴＧＦ－β１の発現が関与している疾患を治療する為に、有効な新たな核酸分子、およびこれを用いた医薬の提供を目的とする。

　前記目的を達成するために、本発明のＴＧＦ－β１遺伝子の発現抑制用核酸分子は、ＴＧＦ－β１遺伝子の発現抑制配列として、下記のヌクレオチド配列を含むことを特徴とする。
　（配列番号１）　3’-CGUCUCAUGUGUGUCGUAU-5’

　本発明の組成物は、ＴＧＦ－β１遺伝子の発現を抑制するための組成物であって、前記本発明の核酸分子を含むことを特徴とする。

　本発明の組成物は、薬学的組成物であって、前記本発明の核酸分子を含むことを特徴とする。

　本発明の発現抑制方法は、ＴＧＦ－β１遺伝子の発現を抑制する方法であって、前記本発明の核酸分子を使用することを特徴とする。

　本発明の肺線維症の治療方法は、前記本発明の核酸分子を、患者に投与する工程を含むことを特徴とする。

　本発明の急性肺傷害の治療方法は、前記本発明の核酸分子を、患者に投与する工程を含むことを特徴とする。

　本発明の核酸分子によれば、ＴＧＦ－β１遺伝子の発現抑制が可能である。このため、本発明は、ＴＧＦ－β１遺伝子の発現が原因となる疾患、例えば、肺線維症および急性肺傷害等の治療に有効である。

図１は、本発明の核酸分子の一例を示す模式図である。図２は、本発明の核酸分子のその他の例を示す模式図である。図３は、本発明の核酸分子のその他の例を示す模式図である。図４は、本発明の核酸分子のその他の例を示す模式図である。図５は、本発明の実施例１におけるＴＧＦ－β１量の相対値を示すグラフである。図６は、本発明の実施例２における血清中の安定性についての電気泳動の写真である。図７は、本発明の実施例３におけるダイサータンパク質に対する反応性についての電気泳動の写真である。図８は、肺線維症自然発症モデルマウスにおける本発明の核酸分子投与による肺組織中ＴＧＦ－β発現抑制効果を示すグラフである。図９は、肺線維症自然発症モデルマウスにおける本発明の核酸分子投与による肺組織中ハイドロキシプロリン量の抑制効果を示すグラフである。図１０は、ブレオマイシン誘発肺線維症モデルマウスにおける本発明の核酸分子投与による気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）中の総細胞数の抑制効果を示すグラフである。図１１は、ブレオマイシン誘発肺線維症モデルマウスにおける本発明の核酸分子投与による生存率改善効果を示すグラフである。図１２は、ブレオマイシン誘発肺線維症モデルマウスにおける本発明の核酸分子投与による肺組織中ハイドロキシプロリン量の抑制効果を示すグラフである。図１３は、ＬＰＳ誘発肺線維症／急性肺傷害併発モデルマウスにおける本発明の核酸分子投与による気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）中の総細胞数の抑制効果を示すグラフである。図１４は、ＬＰＳ誘発肺線維症／急性肺傷害併発モデルマウスの気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）中のＩＦＮ量に及ぼす本発明の核酸分子投与の影響を示すグラフである。

　本明細書で使用する用語は、特に言及しない限り、当該技術分野で通常用いられる意味で用いることができる。

１．ＴＧＦ－β１遺伝子の発現抑制用核酸分子
（１）発現抑制配列および相補配列
　本発明の核酸分子は、前述のように、ＴＧＦ－β１遺伝子の発現抑制用であって、ＴＧＦ－β１遺伝子の発現抑制配列として、下記のヌクレオチド配列を含むことを特徴とする。
（配列番号１）　3’-CGUCUCAUGUGUGUCGUAU-5’

　前記発現抑制配列は、例えば、前記ヌクレオチド配列からなる配列でもよいし、前記ヌクレオチド配列を含む配列でもよい。

　前記発現抑制配列の長さは、特に制限されず、例えば、１８～３２塩基長であり、好ましくは１９～３０塩基長であり、より好ましくは１９、２０、２１塩基長である。本発明において、例えば、塩基数の数値範囲は、その範囲に属する正の整数を全て開示するものであり、例えば、「１～４塩基」との記載は、「１、２、３、４塩基」の全ての開示を意味する（以下、同様）。

　本発明の一本鎖核酸分子は、例えば、さらに、前記発現抑制配列とアニーリング可能な相補配列を有することが好ましい。前記相補配列は、例えば、前記発現抑制配列と同じ鎖にあり、１つの一本鎖から構成される一本鎖核酸分子を形成する。

　前記相補配列は、例えば、前記発現抑制配列とアニーリング可能であればよい。前記相補配列は、例えば、前記発現抑制配列と、１００％の相補性を示す配列でもよいし、アニーリング可能な範囲で１００％未満の相補性を示す配列でもよい。前記相補性は、特に制限されず、例えば、９０％～１００％、９３％～１００％、９５％～１００％、９８％～１００％、９９％～１００％等が例示できる。

　前記相補配列は、例えば、下記のヌクレオチド配列を含むものが例示できる。
　（配列番号２）5’-GCAGAGUACACACAGCAUA-3’

　以下、前記配列番号２のヌクレオチド配列をｓヌクレオチド配列という。

　前記相補配列は、例えば、前記ｓヌクレオチド配列からなる配列でもよいし、前記ｓヌクレオチド配列を含む配列でもよい。

　前記相補配列の長さは、特に制限されず、例えば、１８～３２塩基長であり、好ましくは１９～３０塩基長であり、より好ましくは１９、２０、２１塩基長である。

　前記発現抑制配列と前記相補配列はそれぞれ、例えば、リボヌクレオチド残基のみからなるＲＮＡ分子でもよいし、リボヌクレオチド残基の他に、デオキシリボヌクレオチド残基を含むＲＮＡ分子でもよい。

（２）一本鎖核酸分子
　前記核酸分子は、例えば、前記発現抑制配列と前記相補配列とが、直接的に連結している形態および間接的に連結している形態があげられる。前記直接的な連結は、例えば、ホスホジエステル結合による連結があげられる。前記間接的な連結は、例えば、リンカー領域を介した連結があげられる。前記発現抑制配列と前記相補配列との連結順序は、特に制限されず、例えば、前記発現抑制配列の３’末端と前記相補配列の５’末端とが連結してもよく、前記発現抑制配列の５’末端と前記相補配列の３’末端とが連結してもよく、好ましくは前者である。前記リンカー領域は、例えば、ヌクレオチド残基から構成されてもよいし、非ヌクレオチド残基から構成されてもよく、前記ヌクレオチド残基および非ヌクレオチド残基から構成されてもよい。前記ヌクレオチド残基は、例えば、リボヌクレオチド残基およびデオキシリボヌクレオチド残基があげられる。

　以下に、前記一本鎖核酸分子の具体例を例示するが、本発明は、これには制限されない。

（２－１）
　前記一本鎖核酸分子の第１形態として、５’側領域および３’側領域が、互いにアニーリングして二重鎖構造（ステム構造）を形成する分子があげられる。これは、ｓｈＲＮＡ（ｓｍａｌｌ　ｈａｉｒｐｉｎ　ＲＮＡまたはｓｈｏｒｔ　ｈａｉｒｐｉｎ　ＲＮＡ）の形態とも言える。ｓｈＲＮＡは、ヘアピン構造をとっており、一般的に、一つのステム領域と一つのループ領域とを有する。

　本形態の核酸分子は、例えば、領域（Ｘ）、リンカー領域（Ｌｘ）および領域（Ｘｃ）を含み、前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｘｃ）との間に、前記リンカー領域（Ｌｘ）が連結された構造をとる。そして、前記領域（Ｘｃ）が、前記領域（Ｘ）と相補的である構造が好ましく、具体的には、前記領域（Ｘ）および前記領域（Ｘｃ）のうち、一方が、前記発現抑制配列を含み、他方が、前記相補配列を含むことが好ましい。前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｘｃ）は、それぞれ、前記発現抑制配列および前記相補配列のいずれかを有するため、例えば、分子内アニーリングにより、ステム構造を形成でき、前記リンカー領域（Ｌｘ）がループ構造となる。

　前記核酸分子は、例えば、５’側から３’側にかけて、前記領域（Ｘｃ）、前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記領域（Ｘ）を、前記順序で有してもよいし、３’側から５’側にかけて、前記領域（Ｘｃ）、前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記領域（Ｘ）を、前記順序で有してもよい。前記発現抑制配列は、例えば、前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｘｃ）のいずれに配置してもよく、前記相補配列の上流側、すなわち、前記相補配列よりも５’側に配置することが好ましい。

　本形態の核酸分子の一例を、図１の模式図に示す。図１（Ａ）は、各領域の順序の概略を示す模式図であり、図１（Ｂ）は、前記核酸分子が、前記分子内において二重鎖を形成している状態を示す模式図である。図１（Ｂ）に示すように、前記核酸分子は、前記領域（Ｘｃ）と前記領域（Ｘ）との間で、二重鎖が形成され、前記Ｌｘ領域が、その長さに応じてループ構造をとる。図１は、あくまでも、前記領域の連結順序および二重鎖を形成する各領域の位置関係を示すものであり、例えば、各領域の長さ、前記リンカー領域（Ｌｘ）の形状等は、これに制限されない。

　前記核酸分子において、前記領域（Ｘｃ）および前記領域（Ｘ）の塩基数は、特に制限されない。以下に各領域の長さを例示するが、本発明は、これには制限されない。

　前記核酸分子において、前記領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）と前記領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）との関係は、例えば、下記（３）または（５）の条件を満たし、前者の場合、具体的には、例えば、下記（１１）の条件を満たす。
　　　Ｘ＞Ｘｃ　・・・（３）
　　　Ｘ－Ｘｃ＝１～１０、好ましくは１、２または３、
　　　　　　　　より好ましくは１または２　　　・・・（１１）
　　　Ｘ＝Ｘｃ　・・・（５）

　前記領域（Ｘ）または前記領域（Ｘｃ）が前記発現抑制配列を含む場合、前記領域は、例えば、前記発現抑制配列のみから構成される領域でもよいし、前記発現抑制配列を含む領域でもよい。前記発現抑制配列の塩基数は、例えば、前述の通りである。前記発現抑制配列を含む領域は、例えば、前記発現抑制配列の５’側および／または３’側に、さらに付加配列を有してもよい。前記付加配列の塩基数は、例えば、１～３１塩基であり、好ましくは、１～２１塩基であり、より好ましくは、１～１１塩基である。

　前記領域（Ｘｃ）の塩基数は、特に制限されない。前記領域（Ｘ）が、前記発現抑制配列を含む場合、その下限は、例えば、１９塩基である。その上限は、例えば、５０塩基であり、好ましくは３０塩基であり、より好ましくは２５塩基である。前記領域（Ｘ）の塩基数の具体例は、例えば、１９塩基～５０塩基であり、好ましくは、１９塩基～３０塩基、より好ましくは１９塩基～２５塩基である。

　前記領域（Ｘ）の塩基数は、特に制限されない。その下限は、例えば、１９塩基であり、好ましくは２０塩基であり、より好ましくは２１塩基である。その上限は、例えば、５０塩基であり、より好ましくは４０塩基であり、さらに好ましくは３０塩基である。

　前記リンカー領域（Ｌｘ）は、それ自体の領域内部において、自己アニーリングを生じない構造であることが好ましい。

　前記リンカー領域（Ｌｘ）が、前述のようにヌクレオチド残基を含む場合、その長さは、特に制限されない。前記リンカー領域（Ｌｘ）は、例えば、前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｘｃ）とが二重鎖を形成可能な長さであることが好ましい。前記リンカー領域（Ｌｘ）の塩基数は、その下限が、例えば、１塩基であり、好ましくは２塩基であり、より好ましくは３塩基であり、その上限が、例えば、１００塩基であり、好ましくは８０塩基であり、より好ましくは５０塩基である。

　前記核酸分子の全長は、特に制限されない。前記核酸分子において、前記塩基数の合計（全長の塩基数）は、下限が、例えば、３８塩基であり、好ましくは４２塩基であり、より好ましくは５０塩基であり、さらに好ましくは５１塩基であり、特に好ましくは５２塩基であり、その上限は、例えば、３００塩基であり、好ましくは２００塩基であり、より好ましくは１５０塩基であり、さらに好ましくは１００塩基であり、特に好ましくは８０塩基である。前記核酸分子において、前記リンカー領域（Ｌｘ）を除く塩基数の合計は、下限が、例えば、３８塩基であり、好ましくは４２塩基であり、より好ましくは５０塩基であり、さらに好ましくは５１塩基であり、特に好ましくは５２塩基であり、上限が、例えば、３００塩基であり、好ましくは２００塩基であり、より好ましくは１５０塩基であり、さらに好ましくは１００塩基であり、特に好ましくは８０塩基である。

（２－２）
　前記一本鎖核酸分子の第２形態として、５’側領域および３’側領域が、それぞれ別個に分子内アニーリングして、２つの二重鎖構造（ステム構造）を形成する分子があげられる。

　本形態の核酸分子は、例えば、５’側から３’側にかけて、５’側領域（Ｘｃ）、内部領域（Ｚ）および３’側領域（Ｙｃ）を、前記順序で含み、前記内部領域（Ｚ）が、内部５’側領域（Ｘ）および内部３’側領域（Ｙ）が連結して構成され、前記５’側領域（Ｘｃ）が、前記内部５’側領域（Ｘ）と相補的であり、前記３’側領域（Ｙｃ）が、前記内部３’側領域（Ｙ）と相補的である構造が好ましい。そして、前記内部領域（Ｚ）、前記５’側領域（Ｘｃ）および前記３’側領域（Ｙｃ）の少なくとも一つが、前記発現抑制配列を含むことが好ましい。具体的には、前記内部領域（Ｚ）の前記内部５’側領域（Ｘ）が前記発現抑制配列を有する場合、前記５’側領域（Ｘｃ）が前記相補配列を有することが好ましく、前記内部領域（Ｚ）の前記内部３’側領域（Ｙ）が前記発現抑制配列を有する場合、前記３’側領域（Ｙｃ）が前記相補配列を有することが好ましい。また、前記５’側領域（Ｘｃ）が前記発現抑制配列を有する場合、前記内部領域（Ｚ）の前記内部５’側領域（Ｘ）が前記相補配列を有することが好ましく、前記３’側領域（Ｙｃ）が前記発現抑制配列を有する場合、前記内部領域（Ｚ）の前記内部３’側領域（Ｙ）が前記相補配列を有することが好ましい。

