WO2013187673A1 - 복합 비타민 컨쥬게이트 및 그를 포함하는 항산화제 - Google Patents

복합 비타민 컨쥬게이트 및 그를 포함하는 항산화제 Download PDF

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polyethylene glycol
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정봉열
황재택
방성식
배근원
이종오
정은지
김택중
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    • C07D311/74—Benzo[b]pyrans, hydrogenated in the carbocyclic ring

Definitions

  • the present invention relates to a complex vitamin conjugate and an antioxidant comprising the same, and more particularly, to a vitamin E-polyethylene glycol-vitamin B3 conjugate having an improved solubility in water, a stable, and a toxic effect. It relates to an antioxidant.
  • Vitamin E is widely used as a fat-soluble antioxidant in living organisms, and in recent years, the field of clinical application has been further expanded.
  • Natural vitamin E is a compound with a hydroxy group in the benzene ring and appears in the form of four types of tocopherols ( ⁇ , ⁇ , ⁇ , ⁇ ) and four types of tocotrienols ( ⁇ , ⁇ , ⁇ , ⁇ ), Among them, the most common and bioactive are the ⁇ -tocopherols of the general formula (2), which are used as pronouns of vitamin E.
  • Natural vitamin E is characterized by fat solubility that is not physically soluble in water, and is generally chemically unstable because of its good oxidation, and the oxidation product of tocopherol quinone does not have the biological activity of vitamin E.
  • niacin also known as vitamin B3
  • vitamin B3 is a generic name of nicotinic acid of formula (3).
  • niacinamide which is also one of the group of vitamin B3 compounds.
  • the vitamin B3 compound was commonly used to treat niacin deficiency and Pelegra's disease.
  • Vitamin B3 compounds have also been found to be useful in the field of skin care actives.
  • US Patent No. 4,096,240 discloses the use of niacinamide for skin whitening.
  • WO 97/39733 discloses that vitamin B3 compounds can be used to control skin conditions such as wrinkles due to skin aging.
  • the present inventors have studied and studied to improve the chemical instability and poor water solubility problem of the natural vitamin E and the poor skin permeability and stability problem of the vitamin B3.
  • the vitamin E-polyethyleneglycol-vitamin B3 conjugate of Formula 1 was found to have improved solubility in water, to be stable and to reduce toxic effects and to complete the present invention.
  • vitamin E-polyethyleneglycol-vitamin B3 conjugate with improved solubility in water, a stable and toxic effect.
  • Another object of the present invention is to provide an antioxidant comprising the vitamin E-polyethylene glycol-vitamin B3 conjugate.
  • the present invention relates to a vitamin E-polyethylene glycol-vitamin B3 conjugate of formula (I).
  • R 1, R 2, and R 3 are each independently hydrogen or an alkyl group of C 1 -C 6 ,
  • X 1 and X 2 are each independently NH or O,
  • n is an integer from 1 to 700
  • an alkyl group of C 1 -C 6 means a straight or branched hydrocarbon having 1 to 6 carbon atoms, for example methyl, ethyl, n-propyl, i-propyl, n-butyl, i- Butyl, s-butyl, t-butyl, n-pentyl, n-hexyl, and the like.
  • the vitamin E-polyethylene glycol-vitamin B3 conjugate of Formula 1 of the present invention is provided.
  • R 1 R 2, and R 3 are each independently hydrogen or an alkyl group of C 1 -C 6 ,
  • X 1 and X 2 are each independently NH or O,
  • n is an integer from 4 to 200
  • vitamin E-polyethylene glycol-vitamin B3 conjugate of Formula 1 of the present invention is vitamin E-polyethylene glycol-vitamin B3 conjugate of Formula 1 of the present invention.
  • R 1, R 2, and R 3 are methyl groups
  • X 1 and X 2 are each independently NH or O,
  • n is an integer from 4 to 200
  • vitamin E-polyethylene glycol-vitamin B3 conjugate of Formula 1 of the present invention is vitamin E-polyethylene glycol-vitamin B3 conjugate of Formula 1 of the present invention.
  • R 1, R 2, and R 3 are methyl groups
  • X 1 and X 2 are O,
  • n is an integer from 4 to 200
  • the vitamin E-polyethyleneglycol-vitamin B3 conjugate according to the invention can be prepared according to the method shown in Scheme 1, for example.
  • the method described in the following reaction scheme is merely exemplary of the method used in the present invention, the order of the unit operation, reaction reagents, reaction conditions, etc. may be changed as much as the case may be.
  • the condensation reaction is preferably carried out in the presence of a condensing agent and an organic amine catalyst in a solvent.
  • condensing agent examples include N, N, N ', N'-tetramethyl- (benzotriazol-1-yl) -uronium tetrafluoroborate (TBTU) and N- (3-dimethylaminopropyl) -N'.
  • Ethyl-carbodiimide (EDC) N, N'-diisopropylcarbodiimide (DIC) or N, N'-dicyclohexylcarbodiimide (DCC) may be used, but is not limited thereto.
  • organic amine catalyst for promoting a condensation reaction diisopropylethylamine (DIPEA) or 4-dimethylaminopyridine (DMAP) may be used, but is not limited thereto.
  • the solvent may be an anhydrous organic solvent, for example, one or more selected from dichloromethane, benzene, toluene, tetrahydrofuran, and diethyl ether, but is not limited thereto.
  • the reaction can proceed in a cooled to warmed state.
  • the compound of Formula 4 is preferably used in the amount of 1 to 1.5 equivalents based on the compound of Formula 5.
  • the compound of Formula 3 is preferably used in the amount of 1 to 3 equivalents based on the compound of Formula 5.
  • the compound of Formula 4 may be easily prepared by reacting vitamin E with succinic acid according to methods known in the art.
  • the compound of formula 1 wherein X 1 is O and X 2 is NH condensates the compound of formula 4 with PEG to obtain a compound of formula 6 wherein X 1 and X 2 are O, and then forms a terminal OH group. It may be prepared by condensation with the compound of Formula 3 after substitution with NH 2 groups according to methods known in the art.
  • the vitamin E-polyethylene glycol-vitamin B3 conjugate according to the present invention is condensation reaction of the compound of formula 5 and the compound of formula 3, as shown in Scheme 2 below to obtain a compound of formula
  • the compound of Formula 7 and the compound of Formula 4 may be prepared by condensation reaction.
  • Vitamin E-polyethylene glycol-vitamin B3 conjugate of the formula 1 according to the present invention showed an antioxidant power similar to nicotinic acid in free radical scavenging effect experiments, and showed a significant reduction in toxicity in a cell activity evaluation experiment.
  • the vitamin E-polyethylene glycol-vitamin B3 conjugate of the formula 1 according to the present invention showed a superior effect than natural tocopherol and nicotinic acid in the collagen synthesis test, melanin synthesis test and tyrosinase activity test .
  • the vitamin E-polyethylene glycol-vitamin B3 conjugate of Formula 1 according to the present invention can be used as an excellent antioxidant, anti-wrinkle and whitening agent.
  • the vitamin E-polyethylene glycol-vitamin B3 conjugate of Formula 1 according to the present invention can be used in anti-aging, anti-wrinkle and whitening cosmetic composition.
  • the cosmetic composition according to the present invention includes the vitamin E-polyethylene glycol-vitamin B3 conjugate of Formula 1 as an active ingredient in an amount of about 0.1 to 10% by weight, preferably 0.5 to 2% by weight.
  • the content of the active ingredient can be appropriately determined according to the purpose of use thereof.
  • the cosmetic composition of the present invention is a component commonly used in cosmetic compositions in addition to the vitamin E-polyethylene glycol-vitamin B3 conjugate of Formula 1 as an active ingredient, for example, antioxidants, stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments and Conventional adjuvants such as perfumes, and carriers.
  • Cosmetic compositions of the present invention may be prepared in any formulation commonly used in the art, and may, for example, be formulated in solutions, suspensions, emulsions, pastes, gels, creams, powders, sprays, and the like.
  • the formulation of the present invention is a paste, cream or gel, animal oils, vegetable oils, waxes, paraffins, starches, trachants, cellulose derivatives, polyethylene glycols, silicones, bentonites, silicas, talc, zinc oxide and the like may be used as carrier components.
  • animal oils, vegetable oils, waxes, paraffins, starches, trachants, cellulose derivatives, polyethylene glycols, silicones, bentonites, silicas, talc, zinc oxide and the like may be used as carrier components.
