WO2014073292A1 - 癌治療のための抗adam28抗体 - Google Patents

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WO2014073292A1
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陽 宮越
令奈 松本
静恵 加藤
友紀 速水
早月 望月
将之 下田
岡田　保典
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ジーンフロンティア株式会社
学校法人 慶應義塾
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    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding

Definitions

  • the present invention relates to an anti-human ADAM28 antibody and its pharmaceutical use.
  • ADAM proteins are multifunctional proteins involved in ectodomain shedding, cell adhesion and invasion of transmembrane proteins (Non-patent Documents 1 and 2).
  • the human genome contains 25 ADAMs including 4 pseudogenes, and 21 ADAMs consist of 13 proteolytic ADAMs and 8 non-proteolytic ADAMs that exhibit proteolytic activity. (Non-Patent Documents 1 and 3).
  • Proteolytic ADAMs share the metalloproteinase domain of matrix metalloproteinases (MMPs), and typical proteolytic ADAMs are propeptides, metalloproteinases, disintegrin-like, cysteine-rich, epidermal growth factor-like, transmembrane and Many proteolytic ADAMs, including intracellular domains (Non-Patent Documents 3-9), including ADAM8, ADAM9, ADAM12, ADAM15, ADAM17, ADAM19 and ADAM28, are overexpressed in human cancer, It is related to progress (Non-Patent Documents 5 and 9).
  • MMPs matrix metalloproteinases
  • ADAM28 ADAM metallopeptidase domain 28
  • ADAM28m prototype membrane anchor type
  • ADAM28s short secreted form
  • Non-Patent Documents 12 and 13 have also been shown to be expressed in large amounts in human non-small cell lung cancer and breast cancer.
  • the present inventors have found that ADAM28 is preferentially expressed in cancer cells contained in cancer tissue, and that the expression level of ADAM28 mRNA is high in breast cancer cells.
  • Non-patent Document 13 It was shown to be related to proliferation (Non-patent Document 13) and to non-small cell lung cancer, both related to cancer cell proliferation and invasion (Non-patent Document 12).
  • Non-patent Document 14 serum ADAM27 levels increase in patients with non-small cell lung cancer with tumor progression, lymph node metastasis, and cancer recurrence.
  • IGF-1 insulin-like growth factor-I
  • IGFBP-3 complex IGF binding protein-3
  • Phage display method is one of the display technologies that achieve high-speed in vitro selection by having one-to-one correspondence between functional peptides and proteins and DNA encoding them in the form of phage particles.
  • This phage display method is applied to antibody selection, and many drug developments of antibodies obtained by this method have been carried out (Non-patent Document 16).
  • Non-patent Document 16 methods for obtaining specific antibodies by combining a human artificial antibody library and a phage display method have also been established, and these methods have been put into practical use by several companies including MorphoSys' HuCAL (Human Combined Antibody Library). It has been advanced.
  • An object of the present invention is to provide an anti-human ADAM28 antibody useful for preventing or treating cancer or inhibiting cancer metastasis.
  • the present inventors produced a plurality of anti-ADAM28 antibodies that bind to human ADAM28.
  • the prepared anti-human ADAM28 antibody inhibits the enzyme activity of ADAM28 and exhibits an excellent cancer cell growth inhibitory effect and cancer metastasis inhibitory effect in an in vivo model.
  • the present invention relates to the following.
  • the light chain variable region comprises CDR1 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5, CDR2 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 6, and CDR3 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7.
  • the heavy chain variable region comprises CDR1 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 8, CDR2 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 and CDR3 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 10;
  • the light chain variable region comprises CDR1 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5, CDR2 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 6 and CDR3 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7.
  • the heavy chain variable region comprises CDR1 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 8, CDR2 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9, and CDR3 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 10 ( However, at least one amino acid sequence selected from the group consisting of the amino acid sequences represented by SEQ ID NOs: 5, 6 and 7 has 1 to 3 amino acids substituted, deleted, inserted and / or added.
  • the light chain variable region includes CDR1 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, CDR2 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12, and CDR3 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 13.
  • the heavy chain variable region comprises CDR1 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 14, CDR2 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 15 and CDR3 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 16;
  • the light chain variable region comprises CDR1 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, CDR2 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12, and CDR3 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 13.
  • the heavy chain variable region comprises CDR1 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 14, CDR2 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 15, and CDR3 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 16 ( However, at least one amino acid sequence selected from the group consisting of the amino acid sequences represented by SEQ ID NOs: 11, 12, and 13 has 1 to 3 amino acids substituted, deleted, inserted, and / or added.
  • the light chain variable region comprises CDR1 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 24, CDR2 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 25, and CDR3 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 26
  • the heavy chain variable region comprises CDR1 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27, CDR2 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 28, and CDR3 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29;
  • a CDR1 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27, and the heavy chain variable region represented by SEQ ID NO: 27 CDR2 having a non-acid sequence and CDR3 having an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29 (however, in at least one amino acid sequence selected from the group consisting of amino acid sequences represented by SEQ ID NOs: 24, 25 and 26) 1 to 3 amino acids are substituted, deleted, inserted, and / or added, and / or 1 to 3 amino acids are substituted, deleted, inserted and / or added in at least one amino acid sequence selected from the group consisting of the amino acid sequences represented by SEQ ID NOs: 27, 28 and 29); [1] The antibody according to [1].
  • the light chain variable region comprises the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 17, and the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 18; (3 ′) the light chain variable region comprises the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19, and the heavy chain variable region comprises the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 20, or (5 ′) the light chain
  • a pharmaceutical composition comprising the antibody according to any one of [1] to [4].
  • a preventive or therapeutic agent for cancer comprising the antibody according to any one of [1] to [4].
  • a cancer metastasis inhibitor comprising the antibody according to any one of [1] to [4].
  • a method for preventing or treating cancer in a mammal comprising administering an effective amount of the antibody according to any one of [1] to [4] to the mammal.
  • the method of [8], wherein the mammal is a human.
  • a method for inhibiting cancer metastasis in a mammal comprising administering an effective amount of the antibody according to any one of [1] to [4] to the mammal.
  • the method of [10] wherein the mammal is a human.
  • an anti-human ADAM28 antibody useful for prevention or treatment of cancer or inhibition of cancer metastasis is provided.
  • Enzyme activity inhibitory effect of anti-human ADAM28 antibody In vitro cancer cell growth inhibitory effect of anti-human ADAM28 antibody. In vivo cancer cell growth inhibitory effect of anti-human ADAM28 antibody. In vivo cancer cell metastasis inhibitory effect of anti-human ADAM28 antibody. In vivo cancer cell metastasis inhibitory effect of anti-human ADAM28 antibody.
  • the present invention provides an antibody having a specific binding activity to human ADAM28 and an activity inhibiting the enzymatic activity of human ADAM28.
  • ADAM28 is a known protein, and its amino acid sequence and cDNA sequence are also known. There are two types of ADAM28, a prototype membrane anchor type (ADAM28m) and a short secretion type (ADAM28s), both of which are included in ADAM28 in the present invention.
  • the representative amino acid sequence of human ADAM28m is SEQ ID NO: 2
  • the representative cDNA sequence of human ADAM28m is SEQ ID NO: 1
  • the representative amino acid sequence of human ADAM28s is SEQ ID NO: 4
  • the representative cDNA sequence of human ADAM28s is Are shown in SEQ ID NO: 3, respectively.
  • the antibody of the present invention has specific binding activity for human ADAM28.
  • “Human ADAM28” means that the amino acid sequence or nucleotide sequence of ADAM28 has the same or substantially the same amino acid sequence or nucleotide sequence as the amino acid sequence or nucleotide sequence of ADAM28 naturally expressed in humans. . “Substantially the same” means that the focused amino acid sequence or nucleotide sequence is 70% or more (preferably 80% or more, more preferably 90% or more) with the amino acid sequence or nucleotide sequence of ADAM28 that is naturally expressed in humans. And more preferably 95% or more, most preferably 99% or more), and has the function of human ADAM28. The same applies to biological species other than humans, and proteins, genes, and fragments other than ADAM28.
  • Specific binding to an antigen X by an antibody means that the binding affinity of the antibody to the antigen X in the antigen-antibody reaction is more than the binding affinity to a non-specific antigen (eg, bovine serum albumin (BSA)). Means high.
  • BSA bovine serum albumin
  • the antibody of the present invention has an activity of inhibiting the enzyme activity of human ADAM28.
  • the enzyme activity of human ADAM28 specifically means the activity of human ADAM28 cleaving human IGFBP-3 (Insulin-like Growth Factor Binding Protein-3).
  • the activity of human ADAM28 cleaving human IGFBP-3 can be evaluated by, for example, zymography analysis described in CancerCanRes 2006; 66 (20): 9913-9920.
  • antibody is used to include a full-length antibody and any antigen-binding fragment thereof (ie, “antigen-binding portion”) or a single chain thereof.
  • Antibody refers to a glycoprotein or antigen-binding portion thereof comprising at least two heavy chains (H) and two light chains (L) linked by disulfide bonds.
  • Each heavy chain is composed of a heavy chain variable region (abbreviated as V H in the text) and a heavy chain constant region.
  • the heavy chain constant region is comprised of three domains, C H 1, C H 2 and C H 3.
  • Each light chain is composed of a light chain variable region (abbreviated herein as VL ) and a light chain constant region.
  • the light chain constant region is comprised of one domain C L.
  • VH and VL regions are further subdivided into highly variable regions called complementarity determining regions (CDRs), which are called framework regions (FR) and are more conserved The area is scattered.
  • CDRs complementarity determining regions
  • FR framework regions
  • Each V H and V L is composed of 3 CDRs and 4 FRs, arranged in the following order: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4 from the amino terminus to the carboxy terminus.
  • the variable regions of the heavy and light chains contain a binding domain that interacts with an antigen.
  • the constant region of an antibody can mediate binding of immunoglobulins to host tissues or factors, including various cells of the immune system (eg, effector cells) and the first component of the traditional complement system (C1q). It is.
  • antigen-binding portion of an antibody is used to refer to one or more fragments of an antibody that retain the ability to specifically bind to an antigen (eg, human ADAM28). It has been shown that the antigen binding function of an antibody is performed by fragments of a full-length antibody.
  • binding fragments included in the term “antigen-binding portion” of an antibody include: (i) a Fab fragment that is a monovalent fragment composed of V L , V H , C L and C H1 domains; (ii) hinge F (ab ′) 2 fragment which is a bivalent fragment containing two Fab fragments linked by disulfide bridge in the region, (iii) Fab ′ fragment which is a native Fab having a hinge region part (FUNDAMENTAL IMMUNOLOGY (Paul ed., 3. sup.rd ed.
  • single chain Fv single chain Fv
  • antigen-binding portion of an antibody
  • these antibody fragments are known to those skilled in the art. It obtained using conventional techniques, and the fragments are screened for utility in the same manner as are intact antibodies.
  • the antibody of the present invention is preferably a monoclonal antibody.
  • “Monoclonal antibody” refers to a preparation of antibody molecules of single molecular composition.
  • a monoclonal antibody composition displays a single binding specificity and affinity for a particular epitope.
  • the antibody of the present invention is preferably a human antibody or a humanized antibody.
  • Human antibody refers to an antibody having variable regions derived from human germline immunoglobulin sequences in both the framework and CDR regions. Furthermore, if the antibody contains a constant region, this constant region is also derived from a human germline immunoglobulin sequence.
  • human antibody includes amino acid residues that are not encoded by human germline immunoglobulin sequences (eg, mutations introduced by random or site-directed mutagenesis in vitro or somatic mutation in vivo). Embodiments are also included.
  • the “humanized antibody” refers to an antibody in which a CDR sequence derived from a germ line of a non-human animal species such as a mouse is fused on a human framework sequence.
  • human antibodies include “reconstituted human antibodies”.
  • the reshaped human antibody refers to a modified antibody in which at least one CDR contained in the first human donor antibody is used in place of the CDR of the second human acceptor antibody in the second human acceptor antibody. Preferably all six CDRs are replaced. More preferably, the entire antigen binding region (eg, Fv, Fab or F (ab ′) 2) of the first human donor antibody is used in place of the corresponding region in the second human acceptor antibody. More preferably, the Fab region of the first human donor antibody is operably linked to an appropriate constant region of the second human acceptor antibody to form a full length antibody.
  • Reconstituted human antibodies can be produced using general gene recombination techniques disclosed in, for example, EP 125023, WO 96/02576, Reference 16 above. Specifically, for example, a DNA sequence designed to link a target CDR in a donor human antibody and a target framework region (FR) in an acceptor human antibody overlaps with the terminal regions of both the CDR and FR. Using several oligonucleotides prepared so as to have a part to be synthesized as primers, the DNA is synthesized by the PCR method (see the method described in WO 98/13388).
  • the reconstructed human antibody can be obtained by ligating the obtained DNA with DNA encoding a human antibody constant region or a human antibody constant region variant, then incorporating the DNA into an expression vector, introducing it into a host and producing it. (See EP 125023, WO 96/02576).
  • artificial human antibody is included in the human antibody.
  • the artificial human antibody can be produced, for example, using a general gene recombination technique disclosed in the above-mentioned document 16 or the like.
  • the antibody of the present invention includes a fusion protein in which the above-described antibody is fused with another peptide or protein.
  • a polynucleotide encoding an antibody of the present invention and a polynucleotide encoding another peptide or polypeptide are linked so that the frames coincide with each other, introduced into an expression vector, and expressed in a host. Any technique known to those skilled in the art can be used.
  • Other peptides subjected to fusion with the antibody of the present invention include, for example, FLAG (Hopp, T. P.