　前記核酸分子において、前記５’側領域（Ｘｃ）は、前記内部５’側領域（Ｘ）と相補的であり、前記３’側領域（Ｙｃ）は、前記内部３’側領域（Ｙ）と相補的である。このため、５’側において、前記領域（Ｘｃ）が前記領域（Ｘ）に向かって折り返し、前記領域（Ｘｃ）と前記領域（Ｘ）とが、自己アニーリングによって、二重鎖を形成可能であり、また、３’側において、前記領域（Ｙｃ）が前記領域（Ｙ）に向かって折り返し、前記領域（Ｙｃ）と前記領域（Ｙ）とが、自己アニーリングによって、二重鎖を形成可能である。

　前記内部領域（Ｚ）は、前述のように、前記内部５’領域（Ｘ）と前記内部３’領域（Ｙ）が連結されている。前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｙ）は、例えば、直接的に連結され、その間に介在配列を有していない。前記内部領域（Ｚ）は、前記５’側領域（Ｘｃ）および前記３’側領域（Ｙｃ）との配列関係を示すために、「前記内部５’側領域（Ｘ）と前記内部３’側領域（Ｙ）が連結して構成される」と表わすものであって、前記内部領域（Ｚ）において、前記５’側領域（Ｘｃ）と前記３’側領域（Ｙｃ）とが、例えば、前記核酸分子の使用において、別個の独立した領域であることを限定するものではない。すなわち、例えば、前記内部領域（Ｚ）が、前記発現抑制配列を有する場合、前記内部領域（Ｚ）において、前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｙ）とにわたって、前記発現抑制配列が配置されてもよい。

　前記核酸分子において、前記５’側領域（Ｘｃ）と前記内部５’側領域（Ｘ）とは、例えば、直接連結してもよいし、間接的に連結してもよい。前者の場合、直接的な連結は、例えば、ホスホジエステル結合による連結があげられる。後者の場合、例えば、前記領域（Ｘｃ）と前記領域（Ｘ）との間に、リンカー領域（Ｌｘ）を有し、前記リンカー領域（Ｌｘ）を介して、前記領域（Ｘｃ）と前記領域（Ｘ）とが連結している形態があげられる。

　前記核酸分子において、前記３’側領域（Ｙｃ）と前記内部３’側領域（Ｙ）とは、例えば、直接連結してもよいし、間接的に連結してもよい。前者の場合、直接的な連結は、例えば、ホスホジエステル結合による連結があげられる。後者の場合、例えば、前記領域（Ｙｃ）と前記領域（Ｙ）との間に、リンカー領域（Ｌｙ）を有し、前記リンカー領域（Ｌｙ）を介して、前記領域（Ｙｃ）と前記領域（Ｙ）とが連結している形態があげられる。

　前記核酸分子は、例えば、前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）の両方を有してもよいし、いずれか一方を有してもよい。後者の場合、例えば、前記５’側領域（Ｘｃ）と前記内部５’側領域（Ｘ）との間に前記リンカー領域（Ｌｘ）を有し、前記３’側領域（Ｙｃ）と前記内部３’側領域（Ｙ）との間に前記リンカー領域（Ｌｙ）を有さない、つまり、前記領域（Ｙｃ）と前記領域（Ｙ）とが直接連結された形態があげられる。また、後者の場合、例えば、前記３’側領域（Ｙｃ）と前記内部３’側領域（Ｙ）との間に前記リンカー領域（Ｌｙ）を有し、前記５’側領域（Ｘｃ）と前記内部５’側領域（Ｘ）との間に前記リンカー領域（Ｌｘ）を有さない、つまり、前記領域（Ｘｃ）と前記領域（Ｘ）とが直接連結された形態があげられる。

　前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）は、それぞれ、それ自体の領域内部において、自己アニーリングを生じない構造であることが好ましい。

　本形態の核酸分子について、前記リンカー領域を有さない一例を、図２の模式図に示す。図２（Ａ）は、前記核酸分子について、５’側から３’側に向かって、各領域の順序の概略を示す模式図であり、図２（Ｂ）は、前記核酸分子が、前記分子内において二重鎖を形成している状態を示す模式図である。図２（Ｂ）に示すように、前記核酸分子は、前記５’側領域（Ｘｃ）が折り返し、前記５’側領域（Ｘｃ）と前記内部５’側領域（Ｘ）との間で二重鎖が形成され、前記３’側領域（Ｙｃ）が折り返し、前記３’側領域（Ｙｃ）と前記内部３’側領域（Ｙ）との間で二重鎖が形成される。図２は、あくまでも、各領域の連結順番および二重鎖を形成する各領域の位置関係を示すものであり、例えば、各領域の長さ等は、これに制限されない。

　前記核酸分子について、前記リンカー領域を有する一例を、図３の模式図に示す。図３（Ａ）は、一例として、前記核酸分子について、５’側から３’側に向かって、各領域の順序の概略を示す模式図であり、図３（Ｂ）は、前記核酸分子が、前記分子内において二重鎖を形成している状態を示す模式図である。図３（Ｂ）に示すように、前記核酸分子は、前記５’側領域（Ｘｃ）と前記内部５’側領域（Ｘ）との間、前記内部３’側領域（Ｙ）と前記３’側領域（Ｙｃ）との間で、二重鎖が形成され、前記Ｌｘ領域および前記Ｌｙ領域が、ループ構造をとる。図３は、あくまでも、各領域の連結順番および二重鎖を形成する各領域の位置関係を示すものであり、例えば、各領域の長さ等は、これに制限されない。

　前記核酸分子において、前記５’側領域（Ｘｃ）、前記内部５’側領域（Ｘ）、前記内部３’側領域（Ｙ）および前記３’側領域（Ｙｃ）の塩基数は、特に制限されず、例えば、以下の通りである。

　前記５’側領域（Ｘｃ）は、前述のように、例えば、前記内部５’側領域（Ｘ）の全領域に相補的でもよい。この場合、前記領域（Ｘｃ）は、例えば、前記領域（Ｘ）と同じ塩基長であり、前記領域（Ｘ）の５’末端から３’末端の全領域に相補的な塩基配列からなることが好ましい。前記領域（Ｘｃ）は、より好ましくは、前記領域（Ｘ）と同じ塩基長であり、且つ、前記領域（Ｘｃ）の全ての塩基が、前記領域（Ｘ）の全ての塩基と相補的である、つまり、例えば、完全に相補的であることが好ましい。なお、これには制限されず、例えば、前述のように、１ないし数（2、3、4もしくは5）塩基が非相補的でもよい。

　また、前記５’側領域（Ｘｃ）は、前述のように、例えば、前記内部５’側領域（Ｘ）の部分領域に相補的でもよい。この場合、前記領域（Ｘｃ）は、例えば、前記領域（Ｘ）の部分領域と同じ塩基長であり、すなわち、前記領域（Ｘ）よりも、１塩基以上短い塩基長の塩基配列からなることが好ましい。前記領域（Ｘｃ）は、より好ましくは、前記領域（Ｘ）の前記部分領域と同じ塩基長であり、且つ、前記領域（Ｘｃ）の全ての塩基が、前記領域（Ｘ）の前記部分領域の全ての塩基と相補的である、つまり、例えば、完全に相補的であることが好ましい。前記領域（Ｘ）の前記部分領域は、例えば、前記領域（Ｘ）における、５’末端の塩基（１番目の塩基）から連続する塩基配列からなる領域（セグメント）であることが好ましい。

　前記３’側領域（Ｙｃ）は、前述のように、例えば、前記内部３’側領域（Ｙ）の全領域に相補的でもよい。この場合、前記領域（Ｙｃ）は、例えば、前記領域（Ｙ）と同じ塩基長であり、前記領域（Ｙ）の５’末端から３’末端の全領域に相補的な塩基配列からなることが好ましい。前記領域（Ｙｃ）は、より好ましくは、前記領域（Ｙ）と同じ塩基長であり、且つ、前記領域（Ｙｃ）の全ての塩基が、前記領域（Ｙ）の全ての塩基と相補的である、つまり、例えば、完全に相補であることが好ましい。なお、これには制限されず、例えば、前述のように、１ないし数（2、3、4もしくは5）塩基が非相補的でもよい。

　また、前記３’側領域（Ｙｃ）は、前述のように、例えば、前記内部３’側領域（Ｙ）の部分領域に相補的でもよい。この場合、前記領域（Ｙｃ）は、例えば、前記領域（Ｙ）の部分領域と同じ塩基長であり、すなわち、前記領域（Ｙ）よりも、１塩基以上短い塩基長の塩基配列からなることが好ましい。前記領域（Ｙｃ）は、より好ましくは、前記領域（Ｙ）の前記部分領域と同じ塩基長であり、且つ、前記領域（Ｙｃ）の全ての塩基が、前記領域（Ｙ）の前記部分領域の全ての塩基と相補的である、つまり、例えば、完全に相補であることが好ましい。前記領域（Ｙ）の前記部分領域は、例えば、前記領域（Ｙ）における、３’末端の塩基（１番目の塩基）から連続する塩基配列からなる領域（セグメント）であることが好ましい。

　前記核酸分子において、前記内部領域（Ｚ）の塩基数（Ｚ）と、前記内部５’側領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）および前記内部３’側領域（Ｙ）の塩基数（Ｙ）との関係、前記内部領域（Ｚ）の塩基数（Ｚ）と、前記５’側領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）および前記３’側領域（Ｙｃ）の塩基数（Ｙｃ）との関係は、例えば、下記式（１）および（２）の条件を満たす。
　　　Ｚ＝Ｘ＋Ｙ　　　・・・（１）
　　　Ｚ≧Ｘｃ＋Ｙｃ　・・・（２）

　本発明の核酸分子において、前記内部５’側領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）と前記内部３’側領域（Ｙ）の塩基数（Ｙ）の長さの関係は、特に制限されず、例えば、下記式のいずれの条件を満たしてもよい。
　　　Ｘ＝Ｙ　・・・（１９）
　　　Ｘ＜Ｙ　・・・（２０）
　　　Ｘ＞Ｙ　・・・（２１）

　前記核酸分子において、前記内部５’側領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）、前記５’側領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）、前記内部３’側領域（Ｙ）の塩基数（Ｙ）および前記３’側領域（Ｙｃ）の塩基数（Ｙｃ）の関係は、例えば、下記（ａ）～（ｄ）のいずれかの条件を満たす。
（ａ）下記式（３）および（４）の条件を満たす。
　　　Ｘ＞Ｘｃ　・・・（３）
　　　Ｙ＝Ｙｃ　・・・（４）
（ｂ）下記式（５）および（６）の条件を満たす。
　　　Ｘ＝Ｘｃ　・・・（５）
　　　Ｙ＞Ｙｃ　・・・（６）
（ｃ）下記式（７）および（８）の条件を満たす。
　　　Ｘ＞Ｘｃ　・・・（７）
　　　Ｙ＞Ｙｃ　・・・（８）
（ｄ）下記式（９）および（１０）の条件を満たす。
　　　Ｘ＝Ｘｃ　・・・（９）
　　　Ｙ＝Ｙｃ　・・・（１０）

　前記（ａ）～（ｄ）において、前記内部５’側領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）と前記５’側領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）の差、前記内部３’側領域（Ｙ）の塩基数（Ｙ）と前記３’側領域（Ｙｃ）の塩基数（Ｙｃ）の差は、例えば、下記条件を満たすことが好ましい。
（ａ）下記式（１１）および（１２）の条件を満たす。
　　　Ｘ－Ｘｃ＝１～１０、好ましくは１、２、３または４、
　　　　　　　　より好ましくは１、２または３　　　・・・（１１）
　　　Ｙ－Ｙｃ＝０　　　　　　　・・・（１２）
（ｂ）下記式（１３）および（１４）の条件を満たす。
　　　Ｘ－Ｘｃ＝０　　　　　　　・・・（１３）
　　　Ｙ－Ｙｃ＝１～１０、好ましくは１、２、３または４、
　　　　　　　　より好ましくは１、２または３　　　・・・（１４）
（ｃ）下記式（１５）および（１６）の条件を満たす。
　　　Ｘ－Ｘｃ＝１～１０、好ましくは、１、２または３、
　　　　　　　　より好ましくは１または２　　　　　・・・（１５）
　　　Ｙ－Ｙｃ＝１～１０、好ましくは、１、２または３、
　　　　　　　　より好ましくは１または２　　　　　・・・（１６）
（ｄ）下記式（１７）および（１８）の条件を満たす。
　　　Ｘ－Ｘｃ＝０　　　　　　　・・・（１７）
　　　Ｙ－Ｙｃ＝０　　　　　　　・・・（１８）

　前記（ａ）～（ｄ）の核酸分子について、それぞれの構造の一例を、図４の模式図に示す。図４は、前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）を含む核酸分子であり、（Ａ）は、前記（ａ）の核酸分子、（Ｂ）は、前記（ｂ）の核酸分子、（Ｃ）は、前記（ｃ）の核酸分子、（Ｄ）は、前記（ｄ）の核酸分子の例である。図４において、点線は、自己アニーリングにより二重鎖を形成している状態を示す。図４の核酸分子は、前記内部５’側領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）と前記内部３’側領域（Ｙ）の塩基数（Ｙ）を、前記式（２０）の「Ｘ＜Ｙ」として表わすが、これには制限されず、前述のように、前記式（１９）の「Ｘ＝Ｙ」でも、前記式（２１）の「Ｘ＞Ｙ」でもよい。また、図４は、あくまでも、前記内部５’側領域（Ｘ）と前記５’側領域（Ｘｃ）との関係、前記内部３’側領域（Ｙ）と前記３’側領域（Ｙｃ）との関係を示す模式図であり、例えば、各領域の長さ、形状等は、これには制限されず、また、リンカー領域（Ｌｘ）およびリンカー領域（Ｌｙ）の有無も、これには制限されない。

