WO2014192907A1

WO2014192907A1 - 運動神経の障害を呈する疾患の鑑別に用いるマイクロｒｎａの検出方法

Info

Publication number: WO2014192907A1
Application number: PCT/JP2014/064377
Authority: WO
Inventors: 隆徳横田; 明町田; 卓哉大久保; 水澤　英洋
Original assignee: 国立大学法人東京医科歯科大学
Priority date: 2013-05-30
Filing date: 2014-05-30
Publication date: 2014-12-04

Abstract

　本発明は、運動神経の障害を呈する疾患において、特に筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、進行性筋萎縮症（ＰＭＡ）、純粋慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（mdＣＩＤＰ）、又は、多巣性運動性ニューロパチー（ＭＭＮ）の鑑別を行うための疾病マーカーを見出して、特に初期段階での的確な鑑別が難しいこれらの疾病の鑑別を容易に行う途を提供することを課題とする発明である。そして本発明者は、髄液中のマイクロＲＮＡを母集団とする、特定の２１８種類マイクロＲＮＡの増減が、これらの４種類の疾患の優れた鑑別指標となることを見出し、本発明を完成した。さらに本発明者は、髄液中のマイクロＲＮＡから特定疾患の鑑別指標を見出し、次いで当該鑑別指標を用いた鑑別を、マイクロＲＮＡ検出用基板を用いて行う際の標準化法を確立し、髄液中のマイクロＲＮＡを用いる疾病の鑑別手段を提供するものである。

Description

運動神経の障害を呈する疾患の鑑別に用いるマイクロＲＮＡの検出方法

　本発明は、特定の疾患の鑑別に用いる検出方法に関する発明である。より具体的には、髄液中に存在する特定のマイクロＲＮＡを指標として用いる、運動神経の障害を呈する疾患である、筋萎縮性側索硬化症、進行性筋萎縮症、純粋運動型慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、又は、多巣性運動性ニューロパチー、の鑑別に際して用いる検出方法に関する発明である。

　さらに本発明は、髄液中のマイクロＲＮＡの検出用アレイを用いて検出を行う際の標準化方法に関する発明を提供する。

　運動神経の障害に伴って起こり得る運動麻痺は、上下肢の随意的な運動が侵された状態であり、運動中枢から筋肉に至るまでのどこかに障害があることを示唆するものである。従って運動麻痺を診察する場合には、大脳皮質から内包、脳幹、脊髄、脊髄前角運動ニューロンへとつながる上位運動ニューロンの障害である中枢性麻痺、脊髄前角運動ニューロン、末梢神経から筋に至るまでの下位運動ニューロンの障害、神経筋接合部の障害、及び、筋肉の障害についての局所診断を念頭に入れて、正確な鑑別・診断を行う必要がある。運動神経の障害に伴って起こり得る運動麻痺を来す疾患は数多く存在するが、その正しい診断の過程を身に付けることは、神経内科系の疾患を扱う医療関係者にとっての必須の事項である。

　しかしながら、運動神経の障害を呈する疾患には紛らわしいものも多く、その的確な鑑別・診断をサポートするために、視診、診察手技、鑑別の基礎知識等の基礎的な鑑別・診断手段に加えて、画像診断技術や神経生理学的診断法が開発されている。

　具体的には、下記の非特許文献１、２に運動神経の障害を呈する疾患の的確な鑑別・診断をサポートするための技術が開示されている。

Neurology(2009).73(29):1686-1692 Neurology(2006).67(4):592-596

　上記した状況のもと、本発明者らは、運動神経の障害を呈する疾患において、特に筋萎縮性側索硬化症（Amyotrophic Lateral Sclerosis：ＡＬＳ）、進行性筋萎縮症（Progressive muscular atrophy：ＰＭＡ）、純粋慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（motor dominant chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy：mdＣＩＤＰ）、又は、多巣性運動性ニューロパチー（multifocal motor neuropathy：ＭＭＮ）の鑑別を行うための疾病マーカーを見出して、特に初期段階での的確な鑑別が難しいこれらの疾病の鑑別を容易に行う途を提供することを課題として、検討を行った。例えば、後述するようにmdＣＩＤＰ又はＭＭＮの治療には「免疫グロブリンの大量投与」が有効であることが分かっている。しかしながらこの療法のコストは、１回１００万円以上で、しかもこれが年６～１２回必要、と非常に高額であるため、この療法が適合しないＡＬＳやＰＭＡに類似した症例に対して、元々無効である可能性を見越して治療を行うことは困難である。よって、現時点では免疫グロブリンの大量投与は、未だ実質的な治療項目とはいえない。仮に、ＡＬＳやＰＭＡと、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮとの鑑別が容易になれば、現状ではリスク視されている免疫グロブリンの大量投与を的確に行うことが可能となり、mdＣＩＤＰやＭＭＮの患者にとっては、早期に適切な治療を受けることによって回復可能性を高めることができると考えられる。

　このような具体的な課題のもと、本発明者は髄液検体中のマイクロＲＮＡ（microＲＮＡ（miＲＮＡ））を、上記の運動神経の障害を呈する疾患の指標とする可能性についての検討を行った。

　miＲＮＡは２１～２３塩基程度からなる短鎖ＲＮＡで、標的となるｍＲＮＡに抑制性に働くことで遺伝子発現の制御に重要な役割を果たしている。このmiＲＮＡの発現パターンが癌や免疫疾患、神経変性疾患でも変化することが報告されており、miＲＮＡの変化を血液等における疾患マーカーとして利用した報告が認められる。

（１）標準化法やデータ解析法の基となる手段について
　本発明者は、目的とする疾患マーカーとなり得るmiＲＮＡを見出す基として「miＲＮＡ検出用アレイ」を選択した。「miＲＮＡ検出用アレイ」は、主にガラスや硬質ポリマー等の基板状素材の表面に、検体中のmiＲＮＡと結合し得るプローブ核酸を網羅的、すなわち、少なくとも５００種類以上のプローブ核酸を整列・配置（アレイ化）したものの総称である。検体中のmiＲＮＡと接触することにより、当該miＲＮＡを捕捉して、事前に標識された検体におけるmiＲＮＡの標識シグナルを検出することによって、当該検体中のmiＲＮＡの存在又は非存在、あるいは、シグナル強度に応じた存在量を検出することができる。特にmiＲＮＡ検出用アレイでは、２つの検体、例えば、疾病に罹患した患者の検体と健常人の検体の間で存在状態の異なるmiＲＮＡ群を、数少ない実験で網羅的に同定できる。すなわち、多数の検体についてmiＲＮＡ検出用アレイで解析を行い、データを蓄積し、それらの情報を並列比較することにより、検体の記述、分類、評価を行うことが可能である。

　miＲＮＡは、進化の過程において保存されている、短い非コードのＲＮＡで、翻訳レベルで遺伝子発現を制御していることが知られている。哺乳動物のゲノムには１０００種類を超える特有のmiＲＮＡがコードされており、少なくとも遺伝子の３０％がこれらのmiＲＮＡ発現に制御されていると推測されている。

　最近では髄液中のmiＲＮＡを中枢原発悪性リンパ腫、神経膠腫、アルツハイマー病等の疾病マーカーとして利用した報告も認められる。

　通常miＲＮＡ検出用アレイの使用に際しては、検体をアレイに接触させて得られるシグナル値を相対化する「標準化」と呼ばれる工程が行われる。しかしながら髄液中のmiＲＮＡ量は、血液等に比べると少量であり、かつ、その採取可能な量も限定されており、しかも髄液中の内因性コントロールとなる既知のmiＲＮＡが、現状では知られていないことが問題点として挙げられる。miＲＮＡ検出用アレイを髄液のmiＲＮＡに対して標準化しようとすると、定量性の乏しいmiＲＮＡまで標準化の母集団に入れざるを得ず、それは、不正確な情報を含んだ要素を、標準化の母集団が含むことを意味するものであり、正確な統計処理を行う際の大きな妨げになることになる。

　＜本発明の標準化方法＞
　本発明者は、この問題を解決するために標準的な採取量の髄液中のmiＲＮＡをmiＲＮＡ検出用アレイに反応させて、定常反応性、好適にはさらに定量性の認められるmiＲＮＡのみを標準化の母集団を構成するmiＲＮＡとし、それらのmiＲＮＡのシグナルの中から適切なものを選び、さらにこれを基にシグナルデータの標準化を行うことにより、この問題を解決できることを見出した。

　すなわち本発明は、以下の（Ａ）～（Ｃ）の工程を含むことを特徴とする、miＲＮＡ検出用アレイを用いたmiＲＮＡの標準化方法（以下、本発明の標準化方法ともいう）を提供し、さらに当該標準化方法を用いたmiＲＮＡの定量方法を提供する。
（Ａ）髄液検体をmiＲＮＡ検出用アレイに接触させて得られるmiＲＮＡのシグナル値に基づき、定常発現が認められるmiＲＮＡ群を選別し、
（Ｂ）当該miＲＮＡ群においてシグナル値が上位２５％～７５％の範囲にある、いずれかのマイクロＲＮＡのシグナル値のうちの一種類を選択し、
（Ｃ）当該選択されたmiＲＮＡのシグナル値を特定の数に置き換え、当該置き換えをするために行われる演算において用いられる数的手段を求め、当該数的手段を当該miＲＮＡ群を構成する個々のmiＲＮＡのシグナル値に対して講じることで、これらのシグナル値を相対的なシグナル強度とする補正を行うことにより、当該miＲＮＡ群の標準化を行う。

　そして、当該標準化がなされたシグナル強度を基にmiＲＮＡの定量を行うことができる。

　上記工程（Ａ）に関し、本発明の標準化方法においてmiＲＮＡ検出用アレイに接触させるために用いられる髄液検体量は限定されるものではないが、標準的な量であることが好適である。すなわち標準量を超えた大量の髄液を用いれば、標準化の母集団となるべき定常反応性や定量性のあるmiＲＮＡの数は増えるものの、臨床現場で現実に採取可能な髄液量を用いて標準化が可能なmiＲＮＡ群からは逸脱してしまい、現実的に適切な標準化の母集団からはかけ離れてしまう。逆に標準量よりも髄液量が少ないと母集団となるべきmiＲＮＡの数は過度に限定され、標準化の母集団としての信頼性が乏しくなる原因となり得る。この意味において本発明の標準化方法において用いられるべき髄液検体量は概ねリンパ球画分を除いた上清量として０．４５～１．８ｍＬの範囲であることが好適である。本実施例、及び、通常の臨床の現場では０．９ｍＬである。

　髄液検体は、通常公知の方法により採取確保することができる。これは本発明のあらゆる態様において共通する。すなわち検体提供者において腰椎穿刺を行い、これにより採取した髄液に対してリンパ球成分を分離することができる程度の遠心を施して得られたリンパ球成分を除いた上清を確保し、これを髄液検体として用いることができる。当該髄液検体の保存は、冷凍保存、好ましくは－８０℃以下の冷凍保存により行うことができる。必要に応じて髄液検体の解凍を行い、常法によりＲＮＡの抽出を行い、これをmiＲＮＡの検出に供することができる。

　本発明の標準化方法に関連して記される「シグナル」とは、髄液検体のmiＲＮＡがmiＲＮＡ検出用アレイ上の核酸プローブと結合することにより顕在化するシグナルのことであり、多くの場合は髄液検体のmiＲＮＡに予め施した蛍光標識、色素標識等である。これらの標識に基づく発光パターンをスキャナー等に取って、その有無や強度を検出する。その際、一通りの髄液量においてmiＲＮＡ検出用アレイのシグナルが認められる場合は「定常発現」である。また、その際にmiＲＮＡに基づくシグナルが髄液の容量に依存して増加する場合を「定量性有り」とすることができる。本発明の標準化方法の工程（Ａ）において、「標準化の母集団を構成するmiＲＮＡ」として選別されるmiＲＮＡは、「検出用アレイにおいて定常発現が認められるmiＲＮＡ」であるが、厳密には「さらに定量性の認められるmiＲＮＡ」が好適である。これについては後述する。

　ここに記す本発明の標準化方法における定義とは別に、他の検出方法、例えば後述するＲＴ－ＰＣＲ法やノーザンブロット法等における検出指標となる出力情報も広義の「シグナル」である。本発明の標準化方法に関わる「シグナル」も、他の検出方法に関わる広義の「シグナル」も、定量シグナルと定性シグナルの双方を含むものである。

　上記の工程（Ａ）において標準化の母集団を構成するmiＲＮＡ群が選別されるが、当該miＲＮＡ群は、髄液検体提供者、特に罹患している疾病によっても異なり、miＲＮＡ検出用アレイの鋭敏性によっても異なり、髄液検体量によっても異なり、miＲＮＡの抽出効率等の実験手技等によっても異なる。後述する実施例では、miＲＮＡ検出用アレイとして「miＲＮＡ　array（３Ｄ　ＧＥＮＥ（登録商標）／ＴＯＲＡＹ）」（東レ）を用いた。このmiＲＮＡ検出用アレイは、高性能ＤＮＡチップ基板３Ｄ　ＧＥＮＥ（登録商標）１枚にデータベースmiRBase Release17から選定したヒト約１７００種のmiＲＮＡを検出するセンス鎖オリゴヌクレオチドを固定化スポットとしたアレイであり、検出対象miＲＮＡに施す標識はＣｙ（Cyanine）を用いた。その結果、健常人の髄液検体をリンパ球画分を除いた上清量として０．９ｍＬに対して３３７個の定常発現しているmiＲＮＡ群が認められ、０．４５ｍＬの髄液検体の使用で４１個の定常発現と共に定量性の伴うmiＲＮＡ群が認められた。これらのmiＲＮＡ群は、両者共に標準化の母集団として適切なものである。しかしながら、これらはあくまでも一実施例である。

　上記の工程（Ｂ）は、工程（ａ）において選別された、「標準化の母集団を構成するmiＲＮＡ群」を、個々のmiＲＮＡをシグナル値の上位、すなわち大きなものから順番にランク付けして、その中から標準化の基となる特定のシグナル値を選択する工程である。この標準化の基となる特定のシグナル値は、上記miＲＮＡ群のうちシグナル値が上位２５％～７５％の範囲にある、いずれかのmiＲＮＡのシグナル値から一種類を選択することが可能である。この選択可能なシグナル値の範囲は、好適には上位３５％～６５％、より好適には上位４５％～５５％とすることができる。さらにこの特定のシグナル値の範囲の選択の方法として、上記miＲＮＡ群のシグナル値の強度分布の中央値領域、つまり、中央値を中心として、－２５％～＋２５％の範囲内とすることが可能であり、さらに当該中央値領域を絞り込むことが好適である。具体的には同じく中央値を中心として、－１０％～＋１０％の範囲とすることが好適であり、－５％～＋５％とすることがさらに好適である。

　標準化の基となる特定のシグナル値は、異なる髄液検体間で標準化がなされた個々のmiＲＮＡ同士のシグナル強度を二次元プロットして近似される直線がｙ＝ｘ（傾きが１）への収束性が高くなるものを選択することが好ましい。後述する実施例において、本発明の標準化法を用いると、理想的な傾きの当該直線が得られることが明らかになった。

　上述したように上記miＲＮＡ群は、「定量性を伴うmiＲＮＡ」で構成させることが厳密であるが、「定常発現を伴うmiＲＮＡ」で構成させることも可能であり、かつ、実用的である。

　すなわち、「定常発現を伴うにもかかわらず、定量性を伴わないmiＲＮＡ」は、主にmiＲＮＡ検出用アレイの特定のmiＲＮＡスポットの不具合や検出装置の不具合や性能により現れるものであり、当該検出用アレイや検出装置の製品としての歩留まりに依るものである。現実的には、ある量の髄液検体をmiＲＮＡ検出用アレイに接触させてシグナルが得られて、定常発現を伴うと認められたスポットのmiＲＮＡに定量性を仮定しても、実質的な不都合は認められないと考えられる。その一方で、miＲＮＡのシグナル強度を計測してターゲット疾患の鑑別等を行う現場において、異なる容量の髄液検体を用いてシグナルの定量性を確認することは過度の重労働になり、かつ、実質的な理由に乏しいコスト高となる。仮に、標準化の母集団として選択した「定常発現を伴うmiＲＮＡ群」の中に、「定量発現を伴わないmiＲＮＡ」が含まれていたとしても、特定のシグナル値は上記のように規定した選択可能範囲内であることが強く見込まれる。よって、標準化の母集団として「定常発現を伴うmiＲＮＡ群」を採用することは、現実的な本発明の標準化法の運用として妥当なものといえる。

　上記の工程（Ｃ）は、工程（Ｂ）において選択された特定のシグナル値を基に、上記miＲＮＡ群を構成する個々のmiＲＮＡのシグナル値を標準化する工程である。

　第一に、上記の特定のシグナル値の補正を行うことが必要である。この補正は、上記特定のシグナル値を、ある特定の数、すなわち補正値に置き換える過程である。この「特定の数」は、特に限定されるものでなく、実数の中から自由に選択することが可能であるが、通常は０以上の整数のいずれかから選ばれる。

　この数的置き換えを行うための演算において用いられる数的手段を求めて、これを当該miＲＮＡ群を構成する個々のmiＲＮＡのシグナル値に対して講じることで、個々のmiＲＮＡのシグナル値が上記の補正値を中心とした相対的なシグナル強度となり、所望の標準化を行うことができる。