  • polypeptides to be subjected to fusion with the antibody of the present invention examples include GST (glutathione-S-transferase), HA (influenza agglutinin), immunoglobulin constant region, ⁇ -galactosidase, MBP (maltose). Binding protein) and the like. Preparing a fusion polypeptide by fusing a commercially available polynucleotide encoding the peptide or polypeptide with a polynucleotide encoding the antibody of the present invention and expressing the fusion polynucleotide prepared thereby. Can do.
  • the antibody of the present invention may be a conjugated antibody bound to various molecules such as a polymer such as polyethylene glycol (PEG) or hyaluronic acid, a radioactive substance, a fluorescent substance, a luminescent substance, an enzyme, or a toxin.
  • a conjugated antibody can be obtained by chemically modifying the obtained antibody.
  • the modification method of an antibody has already been established in this field (for example, US5057313, US5156840).
  • the antibody of the present invention is preferably isolated or purified. “Isolated or purified” means that an operation for removing components other than the target component from a naturally occurring state has been performed.
  • the purity (the ratio of the weight of the antibody of the present invention to the total protein weight) of the isolated or purified antibody of the present invention is usually 50% or more, preferably 70% or more, more preferably 90% or more, most preferably 95% or more (for example, substantially 100%).
  • the antibody of the present invention binds to human ADAM28 at an epitope comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 21, 22 or 23.
  • the epitope containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 21 is a continuous partial sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 4, and the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 21 And an epitope consisting of a partial sequence of preferably 20 amino acids or less, more preferably 12 amino acids or less.
  • an epitope including the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 21 an epitope comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 21, an epitope comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 32 (FTLENFSKWRGS), and The epitope which consists of an amino acid sequence (ENFSKWRGSVLS) represented by sequence number 33 can be mentioned.
  • the epitope containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 22 is a continuous partial sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 4, and the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 22 And an epitope consisting of a partial sequence of preferably 20 amino acids or less, more preferably 12 amino acids or less.
  • Specific examples of the epitope including the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 22 include an epitope consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 22.
  • the epitope including the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 23 is a continuous partial sequence of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 4, and the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 23 And an epitope consisting of a partial sequence of preferably 20 amino acids or less, more preferably 12 amino acids or less.
  • an epitope including the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 23 an epitope consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 23, an epitope consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 34 (LSNCLFNAPLPT), and The epitope which consists of an amino acid sequence (CLFNAPLPTDII) represented by sequence number 35 can be mentioned.
  • Preferred embodiments of the antibody of the present invention include the antibodies described in the following (1) to (4): (1) comprising a light chain variable region and a heavy chain variable region,
  • the light chain variable region comprises CDR1 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5, CDR2 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 6 and CDR3 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7, and
  • the light chain variable region comprises CDR1 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5, CDR2 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 6 and CDR3 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7, and
  • An antibody wherein the heavy chain variable region comprises CDR1 having the amino acid
  • the light chain variable region comprises CDR1 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, CDR2 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12, and CDR3 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 13, and An antibody in which the heavy chain variable region comprises CDR1 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 14, CDR2 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 15 and CDR3 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 16; (4) comprising a light chain variable region and a heavy chain variable region, The light chain variable region comprises CDR1 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11, CDR2 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12, and CDR3 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO:
  • the light chain variable region comprises CDR1 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 24, CDR2 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 25, and CDR3 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 26, and An antibody in which the heavy chain variable region comprises CDR1 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27, CDR2 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 28, and CDR3 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29; (6) comprising a light chain variable region and a heavy chain variable region, The light chain variable region comprises CDR1 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 24, CDR2 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 25, and CDR3 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO:
  • the number of substitutions, deletions, insertions and / or additions is such that the antibody has specific binding activity for human ADAM28 and human ADAM28 Although it does not specifically limit as long as it has the activity which inhibits the enzyme activity of this, Preferably it is less than 2 amino acids per one CDR sequence, More preferably, it is 1 amino acid. Further, the number of CDR sequences in which amino acids are substituted, deleted, inserted and / or added is particularly limited as long as the antibody has a specific binding activity to human ADAM28 and an activity to inhibit the enzymatic activity of human ADAM28.
  • Examples of a method for substituting one or more amino acid residues with other amino acids of interest include, for example, site-directed mutagenesis (Hashimoto-Gotoh, T, Mizuno, T, Ogasahara, Y, and Nakagawa, M. (1995). ) An oligodeoxyribonucleotide-directed dual amber method for site-directed mutagenesis. Gene 152, 271-275, Zoller, MJ, and Smith, M. (1983) Oligonucleotide-directed mutagenesis of DNA fragments cloned into M13 vectors.M ths Enzymol.
  • the framework region (FR) of the antibody linked to the CDR is selected so that the CDR forms a favorable antigen binding site.
  • the FR used in the antibody of the present invention is not particularly limited, and any FR may be used, but it is preferable to use a human antibody FR.
  • the FR of a human antibody may be a FR having a natural sequence, and if necessary, one or more amino acids in a framework region having a natural sequence are substituted so that the CDR forms an appropriate antigen-binding site. , Deletion, addition and / or insertion.
  • a mutant FR sequence having a desired property can be selected by measuring and evaluating the antigen-binding activity of an antibody using FRs substituted with amino acids (Sato, K. et al., Cancer Res. (1993). 53, 851-856).
  • the human antibody Vk1 (Kabat database) FR is preferably used for the light chain, and the human antibody VH5 (Kabat database) FR is preferably used for the heavy chain. It is done.
  • the human antibody Vk2 (Kabat database) FR is preferably used for the light chain, and the human antibody VH6 (Kabat database) FR is preferably used for the heavy chain. It is done.
  • the human antibody Vk2 (Kabat database) FR is preferably used for the light chain
  • the human antibody VH3 (Kabat database) FR is preferably used for the heavy chain. It is done.
  • the constant region used in the antibody of the present invention is not particularly limited, and any constant region may be used.
  • the constant region used in the antibody of the present invention include human antibody constant regions (such as IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, and IgM-derived constant regions).
  • C ⁇ 1, C ⁇ 2, C ⁇ 3, C ⁇ 4, C ⁇ , C ⁇ , C ⁇ 1, C ⁇ 2, and C ⁇ can be used for the H chain, and C ⁇ and C ⁇ can be used for the L chain.
  • the C ⁇ constant region of a human antibody is preferably used for the light chain, and the C ⁇ 1 constant region of the human antibody is preferably used for the heavy chain.
  • the C ⁇ constant region of a human antibody is preferably used for the light chain, and the C ⁇ 1 constant region of the human antibody is preferably used for the heavy chain.
  • Preferred antibodies of the present invention include the following: (1 ′) an amino acid comprising a light chain variable region and a heavy chain variable region, wherein the light chain variable region comprises an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 17, and wherein the heavy chain variable region is represented by SEQ ID NO: 18 An antibody comprising a sequence; (3 ′) an amino acid comprising a light chain variable region and a heavy chain variable region, the light chain variable region comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19, and the heavy chain variable region represented by SEQ ID NO: 20 An antibody comprising a sequence; and (5 ′) a light chain variable region and a heavy chain variable region, wherein the light chain variable region comprises the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 30, and the heavy chain variable region is a sequence An antibody comprising the amino acid sequence represented by No. 31.
  • the antibody (1 ') corresponds to the preferred embodiment of the antibody (1), and the antibody (3') corresponds to the preferred embodiment of the antibody (3).
  • the antibody (5 ') corresponds to a preferred embodiment of the antibody (5).
  • the present invention also provides a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding the antibody of the present invention.
  • the polynucleotide may be DNA or RNA, or may be a DNA / RNA chimera.
  • the polynucleotide may be double-stranded or single-stranded. In the case of a double strand, it may be a double-stranded DNA, a double-stranded RNA or a DNA: RNA hybrid.
  • the polynucleotide of the present invention includes a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding both the heavy chain variable region and the light chain variable region of the antibody of the present invention, and a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding the heavy chain variable region. And a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a light chain variable region is included.
  • the polynucleotide of the present invention can be easily produced by utilizing a known gene recombination technique based on the amino acid sequence information of the antibody of the present invention, known sequence information, or sequence information described in the sequence listing of the present specification. can do. For example, by designing an appropriate primer based on the sequence information, amplifying DNA encoding the component constituting the antibody of the present invention by PCR reaction, and ligating the DNA fragment using an appropriate enzyme such as ligase, The polynucleotide of the present invention can be produced. Alternatively, a polynucleotide encoding each component may be synthesized by a polynucleotide synthesizer based on the amino acid sequence information of the antibody of the present invention.
  • the obtained polynucleotide encoding the antibody of the present invention can be used as it is or after digestion with a restriction enzyme or adding a linker, if desired.
  • the polynucleotide may have ATG as a translation initiation codon on the 5 'end side, and may have TAA, TGA or TAG as a translation stop codon on the 3' end side. These translation initiation codon and translation termination codon can be added using an appropriate synthetic DNA adapter.
  • the polynucleotide of the present invention is preferably isolated or purified.
  • the purity of the isolated or purified polynucleotide of the present invention is usually 50% or more, preferably 70% or more, more preferably 90% or more, Most preferably, it is 95% or more (for example, substantially 100%).
  • the present invention provides a vector containing the polynucleotide of the present invention.
  • the vector of the present invention includes a vector comprising a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding both the heavy chain variable region and the light chain variable region of the antibody of the present invention, and a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding the heavy chain variable region And a vector comprising a polynucleotide comprising a nucleotide sequence encoding a light chain variable region.
  • the vector is preferably isolated or purified. Examples of the vector include an expression vector and a cloning vector, and can be selected according to the purpose. Preferably, the vector is an expression vector.
  • the expression vector can express the antibody of the present invention.
  • the expression vector can be produced by operably linking the polynucleotide of the present invention downstream of a promoter in an appropriate expression vector.
  • Examples of the vector include plasmid vectors and virus vectors, and can be appropriately selected depending on the host to be used.
  • hosts include Escherichia (Escherichia coli, etc.), Bacillus (Bacillus subtilis, etc.), yeast (Saccharomyces cerevisiae, night, etc.). Larvae-derived cell lines (Spodoptera frugiperda cells; Sf cells), insects (larvae of silkworms), mammalian cells (rat neurons, monkey cells (COS-7, etc.), Chinese hamster cells (CHO cells, etc.) Etc.) is used.
  • mammals include, for example, laboratory animals such as rodents and rabbits such as mice, rats, hamsters, and guinea pigs, domestic animals such as pigs, cows, goats, horses, sheep and minks, pets such as dogs and cats, humans, Examples include, but are not limited to, primates such as monkeys, cynomolgus monkeys, rhesus monkeys, marmosets, orangutans and chimpanzees.
  • plasmid vectors derived from E. coli (eg, pBR322, pBR325, pUC12, pUC13), plasmid vectors derived from Bacillus subtilis (eg, pUB110, pTP5, pC194), yeast-derived plasmid vectors (eg, pSH19, pSH15), etc. And can be appropriately selected depending on the type of host used and the purpose of use.
  • the type of virus vector can be appropriately selected according to the type of host used and the purpose of use. For example, when insect cells are used as the host, baculovirus vectors can be used. When mammalian cells are used as hosts, Moloney murine leukemia virus vectors, lentivirus vectors, Sindbis virus vectors and other retrovirus vectors, adenovirus vectors, herpes virus vectors, adeno-associated virus vectors, parvovirus vectors, Vaccinia virus vectors, Sendai virus vectors and the like can be used.
  • a promoter that can start transcription in the host can be selected according to the type of host to be used. For example, when the host is Escherichia, trp promoter, lac promoter, T7 promoter and the like are preferable. When the host is Bacillus, SPO1 promoter, SPO2 promoter, penP promoter and the like are preferable. When the host is yeast, PHO5 promoter, PGK promoter and the like are preferable. When the host is an insect cell, a polyhedrin promoter, a P10 promoter and the like are preferable. When the host is a mammalian cell, a subgenomic (26S) promoter, CMV promoter, SR ⁇ promoter and the like are preferable.
  • the vector of the present invention may contain a signal sequence for antibody secretion.
  • a signal sequence for antibody secretion the pelB signal sequence (Lei, SP et al. J. Bacteriol. (1987) 169, 4379) may be used in the case of production in the periplasm of E. coli.
  • the vector of the present invention may contain an enhancer, a splicing signal, a poly A addition signal, a selection marker, an SV40 replication origin (hereinafter sometimes abbreviated as SV40ori) and the like in a functional manner, if desired.
  • selectable markers include dihydrofolate reductase (hereinafter sometimes abbreviated as dhfr) gene [methotrexate (MTX) resistance], ampicillin resistance gene (sometimes abbreviated as Amp r ), neomycin resistance gene (Neo). G418 resistance) which may be abbreviated as r ).
  • the above-described vector of the present invention is prepared according to a gene transfer method known per se (for example, lipofection method, calcium phosphate method, microinjection method, proplast fusion method, electroporation method, DEAE dextran method, Gene Gun gene transfer method, etc.) By introducing it into a host, a transformant introduced with the vector (transformant of the present invention) can be produced. By using an expression vector as the introduced vector, the transformant can express the antibody of the present invention.
  • the transformant of the present invention is useful for producing the antibody of the present invention.
  • the antibody of the present invention can be produced by culturing the transformant of the present invention by a method known per se according to the type of host and isolating the antibody of the present invention from the culture.
  • the transformant whose host is Escherichia is cultured in an appropriate medium such as LB medium or M9 medium, usually at about 15 to 43 ° C. for about 3 to 24 hours.
  • the transformant whose host is Bacillus is cultured in an appropriate medium, usually at about 30 to 40 ° C. for about 6 to 24 hours.
  • Cultivation of the transformant whose host is yeast is usually carried out at about 20 ° C. to 35 ° C. for about 24 to 72 hours in a suitable medium such as a Burkholder medium.