　前記（ａ）～（ｃ）の核酸分子は、例えば、前記５’側領域（Ｘｃ）と前記内部５’側領域（Ｘ）、および、前記３’側領域（Ｙｃ）と前記内部３’側領域（Ｙ）が、それぞれ二重鎖を形成することによって、前記内部領域（Ｚ）において、前記５’側領域（Ｘｃ）および前記３’側領域（Ｙｃ）のいずれともアライメントできない塩基を有する構造であり、二重鎖を形成しない塩基を有する構造ともいえる。前記内部領域（Ｚ）において、前記アライメントできない塩基（二重鎖を形成しない塩基ともいう）を、以下、「フリー塩基」という。図４において、前記フリー塩基の領域を、「Ｆ」で示す。前記領域（Ｆ）の塩基数は、特に制限されない。前記領域（Ｆ）の塩基数（Ｆ）は、例えば、前記（ａ）の核酸分子の場合、「Ｘ－Ｘｃ」の塩基数であり、前記（ｂ）の核酸分子の場合、「Ｙ－Ｙｃ」の塩基数であり、前記（ｃ）の核酸分子の場合、「Ｘ－Ｘｃ」の塩基数と「Ｙ－Ｙｃ」の塩基数との合計数である。

　他方、前記(ｄ)の核酸分子は、例えば、前記内部領域（Ｚ）の全領域が、前記５’側領域（Ｘｃ）および前記３’側領域（Ｙｃ）とアライメントする構造であり、前記内部領域（Ｚ）の全領域が二重鎖を形成する構造ともいえる。なお、前記（ｄ）の核酸分子において、前記５’側領域（Ｘｃ）の５’末端と前記３’側領域（Ｙｃ）の３’末端は、未連結である。

　前記核酸分子について、各領域の長さを以下に例示するが、本発明は、これには制限されない。

　前記５’側領域（Ｘｃ）、前記３’側領域（Ｙｃ）、および前記内部領域（Ｚ）における前記フリー塩基（Ｆ）の塩基数の合計は、前記内部領域（Ｚ）の塩基数となる。このため、前記５’側領域（Ｘｃ）および前記３’側領域（Ｙｃ）の長さは、例えば、前記内部領域（Ｚ）の長さ、前記フリー塩基の数（Ｆ）およびその位置に応じて、適宜決定できる。

　前記内部領域（Ｚ）の塩基数は、例えば、１９塩基以上である。前記塩基数の下限は、例えば、１９塩基であり、好ましくは２０塩基であり、より好ましくは２１塩基である。前記塩基数の上限は、例えば、５０塩基であり、好ましくは４０塩基であり、より好ましくは３０塩基である。前記内部領域（Ｚ）の塩基数の具体例は、例えば、１９塩基、２０塩基、２１塩基、２２塩基、２３塩基、２４塩基、２５塩基、２６塩基、２７塩基、２８塩基、２９塩基、または、３０塩基である。

　前記内部領域（Ｚ）が前記発現抑制配列を含む場合、前記内部領域（Ｚ）は、例えば、前記発現抑制配列のみから構成される領域でもよいし、前記発現抑制配列を含む領域でもよい。前記発現抑制配列の塩基数は、例えば、前述の通りである。前記内部領域（Ｚ）が前記発現抑制配列を含む場合、前記発現抑制配列の５’側および／または３’側に、さらに付加配列を有してもよい。前記付加配列の塩基数は、例えば、１～３１塩基であり、好ましくは、１～２１塩基であり、より好ましくは、１～１１塩基であり、さらに好ましくは、１～７塩基である。

　前記５’側領域（Ｘｃ）の塩基数は、例えば、１～２９塩基であり、好ましくは１～１１塩基であり、より好ましくは１～７塩基であり、さらに好ましくは１～４塩基であり、特に好ましくは１塩基、２塩基、３塩基である。前記内部領域（Ｚ）または前記３’側領域（Ｙｃ）が前記発現抑制配列を含む場合、例えば、このような塩基数が好ましい。具体例として、前記内部領域（Ｚ）の塩基数が、１９～３０塩基（例えば、１９塩基）の場合、前記５’側領域（Ｘｃ）の塩基数は、例えば、１～１１塩基であり、好ましくは１～７塩基であり、より好ましくは１～４塩基であり、さらに好ましくは１塩基、２塩基、３塩基である。

　前記５’側領域（Ｘｃ）が前記発現抑制配列を含む場合、前記５’側領域（Ｘｃ）は、例えば、前記発現抑制配列のみから構成される領域でもよいし、前記発現抑制配列を含む領域でもよい。前記発現抑制配列の長さは、例えば、前述の通りである。前記５’側領域（Ｘｃ）が前記発現抑制配列を含む場合、前記発現抑制配列の５’側および／または３’側に、さらに付加配列を有してもよい。前記付加配列の塩基数は、例えば、１～１１塩基であり、好ましくは、１～７塩基である。

　前記３’側領域（Ｙｃ）の塩基数は、例えば、１～２９塩基であり、好ましくは１～１１塩基であり、より好ましくは１～７塩基であり、さらに好ましくは１～４塩基であり、特に好ましくは１塩基、２塩基、３塩基である。前記内部領域（Ｚ）または前記５’側領域（Ｘｃ）が前記発現抑制配列を含む場合、例えば、このような塩基数が好ましい。具体例として、前記内部領域（Ｚ）の塩基数が、１９～３０塩基（例えば、１９塩基）の場合、前記３’側領域（Ｙｃ）の塩基数は、例えば、１～１１塩基であり、好ましくは１～７塩基であり、より好ましくは１～４塩基であり、さらに好ましくは１塩基、２塩基、３塩基である。

　前記３’側領域（Ｙｃ）が前記発現抑制配列を含む場合、前記３’側領域（Ｙｃ）は、例えば、前記発現抑制配列のみから構成される領域でもよいし、前記発現抑制配列を含む領域でもよい。前記発現抑制配列の長さは、例えば、前述の通りである。前記３’側領域（Ｙｃ）が前記発現抑制配列を含む場合、前記発現抑制配列の５’側および／または３’側に、さらに付加配列を有してもよい。前記付加配列の塩基数は、例えば、１～１１塩基であり、好ましくは、１～７塩基である。

　前述のように、前記内部領域（Ｚ）、前記５’側領域（Ｘｃ）および前記３’側領域（Ｙｃ）の塩基数は、例えば、前記式（２）の「Ｚ≧Ｘｃ＋Ｙｃ」で表わすことができる。具体例として、「Ｘｃ＋Ｙｃ」の塩基数は、例えば、前記内部領域（Ｚ）と同じ、または、前記内部領域（Ｚ）より小さい。後者の場合、「Ｚ－（Ｘｃ＋Ｙｃ）」は、例えば、１～１０、好ましくは１～４、より好ましくは１、２または３である。前記「Ｚ－（Ｘｃ＋Ｙｃ）」は、前記内部領域（Ｚ）における前記フリー塩基の領域（Ｆ）の塩基数（Ｆ）に相当する。

　前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）が、前述のようにヌクレオチド残基を含む場合、その長さは、特に制限されない。前記リンカー領域（Ｌｘ）は、例えば、前記内部５’側領域（Ｘ）と前記５’側領域（Ｘｃ）とが二重鎖を形成可能な長さであることが好ましく、前記リンカー領域（Ｌｙ）は、例えば、前記内部３’側領域（Ｙ）と前記３’側領域（Ｙｃ）とが二重鎖を形成可能な長さであることが好ましい。前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）の長さは、例えば、同じでも異なってもよく、また、その塩基配列も、同じでも異なってもよい。前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）の塩基数は、その下限が、例えば、１塩基であり、好ましくは２塩基であり、より好ましくは３塩基であり、その上限が、例えば、１００塩基であり、好ましくは８０塩基であり、より好ましくは５０塩基である。前記各リンカー領域の塩基数は、具体例として、例えば、１～５０塩基、１～３０塩基、１～２０塩基、１～１０塩基、１～７塩基、１～４塩基等が例示できるが、これには制限されない。

　前記核酸分子の全長は、特に制限されない。前記核酸分子において、前記塩基数の合計（全長の塩基数）は、下限が、例えば、３８塩基であり、好ましくは４２塩基であり、より好ましくは５０塩基であり、さらに好ましくは５１塩基であり、特に好ましくは５２塩基であり、その上限は、例えば、３００塩基であり、好ましくは２００塩基であり、より好ましくは１５０塩基であり、さらに好ましくは１００塩基であり、特に好ましくは８０塩基である。前記核酸分子において、前記リンカー領域（Ｌｘ）およびリンカー領域（Ｌｙ）を除く塩基数の合計は、下限が、例えば、３８塩基であり、好ましくは４２塩基であり、より好ましくは５０塩基であり、さらに好ましくは５１塩基であり、特に好ましくは５２塩基であり、上限が、例えば、３００塩基であり、好ましくは２００塩基であり、より好ましくは１５０塩基であり、さらに好ましくは１００塩基であり、特に好ましくは８０塩基である。

　本形態の核酸分子は、例えば、５’末端と３’末端とが、結合してもよいし、未結合でもよい。前者の場合、本形態の核酸分子は、環状の一本鎖核酸分子である。後者の場合、本形態の核酸分子は、例えば、両末端の未結合を維持できることから、５’末端が非リン酸基であることが好ましい。

（２－３）
　前記一本鎖核酸分子の第３形態として、前記リンカー領域が、非ヌクレオチド構造である分子があげられる。

　本形態は、前記第１形態および前記第２形態の核酸分子において、前記リンカー領域（Ｌｘ）および／または前記リンカー領域（Ｌｙ）が、非ヌクレオチド構造を有する以外は、前述の説明を援用できる。

　前記非ヌクレオチド構造は、特に制限されず、例えば、ポリアルキレングリコール、ピロリジン骨格、ピペリジン骨格等があげられる。前記ポリアルキレングリコールは、例えば、ポリエチレングリコールがあげられる。

　前記ピロリジン骨格は、例えば、ピロリジンの５員環を構成する炭素が、１個以上、置換されたピロリジン誘導体の骨格でもよく、置換される場合、例えば、Ｃ－２の炭素以外の炭素原子であることが好ましい。前記炭素は、例えば、窒素、酸素または硫黄で置換されてもよい。前記ピロリジン骨格は、例えば、ピロリジンの５員環内に、例えば、炭素－炭素二重結合または炭素－窒素二重結合を含んでもよい。前記ピロリジン骨格において、ピロリジンの５員環を構成する炭素および窒素は、例えば、水素が結合してもよいし、後述するような置換基が結合してもよい。前記リンカー領域（Ｌｘ）は、前記領域（Ｘ）および前記領域（Ｘｃ）と、前記リンカー領域（Ｌｙ）は、前記領域（Ｙ）および前記領域（Ｙｃ）と、例えば、前記ピロリジン骨格のいずれの基を介して結合してもよく、好ましくは、前記５員環のいずれか１個の炭素原子と窒素であり、好ましくは、前記５員環の２位の炭素（Ｃ－２）と窒素である。前記ピロリジン骨格としては、例えば、プロリン骨格、プロリノール骨格等があげられる。前記プロリン骨格およびプロリノール骨格等は、例えば、生体内物質およびその還元体であるため、安全性にも優れる。

　前記ピペリジン骨格は、例えば、ピペリジンの６員環を構成する炭素が、１個以上、置換されたピペリジン誘導体の骨格でもよく、置換される場合、例えば、Ｃ－２の炭素以外の炭素原子であることが好ましい。前記炭素は、例えば、窒素、酸素または硫黄で置換されてもよい。前記ピペリジン骨格は、例えば、ピペリジンの６員環内に、例えば、炭素－炭素二重結合または炭素－窒素二重結合を含んでもよい。前記ピペリジン骨格において、ピペリジンの６員環を構成する炭素および窒素は、例えば、水素基が結合してもよいし、後述するような置換基が結合してもよい。前記リンカー領域（Ｌｘ）は、前記領域（Ｘ）および前記領域（Ｘｃ）と、前記リンカー領域（Ｌｙ）は、前記領域（Ｙ）および前記領域（Ｙｃ）と、例えば、前記ピペリジン骨格のいずれの基を介して結合してもよく、好ましくは、前記６員環のいずれか１個の炭素原子と窒素であり、より好ましくは、前記６員環の２位の炭素（Ｃ－２）と窒素である。

　前記リンカー領域は、例えば、前記非ヌクレオチド構造からなる非ヌクレオチド残基のみを含んでもよいし、前記非ヌクレオチド構造からなる非ヌクレオチド残基と、ヌクレオチド残基とを含んでもよい。

　前記リンカー領域は、例えば、下記式（Ｉ）で表わされる。

　前記式（Ｉ）中、例えば、
Ｘ^１およびＸ^２は、それぞれ独立して、Ｈ_２、Ｏ、ＳまたはＮＨであり；
Ｙ^１およびＹ^２は、それぞれ独立して、単結合、ＣＨ_２、ＮＨ、ＯまたはＳであり；
Ｒ^３は、環Ａ上のＣ－３、Ｃ－４、Ｃ－５またはＣ－６に結合する水素原子または置換基であり、
Ｌ^１は、ｎ個の原子からなるアルキレン鎖であり、ここで、アルキレン炭素原子上の水素原子は、ＯＨ、ＯＲ^ａ、ＮＨ_２、ＮＨＲ^ａ、ＮＲ^ａＲ^ｂ、ＳＨ、もしくはＳＲ^ａで置換されても置換されていなくてもよく、または、
Ｌ^１は、前記アルキレン鎖の一つ以上の炭素原子が、酸素原子で置換されたポリエーテル鎖であり、
ただし、Ｙ^１が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ^１に結合するＬ^１の原子は炭素であり、ＯＲ^１に結合するＬ^１の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接せず；
Ｌ^２は、ｍ個の原子からなるアルキレン鎖であり、ここで、アルキレン炭素原子上の水素原子は、ＯＨ、ＯＲ^ｃ、ＮＨ_２、ＮＨＲ^ｃ、ＮＲ^ｃＲ^ｄ、ＳＨもしくはＳＲ^ｃで置換されても置換れていなくてもよく、または、
Ｌ^２は、前記アルキレン鎖の一つ以上の炭素原子が、酸素原子で置換されたポリエーテル鎖であり、
ただし、Ｙ^２が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ^２に結合するＬ^２の原子は炭素であり、ＯＲ^２に結合するＬ^２の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接せず；
Ｒ^ａ、Ｒ^ｂ、Ｒ^ｃおよびＲ^ｄは、それぞれ独立して、置換基または保護基であり；
ｌは、１または２であり；
ｍは、０～３０の範囲の整数であり；
ｎは、０～３０の範囲の整数であり；
環Ａは、前記環Ａ上のＣ－２以外の１個の炭素原子が、窒素、酸素、硫黄で置換されてもよく、
前記環Ａ内に、炭素－炭素二重結合または炭素－窒素二重結合を含んでもよく、
前記領域（Ｘｃ）および前記領域（Ｘ）は、それぞれ、－ＯＲ^１－または－ＯＲ^２－を介して、前記リンカー領域（Ｌｘ）に結合し、
前記領域（Ｙｃ）および前記領域（Ｙ）は、それぞれ、－ＯＲ^１－または－ＯＲ^２－を介して、前記リンカー領域（Ｌｙ）に結合し、
ここで、Ｒ^１およびＲ^２は、存在しても存在しなくてもよく、存在する場合、Ｒ^１およびＲ^２は、それぞれ独立して、ヌクレオチド残基または前記構造（Ｉ)である。

