WO2015008949A1 - 간이 동물세포 배양기 및 이를 이용한 동물세포 배양방법 - Google Patents

간이 동물세포 배양기 및 이를 이용한 동물세포 배양방법 Download PDF

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WO2015008949A1
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culture
culture vessel
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이우종
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한국생산기술연구원
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Definitions

  • the present invention relates to an animal cell incubator and a method for culturing animal cells using the same, and more particularly, it is possible not only to concentrate and culture animal cells at a high concentration, but also to concentrate useful proteins such as cell growth promoting factors or proteins to be targeted.
  • the present invention relates to a simple animal cell incubator and an animal cell culture method using the same.
  • the production of target protein through animal cell culture is determined by the product of the number of cells and the amount of protein produced per unit cell. Therefore, in order to increase the production of the target protein, a high concentration cell culture that increases the number of animal cells that produce the protein, or a method of increasing the protein production per unit cell is required.
  • High concentration cell culture requires optimized medium composition, which is most important for animal cell growth, and particularly rapid medium replacement.
  • Korean Patent Publication No. 10-2009-0059448 discloses a "portable small animal cell incubator and its manufacturing method".
  • the portable small animal cell incubator presented above has a problem that rapid medium exchange is impossible.
  • An object of the present invention is to solve the above problems, to provide a simple animal cell incubator and animal cell culture method using the same that can be easily cultured animal cells with a simple structure.
  • Another object of the present invention is to provide an animal cell incubator capable of rapid medium exchange and high cell culture and an animal cell culture method using the same.
  • Still another object of the present invention is to provide an animal cell incubator capable of preventing external leakage of useful proteins or target proteins such as growth promoters during medium exchange, and animal cell culture methods using the same.
  • the simple animal cell incubator of the present invention comprises: a culture vessel in which a culture solution is accommodated; An animal cell receptor coupled to the upper portion of the culture vessel; A cell support housed in the animal cell receptor and to which an animal cell is attached; It characterized in that it comprises a cover for covering the top of the culture vessel.
  • the animal cell receptor is configured so that the animal cells and proteins inside are not discharged to the outside, and nutrients and waste products are discharged to the outside.
  • the animal cell receptor is configured so that the animal cells inside are not discharged to the outside, and proteins, nutrients and waste products are discharged to the outside.
  • the animal cell receptor may be formed of any one of a semi-permeable film, a mesh network, a nonwoven material or a woven material.
  • the animal cell receptor comprises: a receptor body in which the animal cells are accommodated; It extends radially outward on the upper portion of the receptor body includes a coupling frame that is engaged to the upper portion of the culture vessel, the plate surface of the receptor body is formed through a plurality of micro-pores through which the culture fluid flows out.
  • the lower portion of the culture vessel is formed with a predetermined length of the medium inlet pipe for introducing the medium from the outside.
  • the culture fluid outlet pipe for discharging the culture medium to the outside is formed in the upper portion of the culture vessel to extend a certain length.
  • an inlet hole for introducing carbon dioxide into the culture vessel is formed on the surface of the cover.
  • a sterilization filter for removing the bacteria contained in the carbon dioxide flowing through the cover.
  • the cell support is formed to have a lattice-shaped porous structure.
  • the cell support is formed to have a three-dimensional shape.
  • the outer peripheral edge of the upper region of the culture vessel is provided with a first screw thread
  • the lower region is provided in a conical shape
  • the inner surface of the cover is provided with a second screw thread screwed with the first screw thread.
  • the present invention is a culture vessel in which the culture medium is accommodated; An animal cell receptor coupled to the upper portion of the culture vessel; A cell support housed in the animal cell receptor and to which an animal cell is attached; In a simple animal cell incubator comprising a cover for covering the top of the culture vessel, the medium is filled, and provides an animal cell culture method comprising culturing the cell support to which the animal cells are attached to the animal cell receptor. .
  • the medium may be replaced repeatedly by opening the culture vessel cover according to the passage of animal cell culture time.
  • the present invention is a culture vessel containing a culture solution; An animal cell receptor coupled to the upper portion of the culture vessel; A cell support housed in the animal cell receptor and to which an animal cell is attached; A medium inlet tube including a cover to cover an upper portion of the culture vessel and having a predetermined length extending at a lower portion of the culture vessel to introduce a medium from the outside; And a culture fluid drainage tube extending from the upper portion of the culture vessel to a predetermined length to discharge the internal culture solution to the outside, and filling the medium with the cell support to which the animal cells are attached. It provides a method for culturing animal cells, characterized in that cultured by seating on. In this case, the medium may be repeatedly replaced by using a medium inlet tube and a culture fluid outlet tube according to the passage of time of animal cell culture.
  • the present invention is a culture vessel containing a culture solution; An animal cell receptor coupled to the upper portion of the culture vessel; A cell support housed in the animal cell receptor and to which an animal cell is attached; Comprising a cover for covering the upper portion of the culture vessel, the surface of the cover is a simple animal cell incubator is formed through the inlet hole for introducing carbon dioxide into the culture vessel, the medium is filled, the cells to which the animal cells are attached It provides an animal cell culture method characterized in that the support is mounted on the animal cell receptor and cultured.
  • the medium is preferably pH can be adjusted by supplying carbon dioxide to the inlet hole formed in the culture vessel cover.
  • the present invention is a culture vessel containing a culture solution; An animal cell receptor coupled to the upper portion of the culture vessel; A cell support housed in the animal cell receptor and to which an animal cell is attached; A medium inlet tube including a cover to cover an upper portion of the culture vessel and having a predetermined length extending at a lower portion of the culture vessel to introduce a medium from the outside; And a culture fluid outlet tube extending to a predetermined length at an upper portion of the culture vessel to discharge the culture medium to the outside, wherein the cover animal has a inlet hole through which an inlet for introducing carbon dioxide into the culture vessel is formed therethrough.
  • a medium is filled, and an animal cell culturing method is provided by culturing a cell support to which an animal cell is attached to an animal cell receptor.
  • the medium is preferably pH can be adjusted by supplying carbon dioxide to the inlet hole formed in the culture vessel cover.
