WO2014032732A1 - Halogenierte benzoxazine und ihre verwendung - Google Patents

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WO2014032732A1
WO2014032732A1 PCT/EP2012/067006 EP2012067006W WO2014032732A1 WO 2014032732 A1 WO2014032732 A1 WO 2014032732A1 EP 2012067006 W EP2012067006 W EP 2012067006W WO 2014032732 A1 WO2014032732 A1 WO 2014032732A1
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WO
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alkyl
group
alkoxy
compound
hydrogen
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PCT/EP2012/067006
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Christian KESENHEIMER
Florian Maier
Ramona STUMM
Bernd Pichler
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Eberhard Karls Universität Tübingen Medizinische Fakultät
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/12—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D498/14—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/041—Heterocyclic compounds
    • A61K51/044—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine, rifamycins
    • A61K51/0463—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine, rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia

Definitions

  • the present invention relates to novel halogenated benzoxazines, processes for their preparation, their use for the diagnosis of diseases and their use for the preparation of medicaments for the diagnosis of diseases, preferably dementias and in particular Alzheimer's disease, in humans and / or animals.
  • Alzheimer's disease is a neurodegenerative disease characterized by an increasing deterioration in cognitive performance, dementia and loss of memory ability.
  • Alzheimer's disease is characterized by the formation of plaques of beta-amyloid peptides (Aß-pAques), which can form many years before the onset of clinical symptoms.
  • Aß-pAques beta-amyloid peptides
  • a problem in the diagnosis and extenso therapy of Alzheimer's disease, as well as in the development of effective therapies for Alzheimer's disease is that to date a final diagnosis only postmortem as part of an autopsy by staining the Aß patches is possible.
  • the possibility of detecting A ⁇ -peaques in the living organism would be of particular interest, since the formation of the A ⁇ -paques begins well before the onset of the clinical symptoms and thus by such a proof a much earlier detection and therapy of Alzheimer's disease would be possible.
  • WO 2005/016934 describes compounds which are structurally similar to the present compounds and which are described as fluorescent dyes for A ⁇ patches. However, it has been shown in these compounds that they are unsuitable for Alzheimer's diagnosis in humans, since their fluorescence can not be observed by the human skull, that is, in living human beings.
  • Another approach in Alzheimer's disease research is the development of labeled tracer compounds, particularly radiolabeled tracer compounds, for use with non-invasive detection techniques such as positron emission tomography (PET) or magnetic resonance imaging (MRI).
  • PET positron emission tomography
  • MRI magnetic resonance imaging
  • the compounds currently most promising in this field are thioflavin derivatives, with the most advanced compound being a radiolabelled thioflavin derivative called Pittsburgh Compound B (PIB).
  • PIB Pittsburgh Compound B
  • Compounds of this type are described, for example, in WO 02/16333 and WO 2004/083195.
  • These connections have the disadvantage that they show a saturation effect from a certain concentration of Aß plaques, that is, that no increase in the tracer signal can be seen despite an increase in the amount of Aß plaques.
  • Aß plaques deposited on vessels with these compounds can not be detected.
  • these compounds are indeed suitable for general diagnosis, but it is questionable whether, for example, the disease can be reliably tracked.
  • halogenated benzoxazines described in the present invention act as tracers for A ⁇ plaques, e.g. suitable for PET and MRI.
  • these compounds provide a signal correlated to the concentration of A ⁇ plaques over a wide concentration range.
  • the invention relates to compounds of the formula
  • X and Y independently of one another are CH, CH 2 , N, S or O, wherein X and Y are not simultaneously CH or CH 2 , where, when X is CH or N, the dashed line between X and the adjacent atom is a bond, and where Y is CH or N, the dashed line is between Y and the neighboring atom represents a bond,
  • R 1 and R 2 are independently selected from the group consisting of (C 1 -C 2 ) -alkyl, (C 1 -C 4 ) -alkoxy and (C 2 -C 2 ) -alky [sulfonyl, wherein alkyl, alkoxy and alkylsulfonyl are included up to three substituents can be substituted, which are selected from the group consisting of 76 Br, 75 Br, 19 F and 18 F,
  • R 3 , R 4 , R 7 , R 8 , Rg and R 10 are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, hydroxy, amino, cyano, nitro, (C 1 -C 4 ) -alkyl, (CC ⁇ Alkylamino and (CC 4 ) alkoxy, wherein alkyl and alkoxy may be substituted with one to three substituents selected from the group consisting of 76 Br, 75 Br, 19 F and 18 F,
  • R 5 when X is CH or N, is a substituent selected from the group consisting of hydrogen, halogen, hydroxy, amino, cyano, nitro, (C 1 -C 4 ) -alkyl, (CC 4 ) Alkylamino and (CC 4 ) -alkoxy, wherein alkyl and alkoxy may be substituted with one to three substituents selected from the group consisting of 76 Br, 75 Br, 19 F and 18 F,
  • R 5 when X is CH 2 , S or O, represents two substituents independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, hydroxy, amino, cyano, nitro, (CC 4 ) -alkyl, (CC 4 ) -alkylamino and (dC 4 ) -alkoxy, wherein alkyl and alkoxy may be substituted with one to three substituents selected from the group consisting of 76 Br, 75 Br, 19 F and 18 F,
  • R 6 when Y is CH or N, is a substituent selected from the group consisting of hydrogen, halogen, hydroxy, amino, cyano, nitro, (CC) alkyl, (C 1 -C 4 ) alkyl - amino and (dC ⁇ alkoxy, wherein alkyl and alkoxy may be substituted with one to three substituents selected from the group consisting of 76 Br, 75 Br, 19 F and 18 F, and
  • R 6 when Y is CH 2 , S or O, are two substituents which are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, hydroxyl, amino, cyano, nitro, (C 1 -C 4 ) -alkyl, (CC 4 ) -alkylamino and (dd) -alkoxy wherein alkyl and alkoxy may be substituted by one to three substituents selected from the group consisting of 76 Br, 75 Br, 19 F and 18 F, wherein the compounds of the formula (I) have at least one substituent selected from the group consisting of 76 Br, 75 Br, 19 F and 8 F, and their salts, solvates and solvates of the salts.
  • Compounds of the invention are the compounds of the formula (I) and their salts, solvates and solvates of the salts, as well as the compounds of formula (I), hereinafter referred to as embodiment (e) and their salts, solvates and solvates of the salts, as far as the compounds encompassed by formula (I) below are not already salts, solvates and solvates of the salts.
  • the present invention encompasses all tautomeric forms.
  • salts physiologically acceptable salts of the compounds according to the invention are preferred in the context of the present invention. But also included are salts which are not suitable for pharmaceutical applications themselves, but can be used for example for the isolation or purification of the compounds of the invention.
  • Physiologically acceptable salts of the compounds of the invention preferably include acid addition salts of mineral acids, carboxylic acids and sulfonic acids, e.g. Salts of hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, toluenesulfonic acid, benzenesulfonic acid, naphthalenedisulfonic acid, acetic acid, trifluoroacetic acid, propionic acid, lactic acid, tartaric acid, malic acid, citric acid, fumaric acid, maleic acid and benzoic acid.
  • salts of hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, toluenesulfonic acid, benzenesulfonic acid, naphthalenedisulfonic acid acetic acid, trifluoroacetic acid, propi
  • solvates such forms of the compounds of the invention are referred to in the context of the invention, which in solid or liquid state Coordinate with solvent molecules to form a complex.
  • Hydrates are a special form of solvates that coordinate with water.
  • Alkyl and the alkyl moieties in alkoxy and alkylsulfonyl are straight-chain or branched alkyl and, unless stated otherwise, include (C 1 -C 6 ) -alkyl, in particular (C 1 -C 4 ) -alkyl, such as, for example, methyl, ethyl, n- Propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, tert-butyl.
  • alkoxy preferably represents a straight-chain or branched alkoxy radical, in particular having 1 to 6, 1 to 4 or 1 to 3 carbon atoms. Preference is given to a straight-chain or branched alkoxy radical having 1 to 3 carbon atoms. Examples which may be mentioned are: methoxy, ethoxy, n-propoxy, isopropoxy, t-butoxy, n-pentoxy and n-hexoxy.
  • Alkylamino represents an alkylamino radical having one or two (independently selected) alkyl substituents, by way of example and preferably methylamino, ethylamino, n-propylamino, isopropylamino, tert-butylamino, n-pentylamino, n-hexylamino, /V./V -Dimethylamino, ⁇ /, / V -diethylamino, / V-ethyl- / V-methylamino, / V-methyl-Wn-propylamino, / V-isopropyl-A / -n-propylamino, N-tert-butyl-N - methylamino, N-ethyl- / Vn-pentylamino and A / -n-hexyl- / V-methylamino.
  • CC 3 alkylamino
  • Halogen is fluorine, chlorine, bromine or iodine and their isotopes, with fluorine and bromine being preferred, unless stated otherwise.
  • halogen in the context of the invention for 76 Br, 75 Br, 19 F and 18 F stand.
  • the invention also relates to compounds of the formula (I) in which
  • X and Y are independently CH, CH 2> N, S or O, where X and Y are not simultaneously CH or CH 2 , where, when X is CH or N, the dotted line between X and the adjacent atom is a bond and, when Y is CH or N, the dashed line between Y and the neighboring atom represents a bond
  • Rt and R2 are independently selected wherein alkyl, alkoxy and alkylsulfonyl be substituted with one to three substituents selected from the group consisting of (CrC 2) alkyl, (dC 2) -alkoxy and (C 1 -C 2) alkylsulfonyl, can be selected from the group consisting of 76 Br, 75 Br, 9 F and 18 F,
  • R 3, R 4, R 7, R 8, Rg and Rio are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, hydroxy, amino, (CC 2) alkyl, and (dC ⁇ alkoxy wherein alkyl and alkoxy may be substituted with one to three substituents selected from the group consisting of
  • R 5 when X is CH or N, is a substituent selected from the group consisting of hydrogen, halogen, hydroxy, amino, (C 1 -C 2 ) -alkyl, and (dC 2 ) -alkoxy, wherein alkyl and alkoxy may be substituted with one to three substituents selected from the group consisting of
  • R 5 when X is CH 2 , S or O, are two substituents independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, hydroxy, amino, (CC 2 ) alkyl, and (CC 2 ) alkoxy wherein alkyl and alkoxy may be substituted with one to three substituents selected from the group consisting of
  • R 6 when Y is CH or N, is a substituent selected from the group consisting of hydrogen, halogen, hydroxy, amino, (C 1 -C 2 ) alkyl, and (CC 1 ) alkoxy, wherein alkyl and alkoxy may be substituted with one to three substituents selected from the group consisting of
  • R 6 when Y is CH 2 , S or O, are two substituents independently selected from the group consisting of Is hydrogen, halogen, hydroxy, amino, (C 1 -C 2 ) alkyl, and (CC 2 ) alkoxy, wherein alkyl and alkoxy may be substituted with one to three substituents selected from the group consisting of
  • the invention also relates to compounds of the formula (I) in which
  • X and Y independently of one another represent CH 2 , S or O, where X and Y are not simultaneously CH 2 ,
  • F and R 2 are independently selected from the group consisting of (dC 2 ) alkyl, (dC 2 ) alkoxy and (dC 2 ) alkylsulfonyl, wherein at least one of the radicals represented by R 1 and R 2 has at least one substituent which is selected from the group consisting of 76 Br, 75 Br, 19 F and 8 F, and
  • R3, R4, R5, Re, R7, Rs, R9 and R 10 are hydrogen, and their salts, solvates and solvates of the salts.
  • the invention also relates to compounds of the formula (I) which are selected from the group consisting of:
  • the compounds of the invention may be preferred if the compounds of the invention have at least one, preferably one, two or three substituents selected from 76 Br, 75 Br or 18 F. In the latter case it may be preferred when two or three substituents are present, they are identical substituents.
