CN108424453B - 用于治疗癌症的抗adam28抗体 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种抗体，所述抗体特异性结合人ADAM28，抑制人ADAM28的酶活性，并且具有抑制表达人ADAM28的癌细胞的转移的活性。本发明的抗体可以是人抗体。

Description

用于治疗癌症的抗ADAM28抗体
本申请是国际申请日为2013年10月01日、国际申请号为PCT/JP2013/076745、进入国家阶段的申请号为201380058516.5、发明名称为“用于治疗癌症的抗ADAM28抗体”的PCT申请的分案申请。
技术领域
本发明涉及抗人ADAM28抗体及其药物用途。
背景技术
ADAM蛋白(解联蛋白和金属蛋白酶)是参与跨膜蛋白的胞外结构域脱落、细胞粘附和浸润的多功能蛋白(非专利文献1, 2)。人基因组含有25种ADAM，其包括四种假基因和21种ADAM，所述21种ADAM由表现出蛋白水解活性的13种蛋白水解性ADAM和八种非蛋白水解性ADAM构成(非专利文献1, 3)。蛋白水解性ADAM共享基质金属蛋白酶(MMP)的金属蛋白酶结构域，且典型的蛋白水解性ADAM蛋白包含肽原、金属蛋白酶、解联蛋白样(disintegrin-like)、富含半胱氨酸、表皮生长因子样、跨膜和细胞质结构域(非专利文献3-9 )。许多蛋白水解性ADAM，包括ADAM8、ADAM9、ADAM12、ADAM15、ADAM17、ADAM19 和ADAM28，在人癌症中过表达，且与肿瘤生长和进展相关(非专利文献5, 9)。本发明人的先前研究已经表明，ADAM28(也称为ADAM金属肽酶结构域28)(其具有两种替代亚型，包括原型膜锚定形式(ADAM28m)和短分泌形式(ADAM28)(非专利文献5, 10, 11))在人非小细胞肺癌和乳腺癌中大量表达(非专利文献12, 13)。通过原位杂交和免疫组织化学，本发明人已经表明，ADAM28主要在癌组织中含有的癌细胞中表达，并且ADAM28的mRNA表达水平与乳腺癌的细胞增殖(非专利文献13)且与非小细胞肺癌中的癌细胞增殖和浸润(非专利文献12)相关。在平行研究中，本发明人显示，非小细胞肺癌患者中的血清ADAM27水平基本上随着肿瘤、淋巴结转移和癌症复发的进展而增加(非专利文献14)。这些数据暗示，ADAM28参与特别是人癌症中的细胞增殖和转移。本发明人已经表明，ADAM28通过选择性消化IGF-I/IGFBP-3复合物的IGF-结合蛋白-3(IGFBP-3)经由胰岛素样生长因子-I(IGF-I)的增强的生物利用度而有助于癌细胞增殖(非专利文献13)，并且通过消化乳腺癌中的结缔组织生长因子有助于血管生成(非专利文献15)。
噬菌体展示方法是已经通过在功能肽或蛋白和编码其的DNA之间以噬菌体颗粒的形式形成一一对应而实现体外高速选择的展示技术之一。这种噬菌体展示方法已经被应用于抗体选择，并且通过该方法获得的许多抗体已经被开发作为药物(非专利文献16)。此外，也已经建立了通过组合人人工抗体文库和噬菌体展示方法而获得特异性抗体的方法，而此类方法已经由多个公司实施，如MorphoSys的HuCAL (人组合抗体文库(HumanCombinatorial Antibody Library))所证明。
[文献列表]
[非专利文献]
非专利文献1: Mol Aspects Med. 2008; 29 (5): 258-289
非专利文献2: Semin Cell Dev Biol. 2009; 20 (2): 138-145
非专利文献3: Pathol Int. 2010; 60 (7): 477-496
非专利文献4: Genes Dev. 2003; 17 (1): 7-30
非专利文献5: Cancer Sci. 2007; 98 (5): 621-628
非专利文献6: Nat Rev Mol Cell Biol. 2005; 6 (1): 32-43
非专利文献7: Kelley’s Textbook of Rheumatology. 8th ed. Philadelphia,PA: Elsevier Saunders; 2009: 115-134
非专利文献8: Curr Opin Cell Biol. 2003; 15 (5): 598-606
非专利文献9: Nat Rev Cancer. 2008; 8 (12): 929-941
非专利文献10: J Biol Chem. 1999; 274 (41): 29251-29259
非专利文献11: Curr Pharm Des. 2009; 15 (20): 2349-2358
非专利文献12: Int J Cancer. 2006; 118 (2): 263-273
非专利文献13: Cancer Res. 2006; 66 (20): 9913-9920
非专利文献14: Int J Cancer. 2010; 127 (8): 1844-1856
非专利文献15: Biochem Biophys Res Commun. 2010; 402 (4): 651-657
非专利文献16: Rothe, C. et al. J. Mol. Biol. 2008; 376:1182-1200。
发明内容
本发明待解决的问题
本发明的一个目标是提供可用于预防或治疗癌症或抑制癌症转移的抗人ADAM28抗体。
解决问题的方法
为了解决上述问题，本发明人已经制备结合人ADAM28的多种抗ADAM28抗体。作为结果，他们已经发现，一些制备的抗人ADAM28抗体抑制ADAM28的酶活性，并且显示对癌细胞增殖的优异的抑制作用，和在体内模型中对癌转移的抑制作用。基于上述发现，他们已经进行了进一步研究，并且完成了本发明。
因此，本发明涉及以下内容。
[1] 特异性结合人ADAM28且具有抑制人ADAM28的酶活性的活性的抗体。
[2] [1]的抗体，其在包含SEQ ID NO: 21、22或23显示的氨基酸序列的表位处结合人ADAM28。
[3] [1]的抗体，其包含轻链可变区和重链可变区，其中
(1) 所述轻链可变区含有包含SEQ ID NO: 5中显示的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 6中显示的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQ ID NO: 7中显示的氨基酸序列的CDR3，并且
所述重链可变区含有包含SEQ ID NO: 8中显示的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ IDNO: 9中显示的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQ ID NO: 10中显示的氨基酸序列的CDR3；
(2) 所述轻链可变区含有包含SEQ ID NO: 5中显示的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 6中显示的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQ ID NO: 7中显示的氨基酸序列的CDR3，并且
所述重链可变区含有包含SEQ ID NO: 8中显示的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ IDNO: 9中显示的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQ ID NO: 10中显示的氨基酸序列的CDR3，
并且在选自SEQ ID NO: 5、6和7中显示的氨基酸序列的至少一条氨基酸序列中取代、缺失、插入和/或添加1至3个氨基酸，和/或
在选自SEQ ID NO: 8、9和10中显示的氨基酸序列的至少一条氨基酸序列中取代、缺失、插入和/或添加1至3个氨基酸；
(3) 所述轻链可变区含有包含SEQ ID NO: 11中显示的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 12中显示的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQ ID NO: 13中显示的氨基酸序列的CDR3，并且
所述重链可变区含有包含SEQ ID NO: 14中显示的氨基酸序列的CDR1，包含SEQID NO: 15中显示的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQ ID NO: 16中显示的氨基酸序列的CDR3；或
(4) 所述轻链可变区含有包含SEQ ID NO: 11中显示的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 12中显示的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQ ID NO: 13中显示的氨基酸序列的CDR3，并且
所述重链可变区含有包含SEQ ID NO: 14中显示的氨基酸序列的CDR1，包含SEQID NO: 15中显示的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQ ID NO: 16中显示的氨基酸序列的CDR3，
并且在选自SEQ ID NO: 11、12和13中显示的氨基酸序列的至少一条氨基酸序列中取代、缺失、插入和/或添加1至3个氨基酸，和/或
在选自SEQ ID NO: 14、15和16中显示的氨基酸序列的至少一条氨基酸序列中取代、缺失、插入和/或添加1至3个氨基酸；
(5) 所述轻链可变区含有包含SEQ ID NO: 24中显示的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 25中显示的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQ ID NO: 26中显示的氨基酸序列的CDR3，并且
所述重链可变区含有包含SEQ ID NO: 27中显示的氨基酸序列的CDR1，包含SEQID NO: 28中显示的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQ ID NO: 29中显示的氨基酸序列的CDR3；或
(6) 所述轻链可变区含有包含SEQ ID NO: 24中显示的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 25中显示的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQ ID NO: 26中显示的氨基酸序列的CDR3，并且
所述重链可变区含有包含SEQ ID NO: 27中显示的氨基酸序列的CDR1，包含SEQID NO: 28中显示的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQ ID NO: 29中显示的氨基酸序列的CDR3，
并且在选自SEQ ID NO: 24、25和26中显示的氨基酸序列的至少一条氨基酸序列中取代、缺失、插入和/或添加1至3个氨基酸，和/或
在选自SEQ ID NO: 27、28和29中显示的氨基酸序列的至少一条氨基酸序列中取代、缺失、插入和/或添加1至3个氨基酸。
[4] [3]的抗体，其中
(1') 所述轻链可变区包含SEQ ID NO: 17中显示的氨基酸序列，并且所述重链可变区包含SEQ ID NO: 18中显示的氨基酸序列；
(3') 所述轻链可变区包含SEQ ID NO: 19中显示的氨基酸序列，并且所述重链可变区包含SEQ ID NO: 20中显示的氨基酸序列；或
(5') 所述轻链可变区包含SEQ ID NO: 30中显示的氨基酸序列，并且所述重链可变区包含SEQ ID NO: 31中显示的氨基酸序列。
[5] 药物组合物，其包含[1] - [4]中任一项的抗体。
[6] 用于预防或治疗癌症的药剂，其包含[1] - [4]中任一项的抗体。
[7] 癌转移抑制剂，其包含[1] - [4]中任一项的抗体。
[8] 预防或治疗哺乳动物中的癌症的方法，其包括将有效量的[1] - [4]中任一项的抗体施用于所述哺乳动物。
[9] [8]的方法，其中所述哺乳动物是人。
[10] 抑制哺乳动物中的癌转移的方法，其包括将有效量的[1] - [4]中任一项的抗体施用于所述哺乳动物。
[11] [10]的方法，其中所述哺乳动物是人。
[12] [1] - [4]中任一项的抗体，其用于预防或治疗癌症。
[13] [1] - [4]中任一项的抗体，其用于抑制癌转移。
[14] [1] - [4]中任一项的抗体用于产生用于预防或治疗癌症的药剂的用途。
[15] [1] - [4]中任一项的抗体用于产生癌转移抑制剂的用途。
[16] 多核苷酸，其编码[1] - [4]中任一项的抗体。
[17] 载体，其包含[16]的多核苷酸。
[18] 转化体，其包含[17]的载体。
发明效果
根据本发明，提供了可用于预防或治疗癌症或抑制癌症转移的抗人ADAM28抗体。
附图说明
图1显示抗人ADAM28抗体的酶活性抑制作用。
图2显示抗人ADAM28抗体的体外癌细胞增殖抑制作用。
图3显示抗人ADAM28抗体的体内癌细胞增殖抑制作用。
图4显示抗人ADAM28抗体的体内癌细胞转移抑制作用。
图5显示抗人ADAM28抗体的体内癌细胞转移抑制作用。
具体实施方式
本发明提供了具有对人ADAM28特异性结合活性和抑制人ADAM28的酶活性的活性的抗体。
ADAM28是已知蛋白，并且其氨基酸序列和其cDNA序列也是已知的。ADAM28包括两种原型膜锚定形式(ADAM28m)和短分泌形式(ADAM28s)，这两者都涵盖在本发明的ADAM28中。人ADAM28m的代表性氨基酸序列显示于SEQ ID NO: 2，人ADAM28m的代表性cDNA序列显示于SEQ ID NO: 1，人ADAM28s的代表性氨基酸序列显示于SEQ ID NO: 4，且人ADAM28s的代表性cDNA序列显示于SEQ ID NO: 3。
本发明的抗体具有对人ADAM28的特异性结合活性。
“人ADAM28”意指ADAM28的氨基酸序列或核酸序列具有与人中天然表达的ADAM28的氨基酸序列或核苷酸序列相同或基本上相同的氨基酸序列或核酸序列。“基本上相同”意指目标氨基酸序列或核酸序列与人中天然表达的ADAM28的氨基酸序列或核酸序列具有不小于70％(优选不小于80％，更优选不小于90％，更优选不小于95％，最优选不小于99％)同一性，并且具有人ADAM28的功能。对于除了人以外的生物物种的术语，除了ADAM28以外的蛋白，基因和其片段也以相同方式进行解释。
抗体与抗原X的“特异性结合”意指在抗原-抗体反应中抗体与抗原X的结合亲和力比与非特异性抗原(例如，牛血清白蛋白(BSA))的结合亲和力更高。
本发明的抗体具有抑制人ADAM28的酶活性的活性。人ADAM28的酶活性具体意指人ADAM28裂解人IGFBP-3(胰岛素样生长因子结合蛋白-3)的活性。人ADAM28裂解人IGFBP-3的活性可以通过，例如，Cancer Res 2006; 66(20):9913-9920中描述的酶谱法分析来评估。
在本说明书中，“抗体”被用作涵盖全长抗体和其任何抗原结合片段(即“抗原结合部分”)或其单链的抗体。“抗体”是指含有通过二硫键连接的至少两条重链(H)和两条轻链(L) 的糖蛋白，或其抗原结合部分。每条重链由重链可变区(本文中简称为VH)和重链恒定区构成。重链恒定区由CH1、CH2和CH3的3个结构域构成。每条轻链由轻链可变区(本文中简称为VL)和轻链恒定区构成。轻链恒定区由单一结构域CL构成。VH和VL区被进一步细分为被称为互补决定区(CDR)的具有更高可变性的区域，其含有分散在其中的被称为框架区(FR)的更高保守区域。每个VH和VL由3个CDR和4个FR构成，它们以下列顺序排列，即，从氨基末端至羧基末端的FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。所述重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子(包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和常规补体系统的第一组分(C1q))的结合。
在本说明书中，抗体的“抗原结合部分”被用来指抗体的保留特异性结合抗原(例如，人ADAM28)的能力的一个或多个片段。已经阐明，抗体的抗原结合功能由全长抗体的片段行使。术语抗体的“抗原结合部分”中包括的结合片段的实例包括(i) Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域构成的单价片段，(ii) F(ab')2片段，含有由铰链区中的二硫键连接的两个Fab片段的二价片段，(iii) Fab'片段，具有铰链区部分的固有Fab (参见FUNDAMENTALIMMUNOLOGY, Paul ed., 3. sup. rd ed. 1993)，(iv) 由VH和CH1结构域构成的Fd片段，(v) 由抗体的单一臂中的VL和VH结构域构成的Fv片段，(vi) 由VH结构域构成的dAb片段(Ward等人, (1989) Nature 341:544-546)，(vii) 分离的互补决定区(CDR)，以及(viii)作为含有单一可变结构域和两个恒定区的重链可变区的纳米抗体。尽管作为Fv片段的两个结构域的VL和VH由不同基因编码，但它们可以通过重组技术通过合成接头连接以产生来自它们的单一蛋白链，其中，在该链中，VL和VH区彼此配对以形成单价分子(称为单链Fv(scFv)；参见，例如，Bird等人(1988) Science 242:423-426；和Huston等人, (1988)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883)。此类单链抗体也涵盖在抗体的“抗原结合部分”中。此类抗体片段由本领域普通技术人员通过已知的常规技术获得，并且以与未修饰抗体相同的方式筛选可用性。
本发明的抗体优选是单克隆抗体。“单克隆抗体”是指单一分子组成的抗体分子的制备物。单克隆抗体组成显示对具体表位的单一结合特异性和亲和力。
本发明的抗体优选是人抗体或人源化抗体。“人抗体”是指在框架区和CDR区两者中具有源自人种系免疫球蛋白序列的可变区的抗体。此外，当抗体含有恒定区时，恒定区也源自人种系免疫球蛋白序列。在本说明书中，“人抗体”也甚至涵盖包括不是由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基的实施方案(例如，通过在体外随机或定点诱变或在体内体细胞突变引入的突变)。此外，在本说明书中，“人源化抗体”的术语意指其中源自除了人以外的动物物种诸如小鼠的种系的CDR序列融合在人框架序列上的抗体。
在本说明书中，人抗体涵盖“重构的人抗体”。重构的人抗体是指其中在第二人受体抗体中使用第一人供体抗体中含有的至少一个CDR而不是第二人受体抗体的CDR的修饰的抗体。优选地，取代所有6个CDR。更优选地，使用第一人供体抗体的整个抗原结合区(例如，Fv、Fab或F(ab')2)代替第二人受体抗体中的对应区域。更优选地，将第一人供体抗体的Fab区可操作地连接至第二人受体抗体的适当的恒定区，以形成全长抗体。