  • animal oils vegetable oils, waxes, paraffins, starches, trachants, cellulose derivatives, polyethylene glycols, silicones, bentonites, silicas, talc, zinc oxide and the like
  • cellulose derivatives polyethylene glycols
  • silicones bentonites
  • silicas talc
  • zinc oxide and the like may be used as carrier components.
  • lactose When the formulation of the present invention is a powder or a spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate, polyamide powder, and the like may be used, and in the case of a spray, additionally, chlorofluorohydrocarbon, Propellant such as propane / butane or dimethylether.
  • a carrier for example water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, 1, 3-butylglycol oil, glycerol fatty acid ester, polyethylene glycol, fatty acid ester of sorbitan and the like can be used.
  • a liquid diluent such as water, ethanol or propylene glycol
  • a suspending agent such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester or polyoxyethylene sorbitan ester, and microcrystals
  • Castle cellulose, aluminum metahydroxy, bentonite, agar, tracant and the like can be used.
  • the cosmetic composition of the present invention is a skin, lotion, cream, essence, pack, foundation, color cosmetics, sun cream, two-way cake, face powder, compact, makeup base, skin cover, eye shadow, lipstick, lip gloss, lip fix, eyebrow pencil It can be applied to such cosmetics.
  • the vitamin E-polyethylene glycol-vitamin B3 conjugate of Formula 1 according to the present invention may be used in an anti-aging pharmaceutical composition.
  • the pharmaceutical composition according to the invention may be administered orally (eg, by taking or inhaling) or parenterally (eg by injection, deposition, transplantation, suppository), and the injection may for example be intravenous injection. , Intracutaneous injection, intramuscular injection or intraperitoneal injection.
  • the pharmaceutical composition according to the present invention may be used as tablets, capsules, granules, fine subtilae, powders, sublingual tablets, suppositories, ointments, injections, emulsions, suspensions, syrups, sprays and the like. Can be formulated.
  • the pharmaceutical compositions according to the present invention in various forms can be prepared by known techniques using pharmaceutically acceptable carriers commonly used in each formulation.
  • Examples of pharmaceutically acceptable carriers include excipients, binders, disintegrating agents, lubricants, preservatives, antioxidants, isotonic agents, buffers, coatings, sweeteners, solubilizers, bases, dispersants, wetting agents , Suspending agents, stabilizers, coloring agents and the like.
  • the pharmaceutical composition according to the present invention varies depending on the form of the medicament, but includes about 0.1 to 10% by weight, preferably 0.5 to 2% by weight of the vitamin E-polyethyleneglycol-vitamin B3 conjugate of Formula 1 above.
  • the specific dosage of the pharmaceutical composition of the present invention may vary depending on the type of mammal including the person being treated, weight, sex, degree of disease, judgment of a doctor, and the like.
  • 10 to 200 mg of active ingredient is administered per kg of body weight per day.
  • the total daily dose may be administered at one time or divided into several times depending on the extent of the disease, the judgment of the doctor.
  • the vitamin E-polyethylene glycol-vitamin B3 conjugate of Chemical Formula 1 according to the present invention may be used in an anti-aging dietary supplement.
  • the health functional food of the present invention may be prepared by appropriately using a food-acceptable carrier such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, sweeteners, fragrances, preservatives, surfactants, lubricants, excipients, etc. Can be.
  • a food-acceptable carrier such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, sweeteners, fragrances, preservatives, surfactants, lubricants, excipients, etc. Can be.
  • the content of the vitamin E-polyethylene glycol-vitamin B3 conjugate of Formula 1 is different depending on the form of the health functional food, but it is about 0.1 to 10% by weight, preferably 0.5 to 2% by weight Concentration.
  • the vitamin E-polyethylene glycol-vitamin B3 conjugate according to the present invention has improved solubility in water, is stable, and has a toxic effect.
  • the vitamin E-polyethylene glycol-vitamin B3 conjugate according to the present invention is a good source of vitamin E and vitamin B3, anti-aging, wrinkle improvement and whitening cosmetic composition, anti-aging pharmaceutical composition, anti-aging health functional food, etc. Can be used effectively.
  • the vitamin E-polyethylene glycol-vitamin B3 conjugate according to the present invention can be hydrolyzed at pH conditions in vivo to slowly release the active vitamin E and vitamin B3, so that the physiological activity of vitamin E and vitamin B3 is continuously expressed. Can be.
  • 1 is a graph comparing free radical residual ratio of vitamin E-polyethylene glycol-vitamin B3 conjugate according to the present invention with natural tocopherol and nicotinic acid.
  • vitamin E-polyethylene glycol-vitamin B3 conjugate according to the present invention is a graph comparing cell viability of vitamin E-polyethylene glycol-vitamin B3 conjugate according to the present invention with natural tocopherol and nicotinic acid.
  • Figure 3 is a graph showing the hydrolysis rate of the buffer solution of pH 7.72 of the vitamin E- polyethylene glycol-vitamin B3 conjugate according to the present invention.
  • Figure 4 is a graph showing the hydrolysis rate of the buffer solution of pH 9.45 of the vitamin E- polyethylene glycol-vitamin B3 conjugate according to the present invention.
  • Figure 5 is a graph showing the hydrolysis rate of the buffer solution of pH 12.30 of the vitamin E- polyethylene glycol-vitamin B3 conjugate according to the present invention.
  • Figure 6 is a graph showing the hydrolysis rate in the rat serum of the vitamin E- polyethylene glycol- vitamin B3 conjugate according to the present invention.
  • FIG. 7 is a graph comparing collagen synthesis ability of vitamin E-polyethylene glycol-vitamin B3 conjugate according to the present invention with natural tocopherol and nicotinic acid.
  • FIG. 8 is a graph comparing melanin synthesis inhibition ability of vitamin E-polyethylene glycol-vitamin B3 conjugate according to the present invention with arbutin, natural tocopherol, and nicotinic acid.
  • FIG. 9 is a graph comparing the inhibitory activity of tyrosinase activity of vitamin E-polyethylene glycol-vitamin B3 conjugate according to the present invention with arbutin, natural tocopherol and nicotinic acid.
  • reaction solvent was removed and the residue was taken up in 250 ml of ethyl acetate and washed with 1.0 N aqueous hydrochloric acid solution.
  • the organic layer was treated with anhydrous magnesium sulfate, filtered and concentrated under reduced pressure.
  • the resulting mixture was subjected to silica gel column chromatography with ethyl acetate and n-hexane (1: 2) to give 20.5 g of the title compound as a pale yellow syrup.
  • Example 2 Vit.E-PEG400-Vit.B3 (R 1 , R 2 and R 3 are all methyl groups, X 1 and X 2 are oxygen, n is 9, Is a single bond)
  • Example 3 Vit.E-PEG8K-Vit.B3 (R 1 , R 2 and R 3 are all methyl groups, X 1 and X 2 are oxygen, n is 182, Is a single bond)
  • Example 4 Vit.E-PEG200-Vit.B3 amide (R 1 , R 2 and R 3 are all methyl groups, X 1 is O, X 2 is NH, n is 4, Is a single bond)
  • reaction solution was washed sequentially with 200 ml of 1.0 N aqueous hydrochloric acid solution, saturated aqueous sodium bicarbonate solution and saturated aqueous sodium chloride solution, and the organic layer was treated with anhydrous magnesium sulfate, filtered and concentrated under reduced pressure.
  • Example 4-1 20.7 g of Vit.E-PEG200-OMs obtained in Example 4-1 was dissolved in 415 ml of 30% aqueous ammonia and stirred for 24 hours. The reaction solution was extracted with 450 ml of dichloromethane, the organic layer was treated with anhydrous magnesium sulfate, filtered and concentrated under reduced pressure. The resulting mixture was subjected to silica gel column chromatography with methanol and dichloromethane (1:10) to afford 8 g of the title compound as a pale yellow syrup.
  • reaction solvent was removed and the residue was taken up in 200 ml of ethyl acetate and washed with 1.0 N aqueous hydrochloric acid solution.
  • the organic layer was treated with anhydrous magnesium sulfate, filtered and concentrated under reduced pressure.
  • the resulting mixture was subjected to silica gel column chromatography with ethyl acetate and n-hexane (1: 2) to give 7.2 g of the title compound as a pale yellow syrup.
