WO2014198789A1 - Composition cosmétique à propriété photoprotectrice - Google Patents

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WO2014198789A1
WO2014198789A1 PCT/EP2014/062157 EP2014062157W WO2014198789A1 WO 2014198789 A1 WO2014198789 A1 WO 2014198789A1 EP 2014062157 W EP2014062157 W EP 2014062157W WO 2014198789 A1 WO2014198789 A1 WO 2014198789A1
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plants
ethanolic
photoprotective
maritima
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Mélanie HUPEL
Michel Pronost
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Salipouss
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    • A61K2800/5922—At least two compounds being classified in the same subclass of A61K8/18

Definitions

  • the invention relates to the field of cosmetology, in particular to the production of topical products for efficient ultraviolet filtration, said products containing halophilic plant extracts.
  • the sun protection factor is a universal indicator of the photoprotective performance of sunscreens against UV-B rays. It is generally determined in vivo on a group of volunteers exposed to increasing doses of UV radiation in the presence or absence of protective cream. The SPF is then determined by the ratio between the minimum dose of radiation required to induce an erythema (sunburn) on a protected skin and the minimum dose of radiation necessary to induce this same erythema on unprotected skin.
  • the SPF indicates the ability of a sunscreen product to reduce UV-induced erythema.
  • SPF is generally measured in vivo by the Food and Drug Administration (FDA) method or the COLIPA method in Europe (Liaison Committee of the Perfumery Industries).
  • FDA Food and Drug Administration
  • COLIPA COLIPA method in Europe
  • in vitro methods have also been developed because they are faster, cheaper and above all do not pose the ethical problems associated with the participation of volunteers.
  • the SPF is then determined by mathematical equations based on the UV spectra observed between 290 and 400 nm (COLIPA, op.cit.). In addition, this makes it possible to evaluate the photostability of the products by comparing the values of the SPF before and after UV irradiation.
  • the experimental setup consists of an irradiation chamber with six UV-B lamps (312 nm, 8 W) and a specific sample exposure arrangement. The samples are exposed to 40 W m-2 UV-B and 20 W m-2 UV-A.
  • the spectral characteristics of the samples are determined by measuring their absorbance spectrum in the UV (290-400 nm). Several parameters are then defined after integration of the absorbance areas of the samples in the UV:
  • UV-B / UV-A ratio which represents the protection potential of the sample in UV-B (290-320 nm) compared to the sample protection potential in UV-A (320 -400 nm).
  • a UV-B / UV-A ⁇ 1 ratio denotes a potential protection mainly against UV-A (or UVA in demand).
  • a UV-B / UV-A ratio " 1 denotes potential protection against UV-A and UV-B.
  • a UV-B / UV-A ratio> 1 denotes a potential protection mainly against UV-B (or UVB in demand)
  • the critical wavelength (Ab) which is the wavelength for which the area under the absorbance curve of the sample, integrated from 290 to Ac, is equal to 90% of the integrated area of 290 to 400 nm.
  • a critical wavelength of 370 nm denotes good potential protection in both UV-A and UV-B. This critical wavelength is measured before (Ac 0 ) and after 2 h of UV-B irradiation (Aci 2 o) - - - - -
  • the photostability of the sample against UV-B radiation is determined by the ratio of the absorbance of the sample between 290 and 320 nm before and after 2 hours of irradiation (UV-B 12 o / UV-B 0 ) .
  • UV-B 12 o / UV-B 0 > 0.9 the sample has a very good photostability. If 0.5 ⁇ UV-B 12 o / UV-Bo ⁇ 0.9, the sample has a medium to good photostability. If UV-B 12 o / UV-Bo ⁇ 0.5, the sample has poor photostability.
  • the photoprotective activity of the extracts tested is determined by:
  • irradiation is carried out beforehand with only the sample recovery solvent as a control in order to remove the half-life due to the solvent.
  • the test can be performed only at 0.1 L "1 and then consider:
  • Halophile plants colonizing saline coastal environments (dunes, cliffs, marshes) are subject to extremely changing environmental conditions due to their exposure to spray and tides (salinity, light, temperature ... Their survival in these environments This is due, in particular, to a strong acclimation capacity thanks to the synthesis of defense molecules varied and potentially original.
  • Hupel et al have studied the photoprotection potential of halophilic plant extracts, these plants being particularly exposed to strong UV radiation in their media.
  • JP 2012 020946 discloses a composition for the treatment of hair that contains a mixture of several halophilic plants including Crithmum maritimum and Matricaria maritima. This composition is not a topical composition intended to be applied to the skin, but is used for the protection of the hair. This document provides no information on the extracts used, nor on the photoprotective properties of compositions containing contemplated mixtures of halophilic plant extracts.
  • US 2005123499 discloses a cosmetic composition containing a UV filtering agent, as well as an extract of Crithmum maritimum. This document does not describe cosmetic compositions comprising a mixture of extracts of at least two halophilic plants.
  • the invention is based on the fact that improved photoprotective compositions can be obtained when they contain extracts of several halophilic plants.
  • these compositions contain several ethanolic extracts of halophilic plants.
  • An ethanolic extract within the meaning of the invention, is an extract of a plant, obtained with an ethanolic solvent.
  • These compositions may in particular exhibit an improvement in the UV absorption levels (in particular UV-B), the duration of effectiveness, or a broadening of the absorption spectra compared to compositions containing only one extract. of plant. Surprisingly, synergies have been observed.
  • these mixtures can be used as ultraviolet filters, in particular as UV-B filters, but also as UV-A filters.
  • the invention relates in particular to a cosmetic composition having a photoprotective function characterized in that it comprises a mixture of extracts of at least two halophilic plants.
  • these are ethanolic extracts, that is to say that the plant extracts introduced into the composition according to the invention were obtained with an ethanolic solvent.
  • other solvents based on methanol, chloroform, polar or apolar solvents, acidic or basic
  • ethanolic solvent refers to pure ethanol or a solvent containing at least 50% (by volume) ethanol with another solvent miscible with ethanol.
  • the second solvent is suitable for obtaining extracts that it is desired to use in a composition intended for application in humans.
  • an ethanol / water mixture (ethanol at 50% by volume or more) is considered an ethanolic solvent, in the context of the present invention).
  • ethanolic extract is obtained by any means known in the art for obtaining compounds soluble in ethanol.
  • ethanolic extract also refers to hydro-ethanolic extracts, that is to say soluble in a solvent comprising ethanol mixed with the water.
  • this composition comprises an ethanolic extract of exactly two halophilic plants. In another embodiment, this composition comprises an alcoholic ethanolic extract of three halophilic plants. Although it is possible for said composition to have extracts from more than three halophilic plants, these embodiments are not generally preferred.
  • a composition having a photoprotective property is a composition for filtering ultraviolet (that is to say to reduce the intensity of the UV after they have passed through said composition).
  • the photoprotective composition therefore makes it possible to limit the exposure of the skin to radiation.
  • the cosmetic compositions with photoprotective properties according to the invention are perfectly suitable for filtering UV-B, UV-A or both UV-B and UV-A.
  • said extracts were obtained by maceration with an ethanolic solvent, that is to say that crushed plants or parts of plants were left to macerate in the ethanolic solvent.
  • This maceration step can be carried out at room temperature, with or without stirring, for a time which is adapted by those skilled in the art (a duration greater than 15 minutes, but less than 2 hours, preferably less than 1 hour, more preferably less than 30 minutes, is perfectly appropriate).
  • the extraction solvent also contains water, in particular at most 50% water.
  • halophytes envisaged for the preparation of the compositions according to the invention are plants adapted to salty environments or to media with a high osmotic pressure. These plants may be "optional halophytes” (able to withstand high levels of salt in the medium, but normally behaving on unsalted soils) or “mandatory halophytes", which develop completely only in the presence of high saline concentrations.
  • At least one of the plants is of the genus Matricaria, Crithmum or Aster.
  • plants of the species Crithmum maritimum, Matricaria maritima or Aster tripolium are preferred.
  • Other suitable plants are selected from the genus Beta (in particular Beta vulgaris, especially subsp. Maritima), or Limonium (Limonium vulgare or Limonium latifolium are particularly suitable).
  • said composition contains an ethanolic extract of Matricaria maritima or Crithmum maritimum or Aster tripolium, as well as an ethanolic extract of another halophyte.
  • this other halophilic plant is of the genus Matricaria, Crithmum, Aster, Beta or Limonium.
  • said composition contains an ethanolic extract of Matricaria maritima or Crithmum maritimum or Aster tripolium, and an extract of another plant selected from Beta maritima, Limonium vulgare, Limonium latifolium, Crithmum maritimum and Matricaria maritima.
