WO2013162100A1 - 치주염증 질환 진단용 바이오마커 조성물 - Google Patents

치주염증 질환 진단용 바이오마커 조성물 Download PDF

Info

Publication number
WO2013162100A1
WO2013162100A1 PCT/KR2012/003239 KR2012003239W WO2013162100A1 WO 2013162100 A1 WO2013162100 A1 WO 2013162100A1 KR 2012003239 W KR2012003239 W KR 2012003239W WO 2013162100 A1 WO2013162100 A1 WO 2013162100A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
protein
disease
mrna
expression level
diagnosing
Prior art date
Application number
PCT/KR2012/003239
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
조제열
이재목
허선희
Original Assignee
경북대학교 산학협력단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 경북대학교 산학협력단 filed Critical 경북대학교 산학협력단
Priority to PCT/KR2012/003239 priority Critical patent/WO2013162100A1/ko
Publication of WO2013162100A1 publication Critical patent/WO2013162100A1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/18—Dental and oral disorders

Definitions

  • the present invention relates to biomarkers. More specifically, the present invention relates to a biomarker composition, a diagnostic kit, and a diagnostic method for diagnosing periodontal disease.
  • Periodontal inflammatory disease is divided into gingivitis and periodontitis, and it is a chronic inflammatory disease caused by damage to the periodontal ligament and adjacent tissues. .
  • Periodontitis is a multifactorial disease that occurs in supportive tissue surrounding teeth, and is caused by bacteria and toxins in the plaque and is known as a result of the host's defense mechanism by bacteria on the tooth surface.
  • Periodontitis is also associated with systemic diseases such as cardiovascular disease (Suzuki et al., 2010) and diabetes mellitus (Nagasawa et al., 2010).
  • Periodontitis is influenced by genetic and environmental factors. Genetic factors include interleukin-1, interleukin-10 and Fc-gamma receptors, human leukocyte antigen characteristics, and family polymorphism gene polymorphism. Environmental factors include smoking, oral hygiene, stress and systemic disease (Stabholz et al., 2010). In addition, periodontitis is characterized by changes in oral bacteria, from most Gram-positive to Gram-negative bacteria, including Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia and Treponema denticola (Darveau, 2010).
  • the present invention has been made to solve such a conventional problem, and an object thereof is to provide an effective marker for early diagnosis of an infection of a pathogen causing a periodontal inflammatory disease.
  • the biomarker composition for diagnosing periodontal disease according to the present invention comprises at least one protein selected from the group consisting of protein S100-A2 (S100A2), protein S100-A8 (S100A8), and protein S100-A9 (S100A9). Characterized in that.
  • the biomarker composition for diagnosing periodontal inflammation according to the present invention is at least one protein selected from the group consisting of protein S100-A2 (S100A2), protein S100-A8 (S100A8), and protein S100-A9 (S100A9) is a periodontal inflammation disease It is characterized by an increase in time.
  • the biomarker composition for diagnosing periodontal inflammation is S100A2 (GenBank: NM_005978), S100A8 (NCBL GeneID: NM_002964), and S100A9 (NCBL GeneID: NM_002965) of one or more genes of mRNA or protein selected from the group consisting of It may include an agent for measuring the expression level.
  • the agent for measuring the expression level of the mRNA may be a primer pair or probe specific to the mRNA
  • the agent for measuring the expression level of the protein may be an antibody or peptide specific for the protein.
  • the present invention can provide a periodontal disease disease diagnostic kit comprising the biomarker composition for diagnosis of periodontal disease as an active ingredient.
  • the present invention is specific to at least one gene selected from the group consisting of S100A2 (GenBank: NM_005978), S100A8 (NCBL GeneID: NM_002964), and S100A9 (NCBL GeneID: NM_002965) in order to provide information necessary for the diagnosis of periodontal inflammation disease.
  • S100A2 GenBank: NM_005978
  • S100A8 NCBL GeneID: NM_002964
  • S100A9 NCBL GeneID: NM_002965
  • the present invention provides at least one protein selected from the group consisting of proteins S100-A2 (S100A2), protein S100-A8 (S100A8), and protein S100-A9 (S100A9) in order to provide information necessary for the diagnosis of periodontal inflammation disease.
  • S100A2 proteins S100-A2
  • S100A8 protein S100-A8
  • S100A9 protein S100-A9
  • the biomarker composition for diagnosing periodontal inflammation disease is characterized in that the expression of mRNA or protein of S100A2 (GenBank: NM_005978) gene in immune cells is increased.
  • the immune cells may be one or more cells selected from the group consisting of Jurkat cells and THP1.
  • the periodontitis may be Streptococcus mutans or Streptococcus mitis .
  • biomarker composition of the present invention has the effect of early diagnosis of periodontal inflammation disease.
  • FIGS. 1A to 1D are graphs illustrating S100A2, S100A8 and S100A9 mRNA expression in gum tissues of patients with normal, gingivitis, moderate periodontitis and severe periodontitis, and FIG. 1A is a graph showing threshold cycle values of GAPDH, and FIG. A graph showing the mRNA expression of S100A2 in the tissue, Figure 1c is a graph showing the mRNA expression of S100A8 of the gum tissue, Figure 1d is a graph showing the mRNA expression of S100A9 of the gum tissue.
  • Figure 2 is a graph illustrating the protein expression of S100A2 in gingival fibroblasts (GCF) in normal, gingivitis, moderate periodontitis and severe periodontitis patients.
  • Figure 3a or 3b is a graph for explaining the mRNA expression level change of S100A2 by LPS stimulation in immune cells
  • Figure 3a is a graph showing the mRNA expression in LPS-stimulated Jurkat cells
  • Figure 3b THP1 cells.
  • Figure 4a or 4b is a graph for explaining the change in secretion level of S100A2 protein by LPS stimulation in immune cells
  • Figure 4a is a graph showing the level of protein in LPS-stimulated Jurkat cells
  • Figure 4b HL-60 cells to be.
  • FIG. 5a or 5b is a graph illustrating the increase in mRNA expression level of S100A2 in bacteria-stimulated cells
  • FIG. 5a is HL-60 cells stimulated by Streptococcus mutans
  • FIG. 5b Shows the mRNA expression level of S100A2 in Jurkat cells stimulated by Streptococcus mitis .
  • biomarker refers to a gene or protein whose expression changes specifically in a particular disease.
  • Periodontal inflammatory disease includes periodontal-associated inflammatory diseases such as periodontitis, gingivitis, and the like.
  • Biomarker composition for diagnosing periodontal disease is characterized in that it comprises at least one protein selected from the group consisting of protein S100-A2 (S100A2), protein S100-A8 (S100A8), and protein S100-A9 (S100A9). It is done.
  • the biomarker composition for diagnosing periodontal inflammation according to the present invention is at least one protein selected from the group consisting of protein S100-A2 (S100A2), protein S100-A8 (S100A8), and protein S100-A9 (S100A9) is a periodontal inflammation disease It is characterized by an increase in time.
  • the biomarker composition for diagnosing periodontal inflammation is S100A2 (GenBank: NM_005978), S100A8 (NCBL GeneID: NM_002964), and S100A9 (NCBL GeneID: NM_002965) of one or more genes of mRNA or protein selected from the group consisting of It may include an agent for measuring the expression level.
  • the agent for measuring the expression level of the mRNA may be a primer pair or probe specific to the mRNA.
  • the detection of a specific nucleic acid using a primer may be performed by amplifying the sequence of the gene of interest using an amplification method such as PCR, and then checking whether the gene is amplified by a method known in the art.