  • the vitamin E-PEG-vitamin B3 conjugates obtained in Examples 1 to 3 were dissolved in deionized water, respectively, and the concentrations showing a transmittance of 80% were measured using a spectrophotometer.
  • Vit.E-PEG200-Vit.B3 obtained in Example 1 was 0.065 mg / ml
  • Vit.E-PEG400-Vit.B3 obtained in Example 2 was 0.13 mg / ml, obtained in Example 3.
  • the Vit.E-PEG8K-Vit.B3 was 9 mg / ml.
  • the molecular weight of PEG increased, solubility in water increased and both were water-soluble.
  • the free radical scavenging effect of Vit.E-PEG200-Vit.B3 obtained in Example 1 was measured using DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl).
  • DPPH solution 0.08 mg / ml was prepared using ethanol and acetate buffer (pH 5.6). After diluting 2.0 mg / ml of the sample dissolved in dimethyl sulfoxide with the same solvent to prepare a sample for each concentration of 50 ⁇ M and 100 ⁇ M, each sample and the prepared DPPH solution were mixed at 3:10 and reacted for 30 minutes. The change in OD value at 520 nm was measured using a spectrometer.
  • the residual free radicals (%) of each sample is shown in FIG. 1, and natural tocopherol and nicotinic acid were used as comparative materials.
  • the vitamin E-PEG-vitamin B3 conjugate according to the present invention showed a similar antioxidant power as nicotinic acid.
  • the vitamin E-PEG-vitamin B3 conjugate according to the present invention showed a significantly lower toxicity effect than natural tocopherol (Tocopherol).
  • the vitamin E-PEG-vitamin B3 conjugate according to the present invention increased cell growth than nicotinic acid. This may be due to the increased stability of vitamin B3 as it is conjugated with PEG.
  • Vit.E-PEG200-Vit.B3 obtained in Example 1 Vit.E-PEG400-Vit.B3 obtained in Example 2 and Vit.E-PEG8K-Vit.B3 obtained in Example 3 were each 0.065.
  • 20 ml of solution were prepared by dissolving in 67 mM potassium phosphate solution pH 7.72, pH 9.45 and pH 12.30 at concentrations of mg / ml, 0.13 mg / ml and 9 mg / ml. The resulting solution was stirred at 100 rpm in a 37 ° C. incubator to allow sufficient reaction to proceed.
  • HPLC analysis conditions are as follows.
  • Vitamin E-PEG-Vitamin B3 peak area at Ct 0 0 hours
  • Vitamin E-PEG-Vitamin B3 peak area at Ct x X hours
  • Vit.E-PEG200-Vit.B3 obtained in Example 1 Vit.E-PEG400-Vit.B3 obtained in Example 2 and Vit.E-PEG8K-Vit.B3 obtained in Example 3 were each 0.065.
  • 20 ml of solution were each prepared by dissolving in rat serum at concentrations of mg / ml, 0.13 mg / ml and 9 mg / ml. The resulting solution was shaken at 100 rpm in a 37 ° C. incubator to allow sufficient reaction to proceed.
  • the serum mixture was recovered from each test tube at a time interval of 2 ml, then stirred with addition of 2 ml of dichloromethane and centrifuged (12,000 rpm, 4 ° C., 20 minutes). After centrifugation the dichloromethane layer was extracted twice.
  • the dichloromethane extract was dried at room temperature, concentrated, dried completely, and analyzed by HPLC with addition of 100 ul of distilled water.
  • HPLC analysis conditions are as follows.
  • Vitamin E-PEG-Vitamin B3 peak area at Ct 0 0 hours
  • Vitamin E-PEG-Vitamin B3 peak area at Ct x X hours
  • the collagen synthesis effect was tested to confirm the anti-aging effect of vitamin E-PEG-vitamin B3 conjugate according to the present invention.
  • Human skin fibroblasts (HS27 cell line) were treated with Vit.E-PEG200-Vit.B3 obtained in Example 1 at a concentration of 100 ⁇ M, using a procollagen type-I C-peptide (PIP) EIA kit.
  • the amount of collagen type I synthesis was measured. Specifically, the cells were planted in a 96 well plate to be 10,000 cells per well, and then cultured for 24 hours. Then, the cultured medium was removed and the sample was treated at a concentration of 100 ⁇ M and incubated for 24 hours. Supernatants were recovered from each well and added to each well of the Procollagen Type-I C-peptide (PIP) EIA kit, and then the total amount of collagen Type I was measured according to the manufacturer's method.
  • PIP procollagen type-I C-peptide
  • Collagen synthesis ability (%) of each sample is shown in Figure 7, as a comparative material natural tocopherol (Tocopherol) and nicotinic acid (Nicotinic acid) was used.
  • the vitamin E-PEG-vitamin B3 conjugate according to the present invention showed a superior collagen synthesis enhancing effect than natural tocopherol and nicotinic acid.
  • Melanocytes (B16 melanoma) were 1 X 10 in Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEA) containing 10% Fetal Bovine Serum (FBS), 1% P / S, and 200 nM TPA (12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate). Inoculated at a density of 5 cells and incubated in a 5% CO 2 incubator at 37 ° C. for 1 day. Melanocytes were dispensed at 1 ⁇ 10 5 cells per well using a 6 well microplate for cell culture, and each of Vit.E-PEG200-Vit.B3 and ⁇ -MSH obtained in Example 1 at a concentration of 100 ⁇ M, respectively. The medium was incubated for 72 hours by replacing with treated 10% FBS / DMEM.
  • DMEA Dulbecco's Modified Eagle's Medium
  • FBS Fetal Bovine Serum
  • P / S Fetal Bovine Serum
  • TPA 12-O-te
  • the cells were detached with trypsin-EDTA and then centrifuged at 3,000 rpm for 10 minutes to recover the cells, and then the cell pellet was washed with PBS and added with 1N NaOH (10% DMSO) to 50-60 to extract melanin. It was left at ⁇ ⁇ . After dissolving the extracted melanin, the absorbance of melanin was measured at 490 nm with a microplate reader.
  • the vitamin E-PEG-vitamin B3 conjugate according to the present invention showed better melanin synthesis inhibition than natural tocopherol and nicotinic acid.
  • Melanocytes (B16 melanoma) were 1 X 10 in Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEA) containing 10% Fetal Bovine Serum (FBS), 1% P / S, and 200 nM TPA (12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate). Inoculated at a density of 5 cells and incubated in a 5% CO 2 incubator at 37 ° C. for 1 day. Melanocytes were dispensed at 1 ⁇ 10 5 cells per well using a 6 well microplate for cell culture, and each of Vit.E-PEG200-Vit.B3 and ⁇ -MSH obtained in Example 1 at a concentration of 100 ⁇ M, respectively. The medium was incubated for 72 hours by replacing with treated 10% FBS / DMEM.
  • DMEA Dulbecco's Modified Eagle's Medium
  • FBS Fetal Bovine Serum
  • P / S Fetal Bovine Serum
  • TPA 12-O-te
  • the medium was removed, washed with PBS, and dissolved in 200 ⁇ L of a 1% Triton X-100 solution on ice. After moving to an e-tube, the solution was allowed to stand for 1 hour while vortexing at an interval of 10 minutes while maintaining 4 ° C. The supernatant centrifuged at 4 ° C and 14,000 rpm for 20 minutes was used as a tyrosinase activity measurement solution. The amount of protein was calculated by measuring the absorbance with a protein analysis solution (Bio Rad, USA).
  • the inhibitory activity (%) of tyrosinase activity of each sample is shown in FIG. 9, Arbutin was used as a negative control, and natural tocopherol and Nicotinic acid were used as a comparative material.
  • the vitamin E-PEG-vitamin B3 conjugate according to the present invention showed superior inhibitory activity of tyrosinase activity than natural tocopherol and nicotinic acid.

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Abstract

본 발명은 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트 및 그를 포함하는 항산화제에 관한 것이다. 본 발명에 따른 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트는 물에 대한 용해도가 개선되고, 안정하며, 독성감소 효과를 가지므로, 우수한 비타민 E 및 비타민 B3의 공급원으로서 노화방지, 주름개선 및 미백용 화장료 조성물, 노화방지용 약제학적 조성물, 노화방지용 건강기능식품 등에 효과적으로 사용될 수 있다.

Description

복합 비타민 컨쥬게이트 및 그를 포함하는 항산화제
본 발명은 복합 비타민 컨쥬게이트 및 그를 포함하는 항산화제에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 물에 대한 용해도가 개선되고, 안정하며, 독성감소 효과를 가지는 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트 및 그를 포함하는 항산화제에 관한 것이다.