  • the invention further provides a process for the preparation of the compounds of the formula (I), wherein a compound of the formula
  • R is hydrogen, (C 1 -C 4 ) -alkyl or phenylcarbonyl, with a compound of the formula
  • R 2 , R 4 , Re, Rg and R 10 have the meaning defined in claim 1, and
  • R12 is oxo or p-nitrophenyl-N, is reacted.
  • the reaction is generally carried out in a polar solvent in the presence of an acid, preferably in a temperature range from 60 ° C. to the reflux of the solvent at atmospheric pressure.
  • Polar solvents are, for example, lower alcohols such as methanol, ethanol, n-propanol or isopropanol, with ethanol being preferred.
  • Acids are preferably mineral acids such as, for example, sulfuric acid, nitric acid, hydrochloric acid or hydrobromic acid, hydrochloric acid is preferred.
  • the compounds of the formula (III) can be prepared, for example, by reacting a compound of the formula (II) in which Rn is hydrogen with 4-nitrophenyl diazonium tetrafluoroborate.
  • the reaction is generally carried out in a polar solvent in the presence of an acid, preferably at room temperature at atmospheric pressure.
  • Polar solvents are, for example, lower alcohols such as methanol, ethanol, n-propanol or isopropanol, with methanol being preferred.
  • Acids are preferably mineral acids, in particular dilute mineral acids such as. Sulfuric acid, nitric acid, hydrochloric acid or hydrobromic acid, with dilute sulfuric acid is preferred.
  • the compounds of the formula (II) in which Rn is hydrogen can be prepared analogously to known processes (see, for example, K.-H. König, Chem. Berichte, 1959, 92 (2), 257-267 and AY Berlin , J. Org. Chem. USSR, 1958, 2355-2359) are prepared from commercially available compounds.
  • the compounds of the formula (II) in which Rn is (C -C 4 ) -alkyl or phenyicarbonyl can be prepared using conventional protecting groups from compounds of the formula (II) in which Rn is hydrogen.
  • the compounds of the invention show an unpredictable, valuable pharmacological activity spectrum.
  • the compounds of the present invention exhibit the ability to bind to A ⁇ patches, thereby labeling them for detection by MRI or PET.
  • Another object of the present invention is therefore the use of the compounds of the invention in a method for the labeling of Aß- PIaques.
  • Another object of the present invention is the use of the compounds of the invention in a method for the diagnosis of Alzheimer's disease.
  • Another object of the present invention is the use of the compounds of the invention for the manufacture of a medicament for the diagnosis of diseases, preferably dementias and in particular Alzheimer's disease.
  • Another object of the present invention is a method for the diagnosis of diseases, preferably dementias, and in particular Alzheimer's disease, which comprises the administration of a compound of the invention to a human or an animal in need of it.
  • diseases preferably dementias, and in particular Alzheimer's disease
  • Another object of the present invention is a method for labeling Aß plaques, which comprises contacting a compound according to the invention with biological material, in particular brain parenchyma and cerebral vasculature.
  • the aforementioned method according to the invention can be carried out both in vivo, e.g. for the diagnosis of Alzheimer's disease, as well as in vitro, e.g. to screen for new drugs.
  • the compounds according to the invention can be administered systemically and / or locally.
  • the compounds of the invention can be administered parenterally.
  • the compounds according to the invention can be administered in suitable administration forms.
  • Parenteral administration can be carried out with the avoidance of an absorption step (eg intravenously, intraarterially, intracardially, intraspinally or intraluminally). bal) or with involvement of a resorption (eg intramuscular, subcutaneous, intracutaneous, percutaneous or intraperitoneal).
  • an absorption step eg intravenously, intraarterially, intracardially, intraspinally or intraluminally.
  • a resorption eg intramuscular, subcutaneous, intracutaneous, percutaneous or intraperitoneal.
  • suitable application forms include injection and infusion preparations in the form of solutions, suspensions, emulsions, lyophilisates or sterile powders.
  • the compounds of the invention can be converted into the mentioned application forms. This can be done in a conventional manner by mixing with inert, non-toxic, pharmaceutically suitable excipients.
  • These adjuvants include, among others. Carriers (for example microcrystalline cellulose, lactose, mannitol), solvents (eg liquid polyethylene glycols), emulsifiers and dispersing or wetting agents (for example sodium dodecyl sulfate, polyoxysorbitanoleate), binders (for example polyvinylpyrrolidone), synthetic and natural polymers (for example albumin), stabilizers (eg antioxidants such as ascorbic acid), dyes (eg, inorganic pigments such as iron oxides), and flavor and / or odor remedies.
  • Carriers for example microcrystalline cellulose, lactose, mannitol
  • solvents eg liquid polyethylene glycols
  • emulsifiers and dispersing or wetting agents for example sodium dodecyl s
  • compositions containing at least one compound of the invention usually together with one or more inert, non-toxic, pharmaceutically suitable excipients, and their use for the purposes mentioned above.
  • Fig. 1 Ol scans of transgenic Alzheimer mice (right) and control animals
  • Fig. 2 Ol scans of transgenic Alzheimer mice (right) and control animals
  • Example 3 shows a diagram in which the signals measured in oil scans for the enrichment of the compound of Example 3 are plotted against the age of transgenic Alzheimer mice, and
  • Ts-Cl or tosyl chloride 4-toluenesulfonic acid chloride
  • Perkin Elmer LS 45 fluorescence spectrometer The spectra were recorded in 3 mL quartz glass cuvettes using Uvasol methanol or TraceSelect water as solvent.
  • the synthesis of the title compound is analogous to the synthesis of the compound of Example 1A, wherein diethanolamine is used instead of 2- (ethylamino) ethanol.
  • the title compound is obtained in a yield of 77%.
  • Zinc dust (0.2 mol) is added to a solution of the compound of Example 1A (0.1 mol) in 250 ml of 10% acetic acid and the solution is refluxed for 30 min until the TLC analysis shows a complete reaction conversion ,
  • the violet suspension is allowed to cool to room temperature, filtered through a Buchner funnel and the solid washed with water.
  • the filtrate is treated with conc.
  • Ammonia neutralized and extracted three times with 200 mL of ethyl acetate.
  • the combined organic phases are washed once with saturated NaCl solution, dried over magnesium sulfate and concentrated on a rotary evaporator to give a dark brown oil (yield: 53%).
  • aqueous H 18 F In a 5 mL reaction vial 2 mL aqueous H 18 F are introduced and at room temperature with 100 .mu.l of a 3.5% aqueous potassium carbonate solution, 16 mg Kryptofix222 (Merck Darmstadt) and 1 mL acetonitrile (DNA Grade). The solution is heated to 140 ° C with vigorous stirring and an argon gas stream. In 4 min intervals are then added four times in each case 1 mL acetonitrile. 20 minutes after the start of the reaction is checked whether there is still liquid in the reaction vessel. If any liquid is present, the reaction mixture stirred for another 4 minutes.
  • reaction vessel is allowed to cool to ⁇ 30 ° C and the residue is taken up in 1 ml of acetonitrile, whereby a yellow solution is obtained. This solution is then used directly for the radiolabelling in the next step.
  • the title compound is obtained in a yield of> 90%.
  • the synthesis of the title compound is analogous to the synthesis of the compound of Example 14A, starting from the compound of Example 4A.
  • the title compound is obtained in a yield of 94%.
  • This compound does not fall within the scope of claim 1 and is intended to serve merely as a non-radioactive model compound for 76 Br and 75 Br substituted compounds.
  • transgenic APPPS1 mice and non-transgenic control mice of various ages provided by Prof. Mathias Jucker, Department of Cellular Neurology , Hertie Institute for Clinical Brain Research, University of Tübingen
  • the compound was formulated in physiological saline (0.9% NaCl) at a concentration of 0.05 mg / ml and injected intravenously into the mice.
  • mice were examined by oil (Aequoria Hamamatsu Optical Imaging System), the signal was detected at 650 nm.
  • the signal strength after subtraction of the autofluorescence was calculated as a percentage (results relative intensity values, l re i) and then the percentage difference between transgenic and control mice - hereinafter referred to as specific binding (B sp ) - calculated and applied over the age of the transgenic mice ( see Fig. 3). It has been shown here that there is a clear correlation between age and thus progression of Alzheimer's disease and signal strength, in particular it has been found that there are no saturation or ceiling effects in the compounds of the invention to the effect that the signal strength from a certain concentration of Aß plaques no longer increases. On the contrary, at the age of 21 months, a particularly strong signal was measured for the transgenic mice.
  • transgenic APP23 mice and non-transgenic control mice provided by Dr. Matthias Staufenbiel, Novartis Institutes for BioMedical Research, Basel, Switzerland
  • transgenic APP23 mice and non-transgenic control mice provided by Dr. Matthias Staufenbiel, Novartis Institutes for BioMedical Research, Basel, Switzerland
  • the compound of Example 1 was formulated in saline (0.9% NaCl) at a concentration of 1 mg / ml
  • MRI ClinScan, Bruker BioSpin MRI, Ettlingen, Germany
  • optical fluorescence measurements Alquoria Hamamatsu Optical Imaging System

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Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft neue halogenierte Benzoxazine, Verfahren zu ihrer Herstellung, ihre Verwendung zur Diagnose von Krankheiten sowie ihre Verwendung zur Herstellung von Arzneimitteln zur Diagnose von Krankheiten, vorzugsweise Demenzerkrankungen und insbesondere der Alzheimer-Krankheit, bei Menschen und/oder Tieren.

Description

Halogenierte Benzoxazine und ihre Verwendung
[0001] Die vorliegende Erfindung betrifft neue halogenierte Benzoxazine, Verfahren zu ihrer Herstellung, ihre Verwendung zur Diagnose von Krankheiten sowie ihre Verwendung zur Herstellung von Arzneimitteln zur Diagnose von Krankheiten, vorzugsweise Demenzerkrankungen und insbesondere der Alzheimer-Krankheit, bei Menschen und/oder Tieren.
[0002] In einer alternden Gesellschaft kommt der Diagnose und Therapie von Erkrankungen, die üblicherweise erst bei älteren Menschen auftreten, eine immer größere Bedeutung zu. Zu diesen Erkrankungen gehören unter anderem die neurodegenerativen Erkrankungen und insbesondere die Alzheimer-Krankheit, die etwa 70% aller neurodegenerativen Erkrankungen ausmacht. [0003] Die Alzheimer-Krankheit ist eine durch eine zunehmende Verschlechterung der kognitiven Leistungsfähigkeit, Demenz und Verlust der Gedächtnisfähigkeiten gekennzeichnete neurodegenerative Erkrankung. Auf zellulärem Level ist die Alzheimer- Krankheit durch die Bildung von Plaques aus Beta-Amyloid-Peptiden (Aß-PIaques) gekennzeichnet, die sich bereits viele Jahre vor Auftreten der klinischen Symptome bilden können.
[0004] Ein Problem in der Diagnose und in extenso der Therapie der Alzheimer-Krankheit, sowie in der Entwicklung wirksamer Therapien für die Alzheimer-Krankheit liegt darin, dass bis heute eine abschließende Diagnose nur postmortem im Rahmen einer Autopsie durch Anfärben der Aß-PIaques möglich ist. Die Möglichkeit Aß-PIaques im lebenden Organismus nachzuweisen wäre insbesondere daher von Interesse, da die Bildung der Aß-PIaques deutlich vor dem Ausbruch der klinischen Symptome beginnt und somit durch einen solchen Nachweis eine deutlich frühere Erkennung und Therapie der Alzheimer-Krankheit möglich wäre.