  • the detection of a particular nucleic acid using a probe may be performed by contacting a sample nucleic acid with a probe under suitable conditions and confirming the presence of the hybridizing nucleic acid.
  • an antibody or peptide that specifically binds to the marker protein of the present invention may be used. Therefore, the present invention provides a composition for diagnosing periodontitis comprising an antibody or peptide specifically binding to the marker protein of the present invention.
  • composition for diagnosing periodontal disease of the present invention may be provided in the form of a diagnostic kit or microarray.
  • the diagnostic kit may be provided, for example, in the form of a lateral flow assay kit based on immunochromatography to detect a specific protein in a sample.
  • Lateral flow assay kits include a sample pad to which a sample is applied, a release pad coated with a detection antibody, a developing membrane (e.g., nitro), in which the sample is moved and separated and an antigen-antibody reaction occurs. Cellulose) or strip, and an absorption pad.
  • the microarray generally attaches an antibody onto a slide glass surface treated with a specific reagent so as to detect a protein that specifically attaches to the antibody by an antigen-antibody reaction.
  • the present invention is specific to at least one gene selected from the group consisting of S100A2 (GenBank: NM_005978), S100A8 (NCBL GeneID: NM_002964), and S100A9 (NCBL GeneID: NM_002965) in order to provide information necessary for the diagnosis of periodontal inflammation disease.
  • S100A2 GenBank: NM_005978
  • S100A8 NCBL GeneID: NM_002964
  • S100A9 NCBL GeneID: NM_002965
  • the detection methods it is possible to compare the mRNA expression level in the normal control group and the mRNA expression level in patients with suspected periodontal disease, and determine whether the expression level of the periodontal disease disease biomarker gene is increased by the periodontal inflammation disease It is easy to diagnose whether a suspected patient actually develops periodontal disease.
  • the present invention provides at least one protein selected from the group consisting of proteins S100-A2 (S100A2), protein S100-A8 (S100A8), and protein S100-A9 (S100A9) in order to provide information necessary for the diagnosis of periodontal inflammation disease.
  • S100A2 proteins S100-A2
  • S100A8 protein S100-A8
  • S100A9 protein S100-A9
  • antigen-antibody complex refers to a combination of periodontal disease disease biomarker protein and an antibody specific thereto, and the amount of antigen-antibody complex formed quantitatively through the magnitude of a signal of a detection label. It can be measured by
  • the gingival fluid is obtained from the gum tissue of patients with normal, gingivitis, moderate periodontitis and severe periodontitis, and the expression values of S100A2, S100A8, and S100A9 through RNA and protein isolated therefrom. was analyzed.
  • S100A2 was expressed in gum tissue, gingival fibroblast (GCF), and immune cells, and was expressed differently according to the grouped periodontitis group, and S100A2 is an immune and inflammatory response associated with periodontal disease. It plays an important role in.
  • GCF gingival fibroblast
  • S100A2 protein secretion was detected in gingival sulcus and immune cells (Jurkat cells) by ELISA, and expression of S100A2 mRNA was also confirmed in 14 normal samples and 88 classified periodontal disease patients.
  • the expression of the S100A2 mRNA was significantly higher in the periodontitis disease group than in the normal group, and in particular, the expression of S100A2 was upregulated by oral habitat microorganisms and LPS.
  • S100A2 was bioavailable in the periodontal disease such as S100A8 and S100A9. I concluded it was a marker.
  • GCF gingival fissure fluid
  • Gum tissue samples were obtained from periodontitis patients and healthy individuals (normal, control). Depending on the gingivitis index, which takes into account the immune response, probing depth, clinically attached loss and bone loss on the radiograph, the gum tissue is normal, gingivitis, and moderate periodontitis. And periodontitis (severe periodontitis).
  • Jurkat cells human T cell lymphoblast-like cell lines
  • THP1 human acute monocytic leukemia cell lines
  • HL-60 cells human promyelocytic leukemia cells
  • RNA extraction and expression level measurement (real-time PCR)
  • S100A2, S100A8, S100A9 MRNA expression levels of the three S100 genes (S100A2, S100A8, S100A9) and GAPDH were determined by real-time PCR using the following primers; S100A2 Sense 5′-GGCTGTGCTGGTCACTACCT-3 ′, S100A2 Antisense 5′-CCT GCTGGTCACTGTTCTCA-3 ′, S100A8 Sense 5′-ATGCCGTCT ACAGGGATGAC-3 ′, S100A8 Antisense 5′-ACGCCCATCTT TATCACCAG-3 ′, S100ACCAACTA TA -3 ′, S100A9 antisense 5′-TCAGCTGCTTGTCTGCATTT3 ′, GAPDH sense 5′-GAGTCAACGGATTTGGTCGT-3 ′, and GAPDH antisense 5′-GACAA GCTTCCCGTTCTCAG-3 ′
  • Total protein was obtained from gingival sulcus fluid (GCF), medium in which Jurkat cells were cultured, and medium in which HL-60 cells were cultured. After diluting the gingival solution with 20 ⁇ l of 0.9% NaCl, the supernatant was separated by centrifugation to remove contaminants such as tissue debris, and the supernatant was centrifuged at 100 ⁇ g for 3 minutes to obtain a culture medium. Collected. The medium was concentrated by TCA / acetone precipitation, and protein concentrates of gingival filtrate and controlled medium were measured by the Bradford assay.
  • S100A2 protein levels were measured by ELISA (Cusabio). Each sample was added to the wells and incubated at 37 ° C. for 2 hours. Liquid was removed from each well, 100 ⁇ l detection reagent A was added, and each sample was incubated at 37 ° C. for 1 hour. The mixture was removed and the wells washed with wash buffer (400 ⁇ l) using a multi-channel pipette, then detection reagent B was added to each well and the samples were incubated at 37 ° C. for 1 hour. After washing the wells, the substrate solution was added and the samples were incubated at 37 ° C. for 30 minutes. Add 50 ⁇ l of stop solution to each well to stop the reaction. Optical density (OD) at 450 nm in each well was measured using a microplate reader.
  • OD optical density
  • gums from 14 healthy individuals (normal / control), 13 gingivitis, 48 moderate periodontitis, 27 severe periodontitis Gingival tissues samples were collected.
  • FIG. 1a shows the threshold cycle value of GAPDH, it was confirmed that the mRNA expression of S100A2, S100A2, S100A8 and S100A9 in the gingivitis, moderate periodontitis and severe periodontitis group compared to normal (Fig. 1b, 1c, 1d).
  • the expression level of mRNA was not significantly different in the gum tissue samples of the gingivitis group and the severity and severe periodontitis patients.
  • Figures 1b, 1c, 1d graph shows the relative expression amount for GAPDH in each group.
  • GCF gingival crevicular fluid
  • GCF gingival crevicular fluid
  • the Jurkat cells and the THP1 cells in FIG. 3B were found to increase mRNA expression of S100A2 according to LPS stimulation, compared to cells not treated with LPS.
  • HL-60 cells and Jurkat cells were tested for Streptococcus mutans at 1, 2, 4 ⁇ 10 7 CFU to determine the level of S100A2 mRNA expression in immune cells.
  • RNA was isolated and real-time PCR was performed (FIGS. 5A and 5B). The expression level of S100A2 mRNA was evaluated by the Ct value of S100A2 compared to the Ct value of GAPDH.
  • FIG. 5A is a graph of changes in mRNA expression levels of S100A2 in HL-60 cells stimulated by Streptococcus mutans. In HL-60 cells in Figure 5a it was confirmed that the mRNA expression of S100A2 significantly increased by stimulation of Streptococcus mutans at all concentrations tested.
  • Figure 5b is a graph of the mRNA expression level change of S100A2 in Jurkat cells stimulated by Streptococcus mitis ( Streptococcus mitis ).
  • Jurkat cells were found to significantly increase the mRNA expression level of S100A2 by stimulation of S. mitis at concentration 2 or 4 ⁇ 10 7 CFU, respectively.