　上記の演算の典型例は乗算であり、その数的手段は当該乗算において用いられた乗数の使用である。

　このようにmiＲＮＡ群を構成する個々のmiＲＮＡのシグナル値が標準化されることにより、上述したような様々な要因が加わり単純に比較することが困難な初発のシグナル値はシグナル強度として相対化がなされて、確度高い比較定量を行うことが可能となる。

　＜本発明の鑑別指標の検出方法＞
　本発明の標準化方法を用いて、ターゲット疾患の鑑別指標として髄液中のmiＲＮＡを検出することができる（以下、本発明の鑑別指標の検出方法ともいう）。後述する実施例では、本発明の鑑別指標の検出方法を用いて、特定の運動神経の障害を呈する疾患の鑑別指標となる髄液中のmiＲＮＡを見出した。

　本発明の鑑別指標の検出方法は、健常人とターゲット疾患の罹患者のそれぞれに由来する髄液検体群、又は、複数のターゲット疾患の罹患者間のそれぞれに由来する髄液検体群において、それぞれの髄液検体をmiＲＮＡ検出用アレイに接触させてmiＲＮＡのシグナル値を得て、それぞれのシグナル値について、上述した本発明の標準化方法により得られるシグナル強度を基に、上記の健常人とターゲット疾患の罹患者のそれぞれに由来する髄液検体群、又は、複数のターゲット疾患の罹患者間のそれぞれに由来する髄液検体群における比較を行い、これらの群間の鑑別指標となるmiＲＮＡを選別する、ターゲット疾患の鑑別指標となる髄液miＲＮＡの検出方法、である。

　上記のターゲット疾患は特に限定されず、髄液中のmiＲＮＡを鑑別指標として用いることができる可能性のある疾患の全てである。例えば、後述する運動神経の障害を呈する疾患群が例示され、さらに悪性腫瘍、痴呆症等が考えられるが、これらに限定されるものではない。

　本発明の鑑別指標の検出方法において用いられる、所望する鑑別が可能なmiＲＮＡを検出する手段は特に限定されず、母集団が等分散であるか否かに関わらず用いることが可能なＷｅｌｃｈ法、２群比較において正規性が仮定できない場合に用いられるMann-Whitney法等が好適に用いられて、健常人とターゲット疾患の罹患者の間の髄液検体のmiＲＮＡ分布、又は、複数のターゲット疾患罹患者間の髄液検体のmiＲＮＡ分布、との間にポジティブ又はネガティブに有意差の認められる特定の髄液検体中のmiＲＮＡを、疾病マーカーとして用いることができる。

　各々の疾病マーカーにおける閾値（cut off値）は、当業者の技術常識に従って個別具体的に求めて実用に供することができる。

　＜本発明の支援方法＞
　本発明の標準化方法を用いて、既知のターゲット疾患の鑑別指標の存在を前提とするターゲット疾患の鑑別の支援方法（以下、本発明の支援方法ともいう）が提供される。

　本発明の支援方法は、ターゲット疾患の鑑別指標となる髄液検体におけるmiＲＮＡに基づき、当該ターゲット疾患の鑑別のためのmiＲＮＡ検出用アレイを用いる検出方法を支援するための方法であって、本発明の標準化方法により、被検髄液検体における上記の鑑別指標として用いられるmiＲＮＡ量を、標準化されたシグナル強度として得て、当該シグナル強度を上記検出方法のために用いることを特徴とする支援方法、である。

　本発明の支援方法によるターゲット疾患の鑑別に対する支援は、例えば、（ａ）被検髄液検体に対して本発明の標準化方法により、シグナル強度を標準化された相対値として得て、（ｂ）当該シグナル強度と、同じく本発明の標準化方法により得られるシグナル強度により定義された、ターゲット疾患の鑑別指標となる髄液検体中の特定のmiＲＮＡのカットオフ値とを比較して、（ｃ）当該カットオフ値に対するシグナル強度の大小を基に、被検髄液検体におけるターゲット疾患の有無や程度の鑑別を行うことにより、行うことができる。

　本発明の支援方法は、後述する本発明の検出方法においても好適に用いることができる。

　＜ソフトウエアの使用＞
　上述した本発明の標準化方法、同鑑別指標の検出方法、及び、同支援方法は、いずれもその方法を行うための工程をアルゴリズム化したソフトウエアを搭載した装置、において実行することによっても行うことができる。当該工程は、本発明の標準化方法では上記の工程（Ａ）～（Ｃ）であり、同鑑別指標の検出方法では当該工程（Ａ）～（Ｃ）、あるいは、これに加えて当該工程（Ｃ）で得られた標準化されたmiＲＮＡ群に対して、上記したＷｅｌｃｈ法、Mann-Whitney法等の統計学的な検定方法を行い、有意差を伴うmiＲＮＡをターゲット疾患の鑑別指標として検出する工程である。さらに、本発明の支援方法では上記の工程（ａ）～（ｃ）である（ただし、工程(ａ)は上記の工程（Ａ）～（Ｃ）の存在を前提としている）。これらの工程は、当業者において自明の手順でアルゴリズム化され、ソフトウエアとして使用される。当該ソフトウエアが搭載される装置は、当該ソフトウエアを実行するための「演算処理部」、及び、当該ソフトウエアの実行に必要なデータが蓄積され、かつ、コンピュータプログラムの実行に伴ってデータが蓄積され得る「記録部」が最低限備わったコンピュータを基本構成とする装置である。当該ソフトウエアのアルゴリズムは、新たに入力されるデータの処理と、要求により記録部から導出されるデータの付加等に伴い演算処理部において実行され、これらの標準化を伴う方法において所望される結果を得ることができる。

（２）具体的な疾患マーカーについて
　本発明においては、上記の手法に基づき髄液中の特定のmiＲＮＡの検出により鑑別を行うターゲット疾患は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、進行性筋萎縮症（Progressive muscular atrophy：ＰＭＡ）、純粋運動型慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（mdＣＩＤＰ）、及び、多巣性運動性ニューロパチー（ＭＭＮ）である。これらの四者はいずれも運動神経の障害を呈する疾患であるが、ＡＬＳとＰＭＡは現在のところは致死的であるものの、mdＣＩＤＰとＭＭＮはある程度の治療手段が存在するという点において、決定的に相違する。

　以下、これらの運動神経の障害を呈する疾患についての個別の説明を行い、次いで、本発明の疾病マーカーを用いた検出方法についての開示を行う。

　＜筋萎縮性側索硬化症（Amyotrophic Lateral Sclerosis：ＡＬＳ）＞
　ＡＬＳは、脳と脊髄にある、運動を担当する神経細胞（運動ニューロン）が選択的に障害を受け、徐々に体を動かすことができなくなる神経変性疾患であり、上位運動ニューロンと下位運動ニューロンの両方が障害を受ける。四肢のみならず、嚥下、会話、呼吸に関する筋力が低下し、日常生活が著しく損なわれる極めて予後が不良で致死的である。人工呼吸器等のサポートが無ければ発症後２～５年で主に呼吸不全で死亡する。人工呼吸器の使用で延命は可能であるものの、体は全く動かない状態である。その反面で知能や感覚機能は障害されないため、患者にとっての苦痛は大きく、難病中の難病といえる。

　ＡＬＳ患者の約５％が家族性、すなわち遺伝性で、ＳＯＤ１やＴＤＰ－４３等の遺伝子変異が見つかっている。しかしながらＡＬＳの大半は遺伝性ではない弧発性であり、その病因仮説としては、グルタミン酸に代表される興奮性アミノ酸の過剰説、自己免疫説、酸化ストレス説、小胞体（ＥＲ）ストレス説、ウイルス感染説、外傷説等があるが、決定的なものは未だ無い。唯一の治療薬としてグルタミン酸放出抑制剤「Riruzole」が知られているが、延命効果は２～３ヶ月である。対症療法として、適度の運動、嚥下障害に対する食事形態を中心とする対策、呼吸不全に対する人工呼吸器の使用等が知られている。日本全国で約８５００人がこの病気に罹患している。

　ＡＬＳの診断は、現在臨床症状とその経過、及び、神経生理検査所見を組み合わせた臨床診断基準に従って、上位運動ニューロン徴候と下位運動ニューロン徴候の有無を基に行われているものの、未だ確立しておらず、適切なバイオマーカーも存在しない。

　＜進行性筋萎縮症（Progressive muscular atrophy：ＰＭＡ）＞
　下位運動ニューロン徴候のみを示す進行性の筋萎縮症で、発症初期にＰＭＡに特徴的な下位運動ニューロン徴候を示す症例の２２％は、５年以内に上位運動ニューロン徴候を示し、磁気刺激運動誘発電位（ＴＭＳ）では１／３に上位運動ニューロン機能異常を、剖検で約半数で錐体路変性を認め、ＴＤＰ－４３異常病理所見の報告もあることから、ＰＭＡはＡＬＳの一部であるとの報告も多くなされている。事実、具体的な治療と予後はＡＬＳに近く、決定的な治療法は現状では存在しない。

　しかしながら、一方ではＡＬＳよりも症状の進行が緩やかな症例が多い等の、ＡＬＳとは異なる点も認められ、さらに少なくとも発症初期には上位運動ニューロン徴候を欠くため、現在のＡＬＳ診断基準ではＡＬＳとは診断することができない。また、下位ニューロン徴候のみであることは、後述するＭＭＮとの鑑別が非常に困難であることを意味する。

　＜純粋運動型慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy：mdＣＩＤＰ）＞
　ＣＩＤＰは、上下肢に対称性に運動・感覚障害を来す脱髄性の末梢神経障害であり、２ヶ月を超えて進行する。ＣＩＤＰはミエリンを標的とする自己免疫によるものであり、細胞性免疫や液性免疫が発生機序に関わっている。有病率は１０万人あたり２～３人と考えられる。症状としては四肢の運動・感覚障害が認められる。自律神経障害はあっても軽度であり、脳神経障害が認められることも少ない。腱反射は低下ないし消失する。末梢神経伝導検査では伝導ブロックや伝導速度の低下、遠位部潜時の延長等の脱髄を示唆する所見が認められる。腓腹神経生検では節性脱髄や神経内鞘浮腫等が認められる。血管周囲の単核細胞浸潤が認められることもある。

　ＣＩＤＰの臨床症状の解析では、運動感覚型が最も多いとされているが（６０．５％）、後述する実施例において検証を行った純粋運動型のＣＩＤＰ（mdＣＩＤＰ）は、全ＣＩＤＰの８．６％である。しかしながら、このmdＣＩＤＰは特に発症早期においてＭＭＮやＡＬＳ等の運動神経障害疾患との鑑別が困難になることがあり、本発明の検出方法を適用する必要性が大きい。

　ＣＩＤＰの診断は、上記のような臨床経過や検査所見に基づき、さらに他のニューロパチー（末梢神経障害）を否定することにより行われている。

　治療としては、副腎皮質ステロイド薬、血漿浄化、免疫グロブリンの大量投与が有効である。そして、これらの方法が無効であった場合には、特に副作用に留意しつつ免疫抑制剤の投与やインターフェロンの投与等が行われる。

　＜多巣性運動性ニューロパチー（multifocal motor neuropathy：ＭＭＮ）＞
　ＭＭＮは、感覚障害を伴わない左右非対称性の上肢遠位優位筋力低下と筋萎縮を主徴とする後天性慢性脱髄性末梢神経疾患である。病変部の神経生検では多巣性炎症性脱髄が証明されるが、ＣＩＤＰとは異なり、同部位の感覚神経伝導には全く異常性が認められない。筋萎縮にしばしば著明な筋線維束性攣縮やミオキシア、筋痙攣が認められるため、ＡＬＳとの鑑別が重要である。萎縮の認められない筋にも筋力低下が認められる場合があること、上位運動ニューロン兆候の無いことがＡＬＳとの臨床的な鑑別点であるが、現実問題として的確な鑑別はかなり困難である。

　さらにＭＭＮの発症には免疫学的機序が推察され、免疫グロブリンの大量投与による治療が可能な疾患である。通常の診断はＣＩＤＰと同様に神経伝導検査で運動神経伝導ブロック（ＣＢ：Conduction Block）や伝導遅延を確認することで行われるが、伝導ブロックが検出できないケースも存在する（MMN without CBと称される）。MMN without CBは、診断基準上はＭＭＮでないにもかかわらず、免疫グロブリンの大量投与療法の有効率は通常のＭＭＮ(MMN with CB)と差が無く、ＣＢだけに頼ったＭＭＮ診断を行っていると、治療可能な患者を見逃してしまうことにもなりかねない。

　唯一のＭＭＮのバイオマーカーとして、ＧＭ１ガングリオシドに対する抗体が知られている。しかし、ＧＭ１ガングリオシドに対する抗体がＭＭＮの約半数で認められるものの、ＡＬＳにおいても５～１０％の低頻度で検出されることもあるため、実用的な鑑別手段とはならない。

　下位運動ニューロン徴候のみのＰＭＡ症例や初期ＡＬＳ症例等を、特にMMN without CBと鑑別することは、現在は不可能である。しかしながら両者の治療と予後は全く異なっている。

　ＭＭＮをＣＩＤＰの一亜型とする立場もあるが、上記のように、ＣＩＤＰが、副腎皮質ステロイド薬、血漿浄化、免疫グロブリンの大量投与に反応するのに対し、ＭＭＮは免疫グロブリンの大量投与のみにしか反応しない場合が多く、副腎皮質ステロイド薬で悪化することもある等から、ＣＩＤＰとは異なる疾患単位とする見方が有力である。免疫グロブリンの大量投与療法は、非常に高額の治療法であることは上述した通りである。

　上述した、ＡＬＳ、ＰＭＡ、mdＣＩＤＰ、及び、ＭＭＮの相互重複関係を図１にベン図として示す。

　＜本発明の検出方法＞
　本発明者は、上記の運動神経の障害を呈する疾患（以下、運動神経障害疾患ともいう）である、ＡＬＳ、ＰＭＡ、mdＣＩＤＰ、又は、ＭＭＮの鑑別に際して、髄液検体における下記のmiＲＮＡからなる群から選ばれる１種又は２種以上（以下、特定miＲＮＡともいう）の量の増減を鑑別指標として検出することを特徴とする、検出方法（以下、本発明の検出方法ともいう）を提供するに至った。

　当該特定miＲＮＡは、下記の通りである。

　hsa-miR-24、hsa-miR-296-5p、hsa-miR-92a-2*、hsa-miR-149*、hsa-miR-296-3p、hsa-miR-92b*、hsa-miR-744、hsa-miR-920、hsa-miR-939、hsa-miR-1225-5p、hsa-miR-1228*、hsa-miR-1202、hsa-miR-1207-5p、hsa-miR-1908、hsa-miR-1909、hsa-miR-3131、hsa-miR-3141、hsa-miR-1260b、hsa-miR-3178、hsa-miR-3180-3p、hsa-miR-3185、hsa-miR-3195、hsa-miR-3197、hsa-miR-4257、hsa-miR-4259、hsa-miR-4327、hsa-miR-4270、hsa-miR-4281、hsa-miR-3621、hsa-miR-3622a-5p、hsa-miR-3648、hsa-miR-3656、hsa-miR-3663-3p、hsa-miR-3917、hsa-miR-3937、hsa-miR-642b、hsa-miR-4417、hsa-miR-4433、hsa-miR-4442、hsa-miR-4447、hsa-miR-4454、hsa-miR-4466、hsa-miR-4467、hsa-miR-4484、hsa-miR-4488、hsa-miR-4492、hsa-miR-4505、hsa-miR-4508、hsa-miR-4530、hsa-miR-3619-3p、hsa-miR-3940-5p、hsa-miR-3960、hsa-miR-4634、hsa-miR-4640-5p、hsa-miR-4655-5p、hsa-miR-4665-5p、hsa-miR-1343、hsa-miR-4688、hsa-miR-4689、hsa-miR-4695-5p、hsa-miR-4697-5p、hsa-miR-4706、hsa-miR-4723-5p、hsa-miR-4725-3p、hsa-miR-4726-5p、hsa-miR-4728-5p、hsa-miR-4730、hsa-miR-4749-5p、hsa-miR-4758-5p、hsa-miR-4763-3p、hsa-miR-4787-5p、hsa-let-7a、hsa-let-7c、hsa-miR-23a、hsa-miR-10a、hsa-miR-200a、hsa-miR-524-5p、hsa-miR-516b、hsa-miR-552、hsa-miR-573、hsa-miR-644、hsa-miR-24-2*、hsa-miR-122*、hsa-miR-145*、hsa-miR-361-3p、hsa-miR-1291、hsa-miR-1260、hsa-miR-1273、hsa-miR-3161、hsa-miR-4310、hsa-miR-4313、hsa-miR-4479、hsa-miR-4493、hsa-miR-4524、hsa-miR-3688-5p、hsa-miR-4633-5p、hsa-miR-4708-5p、hsa-miR-3545-3p、hsa-miR-4741、hsa-miR-4742-3p、hsa-miR-4762-3p、hsa-miR-214、hsa-miR-519d、hsa-miR-575、hsa-miR-30c-2*、hsa-miR-135a*、hsa-miR-185*、hsa-miR-423-5p、hsa-miR-551b*、hsa-miR-550a、hsa-miR-885-3p、hsa-miR-936、hsa-miR-940、hsa-miR-1225-3p、hsa-miR-1233、hsa-miR-1181、hsa-miR-1268、hsa-miR-2276、hsa-miR-711、hsa-miR-718、hsa-miR-1193、hsa-miR-3184、hsa-miR-4323、hsa-miR-4265、hsa-miR-4269、hsa-miR-3605-3p、hsa-miR-3663-5p、hsa-miR-3667-3p、hsa-miR-3679-5p、hsa-miR-3682-3p、hsa-miR-3918、hsa-miR-3940-3p、hsa-miR-3944-3p、hsa-miR-4430、hsa-miR-4440、hsa-miR-4446-3p、hsa-miR-4461、hsa-miR-4481、hsa-miR-4489、hsa-miR-2392、hsa-miR-3922-5p、hsa-miR-4642、hsa-miR-4669、hsa-miR-4676-5p、hsa-miR-4691-5p、hsa-miR-4713-5p、hsa-miR-4722-3p、hsa-miR-4727-3p、hsa-miR-4736、hsa-miR-371b-3p、hsa-miR-2467-3p、hsa-miR-518c*、hsa-miR-574-3p、hsa-miR-642a、hsa-miR-657、hsa-miR-25*、hsa-miR-139-3p、hsa-miR-187*、hsa-miR-574-5p、hsa-miR-1231、hsa-miR-1292、hsa-miR-675*、hsa-miR-1539、hsa-miR-2682*、hsa-miR-449c*、hsa-miR-3130-5p、hsa-miR-3138、hsa-miR-3156-5p、hsa-miR-4297、hsa-miR-4276、hsa-miR-4437、hsa-miR-4639-3p、hsa-miR-4701-3p、hsa-miR-4726-3p、hsa-miR-4754、hsa-miR-3928、hsa-miR-3162-5p、hsa-miR-1275、hsa-miR-4787-3p、hsa-miR-1914*、hsa-miR-4753-5p、hsa-miR-4667-5p、hsa-miR-3180、hsa-miR-4769-5p、hsa-miR-4526、hsa-miR-485-3p、hsa-miR-4779、hsa-miR-4261、hsa-miR-4646-5p、hsa-miR-486-5p、hsa-miR-3188、hsa-miR-432*、hsa-miR-3652、hsa-miR-4425、hsa-miR-99a、hsa-miR-26b*、hsa-miR-4800-5p、hsa-miR-4635、hsa-miR-4478、hsa-miR-4751、hsa-miR-4709-3p、hsa-miR-3689a-3p、hsa-miR-3187-3p、hsa-miR-3654、hsa-miR-1296、hsa-miR-184、hsa-miR-3176、hsa-miR-675、hsa-miR-4740-5p、hsa-miR-3919、hsa-miR-514b-5p、hsa-miR-1182、hsa-miR-2467-5p、hsa-miR-4450、hsa-miR-3925-5p、hsa-miR-1250、hsa-miR-23b、及び、hsa-miR-4465；