  • Simple animal cell incubator according to the present invention can be used simply because it is a simple structure of a small size.
  • carbon dioxide can be supplied through the inlet of the cover if necessary, so that the pH of the culture solution can be properly maintained.
  • FIG. 1 is a perspective view showing the configuration of a simple animal cell incubator according to a preferred embodiment of the present invention
  • Figure 2 is an exploded perspective view showing the decomposition of the configuration of a simple animal cell incubator according to a preferred embodiment of the present invention
  • Figure 3 is a schematic diagram showing a culturing process of a simple animal cell incubator according to a preferred embodiment of the present invention
  • Figure 4 is an exploded perspective view showing the decomposition of the configuration of a simple animal cell incubator according to another embodiment of the present invention
  • Figure 5 is a schematic diagram schematically showing the culturing process of a simple animal cell incubator according to another embodiment of the present invention.
  • Figure 6 is an exploded perspective view showing the configuration of a simple animal cell incubator according to another embodiment of the present invention.
  • container body 111a first screw thread
  • FIG. 1 is a perspective view showing the configuration of a simple animal cell incubator 100 according to a preferred embodiment of the present invention
  • Figure 2 is an exploded perspective view showing the decomposition of the configuration of a simple animal cell incubator 100.
  • the culture vessel 110 in which the culture solution A is accommodated, and the animal cell receptor 120 coupled to the top of the culture vessel 110.
  • the cell support 130 is accommodated inside the animal cell receptor 120, the animal cell (M) is seated and grown, the cover 140 is coupled to the top of the culture vessel 110, the cover 140 and It includes a bactericidal filter 150 disposed between the animal cell receptor 120.
  • the culture vessel 110 is a medium is accommodated therein, the animal cell receptor 120 is coupled to the top.
  • the culture vessel 110 is formed in the form of a tube having a certain length.
  • the lower portion 111b of the culture vessel 110 is formed in a pointed shape as shown, and the first screw thread 111a for coupling with the cover 140 is formed on the outer circumferential surface of the upper portion.
  • the culture vessel 110 may be provided in various sizes depending on the use.
  • Animal cell receptor 120 is coupled to the top of the culture vessel 110, the cell support 130 is accommodated therein.
  • the animal cell receptor 120 prevents useful cells such as animal cells and growth promoters and target proteins from being discharged together with the culture medium (A) during the medium exchange of the culture vessel 110.
  • the animal cell receptor 120 is configured to be discharged to the outside, the animal cells inside, the protein, nutrients and waste products to the outside. Can be.
  • the animal cell receptor 120 includes a receptor body 121 in which the cell support 130 is accommodated, and a coupling frame 123 formed on an upper portion of the receptor body 121 and engaged to an upper end of the culture vessel 110. do.
  • Receptor body 121 is a medium, nutrients and waste products can be flowed in and out, the animal cells and the useful protein or target protein inside the receptor body 121 is formed in a form that is impossible to outflow to the outside. At this time, if necessary, the receptor body 121, the medium, nutrients, waste products and proteins can be flowed in, the animal cells inside the receptor body 121 may be formed in a form that is not possible to leak to the outside. To this end, the receptor body 121 may be formed of a semi-permeable membrane material or a mesh network, or may be formed of a nonwoven material or a woven material.
  • the plate surface of the receptor body 121 is formed with a plurality of through-holes 121a for the smooth flow of the culture solution.
  • the micro-pores 121a are formed smaller than the size of the protein and the animal cells to prevent the outflow of the protein and the animal cells.
  • the micro-pores 121a may be formed smaller than the size of the animal cells, thereby preventing only the animal cells from passing through, and passing through proteins, media, nutrients, and waste products to the outside.
  • Coupling frame 123 is formed to extend a predetermined area radially outward on the upper portion of the receiver body 121.
  • the animal cell receptor 120 is mounted on the top of the culture vessel 110 to be fixed in position.
  • Coupling frame 123 is the outer diameter is formed the same as the outer diameter of the culture vessel 110 or a short length.
  • the coupling frame 123 is provided with an outer diameter that can be mounted on the upper portion of the culture vessel 110, it is formed shorter than the inner diameter of the cover 140. This prevents the interference of the cover 140 is coupled to the culture vessel 110.
  • the cell support 130 is accommodated inside the animal cell receptor 120 to allow the animal cells to rest and grow.
  • the cell support 130 is a structure that helps to attach and proliferate animal cells.
  • the cell support 130 is formed in a three-dimensional solid shape in the form of a lattice.
  • the cell support 130 forms a three-dimensional shape in a shape in which the horizontal support 131, the vertical support 133, and the vertical support 135 are orthogonal to each other.
  • Each animal cell is seated and propagated in porous pores between the horizontal support 131, the vertical support 133, and the vertical support 135.
  • the cell support 130 may be formed by stacking biodegradable polymer filaments.
  • the cover 140 is coupled to the upper portion of the culture vessel 110 to seal the culture vessel 110.
  • the cover 140 is formed of a cover body 141 covering the upper portion of the culture vessel 110 and a plurality of inlets 143 formed through the plate surface of the cover body 141 to introduce carbon dioxide into the inside.
  • a second screw thread 141a is formed inside the cover body 141 to correspond to the first screw thread 111a of the container body 111.
  • the first screw thread 111a and the second screw thread 141a are formed in the form of male and female threads and screwed together.
  • the inlet 143 supplies carbon dioxide into the culture vessel 110.
  • Carbon dioxide prevents the pH of a culture from changing rapidly due to an equilibrium reaction with sodium bicarbonate in the medium. This serves as a buffer for controlling the culture in the range of pH 6.9-7.4 that is optimal for the growth of animal cells.
  • the germicidal filter 150 is disposed between the cover 140 and the culture vessel 110 to remove various germs contained in the carbon dioxide introduced through the inlet 143.
  • the antibacterial filter 150 is integrally coupled to the inside of the cover 140. As a result, when the cover 140 is separated from the culture vessel 110, the sterilization filter 150 is also separated, and when the cover 140 is coupled to the culture vessel 110, the cover 140 is coupled together.