  • Incubation of transformants whose hosts are insect cells or insects is usually performed at about 27 ° C. for about 3 to 5 days in a suitable medium such as Grace's Insect medium supplemented with about 10% bovine serum. .
  • a suitable medium such as Grace's Insect medium supplemented with about 10% bovine serum.
  • the transformant whose host is an animal cell is cultured in an appropriate medium such as a MEM medium supplemented with about 10% bovine serum, usually at about 30 ° C. to 40 ° C. for about 15 to 60 hours. In any culture, aeration and agitation may be performed as necessary.
  • Separation and purification of the antibody of the present invention from the culture may be carried out by any separation or purification method used in normal antibody purification, and is not limited in any way.
  • any separation or purification method used in normal antibody purification and is not limited in any way.
  • chromatography column, filter, ultrafiltration, salting out, solvent precipitation, solvent extraction, distillation, immunoprecipitation, SDS-polyacrylamide gel electrophoresis, isoelectric focusing, dialysis, recrystallization, etc. are appropriately selected.
  • antibodies can be separated and purified.
  • chromatography examples include affinity chromatography, ion exchange chromatography, hydrophobic chromatography, gel filtration, reverse phase chromatography, adsorption chromatography, and the like (Strates for Protein and Purification: Charactorization: A Laboratory Course Manual. Ed Dan. R. Marshak et al., Cold Spring Harbor or Laboratory Press, 1996). These chromatography can be performed using liquid phase chromatography, for example, liquid phase chromatography, such as HPLC and FPLC. Examples of columns used for affinity chromatography include a protein A column and a protein G column. For example, Hyper D, POROS, Sepharose FF (GE Amersham Biosciences) etc. are mentioned as a column using protein A. The present invention also encompasses antibodies highly purified using these purification methods.
  • the present invention also provides a pharmaceutical composition containing the antibody of the present invention as an active ingredient.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is useful as a preventive or therapeutic agent for cancer; a cancer growth inhibitor; a cancer metastasis inhibitor;
  • the type of cancer is not particularly limited as long as it can achieve the effect of preventing or treating cancer by the antibody of the present invention; the effect of inhibiting the growth of cancer; or the effect of inhibiting cancer metastasis, but it is not limited to liver cancer, colon cancer, kidney cancer, melanoma, Pancreatic cancer, thyroid cancer, gastric cancer, lung cancer (small cell lung cancer, non-small cell lung cancer), brain tumor, uterine cancer, breast cancer, multiple osteosarcoma, ovarian cancer, chronic leukemia, prostate cancer, acute lymphocytic leukemia, germ cell tumor, acute Examples include myeloid leukemia, malignant lymphoma, ciliary cancer, childhood malignant tumor, gallbladder / bile duct cancer and the like.
  • ADAM28 inhibits the formation of IGF-1 / IGFBP-3 complex by degrading IGFBP-3 and promotes the proliferation of cancer cells by IGF-1.
  • the antibody of the present invention inhibits the growth of cancer cells by IGF-1 by inhibiting the degradation of IGFBP-3 by ADAM28. Therefore, in one embodiment, the cancer to which the antibody of the present invention is applied is an IGF-1-sensitive cancer (that is, a cancer that exhibits IGF-1-dependent growth promotion). Whether or not the cancer is IGF-1 sensitive can be evaluated by analyzing the expression of the IGF-1 receptor in the cancer by Western blotting, RT-PCR or the like.
  • ADAM28 inhibits cancer cell apoptosis induction by vWF by degrading von Willebrand factor (vWF).
  • the antibody of the present invention inhibits the degradation of vWF by ADAM28, thereby promoting the induction of apoptosis of cancer cells by vWF and consequently suppressing the growth and metastasis of cancer. Therefore, in one embodiment, the cancer to which the present invention is applied is a vWF-sensitive cancer (that is, a cancer in which apoptosis is induced by vWF).
  • Whether cancer is vWF-sensitive can be determined by culturing cancer cells on a vWF-coated plate and analyzing DNA fragmentation by the method described in J Natl Cancer Inst 2012; 104: 906-922, for example. It can be evaluated by doing.
  • “Containing the antibody of the present invention as an active ingredient” means containing the antibody of the present invention as at least one of the active ingredients, and does not limit the content rate. Moreover, the pharmaceutical composition of the present invention may contain other active ingredients in combination with the antibody of the present invention.
  • the antibody of the present invention can be formulated in accordance with a conventional method (for example, Remington's Pharmaceutical Science, latest edition, Mark Publishing Company, Easton, USA).
  • a pharmaceutically acceptable carrier and / or additive may be included as necessary.
  • surfactants PEG, Tween, etc.
  • excipients antioxidants (ascorbic acid, etc.)
  • coloring agents flavoring agents, preservatives, stabilizers, buffering agents (phosphoric acid, citric acid, other organic acids) Etc.), chelating agents (EDTA, etc.), suspending agents, tonicity agents, binders, disintegrating agents, lubricants, fluidity promoters, flavoring agents and the like.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is not limited to these and may contain other conventional carriers as appropriate. Specifically, light anhydrous silicic acid, lactose, crystalline cellulose, mannitol, starch, carmellose calcium, carmellose sodium, hydroxypropylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, polyvinylacetal diethylaminoacetate, polyvinylpyrrolidone, gelatin, medium chain fatty acid triglyceride, Examples thereof include polyoxyethylene hydrogenated castor oil 60, sucrose, carboxymethylcellulose, corn starch, and inorganic salts. It may also contain other low molecular weight polypeptides, proteins such as serum albumin, gelatin and immunoglobulins, and amino acids.
  • the antibody of the present invention is dissolved in an isotonic solution containing, for example, physiological saline, glucose or other adjuvants.
  • the adjuvant include D-sorbitol, D-mannose, D-mannitol, sodium chloride, and further suitable solubilizers such as alcohol (ethanol etc.), polyalcohol (propylene glycol, PEG etc.), A nonionic surfactant (polysorbate 80, HCO-50) or the like may be used in combination.
  • polypeptides can be encapsulated in microcapsules (microcapsules such as hydroxymethylcellulose, gelatin, poly [methylmethacrylic acid]) or colloid drug delivery systems (liposomes, albumin microspheres, microemulsions, nanoparticles and nanoparticles). Capsules etc.) (see Remington's Pharmaceutical Science 16th edition &, Oslo Ed. (1980), etc.).
  • a method of making a drug a sustained-release drug is also known and can be applied to a polypeptide (Langer et al., J. Biomed. Mater. Res. (1981) 15: 167-277; Langer, Chem. Tech. (1982) 12: 98-105; U.S.
  • the content of the antibody of the present invention in the pharmaceutical composition is, for example, about 0.01 to 100% by weight, preferably 0.1 to 99.9% of the whole pharmaceutical composition.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be administered either orally or parenterally, but is preferably administered parenterally. Specifically, it is administered to a patient by injection and transdermal administration.
  • the injection form it can be administered systemically or locally by, for example, intravenous injection, intramuscular injection or subcutaneous injection. Local injections, particularly intramuscular injections, may be made at or around the treatment site.
  • transdermal dosage forms include ointments, gels, creams, poultices, patches, and the like, which can be administered systemically or locally.
  • the administration method can be appropriately selected depending on the age and symptoms of the patient.
  • the dose can be selected in the range of 0.5 mg to 10 mg of the antibody of the present invention per kg body weight per time, for example.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is not limited to these doses.
  • the rhADAM28 immobilized beads were added to the phage library to bind the antigen-specific antibody. After collecting the magnetic beads and washing several times, the phage was eluted from the magnetic beads. The eluted phages were infected with E. coli and cultured overnight at 37 ° C. In addition, the phage rescue operation from phage-infected Escherichia coli followed a general method (Molecular cloning third. Ed. Cold Spring Harbor Lab. Press, 2001). The selection round described above was repeated a plurality of times, and the operation of concentrating phages displaying antigen-specific antibodies was performed.
  • IgG expression vector (heavy chain constant region is IgG1) was constructed by subcloning the obtained two clone Fab antibody genes. These expression vectors were transfected into HEK293T cells according to the standard method of Lipofectamine (manufactured by Invitrogen), and the culture supernatant after 72 hours of culture was collected. As the medium, DMEM (Sigma) supplemented with Ultra Low IgG FBS (manufactured by Invitrogen) at 10% was used.
  • an IgG antibody was purified by a standard method using rProtein A Sepharose Fast Flow (manufactured by GE healthcare). The purified protein was confirmed to be a single band by SDS-PAGE, and the concentration was determined using BCA Protein Assay Kit (PIERCE).
  • Example 2 Anti-human ADAM28 antibody human ADAM28 enzyme activity inhibitory effect rhADAM28 and anti-ADAM28 antibody were incubated for 2 hours at the weight ratio shown in the figure, then IGFBP-3 (100 ng) was added and incubated at 37 ° C for 24 hours, and 5 mM EDTA The reaction was terminated with SDS-sample buffer containing. Thereafter, the reaction product was subjected to SDS-PAGE (10% acrylamide gel), and the degree of IGFBP-3 degradation was detected by immunoblotting using an anti-IGFBP-3 antibody (Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, Calif.). (FIG. 1). Both antibodies 211-14 and 211-12 inhibited the degradation of IGFBP-3 by human ADAM28.
  • Example 3 Proliferation inhibitory effect of anti-human ADAM28 antibody on breast cancer cell line 5-GF-2-deoxy-uridine (BrdUrd) Labeling and Detection Kit according to the manufacturer's instructions on the mitogenic effect of IGF-I on MDA-MB231 cells Measurements were made using III (Roche Molecular Biochemicals, Basel, Switzerland). After synchronization and growth arrest, cells were treated with 1 ⁇ g / ml IGF-1 in DMEM containing 1% FBS. After 6 hours, BrdUrd (10 ⁇ mol / L) was added to the medium, and the cells were further cultured for 42 hours.
  • Anti-human ADAM28 antibody suppresses cancer cell proliferation in vivo ADAM28 high-expressing breast cancer cell line MDA-MB231 ffLuc-cp156 that constitutively expresses luciferase using a lentiviral vector was prepared, and NOD / SCID mice (Six-week-old male , Charles River Laboratories International Inc, Washington, MA). After transplantation, anti-ADAM28 antibody (2 mg / kg / mice) was locally injected 5 times at 2-day intervals, and the effect of suppressing tumor growth was examined.
  • Example 5 Inhibitory effect of anti-human ADAM28 antibody on metastasis of cancer cells in vivo PC-9 ffLuc-cp156 cells in the tail vein of male NOD / SCID mice (6 weeks old) (Charles River Laboratories International, Inc., Wilmington, Mass. ) 1 ⁇ 10 6 ) were injected in 300 ⁇ l of PBS. Lung metastases were monitored by bioluminescence imaging using an In Vivo Imaging System (IVIS) -100 camera system (Xenogen Co., Alameda, Calif.) For detection of luciferase activity according to the manufacturer's instructions.
  • IVIS In Vivo Imaging System
  • mice were anesthetized with isoflurane and D-luciferin (150 mg / kg; Promega Co., Madison, Wis.) was injected intraperitoneally and 1 minute later, photons from the whole animal were counted.
  • D-luciferin 150 mg / kg; Promega Co., Madison, Wis.
  • Example 6 In Example 4, RT-PCR was performed from RNA extracted from each mouse organ 6 weeks after transplantation of cancer cells using luciferase-specific primers to confirm the presence or absence of tumor-derived gene expression. The presence or absence of natural metastasis was examined (FIG. 5). Both antibodies 211-14 and 211-12 suppressed micrometastasis of cancer cells.
  • Example 7 From the cDNA of the hybridoma producing the mouse anti-human ADAM28 monoclonal antibody 297-2F3 obtained in Example 1 (7) above, the variable region of the antibody was PCR amplified, sub-cloned into a cloning vector, and the base of the region The sequence was analyzed. Table 2 shows the amino acid sequence of CDR (complementarity determining region). The full-length amino acid sequences of the light chain and heavy chain variable regions are shown in SEQ ID NOs: 146 and 147, respectively.
  • each CDR of the mouse anti-human ADAM28 monoclonal antibody 297-2F3 was grafted to a human antibody frame for humanization.
  • the resulting full-length amino acid sequences of the light chain and heavy chain variable regions of humanized 297-2F3 are shown in SEQ ID NOs: 30 and 31, respectively.
  • Example 9 Epitope identification (1) Epitope mapping was performed for anti-human ADAM28 antibodies 211-12 and 297-2F3 using a peptide array in which a partial peptide of human ADAM28s was immobilized. Specifically, as shown in the table below, a peptide comprising a peptide group having 12 amino acid residues and 3 amino acid residues offset with respect to a sequence covering from the protease domain of human ADAM28s to the C-terminus. An array was made. HRP-labeled anti-human ADAM28s antibody was reacted with the peptide array.
  • 211-12 specifically bound to the peptides # 25 and # 26. From this result, it was suggested that the epitope of 211-12 includes the amino acid sequence (ENFSKWRGS) represented by SEQ ID NO: 21 common to peptides # 25 and # 26.
  • ENFSKWRGS amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 21 common to peptides # 25 and # 26.
  • 297-2F3 specifically bound to the peptides # 65 and # 66.
  • the epitope of 297-2F3 contains the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 23 (LFNAPLPT) was included.
  • 297-2F3 specifically recognizes SEQ ID NO: 23 as an epitope by dot blot using Escherichia coli lysate forcibly expressing a fusion protein in which the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 23 is added to the C-terminus of MBP It was confirmed.