비타민 E는 생명체에 지용성 항산화제로 널리 사용되고 있으며, 최근 들어 임상적용 분야를 더 넓혀 가고 있는 추세이다.
천연 비타민 E는 벤젠 고리에 하이드록시기를 가지고 있는 화합물로서, 네 종류의 토코페롤(tocopherol: α, β, γ, δ)과 네 종류의 토코트리에놀(tocotrienol:α, β, γ, δ) 형태로 나타나지만, 이 중 가장 흔하고 생체활성이 큰 것은 하기 화학식 2의 α-토코페롤로서 비타민 E의 대명사처럼 사용된다.
[화학식 2]
Figure PCTKR2013005143-appb-I000001
천연 비타민 E는 물리적으로는 물에 용해되지 않는 지용성의 특징이 있고, 일반적으로 산화가 잘 되기 때문에 화학적으로 불안정할 뿐만 아니라, 산화 생성물인 토코페롤 퀴논은 비타민 E의 생물학적 활성을 갖지 못한다.
한편, 비타민 B3로도 알려진 니아신은 하기 화학식 3의 니코틴산의 일반명이다.
[화학식 3]
Figure PCTKR2013005143-appb-I000002
니아신의 생리학적 활성 형태는 니아신아미드이며, 이 또한 비타민 B3 화합물군의 하나이다. 상기 비타민 B3 화합물은 통상적으로 니아신 결핍증 및 펠레그라병을 치료하기 위해 사용되었다.
또한, 비타민 B3 화합물은 스킨 케어 활성물질 분야에서도 용도가 있음이 밝혀졌다. 미국 특허 제4,096,240호에는 니아신아미드의 피부 미백용 용도가 개시되어 있다. 또한, 국제공개 WO 97/39733호에는 비타민 B3 화합물이 피부 노화로 인한 주름 등 피부 상태를 조절하는데 사용될 수 있음이 개시되어 있다.
그러나, 피부에 국소적으로 도포할 경우, 도포된 비타민 B3 화합물의 약 2 내지 4%만이 실제로 피부로 투과하는 것으로 알려져 있다. 또한, 대부분의 비타민 B3 화합물들이 극성 용매에 용해되기 때문에, 주로 친지성 물질로 구성되는 화장료 조성물을 제조할 때, 안정성이 문제될 수 있는 것으로 보고되어 있다.
본 발명자들은 상기한 천연 비타민 E의 문제점인 화학적 불안정성과 물에 대한 난용성 문제를 개선하고, 비타민 B3의 문제점인 열악한 피부 투과력 및 안정성 문제를 개선하기 위해 예의 연구 검토한 결과, 본 발명에 따른 하기 화학식 1의 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트가 물에 대한 용해도가 개선되고, 안정하며, 독성감소 효과를 가짐을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명의 목적은 물에 대한 용해도가 개선되고, 안정하며, 독성감소 효과를 가지는 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트를 포함하는 항산화제를 제공하는 것이다.
본 발명은 하기 화학식 1의 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트에 관한 것이다.
[화학식 1]
Figure PCTKR2013005143-appb-I000003
상기 식에서,
R1, R2, 및 R3는 각각 독립적으로 수소 또는 C1-C6의 알킬기이고,
X1 및 X2는 각각 독립적으로 NH 또는 O이며,
n은 1 내지 700의 정수이고,
Figure PCTKR2013005143-appb-I000004
은 단일 결합 또는 이중 결합을 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 C1-C6의 알킬기는 탄소수 1 내지 6개로 구성된 직쇄형 또는 분지형 탄화수소를 의미하며, 예를 들어 메틸, 에틸, n-프로필, i-프로필, n-부틸, i-부틸, s-부틸, t-부틸, n-펜틸, n-헥실 등이 포함되나 이에 한정되는 것은 아니다.
일 태양으로, 본 발명의 상기 화학식 1의 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트는,
R1 R2, 및 R3가 각각 독립적으로 수소 또는 C1-C6의 알킬기이고,
X1 및 X2가 각각 독립적으로 NH 또는 O이며,
n은 4 내지 200의 정수이고,
Figure PCTKR2013005143-appb-I000005
은 단일 결합 또는 이중 결합을 의미한다.
다른 태양으로, 본 발명의 상기 화학식 1의 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트는,
R1, R2, 및 R3가 메틸기이고,
X1 및 X2가 각각 독립적으로 NH 또는 O이며,
n은 4 내지 200의 정수이고,
Figure PCTKR2013005143-appb-I000006
은 단일 결합을 의미한다.
또 다른 태양으로, 본 발명의 상기 화학식 1의 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트는,
R1, R2, 및 R3가 메틸기이고,
X1 및 X2가 O이며,
n은 4 내지 200의 정수이고,
은 단일 결합을 의미한다.
본 발명에 따른 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트는 예를 들어 하기 반응식 1에 나타낸 방법에 따라 제조될 수 있다. 하기 반응식에 기재된 방법은 본 발명에서 대표적으로 사용된 방법을 예시한 것일 뿐 단위조작의 순서, 반응시약, 반응조건 등은 경우에 따라 얼마든지 변경될 수 있다.
[반응식 1]
Figure PCTKR2013005143-appb-I000008
상기 식에서,
R1, R2, R3, X1, X2, n 및
Figure PCTKR2013005143-appb-I000009
은 화학식 1에서 정의한 바와 같다.
상기 반응식 1에 따르면, 상기 화학식 4의 화합물과 상기 화학식 5의 화합물을 축합반응시켜 상기 화학식 6의 화합물을 수득한 다음, 상기 화학식 6의 화합물과 상기 화학식 3의 화합물을 축합반응시켜 본 발명에 따른 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트를 제조한다.
상기 축합반응은 용매 중에서 축합제 및 유기아민 촉매의 존재 하에 수행하는 것이 바람직한다.
상기 축합제로는 N,N,N',N'-테트라메틸-(벤조트리아졸-1-일)-우로니움테트라플루오로보레이트(TBTU), N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸-카보디이미드(EDC), N,N'-디이소프로필카보디이미드(DIC) 또는 N,N‘-디사이클로헥실카보디이미드(DCC)를 사용할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 축합반응을 촉진시키는 유기아민 촉매로는 디이소프로필에틸아민(DIPEA) 또는 4-디메틸아미노피리딘(DMAP)을 사용할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 용매로는 무수 유기용매, 예를 들어 디클로로메탄, 벤젠, 톨루엔, 테트라하이드로푸란 및 디에틸에테르 중에서 선택된 1종 이상을 사용할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 반응은 냉각 내지 가온된 상태에서 진행될 수 있다.
상기 화학식 4의 화합물은 상기 화학식 5의 화합물을 기준으로 1 내지 1.5 당량 사용하는 것이 바람직하다.
또한, 화학식 3의 화합물은 상기 화학식 5의 화합물을 기준으로 1 내지 3 당량 사용하는 것이 바람직하다.
상기 화학식 4의 화합물은 당업계에 공지된 방법에 따라 비타민 E와 숙신산을 반응시켜 용이하게 제조할 수 있다.
X1 및 X2가 O인 화학식 5의 화합물(PEG)는 공지의 수용성 고분자로서 상업적으로 입수하거나 공지된 방법[참고문헌: Sandler and Karo, Polymer Synthesis, Academic Press, New York, Vol.3, pages 138-161]에 따라 에틸렌 글리콜을 개환 중합반응시켜 제조할 수 있다.
X1 및 X2가 NH인 화학식 5의 화합물(말단에 아민기를 가지는 PEG 유도체)는 상업적으로 입수하거나 공지된 방법[참고문헌: Makromol. Chem., 1981, vol. 182, pages 1379-1384 등]에 따라 PEG로부터 제조할 수 있다.
한편, X1이 O이고, X2가 NH인 화학식 1의 화합물은 상기 화학식 4의 화합물과 PEG를 축합반응시켜 X1 및 X2가 O인 화학식 6의 화합물을 수득한 다음, 말단 OH기를 당업계에 공지된 방법에 따라 NH2기로 치환시킨 후 상기 화학식 3의 화합물과 축합반응시켜 제조할 수 있다.