重构的人抗体可以通过公开于，例如，EP125023、WO96/02576、上述文献16等中的常规基因重组技术来产生。具体地，例如，经设计以连接供体人抗体中期望的CDR和受体人抗体中期望的框架区(FR)的DNA序列通过PCR方法使用作为引物的经产生以具有与CDR和FR两者的末端区域重叠的区域的几个寡核苷酸来合成(参见WO98/13388中描述的方法)。将获得的DNA连接至编码人抗体恒定区或人抗体恒定区突变体的DNA，将其并入表达载体中，并将载体引入宿主以允许生产，由此可以获得重构的人抗体(参见EP125023、WO96/02576)。
此外，在本说明书中，人抗体涵盖“人工人抗体”。人工人抗体可以通过公开于，例如，上述文献16等中的常规基因重组技术来产生。
本发明的抗体还包括其中融合上述抗体和其它肽或蛋白的融合蛋白。融合蛋白的产生方法包括：连接编码本发明的抗体的多核苷酸和编码其它肽或多肽的多核苷酸以匹配框架，将其引入表达载体，并允许其在宿主中表达，并可以使用本领域普通技术人员已知的技术。作为待与本发明的抗体融合的其它肽，可以使用已知的肽，诸如FLAG (Hopp, T.P.等人, BioTechnology (1988) 6, 1204-1210)、由6个His(组氨酸)残基组成的6×His、10×His、人c-myc片段、VSV-GP片段、p18HIV片段、T7-标签、HSV-标签、E-标签、SV40T抗原片段、lck标签、α-微管蛋白片段、B-标签、蛋白C片段等。待与本发明的抗体融合的其它多肽的实例包括GST(谷胱甘肽-S-转移酶)、HA(流感血凝素)、免疫球蛋白恒定区、β-半乳糖苷酶、MBP(麦芽糖结合蛋白)等。将商购的编码此类肽或多肽的多核苷酸与编码本发明的抗体的多核苷酸融合，并且表达由此制备的融合多核苷酸，从而可以制备融合多肽。
本发明的抗体可以是与各种分子结合的缀合抗体，所述分子例如，聚合物物质，诸如聚乙二醇(PEG)，透明质酸等，放射性物质，荧光物质，发光物质，酶，毒素等。此类缀合抗体可以通过化学修饰获得的抗体而获得。本领域中已经建立了抗体的修饰方法(例如，US5057313、US5156840)。
本发明的抗体优选是分离的或纯化的。“分离的或纯化的”意指去除除了目标组分以外的组分的操作已被应用于天然存在的状态。本发明的分离或纯化的抗体的纯度(本发明的抗体的重量与总蛋白的重量的比率)通常为50％或更高，优选70％或更高，更优选90％或更高，最优选95％或更高(例如，基本上100％)。
在一个优选实施方案中，本发明的抗体在包含SEQ ID NO: 21、22或23显示的氨基酸序列的表位处结合人ADAM28。
包含SEQ ID NO: 21(ENFSKWRGS:hADAM28s 274-282)中显示的氨基酸序列的表位的实例包括由SEQ ID NO: 4中显示的氨基酸序列的连续部分序列组成的表位，其包含SEQID NO: 21中显示的氨基酸序列，且优选具有20或更少、更优选12或更少的氨基酸长度。作为包含SEQ ID NO: 21中显示的氨基酸序列的表位，具体地，可以提及由SEQ ID NO: 21中显示的氨基酸序列组成的表位，由SEQ ID NO: 35(FTLENFSKWRGS)中显示的氨基酸序列组成的表位，和由SEQ ID NO: 33(ENFSKWRGSVLS)中显示的氨基酸序列组成的表位。
包含SEQ ID NO: 22(TELWGPGRRT:hADAM28s 517-526)中显示的氨基酸序列的表位的实例包括由SEQ ID NO: 4中显示的氨基酸序列的连续部分序列组成的表位，其包含SEQ ID NO: 22中显示的氨基酸序列，且优选具有20或更少、更优选12或更少的氨基酸长度。作为包含SEQ ID NO: 22中显示的氨基酸序列的表位，具体地，可以提及由SEQ ID NO:22中显示的氨基酸序列组成的表位。
包含SEQ ID NO: 23(LFNAPLPT:hADAM28s 395-402)中显示的氨基酸序列的表位的实例包括由SEQ ID NO: 4中显示的氨基酸序列的连续部分序列组成的表位，其包含SEQID NO: 23中显示的氨基酸序列，且优选具有20或更少、更优选12或更少的氨基酸长度。作为包含SEQ ID NO: 23中显示的氨基酸序列的表位，具体地，可以提及由SEQ ID NO: 23中显示的氨基酸序列组成的表位，由SEQ ID NO: 34(LSNCLFNAPLPT)中显示的氨基酸序列组成的表位，和由SEQ ID NO: 35(CLFNAPLPTDII)中显示的氨基酸序列组成的表位。
作为本发明的抗体的优选实施方案，可以提及以下(1)-(4)中描述的抗体：
(1) 抗体，其包含轻链可变区和重链可变区，
其中所述轻链可变区含有包含SEQ ID NO: 5中显示的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 6中显示的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQ ID NO: 7中显示的氨基酸序列的CDR3，并且
所述重链可变区含有包含SEQ ID NO: 8中显示的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ IDNO: 9中显示的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQ ID NO: 10中显示的氨基酸序列的CDR3；
(2) 抗体，其包含轻链可变区和重链可变区，
其中所述轻链可变区含有包含SEQ ID NO: 5中显示的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 6中显示的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQ ID NO: 7中显示的氨基酸序列的CDR3，并且
所述重链可变区含有包含SEQ ID NO: 8中显示的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ IDNO: 9中显示的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQ ID NO: 10中显示的氨基酸序列的CDR3
并且在选自SEQ ID NO: 5、6和7中显示的氨基酸序列的至少一条氨基酸序列中取代、缺失、插入和/或添加1至3个氨基酸，和/或
在选自SEQ ID NO: 8、9和10中显示的氨基酸序列的至少一条氨基酸序列中取代、缺失、插入和/或添加1至3个氨基酸；
(3) 抗体，其包含轻链可变区和重链可变区，
其中所述轻链可变区含有包含SEQ ID NO: 11中显示的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 12中显示的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQ ID NO: 13中显示的氨基酸序列的CDR3，并且
所述重链可变区含有包含SEQ ID NO: 14中显示的氨基酸序列的CDR1，包含SEQID NO: 15中显示的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQ ID NO: 16中显示的氨基酸序列的CDR3；
(4) 抗体，其包含轻链可变区和重链可变区，
其中所述轻链可变区含有包含SEQ ID NO: 11中显示的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 12中显示的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQ ID NO: 13中显示的氨基酸序列的CDR3，并且
所述重链可变区含有包含SEQ ID NO: 14中显示的氨基酸序列的CDR1，包含SEQID NO: 15中显示的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQ ID NO: 16中显示的氨基酸序列的CDR3，
并且在选自SEQ ID NO: 11、12和13中显示的氨基酸序列的至少一条氨基酸序列中取代、缺失、插入和/或添加1至3个氨基酸，和/或
在选自SEQ ID NO: 14、15和16中显示的氨基酸序列的至少一条氨基酸序列中取代、缺失、插入和/或添加1至3个氨基酸；
(5) 抗体，其包含轻链可变区和重链可变区，
其中所述轻链可变区含有包含SEQ ID NO: 24中显示的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 25中显示的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQ ID NO: 26中显示的氨基酸序列的CDR3，并且
所述重链可变区含有包含SEQ ID NO: 27中显示的氨基酸序列的CDR1，包含SEQID NO: 28中显示的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQ ID NO: 29中显示的氨基酸序列的CDR3；和
(6) 抗体，其包含轻链可变区和重链可变区，
其中所述轻链可变区含有包含SEQ ID NO: 24中显示的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO: 25中显示的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQ ID NO: 26中显示的氨基酸序列的CDR3，并且
所述重链可变区含有包含SEQ ID NO: 27中显示的氨基酸序列的CDR1，包含SEQID NO: 28中显示的氨基酸序列的CDR2，和包含SEQ ID NO: 29中显示的氨基酸序列的CDR3，
并且在选自SEQ ID NO: 24、25和26中显示的氨基酸序列的至少一条氨基酸序列中取代、缺失、插入和/或添加1至3个氨基酸，和/或
在选自SEQ ID NO: 27、28和29中显示的氨基酸序列的至少一条氨基酸序列中取代、缺失、插入和/或添加1至3个氨基酸。
在(2)、(4)和(6)的实施方案中，待取代、缺失、插入和/或添加的氨基酸数目没有特别限制，只要所述抗体具有对人ADAM28的特异性结合活性，并且具有抑制人ADAM28的酶活性的活性。它优选为每一个CDR序列2个氨基酸以内，更优选一个氨基酸。其中取代、缺失、插入和/或添加氨基酸的CDR序列的数目没有特别限制，只要所述抗体具有对人ADAM28的特异性结合活性，并且具有抑制ADAM28的酶活性的活性。它优选为每一个轻链可变区2以内，更优选为一，并且优选为每一个重链可变区2以内，更优选为1。可以在轻链可变区和重链可变区两者或它们的任一者中进行氨基酸的取代、缺失、插入和/或添加。
在(2)、(4)和(6)的实施方案中，优选仅在轻链可变区中CDR3的氨基酸序列中取代、缺失、插入和/或添加1 - 3(优选1或2，更优选1)个氨基酸。
用于用其它期望的氨基酸取代一个或多个氨基酸残基的方法的实例包括定点诱变法(Hashimoto-Gotoh, T, Mizuno, T, Ogasahara, Y, 和Nakagawa, M. (1995) Anoligodeoxyribonucleotide-directed dual amber method for site-directedmutagenesis. Gene 152, 271-275; Zoller, MJ, 和Smith, M. (1983)Oligonucleotide-directed mutagenesis of DNA fragments cloned into M13vectors. Methods Enzymol. 100, 468-500; Kramer, W, Drutsa, V, Jansen, HW,Kramer, B, Pflugfelder, M, 和Fritz, HJ (1984) The gapped duplex DNA approachto oligonucleotide-directed mutation construction. Nucleic Acids Res. 12,9441-9456; Kramer W, 和Fritz HJ (1987) Oligonucleotide-directed constructionof mutations via gapped duplex DNA Methods. Enzymol. 154, 350-367, Kunkel, TA(1985) Rapid and efficient site-specific mutagenesis without phenotypicselection. Proc Natl Acad Sci U S A. 82, 488-492)。使用这些方法，抗体中期望的氨基酸可以被其它目标氨基酸取代。此外，使用文库技术诸如框架改组(Mol Immunol.2007Apr; 44(11):3049-60)和CDR修复(US2006 /0122377)等，框架或CDR中的氨基酸也可以被其它适当的氨基酸取代。
在本发明的抗体中，作为待连接至CDR的抗体的框架区(FR)，选择使得CDR形成良好抗原结合位点的框架。尽管待用于本发明的抗体的FR没有特别限制并且可以使用任何FR，但优选使用人抗体的FR。作为人抗体的FR，可以使用具有天然序列的FR，或者可以根据需要取代、缺失、添加和/或插入等具有天然序列的框架区中的一个或多个氨基酸，从而使得CDR将形成适当的抗原结合位点。例如，可以通过测量和评价具有含取代的氨基酸的FR的抗体与抗原的结合活性来选择具有期望特性的突变体FR序列(Sato, K.等人, CancerRes.(1993)53, 851-856)。
在(1)和(2)的抗体中，人抗体的Vk1的FR(Kabat数据库)优选用于轻链，并且人抗体的VH5的FR(Kabat数据库)优选用于重链。
在(3)和(4)的抗体中，人抗体的Vk2的FR(Kabat数据库)优选用于轻链，并且人抗体的VH6的FR(Kabat数据库)优选用于重链。
在(5)和(6)的抗体中，人抗体的Vk2的FR(Kabat数据库)优选用于轻链，并且人抗体的VH3的FR(Kabat数据库)优选用于重链。
用于本发明的抗体的恒定区没有特别限制，并且可以使用任何恒定区。用于本发明的抗体的恒定区的优选实例包括人抗体的恒定区(源自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM等的恒定区)。例如，Cγ1、Cγ2、Cγ3、Cγ4、Cμ、Cδ、Cα1、Cα2、Cε可用于H链中，并且Cκ、Cλ可用于L链中。
在(1) - (4)的抗体中，人抗体的Cκ的恒定区优选用于轻链，并且人抗体的Cγ1的恒定区优选用于重链。
在(5)和(6)的抗体中，人抗体的Cκ的恒定区优选用于轻链，并且人抗体的Cγ1的恒定区优选用于重链。
优选地，本发明的抗体包括以下：
(1') 包含轻链可变区和重链可变区的抗体，其中所述轻链可变区包含SEQ IDNO: 17中显示的氨基酸序列，并且所述重链可变区包含SEQ ID NO: 18中显示的氨基酸序列；
(3') 包含轻链可变区和重链可变区的抗体，其中所述轻链可变区包含SEQ IDNO: 19中显示的氨基酸序列，并且所述重链可变区包含SEQ ID NO: 20中显示的氨基酸序列；和
(5') 包含轻链可变区和重链可变区的抗体，其中所述轻链可变区包含SEQ IDNO: 30中显示的氨基酸序列，并且所述重链可变区包含SEQ ID NO: 31中显示的氨基酸序列。
分别地，上述(1')的抗体对应于上述(1)的抗体的优选实施方案，并且上述(3')的抗体对应于上述(3)的抗体的优选实施方案。分别地，上述(5')的抗体对应于上述(5)的抗体的优选实施方案。
本发明提供了含有编码上述本发明的抗体的核苷酸序列的多核苷酸。所述多核苷酸可以是DNA或RNA，或DNA/ RNA嵌合体。所述多核苷酸可以是双链或单链的。当所述多核苷酸是双链的时，它可以是双链DNA、双链RNA或DNA:RNA杂合体。
本发明的多核苷酸涵盖含有编码本发明的抗体的重链可变区和轻链可变区两者的核苷酸序列的多核苷酸，和含有编码本发明的抗体的重链可变区的核苷酸序列的多核苷酸和含有编码本发明的抗体的轻链可变区的核苷酸序列的多核苷酸的组合。
本发明的多核苷酸可以基于本发明的抗体的氨基酸序列的信息、已知序列信息和本说明书中序列表中描述的序列信息并且通过利用已知的基因重组技术容易地制备。例如，合适的引物基于序列信息设计，编码构成本发明的抗体的元件的DNA通过PCR反应扩增，DNA片段通过适当的酶诸如连接酶等连接，由此可以产生本发明的多核苷酸。或者，编码每个元件的多核苷酸可以基于本发明的抗体的氨基酸序列的信息通过多核苷酸合成仪进行合成。
获得的编码本发明的抗体的多核苷酸可以，根据目的，直接使用，或者当期望时用限制性酶消化或添加接头后使用。所述多核苷酸可以具有ATG作为5'末端侧上的翻译起始密码子，并且可以具有TAA、TGA或TAG作为3'末端侧上的翻译终止密码子。这些翻译起始密码子和翻译终止密码子可以使用合适的合成的DNA适配体进行添加。
本发明的多核苷酸优选是分离的或纯化的。本发明的分离或纯化的多核苷酸具有通常50％或更高，优选70％或更高，更优选90％或更高，最优选95％或更高(例如，基本上100％)的纯度(本发明的多核苷酸的重量与总多核苷酸重量的比率)。
本发明提供了包含上述本发明的多核苷酸的载体。本发明的载体涵盖包含含有编码本发明的抗体的重链可变区和轻链可变区两者的核苷酸序列的多核苷酸的载体，和包含含有编码本发明的抗体的重链可变区的核苷酸序列的多核苷酸的载体和包含含有编码本发明的抗体的轻链可变区的核苷酸序列的多核苷酸的载体的组合。所述载体优选是分离的或纯化的。所述载体的实例包括表达载体、克隆载体等，其可以根据对象来选择。优选地，所述载体是表达载体。表达载体可以表达本发明的抗体。表达载体可以通过将本发明的多核苷酸可操作地连接至合适的表达载体中启动子的下游来产生。载体的种类包括，例如，质粒载体、病毒载体等，其可以根据待使用的宿主适当地选择。
作为宿主，使用埃希氏菌属(Escherichia)(大肠杆菌(Escherichia coli)等)、芽孢杆菌属(Bacillus)(枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)等)、酵母(酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)等)、昆虫细胞(源自甘蓝夜蛾(Mamestra brassicae)的幼虫的建立的细胞系(草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞；Sfcell )等)、昆虫(家蚕(Bombyx mori)的幼虫等)、哺乳动物细胞(大鼠神经细胞，猴细胞(COS-7等)、中国仓鼠细胞(CHO细胞等)等)等。
哺乳动物的实例包括，但不限于，实验动物诸如啮齿类动物，诸如小鼠、大鼠、仓鼠和豚鼠等，兔等，家畜动物诸如猪、牛、山羊、马、绵羊、貂等，伴侣动物诸如狗、猫等，灵长类动物诸如人、猴、食蟹猴(Macaca fascicularis)、恒河猴(Macaca mulatta)、狨猴、猩猩、黑猩猩等，等。
质粒载体的实例包括源自大肠杆菌的质粒载体(例如，pBR322、pBR325、pUC12、pUC13)，源自枯草芽孢杆菌的质粒载体(例如，pUB110、pTP5、pC194)，源自酵母的质粒载体(例如，pSH19、pSH15)等，其可以根据待使用的宿主种类和使用对象适当地选择。
病毒载体的种类可以根据待使用的宿主种类和使用对象适当地选择。例如，当昆虫细胞被用作宿主时，可以使用杆状病毒载体等。当哺乳动物细胞被用作宿主时，可以使用逆转录病毒载体，诸如莫洛尼鼠白血病病毒载体、慢病毒载体、辛德毕斯病毒载体等、腺病毒载体、疱疹病毒载体、腺伴随病毒载体、细小病毒载体、痘苗病毒载体、仙台病毒载体等。