　下記表１～５において、これらのmiＲＮＡの核酸配列と、配列表に示される配列番号の割り振りを列挙する。表１－１及び１－２は、共に実施例においてＡＬＳと、ＭＭＮ／mdＣＩＤＰで有意差が認められたmiＲＮＡ群であり、表２は実施例において健常人(Normal)とＡＬＳで有意差が認められたmiＲＮＡ群であり、表３－１及び３－２は、共に実施例において健常人(Normal)と、ＭＭＮ／mdＣＩＤＰで有意差が認められたmiＲＮＡ群であり、表４は実施例においてＡＬＳとＭＭＮで有意差が認められたmiＲＮＡ群であり、表５－１及び５－２は実施例においてＭＭＮとＰＭＡで有意差が認められたmiＲＮＡ群である。

　本発明により、運動神経に障害を呈する疾患である、ＡＬＳ、ＰＭＡ、mdＣＩＤＰ、又は、ＭＭＮを、髄液検体を用いて、包括的な鑑別から、より突っ込んだ鑑別まで、マイクロＲＮＡ検出シグナルに基づく的確な鑑別指標が提供される。また、マイクロＲＮＡ検出用アレイを用いて髄液検体における定量を行う際の標準化手段、当該標準化手段を用いる疾患マーカーを見出す際の鑑別指標となる髄液マイクロＲＮＡの検出方法、及び、当該標準化手段を用いるターゲット疾患の鑑別の支援方法が提供される。

ＡＬＳ、ＰＭＡ、mdＣＩＤＰ、及び、ＭＭＮの相互重複関係をベン図として示した図面である。選別されたシグナル値が高く、リンパ球画分を除いた上清量としての髄液量０．４５ｍＬからの定量性を伴うmiＲＮＡであるhas-miR-3960におけるシグナル強度の髄液容量依存直線を、健常人３例において示した図面である。従来法(Global normalization法)と、本発明の標準化方法(Top20th normalization法)との間における、リンパ球画分を除いた上清量として０．９ｍＬの髄液のmiＲＮＡ毎のシグナル強度をプロットした正常髄液検体２者間の傾きの分布を示した図面である。髄液検体中の（１）hsa-miR-744又は（２）hsa-miR-4505について、健常人、ＡＬＳ、並びにmdＣＩＤＰ及びＭＭＮのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-let-7a、（２）hsa-let-7c、（３）hsa-miR-23a、及び、（４）hsa-miR-10aについて、ＡＬＳと健常人のシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-200a、（２）hsa-miR-524-5p、（３）hsa-miR-516b、及び、（４）hsa-miR-552について、ＡＬＳと健常人のシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-573、（２）hsa-miR-644、（３）hsa-miR-24-2*、及び、（４）hsa-miR-122*について、ＡＬＳと健常人のシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-145*、（２）hsa-miR-361-3p、（３）hsa-miR-1291、及び、（４）hsa-miR-1260について、ＡＬＳと健常人のシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-1273、（２）hsa-miR-3161、（３）hsa-miR-4310、及び、（４）hsa-miR-4313について、ＡＬＳと健常人のシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-4479、（２）hsa-miR-4493、（３）hsa-miR-4524、及び、（４）hsa-miR-3688-5pについて、ＡＬＳと健常人のシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-4633-5p、（２）hsa-miR-4708-5p、（３）hsa-miR-3545-3p、及び、（４）hsa-miR-4741について、ＡＬＳと健常人のシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-4742-3p、及び、（２）hsa-miR-4762-3pについて、ＡＬＳと健常人のシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中におけるＡＬＳと健常人を鑑別する好適な４種のマーカーの、シグナル強度の分布をピックアップした図面である。髄液検体中におけるＡＬＳと健常人を鑑別する好適な４種のマーカーを用いた検出工程を、その感度(Sensitivity)と特異性(Specificity)と共に図式化した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-214、（２）hsa-miR-519d、（３）hsa-miR-575、及び、（４）hsa-miR-30c-2*について、mdＣＩＤＰ及びＭＭＮと健常人のシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-135a*、（２）hsa-miR-185*、（３）hsa-miR-423-5p、及び、（４）hsa-miR-92b*について、mdＣＩＤＰ及びＭＭＮと健常人のシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-551b*、（２）hsa-miR-550a、（３）hsa-miR-885-3p、及び、（４）hsa-miR-936について、mdＣＩＤＰ及びＭＭＮと健常人のシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-940、（２）hsa-miR-1225-3p、（３）hsa-miR-1233、及び、（４）hsa-miR-1181について、mdＣＩＤＰ及びＭＭＮと健常人のシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-1268、（２）hsa-miR-1908、（３）hsa-miR-2276、及び、（４）hsa-miR-711について、mdＣＩＤＰ及びＭＭＮと健常人のシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-718、（２）hsa-miR-1193、（３）hsa-miR-3184、及び、（４）hsa-miR-3197について、mdＣＩＤＰ及びＭＭＮと健常人のシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-4323、（２）hsa-miR-4265、（３）hsa-miR-4269、及び、（４）hsa-miR-3605-3pについて、mdＣＩＤＰ及びＭＭＮと健常人のシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-3648、（２）hsa-miR-3663-5p、（３）hsa-miR-3667-3p、及び、（４）hsa-miR-3679-5pについて、mdＣＩＤＰ及びＭＭＮと健常人のシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-3682-3p、（２）hsa-miR-3918、（３）hsa-miR-3937、及び、（４）hsa-miR-3940-3pについて、mdＣＩＤＰ及びＭＭＮと健常人のシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-3944-3p、（２）hsa-miR-4417、（３）hsa-miR-4430、及び、（４）hsa-miR-4440について、mdＣＩＤＰ及びＭＭＮと健常人のシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-4446-3p、（２）hsa-miR-4461、（３）hsa-miR-4481、及び、（４）hsa-miR-4489について、mdＣＩＤＰ及びＭＭＮと健常人のシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-2392、（２）hsa-miR-3922-5p、（３）hsa-miR-4634、及び、（４）hsa-miR-4642について、mdＣＩＤＰ及びＭＭＮと健常人のシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-4669、（２）hsa-miR-4676-5p、（３）hsa-miR-4691-5p、及び、（４）hsa-miR-4713-5pについて、mdＣＩＤＰ及びＭＭＮと健常人のシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-4722-3p、（２）hsa-miR-4725-3p、（３）hsa-miR-4727-3p、及び、（４）hsa-miR-4736について、mdＣＩＤＰ及びＭＭＮと健常人のシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-371b-3p、及び、（２）hsa-miR-2467-3pについて、mdＣＩＤＰ及びＭＭＮと健常人のシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中におけるmdＣＩＤＰ及びＭＭＮと健常人を鑑別する好適なマーカーであるhsa-miR-4717の、（１）シグナル強度の分布をピックアップした図面、（２）ＲＯＣ曲線（receiver operating characteristic curve：受動者動作特性曲線）、及び、（３）当該メーカーを用いた検出工程を、感度(Sensitivity)と特異性(Specificity)と共に図式化した図面、である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-24、（２）hsa-miR-296-5p、（３）hsa-miR-92a-2*、及び、（４）hsa-miR-149*について、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-296-3p、（２）hsa-miR-92b*、（３）hsa-miR-920、及び、（４）hsa-miR-939について、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-1225-5p、（２）hsa-miR-1228*、（３）hsa-miR-1202、及び、（４）hsa-miR-1207-5pについて、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-1908、（２）hsa-miR-1909、（３）hsa-miR-3131、及び、（４）hsa-miR-3141について、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-1260b、（２）hsa-miR-3178、（３）hsa-miR-3180-3p、及び、（４）hsa-miR-3185について、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-3195、（２）hsa-miR-3197、（３）hsa-miR-4257、及び、（４）hsa-miR-4259について、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-4327、（２）hsa-miR-4270、（３）hsa-miR-4281、及び、（４）hsa-miR-3621について、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-3622a-5p、（２）hsa-miR-3648、（３）hsa-miR-3656、及び、（４）hsa-miR-3663-3pについて、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-3917、（２）hsa-miR-3937、（３）hsa-miR-642b、及び、（４）hsa-miR-4417について、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-4433、（２）hsa-miR-4442、（３）hsa-miR-4447、及び、（４）hsa-miR-4454について、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-4466、（２）hsa-miR-4484、（３）hsa-miR-4488、及び、（４）hsa-miR-4492について、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-4508、（２）hsa-miR-4530、（３）hsa-miR-3619-3p、及び、（４）hsa-miR-3940-5pについて、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-3960、（２）hsa-miR-4634、（３）hsa-miR-4640-5p、及び、（４）hsa-miR-4655-5pについて、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-4665-5p、（２）hsa-miR-1343、（３）hsa-miR-4688、及び、（４）hsa-miR-4689について、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-4695-5p、（２）hsa-miR-4697-5p、（３）hsa-miR-4706、及び、（４）hsa-miR-4723-5pについて、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-4725-3p、（２）hsa-miR-4726-5p、（３）hsa-miR-4728-5p、及び、（４）hsa-miR-4730について、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-4749-5p、（２）hsa-miR-4758-5p、（３）hsa-miR-4763-3p、及び、（４）hsa-miR-4787-5pについて、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中のhsa-miR-4467について、健常人、ＡＬＳ、並びにmdＣＩＤＰ及びＭＭＮのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中におけるＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮを鑑別する好適な４種のマーカーの、シグナル強度の分布をピックアップした図面である。髄液検体中におけるＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮを鑑別する好適な４種のマーカーのＲＯＣ曲線（receiver operating characteristic curve：受動者動作特性曲線）を示した図面である。髄液検体中におけるＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮを鑑別する好適なマーカーであるhsa-miR-4417及びhsa-miR-642bの、（１）シグナル強度の分布をピックアップした図面、及び、（２）これらを用いた検出工程を、感度(Sensitivity)と特異性(Specificity)と共に図式化した図面、である。髄液検体中におけるＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮを鑑別する好適なマーカーであるhsa-miR-4417及びhsa-miR-3197の、（１）シグナル強度の分布をピックアップした図面、及び、（２）これらを用いた検出工程を、感度(Sensitivity)と特異性(Specificity)と共に図式化した図面、である。髄液検体中におけるＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮを鑑別する好適なマーカーであるhsa-miR-4417及びhsa-miR-4697-5pの、（１）シグナル強度の分布をピックアップした図面、及び、（２）これらを用いた検出工程を、感度(Sensitivity)と特異性(Specificity)と共に図式化した図面、である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-214、（２）hsa-miR-518c*、（３）hsa-miR-574-3p、及び、（４）hsa-miR-642aについて、ＡＬＳとＭＭＮのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-657、（２）hsa-miR-25*、（３）hsa-miR-139-3p、及び、（４）hsa-miR-187*について、ＡＬＳとＭＭＮのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-135a*、（２）hsa-miR-185*、（３）hsa-miR-574-5p、及び、（４）hsa-miR-1231について、ＡＬＳとＭＭＮのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-1181、（２）hsa-miR-1292、（３）hsa-miR-675*、及び、（４）hsa-miR-1539について、ＡＬＳとＭＭＮのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-718、（２）hsa-miR-2682*、（３）hsa-miR-449c*、及び、（４）hsa-miR-3130-5pについて、ＡＬＳとＭＭＮのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-3138、（２）hsa-miR-3156-5p、（３）hsa-miR-3197、及び、（４）hsa-miR-4297について、ＡＬＳとＭＭＮのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-4276、（２）hsa-miR-3667-3p、（３）hsa-miR-3937、及び、（４）hsa-miR-4437について、ＡＬＳとＭＭＮのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-4446-3p、（２）hsa-miR-4481、（３）hsa-miR-4639-3p、及び、（４）hsa-miR-4701-3pについて、ＡＬＳとＭＭＮのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-4726-3p、及び、（２）hsa-miR-4754について、ＡＬＳとＭＭＮのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中におけるＡＬＳとＭＭＮを鑑別する好適なマーカーであるhsa-miR-2682*及びhsa-miR-3130-5pのそれぞれについて、（１）シグナル強度の分布をピックアップした図面、及び、（２）これらを用いた検出工程を、感度(Sensitivity)と特異性(Specificity)と共に図式化した図面、である。髄液検体中におけるＡＬＳとＭＭＮを鑑別する好適なマーカーであるhsa-miR-139-3p及びhsa-miR-1231について、これらを組み合わせて用いた検出工程を、感度(Sensitivity)と特異性(Specificity)と共に図式化した図面、である。髄液検体中におけるＡＬＳとＭＭＮを鑑別する好適なマーカーであるhsa-miR-2682*及びhsa-miR-3130-5pについて、これらを組み合わせて用いた検出工程を、感度(Sensitivity)と特異性(Specificity)と共に図式化した図面、である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-99a、（２）hsa-miR-23b、（３）hsa-miR-184、及び、（４）hsa-miR-485-3pについて、ＭＭＮとＰＭＡのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-486-5p、（２）hsa-miR-432*、（３）hsa-miR-675、及び、（４）hsa-miR-25*について、ＭＭＮとＰＭＡのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-26b*、（２）hsa-miR-920、（３）hsa-miR-1296、及び、（４）hsa-miR-1182について、ＭＭＮとＰＭＡのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-1250、（２）hsa-miR-1275、（３）hsa-miR-1292、及び、（４）hsa-miR-1914について、ＭＭＮとＰＭＡのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-711、（２）hsa-miR-3138、（３）hsa-miR-3162-5p、及び、（４）hsa-miR-3176について、ＭＭＮとＰＭＡのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-3187-3p、（２）hsa-miR-3188、（３）hsa-miR-3197、及び、（４）hsa-miR-514b-5pについて、ＭＭＮとＰＭＡのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-4261、（２）hsa-miR-3652、（３）hsa-miR-3654、及び、（４）hsa-miR-3679-5pについて、ＭＭＮとＰＭＡのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-3689a-3p、（２）hsa-miR-3180、（３）hsa-miR-3919、及び、（４）hsa-miR-3925-5pについて、ＭＭＮとＰＭＡのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-3928、（２）hsa-miR-4425、（３）hsa-miR-4437、及び、（４）hsa-miR-4450について、ＭＭＮとＰＭＡのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-4461、（２）hsa-miR-4465、（３）hsa-miR-4478、及び、（４）hsa-miR-2392について、ＭＭＮとＰＭＡのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-4526、（２）hsa-miR-3619-3p、（３）hsa-miR-3940-5p、及び、（４）hsa-miR-4635について、ＭＭＮとＰＭＡのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-4646-5p、（２）hsa-miR-4667-5p、（３）hsa-miR-4691-5p、及び、（４）hsa-miR-4709-3pについて、ＭＭＮとＰＭＡのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-4740-5p、（２）hsa-miR-4751、（３）hsa-miR-4753-5p、及び、（４）hsa-miR-4769-5pについて、ＭＭＮとＰＭＡのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中の、（１）hsa-miR-4779、（２）hsa-miR-2467-5p、（３）hsa-miR-4787-3p、及び、（４）hsa-miR-4800-5pについて、ＭＭＮとＰＭＡのシグナル強度の分布を示した図面である。髄液検体中におけるＭＭＮとＰＭＡを鑑別する好適なマーカーであるhsa-miR-3162-5p及びhsa-miR-3928のそれぞれについて、（１）シグナル強度の分布をピックアップした図面、及び、（２）これらを用いた検出工程を、感度(Sensitivity)と特異性(Specificity)と共に図式化した図面、である。髄液検体中におけるＭＭＮとＰＭＡを鑑別する好適なマーカーであるhsa-miR-3162-5p 及びhsa-miR-3928について、これらを組み合わせて用いた検出工程を、感度(Sensitivity)と特異性(Specificity)と共に図式化した図面、である。