  • the composition according to the invention preferably comprises a mixture of extracts of Matricaria maritima and Crithmum maritimum or a mixture of extracts of (Matricaria maritima or Crithmum maritimum or Aster tripolium) and (Tripolium aster, Beta maritima, Limonium vulgare or Limonium latifolium).
  • the invention also relates to a composition as described above, in particular for its use in protecting an epidermis against UV radiation, in particular solar radiation. It is then in the form of a topical composition, in particular one in the form of a cream, a lotion, an ointment or an ointment, an emulsion, i.e. say intended to be applied to the skin.
  • a topical composition in particular one in the form of a cream, a lotion, an ointment or an ointment, an emulsion, i.e. say intended to be applied to the skin.
  • compositions according to the invention may also contain a mineral sunscreen.
  • mineral filters include metal oxides, in particular titanium oxides (amorphous titanium dioxide or crystallized in rutile and / or anatase form), zinc oxides, iron oxides, zirconium oxides, cerium oxides or mixtures thereof. They may be in the form of micro- or nano-pigments (coated or uncoated).
  • any organic UV-A and / or UV-B filter can be used in the composition according to the invention.
  • Some of these molecules are mentioned in Hupel et al, but mention may be made of dibenzoylmethane derivatives, benzophenone derivatives, anthranilates, triazine derivatives, and mixtures of these filters (UV-A filter).
  • Anti-UV-B filters that may be mentioned include salicylic acid derivatives, cinnamic acid derivatives, liquid ⁇ , ⁇ '-diphenylacrylate derivatives, p-aminobenzoic acid derivatives, 4- methyl benzylidene camphor, 2-phenylbenzimidazole 5-sulfonic acid, 1,3,5-triazine derivatives, and mixtures of these filters. Depending on the desired result, a mixture of UV-A and UV-B filters can be used.
  • the invention also relates to a method for preparing a photoprotective composition, said method comprising the step of mixing ethanolic extracts of at least two halophilic plants in a cosmetically acceptable medium.
  • the invention also relates to a method for preparing a cosmetic composition comprising the step of mixing extracts of at least two halophilic plants with pharmaceutically (cosmetically) acceptable excipients.
  • the medium or cosmetically acceptable excipients are selected according to the knowledge of those skilled in the art. It consists in particular of water or a mixture of water and solvent, said solvent may be a lower alcohol C1-C4 such as ethanol or isopropanol or a polyol or a polyol ether such as glycerin, polypropylene glycol or their ethers.
  • said solvent may be a lower alcohol C1-C4 such as ethanol or isopropanol or a polyol or a polyol ether such as glycerin, polypropylene glycol or their ethers.
  • said method also comprises a step of concentration (or purification) of the active ingredients of said ethanolic extracts.
  • This step is preferably carried out by adsorption chromatography of extracts of plant grinds on a C18 column.
  • the elution is then carried out by passing hydroalcoholic solvents of decreasing polarity (100% water to 100% ethanol).
  • the photoprotective extracts are recovered with an elution solvent composed of 50 to 100% ethanol.
  • the final concentration of the mixture of ethanolic extracts of at least two halophilous plants will preferably be 0.1% (1 g L -1 ) in the case of mixtures of crude extracts (in particular those obtained by maceration in the ethanolic solvent) and preferably 0.01% (0.1 g L -1 ) in the case of mixtures of purified extracts (in particular those obtained by chromatography).
  • each extract is preferably added at the same concentration.
  • the photoprotective composition comprises a mixture of crude or purified ethanolic extracts of at least two halophilic plants which may be used either in liquid form or in dry form after solvent evaporation and / or lyophilization of the aqueous part in the case of the use of hydroalcoholic extracts.
  • the mixing of the extracts in liquid form is carried out in order to ensure the homogeneity of the mixture, and then that the drying step is carried out.
  • the mixture of extracts of at least two halophilic plants will preferably be prepared in the form of a mixture of liquid extracts of final concentration equal to 1% (10 g L -1 ) or a mixture of purified liquid extracts of final concentration equal to 0.1% (1 g L -1 ) and incorporated at least 10% of the total weight of the preparation.
  • FIG. 1 Schematic of the experimental device consisting of an irradiation chamber (1) providing UV radiation (60 Wm -2 ) and equipped with an external cooling system, a plate (2) allowing the specific arrangement of 30 experimental units to be subjected to irradiation, placed at 10 cm from the UV-B lamps
  • Each experimental unit is composed of a cuvette containing the tested sample placed above a cuvette containing CMS E1, E2 ... : sample 1, sample 2, ...
  • Figure 2 Spectral distribution of the energy emitted by the lamps at 312 nm.
  • FIG. 3 UV absorption profile of the purified extracts of Matricaria maritima obtained by adsorption chromatography on a C18 column with a water / alcohol gradient (100/0 to 0/100).
  • FIG. 4 Half-life time of the CMS (min) of mixtures of methanolic, ethanolic and hydroethanol extracts (ethanol 50%) at a final concentration of 1 g L-1 (0.5 g L -1 of each of the plants)
  • White boxes Mixture of extracts less effective than at least one of the two extracts alone at 1 g L -1 ; Boxes light gray: Mixture of extracts as effective as at least one of the two extracts alone at 1 g L "1 : Dark gray boxes: Mix of extracts more effective than the two extracts alone at 1 g L " 1 Examples
  • the choice of extraction solvents made it possible to obtain aqueous, hydroalcoholic (20% ethanol, 50% ethanol) and alcoholic (ethanol and methanol) extracts.
  • An alcoholic crude extract containing 50% ethanol Matricaria maritima prepared according to the protocol of Example 1) is adsorbed on a C18 grafted silica column previously conditioned with 100% alcohol and then 100% water. Purified extracts are then obtained after successive elutions with water / alcohol mixtures according to the 0/100, 20/80, 40/60, 60/40, 80/20 and 100/0 gradient. The various extracts obtained are then dried by evaporation under vacuum and / or lyophilization and then taken up in a suitable volume of water (fractions 0/100 to 40/60) or alcohol (fractions 60/40 to 100/0) to obtain a 0.01% liquid extract.
  • the mixture of halophilic plant extracts is prepared at a final concentration of 0.1% by diluting 1/10 of the equivalent parts of 1% extracts of two halophilic plants.
  • UV-B is that developed by Hupel et al. in 201 1 (op cit).
  • the UV-absorbing compounds are predominantly localized in the epidermal peripheral tissues of higher plants, protecting the underlying photosynthetic tissues from degradation.
  • This vertical "hierarchy" of the photoprotective compounds located above the pigments photosynthetics served as a model for the development of the experimental setup used in this method ( Figure 1).
  • a UV spectrophotometer tank containing the extract to be tested is placed horizontally on another tank containing the degradation target, forming an experimental unit. All the experimental units are placed in a device where they are physically independent of each other, to allow exclusively vertical irradiation and limited to UV-B radiation from above.
  • the compound used as a degradation target is a synthetic derivative of chlorophyll (UV-degrading molecule), sodium magnesium chlorophyllin (CMS), whose absorbance at 650 nm is measured before and after UV exposure.
  • B Figure 2 in an irradiation chamber.
  • the experimental units are exposed to an intensity of 40 W m-2 UV-B and 20 W m-2 UV-A for two hours and the ability of the sample to filter UV-B radiation is then based on more or less significant inhibition of CMS degradation.
  • the samples tested are also evaluated for their photostability by measuring their absorbance spectrum in UV-B before and after irradiation. 2) Measured parameters
  • the spectral characteristics of the samples are determined by measuring their absorbance spectrum in the UV (290-400 nm). Several parameters are then calculated after integration of the absorbance areas of the samples in the UV:
  • the photoprotective activity is determined by the ability of the sample to prevent degradation of the CMS. This protection is calculated by the half-life time of the CMS (t 1/2 CMS).
  • the test can be performed only at 0.1 g L -1 and then consider:
  • Table 2 Spectral properties (absorption maximum (A max ), critical wavelength (Ac)) before irradiation and photostability in UV-B UVB 12 o / UVBo after 120 min of irradiation of hydroethanolic extracts ( 50% ethanol) and ethanolic halophilic plants.
  • the extracts with the highest potency times in all species are pure or 50% ethanol alcohol extracts, whose t 1/2 CMS varies from 250 min to 540 min depending on the species (Table 1) and is much greater than the duration of the irradiation (120 min).
  • the alcoholic extracts with 50% ethanol of Beta maritima and Limonium vulgare show a capacity of absorption in both UV-B and UV-A with regard to their maximum absorption in the UV (330 -336 nm) and the critical wavelength equal to 370 nm (Table 2).
  • Pure alcoholic extracts of all halophilic species have potential for UV-B and UV-A photoprotection with critical wavelengths of 370 nm or greater (Table 2).
  • the photostability of the extracts is generally lower for the pure alcoholic extracts than for the alcoholic extracts with 50% ethanol (Table 2).