  • the antibacterial filter 150 is seated on the outer periphery of the animal cell receptor 120 separately from the cover 140, the cover 140 is coupled to the culture vessel 110 by screwing. When pressurized to the inner surface of the cover 140 by a bonding force can be fixed.
  • the manager inserts a medium into the culture vessel 110 at a certain height, and inserts the animal cell receptor 120. Inside the animal cell receptor 120, a cell support 130 to which an animal cell (M) is attached is accommodated. The cover 140 to which the antibacterial filter 150 is coupled is coupled to the upper portion of the culture vessel 110. At this time, the supply height of the medium in the culture vessel 110 is supplied to the height (h1, h2) that the animal cells of the animal cell receptor 120 can be immersed.
  • the nutrient in the medium flows into the animal cell receptor 120 by the semi-permeable membrane characteristic of the animal cell receptor 120 and is in contact with the animal cell (M) and is used for the growth of the animal cell.
  • the waste of the animal cells (M) that are discharged to the outside of the cell as the animal cells grow out of the animal cell receptor 120 is mixed with the medium.
  • the nutrients in the medium are gradually depleted and the concentration of waste products discharged from animal cells increases.
  • the medium is in the state of the culture medium, in which various wastes discharged from the animal cells gradually accumulate.
  • the manager After the start of the culture, if a certain amount of waste is accumulated after a certain time, the nutrients are depleted, the manager opens the cover 140 and pulls up the animal cell receptor 120 in the facet (not shown) from the culture vessel 110 After separation, the culture fluid with the accumulated waste is discharged to the outside. Then, the clean medium is again administered to the culture vessel 110 and the animal cell receptor 120 is coupled to the culture vessel 110 again with a facet (not shown), and then the cover 140 is closed.
  • the micro-hole 121a may be formed larger than the protein and smaller than the animal cell to confine only the animal cell and discharge the protein to the outside.
  • Figure 4 is an exploded perspective view showing the configuration of a simple animal cell incubator (100a) according to another embodiment of the present invention
  • Figure 5 is a culture process of a simple animal cell incubator (100a) according to another embodiment of the present invention It is a schematic diagram showing.
  • the simple animal cell incubator 100 according to the preferred embodiment of the present invention described above had to separate the cover 140 and separate the animal cell receptor 120 to the outside for medium exchange.
  • the simple animal cell incubator 100a according to another embodiment of the present invention is capable of exchanging a culture medium and a medium in a state in which the animal cell receptor 120 is accommodated in the culture vessel 110a.
  • the simple animal cell incubator 100a according to another embodiment of the present invention has a medium inlet tube 113 protruding from the medium B into the lower portion of the culture vessel 110a, and the culture solution A thereon. Culture medium outlet pipe 115 for discharging the outside is formed to protrude.
  • the medium is introduced into the medium inlet tube 113 while the animal cell receptor 120 is coupled to the culture vessel 110a of the simple animal cell incubator 100a.
  • a valve is connected to the medium inlet pipe 113 and the culture fluid outlet 115 to open and close the media inlet and the culture fluid outlet.
  • the manager may open a valve (not shown) on the culture fluid outlet pipe 115 side or use an outflow syringe (not shown) in the culture container 110a.
  • the culture solution A is discharged to the outside.
  • the valve (not shown) of the medium inlet pipe 113 is opened or a fresh medium B is introduced into the culture vessel 110a by using an inlet syringe (not shown). do.
  • the animal cell receptor 120 is accommodated in the culture vessel 110a, but the outflow of animal cells and proteins is blocked by the semi-permeable membrane characteristic of the animal cell receptor 120.
  • the exchange of the medium and the culture solution may be performed independently of each other as described above, or may be continuously performed in some cases.
  • FIG. 6 is an exploded perspective view showing the configuration of a simple animal cell incubator (100b) according to another embodiment of the present invention.
  • the simple animal cell incubators 100 and 100a of the two embodiments described above are formed with an inlet 143 through which carbon dioxide is introduced into the cover 140, but according to another embodiment, the simple animal cell incubator 100b is an inlet 143. Is not formed.
  • the pH of the culture solution is adjusted by adding carbonate ions to the medium introduced through the medium inlet pipe 113. Carbon dioxide dissolved carbonic acid solution is introduced through the medium together to adjust the pH of the culture solution can achieve the same effect as in the previous two cases.
  • the inflow of various bacteria from the outside is also blocked at the source, so that the structure of the germicidal filter 150 may be omitted.

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Abstract

본 발명은 간이 동물세포 배양기 및 이를 이용한 동물세포 배양방법에 관한 것으로서, 배양액이 수용되는 배양용기와; 상기 배양용기의 상부에 결합되는 동물세포수용체와; 상기 동물세포수용체의 내부에 수용되며 동물세포가 부착되는 세포지지체와; 상기 배양용기의 상부를 커버하는 커버를 포함하는 간이 동물세포 배양기를 제공하고, 이를 이용한 동물세포 배양방법을 제공한다.

Description

간이 동물세포 배양기 및 이를 이용한 동물세포 배양방법
본 발명은 동물세포 배양기 및 이를 이용한 동물세포 배양방법에 관한 것으로, 보다 자세히는 동물세포를 고농도로 농축 배양할 수 있을 뿐만 아니라, 세포 생장 촉진 인자 등의 유용 단백질 또는 타겟으로 하는 단백질의 농축도 가능한 간이 동물세포 배양기 및 이를 이용한 동물세포 배양방법에 관한 것이다.
세포배양을 이용하여 타겟 단백질을 생산하는 방법으로 동물세포를 이용하는 방법이 있다. 동물세포 배양을 통한 타겟 단백질의 생산량은 세포 수와 단위 세포 당 단백질 생산량의 곱으로 결정된다. 따라서, 타겟 단백질의 생산량을 높이기 위해서는 단백질을 생산하는 동물세포의 수를 늘리는 고농도 세포배양이나, 단위 세포당 단백질 생산량을 높이는 방법이 필요하다.
고농도 세포배양을 위해서는 동물세포의 생장에 가장 중요한 최적화된 배지조성이 요구되며, 특히나 빠른 배지의 교체가 요구된다.