　本発明の検出方法においては、数種類の優れた性質を有する運動神経障害疾患のmiＲＮＡマーカーが認められる。いずれも上に挙げた４種類の運動神経障害疾患を鑑別する上において極めて有用性の高いものである。

　本発明の検出方法においては、上述した常法に従い髄液を採取し調製した提供者の髄液検体におけるmiＲＮＡを定量して、その定量値が、比較対象よりも低値又は高値であることを示すシグナルを検出すること、すなわち当該miＲＮＡ量の増減を検出することにより、所望の鑑別指標を得ることができる。

　miＲＮＡの定量方法は、特に限定されず、例えば、上記した個別のmiＲＮＡの塩基配列に基づく既存の手段、さらには将来開発される手段を含めて用いることができる。例えば、上述した本発明の標準化方法において用いた、miＲＮＡが網羅的に搭載された「マイクロＲＮＡ検出用アレイ」の使用が挙げられる。また、ＲＴ－ＰＣＲ法等の遺伝子増幅法を基礎とするＲＮＡの定量方法を挙げることができる。この遺伝子増幅法を用いる場合には、大量処理と迅速性という観点から、自動化された検出機器によるリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ法が好適である。その他、ノーザンブロット法等が挙げられる。

　このmiＲＮＡ個々の定量シグナルに基づく定量値が、相対的に比較対象（例えば、健常人や、比較対象となる異なる運動神経障害疾患）よりも、閾値において低値又は高値である場合には、当該定量値は「低値陽性」又は「高値陽性」として扱うことができる。具体的な閾値は個別具体的に設定することができる。

　より詳細は実施例として後述するが、ここで本発明の検出方法の具体的な態様の概略を開示する。

（Ａ）運動神経障害疾患の鑑別に際して、髄液検体におけるhsa-miR-744量の減少又はhsa-miR-4505量の減少を、ＡＬＳ、mdＣＩＤＰ、又は、ＭＭＮの鑑別指標として検出することができる。

　この態様の本発明の検出方法は、特に被験者における運動神経障害疾患の大まかな傾向を把握することを意図する場合に特に有用である。後述する実施例において示すように、上記３種の運動神経障害疾患においては、髄液検体におけるhsa-miR-744又はhsa-miR-4505の定量値は減少する。よって、被験者の髄液検体におけるhsa-miR-744又はhsa-miR-4505の定量値が健常人の標準よりも減少していることが認められる場合には、当該被験者は、ＡＬＳ、mdＣＩＤＰ、又は、ＭＭＮに罹患している可能性が高くなり、以後の疾病鑑別の方向性を絞り込むことが可能となる。より突っ込んだ鑑別目的に対しては、後述する異なる態様の検出方法が提供されている。

（Ｂ）ＡＬＳの健常人との鑑別に際して、髄液検体における下記「　」内の健常人を基準としたマイクロＲＮＡ量の変化からから選ばれる１種又は２種以上を、ＡＬＳの鑑別指標として検出することができる。なお、上記の「hsa-miR-744量の減少」又は「hsa-miR-4505量の減少」も本態様の鑑別指標として含まれるが、この鑑別指標を用いる場合には、ここに列挙された他の指標を組み合わせて用いることが好適である。

　「hsa-let-7a量の増加、hsa-let-7c量の増加、hsa-miR-23a量の増加、hsa-miR-10a量の増加、hsa-miR-200a量の増加、hsa-miR-524-5p量の減少、hsa-miR-516b量の増加、hsa-miR-552量の増加、hsa-miR-573量の増加、hsa-miR-644量の増加、hsa-miR-24-2*量の増加、hsa-miR-122*量の増加、hsa-miR-145*量の増加、hsa-miR-361-3p量の増加、hsa-miR-1291量の増加、hsa-miR-1260量の減少、hsa-miR-1273量の減少、hsa-miR-3161量の増加、hsa-miR-4310量の増加、hsa-miR-4313量の減少、hsa-miR-4479量の増加、hsa-miR-4493量の減少、hsa-miR-4524量の増加、hsa-miR-3688-5p量の増加、hsa-miR-4633-5p量の増加、hsa-miR-4708-5p量の増加、hsa-miR-3545-3p量の増加、hsa-miR-4741量の減少、hsa-miR-4742-3p量の増加、hsa-miR-4762-3p量の増加、has-miR-4467量の減少、has-miR-4505量の減少、及び、hsa-miR-744量の減少」

　好適には、特に、hsa-miR-10a量の増加、hsa-miR-516b量の増加、hsa-miR-122*量の増加、及び、hsa-miR-4762-3pの増加、からなる群から選ばれる１種又は２種以上のマイクロＲＮＡ量の変化を、本態様の鑑別指標として用いることができる。この好適態様の検出方法は、より高感度及び高特異度で所望の鑑別ターゲットの検出が可能であるという点においても有利である。

　後述する実施例において示すように、ＡＬＳにおいては、髄液検体における上記のmiＲＮＡ値が、それぞれ列挙された特徴的な増減を示す。よって、被験者の髄液検体におけるこれらのmiＲＮＡの定量値が健常人の標準との比較において、列挙された増減を示すことが認められる場合には、当該被験者は、ＡＬＳに罹患している可能性が高いことが認められる。

（Ｃ）mdＣＩＤＰ又はＭＭＮの健常人との鑑別に際して、髄液検体における下記「　」内の健常人を基準としたマイクロＲＮＡ量の変化からから選ばれる１種又は２種以上を指標として、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮの鑑別指標として検出することができる。なお、上記の「hsa-miR-744量の減少」又は「hsa-miR-4505量の減少」も本態様の指標として含まれるが、この指標を本態様において用いる場合には、ここに列挙された他の指標を組み合わせて用いることが好適である。

　「hsa-miR-214量の減少、hsa-miR-519d量の減少、hsa-miR-575量の減少、hsa-miR-30c-2*量の減少、hsa-miR-135a*量の減少、hsa-miR-185*量の減少、hsa-miR-423-5p量の減少、hsa-miR-92b*量の減少、hsa-miR-551b*量の減少、hsa-miR-550a量の減少、hsa-miR-885-3p量の減少、hsa-miR-936量の減少、hsa-miR-940量の減少、hsa-miR-1225-3p量の減少、hsa-miR-1233量の減少、hsa-miR-1181量の減少、hsa-miR-1268量の増加、hsa-miR-1908量の減少、hsa-miR-2276量の減少、hsa-miR-711量の減少、hsa-miR-718量の減少、hsa-miR-1193量の減少、hsa-miR-3184量の減少、hsa-miR-3197量の減少、hsa-miR-4323量の減少、hsa-miR-4265量の減少、hsa-miR-4269量の減少、hsa-miR-3605-3p量の減少、hsa-miR-3648量の減少、hsa-miR-3663-5p量の減少、hsa-miR-3667-3p量の減少、hsa-miR-3679-5p量の減少、hsa-miR-3682-3p量の減少、hsa-miR-3918量の減少、hsa-miR-3937量の減少、hsa-miR-3940-3p量の減少、hsa-miR-3944-3p量の減少、hsa-miR-4417量の増加、hsa-miR-4430量の減少、hsa-miR-4440量の減少、hsa-miR-4446-3p量の減少、hsa-miR-4461量の減少、hsa-miR-4481量の減少、hsa-miR-4489量の減少、hsa-miR-2392量の減少、hsa-miR-3922-5p量の減少、hsa-miR-4634量の増加、hsa-miR-4642量の減少、hsa-miR-4669量の減少、hsa-miR-4676-5p量の減少、hsa-miR-4691-5p量の減少、hsa-miR-4713-5p量の減少、hsa-miR-4722-3p量の減少、hsa-miR-4725-3p量の減少、hsa-miR-4727-3p量の減少、hsa-miR-4736量の減少、hsa-miR-371b-3p量の減少、hsa-miR-744量の減少、hsa-miR-4505量の減少、及び、hsa-miR-2467-3p量の減少」

　好適には、特に、hsa-miR-4417量の増加を、本態様の鑑別指標として用いることができる。この好適態様の検出方法は、より高感度及び高特異度で所望の鑑別ターゲットの検出が可能であるという点においても有利である。

　後述する実施例において示すように、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮにおいては、髄液検体における上記のmiＲＮＡ値が、それぞれ列挙された特徴的な増減を示す。よって、被験者の髄液検体におけるこれらのmiＲＮＡの定量値が健常人の標準との比較において、列挙された増減を示すことが認められる場合には、当該被験者は、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮに罹患している可能性が高いことが認められる。なお、mdＣＩＤＰとＭＭＮとの間の鑑別は、従来から当業者間において行われている手法に従い行うことができる。

（Ｄ）（１）ＡＬＳ、並びに、（２）mdＣＩＤＰ又はＭＭＮ、の択一的な鑑別に際して、髄液検体における下記「　」内のmdＣＩＤＰ又はＭＭＮを基準としたマイクロＲＮＡ量の変化から選ばれる１種又は２種以上を、ＡＬＳの鑑別指標として検出することができる。

　「hsa-miR-24量の増加、hsa-miR-296-5p量の増加、hsa-miR-92a-2*量の減少、hsa-miR-149*量の増加、hsa-miR-296-3p量の増加、hsa-miR-92b*量の増加、hsa-miR-744量の増加、hsa-miR-920量の増加、hsa-miR-939量の減少、hsa-miR-1225-5p量の減少、hsa-miR-1228*量の増加、hsa-miR-1202量の増加、hsa-miR-1207-5p量の増加、hsa-miR-1908量の増加、hsa-miR-1909量の増加、hsa-miR-3131量の増加、hsa-miR-3141量の増加、hsa-miR-1260b量の減少、hsa-miR-3178量の増加、hsa-miR-3180-3p量の増加、hsa-miR-3185量の増加、hsa-miR-3195量の増加、hsa-miR-3197量の増加、hsa-miR-4257量の増加、hsa-miR-4259量の増加、hsa-miR-4327量の増加、hsa-miR-4270量の増加、hsa-miR-4281量の増加、hsa-miR-3621量の減少、hsa-miR-3622a-5p量の増加、hsa-miR-3648量の増加、hsa-miR-3656量の減少、hsa-miR-3663-3p量の増加、hsa-miR-3917量の増加、hsa-miR-3937量の増加、hsa-miR-642b量の増加、hsa-miR-4417量の減少、hsa-miR-4433量の増加、hsa-miR-4442量の増加、hsa-miR-4447量の増加、hsa-miR-4454量の減少、hsa-miR-4466量の減少、hsa-miR-4467量の減少、hsa-miR-4484量の増加、hsa-miR-4488量の減少、hsa-miR-4492量の減少、hsa-miR-4505量の増加、hsa-miR-4508量の減少、hsa-miR-4530量の増加、hsa-miR-3619-3p量の増加、hsa-miR-3940-5p量の減少、hsa-miR-3960量の減少、hsa-miR-4634量の減少、hsa-miR-4640-5p量の増加、hsa-miR-4655-5p量の増加、hsa-miR-4665-5p量の増加、hsa-miR-1343量の増加、hsa-miR-4688量の増加、hsa-miR-4689量の増加、hsa-miR-4695-5p量の増加、hsa-miR-4697-5p量の増加、hsa-miR-4706量の増加、hsa-miR-4723-5p量の増加、hsa-miR-4725-3p量の増加、hsa-miR-4726-5p量の増加、hsa-miR-4728-5p量の増加、hsa-miR-4730量の増加、hsa-miR-4749-5p量の増加、hsa-miR-4758-5p量の増加、hsa-miR-4763-3p量の増加、及び、hsa-miR-4787-5p量の減少」

　より好適な態様として、hsa-miR-642b量の増加、hsa-miR-3197量の増加、hsa-miR-4697-5p量の増加、及び、hsa-miR-4417量の減少、からなる群から選ばれる１種又は２種以上（ただし、hsa-miR-4417量の減少は他の３種のマイクロＲＮＡ量の増減から選ばれる１～３種との組み合わせである）を、本態様のＡＬＳの鑑別指標として検出することが可能である。そしてさらに、（ａ）hsa-miR-4417量の減少、並びに、（ｂ）hsa-miR-642b量の増加、hsa-miR-3197量の増加、及び、hsa-miR-4697-5p量の増加からなる群から選ばれるいずれか１種をＡＬＳの鑑別指標として検出することが極めて好適である。これらの好適態様の検出方法は、より高感度及び高特異度で所望の鑑別ターゲットの検出が可能であるという点においても有利である。

　上述したように、本態様の検出方法は、特に罹患初期の相互鑑別に困難を伴うＡＬＳと、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮの鑑別に大いなる助けとなるものである。本態様を用いることにより、高額の費用負担が問題となっている「免疫グロブリンの大量投与療法」を行うか否かの判断が容易になり、患者と医療提供者双方にとって極めて重要な鑑別を容易に行うことができる。

　後述する実施例において示すように、ここに定義された相互鑑別においては「mdＣＩＤＰ又はＭＭＮ」を基準とした髄液検体における上記のmiＲＮＡ定量値が、それぞれ列挙された特徴的な増減を示す。よって、被験者の髄液検体におけるこれらのmiＲＮＡの定量値が「mdＣＩＤＰ又はＭＭＮ」の標準との比較において、列挙された増減を示すことが認められる場合には、当該被験者は、「mdＣＩＤＰ又はＭＭＮ」ではなくて「ＡＬＳ」に罹患している可能性が高いことが認められる。mdＣＩＤＰとＭＭＮとの間の鑑別は、従来から当業者間において行われている手法に従い行うことができることは、上述の「mdＣＩＤＰ又はＭＭＮ」の健常人からの鑑別と同様である。

　なお、ここに開示した態様は「mdＣＩＤＰ又はＭＭＮ」を基準とした、「ＡＬＳ」に向けた量変化であるが、これはあくまでも相対的なものである。すなわち、逆に基準を「ＡＬＳ」に置いて、「mdＣＩＤＰ又はＭＭＮ」に向けた量変化に等価的に置き換えて用いることができる。すなわちこの逆の基準を用いると、ここに開示された定量値の「増加」は「減少」として、「減少」は「増加」として、「ＡＬＳ」を基準とした「mdＣＩＤＰ又はＭＭＮ」の鑑別指標が提供される。

（Ｅ）ＡＬＳとＭＭＮとの鑑別に際して、髄液検体における下記「　」内のＭＭＮを基準としたマイクロＲＮＡ量の変化からから選ばれる１種又は２種以上を指標として、ＡＬＳの鑑別指標として検出することができる。

　「hsa-miR-214の増加、hsa-miR-518c*の増加、hsa-miR-574-3pの増加、hsa-miR-642aの増加、hsa-miR-657の増加、hsa-miR-25*の増加、hsa-miR-139-3pの増加、hsa-miR-187*の増加、hsa-miR-135a*の増加、 hsa-miR-185*の増加、hsa-miR-574-5pの増加、hsa-miR-1231の増加、hsa-miR-1181の増加、hsa-miR-1292の増加、hsa-miR-675*の増加、hsa-miR-1539の増加、hsa-miR-718の増加、hsa-miR-2682*の増加、hsa-miR-449c*の増加、hsa-miR-3130-5pの増加、hsa-miR-3138の増加、hsa-miR-3156-5pの増加、hsa-miR-3197の増加、hsa-miR-4297の増加、hsa-miR-4276の増加、hsa-miR-3667-3pの増加、hsa-miR-3937の増加、hsa-miR-4437の増加、hsa-miR-4446-3pの増加、hsa-miR-4481の増加、hsa-miR-4639-3pの増加、hsa-miR-4701-3pの増加、hsa-miR-4726-3pの増加、hsa-miR-4754の増加」

　より好適な態様として、hsa-miR-139-3pの増加、hsa-miR-574-5pの増加、hsa-miR-1231の増加、hsa-miR-2682*の増加、及び、hsa-miR-3130-5pの増加、からなる群から選ばれるマイクロＲＮＡ量の変化の１種又は２種以上を、本態様のＡＬＳの鑑別指標として検出することが可能である。そしてさらに、（ａ)hsa-miR-2682*の増加、（ｂ）hsa-miR-3130-5pの増加、（ｃ）hsa-miR-139-3pの増加とhsa-miR-1231の増加の組み合わせ、並びに、（ｄ）hsa-miR-2682*の増加とhsa-miR-3130-5pの増加の組み合わせ、からなる群から選ばれるいずれか１種をＡＬＳの鑑別指標として検出することが極めて好適である。これらの好適態様の検出方法は、より高感度及び高特異度で所望の鑑別ターゲットの検出が可能であるという点においても有利である。

　上述したように、本態様の検出方法は、特に罹患初期の相互鑑別に困難を伴うＡＬＳとＭＭＮの鑑別に大いなる助けとなるものである。本態様を用いることにより、高額の費用負担が問題となっている「免疫グロブリンの大量投与療法」を行うか否かの判断が容易になり、患者と医療提供者双方にとって極めて重要な鑑別を容易に行うことができる。