  • the alcoholic extracts of Matricaria maritima, Aster tripolium and Crithmum maritimum have a strong photoprotective activity (Table 1) but a photostability which could be better (0.51 to 0.78) whereas the alcohol extracts of Limonium vulgare have a lower activity but the photostability the stronger (0.84 to 1 .00).
  • the alcoholic extract of Beta maritima has a strong photoprotective activity and a strong photostability (0.84-0.93).
  • the photoprotective activity results of extracts purified by adsorption chromatography on a C18 column in Matricaria maritima are shown in Table 3.
  • the UV absorption profile of the various purified extracts is shown in FIG. 3, their spectral properties. and photostability in Table 4.
  • the fractions 60/40, 40/60 and 20/80 have a photoprotective activity that is greater than that of the crude extract
  • Table 3 Example of half-life time (min) of Chlorophylline Magnesium and Sodium (t 1/2 CMS) extracts purified by C18 column absorption chromatography in Matricaria maritima. The various purified extracts were obtained after adsorption of an alcoholic extract with 50% ethanol on a C18 column and successive elutions with a water / alcohol gradient (100/0 to 0/100). The half-life times are given for a concentration of 0.1 g L -1 .
  • Table 4 Spectral properties (absorption maximum (Amax), critical wavelength (Ac)) before irradiation and photostability (UVB 12 o / UVBo) after 120 min of irradiation of the purified and active extracts of Matricaria maritima obtained by column adsorption chromatography C18.
  • the mixture of methanolic extracts of Matricaria maritima and Crithmum maritimum has an inhibitory effect on the photoprotective activity compared to the use from one of the two extracts alone (Table 1 and Figure 4).
  • Such an inhibitory effect is not observed for the mixtures of hydroethanol or ethanolic extracts, where a synergistic effect of the mixture on the photoprotective activity is observed with respect to the extracts alone (FIG. 4).
  • the mixture of pure ethanolic extracts of Matricaria maritima and Beta maritima gives an absorption spectrum with three absorption maxima in the UV range, hence a broader specificity of action.
  • the critical wavelengths obtained are equal to or slightly greater than the extracts alone, but less than 370 nm. This indicates that ethanol extracts with 50% ethanol will preferentially be used for protection against UV-B.

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Abstract

L'invention se rapporte à une composition cosmétique ayant des propriétés photoprotectrices comprenant un mélange d'extraits d'au moins deux plantes halophiles.

Description

COMPOSITION COSMÉTIQUE À PROPRIÉTÉ PHOTOPROTECTRICE
L'invention se rapporte au domaine de la cosmétologie, en particulier à la production de produits topiques permettant une filtration efficace des ultraviolets, lesdits produits contenant des extraits de plantes halophiles.
La protection de l'Homme contre les radiations UV suscite un réel intérêt de part les risques de cancer de la peau et de photovieillissement liés à l'exposition. A l'heure actuelle, l'industrie cosmétique est à la recherche de nouveaux actifs toujours plus efficaces dans la protection solaire.
A ce titre, différentes méthodes in vitro ont été développées pour apprécier l'effet photo-protecteur de composés destinés à entrer dans la composition de produits cosmétiques (crèmes protectrices anti-UV).
Le facteur de protection solaire (FPS) est un indicateur universel de la performance photoprotectrice des écrans solaires contre les rayons UV-B. Il est généralement déterminé in vivo sur un groupe de volontaires exposés à des doses croissantes de radiations UV en présence ou non de crème protectrice. Le FPS est alors déterminé par le rapport entre la dose minimale de radiations nécessaires pour induire un érythème (coup de soleil) sur une peau protégée et la dose minimale de radiations nécessaires pour induire ce même érythème sur une peau non protégée.
Ainsi, le FPS indique la capacité d'un produit de protection solaire à réduire les érythèmes induits par les UV. Le FPS est généralement mesuré in vivo par la méthode de la FDA (Food and Drug Administration) (Food and Drug Administration, Fédéral Register 64 (1999) 27666-27693) ou la méthode COLIPA en Europe (Comité de Liaison des Industries de la Parfumerie, Guidelines for International Sun Protection Factor Test Method, 2006).]- Toutefois, des méthodes in vitro ont également été développées, car elles sont plus rapides, moins coûteuses et surtout ne posent pas les problèmes éthiques liés à la participation de volontaires.
Ces méthodes consistent, soit en la mesure de la transmittance spectrale de la substance écran incorporée dans une émulsion de crème et appliquée sur un support synthétique simulant la peau humaine, soit en l'analyse spectrophotométrique des solutions diluées de produits de protection solaire.
Le FPS est alors déterminé par des équations mathématiques sur la base des spectres UV observés entre 290 à 400 nm (COLIPA, op. cit.). En outre, ceci permet d'évaluer la photostabilité des produits en comparant les valeurs du FPS avant et après irradiation UV.
Afin d'évaluer rapidement la capacité photoprotectrice d'extraits de plantes sans être obligé de les incorporer dans des matrices cosmétiques, un test in vitro a été développé par (Hupel et al, Talanta, 86 (201 1 ) 362- 371 ). Ce test est notamment basé sur la capacité des extraits testés à filtrer de fortes radiations UV- B (290-320 nm) et empêcher la dégradation de la chlorophylline de magnésium et de sodium (CMS), un dérivé de la chlorophylle.
Le dispositif expérimental est composé d'une chambre d'irradiation avec six lampes UV-B (312 nm, 8 W) et une disposition spécifique d'exposition des échantillons. Les échantillons sont exposés à 40 W m-2 d'UV-B et 20 W m-2 d'UV- A.
Les caractéristiques spectrales des échantillons sont déterminées par la mesure de leur spectre d'absorbance dans l'UV (290-400 nm). Plusieurs paramètres sont alors définis après intégration des aires d'absorbance des échantillons dans l'UV :
- Les longueurs d'onde maximales d'absorption de l'échantillon (Amax)
- Le ratio UV-B/UV-A qui représente le potentiel de protection de l'échantillon dans l'UV-B (290-320 nm) par rapport au potentiel de protection de l'échantillon dans l'UV-A (320-400 nm). Ainsi, un ratio UV-B/UV-A <1 dénote une protection potentielle majoritairement contre les UV-A (ou UVA dans la demande). Un ratio UV-B/UV-A « 1 dénote une protection potentielle contre les UV-A et les UV-B. Un ratio UV-B/UV-A >1 dénote une protection potentielle majoritairement contre les UV-B (ou UVB dans la demande)
- La longueur d'onde critique (Ac) qui est la longueur d'onde pour laquelle l'aire sous la courbe d'absorbance de l'échantillon, intégrée de 290 à Ac, est égale à 90% de l'aire intégrée de 290 à 400 nm. (Domaine de l'UV-B et de l'UV-A). Une longueur d'onde critique de 370 nm dénote une bonne protection potentielle à la fois dans l'UV-A et dans l'UV-B. Cette longueur d'onde critique est mesurée avant (Ac0) et après 2 h d'irradiation UV-B (Aci2o)- - La photostabilité de l'échantillon contre les radiations UV-B est déterminée par le ratio de l'absorbance de l'échantillon entre 290 et 320 nm avant et après 2h d'irradiation (UV-B12o/UV-B0). Ainsi, si UV-B12o/UV-B0 > 0.9, l'échantillon a une très bonne photostabilité. Si 0.5 < UV-B12o/UV-Bo < 0.9, l'échantillon à une photostabilité moyenne à bonne. Si UV-B12o/UV-Bo < 0.5, l'échantillon a une mauvaise photostabilité.
L'activité photoprotectrice des extraits testés est déterminée par :
- le temps de demi-vie de la CMS (t|/2 CMS) qui est le temps au bout duquel l'absorbance de la CMS est divisée par 2 après irradiation dans le dispositif de Hupel et al (60 W.m"1). Ce paramètre traduit la capacité de l'échantillon à filtrer efficacement les radiations UV et empêcher la dégradation de la CMS: plus ce temps est long et plus l'échantillon est photoprotecteur. Ce paramètre donne aussi une notion de durée d'efficacité photoprotectrice des échantillons testés. En effet, il est recommandé que les préparations cosmétiques solaires aient une durée d'efficacité d'au moins deux heures (application recommandée de crème solaire toutes les deux heures pour le consommateur). Ainsi, dans la méthode de Hupel et al., une irradiation de deux heures est réalisée et un échantillon donnant un temps de demi-vie de la CMS supérieur à 120 min est considéré comme fortement photoprotecteur. Le document Hupel et al montre que la perte d'absorbance à 650 nm de la CMS durant l'irradiation suit une loi exponentielle telle que (A650nmCMS)t=i2o min = (A65onmCMS)t=o x e"kt. Le temps de demi-vie de la CMS est alors calculé par t1/2 CMS = In2 / k. De plus, une irradiation est réalisée au préalable avec uniquement le solvant de reprise de l'échantillon en guise de témoin afin de retirer le temps de demi-vie dû au solvant.