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

본 발명은 치은열구액으로부터 분리한 치주염증 질환 진단용 바이오 마커에 관한 것이다. 본 발명에 의해 치주염증 질환 환자의 치은열구액에서 발현되는 마커 유전자의 발현을 mRNA 또는 단백질 수준에서 측정하는 제제를 포함하는 치주염증 질환 진단용 조성물에 관한 것이다.

Description

치주염증 질환 진단용 바이오마커 조성물
본 발명은 바이오마커에 관한 것이다. 더욱 구체적으로 치주염증 질환의 진단용 바이오마커 조성물, 진단용 키트, 진단 방법에 관한 것이다.
치주염증 질환은 치은염(gingivitis)과 치주염(periodontitis)으로 나뉘며, 치주인대와 인접조직을 손상시켜 발생하는 만성 염증 질환으로서 염증이 치료되지 못하고 지속되면 치주조직이 서서히 파괴되어서 이가 흔들리게 되고 심하면 빠지게 된다. 치주염은 다인성 질병으로 치아를 둘러싼 지지조직에 생긴 염증이며, 치태 내의 세균 및 독소에 의해 발생되는 질환으로 치아 표면의 박테리아에 의한 숙주의 방어 기전에 따른 결과로 알려져 있다. 또한 치주염은 심장 혈관 질환(Suzuki 외, 2010)과 당뇨병(Nagasawa 외, 2010)과 같은 전신 질환과 관련된다.
치주염은 유전적 요인과 환경적 요인에 의해 영향을 받는다. 유전적 요인은 인터류킨-1, 인터루킨-10과 Fc-감마 리셉터, 인간 백혈구 항원 특성 그리고 가족 내 군집성의 유전자 다형성을 포함한다. 환경적 요인은 흡연, 구강 위생, 스트레스와 전신 질환을 포함한다(Stabholz 외, 2010). 게다가 치주염은 Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola를 포함하여 대부분의 그람 양성균에서부터 그람 음성균에 이르기까지 구강 세균의 변화에 의해 특징 지워진다(Darveau, 2010).
미국에서 성인의 절반은 만성적 치주염증 질환으로 피해를 입고, 약 10%는 파괴적인 중증치주염증 질환이 생기는 위험에 처해 있다(Albandar, 2002). 특히 한국에서의 치주 질환은 50세 이상에서 50%로 보고되었다(국민 건강 상태 통계, 건강복지부, 2009). 한국의 치주 질환이 2007년부터 2009년까지 점차 감소했지만, 여전히 영국(Adult Dental Health, 2009)과 미국보다 높다(NHANES 2005-2008). 따라서 치주염증 질환을 진단하고 처리하고 모니터링 하는 것에 도움을 줄 수 있는 치주염증 질환 진단용 바이오마커가 요구된다.
이에, 본 발명은 이러한 종래의 문제점을 해결하기 위하여 이루어진 것으로, 그 목적은 치주염증 질환을 일으키는 병원균의 감염을 조기에 진단할 수 있는 효과적인 마커를 제공하는 것이다.
이를 위하여, 본 발명에 따른 치주염증 질환 진단용 바이오마커 조성물은 단백질 S100-A2(S100A2), 단백질 S100-A8(S100A8), 및 단백질 S100-A9(S100A9)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 단백질을 포함하는 것을 특징으로 한다.
또한 본 발명에 따른 치주염증 질환 진단용 바이오마커 조성물은 단백질 S100-A2(S100A2), 단백질 S100-A8(S100A8), 및 단백질 S100-A9(S100A9)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 단백질이 치주염증 질환 시 증가하는 것을 특징으로 한다.
또한 본 발명에 따른 치주염증 질환 진단용 바이오 마커 조성물은 S100A2(GenBank: NM_005978), S100A8(NCBL GeneID: NM_002964), 및 S100A9(NCBL GeneID: NM_002965)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자의 mRNA 또는 단백질의 발현수준을 측정하는 제제를 포함할 수 있다.
여기서, 상기 mRNA의 발현수준을 측정하는 제제는 상기 mRNA에 특이적인 프라이머 쌍 또는 프로브일 수 있으며, 상기 단백질의 발현수준을 측정하는 제제는 상기 단백질에 특이적인 항체 또는 펩타이드일 수 있다.
한편, 본 발명은 상기 치주염증 질환 진단용 바이오 마커 조성물을 유효성분으로 포함하는 치주염증 질환 진단용 키트를 제공할 수 있다.
여기서, 상기 키트는 마이크로어레이로 구성된 치주염증 질환 진단용 키트일 수 있다.
또한, 본 발명은 치주염증 질환 진단에 필요한 정보를 제공하기 위하여 S100A2(GenBank: NM_005978), S100A8(NCBL GeneID: NM_002964), 및 S100A9(NCBL GeneID: NM_002965)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자에 특이적인 프라이머를 사용하여 치주염증 질환 의심 환자의 생물학적 시료로부터 mRNA의 발현 수준을 측정하는 단계; 및 상기 측정된 mRNA의 발현 수준을 정상 대조군 시료의 mRNA 발현 수준과 비교하는 단계를 포함하는 치주염증 질환 진단 방법을 제공할 수 있다.
또한, 본 발명은 치주염증 질환 진단에 필요한 정보를 제공하기 위하여 단백질 S100-A2(S100A2), 단백질 S100-A8(S100A8), 및 단백질 S100-A9(S100A9)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 단백질에 특이적인 항체를 치주염증 질환 의심 환자의 생물학적 시료와 접촉시켜 항원-항체 복합체 형성에 의해 단백질의 발현 수준을 측정하는 단계; 및 상기 측정된 단백질의 발현 수준을 정상 대조군 시료의 단백질 발현 수준과 비교하는 단계를 포함하는 치주염증 질환 진단 방법을 제공할 수 있다.
한편, 본 발명에 따른 치주염증 질환 진단용 바이오마커 조성물은 면역세포에서 S100A2(GenBank: NM_005978) 유전자의 mRNA 또는 단백질의 발현이 증가하는 것을 특징으로 한다.
여기서, 상기 면역세포는 Jurkat 세포 및 THP1로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 세포일 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 치주염증 질환 진단용 바이오마커 조성물은 면역세포에서 추출된 S100A2(GenBank: NM_005978) 유전자의 mRNA 또는 단백질이 LPS 또는 치주염균에 의해 자극되어 발현이 증가하는 것을 특징으로 한다.