한편, 동물세포 배양에 관한 특허로는 대한민국 등록특허 제10-0679112호 (발명의 명칭: 동물세포 배양방법)이 있다. 상기 문헌에 기재된 동물세포배양기는 동물세포의 배양을 위해 사용될 수 있으나, 복잡한 구조를 갖으므로 전체 부피가 커서 간단한 동물세포 배양에 적합하지 않은 단점이 있었다.
이러한 문제를 해결하기 위해 대한민국 공개특허 제10-2009-0059448호에 “휴대용 소형 동물 세포 배양기 및 그 제조방법”이 제시된 바 있다. 그러나, 상기 제시된 휴대용 소형 동물 세포 배양기는 빠른 배지의 교환이 불가능한 문제가 있다.
고농도의 동물세포의 배양을 유도할 경우, 동물세포가 농축되어 배양되므로 빠른 배지의 교체가 요구된다. 하지만 종래 휴대용 소형 동물 세포 배양기는 빠른 배지 교환이 어려우며, 배지 교환시 동물세포에 의해 이미 생성된 생장 촉진인자 등의 유용 단백질 및 타겟 단백질도 함께 빠져나가 희석되므로, 타겟 단백질 생산량을 높이려는 원래 목적에 반하는 결과를 초래한다.
본 발명의 목적은 상술한 문제를 해결하기 위한 것으로, 간단한 구조로 간편하게 동물세포를 배양할 수 있는 간이 동물세포 배양기 및 이를 이용한 동물세포 배양방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 신속한 배지교환이 가능하여 고농도 세포배양이 가능한 동물세포 배양기 및 이를 이용한 동물세포 배양방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 배지교환 시 생장 촉진인자 등의 유용한 단백질 또는 타겟 단백질의 외부 유출을 방지할 수 있는 동물세포 배양기 및 이를 이용한 동물세포 배양방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 상기 목적과 여러 가지 장점은 이 기술분야에 숙련된 사람들에 의해 본 발명의 바람직한 실시예로부터 더욱 명확하게 될 것이다.
본 발명의 간이 동물세포 배양기는, 배양액이 수용되는 배양용기와; 상기 배양용기의 상부에 결합되는 동물세포수용체와; 상기 동물세포수용체의 내부에 수용되며 동물세포가 부착되는 세포지지체와; 상기 배양용기의 상부를 커버하는 커버를 포함하는 것을 특징으로 한다.
일 실시예에 따르면, 상기 동물세포수용체는 내부의 동물세포와 단백질은 외부로 배출되지 못하고, 영양성분과 노폐물은 외부로 배출될 수 있도록 구성된다.
일 실시예에 따르면, 상기 동물세포수용체는 내부의 동물세포는 외부로 배출되지 못하고, 단백질, 영양성분 및 노폐물은 외부로 배출될 수 있도록 구성된다.
일 실시예에 따르면, 상기 동물세포수용체는 반투막 필름, 메쉬망, 부직포 재질 또는 직포 재질 중 어느 하나로 형성될 수 있다.
일 실시예에 따르면, 상기 동물세포수용체는, 상기 동물세포가 수용되는 수용체본체와; 상기 수용체본체의 상부에 반경방향 외측으로 연장형성되어 상기 배양용기 상부에 걸림결합되는 결합프레임을 포함하며, 상기 수용체본체의 판면에는 상기 배양액이 유출입되는 미세통공이 복수개 관통형성된다.
일 실시예에 따르면, 상기 배양용기의 하부에는 외부로부터 배지가 유입되는 배지유입관이 일정길이 연장형성된다.
일 실시예에 따르면, 상기 배양용기의 상부에는 내부의 배양액을 외부로 배출시키는 배양액유출관이 일정길이 연장형성된다.
일 실시예에 따르면, 상기 커버의 표면에는 이산화탄소를 상기 배양용기 내부로 유입시키는 유입공이 관통 형성된다.
일 실시예에 따르면, 상기 커버와 상기 배양용기 사이에는 상기 커버를 통해 유입되는 이산화탄소 속에 포함된 균을 제거하는 제균필터가 구비된다.
일 실시예에 따르면, 상기 세포지지체는 격자형상의 다공성 구조를 갖도록 형성된다.
일 실시예에 따르면, 상기 세포지지체는 입체적인 형상을 갖도록 형성된다.
일 실시예에 따르면, 상기 배양용기의 상부영역 외주연에는 제1나사산이 구비되고 하부영역은 원추형상으로 구비되며, 상기 커버의 내측면에는 상기 제1나사산과 나사결합되는 제2나사산이 구비된다.
한편, 본 발명은 배양액이 수용되는 배양용기와; 상기 배양용기의 상부에 결합되는 동물세포수용체와; 상기 동물세포수용체의 내부에 수용되며 동물세포가 부착되는 세포지지체와; 상기 배양용기의 상부를 커버하는 커버를 포함하는 간이 동물세포 배양기에, 배지를 채우고, 동물세포가 부착되어 있는 세포지지체를 동물세포수용체에 안착시켜 배양하는 것을 특징으로 하는 동물세포 배양방법을 제공한다. 이때, 상기 배지는 바람직하게 동물세포 배양 시간의 경과에 따라 배양용기 커버를 열어 반복적으로 교체될 수 있다.
또한, 본 발명은 배양액이 수용되는 배양용기와; 상기 배양용기의 상부에 결합되는 동물세포수용체와; 상기 동물세포수용체의 내부에 수용되며 동물세포가 부착되는 세포지지체와; 상기 배양용기의 상부를 커버하는 커버를 포함하고, 상기 배양용기의 하부에 일정길이 연장형성되어 외부로부터 배지가 유입되는 배지유입관; 및 상기 배양용기의 상부에 일정길이 연장형성되어 내부의 배양액을 외부로 배출시키는 배양액유출관을 추가로 포함하는 간이 동물세포 배양기에, 배지를 채우고, 동물세포가 부착되어 있는 세포지지체를 동물세포수용체에 안착시켜 배양하는 것을 특징으로 하는 동물세포 배양방법을 제공한다. 이때, 상기 배지는 바람직하게 동물세포 배양의 시간의 경과에 따라 배지유입관 및 배양액유출관을 이용하여 반복적으로 교체될 수 있다.