[0005] Es gibt bereits verschiedene Ansätze um Aß-PIaques zu markieren und sichtbar zu machen. So sind in der WO 2005/016934 Verbindungen beschrieben, die strukturell den vorliegenden Verbindungen ähnlich sind und die als Fluoreszenzfarbstoffe für Aß-PIaques beschrieben sind. Es hat sich allerdings bei diesen Verbindungen gezeigt, dass diese für die Alzheimer-Diagnostik im Menschen ungeeignet sind, da ihre Fluoreszenz nicht durch den menschlichen Schädel, also im lebenden Menschen, beobachtet werden kann.
[0006] Ein weiterer Ansatz in der Forschung zur Alzheimer-Diagnostik besteht in der Entwicklung von markierten Tracer-Verbindungen, insbesondere radioaktiv markierten Tracer-Verbindungen, zur Verwendung mit nicht-invasiven Detektionsverfahren wie bspw. Positronen-Emissions-Tomographie (PET) oder Magnetresonanztomographie (MRT). Die auf diesem Gebiet zurzeit vielversprechendsten Verbindungen sind Thioflavin- Derivate, wobei die am weitesten entwickelte Verbindung ein radiomarkiertes Thioflavin- Derivat ist, das als Pittsburgh Compound B (PIB) bezeichnet wird. Verbindungen dieser Art sind bspw. in der WO 02/16333 und der WO 2004/083195 beschrieben. Diese Verbin- düngen haben allerdings den Nachteil, dass diese ab einer gewissen Konzentration an Aß-Plaques einen Sättigungseffekt zeigen, das heißt, dass trotz einer Zunahme der Menge an Aß-Plaques keine Zunahme im Tracer-Signal mehr zu erkennen ist. Des Weiteren können mit diesen Verbindungen an Gefäßen abgelagerte Aß-Plaques nicht detektiert werden. Im Hinblick auf diese Nachteile sind diese Verbindungen zwar zur allgemeinen Diagnose geeignet, es ist allerdings fraglich, ob z.B. der Krankheitsverlauf damit zuverlässig verfolgt werden kann.
[0007] Somit besteht ein dringender Bedarf an neuen Verbindungen zum Einsatz in der Alzheimer-Diagnostik, die die oben genannten Nachteile nicht aufweisen und mit denen in vivo eine Alzheimer-Erkrankung frühzeitig diagnostiziert und über den gesamten Krankheitsverlauf verfolgt werden kann.
[0008] Überraschenderweise wurde gefunden, dass die in der vorliegenden Erfindung beschriebenen halogenierten Benzoxazine als Tracer für Aß-Plaques z.B. für die PET und MRT geeignet sind. Insbesondere hat sich gezeigt, dass diese Verbindungen über einen breiten Konzentrationsbereich ein zur Konzentration an Aß-Plaques korreliertes Signal liefern.
[0009] Gegenstand der Erfindung sind Verbindungen der Formel
Figure imgf000004_0001
in welcher,
X und Y unabhängig voneinander für CH, CH2, N, S oder O stehen, wobei X und Y nicht gleichzeitig CH oder CH2 sind, wobei, wenn X für CH oder N steht, die gestrichelte Linie zwischen X und dem Nachbaratom eine Bindung darstellt, und wobei, wenn Y für CH oder N steht, die gestrichelte Linie zwischen Y und dem Nachbaratom eine Bindung darstellt,
Ri und R2 unabhängig voneinander ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus (Ci-C2)-Alkyl, (C^C^-Alkoxy und (C -C2)-Alky[- sulfonyl, wobei Alkyl, Alkoxy und Alkylsulfonyl mit ein bis drei Substi- tuenten substituiert sein können, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus 76Br, 75Br, 19F und 18F,
R3, R4, R7, R8, Rg und R10 unabhängig voneinander ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoff, Halogen, Hydroxy, Amino, Cyano, Nitro, (C1-C4)-Alkyl, (C C^-Alkylamino und (C C4)- Alkoxy, wobei Alkyl und Alkoxy mit ein bis drei Substituenten substituiert sein können, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus 76Br, 75Br, 19F und 18F,
R5, wenn X für CH oder N steht, für einen Substituenten steht, der ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoff, Halogen, Hydroxy, Amino, Cyano, Nitro, (C1-C4)-Alkyl, (C C4)- Alkylamino und (C C4)-Alkoxy, wobei Alkyl und Alkoxy mit ein bis drei Substituenten substituiert sein können, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus 76Br, 75Br, 19F und 18F,
R5, wenn X für CH2, S oder O steht, für zwei Substituenten steht, die unabhängig voneinander ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoff, Halogen, Hydroxy, Amino, Cyano, Nitro, (C C4)-Alkyl, (C C4)-Alkylamino und (d-C4)-Alkoxy, wobei Alkyl und Alkoxy mit ein bis drei Substituenten substituiert sein können, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus 76Br, 75Br, 19F und 18F,
R6, wenn Y für CH oder N steht, für einen Substituenten steht der ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoff, Halogen, Hydroxy, Amino, Cyano, Nitro, (C C )-Alkyl, (C1-C4)-Alkyl- amino und (d-C^-Alkoxy, wobei Alkyl und Alkoxy mit ein bis drei Substituenten substituiert sein können, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus 76Br, 75Br, 19F und 18F, und
R6, wenn Y für CH2, S oder O steht, für zwei Substituenten steht, die unabhängig voneinander ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoff, Halogen, Hydroxy, Amino, Cyano, Nitro, (d- C4)-Alkyl, (C C4)-Alkylamino und (d-d)-Alkoxy wobei Alkyl und Alkoxy mit ein bis drei Substituenten substituiert sein können, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus 76Br, 75Br, 19F und 18F, wobei die Verbindungen der Formel (I) zumindest einen Substituenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus 76Br, 75Br, 19F und 8F aufweisen, und ihre Salze, Solvate und Solvate der Salze.
[0010] Erfindungsgemäße Verbindungen sind die Verbindungen der Formel (I) und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze, sowie die von Formel (I) umfassten, nachfolgend als Ausführungsbeispiel(e) genannten Verbindungen und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze, soweit es sich bei den von Formel (I) umfassten, nachfolgend genannten Verbindungen nicht bereits um Salze, Solvate und Solvate der Salze handelt.
[0011] Sofern die erfindungsgemäßen Verbindungen in tautomeren Formen vorkommen können, umfasst die vorliegende Erfindung sämtliche tautomere Formen.
[0012] Als Salze sind im Rahmen der vorliegenden Erfindung physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen bevorzugt. Umfasst sind aber auch Salze, die für pharmazeutische Anwendungen selbst nicht geeignet sind, aber beispielsweise für die Isolierung oder Reinigung der erfindungsgemäßen Verbindungen verwendet werden können.
[0013] Physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen vorzugsweise Säureadditionssalze von Mineralsäuren, Carbonsäuren und Sulfonsäuren, z.B. Salze der Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Methansulfonsäure, Ethansulfonsäure, Toluolsulfonsäure, Benzol- sulfonsäure, Naphthalindisulfonsäure, Essigsäure, Trifluoressigsäure, Propionsäure, Milchsäure, Weinsäure, Äpfelsäure, Zitronensäure, Fumarsäure, Maleinsäure und Benzoesäure.
[0014] Als Solvate werden im Rahmen der Erfindung solche Formen der erfindungsgemäßen Verbindungen bezeichnet, welche in festem oder flüssigem Zustand durch Koordination mit Lösungsmittelmolekülen einen Komplex bilden. Hydrate sind eine spezielle Form der Solvate, bei denen die Koordination mit Wasser erfolgt.
[0015] Im Rahmen der vorliegenden Erfindung haben die Substituenten, soweit nicht anders spezifiziert, die folgende Bedeutung:
[0016] Alkyl sowie die Alkylteile in Alkoxy und Alkylsulfonyl stehen für geradliniges oder verzweigtes Alkyl und umfassen, wenn nicht anders angegeben, (Ci-C6)-Alkyl, insbesondere (d-C4)-Alkyl, wie z.B. Methyl, Ethyl, n-Propyl, Isopropyl, n-Butyl, Isobutyl, tert.-Butyl.
[0017] Alkoxy steht im Rahmen der Erfindung vorzugsweise für einen geradkettigen oder verzweigten Alkoxyrest insbesondere mit 1 bis 6, 1 bis 4 bzw. 1 bis 3 Kohlenstoffatomen. Bevorzugt ist ein geradkettiger oder verzweigter Alkoxyrest mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen. Beispielhaft und vorzugsweise seien genannt: Methoxy, Ethoxy, n- Propoxy, Isopropoxy, t-Butoxy, n-Pentoxy und n-Hexoxy.
[0018] Alkylamino steht für einen Alkylaminorest mit einem oder zwei (unabhängig voneinander gewählten) Alkylsubstituenten, beispielhaft und vorzugsweise für Methylamino, Ethylamino, n-Propylamino, Isopropylamino, tert-Butylamino, n- Pentylamino, n-Hexylamino, /V./V-Dimethylamino, Λ/,/V-Diethylamino, /V-Ethyl-/V- methylamino, /V-Methyl-W-n-propylamino, /V-lsopropyl-A/-n-propylamino, N-tert-Buty\-N- methylamino, N-Ethyl-/V-n-pentylamino und A/-n-Hexyl-/V-rnethylamino. C C3-Alkylamino steht beispielsweise für einen Monoalkylaminorest mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen oder für einen Dialkylaminorest mit jeweils 1 bis 3 Kohlenstoffatomen pro Alkylsubstituent.
[0019] Halogen steht für Fluor, Chlor, Brom oder Jod und deren Isotope, wobei Fluor und Brom bevorzugt sind, wenn nichts anderes angegeben ist. Insbesondere kann Halogen im Rahmen der Erfindung fü 76Br, 75Br, 19F und 18F stehen.
[0020] Die oben aufgeführten allgemeinen oder in Vorzugsbereichen angegebenen Restedefinitionen gelten sowohl für die Endprodukte der Formel (I) als auch entsprechend für die jeweils zur Herstellung benötigten Ausgangsstoffe bzw. Zwischenprodukte.
[0021] Die in den jeweiligen Kombinationen bzw. bevorzugten Kombinationen von Resten im Einzelnen angegebenen Restedefinitionen werden unabhängig von den jeweilig angegebenen Kombinationen der Reste beliebig auch durch Restedefinitionen anderer Kombinationen ersetzt.
[0022] Gegenstand der Erfindung sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher
X und Y unabhängig voneinander für CH, CH2> N, S oder O stehen, wobei X und Y nicht gleichzeitig CH oder CH2 sind, wobei, wenn X für CH oder N steht, die gestrichelte Linie zwischen X und dem Nachbaratom eine Bindung darstellt, und wobei, wenn Y für CH oder N steht, die gestrichelte Linie zwischen Y und dem Nachbaratom eine Bindung darstellt
R-t und R2 unabhängig voneinander ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus (CrC2)-Alkyl, (d-C2)-Alkoxy und (C1-C2)-Alkylsulfonyl, wobei Alkyl, Alkoxy und Alkylsulfonyl mit ein bis drei Substituenten substituiert sein können, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus 76Br, 75Br, 9F und 18F,
R3, R4, R7, R8, Rg und Rio unabhängig voneinander ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoff, Halogen, Hydroxy, Amino, (C C2)-Alkyl, und (d-C^-Alkoxy, wobei Alkyl und Alkoxy mit ein bis drei Substituenten substituiert sein können, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus
76Br, 75Br, 19F und 18F,
R5, wenn X für CH oder N steht, für einen Substituenten steht, der ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoff, Halogen, Hydroxy, Amino, (C1-C2)-Alkyl, und (d-C2)-Alkoxy, wobei Alkyl und Alkoxy mit ein bis drei Substituenten substituiert sein können, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus
76Br, 75Br, 19F und 18F,
R5, wenn X für CH2, S oder O steht, für zwei Substituenten steht die unabhängig voneinander ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoff, Halogen, Hydroxy, Amino, (C C2)-Alkyl, und (C C2)- Alkoxy, wobei Alkyl und Alkoxy mit ein bis drei Substituenten substituiert sein können, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus
76Br, 75Br, 19F und 18F,
R6, wenn Y für CH oder N steht, für einen Substituenten steht der ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoff, Halogen, Hydroxy, Amino, (C1-C2)-Alkyl, und (C C^-Alkoxy, wobei Alkyl und Alkoxy mit ein bis drei Substituenten substituiert sein können, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus
76Br, 75Br, 19F und 18F,
R6, wenn Y für CH2, S oder O steht, für zwei Substituenten steht die unabhängig voneinander ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoff, Halogen, Hydroxy, Amino, (d-C2)-Alkyl, und (C C2)- Alkoxy, wobei Alkyl und Alkoxy mit ein bis drei Substituenten substituiert sein können, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus
76Br, 75Br, 9F und 18F, wobei die Verbindungen der Formel (I) zumindest einen Substituenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus 76Br, 75Br, 19F und 18F aufweisen, und ihre Salze, Solvate und Solvate der Salze.