여기서, 상기 치주염균은 스트렙토코커스 뮤탄스(Streptococcus mutans) 또는 스트렙토코커스 미티스(Streptococcus mitis)일 수 있다.
본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 첨부되는 도면과 함께 상세하게 후술되어 있는 상세한 설명 및 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나 본 발명은 이하에서 개시되는 예들에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 것이다.
이와 같이, 본 발명의 바이오마커 조성물에 의해서 치주염증 질환을 초기에 진단할 수 있는 효과가 있다.
도 1a 내지 도 1d는 정상, 치은염, 중등도 치주염과 중증 치주염 환자의 잇몸 조직의 S100A2, S100A8, S100A9 mRNA 발현을 설명하기 위한 것으로, 도 1a는 GAPDH의 역치 사이클 값을 나타내는 그래프이며, 도 1b는 잇몸 조직의 S100A2의 mRNA 발현을 나타내는 그래프, 도 1c는 잇몸 조직의 S100A8의 mRNA 발현을 나타내는 그래프, 도 1d는 잇몸 조직의 S100A9의 mRNA 발현을 나타내는 그래프이다.
도 2는 정상, 치은염, 중등도 치주염과 중증 치주염 환자의 치은열구액(GCF)에서 S100A2의 단백질 발현을 설명하기 위한 그래프이다.
도 3a 또는 3b는 면역 세포에서 LPS 자극에 의한 S100A2의 mRNA 발현 레벨 변화를 설명하기 위한 그래프로, 도 3a는 LPS로 자극한 Jurkat 세포, 도 3b는 THP1 세포에서의 mRNA 발현을 나타내는 그래프이다.
도 4a 또는 4b는 면역 세포에서 LPS 자극에 의한 S100A2 단백질의 분비 레벨 변화를 설명하기 위한 그래프로, 도 4a는 LPS로 자극한 Jurkat 세포, 도 4b는 HL-60 세포에서의 단백질의 레벨을 나타내는 그래프이다.
도 5a 또는 도 5b는 세균에 의해 자극된 세포에서의 S100A2의 mRNA 발현 레벨의 증가를 설명하기 위한 그래프로, 도 5a는 스트렙토코커스 뮤탄스(Streptococcus mutans)에 의해 자극된 HL-60 세포, 도 5b는 스트렙토코커스 미티스(Streptococcus mitis)에 의해 자극된 Jurkat 세포에서의 S100A2의 mRNA 발현 레벨을 나타낸다.
이하, 본 발명의 실시형태에 대해서 도면을 참조하여 상세하게 설명한다.
본원에서 정의되는 “바이오마커”는 특정 질병에서 특이적으로 발현이 변화하는 유전자 또는 단백질을 의미한다.
본원에서 정의되는 “치주염증 질환”은 치주염, 치은염 등의 치주 관련 염증 질환을 포함한다.
본 발명에 따른 치주염증 질환 진단용 바이오마커 조성물은 단백질 S100-A2(S100A2), 단백질 S100-A8(S100A8), 및 단백질 S100-A9(S100A9)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 단백질을 포함하는 것을 특징으로 한다.
또한 본 발명에 따른 치주염증 질환 진단용 바이오마커 조성물은 단백질 S100-A2(S100A2), 단백질 S100-A8(S100A8), 및 단백질 S100-A9(S100A9)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 단백질이 치주염증 질환 시 증가하는 것을 특징으로 한다.
또한 본 발명에 따른 치주염증 질환 진단용 바이오 마커 조성물은 S100A2(GenBank: NM_005978), S100A8(NCBL GeneID: NM_002964), 및 S100A9(NCBL GeneID: NM_002965)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자의 mRNA 또는 단백질의 발현수준을 측정하는 제제를 포함할 수 있다.
여기서, 상기 mRNA의 발현수준을 측정하는 제제는 상기 mRNA에 특이적인 프라이머 쌍 또는 프로브일 수 있다. 프라이머를 이용한 특정 핵산의 검출은 PCR과 같은 증폭 방법을 사용하여 목적 유전자의 서열을 증폭한 다음 당 분야에 공지된 방법으로 유전자의 증폭여부를 확인함으로써 수행될 수 있다. 또한, 프로브를 이용한 특정 핵산의 검출은 적합한 조건하에서 시료 핵산을 프로브와 접촉시킨 후 하이브리드화되는 핵산의 존재여부를 확인함으로써 수행될 수 있다.
본 발명의 마커 단백질의 존재여부를 확인할 수 있는 방법으로는 본 발명의 마커 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 또는 펩타이드를 이용할 수 있다. 그러므로 본 발명은 본 발명의 마커 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 또는 펩타이드를 포함하는 치주염 진단용 조성물을 제공한다.
바람직하게는, 본 발명의 치주염증 질환 진단용 조성물은 진단용 키트 또는 마이크로어레이 형태로 제공될 수 있다.
상기 진단용 키트로는 예를 들면, 시료 중의 특정 단백질을 검출하기 위해 면역크로마토그래피법을 기초로 하는 측방 유동 검정 키트(lateral flow assay kit)의 형태로 제공될 수 있다. 측방 유동 검정 키트는 시료가 적용되는 샘플패드 (sample pad), 탐지용 항체가 코팅되어 있는 방출패드(releasing pad), 시료가 이동하여 분리되고 항원-항체 반응이 일어나는 전개용 막(예를 들어 니트로셀룰로스) 또는 스트립, 그리고 흡수패드(absorption pad)로 이루어져 있다.
상기 마이크로어레이는 일반적으로 특정 시약으로 처리된 슬라이드 글라스 표면 위에 항체를 부착하여 항원-항체 반응에 의해 상기 항체에 특이적으로 부착하는 단백질을 검출할 수 있도록 하는 것이다.
또한, 본 발명은 치주염증 질환 진단에 필요한 정보를 제공하기 위하여 S100A2(GenBank: NM_005978), S100A8(NCBL GeneID: NM_002964), 및 S100A9(NCBL GeneID: NM_002965)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자에 특이적인 프라이머를 사용하여 치주염증 질환 의심 환자의 생물학적 시료로부터 mRNA의 발현 수준을 측정하는 단계; 및 상기 측정된 mRNA의 발현 수준을 정상 대조군 시료의 mRNA 발현 수준과 비교하는 단계를 포함하는 치주염증 질환 진단 방법을 제공할 수 있다.