启动子可以根据待使用的宿主种类进行选择，并且可以选择能够在宿主中起始转录的启动子。例如，当宿主是埃希氏菌属时，trp启动子、lac启动子、T7启动子等是优选的。当宿主是芽孢杆菌属时，SPO1启动子、SPO2启动子、penP启动子等是优选的。当宿主是酵母时，PHO5启动子、PGK启动子等是优选的。当宿主是昆虫细胞时，多角体蛋白启动子、P10启动子等是优选的。当宿主是哺乳动物细胞时，亚基因组(26S)启动子、CMV启动子、SRα启动子等是优选的。
本发明的载体可以含有用于抗体分泌的信号序列。作为当抗体产生于大肠杆菌的周质中时抗体分泌的信号序列，可以使用pelB信号序列(Lei, S. P.等人J. Bacteriol.(1987) 169, 4379)。
当期望时，本发明的载体可以各自以可操作方式含有增强子、剪接信号、多聚腺苷酸附加信号、选择标记、SV40复制原点(以下有时简称为SV40ori)等。选择标记的实例包括二氢叶酸还原酶(以下有时简称为dhfr)基因[甲氨蝶呤(MTX)抗性]、氨苄青霉素抗性基因(有时简称为Ampr)、新霉素抗性基因(有时简称为Neor，G418抗性)等。
通过经由本身已知的基因转移方法(例如，脂质体转染法、磷酸钙法、显微注射法、原生质体(proplast)融合法、电穿孔法、DEAE葡聚糖法、通过基因枪(Gene Gun)的基因转移法等)将上述本发明的上述载体引入上述宿主，可以产生具有引入其中的载体的转化体(本发明的转化体)。当表达载体被用作待引入的载体时，转化体可以表达本发明的抗体。本发明的转化体可用于产生本发明的抗体等。
本发明的抗体可以通过经由本身已知的方法根据宿主的种类培养本发明的转化体，并从培养物中分离本发明的抗体来生产。当宿主是埃希氏菌属时，将转化体在通常约15-43℃在适当的培养基诸如LB培养基、M9培养基等中培养约3-24小时。当宿主是芽孢杆菌属时，将转化体在通常约30-40℃在适当的培养基中培养约6-24小时。当宿主是酵母时，将转化体在通常约20℃-35℃在适当的培养基诸如Burkholder氏培养基等中培养约24-72小时。当宿主是昆虫细胞或昆虫时，将转化体在通常约27℃在适当的培养基诸如用约10％牛血清添加的Grace氏昆虫培养基等中培养约3–5天。当宿主是动物细胞时，将转化体在通常约30℃-40℃在适当的培养基诸如用约10％牛血清添加的MEM培养基等中培养约15–60小时。在任何培养中，必要时可以进行通气和搅拌。
至于通过基因工程的抗体生产方法，例如，可以提及Co, M. S. 等人, J.Immunol. (1994) 152, 2968-2976; Better, M. 和Horwitz, A. H., Methods Enzymol.(1989) 178, 476-496; Pluckthun, A.和Skerra, A., Methods Enzymol. (1989) 178,497-515; Lamoyi, E., Methods Enzymol. (1986) 121, 652-663; Rousseaux, J. 等人, Methods Enzymol. (1986) 121, 663-669; Bird, R. E.和Walker, B. W., TrendsBiotechnol. (1991) 9, 132-137等。
从培养物分离和纯化本发明的抗体不以任何方式限制，并且可以采用通常用于抗体纯化的分离和纯化方法。例如，抗体可以通过适当地选择和组合层析柱、滤器、超滤、盐析、溶剂沉淀、溶剂提取、蒸馏、免疫沉淀、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚焦、透析、重结晶等分离和纯化。
层析的实例包括亲和层析、离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤、反相层析、吸附层析等 (Strategies for Protein Purification and Characterization: A LaboratoryCourse Manual. Ed Daniel R. Marshak 等人, Cold Spring Harbor LaboratoryPress, 1996)。这些层析可以通过使用液相层析，例如，液相层析诸如HPLC、FPLC等进行。待用于亲和层析的柱的实例包括蛋白A柱和蛋白G柱。例如，作为使用蛋白A的柱，可以提及Hyper D、POROS、Sepharose FF(由GE Amersham Biosciences制造)等。本发明还涵盖通过这些纯化方法高度纯化的抗体。
此外，本发明提供了含有上述本发明的抗体作为活性成分的药物组合物。本发明的药物组合物可用作癌症的预防或治疗剂；癌症增殖抑制剂；癌转移抑制剂等。尽管癌症的种类没有特别限制，只要它可以通过本发明的抗体实现对癌症的预防或治疗效果；癌症增殖抑制效果；或癌症转移抑制效果，但可以提及肝癌、结肠直肠癌、肾癌、黑色素瘤、胰腺癌、甲状腺癌、胃癌、肺癌(小细胞肺癌、非小细胞肺癌)、脑肿瘤、子宫癌、乳腺癌、多发性骨肉瘤、卵巢癌、慢性白血病、前列腺癌、急性淋巴细胞性白血病、生殖细胞瘤、急性骨髓性白血病、恶性淋巴瘤、绒毛状癌、儿科恶性肿瘤、胆囊或胆管癌等。在一个优选实施方案中，作为本发明的抗体的应用目标的癌症是表达人ADAM28的癌症。癌症是否表达人ADAM28可以通过Western印迹、RT-PCR等来评估。
尽管不受理论束缚，但ADAM28通过降解IGFBP-3抑制IGF-1/IGFBP-3复合物的形成，并且通过IGF-1促进癌细胞增殖。本发明的抗体通过抑制ADAM28对IGFBP-3的降解而抑制通过IGF-1的癌细胞增殖。因此，在一个实施方案中，作为本发明的抗体的应用目标的癌症是IGF-1敏感的癌症(即，显示IGF-1依赖的增殖促进的癌症)。癌症是否是IGF-1敏感的可以通过Western印迹、RT-PCR等通过分析癌症中的IGF-1受体的表达来评估。
尽管不受理论束缚，但ADAM28通过降解血管性假血友病因子(vWF)抑制vWF对癌细胞的细胞凋亡的诱导。本发明的抗体通过抑制ADAM28对vWF的降解促进vWF对癌细胞的细胞凋亡的诱导，作为其结果，所述抗体抑制癌症增殖和转移。因此，在一个实施方案中，作为本发明中的应用目标的癌症是vWF敏感的癌症(即，允许vWF对细胞凋亡的诱导的癌症)。癌症是否是vWF敏感的可以通过以下评估：在vWF包被板上培养癌细胞，并且通过，例如，J NatlCancer Inst 2012;104:906-922中描述的方法，分析DNA的片段化。
当本发明的抗体被“包含作为活性成分”时，意指本发明的抗体被包含作为至少一种活性成分，并且不限制其含量。本发明的药物组合物可以含有其它一种或多种活性成分连同本发明的抗体。
本发明的抗体可以根据常规方法(例如，Remington's Pharmaceutical Science,最新版, Mark Publishing Company, Easton, U.S.A)进行配制。此外，如果需要，它可以含有药学上可接受的载体和/或添加剂。例如，它可以含有表面活性剂(PEG、Tween等)、赋形剂、抗氧化剂(抗坏血酸等)、着色剂、调味剂、防腐剂、稳定剂、缓冲剂(磷酸盐、柠檬酸盐、其它有机酸等)、螯合剂(EDTA等)、悬浮剂、等渗剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、矫味剂等。不限于这些，本发明的药物组合物可以适当地含有其它常规载体。具体实例包括轻质无水硅酸、乳糖、结晶纤维素、甘露醇、淀粉、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯乙缩醛二乙基氨基乙酸酯(polyvinylacetaldiethylaminoacetate)、聚乙烯吡咯烷酮、明胶、中链脂肪酸三甘油酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油60、蔗糖、羧甲基纤维素、玉米淀粉、无机盐等。它也可以含有其它低分子量多肽、血清白蛋白、明胶和蛋白，诸如免疫球蛋白等，以及氨基酸。当配制用于注射的水溶液时，将本发明的抗体溶解于，例如，含有盐水、葡萄糖或其它助剂的等渗溶液中。助剂的实例包括D-山梨醇、D-甘露糖、D-甘露醇、和氯化钠，并且可以与合适的增溶剂，例如醇(乙醇等)、多元醇(丙二醇、PEG等)、非离子表面活性剂(聚山梨醇酯80、HCO-50)等组合使用。
在必要时，也可以将多肽包括在微胶囊(由羟甲基纤维素、明胶、聚[甲基丙烯酸甲酯]等制成的微胶囊)中，或配制作为胶体药物递送系统(脂质体、白蛋白微球、微乳剂、纳米颗粒和纳米胶囊等) (参见Remington's Pharmaceutical Science 第16版 &, Oslo Ed.(1980)等)。此外，配制药物作为缓释的药物的方法也是已知的，并且适用于多肽(Langer等人, J. Biomed. Mater. Res. (1981)15: 167-277; Langer, Chem. Tech. (1982)12:98-105; 美国专利号 3,773,919; EP-A-58,481; Sidman 等人, Biopolymers (1983)22: 547-56; EP号 133,988)。此外，也可以通过将透明质酸酶添加至本药剂或与本药剂掺合以增加待皮下施用的液体量(例如，WO 2004/078140等)。
药物组合物中本发明的抗体的含量为，例如，整个药物组合物的约0.01 - 100wt%，优选0.1 - 99.9 %。
尽管本发明的药物组合物可以口服和肠胃外施用，但其优选肠胃外施用。具体地，通过注射或经皮施用将其施用于患者。作为注射的剂型的实例，可以通过静脉内注射、肌内注射、皮下注射等全身或局部施用。也可以通过局部注射、特别是肌内注射将其施用于治疗部位或其附近。经皮施用的剂型的实例包括软膏、凝胶、乳膏、膏药、贴剂等，其可以全身或局部施用。此外，施用方法可以根据患者的年龄和症状适当地选择。剂量可以选自，例如，作为本发明的抗体的0.5 mg–10 mg/kg体重的范围。然而，本发明的药物组合物不受这些剂量的限制。
本说明书中引用的所有参考文献，包括出版物、专利文献等，单独地且明确地通过引用并入本文，至其全部内容已明确地在本文公开的程度。
实施例
本发明在下面通过参照实施例更详细地进行解释，所述实施例不应当被解释为限制性的。实施例中的各种基因操作遵循Molecular cloning第三版(Cold Spring HarborLab.Press, 2001)中描述的方法。
[实施例1]
抗原和抗体的产生
(1) 人ADAM28重组蛋白(rhADAM28)的制备
制备全长rhADAM28并通过Biochem Biophys Res Commun.2004; 315:79-84中描述的方法进行纯化。
(2) rhADAM28的生物素化
根据EZ-Link NHS-PEO4-Biotin (Thermo Scientific)的标准方案将纯化的rhADAM28生物素化，并且通过使用BCA蛋白测定试剂盒(由PIERCE制造)测定浓度。
(3) 通过噬菌体展示方法选择抗人ADAM28人抗体克隆
在4℃将生物素化的rhADAM28固定在链霉抗生物素蛋白包被的磁珠(DynabeadsMyOne Streptavidin T1磁珠，由Invitrogen制造，100 μl)上1小时，并且用1 ml PBST (含有0.05% Tween 20的PBS)洗涤5次。使用用于人抗体噬菌体文库的HuCAL GOLD (由MorphoSys制造)，根据WO 2007/042309、WO 2006/122797等中描述的方法进行抗体选择。将rhADAM28-固定的珠添加至该噬菌体文库以结合抗原特异性抗体。将磁珠回收并洗涤数次，并将噬菌体从磁珠洗脱下来。用洗脱的噬菌体感染大肠杆菌细胞，并在37℃培养过夜。从噬菌体感染的大肠杆菌细胞拯救噬菌体的操作遵循一般方法(Molecular cloning 第三版Cold Spring Harbor Lab.Press, 2001)。将上述选择轮次重复几次，以浓缩展示对于抗原特异性的抗体的噬菌体。
(4) 通过ELISA筛选抗人ADAM28人抗体
将浓缩操作后获得的Fab基因的合并物亚克隆到大肠杆菌表达载体中。根据WO2006/122797等中描述的方法，表达Fab抗体，并通过ELISA方法筛选抗原特异性抗体。根据Strep-Tactin柱(由IBA制造)的标准方法从大肠杆菌裂解物的可溶性级分纯化Fab抗体。此外，通过SDS-PAGE证实纯化的抗体的纯度，并且通过使用BCA蛋白测定试剂盒(由PIERCE制造)测定浓度。
(5) 抗人ADAM28人抗体克隆的碱基序列的分析
培养获得的2个大肠杆菌克隆(211-12、211-14)，并且将质粒回收(QIAprep Spin微量制备试剂盒：由QIAGEN制造)，并用于碱基序列分析。表1显示各个克隆的CDR (互补决定区)的氨基酸序列。每个克隆的可变区的全长氨基酸序列分别显示于SEQ ID NO: 17 –20中。
表1
Figure 508419DEST_PATH_IMAGE001
(6) 抗人ADAM28人抗体克隆的IgG抗体的制备
将获得的2个克隆的Fab抗体基因亚克隆以构建IgG表达载体(重链的恒定区是IgG1)。根据Lipofectamine (由Invitrogen制造)的标准方法用这些表达载体转染HEK293T细胞，并回收培养72小时后的培养上清液。作为培养基，使用用10% Ultra Low IgG FBS(由Invitrogen制造)补充的DMEM (Sigma)。从培养上清液，使用rProteinA SepharoseFast Flow (由GE healthcare制造)通过标准方法纯化IgG抗体。通过SDS-PAGE证实纯化后的蛋白显示单一条带，并且通过使用BCA蛋白测定试剂盒(由PIERCE制造)测定浓度。
(7) 抗人ADAM28小鼠单克隆抗体的制备
使用纯化的rhADAM28作为抗原，建立针对人ADAM28蛋白的单克隆抗体。首先通过ELISA使用rhADAM28选择五个克隆，并且选择克隆297-2F3作为候选的针对人ADAM28的抗体。单克隆抗体(297-2F3)的单反应性通过针对重组人ADAM28的免疫印迹来测定。
[实施例2]
抗人ADAM28抗体对人ADAM28酶活性的抑制作用
将rhADAM28和抗ADAM28抗体以图中所示的重量比孵育2小时，添加IGFBP-3 (100ng)并在37℃孵育24小时，并且使用含有5 mM EDTA的SDS-样品缓冲液终止反应。其后，将反应产物应用至SDS-PAGE(10％丙烯酰胺凝胶)，并且IGFBP-3的降解水平通过免疫印迹法使用抗IGFBP-3抗体(Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA)进行检测(图1)。211-14和211-12抗体两者均抑制人ADAM28对IGFBP-3的降解。
[实施例3]
抗人ADAM28抗体对乳腺癌细胞系的增殖抑制作用
IGF-I对MDA-MB231细胞的促有丝分裂作用使用5-溴-2’脱氧-尿苷(BrdUrd) 标记和检测试剂盒III (Roche Molecular Biochemicals, Basel, Switzerland)根据制造商的说明进行测量。同步化和生长停滞后，细胞用含有1% FBS的DMEM中的1 μg/mL IGF-I处理。同步化和生长停滞后，细胞用含有1% FBS的DMEM中的1 μg/mL IGF-I处理。6小时后，将BrdUrd (10 μmol/L)添加至培养基并再培养42小时。为了测定ADAM28活性对IGF-I的促有丝分裂作用的贡献，将细胞与1或5 μg/mL抗ADAM28抗体孵育30分钟，然后IGF-I处理，然后在IGF-I存在的情况下与BrdUrd反应42小时(图2)。211-14、211-12和297-2F3抗体都抑制MDA-MB231细胞的体外生长。
[实施例4]
抗人ADAM28抗体对癌细胞体内增殖的抑制作用
组成型表达荧光素酶的ADAM28高表达乳腺癌细胞系MDA-MB231 ffLuc-cp156通过慢病毒载体制备，并且移植(2 x 10e6个细胞)至NOD/SCID小鼠(六周龄雄性，Charles RiverLaboratories International Inc, Washington, MA)的乳房皮下组织。移植后，抗ADAM28抗体(2 mg/kg/小鼠)以2天时间间隔局部注射5次，并且检查对肿瘤生长的抑制作用。腹膜内施用D-荧光素(150 mg/Kg) (Promega Co, Madison, MI)之后，发光通过体内成像系统(IVIS)-100 (Xenogen Co., Alameda, CA)检测(图3)。211-14和211-12抗体两者都抑制MDA-MB231 ffLuc-cp156的体内增殖。
[实施例5]
抗人ADAM28抗体对癌细胞体内转移的抑制作用
将雄性NOD/SCID小鼠(6周龄)(Charles River Laboratories International,Inc., Wilmington, MA)用PC-9ffLuc-cp156细胞(300 μl PBS中的1x106个细胞)注射至尾静脉。通过使用用于检测荧光素酶活性的体内成像系统(IVIS)-100(Xenogen Co., Alameda,CA)根据制造商的说明的生物发光成像来监测肺转移。在成像过程中，将小鼠用异氟烷麻醉并接受D-荧光素(150 mg/kg; Promega Co., Madison, WI)的腹膜内注射，并且1分钟后，计数来自动物整个身体的光子。为了检查中和性抗ADAM28抗体对肺转移的作用，将PC-9ffLuc-cp156细胞与5 μg/ml抗人ADAM28小鼠单克隆抗体(297-2F3)或5 μg/ml非免疫IgG在4℃孵育2小时，然后静脉注射至小鼠(每组n =9只小鼠)(图4)。通过297-2F3施用抑制癌转移。
[实施例6]
在实施例4中，在移植癌细胞后6周时，使用从小鼠的各个器官提取的RNA进行使用荧光素酶特异性引物的RT-PCR，证实肿瘤来源的基因表达的存在或不存在，并且检查非人为转移的存在或不存在(图5)。211-14和211-12抗体两者均抑制癌细胞的微转移。
[实施例7]
使用来自产生上述实施例1(7)中获得的小鼠抗人ADAM28单克隆抗体297-2F3的杂交瘤的cDNA，PCR扩增所述抗体的可变区，亚克隆至克隆载体，并且分析所述区域的碱基序列。表2显示CDR (六个互补决定区)的氨基酸序列。轻链和重链可变区的全长氨基酸序列分别显示于SEQ ID NO: 146和147中。
表2
Figure 97664DEST_PATH_IMAGE002
[实施例8]
然后，通过参考WO 98/13388中描述的方法，小鼠抗人ADAM28单克隆抗体297-2F3通过将抗体的各CDR嫁接至人抗体框架而进行人源化。因此获得的人源化297-2F3的轻链和重链可变区的全长氨基酸序列分别显示于SEQ ID NO: 30和31中。
[实施例9]
表位(1)的鉴定
使用固定有人ADAM28s的部分肽的肽阵列，针对抗人ADAM28抗体211-12和297-2F3进行表位定位。具体地，如下所示，制备由具有12个氨基酸残基(具有3个氨基酸残基偏移)的残基数目的肽组成的肽阵列，用于覆盖人ADAM28s的蛋白酶结构域至C端的序列。HRP标记的抗人ADAM28s抗体与肽阵列反应。
Figure 877401DEST_PATH_IMAGE003
Figure 475872DEST_PATH_IMAGE004