[0023] Gegenstand der Erfindung sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher
X und Y unabhängig voneinander für CH2, S oder O stehen, wobei X und Y nicht gleichzeitig CH2 sind,
F und R2 unabhängig voneinander ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus (d-C2)-Alkyl, (d-C2)-Alkoxy und (d-C2)-Alkylsulfonyl, wobei zumindest einer der durch R1 und R2 dargestellten Reste mit zumindest einem Substituenten substituiert ist, der ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus 76Br, 75Br, 19F und 8F, und
R3, R4, R5, Re, R7, Rs, R9 und R10 für Wasserstoff stehen, und ihre Salze, Solvate und Solvate der Salze. [0024] Gegenstand der Erfindung sind auch Verbindungen der Formel (I), die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus:
8-Ethyl-4-(2-fluoroethyl)-3,8,9, 10-tetrahydro-2H-bis([1 ,4]-oxazino)[2,3-b:3\2'- /]phenoxazin-4-ium,
4-(2-Fluoroethyl)-8-(2-hydroxyethyl)-3,8,9, 10-tetrahydro-2H-bis([1 ,4]oxazino)[2,3- b:3',2'-/]phenoxazin-4-ium,
[F-18]-8-Ethyl-4-(2-fluoroethyl)-3,8,9, 10-tetrahydro-2H-bis([1 ,4]-oxazino)[2,3- ö:3',2'-/]phenoxazin-4-ium,
[F-18]-4-(2-fluoroethyl)-8-(2-hydroxyethyl)-3,8,9,10-tetrahydro-2H- bis([1 ,4]oxazino)[2,3-ö:3',2'-/]phenoxazin-4-ium,
[Br-75]-8-Ethyl-4-(2-bromoethyl)-3,8,9,10-tetrahydro-2H-bis([1 ,4]-oxazino)[2,3- 0:3',2'-/]phenoxazin-4-ium,
[Br-75]-4-(2-Bromoethyl)-8-(2-hydroxyethyl)-3,8,9,10-tetrahydro-2H- bis([1 ,4]oxazino)[2, 3-ό:3', 2'-/]phenoxazin-4-ium,
[Br-76]-8-Ethyl-4-(2-bromoethyl)-3,8,9,10-tetrahydro-2H-bis([1 ,4]-oxazino)[2,3- ö:3',2'-/]phenoxazin-4-ium, und
[Br-76]-4-(2-bromoethyl)-8-(2-hydroxyethyl)-3,8,9,10-tetrahydro-2H- bis([1 ,4]oxazino)[2, 3-ό:3', 2'-/]phenoxazin-4-ium, wobei das jeweilige Gegenion frei wählbar ist. [0025] In einigen Ausführungsformen der Erfindung kann es bevorzugt sein, wenn die Verbindungen der Formel (I) zumindest einen, vorzugsweise mehrere, wie bspw. zwei, drei, vier, fünf oder sechs 19F Substituenten aufweisen.
[0026] In einigen Ausführungsformen der Erfindung kann es bevorzugt sein, wenn die Verbindungen der Erfindung zumindest einen, vorzugsweise einen, zwei oder drei Substituenten aufweisen, die ausgewählt sind aus 76Br, 75Br oder 18F. In letzterem Fall kann es bevorzugt sein, wenn zwei oder drei Substituenten vorliegen, dass es sich um identische Substituenten handelt.
[0027] In einigen Ausführungsformen der Erfindung kann es vorteilhaft sein, wenn die Substituenten die ausgewählt sind aus 76Br, 75Br, 19F und 8F, an die durch F^ und R2 dargestellten Reste gebunden sind.
[0028] Gegenstand der Erfindung ist weiterhin ein Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel (I), wobei eine Verbindung der Formel
Figure imgf000013_0001
in welcher,
Ri . R3, R5, R7 und R8 die in Anspruch 1 definierte Bedeutung aufweisen, und
RH für Wasserstoff, (d-C4)-Alkyl oder Phenylcarbonyl steht, mit einer Verbindung der Formel
Figure imgf000014_0001
in welcher
R2, R4, Re, Rg und R10 die in Anspruch 1 definierte Bedeutung aufweisen, und
R12 für Oxo oder p-Nitrophenyl-N steht, umgesetzt wird.
[0029] Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in einem polaren Lösungsmittel in Gegenwart eine Säure, bevorzugt in einem Temperaturbereich von 60°C bis zum Rück- fluss des Lösungsmittels bei Normaldruck.
[0030] Polare Lösungsmittel sind bspw. niedere Alkohole wie Methanol, Ethanol, n-Propanol oder Isopropanol, wobei Ethanol bevorzugt ist.
[0031] Säuren sind vorzugsweise Mineralsäuren wie bspw. Schwefelsäure, Salpetersäure, Chlorwasserstoffsäure oder Bromwasserstoffsäure, wobei Chlorwasserstoffsäure bevorzugt ist.
[0032] Die Verbindungen der Formel (III) können z.B. hergestellt werden, indem eine Verbindung der Formel (II), in der Rn für Wasserstoff steht, mit 4-Nitro-phenyl- diazonium-tetrafluoroborat umgesetzt wird. [0033] Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in einem polaren Lösungsmittel in Gegenwart eine Säure, bevorzugt bei Raumtemperatur bei Normaldruck.
[0034] Polare Lösungsmittel sind bspw. niedere Alkohole wie Methanol, Ethanol, n-Propanol oder Isopropanol, wobei Methanol bevorzugt ist.
[0035] Säuren sind vorzugsweise Mineralsäuren, insbesondere verdünnte Mineralsäuren wie bspw. Schwefelsäure, Salpetersäure, Chlorwasserstoffsäure oder Bromwasserstoffsäure, wobei verdünnte Schwefelsäure bevorzugt ist.
[0036] Die Verbindungen der Formel (II), in denen Rn für Wasserstoff steht, können analog zu bekannten Verfahren (siehe z.B. K.-H. König, Chem. Berichte, 1959, 92 (2), 257-267 und A. Y. Berlin, J. Org. Chem. USSR, 1958, 2355-2359) aus kommerziell erhältlichen Verbindungen hergestellt werden.
[0037] Die Verbindungen der Formel (II), in denen Rn für (C -C4)-Alkyl oder Phenyicarbonyl steht, können unter Verwendung üblicher Schutzgruppen aus Verbindungen der Formel (II) hergestellt werden, in denen Rn für Wasserstoff steht.
[0038] Die in den erfindungsgemäßen Verbindungen vorhandenen 76Br, 75Br, 19F bzw. 18F Substituenten können bereits in den Ausgangsverbindungen vorliegen oder während der Synthese eingeführt werden.
[0039] Es kann hierbei im Rahmen der Erfindung vorteilhaft sein, in einer Zwischenstufe eine Verbindung der Formel (II) oder (III) zu synthetisieren, in der ^ oder R2 für ein Hydroxy-(CrC2)-alkyl steht, in einer weiteren Stufe die Hydroxygruppe von oder R2 in eine Abgangsgruppe umzuwandeln und diese dann zur Einführung eines 76Br, 75Br, 19F oder 18F Substituenten einer entsprechenden nukleophilen Substitutionsreaktion zu unterziehen.
[0040] Die Synthese der erfindungsgemäßen Verbindungen kann durch die nachfolgenden Syntheseschemata beispielhaft verdeutlicht werden. eaktionsschema 1 :
Figure imgf000016_0001
Zn-Staub,
HOAc (10 Vol.-%), H20 Δ, 2h
Figure imgf000016_0002
Reaktionsschema 2:
Figure imgf000016_0003
Bz-Cl, Et3N, CH2CI2, 0°C => rt, über Nacht
Figure imgf000016_0004
Reaktionsschema 3:
Figure imgf000017_0001
[K] 8F, Kryptofix 222 K2C03, MeCN, 85°C, 15-30 min
Figure imgf000017_0002
Reaktionsschema 4:
Figure imgf000017_0003
Reaktionsschema 5
Figure imgf000018_0001
[0041] Die erfindungsgemäßen Verbindungen zeigen ein nicht vorhersehbares, wertvolles pharmakologisches Wirkspektrum. Die erfindungsgemäßen Verbindungen zeigen die Fähigkeit an Aß-PIaques zu binden, wodurch diese zur Detektion mittels MRT oder PET markiert werden.
[0042] Sie eignen sich daher zur Verwendung als Arzneimittel zur Diagnose von Krankheiten, vorzugsweise von Demenzerkrankungen und insbesondere der Alzheimer-Krankheit.
[0043] Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist daher die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen in einem Verfahren zur Markierung von Aß- PIaques. [0044] Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen in einem Verfahren zur Diagnose der Alzheimer- Krankheit.
[0045] Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Herstellung eines Arzneimittels zur Diagnose von Krankheiten, vorzugsweise von Demenzerkrankungen und insbesondere der Alzheimer-Krankheit.
[0046] Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Diagnose von Krankheiten, vorzugsweise von Demenzerkrankungen und insbesondere der Alzheimer-Krankheit, das die Verabreichung einer erfindungsgemäßen Verbindung an einen Menschen oder ein Tier, der (das) dieses benötigt, aufweist.
[0047] Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Markierung von Aß-Plaques, das das Inkontaktbringen einer erfindungsgemäßen Verbindung mit biologischem Material, insbesondere Hirnparenchym und Hirnvaskulatur, aufweist.
[0048] Das zuvor genannte erfindungsgemäße Verfahren kann dabei sowohl in vivo z.B. zur Diagnose der Alzheimer-Krankheit, wie auch in vitro, z.B. zum Screening nach neuen Medikamenten, erfolgen.
[0049] Die erfindungsgemäßen Verbindungen können systemisch und/oder lokal appliziert werden. Bevorzugt können die erfindungsgemäßen Verbindungen parenteral verabreicht werden.
[0050] Für die gewünschten Applikationswege können die erfindungsgemäßen Verbindungen in geeigneten Applikationsformen verabreicht werden.
[0051] Die parenterale Applikation kann unter Umgehung eines Resorptionsschrittes geschehen (z.B. intravenös, intraarteriell, intrakardial, intraspinal oder intralum- bal) oder unter Einschaltung einer Resorption (z.B. intramuskulär, subcutan, intracutan, percutan oder intraperitoneal). Für die parenterale Applikation eignen sich als Applikationsformen u.a. Injektions- und Infusionszubereitungen in Form von Lösungen, Suspensionen, Emulsionen, Lyophilisaten oder sterilen Pulvern.