또한, 본 발명은 배양액이 수용되는 배양용기와; 상기 배양용기의 상부에 결합되는 동물세포수용체와; 상기 동물세포수용체의 내부에 수용되며 동물세포가 부착되는 세포지지체와; 상기 배양용기의 상부를 커버하는 커버를 포함하되, 상기 커버의 표면에는 이산화탄소를 상기 배양용기 내부로 유입시키는 유입공이 관통 형성되어 있는 간이 동물세포 배양기에, 배지를 채우고, 동물세포가 부착되어 있는 세포지지체를 동물세포수용체에 안착시켜 배양하는 것을 특징으로 하는 동물세포 배양방법을 제공한다. 이때, 상기 배지는 바람직하게 배지의 pH가 배양용기 커버에 형성된 유입공으로 이산화탄소를 공급함으로써 조절될 수 있다.
또한, 본 발명은 배양액이 수용되는 배양용기와; 상기 배양용기의 상부에 결합되는 동물세포수용체와; 상기 동물세포수용체의 내부에 수용되며 동물세포가 부착되는 세포지지체와; 상기 배양용기의 상부를 커버하는 커버를 포함하고, 상기 배양용기의 하부에 일정길이 연장형성되어 외부로부터 배지가 유입되는 배지유입관; 및 상기 배양용기의 상부에 일정길이 연장형성되어 내부의 배양액을 외부로 배출시키는 배양액유출관을 추가로 포함하되 상기 커버의 표면에는 이산화탄소를 상기 배양용기 내부로 유입시키는 유입공이 관통 형성되어 있는 간이 동물세포 배양기에, 배지를 채우고, 동물세포가 부착되어 있는 세포지지체를 동물세포수용체에 안착시켜 배양하는 것을 특징으로 하는 동물세포 배양방법을 제공한다. 이때, 상기 배지는 바람직하게 배지의 pH가 배양용기 커버에 형성된 유입공으로 이산화탄소를 공급함으로써 조절될 수 있다.
본 발명에 따른 간이 동물세포 배양기는 작은 크기의 간단한 구조이므로 간편하게 사용할 수 있다.
또한, 배양액 교환시, 동물세포, 생장 촉진인자 등의 유용 단백질 및 타겟 단백질의 외부 유출을 방지할 수 있어 고농도의 동물세포 배양이 가능하다.
또한, 배지유입관과 배양액유출관을 통해 독립적으로 배지와 배양액의 교환이 가능하므로 빠른 배지 교환이 가능하다.
또한, 필요시 커버의 유입구를 통해 이산화탄소 공급이 가능하므로 배양액의 pH를 적정하게 유지시킬 수 있다.
도 1은 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 간이 동물세포 배양기의 구성을 도시한 사시도,
도 2는 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 간이 동물세포 배양기의 구성을 분해하여 도시한 분해사시도,
도 3은 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 간이 동물세포 배양기의 배양과정을 개략적으로 도시한 개략도,
도 4는 본 발명의 다른 실시예에 따른 간이 동물세포 배양기의 구성을 분해하여 도시한 분해사시도,
도 5는 본 발명의 다른 실시예에 따른 간이 동물세포 배양기의 배양과정을 개략적으로 도시한 개략도,
도 6은 본 발명의 또 다른 실시예에 따른 간이 동물세포 배양기의 구성을 도시한 분해사시도이다.
<도면 부호에 대한 설명>
100 : 간이 동물세포 배양기 110 : 배양용기
111 : 용기본체 111a : 제1나사산
113 : 배지유입관 115 : 배양액유출관
120 : 동물세포수용체 121 : 수용체본체
121a : 미세통공 123 : 결합프레임
130 : 세포지지체 131 : 가로지지체
133 : 세로지지체 135 : 수직지지체
140 : 커버 141 : 커버본체
141a : 제2나사산 143 : 유입구
150 : 제균필터
본 발명을 충분히 이해하기 위해서 본 발명의 바람직한 실시예를 첨부 도면을 참조하여 설명한다. 본 발명의 실시예는 여러 가지 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 아래에서 상세히 설명하는 실시예로 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해서 제공되어지는 것이다. 따라서 도면에서의 요소의 형상 등은 보다 명확한 설명을 강조하기 위해서 과장되어 표현될 수 있다. 각 도면에서 동일한 부재는 동일한 참조부호로 도시한 경우가 있음을 유의하여야 한다. 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 공지 기능 및 구성에 대한 상세한 기술은 생략된다.
도 1은 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 간이 동물세포 배양기(100)의 구성을 도시한 사시도이고, 도 2는 간이 동물세포 배양기(100)의 구성을 분해하여 도시한 분해사시도이다.
도시된 바와 같이 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 간이 동물세포 배양기(100)는 배양액(A)이 수용되는 배양용기(110)와, 배양용기(110)의 상단에 결합되는 동물세포수용체(120)와, 동물세포수용체(120) 내부에 수용되며 동물세포(M)가 안착되어 성장되는 세포지지체(130)와, 배양용기(110)의 상단에 결합되는 커버(140)와, 커버(140)와 동물세포수용체(120) 사이에 배치되는 제균필터(150)를 포함한다.
배양용기(110)는 내부에 배지가 수용되며, 상부에 동물세포수용체(120)가 결합된다. 배양용기(110)는 일정 길이를 갖는 관의 형태로 형성된다. 배양용기(110)의 하부(111b)는 도시된 바와 같이 뾰족한 형태로 형성되고, 상부의 외주면에는 커버(140)와의 결합을 위한 제1나사산(111a)이 형성된다. 배양용기(110)는 용도에 따라 다양한 크기로 구비될 수 있다.
동물세포수용체(120)는 배양용기(110)의 상단에 결합되며 내부에 세포지지체(130)가 수용된다. 동물세포수용체(120)는 배양용기(110)의 배지 교환시 동물세포와 생장 촉진인자 등의 유용 단백질 및 타겟 단백질이 배양액(A)과 함께 배출되는 것을 방지한다.