作为结果，211-12特异性结合上述肽#25和#26。结果表明，211-12的表位含有肽#25和#26共有的SEQ ID NO: 21 (ENFSKWRGS)中显示的氨基酸序列。
297-2F3特异性结合上述肽#65和#66。在肽#65和#66共有的氨基酸序列(CLFNAPLPT:SEQ ID NO: 145)中，半胱氨酸在大多数情况下未被抗体识别。因此，表明297-2F3的表位含有SEQ ID NO: 23 (LFNAPLPT)中显示的氨基酸序列。通过斑点印迹证实，297-2F3特异性识别SEQ ID NO: 23作为表位，所述斑点印迹使用强制表达融合蛋白的大肠杆菌的裂解物，所述融合蛋白包含添加至MBP的C端的SEQ ID NO: 23中显示的氨基酸序列。
[实施例9]
表位(2)的鉴定
分别制备融合蛋白，所述融合蛋白包含添加至MBP的C端的人ADAM28s(SEQ ID NO:4)的以下区域的部分序列：
399-540、399-497、491-540、491-510、501-520、511-530、521-540、513-522、515-524、517-526、519-528。
作为对照，制备融合蛋白，所述融合蛋白包含添加至MBP的C端的人ADAM28m (SEQID NO: 2)的以下区域的部分序列：
517-526 (人ADAM28m，作为对照)。
抗人ADAM28抗体211-14对上述融合蛋白的反应性通过Western印迹进行评估。作为结果，211-14强烈结合含有人ADAM28s的区域399-540、491-540、511-530 和517-526的部分序列的融合蛋白。结果表明，211-14的表位含有人ADAM28s的517-526区域(TELWGPGRRT,SEQ ID NO: 22)。
Figure 962348DEST_PATH_IMAGE005
Figure 784811DEST_PATH_IMAGE006
Figure 51844DEST_PATH_IMAGE007
Figure 250744DEST_PATH_IMAGE008
Figure 627280DEST_PATH_IMAGE009
工业实用性
根据本发明，提供了适用于预防或治疗癌症的抗人ADAM28抗体。
本申请基于在美国提交的临时专利申请号61/724,484 (申请日：2012年11月9日)，其内容完全并入本文。
序列表
<110> 基因先端领域株式会社
学校法人庆应义塾
<120> 用于治疗癌症的抗ADAM28抗体
<130> 092083
<150> US 61/724,484
<151> 2012-11-09
<160> 147
<170> PatentIn version 3.4
<210> 1
<211> 3220
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<221> CDS
<222> (84)..(2411)
<400> 1
tcactggaga ggaggcaggg acagacccag cagcacccac ctgagcgaga agagcagaca 60
ccgtgctcct ggaatcaccc agc atg ttg caa ggt ctc ctg cca gtc agt ctc 113
Met Leu Gln Gly Leu Leu Pro Val Ser Leu
1 5 10
ctc ctc tct gtt gca gta agt gct ata aaa gaa ctc cct ggg gtg aag 161
Leu Leu Ser Val Ala Val Ser Ala Ile Lys Glu Leu Pro Gly Val Lys
15 20 25
aag tat gaa gtg gtt tat cct ata aga ctt cat cca ctg cat aaa aga 209
Lys Tyr Glu Val Val Tyr Pro Ile Arg Leu His Pro Leu His Lys Arg
30 35 40
gag gcc aaa gag cca gag caa cag gaa caa ttt gaa act gaa tta aag 257
Glu Ala Lys Glu Pro Glu Gln Gln Glu Gln Phe Glu Thr Glu Leu Lys
45 50 55
tat aaa atg aca att aat gga aaa att gca gtg ctt tat ttg aaa aaa 305
Tyr Lys Met Thr Ile Asn Gly Lys Ile Ala Val Leu Tyr Leu Lys Lys
60 65 70
aac aag aac ctc ctt gca cca ggc tac acg gaa aca tat tat aat tcc 353
Asn Lys Asn Leu Leu Ala Pro Gly Tyr Thr Glu Thr Tyr Tyr Asn Ser
75 80 85 90
act gga aag gag atc acc aca agc cca caa att atg gat gat tgt tat 401
Thr Gly Lys Glu Ile Thr Thr Ser Pro Gln Ile Met Asp Asp Cys Tyr
95 100 105
tat caa gga cat att ctt aat gaa aag gtt tct gac gct agc atc agc 449
Tyr Gln Gly His Ile Leu Asn Glu Lys Val Ser Asp Ala Ser Ile Ser
110 115 120
aca tgt agg ggt cta agg ggc tac ttc agt cag ggg gat caa aga tac 497
Thr Cys Arg Gly Leu Arg Gly Tyr Phe Ser Gln Gly Asp Gln Arg Tyr
125 130 135
ttt att gaa cct tta agc ccc ata cat cgg gat gga cag gag cat gca 545
Phe Ile Glu Pro Leu Ser Pro Ile His Arg Asp Gly Gln Glu His Ala
140 145 150
ctc ttc aag tat aac cct gat gaa aag aat tat gac agc acc tgt ggg 593
Leu Phe Lys Tyr Asn Pro Asp Glu Lys Asn Tyr Asp Ser Thr Cys Gly
155 160 165 170
atg gat ggt gtg ttg tgg gcc cac gat ttg cag cag aac att gcc cta 641
Met Asp Gly Val Leu Trp Ala His Asp Leu Gln Gln Asn Ile Ala Leu
175 180 185
cct gcc acc aaa cta gta aaa ttg aaa gac agg aag gtt cag gaa cat 689
Pro Ala Thr Lys Leu Val Lys Leu Lys Asp Arg Lys Val Gln Glu His
190 195 200
gag aaa tac ata gaa tat tat ttg gtc ctg gat aat ggt gag ttt aaa 737
Glu Lys Tyr Ile Glu Tyr Tyr Leu Val Leu Asp Asn Gly Glu Phe Lys
205 210 215
agg tac aat gag aat caa gat gag atc aga aag agg gta ttt gag atg 785
Arg Tyr Asn Glu Asn Gln Asp Glu Ile Arg Lys Arg Val Phe Glu Met
220 225 230
gct aat tat gtc aac atg ctt tat aaa aag ctc aat act cat gtg gcc 833
Ala Asn Tyr Val Asn Met Leu Tyr Lys Lys Leu Asn Thr His Val Ala
235 240 245 250
tta gtt ggt atg gaa atc tgg act gac aag gat aag ata aag ata acc 881
Leu Val Gly Met Glu Ile Trp Thr Asp Lys Asp Lys Ile Lys Ile Thr
255 260 265
cca aat gca agc ttc acc ttg gag aat ttt tct aaa tgg agg ggg agt 929
Pro Asn Ala Ser Phe Thr Leu Glu Asn Phe Ser Lys Trp Arg Gly Ser
270 275 280
gtt ctc tca aga aga aag cgt cat gat att gct cag tta atc aca gca 977
Val Leu Ser Arg Arg Lys Arg His Asp Ile Ala Gln Leu Ile Thr Ala
285 290 295
aca gaa ctt gct gga acg act gtg ggt ctt gca ttt atg tct aca atg 1025
Thr Glu Leu Ala Gly Thr Thr Val Gly Leu Ala Phe Met Ser Thr Met
300 305 310
tgt tct cct tat tct gtt ggc gtt gtt cag gac cac agc gat aat ctt 1073
Cys Ser Pro Tyr Ser Val Gly Val Val Gln Asp His Ser Asp Asn Leu
315 320 325 330
ctt aga gtt gca ggg aca atg gca cat gaa atg ggc cac aac ttt gga 1121
Leu Arg Val Ala Gly Thr Met Ala His Glu Met Gly His Asn Phe Gly
335 340 345
atg ttt cat gac gac tat tct tgc aag tgt cct tct aca ata tgt gtg 1169
Met Phe His Asp Asp Tyr Ser Cys Lys Cys Pro Ser Thr Ile Cys Val
350 355 360
atg gac aaa gca ctg agc ttc tat ata ccc aca gac ttc agt tcc tgc 1217
Met Asp Lys Ala Leu Ser Phe Tyr Ile Pro Thr Asp Phe Ser Ser Cys
365 370 375
agc cgt ctc agc tat gac aag ttt ttt gaa gat aaa tta tca aat tgc 1265
Ser Arg Leu Ser Tyr Asp Lys Phe Phe Glu Asp Lys Leu Ser Asn Cys
380 385 390
ctc ttt aat gct cca ttg cct aca gat atc ata tcc act cca att tgt 1313
Leu Phe Asn Ala Pro Leu Pro Thr Asp Ile Ile Ser Thr Pro Ile Cys
395 400 405 410
ggg aac cag ttg gtg gaa atg gga gag gac tgt gat tgt ggg aca tct 1361
Gly Asn Gln Leu Val Glu Met Gly Glu Asp Cys Asp Cys Gly Thr Ser
415 420 425
gag gaa tgt acc aat att tgc tgt gat gct aag aca tgt aaa atc aaa 1409
Glu Glu Cys Thr Asn Ile Cys Cys Asp Ala Lys Thr Cys Lys Ile Lys
430 435 440
gca act ttt caa tgt gca tta gga gaa tgt tgt gaa aaa tgc caa ttt 1457
Ala Thr Phe Gln Cys Ala Leu Gly Glu Cys Cys Glu Lys Cys Gln Phe
445 450 455
aaa aag gct ggg atg gtg tgc aga cca gca aaa gat gag tgc gac ctg 1505
Lys Lys Ala Gly Met Val Cys Arg Pro Ala Lys Asp Glu Cys Asp Leu
460 465 470
cct gaa atg tgt aat ggt aaa tct ggt aat tgt cct gat gat aga ttc 1553
Pro Glu Met Cys Asn Gly Lys Ser Gly Asn Cys Pro Asp Asp Arg Phe
475 480 485 490
caa gtc aat ggc ttc cct tgc cat cac ggg aag ggc cac tgc ttg atg 1601
Gln Val Asn Gly Phe Pro Cys His His Gly Lys Gly His Cys Leu Met
495 500 505
ggg aca tgc ccc aca ctg cag gag cag tgc aca gag ctg tgg gga cca 1649
Gly Thr Cys Pro Thr Leu Gln Glu Gln Cys Thr Glu Leu Trp Gly Pro
510 515 520
gga act gag gtt gca gat aag tca tgt tac aac agg aat gaa ggt ggg 1697
Gly Thr Glu Val Ala Asp Lys Ser Cys Tyr Asn Arg Asn Glu Gly Gly
525 530 535
tca aag tac ggg tac tgt cgc aga gtg gat gac aca ctc att ccc tgc 1745
Ser Lys Tyr Gly Tyr Cys Arg Arg Val Asp Asp Thr Leu Ile Pro Cys
540 545 550
aaa gca aat gat acc atg tgt ggg aag ttg ttc tgt caa ggt ggg tcg 1793
Lys Ala Asn Asp Thr Met Cys Gly Lys Leu Phe Cys Gln Gly Gly Ser
555 560 565 570
gat aat ttg ccc tgg aaa gga cgg ata gtg act ttc ctg aca tgt aaa 1841
Asp Asn Leu Pro Trp Lys Gly Arg Ile Val Thr Phe Leu Thr Cys Lys
575 580 585
aca ttt gat cct gaa gac aca agt caa gaa ata ggc atg gtg gcc aat 1889
Thr Phe Asp Pro Glu Asp Thr Ser Gln Glu Ile Gly Met Val Ala Asn
590 595 600
gga act aag tgt ggc gat aac aag gtt tgc att aat gca gaa tgt gtg 1937
Gly Thr Lys Cys Gly Asp Asn Lys Val Cys Ile Asn Ala Glu Cys Val
605 610 615
gat att gag aaa gcc tac aaa tca acc aat tgc tca tct aag tgc aaa 1985
Asp Ile Glu Lys Ala Tyr Lys Ser Thr Asn Cys Ser Ser Lys Cys Lys
620 625 630
gga cat gct gtg tgt gac cat gag ctc cag tgt caa tgt gag gaa gga 2033
Gly His Ala Val Cys Asp His Glu Leu Gln Cys Gln Cys Glu Glu Gly
635 640 645 650
tgg atc cct ccc gac tgc gat gac tcc tca gtg gtc ttc cac ttc tcc 2081
Trp Ile Pro Pro Asp Cys Asp Asp Ser Ser Val Val Phe His Phe Ser
655 660 665
att gtg gtt ggg gtg ctg ttc cca atg gcg gtc att ttt gtg gtg gtt 2129
Ile Val Val Gly Val Leu Phe Pro Met Ala Val Ile Phe Val Val Val
670 675 680
gct atg gta atc cgg cac cag agc tcc aga gaa aag cag aag aaa gat 2177
Ala Met Val Ile Arg His Gln Ser Ser Arg Glu Lys Gln Lys Lys Asp
685 690 695
cag agg cca cta tct acc act ggc acc agg cca cac aaa cag aag agg 2225
Gln Arg Pro Leu Ser Thr Thr Gly Thr Arg Pro His Lys Gln Lys Arg
700 705 710
aaa ccc cag atg gta aag gct gtt caa ccc caa gag atg agt cag atg 2273
Lys Pro Gln Met Val Lys Ala Val Gln Pro Gln Glu Met Ser Gln Met
715 720 725 730
aag ccc cat gtg tat gat ctg cca gta gaa ggc aat gag ccc cca gcc 2321
Lys Pro His Val Tyr Asp Leu Pro Val Glu Gly Asn Glu Pro Pro Ala
735 740 745
tct ttt cat aaa gac aca aac gca ctt ccc cct act gtt ttc aag gat 2369
Ser Phe His Lys Asp Thr Asn Ala Leu Pro Pro Thr Val Phe Lys Asp
750 755 760
aat cca gtg tct aca cct aag gac tca aat cca aaa gca tga 2411
Asn Pro Val Ser Thr Pro Lys Asp Ser Asn Pro Lys Ala
765 770 775
agcaacagct aagcaagaac taatggctaa attatcaact tggaaaactg gaaaatctgg 2471