　前記式（Ｉ）中、Ｘ^１およびＸ^２は、例えば、それぞれ独立して、Ｈ_２、Ｏ、ＳまたはＮＨである。前記式（Ｉ）中において、Ｘ^１がＨ_２であるとは、Ｘ^１が、Ｘ^１の結合する炭素原子とともに、ＣＨ_２（メチレン基）を形成することを意味する。Ｘ^２についても同様である。

　前記式（Ｉ）中、Ｙ^１およびＹ^２は、それぞれ独立して、単結合、ＣＨ_２、ＮＨ、ＯまたはＳである。

　前記式（Ｉ）中、環Ａにおいて、ｌは、１または２である。ｌ＝１の場合、環Ａは、５員環であり、例えば、前記ピロリジン骨格である。前記ピロリジン骨格は、例えば、プロリン骨格、プロリノール骨格等があげられ、これらの二価の構造が例示できる。ｌ＝２の場合、環Ａは、６員環であり、例えば、前記ピペリジン骨格である。環Ａは、環Ａ上のＣ－２以外の１個の炭素原子が、窒素、酸素または硫黄で置換されてもよい。また、環Ａは、環Ａ内に、炭素－炭素二重結合または炭素－窒素二重結合を含んでもよい。環Ａは、例えば、Ｌ型およびＤ型のいずれでもよい。

　前記式（Ｉ）中、Ｒ^３は、環Ａ上のＣ－３、Ｃ－４、Ｃ－５またはＣ－６に結合する水素原子または置換基である。Ｒ^３が前記置換基の場合、置換基Ｒ^３は、１でも複数でも、存在しなくてもよく、複数の場合、同一でも異なってもよい。

　置換基Ｒ^３は、例えば、ハロゲン、ＯＨ、ＯＲ^４、ＮＨ_２、ＮＨＲ^４、ＮＲ^４Ｒ^５、ＳＨ、ＳＲ^４またはオキソ基（＝Ｏ）等である。

　Ｒ^４およびＲ^５は、例えば、それぞれ独立して、置換基または保護基であり、同一でも異なってもよい。前記置換基は、例えば、ハロゲン、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクリルアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アミノアルキル、ヘテロシクリルアルケニル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロアリールアルキル、シリル、シリルオキシアルキル等があげられる。以下、同様である。置換基Ｒ^３は、これらの列挙する置換基でもよい。

　前記保護基は、例えば、反応性の高い官能基を不活性に変換する官能基であり、公知の保護基等があげられる。前記保護基は、例えば、文献（J.　F.　W.　McOmie、　「Protecting　Groups　in　Organic　Chemistry」　Prenum　Press、　London　and　New　York、　1973）の記載を援用できる。前記保護基は、特に制限されず、例えば、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル基（ＴＢＤＭＳ）、ビス（２－アセトキシエチルオキシ）メチル基（ＡＣＥ）、トリイソプロピルシリルオキシメチル基（ＴＯＭ）、１－（２－シアノエトキシ）エチル基（ＣＥＥ）、２－シアノエトキシメチル基（ＣＥＭ）およびトリルスルフォニルエトキシメチル基（ＴＥＭ）、ジメトキシトリチル基（ＤＭＴｒ）等があげられる。Ｒ^３がＯＲ^４の場合、前記保護基は、特に制限されず、例えば、ＴＢＤＭＳ基、ＡＣＥ基、ＴＯＭ基、ＣＥＥ基、ＣＥＭ基およびＴＥＭ基等があげられる。この他にも、後述する［化５］のシリル含有基もあげられる。以下、同様である。

　前記式（Ｉ）中、Ｌ^１は、ｎ個の原子からなるアルキレン鎖である。前記アルキレン炭素原子上の水素原子は、例えば、ＯＨ、ＯＲ^ａ、ＮＨ_２、ＮＨＲ^ａ、ＮＲ^ａＲ^ｂ、ＳＨ、もしくはＳＲ^ａで置換されてもよいし、置換されていなくてもよい。または、Ｌ^１は、前記アルキレン鎖の１つ以上の炭素原子が酸素原子で置換されたポリエーテル鎖でもよい。前記ポリエーテル鎖は、例えば、ポリエチレングリコールである。なお、Ｙ^１が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ^１に結合するＬ^１の原子は炭素であり、ＯＲ^１に結合するＬ^１の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接しない。つまり、例えば、Ｙ^１がＯの場合、その酸素原子とＬ^１の酸素原子は隣接せず、ＯＲ^１の酸素原子とＬ^１の酸素原子は隣接しない。

　前記式（Ｉ）中、Ｌ^２は、ｍ個の原子からなるアルキレン鎖である。前記アルキレン炭素原子上の水素原子は、例えば、ＯＨ、ＯＲ^ｃ、ＮＨ_２、ＮＨＲ^ｃ、ＮＲ^ｃＲ^ｄ、ＳＨもしくはＳＲ^ｃで置換されてもよいし、置換されていなくてもよい。または、Ｌ^２は、前記アルキレン鎖の１つ以上の炭素原子が酸素原子で置換されたポリエーテル鎖でもよい。なお、Ｙ^２が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ^２に結合するＬ^２の原子は炭素であり、ＯＲ^２に結合するＬ^２の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接しない。つまり、例えば、Ｙ^２がＯの場合、その酸素原子とＬ^２の酸素原子は隣接せず、ＯＲ^２の酸素原子とＬ^２の酸素原子は隣接しない。

　Ｌ^１のｎおよびＬ^２のｍは、特に制限されず、それぞれ、下限は、例えば、０であり、上限も、特に制限されない。ｎおよびｍは、例えば、前記リンカー領域（Ｌｘ）または（Ｌｙ）の所望の長さに応じて、適宜設定できる。ｎおよびｍは、例えば、製造コストおよび収率等の点から、それぞれ、０～３０が好ましく、より好ましくは０～２０であり、さらに好ましくは０～１５である。ｎとｍは、同じでもよいし（ｎ＝ｍ）、異なってもよい。ｎ＋ｍは、例えば、０～３０であり、好ましくは０～２０であり、より好ましくは０～１５である。

　Ｒ^ａ、Ｒ^ｂ、Ｒ^ｃおよびＲ^ｄは、例えば、それぞれ独立して、置換基または保護基である。前記置換基および前記保護基は、例えば、前述と同様である。

　前記式（Ｉ）において、水素原子は、例えば、それぞれ独立して、Ｃｌ、Ｂｒ、ＦおよびＩ等のハロゲンに置換されてもよい。

　前記領域（Ｘｃ）および前記領域（Ｘ）は、前記リンカー領域（Ｌｘ）に、前記領域（Ｙｃ）および前記領域（Ｙ）は、前記リンカー領域（Ｌｙ）に、例えば、それぞれ、－ＯＲ^１－または－ＯＲ^２－を介して、結合する。ここで、Ｒ^１およびＲ^２は、存在しても存在しなくてもよい。Ｒ^１およびＲ^２が存在する場合、Ｒ^１およびＲ^２は、それぞれ独立して、ヌクレオチド残基または前記式（Ｉ)の構造である。Ｒ^１および／またはＲ^２が前記ヌクレオチド残基の場合、前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）は、例えば、ヌクレオチド残基Ｒ^１および／またはＲ^２を除く前記式（Ｉ）の構造からなる前記非ヌクレオチド残基と、前記ヌクレオチド残基とから形成される。Ｒ^１および／またはＲ^２が前記式（Ｉ）の構造の場合、前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）は、例えば、前記式（Ｉ）の構造からなる前記非ヌクレオチド残基が、２つ以上連結された構造となる。前記式（Ｉ）の構造は、例えば、１個、２個、３個または４個含んでもよい。このように、前記構造を複数含む場合、前記（Ｉ）の構造は、例えば、直接連結されてもよいし、前記ヌクレオチド残基を介して結合してもよい。他方、Ｒ^１およびＲ^２が存在しない場合、前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）は、例えば、前記式（Ｉ）の構造からなる前記非ヌクレオチド残基のみから形成される。

　前記領域（Ｘｃ）および前記領域（Ｘ）、ならびに、前記領域（Ｙｃ）および前記領域（Ｙ）と、前記－ＯＲ^１－および－ＯＲ^２－との結合の組合せは、特に制限されず、例えば、以下のいずれかの条件があげられる。
条件（１）
　前記領域（Ｘｃ）は、－ＯＲ^２－を介して、前記領域（Ｘ）は、－ＯＲ^１－を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合し、
　前記領域（Ｙｃ）は、－ＯＲ^１－を介して、前記領域（Ｙ）は、－ＯＲ^２－を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合する。
条件（２）
　前記領域（Ｘｃ）は、－ＯＲ^２－を介して、前記領域（Ｘ）は、－ＯＲ^１－を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合し、
　前記領域（Ｙｃ）は、－ＯＲ^２－を介して、前記領域（Ｙ）は、－ＯＲ^１－を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合する。
条件（３）
　前記領域（Ｘｃ）は、－ＯＲ^１－を介して、前記領域（Ｘ）は、－ＯＲ^２－を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合し、
　前記領域（Ｙｃ）は、－ＯＲ^１－を介して、前記領域（Ｙ）は、－ＯＲ^２－を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合する。
条件（４）
　前記領域（Ｘｃ）は、－ＯＲ^１－を介して、前記領域（Ｘ）は、－ＯＲ^２－を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合し、
　前記領域（Ｙｃ）は、－ＯＲ^２－を介して、前記領域（Ｙ）は、－ＯＲ^１－を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合する。

　前記式（Ｉ）の構造は、例えば、下記式（Ｉ－１）～式（Ｉ－９）が例示でき、下記式において、ｎおよびｍは、前記式（Ｉ）と同じである。下記式において、ｑは、０～１０の整数である。

　前記式（Ｉ－１）～（Ｉ－９）において、ｎ、ｍおよびｑは、特に制限されず、前述の通りである。具体例として、前記式（Ｉ－１）において、ｎ＝８、前記（Ｉ－２）において、ｎ＝３、前記式（Ｉ－３）において、ｎ＝４または８、前記（Ｉ－４）において、ｎ＝７または８、前記式（Ｉ－５）において、ｎ＝３およびｍ＝４、前記（Ｉ－６）において、ｎ＝８およびｍ＝４、前記式（Ｉ－７）において、ｎ＝８およびｍ＝４、前記（Ｉ－８）において、ｎ＝５およびｍ＝４、前記式（Ｉ－９）において、ｑ＝１およびｍ＝４があげられる。前記式（Ｉ－４）の一例（ｎ＝８）を、下記式（Ｉ－４ａ）に、前記式（Ｉ－６）の一例（ｎ＝５、ｍ＝４）を、下記式（Ｉ－６ａ）に示す。

　本発明の核酸分子の構成単位は、特に制限されず、例えば、ヌクレオチド残基があげられる。前記ヌクレオチド残基は、例えば、リボヌクレオチド残基およびデオキシリボヌクレオチド残基があげられる。前記ヌクレオチド残基は、例えば、修飾されていない非修飾ヌクレオチド残基および修飾された修飾ヌクレオチド残基があげられる。本発明の核酸分子は、例えば、前記修飾ヌクレオチド残基を含むことによって、ヌクレアーゼ耐性を向上し、安定性を向上可能である。また、本発明の核酸分子は、例えば、前記ヌクレオチド残基の他に、さらに、非ヌクレオチド残基を含んでもよい。

　本発明の核酸分子において、前記リンカー以外の領域の構成単位は、それぞれ、前記ヌクレオチド残基が好ましい。前記各領域は、例えば、下記（１）～（３）の残基で構成される。
　（１）非修飾ヌクレオチド残基
　（２）修飾ヌクレオチド残基
　（３）非修飾ヌクレオチド残基および修飾ヌクレオチド残基

　本発明の核酸分子において、前記リンカー領域の構成単位は、特に制限されず、例えば、前記ヌクレオチド残基および前記非ヌクレオチド残基があげられる。前記リンカー領域は、例えば、前記ヌクレオチド残基のみから構成されてもよいし、前記非ヌクレオチド残基のみから構成されてもよいし、前記ヌクレオチド残基と前記非ヌクレオチド残基から構成されてもよい。前記リンカー領域は、例えば、下記（１）～（７）の残基で構成される。
　（１）非修飾ヌクレオチド残基
　（２）修飾ヌクレオチド残基
　（３）非修飾ヌクレオチド残基および修飾ヌクレオチド残基
　（４）非ヌクレオチド残基
　（５）非ヌクレオチド残基および非修飾ヌクレオチド残基
　（６）非ヌクレオチド残基および修飾ヌクレオチド残基
　（７）非ヌクレオチド残基、非修飾ヌクレオチド残基および修飾ヌクレオチド残基

　本発明の核酸分子が、前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）の両方を有する場合、例えば、両方の構成単位が同じでもよいし、異なってもよい。具体例として、例えば、両方のリンカー領域の構成単位が前記ヌクレオチド残基である形態、両方のリンカー領域の構成単位が前記非ヌクレオチド残基である形態、一方の領域の構成単位が前記ヌクレオチド残基であり、他方のリンカー領域の構成単位が非ヌクレオチド残基である形態等があげられる。