- la concentration efficace en extrait nécessaire pour protéger la CMS de la dégradation pendant 120 min (EC120). Ce paramètre traduit la quantité d'extrait nécessaire pour obtenir une efficacité photoprotectrice minimale : plus cette concentration est faible et plus l'échantillon est photoprotecteur Hupel et al. ont montré l'existence d'une relation logarithmique entre la teneur en extrait testé et le temps de demi-vie de la CMS telle que :
t-i/2 CMS = b + a x In (concentration en extrait)
Les échantillons sont alors testés à 0.1 et 1 g L"1 afin de déterminer les paramètres a et b de l'équation ci-dessus :
b = ti/2 CMS à 1 g L"1 a = (ti/2 CMS à 0.1 g L"1 - 11/2 CMS à 1 g L"1) / In (0.1 )
La concentration efficace en extrait nécessaire pour protéger la CMS de la dégradation pendant 120 min est alors calculée par EC120 = e(120"b)/a
Les critères d'évaluation de l'intensité de l'activité photoprotectrice d'extraits bruts sont alors :
• Si ti/2 CMS > 120 min à 0.1 g L-1 d'extrait = Très forte activité photoprotectrice et pas de test des extraits à 1 g L-1
« Si t-,,2 CMS à 0.1 g L"1 d'extrait < 120 min < t1/2 CMS à 1 g L"1 d'extrait =
Forte à faible activité photoprotectrice ; Calcul de EC120 pour classer les extraits :
Si EC120 < 0.2 g L"1 = Forte activité
Si 0.2 g L"1 <ECi2o< 0.4 g L"1 = Activité moyenne
Si EC120 > 0.4 g L"1 = Faible activité
« Si ti/2 CMS à 1 g L"1 d'extrait est < 120 min = Pas d'activité photoprotectrice
Pour les fractions purifiées, le test peut être réalisé uniquement à 0.1 L"1 et on considère alors :
· Si t-i/2 CMS > 120 min = Très forte activité photoprotectrice
• Si t-i/2 CMS < 120 min = Faible activité photoprotectrice
Cette méthode décrite dans Hupel et al (Talanta, op. cit.) est particulièrement adaptée aux extraits végétaux. Par ailleurs, cette méthode a été validée par Hupel et al, en testant neuf filtres UV standard utilisés dans l'industrie cosmétique européenne et en comparant les résultats de leurs activités avec celles d'une méthode in vitro, proche de la méthode de référence COLIPA. Certaines différences ont été observées, qui peuvent être expliquées par le ratio d'irradiation UV-B/UV-A différent entre le test de Hupel et al et le test COLIPA.
Les plantes halophiles (ou halophytes) colonisant les milieux salés littoraux (dunes, falaises, marais) sont soumises à des conditions environnementales extrêmement changeantes de par leur exposition aux embruns et aux marées (salinité, lumière, température... Leur survie dans ces milieux contraignants est notamment due à une forte capacité d'acclimatation grâce à la synthèse de molécules de défense variées et potentiellement originales. Ainsi, Hupel et al ont étudié le potentiel de photoprotection d'extraits de plantes halophiles, ces plantes étant particulièrement exposées à de fortes radiations UV dans leurs milieux.
Les auteurs ont ainsi rapporté un potentiel photoprotecteur important pour les extraits de plantes halophiles testées, et notamment Crithmum maritimum et Matricaria maritima. Ces extraits ont été obtenus par lyophilisation d'échantillons de parties aériennes, broyés en poudre fine, et extrait par macération dans le méthanol. JP 2012 020946 décrit une composition pour le traitement des cheveux qui contient un mélange de plusieurs plantes halophiles dont Crithmum maritimum et Matricaria maritima. Cette composition n'est donc pas une composition topique destinée à être appliquée sur la peau, mais est utilisée pour la protection des cheveux. Ce document ne fournit aucune information sur les extraits utilisés, ni sur les propriétés photoprotectrices de compositions contenant les mélanges envisagés d'extraits de plantes halophiles.
US 2005123499 décrit une composition cosmétique contenant un agent filtrant les UV, ainsi qu'un extrait de Crithmum maritimum. Ce document ne décrit pas de compositions cosmétiques comprenant un mélange d'extraits d'au moins deux plantes halophiles.
L'invention se base sur le fait que l'on peut obtenir des compositions photoprotectrices améliorées lorsqu'elles contiennent des extraits de plusieurs plantes halophiles. En particulier, ces compositions contiennent plusieurs extraits éthanoliques de plantes halophiles. Un extrait éthanolique, au sens de l'invention est un extrait d'une plante, obtenu avec un solvant éthanolique. Ces compositions peuvent en particulier présenter une amélioration des niveaux d'absorption des UV (en particulier des UV-B), des durées d'efficacité, ou un élargissement des spectres d'absorption par rapport à des compositions ne contenant qu'un seul extrait de plante. De façon surprenante, des synergies ont été observées. Ainsi, ces mélanges peuvent être utilisés en tant que filtres à ultra violets, en particulier en tant que filtres à UV-B, mais également en tant que filtres à UV-A.
Ainsi, l'invention se rapporte notamment à une composition cosmétique, ayant une fonction photoprotectrice caractérisée en ce qu'elle comprend un mélange d'extraits d'au moins deux plantes halophiles. De manière préférée, il s'agit d'extraits éthanoliques, c'est-à-dire que les extraits de plantes introduits dans la composition selon l'invention ont été obtenus avec un solvant éthanolique. Toutefois, d'autres solvants (à base de méthanol, de chloroforme, de solvants polaires ou apolaires, acides ou basiques) peuvent aussi être utilisés dans le cadre de l'invention.
Le terme « solvant éthanolique » se rapporte à l'éthanol pur ou à un solvant contenant 50 % au moins (en volume) d'éthanol avec un autre solvant miscible à l'éthanol. De préférence, le second solvant est adapté à l'obtention d'extraits que l'on souhaite utiliser dans une composition destinée à l'application chez l'homme. Ainsi, un mélange éthanol / eau (éthanol à 50 % en volume ou plus) est considéré comme un solvant éthanolique, dans le cadre de la présente invention).
Cet extrait éthanolique est obtenu par tout moyen connu dans l'art permettant l'obtention de composés solubles dans l'éthanol. Par ailleurs, et comme vu plus haut, dans le cadre de la présente invention, le terme « extrait éthanolique » se rapporte également aux extraits hydro-éthanoliques, c'est-à-dire solubles dans un solvant comprenant l'éthanol mélangé avec de l'eau.
Dans un mode de réalisation, cette composition comprend un extrait éthanolique d'exactement deux plantes halophiles. Dans un autre mode de réalisation, cette composition comprend un extrait éthanolique alcoolique de trois plantes halophiles. Bien qu'il soit possible que ladite composition présente des extraits issus de plus de trois plantes halophiles, ces modes de réalisations ne sont généralement pas préférés.
Dans le cadre de la présente demande, une composition ayant une propriété photoprotectrice est une composition permettant de filtrer les ultra-violets (c'est-à-dire de diminuer l'intensité des UV après que ceux-ci ont traversé ladite composition). La composition photoprotectrice permet donc de limiter l'exposition de la peau au rayonnement. En particulier, les compositions cosmétiques à propriétés photoprotectrices selon l'invention sont parfaitement adaptées pour filtrer les UV-B, les UV-A ou à la fois les UV-B et les UV-A.
Dans un mode de réalisation préféré, lesdits extraits ont été obtenus par macération avec un solvant éthanolique, c'est-à-dire que l'on a laissé des broyats de plantes ou de parties de plantes macérer dans le solvant éthanolique. Cette étape de macération peut être effectuée à température ambiante, avec ou sans agitation, pendant une durée qui est adaptée par l'homme du métier (une durée supérieure à 15 minutes, mais inférieure à 2h, préférentiellement inférieure à 1 h, de façon plus préférée inférieure à 30 minutes, est parfaitement appropriée).
Dans un mode de réalisation particulier, le solvant d'extraction contient également de l'eau, en particulier au maximum 50 % d'eau.
Les halophytes envisagées pour la préparation des compositions selon l'invention sont des plantes adaptées aux milieux salés ou aux milieux à pression osmotique importante. Ces plantes peuvent être des « halophytes facultatives » (pouvant résister à d'importantes concentration de sel dans le milieu, mais se comportant normalement sur des sols non salés) ou être des « halophytes obligatoires », qui ne se développent complètement qu'en présence de fortes concentrations salines.