atggcagaga aatatactat ctatctcacc agtatttgct ctcgactcaa gaaggttaac 2531
attttctgat tcatgttaga ctttgaagag actaaagaaa attttcaaga ggaacatatg 2591
cctgagaacc tttgcatgaa tttaaaattt caattatcca ttcttataag aaggaagatg 2651
attgtaaaga aatatctccg aagttaaaat ctgtaatagg aattgattca ttctctaatg 2711
aaaacaaaac ataaaaacat cacactaatc ttggaggaat aagaaaaatt gtacatccat 2771
taaatgtaca attgattgca acatcttgat tgttttaacc attaacttgt caaattacaa 2831
tcacagttaa gaaaatgatg taaaattctg ttttgtggat ctctttccta gattagcttc 2891
tgaaatcatt attagctata tcatttgagg ttttctacaa tttggtataa ctaagaattt 2951
aaaaatgttt tatcatatat atttgtataa ttaattactg gcatggttaa agtggttttc 3011
actttttaaa tggagaaaat ttcagttaaa ttaataggat aaaccaggtt gcgaactggt 3071
gacctgtagg ccatgtttgc actgcaaata tatttggtct gaatgatatt gatattggac 3131
acatagtact tttacatgtt ttgaatgtat tgctaatatt taaaaattga gagatcttgc 3191
ataaacaata gattcccagc tttgtcaga 3220
<210> 2
<211> 775
<212> PRT
<213> 智人
<400> 2
Met Leu Gln Gly Leu Leu Pro Val Ser Leu Leu Leu Ser Val Ala Val
1 5 10 15
Ser Ala Ile Lys Glu Leu Pro Gly Val Lys Lys Tyr Glu Val Val Tyr
20 25 30
Pro Ile Arg Leu His Pro Leu His Lys Arg Glu Ala Lys Glu Pro Glu
35 40 45
Gln Gln Glu Gln Phe Glu Thr Glu Leu Lys Tyr Lys Met Thr Ile Asn
50 55 60
Gly Lys Ile Ala Val Leu Tyr Leu Lys Lys Asn Lys Asn Leu Leu Ala
65 70 75 80
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Thr Ser Pro Gln Ile Met Asp Asp Cys Tyr Tyr Gln Gly His Ile Leu
100 105 110
Asn Glu Lys Val Ser Asp Ala Ser Ile Ser Thr Cys Arg Gly Leu Arg
115 120 125
Gly Tyr Phe Ser Gln Gly Asp Gln Arg Tyr Phe Ile Glu Pro Leu Ser
130 135 140
Pro Ile His Arg Asp Gly Gln Glu His Ala Leu Phe Lys Tyr Asn Pro
145 150 155 160
Asp Glu Lys Asn Tyr Asp Ser Thr Cys Gly Met Asp Gly Val Leu Trp
165 170 175
Ala His Asp Leu Gln Gln Asn Ile Ala Leu Pro Ala Thr Lys Leu Val
180 185 190
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195 200 205
Tyr Leu Val Leu Asp Asn Gly Glu Phe Lys Arg Tyr Asn Glu Asn Gln
210 215 220
Asp Glu Ile Arg Lys Arg Val Phe Glu Met Ala Asn Tyr Val Asn Met
225 230 235 240
Leu Tyr Lys Lys Leu Asn Thr His Val Ala Leu Val Gly Met Glu Ile
245 250 255
Trp Thr Asp Lys Asp Lys Ile Lys Ile Thr Pro Asn Ala Ser Phe Thr
260 265 270
Leu Glu Asn Phe Ser Lys Trp Arg Gly Ser Val Leu Ser Arg Arg Lys
275 280 285
Arg His Asp Ile Ala Gln Leu Ile Thr Ala Thr Glu Leu Ala Gly Thr
290 295 300
Thr Val Gly Leu Ala Phe Met Ser Thr Met Cys Ser Pro Tyr Ser Val
305 310 315 320
Gly Val Val Gln Asp His Ser Asp Asn Leu Leu Arg Val Ala Gly Thr
325 330 335
Met Ala His Glu Met Gly His Asn Phe Gly Met Phe His Asp Asp Tyr
340 345 350
Ser Cys Lys Cys Pro Ser Thr Ile Cys Val Met Asp Lys Ala Leu Ser
355 360 365
Phe Tyr Ile Pro Thr Asp Phe Ser Ser Cys Ser Arg Leu Ser Tyr Asp
370 375 380
Lys Phe Phe Glu Asp Lys Leu Ser Asn Cys Leu Phe Asn Ala Pro Leu
385 390 395 400
Pro Thr Asp Ile Ile Ser Thr Pro Ile Cys Gly Asn Gln Leu Val Glu
405 410 415
Met Gly Glu Asp Cys Asp Cys Gly Thr Ser Glu Glu Cys Thr Asn Ile
420 425 430
Cys Cys Asp Ala Lys Thr Cys Lys Ile Lys Ala Thr Phe Gln Cys Ala
435 440 445
Leu Gly Glu Cys Cys Glu Lys Cys Gln Phe Lys Lys Ala Gly Met Val
450 455 460
Cys Arg Pro Ala Lys Asp Glu Cys Asp Leu Pro Glu Met Cys Asn Gly
465 470 475 480
Lys Ser Gly Asn Cys Pro Asp Asp Arg Phe Gln Val Asn Gly Phe Pro
485 490 495
Cys His His Gly Lys Gly His Cys Leu Met Gly Thr Cys Pro Thr Leu
500 505 510
Gln Glu Gln Cys Thr Glu Leu Trp Gly Pro Gly Thr Glu Val Ala Asp
515 520 525
Lys Ser Cys Tyr Asn Arg Asn Glu Gly Gly Ser Lys Tyr Gly Tyr Cys
530 535 540
Arg Arg Val Asp Asp Thr Leu Ile Pro Cys Lys Ala Asn Asp Thr Met
545 550 555 560
Cys Gly Lys Leu Phe Cys Gln Gly Gly Ser Asp Asn Leu Pro Trp Lys
565 570 575
Gly Arg Ile Val Thr Phe Leu Thr Cys Lys Thr Phe Asp Pro Glu Asp
580 585 590
Thr Ser Gln Glu Ile Gly Met Val Ala Asn Gly Thr Lys Cys Gly Asp
595 600 605
Asn Lys Val Cys Ile Asn Ala Glu Cys Val Asp Ile Glu Lys Ala Tyr
610 615 620
Lys Ser Thr Asn Cys Ser Ser Lys Cys Lys Gly His Ala Val Cys Asp
625 630 635 640
His Glu Leu Gln Cys Gln Cys Glu Glu Gly Trp Ile Pro Pro Asp Cys
645 650 655
Asp Asp Ser Ser Val Val Phe His Phe Ser Ile Val Val Gly Val Leu
660 665 670
Phe Pro Met Ala Val Ile Phe Val Val Val Ala Met Val Ile Arg His
675 680 685
Gln Ser Ser Arg Glu Lys Gln Lys Lys Asp Gln Arg Pro Leu Ser Thr
690 695 700
Thr Gly Thr Arg Pro His Lys Gln Lys Arg Lys Pro Gln Met Val Lys
705 710 715 720
Ala Val Gln Pro Gln Glu Met Ser Gln Met Lys Pro His Val Tyr Asp
725 730 735
Leu Pro Val Glu Gly Asn Glu Pro Pro Ala Ser Phe His Lys Asp Thr
740 745 750
Asn Ala Leu Pro Pro Thr Val Phe Lys Asp Asn Pro Val Ser Thr Pro
755 760 765
Lys Asp Ser Asn Pro Lys Ala
770 775
<210> 3
<211> 2108
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<221> CDS
<222> (84)..(1706)
<400> 3
tcactggaga ggaggcaggg acagacccag cagcacccac ctgagcgaga agagcagaca 60
ccgtgctcct ggaatcaccc agc atg ttg caa ggt ctc ctg cca gtc agt ctc 113
Met Leu Gln Gly Leu Leu Pro Val Ser Leu
1 5 10
ctc ctc tct gtt gca gta agt gct ata aaa gaa ctc cct ggg gtg aag 161
Leu Leu Ser Val Ala Val Ser Ala Ile Lys Glu Leu Pro Gly Val Lys
15 20 25
aag tat gaa gtg gtt tat cct ata aga ctt cat cca ctg cat aaa aga 209
Lys Tyr Glu Val Val Tyr Pro Ile Arg Leu His Pro Leu His Lys Arg
30 35 40
gag gcc aaa gag cca gag caa cag gaa caa ttt gaa act gaa tta aag 257
Glu Ala Lys Glu Pro Glu Gln Gln Glu Gln Phe Glu Thr Glu Leu Lys
45 50 55
tat aaa atg aca att aat gga aaa att gca gtg ctt tat ttg aaa aaa 305
Tyr Lys Met Thr Ile Asn Gly Lys Ile Ala Val Leu Tyr Leu Lys Lys
60 65 70
aac aag aac ctc ctt gca cca ggc tac acg gaa aca tat tat aat tcc 353
Asn Lys Asn Leu Leu Ala Pro Gly Tyr Thr Glu Thr Tyr Tyr Asn Ser
75 80 85 90
act gga aag gag atc acc aca agc cca caa att atg gat gat tgt tat 401
Thr Gly Lys Glu Ile Thr Thr Ser Pro Gln Ile Met Asp Asp Cys Tyr
95 100 105
tat caa gga cat att ctt aat gaa aag gtt tct gac gct agc atc agc 449
Tyr Gln Gly His Ile Leu Asn Glu Lys Val Ser Asp Ala Ser Ile Ser
110 115 120
aca tgt agg ggt cta agg ggc tac ttc agt cag ggg gat caa aga tac 497
Thr Cys Arg Gly Leu Arg Gly Tyr Phe Ser Gln Gly Asp Gln Arg Tyr
125 130 135
ttt att gaa cct tta agc ccc ata cat cgg gat gga cag gag cat gca 545
Phe Ile Glu Pro Leu Ser Pro Ile His Arg Asp Gly Gln Glu His Ala
140 145 150
ctc ttc aag tat aac cct gat gaa aag aat tat gac agc acc tgt ggg 593
Leu Phe Lys Tyr Asn Pro Asp Glu Lys Asn Tyr Asp Ser Thr Cys Gly
155 160 165 170
atg gat ggt gtg ttg tgg gcc cac gat ttg cag cag aac att gcc cta 641
Met Asp Gly Val Leu Trp Ala His Asp Leu Gln Gln Asn Ile Ala Leu
175 180 185
cct gcc acc aaa cta gta aaa ttg aaa gac agg aag gtt cag gaa cat 689
Pro Ala Thr Lys Leu Val Lys Leu Lys Asp Arg Lys Val Gln Glu His
190 195 200
gag aaa tac ata gaa tat tat ttg gtc ctg gat aat ggt gag ttt aaa 737
Glu Lys Tyr Ile Glu Tyr Tyr Leu Val Leu Asp Asn Gly Glu Phe Lys
205 210 215
agg tac aat gag aat caa gat gag atc aga aag agg gta ttt gag atg 785
Arg Tyr Asn Glu Asn Gln Asp Glu Ile Arg Lys Arg Val Phe Glu Met
220 225 230
gct aat tat gtc aac atg ctt tat aaa aag ctc aat act cat gtg gcc 833
Ala Asn Tyr Val Asn Met Leu Tyr Lys Lys Leu Asn Thr His Val Ala
235 240 245 250
tta gtt ggt atg gaa atc tgg act gac aag gat aag ata aag ata acc 881
Leu Val Gly Met Glu Ile Trp Thr Asp Lys Asp Lys Ile Lys Ile Thr
255 260 265
cca aat gca agc ttc acc ttg gag aat ttt tct aaa tgg agg ggg agt 929
Pro Asn Ala Ser Phe Thr Leu Glu Asn Phe Ser Lys Trp Arg Gly Ser
270 275 280
gtt ctc tca aga aga aag cgt cat gat att gct cag tta atc aca gca 977
Val Leu Ser Arg Arg Lys Arg His Asp Ile Ala Gln Leu Ile Thr Ala
285 290 295
aca gaa ctt gct gga acg act gtg ggt ctt gca ttt atg tct aca atg 1025
Thr Glu Leu Ala Gly Thr Thr Val Gly Leu Ala Phe Met Ser Thr Met
300 305 310
tgt tct cct tat tct gtt ggc gtt gtt cag gac cac agc gat aat ctt 1073
Cys Ser Pro Tyr Ser Val Gly Val Val Gln Asp His Ser Asp Asn Leu
315 320 325 330
ctt aga gtt gca ggg aca atg gca cat gaa atg ggc cac aac ttt gga 1121
Leu Arg Val Ala Gly Thr Met Ala His Glu Met Gly His Asn Phe Gly
335 340 345
atg ttt cat gac gac tat tct tgc aag tgt cct tct aca ata tgt gtg 1169
Met Phe His Asp Asp Tyr Ser Cys Lys Cys Pro Ser Thr Ile Cys Val
350 355 360
atg gac aaa gca ctg agc ttc tat ata ccc aca gac ttc agt tcc tgc 1217
Met Asp Lys Ala Leu Ser Phe Tyr Ile Pro Thr Asp Phe Ser Ser Cys
365 370 375
agc cgt ctc agc tat gac aag ttt ttt gaa gat aaa tta tca aat tgc 1265
Ser Arg Leu Ser Tyr Asp Lys Phe Phe Glu Asp Lys Leu Ser Asn Cys
380 385 390
ctc ttt aat gct cca ttg cct aca gat atc ata tcc act cca att tgt 1313
Leu Phe Asn Ala Pro Leu Pro Thr Asp Ile Ile Ser Thr Pro Ile Cys
395 400 405 410