  • Epitope identification (2) A fusion protein in which a partial sequence of the following region of human ADAM28s (SEQ ID NO: 4) was added to the C-terminus of MBP was prepared. 399-540, 399-497, 491-540, 491-510, 501-220, 511-530, 521-540, 513-522, 515-524, 517-526, 519-528 As a control, a fusion protein was prepared by adding a partial sequence of the following region of human ADAM28m (SEQ ID NO: 2) to the C-terminus of MBP. 517-526 (human ADAM28m, as control)
  • the reactivity of the anti-human ADAM28 antibody 211-14 to the fusion protein was evaluated by Western blotting. As a result, 211-14 strongly bound to a fusion protein containing partial sequences of the regions 399-540, 491-540, 511-530, and 517-526 of human ADAM28s. From this result, it was suggested that the epitope of 211-14 includes the region 517-526 of human ADAM28s (TELWGPGRRT, SEQ ID NO: 22).
  • an anti-human ADAM28 antibody applicable to cancer prevention or treatment is provided.

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Abstract

　本発明は、ヒトADAM28に特異的に結合し、ヒトADAM28の酵素活性を阻害し、ヒトADAM28を発現する癌細胞の転移を抑制する活性を有する抗体を提供する。本発明の抗体はヒト抗体であり得る。

Description

癌治療のための抗ADAM28抗体
　本発明は、抗ヒトADAM28抗体、及びその医薬用途に関する。
　ADAMタンパク質（ADAMs：a disintegrin and metalloproteinases)は、膜貫通タンパク質の外部ドメインシェディング、細胞接着及び浸潤に関わる多機能タンパク質である（非特許文献１、２）。ヒトゲノムには、４個の偽遺伝子を含む２５個のADAMsが含まれており、２１種のADAMsは、タンパク質分解活性を示す１３種のタンパク質分解性ADAMsと８種の非タンパク質分解性ADAMsからなる（非特許文献１、３）。タンパク質分解性ADAMsは、マトリックスメタロプロテイナーゼ（MMPs）のメタロプロテイナーゼドメインを共有し、典型的なタンパク質分解性ADAMsは、プロペプチド、メタロプロテイナーゼ、ディスインテグリン様、システインリッチ、上皮増殖因子様、膜貫通及び細胞内ドメインを含み（非特許文献３～９）、ADAM8、ADAM9、ADAM12、ADAM15、ADAM17、ADAM19及びADAM28を含む多くのタンパク質分解性ADAMsは、ヒト癌において過剰発現しており、癌の増殖及び進行と関係している（非特許文献５、９）。本発明者らの以前の研究は、プロトタイプ膜アンカー型（ADAM28m）及び短い分泌型（ADAM28s）を含む（非特許文献５、１０、１１）２つのオルタナティブアイソフォームを有するADAM28（ADAMメタロペプチダーゼドメイン28としても知られる）が、ヒト非小細胞肺癌及び乳癌において、大量に発現されていることを示した（非特許文献１２、１３）。更に、In situハイブリダイゼーション及び免疫組織化学染色により、本発明者らは、ADAM28が、癌組織中に含まれる癌細胞において優位に発現していること、及びADAM28のmRNA発現レベルが、乳癌の細胞増殖に関連していること（非特許文献１３）、及び非小細胞肺癌において、癌細胞増殖と浸潤の両方に関連していることを示した（非特許文献１２）。並行した研究において、本発明者らは、血清ADAM27レベルが、非小細胞肺癌患者において、腫瘍の進行度、リンパ節転移、及び癌再発とともに上昇することを示した（非特許文献１４）。これらのデータは、ADAM28が、特にヒト癌において細胞の増殖及び転移に関与することを示している。本発明者らは、ADAM28が、IGF-I/IGFBP-3複合体のIGF結合タンパク質-3（IGFBP-3）の選択的分解により、インスリン様成長因子－I（IGF-1）のバイオアベイラビリティを上昇させることを通じて癌細胞増殖へ寄与すること（非特許文献１３）、乳癌において、結合組織成長因子の分解により血管形成へ寄与すること（非特許文献１５）を証明している。
　ファージディスプレイ法は、機能を持ったペプチドやタンパク質とそれをコードするDNAとがファージ粒子という形で一対一に対応付けられることで試験管内高速選択を実現したディスプレイ技術の１つである。このファージディスプレイ法は抗体選択に応用され、この手法で取得された抗体の医薬品開発も数多く行われている（非特許文献１６）。更に、ヒト人工抗体ライブラリーとファージディスプレイ法を組み合わせて特異的な抗体を得る手法も確立しており、これらの手法はＭｏｒｐｈｏＳｙｓ社のＨｕＣＡＬ（Ｈｕｍａｎ　Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｙ　Ｌｉｂｒａｒｙ）を始めとして複数社により実用化が進められてきている。
Mol Aspects Med. 2008; 29 (5): 258-289 Semin Cell Dev Biol. 2009; 20 (2): 138-145 Pathol Int. 2010; 60 (7): 477-496 Genes Dev. 2003; 17 (1): 7-30 Cancer Sci. 2007 ; 98 (5): 621-628 Nat Rev Mol Cell Biol. 2005; 6 (1): 32-43 Kelley’s Textbook of Rheumatology. 8th ed. Philadelphia, PA: Elsevier Saunders; 2009: 115-134 Curr Opin Cell Biol. 2003; 15 (5): 598-606 Nat Rev Cancer. 2008; 8 (12): 929-941 J Biol Chem. 1999; 274 (41): 29251-29259 Curr Pharm Des. 2009; 15 (20): 2349-2358 Int J Cancer. 2006; 118 (2): 263-273 Cancer Res. 2006; 66 (20): 9913-9920 Int J Cancer. 2010; 127 (8): 1844-1856 Biochem Biophys Res Commun. 2010; 402 (4): 651-657 Rothe, C. et al. J. Mol. Biol. 2008; 376:1182-1200
　本発明の目的は、癌の予防又は治療、或いは癌転移阻害に有用な抗ヒトADAM28抗体を提供することである。
　本発明者らは、上記課題を解決するため、ヒトADAM28に結合する抗ADAM28抗体を複数作製した。その結果、作製した抗ヒトADAM28抗体がADAM28の酵素活性を阻害し、インビボモデルにおいて、優れた癌細胞の増殖抑制効果及び癌転移阻害効果を示すことを見出した。以上の知見に基づき、更に検討を加え、本発明を完成した。
　即ち、本発明は以下に関する。
［１］ヒトADAM28に特異的に結合し、且つヒトADAM28の酵素活性を阻害する活性を有する、抗体。
［２］配列番号２１、２２又は２３で表されるアミノ酸配列を含むエピトープにおいて、ヒトADAM28に結合する、［１］に記載の抗体。
［３］軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、
（１）該軽鎖可変領域が、配列番号５で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号６で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号７で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含み、且つ
　該重鎖可変領域が、配列番号８で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号９で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号１０で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む；
（２）該軽鎖可変領域が、配列番号５で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号６で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号７で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含み、且つ
　該重鎖可変領域が、配列番号８で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号９で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号１０で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む
（但し、配列番号５、６及び７で表されるアミノ酸配列からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列において、１～３個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加しており、且つ／或いは、
　配列番号８、９及び１０で表されるアミノ酸配列からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列において、１～３個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加している）；
（３）該軽鎖可変領域が、配列番号１１で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１２で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号１３で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含み、且つ
　該重鎖可変領域が、配列番号１４で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１５で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号１６で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む；
（４）該軽鎖可変領域が、配列番号１１で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１２で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号１３で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含み、且つ
　該重鎖可変領域が、配列番号１４で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１５で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号１６で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む
（但し、配列番号１１、１２及び１３で表されるアミノ酸配列からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列において、１～３個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加しており、且つ／或いは、
　配列番号１４、１５及び１６で表されるアミノ酸配列からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列において、１～３個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加している）；
（５）該軽鎖可変領域が、配列番号２４で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２５で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号２６で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含み、且つ
　該重鎖可変領域が、配列番号２７で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２８で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号２９で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む；又は
（６）該軽鎖可変領域が、配列番号２４で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２５で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号２６で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含み、且つ
　該重鎖可変領域が、配列番号２７で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２８で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号２９で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む
（但し、配列番号２４、２５及び２６で表されるアミノ酸配列からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列において、１～３個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加しており、且つ／或いは、
　配列番号２７、２８及び２９で表されるアミノ酸配列からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列において、１～３個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加している）；
ことを特徴とする［１］に記載の抗体。
［４］（１’）該軽鎖可変領域が配列番号１７で表されるアミノ酸配列を含み、且つ、該重鎖可変領域が配列番号１８で表されるアミノ酸配列を含む；
（３’）該軽鎖可変領域が配列番号１９で表されるアミノ酸配列を含み、且つ、該重鎖可変領域が配列番号２０で表されるアミノ酸配列を含む、又は
（５’）該軽鎖可変領域が配列番号３０で表されるアミノ酸配列を含み、且つ、該重鎖可変領域が配列番号３１で表されるアミノ酸配列を含む、［３］に記載の抗体。
［５］［１］～［４］のいずれかに記載の抗体を含む医薬組成物。
［６］［１］～［４］のいずれかに記載の抗体を含む、癌の予防又は治療剤。
［７］［１］～［４］のいずれかに記載の抗体を含む、癌転移阻害剤。
［８］哺乳動物へ有効量の［１］～［４］のいずれかに記載の抗体を投与することを含む、該哺乳動物における癌の予防又は治療方法。
［９］哺乳動物がヒトである、［８］記載の方法。
［１０］哺乳動物へ有効量の［１］～［４］のいずれかに記載の抗体を投与することを含む、該哺乳動物における癌転移阻害方法。
［１１］哺乳動物がヒトである、［１０］記載の方法。
［１２］癌の予防又は治療において使用するための、［１］～［４］のいずれかに記載の抗体。
［１３］癌転移阻害において使用するための、［１］～［４］のいずれかに記載の抗体。
［１４］癌の予防又は治療剤の製造のための、［１］～［４］のいずれかに記載の抗体の使用。
［１５］癌転移阻害剤の製造のための、［１］～［４］のいずれかに記載の抗体の使用。
［１６］［１］～［４］のいずれかに記載の抗体をコードするポリヌクレオチド。
［１７］［１６］に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
［１８］［１７］に記載のベクターを含む形質転換体。
　本発明によれば、癌の予防又は治療、或いは癌転移阻害に有用な抗ヒトADAM28抗体が提供される。
抗ヒトADAM28抗体の酵素活性阻害効果。 抗ヒトADAM28抗体のインビトロにおける癌細胞増殖阻害効果。 抗ヒトADAM28抗体のインビボにおける癌細胞増殖阻害効果。 抗ヒトADAM28抗体のインビボにおける癌細胞転移阻害効果。 抗ヒトADAM28抗体のインビボにおける癌細胞転移阻害効果。
　本発明は、ヒトADAM28に対する特異的結合活性を有し、且つヒトADAM28の酵素活性を阻害する活性を有する抗体を提供する。
　ADAM28は公知のタンパク質であり、そのアミノ酸配列やｃＤＮＡ配列も公知である。ADAM28には、プロトタイプ膜アンカー型（ADAM28m）と、ショート分泌型（ADAM28s）の２種類が存在し、いずれも本発明におけるADAM28に包含される。ヒトADAM28mの代表的なアミノ酸配列を配列番号２に、ヒトADAM28mの代表的なｃＤＮＡ配列を配列番号１に、ヒトADAM28sの代表的なアミノ酸配列を配列番号４に、ヒトADAM28sの代表的なｃＤＮＡ配列を配列番号３に、それぞれ示す。
　本発明の抗体は、ヒトADAM28に対する特異的結合活性を有する。
　「ヒトADAM28」とは、ADAM28のアミノ酸配列又はヌクレオチド配列が、ヒトにおいて天然に発現しているADAM28のアミノ酸配列又はヌクレオチド配列と同一又は実質的に同一のアミノ酸配列又はヌクレオチド配列を有することを意味する。「実質的に同一」とは、着目したアミノ酸配列又はヌクレオチド配列が、ヒトにおいて天然に発現しているADAM28のアミノ酸配列又はヌクレオチド配列と７０％以上（好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、更に好ましくは９５％以上、最も好ましくは９９％以上）の同一性を有しており、且つヒトADAM28の機能を有することを意味する。ヒト以外の生物種や、ADAM28以外のタンパク質、遺伝子、それらの断片についても同様に解釈する。