Parmi les halophytes utilisables pour leur potentiel photoprotecteur dans le cadre de la présente invention, on choisit particulièrement qu'un moins une des plantes soit du genre Matricaria, Crithmum ou Aster. En particulier, on préfère des plantes des espèces Crithmum maritimum, Matricaria maritima ou Aster tripolium. D'autres plantes adaptées sont choisies dans le genre Beta (en particulier Beta vulgaris, notamment subsp. maritima), ou Limonium (Limonium vulgare ou Limonium latifolium sont particulièrement adaptés,).
Dans un mode de réalisation préféré, ladite composition contient un extrait éthanolique de Matricaria maritima ou Crithmum maritimum ou Aster tripolium, ainsi qu'un extrait éthanolique d'une autre halophyte. Dans un mode de réalisation particulier, cet autre plante halophile est du genre Matricaria, Crithmum, Aster, Beta ou Limonium.
Dans un mode de réalisation préféré, ladite composition contient un extrait éthanolique de Matricaria maritima ou Crithmum maritimum ou Aster tripolium, et un extrait d'une autre plante choisie parmi Beta maritima, Limonium vulgare, Limonium latifolium, Crithmum maritimum et Matricaria maritima. Ainsi, la composition selon l'invention comprend préférentiellement un mélange d'extraits de Matricaria maritima et Crithmum maritimum ou un mélange d'extraits de (Matricaria maritima ou Crithmum maritimum ou Aster tripolium) et de (Aster tripolium, Beta maritima, Limonium vulgare ou Limonium latifolium).
Sont donc objets préférés de l'invention les compositions contenant un mélange d'extraits éthanoliques de :
- Matricaria maritima et Crithmum maritimum Matricaria maritima et Beta maritima
Matricaria maritima et Limonium vulgare
Matricaria maritima et Limonium latifolium
Matricaria maritima et Aster tripolium
- Crithmum maritimum et Aster tripolium
Crithmum maritimum et Beta maritima
-Crithmum maritimum et Limonium vulgare
Crithmum maritimum et Limonium latifolium
- Aster tripolium et Beta maritima
- Aster tripolium et Limonium vulgare
- Aster tripolium et Limonium latifolium
L'invention se rapporte également à une composition telle que décrite plus haut, notamment pour son utilisation dans la protection d'un épiderme contre un rayonnement UV, en particulier le rayonnement solaire. Elle se présente alors sous la forme d'une composition topique, en particulier une sous la forme d'une crème, d'une lotion, d'un onguent ou d'une pommade, d'une émulsion, c'est-à-dire destinée à être appliquée sur la peau. Ces compositions sont préparées selon des méthodes connues dans l'art.
Les compositions selon l'invention peuvent également contenir un filtre solaire minéral. De tels filtres minéraux sont connus, et incluent les oxydes métalliques, notamment les oxydes de titane (dioxyde de titane amorphe ou cristallisé sous forme rutile et/ou anatase), les oxydes de zinc, les oxydes de fer, les oxydes de zirconium, les oxydes de cérium ou leurs mélanges. Ils peuvent se présenter sous forme de micro- ou nano-pigments (enrobés ou non).
De même, on peut utiliser tout filtre organique anti UV-A et/ou UV-B dans la composition selon l'invention. Certaines de ces molécules sont citées dans Hupel et al, mais on peut mentionner les dérivés de dibenzoylméthane, les dérivés de benzophénone, les anthranilates, les dérivés de triazine, et les mélanges de ces filtres (filtre anti UV-A). Comme filtres anti UV-B, on peut citer les dérivés de l'acide salicylique, les dérivés de l'acide cinnamique, les dérivés de β, β '-diphénylacrylate liquide, les dérivés de l'acide p-aminobenzoïque, le 4-méthyl benzylidène camphre, l'acide 2-phénylbenzimidazole 5-sulfonique, les dérivés de 1 ,3,5-triazine, et les mélanges de ces filtres. En fonction du résultat recherché, un mélange de filtres anti UV-A et UV-B peut être utilisé. L'invention se rapporte également à une méthode de préparation d'une composition photoprotectrice, ladite méthode comprenant l'étape de mélange d'extraits éthanoliques d'au moins deux plantes halophiles dans un milieu cosmétiquement acceptable.
L'invention se rapporte aussi à une méthode de préparation d'une composition cosmétique comprenant l'étape de mélange d'extraits d'au moins deux plantes halophiles avec des excipients pharmaceutiquement (cosmétiquement) acceptables.
Le milieu ou les excipients cosmétiquement acceptables sont choisis selon les connaissances de l'homme du métier. Il consiste notamment en de l'eau ou un mélange d'eau et de solvant, ledit solvant pouvant être un alcool inférieur en C1 - C4 comme l'éthanol ou l'isopropanol ou un polyol ou un éther de polyol comme la glycérine, le polypropylène glycol ou leurs éthers.
Dans un mode de réalisation particulier, ladite méthode comprend également une étape de concentration (ou purification) des actifs desdits extraits éthanoliques. Cette étape est préférentiellement réalisée par chromatographie d'adsorption d'extraits de broyats de plantes sur colonne C18. L'élution est alors réalisée par passage de solvants hydroalcooliques de polarité décroissante (100% d'eau à 100% d'éthanol). De manière préférentielle, les extraits photoprotecteurs sont récupérés avec un solvant d'élution composé de 50 à 100% d'éthanol.
Dans un mode de réalisation préféré, la concentration finale du mélange d'extraits éthanoliques d'au moins deux plantes halophiles sera préférentiellement de 0.1 % (1 g L"1) dans le cas de mélanges d'extraits bruts (notamment ceux obtenus par macération dans le solvant éthanolique) et préférentiellement de 0.01 % (0.1 g L"1) dans le cas de mélanges d'extraits purifiés (notamment ceux obtenus par chromatographie).
Lors du mélange d'extraits de deux plantes halophiles constituant la composition photoprotectrice, on ajoute de préférence chaque extrait à la même concentration.
Selon certains modes de réalisation de la présente invention, la composition photoprotectrice comprend un mélange d'extraits éthanoliques bruts ou purifiés d'au moins deux plantes halophiles qui peut être utilisé soit sous forme liquide soit sous forme sèche après évaporation du solvant et/ou lyophilisation de la partie aqueuse dans le cas de l'utilisation d'extraits hydroalcooliques. Dans le cas de la préparation du mélange sous forme sèche, il est préférable que l'on effectue le mélange des extraits sous forme liquide, pour s'assurer de l'homogénéité du mélange, puis que l'on effectue l'étape de séchage.
Dans les compositions cosmétiques de type crème, le mélange d'extraits d'au moins deux plantes halophiles sera préférentiellement préparé sous forme d'un mélange d'extraits bruts liquide de concentration finale égale à 1 % (10 g L"1) ou d'un mélange d'extraits purifiés liquide de concentration finale égale à 0.1 % (1 g L"1) et incorporé au minimum à 10% du poids total de la préparation. Description des Figures
Figure 1 : Schéma du dispositif expérimental constitué d'une chambre d'irradiation (1 ) fournissant un rayonnement UV (60 W.m"2) et équipée d'un système de refroidissement externe, d'un plateau (2) permettant la disposition spécifique de 30 unités expérimentales à soumettre à irradiation, placées à 10 cm des lampes UV-B. Chaque unité expérimentale est composée d'une cuvette contenant l'échantillon testé placé au-dessus d'une cuvette contenant la CMS. E1 , E2...: échantillon 1 , échantillon 2, ...
Figure 2 : Distribution spectrale de l'énergie émise par les lampes à 312 nm.
Figure 3 : Profil d'absorption UV des extraits purifiés de Matricaria maritima obtenus par chromatographie d'adsorption sur colonne C18 avec un gradient eau/alcool (100/0 à 0/100).
Figure 4 : Temps de demi-vie de la CMS (min) de mélanges d'extraits méthanoliques, éthanoliques et hydroéthanoliques (éthanol 50%) à une concentration finale de 1 g L-1 (0.5 g L"1 de chacune des plantes). Cases blanches : Mélange d'extraits moins efficace qu'au moins un des deux extraits seuls à 1 g L"1 ; Cases gris clair : Mélange d'extraits aussi efficace qu'au moins un des deux extraits seuls à 1 g L"1 ; Cases gris foncé : Mélange d'extraits plus efficace que les deux extraits seuls à 1 g L"1 Exemples
Exemple 1 - Préparation des extraits de plantes halophiles
1 ) Préparation d'un extrait brut de Matricaria maritima, Crithmum maritimum, Limonium vulgare ou Beta maritima
Les plantes halophiles entières ou uniquement leurs parties aériennes (feuilles, tiges, fleurs) sont récoltées, lyophilisées puis broyées. La poudre de plante sèche est alors extraite avec le solvant souhaité (rapport masse sèche de plante/solvant égale à 1/10) par macération pendant 20 min. L'opération est renouvelée trois fois afin d'épuiser la matière végétale. L'extrait obtenu est filtré et le solvant est évaporé sous vide à une température de 40°C (et/ou lyophilisé si le solvant contient une partie aqueuse) afin d'obtenir un extrait sec. L'extrait sec est alors dissous dans un volume approprié du solvant d'extraction afin d'obtenir un extrait liquide à 1 % (10g.L"1).