ggg aac cag ttg gtg gaa atg gga gag gac tgt gat tgt ggg aca tct 1361
Gly Asn Gln Leu Val Glu Met Gly Glu Asp Cys Asp Cys Gly Thr Ser
415 420 425
gag gaa tgt acc aat att tgc tgt gat gct aag aca tgt aaa atc aaa 1409
Glu Glu Cys Thr Asn Ile Cys Cys Asp Ala Lys Thr Cys Lys Ile Lys
430 435 440
gca act ttt caa tgt gca tta gga gaa tgt tgt gaa aaa tgc caa ttt 1457
Ala Thr Phe Gln Cys Ala Leu Gly Glu Cys Cys Glu Lys Cys Gln Phe
445 450 455
aaa aag gct ggg atg gtg tgc aga cca gca aaa gat gag tgc gac ctg 1505
Lys Lys Ala Gly Met Val Cys Arg Pro Ala Lys Asp Glu Cys Asp Leu
460 465 470
cct gaa atg tgt aat ggt aaa tct ggt aat tgt cct gat gat aga ttc 1553
Pro Glu Met Cys Asn Gly Lys Ser Gly Asn Cys Pro Asp Asp Arg Phe
475 480 485 490
caa gtc aat ggc ttc cct tgc cat cac ggg aag ggc cac tgc ttg atg 1601
Gln Val Asn Gly Phe Pro Cys His His Gly Lys Gly His Cys Leu Met
495 500 505
ggg aca tgc ccc aca ctg cag gag cag tgc aca gag ctg tgg gga cca 1649
Gly Thr Cys Pro Thr Leu Gln Glu Gln Cys Thr Glu Leu Trp Gly Pro
510 515 520
ggt agg agg aca aat cct ttc ccc tgt gca tgt gcg aag gaa aat cat 1697
Gly Arg Arg Thr Asn Pro Phe Pro Cys Ala Cys Ala Lys Glu Asn His
525 530 535
ttc aga tga cagtgtttaa ccatggtcaa aggaccattc tgtcctatcc 1746
Phe Arg
540
ttcttagaag ctttgaactc aaaatcatgg aaaggtttta agatttgagg ttggttttag 1806
ggttgctaga tttagcaagt aaaaataagg atggccccgt taaattttaa cttaaaatta 1866
acaagttttt tgttaatttt ttgttttttg tctcagcatc agtatatccc atgcaatatt 1926
tgaggtgtgc tcatactaaa attatttgtg tatctgaaat tcaaattaaa ctgggtgtct 1986
ttttcttttc atctggcaac cctactaaga tcataaaccc ttggaaatct gtgtgtgtgc 2046
gggtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgcaggggt ggcagaagta ctgtgggatg ggacagaaat 2106
aa 2108
<210> 4
<211> 540
<212> PRT
<213> 智人
<400> 4
Met Leu Gln Gly Leu Leu Pro Val Ser Leu Leu Leu Ser Val Ala Val
1 5 10 15
Ser Ala Ile Lys Glu Leu Pro Gly Val Lys Lys Tyr Glu Val Val Tyr
20 25 30
Pro Ile Arg Leu His Pro Leu His Lys Arg Glu Ala Lys Glu Pro Glu
35 40 45
Gln Gln Glu Gln Phe Glu Thr Glu Leu Lys Tyr Lys Met Thr Ile Asn
50 55 60
Gly Lys Ile Ala Val Leu Tyr Leu Lys Lys Asn Lys Asn Leu Leu Ala
65 70 75 80
Pro Gly Tyr Thr Glu Thr Tyr Tyr Asn Ser Thr Gly Lys Glu Ile Thr
85 90 95
Thr Ser Pro Gln Ile Met Asp Asp Cys Tyr Tyr Gln Gly His Ile Leu
100 105 110
Asn Glu Lys Val Ser Asp Ala Ser Ile Ser Thr Cys Arg Gly Leu Arg
115 120 125
Gly Tyr Phe Ser Gln Gly Asp Gln Arg Tyr Phe Ile Glu Pro Leu Ser
130 135 140
Pro Ile His Arg Asp Gly Gln Glu His Ala Leu Phe Lys Tyr Asn Pro
145 150 155 160
Asp Glu Lys Asn Tyr Asp Ser Thr Cys Gly Met Asp Gly Val Leu Trp
165 170 175
Ala His Asp Leu Gln Gln Asn Ile Ala Leu Pro Ala Thr Lys Leu Val
180 185 190
Lys Leu Lys Asp Arg Lys Val Gln Glu His Glu Lys Tyr Ile Glu Tyr
195 200 205
Tyr Leu Val Leu Asp Asn Gly Glu Phe Lys Arg Tyr Asn Glu Asn Gln
210 215 220
Asp Glu Ile Arg Lys Arg Val Phe Glu Met Ala Asn Tyr Val Asn Met
225 230 235 240
Leu Tyr Lys Lys Leu Asn Thr His Val Ala Leu Val Gly Met Glu Ile
245 250 255
Trp Thr Asp Lys Asp Lys Ile Lys Ile Thr Pro Asn Ala Ser Phe Thr
260 265 270
Leu Glu Asn Phe Ser Lys Trp Arg Gly Ser Val Leu Ser Arg Arg Lys
275 280 285
Arg His Asp Ile Ala Gln Leu Ile Thr Ala Thr Glu Leu Ala Gly Thr
290 295 300
Thr Val Gly Leu Ala Phe Met Ser Thr Met Cys Ser Pro Tyr Ser Val
305 310 315 320
Gly Val Val Gln Asp His Ser Asp Asn Leu Leu Arg Val Ala Gly Thr
325 330 335
Met Ala His Glu Met Gly His Asn Phe Gly Met Phe His Asp Asp Tyr
340 345 350
Ser Cys Lys Cys Pro Ser Thr Ile Cys Val Met Asp Lys Ala Leu Ser
355 360 365
Phe Tyr Ile Pro Thr Asp Phe Ser Ser Cys Ser Arg Leu Ser Tyr Asp
370 375 380
Lys Phe Phe Glu Asp Lys Leu Ser Asn Cys Leu Phe Asn Ala Pro Leu
385 390 395 400
Pro Thr Asp Ile Ile Ser Thr Pro Ile Cys Gly Asn Gln Leu Val Glu
405 410 415
Met Gly Glu Asp Cys Asp Cys Gly Thr Ser Glu Glu Cys Thr Asn Ile
420 425 430
Cys Cys Asp Ala Lys Thr Cys Lys Ile Lys Ala Thr Phe Gln Cys Ala
435 440 445
Leu Gly Glu Cys Cys Glu Lys Cys Gln Phe Lys Lys Ala Gly Met Val
450 455 460
Cys Arg Pro Ala Lys Asp Glu Cys Asp Leu Pro Glu Met Cys Asn Gly
465 470 475 480
Lys Ser Gly Asn Cys Pro Asp Asp Arg Phe Gln Val Asn Gly Phe Pro
485 490 495
Cys His His Gly Lys Gly His Cys Leu Met Gly Thr Cys Pro Thr Leu
500 505 510
Gln Glu Gln Cys Thr Glu Leu Trp Gly Pro Gly Arg Arg Thr Asn Pro
515 520 525
Phe Pro Cys Ala Cys Ala Lys Glu Asn His Phe Arg
530 535 540
<210> 5
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 211-12 LCDR1
<400> 5
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Ser Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 6
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 211-12 LCDR2
<400> 6
Tyr Gly Val Ser Thr Leu Gln Ser
1 5
<210> 7
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 211-12 LCDR3
<400> 7
Leu Gln Tyr Asp Ser Leu Pro Ser
1 5
<210> 8
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 211-12 HCDR1
<400> 8
Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Ala
1 5
<210> 9
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 211-12 HCDR2
<400> 9
Ile Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 10
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 211-12 HCDR3
<400> 10
Trp Ser Trp Met Gly Arg Gly Phe Asp Asn
1 5 10
<210> 11
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 211-14 LCDR1
<400> 11
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asn Gly Tyr Ile Tyr Leu Asn
1 5 10 15
<210> 12
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 211-14 LCDR2
<400> 12
Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser
1 5
<210> 13
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 211-14 LCDR3
<400> 13
Phe Gln Tyr Gly Gly Ser Pro Leu
1 5
<210> 14
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 211-14 HCDR1
<400> 14
Asp Ser Val Ser Ser Asn Thr Ala Ala Trp Gly
1 5 10
<210> 15
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 211-14 HCDR2
<400> 15
Val Ile Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala Val Ser Val
1 5 10 15
Lys Ser
<210> 16
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 211-14 HCDR3
<400> 16
Tyr Lys Glu Ser Ile Pro Glu Tyr Gly Phe Asp Phe
1 5 10
<210> 17
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 211-12 VL
<400> 17
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Val Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Ser Leu Pro Ser
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
100 105
<210> 18
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 211-12 VH
<400> 18
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Ala Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Ser Trp Met Gly Arg Gly Phe Asp Asn Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 19
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 211-14 VL
<400> 19
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Asn Gly Tyr Ile Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Tyr
85 90 95
Gly Gly Ser Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr
<210> 20
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 211-14 VH
<400> 20
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Thr Ala Ala Trp Gly Trp Ile Arg Gln Ser Pro Gly Arg Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Gly Val Ile Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala
50 55 60
Val Ser Val Lys Ser Arg Ile Thr Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn
65 70 75 80
Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val
85 90 95
Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Lys Glu Ser Ile Pro Glu Tyr Gly Phe Asp
100 105 110
Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 21
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 211-12表位
<400> 21
Glu Asn Phe Ser Lys Trp Arg Gly Ser
1 5
<210> 22
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 211-14表位
<400> 22
Thr Glu Leu Trp Gly Pro Gly Arg Arg Thr
1 5 10
<210> 23
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 297-2F3表位
<400> 23
Leu Phe Asn Ala Pro Leu Pro Thr
1 5
<210> 24
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 297-2F3 LCDR1
<400> 24
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Leu Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asn
1 5 10 15
<210> 25
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 297-2F3 LCDR2
<400> 25
Lys Ile Ser Ala Arg Phe Ser
1 5
<210> 26
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 297-2F3 LCDR3
<400> 26
Ser Gln Thr Ala His Val Pro Trp Thr
1 5
<210> 27
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 297-2F3 HCDR1
<400> 27
Asp Ala Trp Met Asp
1 5
<210> 28