한편, 필요에 따라, 단백질을 외부로 배출해야 할 경우에 있어서, 동물세포수용체(120)는 내부의 동물세포는 외부로 배출되지 못하고, 단백질, 영양성분 및 노폐물은 외부로 배출될 수 있도록 구성될 수 있다.
동물세포수용체(120)는 세포지지체(130)가 수용되는 수용체본체(121)와, 수용체본체(121)의 상부에 형성되어 배양용기(110)의 상단에 걸림결합되는 결합프레임(123)을 포함한다.
수용체본체(121)는 배지, 영양성분 및 노폐물은 유출입가능하고, 수용체 본체(121) 내부의 동물세포와 유용 단백질 또는 타겟 단백질은 외부로의 유출이 불가능한 형태로 형성된다. 이때, 필요에 따라, 수용체본체(121)는 배지, 영양성분, 노폐물 및 단백질은 유출입가능하고, 수용체 본체(121) 내부의 동물세포는 외부로의 유출이 불가능한 형태로 형성될 수도 있다. 이를 위해 수용체본체(121)는 반투막 필름 재질 또는 메쉬망으로 형성되거나, 부직포 재질 또는 직포 재질로 형성될 수 있다. 이 때, 수용체본체(121)의 판면에는 배양액의 원활한 유출입을 위한 미세통공(121a)이 복수개 관통형성된다. 미세통공(121a)은 단백질과 동물세포의 크기보다 작게 형성되어 단백질과 동물세포의 외부 유출을 방지한다. 또한, 필요시 미세통공(121a)는 동물세포의 크기보다 작게 형성되어, 동물세포만 통과시키지 못하게 하고, 그 외에 단백질, 배지, 영양성분, 노폐물 등은 통과시켜 외부로 배출하게 할 수도 있다.
결합프레임(123)은 수용체본체(121)의 상부에 반경방향 외측으로 일정면적 연장되게 형성된다. 결합프레임(123)에 의해 동물세포수용체(120)가 배양용기(110)의 상단에 거치되어 위치가 고정되게 된다. 결합프레임(123)은 외경이 배양용기(110)의 외경과 같거나 일정 길이 짧게 형성된다. 이 때, 결합프레임(123)은 배양용기(110)의 상부에 거치될 수 있는 외경으로 구비되고, 커버(140)의 내경보다 짧게 형성된다. 이에 의해 커버(140)가 배양용기(110)에 결합되는 것에 간섭이 발생되지 않도록 한다.
세포지지체(130)는 동물세포수용체(120) 내부에 수용되어 동물세포가 안착되어 성장되도록 한다. 세포지지체(130)는 동물세포의 부착, 증식에 도움을 주는 구조체이다. 이를 위해 세포지지체(130)는 격자 형태의 3차원 입체형상으로 형성된다. 세포지지체(130)는 가로지지체(131), 세로지지체(133) 및 수직지지체(135)가 서로 직교되는 형상으로 입체형상을 형성한다.
가로지지체(131), 세로지지체(133) 및 수직지지체(135) 사이의 다공성 기공에 각 동물세포들이 안착되어 증식된다. 세포지지체(130)는 생분해성 고분자 필라멘트를 적층하여 형성될 수 있다.
커버(140)는 배양용기(110)의 상부에 결합되어 배양용기(110)를 밀폐한다. 커버(140)는 배양용기(110)의 상부를 커버하는 커버본체(141)와, 커버본체(141)의 판면에 관통형성되어 이산화탄소를 내부로 유입시키는 복수개의 유입구(143)로 형성된다. 커버본체(141)의 내측에는 용기본체(111)의 제1나사산(111a)에 대응되게 형성되는 제2나사산(141a)가 형성된다. 제1나사산(111a)와 제2나사산(141a)는 암수 나사산의 형태로 형성되어 서로 나사결합된다.
유입구(143)는 배양용기(110) 내부로 이산화탄소를 공급한다. 이산화탄소는 배지에 포함되어 있는 소디움 바이카보네이트와의 평형반응으로 배양액의 pH가 급격하게 변화하는 것을 방지한다. 이에 의해 배양액을 동물세포의 성장에 최적인 pH 6.9∼7.4의 범위로 조절하는 완충제(bufer)로 역할한다.
제균필터(150)는 커버(140)와 배양용기(110) 사이에 배치되어 유입구(143)를 통해 유입되는 이산화탄소에 포함된 잡균을 제거한다. 제균필터(150)는 커버(140)의 내측에 일체로 결합된다. 이에 의해 커버(140)를 배양용기(110)로부터 분리하면 제균필터(150)도 함께 분리되고, 배양용기(110)에 커버(140)가 결합되면 함께 결합된다. 또한, 상기 일체형 외에, 제균필터(150)는 커버(140)와 별개로 동물세포수용체(120)의 외주연에 안착된 후, 커버(140)가 나사결합에 의해 배양용기(110)에 결합될 때 결합력에 의해 커버(140)의 내면에 가압되어 고정될 수 있다.
이러한 구성을 갖는 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 간이 동물세포 배양기(100)의 사용과정을 도 1 내지 도 3을 참조로 하여 설명한다.
관리자는 배양용기(110) 내에 배지를 일정 높이 투입하고, 동물세포수용체(120)를 삽입한다. 동물세포수용체(120) 내부에는 동물세포(M)가 부착된 세포지지체(130)가 수용된다. 제균필터(150)가 결합된 커버(140)를 배양용기(110)의 상부에 결합시킨다. 이때, 배양용기(110) 내부의 배지의 공급높이는 동물세포수용체(120)의 동물세포가 침지될 수 있는 높이(h1, h2)로 공급된다.
이 상태에서 배지 내 영양성분은 동물세포수용체(120)의 반투막 특성에 의해 동물세포수용체(120) 내부로 흘러 들어가 동물세포(M)와 접촉되며 동물세포의 성장을 위해 사용된다. 또한, 동물세포의 성장에 따라 세포 외로 배출되는 동물세포(M)의 노폐물은 동물세포수용체(120)를 빠져나와 배지와 혼합된다. 이렇게 일정시간이 경과하면 배지 속의 영양분은 점차 고갈되고 동물세포로부터 배출된 노폐물의 농도는 증가한다. 배양 개시 후 일정기간이 지나면 배지는 배양액의 상태가 되는데, 배양액에는 동물세포로부터 배출된 각종 노폐물이 점차 누적되는 것이다.