Dans cet exemple, le choix des solvants d'extraction a permis d'obtenir des extraits aqueux, hydroalcooliques (éthanol 20%, éthanol 50%) et alcooliques (éthanol et méthanol).
2) Préparation d'extraits purifiés de Matricaria maritima
Un extrait brut alcoolique à 50% d'éthanol de Matricaria maritima préparé selon le protocole de l'exemple 1 ) est adsorbé sur une colonne de silice greffée C18 préalablement conditionnée avec 100% d'alcool puis 100% d'eau. Des extraits purifiés sont alors obtenus après élutions successives par des mélanges eau/alcool selon le gradient 0/100, 20/80, 40/60, 60/40, 80/20 et 100/0. Les différents extraits obtenus sont alors séchés par évaporation sous vide et/ou lyophilisation puis repris dans un volume approprié d'eau (fractions 0/100 à 40/60) ou d'alcool (fractions 60/40 à 100/0) pour obtenir un extrait liquide à 0.01 %.
3) Préparation d'un mélange de deux extraits de plantes halophiles
Le mélange d'extraits de plantes halophiles est préparé à une concentration finale de 0.1 % en diluant au 1/10 des parts équivalentes d'extraits à 1 % de deux plantes halophiles.
Exemple 2 Mesure de l'activité hoto protectrice d'extraits de plantes
1 ) Dispositif et Principe de la méthode
La méthode de mesure de la capacité d'échantillons à filtrer les radiations
UV-B est celle mise au point par Hupel et al. en 201 1 (op. cit.).
Les composés absorbeurs d'UV sont majoritairement localisés dans les tissus périphériques épidermiques des végétaux supérieurs, protégeant les tissus photosynthétiques sous-jacents de la dégradation. Cette « hiérarchisation » verticale des composés photoprotecteurs situés au-dessus des pigments photosynthétiques (notamment la chlorophylle sensible aux UV) a servi de modèle au développement du dispositif expérimental utilisé dans cette méthode (Figure 1 ). Ainsi, une cuve de spectrophotomètre UV contenant l'extrait à tester est placée horizontalement sur une autre cuve contenant la cible de dégradation, formant une unité expérimentale. L'ensemble des unités expérimentales est placé dans un dispositif où elles sont physiquement indépendantes les unes des autres, pour permettre une irradiation exclusivement verticale et limitée aux radiations UV-B provenant du dessus.
Le composé utilisé comme cible de dégradation est un dérivé synthétique de la chlorophylle (molécule se dégradant face aux UV), la chlorophylline de magnésium et de sodium (CMS), dont l'absorbance à 650 nm est mesurée avant et après exposition aux UV-B (Figure 2) dans une chambre d'irradiation. Les unités expérimentales sont exposées à une intensité de 40 W m-2 d'UV-B et de 20 W m-2 d'UV-A pendant deux heures et la capacité de l'échantillon à filtrer les radiations UV-B est ensuite basée sur une inhibition plus ou moins importante de la dégradation de la CMS. Les échantillons testés sont également évalués pour leur photostabilité par mesure de leur spectre d'absorbance dans l'UV-B avant et après irradiation. 2) Paramètres mesurés
2.2.1) Caractéristiques spectrales et photostabilité
Les caractéristiques spectrales des échantillons sont déterminées par la mesure de leur spectre d'absorbance dans l'UV (290-400 nm). Plusieurs paramètres sont alors calculés après intégration des aires d'absorbance des échantillons dans l'UV :
- Les longueurs d'onde maximales d'absorption de l'échantillon (Amax)
- La longueur d'onde critique (Ac)
- La photostabilité par le ratio de l'absorbance de l'échantillon entre 290 et 320 nm avant et après 2h d'irradiation (UV-B12o/UV-B0)
2.2.2) Activité photoprotectrice
L'activité photoprotectrice est déterminée par la capacité de l'échantillon à empêcher la dégradation de la CMS. Cette protection est calculée par le temps de demi-vie de la CMS (t1/2 CMS).
Les échantillons ont été testés à 0.1 et 1 g L"1. Une irradiation a été réalisée au préalable avec uniquement le solvant de reprise de l'échantillon en guise de témoin. Le temps de demi-vie de la CMS est calculé à chaque concentration testée tel que décrit dans la publication de Hupel et al. (201 1 , op. cit.).
La concentration efficace en extrait nécessaire pour protéger la CMS de la dégradation pendant 120 min (EC120) est également calculée. Les critères d'évaluation de l'intensité de l'activité photoprotectrice d'extraits bruts sont décrits ci dessous :
Si ti/2 CMS > 120 min à 0.1 g L"1 d'extrait = Très forte activité photoprotectrice et pas de test des extraits à 1 g L"1
• Si ti/2 CMS à 0.1 g L"1 d'extrait < 120 min < t1/2 CMS à 1 g L"1 d'extrait = Forte à faible activité photoprotectrice ; Calcul de EC120 pour classer les extraits :
Si EC120≤ 0.2 g L"1 = Forte activité
Si 0.2 g L"1 < EC120 ≤ 0.4 g L"1 = Activité moyenne
Si EC120 > 0.4 g L"1 = Faible activité
• Si ti/2 CMS à 1 g L"1 d'extrait est < 120 min = Pas d'activité photoprotectrice
Pour les fractions purifiées, le test peut être réalisé uniquement à 0.1 g L"1 et on considère alors :
• Si t-i/2 CMS > 120 min = Très forte activité photoprotectrice
• Si t-i/2 CMS < 120 min = Faible activité photoprotectrice
Exemple 3 : résultats
1 ) Activité photoprotectrice d'extraits bruts seuls
Les résultats d'activité photoprotectrice d'extraits bruts de plantes halophiles en fonction de différents solvants d'extraction sont présentés dans le Tableau 1 . Les caractéristiques spectrales et la photostabilité des extraits les plus actifs sont présentés dans le Tableau 2.
La publication de Hupel et al., a suggéré l'activité photoprotectrice d'extrait méthanolique de Matricaria maritima et de Crithmum maritimum avec des durée d'efficacité (t1/2 CMS) à 1 g L"1 respectivement de 494 et 438 min et des EC120 respectivement de 0.14 et 0.12 g L"1.
Dans la présente invention, ces extraits ont été testés ainsi que ceux de Beta maritima et Limonium vulgare avec du méthanol pur comme solvant d'extraction ainsi que de l'éthanol pur, de l'éthanol à 50%, de l'éthanol à 20% et de l'eau. Les résultats obtenus pour les extraits méthanoliques de Matricaria maritima et Crithmum maritimum dans la présente invention sont conformes à ceux déjà mis en évidence par Hupel et al. (Tableau 1 ).
Figure imgf000015_0002
Sodium (ti/2 CMS) d'extraits de plantes halophiles à 1 g L"1 (ligne supérieure) et EC120 (g L"1) (ligne inférieure) en fonction de différents solvants d'extraction. Pour un solvant d'extraction donné, la présence de lettres différentes indiquent des différences statistiques significatives d'activité photoprotectrice entre les espèces (ANOVA, Test LSD de Fisher, p=0.05).
Activité photoprotectrice faible : t1/2 CMS < 120 min à 1 g L"1 ou EC120 > 0.4 g L"1 Activité photoprotectrice moyenne : t1/2 CMS > 120 min à 1 g L"1 et 0.2 g L-1 <
Figure imgf000015_0001
Activité photoprotectrice forte (t1/2 CMS > 120 min et EC120 ≤ 0.2 g L"1)
Extraits Ethanol/Eau (50/50) Extraits Ethanol
Amax Ac UVB1?n Amax Ac UVB1?n
(nm) (nm) UVBo (nm) (nm) UVBo
Aster 296 294
360 0.74 375 0.56 tripolium 320 330
Beta
330 370 0.93 332 382 0.84 maritima
Crithmum 296 355 0.78 282 371 0.51 maritimum 323 332
281
Limonium 270
368 1 .00 294 388 0.97 vulgare 336
325
290
Matricaria 298
353 0.63 300 369 0.61 maritima 325
329
Tableau 2 : Propriétés spectrales (Maximum d'absorption (Amax), Longueur d'onde critique (Ac)) avant irradiation et photostabilité dans l'UV-B UVB12o/UVBo après 120 min d'irradiation d'extraits hydroéthanoliques (éthanol 50%) et éthanoliques de plantes halophiles.