생물학적 시료에서 mRNA를 분리하는 과정은 공지의 공정을 이용하여 수행할 수 있으며 mRNA 수준은 다양한 방법으로 측정할 수 있다. mRNA 수준을 측정하기 위한 분석 방법으로는 역전사효소 중합효소반응, 경쟁적 역전사효소 중합효소반응, 실시간 역전사효소 중합효소반응, RNase 보호 분석법, 노던 블랏팅, DNA 칩 등이 있으나 이로 제한되는 것은 아니다.
상기 검출 방법들을 통하여, 정상 대조군에서의 mRNA 발현량과 치주염증 질환 의심 환자에서의 mRNA 발현량을 비교할 수 있고, 치주염증 질환 바이오 마커 유전자에서 mRNA로의 유의한 발현량의 증가여부를 판단하여 치주염증 질환 의심 환자의 실제 치주염증 질환 발병 여부를 간편하게 진단할 수 있다.
또한, 본 발명은 치주염증 질환 진단에 필요한 정보를 제공하기 위하여 단백질 S100-A2(S100A2), 단백질 S100-A8(S100A8), 및 단백질 S100-A9(S100A9)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 단백질에 특이적인 항체를 치주염증 질환 의심 환자의 생물학적 시료와 접촉시켜 항원-항체 복합체 형성에 의해 단백질의 발현 수준을 측정하는 단계; 및 상기 측정된 단백질의 발현 수준을 정상 대조군 시료의 단백질 발현 수준과 비교하는 단계를 포함하는 치주염증 질환 진단 방법을 제공할 수 있다.
생물학적 시료에서 단백질을 분리하는 과정은 공지의 공정을 이용하여 수행할 수 있으며 단백질 수준은 다양한 방법으로 측정할 수 있다. 정상 대조군에서의 항원-항체 복합체의 형성량과 치주염증 질환 의심환자에서의 항원-항체 복합체의 형성량을 비교할 수 있고, 치주염증 질환 마커 유전자 S100A2(GenBank: NM_005978), S100A8(NCBL GeneID: NM_002964), 또는 S100A9(NCBL GeneID: NM_002965)에서 단백질로의 유의한 발현량의 증가여부를 판단하여, 치주염증 질환 진단에 필요한 정보를 제공할 수 있다.
본 발명에서 용어 “항원-항체 복합체”란 치주염증 질환 바이오마커 단백질과 이에 특이적인 항체의 결합물을 의미하고, 항원-항체 복합체의 형성량은 검출 라벨(detection label)의 시그널의 크기를 통해서 정량적으로 측정 가능하다.
본 발명의 일 실시예에서는 정상, 치은염, 중등도 치주염과 중증 치주염 환자의 잇몸조직에서 치은열구액(GCF)을 획득하고, 이로부터 추출된 RNA 및 분리된 단백질을 통하여 S100A2, S100A8, S100A9의 발현수치를 분석하였다.
이하 설명할 본 발명의 실시예에 따르면 S100A2는 잇몸 조직, 치은열구액(GCF), 및 면역세포에서 발현되었으며, 분류된 치주염 그룹에 따라 다르게 발현되었는바, S100A2가 치주염질환과 관련된 면역 및 염증반응에서 중요한 역할을 함을 확인하였다.
특히, S100A2 단백질 분비는 ELISA에 의해 치은열구액과 면역세포(Jurkat 세포)에서 탐지되었고, S100A2 mRNA의 발현도 역시 14개의 정상 샘플과 88개의 분류된 치주염질환 환자 샘플에서 확인되었다. 상기 S100A2 mRNA의 발현은 정상 그룹에 비해 치주염 질환 그룹에서 유의하게 발현이 높았으며 특히 구강 서식 미생물과 LPS에 의해 S100A2의 발현이 상향 조절되는 것을 확인하였으므로, S100A2를 S100A8, S100A9와 같이 치주염질환의 바이오마커라고 결론지었다.
이하, 본 발명을 실험예 및 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 단, 하기 실험예 및 실시예들은 본 발명을 더욱 쉽게 이해할 수 있도록 예시하는 것으로 본 발명의 내용이 실험예 및 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
<실험예 1>
1. 잇몸조직 분류 및 치은열구액(GCF) 획득
잇몸조직 샘플은 치주염 환자와 건강한 개인(정상, 대조군)으로부터 획득되었다. 면역 반응, 탐색할 깊이(probing depth), 방사선 사진에서 임상적으로 부착된 손실과 뼈 손실 등을 고려한 치은염 지수에 따라, 잇몸 조직을 정상(normal), 치은염(gingivitis), 중등도 치주염(moderate periodontitis)과 중증 치주염(severe periodontitis)으로 분류하였다.
2. 실험대상 세포배양
Jurkat 세포(인간 T 세포 림프아세포(lymphoblast)-유사 셀라인), THP1(인간 급성 단구성 백혈병 셀라인)과 HL-60 세포(인간 전골수구성 백혈병 세포)는 37°C에서 5% CO2 존재 하 10% FBS가 보강된 RPMI 배지에서 배양되었다.
LPS로 자극하기 위하여, 세포는 1시간 동안 FBS없는 RPMI 배지에서 배양되었다.
스트렙토코커스 뮤탄스(S. mutans)와 스트렙토코커스 미티스(S. mitis)로 자극하기 위하여, 상기 세포들 5×105개는 3시간동안 1% FBS와 스트렙토코커스 뮤탄스(S. mutans) 또는 스트렙토코커스 미티스(S. mitis)를 포함한 RPMI 배지에서 배양되었다.
3. RNA 추출 및 발현레벨 측정(리얼타임 PCR)
잇몸조직 또는 Jurkat 세포에서 전체의 세포성 RNA를 트라이졸 시약(TRIzol Reagent, Invitrogen 사)을 이용하여 분리하였다. 전체 RNA 2 μg을 이용하여 싱글-나선 cDNA를 합성하는데 올리고(dT) 18의 프라이머와 Omniscript 역전사 효소(독일 Qiagen사) 를 사용하였다. 유전자 특이적 프라이머는 웹(web) 기반 프라이머 디자인 도구인 프라이머 3을 이용하여 설계되었다. 세 S100 유전자(S100A2, S100A8, S100A9)와 GAPDH의 mRNA 발현 레벨은 하기의 프라이머를 이용하는 리얼타임 PCR에 의해 결정되었다; S100A2 센스 5′-GGCTGTGCTGGTCACTACCT-3′, S100A2 안티센스 5′-CCT GCTGGTCACTGTTCTCA-3′, S100A8 센스 5′-ATGCCGTCT ACAGGGATGAC-3′, S100A8 안티센스 5′-ACGCCCATCTT TATCACCAG-3′, S100A9 센스 5′-CAGCTGGAACGCAACA TAGA-3′, S100A9 안티센스 5′-TCAGCTGCTTGTCTGCATTT3′, GAPDH 센스 5′-GAGTCAACGGATTTGGTCGT-3′, 및 GAPDH 안티센스 5′-GACAA GCTTCCCGTTCTCAG-3′
4. 단백질 분리