[0052] Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in die angeführten Applikationsformen überführt werden. Dies kann in an sich bekannter Weise durch Mischen mit inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoffen geschehen. Zu diesen Hilfsstoffen zählen u.a. Trägerstoffe (beispielsweise mikrokristalline Cellulose, Laktose, Mannitol), Lösungsmittel (z.B. flüssige Polyethylenglycole), Emulgatoren und Dispergier- oder Netzmittel (beispielsweise Natriumdodecylsulfat, Polyoxysorbitanoleat), Bindemittel (beispielsweise Polyvinylpyrrolidon), synthetische und natürliche Polymere (beispielsweise Albumin), Stabilisatoren (z.B. Antioxidantien wie beispielsweise Ascorbinsäure), Farbstoffe (z.B. anorganische Pigmente wie beispielsweise Eisenoxide) und Geschmacks- und/oder Geruchskorrigentien.
[0053] Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, die mindestens eine erfindungsgemäße Verbindung, üblicherweise zusammen mit einem oder mehreren inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoffen enthalten, sowie deren Verwendung zu den zuvor genannten Zwecken.
[0054] Es versteht sich, dass die vorstehend genannten und die nachstehend noch zu erläuternden Merkmale nicht nur in der jeweils angegebenen Kombination, sondern auch in anderen Kombinationen oder in Alleinstellung verwendbar sind, ohne den Rahmen der vorliegenden Erfindung zu verlassen.
[0055] Die Erfindung wird nachstehend in Bezug auf die folgenden nicht einschränkenden Beispiele sowie die Zeichnungen näher beschrieben und erläutert. Es zeigen:
Fig. 1 : Ol-Scans von transgenen Alzheimermäusen (rechts) und Kontrolltieren
(links), Alter jeweils 12 Monate, nach Verabreichung von 0.1 mg/kg Kör- pergewicht der Verbindung von Beispiel 3, gemessen 120 min, nach der Injektion
Fig. 2: Ol-Scans von transgenen Alzheimermäusen (rechts) und Kontrolltieren
(links) nach Verabreichung von 0.1 mg/kg Körpergewicht der Verbindung von Beispiel 3, für Tiere im Alter von 2 Monaten (obere Reihe) und 12 Monaten (untere Reihe),
Fig. 3: ein Diagramm, in dem die in Ol-Scans für die Anreicherung der Verbindung von Beispiel 3 gemessenen Signale gegen das Lebensalter trans- gener Alzheimermäuse aufgetragen sind, und
Fig. 4: ein Diagramm, in dem die in MRT-Scans für die Anreicherung der Verbindung von Beispiel 1 gemessenen Signale, sowie Signale entsprechender Messungen der Fluoreszenz gegen die Messdauer aufgetragen sind.
[0056] Die Prozentangaben in den folgenden Tests und Beispielen sind, sofern nicht anders angegeben, Gewichtsprozente; Teile sind Gewichtsteile. Lösungsmittelverhältnisse, Verdünnungsverhältnisse und Konzentrationsangaben von flüssig/flüssig- Lösungen beziehen sich jeweils auf das Volumen.
Abkürzungsverzeichnis
Aß-Plaques Amyloid-beta-Peptid-Ablagerungen
Bz-Cl Benzoesäure-chlorid
DMAP 4-Dimethylamino-pyridin
DMF N,N-Dimethylformamid
GC/ S Gaschromatographie gekoppelt mit
Massenspektrometrie
Kryptofix222 4,7,13,16,21 ,24-Hexaoxa-1 , 10- diazabicyclo[8.8.8]-hexacosan
MRT Magnet Resonanz Tomographie
MW Molekulargewicht
Ol optische Bildgebung
PE Petrolether bzw. Petroleumbenzin
PET Positronen Emissions Tomographie
PIB Pittsburgh Compound B
TBAF Tetrabutylammonium-fluorid-trihydrat
TBS-CI Chlor-terf-butyl-dimethylsilan
THF Tetrahydrofuran
Ts-Cl bzw. Tosyl-chlorid 4-Toluolsulfonsäure-chlorid Beispiele
A. Analytische Geräte und Methoden:
GC/ S
[0057] Agilent 7890 GC mit einem 5975C MSD mit El, Säule: HP5-MS, Starttemperatur: 50°C, linearer Temperaturgradient auf 300°C innerhalb 20 min.
Radio-HPLC
[0058] Agilent 1260 HPLC mit MWD-, Rl- und Radiodetektor.
LC/MS
[0059] Agilent 1200 HPLC mit MWD und MMI Single Quad MSD. PC-Scanner
[0060] Perkin Elmer Cyclone Plus Phosphor Imager. IR-Spektroskopie
[0061] Perkin Elmer FT-IR Spectrum ONE mit einer ATR Sampling Unit. Die Proben wurde entweder in fester oder flüssiger Form direkt mit der ATR Sampling Unit gemessen ohne die Verwendung von Presslingen oder Küvetten. UV/Vis-Spektroskopie
[0062] Perkin Elmer Lambda 25 UV/Vis Spektrometer. Die Spektren wurden in 3 mL Quarzglasküvetten aufgenommen mit Uvasol Methanol oder TraceSelect Wasser als Lösungsmittel.
Fluoreszenzspektroskopie
[0063] Perkin Elmer LS 45 Fluoreszenz-Spektrometer. Die Spektren wurde in 3 mL Quarzglasküvetten aufgenommen mit Uvasol Methanol oder TraceSelect Wasser als Lösungsmittel.
B. Ausgangsverbindungen und Intermediate: Beispiel 1A
2-(Ethyl(2-hydroxyethyl)amino)-1 ,4-benzochinon
Figure imgf000025_0001
[0064] Zu einer Suspension von 1 ,4-Benzochinon (0.3 mol) in 72 ml Aceton wird bei Raumtemperatur eine Lösung von 2-(Ethylamino)ethanol (0.15 mol) in 18 mL Methanol so zugetropft, dass die Temperatur 30°C nicht übersteigt. Nach vollständiger Zugabe der methanolischen Lösung wird die dunkelbraune Suspension über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Danach wird die Suspension über einen Büchnertrichter abgesaugt und der erhaltene Rückstand mit wenig eiskaltem Methanol gewaschen. Die gelblichen bis braunen Kristalle werden anschließend im Exsikkator über Nacht getrocknet (Ausbeute: 16%).
[0065] MW: 181.19 g/mol
[0066] GC/MS: m/z = 181 (30.8%), 152 (8.5%), 151 (12.3%), 150 (100.0%), 122 (38.5%), 108 (7.3%), 94 (13.3%), 82 (9.2%), 81 (14.8%), 79 (8.1 %), 68 (12.5%), 55 (7.7%), 54 (8.2%), 53 (19.9%), 52 (7.4%). Beispiel 2A
2-(Bis(2-hydroxyethyl)amino)-1 ,4-benzochinon
Figure imgf000026_0001
[0067] Die Synthese der Titelverbindung erfolgt analog zur Synthese der Verbindung aus Beispiel 1A, wobei Diethanolamin anstatt 2-(Ethylamino)ethanol verwendet wird. Man erhält die Titelverbindung in einer Ausbeute von 77%.
[0068] MW: 211.21 g/mol;
[0069] GC/MS: m/z = 211 (26.8%), 207 (19.6%), 195 (19.6%), 193 (15.0%), 182 (23.1%), 181 (13.7%), 180 (100.0%), 164 (37.7%), 162 (10.2%), 151 (13.4%), 150 (54.0%), 149 (12.7%), 136 (69.4%), 135 (10.1%), 122 (23.3%), 109 (16.(%), 108 (22.1 %), 94 (10.(%), 82 (10.3%), 81 (16.7%), 80 (14.0%), 79 (11.2%), 68 (11.1%), 55 (17.6%), 54 (14.3%), 53 (24.5%), 52 (12.8%).
Beispiel 3A
4-Methyl-3,4-dihydro-2H-benzo[6][1 ,4]oxazin-6-ol
Figure imgf000026_0002
[0070] Zu einer Lösung der Verbindung aus Beispiel 1A (0.1 mol) in 250 ml_ 10%iger Essigsäure wird Zink-Staub (0.2 mol) gegeben und die Lösung für 30 min unter Rückfluss erhitzt, bis die DC-Analyse einen vollständigen Reaktionsumsatz zeigt. Die violette Suspension wird auf Raumtemperatur abkühlen gelassen, über einen Büchnertrichter abfiltriert und der Feststoff mit Wasser nachgewaschen. Das Filtrat wird mit konz. Ammoniak neutralisiert und dreimal mit 200 mL Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden einmal mit gesättigter NaCI-Lösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und am Rotationsverdampfer eingeengt, wobei ein dunkelbraunes Öl erhalten wird (Ausbeute: 53%).
[0071] MW: 165.19 g/mol
[0072] GC/MS: m/z = 166 (10.1 %), 165 (100.0%), 164 (13.9%), 150 (53.7%), 136 (22.4%), 123 (5.7%), 109 (10.8%), 108 (5.3%), 82 (15.5%), 81 (12.8%), 80 (5.4%), 55 (7.4%), 53 (6.9%).
Beispiel 4A
4-Ethyl-3,4-dihydro-2H-benzo[6][1 ,4]oxazin-6-ol
Figure imgf000027_0001
[0073] Die Synthese der Titelverbindung erfolgt analog zur Synthese der Verbindung aus Beispiel 3A, ausgehend von der Verbindung aus Beispiel 2A. Man erhält die Titelverbindung in einer Ausbeute von 83%.
[0074] MW: 179.22 g/mol
[0075] GC/MS: m/z = 180 (7.4%), 179 (63.1 %), 165 (10.8%), 164 (100.0%), 150 (8.1 %), 136 (22.5%), 123 (5.4%), 109 (7.7%), 108 (6.8%), 55 (5.1 %). Beispiel 5A
4-(2-(tert-Butyldimethylsilyloxy)ethyl)-3,4-dihydro-2H-benzo[J ]-[1 ,4]-oxazin
Figure imgf000028_0001
[0076] Zu einer Lösung der Verbindung aus Beispiel 4A (27.2 g, 0.139 mol, 1 equ.) in 300 mL D F wird bei Raumtemperatur zunächst DMAP (-30 mg, kat. Menge) und Et3N (29 mL, 0.210 mol, 1.5 equ.) gegeben. Zu dieser Lösung wird dann portionsweise TBS-CI (22.03 g, 0.146 mol, 1.05 equ.) in fester Form langsam zugegen, wobei eine exotherme Reaktion zu beobachten ist. Die erhaltene Reaktionslösung wird bei Raumtemperatur für 48 Stunden gerührt. Zur Aufarbeitung wird die Reaktionslösung mit 1.5 L dest. Wasser versetzt und die erhaltene trübe Lösung viermal mit 250 mL EtOAc extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden einmal mit 300 mL ges. NaCI-Lösung gewaschen, über MgS04 getrocknet und am Rotationsverdampfer eingeengt. Der erhaltene Rückstand wird säulenchromatographisch über Kieselgel mit PE/EtOAc/Et3N = 750:250:10 als Laufmittel gereinigt, wobei ein dunkelbraunes Öl erhalten wird (Ausbeute: 94%).
[0077] MW: 309.48 g/mol
[0078] GC/MS: m/z = 310 (6.9%), 309 (29.8%), 252 (7.4%), 208 (7.9%), 165 (12.7%), 164 (100.0%), 136 (5.2%), 75 (4.0%), 73 (4.9%). Beispiel 6A
4-(2-(terf-Butyldimethylsilyloxy)ethy^ benzoat
Figure imgf000029_0001
[0079] Zu einer Lösung der Verbindung aus Beispiel 5A (10.15 g, 32.8 mmol, 1 equ.) und Et3N (4.8 mL, 34.5 mmol, 1.05 equ.) in 200 mL Dichlormethan wird bei 0°C eine 10%ige Lösung von Benzoylchlorid (4.0 mL, 34.5 mmol, 1.05 equ.) in Dichlormethan langsam über einen Tropftrichter zugegen. Nach beendeter Zugabe wird die Reaktionslösung im Eisbad belassen und unter langsamem Aufwärmen auf Raumtemperatur über Nacht gerührt. Zur Aufarbeitung wird die braune Reaktionslösung mit 400 mL dest.