대안적으로, 본 발명에 따른 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트는 하기 반응식 2에 나타낸 바와 같이, 하기 화학식 5의 화합물과 하기 화학식 3의 화합물을 축합반응시켜 하기 화학식 7의 화합물을 수득한 다음, 하기 화학식 7의 화합물과 하기 화학식 4의 화합물을 축합반응시켜 제조할 수도 있다.
[반응식 2]
Figure PCTKR2013005143-appb-I000010
상기 식에서,
R1, R2, R3, X1, X2, n 및
Figure PCTKR2013005143-appb-I000011
은 화학식 1에서 정의한 바와 같다.
본 발명에 따른 상기 화학식 1의 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트는 자유라디칼 소거 효과 실험에서 니코틴산(Nicotinic acid)과 유사한 항산화력을 나타내었으며, 세포활성도 평가 실험에서 현저한 독성감소 효과를 나타내었다. 아울러, 본 발명에 따른 상기 화학식 1의 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트는 콜라겐 합성 효과 시험, 멜라닌 합성 저해 효과 시험 및 티로시나아제 활성 저해 효과 시험에서 천연 토코페롤 및 니코틴산보다 우수한 효과를 나타내었다.
따라서, 본 발명에 따른 상기 화학식 1의 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트는 우수한 항산화제, 주름개선제 및 미백제로서 사용될 수 있다.
일 태양으로, 본 발명에 따른 상기 화학식 1의 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트는 노화방지, 주름개선 및 미백용 화장료 조성물에 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 상기 화학식 1의 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트를 유효성분으로서 약 0.1 내지 10 중량%, 바람직하게는 0.5 내지 2 중량%로 포함한다. 유효성분의 함량은 그의 사용 목적에 따라 적절하게 결정될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 유효성분으로서 상기 화학식 1의 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 사용되는 성분들, 예를 들어 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.
본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 사용되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 파우더, 스프레이 등으로 제형화될 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트, 폴리아미드 파우더 등이 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제, 예를 들어 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방산 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜, 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 또는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가, 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 스킨, 로션, 크림, 에센스, 팩, 파운데이션, 색조화장품, 선크림, 투웨이케이크, 페이스파우더, 콤팩트, 메이크업베이스, 스킨커버, 아이쉐도우, 립스틱, 립글로스, 립픽스, 아이브로우 펜슬 등의 화장품에 적용될 수 있다.
다른 태양으로, 본 발명에 따른 상기 화학식 1의 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트는 노화방지용 약제학적 조성물에 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 약제학적 조성물은 경구적으로(예를 들면, 복용 또는 흡입) 또는 비경구적으로(예를 들면, 주사, 침착, 이식, 좌약) 투여될 수 있으며, 주사는 예를 들면, 정맥주사, 피하주사, 근육내주사 또는 복강내주사일 수 있다. 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 투여 경로에 따라, 정제, 캡슐제, 과립제, 파인 서브틸래(fine subtilae), 분제, 설하 정제, 좌약, 연고, 주사제, 유탁액제, 현탁액제, 시럽제, 분무제 등으로 제형화될 수 있다. 상기 여러 가지 형태의 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 각 제형에 통상적으로 사용되는 약제학적으로 허용되는 담체(carrier)를 사용하여 공지기술에 의해 제조될 수 있다. 약제학적으로 허용되는 담체의 예는 부형제, 결합제, 붕해제(disintegrating agent), 윤활제, 방부제, 항산화제, 등장제(isotonic agent), 완충제, 피막제, 감미제, 용해제, 기제(base), 분산제, 습윤제, 현탁화제, 안정제, 착색제 등을 포함한다.
본 발명에 따른 약제학적 조성물은 약제의 형태에 따라 다르지만, 상기 화학식 1의 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트를 약 0.1 내지 10 중량%, 바람직하게는 0.5 내지 2 중량%로 포함한다.
본 발명의 약제학적 조성물의 구체적인 투여량은 치료되는 사람을 포함한 포유동물의 종류, 체중, 성별, 질환의 정도, 의사의 판단 등에 따라 다를 수 있다. 바람직하게는, 경구투여의 경우에는 하루에 체중 1 kg 당 활성성분 10 내지 200 mg이 투여된다. 상기 총 일일 투여량은 질환의 정도, 의사의 판단 등에 따라 한번에 또는 수회로 나누어 투여될 수 있다.
또 다른 태양으로, 본 발명에 따른 상기 화학식 1의 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트는 노화방지용 건강기능식품에 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 건강기능식품의 종류에는 특별한 제한이 없으며, 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액제, 에멀젼, 시럽제 등의 경구형 제제 형태이거나, 캔디, 과자, 껌, 아이스크림, 면류, 빵, 음료 등 일반적인 식품에 첨가될 수 있다.
본 발명의 건강기능식품은 형태에 따라 통상적인 방법으로 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 감미제, 방향제, 보존제, 계면활성제, 윤활제, 부형제 등 식품학적으로 허용되는 담체를 적절히 사용하여 제조될 수 있다.
상기 건강기능식품의 제조에 있어서 상기 화학식 1의 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트의 함량은 건강기능식품의 형태에 따라 다르지만, 약 0.1 내지 10 중량%, 바람직하게는 0.5 내지 2 중량%의 농도이다.
본 발명에 따른 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트는 물에 대한 용해도가 개선되고, 안정하며, 독성감소 효과를 가진다.
따라서, 본 발명에 따른 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트는 우수한 비타민 E 및 비타민 B3의 공급원으로서, 노화방지, 주름개선 및 미백용 화장료 조성물, 노화방지용 약제학적 조성물, 노화방지용 건강기능식품 등에 효과적으로 사용될 수 있다.
아울러, 본 발명에 따른 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트는 생체 내 pH 조건에서 가수분해되어 활성 비타민 E 와 비타민 B3를 서서히 방출할 수 있으므로, 비타민 E 와 비타민 B3의 생리활성을 지속적으로 나타낼 수 있다.
도 1은 본 발명에 따른 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트의 자유라디칼 잔존율을 천연 토코페롤(Tocopherol) 및 니코틴산(Nicotinic acid)과 비교한 그래프이다.
도 2는 본 발명에 따른 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트의 세포활성도(cell viability)를 천연 토코페롤(Tocopherol) 및 니코틴산(Nicotinic acid)과 비교한 그래프이다.
도 3은 본 발명에 따른 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트의 pH 7.72의 완충용액 중 가수분해율을 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명에 따른 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트의 pH 9.45의 완충용액 중 가수분해율을 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명에 따른 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트의 pH 12.30의 완충용액 중 가수분해율을 나타낸 그래프이다.
도 6은 본 발명에 따른 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트의 쥐 혈청 중 가수분해율을 나타낸 그래프이다.
도 7은 본 발명에 따른 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트의 콜라겐 합성능을 천연 토코페롤(Tocopherol) 및 니코틴산(Nicotinic acid)과 비교한 그래프이다.
도 8은 본 발명에 따른 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트의 멜라닌 합성 저해능을 알부틴(Arbutin), 천연 토코페롤(Tocopherol) 및 니코틴산(Nicotinic acid)과 비교한 그래프이다.
도 9는 본 발명에 따른 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트의 티로시나아제 활성 저해능을 알부틴(Arbutin), 천연 토코페롤(Tocopherol) 및 니코틴산(Nicotinic acid)과 비교한 그래프이다.
이하, 실시예에 의해 본 발명을 보다 구체적으로 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오직 본 발명을 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되지 않는다는 것은 당업자에게 있어서 자명하다.
실시예 1: Vit.E-PEG200-Vit.B3 (R1, R2 및 R3가 모두 메틸기이고, X1 및 X2가 산소이며, n은 4이고,
Figure PCTKR2013005143-appb-I000012
은 단일 결합인 화학식 1의 화합물)의 제조
폴리에틸렌글리콜(PEG200) 10 g(0.051 mol)을 디클로로메탄 200 ml에 용해한 용액에 4-디메틸아미노피리딘 12.6 g(0.103 mol)과 토코페릴숙신산 32.8 g(0.062 mol)을 가하고, N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸-카보디이미드 23.7 g(0.124 mol)을 천천히 가한 후 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 TLC로 확인하고, 니코틴산 6.3 g(0.051 mol)을 첨가한 다음, 실온에서 3 시간 동안 교반하였다.
반응 용매를 제거하고, 잔류물을 에틸아세테이트 250 ml에 녹인 다음, 1.0 N 염산 수용액으로 세척하였다. 유기층을 무수 황산마그네슘으로 처리한 후 여과하여 감압 농축하였다. 생성된 혼합물을 에틸아세테이트와 n-헥산(1:2)로 실리카겔 컬럼 크로마토그래피하여 20.5 g의 연노랑의 시럽 형태의 표제 화합물을 수득하였다.