　本発明の核酸分子は、例えば、前記ヌクレオチド残基のみから構成される分子、前記ヌクレオチド残基の他に前記非ヌクレオチド残基を含む分子等があげられる。本発明の核酸分子において、前記ヌクレオチド残基は、前述のように、例えば、前記非修飾ヌクレオチド残基のみでもよいし、前記修飾ヌクレオチド残基のみでもよいし、前記非修飾ヌクレオチド残基および前記修飾ヌクレオチド残基の両方でもよい。前記核酸分子が、前記非修飾ヌクレオチド残基と前記修飾ヌクレオチド残基を含む場合、前記修飾ヌクレオチド残基の個数は、特に制限されず、例えば、「１もしくは数個」であり、具体的には、例えば、１～５個、好ましくは１～４個、より好ましくは１～３個、最も好ましくは１または２個である。本発明の核酸分子が、前記非ヌクレオチド残基を含む場合、前記非ヌクレオチド残基の個数は、特に制限されず、例えば、「１もしくは数個」であり、具体的には、例えば、１～８個、１～６個、１～４個、１、２または３個である。

　前記核酸分子が、例えば、前記非修飾リボヌクレオチド残基の他に前記修飾リボヌクレオチド残基を含む場合、前記修飾リボヌクレオチド残基の個数は、特に制限されず、例えば、「１もしくは数個」であり、具体的には、例えば、１～５個、好ましくは１～４個、より好ましくは１～３個、最も好ましくは１または２個である。前記非修飾リボヌクレオチド残基に対する前記修飾リボヌクレオチド残基は、例えば、リボース残基がデオキシリボース残基に置換された前記デオキシリボヌクレオチド残基でもよい。前記核酸分子が、例えば、前記非修飾リボヌクレオチド残基の他に前記デオキシリボヌクレオチド残基を含む場合、前記デオキシリボヌクレオチド残基の個数は、特に制限されず、例えば、「１もしくは数個」であり、具体的には、例えば、１～５個、好ましくは１～４個、より好ましくは１～３個、最も好ましくは１または２個である。

　本発明の核酸分子は、例えば、標識物質を含み、前記標識物質で標識化されてもよい。前記標識物質は、特に制限されず、例えば、蛍光物質、色素、同位体等があげられる。前記標識物質は、例えば、ピレン、ＴＡＭＲＡ、フルオレセイン、Ｃｙ３色素、Ｃｙ５色素等の蛍光団があげられ、前記色素は、例えば、Ａｌｅｘａ４８８等のＡｌｅｘａ色素等があげられる。前記同位体は、例えば、安定同位体および放射性同位体があげられ、好ましくは安定同位体である。前記安定同位体は、例えば、被ばくの危険性が少なく、専用の施設も不要であることから取り扱い性に優れ、また、コストも低減できる。また、前記安定同位体は、例えば、標識した化合物の物性変化がなく、トレーサーとしての性質にも優れる。前記安定同位体は、特に制限されず、例えば、^２Ｈ、^１３Ｃ、^１５Ｎ、^１７Ｏ、^１８Ｏ、^３３Ｓ、^３４Ｓおよび^３６Ｓがあげられる。

　本発明の核酸分子は、前述のように、ＴＧＦ－β１遺伝子の発現抑制ができる。このため、本発明の核酸分子は、例えば、ＴＧＦ－β１遺伝子が原因となる疾患の治療剤として使用できる。本発明において、「治療」は、例えば、前記疾患の予防、疾患の改善、予後の改善の意味を含み、いずれでもよい。前記疾患としては、具体的には、急性肺傷害；肺線維症があげられる。

　本発明の核酸分子の使用方法は、特に制限されず、例えば、前記ＴＧＦ－β１遺伝子を有する投与対象に、前記核酸分子を投与すればよい。

　前記投与対象は、例えば、細胞、組織または器官があげられる。前記投与対象は、例えば、ヒト、ヒトを除く非ヒト哺乳類等の非ヒト動物があげられる。前記投与は、例えば、ｉｎ　ｖｉｖｏでもｉｎ　ｖｉｔｒｏでもよい。前記細胞は、特に制限されず、例えば、Ａ５４９、ＨｅＬａ、２９３、ＣＯＳ７等の各種培養細胞、ＥＳ細胞、ｉＰＳ細胞等の多能性幹細胞、造血幹細胞等の体性幹細胞、前記多能性幹細胞もしくは体性幹細胞から分化誘導された各種培養細胞、初代培養細胞等の生体から単離した細胞等があげられる。

　本発明の核酸分子の使用に関しては、後述する本発明の組成物、発現抑制方法および治療方法等の記載を参照できる。

　本発明の核酸分子は、前述のように、ＴＧＦ－β１遺伝子の発現を抑制可能であることから、例えば、医薬品、診断薬および農薬、ならびに、農薬、医学、生命科学等の研究ツールとして有用である。

２．ヌクレオチド残基
　前記ヌクレオチド残基は、例えば、構成要素として、糖、塩基およびリン酸を含む。前記ヌクレオチド残基は、前述のように、例えば、リボヌクレオチド残基およびデオキシリボヌクレオチド残基があげられる。前記リボヌクレオチド残基は、例えば、糖としてリボース残基を有し、塩基として、アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）およびＵ（ウラシル）を有し、前記デオキシリボース残基は、例えば、糖としてデオキシリボース残基を有し、塩基として、アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）およびチミン（Ｔ）を有する。

　前記ヌクレオチド残基は、未修飾ヌクレオチド残基および修飾ヌクレオチド残基があげられる。前記未修飾ヌクレオチド残基は、前記各構成要素が、例えば、天然に存在するものと同一または実質的に同一であり、好ましくは、人体において天然に存在するものと同一または実質的に同一である。

　前記修飾ヌクレオチド残基は、例えば、前記未修飾ヌクレオチド残基を修飾したヌクレオチド残基である。前記修飾ヌクレオチド残基は、例えば、前記未修飾ヌクレオチド残基の構成要素のいずれが修飾されてもよい。本発明において、「修飾」は、例えば、前記構成要素の置換、付加および／または欠失、前記構成要素における原子および／または官能基の置換、付加および／または欠失であり、「改変」ということができる。前記修飾ヌクレオチド残基は、例えば、天然に存在するヌクレオチド残基、人工的に修飾したヌクレオチド残基等があげられる。前記天然由来の修飾ヌクレオチド残基は、例えば、リンバックら（Ｌｉｍｂａｃｈ　ｅｔ　ａｌ．、１９９４、Ｓｕｍｍａｒｙ：ｔｈｅ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ　ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ　ｏｆ　ＲＮＡ、Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．２２：２１８３～２１９６）を参照できる。また、前記修飾ヌクレオチド残基は、例えば、前記ヌクレオチドの代替物の残基でもよい。

　前記ヌクレオチド残基の修飾は、例えば、リボース－リン酸骨格（以下、リボリン酸骨格）の修飾があげられる。

　前記リボリン酸骨格において、例えば、リボース残基を修飾できる。前記リボース残基は、例えば、２’位炭素を修飾でき、具体的には、例えば、２’位炭素に結合する水酸基を、水素またはフルオロ等のハロゲンに置換できる。前記２’位炭素の水酸基を水素に置換することで、リボース残基をデオキシリボースに置換できる。前記リボース残基は、例えば、立体異性体に置換でき、例えば、アラビノース残基に置換してもよい。

　前記リボリン酸骨格は、例えば、非リボース残基および／または非リン酸を有する非リボリン酸骨格に置換してもよい。前記非リボリン酸骨格は、例えば、前記リボリン酸骨格の非荷電体があげられる。前記非リボリン酸骨格に置換された、前記ヌクレオチドの代替物は、例えば、モルホリノ、シクロブチル、ピロリジン等があげられる。前記代替物は、この他に、例えば、人工核酸モノマー残基があげられる。具体例として、例えば、ＰＮＡ（ペプチド核酸）、ＬＮＡ（Ｌｏｃｋｅｄ　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄ）、ＥＮＡ（２’－Ｏ、４’－Ｃ－Ｅｔｈｙｌｅｎｅｂｒｉｄｇｅｄ　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄ）等があげられ、好ましくはＰＮＡである。

　前記リボリン酸骨格において、例えば、リン酸基を修飾できる。前記リボリン酸骨格において、糖残基に最も隣接するリン酸基は、αリン酸基と呼ばれる。前記αリン酸基は、負に荷電し、その電荷は、糖残基に非結合の２つの酸素原子にわたって、均一に分布している。前記αリン酸基における４つの酸素原子のうち、ヌクレオチド残基間のホスホジエステル結合において、糖残基と非結合である２つの酸素原子は、以下、「非結合（ｎｏｎ－ｌｉｎｋｉｎｇ）酸素」ともいう。他方、前記ヌクレオチド残基間のホスホジエステル結合において、糖残基と結合している２つの酸素原子は、以下、「結合（ｌｉｎｋｉｎｇ）酸素」という。前記αリン酸基は、例えば、非荷電となる修飾、または、前記非結合酸素における電荷分布が非対称型となる修飾を行うことが好ましい。

　前記リン酸基は、例えば、前記非結合酸素を置換してもよい。前記酸素は、例えば、Ｓ（硫黄）、Ｓｅ（セレン）、Ｂ（ホウ素）、Ｃ（炭素）、Ｈ（水素）、Ｎ（窒素）およびＯＲ（Ｒは、アルキル基またはアリール基）のいずれかの原子で置換でき、好ましくは、Ｓで置換される。前記非結合酸素は、例えば、両方が置換されていることが好ましく、より好ましくは、両方がＳで置換される。前記修飾リン酸基は、例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレネート、ボラノホスフェート、ボラノホスフェートエステル、ホスホネート水素、ホスホロアミデート、アルキルまたはアリールホスホネート、およびホスホトリエステル等があげられ、中でも、前記２つの非結合酸素が両方ともＳで置換されているホスホロジチオエートが好ましい。

　前記リン酸基は、例えば、前記結合酸素を置換してもよい。前記酸素は、例えば、Ｓ（硫黄）、Ｃ（炭素）およびＮ（窒素）のいずれかの原子で置換でき、前記修飾リン酸基は、例えば、Ｎで置換した架橋ホスホロアミデート、Ｓで置換した架橋ホスホロチオエート、およびＣで置換した架橋メチレンホスホネート等があげられる。前記結合酸素の置換は、例えば、本発明の核酸分子の５’末端ヌクレオチド残基および３’末端ヌクレオチド残基の少なくとも一方において行うことが好ましく、５’側の場合、Ｃによる置換が好ましく、３’側の場合、Ｎによる置換が好ましい。

　前記リン酸基は、例えば、前記リン非含有のリンカーに置換してもよい。前記リンカーは、例えば、シロキサン、カーボネート、カルボキシメチル、カルバメート、アミド、チオエーテル、エチレンオキサイドリンカー、スルホネート、スルホンアミド、チオホルムアセタール、ホルムアセタール、オキシム、メチレンイミノ、メチレンメチルイミノ、メチレンヒドラゾ、メチレンジメチルヒドラゾ、およびメチレンオキシメチルイミノ等を含み、好ましくは、メチレンカルボニルアミノ基およびメチレンメチルイミノ基を含む。

　本発明の核酸分子は、例えば、３’末端および５’末端の少なくとも一方のヌクレオチド残基が修飾されてもよい。前記修飾は、例えば、３’末端および５’末端のいずれか一方でもよいし、両方でもよい。前記修飾は、例えば、前述の通りであり、好ましくは、末端のリン酸基に行うことが好ましい。前記リン酸基は、例えば、全体を修飾してもよいし、前記リン酸基における１つ以上の原子を修飾してもよい。前者の場合、例えば、リン酸基全体の置換でもよいし、欠失でもよい。

　前記末端のヌクレオチド残基の修飾は、例えば、他の分子の付加があげられる。前記他の分子は、例えば、前述のような標識物質、保護基等の機能性分子があげられる。前記保護基は、例えば、Ｓ（硫黄）、Ｓｉ（ケイ素）、Ｂ（ホウ素）、エステル含有基等があげられる。前記標識物質等の機能性分子は、例えば、本発明の核酸分子の検出等に利用できる。

　前記他の分子は、例えば、前記ヌクレオチド残基のリン酸基に付加してもよいし、スペーサーを介して、前記リン酸基または前記糖残基に付加してもよい。前記スペーサーの末端原子は、例えば、前記リン酸基の前記結合酸素、または、糖残基のＯ、Ｎ、ＳもしくはＣに、付加または置換できる。前記糖残基の結合部位は、例えば、３’位のＣもしくは５’位のＣ、またはこれらに結合する原子が好ましい。前記スペーサーは、例えば、前記ＰＮＡ等のヌクレオチド代替物の末端原子に、付加または置換することもできる。

　前記スペーサーは、特に制限されず、例えば、－（ＣＨ_２）_ｎ－、－（ＣＨ_２）_ｎＮ－、－（ＣＨ_２）_ｎＯ－、－（ＣＨ_２）_ｎＳ－、Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、無塩基糖、アミド、カルボキシ、アミン、オキシアミン、オキシイミン、チオエーテル、ジスルフィド、チオ尿素、スルホンアミド、およびモルホリノ等、ならびに、ビオチン試薬およびフルオレセイン試薬等を含んでもよい。前記式において、ｎは、正の整数であり、ｎ＝３または６が好ましい。

　前記末端に付加する分子は、これらの他に、例えば、色素、インターカレート剤（例えば、アクリジン）、架橋剤（例えば、ソラレン、マイトマイシンＣ）、ポルフィリン（ＴＰＰＣ４、テキサフィリン、サッフィリン）、多環式芳香族炭化水素（例えば、フェナジン、ジヒドロフェナジン）、人工エンドヌクレアーゼ（例えば、ＥＤＴＡ）、親油性担体（例えば、コレステロール、コール酸、アダマンタン酢酸、１－ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、１、３－ビス－Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール、ゲラニルオキシヘキシル基、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、メントール、１、３－プロパンジオール、ヘプタデシル基、パルミチン酸、ミリスチン酸、Ｏ３－（オレオイル）リトコール酸、Ｏ３－（オレオイル）コール酸、ジメトキシトリチル、またはフェノキサジン）およびペプチド複合体（例えば、アンテナペディアペプチド、Ｔａｔペプチド）、アルキル化剤、リン酸、アミノ、メルカプト、ＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ－４０Ｋ）、ＭＰＥＧ、［ＭＰＥＧ］_２、ポリアミノ、アルキル、置換アルキル、放射線標識マーカー、酵素、ハプテン（例えば、ビオチン）、輸送／吸収促進剤（例えば、アスピリン、ビタミンＥ、葉酸）、合成リボヌクレアーゼ（例えば、イミダゾール、ビスイミダゾール、ヒスタミン、イミダゾールクラスター、アクリジン－イミダゾール複合体、テトラアザマクロ環のＥｕ^３＋複合体）等があげられる。