치은열구액(GCF), Jurkat 세포가 배양된 배지, HL-60 세포가 배양된 배지에서 총 단백질을 획득하였다. 치은열구액 샘플은 0.9% NaCl 20μl로 희석 후, 조직 파편과 같은 오염물질 제거를 위해 원심분리하여 상청액을 분리한 후, 그 상청액을 3분 동안 100 × g으로 원심분리하여 세포가 배양된 배지를 수집하였다. 상기 배지는 TCA/아세톤 침전에 의해 농축되었고, 치은열구액과 조절된 배지의 단백질 농축액을 브래포드 방법(Bradford assay)으로 측정하였다.
5. 단백질레벨 측정(ELISA)
S100A2 단백질 레벨은 ELISA(Cusabio)에 의해 측량되었다. 각 샘플을 웰에 추가하여 37℃에서 2시간 동안 배양하였다. 각 웰에서 액체를 제거하고, 100 ㎕ 검출 시약 A를 추가한 후, 각 샘플을 37℃에서 1시간동안 배양하였다. 혼합물을 제거하고, 웰을 다중-채널 파이펫을 이용하여 워시 버퍼(400 ㎕)로 세척한 후, 검출 시약 B를 각 웰에 추가하고 샘플을 37℃에서 1시간 동안 배양하였다. 웰을 세척한 후, 기질 용액을 추가하고, 샘플을 37℃에서 30분 동안 배양하였다. 각 웰에 정지 용액을 50 ㎕ 첨가하면 반응이 멈춘다. 각 웰에서 450 ㎚에서의 광학밀도(OD)를 미소 평판 해독기(microplate reader)를 이용하여 측정하였다.
6. 통계분석
± S.E의 평균값으로 데이터를 도출하였다. 통계적 유의값은 쌍이 아닌 샘플에서 일원배치분산분석(oneway anova)에 이어 스튜던트 T-테스트를 이용하여 수행되었다. 0.05 이하의 확률(p값)은 중요한 것으로 간주한다.
<실시예 1> S100A2, S100A8과 S100A9의 mRNA 발현 측정
Figure PCTKR2012003239-appb-I000001
3개 S100 유전자의 mRNA 발현 정도를 확인하기 위하여, 건강한 개인(정상/대조군) 14명, 치은염(Gingivitis) 13명, 중등도 치주염(moderate periodontitis) 48명, 중증 치주염 환자(severe periodontitis) 27명으로부터 잇몸 조직(Gingival tissues) 샘플을 수집하였다.
이들 잇몸 조직 샘플을 이용하여 S100A2, S100A8, S100A9 mRNA 발현 정도를 확인하기 위해 리얼 타임 PCR을 수행하였다(도 1a ~ 도 1d). 도 1a는 GAPDH의 역치 사이클 값을 나타낸 것이며, 정상에 비해 치은염, 중등도 치주염과 중증 치주염 그룹에서 S100A2, S100A2, S100A8과 S100A9의 mRNA 발현이 증가하였음을 확인하였다(도 1b, 1c, 1d). S100A2의 경우, 치은염그룹과 중증도, 중증 치주염 환자의 잇몸 조직 샘플에서 mRNA의 발현 정도는 크게 다르지 않았다. 참고로 도 1b, 1c, 1d 그래프는 각 그룹에서 GAPDH에 대한 상대적인 발현 양을 나타낸 것이다.
<실시예 2> S100A2 단백질의 발현 측정
Figure PCTKR2012003239-appb-I000002
치은염, 중등도 치주염, 중증 치주염 환자에서 S100A2 단백질의 발현 레벨 정도를 확인하기 위하여 정상(대조군) 19, 치은염 39, 중등도 치주염 48, 중증 치주염 환자 33명으로부터 치은열구액(gingival crevicular fluid, GCF) 샘플을 수집한 후 이를 이용하여 ELISA를 수행하였다(도 2).
치은열구액(gingival crevicular fluid, GCF) 샘플에서 S100A2 단백질 레벨은 치은염과 중등도 치주염 샘플에서 정상 샘플에 비해 더 높은 것을 확인하였다. 따라서, S100A2단백질은 S100A8와 마찬가지로 치은염 또는 치주염의 바이오마커로 기능할 수 있음을 확인할 수 있었다. 한편 실험 결과, S100A2 단백질 발현 정도는 성 또는 연령과 관련이 없었다.
<실시예 3> LPS 자극에 의한 S100A2 mRNA 발현 및 단백질 분비 비교
면역 세포에서 S100A2의 mRNA의 발현 정도를 확인하기 위하여, Jurkat 세포와 THP1 세포를 LPS를 처리하여 배양한 후 RNA를 분리하고 리얼타임 PCR을 수행하였다(도 3a, 도 3b, 도 4a, 도 4b).
도 3a에서 Jurkat 세포와 도 3b에서 THP1 세포는 LPS를 처리하지 않은 세포와 비교할 때, LPS 자극에 따라 S100A2의 mRNA 발현이 증가함을 확인하였다.
면역 세포에서 S100A2의 단백질의 분비량을 확인하기 위하여, Jurkat 세포, HL-60 세포에 LPS를 처리하였다. 도 4a에서 Jurkat 세포와 도 4b에서 HL-60 세포는 LPS를 처리하지 않은 세포와 비교할 때, LPS 자극에 따라 S100A2의 단백질 분비량이 증가함을 확인하였다. 도 4a, 4b에서 흰색 막대는 LPS를 처리한 후 3시간 후에, 검은색 막대는 24시간 후에 S100A2의 단백질의 분비량을 측정한 것이다.
<실시예 4> 치주염 질환 유발균에 의한 S100A2 mRNA 발현 측정
치은염 또는 치주염을 유발하는 구강 내 미생물에 의해, 면역세포에서 S100A2 mRNA 발현정도를 측정하기 위하여 HL-60 세포와 Jurkat 세포를 1, 2, 4×107 CFU의 스트렙토코커스 뮤탄스(Streptococcus mutans) 또는 스트렙토코커스 미티스(Streptococcus mitis)로 자극하여 배양한 후 RNA를 분리하고 리얼타임 PCR을 수행하였다(도 5a, 5b). S100A2 mRNA의 발현 수치는 GAPDH의 Ct값 대비 S100A2의 Ct 값에 의해 평가되었다.
도 5a는 스트렙토코커스 뮤탄스(Streptococcus mutans)에 의해 자극된 HL-60 세포에서의 S100A2의 mRNA 발현 수치 변화 그래프이다. 도 5a에서 HL-60 세포는 실험한 모든 농도에서 스트렙토코커스 뮤탄스의 자극에 의해 S100A2의 mRNA 발현이 유의하게 증가함을 확인하였다.
한편, 도 5b는 스트렙토코커스 미티스(Streptococcus mitis)에 의해 자극된 Jurkat 세포에서의 S100A2의 mRNA 발현 수치 변화 그래프이다. Jurkat 세포는 각각 농도 2 또는 4×107 CFU의 S. mitis의 자극에 의해 S100A2의 mRNA 발현 수치가 유의하게 증가함을 확인하였다.
이상 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 실험예 및 실시예들을 설명하였지만, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 그 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.