1H NMR 400 MHz(CDCl3) δ 9.24(dd, 2H), 8.78(dd, 2H), 8.31(td, 2H), 7.39(dt, 2H), 4.51(t, 2H), 4.26(t, 2H), 3.84(t, 2H), 3.83-3.63(PEG), 2.93(t, 2H), 2.79(t, 2H), 2.58(t, 2H), 2.08(t, 3H), 2.01(t, 3H), 1.97(t, 3H), 1.79(m, 2H), 1.52(m, 3H), 1.40-1.23(m, 6H), 1.23(s, 3H), 1.16-1.05(m, 12H), 0.87-0.83(m, 12H)
실시예 2: Vit.E-PEG400-Vit.B3 (R1, R2 및 R3가 모두 메틸기이고, X1 및 X2가 산소이며, n은 9이고,
Figure PCTKR2013005143-appb-I000013
은 단일 결합인 화학식 1의 화합물)의 제조
폴리에틸렌글리콜(PEG400) 20 g(0.05 mol)을 디클로로메탄 300 ml에 용해한 용액에 4-디메틸아미노피리딘 12.6 g(0.103 mol)과 토코페릴숙신산 31.8 g(0.060 mol)을 가하고, N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸-카보디이미드 23.0 g(0.120 mol)을 천천히 가하는 것을 제외하고는, 실시예 1과 동일한 방법으로 30.0 g의 연노랑의 시럽 형태의 표제 화합물을 수득하였다.
1H NMR 400 MHz (CDCl3) δ 9.25(dd, 2H), 8.79(dd, 2H), 8.30(td, 2H), 7.39(dt, 2H), 4.51(t, 2H), 4.25(t, 2H), 3.84(t, 2H), 3.83-3.63(PEG), 2.94(t, 2H), 2.79(t, 2H), 2.58(t, 2H), 2.08(t, 3H), 2.01(t, 3H), 1.97(t, 3H), 1.79(m, 2H), 1.52(m, 3H), 1.41-1.22(m, 6H), 1.23(s, 3H), 1.16-1.05(m, 12H), 0.87-0.83(m, 12H)
실시예 3: Vit.E-PEG8K-Vit.B3 (R1, R2 및 R3가 모두 메틸기이고, X1 및 X2가 산소이며, n은 182이고,
Figure PCTKR2013005143-appb-I000014
은 단일 결합인 화학식 1의 화합물)의 제조
폴리에틸렌글리콜(PEG8K) 20 g(2.5 mmol)을 디클로로메탄 600 ml에 용해한 용액에 4-디메틸아미노피리딘 0.61 g(5.0 mmol)과 토코페릴숙신산 1.33 g(2.5 mmol)을 가하고, N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸-카보디이미드 0.95 g(5.0 mmol)을 천천히 가하는 것을 제외하고는, 실시예 1과 동일한 방법으로 28.6 g의 고형의 표제 화합물을 수득하였다.
1H NMR 400 MHz (CDCl3) δ 9.23(d, 2H), 8.78(d, 2H), 8.31(d, 2H), 7.39(t, 2H), 4.51(t, 2H), 4.26(t, 2H), 3.84(t, 2H), 3.83-3.63(PEG), 2.93(t, 2H), 2.79(t, 2H), 2.58(t, 2H), 2.08(t, 3H), 2.01(t, 3H), 1.97(t, 3H), 1.79(m, 2H), 1.52(m, 3H), 1.40-1.23(m, 6H), 1.23(s, 3H), 1.16-1.05(m, 12H), 0.87-0.82(m, 12H)
실시예 4: Vit.E-PEG200-Vit.B3 아마이드 (R1, R2 및 R3가 모두 메틸기이고, X1 이 O이며, X2가 NH이고, n은 4이며,
Figure PCTKR2013005143-appb-I000015
은 단일 결합인 화학식 1의 화합물)의 제조
실시예 4-1: Vit.E-PEG200-OMs
PEG200 10 g(0.051 mol)을 디클로로메탄 200 ml에 용해한 용액에 4-디메틸아미노피리딘 12.6 g(0.103 mol)과 토코페릴숙신산 32.8 g(0.062 mol)을 가하고, N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸-카보디이미드 23.7 g(0.124 mol)을 천천히 가한 후 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 1.0 N 염산 수용액, 포화 탄산수소나트륨 수용액 및 포화 염화나트륨 수용액 각각 200 ml로 순차적으로 세척하고, 유기층을 무수 황산마그네슘으로 처리한 후 여과하여 감압 농축하였다.
생성된 혼합물을 정제 없이 디클로로메탄 200 ml에 용해하고, 트리에틸아민 21.6 ml(0.155 mol)을 가하였다. 생성된 용액에 메탄술포닐클로라이드 12.0 ml(0.155 mol)을 0 ℃에서 천천히 가하고 3 시간 동안 교반하였다. 생성된 침전물을 여과하여 제거하고, 여과액을 1.0 N 염산 수용액, 포화 탄산수소나트륨 수용액 및 포화 염화나트륨 수용액 각각 200 ml로 순차적으로 세척하고, 유기층을 무수 황산마그네슘으로 처리한 후 여과하여 감압 농축하였다. 생성된 혼합물을 에틸아세테이트와 n-헥산(1:4)로 실리카겔 컬럼 크로마토그래피하여 20.7 g의 연노랑의 시럽 형태의 표제 화합물을 수득하였다.
1H NMR 400 MHz (CDCl3) δ 4.26(t, 2H), 4.18(t, 2H), 3.84(t, 2H), 3.83-3.63(PEG), 2.97(s, 3H), 2.93(t, 2H), 2.79(t, 2H), 2.58(t, 2H), 2.08(t, 3H), 2.01(t, 3H), 1.97(t, 3H), 1.79(m, 2H), 1.52(m, 3H), 1.40-1.23(m, 6H), 1.23(s, 3H), 1.16-1.05(m, 12H), 0.87-0.83(m, 12H)
실시예 4-2: Vit.E-PEG200-NH2
실시예 4-1에서 수득한 Vit.E-PEG200-OMs 20.7 g을 30% 암모니아수 415 ml에 용해하고, 24 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 디클로로메탄 450 ml로 추출하고, 유기층을 무수 황산마그네슘으로 처리한 후 여과하여 감압 농축하였다. 생성된 혼합물을 메탄올과 디클로로메탄(1:10)으로 실리카겔 컬럼 크로마토그래피하여 8 g의 연노랑의 시럽 형태의 표제 화합물을 수득하였다.
1H NMR 400 MHz (CDCl3) δ 4.26(t, 2H), 3.84(t, 2H), 3.83-3.63(PEG), 2.93(t, 2H), 2.86(t, 2H), 2.79(t, 2H), 2.58(t, 2H), 2.08(t, 3H), 2.01(t, 3H), 1.97(t, 3H), 1.79(m, 2H), 1.52(m, 3H), 1.40-1.23(m, 6H), 1.23(s, 3H), 1.16-1.05(m, 12H), 0.87-0.83(m, 12H)
실시예 4-3: Vit.E-PEG200-Vit.B3 아마이드
실시예 4-2에서 수득한 Vit.E-PEG200-NH2 7.0 g(9.92 mmol)을 디클로로메탄 140 ml에 용해하고, 4-디메틸아미노피리딘 1.45 g(0.012 mol)과 니코틴산 1.22 g(9.92 mmol)을 가하고, N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸-카보디이미드 2.85 g(0.015 mol)을 천천히 가한 후 실온에서 3시간 동안 교반하였다.
반응 용매를 제거하고, 잔류물을 에틸아세테이트 200 ml에 녹인 다음, 1.0 N 염산 수용액으로 세척하였다. 유기층을 무수 황산마그네슘으로 처리한 후 여과하여 감압 농축하였다. 생성된 혼합물을 에틸아세테이트와 n-헥산(1:2)로 실리카겔 컬럼 크로마토그래피하여 7.2 g의 연노랑의 시럽 형태의 표제 화합물을 수득하였다.