　本発明の核酸分子は、前記５’末端が、例えば、リン酸基またはリン酸基アナログで修飾されてもよい。前記リン酸基は、例えば、５’一リン酸（(HO)₂(O)P-O-5’）、５’二リン酸（(HO)₂(O)P-O-P(HO)(O)-O-5’）、５’三リン酸（(HO)₂(O)P-O-(HO)(O)P-O-P(HO)(O)-O-5’）、５’－グアノシンキャップ（７－メチル化または非メチル化、7m-G-O-5’-(HO)(O)P-O-(HO)(O)P-O-P(HO)(O)-O-5’）、５’－アデノシンキャップ（Ａｐｐｐ）、任意の修飾または非修飾ヌクレオチドキャップ構造（N-O-5’-(HO)(O)P-O-(HO)(O)P-O-P(HO)(O)-O-5’）、５’一チオリン酸（ホスホロチオエート：(HO)₂(S)P-O-5’）、５’一ジチオリン酸（ホスホロジチオエート：(HO)(HS)(S)P-O-5’）、５’－ホスホロチオール酸（(HO)₂(O)P-S-5’）、硫黄置換の一リン酸、二リン酸および三リン酸（例えば、５’－α－チオ三リン酸、５’－γ－チオ三リン酸等）、５’－ホスホルアミデート（(HO)₂(O)P-NH-5’、(HO)(NH₂)(O)P-O-5’）、５’－アルキルホスホン酸（例えば、RP(OH)(O)-O-5’、(OH)₂(O)P-5’-CH₂、Ｒはアルキル（例えば、メチル、エチル、イソプロピル、プロピル等））、５’－アルキルエーテルホスホン酸（例えば、RP(OH)(O)-O-5’、Ｒはアルキルエーテル（例えば、メトキシメチル、エトキシメチル等））等があげられる。

　前記ヌクレオチド残基において、前記塩基は、特に制限されない。前記塩基は、例えば、天然の塩基でもよいし、非天然の塩基でもよい。前記塩基は、例えば、天然由来でもよいし、合成品でもよい。前記塩基は、例えば、一般的な塩基、その修飾アナログ等が使用できる。

　前記塩基は、例えば、アデニンおよびグアニン等のプリン塩基、シトシン、ウラシルおよびチミン等のピリミジン塩基があげられる。前記塩基は、この他に、イノシン、チミン、キサンチン、ヒポキサンチン、ヌバラリン（ｎｕｂｕｌａｒｉｎｅ）、イソグアニシン（ｉｓｏｇｕａｎｉｓｉｎｅ）、ツベルシジン（ｔｕｂｅｒｃｉｄｉｎｅ）等があげられる。前記塩基は、例えば、２－アミノアデニン、６－メチル化プリン等のアルキル誘導体；２－プロピル化プリン等のアルキル誘導体；５－ハロウラシルおよび５－ハロシトシン；５－プロピニルウラシルおよび５－プロピニルシトシン；６－アゾウラシル、６－アゾシトシンおよび６－アゾチミン；５－ウラシル（プソイドウラシル）、４－チオウラシル、５－ハロウラシル、５－（２－アミノプロピル）ウラシル、５－アミノアリルウラシル；８－ハロ化、アミノ化、チオール化、チオアルキル化、ヒドロキシル化および他の８－置換プリン；５－トリフルオロメチル化および他の５－置換ピリミジン；７－メチルグアニン；５－置換ピリミジン；６－アザピリミジン；Ｎ－２、Ｎ－６、およびＯ－６置換プリン（２－アミノプロピルアデニンを含む）；５－プロピニルウラシルおよび５－プロピニルシトシン；ジヒドロウラシル；３－デアザ－５－アザシトシン；２－アミノプリン；５－アルキルウラシル；７－アルキルグアニン；５－アルキルシトシン；７－デアザアデニン；Ｎ６、Ｎ６－ジメチルアデニン；２、６－ジアミノプリン；５－アミノ－アリル－ウラシル；Ｎ３－メチルウラシル；置換１、２、４－トリアゾール；２－ピリジノン；５－ニトロインドール；３－ニトロピロール；５－メトキシウラシル；ウラシル－５－オキシ酢酸；５－メトキシカルボニルメチルウラシル；５－メチル－２－チオウラシル；５－メトキシカルボニルメチル－２－チオウラシル；５－メチルアミノメチル－２－チオウラシル；３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）ウラシル；３－メチルシトシン；５－メチルシトシン；Ｎ４－アセチルシトシン；２－チオシトシン；Ｎ６－メチルアデニン；Ｎ６－イソペンチルアデニン；２－メチルチオ－Ｎ６－イソペンテニルアデニン；Ｎ－メチルグアニン；Ｏ－アルキル化塩基等があげられる。また、プリンおよびピリミジンは、例えば、米国特許第３、６８７、８０８号、「Ｃｏｎｃｉｓｅ　Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ　Ｏｆ　Ｐｏｌｙｍｅｒ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ａｎｄ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ」、８５８～８５９頁、クロシュビッツ　ジェー　アイ（Ｋｒｏｓｃｈｗｉｔｚ　Ｊ．Ｉ．）編、Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ、１９９０、およびイングリッシュら（Ｅｎｇｌｉｓｃｈら）、Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ　Ｃｈｅｍｉｅ、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｅｄｉｔｉｏｎ、１９９１、３０巻、ｐ．６１３に開示されるものが含まれる。

　前記修飾ヌクレオチド残基は、これらの他に、例えば、塩基を欠失する残基、すなわち、無塩基のリボリン酸骨格を含んでもよい。また、前記修飾ヌクレオチド残基は、例えば、米国仮出願第６０／４６５、６６５号（出願日：２００３年４月２５日）、および国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ０４／０７０７０号（出願日：２００４年３月８日）に記載される残基が使用でき、本発明は、これらの文献を援用できる。

３．本発明の核酸分子の合成方法
　本発明の核酸分子の合成方法は、特に制限されず、従来公知の方法が採用できる。前記合成方法は、例えば、遺伝子工学的手法による合成法、化学合成法等があげられる。遺伝子工学的手法は、例えば、インビトロ転写合成法、ベクターを用いる方法、ＰＣＲカセットによる方法があげられる。前記ベクターは、特に制限されず、プラスミド等の非ウイルスベクター、ウイルスベクター等があげられる。前記化学合成法は、特に制限されず、例えば、ホスホロアミダイト法およびＨ－ホスホネート法等があげられる。前記化学合成法は、例えば、市販の自動核酸合成機を使用可能である。前記化学合成法は、一般に、アミダイトが使用される。前記アミダイトは、特に制限されず、市販のアミダイトとして、例えば、ＲＮＡ　Ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅｓ（２’－Ｏ－ＴＢＤＭＳｉ、商品名、三千里製薬）、ＡＣＥアミダイトおよびＴＯＭアミダイト、ＣＥＥアミダイト、ＣＥＭアミダイト、ＴＥＭアミダイト等があげられる。

４．発現ベクター
　本発明の発現ベクターは、前記本発明の核酸分子をコードするＤＮＡを含むことを特徴とする。本発明の発現ベクターは、前記ＤＮＡを含むことが特徴であり、その他の構成は、何ら制限されない。本発明の発現ベクターは、例えば、ベクターに発現可能なように前記ＤＮＡが挿入されている。前記ＤＮＡを挿入するベクターは、特に制限されず、例えば、一般的なベクターが使用でき、ウイルスベクターおよび非ウイルスベクター等があげられる。前記非ウイルスベクターは、例えば、プラスミドベクターがあげられる。

５．組成物
　本発明の発現抑制用組成物は、前述のように、ＴＧＦ－β１遺伝子の発現を抑制するための組成物であり、前記本発明の核酸分子を含むことを特徴とする。本発明の組成物は、前記本発明の核酸分子を含むことが特徴であり、その他の構成は、何ら制限されない。本発明の発現抑制用組成物は、例えば、発現抑制用試薬ということもできる。

　本発明によれば、例えば、前記ＴＧＦ－β１遺伝子が存在する対象に投与することで、前記ＴＧＦ－β１遺伝子の発現抑制を行うことができる。

　また、本発明の薬学的組成物は、前述のように、前記本発明の核酸分子を含むことを特徴とする。本発明の組成物は、前記本発明の核酸分子を含むことが特徴であり、その他の構成は何ら制限されない。本発明の薬学的組成物は、例えば、医薬品ということもできる。

　本発明によれば、例えば、前記ＴＧＦ－β１遺伝子が原因となる疾患の患者に投与することで、前記遺伝子の発現を抑制し、前記疾患を治療できる。前記疾患は、例えば、前述の通りであって、急性肺傷害、間質性肺炎/肺線維症等があげられる。本発明において、「治療」は、前述のように、例えば、前記疾患の予防、疾患の改善、予後の改善の意味を含み、いずれでもよい。

　本発明の発現抑制用組成物および薬学的組成物（以下、組成物という）は、その使用方法は、特に制限されず、例えば、前記ＴＧＦ－β１遺伝子を有する投与対象に、前記核酸分子を投与すればよい。

　前記投与対象は、例えば、細胞、組織または器官があげられる。前記投与対象は、例えば、ヒト、ヒトを除く非ヒト哺乳類等の非ヒト動物があげられる。前記投与は、例えば、ｉｎ　ｖｉｖｏでもｉｎ　ｖｉｔｒｏでもよい。前記細胞は、特に制限されず、例えば、前述のような細胞等があげられる。

　前記投与方法は、特に制限されず、例えば、投与対象に応じて適宜決定できる。前記投与対象が培養細胞の場合、例えば、トランスフェクション試薬を使用する方法、エレクトロポレーション法等があげられる。

　本発明の組成物は、例えば、本発明の核酸分子のみを含んでもよいし、さらにその他の添加物を含んでもよい。前記添加物は、特に制限されず、例えば、薬学的に許容された添加物が好ましい。前記添加物の種類は、特に制限されず、例えば、投与対象の種類に応じて適宜選択できる。

　本発明の組成物において、前記核酸分子は、例えば、前記添加物と複合体を形成してもよい。前記添加物は、例えば、複合化剤ということもできる。前記複合体形成により、例えば、前記核酸分子を効率よくデリバリーすることができる。前記核酸分子と前記複合化剤との結合は、特に制限されず、例えば、非共有結合があげられる。前記複合体は、例えば、包接複合体があげられる。

　前記複合化剤は、特に制限されず、ポリマー、シクロデキストリン、アダマンチン等があげられる。前記シクロデキストリンは、例えば、線状シクロデキストリンコポリマー、線状酸化シクロデキストリンコポリマー等があげられる。

　前記添加剤は、この他に、例えば、担体、標的細胞への結合物質、縮合剤、融合剤、賦形剤等があげられる。

６．発現抑制方法
　本発明の発現抑制方法は、前述のように、ＴＧＦ－β１遺伝子の発現を抑制する方法であって、前記本発明の核酸分子を使用することを特徴とする。本発明の発現抑制方法は、前記本発明の核酸分子を使用することが特徴であって、その他の工程および条件は、何ら制限されない。

　本発明の発現抑制方法は、例えば、前記ＴＧＦ－β１遺伝子が存在する対象に、前記核酸分子を投与する工程を含む。前記投与工程により、例えば、前記投与対象に前記核酸分子を接触させる。前記投与対象は、例えば、細胞、組織または器官があげられる。前記投与対象は、例えば、ヒト、ヒトを除く非ヒト哺乳類等の非ヒト動物があげられる。前記投与は、例えば、ｉｎ　ｖｉｖｏでもｉｎ　ｖｉｔｒｏでもよい。

　本発明の発現抑制方法は、例えば、前記核酸分子を単独で投与してもよいし、前記核酸分子を含む前記本発明の組成物を投与してもよい。前記投与方法は、特に制限されず、例えば、投与対象の種類に応じて適宜選択できる。

７．治療方法
　本発明の疾患の治療方法は、前述のように、前記本発明の核酸分子を、患者に投与する工程を含むことを特徴とする。本発明の治療方法は、前記本発明の核酸分子を使用することが特徴であって、その他の工程および条件は、何ら制限されない。本発明が対象とする疾患は、例えば、前述の通りであって、急性肺傷害、間質性肺炎/肺線維症等があげられる。

　本発明の治療方法は、例えば、前記本発明の発現抑制方法等を援用できる。前記投与方法は、特に制限されず、例えば、経口投与および非経口投与のいずれでもよい。
　本発明の治療方法における本発明の核酸分子の投与量は、前記疾患の治療上有効な量であれば特に制限されず、疾患の種類、重症度、投与対象の動物種、齢、体重、薬物受容性、投与経路等によって異なるが、通常、成人１回あたり約０．０００１～約１００ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．００１～約１０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．００５～約５ｍｇ／ｋｇであり得る。当該量を、例えば、１日３回～２週間に１回、好ましくは１日～１週間に１回の間隔で投与することができる。

８．核酸分子の使用
　本発明の使用は、前記ＴＧＦ－β１遺伝子の発現抑制のための、前記本発明の核酸分子の使用である。
　本発明はまた、ＴＧＦ－β１遺伝子の発現抑制、あるいは肺線維症または急性肺傷害の治療における使用のための、本発明の核酸分子を提供する。
　本発明はまた、ＴＧＦ－β１遺伝子の発現抑制剤、あるいは肺線維症または急性肺傷害の治療剤の製造のための、本発明の核酸分子の使用を提供する。

　以下、実施例等により、本発明を詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

（実施例１）Ａ５４９細胞における一本鎖核酸分子のＴＧＦ－β１遺伝子の発現抑制効果
（１）一本鎖核酸分子の合成
　以下に示す一本鎖核酸分子を、ホスホロアミダイト法に基づき、核酸合成機（商品名ＡＢＩ　Ｅｘｐｅｄｉｔｅ（登録商標）　８９０９　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　Ｓｙｓｔｅｍ、アプライドバイオシステムス）により合成した。前記合成には、ＲＮＡアミダイトとして、ＲＮＡ　Ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅｓ（２’－Ｏ－ＴＢＤＭＳｉ、商品名、三千里製薬）を用いた（以下、同様）。前記アミダイトの脱保護は、定法に従った。合成したＲＮＡは、ＨＰＬＣにより精製した。精製後のＲＮＡは、それぞれ凍結乾燥した。