배양개시 후, 일정시간이 지나 노폐물이 많이 쌓이고, 영양분이 고갈되었다고 판단되면, 관리자는 커버(140)를 개방하고 포셋(미도시)으로 동물세포수용체(120)를 잡아 올려 배양용기(110)로부터 분리한 후 노폐물이 쌓인 배양액을 외부로 배출시킨다. 그리고 깨끗한 배지를 다시 배양용기(110)에 투여하고 포셋(미도시)으로 동물세포수용체(120)를 다시 배양용기(110)에 결합시킨 후 커버(140)를 닫는다.
이렇게 일정 시간마다 새로운 배지를 교환할 때, 동물세포수용체(120) 내부의 동물세포와 동물세포로부터 생성되는 각종 유용 단백질 및 타겟 단백질은 외부로 배출되지 않게 된다. 이에 따라 동물세포수용체(120) 내부에는 동물세포와 단백질이 고농도로 농축될 수 있다. 다만, 필요에 의해 단백질을 외부로 배출시킬 필요가 있는 경우, 미세통공(121a)을 보다 단백질보다 크고 동물세포보다 작게 형성시켜 동물세포만 안에 가두고 그 외에 단백질 등을 외부로 배출시킬 수도 있다.
한편, 도 4는 본 발명의 다른 실시예에 따른 간이 동물세포 배양기(100a)의 구성을 도시한 분해사시도이고, 도 5는 본 발명의 다른 실시예에 따른 간이 동물세포 배양기(100a)의 배양과정을 도시한 개략도이다.
앞서 설명한 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 간이 동물세포 배양기(100)는 배지의 교환을 위해 커버(140)를 분리하고 동물세포수용체(120)를 외부로 분리해야 했다. 반면, 본 발명의 다른 실시예에 따른 간이 동물세포 배양기(100a)는 배양용기(110a) 내부에 동물세포수용체(120)를 수용한 상태에서 배양액과 배지의 교환이 가능하다. 이를 위해 본 발명의 다른 실시예에 따른 간이 동물세포 배양기(100a)는 배양용기(110a)의 하부에 배지(B)가 유입되는 배지유입관(113)이 돌출 형성되고, 상부에 배양액(A)을 외부로 배출하는 배양액유출관(115)가 돌출 형성된다. 이에 의해 간이 동물세포 배양기(100a)의 배양용기(110a)에 동물세포수용체(120)를 결합시킨 상태에서 배지유입관(113)으로 배지를 유입한다. 이때, 배지유입관(113)과 배양액유출구(115)에는 각각 밸브가 연결되어 배지유입과 배양액유출을 개폐할 수 있다.
동물세포 배양을 위해 일정 시간이 경과되고 배양액을 교환해야 할 경우, 관리자는 배양액유출관(115) 측의 밸브(미도시)를 개방하거나 유출주사기(미도시)를 사용하여 배양용기(110a) 속의 배양액(A)을 외부로 배출시킨다. 배양용기(110a) 내부의 배양액이 모두 제거되면 배지유입관(113) 측의 밸브(미도시)를 개방하거나 유입주사기(미도시)를 이용하여 신선한 배지(B)를 배양용기(110a)로 유입한다. 이때, 동물세포수용체(120)가 배양용기(110a)에 수용된 상태이지만 동물세포수용체(120)의 반투막특성에 의해 동물세포와 단백질의 외부 유출은 차단되게 된다. 여기서, 배지와 배양액의 교환은 상술한 바와 같이 서로 독립적으로 이루어지거나, 경우에 따라 연속적으로 이루어질 수도 있다.
한편, 도 6은 본 발명의 또 다른 실시예에 따른 간이 동물세포 배양기(100b)의 구성을 도시한 분해사시도이다. 앞서 설명한 두 실시예의 간이 동물세포 배양기(100,100a)는 커버(140)에 이산화탄소가 유입되는 유입구(143)가 형성되어 있으나, 또 다른 실시예에 따른 간이 동물세포 배양기(100b)는 유입구(143)가 형성되어 있지 않다. 이 경우, 배양액의 pH는 배지유입관(113)을 통해 유입되는 배지에 탄산이온을 첨가하여 조절한다. 이산화탄소가 용해된 탄산액이 함께 배지를 통해 유입되어 배양액의 pH를 조절하므로 앞서 두 가지 경우와 동일한 효과를 얻을 수 있다. 이때, 이산화탄소 유입구가 없으므로 외부로부터 잡균의 유입도 원천적으로 차단되므로 제균필터(150)의 구성도 생략될 수 있다.
이상에서 설명된 본 발명의 간이 동물세포 배양기의 실시예는 예시적인 것에 불과하며, 본 발명이 속한 기술분야의 통상의 지식을 가진 자라면 이로부터 다양한 변형 및 균등한 타 실시예가 가능하다는 점을 잘 알 수 있을 것이다. 그러므로 본 발명은 상기의 상세한 설명에서 언급되는 형태로만 한정되는 것은 아님을 잘 이해할 수 있을 것이다. 따라서 본 발명의 진정한 기술적 보호 범위는 첨부된 특허청구범위의 기술적 사상에 의해 정해져야 할 것이다. 또한, 본 발명은 첨부된 청구범위에 의해 정의되는 본 발명의 정신과 그 범위 내에 있는 모든 변형물과 균등물 및 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.

Claims (20)

  1. 배양액이 수용되는 배양용기와;
    상기 배양용기의 상부에 결합되는 동물세포수용체와;
    상기 동물세포수용체의 내부에 수용되며 동물세포가 부착되는 세포지지체와;
    상기 배양용기의 상부를 커버하는 커버를 포함하는 것을 특징으로 하는 간이 동물세포 배양기.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 동물세포수용체는 내부의 동물세포와 단백질은 외부로 배출되지 못하고, 영양성분과 노폐물은 외부로 배출될 수 있는 것을 특징으로 하는 간이 동물세포 배양기.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 동물세포수용체는 내부의 동물세포는 외부로 배출되지 못하고, 단백질, 영양성분 및 노폐물은 외부로 배출될 수 있는 것을 특징으로 하는 간이 동물세포 배양기.