Wasser versetzt und für 5 min intensiv gerührt. Nach der Phasentrennung wird die wässrige Phase dreimal mit 200 mL Dichlormethan extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden anschließend über MgS04 getrocknet und am Rotationsverdampfer eingeengt. Der Rückstand wird säulenchromatographisch über Kieselgel mit
PE/EtOAc/Et3N = 500: 100:5 als Laufmittel gereinigt, wobei ein braunes Öl erhalten wird (Ausbeute: ~quant).
[0080] MW: 413.58 g/mol
[0081] GC/MS: m/z = 324 (5.3%), 323 (22.0%), 266 (4.2%), 222 (3.3%), 179 (12.0%), 178 (100.0%), 150 (4.6%), 135 (2.4%), 75 (2.6%), 73 (3.7%), 59 (2.1 %). Beispiel 7A
4-(2-Hydroxyethyl)-3,4-dihydro-2H-benzo[ö][1 ,4]oxazin-6-yl benzoat
Figure imgf000030_0001
[0082] Zu einer Lösung der Verbindung aus Beispiel 6A (26.2 mmol, 1 equ.) in 100 mL THF wird bei 0°C eine Lösung von TBAF (27.5 mL, 27.5 mmol, 1.05 equ., 1 M Lösung in THF) langsam zugegeben und die Reaktionslösung unter langsamem Erwärmen auf Raumtemperatur über Nacht gerührt. Zur Aufarbeitung wird die Reaktionslösung mit 150 mL dest. Wasser versetzt und für 5 min intensiv gerührt. Nach der Phasentrennung wird die wässrige Phase dreimal mit jeweils 100 mL Et20 extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden einmal mit 100 mL gesättigter NaCI-Lösung gewaschen, über MgS04 getrocknet und am Rotationsverdampfer eingeengt. Der Rückstand wird säulenchromatographisch über Kieselgel mit PE/EtOAc/Et3N = 500:500:5 als Laufmittel gereinigt, wobei ein hellgelbes Öl erhalten wird (Ausbeute: 72%).
[0083] MW: 299.32 g/mol;
[0084] GC/MS: m/z = 300 (5.0%), 299 (26.8%), 270 (2.2%), 269 (18.0%), 268 (100.0%), 164 (2.9%), 108 (5.6%), 106 (5.1%), 105 (52.7%), 78 (2.2%), 77 (26.4%), 55 (2.3%), 51 (4.8%).
Beispiel 8A
4-(2-Fluoroethyl)-3,4-dihydro-2H-benzo[ö][1 ,4]oxazin-6-yl benzoat
Figure imgf000031_0001
[0085] Zu einer Lösung der Verbindung aus Beispiel 7A (4.49 g, 15 mmol, 1 equ.) in 100 mL THF wird bei Raumtemperatur eine Lösung von Deoxofluor (13.0 mL, 30 mmol, 2.0 equ., 50%ige Lösung in THF) zugegeben und die Reaktionsmischung bei dieser Temperatur über Nacht gerührt. Zur Aufarbeitung wird die Reaktionsmischung mit ~50g Kieselgel versetzt und am Rotationsverdampfer bis zur Trockne eingeengt. Der Rückstand wird säulenchromatographisch über Kieselgel mit PE/EtOAc/Et3N = 300:150:5 als Laufmittel gereinigt, wobei ein gelbes Öl erhalten wird (Ausbeute: 79%)
[0086] MW: 301.31 g/mol
[0087] GC/MS: m/z = 302 (8.5%), 301 (44.6%), 269 (3.4%), 268 (18.5%), 168 (3.4%), 106 (8.4%), 105 (100.0%), 77 (28.9%), 51 (4.8%).
Beispiel 9A
4-(2-Bromoethyl)-3,4-dihydro-2H-benzo[ö][1 ,4]oxazin-6-yl-benzoat
Figure imgf000031_0002
[0088] Zu einer Lösung der Verbindung von Beispiel 7A (1 g, 3.34 mmol, 1 equ.) in 30 mL CHCI3 wird bei Raumtemperatur CBr4 (2.23 g, 6.68 mmol, 2.0 equ.) gefolgt vom PPh3 (1.75 g, 6.68 mmol, 2.0 equ.) zugegeben und die Reaktionsmischung bei dieser Temperatur für 60 min gerührt. Nachdem ein vollständiger Umsatz des Ausgangsmaterials mittels DC-Analyse festgestellt wird, wird die trübe Lösung filtriert und mit ~20g Kieselgel versetzt. Die Suspension wird am Rotationsverdampfer bis zur Trockne eingeengt und der erhaltene Rückstand säulenchromatographisch über Kieselgel mit
PE/EtOAc/Et3N = 100:300:5 als Laufmittel gereinigt, wobei ein gelbes Öl erhalten wird (Ausbeute ~quant).
[0089] MW: 362.22 g/mol
[0090] GC/MS: m/z = 364 (4.3%), 363 (23.4%), 362 (4.7%), 361 (23.8%), 282 (2.6%), 269 (7.1 %), 268 (39.9%), 109 (3.1 %), 108 (3.5%), 107 (4.1 %), 106 (8.4%), 105 (100.0%), 78 (2.3%), 77 (28.5%), 51 (4.7%).
Beispiel 10A
4-(2-(Tosyloxy)ethyl)-3,4-dihydro-2H-benzo[ö][1 ,4]oxazin-6-yl-benzoat
Figure imgf000032_0001
[0091] Zu einer Lösung der Verbindung aus Beispiel 7A (1 g, 3.34 mmol, 1 equ.) und Et3N (0.7 mL, 5.0 mmol, 1.5 equ.) in 30 mL Dichlormethan wird bei 0°C eine Lösung von Tosylchlorid (0.7 g, 3.67 mmol, 1.1 equ.) in 10 mL Dichlormethan langsam zugetropft. Die erhaltene Reaktionslösung wird unter langsamem Erwärmen auf Raumtemperatur über Nacht gerührt. Zur Aufarbeitung wird die Reaktionslösung mit 100 mL Wasser versetzt und für 5 min intensiv gerührt. Nach der Phasentrennung wird die wässrige Phase dreimal mit 75 mL Dichlormethan extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden einmal mit 100 mL gesättigter NaCI-Lösung gewaschen, über MgS04 getrocknet und am Rotationsverdampfer eingeengt, wobei ein braunes Öl erhalten wird. Der Rückstand wird säulenchromatographisch über Kieselgel mit PE/EtOAc/Et3N = 300: 100:5 als Laufmittel gereinigt, wobei ein hellbraunes Öl erhalten wird, welches sich beim Stehen im Kühlschrank verfestigt (Ausbeute: 74%).
[0092] MW: 453.51 g/mol
[0093] GC/MS: m/z = 342 (9.6%), 341 (35.7%), 281 (14.7), 269 (16.5%), 268 (100.0%), 208 (6.0%), 207 (25.6%), 148 (4.4%), 135 (4.6%), 108 (6.0%), 106 (8.8%), 105 (84.7%), 87 (8.4%), 78 (4.6%), 77 (27.1 %), 73 (8.2%), 51 (4.8%).
Beispiel 11A
[F-18]-4-(2-Fluoroethyl)-3,4-dihydro-2H-benzo[b][1 ,4]oxazin-6-yl-benzoat
Figure imgf000033_0001
1. Schritt: Herstellung des radioaktiven Fluor-Reagenz
[0094] In einem 5 mL Reaktionsgefäß (reaction vial) werden 2 mL wässriges H18F vorgelegt und bei Raumtemperatur mit 100 μί einer 3.5%igen wässrigen Kalium- carbonat-Lösung, 16 mg Kryptofix222 (Merck Darmstadt) und 1 mL Acetonitril (DNA Grade) versetzt. Die Lösung wird unter intensivem Rühren und einem Argon-Gasstrom auf 140°C erhitzt. In 4 min Intervallen werden dann viermal jeweils 1 mL Acetonitril zugegeben. 20 min nach Reaktionsstart wird kontrolliert, ob noch Flüssigkeit im Reaktionsgefäß vorhanden ist. Falls noch Flüssigkeit vorhanden ist wird die Reaktionsmischung weitere 4 Minuten gerührt. Anschließend lässt man das Reaktionsgefäß auf ~30°C abkühlen und nimmt den Rückstand in 1 ml_ Acetonitril auf, wobei eine gelbe Lösung erhalten wird. Diese Lösung wird dann direkt für die Radiomarkierung im nächsten Schritt verwendet.
2. Schritt: Radiomarkierung
[0095] Zu einer Lösung der Verbindung von Beispiel 10A (4 mg) in 1 mL abs. Acetonitril wird die in Schritt 1 hergestellte Lösung von [K]18F zugegeben und die erhaltene Reaktionsmischung bei 85°C für 30 min gerührt. Nach Abkühlen auf ~30°C wird die Reaktionsmischung auf eine präparative HPLC gegeben (Säule: Phenomenex Luna C18(2), 250x10 mm, Laufmittel: 60% Acetonitril / 40% Wasser, Flussrate: 7 mL/min, Detektor: UV und Radioaktivität) und das Produkt vom Ausgangsmaterial getrennt. Die Produktfraktion wird mit 70 mL dest. Wasser verdünnt und auf eine konditionierte Strata- X-SPE-Kartusche gegeben (Phenomenex, 10 mg Bettmaterial), wobei das radiomarkierte Produkt auf dem Bettmaterial zurückgehalten wird. Anschließend wird die Strata-X- Kartusche mit 5 mL Wasser gewaschen und überschüssiges Wasser mit 5 mL Luft entfernt. Zuletzt wird das Produkt mit 1 mL 96%igem Ethanol von der Kartusche eluiert (Ausbeute: 22%).
[0096] Die Identifikation der Titelverbindung erfolgte über Radio-DC mit PE/Et02 als Laufmittel.
Beispiel 12A
4-(2-Fluoroethyl)-3,4-dihydro-2H-benzo[b][1 ,4]oxazin-6-ol
Figure imgf000034_0001
[0097] Zu einer Lösung der Verbindung aus Beispiel 8A (2 mmol, 1 equ.) in 30 mL abs. Methanol wird feste Natronlauge (MW: 40.0 g/mol, 84 mg, 2.1 mmol, 1.05 eq.) zugegeben und die Reaktionsmischung bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Zur Aufarbeitung wird die Reaktionslösung mit ~25g Kieselgel versetzt und am Rotationsverdampfer bis zur Trockne eingeengt. Der Rückstand wird säulenchromatographisch über Kieselgel gereinigt (Laufmittel: PE/EtOAc/Et3N = 400:600:5), wobei ein Öl erhalten wird (Ausbeute: 99%).
[0098] MW: 197.21 g/mol;
[0099] GC/MS: m/z = 198 (10.4%), 197 (79.6%), 168 (4.9%), 165 (16.2%), 164 (100.0%), 136 (29.2%), 123 (7.4%), 109 (12.0%), 108 (10.4%), 94 (4.3%), 82 (6.7%), 81 (5.7%), 65 (4.4%), 55 (5.2%), 53 (5.6%);
Beispiel 13A
4-(2-Bromoethyl)-3,4-dihydro-2H-benzo[b][1 ,4]oxazin-6-ol
Figure imgf000035_0001
[0100] Die Synthese der Titelverbindung erfolgt analog zur Synthese der Verbindung aus Beispiel 12A, ausgehend von der Verbindung aus Beispiel 9A, wobei zur Aufreinigung PE/EtOAc/Et3N = 700:300:25 als Laufmittel verwendet wird. Man erhält die Titelverbindung in einer Ausbeute von >90%.