　実施例の一本鎖核酸分子としてＰＨ－０００９を、参考例の一本鎖核酸分子として、Ｈａｍａｓａｋｉらが用いた一本鎖核酸分子ｎｋＲＮＡ（以下、ＮＫ－０１３３ともいう）、ＰｎｋＲＮＡ（以下、ＰＫ－００５１ともいう）（ＰＬｏＳ　ＯＮＥ、　７（８）、ｅ４２６５５、ｄｏｉ：１０．１３７１、２０１２、Ｔａｂｌｅ　Ｓ５）を、それぞれ上記のように合成した。ＰＨ－０００９およびＰｎｋＲＮＡにおいて、ＬｘおよびＬｙは、それぞれリンカー領域ＬｘおよびＬｙであり、それぞれ、Ｌ－プロリンジアミドアミダイトを用いて下記構造式とした。各配列において、下線部は、ヒトＴＧＦ－β１遺伝子の発現抑制配列である。
ＰＨ－０００９（配列番号３）
　5’-GCAGAGUACACACAGCAUAUACC-Ｌｘ-GGUAUAUGCUGUGUGUACUCUGCUU-3’　
ｎｋＲＮＡ（配列番号４）
　5’-AGCAGAGUACACACAGCAUAUACCCCACACCGGUAUAUGCUGUGUGUACUCUGCUUCUUCGG-3’
ＰｎｋＲＮＡ（配列番号５）
　5’-AGCAGAGUACACACAGCAUAUACC-Ｌｘ-GGUAUAUGCUGUGUGUACUCUGCUUC-Ｌｙ-G-3’

（２）ＴＧＦ－β１遺伝子の発現量の測定
　前記各ＲＮＡを、２０μｍｏｌ／Ｌとなるように、注射用蒸留水（大塚製薬）に溶解し、ＲＮＡ溶液を調製した。

　細胞は、Ａ５４９細胞（ＤＳファーマバイオメディカル）を使用した。培地は、１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用した。培養条件は、３７℃、５％ＣＯ_２下とした。

　まず、細胞を、前記培地中で培養し、その培養液を、２４穴プレートに、４００μＬずつ、５×１０^４細胞／ウェルとなるように分注した。さらに、前記ウェル中の細胞を２４時間培養した後、前記ＲＮＡをトランスフェクション試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用い、前記トランスフェクション試薬の添付プロトコールに従って、トランスフェクションした。具体的には、前記ウェルあたりの組成を以下のように設定し、トランスフェクションを行った。下記組成において、（Ｂ）は、Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、（Ｃ）は、２０μｍｏｌ／Ｌ　前記ＲＮＡ溶液であり、両者をあわせて９８．５μＬ添加した。なお、前記ウェルにおいて、前記ＲＮＡの最終濃度は、１ｎｍｏｌ／Ｌとした。

　トランスフェクション後、前記ウェル中の細胞を２４時間培養した後、ＲＮｅａｓｙ　Ｍｉｎｉ　Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ、オランダ）を用い、添付のプロトコールに従って、ＲＮＡを回収した。次に、逆転写酵素（商品名ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ　III、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用い、添付のプロトコールに従って、前記ＲＮＡからｃＤＮＡを合成した。そして、以下に示すように、合成した前記ｃＤＮＡを鋳型としてＰＣＲを行い、ＴＧＦ－β１遺伝子の発現量および内部標準であるβ－アクチン遺伝子の発現量を測定した。前記ＴＧＦ－β１遺伝子の発現量は、前記β－アクチン遺伝子の発現量により補正した。

　前記ＰＣＲは、試薬としてＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ　ＦａｓｔＳｔａｒｔ　ＤＮＡ　Ｍａｓｔｅｒ　ＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ　Ｉ（商品名、Ｒｏｃｈｅ）、機器としてＬｉｇｈｔ　Ｃｙｃｌｅｒ　ＤＸ４００（商品名、Ｒｏｃｈｅ）を用いた（以下、同様）。前記ＴＧＦ－β１遺伝子およびβ－アクチン遺伝子の増幅には、それぞれ、以下のプライマーセットを使用した。
ＴＧＦ－β１遺伝子用ＰＣＲプライマーセット
　　（配列番号６）　5’-TTGTGCGGCAGTGGTTGAGCCG-3’
　　（配列番号７）　5’-GAAGCAGGAAAGGCCGGTTCATGC-3’
β－アクチン遺伝子用プライマーセット
　　（配列番号８）　5’-GCCACGGCTGCTTCCAGCTCCTC-3’
　　（配列番号９）　5’-AGGTCTTTGCGGATGTCCACGTCAC-3’

　なお、コントロール１として、前記培養液に前記（Ｂ）液１００μＬのみを添加した細胞についても、遺伝子発現量を測定した（－）。また、コントロール２として、トランスフェクションにおいて、前記ＲＮＡ溶液を未添加とし、前記（Ａ）１．５μＬと前記（Ｂ）とを合計１００μＬ添加した以外は、同様にして処理した細胞についても、遺伝子発現量を測定した（ｍｏｃｋ）。

　補正後のＴＧＦ－β１遺伝子の発現量について、コントロール（－）の細胞における発現量を１として、各ＲＮＡを導入した細胞での発現量の相対値を求めた。

（３）結果
　これらの結果を、図５に示す。図５は、ＴＧＦ－β１遺伝子発現量の相対値を示すグラフであり、縦軸は、相対遺伝子発現量である。図５に示すように、全ての一本鎖核酸分子は、強い遺伝子発現抑制活性を示した。特に本発明のＰＨ－０００９は他の二つの一本鎖核酸分子を上回る強い遺伝子発現抑制活性を示すことがわかった。

（実施例２）一本鎖核酸分子のヒト血清中での安定性
　実施例の核酸分子として、前記実施例１のＰＨ－０００９を、比較例の核酸分子として、前記実施例１に示すＮＫ－０１３３とＰＫ－００５１を使用し、ヒト血清中での安定性を検討した。

（１）材料および方法
　まず、１×ＰＢＳに、前記核酸分子および正常ヒト血清（ＭＰ　Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）を混合した混合液３０μＬを、３７℃でインキュベートした。前記混合液３０μＬにおいて、前記核酸分子の添加量は、６０ｐｍｏｌとし、前記正常ヒト血清の添加量は、終濃度１０％とした。そして、インキュベート開始から、０分後、０．５分後、１分後、５分後、１０分後、３０分後、６０分後、１２０分後および２４０分後に、フェノール・クロロフォルム抽出によって反応を停止した。得られた抽出液を１５％ポリアクリルアミドゲルで電気泳動した後、ＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ　ＩＩ（商品名、Ｌｏｎｚａ）で染色し、Ｅ－ＢＯＸ－ＶＸ２（エムエス機器、東京）を用いて分析した。

（２）結果
　この結果を図６に示す。図６（Ａ）はＰＨ－０００９の血清に対する安定性を示す電気泳動の結果であり、図６（Ｂ）はＮＫ－０１３３の血清に対する安定性を示す電気泳動の結果であり、図６（Ｃ）はＰＫ－００５１の血清に対する安定性を示す電気泳動の結果である。各々の図において、レーン「Ｍ」は分子量マーカーであり、（ｍｉｎ）はインキュベート時間を示す。

　図６に示すように、比較例のＮＫ－０１３３とＰＫ－００５１は、インキュベート０．５分後において、速やかな分解反応がすでに開始しており、その結果、０．５～２４０分の全ての結果において、０分の結果よりも、核酸分子のサイズが小さくなったことが確認された。これに対して、本発明のＰＨ－０００９は、インキュベート時間の経過にともなう泳動度の変化、すなわち、分解による分子量の減少が、ほとんど確認されなかった。この結果から、本発明の核酸分子であるＰＨ－０００９は、ヒト血清中での高い安定性を有することが示された。

（実施例３）一本鎖核酸分子のダイサータンパク質に対する反応性
　実施例の核酸分子として、前記実施例１のＰＨ－０００９を、比較例の核酸分子として、前記実施例１に示すＮＫ－０１３３とＰＫ－００５１を使用し、ダイサータンパク質に対する反応性を検討した。

（１）材料および方法
　試薬としてＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　Ｈｕｍａｎ　Ｄｉｃｅｒ　Ｅｎｚｙｍｅ　Ｋｉｔ（商品名、Ｇｅｎｌａｎｔｉｓ）を用い、添付プロトコールに従って、前記ダイサータンパク質と前記核酸分子を含む反応液を調製し、これを３７℃でインキュベートした。インキュベート時間は、０、０．５、１、２、６、２４時間とした。所定時間インキュベート後の前記反応液に、前記試薬の反応停止液を加え、７Ｍ尿素－２０％ポリアクリルアミドゲル電気泳動を行った。その後、前記ポリアクリルアミドゲルを、ＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ　ＩＩ（商品名、Ｌｏｎｚａ）で染色し、ＣｈｅｍｉＤｏｃ（商品名、Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用して分析した。

（２）結果
　結果を図７に示す。図７はダイサータンパク質に対する反応性を示す電気泳動の結果であり、レーン「Ｍ」は分子量マーカー（２０、３０、４０、５０および１００　ｂａｓｅ）を示す。

　比較例のＮＫ－０１３３とＰＫ－００５１においては、前記ダイサータンパク質に対する反応が穏やかに進行し２４時間後でも反応が完結していなかった。これに対して、本発明のＰＨ－０００９は、前記ダイサータンパク質に速やかに反応し、遅くとも２４時間後までには反応が終了していた。
　以上の結果から、本発明の一本鎖核酸分子は、ダイサータンパク質に対して高い反応性を有していることがわかった。

（実施例４）肺線維症自然発症モデルマウスにおける肺線維化抑制効果
　肺線維症自然発症モデルマウス（非特許文献６および７記載のヒトＴＧＦ－β１トランスジェニックマウス、以下ＴＧマウスと呼ぶ）を用いて、本発明の核酸分子の肺線維化抑制効果を確認した。前記効果の確認は、肺組織中のハイドロキシプロリン量を指標として、非特許文献７記載の方法に従って行った。

（１）核酸分子溶液の調製
　実施例の核酸分子として、前記実施例１で合成したＰＨ－０００９を使用した。ＰＨ－０００９を、２μｇ／７５μＬとなるように滅菌生理食塩水に溶解して、核酸分子溶液を調製した。

（２）肺線維症自然発症モデルマウスへの核酸分子の投与
　前記核酸分子溶液を、ＭｙｃｒｏＳｐｒａｙｅｒ(R)（ＭＳＡ－２５０－Ｍ：ＰＥＮＮＣＥＮＴＵＲＹ社製）を用いて、１回／週、計４回マウスに気管内投与した。前記核酸分子溶液に対するネガティブコントロールとして、滅菌生理食塩水７５μＬを用いた。

　以下に、各投与群を示す。各投与群において、５匹の雄マウスを使用した。
・投与群１
　野生型マウスに、滅菌生理食塩水７５μＬ投与
・投与群２
　ＴＧマウスに、滅菌生理食塩水７５μＬ投与
・投与群３
　ＴＧマウスに、２μｇ／７５μＬ核酸分子溶液７５μＬ（０．１ｍｇ／ｋｇマウス体重）投与

（３）肺組織のサンプリング
　最初の投与から４週間後、前記マウスに、ペントバルビタール（１．６２ｍｇ／２００μＬ／頭）の腹腔内投与により麻酔をし、採血後のマウスの右心室より、ヘパリン含有生理食塩液で低速還流したのち、肺右葉を摘出した。

（４）肺組織中のＴＧＦ－β１量の測定
　前記肺右葉を、ビーズ式細胞破砕装置（ＭＳ－１００：トミー精工社製）を用いてホモジナイズし、一部を遠心し上清を回収した。回収した上清について、Ｈｕｍａｎ　ＴＧＦ－β１　ＥＬＩＳＡ　Ｓｅｔ（商品名、日本ベクトン・ディッキンソン社製）を用いてＴＧＦ－β１発現量を測定した。各投与群の定量結果は、投与群２のＴＧＦ－β１量を１００とし相対値として表した。

（５）肺組織中のハイドロキシプロリン量の測定
　前記ホモジネートを１１０℃で一晩インキュベートして乾燥させた後、再度ビーズ式細胞破砕装置を用いて粉砕した。その後、蒸留水１００ｍｌにゆっくりかき混ぜながら濃塩酸１００ｍｌを少しずつ注いで調製した６Ｎ　ＨＣｌを２ｍＬ加え、粉砕した肺右葉の懸濁液をあらかじめ重量を測定しておいたスクリュー管に移し、蓋をして１１０℃で一晩、ドラフト内でインキュベートした。その後、蓋を外し１１０℃で一晩、ドラフト内でインキュベートして乾燥させた。そこに２ｍＬのＰＢＳを加え６０℃で１時間インキュベートし、フィルター濾過したものを、ハイドロキシプロリン量測定用サンプルとした。測定は、非特許文献７に記載の方法に従って行った。

（６）結果
　その結果を、図８、９に示す。図８は、投与群２および３におけるＴＧＦ－β１量を示すグラフであり、縦軸は、肺組織中のＴＧＦ－β１量を示す。図９は、各投与群におけるハイドロキシプロリン量を示すグラフであり、縦軸は、肺組織中のハイドロキシプロリン量を示す。ＴＧマウス／核酸分子溶液（０．１ｍｇ／ｋｇ）の投与群３は、ＴＧマウス／滅菌生理食塩水の投与群２と比較して、肺組織中のＴＧＦ－β１量およびハイドロキシプロリン量が有意に抑制された。
　このことから、本発明の核酸分子であるＰＨ－０００９は、ｉｎ　ｖｉｖｏにおいてもターゲットであるＴＧＦ－β１の発現を抑制し、かつ肺線維化を抑制することが示された。

（実施例５）ブレオマイシン誘発肺線維症モデルマウスにおける肺線維化抑制効果
　次に、ブレオマイシン誘発肺線維症モデルマウス（非特許文献７）を用いて、本発明の核酸分子の肺線維化抑制効果を確認した。前記効果の確認は、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）中総細胞数、マウスの生存率、肺組織中のハイドロキシプロリン量を指標として、非特許文献７記載の方法に従って行った。

（１）モデルマウスの作製
　野生型（Ｃ５７ＢＬ／６）および実施例４のＴＧマウスに、ペントバルビタール（大日本住友製薬株式会社製）を腹腔内に投与後、マウス背部皮下にＡＬＺＥＴ浸透圧ポンプを埋め込んだ。なお、ＡＬＺＥＴ浸透圧ポンプには、ブレオマイシン生理食塩水溶液２００μＬをあらかじめ注入した（非特許文献７）。