  4. 제2항 또는 제3항에 있어서,
    상기 동물세포수용체는 반투막 필름, 메쉬망, 부직포 재질 또는 직포 재질 중 어느 하나로 형성되는 것을 특징으로 하는 간이 동물세포 배양기.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 동물세포수용체는,
    상기 동물세포가 수용되는 수용체본체와;
    상기 수용체본체의 상부에 반경방향 외측으로 연장형성되어 상기 배양용기 상부에 걸림결합되는 결합프레임을 포함하며,
    상기 수용체본체의 판면에는 상기 배양액이 유출입되는 미세통공이 복수개 관통형성되는 것을 특징으로 하는 간이 동물세포 배양기.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 배양용기의 하부에는 외부로부터 배지가 유입되는 배지유입관이 일정길이 연장형성되는 것을 특징으로 하는 간이 동물세포 배양기.
  7. 제6항에 있어서,
    상기 배양용기의 상부에는 내부의 배양액을 외부로 배출시키는 배양액유출관이 일정길이 연장형성되는 것을 특징으로 하는 간이 동물세포 배양기.
  8. 제1항 또는 제7항에 있어서,
    상기 커버의 표면에는 이산화탄소를 상기 배양용기 내부로 유입시키는 유입공이 관통 형성되는 것을 특징으로 하는 간이 동물세포 배양기.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 커버와 상기 배양용기 사이에는 상기 커버를 통해 유입되는 이산화탄소 속에 포함된 균을 제거하는 제균필터가 구비되는 것을 특징으로 하는 간이 동물세포 배양기.
  10. 제1항에 있어서,
    상기 세포지지체는 격자형상의 다공성 구조를 갖도록 형성되는 것을 특징으로 하는 간이 동물세포 배양기.
  11. 제10항에 있어서,
    상기 세포지지체는 입체적인 형상을 갖도록 형성되는 것을 특징으로 하는 간이 동물세포 배양기.
  12. 제1항에 있어서,
    상기 배양용기의 상부영역 외주연에는 제1나사산이 구비되고 하부영역은 원추형상으로 구비되며,
    상기 커버의 내측면에는 상기 제1나사산과 나사결합되는 제2나사산이 구비되는 것을 특징으로 하는 간이 동물세포 배양기.
  13. 배양액이 수용되는 배양용기와; 상기 배양용기의 상부에 결합되는 동물세포수용체와; 상기 동물세포수용체의 내부에 수용되며 동물세포가 부착되는 세포지지체와; 상기 배양용기의 상부를 커버하는 커버를 포함하는 간이 동물세포 배양기에, 배지를 채우고, 동물세포가 부착되어 있는 세포지지체를 동물세포수용체에 안착시켜 배양하는 것을 특징으로 하는 동물세포 배양방법.
  14. 제13항에 있어서,
    상기 배지는,
    동물세포 배양 시간의 경과에 따라 배양용기 커버를 열어 반복적으로 교체되는 것을 특징으로 하는 동물세포 배양방법.
  15. 배양액이 수용되는 배양용기와; 상기 배양용기의 상부에 결합되는 동물세포수용체와; 상기 동물세포수용체의 내부에 수용되며 동물세포가 부착되는 세포지지체와; 상기 배양용기의 상부를 커버하는 커버를 포함하고, 상기 배양용기의 하부에 일정길이 연장형성되어 외부로부터 배지가 유입되는 배지유입관; 및 상기 배양용기의 상부에 일정길이 연장형성되어 내부의 배양액을 외부로 배출시키는 배양액유출관을 추가로 포함하는 간이 동물세포 배양기에, 배지를 채우고, 동물세포가 부착되어 있는 세포지지체를 동물세포수용체에 안착시켜 배양하는 것을 특징으로 하는 동물세포 배양방법.
  16. 제15항에 있어서,
    상기 배지는,
    동물세포 배양의 시간의 경과에 따라 배지유입관 및 배양액유출관을 이용하여 반복적으로 교체되는 것을 특징으로 하는 동물세포 배양방법.
  17. 배양액이 수용되는 배양용기와; 상기 배양용기의 상부에 결합되는 동물세포수용체와; 상기 동물세포수용체의 내부에 수용되며 동물세포가 부착되는 세포지지체와; 상기 배양용기의 상부를 커버하는 커버를 포함하되, 상기 커버의 표면에는 이산화탄소를 상기 배양용기 내부로 유입시키는 유입공이 관통 형성되어 있는 간이 동물세포 배양기에, 배지를 채우고, 동물세포가 부착되어 있는 세포지지체를 동물세포수용체에 안착시켜 배양하는 것을 특징으로 하는 동물세포 배양방법.
  18. 제17항에 있어서,
    상기 배지는,
    배지의 pH가 배양용기 커버에 형성된 유입공으로 이산화탄소를 공급함으로써 조절되는 것을 특징으로 하는 동물세포 배양방법.
  19. 배양액이 수용되는 배양용기와; 상기 배양용기의 상부에 결합되는 동물세포수용체와; 상기 동물세포수용체의 내부에 수용되며 동물세포가 부착되는 세포지지체와; 상기 배양용기의 상부를 커버하는 커버를 포함하고, 상기 배양용기의 하부에 일정길이 연장형성되어 외부로부터 배지가 유입되는 배지유입관; 및 상기 배양용기의 상부에 일정길이 연장형성되어 내부의 배양액을 외부로 배출시키는 배양액유출관을 추가로 포함하되, 상기 커버의 표면에는 이산화탄소를 상기 배양용기 내부로 유입시키는 유입공이 관통 형성되어 있는 간이 동물세포 배양기에 배지를 채우고, 동물세포가 부착되어 있는 세포지지체를 동물세포수용체에 안착시켜 배양하는 것을 특징으로 하는 동물세포 배양방법.
  20. 제19항에 있어서,
    상기 배지는,
    배지의 pH가 배양용기 커버에 형성된 유입공으로 이산화탄소를 공급함으로써 조절되는 것을 특징으로 하는 동물세포 배양방법.
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