　抗体による抗原Ｘへの「特異的結合」とは、抗原抗体反応における、抗体の抗原Ｘに対する結合親和性が、非特異的な抗原（例、牛血清アルブミン（ＢＳＡ））に対する結合親和性よりも高いことを意味する。
　本発明の抗体は、ヒトADAM28の酵素活性を阻害する活性を有する。ヒトADAM28の酵素活性とは、具体的にはヒトADAM28がヒトIGFBP-3（Insulin-like Growth Factor Binding Protein-3）を切断する活性を意味する。ヒトADAM28がヒトIGFBP-3を切断する活性は、例えばCancer Res 2006; 66(20):9913-9920に記載されたザイモグラフィー解析により評価することができる。
　本明細書において、「抗体」は、全長抗体及びそのいかなる抗原結合断片（すなわち、「抗原結合部分」）又はその一重鎖を含むものとして使用する。「抗体」は、ジスルフィド結合で連結された少なくとも２個の重鎖（Ｈ）と２個の軽鎖（Ｌ）を含む糖タンパク質またはその抗原結合部分を称する。各重鎖は、重鎖可変領域（本文においてＶＨと略す。）と重鎖定常領域とから構成されている。重鎖定常領域は、３個のドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３から構成されている。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本文においてＶＬと略す。）と軽鎖定常領域から構成されている。軽鎖定常領域は、１個のドメインＣＬで構成されている。ＶＨおよびＶＬ領域は、更に、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される変異性の高い領域に小分割され、それらには、フレームワーク領域（ＦＲ）と称され、より保存性の高い領域が散在している。各ＶＨおよびＶＬは、３個のＣＤＲと４個のＦＲで構成され、下記の順序、すなわち、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４でアミノ末端からカルボキシ末端へ配置されている。当該重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含んでいる。抗体の定常領域は、イムノグロブリンの宿主組織または因子への結合を媒介でき、それらには、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および旧来の補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）が含まれる。
　本明細書において、抗体の「抗原結合部分」とは、特異的に抗原（例えば、ヒトADAM28）に結合する能力を保持する抗体の１個以上の断片を称するものとして使用する。抗体の抗原結合機能は全長抗体の断片によって行われることが明らかとなっている。抗体の「抗原結合部分」という用語に含まれる結合断片の例として、（i）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインから構成される１価の断片であるＦａｂ断片、（ii）ヒンジ領域中ジスルフィド架橋で結合した２個のＦａｂ断片を含む２価の断片であるＦ（ａｂ’）２断片、（iii）ヒンジ領域の部分を持つ本来的ＦａｂであるＦａｂ’断片（ＦＵＮＤＡＭＥＮＴＡＬ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ（Ｐａｕｌ ｅｄ．，３．ｓｕｐ．ｒｄ ｅｄ．１９９３参照）、（iv）ＶＨおよびＣＨ１ドメインから構成されるＦｄ断片、（v）抗体のシングルアームのＶＬおよびＶＨドメインで構成されるＦｖ断片、（vi）ＶＨドメインから構成されるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら、（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６）、（vii）単離相補性決定領域（ＣＤＲ）および（viii）単一可変ドメインと二つの定常領域を含む重鎖可変領域であるナノボディを含む。更に、Ｆｖ断片の２個のドメインであるＶＬおよびＶＨは別々の遺伝子によりコードされているが、それらは、組換え技術を用いてそれらを単一タンパク質鎖として作製できる合成リンカーにより連結でき、この鎖中では、ＶＬおよびＶＨ領域が対となって１価の分子を形成する（単一鎖のＦｖ（ｓｃＦｖ）として知られている；例えば、Ｂｉｒｄら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６；およびＨｕｓｔｏｎら、（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３参照）。このような単一鎖の抗体も、抗体の「抗原結合部分」に包含される。これらの抗体断片は、当業者に公知の従来の技術を用いて得られ、当該断片について、未改変抗体の場合と同様に有用性を求めてスクリーニングされる。
　本発明の抗体は、好ましくはモノクローナル抗体である。「モノクローナル抗体」とは、単一分子組成物の抗体分子の調製物をいう。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対して単一結合特異性と親和性を示す。
　本発明の抗体は、好ましくはヒト抗体又はヒト化抗体である。「ヒト抗体」とは、フレームワークとＣＤＲ領域の両方ともにヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する抗体をいう。更に、抗体が定常領域を含む場合には、この定常領域もヒト生殖細胞系列イムノグロブリン配列に由来する。本明細書において、「ヒト抗体」は、ヒト生殖細胞系列イムノグロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロにおけるランダムまたは部位特異的変異誘発またはインビボにおける体細胞変異により導入される変異）を含む態様をも包含する。また、本明細書において、「ヒト化抗体」とは、マウスのようなヒト以外の動物種の生殖細胞系列に由来するＣＤＲ配列をヒトフレームワーク配列上に融合させた抗体をいう。
　本明細書において、ヒト抗体には「再構成ヒト抗体」が包含される。再構成ヒト抗体とは、第１のヒトドナー抗体に含まれる少なくとも１つのＣＤＲが、第２のヒトアクセプター抗体において、第２のヒトアクセプター抗体のＣＤＲの代わりに用いられる改変型抗体をいう。好ましくは、６つのＣＤＲ全てが置換される。より好ましくは、第１のヒトドナー抗体の抗原結合領域（例えば、Ｆｖ、ＦａｂまたはＦ（ａｂ'）２）全体が第２のヒトアクセプター抗体における対応領域の代わりに用いられる。より好ましくは、第１のヒトドナー抗体のＦａｂ領域が第２のヒトアクセプター抗体の適切な定常領域と機能可能なように連結して全長抗体を形成する。
　再構成ヒト抗体は、例えば、ＥＰ１２５０２３、ＷＯ９６／０２５７６、上記文献16等に開示された、一般的な遺伝子組換え手法を用いて製造することができる。具体的には、例えばドナーヒト抗体中の目的のＣＤＲとアクセプターヒト抗体中の目的のフレームワーク領域（ＦＲ）とを連結するように設計したＤＮＡ配列を、ＣＤＲおよびＦＲ両方の末端領域にオーバーラップする部分を有するように作製した数個のオリゴヌクレオチドをプライマーとして用いてＰＣＲ法により合成する（ＷＯ９８／１３３８８に記載の方法を参照）。得られたＤＮＡをヒト抗体定常領域もしくはヒト抗体定常領域改変体をコードするＤＮＡと連結し、次いで発現ベクターに組み込んで、これを宿主に導入し産生させることにより再構成ヒト抗体を得ることができる（ＥＰ１２５０２３、ＷＯ９６／０２５７６参照）。
　また本明細書において、ヒト抗体には「人工ヒト抗体」が包含される。人工ヒト抗体は、例えば、上記文献１６等に開示された、一般的な遺伝子組換え手法を用いて製造することができる。
　本発明の抗体には、上述の抗体と他のペプチド又はタンパク質とが融合した融合タンパク質も含まれる。融合タンパク質を作製する方法は、本発明の抗体をコードするポリヌクレオチドと他のペプチド又はポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをフレームが一致するように連結してこれを発現ベクターに導入し、宿主で発現させればよく、当業者に公知の手法を用いることができる。本発明の抗体との融合に付される他のペプチドとしては、例えば、ＦＬＡＧ（Ｈｏｐｐ, Ｔ. Ｐ. ｅｔ ａｌ.， ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ （１９８８） ６, １２０４－１２１０）、６個のＨｉｓ（ヒスチジン）残基からなる６×Ｈｉｓ、１０×Ｈｉｓ、ヒトｃ－ｍｙｃの断片、ＶＳＶ－ＧＰの断片、ｐ１８ＨＩＶの断片、Ｔ７－ｔａｇ、ＨＳＶ－ｔａｇ、Ｅ－ｔａｇ、ＳＶ４０Ｔ抗原の断片、ｌｃｋ ｔａｇ、α－ｔｕｂｕｌｉｎの断片、Ｂ－ｔａｇ、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃの断片等の公知のペプチドを使用することができる。また、本発明の抗体との融合に付される他のポリペプチドとしては、例えば、ＧＳＴ（グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ）、ＨＡ（インフルエンザ凝集素）、イムノグロブリン定常領域、β－ガラクトシダーゼ、ＭＢＰ（マルトース結合タンパク質）等が挙げられる。市販されているこれらペプチドまたはポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを、本発明の抗体をコードするポリヌクレオチドと融合させ、これにより調製された融合ポリヌクレオチドを発現させることにより、融合ポリペプチドを調製することができる。
　また本発明の抗体は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）やヒアルロン酸などの高分子物質、放射性物質、蛍光物質、発光物質、酵素、トキシン等の各種分子と結合したコンジュゲート抗体でもよい。このようなコンジュゲート抗体は、得られた抗体に化学的な修飾を施すことによって得ることができる。尚、抗体の修飾方法はこの分野においてすでに確立されている（例えば、ＵＳ５０５７３１３、ＵＳ５１５６８４０）。
　本発明の抗体は単離又は精製されていることが好ましい。「単離又は精製」とは、天然に存在する状態から、目的とする成分以外の成分を除去する操作が施されていることを意味する。単離又は精製された本発明の抗体の純度（全タンパク質重量に対する、本発明の抗体の重量の割合）は、通常５０％以上、好ましくは７０％以上、より好ましくは９０％以上、最も好ましくは９５％以上（例えば実質的に１００％）である。
　好ましい態様において、本発明の抗体は、配列番号２１、２２又は２３で表されるアミノ酸配列を含むエピトープにおいて、ヒトADAM28と結合する。
　配列番号２１で表されるアミノ酸配列（ENFSKWRGS: hADAM28s 274-282）を含むエピトープとしては、配列番号４で表されるアミノ酸配列の連続する部分配列であって、配列番号２１で表されるアミノ酸配列を含み、好ましくは２０アミノ酸長以下、より好ましくは１２アミノ酸長以下の部分配列からなるエピトープを挙げることができる。配列番号２１で表されるアミノ酸配列を含むエピトープとしては、具体的には、配列番号２１で表されるアミノ酸配列からなるエピトープ、配列番号３２で表されるアミノ酸配列（FTLENFSKWRGS）からなるエピトープ、及び配列番号３３で表されるアミノ酸配列（ENFSKWRGSVLS）からなるエピトープを挙げることができる。
　配列番号２２で表されるアミノ酸配列（TELWGPGRRT: hADAM28s 517-526）を含むエピトープとしては、配列番号４で表されるアミノ酸配列の連続する部分配列であって、配列番号２２で表されるアミノ酸配列を含み、好ましくは２０アミノ酸長以下、より好ましくは１２アミノ酸長以下の部分配列からなるエピトープを挙げることができる。配列番号２２で表されるアミノ酸配列を含むエピトープとしては、具体的には、配列番号２２で表されるアミノ酸配列からなるエピトープを挙げることができる。
　配列番号２３で表されるアミノ酸配列（LFNAPLPT: hADAM28s 395-402）を含むエピトープとしては、配列番号４で表されるアミノ酸配列の連続する部分配列であって、配列番号２３で表されるアミノ酸配列を含み、好ましくは２０アミノ酸長以下、より好ましくは１２アミノ酸長以下の部分配列からなるエピトープを挙げることができる。配列番号２３で表されるアミノ酸配列を含むエピトープとしては、具体的には、配列番号２３で表されるアミノ酸配列からなるエピトープ、配列番号３４で表されるアミノ酸配列（LSNCLFNAPLPT）からなるエピトープ、及び配列番号３５で表されるアミノ酸配列（CLFNAPLPTDII）からなるエピトープを挙げることができる。
　本発明の抗体の好ましい態様としては、以下の（１）～（４）に記載の抗体を挙げることができる：
（１）軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、
　該軽鎖可変領域が、配列番号５で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号６で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号７で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含み、且つ
　該重鎖可変領域が、配列番号８で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号９で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号１０で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、抗体；
（２）軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、
　該軽鎖可変領域が、配列番号５で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号６で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号７で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含み、且つ
　該重鎖可変領域が、配列番号８で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号９で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号１０で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、抗体
（但し、配列番号５、６及び７で表されるアミノ酸配列からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列において、１～３個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加しており、且つ／或いは、
　配列番号８、９及び１０で表されるアミノ酸配列からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列において、１～３個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加している）。
（３）軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、
　該軽鎖可変領域が、配列番号１１で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１２で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号１３で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含み、且つ
　該重鎖可変領域が、配列番号１４で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１５で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号１６で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、抗体；
（４）軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、
　該軽鎖可変領域が、配列番号１１で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１２で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号１３で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含み、且つ
　該重鎖可変領域が、配列番号１４で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１５で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号１６で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、抗体
（但し、配列番号１１、１２及び１３で表されるアミノ酸配列からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列において、１～３個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加しており、且つ／或いは、
　配列番号１４、１５及び１６で表されるアミノ酸配列からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列において、１～３個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加している）；
（５）軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、
　該軽鎖可変領域が、配列番号２４で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２５で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号２６で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含み、且つ