Claims (13)

  1. 단백질 S100-A2(S100A2), 단백질 S100-A8(S100A8), 및 단백질 S100-A9(S100A9)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 단백질을 포함하는 것을 특징으로 하는 치주염증 질환 진단용 바이오 마커 조성물.
  2. 단백질 S100-A2(S100A2), 단백질 S100-A8(S100A8), 및 단백질 S100-A9(S100A9)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 단백질이 치주염증 질환 시 증가하는 것을 특징으로 하는 치주염증 질환 진단용 바이오 마커 조성물.
  3. 청구항 1에 있어서, 상기 조성물은 S100A2(GenBank: NM_005978), S100A8(NCBL GeneID: NM_002964), 및 S100A9(NCBL GeneID: NM_002965)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자의 mRNA 또는 단백질의 발현수준을 측정하는 제제를 포함하는 치주염증 질환 진단용 바이오 마커 조성물.
  4. 청구항 3에 있어서, 상기 mRNA의 발현수준을 측정하는 제제는 상기 mRNA에 특이적인 프라이머 쌍 또는 프로브인 것을 특징으로 하는 치주염증 질환 진단용 바이오 마커 조성물.
  5. 청구항 3에 있어서, 상기 단백질의 발현수준을 측정하는 제제는 상기 단백질에 특이적인 항체 또는 펩타이드인 것을 특징으로 하는 치주염증 질환 진단용 바이오 마커 조성물.
  6. 청구항 1 내지 5 중 어느 한 항의 조성물을 유효성분으로 포함하는 치주염증 질환 진단용 키트.
  7. 청구항 6에 있어서, 상기 키트는 마이크로어레이로 구성된 치주염증 질환 진단용 키트.
  8. 치주염증 질환 진단에 필요한 정보를 제공하기 위하여 S100A2(GenBank: NM_005978), S100A8(NCBL GeneID: NM_002964), 및 S100A9(NCBL GeneID: NM_002965)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자에 특이적인 프라이머를 사용하여 치주염증 질환 의심 환자의 생물학적 시료로부터 mRNA의 발현 수준을 측정하는 단계; 및 상기 측정된 mRNA의 발현 수준을 정상 대조군 시료의 mRNA 발현 수준과 비교하는 단계를 포함하는 치주염증 질환 진단 방법.
  9. 치주염증 질환 진단에 필요한 정보를 제공하기 위하여 단백질 S100-A2(S100A2), 단백질 S100-A8(S100A8), 및 단백질 S100-A9(S100A9)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 단백질에 특이적인 항체를 치주염증 질환 의심 환자의 생물학적 시료와 접촉시켜 항원-항체 복합체 형성에 의해 단백질의 발현 수준을 측정하는 단계; 및 상기 측정된 단백질의 발현 수준을 정상 대조군 시료의 단백질 발현 수준과 비교하는 단계를 포함하는 치주염증 질환 진단 방법.
  10. 면역세포에서 S100A2(GenBank: NM_005978) 유전자의 mRNA 또는 단백질의 발현이 증가하는 것을 특징으로 하는 치주염증 질환 진단용 바이오 마커 조성물.
  11. 청구항 10에 있어서, 상기 면역세포는 Jurkat 세포 및 THP1로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 세포인 것을 특징으로 하는 치주염증 질환 진단용 바이오 마커 조성물.
  12. 청구항 10에 있어서,
    상기 S100A2(GenBank: NM_005978) 유전자의 mRNA 또는 단백질은 LPS 또는 구강세균에 의해 자극되어 발현이 증가하는 것을 특징으로 하는 치주염증 질환 진단용 바이오 마커 조성물.
  13. 청구항 12에 있어서, 상기 구강세균은 스트렙토코커스 뮤탄스(Streptococcus mutans) 또는 스트렙토코커스 미티스(Streptococcus mitis)인 것을 특징으로 하는 치주염증 질환 진단용 바이오 마커 조성물.
PCT/KR2012/003239 2012-04-26 2012-04-26 치주염증 질환 진단용 바이오마커 조성물 WO2013162100A1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/KR2012/003239 WO2013162100A1 (ko) 2012-04-26 2012-04-26 치주염증 질환 진단용 바이오마커 조성물