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 297-2F3 HCDR2
<400> 28
Glu Ile Arg Ser Lys Ala Asn Asn His Ala Ile Tyr Tyr Ala Glu Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 29
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 297-2F3 HCDR3
<400> 29
Phe Ala Tyr
1
<210> 30
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人源化297-2F3 VL
<400> 30
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Leu Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Ile Ser Ala Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Thr
85 90 95
Ala His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr
<210> 31
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人源化297-2F3 VH
<400> 31
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ala
20 25 30
Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Glu Ile Arg Ser Lys Ala Asn Asn His Ala Ile Tyr Tyr Ala Glu
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 32
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 211-12表位1
<400> 32
Phe Thr Leu Glu Asn Phe Ser Lys Trp Arg Gly Ser
1 5 10
<210> 33
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 211-12表位1
<400> 33
Glu Asn Phe Ser Lys Trp Arg Gly Ser Val Leu Ser
1 5 10
<210> 34
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 34
Val Gln Glu His Glu Lys Tyr Ile Glu Tyr Tyr Leu
1 5 10
<210> 35
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 35
His Glu Lys Tyr Ile Glu Tyr Tyr Leu Val Leu Asp
1 5 10
<210> 36
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 36
Tyr Ile Glu Tyr Tyr Leu Val Leu Asp Asn Gly Glu
1 5 10
<210> 37
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 37
Tyr Tyr Leu Val Leu Asp Asn Gly Glu Phe Lys Arg
1 5 10
<210> 38
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 38
Val Leu Asp Asn Gly Glu Phe Lys Arg Tyr Asn Glu
1 5 10
<210> 39
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 39
Asn Gly Glu Phe Lys Arg Tyr Asn Glu Asn Gln Asp
1 5 10
<210> 40
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 40
Phe Lys Arg Tyr Asn Glu Asn Gln Asp Glu Ile Arg
1 5 10
<210> 41
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 41
Tyr Asn Glu Asn Gln Asp Glu Ile Arg Lys Arg Val
1 5 10
<210> 42
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 42
Asn Gln Asp Glu Ile Arg Lys Arg Val Phe Glu Met
1 5 10
<210> 43
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 43
Glu Ile Arg Lys Arg Val Phe Glu Met Ala Asn Tyr
1 5 10
<210> 44
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 44
Lys Arg Val Phe Glu Met Ala Asn Tyr Val Asn Met
1 5 10
<210> 45
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 45
Phe Glu Met Ala Asn Tyr Val Asn Met Leu Tyr Lys
1 5 10
<210> 46
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 46
Ala Asn Tyr Val Asn Met Leu Tyr Lys Lys Leu Asn
1 5 10
<210> 47
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 47
Val Asn Met Leu Tyr Lys Lys Leu Asn Thr His Val
1 5 10
<210> 48
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 48
Leu Tyr Lys Lys Leu Asn Thr His Val Ala Leu Val
1 5 10
<210> 49
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 49
Lys Leu Asn Thr His Val Ala Leu Val Gly Met Glu
1 5 10
<210> 50
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 50
Thr His Val Ala Leu Val Gly Met Glu Ile Trp Thr
1 5 10
<210> 51
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 51
Ala Leu Val Gly Met Glu Ile Trp Thr Asp Lys Asp
1 5 10
<210> 52
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 52
Gly Met Glu Ile Trp Thr Asp Lys Asp Lys Ile Lys
1 5 10
<210> 53
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 53
Ile Trp Thr Asp Lys Asp Lys Ile Lys Ile Thr Pro
1 5 10
<210> 54
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 54
Asp Lys Asp Lys Ile Lys Ile Thr Pro Asn Ala Ser
1 5 10
<210> 55
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 55
Lys Ile Lys Ile Thr Pro Asn Ala Ser Phe Thr Leu
1 5 10
<210> 56
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 56
Ile Thr Pro Asn Ala Ser Phe Thr Leu Glu Asn Phe
1 5 10
<210> 57
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 57
Asn Ala Ser Phe Thr Leu Glu Asn Phe Ser Lys Trp
1 5 10
<210> 58
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 58
Phe Thr Leu Glu Asn Phe Ser Lys Trp Arg Gly Ser
1 5 10
<210> 59
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 59
Glu Asn Phe Ser Lys Trp Arg Gly Ser Val Leu Ser
1 5 10
<210> 60
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 60
Ser Lys Trp Arg Gly Ser Val Leu Ser Arg Arg Lys
1 5 10
<210> 61
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 61
Arg Gly Ser Val Leu Ser Arg Arg Lys Arg His Asp
1 5 10
<210> 62
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 62
Val Leu Ser Arg Arg Lys Arg His Asp Ile Ala Gln
1 5 10
<210> 63
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 63
Arg Arg Lys Arg His Asp Ile Ala Gln Leu Ile Thr
1 5 10
<210> 64
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 64
Arg His Asp Ile Ala Gln Leu Ile Thr Ala Thr Glu
1 5 10
<210> 65
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 65
Ile Ala Gln Leu Ile Thr Ala Thr Glu Leu Ala Gly
1 5 10
<210> 66
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 66
Leu Ile Thr Ala Thr Glu Leu Ala Gly Thr Thr Val
1 5 10
<210> 67
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 67
Ala Thr Glu Leu Ala Gly Thr Thr Val Gly Leu Ala
1 5 10
<210> 68
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 68
Leu Ala Gly Thr Thr Val Gly Leu Ala Phe Met Ser
1 5 10
<210> 69
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 69
Thr Thr Val Gly Leu Ala Phe Met Ser Thr Met Cys
1 5 10
<210> 70
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 70
Gly Leu Ala Phe Met Ser Thr Met Cys Ser Pro Tyr
1 5 10
<210> 71
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 71
Phe Met Ser Thr Met Cys Ser Pro Tyr Ser Val Gly
1 5 10
<210> 72
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 72
Thr Met Cys Ser Pro Tyr Ser Val Gly Val Val Gln
1 5 10
<210> 73
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 73
Ser Pro Tyr Ser Val Gly Val Val Gln Asp His Ser
1 5 10
<210> 74
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 74
Ser Val Gly Val Val Gln Asp His Ser Asp Asn Leu
1 5 10
<210> 75
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 75
Val Val Gln Asp His Ser Asp Asn Leu Leu Arg Val
1 5 10
<210> 76
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 76
Asp His Ser Asp Asn Leu Leu Arg Val Ala Gly Thr
1 5 10
<210> 77
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 77
Asp Asn Leu Leu Arg Val Ala Gly Thr Met Ala His
1 5 10
<210> 78
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 78
Leu Arg Val Ala Gly Thr Met Ala His Glu Met Gly
1 5 10
<210> 79
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 79
Ala Gly Thr Met Ala His Glu Met Gly His Asn Phe
1 5 10
<210> 80
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 80
Met Ala His Glu Met Gly His Asn Phe Gly Met Phe
1 5 10
<210> 81
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 81
Glu Met Gly His Asn Phe Gly Met Phe His Asp Asp
1 5 10
<210> 82
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 82
His Asn Phe Gly Met Phe His Asp Asp Tyr Ser Cys
1 5 10
<210> 83
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 83
Gly Met Phe His Asp Asp Tyr Ser Cys Lys Cys Pro
1 5 10
<210> 84
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 84
His Asp Asp Tyr Ser Cys Lys Cys Pro Ser Thr Ile
1 5 10
<210> 85
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 85
Tyr Ser Cys Lys Cys Pro Ser Thr Ile Cys Val Met
1 5 10
<210> 86
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 86
Lys Cys Pro Ser Thr Ile Cys Val Met Asp Lys Ala
1 5 10
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 87
Ser Thr Ile Cys Val Met Asp Lys Ala Leu Ser Phe
1 5 10
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 88
Cys Val Met Asp Lys Ala Leu Ser Phe Tyr Ile Pro
1 5 10
<210> 89
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 89
Asp Lys Ala Leu Ser Phe Tyr Ile Pro Thr Asp Phe
1 5 10
<210> 90
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 90
Leu Ser Phe Tyr Ile Pro Thr Asp Phe Ser Ser Cys
1 5 10
<210> 91
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 91
Tyr Ile Pro Thr Asp Phe Ser Ser Cys Ser Arg Leu
1 5 10
<210> 92
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 92
Thr Asp Phe Ser Ser Cys Ser Arg Leu Ser Tyr Asp
1 5 10
<210> 93
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 93
Ser Ser Cys Ser Arg Leu Ser Tyr Asp Lys Phe Phe
1 5 10
<210> 94
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 94