1H NMR 400 MHz (CDCl3) δ 9.23(d, 2H), 8.78(d, 2H), 8.31(d, 2H), 7.39(t, 2H), 5.98(s, 1H), 3.84(t, 2H), 3.83-3.63(PEG), 2.93(t, 2H), 2.79(t, 2H), 2.58(t, 2H), 2.08(t, 3H), 2.01(t, 3H), 1.97(t, 3H), 1.79(m, 2H), 1.52(m, 3H), 1.40-1.23(m, 6H), 1.23(s, 3H), 1.16-1.05(m, 12H), 0.87-0.82(m, 12H)
실험예 1: 물에 대한 용해도 평가
상기 실시예 1 내지 3에서 수득한 비타민 E-PEG-비타민 B3 컨쥬게이트를 각각 탈이온수에 농도 별로 용해시키고 분광광도계(spectrophotometer)를 이용하여 80%의 투과도(transmittance)를 보이는 농도를 측정하였다.
그 결과, 실시예 1에서 수득한 Vit.E-PEG200-Vit.B3는 0.065 mg/ml, 실시예 2에서 수득한 Vit.E-PEG400-Vit.B3는 0.13 mg/ml, 실시예 3에서 수득한 Vit.E-PEG8K-Vit.B3는 9 mg/ml로 PEG의 분자량이 커질수록 물에 대한 용해도가 증가하며 모두 수용성인 것을 확인하였다.
실험예 2: 항산화력 평가
상기 실시예 1에서 수득한 Vit.E-PEG200-Vit.B3의 자유라디칼 소거 효과를 DPPH(1,1-디페닐-2-피크릴히드라질)를 이용하여 측정하였다.
우선 에탄올과 아세테이트 완충액(pH 5.6)을 이용하여 0.08 mg/ml의 DPPH 용액을 제조하였다. 디메틸설폭사이드에 녹인 2.0 mg/ml의 시료를 동일 용매로 희석시켜 50 μM 및 100 μM의 농도별로 시료를 제조한 후, 각각의 시료와 제조된 상기 DPPH 용액을 3:10으로 섞어 30분간 반응시키고, 분광기를 이용하여 520 nm에서 OD 값의 변화를 측정하였다.
각 시료의 자유라디칼 잔존율(%)를 도 1에 나타내었으며, 비교물질로는 천연 토코페롤(Tocopherol)과 니코틴산(Nicotinic acid)을 사용하였다.
도 1에서 보듯이, 본 발명에 따른 비타민 E-PEG-비타민 B3 컨쥬게이트는 니코틴산(Nicotinic acid)과 유사한 항산화력을 나타내었다.
실험예 3: 세포활성도 평가
상기 실시예 1에서 수득한 Vit.E-PEG200-Vit.B3의 1차 안전성을 검증하기 위해, 인간피부세포주(HS27, ATCC CRL-1634)를 배양하여 MTT 실험[참고문헌: Journal of Immunological Methods, 1983, 65, 55~63; J. Medical Plants Research, 4(22), 2383-2387]을 통해 세포활성도(cell viability)를 측정하고, 그 결과를 도 2에 나타내었다. 비교물질로는 천연 토코페롤(Tocopherol)과 니코틴산(Nicotinic acid)을 사용하였다.
도 2에서 보듯이, 본 발명에 따른 비타민 E-PEG-비타민 B3 컨쥬게이트는 천연 토코페롤(Tocopherol) 보다 현저히 우수한 독성감소 효과를 나타내었다. 아울러, 본 발명에 따른 비타민 E-PEG-비타민 B3 컨쥬게이트는 니코틴산(Nicotinic acid) 보다 세포 성장을 증가시켰다. 이는 비타민 B3가 PEG와 컨쥬케이션을 이룸으로써 비타민 B3의 안정성이 증가되었기 때문인 것으로 판단된다.
실험예 4: 완충용액 중 가수분해 시험
본 발명에 따른 비타민 E-PEG-비타민 B3 컨쥬게이트의 완충용액 중 가수분해를 확인하였다.
실시예 1에서 수득한 Vit.E-PEG200-Vit.B3, 실시예 2에서 수득한 Vit.E-PEG400-Vit.B3 및 실시예 3에서 수득한 Vit.E-PEG8K-Vit.B3를 각각 0.065 mg/ml, 0.13 mg/ml 및 9 mg/ml의 농도로 67 mM 포타슘포스페이트 용액 pH 7.72, pH 9.45 및 pH 12.30에 용해시켜 각각 20 ml의 용액을 제조하였다. 생성된 용액을 37 oC 항온기에서 100 rpm으로 흔들어 주면서 충분한 반응이 진행되도록 하였다. 시간 간격을 두고 각 시험 튜브에서 2 ml씩 완충용액을 회수한 후, 2 ml의 디클로로메탄을 첨가하여 교반한 다음, 디클로로메탄 층을 2회 추출하였다. 디클로로메탄 추출물을 상온에서 건조, 농축한 후, 완전 건조시키고 100 ul의 증류수를 첨가하여 HPLC 분석하였다.
HPLC의 분석 조건은 다음과 같다.
분석기기명 : Agilent HPLC 1260
컬럼 : C18 (150 x 4.6 mm/5 um)
소프트웨어 : 전체 module Open LAB CDS, Software 프로그램 EZchrom Edition
전개용매 : 40% ACN in H2O
컬럼 온도 : 30 oC
가수분해율(%) = [Ctx/Ct0] X 100(%)
Ct0 = 0 시간의 비타민 E-PEG-비타민 B3 피크 면적
Ctx = X 시간의 비타민 E-PEG-비타민 B3 피크 면적
pH 7.72, pH 9.45 및 pH 12.30의 완충용액에서의 결과를 각각 도 3 내지 도 5에 나타내었다. 도 3 내지 도 5로부터 본 발명에 따른 비타민 E-PEG-비타민 B3 컨쥬게이트는 pH 7.72-12.30에서 에스테르 결합이 가수분해되어 활성 비타민 E와 비타민 B3를 방출할 수 있음을 확인하였다. 또한, 본 발명에 따른 비타민 E-PEG-비타민 B3 컨쥬게이트의 분해 속도는 완충용액의 pH가 증가할수록 빨라졌으며, 이는 에스테르 결합이 알칼리 용액에서 분해가 잘 일어나기 때문이다.
실험예 5: 쥐 혈청 중 가수분해 시험
본 발명에 따른 비타민 E-PEG-비타민 B3 컨쥬게이트의 쥐 혈청 중 가수분해를 확인하였다.
실시예 1에서 수득한 Vit.E-PEG200-Vit.B3, 실시예 2에서 수득한 Vit.E-PEG400-Vit.B3 및 실시예 3에서 수득한 Vit.E-PEG8K-Vit.B3를 각각 0.065 mg/ml, 0.13 mg/ml 및 9 mg/ml의 농도로 쥐 혈청에 용해시켜 각각 20 ml의 용액을 제조하였다. 생성된 용액을 37 oC 항온기에서 100 rpm으로 흔들어 주면서 충분한 반응이 진행되도록 하였다. 시간 간격을 두고 각 시험 튜브에서 2 ml씩 혈청 혼합물을 회수한 후, 2 ml의 디클로로메탄을 첨가하여 교반한 다음, 원심분리(12,000 rpm, 4 oC, 20 분)하였다. 원심분리 후 디클로로메탄 층을 2회 추출하였다. 디클로로메탄 추출물을 상온에서 건조, 농축한 후, 완전 건조시키고 100 ul의 증류수를 첨가하여 HPLC 분석하였다.
HPLC의 분석 조건은 다음과 같다.
분석기기명 : Agilent HPLC 1260
컬럼 : C18 (150 x 4.6 mm/5 um)
소프트웨어 : 전체 module Open LAB CDS, Software 프로그램 EZchrom Edition
전개용매 : 40% ACN in H2O
컬럼 온도 : 30 oC
가수분해율(%) = [Ctx/Ct0] X 100(%)
Ct0 = 0 시간의 비타민 E-PEG-비타민 B3 피크 면적
Ctx = X 시간의 비타민 E-PEG-비타민 B3 피크 면적
분석 결과를 도 6에 나타내었다. 도 6으로부터 본 발명에 따른 비타민 E-PEG-비타민 B3 컨쥬게이트는 체내에서 에스테르 결합이 가수분해되어 활성 비타민 E와 비타민 B3를 방출할 수 있음을 확인하였다.
실험예 6: 콜라겐 합성 효과 시험
본 발명에 따른 비타민 E-PEG-비타민 B3 컨쥬게이트의 피부노화방지 효능을 확인하기 위해 콜라겐 합성 효과를 시험하였다.