[0101] Die Titelverbindung ist instabil und zersetzt sich innerhalb von 12 h bereits zu 50% bei -25°C. Die Titelverbindung wird daher direkt nach dem Isolieren weiter umgesetzt. [0102] MW: 258.11 g/mol;
[0103] GC/MS: m/z = 259 (20.7%), 257 (18.7%), 207 (4.4%), 178 (5.5%), 165 (1 1.7%), 164 (100.0%), 148 (3.9%), 136 (12.8%), 123 (4.4%), 109 (6.9%), 108 (4.6%), 94 (3.7%), 82 (4.3%), 55 (3.5%).
Beispiel 14A
4-Ethyl-7-((4-nitrophenyl)diazenyl)-3,4-dihydro-2H-benzo[ö][1 ,4]oxazin-6-ol
Figure imgf000036_0001
[0104] Zu einer Lösung der Verbindung aus Beispiel 3A (3 mmol, 1 equ.) in 10 mL Methanol wird bei Raumtemperatur eine Lösung von 4-Nitro-phenyl-diazonium- tetrafluoroborat (710 mg, 3 mmol, 1 equ.) in 2 mL 10%iger, wässriger Schwefelsäure zugegeben. Die tiefrote Reaktionslösung wird für 30 min bei Raumtemperatur gerührt und mit halbkonzentrierter Ammoniak-Lösung neutralisiert. Der erhaltene rote Niederschlag wird abfiltriert und mit kaltem dest. Wasser auf dem Filter gewaschen. Anschließend wird der rote Feststoff im Ölpumpen-Vakuum über Nacht getrocknet und aus n-Butanol umkristallisiert (Ausbeute: 82%).
[0105] MW: 328.32 g/mol;
[0106] LC/MS: m/z = 330 (19.3%), 329 (100.0%); Beispiel 15A
4-(2-Hydroxyethyl)-7-((4-nitrophenyi)diazenyl)-3,4-dihy^
Figure imgf000037_0001
[0107] Die Synthese der Titelverbindung erfolgt analog zur Synthese der Verbindung aus Beispiel 14A, ausgehend von der Verbindung aus Beispiel 4A. Man erhält die Titelverbindung in einer Ausbeute von 94%.
[0108] MW: 344.32 g/mol;
[0109] LC/MS: m/z = 346 (19.0%), 345 (100.0%);
C. Ausführungsbeispiele
Beispiel 1
8-Ethyl-4-(2-fluoroethyl)-3,8,9,10-tetrahydro-2H-bis([1
Figure imgf000038_0001
4-ium Chlorid
Figure imgf000038_0002
[0110] Zu einer Lösung der Verbindung aus Beispiel 14A (2 mmol, 1 equ.) und der Verbindung aus Beispiel 12A (3 mmol, 1.5 equ.) in 12 mL 90%igem Ethanol wird 1 mL 32%ige Salzsäure zugegeben und die Reaktionslösung für 60-240 min unter Rückfluss (~80°C) erhitzt, bis die DC- bzw. LC/MS-Analyse einen vollständigen Reaktionsumsatz zeigt. Zur Aufarbeitung wird die Reaktionslösung mit konzentrierter Ammoniak-Lösung neutralisiert und am Rotationsverdampfer bis zur Trockne eingeengt. Der erhaltene Rückstand wird in Methanol aufgenommen, mit ~10g Kieselgel versetzt, und erneut am Rotationsverdampfer bis zur Trockne eingeengt. Der grün-blaue Rückstand wird säu- lenchromatographisch über Kieselgel mit CH2Cl2/MeOH = 20:1 als Laufmittel gereinigt, wobei grünliche bis blaue Feststoffe erhalten werden (Ausbeute: 62%).
[0111] MW: 405.85 g/mol
[0112] LC/MS: m/z = 371 (22.9%), 370 (100.0%). Beispiel 2
4-(2-Bromoethyl)-8-ethyl-3,8,9,10-tetrahydro-2H-bis^
4-ium Bromid
Figure imgf000039_0001
[0113] Die Synthese der Titelverbindung erfolgt analog zur Synthese der Verbindung aus Beispiel 1 , ausgehend von den Verbindungen aus Beispiel 14A und Beispiel 13A. Nach Aufreinigung des Rohprodukts durch Säulenchromatographie an Kieselgel mit CH2CI2/MeOH = 1000:50 als Laufmittel erhält man die Titelverbindung in einer Ausbeute von 24%.
[0114] Diese Verbindung fällt nicht unter den Schutzbereich von Anspruch 1 und soll lediglich als nicht-radioaktive Modellverbindung für 76Br- und 75Br-substituierte Verbindungen dienen.
[0115] MW: 511.12 g/mol
[0116] LC/MS: m/z = 436 (13.8%), 435 (46.4%), 434 (19.8%), 433 (57.0%), 247 (15.0%), 231 (10.1%), 230 (13.3%), 213 (13.7%), 207 (10.2%), 166 (100.0%), 138 (21.5%), 137 (65.1%), 125 (16.0%), 124 (49.5%);
Beispiel 3
[F-18]-8-Ethyl-4-(2-Fluoroethyl)-3,8,9, 10-tetrahydro-2H-bis([1 ,4]-oxazino)[2,3-6:3',2'- /]phenoxazin-4-ium Chlorid
Figure imgf000040_0001
[0117] Zu einer ethanolischen Lösung der Verbindung aus Beispiel 11A werden bei Raumtemperatur 2 mg feste Natronlauge gegeben und die Reaktionsmischung bei 50°C für 5 min gerührt, wobei mittels Radio-DC ein vollständiger Umsatz beobachtet wird. Zu dieser Reaktionslösung wird eine Lösung bestehend aus der Verbindung aus Beispiel 14A (4 mg) und 50 μί konzentrierter Salzsäure gegeben und die Reaktionsmischung bei 75°C für 20 min gerührt. Die Reaktionsmischung wird per HPLC aufgereinigt und die Titelverbindung in einer Ausbeute von 8% erhalten.
[0118] Die Identifikation der Titelverbindung erfolgte über Radio-DC mit CH2CI2/MeOH 10:1 als Laufmittel und Radio-HPLC mit der Verbindung aus Beispiel 1 als Vergleichssubstanz.
Beispiel 4
4-(2-Fluoroethyl)-8-(2-hydroxyethyl)-3,8,9, 10-tetrahydro-2H-bis([1 ,4]oxazino)[2,3-0:3',2'- /]phenoxazin-4-ium chlorid
Figure imgf000040_0002
[0119] Die Synthese der Titelverbindung erfolgt analog zur Synthese der Verbindung aus Beispiel 1 , ausgehend von den Verbindungen aus Beispiel 15A und Beispiel 12A. Nach Aufreinigung des Rohprodukts durch Säulenchromatographie an Kieselgel mit Gradient von CH2CI2/MeOH = 20:1 auf CH2CI2/MeOH = 1 :1 erhält man die Titelverbindung in einer Ausbeute von 24%.
[0120] MW: 421.85 g/mol
[0121] LC/MS: m/z = 388 (7.6%), 387 (29.0%), 386 (100.0%), 385 (6.0%).
D. Bewertung der physiologischen Aktivität
Detektion von Aß-Plaques mittels optischer Bildgebung (Ol) im Mausmodell
[0122] Zur Demonstration der selektiven Markierung von Aß-Plaques durch radioaktiv markierte Verbindungen der Erfindung und die Sichtbarmachung der Markierung durch Ol wurden transgene APPPS1 -Mäuse sowie nicht transgene Kontrollmäuse verschiedenen Alters (zur Verfügung gestellt von Prof. Mathias Jucker, Department of Cellular Neurology, Hertie-Institute for Clinical Brain Research, University of Tübingen) mit 0.1 mg/kg Körpergewicht der Verbindung von Beispiel 3 behandelt und dann mittels Ol untersucht. Die Verbindung wurde in physiologischer Kochsalzlösung (0.9 % NaCI) in einer Konzentration von 0.05 mg/ml formuliert und intravenös in die Mäuse injiziert.
Nachfolgend wurden die Mäuse mittels Ol (Aequoria Hamamatsu Optical Imaging System) untersucht, das Signal wurde bei 650 nm detektiert.
[0123] Diese Versuche dienen dazu, die grundsätzliche Fähigkeit der erfindungsgemäßen Verbindungen zu demonstrieren, an Aß-Plaques zu binden und ein zur Konzentration an Aß-Plaques korrelierendes Signal zu liefern. Es ist dem Fachmann dabei klar, dass diese Markierung dann in Abhängigkeit von der Art der Markierung durch jegliches Verfahren, sei es Ol, PET (z.B. bei 76Br-, 75Br- oder 18F-markierten Verbindungen) oder MRT (z.B. bei 19F-markierten Verbindungen) erfolgen kann.
[0124] Bei diesen Versuchen hat sich gezeigt, dass sich die Verbindung von Beispiel 3 spezifisch in transgenen Mäusen anreichert während in Kontrollmäusen keine Anreicherung nachzuweisen war (siehe Fig. 1).
[0125] Es hat sich ferner gezeigt, dass die Anreicherung der Verbindung von Beispiel 3 mit dem Alter der transgenen Mäuse und somit der zunehmenden Bildung von Aß-Plaques zunimmt. Es zeigt sich dabei, dass in 2 Monate alten transgenen Mäusen - in denen es noch kaum zur Bildung von Aß-Plaques gekommen ist - keine Anreicherung nachzuweisen war, während im Alter von 12 Monaten eine deutliche Anreicherung sichtbar ist (siehe Fig. 2) [0126] Die Signalstärke wurde als relatives Fluoreszenzsignal quantifiziert, wobei 30 min nach Injektion als Normierungszeitpunkt gewählt wurde. Hierbei wurde die Signalstärke nach Subtraktion der Autofluoreszenz prozentual berechnet (ergibt relative Intensitätswerte, lrei) und anschließend der prozentuale Unterschied zwischen transgenen und Kontrollmäusen - im Folgenden als spezifische Bindung (Bsp) bezeichnet - berechnet und über das Lebensalter der transgenen Mäuse aufgetragen (siehe Fig. 3). Es hat sich hierbei gezeigt, dass es eine deutliche Korrelation zwischen Lebensalter und somit Fortschreiten der Alzheimer-Krankheit und Signalstärke gibt, wobei insbesondere festgestellt wurde, dass es bei den erfindungsgemäßen Verbindungen keine Sättigungs- oder Ceiling-Effekte dahingehend gibt, dass die Signalstärke ab einer gewissen Konzentration an Aß-Plaques nicht mehr zunimmt. Ganz im Gegenteil wurde im Alter von 21 Monaten für die transgenen Mäuse ein besonders starkes Signal gemessen.
Detektion von Aß-Plaques mittels MRT im Mausmodell
[0127] Zur Demonstration der selektiven Markierung von Aß-Plaques durch die mit Fluor markierten Verbindungen der Erfindung und die Sichtbarmachung der Markierung durch MRT wurden transgene APP23-Mäuse sowie nicht transgene Kontrollmäuse (zur Verfügung gestellt von Dr. Matthias Staufenbiel, Novartis Institutes for BioMedical Research, Basel, Schweiz) im Alter von 28 Monaten mit 2 mg/kg Körpergewicht der Verbindung von Beispiel 1 behandelt (die Verbindung wurde in physiologischer Kochsalzlösung (0.9% NaCI) in einer Konzentration von 1 mg/ml formuliert) und dann mittels MRT (ClinScan, Bruker BioSpin MRI, Ettlingen, Deutschland) sowie optischer Fluoreszenzmessungen untersucht (Aequoria Hamamatsu Optical Imaging System) und wie zuvor beschrieben ausgewertet. Für die MRT-Messungen wurde eine dreidimensionale Gradien- tenechosequenz (gre3D), die sowohl T1- als auch T2*-Anteile enthält, sowie eine quantitative T2-Wert Bestimmungssequenz (T2map) verwendet. Es konnte hierbei wiederum über die Messdauer von 90 Minuten eine spezifische Anreicherung in den transgenen Mäusen nachgewiesen werden. In Kontrollmäusen zeigte sich weder bei den MRT-Messungen noch bei den Fluoreszenzmessungen eine spezifische Anreicherung der Verbindung von Beispiel 1. [0 28] Die aus dem MRT erhaltenen Werte wurden mit den Werten aus der Fluoreszenzmessung verglichen, wobei sich eine signifikante Korrelation ergibt, wie diese auch aus dem Diagramm von Fig. 4 ersichtlich ist. Die in vivo gemachten Beobachtungen konnten auch nach einer Präparation der Gehirne ex vivo belegt werden.