　該重鎖可変領域が、配列番号２７で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２８で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号２９で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、抗体；及び
（６）軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、
　該軽鎖可変領域が、配列番号２４で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２５で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号２６で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含み、且つ
　該重鎖可変領域が、配列番号２７で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２８で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号２９で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、抗体
（但し、配列番号２４、２５及び２６で表されるアミノ酸配列からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列において、１～３個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加しており、且つ／或いは、
　配列番号２７、２８及び２９で表されるアミノ酸配列からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列において、１～３個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加している）。
　（２）、（４）及び（６）の態様においては、置換、欠失、挿入、及び／又は付加されるアミノ酸の数は、抗体がヒトADAM28に対する特異的結合活性を有し、且つヒトADAM28の酵素活性を阻害する活性を有する限り特に限定されないが、１つのＣＤＲ配列につき、好ましくは２アミノ酸以内、より好ましくは１アミノ酸である。また、アミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加するＣＤＲ配列の数は、抗体がヒトADAM28に対する特異的結合活性を有し、且つヒトADAM28の酵素活性を阻害する活性を有する限り特に限定されないが、１つの軽鎖可変領域につき、好ましくは２つ以内、より好ましくは１つであり、１つの重鎖可変領域につき、好ましくは２つ以内、より好ましくは１つである。アミノ酸の置換、欠失、挿入、及び／又は付加は、軽鎖可変領域と重鎖可変領域の両方において行われてもよいし、いずれか一方のみにおいて行われてもよい。
　（２）、（４）及び（６）の態様においては、好ましくは、軽鎖可変領域のＣＤＲ３のアミノ酸配列においてのみ、１～３個（好ましくは１又は２個、より好ましくは１個）のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加している。
　１又は複数のアミノ酸残基を目的の他のアミノ酸に置換する方法としては、例えば、部位特異的変異誘発法（Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ－Ｇｏｔｏｈ，　Ｔ，　Ｍｉｚｕｎｏ， Ｔ，　Ｏｇａｓａｈａｒａ，　Ｙ，　ａｎｄ Ｎａｋａｇａｗａ，　Ｍ．　（１９９５）　Ａｎ　ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ－ｄｉｒｅｃｔｅｄ　ｄｕａｌ　ａｍｂｅｒ　ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ　ｓｉｔｅ－ｄｉｒｅｃｔｅｄ　ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ． Ｇｅｎｅ　１５２，　２７１－２７５、Ｚｏｌｌｅｒ，　ＭＪ，　ａｎｄ　Ｓｍｉｔｈ，　Ｍ．（１９８３）　Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ－ｄｉｒｅｃｔｅｄ　ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ　ｏｆ　ＤＮＡ　ｆｒａｇｍｅｎｔｓ　ｃｌｏｎｅｄ　ｉｎｔｏ　Ｍ１３　ｖｅｃｔｏｒｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｅｎｚｙｍｏｌ． １００，　４６８－５００、Ｋｒａｍｅｒ，Ｗ， Ｄｒｕｔｓａ，Ｖ，　Ｊａｎｓｅｎ，ＨＷ，　Ｋｒａｍｅｒ，Ｂ，　Ｐｆｌｕｇｆｅｌｄｅｒ，Ｍ， ａｎｄ　Ｆｒｉｔｚ，ＨＪ（１９８４） Ｔｈｅ　ｇａｐｐｅｄ　ｄｕｐｌｅｘ　ＤＮＡ　ａｐｐｒｏａｃｈ　ｔｏ　ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ－ｄｉｒｅｃｔｅｄ　ｍｕｔａｔｉｏｎ　ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ．　Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．　１２，　９４４１－９４５６、Ｋｒａｍｅｒ　Ｗ，　ａｎｄ　Ｆｒｉｔｚ　ＨＪ（１９８７） Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ－ｄｉｒｅｃｔｅｄ　ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｕｔａｔｉｏｎｓ　ｖｉａ ｇａｐｐｅｄ　ｄｕｐｌｅｘ　ＤＮＡ　Ｍｅｔｈｏｄｓ．　Ｅｎｚｙｍｏｌ．　１５４，　３５０－３６７、Ｋｕｎｋｅｌ，ＴＡ（１９８５）　Ｒａｐｉｄ　ａｎｄ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｓｉｔｅ－sｐｅｃｉｆｉｃ　ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ　ｗｉｔｈｏｕｔ ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ　ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ．Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　Ｕ　Ｓ　Ａ．　８２，　４８８－４９２）が挙げられる。該方法を用いて、抗体の所望のアミノ酸を目的の他のアミノ酸に置換することができる。又、フレームワークシャッフリング（Ｍｏｌ　Ｉｍｍｕｎｏｌ．　２００７　Ａｐｒ；４４（１１）：３０４９－６０）およびＣＤＲ修復（ＵＳ２００６／０１２２３７７）等のライブラリー技術を用いることにより、フレームワークおよびＣＤＲにおけるアミノ酸を適切な他のアミノ酸に置換することも可能である。
　本発明の抗体において、ＣＤＲと連結される抗体のフレームワーク領域(ＦＲ)は、ＣＤＲが良好な抗原結合部位を形成するものが選択される。本発明の抗体に用いられるＦＲは特に限定されず、如何なるＦＲが用いられていてもよいが、ヒト抗体のＦＲが用いられることが好ましい。ヒト抗体のＦＲは天然配列を有するＦＲが用いられてもよいし、必要に応じ、ＣＤＲが適切な抗原結合部位を形成するように、天然配列を有するフレームワーク領域の１又は複数のアミノ酸を置換、欠失、付加及び／又は挿入等してもよい。例えば、アミノ酸を置換したＦＲを用いた抗体の抗原への結合活性を測定し評価することによって、所望の性質を有する変異ＦＲ配列が選択できる（Ｓａｔｏ，　Ｋ．　ｅｔ　ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．（１９９３）５３，　８５１－８５６）。
　（１）及び（２）の抗体においては、軽鎖については、好ましくはヒト抗体のＶｋ１（Ｋａｂａｔ　ｄａｔａｂａｓｅ）のＦＲが、重鎖については、好ましくはヒト抗体のＶＨ５（Ｋａｂａｔ　ｄａｔａｂａｓｅ）のＦＲが用いられる。
　（３）及び（４）の抗体においては、軽鎖については、好ましくはヒト抗体のＶｋ２（Ｋａｂａｔ　ｄａｔａｂａｓｅ）のＦＲが、重鎖については、好ましくはヒト抗体のＶＨ６（Ｋａｂａｔ　ｄａｔａｂａｓｅ）のＦＲが用いられる。
　（５）及び（６）の抗体においては、軽鎖については、好ましくはヒト抗体のＶｋ２（Ｋａｂａｔ　ｄａｔａｂａｓｅ）のＦＲが、重鎖については、好ましくはヒト抗体のＶＨ３（Ｋａｂａｔ　ｄａｔａｂａｓｅ）のＦＲが用いられる。
　本発明の抗体で用いられる定常領域は特に限定されず、如何なる定常領域が用いられてもよい。本発明の抗体で用いられる定常領域の好ましい例としては、ヒト抗体の定常領域（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＭ由来の定常領域など）を挙げることができる。例えばＨ鎖では、Ｃγ１、Ｃγ２、Ｃγ３、Ｃγ４、Ｃμ、Ｃδ、Ｃα１、Ｃα２、Ｃεを、Ｌ鎖ではＣκ、Ｃλを使用することができる。
　（１）～（４）の抗体においては、軽鎖については、好ましくはヒト抗体のＣκの定常領域が、重鎖については、好ましくはヒト抗体のＣγ１の定常領域が用いられる。
　（５）及び（６）の抗体においては、軽鎖については、好ましくはヒト抗体のＣκの定常領域が、重鎖については、好ましくはヒト抗体のＣγ１の定常領域が用いられる。
　本発明の好ましい抗体として以下のものを挙げることができる：
（１’）軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、該軽鎖可変領域が配列番号１７で表されるアミノ酸配列を含み、且つ、該重鎖可変領域が配列番号１８で表されるアミノ酸配列を含む、抗体；
（３’）軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、該軽鎖可変領域が配列番号１９で表されるアミノ酸配列を含み、且つ、該重鎖可変領域が配列番号２０で表されるアミノ酸配列を含む、抗体；及び
（５’）軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、該軽鎖可変領域が配列番号３０で表されるアミノ酸配列を含み、且つ、該重鎖可変領域が配列番号３１で表されるアミノ酸配列を含む、抗体。
　上記（１’）の抗体は、上記（１）の抗体の好ましい態様に、上記（３’）の抗体は、上記（３）の抗体の好ましい態様に、それぞれ相当する。上記（５’）の抗体は、上記（５）の抗体の好ましい態様に、それぞれ相当する。
　また、本発明は上記本発明の抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを提供するものである。該ポリヌクレオチドは、ＤＮＡであってもＲＮＡであってもよく、あるいはＤＮＡ／ＲＮＡキメラであってもよい。また、該ポリヌクレオチドは二本鎖であっても、一本鎖であってもよい。二本鎖の場合は、二本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＲＮＡまたはＤＮＡ：ＲＮＡのハイブリッドでもよい。
　尚、本発明のポリヌクレオチドには、本発明の抗体の重鎖可変領域と軽鎖可変領域の両方をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、及び重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドと、軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとの組み合わせが包含される。
　本発明のポリヌクレオチドは、本発明の抗体のアミノ酸配列情報、公知の配列情報や本明細書の配列表に記載された配列情報に基づき、公知の遺伝子組換え技術を利用することにより容易に製造することができる。例えば、配列情報に基づき適当なプライマーを設計し、本発明の抗体を構成する構成要素をコードするＤＮＡをＰＣＲ反応によって増幅し、ＤＮＡフラグメントをリガーゼなどの適切な酵素を用いて連結することにより、本発明のポリヌクレオチドを製造することができる。或いは、本発明の抗体のアミノ酸配列情報に基づいて、ポリヌクレオチド合成装置により各構成要素をコードするポリヌクレオチドを合成してもよい。
　取得された本発明の抗体をコードするポリヌクレオチドは、目的によりそのまま、または所望により制限酵素で消化するか、リンカーを付加した後に、使用することができる。該ポリヌクレオチドはその５’末端側に翻訳開始コドンとしてのＡＴＧを有し、また３’末端側には翻訳終止コドンとしてのＴＡＡ、ＴＧＡまたはＴＡＧを有していてもよい。これらの翻訳開始コドンや翻訳終止コドンは、適当な合成ＤＮＡアダプターを用いて付加することができる。
　本発明のポリヌクレオチドは、好ましくは単離又は精製されている。単離又は精製された本発明のポリヌクレオチドの純度（全ポリヌクレオチド重量に対する、本発明のポリヌクレオチドの重量の割合）は、通常５０％以上、好ましくは７０％以上、より好ましくは９０％以上、最も好ましくは９５％以上（例えば実質的に１００％）である。
　本発明は、上記本発明のポリヌクレオチドを含むベクターを提供するものである。本発明のベクターには、本発明の抗体の重鎖可変領域と軽鎖可変領域の両方をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含むベクター、及び重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含むベクターと、軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含むベクターとの組み合わせが包含される。該ベクターは好ましくは単離又は精製されている。ベクターとしては発現ベクター、クローニングベクター等を挙げることができ、目的に応じて選択することが可能であるが、好ましくは、ベクターは発現ベクターである。該発現ベクターは、本発明の抗体を発現し得る。該発現ベクターは、本発明のポリヌクレオチドを適当な発現ベクター中のプロモーターの下流に機能的に連結することにより製造することができる。ベクターの種類としては、プラスミドベクター、ウイルスベクター等を挙げることができ、用いる宿主に応じて適宜選択することができる。
　宿主としては、例えば、エシェリヒア属菌（エシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ）等）、バチルス属菌（バチルス・サブチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｕｂｔｉｌｉｓ）等）、酵母（サッカロマイセス　セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）等）、昆虫細胞（夜盗蛾の幼虫由来株化細胞（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ　ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ ｃｅｌｌ；Ｓｆ細胞）等）、昆虫（カイコの幼虫等）、哺乳動物細胞（ラット神経細胞、サル細胞（ＣＯＳ－７等）、チャイニーズハムスター細胞（ＣＨＯ細胞等）等）などが用いられる。
　哺乳動物としては、例えば、マウス、ラット、ハムスター、モルモット等のげっ歯類やウサギ等の実験動物、ブタ、ウシ、ヤギ、ウマ、ヒツジ、ミンク等の家畜、イヌ、ネコ等のペット、ヒト、サル、カニクイザル、アカゲザル、マーモセット、オランウータン、チンパンジーなどの霊長類等を挙げることができるが、これらに限定されるものではない。
　プラスミドベクターとしては、大腸菌由来のプラスミドベクター（例、ｐＢＲ３２２，ｐＢＲ３２５，ｐＵＣ１２，ｐＵＣ１３）、枯草菌由来のプラスミドベクター（例、ｐＵＢ１１０，ｐＴＰ５，ｐＣ１９４）、酵母由来プラスミドベクター（例、ｐＳＨ１９，ｐＳＨ１５）等を挙げることができ、用いる宿主の種類や使用目的に応じて適宜選択することができる。
　ウイルスベクターの種類は、用いる宿主の種類や使用目的に応じて適宜選択することができる。例えば、宿主として昆虫細胞を用いる場合には、バキュロウイルスベクター等を用いることができる。また、宿主として哺乳動物細胞を用いる場合には、モロニーマウス白血病ウイルスベクター、レンチウイルスベクター、シンドビスウイルスベクター等のレトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、パルボウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、センダイウイルスベクター等を用いることができる。
　また、プロモーターは、用いる宿主の種類に対応して、該宿主内で転写を開始可能なものを選択することができる。例えば、宿主がエシェリヒア属菌である場合、ｔｒｐプロモーター、ｌａｃプロモーター、Ｔ７プロモーターなどが好ましい。宿主がバチルス属菌である場合、ＳＰＯ１プロモーター、ＳＰＯ２プロモーター、ｐｅｎＰプロモーターなどが好ましい。宿主が酵母である場合、ＰＨＯ５プロモーター、ＰＧＫプロモーターなどが好ましい。宿主が昆虫細胞である場合、ポリヘドリンプロモーター、Ｐ１０プロモーターなどが好ましい。宿主が哺乳動物細胞である場合、サブゲノミック（２６Ｓ）プロモーター、ＣＭＶプロモーター、ＳＲαプロモーターなどが好ましい。
　本発明のベクターには、抗体分泌のためのシグナル配列が含まれていてもよい。抗体分泌のためのシグナル配列としては、大腸菌のペリプラズムに産生させる場合、ｐｅｌＢシグナル配列（Ｌｅｉ，　Ｓ．　Ｐ．　ｅｔ　ａｌ　Ｊ．　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．　（１９８７） １６９，　４３７９）を使用すればよい。
　本発明のベクターは、所望によりエンハンサー、スプライシングシグナル、ポリＡ付加シグナル、選択マーカー、ＳＶ４０複製オリジン（以下、ＳＶ４０ｏｒｉと略称する場合がある）などを、それぞれ機能可能な態様で含有していてもよい。選択マーカーとしては、例えば、ジヒドロ葉酸還元酵素（以下、ｄｈｆｒと略称する場合がある）遺伝子〔メソトレキセート（ＭＴＸ）耐性〕、アンピシリン耐性遺伝子（Ａｍｐｒと略称する場合がある）、ネオマイシン耐性遺伝子（Ｎｅｏｒと略称する場合がある、Ｇ４１８耐性）等が挙げられる。
　上記本発明のベクターを、自体公知の遺伝子導入法（例えば、リポフェクション法、リン酸カルシウム法、マイクロインジェクション法、プロプラスト融合法、エレクトロポレーション法、ＤＥＡＥデキストラン法、Ｇｅｎｅ　Ｇｕｎによる遺伝子導入法等）に従って上記宿主へ導入することにより、該ベクターが導入された形質転換体（本発明の形質転換体）を製造することができる。導入されるベクターとして発現ベクターを使用することにより、該形質転換体は本発明の抗体を発現し得る。本発明の形質転換体は、本発明の抗体の製造等に有用である。