Ser Arg Leu Ser Tyr Asp Lys Phe Phe Glu Asp Lys
1 5 10
<210> 95
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 95
Ser Tyr Asp Lys Phe Phe Glu Asp Lys Leu Ser Asn
1 5 10
<210> 96
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 96
Lys Phe Phe Glu Asp Lys Leu Ser Asn Cys Leu Phe
1 5 10
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 97
Glu Asp Lys Leu Ser Asn Cys Leu Phe Asn Ala Pro
1 5 10
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 98
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1 5 10
<210> 99
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 99
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1 5 10
<210> 100
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 100
Asn Ala Pro Leu Pro Thr Asp Ile Ile Ser Thr Pro
1 5 10
<210> 101
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 101
Leu Pro Thr Asp Ile Ile Ser Thr Pro Ile Cys Gly
1 5 10
<210> 102
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 102
Asp Ile Ile Ser Thr Pro Ile Cys Gly Asn Gln Leu
1 5 10
<210> 103
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 103
Ser Thr Pro Ile Cys Gly Asn Gln Leu Val Glu Met
1 5 10
<210> 104
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 104
Ile Cys Gly Asn Gln Leu Val Glu Met Gly Glu Asp
1 5 10
<210> 105
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 105
Asn Gln Leu Val Glu Met Gly Glu Asp Cys Asp Cys
1 5 10
<210> 106
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 106
Val Glu Met Gly Glu Asp Cys Asp Cys Gly Thr Ser
1 5 10
<210> 107
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 107
Gly Glu Asp Cys Asp Cys Gly Thr Ser Glu Glu Cys
1 5 10
<210> 108
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 108
Cys Asp Cys Gly Thr Ser Glu Glu Cys Thr Asn Ile
1 5 10
<210> 109
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 109
Gly Thr Ser Glu Glu Cys Thr Asn Ile Cys Cys Asp
1 5 10
<210> 110
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 110
Glu Glu Cys Thr Asn Ile Cys Cys Asp Ala Lys Thr
1 5 10
<210> 111
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 111
Thr Asn Ile Cys Cys Asp Ala Lys Thr Cys Lys Ile
1 5 10
<210> 112
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 112
Cys Cys Asp Ala Lys Thr Cys Lys Ile Lys Ala Thr
1 5 10
<210> 113
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 113
Ala Lys Thr Cys Lys Ile Lys Ala Thr Phe Gln Cys
1 5 10
<210> 114
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 114
Cys Lys Ile Lys Ala Thr Phe Gln Cys Ala Leu Gly
1 5 10
<210> 115
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 115
Lys Ala Thr Phe Gln Cys Ala Leu Gly Glu Cys Cys
1 5 10
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 116
Phe Gln Cys Ala Leu Gly Glu Cys Cys Glu Lys Cys
1 5 10
<210> 117
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 117
Ala Leu Gly Glu Cys Cys Glu Lys Cys Gln Phe Lys
1 5 10
<210> 118
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 118
Glu Cys Cys Glu Lys Cys Gln Phe Lys Lys Ala Gly
1 5 10
<210> 119
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 119
Glu Lys Cys Gln Phe Lys Lys Ala Gly Met Val Cys
1 5 10
<210> 120
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 120
Gln Phe Lys Lys Ala Gly Met Val Cys Arg Pro Ala
1 5 10
<210> 121
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 121
Lys Ala Gly Met Val Cys Arg Pro Ala Lys Asp Glu
1 5 10
<210> 122
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 122
Met Val Cys Arg Pro Ala Lys Asp Glu Cys Asp Leu
1 5 10
<210> 123
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 123
Arg Pro Ala Lys Asp Glu Cys Asp Leu Pro Glu Met
1 5 10
<210> 124
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 124
Lys Asp Glu Cys Asp Leu Pro Glu Met Cys Asn Gly
1 5 10
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 125
Cys Asp Leu Pro Glu Met Cys Asn Gly Lys Ser Gly
1 5 10
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
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Pro Glu Met Cys Asn Gly Lys Ser Gly Asn Cys Pro
1 5 10
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<211> 12
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<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 127
Cys Asn Gly Lys Ser Gly Asn Cys Pro Asp Asp Arg
1 5 10
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<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 128
Lys Ser Gly Asn Cys Pro Asp Asp Arg Phe Gln Val
1 5 10
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<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 129
Asn Cys Pro Asp Asp Arg Phe Gln Val Asn Gly Phe
1 5 10
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<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 130
Asp Asp Arg Phe Gln Val Asn Gly Phe Pro Cys His
1 5 10
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<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
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Phe Gln Val Asn Gly Phe Pro Cys His His Gly Lys
1 5 10
<210> 132
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<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 132
Asn Gly Phe Pro Cys His His Gly Lys Gly His Cys
1 5 10
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<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 133
Pro Cys His His Gly Lys Gly His Cys Leu Met Gly
1 5 10
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 134
His Gly Lys Gly His Cys Leu Met Gly Thr Cys Pro
1 5 10
<210> 135
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 135
Gly His Cys Leu Met Gly Thr Cys Pro Thr Leu Gln
1 5 10
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 136
Leu Met Gly Thr Cys Pro Thr Leu Gln Glu Gln Cys
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<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
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<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 138
Thr Leu Gln Glu Gln Cys Thr Glu Leu Trp Gly Pro
1 5 10
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<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 139
Glu Gln Cys Thr Glu Leu Trp Gly Pro Gly Arg Arg
1 5 10
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 140
Thr Glu Leu Trp Gly Pro Gly Arg Arg Thr Asn Pro
1 5 10
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 141
Trp Gly Pro Gly Arg Arg Thr Asn Pro Phe Pro Cys
1 5 10
<210> 142
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 142
Gly Arg Arg Thr Asn Pro Phe Pro Cys Ala Cys Ala
1 5 10
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 143
Thr Asn Pro Phe Pro Cys Ala Cys Ala Lys Glu Asn
1 5 10
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 144
Phe Pro Cys Ala Cys Ala Lys Glu Asn His Phe Arg
1 5 10
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人ADAM28s的部分肽
<400> 145
Cys Leu Phe Asn Ala Pro Leu Pro Thr
1 5
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<211> 114
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 297-2F3 VH
<400> 146
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Met Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ala
20 25 30
Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
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<210> 147
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<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 297-2F3 VL
<400> 147
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Lys Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Leu Ser
20 25 30
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35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Ile Ser Ala Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Thr
85 90 95
Ala His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Ala

Claims (13)

1.特异性结合人ADAM28且具有抑制人ADAM28的酶活性的活性的抗体，其包含轻链可变区和重链可变区，其中
所述轻链可变区包含由SEQ ID NO: 11中显示的氨基酸序列组成的CDR1，由SEQ IDNO: 12中显示的氨基酸序列组成的CDR2，和由SEQ ID NO: 13中显示的氨基酸序列组成的CDR3，并且
所述重链可变区包含由SEQ ID NO: 14中显示的氨基酸序列组成的CDR1，由SEQ IDNO: 15中显示的氨基酸序列组成的CDR2，和由SEQ ID NO: 16中显示的氨基酸序列组成的CDR3。
2.权利要求1的抗体，其中
所述轻链可变区由SEQ ID NO: 19中显示的氨基酸序列组成，并且所述重链可变区由SEQ ID NO: 20中显示的氨基酸序列组成。
3.权利要求1或2的抗体，其中所述抗体在包含SEQ ID NO: 22显示的氨基酸序列的表位处特异性结合人ADAM28。
4.药物组合物，其包含权利要求1-3中任一项的抗体。
5.用于预防或治疗癌症的药剂，其包含权利要求1 -3中任一项的抗体，其中所述癌症表达人ADAM28。
6.癌转移抑制剂，其包含权利要求1 -3中任一项的抗体，其中所述癌症表达人ADAM28。
7.权利要求1-3中任一项的抗体在制备用于预防或治疗哺乳动物中的癌症的药物中的用途，其中所述癌症表达人ADAM28。
8.权利要求7的用途，其中所述哺乳动物是人。
9.权利要求1-3中任一项的抗体在制备用于抑制哺乳动物中的癌转移的药物中的用途，其中所述癌症表达人ADAM28。
10.权利要求9的用途，其中所述哺乳动物是人。
11.多核苷酸，其编码权利要求1 -3中任一项的抗体。
12.载体，其包含权利要求11的多核苷酸。
13.转化体，其包含权利要求12的载体。
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