인간 피부 섬유아세포(HS27 세포주)에 100 μM의 농도로 상기 실시예 1에서 수득한 Vit.E-PEG200-Vit.B3를 처리하고, 프로콜라겐 타입-I C-펩타이드(PIP) EIA 키트를 이용하여 콜라겐 타입 I의 합성양을 측정하였다. 구체적으로, 96 웰 플레이트에 각 웰당 10,000 세포가 되도록 심어준 후 24시간 동안 배양하였다. 그런 다음, 배양된 배지를 제거하고 시료를 100 μM의 농도로 처리한 후 24시간 동안 배양하였다. 각 웰로부터 상층액을 회수하여 프로콜라겐 타입-I C-펩타이드(PIP) EIA 키트의 각 웰에 첨가한 후, 제조사의 방법에 따라 콜라겐 타입 I의 총 양을 측정하였다.
각 시료의 콜라겐 합성능(%)를 도 7에 나타내었으며, 비교물질로는 천연 토코페롤(Tocopherol)과 니코틴산(Nicotinic acid)을 사용하였다.
도 7에서 보듯이, 본 발명에 따른 비타민 E-PEG-비타민 B3 컨쥬게이트는 천연 토코페롤 및 니코틴산보다 우수한 콜라겐 합성 증진효과를 나타내었다.
실험예 7: 멜라닌 합성 저해 효과 시험
멜라닌 세포(B16 melanoma)를 10% FBS(Fetal Bovine Serum)과 1% P/S, 200 nM TPA(12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate)가 함유된 DMEA(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)에 1 X 105 세포의 밀도로 접종하고, 하루 동안 37 ℃에서 5% CO2 인큐베이터에서 배양하였다. 멜라닌 세포를 세포 배양용 6 웰 마이크로플레이트를 사용하여 각 웰당 1×105 세포로 분주하고, 100 μM 농도의 상기 실시예 1에서 수득한 Vit.E-PEG200-Vit.B3와 α-MSH로 각각 처리된 10% FBS/DMEM으로 교체하여 배지를 72시간 배양하였다.
그런 다음, 세포를 트립신-EDTA로 떼어낸 후 3,000 rpm으로 10분간 원심 분리하여 세포를 회수한 다음, 세포 펠릿을 PBS로 세척하고 1N NaOH(10% DMSO)를 첨가하여 멜라닌이 추출되도록 50 내지 60 ℃에서 방치하였다. 추출된 멜라닌을 용해한 후 마이크로플레이트 리더로 490 nm에서 멜라닌의 흡광도를 측정하였다.
각 시료의 멜라닌 합성 저해능(%)를 도 8에 나타내었으며, 음성대조군으로는 알부틴(Arbutin)을 사용하고, 비교물질로는 천연 토코페롤(Tocopherol)과 니코틴산(Nicotinic acid)을 사용하였다.
도 8에서 보듯이, 본 발명에 따른 비타민 E-PEG-비타민 B3 컨쥬게이트는 천연 토코페롤 및 니코틴산보다 우수한 멜라닌 합성 저해능을 나타내었다.
실험예 8: 티로시나아제 활성 저해 효과 시험
멜라닌 세포(B16 melanoma)를 10% FBS(Fetal Bovine Serum)과 1% P/S, 200 nM TPA(12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate)가 함유된 DMEA(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)에 1 X 105 세포의 밀도로 접종하고, 하루 동안 37 ℃에서 5% CO2 인큐베이터에서 배양하였다. 멜라닌 세포를 세포 배양용 6 웰 마이크로플레이트를 사용하여 각 웰당 1×105 세포로 분주하고, 100 μM 농도의 상기 실시예 1에서 수득한 Vit.E-PEG200-Vit.B3와 α-MSH로 각각 처리된 10% FBS/DMEM으로 교체하여 배지를 72시간 배양하였다.
그런 다음, 배지를 제거하고 PBS로 세척한 다음, 얼음 위에 얹은 채로 1% 트리톤 X-100 용액을 200 μL씩 처리하여 용해시켰다. 그 후 e-튜브에 옮겨 담고 4 ℃을 유지한 상태에서 10분 간격으로 보텍싱하면서 1시간 가량 방치한 다음, 4 ℃, 14,000 rpm에서 20분간 원심 분리한 상층액을 티로시나아제 활성 측정 용액으로 사용하였고, 단백질 분석 용액(Bio Rad, USA)으로 흡광도를 측정하여 동량의 단백질 양을 계산하였다. 단백질 40 μg을 포함한 세포 추출물과 시료를 총 100 μL가 되게 섞은 후 L-DOPA를 100 μL씩 처리한 다음, 37 ℃, 10% CO2 인큐베이터에 넣고 490 nm에서 60분 후에 흡광도의 변화를 측정하였다.
각 시료의 티로시나아제 활성 저해능(%)를 도 9에 나타내었으며, 음성대조군으로는 알부틴(Arbutin)을 사용하고, 비교물질로는 천연 토코페롤(Tocopherol)과 니코틴산(Nicotinic acid)을 사용하였다.
도 9에서 보듯이, 본 발명에 따른 비타민 E-PEG-비타민 B3 컨쥬게이트는 천연 토코페롤 및 니코틴산보다 우수한 티로시나아제 활성 저해능을 나타내었다.

Claims (7)

  1. 하기 화학식 1의 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2013005143-appb-I000016
    상기 식에서,
    R1, R2, 및 R3는 각각 독립적으로 수소 또는 C1-C6의 알킬기이고,
    X1 및 X2는 각각 독립적으로 NH 또는 O이며,
    n은 1 내지 700의 정수이고,
    Figure PCTKR2013005143-appb-I000017
    은 단일 결합 또는 이중 결합을 의미한다.
  2. 제1항에 있어서,
    R1, R2 및 R3가 각각 독립적으로 수소 또는 C1-C6의 알킬기이고,
    X1 및 X2가 각각 독립적으로 NH 또는 O이며,
    n은 4 내지 200의 정수이고,
    Figure PCTKR2013005143-appb-I000018
    은 단일 결합 또는 이중 결합을 의미하는 것을 특징으로 하는 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트.
  3. 제1항에 있어서,
    R1, R2 및 R3가 메틸기이고,
    X1 및 X2가 각각 독립적으로 NH 또는 O이며,
    n은 4 내지 200의 정수이고,
    Figure PCTKR2013005143-appb-I000019
    은 단일 결합을 의미하는 것을 특징으로 하는 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트.
  4. 제1항에 있어서,
    R1, R2 및 R3가 메틸기이고,
    X1 및 X2가 O이며,
    n은 4 내지 200의 정수이고,
    Figure PCTKR2013005143-appb-I000020
    은 단일 결합을 의미하는 것을 특징으로 하는 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트를 포함하는 노화방지, 주름개선 및 미백용 화장료 조성물.
  6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트를 포함하는 노화방지용 약제학적 조성물.
  7. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 비타민 E-폴리에틸렌글리콜-비타민 B3 컨쥬게이트를 포함하는 노화방지용 건강기능식품.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5696101A (en) * 1996-04-16 1997-12-09 Eastman Chemical Company Oxidized cellulose and vitamin E blend for topical hemostatic applications
US20110053990A1 (en) * 2009-09-01 2011-03-03 Milne Jill C Fatty acid niacin conjugates and their uses

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5696101A (en) * 1996-04-16 1997-12-09 Eastman Chemical Company Oxidized cellulose and vitamin E blend for topical hemostatic applications
US20110053990A1 (en) * 2009-09-01 2011-03-03 Milne Jill C Fatty acid niacin conjugates and their uses

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KONG, L. Y. ET AL.: "Direct quantification of mono- and di-d-a-tocopherol polyethylene glycol 1000 succinate by high performance liquid chromatography.", JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY A., vol. 1218, 2011, pages 8664 - 8671 *
MELETIS, C. D. ET AL.: "Nutritional and Botanical Approaches to Antiaging.", ALTERNATIVE AND COMPLEMENTARY THERAPIES., vol. 12, no. 6, 2006, pages 268 - 274 *
SHARMA, A. ET AL.: "Multivalent niacin nanoconjugates for delivery to cytoplasmic lipid droplets.", BIOMATERIALS, vol. 32, 2011, pages 1419 - 1429 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11872261B2 (en) 2016-05-05 2024-01-16 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Lipoprotein targeting protease inhibitors and uses

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