　後述する実施例において示すように、ここに定義された相互鑑別においては「ＭＭＮ」を基準とした髄液検体における上記のmiＲＮＡ定量値が、それぞれ列挙された特徴的な増加を示す。よって、被験者の髄液検体におけるこれらのmiＲＮＡの定量値が「ＭＭＮ」の標準との比較において、列挙された増加を示すことが認められる場合には、当該被験者は、「ＭＭＮ」ではなくて「ＡＬＳ」に罹患している可能性が高いことが認められる。

　なお、ここに開示した態様は「ＭＭＮ」を基準とした、「ＡＬＳ」に向けた量変化であるが、これはあくまでも相対的なものである。すなわち、逆に基準を「ＡＬＳ」に置いて、「ＭＭＮ」に向けた量変化に等価的に置き換えて用いることができる。すなわちこの逆の基準を用いると、ここに開示された定量値の「増加」は「減少」として、「ＡＬＳ」を基準とした「ＭＭＮ」の鑑別指標が提供される。

（Ｆ）ＭＭＮとＰＭＡとの鑑別に際して、髄液検体における下記「　」内のＭＭＮを基準としたマイクロＲＮＡ量の変化からから選ばれる１種又は２種以上を指標として、ＰＭＡの鑑別指標として検出することができる。

　「hsa-miR-3928の増加、hsa-miR-711の増加、hsa-miR-3138の増加、hsa-miR-3162-5pの増加、hsa-miR-1275の増加、hsa-miR-4787-3pの増加、hsa-miR-1914*の増加、hsa-miR-25*の増加、hsa-miR-3619-3pの増加、hsa-miR-4753-5pの増加、hsa-miR-4667-5pの増加、hsa-miR-3180の減少、hsa-miR-4769-5pの増加、hsa-miR-4526の増加、hsa-miR-485-3pの減少、hsa-miR-4779の増加、hsa-miR-4261の増加、hsa-miR-4646-5pの増加、hsa-miR-3197の増加、hsa-miR-486-5pの減少、hsa-miR-3188の増加、hsa-miR-432*の減少、hsa-miR-1292の増加、hsa-miR-3652の増加、hsa-miR-4425の増加、hsa-miR-99aの減少、hsa-miR-3679-5pの増加、hsa-miR-4461の増加、hsa-miR-26b*の減少、hsa-miR-3940-5pの減少、hsa-miR-4800-5pの増加、hsa-miR-4635の増加、hsa-miR-4478の増加、hsa-miR-4751の増加、hsa-miR-4691-5pの増加、hsa-miR-4709-3pの増加、hsa-miR-3689a-3pの増加、hsa-miR-4437の増加、hsa-miR-3187-3pの増加、hsa-miR-3654の増加、hsa-miR-1296の増加、hsa-miR-184の増加、hsa-miR-920の増加、hsa-miR-3176の増加、hsa-miR-675の増加、hsa-miR-4740-5pの増加、hsa-miR-3919の増加、hsa-miR-514b-5pの増加、hsa-miR-1182の増加、hsa-miR-2467-5pの増加、hsa-miR-4450の増加、hsa-miR-3925-5pの増加、hsa-miR-1250の増加、hsa-miR-2392の増加、hsa-miR-23bの減少、及び、hsa-miR-4465の増加」

　より好適な態様として、hsa-miR-1275の増加、hsa-miR-711の増加、hsa-miR-3138の増加、hsa-miR-3162-5pの増加、hsa-miR-3928の増加、及び、hsa-miR-1914*の増加、からなる群から選ばれるマイクロＲＮＡ量の変化の１種又は２種以上を、本態様のＰＭＡの鑑別指標として検出することが可能である。

　さらに好適な態様として、hsa-miR-3162-5pの増加、及び／又は、hsa-miR-3928の増加、を、本態様のＰＭＡの鑑別指標として検出することが可能である。

　これらの好適態様の検出方法は、より高感度及び高特異度で所望の鑑別ターゲットの検出が可能であるという点においても有利である。

　上述したように、本態様の検出方法は、特に罹患初期の相互鑑別に困難を伴うＭＭＮとＰＭＡの鑑別に大いなる助けとなるものである。本態様を用いることにより、高額の費用負担が問題となっている「免疫グロブリンの大量投与療法」を行うか否かの判断が容易になり、患者と医療提供者双方にとって極めて重要な鑑別を容易に行うことができる。

　後述する実施例において示すように、ここに定義された相互鑑別においては「ＭＭＮ」を基準とした髄液検体における上記のmiＲＮＡ定量値が、それぞれ列挙された特徴的な増加を示す。よって、被験者の髄液検体におけるこれらのmiＲＮＡの定量値が「ＭＭＮ」の標準との比較において、列挙された増加を示すことが認められる場合には、当該被験者は、「ＭＭＮ」ではなくて「ＰＭＡ」に罹患している可能性が高いことが認められる。

　なお、ここに開示した態様は「ＭＭＮ」を基準とした、「ＰＭＡ」に向けた量変化であるが、これはあくまでも相対的なものである。すなわち、逆に基準を「ＰＭＡ」において、「ＭＭＮ」に向けた量変化に等価的に置き換えて用いることができる。すなわちこの逆の基準を用いると、ここに開示された定量値の「増加」は「減少」として、「ＰＭＡ」を基準とした「ＭＭＮ」の鑑別指標が提供される。

　以下、本発明の実施例を記載する。

［Ａ］　統計解析法（本発明の標準化方法）の確立
　通常の診断目的で、腰椎穿刺により採種したヒト髄液を遠心分離（５００ｇ×１０分）にかけてリンパ球成分を分離した上清を確保し、前述した「miＲＮＡ　array（３Ｄ　ＧＥＮＥ（登録商標）／ＴＯＲＡＹ）」（東レ）に添付されたプロトコールに従い、miＲＮeasy Mini Kit（Qiagen社）を用いてmiＲＮＡ抽出を行った。当該ＲＮＡ画分を、同じく「miＲＮＡ　array（３Ｄ　ＧＥＮＥ（登録商標）／ＴＯＲＡＹ）」（東レ）による解析を行った。臨床診断で「正常」と判明した提供者の髄液（正常対照）を、リンパ球画分を除いた上清量としてそれぞれ０．４５ｍＬ、０．９ｍＬ、１．８ｍＬでの当該マイクロアレイにおける反応性を検証した。その結果、同０．９ｍＬで３３７個のmiＲＮＡにおいて定常発現が確認され、同０．４５ｍＬで４１個のmiＲＮＡが定常発現と定量性（容量依存性）が確認された。ここに上記４１個のmiＲＮＡを表６（６－１及び６－２）に示す。

　その結果、有意なシグナルを示した３３７個のmiＲＮＡのうち、発現量の多い４１個のmiＲＮＡのみで定量性が確認された。

　ここで、上記４１個のmiＲＮＡの一つである「has-miR-3960」を例にとると（図２）、健常人３例において、アレイ上のシグナル値に容量依存性が示され、定量性があることが確認された。

　本発明の標準化方法の実施例として、ここでは上記の「４１個のmiＲＮＡ」を用いた具体例を開示する。ここに示す「４１個のmiＲＮＡ」による傾向は、上記の「３３７個のmiＲＮＡ」においても認められた。

　前述したように、miＲＮＡの発現の比較に際しては、miＲＮＡ抽出効率等の実験手技等によるバラつきが生じるため、評価に際しては標準化が必要である。従来まで数多く用いられてきたGlobal Normalization法（シグナル強度を順に並べた際の中央値を２５とする補正法）で、元々miＲＮＡの存在量が少ない髄液中のmiＲＮＡを補正すると、中央値として選択したmiＲＮＡが正常の個体間であってもそのシグナル強度がかなり変動するものを選択してしまう可能性がありうる。

　本発明者は、「正常髄液の網羅的解析におけるmiＲＮＡ群のシグナル値は全体として個体間で大きな差はない」という仮定のもと、個々のサンプルのmiＲＮＡ群のシグナル強度を比較した場合に近似直線がｙ＝ｘにより収束する標準化法がより理想的であると考えた。そこで上記のように定量性を確認し得た、個体間のバラつきの少ない４１個のmiＲＮＡの中央領域にある上位２０番目のmiＲＮＡでの補正(Top20th Normalization法)を行った。

　すなわち、当該上位２０番目のmiＲＮＡにおいて認められる蛍光強度をシグナル値として、これを特定数に置き換え、この置き換えを行う乗算において用いられた乗数を、他のmiＲＮＡに認められた蛍光強度に対しての乗算に適用して、上記の４１個のmiＲＮＡ群の標準化を行った。

　従来のGlobal Normalization法と本発明が作出したTop20th Normalization法を比較したところ、後者で補正したマイクロＲＮＡアレイのシグナル値の個体間の近似直線の傾きがよりy=ｘに近付くことが示され、髄液中miＲＮＡのアレイシグナルの評価に際してはTop20th Normalization（本発明の標準化方法）がより理想的であることが示された（図３）。図３は、従来法(Global normalization法)と、本発明の標準化方法(Top20th normalization法)との間における、リンパ球画分を除いた上清量として０．９ｍＬの髄液のmiＲＮＡ毎のシグナル強度をプロットした正常髄液検体２者間の傾きの分布を示した図面である。なお今回用いたシグナルは、前述した通りに「被験miＲＮＡに結合させたＣｙ（Cyanine）」である。当該蛍光色素の蛍光強度が、今回の実施例のシグナル値である。

［Ｂ］　各種の疾病マーカーの確立（１）
　上記した「miＲＮＡ　array（３Ｄ　ＧＥＮＥ（登録商標）／ＴＯＲＡＹ）」（東レ）を、miＲＮＡ検出用アレイとして用い、当該アレイに搭載された全てのmiＲＮＡを母集団として、上述した本発明の鑑別指標の検出方法により、３範疇の疾病（ＡＬＳ、ＭＭＮ、及び、mdＣＩＤＰ）のマーカーとして用いることができる髄液中のmiＲＮＡを選別した。選別手法は、帰無仮定を基にしたＷｅｌｃｈ法を用い、有意水準は５％で選別した。

　また、各範疇の選別のために用いた髄液検体の内訳は、「健常人：１０検体、ＡＬＳ：２３検体、mdＣＩＤＰ：５検体、ＭＭＮ：５検体（mdＣＩＤＰ／ＭＭＮ：１０検体）」である。ただしＡＬＳと健常人を鑑別するための指標の選別においては、血液の混入が認められた髄液は除外したゆえに、「健常人：９検体、ＡＬＳ：１９検体」である。

　［Ｂ］－１：ＡＬＳ、mdＣＩＤＰ、又は、ＭＭＮの鑑別指標を提供するマーカー
　図４は、髄液検体中の（１）hsa-miR-744と（２）hsa-miR-4505について、健常人、ＡＬＳ、並びにmdＣＩＤＰ及びＭＭＮのシグナル強度の分布を示した図面である。図中、グラフの縦軸はシグナル強度であり、グラフの中の横線は各群の平均値である。hsa-miR-744は、健常人とＡＬＳ、及び、健常人とmdＣＩＤＰ／ＭＭＮの間で、共に疾病群のシグナルが有意に減少していた。

　このようにhsa-miR-744とhsa-miR-4505は、特に被験者における運動神経障害疾患の大まかな傾向を把握することを意図する場合に特に有用である。しかしながらhsa-miR-744とhsa-miR-4505を用いて、ＡＬＳ、又は、mdＣＩＤＰ／ＭＭＮをそれぞれ単独で鑑別する場合には、後述するこれらの疾病を鑑別可能な他のマーカーと併用することが好適である。

　［Ｂ］－２（１）：ＡＬＳと健常人の鑑別指標を提供するマーカー
　図５（図５－１～図５－８）は、ＡＬＳと健常人の鑑別指標を提供するマーカーのシグナル強度の分布を示している。

　＜１＞　図５－１は髄液検体中の、（１）hsa-let-7a、（２）hsa-let-7c、（３）hsa-miR-23a、及び、（４）hsa-miR-10aについて、ＡＬＳと健常人のシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-let-7aは、健常人に対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-let-7cは、健常人に対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-23aは、健常人に対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-10aは、健常人に対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　よって髄液に存在するこれらのmiＲＮＡは、健常人とＡＬＳの鑑別指標を与えるマーカーであることが判明した。

　＜２＞　図５－２は髄液検体中の、（１）hsa-miR-200a、（２）hsa-miR-524-5p、（３）hsa-miR-516b、及び、（４）hsa-miR-552について、ＡＬＳと健常人のシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-200aは、健常人に対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-524-5pは、健常人に対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（３）hsa-miR-516bは、健常人に対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-552は、健常人に対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　＜３＞　図５－３は髄液検体中の、（１）hsa-miR-573、（２）hsa-miR-644、（３）hsa-miR-24-2*、及び、（４）hsa-miR-122*について、ＡＬＳと健常人のシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-573は、健常人に対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-644は、健常人に対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-24-2*は、健常人に対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-122*は、健常人に対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　＜４＞　図５－４は髄液検体中の、（１）hsa-miR-145*、（２）hsa-miR-361-3p、（３）hsa-miR-1291、及び、（４）hsa-miR-1260について、ＡＬＳと健常人のシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-145*は、健常人に対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-361-3pは、健常人に対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-1291は、健常人に対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-1260は、健常人に対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に減少していた。

　＜５＞　図５－５は髄液検体中の、（１）hsa-miR-1273、（２）hsa-miR-3161、（３）hsa-miR-4310、及び、（４）hsa-miR-4313について、ＡＬＳと健常人のシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-1273は、健常人に対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（２）hsa-miR-3161は、健常人に対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-4310は、健常人に対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-4313は、健常人に対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に減少していた。

　＜６＞　図５－６は髄液検体中の、（１）hsa-miR-4479、（２）hsa-miR-4493、（３）hsa-miR-4524、及び、（４）hsa-miR-3688-5pについて、ＡＬＳと健常人のシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-4479は、健常人に対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-4493は、健常人に対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（３）hsa-miR-4524は、健常人に対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-3688-5pは、健常人に対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　＜７＞　図５－７は髄液検体中の、（１）hsa-miR-4633-5p、（２）hsa-miR-4708-5p、（３）hsa-miR-3545-3p、及び、（４）hsa-miR-4741について、ＡＬＳと健常人のシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-4633-5pは、健常人に対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-4708-5pは、健常人に対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-3545-3pは、健常人に対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-4741は、健常人に対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に減少していた。

　＜８＞　図５－８は髄液検体中の、（１）hsa-miR-4742-3p、及び、（２）hsa-miR-4762-3pについて、ＡＬＳと健常人のシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-4742-3pは、健常人に対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-4762-3pは、健常人に対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　＜９＞　重複する指標について
　上述した「hsa-miR-744量の減少」と「hsa-miR-4505量の減少」は、健常人とＡＬＳからＡＬＳを鑑別し得る指標である（図４）。また図１１（後述）に示すように、has-miR-4467量の減少は、健常人とＡＬＳからＡＬＳを鑑別し得る指標である。

　［Ｂ］－２（２）：髄液検体中におけるＡＬＳと健常人を鑑別する好適なマーカー
　上述した髄液検体中におけるＡＬＳと健常人を鑑別するマーカー群の中から、「hsa-miR-10a量の増加」、「hsa-miR-516b量の増加」、「hsa-miR-122*量の増加」、及び、「hsa-miR-4762-3pの増加」をピックアップし、これらについてさらに検証した。図６は、これらの４種のマーカーの、シグナル強度の分布を改めて示した図面である。図７は、髄液検体中におけるこれらの４種のマーカーを用いた検出工程を、その感度(Sensitivity)と特異性(Specificity)と共に図式化した図面である。その結果、これらのマーカーにおいては、前記4種のうちいずれか一つでもシグナルが検出されたものを陽性と判断することにより、感度８９．５％、特異性１００％という非常に優れた鑑別成績が認められた。

　［Ｂ］－３（１）：mdＣＩＤＰ／ＭＭＮと健常人の鑑別指標を提供するマーカー
　図８（図８－１～図８－１５）は、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮと健常人の鑑別指標を提供するマーカーのシグナル強度の分布を示している。

　＜１＞　図８－１は髄液検体中の、（１）hsa-miR-214、（２）hsa-miR-519d、（３）hsa-miR-575、及び、（４）hsa-miR-30c-2*について、mdＣＩＤＰ及びＭＭＮと健常人のシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-214は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（２）hsa-miR-519dは、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（３）hsa-miR-575は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（４）hsa-miR-30c-2*は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。

　よって髄液に存在するこれらのmiＲＮＡは、健常人とＣＩＤＰ又はＭＭＮの鑑別指標を与えるマーカーであることが判明した。

　＜２＞　図８－２は髄液検体中の、（１）hsa-miR-135a*、（２）hsa-miR-185*、（３）hsa-miR-423-5p、及び、（４）hsa-miR-92b*について、mdＣＩＤＰ及びＭＭＮと健常人のシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-135a*は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（２）hsa-miR-185*は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（３）hsa-miR-423-5pは、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（４）hsa-miR-92b*は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。

　よって髄液に存在するこれらのmiＲＮＡは、健常人とmdＣＩＤＰ又はＭＭＮの鑑別指標を与えるマーカーであることが判明した。

　＜３＞　図８－３は髄液検体中の、（１）hsa-miR-551b*、（２）hsa-miR-550a、（３）hsa-miR-885-3p、及び、（４）hsa-miR-936について、mdＣＩＤＰ及びＭＭＮと健常人のシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-551b*は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（２）hsa-miR-550aは、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（３）hsa-miR-885-3pは、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（４）hsa-miR-936は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。