（２）核酸分子溶液の調製
　実施例の核酸分子として、前記実施例１で合成したＰＨ－０００９を使用した。また、ネガティブコントロールとして、下記の配列を有するＰＨ－００００を使用した。ここでＬｘは下記構造式で表されるリンカーを示す。
ＰＨ－００００（配列番号１０）
5’- UACUAUUCGACACGCGAAGUUCC-Ｌｘ-GGAACUUCGCGUGUCGAAUAGUAUU-3’

　ＰＨ－０００９またはＰＨ－００００を、１００μｇ／５０μＬとなるように滅菌生理食塩水に溶解して、核酸分子溶液を調製した。

（３）ブレオマイシン誘発肺線維モデルマウスへの核酸分子の投与
　ブレオマイシン投与開始後３、５および７日目に、前記核酸分子溶液をマウスに気管内投与した。正常対照として、野生型マウスに滅菌生理食塩水５０μＬを投与したものを用いた。

　以下に、各投与群を示す。
・投与群１
　ブレオマイシン投与野生型マウス（ｎ＝７）に、滅菌生理食塩水５０μＬ投与
・投与群２
　ブレオマイシン投与ＴＧマウスに、１００μｇ／５０μＬＰＨ－００００溶液５０μＬ投与
・投与群３
　ブレオマイシン投与ＴＧマウスに、１００μｇ／５０μＬＰＨ－０００９溶液５０μＬ投与
　各投与群におけるマウスの生存を、ブレオマイシン投与開始から２１日間モニタリングした。

（４）ＢＡＬＦ細胞数および肺組織中のハイドロキシプロリン量の測定
　ブレオマイシン投与開始後２１日目に、ペントバルビタールをマウス腹腔内に投与し、麻酔下のマウスの頚部皮膚および筋肉を剥離し気管を露出させた。頚静脈から全採血し致死させた後、留置針を用いて生理食塩水を気管内へ注入し、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）を回収した。次いで、開胸し、生理食塩水で灌流を行い、肺を摘出した。
　回収したＢＡＬＦ中の総細胞数は、気管支肺胞洗浄の当日、nucleocounter（ChemoMetec, Allerod, Denmark）でカウントし、サイトスピン（Labsystems Japan）法で細胞標本を作製し、ギムザ染色（Merck Japan）を行い、細胞分画を算定した。また、肺組織中のハイドロキシプロリン量の測定は、実施例４と同様にして行った。

（５）結果
　その結果を、図１０～１２に示す。図１０は、各投与群における肺線維症に伴う炎症の程度を示すグラフであり、横軸は、ＢＡＬＦ中の総細胞数を示す。図１１は、各投与群における生存曲線を示すグラフであり、縦軸は累積生存率を示す。図１２は、肺組織の線維化の程度を示すグラフであり、横軸は、肺組織中のハイドロキシプロリン量を示す。ＴＧマウス／ＰＨ－０００９溶液の投与群３では、ＴＧマウス／ＰＨ－００００の投与群２と比較して、マウスの生存率が顕著に改善され、また、ＢＡＬＦ細胞数および肺組織中のハイドロキシプロリン量が有意に抑制された。
　このことから、本発明の核酸分子であるＰＨ－０００９は、ｉｎ　ｖｉｖｏにおいて、肺線維症に伴う炎症および肺線維化を抑制し、肺線維症に対して治療効果を示すことが確認された。

（実施例６）ＬＰＳ誘発肺線維症／急性肺傷害併発モデルマウスにおける炎症抑制効果および安全性
　ＬＰＳ投与により肺線維症と急性肺傷害とを併発したマウスを用いて、本発明の核酸分子による治療効果と副作用を調べた。治療効果の確認は、ＢＡＬＦ中総細胞数を指標として、また、副作用有無の確認は、ＢＡＬＦ中のインターフェロン（ＩＦＮ）－γおよび－βの発現量を指標にして、非特許文献７記載の方法に従って行った。

（１）核酸分子溶液の調製
　実施例の核酸分子として、前記実施例１で合成したＰＨ－０００９を、ネガティブコントロールとして、ＰＨ－００００を使用した。また、参考例として、実施例１で合成したＰＫ－００５１を、ネガティブコントロールとして、下記の配列を有するＰＫ－００００を使用した。ここでＬｘおよびＬｙは下記構造式で表されるリンカーを示す。
ＰＫ－００００（配列番号１１）
5’- AUACUAUUCGACACGCGAAGUUCC-Ｌｘ-GGAACUUCGCGUGUCGAAUAGUAUUC-Ｌｙ-G -3’

　上記各核酸分子を５０μｇ／５０μＬとなるように蒸留水に溶解して、核酸分子溶液を調製した。

（２）核酸分子およびＬＰＳの投与
　０、１、２日目に、上記各核酸分子溶液５０μＬを計３回、実施例４のＴＧマウスに経鼻投与した。３回目の核酸分子投与から６時間後にＬＰＳ（１００μｇ／７５μＬ）を気管内投与して、肺線維症／急性肺傷害を誘発した。

　以下に、各投与群を示す。
・投与群１
　蒸留水５０μＬを３回投与後、滅菌生理食塩水７５μＬ投与（ｎ＝４）
・投与群２
　滅菌生理食塩水５０μＬを３回投与後、ＬＰＳ溶液７５μＬ投与（ｎ＝５）
・投与群３
　ＰＫ－００００（５０μｇ）を３回投与後、ＬＰＳ溶液７５μＬ投与（ｎ＝４）
・投与群４
　ＰＫ－００５１（５０μｇ）を３回投与後、ＬＰＳ溶液７５μＬ投与（ｎ＝５）
・投与群５
　ＰＨ－００００（５０μｇ）を３回投与後、ＬＰＳ溶液７５μＬ投与（ｎ＝３）
・投与群６
　ＰＨ－０００９（５０μｇ）を３回投与後、ＬＰＳ溶液７５μＬ投与（ｎ＝５）

（３）ＢＡＬＦ中の総細胞数およびＩＦＮ量の測定
　ＬＰＳ投与２４時間後、麻酔（ペントバルビタ―ルナトリウム）による安楽死、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）を行った。ＢＡＬＦ中の総細胞数は、実施例５と同様にして算定した。ＢＡＬＦ中のＩＦＮ量は、ＩＦＮ－γ（BD Bioscience）およびＩＦＮ－β（PBL Biomedical Laboratories）測定用キットを用いて、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）にて測定した。

（４）結果
　その結果を、図１３、１４に示す。図１３は、各投与群における肺線維症に伴う炎症の程度を示すグラフであり、横軸は、ＢＡＬＦ中の総細胞数を示す。図１４は、各投与群におけるＢＡＬＦ中ＩＦＮ（上：ＩＦＮ－γ、下：ＩＦＮ－β）量を示すグラフであり、縦軸は、ＢＡＬＦ中のＩＦＮ濃度を示す。ＴＧマウス／ＰＨ－０００９溶液の投与群６では、ＴＧマウス／ＰＨ－００００の投与群５と比較して、ＢＡＬＦ細胞数が有意に抑制された。ＰＫ－００５１との比較でも、有意差はないものの、ＢＡＬＦ細胞数は減少傾向であった。一方、ＢＡＬＦ中のＩＦＮ量は、いずれの核酸分子投与群でも、コントロールと比較して有意差は認められなかった。
　このことから、本発明の核酸分子であるＰＨ－０００９は、肺線維症に急性肺傷害を併発した患者に対しても、ｉｎ　ｖｉｖｏにおいて、炎症を抑制し治療効果を示すことが確認された。また、該核酸分子投与による副作用は認めらなかったことから、ＰＨ－０００９は、治療上有効な量において、ヒトを含む動物に安全に投与し得ることが示唆された。

　以上、実施形態を参照して本願発明を説明したが、本願発明は、上記実施形態に限定されるものではない。本願発明の構成や詳細には、本願発明のスコープ内で当業者が理解しうる様々な変更をすることができる。

　この出願は、平成２５年１２月１６日に出願された特願２０１３－２５９５００および平成２６年４月４日に出願された特願２０１４－０７８０８３を基礎とする優先権を主張し、その開示の全てをここに取り込む。

　本発明の一本鎖核酸分子によれば、ＴＧＦ－β１遺伝子の発現抑制が可能である。このため、本発明は、ＴＧＦ－β１遺伝子の発現が原因となる疾患、例えば、肺線維症および急性肺傷害等の治療に有効である。

Claims

　ＴＧＦ－β１遺伝子の発現を抑制する一本鎖核酸分子であって、
領域（Ｘ）、リンカー領域（Ｌｘ）および領域（Ｘｃ）のみからなり、
前記リンカー領域（Ｌｘ）が、ピロリジン骨格およびピペリジン骨格の少なくとも一方を含む非ヌクレオチド構造を有し、
かつ前記領域（Ｘ）および前記領域（Ｘｃ）の少なくとも一方が、ＴＧＦ－β１遺伝子の発現を抑制する発現抑制配列を含むことを特徴とする核酸分子。
　５’側から３’側にかけて、前記領域（Ｘｃ）、リンカー領域（Ｌｘ）および領域（Ｘ）を、当該順序で有してなる、請求項１記載の一本鎖核酸分子。
　前記リンカー領域（Ｌｘ）が、下記式（Ｉ）で表わされる、請求項１または２記載の一本鎖核酸分子。

前記式中、
Ｘ^１およびＸ^２は、それぞれ独立して、Ｈ_２、Ｏ、ＳまたはＮＨであり；
Ｙ^１およびＹ^２は、それぞれ独立して、単結合、ＣＨ_２、ＮＨ、ＯまたはＳであり；
Ｒ^３は、環Ａ上のＣ－３、Ｃ－４、Ｃ－５またはＣ－６に結合する水素原子または置換基であり；
Ｌ^１は、ｎ個の原子からなるアルキレン鎖であり、ここで、アルキレン炭素原子上の水素原子は、ＯＨ、ＯＲ^ａ、ＮＨ_２、ＮＨＲ^ａ、ＮＲ^ａＲ^ｂ、ＳＨ、もしくはＳＲ^ａで置換されても置換されていなくてもよく、または、
Ｌ^１は、前記アルキレン鎖の一つ以上の炭素原子が、酸素原子で置換されたポリエーテル鎖であり、
ただし、Ｙ^１が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ^１に結合するＬ^１の原子は炭素であり、ＯＲ^１に結合するＬ^１の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接せず；
Ｌ^２は、ｍ個の原子からなるアルキレン鎖であり、ここで、アルキレン炭素原子上の水素原子は、ＯＨ、ＯＲ^ｃ、ＮＨ_２、ＮＨＲ^ｃ、ＮＲ^ｃＲ^ｄ、ＳＨもしくはＳＲ^ｃで置換されても置換されていなくてもよく、または、
Ｌ^２は、前記アルキレン鎖の一つ以上の炭素原子が、酸素原子で置換されたポリエーテル鎖であり、
ただし、Ｙ^２が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ^２に結合するＬ^２の原子は炭素であり、ＯＲ^２に結合するＬ^２の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接せず；
Ｒ^ａ、Ｒ^ｂ、Ｒ^ｃおよびＲ^ｄは、それぞれ独立して、置換基または保護基であり；
ｌは、１または２であり；
ｍは、０～３０の範囲の整数であり；
ｎは、０～３０の範囲の整数であり；
環Ａは、前記環Ａ上のＣ－２以外の１個の炭素原子が、窒素、酸素または硫黄で置換されてもよく、
前記環Ａ内に、炭素－炭素二重結合または炭素－窒素二重結合を含んでもよく、
前記領域（Ｘｃ）および前記領域（Ｘ）は、それぞれ、－ＯＲ^１－または－ＯＲ^２－を介して、前記リンカー領域（Ｌｘ）に結合し、
ここで、Ｒ^１およびＲ^２は、存在しても存在しなくてもよく、存在する場合、Ｒ^１およびＲ^２は、それぞれ独立して、ヌクレオチド残基または前記構造（Ｉ)である。
　前記領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）および前記５’側領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）が、下記式（３）または式（５）の条件を満たす、請求項２または３記載の一本鎖核酸分子。
　　　Ｘ＞Ｘｃ　・・・（３）
　　　Ｘ＝Ｘｃ　・・・（５）
　前記領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）および前記５’側領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）が、下記式（１１）の条件を満たす、請求項４記載の一本鎖核酸分子。
　　　Ｘ－Ｘｃ＝１、２または３　・・・（１１）
　前記領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）が、１９塩基～３０塩基である、請求項１から５のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子。
　ＲＮＡ分子である、請求項１から６のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子。
　前記一本鎖核酸分子において、塩基数の合計が、３８塩基以上である、請求項１から７のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子。
　前記発現抑制配列として、下記配列番号１の塩基配列を含む、請求項１から８のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子。
配列番号１　3’-CGUCUCAUGUGUGUCGUAU-5’
　前記一本鎖核酸分子の塩基配列が、配列番号３の塩基配列である、請求項９記載の一本鎖核酸分子。
　ＴＧＦ-β１遺伝子の発現を抑制するための組成物であって、
請求項１から１０のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子を含むことを特徴とする、ＴＧＦ-β１遺伝子の発現抑制用組成物。
　請求項１から１０のいずれか一項に記載の核酸分子を含むことを特徴とする、薬学的組成物。
　肺線維症または急性肺傷害の治療用である、請求項１２記載の薬学的組成物。
　ＴＧＦ－β１遺伝子の発現を抑制する方法であって、
請求項１から１０のいずれか一項に記載の核酸分子を使用することを特徴とする発現抑制方法。
　前記核酸分子を、細胞、組織または器官に投与する工程を含む、請求項１４記載の発現抑制方法。
　前記核酸分子を、ｉｎ　ｖｉｖｏまたはｉｎ　ｖｉｔｒｏで投与する、請求項１５記載の発現抑制方法。
　請求項１から１０のいずれか一項に記載の核酸分子を、患者に投与する工程を含むことを特徴とする肺線維症の治療方法。
　請求項１から１０のいずれか一項に記載の核酸分子を、患者に投与する工程を含むことを特徴とする急性肺傷害の治療方法。
　ＴＧＦ－β１遺伝子の発現抑制における使用のための、請求項１から１０のいずれか一項に記載の核酸分子。
　ＴＧＦ－β１遺伝子の発現抑制剤の製造のための、請求項１から１０のいずれか一項に記載の核酸分子の使用。