　本発明の形質転換体を、宿主の種類に応じて、自体公知の方法で培養し、培養物から本発明の抗体を単離することにより、本発明の抗体を製造することができる。宿主がエシェリヒア属菌である形質転換体の培養は、ＬＢ培地やＭ９培地等の適切な培地中、通常約１５～４３℃で、約３～２４時間行なわれる。宿主がバチルス属菌である形質転換体の培養は、適切な培地中、通常約３０～４０℃で、約６～２４時間行なわれる。宿主が酵母である形質転換体の培養は、バークホールダー培地等の適切な培地中、通常約２０℃～３５℃で、約２４～７２時間行なわれる。宿主が昆虫細胞または昆虫である形質転換体の培養は、約１０％のウシ血清が添加されたＧｒａｃｅ’ｓ　Ｉｎｓｅｃｔ　ｍｅｄｉｕｍ等の適切な培地中、通常約２７℃で、約３～５日間行なわれる。宿主が動物細胞である形質転換体の培養は、約１０％のウシ血清が添加されたＭＥＭ培地等の適切な培地中、通常約３０℃～４０℃で、約１５～６０時間行なわれる。いずれの培養においても、必要に応じて通気や撹拌を行ってもよい。
　尚、遺伝子工学的に抗体を製造する方法については、例えば、Ｃｏ，　Ｍ．　Ｓ．　ｅｔ　ａｌ．，　Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．　（１９９４）　１５２， ２９６８－２９７６　；　Ｂｅｔｔｅｒ，　Ｍ． ａｎｄ　Ｈｏｒｗｉｔｚ，　Ａ．　Ｈ．，　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｅｎｚｙｍｏｌ．　（１９８９）　１７８，　４７６－４９６　；　Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，　Ａ． ａｎｄ　Ｓｋｅｒｒａ，　Ａ．，　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｅｎｚｙｍｏｌ．　（１９８９） １７８，　４９７－５１５　；　Ｌａｍｏｙｉ，　Ｅ．，　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｅｎｚｙｍｏｌ． （１９８６）　１２１，　６５２－６６３　；　Ｒｏｕｓｓｅａｕｘ，　Ｊ．　ｅｔ　ａｌ．， Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｅｎｚｙｍｏｌ．　（１９８６）　１２１， ６６３－６６９　；　Ｂｉｒｄ，　Ｒ． Ｅ．　ａｎｄ　Ｗａｌｋｅｒ，　Ｂ．　Ｗ．， Ｔｒｅｎｄｓ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．　（１９９１）　９，　１３２－１３７等を参照のこと。
　培養物からの本発明の抗体の分離、精製は、通常の抗体の精製で使用されている分離、精製方法を使用すればよく、何ら限定されるものではない。例えば、クロマトグラフィーカラム、フィルター、限外濾過、塩析、溶媒沈殿、溶媒抽出、蒸留、免疫沈降、ＳＤＳ－ポリアクリルアミドゲル電気泳動、等電点電気泳動法、透析、再結晶等を適宜選択、組み合わせれば抗体を分離、精製することができる。
　クロマトグラフィーとしては、例えばアフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、ゲル濾過、逆相クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー等が挙げられる（Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ　ｆｏｒ　Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ： Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｃｏｕｒｓｅ　Ｍａｎｕａｌ．　Ｅｄ　Ｄａｎｉｅｌ　Ｒ．　Ｍａｒｓｈａｋ　ｅｔ　al．，　Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ，　１９９６）。これらのクロマトグラフィーは、液相クロマトグラフィー、例えばＨＰＬＣ、ＦＰＬＣ等の液相クロマトグラフィーを用いて行うことができる。アフィニティークロマトグラフィーに用いるカラムとしては、プロテインＡカラム、プロテインＧカラムが挙げられる。例えば、プロテインＡを用いたカラムとして、Ｈｙｐｅｒ　Ｄ，　ＰＯＲＯＳ，　Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　ＦＦ（ＧＥ　Ａｍｅｒｓｈａｍ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社製）等が挙げられる。本発明は、これらの精製方法を用い、高度に精製された抗体も包含する。
　また本発明は、上記本発明の抗体を有効成分として含有する医薬組成物を提供する。本発明の医薬組成物は癌の予防又は治療剤；癌の増殖阻害剤；癌転移阻害剤等として有用である。癌の種類としては、本発明の抗体による癌の予防又は治療効果；癌の増殖阻害効果；又は癌転移阻害効果を達成し得る限り特に限定されないが、肝癌、大腸癌、腎臓癌、黒色腫、膵癌、甲状腺癌、胃癌、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌）、脳腫瘍、子宮癌、乳癌、多発性骨肉腫、卵巣癌、慢性白血病、前立腺癌、急性リンパ性白血病、胚細胞腫、急性骨髄性白血病、悪性リンパ腫、繊毛癌、小児悪性腫瘍、胆嚢・胆管癌等が挙げられる。好ましい態様において、本発明の抗体の適用対象となる癌はヒトADAM28を発現する癌である。癌がヒトADAM28を発現するか否かは、ウェスタンブロッティング、ＲＴ－ＰＣＲ等により評価することができる。
　理論には拘束されないが、ADAM28はIGFBP-3を分解することにより、IGF-1/IGFBP-3複合体の形成を阻害し、IGF-1による癌細胞の増殖を促進する。本発明の抗体はこのADAM28によるIGFBP-3の分解を阻害することにより、IGF-1による癌細胞の増殖を抑制する。従って、一態様において、本発明の抗体の適用対象となる癌は、IGF-1感受性の癌（即ち、IGF-1依存的な増殖促進を示す癌）である。癌がIGF-1感受性であるか否かは、癌におけるIGF-1受容体の発現をウェスタンブロッティング、ＲＴ－ＰＣＲ等により解析することにより評価することができる。
　理論には拘束されないが、ADAM28はvon Willebrand factor (vWF)を分解することにより、vWFによる癌細胞のアポトーシス誘導を阻害する。本発明の抗体はこのADAM28によるvWFの分解を阻害することにより、vWFによる癌細胞のアポトーシス誘導を促進し、その結果として癌の増殖や転移を抑制する。従って、一態様において、本発明の適用対象となる癌は、vWF感受性の癌（即ち、vWFによりアポトーシスが誘導される癌）である。癌がvWF感受性であるか否かは、例えば、J Natl Cancer Inst 2012;104:906-922に記載された方法により、vWFでコートしたプレート上で癌細胞を培養し、ＤＮＡの断片化を解析することにより評価することができる。
　本発明の抗体を「有効成分として含有する」とは、本発明の抗体を活性成分の少なくとも１つとして含むという意味であり、その含有率を制限するものではない。また、本発明の医薬組成物は、本発明の抗体と合わせて他の有効成分を含有してもよい。
　本発明の抗体は、常法に従って製剤化することができる（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ， ｌａｔｅｓｔ　ｅｄｉｔｉｏｎ，　Ｍａｒｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏｍｐａｎｙ，　Ｅａｓｔｏｎ， Ｕ．Ｓ．Ａ）。更に、必要に応じ、医薬的に許容される担体及び/または添加物を含んでもよい。例えば、界面活性剤（ＰＥＧ、Ｔｗｅｅｎ等）、賦形剤、酸化防止剤（アスコルビン酸等）、着色料、着香料、保存料、安定剤、緩衝剤（リン酸、クエン酸、他の有機酸等）、キレート剤（ＥＤＴＡ等）、懸濁剤、等張化剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤等を含むことができる。しかしながら、本発明の医薬組成物は、これらに制限されず、その他常用の担体を適宜含んでいてもよい。具体的には、軽質無水ケイ酸、乳糖、結晶セルロース、マンニトール、デンプン、カルメロースカルシウム、カルメロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、中鎖脂肪酸トリグリセライド、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０、白糖、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩類等を挙げることができる。また、その他の低分子量のポリペプチド、血清アルブミン、ゼラチン及び免疫グロブリン等のタンパク質、並びに、アミノ酸を含んでいてもよい。注射用の水溶液とする場合には、本発明の抗体を、例えば、生理食塩水、ブドウ糖またはその他の補助薬を含む等張液に溶解する。補助薬としては、例えば、Ｄ－ソルビトール、Ｄ－マンノース、Ｄ－マンニトール、塩化ナトリウムが挙げられ、更に、適当な溶解補助剤、例えばアルコール（エタノール等）、ポリアルコール（プロピレングリコール、ＰＥＧ等）、非イオン性界面活性剤（ポリソルベート８０、ＨＣＯ－５０）等と併用してもよい。
　また、必要に応じポリペプチドをマイクロカプセル（ヒドロキシメチルセルロース、ゼラチン、ポリ[メチルメタクリル酸]等のマイクロカプセル）に封入したり、コロイドドラッグデリバリーシステム(リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子及びナノカプセル等)とすることもできる（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ　＆，　Ｏｓｌｏ　Ｅｄ．　（１９８０）等参照）。更に、薬剤を徐放性の薬剤とする方法も公知であり、ポリペプチドに適用し得る（Ｌａｎｇｅｒ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．（１９８１）　１５： １６７－２７７；　Ｌａｎｇｅｒ，　Ｃｈｅｍ．　Ｔｅｃｈ． （１９８２）１２：　９８－１０５；米国特許第３，７７３，９１９号;欧州特許出願公開（ＥＰ）第５８，４８１号; Ｓｉｄｍａｎ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ（１９８３）２２：５４７－５６；ＥＰ第１３３，９８８号）。更に、本剤にヒアルロニダーゼを添加あるいは混合することで皮下に投与する液量を増加させることも可能である（例えば、ＷＯ２００４／０７８１４０等）。
　医薬組成物中の本発明の抗体の含有量は、例えば、医薬組成物全体の約０．０１～１００重量％、好ましくは０．１～９９．９％である。
　本発明の医薬組成物は、経口又は非経口のいずれでも投与可能であるが、好ましくは非経口投与される。具体的には、注射及び経皮投与により患者に投与される。注射剤型の例としては、例えば、静脈内注射、筋肉内注射または皮下注射等により全身又は局所的に投与することができる。治療部位又はその周辺に局所注入、特に筋肉内注射してもよい。経皮投与剤型の例としては、例えば、軟膏剤、ゲル剤、クリーム剤、湿布剤、および貼付剤等があげられ、全身又は局所的に投与することができる。また、患者の年齢、症状により適宜投与方法を選択することができる。投与量としては、例えば、１回につき体重１ｋｇあたり本発明の抗体として０．５ｍｇ～１０ｍｇの範囲で選ぶことが可能である。しかしながら、本発明の医薬組成物は、これらの投与量に制限されるものではない。
　刊行物、特許文献等を含む、本明細書に引用されたすべての参考文献は、引用により、それらが個々に具体的に参考として援用されかつその内容全体が具体的に記載されているのと同程度まで、本明細書に援用される。
　以下に、実施例により本発明を更に具体的に説明するが、本発明はそれに限定されるものではない。尚、実施例における各種遺伝子操作は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ｔｈｉｒｄ．　ｅｄ． （Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂ．　Ｐｒｅｓｓ，　２００１）に記載の方法に従った。
［実施例１］
抗原および抗体作製
（１）ヒトADAM28組み換えタンパク質（rhADAM28）の作製
　完全長rhADAM28は、Biochem Biophys Res Commun. 2004; 315: 79-84に記載の方法にしたがって、作製および精製された。
（２）rhADAM28のビオチン化
　精製したrhADAM28は、ＥＺ－Ｌｉｎｋ　ＮＨＳ－ＰＥＯ４－Ｂｉｏｔｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）の標準プロトコールに従ってビオチン化し、ＢＣＡ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａｓｓａｙ　Ｋｉｔ（ＰＩＥＲＣＥ社製）を用いて濃度を決定した。
（３）ファージディスプレイ法による抗ヒトADMA28ヒト抗体クローンの選択
　ビオチン化したrhADAM28は、ストレプトアビジンコート磁性体ビーズ（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ ＭｙＯｎｅ　Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ　Ｔ１　磁性体ビーズ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製)１００μlに４℃、１時間固相化し、１ｍｌのＰＢＳＴ（０．０５％　Ｔｗｅｅｎ　２０含有ＰＢＳ）で５回洗浄した。ヒト抗体ファージライブラリーにはＨｕＣＡＬ　ＧＯＬＤ（ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ社製）を用い、ＷＯ２００７/０４２３０９及びＷＯ２００６/１２２７９７等に記載された方法に従って抗体選択を行った。ファージライブラリーにrhADAM28固相化ビーズを加えて抗原特異的抗体を結合させた。磁性体ビーズを回収し、数回洗浄を行った後、ファージを磁性体ビーズから溶出させた。溶出したファージは、大腸菌に感染させ、３７℃で一晩培養した。尚、ファージ感染大腸菌からのファージレスキュー操作は一般的な方法に従った（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ｔｈｉｒｄ． Ｅｄ．　Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂ．　Ｐｒｅｓｓ，　２００１）。以上に記載した選択ラウンドを複数回繰り返して抗原特異的抗体を提示するファージの濃縮操作を行った。
（４）ＥＬＩＳＡによる抗ヒトADMA28ヒト抗体のスクリーニング
　濃縮操作後に得られたＦａｂ遺伝子のプールを大腸菌発現ベクターにサブクローニングした。ＷＯ２００６/１２２７９７等に記載の手法に従って、Ｆａｂ抗体を発現させ、ＥＬＩＳＡ法により抗原特異的抗体のスクリーニングを行った。Ｆａｂ抗体は大腸菌破砕液の可溶性画分よりＳｔｒｅｐ－Ｔａｃｔｉｎカラム（ＩＢＡ社製）の標準法に従い精製を行った。また、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって精製抗体の純度を確認し、ＢＣＡ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａｓｓａｙ　Ｋｉｔ（ＰＩＥＲＣＥ社製）を用いて濃度を決定した。
（５）抗ヒトADAM28ヒト抗体クローンの塩基配列解析
　得られた２クローン（２１１－１２、２１１－１４）の大腸菌を培養し、プラスミドを回収(ＱＩＡｐｒｅｐ　Ｓｐｉｎ　ＭｉｎｉＰｒｅｐ　ｋｉｔ：ＱＩＡＧＥＮ社製)して塩基配列解析に使用した。表１に、それぞれのクローンのＣＤＲ（相補性決定領域）のアミノ酸配列を示す。また、各クローンの可変領域の全長アミノ酸配列を配列番号１７～２０に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
  
（６）抗ヒトADAM28ヒト抗体クローンのＩｇＧ抗体作製
　得られた２クローンのＦａｂ抗体遺伝子をサブクローニングすることでＩｇＧ発現ベクター（重鎖の定常領域はＩｇＧ１）を構築した。これらの発現ベクターをＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）の標準方法に従ってＨＥＫ２９３Ｔ細胞にトランスフェクションし、７２時間培養後の培養上清を回収した。尚、培地にはＵｌｔｒａ　Ｌｏｗ　ＩｇＧ　ＦＢＳ(Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製)を１０％で添加したＤＭＥＭ（Ｓｉｇｍａ）を用いた。この培養上清からｒＰｒｏｔｅｉｎＡ　Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　Ｆａｓｔ　Ｆｌｏｗ（ＧＥ　ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社製）を用いた標準方法によってＩｇＧ抗体を精製した。精製後のタンパク質はＳＤＳ－ＰＡＧＥによって単一バンドであることを確認し、ＢＣＡ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａｓｓａｙ　Ｋｉｔ(ＰＩＥＲＣＥ社製)を用いて濃度を決定した。
（７）抗ヒトADAM28マウスモノクローナル抗体の作製
　精製したrhADAM28を抗原として用いて、ヒトADAM28タンパク質に対するモノクローナル抗体を樹立した。rhADAM28を用いたELISAによりまず５つのクローン選抜し、クローン297-2F3をヒトADAM28に対する抗体の候補として選択した。モノクローナル抗体（297-2F3）の単一反応性を、組み換え型ヒトADAM28のイムノブロッティングにより決定した。
［実施例２］
抗ヒトADAM28抗体のヒトADAM28酵素活性抑制効果
　rhADAM28と抗ADAM28抗体を、図中に示す重量比で2時間インキュベート後、IGFBP-3(100ng)を加えて37℃で24時間インキュベートし、5mMのEDTAを含むSDS-sample bufferで反応を終了させた。その後、反応産物をSDS-PAGE(10% アクリルアミドゲル)し、抗IGFBP-3抗体（Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA）を用いたイムノブロット法によりIGFBP-3分解の程度を検出した（図１）。211-14及び211-12のいずれの抗体も、ヒトADAM28によるIGFBP-3の分解を抑制した。
［実施例３］
乳癌細胞株に対する抗ヒトADAM28抗体の増殖抑制効果