　＜４＞　図８－４は髄液検体中の、（１）hsa-miR-940、（２）hsa-miR-1225-3p、（３）hsa-miR-1233、及び、（４）hsa-miR-1181について、mdＣＩＤＰ及びＭＭＮと健常人のシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-940は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（２）hsa-miR-1225-3pは、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（３）hsa-miR-1233は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（４）hsa-miR-1181は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。

　＜５＞　図８－５は髄液検体中の、（１）hsa-miR-1268、（２）hsa-miR-1908、（３）hsa-miR-2276、及び、（４）hsa-miR-711について、mdＣＩＤＰ及びＭＭＮと健常人のシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-1268は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-1908は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（３）hsa-miR-2276は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（４）hsa-miR-711は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。

　＜６＞　図８－６は髄液検体中の、（１）hsa-miR-718、（２）hsa-miR-1193、（３）hsa-miR-3184、及び、（４）hsa-miR-3197について、mdＣＩＤＰ及びＭＭＮと健常人のシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-718は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（２）hsa-miR-1193は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（３）hsa-miR-3184は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（４）hsa-miR-3197は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。

　＜７＞　図８－７は髄液検体中の、（１）hsa-miR-4323、（２）hsa-miR-4265、（３）hsa-miR-4269、及び、（４）hsa-miR-3605-3pについて、mdＣＩＤＰ及びＭＭＮと健常人のシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-4323は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（２）hsa-miR-4265は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（３）hsa-miR-4269は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（４）hsa-miR-3605-3pは、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。

　＜８＞　図８－８は髄液検体中の、（１）hsa-miR-3648、（２）hsa-miR-3663-5p、（３）hsa-miR-3667-3p、及び、（４）hsa-miR-3679-5pについて、mdＣＩＤＰ及びＭＭＮと健常人のシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-3648は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（２）hsa-miR-3663-5pは、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（３）hsa-miR-3667-3pは、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（４）hsa-miR-3679-5pは、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。

　＜９＞　図８－９は髄液検体中の、（１）hsa-miR-3682-3p、（２）hsa-miR-3918、（３）hsa-miR-3937、及び、（４）hsa-miR-3940-3pについて、mdＣＩＤＰ及びＭＭＮと健常人のシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-3682-3pは、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（２）hsa-miR-3918は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（３）hsa-miR-3937は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（４）hsa-miR-3940-3pは、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。

　＜１０＞　図８－１０は髄液検体中の、（１）hsa-miR-3944-3p、（２）hsa-miR-4417、（３）hsa-miR-4430、及び、（４）hsa-miR-4440について、mdＣＩＤＰ及びＭＭＮと健常人のシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-3944-3pは、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（２）hsa-miR-4417は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-4430は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（４）hsa-miR-4440は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。

　＜１１＞　図８－１１は髄液検体中の、（１）hsa-miR-4446-3p、（２）hsa-miR-4461、（３）hsa-miR-4481、及び、（４）hsa-miR-4489について、mdＣＩＤＰ及びＭＭＮと健常人のシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-4446-3pは、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（２）hsa-miR-4461は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（３）hsa-miR-4481は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（４）hsa-miR-4489は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。

　＜１２＞　図８－１２は髄液検体中の、（１）hsa-miR-2392、（２）hsa-miR-3922-5p、（３）hsa-miR-4634、及び、（４）hsa-miR-4642について、mdＣＩＤＰ及びＭＭＮと健常人のシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-2392は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（２）hsa-miR-3922-5pは、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（３）hsa-miR-4634は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-4642は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。

　＜１３＞　図８－１３は髄液検体中の、（１）hsa-miR-4669、（２）hsa-miR-4676-5p、（３）hsa-miR-4691-5p、及び、（４）hsa-miR-4713-5pについて、mdＣＩＤＰ及びＭＭＮと健常人のシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-4669は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（２）hsa-miR-4676-5pは、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（３）hsa-miR-4691-5pは、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（４）hsa-miR-4713-5pは、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。

　＜１４＞　図８－１４は髄液検体中の、（１）hsa-miR-4722-3p、（２）hsa-miR-4725-3p、（３）hsa-miR-4727-3p、及び、（４）hsa-miR-4736について、mdＣＩＤＰ及びＭＭＮと健常人のシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-4722-3pは、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（２）hsa-miR-4725-3pは、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（３）hsa-miR-4727-3pは、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（４）hsa-miR-4736は、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。

　＜１５＞　図８－１５は髄液検体中の、（１）hsa-miR-371b-3p、及び、（２）hsa-miR-2467-3pについて、mdＣＩＤＰ及びＭＭＮと健常人のシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-371b-3pは、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（２）hsa-miR-2467-3pは、健常人に対してmdＣＩＤＰ／ＭＭＮにおいてシグナル強度が有意に減少していた。

　＜１６＞　重複する指標について
　上述した「hsa-miR-744量の減少」と「hsa-miR-4505量の減少」は、健常人とmdＣＩＤＰ又はＭＭＮからmdＣＩＤＰ又はＭＭＮを鑑別し得る指標である（図４）。

　［Ｂ］－３（２）：髄液検体中におけるmdＣＩＤＰ又はＭＭＮと健常人を鑑別する好適なマーカー
　図９は、髄液検体中におけるmdＣＩＤＰ及びＭＭＮと健常人を鑑別する好適なマーカーであるhsa-miR-4717の、（１）シグナル強度の分布をピックアップした図面、（２）ＲＯＣ曲線（receiver operating characteristic curve：受動者動作特性曲線）、及び、（３）当該メーカーを用いた検出工程を、感度(Sensitivity)と特異性(Specificity)と共に図式化した図面、である。これにより当該マーカーは、感度８０．０％、特異性９０．０％という非常に優れた鑑別成績が認められた。

　［Ｂ］－４（１）：ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮの択一的な鑑別マーカー
　図１０（図１０－１～図１０－１７）は、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮの択一的な鑑別指標を提供するマーカーのシグナル強度の分布を示している。

　＜１＞　図１０－１は髄液検体中の、髄液検体中の、（１）hsa-miR-24、（２）hsa-miR-296-5p、（３）hsa-miR-92a-2*、及び、（４）hsa-miR-149*について、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮのシグナル強度の分布を示している。ここでは、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮのシグナル強度を基準とした増減で、ＡＬＳのシグナル強度を表現する（以下の図１０のシリーズの説明において同様である）。
　（１）hsa-miR-24は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-296-5pは、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-92a-2*は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（４）hsa-miR-149*は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　よって髄液に存在するこれらのmiＲＮＡは、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮの択一的な鑑別指標を与えるマーカーであることが判明した。

　＜２＞　図１０－２は髄液検体中の、（１）hsa-miR-296-3p、（２）hsa-miR-92b*、（３）hsa-miR-920、及び、（４）hsa-miR-939について、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-296-3pは、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-92b*は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-920は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-939は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に減少していた。

　＜３＞　図１０－３は髄液検体中の、（１）hsa-miR-1225-5p、（２）hsa-miR-1228*、（３）hsa-miR-1202、及び、（４）hsa-miR-1207-5pについて、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-1225-5pは、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（２）hsa-miR-1228*は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-1202は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-1207-5pは、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　＜４＞　図１０－４は髄液検体中の、（１）hsa-miR-1908、（２）hsa-miR-1909、（３）hsa-miR-3131、及び、（４）hsa-miR-3141について、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-1908は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-1909は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-3131は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-3141は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　＜５＞　図１０－５は髄液検体中の、（１）hsa-miR-1260b、（２）hsa-miR-3178、（３）hsa-miR-3180-3p、及び、（４）hsa-miR-3185について、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-1260bは、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（２）hsa-miR-3178は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-3180-3pは、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-3185は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　＜６＞　図１０－６は髄液検体中の、（１）hsa-miR-3195、（２）hsa-miR-3197、（３）hsa-miR-4257、及び、（４）hsa-miR-4259について、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-3195は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-3197は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-4257は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-4259は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　＜７＞　図１０－７は髄液検体中の、（１）hsa-miR-4327、（２）hsa-miR-4270、（３）hsa-miR-4281、及び、（４）hsa-miR-3621について、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-4327は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-4270は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-4281は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-3621は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に減少していた。

　＜８＞　図１０－８は髄液検体中の、（１）hsa-miR-3622a-5p、（２）hsa-miR-3648、（３）hsa-miR-3656、及び、（４）hsa-miR-3663-3pについて、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-3622a-5pは、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-3648は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-3656は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（４）hsa-miR-3663-3pは、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　＜９＞　図１０－９は髄液検体中の、（１）hsa-miR-3917、（２）hsa-miR-3937、（３）hsa-miR-642b、及び、（４）hsa-miR-4417について、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-3917は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-3937は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-642bは、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-4417は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に減少していた。

　＜１０＞　図１０－１０は髄液検体中の、（１）hsa-miR-4433、（２）hsa-miR-4442、（３）hsa-miR-4447、及び、（４）hsa-miR-4454について、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-4433は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-4442は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-4447は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-4454は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に減少していた。

　＜１１＞　図１０－１１は髄液検体中の、（１）hsa-miR-4466、（２）hsa-miR-4484、（３）hsa-miR-4488、及び、（４）hsa-miR-4492について、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-4466は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（２）hsa-miR-4484は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-4488は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（４）hsa-miR-4492は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に減少していた。

　＜１２＞　図１０－１２は髄液検体中の、（１）hsa-miR-4508、（２）hsa-miR-4530、（３）hsa-miR-3619-3p、及び、（４）hsa-miR-3940-5pについて、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-4508は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（２）hsa-miR-4530は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-3619-3pは、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-3940-5pは、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に減少していた。

　＜１３＞　図１０－１３は髄液検体中の、（１）hsa-miR-3960、（２）hsa-miR-4634、（３）hsa-miR-4640-5p、及び、（４）hsa-miR-4655-5pについて、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-3960は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（２）hsa-miR-4634は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（３）hsa-miR-4640-5pは、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-4655-5pは、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　＜１４＞　図１０－１４は髄液検体中の、（１）hsa-miR-4665-5p、（２）hsa-miR-1343、（３）hsa-miR-4688、及び、（４）hsa-miR-4689について、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-4665-5pは、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-1343は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-4688は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-4689は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　＜１５＞　図１０－１５は髄液検体中の、（１）hsa-miR-4695-5p、（２）hsa-miR-4697-5p、（３）hsa-miR-4706、及び、（４）hsa-miR-4723-5pについて、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-4695-5pは、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-4697-5pは、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-4706は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-4723-5pは、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　＜１６＞　図１０－１６は髄液検体中の、（１）hsa-miR-4725-3p、（２）hsa-miR-4726-5p、（３）hsa-miR-4728-5p、及び、（４）hsa-miR-4730について、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-4725-3pは、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-4726-5pは、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-4728-5pは、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-4730は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　＜１７＞　図１０－１７は髄液検体中の、（１）hsa-miR-4749-5p、（２）hsa-miR-4758-5p、（３）hsa-miR-4763-3p、及び、（４）hsa-miR-4787-5pについて、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-4749-5pは、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-4758-5pは、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-4763-3pは、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-4787-5pは、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に減少していた。

　＜１８＞　重複する指標について
　hsa-miR-744とhsa-miR-4505は、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた（図４）。

　また、図１１は髄液検体中のhsa-miR-4467について、健常人、ＡＬＳ、並びにmdＣＩＤＰ及びＭＭＮのシグナル強度の分布を示しており、hsa-miR-4467については、ＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に減少していたことが確認された。

　これらの髄液に存在するmiＲＮＡは、ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮの択一的な鑑別指標を与えるマーカーであることが判明した。

　［Ｂ］－４（２）：ＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮの択一的な鑑別マーカーの好適例
　この択一的な鑑別マーカーの好適例については、さらにＲＯＣ曲線を作成した場合のＡＵＣ(area under the curve：ＲＯＣ曲線下面積)が０．９５以上のものを選択した。これにより選択されたmiＲＮＡ指標は、hsa-miR-642b量の増加、hsa-miR-3197量の増加、hsa-miR-4697-5p量の増加、及び、hsa-miR-4417量の減少である。ただし、hsa-miR-4417量の減少は他の３種のマイクロＲＮＡ量の増減から選ばれる１～３種の鑑別指標との組み合わせとして用いられる。

　図１２は、髄液検体中におけるＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮを鑑別する好適なこれらの４種のマーカーの、シグナル強度の分布をピックアップした図面であり、図１３は、髄液検体中におけるＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮを鑑別するこれらのマーカーのＲＯＣ曲線（receiver operating characteristic curve：受動者動作特性曲線）を示している。

　図１４～１６は、特に好適な鑑別態様を示している。

　図１４は、髄液検体中におけるＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮを鑑別する好適なマーカーであるhsa-miR-4417及びhsa-miR-642bの、（１）シグナル強度の分布をピックアップした図面、及び、（２）これらを用いた検出工程を、感度(Sensitivity)と特異性(Specificity)と共に図式化した図面である。この態様では、感度１００％、特異性９５．７％という、非常に優れた鑑別成績が認められた。

　図１５は、髄液検体中におけるＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮを鑑別する好適なマーカーであるhsa-miR-4417及びhsa-miR-3197の、（１）シグナル強度の分布をピックアップした図面、及び、（２）これらを用いた検出工程を、感度(Sensitivity)と特異性(Specificity)と共に図式化した図面である。この態様では、感度９１．３％、特異性９０．０％という、非常に優れた鑑別成績が認められた。

　図１６は、髄液検体中におけるＡＬＳ、並びに、mdＣＩＤＰ又はＭＭＮを鑑別する好適なマーカーであるhsa-miR-4417及びhsa-miR-4697-5pの、（１）シグナル強度の分布をピックアップした図面、及び、（２）これらを用いた検出工程を、感度(Sensitivity)と特異性(Specificity)と共に図式化した図面である。この態様では、感度９１．３％、特異性９０．０％という、非常に優れた鑑別成績が認められた。

［Ｃ］　各種の疾病マーカーの確立（２）
　本実施例では、ＡＬＳ、ＭＭＮ、及び、ＰＭＡに関連するマーカーとして用いることができる髄液中のmiＲＮＡを、前回行った疾病マーカーの確立工程と同内容の本発明の鑑別指標の検出方法を用いて選別した。選別手法は、帰無仮定を基にしたＷｅｌｃｈ法を用いた。　また、各範疇の選別のために用いた髄液検体の内訳は、「健常人：１０検体、ｓＡＬＳ：２３検体、ＭＭＮ：１３検体、ＰＭＡ１１検体」である。

　［Ｃ］－１（１）：ＡＬＳとＭＭＮの鑑別指標を提供するマーカー
　図１７（図１７－１～図１７－８）は、ＡＬＳ（弧発性、ｓＡＬＳ）とＭＭＮの鑑別指標を提供するマーカーのシグナル強度の分布を示している。選別手法は、帰無仮定を基にしたＷｅｌｃｈ法を用い、有意水準は０．００１％で選別した。

　＜１＞　図５－１は髄液検体中の、（１）hsa-miR-214、（２）hsa-miR-518c*、（３）hsa-miR-574-3p、及び、（４）hsa-miR-642aについて、ＡＬＳとＭＭＮのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-214は、ＭＭＮに対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-518c*は、ＭＭＮに対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-574-3p は、ＭＭＮに対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-642a は、ＭＭＮに対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　よって髄液に存在するこれらのmiＲＮＡは、ＡＬＳとＭＭＮの鑑別指標を与えるマーカーであることが判明した。