L'analyse des extraits bruts montre une influence du solvant d'extraction sur l'activité photoprotectrice, notamment en termes de durée d'efficacité (t1/2 CMS) (Tableau 1 ).
Les extraits présentant les durées d'efficacité les plus fortes chez toutes les espèces sont les extraits alcooliques purs ou à 50% d'éthanol, dont le t1/2 CMS varie de 250 min à 540 min selon les espèces (Tableau 1 ) et est largement supérieur à la durée de l'irradiation (120 min).
Les extraits alcooliques à 20% d'éthanol ont également des durées d'efficacité fortes chez Matricaria maritima (t1/2 CMS = 250 min), moyennement fortes chez Crithmum maritimum et Beta maritima (t1/2 CMS = 180-200 min) et faibles chez Limonium vulgare et Aster tripolium (t1/2 CMS = 140-150 min).
Les extraits aqueux présentent une forte durée d'efficacité uniquement chez Matricaria maritima (t1/2 CMS = 250 min). Chez Limonium vulgare, les extraits alcooliques purs ou à 50% d'éthanol ont la même durée d'efficacité (t1/2 CMS = 250 min). De manière globale, Matricaria maritima est l'espèce offrant le plus large choix d'extraits photoprotecteurs actifs puisque la durée d'efficacité est forte pour des extraits aqueux à alcooliques purs (Tableau 1 ). Néanmoins, il est préférable d'utiliser ses extraits alcooliques purs ou à 50% d'éthanol qui ont une durée d'efficacité potentielle 1 .5 à 2 fois plus longue que les extraits aqueux ou les extraits alcooliques à 20% d'éthanol (t1/2 CMS = 400-540 min contre 250 min).
L'analyse des valeurs d'ECi20 obtenues pour les extraits alcoolique pur ou à 50% d'éthanol de plantes halophiles montrent que les concentrations minimales en extrait nécessaire pour limiter la dégradation de la Chlorophylline de Magnésium et Sodium (CMS) à 50% (t1/2 CMS = 120 min = durée de l'irradiation) sont comprises entre 0.05 et 0.3 g L"1 selon les espèces (Tableau 1 ). Selon Hupel et al. (201 1 , op.cit.), le t1/2 CMS de filtres UV-B autorisés dans des formulations cosmétiques à 1 g L"1 varie de 137 à 971 min et Γ EC120 de 0.01 à 0.4 g L"1. Les valeurs obtenues pour les extraits de plantes halophiles sont comprises dans ces intervalles et dénotent donc un potentiel fort de ces plantes en tant que compléments à des filtres UV chimiques et/ou minéraux.
L'analyse des caractéristiques spectrales des extraits alcooliques purs ou à 50% d'éthanol montrent des profils d'absorption différents selon les espèces. Pour les extraits alcooliques à 50% d'éthanol, un profil d'absorption similaire et majoritairement dans l'UV-B (290-320 nm) est observé pour les extraits de Matricaria maritima, d'Aster tripolium et de Crithmum maritimum au regard des maxima d'absorption (296-298 nm et 320-325 nm) et de la longueur d'onde critique inférieure à 370 nm (353-360 nm) (Tableau 2).
Les extraits alcooliques à 50% d'éthanol de Beta maritima et Limonium vulgare montrent une capacité d'absorption à la fois dans l'UV-B et l'UV-A au regard de leur maximum d'absorption dans l'UV (330-336 nm) et de la longueur d'onde critique égale à 370 nm (Tableau 2). Les extraits alcooliques purs de toutes les espèces halophiles ont potentiellement une capacité de photoprotection dans l'UV-B et l'UV-A avec des longueurs d'ondes critiques égales ou supérieures à 370 nm (Tableau 2).
La photostabilité des extraits est globalement plus faible pour les extraits alcooliques purs que pour les extraits alcooliques à 50% d'éthanol (Tableau 2). Les extraits alcooliques de Matricaria maritima, Aster tripolium et Crithmum maritimum ont une activité photoprotectrice forte (Tableau 1 ) mais une photostabilité qui pourrait être meilleure (0.51 à 0.78) alors que les extraits alcooliques de Limonium vulgare ont une activité plus faible mais la photostabilité la plus forte (0.84 à 1 .00). L'extrait alcoolique de Beta maritima a une activité photoprotectrice forte et une photostabilité forte (0.84-0.93).
2) Activité photoprotectrice d'extraits purifiés de Matricaria maritima
Les résultats d'activité photoprotectrice d'extraits purifiés par chromatographie d'adsorption sur colonne C18 chez Matricaria maritima sont présentés dans le Tableau 3. Le profil d'absorption dans l'UV des différents extraits purifiés est présenté en Figure 3, leurs propriétés spectrales et photostabilité dans le Tableau 4. Les fractions 60/40, 40/60 et 20/80 présentent une activité photoprotectrice est supérieure à celle de l'extrait brut
L'extrait purifié correspondant à la fraction 40/60 est aussi actif à 0.1 g L"1 que l'extrait brut à 1 g L"1 (t1/2 CMS = 399 ± 29)
Solvant d'élution (Eau/Alcool) utilisé sur colonne C18
Figure imgf000018_0001
Tableau 3 : Exemple de temps de demi-vie (min) de la Chlorophylline de Magnésium et Sodium (t1/2 CMS) d'extraits purifiés par chromatographie d'absorption sur colonne C18 chez Matricaria maritima. Les différents extraits purifiés ont été obtenus après adsorption d'un extrait alcoolique à 50% d'éthanol sur colonne C18 et élutions successives avec un gradient eau/alcool (100/0 à 0/100). Les temps de demi-vie sont donnés pour une concentration de 0.1 g L"1.
Figure imgf000018_0002
Tableau 4 : Propriétés spectrales (Maximum d'absorption (Amax), Longueur d'onde critique (Ac)) avant irradiation et photostabilité (UVB12o/UVBo) après 120 min d'irradiation des extraits purifiés et actifs de Matricaria maritima obtenus par chromatographie d'adsorption sur colonne C18.
Les résultats montrent que l'étape de purification d'un extrait brut alcoolique à 50% d'éthanol de Matricaria maritima par chromatographie d'adsorption permet d'obtenir des extraits purifiés actifs à faible concentration (0.1 g L"1), notamment pour les extraits obtenus avec un solvant d'élution composé de 40 à 80% d'alcool (Tableau 3). Chez Matricaria maritima, l'extrait purifié obtenu avec un solvant d'élution composé de 60% d'alcool a une activité photoprotectrice équivalente à 0.1 g L"1 à celle de l'extrait brut alcoolique à 50% d'éthanol à 1 g L"1 ( t1/2 CMS = 396-399 min). Il est donc possible d'obtenir des extraits purifiés photoprotecteurs utilisables à des concentrations 10 fois plus faibles que l'extrait brut pour la même activité.
L'analyse des caractéristiques spectrales des différents extraits purifiés montre une faible absorption dans l'UV des extraits obtenus avec 100% d'eau et 100% d'alcool, compatibles avec leur faible activité. Cela est logique puisque l'extrait à 100% d'eau contient essentiellement des sucres et l'extrait à 100% d'alcool essentiellement des pigments photosynthétiques, molécules n'ayant pas d'activité photoprotectrice connue. Les extraits les plus actifs (20% à 80% d'alcool) absorbent fortement dans l'UV, majoritairement dans l'UV-B pour les extraits à 20 et 40% d'alcool (Ac = 347-350 nm) et à la fois dans l'UV-B et l'UV-A pour les extraits à 40 et 60% d'alcool (Ac > 370 nm) (Tableau 4 et Figure 3). Les extraits à 20 et 40 % d'alcool ont le même profil d'absorption (Amax = 291/319 nm) et la même photostabilité (0.76-0.77). Les extraits les plus actifs à 60% et 80% d'alcool ont respectivement un maximum d'absorption à 341 et 329 nm et des photostabilité proches (0.67-0.73) (Tableau 4 et Figure 3). 3) Activité photoprotectrice de mélanges d'extraits alcooliques ou hvdroalcooliques Influence du mélange d'extraits sur l'efficacité photoprotectrice
Pour le mélange d'extrait de plantes halophiles, il a été choisi de garder les extraits alcooliques pur (méthanol et éthanol) et à 50% d'éthanol qui sont les plus actifs en termes de durée d'efficacité (t1/2 CMS) et/ou de concentration efficace (ECi2o)- Les résultats de l'activité photoprotectrice et des caractéristiques spectrales des mélanges d'extraits alcooliques purs (éthanol ou méthanol) ou à 50% d'éthanol sont présentés en Tableau 5 et Figure 4.