　MDA-MB231細胞に対するIGF-Iの細胞分裂促進効果を、製造者の指示書に従い、5-bromo-2’deoxy-uridine (BrdUrd) Labeling and Detection Kit III (Roche Molecular Biochemicals, Basel, Switzerland)を用いて測定した。同期化及び増殖停止の後、細胞を１％FBSを含有するDMEM中の１μｇ／ｍｌのIGF-1により処理した。６時間後、BrdUrd（１０μmol/L）を培地へ添加し、更に４２時間培養した。IGF-Iの細胞分裂促進効果へのADAM28活性の寄与を調べるため、細胞をIGF-I処理の30分前に、１又は５μｇ／ｍｌの抗ADAM28抗体とともにインキュベートし、次に、IGF-Iの存在下で、42時間、BrdUrdと反応させた（図２）。211-14、211-12及び297-2F3のいずれの抗体もMDA-MB231細胞のインビトロ増殖を抑制した。
［実施例４］
抗ヒトADAM28抗体のインビボにおける癌細胞増殖抑制効果
　レンチウイルスベクターによりルシフェラーゼを恒常的に発現するADAM28高発現乳癌細胞株MDA-MB231 ffLuc-cp156を作製し、NOD/SCIDマウス（Six-week-old male, Charles River Laboratories International Inc, Washington, MA）の乳房皮下組織に移植（2 x 10e6個）した。移植後、抗ADAM28抗体(2mg/kg/mice)を2日間隔で5回局所注射し、腫瘍増殖の抑制効果を検討した。D-ルシフェリン（150ｍｇ/Kg）（Promega Co, Madison, MI）を腹腔内投与後in vivo imaging system (IVIS)-100 (Xenogen Co., Alameda, CA)にて発光を検出した（図３）。211-14及び211-12のいずれの抗体も、インビボにおけるMDA-MB231 ffLuc-cp156の増殖を抑制した。
［実施例５］
抗ヒトADAM28抗体のインビボにおける癌細胞転移抑制効果
　雄のNOD/SCIDマウス（６週齢）(Charles River Laboratories International, Inc., Wilmington, MA)の尾静脈中に、PC-9ffLuc-cp156細胞（300μｌのPBS中に、1x106個）を注射した。製造者の指示書に従い、肺転移を、ルシフェラーゼ活性の検出のためのIn Vivo Imaging System (IVIS)-100カメラシステム(Xenogen Co., Alameda, CA)を用いた生物発光イメージングによりモニターした。イメージングの間、マウスを、イソフルランで麻酔し、D-ルシフェリン(150 mg/kg; Promega Co., Madison, WI)を腹腔内へ注射し、１分後、動物全身からの光子をカウントした。抗ADAM28中和抗体の、肺転移への効果を調べるため、PC-9ffLuc-cp156細胞を５μｇ／ｍｌのマウス抗ヒトADAM28モノクローナル抗体（297-2F3）、又は５μｇ／ｍｌの非免疫IgGとともに２時間、４℃にてインキュベートし、マウスへ静注した(１群あたりn = 9匹)（図４）。297-2F3投与によって癌転移が抑制された。
［実施例６］
　また、実施例４において、癌細胞移植後6週間後のマウスの各臓器から抽出したRNAから、ルシフェラーゼ特異的なプライマーを用いてRT-PCRを行い、腫瘍由来の遺伝子発現の有無を確認し、自然転移の有無を検討した（図５）。211-14及び211-12のいずれの抗体も、癌細胞の微小転移を抑制した。
［実施例７］
　上記実施例１（７）において得られた、マウス抗ヒトADAM28モノクローナル抗体297-2F3を産生するハイブリドーマのｃＤＮＡより、当該抗体の可変領域をPCR増幅し、クローニングベクターへサブローニングし、当該領域の塩基配列を解析した。表２に、ＣＤＲ（相補性決定領域）のアミノ酸配列を示す。また、軽鎖及び重鎖可変領域の全長アミノ酸配列を配列番号１４６及び１４７にそれぞれ示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
  
［実施例８］
　次に、ＷＯ９８／１３３８８に記載の方法を参照しつつ、マウス抗ヒトADAM28モノクローナル抗体297-2F3の各ＣＤＲを、ヒト抗体フレームにグラフティングし、ヒト化を行った。この結果得られたヒト化297-2F3の軽鎖及び重鎖可変領域の全長アミノ酸配列を配列番号３０及び３１にそれぞれ示す。
［実施例９］
　エピトープの同定（１）
　ヒトADAM28sの部分ペプチドを固定化したペプチドアレイを用いて、抗ヒトADAM28抗体211-12及び297-2F3について、エピトープマッピングを行った。具体的には、下記の表のように、ヒトADAM28sのプロテアーゼドメインからC末端までをカバーする配列に対して、残基数が１２アミノ酸残基でオフセットが３アミノ酸残基のペプチド群からなるペプチドアレイを作製した。ＨＲＰ標識した抗ヒトADAM28s抗体をペプチドアレイと反応させた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
  
　その結果、211-12は、上記ペプチド＃２５及び＃２６に特異的に結合した。この結果から、211-12のエピトープには、ペプチド＃２５と＃２６に共通する配列番号２１で表されるアミノ酸配列（ENFSKWRGS）が含まれることが示唆された。
　297-2F3は、上記ペプチド＃６５及び＃６６に特異的に結合した。ペプチド＃６５と＃６６に共通するアミノ酸配列（CLFNAPLPT：配列番号145）のうち、システインは、多くの場合抗体に認識されないので、297-2F3のエピトープには、配列番号２３で表されるアミノ酸配列（LFNAPLPT）が含まれることが示唆された。ＭＢＰのＣ末端に配列番号２３で表されるアミノ酸配列を付加した融合タンパク質を強制発現した大腸菌のライセートを用いたドットブロットにより、297-2F3が、配列番号２３をエピトープとして特異的に認識することを確認した。
［実施例９］
　エピトープの同定（２）
　ＭＢＰのＣ末端に、ヒトADAM28s（配列番号４）の以下の領域の部分配列を付加した融合タンパク質を、それぞれ調製した。
399-540、399-497、491-540、491-510、501-520、511-530、521-540、513-522、515-524、517-526、519-528
　また、コントロールとして、ＭＢＰのＣ末端に、ヒトADAM28m（配列番号２）の以下の領域の部分配列を付加した融合タンパク質を調製した。
517-526（ヒトADAM28m、コントロールとして）
　上記融合タンパク質に対する抗ヒトADAM28抗体211-14の反応性を、ウェスタンブロッティングにより評価した。その結果、211-14は、ヒトADAM28sの399-540、491-540、511-530及び517-526の領域の部分配列を含む融合タンパク質へ強く結合した。この結果から、211-14のエピトープには、ヒトADAM28sの517-526の領域（TELWGPGRRT、配列番号２２）が含まれることが示唆された。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000006
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000007
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000008
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000009
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000010
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000011
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000012
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000013
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000014
  
　本発明によれば、癌の予防又は治療に応用可能な抗ヒトADAM28抗体が提供される。
　本出願は米国仮出願No. 61/724,484（出願日：2012年11月9日）を基礎としており、その内容は本明細書に全て包含されるものである。

Claims (18)

  1. 　ヒトADAM28に特異的に結合し、且つヒトADAM28の酵素活性を阻害する活性を有する、抗体。
  2. 　配列番号２１、２２又は２３で表されるアミノ酸配列を含むエピトープにおいて、ヒトADAM28に結合する、請求項１記載の抗体。
  3. 　軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、
    （１）該軽鎖可変領域が、配列番号５で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号６で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号７で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含み、且つ
    　該重鎖可変領域が、配列番号８で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号９で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号１０で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む；
    （２）該軽鎖可変領域が、配列番号５で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号６で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号７で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含み、且つ
    　該重鎖可変領域が、配列番号８で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号９で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号１０で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む
    （但し、配列番号５、６及び７で表されるアミノ酸配列からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列において、１～３個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加しており、且つ／或いは、
    　配列番号８、９及び１０で表されるアミノ酸配列からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列において、１～３個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加している）；
    （３）該軽鎖可変領域が、配列番号１１で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１２で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号１３で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含み、且つ
    　該重鎖可変領域が、配列番号１４で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１５で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号１６で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む；
    （４）該軽鎖可変領域が、配列番号１１で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１２で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号１３で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含み、且つ
    　該重鎖可変領域が、配列番号１４で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１５で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号１６で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む
    （但し、配列番号１１、１２及び１３で表されるアミノ酸配列からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列において、１～３個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加しており、且つ／或いは、
    　配列番号１４、１５及び１６で表されるアミノ酸配列からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列において、１～３個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加している）；
    （５）該軽鎖可変領域が、配列番号２４で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２５で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号２６で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含み、且つ
    　該重鎖可変領域が、配列番号２７で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２８で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号２９で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む；又は
    （６）該軽鎖可変領域が、配列番号２４で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２５で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号２６で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含み、且つ
    　該重鎖可変領域が、配列番号２７で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２８で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及び配列番号２９で表されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む
    （但し、配列番号２４、２５及び２６で表されるアミノ酸配列からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列において、１～３個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加しており、且つ／或いは、
    　配列番号２７、２８及び２９で表されるアミノ酸配列からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列において、１～３個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／又は付加している）；
    ことを特徴とする請求項１に記載の抗体。
  4. （１’）該軽鎖可変領域が配列番号１７で表されるアミノ酸配列を含み、且つ、該重鎖可変領域が配列番号１８で表されるアミノ酸配列を含む；
    （３’）該軽鎖可変領域が配列番号１９で表されるアミノ酸配列を含み、且つ、該重鎖可変領域が配列番号２０で表されるアミノ酸配列を含む；又は
    （５’）該軽鎖可変領域が配列番号３０で表されるアミノ酸配列を含み、且つ、該重鎖可変領域が配列番号３１で表されるアミノ酸配列を含む請求項３に記載の抗体。
  5. 　請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体を含む医薬組成物。
  6. 　請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体を含む、癌の予防又は治療剤。
  7. 　請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体を含む、癌転移阻害剤。
  8. 　哺乳動物へ有効量の請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体を投与することを含む、該哺乳動物における癌の予防又は治療方法。
  9. 　哺乳動物がヒトである、請求項８記載の方法。
  10. 　哺乳動物へ有効量の請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体を投与することを含む、該哺乳動物における癌転移阻害方法。
  11. 　哺乳動物がヒトである、請求項１０記載の方法。
  12. 　癌の予防又は治療において使用するための、請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体。
  13. 　癌転移阻害において使用するための、請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体。
  14. 　癌の予防又は治療剤の製造のための、請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体の使用。
  15. 　癌転移阻害剤の製造のための、請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体の使用。
  16. 　請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体をコードするポリヌクレオチド。
  17. 　請求項１６記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
  18. 　請求項１７記載のベクターを含む形質転換体。
PCT/JP2013/076745 2012-11-09 2013-10-01 癌治療のための抗adam28抗体 WO2014073292A1 (ja)

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