　＜２＞　図１７－２は髄液検体中の、（１）hsa-miR-657、（２）hsa-miR-25*、（３）hsa-miR-139-3p、及び、（４）hsa-miR-187*について、ＡＬＳとＭＭＮのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-657は、ＭＭＮに対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-25*は、ＭＭＮに対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-139-3p は、ＭＭＮに対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-187*は、ＭＭＮに対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　＜３＞　図１７－３は髄液検体中の、（１）hsa-miR-135a*、（２）hsa-miR-185*、（３）hsa-miR-574-5p、及び、（４）hsa-miR-1231について、ＡＬＳとＭＭＮのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-135a*は、ＭＭＮに対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-185*は、ＭＭＮに対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-574-5pは、ＭＭＮに対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-1231は、ＭＭＮに対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　＜４＞　図１７－４は髄液検体中の、（１）hsa-miR-1181、（２）hsa-miR-1292、（３）hsa-miR-675*、及び、（４）hsa-miR-1539について、ＡＬＳとＭＭＮのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-1181は、ＭＭＮに対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-1292は、ＭＭＮに対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-675*は、ＭＭＮに対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-1539は、ＭＭＮに対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　＜５＞　図１７－５は髄液検体中の、（１）hsa-miR-718、（２）hsa-miR-2682*、（３）hsa-miR-449c*、及び、（４）hsa-miR-3130-5pについて、ＡＬＳとＭＭＮのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-718は、ＭＭＮに対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-2682*は、ＭＭＮに対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-449c*は、ＭＭＮに対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-3130-5pは、ＭＭＮに対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　＜６＞　図１７－６は髄液検体中の、（１）hsa-miR-3138、（２）hsa-miR-3156-5p、（３）hsa-miR-3197、及び、（４）hsa-miR-4297について、ＡＬＳとＭＭＮのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-3138は、ＭＭＮに対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-3156-5pは、ＭＭＮに対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-3197は、ＭＭＮに対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-4297は、ＭＭＮに対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　＜７＞　図１７－７は髄液検体中の、（１）hsa-miR-4276、（２）hsa-miR-3667-3p、（３）hsa-miR-3937、及び、（４）hsa-miR-4437について、ＡＬＳとＭＭＮのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-4276は、ＭＭＮに対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-3667-3pは、ＭＭＮに対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-3937は、ＭＭＮに対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-4437は、ＭＭＮに対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　＜８＞　図１７－８は髄液検体中の、（１）hsa-miR-4446-3p、（２）hsa-miR-4481、（３）hsa-miR-4639-3p、及び、（４）hsa-miR-4701-3pについて、ＡＬＳとＭＭＮのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-4446-3pは、ＭＭＮに対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-4481は、ＭＭＮに対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-4639-3pは、ＭＭＮに対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-4701-3pは、ＭＭＮに対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　＜９＞　図１７－９は髄液検体中の、（１）hsa-miR-4726-3p、及び、（２）hsa-miR-4754について、ＡＬＳとＭＭＮのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-4726-3pは、ＭＭＮに対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-4754は、ＭＭＮに対してＡＬＳにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　［Ｃ］－１（２）：ＡＬＳとＭＭＮの鑑別指標を提供する好適なマーカー
　上記の３４種類のＡＬＳとＭＭＮの鑑別指標を与えるマーカーとして用いられるmiＲＮＡのうち、さらにＡＵＣ＞０．９５の高感度と高特異度が期待できるものとして、hsa-miR-139-3pの増加、hsa-miR-574-5pの増加、hsa-miR-1231の増加、hsa-miR-2682*の増加、及び、hsa-miR-3130-5pの増加、が挙げられる。これらの１種又は２種以上を、ＭＭＮに対するＡＬＳの鑑別指標として用いることにより、ＭＭＮとＡＬＳを高感度かつ高特異度で鑑別することができる。図１８では、これらの好適なマーカーのうちhsa-miR-2682*の増加及びhsa-miR-3130-5pの増加のそれぞれについて、（１）シグナル強度の分布をピックアップし、及び、（２）これらを用いた検出工程を、感度(Sensitivity)と特異性(Specificity)と共に図式化して示している。これらの２種類の指標を単独で用いると、共に感度９２．３％、特異度９５．７％で、ＡＬＳとＭＭＮを鑑別することができた。また、図１９では、hsa-miR-139-3pの増加及びhsa-miR-1231の増加について、これらを組み合わせて用いた検出工程を、感度(Sensitivity)と特異性(Specificity)と共に図式化している。この組み合わせにおいては、感度１００％、特異度９１％で、ＡＬＳとＭＭＮを鑑別することができた。さらに図２０では、hsa-miR-2682*の増加及びhsa-miR-3130-5pの増加について、これらを組み合わせて用いた検出工程を、感度(Sensitivity)と特異性(Specificity)と共に図式化している。この組み合わせにおいては、感度９２．３％、特異度１００％で、ＡＬＳとＭＭＮを鑑別することができた。

　［Ｃ］－２（１）：ＭＭＮとＰＭＡの鑑別指標を提供するマーカー
　図２１（図２１－１～図１７－１４）は、ＭＭＮとＰＭＡの鑑別指標を提供するマーカーのシグナル強度の分布を示している。選別手法は、帰無仮定を基にしたＷｅｌｃｈ法を用い、有意水準は５％で選別した。

　＜１＞　図２１－１は髄液検体中の、（１）hsa-miR-99a、（２）hsa-miR-23b、（３）hsa-miR-184、及び、（４）hsa-miR-485-3pについて、ＭＭＮとＰＭＡのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-99aは、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（２）hsa-miR-23bは、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（３）hsa-miR-184は、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-485-3pは、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に減少していた。

　＜２＞　図２１－２は髄液検体中の、（１）hsa-miR-486-5p、（２）hsa-miR-432*、（３）hsa-miR-675、及び、（４）hsa-miR-25*について、ＭＭＮとＰＭＡのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-486-5pは、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（２）hsa-miR-432*は、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（３）hsa-miR-675は、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-25*は、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　＜３＞　図２１－３は髄液検体中の、（１）hsa-miR-26b*、（２）hsa-miR-920、（３）hsa-miR-1296、及び、（４）hsa-miR-1182について、ＭＭＮとＰＭＡのシグナル強度の分布を示した図面である。
　（１）hsa-miR-26b*は、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（２）hsa-miR-920は、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-1296は、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-1182は、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　＜４＞　図２１－４は髄液検体中の、（１）hsa-miR-1250、（２）hsa-miR-1275、（３）hsa-miR-1292、及び、（４）hsa-miR-1914について、ＭＭＮとＰＭＡのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-1250は、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-1275は、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-1292は、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-1914は、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　＜５＞　図２１－５は髄液検体中の、（１）hsa-miR-711、（２）hsa-miR-3138、（３）hsa-miR-3162-5p、及び、（４）hsa-miR-3176について、ＭＭＮとＰＭＡのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-711は、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-3138は、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-3162-5pは、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-3176は、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　＜６＞　図２１－６は髄液検体中の、（１）hsa-miR-3187-3p、（２）hsa-miR-3188、（３）hsa-miR-3197、及び、（４）hsa-miR-514b-5pについて、ＭＭＮとＰＭＡのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-3187-3pは、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-3188は、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-3197は、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-514b-5pは、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　＜７＞　図２１－７は髄液検体中の、（１）hsa-miR-4261、（２）hsa-miR-3652、（３）hsa-miR-3654、及び、（４）hsa-miR-3679-5pについて、ＭＭＮとＰＭＡのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-4261は、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-3652は、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-3654は、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-3679-5pは、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　＜８＞　図２１－８は髄液検体中の、（１）hsa-miR-3689a-3p、（２）hsa-miR-3180、（３）hsa-miR-3919、及び、（４）hsa-miR-3925-5pについて、ＭＭＮとＰＭＡのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-3689a-3pは、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-3180は、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（３）hsa-miR-3919は、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-3925-5pは、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　＜９＞　図２１－９は髄液検体中の、（１）hsa-miR-3928、（２）hsa-miR-4425、（３）hsa-miR-4437、及び、（４）hsa-miR-4450について、ＭＭＮとＰＭＡのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-3928は、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-4425は、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-4437は、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-4450は、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　＜１０＞　図２１－１０は髄液検体中の、（１）hsa-miR-4461、（２）hsa-miR-4465、（３）hsa-miR-4478、及び、（４）hsa-miR-2392について、ＭＭＮとＰＭＡのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-4461は、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-4465は、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-4478は、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-2392は、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　＜１１＞　図２１－１1は髄液検体中の、（１）hsa-miR-4526、（２）hsa-miR-3619-3p、（３）hsa-miR-3940-5p、及び、（４）hsa-miR-4635について、ＭＭＮとＰＭＡのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-4526は、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-3619-3pは、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-3940-5pは、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に減少していた。
　（４）hsa-miR-4635は、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　＜１２＞　図２１－１２は髄液検体中の、（１）hsa-miR-4646-5p、（２）hsa-miR-4667-5p、（３）hsa-miR-4691-5p、及び、（４）hsa-miR-4709-3pについて、ＭＭＮとＰＭＡのシグナル強度の分布を示している。

　（１）hsa-miR-4646-5pは、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-4667-5pは、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-4691-5pは、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-4709-3pは、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　＜１３＞　図２１－１３は髄液検体中の、（１）hsa-miR-4740-5p、（２）hsa-miR-4751、（３）hsa-miR-4753-5p、及び、（４）hsa-miR-4769-5pについて、ＭＭＮとＰＭＡのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-4740-5pは、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-4751は、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-4753-5pは、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-4769-5pは、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に減少していた。

　＜１４＞　図２１－１４は髄液検体中の、（１）hsa-miR-4779、（２）hsa-miR-2467-5p、（３）hsa-miR-4787-3p、及び、（４）hsa-miR-4800-5pについて、ＭＭＮとＰＭＡのシグナル強度の分布を示している。
　（１）hsa-miR-4779は、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（２）hsa-miR-2467-5pは、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（３）hsa-miR-4787-3pは、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。
　（４）hsa-miR-4800-5pは、ＭＭＮに対してＰＭＡにおいてシグナル強度が有意に増加していた。

　［Ｃ］－２（２）：ＭＭＮとＰＭＡの鑑別指標を提供する好適なマーカー
　上記の５６種類のＭＭＮとＰＭＡの鑑別指標を与えるマーカーとして用いられるmiＲＮＡのうち、さらに有意水準１％の高感度が期待できるものとして、hsa-miR-1275の増加、hsa-miR-711の増加、hsa-miR-3138の増加、及び、hsa-miR-3162-5pの増加、hsa-miR-3928の増加、が挙げられる。さらにこれらの５種類の指標のうちＡＵＣ＞０．８５の高特異度の指標として、hsa-miR-3162-5pの増加、及び、hsa-miR-3928の増加が挙げられる。さらに有意水準１～５％でＡＵＣ＞０．８５のバランスの指標としてhsa-miR-1914*の増加が挙げられる。これらの６種類により、ＭＭＮとＰＭＡの鑑別を好適に行うことが可能であり、特に好適には、hsa-miR-3162-5pの増加、及び／又は、hsa-miR-3928の増加、が挙げられる。

　図２２は、これらの好適な２種、すなわちhsa-miR-3162-5pの増加及びhsa-miR-3928の増加のそれぞれについて、（１）シグナル強度の分布をピックアップし、及び、（２）これらを用いた検出工程を、感度(Sensitivity)と特異性(Specificity)と共に図式化して示している。これらの２種類の指標を単独で用いると、共に感度８４．６％、特異度９０．９％で、ＭＭＮとＰＭＡを鑑別することができた。図２３では、hsa-miR-3162-5p 及びhsa-miR-3928の増加について、これらを組み合わせて用いた検出工程を、感度(Sensitivity)と特異性(Specificity)と共に図式化している。この組み合わせにおいては、感度７６．９％、特異度１００％で、ＭＭＮとＰＭＡを鑑別することができた。