Le mélange d'extraits éthanoliques de Matricaria maritima et Crithmum maritimum est le plus performant en termes de durée potentielle d'efficacité (t1/2 CMS jusqu'à 698 min) (Figure 4) et il y a un effet synergique par rapport à l'utilisation des extraits des deux plantes seuls (Tableau 1 ).
De façon surprenante, et contrairement à ce qui aurait pu être attendu à la vue des résultats de Hupel et al, le mélanges d'extraits méthanoliques de Matricaria maritima et Crithmum maritimum a un effet inhibiteur sur l'activité photoprotectrice par rapport à l'utilisation d'un des deux extraits seuls (Tableau 1 et Figure 4). Un tel effet inhibiteur n'est pas observé pour les mélanges d'extraits hydroéthanoliques ou éthanoliques, où on observe un effet synergique du mélange sur l'activité photoprotectrice par rapports aux extraits seuls (Figure 4).
Ces résultats montrent bien l'importance du solvant d'extraction pour l'obtention d'un effet photoprotecteur pour des mélanges d'extraits de plantes halophiles.
Ainsi, le méthanol en tant que solvant d'extraction, semble avoir un effet inhibiteur sur l'activité photoprotectrice lors du mélanges d'extraits, ce qui n'était pas le cas pour les extraits seuls (Tableau 1 ).
Cet effet inhibiteur semble également confirmé pour les mélanges d'extraits méthanoliques de Matricaria maritima, Aster tripolium ou Crithmum maritimum avec Limonium vulgare comparativement aux mélanges à base d'extraits éthanoliques (Figure 4).
Les mélanges d'un extrait éthanolique (pur ou à 50%) de Matricaria maritima ou Crithmum maritimum ou Aster tripolium avec un même extrait de Limonium vulgare ou Beta maritima donnent des activités photoprotectrices supérieures aux deux extraits seuls (Crithmum maritimum + Limonium vulgare) ou au moins équivalentes à l'extrait le plus actif seul (Figure 4). Les mélanges d'extrait de Matricaria maritima ou Crithmum maritimum avec un même extrait d'Aster tripolium donnent des activités photoprotectrices au moins équivalentes à un des deux extraits seul.
L'ensemble des mélanges cités ont une forte activité photoprotectrice bien qu'il soit préférable d'utiliser les mélanges d'extraits éthanoliques purs plutôt que les mélanges d' extraits éthanoliques à 50% d'éthanol qui donnent une durée d'efficacité maximum (Figure 4). En termes d'efficacité photoprotectrice, le mélange d'extraits éthanoliques de Crithmum maritimum et de Matricaria maritima sera préféré. Influence du mélange d'extraits sur le spectre d'action et la photostabilité
L'analyse de l'ensemble des données obtenues sur des extraits bruts seuls de plantes halophiles à également suggéré que l'association d'extrait éthanolique de Matricaria maritima ou Crithmum maritimum ou Aster tripolium (forte activité photoprotectrice, absorption majoritaire dans l'UV-B, faible photostabilité) avec un extrait éthanolique de Limonium vulgare ou Beta maritima (activité photoprotectrice globalement plus faible mais absorption plus importante dans l'UV-A et meilleure photostabilité) pourrait donner une composition photoprotectrice efficace notamment en termes d'amélioration de la photostabilité et du spectre d'action (activité photoprotectrice dans les UV-A).
Les résultats montrent que le mélanges d'extraits éthanoliques purs ou à
50% d'éthanol de Matricaria maritima, Aster tripolium ou Crithmum maritimum avec Beta maritima ou Limonium vulgare donnent des photostabilités meilleures par rapport aux extraits seuls (Tableaux 2 et 5) (ce qui est également le cas lors de l'association deux à deux d'extraits de Matricaria maritima, Aster tripolium et Crithmum maritimum). Les photostabilités les plus fortes sont obtenues pour les mélanges d'extraits éthanoliques à 50% (photostabilité entre 0.9 et 1 ), ainsi que pour le mélange d'extraits éthanoliques purs de Matricaria maritima ou Aster tripolium avec Beta maritima (photostabilité égale à 0.96 et 0.91 , respectivement) (Tableau 5). Les autres mélanges d'extraits éthanoliques ont cependant une très bonne photostabilité (0.77 à 0.85).
Figure imgf000021_0001
Tableau 5 : Propriétés spectrales (Maximum d'absorption (Amax), Longueur d'onde critique (Ac)) avant irradiation et photostabilité (UVB120/UVB0) après 120 min d'irradiation d'extraits hydroalcooliques et alcooliques de quelques halophytes. Les cases foncées représentent les extraits pour lesquels on obtient une augmentation de la longueur d'onde critique et de la photostabilité
Concernant l'élargissement du spectre d'action, l'ensemble des mélanges d'extraits éthanoliques purs donnent une longueur d'onde critique supérieures à 370 nm, suggérant une photoprotection potentielles à la fois dans les UV-A et les UV-B (Tableau 5), et améliorée par rapport aux extraits seuls (Tableau 2).
En termes de spectre d'action, les mélange d'extraits éthanoliques purs de Matricaria maritima, Aster tripolium ou Crithmum maritimum avec Limonium vulgare et de Matricaria maritima ou Aster tripolium avec Beta maritima donnent les longueurs d'onde critique les plus fortes. Le mélange d'extrait éthanoliques purs deux à deux de Matricaria maritima, Aster tripolium et Crithmum maritimum n'est pas préféré pour son spectre d'action (longueurs d'onde critique supérieures à 370 nm mais plus faibles par rapport aux autres mélanges).
Le mélange d'extraits éthanoliques purs de Matricaria maritima et Beta maritima donnent un spectre d'absorption avec trois maxima d'absorption dans le domaine de l'UV, d'où une spécificité d'action plus large.
Pour les mélanges d'extraits éthanoliques à 50% d'éthanol, les longueurs d'ondes critiques obtenues sont égales ou légèrement supérieures aux extraits seuls, mais inférieures à 370 nm. Cela indique que les extraits éthanoliques à 50% d'éthanol seront préférentiellement utilisés pour la protection contre les UV-B.
En résumé, l'ensemble des mélanges d'extraits éthanoliques (pur ou à 50% d'alcool) de plantes halophiles testés peut être utilisé pour leur activité photoprotectrice contre les UV-B en termes d'efficacité et de bonne photostabilité. Concernant une protection potentielle à la fois contre les UV-B et les UV-A, les mélanges d'extraits éthanoliques purs seront préférés pour leur spectre d'action.

Claims

Revendications
1 . Composition cosmétique, caractérisée en ce qu'elle comprend un mélange d'extraits d'au moins deux plantes halophiles.
2. Composition cosmétique selon la revendication 1 , caractérisée en ce qu'elle comprend un mélange d'extraits éthanoliques d'au moins deux plantes halophiles.
3. Composition selon la revendication 2, caractérisée en ce que au moins un extrait a été obtenu par extraction par chromatographie d'adsorption après élution avec un solvant éthanolique composé de 20 à 80% d'éthanol.
4. Composition selon la revendication 2 ou 3, caractérisé en ce que ledit solvant éthanolique contient au minimum 50 % d'éthanol
5. .Composition selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce qu'au moins l'une des plantes halophiles est choisie dans le groupe constitué des plantes de genre Matricaria, Crithmum, et Aster.
6. Composition selon la revendicaton 5, caractérisée en ce qu'au moins l'une des plantes halophiles est choisie dans le groupe constitué de Matricaria maritima, Crithmum martitimum, et Aster tripolium.
7. Composition selon la revendication 5 ou 6, caractérisée en ce que la seconde plante halophile est choisie parmi Beta maritima, Limonium vulgare, Limonium latifolium, Aster tripolium et (Crithmum maritimum ou Matricaria maritima (en fonction de la première plante)).
8. Composition selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisée en ce qu'elle contient en outre un filtre solaire minéral.
9. Composition selon l'une des revendications 1 à 8, pour son utilisation dans la protection d'un épiderme contre le rayonnement UV.
10. Composition selon l'une des revendications 1 à 9, caractérisée en ce qu'elle se présente sous la forme d'une crème, d'une lotion, d'un onguent ou d'une pommade.
1 1 . Méthode de préparation d'une composition cosmétique comprenant l'étape de mélange d'extraits d'au moins deux plantes halophiles avec des excipients pharmaceutiquement (cosmétiquement) acceptables.
12. Méthode selon la revendication 1 1 , caractérisée en ce que lesdits extraits sont des extraits éthanoliques.
13. Méthode selon la revendication 12, caractérisée en ce qu'elle comprend une étape d'isolation desdits extraits éthanoliques à partir d'échantillons de plantes.
14. Méthode selon la revendication 13, caractérisée en ce que ladite étape d'isolation est réalisée par chromatographie d'adsorption d'extraits de broyats de plantes sur colonne C18, par élution avec un solvant hydroéthanolique.
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