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/KR2012/003239 WO2013162100A1 (ko) 2012-04-26 2012-04-26 치주염증 질환 진단용 바이오마커 조성물

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2013162100A1 true WO2013162100A1 (ko) 2013-10-31

Family

ID=49483376

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/KR2012/003239 WO2013162100A1 (ko) 2012-04-26 2012-04-26 치주염증 질환 진단용 바이오마커 조성물

Country Status (1)

Country Link
WO (1) WO2013162100A1 (ko)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2607041C2 (ru) * 2015-05-29 2017-01-10 Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственная фирма ДНК-Технология" Способ определения степени гноетечения на пародонте по уровню мРНК гена интерлейкина-8 (IL-8) человека
RU2619174C2 (ru) * 2015-05-29 2017-05-12 Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственная фирма ДНК-Технология" (ООО "НПФ ДНК-Технология") Способ оценки защитной эффективности работы неспецифического иммунитета на поверхности пародонта на основе полимеразной цепной реакции в реальном времени
WO2020040609A1 (ko) * 2018-08-23 2020-02-27 서울대학교 산학협력단 타액 중의 s100 단백질을 이용한 초기 치주염의 진단방법, 정보제공방법, 조성물 및 키트
CN111954818A (zh) * 2018-04-12 2020-11-17 皇家飞利浦有限公司 轻度或重度牙周炎的诊断
US11124833B2 (en) 2017-10-27 2021-09-21 Colgate-Palmolive Company Salivary extracellular RNA biomarkers for gingivitis

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20110104805A (ko) * 2010-03-17 2011-09-23 경북대학교 산학협력단 바이오마커
KR20110135911A (ko) * 2011-12-05 2011-12-20 경북대학교 산학협력단 바이오마커

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20110104805A (ko) * 2010-03-17 2011-09-23 경북대학교 산학협력단 바이오마커
KR20110135911A (ko) * 2011-12-05 2011-12-20 경북대학교 산학협력단 바이오마커

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BUDUNELI, N ET AL., J CLIN PERIODONTOL., vol. 38, no. 11, March 2011 (2011-03-01), pages 85 - 105 *
HEO, SH ET AL., MOL CELLS., vol. 32, no. 5, November 2011 (2011-11-01), pages 445 - 450 *

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2607041C2 (ru) * 2015-05-29 2017-01-10 Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственная фирма ДНК-Технология" Способ определения степени гноетечения на пародонте по уровню мРНК гена интерлейкина-8 (IL-8) человека
RU2619174C2 (ru) * 2015-05-29 2017-05-12 Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственная фирма ДНК-Технология" (ООО "НПФ ДНК-Технология") Способ оценки защитной эффективности работы неспецифического иммунитета на поверхности пародонта на основе полимеразной цепной реакции в реальном времени
US11124833B2 (en) 2017-10-27 2021-09-21 Colgate-Palmolive Company Salivary extracellular RNA biomarkers for gingivitis
CN111954818A (zh) * 2018-04-12 2020-11-17 皇家飞利浦有限公司 轻度或重度牙周炎的诊断
WO2020040609A1 (ko) * 2018-08-23 2020-02-27 서울대학교 산학협력단 타액 중의 s100 단백질을 이용한 초기 치주염의 진단방법, 정보제공방법, 조성물 및 키트
KR20210029822A (ko) * 2018-08-23 2021-03-16 서울대학교산학협력단 타액 중의 s100 단백질을 이용한 초기 치주염의 진단방법, 정보제공방법, 조성물 및 키트
KR102500669B1 (ko) * 2018-08-23 2023-02-16 서울대학교산학협력단 타액 중의 s100 단백질을 이용한 초기 치주염의 진단방법, 정보제공방법, 조성물 및 키트

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2013162100A1 (ko) 치주염증 질환 진단용 바이오마커 조성물
Farina et al. Whole metagenomic shotgun sequencing of the subgingival microbiome of diabetics and non-diabetics with different periodontal conditions
WO2016186360A1 (ko) 초기 알츠하이머 병 또는 경도 인지 장애 진단 방법
Cortelli et al. Aggregatibacter actinomycetemcomitans serotypes infections and periodontal conditions: a two-way assessment
EP2994753B1 (en) Method and system for assessing health condition
Yaseen et al. Oral colonization by Entamoeba gingivalis and Trichomonas tenax: A PCR-based study in health, gingivitis, and periodontitis
Wang et al. Microbial community analysis of saliva and biopsies in patients with oral lichen planus
Lario et al. microRNA profiling in duodenal ulcer disease caused by Helicobacter pylori infection in a Western population
Özcan et al. Porphyromonas gingivalis and Epstein‐Barr virus are associated with increased levels of visfatin in gingival crevicular fluid
WO2019093717A2 (ko) Gcc2 유전자 또는 단백질을 과발현하는 엑소좀 기반 폐암 진단 또는 예후 예측용 마커 조성물
Yazid et al. Caries detection analysis in human saliva alpha amylase
WO2021256710A1 (ko) 구강 세균의 군집을 이용한 알츠하이머 진단용 바이오마커 및 이의 용도
Leonhardt et al. Detection of periodontal markers in chronic periodontitis
Ryu et al. detection of Helicobacter pylori in saliva of patient with oral lichen planus
Zhao et al. Prevotella genus and its related NOD-like receptor signaling pathway in young males with stage III periodontitis
WO2013054984A1 (en) Composition for diagnosis of lung cancer and diagnosis kit of lung cancer
WO2017026692A1 (ko) 비만 조기진단용 조성물 및 이의 용도
Miyamoto et al. Bacterial profiles of oral streptococcal and periodontal bacterial species in saliva specimens from Japanese subjects
WO2022220411A1 (ko) 치주질환 진단용 바이오마커 조성물, 치주질환 치료 효용성 평가용 바이오마커 조성물 및 이를 이용한 진단키트
WO2020040609A1 (ko) 타액 중의 s100 단백질을 이용한 초기 치주염의 진단방법, 정보제공방법, 조성물 및 키트
Zhu et al. Comparative evaluation of peptidome and microbiota in different types of saliva samples
RU2607046C2 (ru) Способ оценки обсемененности пародонта патогенными бактериями с применением полимеразной цепной реакции в реальном времени
Wrightson et al. S114 previously unrecognised oral anaerobes in pleural infection
WO2024049247A1 (ko) 신규 파킨슨병 바이오마커 및 이의 용도
KR101980846B1 (ko) 구강 질환 관련 세균의 실시간 검출용 프라이머 및 프로브, 및 이를 이용한 리얼타임 pcr 방법

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 12875093

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 12875093

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1