Claims

　運動神経の障害を呈する疾患における、筋萎縮性側索硬化症、進行性筋萎縮症、純粋運動型慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、又は、多巣性運動性ニューロパチーの鑑別に際して、髄液検体における下記のマイクロＲＮＡ：
　hsa-miR-24、hsa-miR-296-5p、hsa-miR-92a-2*、hsa-miR-149*、hsa-miR-296-3p、hsa-miR-92b*、hsa-miR-744、hsa-miR-920、hsa-miR-939、hsa-miR-1225-5p、hsa-miR-1228*、hsa-miR-1202、hsa-miR-1207-5p、hsa-miR-1908、hsa-miR-1909、hsa-miR-3131、hsa-miR-3141、hsa-miR-1260b、hsa-miR-3178、hsa-miR-3180-3p、hsa-miR-3185、hsa-miR-3195、hsa-miR-3197、hsa-miR-4257、hsa-miR-4259、hsa-miR-4327、hsa-miR-4270、hsa-miR-4281、hsa-miR-3621、hsa-miR-3622a-5p、hsa-miR-3648、hsa-miR-3656、hsa-miR-3663-3p、hsa-miR-3917、hsa-miR-3937、hsa-miR-642b、hsa-miR-4417、hsa-miR-4433、hsa-miR-4442、hsa-miR-4447、hsa-miR-4454、hsa-miR-4466、hsa-miR-4467、hsa-miR-4484、hsa-miR-4488、hsa-miR-4492、hsa-miR-4505、hsa-miR-4508、hsa-miR-4530、hsa-miR-3619-3p、hsa-miR-3940-5p、hsa-miR-3960、hsa-miR-4634、hsa-miR-4640-5p、hsa-miR-4655-5p、hsa-miR-4665-5p、hsa-miR-1343、hsa-miR-4688、hsa-miR-4689、hsa-miR-4695-5p、hsa-miR-4697-5p、hsa-miR-4706、hsa-miR-4723-5p、hsa-miR-4725-3p、hsa-miR-4726-5p、hsa-miR-4728-5p、hsa-miR-4730、hsa-miR-4749-5p、hsa-miR-4758-5p、hsa-miR-4763-3p、hsa-miR-4787-5p、hsa-let-7a、hsa-let-7c、hsa-miR-23a、hsa-miR-10a、hsa-miR-200a、hsa-miR-524-5p、hsa-miR-516b、hsa-miR-552、hsa-miR-573、hsa-miR-644、hsa-miR-24-2*、hsa-miR-122*、hsa-miR-145*、hsa-miR-361-3p、hsa-miR-1291、hsa-miR-1260、hsa-miR-1273、hsa-miR-3161、hsa-miR-4310、hsa-miR-4313、hsa-miR-4479、hsa-miR-4493、hsa-miR-4524、hsa-miR-3688-5p、hsa-miR-4633-5p、hsa-miR-4708-5p、hsa-miR-3545-3p、hsa-miR-4741、hsa-miR-4742-3p、hsa-miR-4762-3p、hsa-miR-214、hsa-miR-519d、hsa-miR-575、hsa-miR-30c-2*、hsa-miR-135a*、hsa-miR-185*、hsa-miR-423-5p、hsa-miR-551b*、hsa-miR-550a、hsa-miR-885-3p、hsa-miR-936、hsa-miR-940、hsa-miR-1225-3p、hsa-miR-1233、hsa-miR-1181、hsa-miR-1268、hsa-miR-2276、hsa-miR-711、hsa-miR-718、hsa-miR-1193、hsa-miR-3184、hsa-miR-4323、hsa-miR-4265、hsa-miR-4269、hsa-miR-3605-3p、hsa-miR-3663-5p、hsa-miR-3667-3p、hsa-miR-3679-5p、hsa-miR-3682-3p、hsa-miR-3918、hsa-miR-3940-3p、hsa-miR-3944-3p、hsa-miR-4430、hsa-miR-4440、hsa-miR-4446-3p、hsa-miR-4461、hsa-miR-4481、hsa-miR-4489、hsa-miR-2392、hsa-miR-3922-5p、hsa-miR-4642、hsa-miR-4669、hsa-miR-4676-5p、hsa-miR-4691-5p、hsa-miR-4713-5p、hsa-miR-4722-3p、hsa-miR-4727-3p、hsa-miR-4736、hsa-miR-371b-3p、hsa-miR-2467-3p、hsa-miR-518c*、hsa-miR-574-3p、hsa-miR-642a、hsa-miR-657、hsa-miR-25*、hsa-miR-139-3p、hsa-miR-187*、hsa-miR-574-5p、hsa-miR-1231、hsa-miR-1292、hsa-miR-675*、hsa-miR-1539、hsa-miR-2682*、hsa-miR-449c*、hsa-miR-3130-5p、hsa-miR-3138、hsa-miR-3156-5p、hsa-miR-4297、hsa-miR-4276、hsa-miR-4437、hsa-miR-4639-3p、hsa-miR-4701-3p、hsa-miR-4726-3p、hsa-miR-4754、hsa-miR-3928、hsa-miR-3162-5p、hsa-miR-1275、hsa-miR-4787-3p、hsa-miR-1914*、hsa-miR-4753-5p、hsa-miR-4667-5p、hsa-miR-3180、hsa-miR-4769-5p、hsa-miR-4526、hsa-miR-485-3p、hsa-miR-4779、hsa-miR-4261、hsa-miR-4646-5p、hsa-miR-486-5p、hsa-miR-3188、hsa-miR-432*、hsa-miR-3652、hsa-miR-4425、hsa-miR-99a、hsa-miR-26b*、hsa-miR-4800-5p、hsa-miR-4635、hsa-miR-4478、hsa-miR-4751、hsa-miR-4709-3p、hsa-miR-3689a-3p、hsa-miR-3187-3p、hsa-miR-3654、hsa-miR-1296、hsa-miR-184、hsa-miR-3176、hsa-miR-675、hsa-miR-4740-5p、hsa-miR-3919、hsa-miR-514b-5p、hsa-miR-1182、hsa-miR-2467-5p、hsa-miR-4450、hsa-miR-3925-5p、hsa-miR-1250、hsa-miR-23b、及び、hsa-miR-4465、からなる群から選ばれる１種又は２種以上；
　の量の増減を鑑別指標として検出することを特徴とする、検出方法。
　運動神経の障害を呈する疾患の鑑別に際して、髄液検体におけるhsa-miR-744量の減少又は、hsa-miR-4505量の減少を、筋萎縮性側索硬化症、純粋運動型慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、又は、多巣性運動性ニューロパチーの鑑別指標として検出することを特徴とする、請求項１に記載の検出方法。
　筋萎縮性側索硬化症の健常人との鑑別に際して、髄液検体における下記の健常人を基準としたマイクロＲＮＡ量の変化：
　hsa-let-7a量の増加、hsa-let-7c量の増加、hsa-miR-23a量の増加、hsa-miR-10a量の増加、hsa-miR-200a量の増加、hsa-miR-524-5p量の減少、hsa-miR-516b量の増加、hsa-miR-552量の増加、hsa-miR-573量の増加、hsa-miR-644量の増加、hsa-miR-24-2*量の増加、hsa-miR-122*量の増加、hsa-miR-145*量の増加、hsa-miR-361-3p量の増加、hsa-miR-1291量の増加、hsa-miR-1260量の減少、hsa-miR-1273量の減少、hsa-miR-3161量の増加、hsa-miR-4310量の増加、hsa-miR-4313量の減少、hsa-miR-4479量の増加、hsa-miR-4493量の減少、hsa-miR-4524量の増加、hsa-miR-3688-5p量の増加、hsa-miR-4633-5p量の増加、hsa-miR-4708-5p量の増加、hsa-miR-3545-3p量の増加、hsa-miR-4741量の減少、hsa-miR-4742-3p量の増加、hsa-miR-4762-3p量の増加、has-miR-4467量の減少、has-miR-4505量の減少、及び、hsa-miR-744量の減少、からなる群から選ばれる１種又は２種以上；
　を、筋萎縮性側索硬化症の鑑別指標として検出することを特徴とする、請求項１に記載の検出方法。
　筋萎縮性側索硬化症の健常人との鑑別に際して、髄液検体における下記の健常人を基準とした、hsa-miR-10a量の増加、hsa-miR-516b量の増加、hsa-miR-122*量の増加、及び、hsa-miR-4762-3pの増加、からなる群から選ばれる１種又は２種以上のマイクロＲＮＡ量の変化を鑑別指標として検出することを特徴とする、請求項１に記載の検出方法。
　純粋運動型慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、又は、多巣性運動性ニューロパチーの健常人との鑑別に際して、髄液検体における下記の健常人を基準としたマイクロＲＮＡ量の変化：
　hsa-miR-214量の減少、hsa-miR-519d量の減少、hsa-miR-575量の減少、hsa-miR-30c-2*量の減少、hsa-miR-135a*量の減少、hsa-miR-185*量の減少、hsa-miR-423-5p量の減少、hsa-miR-92b*量の減少、hsa-miR-551b*量の減少、hsa-miR-550a量の減少、hsa-miR-885-3p量の減少、hsa-miR-936量の減少、hsa-miR-940量の減少、hsa-miR-1225-3p量の減少、hsa-miR-1233量の減少、hsa-miR-1181量の減少、hsa-miR-1268量の増加、hsa-miR-1908量の減少、hsa-miR-2276量の減少、hsa-miR-711量の減少、hsa-miR-718量の減少、hsa-miR-1193量の減少、hsa-miR-3184量の減少、hsa-miR-3197量の減少、hsa-miR-4323量の減少、hsa-miR-4265量の減少、hsa-miR-4269量の減少、hsa-miR-3605-3p量の減少、hsa-miR-3648量の減少、hsa-miR-3663-5p量の減少、hsa-miR-3667-3p量の減少、hsa-miR-3679-5p量の減少、hsa-miR-3682-3p量の減少、hsa-miR-3918量の減少、hsa-miR-3937量の減少、hsa-miR-3940-3p量の減少、hsa-miR-3944-3p量の減少、hsa-miR-4417量の増加、hsa-miR-4430量の減少、hsa-miR-4440量の減少、hsa-miR-4446-3p量の減少、hsa-miR-4461量の減少、hsa-miR-4481量の減少、hsa-miR-4489量の減少、hsa-miR-2392量の減少、hsa-miR-3922-5p量の減少、hsa-miR-4634量の増加、hsa-miR-4642量の減少、hsa-miR-4669量の減少、hsa-miR-4676-5p量の減少、hsa-miR-4691-5p量の減少、hsa-miR-4713-5p量の減少、hsa-miR-4722-3p量の減少、hsa-miR-4725-3p量の減少、hsa-miR-4727-3p量の減少、hsa-miR-4736量の減少、hsa-miR-371b-3p量の減少、hsa-miR-744量の減少、hsa-miR-4505量の減少、及び、hsa-miR-2467-3p量の減少、からなる群から選ばれる１種又は２種以上；
　を、純粋運動型慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、又は、多巣性運動性ニューロパチーの鑑別指標として検出することを特徴とする、請求項１に記載の検出方法。
　純粋運動型慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、又は、多巣性運動性ニューロパチーの健常人との鑑別に際して、髄液検体におけるhsa-miR-4417の量の増加を純粋運動型慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、又は、多巣性運動性ニューロパチーの鑑別指標として検出することを特徴とする、請求項１に記載の検出方法。
　（１）筋萎縮性側索硬化症、並びに、（２）純粋運動型慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー又は多巣性運動性ニューロパチー、からなる運動神経の障害を呈する疾患の択一的な鑑別に際して、髄液検体における下記の純粋運動型慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー又は多巣性運動性ニューロパチーを基準としたマイクロＲＮＡの量の変化；
　hsa-miR-24量の増加、hsa-miR-296-5p量の増加、hsa-miR-92a-2*量の減少、hsa-miR-149*量の増加、hsa-miR-296-3p量の増加、hsa-miR-92b*量の増加、hsa-miR-744量の増加、hsa-miR-920量の増加、hsa-miR-939量の減少、hsa-miR-1225-5p量の減少、hsa-miR-1228*量の増加、hsa-miR-1202量の増加、hsa-miR-1207-5p量の増加、hsa-miR-1908量の増加、hsa-miR-1909量の増加、hsa-miR-3131量の増加、hsa-miR-3141量の増加、hsa-miR-1260b量の減少、hsa-miR-3178量の増加、hsa-miR-3180-3p量の増加、hsa-miR-3185量の増加、hsa-miR-3195量の増加、hsa-miR-3197量の増加、hsa-miR-4257量の増加、hsa-miR-4259量の増加、hsa-miR-4327量の増加、hsa-miR-4270量の増加、hsa-miR-4281量の増加、hsa-miR-3621量の減少、hsa-miR-3622a-5p量の増加、hsa-miR-3648量の増加、hsa-miR-3656量の減少、hsa-miR-3663-3p量の増加、hsa-miR-3917量の増加、hsa-miR-3937量の増加、hsa-miR-642b量の増加、hsa-miR-4417量の減少、hsa-miR-4433量の増加、hsa-miR-4442量の増加、hsa-miR-4447量の増加、hsa-miR-4454量の減少、hsa-miR-4466量の減少、hsa-miR-4467量の減少、hsa-miR-4484量の増加、hsa-miR-4488量の減少、hsa-miR-4492量の減少、hsa-miR-4505量の増加、hsa-miR-4508量の減少、hsa-miR-4530量の増加、hsa-miR-3619-3p量の増加、hsa-miR-3940-5p量の減少、hsa-miR-3960量の減少、hsa-miR-4634量の減少、hsa-miR-4640-5p量の増加、hsa-miR-4655-5p量の増加、hsa-miR-4665-5p量の増加、hsa-miR-1343量の増加、hsa-miR-4688量の増加、hsa-miR-4689量の増加、hsa-miR-4695-5p量の増加、hsa-miR-4697-5p量の増加、hsa-miR-4706量の増加、hsa-miR-4723-5p量の増加、hsa-miR-4725-3p量の増加、hsa-miR-4726-5p量の増加、hsa-miR-4728-5p量の増加、hsa-miR-4730量の増加、hsa-miR-4749-5p量の増加、hsa-miR-4758-5p量の増加、hsa-miR-4763-3p量の増加、及び、hsa-miR-4787-5p量の減少、からなる群から選ばれる１種又は２種以上；
　を、筋萎縮性側索硬化症の鑑別指標として検出することを特徴とする、請求項１に記載の検出方法。
　（１）筋萎縮性側索硬化症、並びに、（２）純粋運動型慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー又は多巣性運動性ニューロパチー、からなる運動神経の障害を呈する疾患の択一的な鑑別に際して、髄液検体における下記の純粋運動型慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー又は多巣性運動性ニューロパチーを基準としたマイクロＲＮＡの量の変化：
　hsa-miR-642b量の増加、hsa-miR-3197量の増加、hsa-miR-4697-5p量の増加、及び、hsa-miR-4417量の減少、からなる群のマイクロＲＮＡから選ばれる１種又は２種以上（ただし、hsa-miR-4417量の減少は他の３種のマイクロＲＮＡ量の増減から選ばれる１～３種との組み合わせである）；
　を筋萎縮性側索硬化症の鑑別指標として検出することを特徴とする、請求項１に記載の検出方法。
　（１）筋萎縮性側索硬化症、並びに、（２）純粋運動型慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー又は多巣性運動性ニューロパチーからなる運動神経の障害を呈する疾患の択一的な鑑別に際して、
髄液検体における下記の筋萎縮性側索硬化症を基準としたマイクロＲＮＡ量の変化：
　（ａ）hsa-miR-4417量の増加、並びに、（ｂ）hsa-miR-642b量の減少、hsa-miR-3197量の減少、及び、hsa-miR-4697-5p量の減少からなる群から選ばれるいずれか１種；
　を純粋運動型慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー又は多巣性運動性ニューロパチーの鑑別指標として検出することを特徴とする、請求項１に記載の検出方法。
　筋萎縮性側索硬化症と多巣性運動性ニューロパチーとの鑑別に際して、髄液検体における下記の多巣性運動性ニューロパチーを基準としたマイクロＲＮＡ量の変化：
　hsa-miR-214の増加、hsa-miR-518c*の増加、hsa-miR-574-3pの増加、hsa-miR-642aの増加、hsa-miR-657の増加、hsa-miR-25*の増加、hsa-miR-139-3pの増加、hsa-miR-187*の増加、hsa-miR-135a*の増加、 hsa-miR-185*の増加、hsa-miR-574-5pの増加、hsa-miR-1231の増加、hsa-miR-1181の増加、hsa-miR-1292の増加、hsa-miR-675*の増加、hsa-miR-1539の増加、hsa-miR-718の増加、hsa-miR-2682*の増加、hsa-miR-449c*の増加、hsa-miR-3130-5pの増加、hsa-miR-3138の増加、hsa-miR-3156-5pの増加、hsa-miR-3197の増加、hsa-miR-4297の増加、hsa-miR-4276の増加、hsa-miR-3667-3pの増加、hsa-miR-3937の増加、hsa-miR-4437の増加、hsa-miR-4446-3pの増加、hsa-miR-4481の増加、hsa-miR-4639-3pの増加、hsa-miR-4701-3pの増加、hsa-miR-4726-3pの増加、及び、hsa-miR-4754の増加、からなる群から選ばれる１種又は２種以上；
　を、筋萎縮性側索硬化症の鑑別指標として検出することを特徴とする、請求項１に記載の検出方法。
　筋萎縮性側索硬化症と多巣性運動性ニューロパチーとの鑑別に際して、髄液検体における多巣性運動性ニューロパチーを基準とした、hsa-miR-139-3pの増加、hsa-miR-574-5pの増加、hsa-miR-1231の増加、hsa-miR-2682*の増加、及び、hsa-miR-3130-5pの増加、からなる群から選ばれるマイクロＲＮＡ量の変化の１種又は２種以上を筋萎縮性側索硬化症の鑑別指標として検出することを特徴とする、請求項１に記載の検出方法。
　筋萎縮性側索硬化症と多巣性運動性ニューロパチーとの鑑別に際して、髄液検体における多巣性運動性ニューロパチーを基準とした、（ａ)hsa-miR-2682*の増加、（ｂ）hsa-miR-3130-5pの増加、（ｃ）hsa-miR-139-3pの増加とhsa-miR-1231の増加の組み合わせ、並びに、（ｄ）hsa-miR-2682*の増加とhsa-miR-3130-5pの増加の組み合わせ、からなる群から選ばれる１種又は２種以上、を筋萎縮性側索硬化症の鑑別指標として検出することを特徴とする、請求項１に記載の検出方法。
　多巣性運動性ニューロパチーと進行性筋萎縮症との鑑別に際して、髄液検体における多巣性運動性ニューロパチーを基準とした、hsa-miR-3928の増加、hsa-miR-711の増加、hsa-miR-3138の増加、hsa-miR-3162-5pの増加、hsa-miR-1275の増加、hsa-miR-4787-3pの増加、hsa-miR-1914*の増加、hsa-miR-25*の増加、hsa-miR-3619-3pの増加、hsa-miR-4753-5pの増加、hsa-miR-4667-5pの増加、hsa-miR-3180の減少、hsa-miR-4769-5pの増加、hsa-miR-4526の増加、hsa-miR-485-3pの減少、hsa-miR-4779の増加、hsa-miR-4261の増加、hsa-miR-4646-5pの増加、hsa-miR-3197の増加、hsa-miR-486-5pの減少、hsa-miR-3188の増加、hsa-miR-432*の減少、hsa-miR-1292の増加、hsa-miR-3652の増加、hsa-miR-4425の増加、hsa-miR-99aの減少、hsa-miR-3679-5pの増加、hsa-miR-4461の増加、hsa-miR-26b*の減少、hsa-miR-3940-5pの減少、hsa-miR-4800-5pの増加、hsa-miR-4635の増加、hsa-miR-4478の増加、hsa-miR-4751の増加、hsa-miR-4691-5pの増加、hsa-miR-4709-3pの増加、hsa-miR-3689a-3pの増加、hsa-miR-4437の増加、hsa-miR-3187-3pの増加、hsa-miR-3654の増加、hsa-miR-1296の増加、hsa-miR-184の増加、hsa-miR-920の増加、hsa-miR-3176の増加、hsa-miR-675の増加、hsa-miR-4740-5pの増加、hsa-miR-3919の増加、hsa-miR-514b-5pの増加、hsa-miR-1182の増加、hsa-miR-2467-5pの増加、hsa-miR-4450の増加、hsa-miR-3925-5pの増加、hsa-miR-1250の増加、hsa-miR-2392の増加、hsa-miR-23bの減少、及び、hsa-miR-4465の増加、からなる群から選ばれるマイクロＲＮＡ量の変化の１種又は２種以上を、進行性筋萎縮症の鑑別指標として検出することを特徴とする、請求項１に記載の検出方法。
　多巣性運動性ニューロパチーと進行性筋萎縮症との鑑別に際して、髄液検体における多巣性運動性ニューロパチーを基準とした、hsa-miR-1275の増加、hsa-miR-711の増加、hsa-miR-3138の増加、hsa-miR-3162-5pの増加、hsa-miR-3928の増加、及び、hsa-miR-1914*の増加、からなる群から選ばれるマイクロＲＮＡ量の変化の１種又は２種以上を、進行性筋萎縮症の鑑別指標として検出することを特徴とする、請求項１に記載の検出方法。
　多巣性運動性ニューロパチーと進行性筋萎縮症との鑑別に際して、髄液検体における多巣性運動性ニューロパチーを基準とした、hsa-miR-3162-5pの増加、及び／又は、hsa-miR-3928の増加、を、進行性筋萎縮症の鑑別指標として検出することを特徴とする、請求項１に記載の検出方法。
　以下の（１）～（３）の工程を含むことを特徴とする、マイクロＲＮＡ検出用アレイを用いたマイクロＲＮＡの定量方法；
（１）髄液検体をマイクロＲＮＡ検出用アレイに接触させて得られるマイクロＲＮＡのシグナル値に基づき、定常発現が認められるマイクロＲＮＡ群を選別し、
（２）当該マイクロＲＮＡ群においてシグナル値が上位２５％～７５％の範囲にある、いずれかのマイクロＲＮＡのシグナル値のうちの一種類を選択し、
（３）当該選択されたmiＲＮＡのシグナル値を特定の数に置き換え、当該置き換えをするために行われる演算において用いられる数的手段を求め、当該数的手段を当該miＲＮＡ群を構成する個々のmiＲＮＡのシグナル値に対して講じることで、これらのシグナル値を相対的なシグナル強度とする補正を行うことにより、当該miＲＮＡ群の標準化を行い、当該標準化がなされたシグナル強度を基にmiＲＮＡの定量を行う。
　上記工程（３）の演算は乗算であり、数的手段は当該乗算において用いられた乗数の使用であることを特徴とする、請求項１６に記載のマイクロＲＮＡの定量方法。
　工程（２）の上位２５％～７５％の範囲は、マイクロＲＮＡ群のシグナル値の中央値領域であることを特徴とする、請求項１６又は１７に記載のマイクロＲＮＡの定量方法。
　定常発現が認められるマイクロＲＮＡ群は、さらに定量性が認められるマイクロＲＮＡ群であることを特徴とする、請求項１６～１８のいずれかに記載のマイクロＲＮＡの定量方法。
　健常人とターゲット疾患の罹患者のそれぞれに由来する髄液検体群、又は、複数のターゲット疾患の罹患者間のそれぞれに由来する髄液検体群において、それぞれの髄液検体をマイクロＲＮＡ検出用アレイに接触させてマイクロＲＮＡのシグナル値を得て、それぞれのシグナル値について請求項１６～１９のいずれかに記載のマイクロＲＮＡの定量方法における標準化により得られるシグナル強度を基に、上記の健常人とターゲット疾患の罹患者のそれぞれに由来する髄液検体群、又は、複数のターゲット疾患の罹患者間のそれぞれに由来する髄液検体群における比較を行い、これらの群間の鑑別指標となるマイクロＲＮＡを選別することを特徴とする、ターゲット疾患の鑑別指標となる髄液マイクロＲＮＡの検出方法。
　ターゲット疾患の鑑別指標となる髄液検体におけるマイクロＲＮＡに基づき、当該ターゲット疾患の鑑別のためのマイクロＲＮＡ検出用アレイを用いる検出方法を支援するための方法であって、請求項１６～１９のいずれかに記載のマイクロＲＮＡの定量方法を用いて、被検髄液検体における上記の鑑別指標として用いられるマイクロＲＮＡ量を、標準化されたシグナル強度として得て、当該シグナル強度を上記検出方法のために用いることを特徴とする、支援方法。
　請求項１～１５のいずれかに記載の検出方法を支援することを特徴とする、請求項２１に記載の支援方法。