Zusammenfassung
[0129] Mit diesen Experimenten konnte die Eignung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur in vivo Markierung von Aß-Plaques und deren nicht-invasive Detektion sowohl durch Ol als auch durch MRT demonstriert werden. Es hat sich hierbei gezeigt, dass die erfindungsgemäßen Verbindungen mit hoher Selektivität an Aß-Plaques binden und über einen weiten Konzentrationsbereich zu einem zur Konzentration an Aß-Plaques korrelierenden Signal führen. Aus den Ol-Untersuchungen unter Verwendung der Verbindung aus Beispiel 3 ergibt sich ,dass diese Verbindung selektiv an Aß-Plaques bindet, wobei es einem Fachmann klar ist, dass sich diese Verbindung auf Grund des Vorliegens von 18F auch zur Untersuchung durch PET eignet und dort analoge Ergebnisse liefern wird. Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind somit zur nicht-invasiven Diagnose der Alzheimer-Krankheit und zur Verfolgung des Krankheitsverlaufs hervorragend geeignet.

Claims

Patentansprüche Verbindung der Formel
Figure imgf000045_0001
in welcher,
X und Y unabhängig voneinander für CH, CH2, N, S oder O stehen, wobei X und Y nicht gleichzeitig CH oder CH2 sind, wobei, wenn X für CH oder N steht, die gestrichelte Linie zwischen X und dem Nachbaratom eine Bindung darstellt, und wobei, wenn Y für CH oder N steht, die gestrichelte Linie zwischen Y und dem Nachbaratom eine Bindung darstellt,
Ri und R2 unabhängig voneinander ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus (C1-C2)-Alkyl, (C C2)-Alkoxy und (C C2)- Alkylsulfonyl, wobei Alkyl, Alkoxy und Alkylsulfonyl mit ein bis drei Substi- tuenten substituiert sein können, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus 76Br, 75Br, 19F und 8F, R3, R4, R7, R8, Rg und R10 unabhängig voneinander ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoff, Halogen, Hydroxy, Amino, Cyano, Nitro, (Ci-C4)-Alkyl, (Ci-C4)-Alkylamino und (d-C4)- Alkoxy, wobei Alkyl und Alkoxy mit ein bis drei Substituenten substituiert sein können, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus 76Br, 75Br, 19F und 18F,
R5, wenn X für CH oder N steht, für einen Substituenten steht, der ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoff, Halogen, Hydroxy, Amino, Cyano, Nitro, (C C4)-Alkyl, (d-C4)- Alkylamino und (d-C4)-Alkoxy, wobei Alkyl und Alkoxy mit ein bis drei Substituenten substituiert sein können, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus 76Br, 75Br, 19F und 18F,
R5, wenn X für CH2, S oder O steht, für zwei Substituenten steht, die unabhängig voneinander ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoff, Halogen, Hydroxy, Amino, Cyano, Nitro, (Ci- C4)-Alkyl, (C C4)-Alkylamino und (d-C4)-Alkoxy, wobei Alkyl und Alkoxy mit ein bis drei Substituenten substituiert sein können, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus 76Br, 75Br, 19F und 8F,
R6, wenn Y für CH oder N steht, für einen Substituenten steht, der ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoff, Halogen, Hydroxy, Amino, Cyano, Nitro, (d-C4)-Alkyl, (d-C4)- Alkylamino und (C C4)-Alkoxy, wobei Alkyl und Alkoxy mit ein bis drei Substituenten substituiert sein können, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus 76Br, 75Br, 19F und 18F, und
R6, wenn Y für CH2, S oder O steht, für zwei Substituenten steht, die unabhängig voneinander ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoff, Halogen, Hydroxy, Amino, Cyano, Nitro, (C-i- C4)-Alkyl, (C1-C4)-Alkylamino und (C C4)-Alkoxy wobei Alkyl und Alkoxy mit ein bis drei Substituenten substituiert sein können, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus 76Br, 75Br, 19F und 18F, wobei die Verbindung der Formel (I) zumindest einen Substituenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus 76Br, 75Br, 19F und 18F aufweist, und ihre Salze, Solvate und Solvate der Salze.
2. Verbindung nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass
X und Y unabhängig voneinander für CH, CH2, N, S oder O stehen, wobei X und Y nicht gleichzeitig CH oder CH2 sind, wobei, wenn X für CH oder N steht, die gestrichelte Linie zwischen X und dem Nachbaratom eine Bindung darstellt, und wobei, wenn Y für CH oder N steht, die gestrichelte Linie zwischen Y und dem Nachbaratom eine Bindung darstellt, Ri und R2 unabhängig voneinander ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus (C C2)-Alkyl, (C C2)-Alkoxy und (C C2)-Alkylsulfonyl, wobei Alkyl, Alkoxy und Alkylsulfonyl mit ein bis drei Substituenten substituiert sein können, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus 76Br, 75Br, 19F und 18F,
R3, R4, R7, R8, Rg und R10 unabhängig voneinander ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoff, Halogen, Hydroxy, Amino, (d- C2)-Alkyl, und (C1-C2)-Alkoxy, wobei Alkyl und Alkoxy mit ein bis drei Substituenten substituiert sein können, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus
76Br, 75Br, 19F und 18F,
R5, wenn X für CH oder N steht, für einen Substituenten steht, der gewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoff, Halogen, Hydroxy, Amino, (C C2)-Alkyl, und (C C^-Alkoxy, wobei Alkyl und Alkoxy mit ein bis drei Substituenten substituiert sein können, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus
76Br, 75Br, 19F und 18F,
R5, wenn X für CH2, S oder O steht, für zwei Substituenten steht, die unabhängig voneinander ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoff, Halogen, Hydroxy, Amino, (CVC^-Alkyl, und (C-i-C2)- Alkoxy, wobei Alkyl und Alkoxy mit ein bis drei Substituenten substituiert sein können, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus
76Br, 75Br, 19F und 8F, R6, wenn Y für CH oder N steht, für einen Substituenten steht, der ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoff, Halogen, Hydroxy, Amino, (C1-C2)-Alkyl, und (C C2)-Alkoxy, wobei Alkyl und Alkoxy mit ein bis drei Substituenten substituiert sein können, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus
76Br, 75Br, 9F und 18F,
R6, wenn Y für CH2, S oder O steht, für zwei Substituenten steht, die unabhängig voneinander ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoff, Halogen, Hydroxy, Amino, (C -C2)-Alkyl, und (CVC2)- Alkoxy, wobei Alkyl und Alkoxy mit ein bis drei Substituenten substituiert sein können, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus
76Br, 75Br, 9F und 18F, wobei die Verbindung der Formel (I) zumindest einen Substituenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus 76Br, 75Br, 9F und 18F aufweist, und ihre Salze, Solvate und Solvate der Salze.
3. Verbindung nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass X und Y unabhängig voneinander für CH2, S oder O stehen, wobei X und Y nicht gleichzeitig CH2 sind,
R! und R2 unabhängig voneinander ausgewählt sind aus (d-C2)-Alkyl, (Ci-C2)- Alkoxy und (C C2)-Alkylsulfonyl, wobei zumindest einer der durch Ri und R2 dargestellten Reste mit zumindest einem Substituenten substituiert ist, der ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus 76Br, 75Br, 19F und 18F, und
R3, R4, R5, e, R7, Rs, 9 und R10 für Wasserstoff stehen, und ihre Salze, Solvate und Solvate der Salze.
4. Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus:
8-Ethyl-4-(2-fluoroethyl)-3,8,9,10-tetrahydro-2H-bis([1 ,4]-oxazino)[2,3-0:3',2'- /]phenoxazin-4-ium,
4-(2-Fluoroethyl)-8-(2-hydroxyethyl)-3,8,9,10-tetrahydro-2H-bis([1 ,4]oxazino)[2,3- jb:3',2'-/]phenoxazin-4-ium,
[F-18]-8-Ethyl-4-(2-fluoroethyl)-3,8,9,10-tetrahydro-2H-bis([1 ,4]-oxazino)[2,3- 6:3',2'-/]phenoxazin-4-ium,
[F-18]-4-(2-Fluoroethyl)-8-(2-hydroxyethyl)-3,8,9, 10-tetrahydro-2H- bis([1 ,4]oxazino)[2, 3-ό:3', 2'-/]phenoxazin-4-ium,
[Br-75]-8-Ethyl-4-(2-bromoethyl)-3,8,9,10-tetrahydro-2H-bis([1 ,4]-oxazino)[2,3- b:3',2'-/]phenoxazin-4-ium,
[Br-75]-4-(2-Bromoethyl)-8-(2-hydroxyethyl)-3,8,9,10-tetrahydro-2H- bis([1 ,4]oxazino)[2, 3-6:3', 2'-/]phenoxazin-4-ium,
[Br-76]-8-Ethyl-4-(2-bromoethyl)-3,8,9, 10-tetrahydro-2H-bis([1 ,4]-oxazino)[2,3- 0:3',2'-/]phenoxazin-4-ium, und [Br-76]-4-(2-Bromoethyl)-8-(2-hydroxyethyl)-3,8,9,10-tetrahydro-2H- bis([1 ,4]oxazino)[2, 3-ö:3', 2'- ]phenoxazin-4-ium, wobei das jeweilige Gegenion frei wählbar ist.
5. Verbindung der Formel (I) nach einem der Ansprüche 1 bis 4 zur Verwendung in einem Verfahren zur Markierung von Aß-Plaques.
6. Verbindung der Formel (I) nach einem der Ansprüche 1 bis 4 zur Verwendung in einem Verfahren zur Diagnose der Alzheimer-Krankheit.
7. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 1 , wobei eine Verbindung der Formel
Figure imgf000051_0001
in welcher,
Ri , Pv3, R5, P und R8 die in Anspruch 1 definierte Bedeutung aufweisen, und
RH für Wasserstoff, (d^J-Alkyl oder Phenylcarbonyl steht, mit einer Verbindung der Formel
Figure imgf000052_0001
in welcher
R2, 4.R-6, R9 und R 0 die in Anspruch 1 definierte Bedeutung aufweisen, und
R12 für Oxo oder p-Nitrophenyl-N steht, umgesetzt wird.
8. Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Diagnose von Krankheiten, vorzugsweise von Demenzerkrankungen und insbesondere der Alzheimer-Krankheit.
9. Arzneimittel, das mindestens eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4 in Kombination mit mindestens einem inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoff enthält.
10. Arzneimittel nach Anspruch 9 zur Verwendung in einem Verfahren zur Diagnose von Krankheiten, vorzugsweise von Demenzerkrankungen und insbesondere der Alzheimer-Krankheit.
1 1. Verfahren zur Diagnose von Krankheiten, vorzugsweise von Demenzerkrankungen und insbesondere der Alzheimer-Krankheit in Menschen und Tieren, das die Verabreichung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4 oder eines Arz- neimittels nach Anspruch 9 an einen Menschen oder ein Tier, der (das) dieses benötigt, aufweist.
12. Verfahren zur Markierung von Aß-Plaques, das das Inkontaktbringen einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4 oder eines Arzneimittels nach Anspruch 9 mit biologischem Material, insbesondere Hirnparenchym und Hirnvaskulatur, aufweist.
13. Verfahren nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, dass das Verfahren in vitro erfolgt.
14. Verfahren nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, dass das Verfahren in vivo erfolgt.
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