WO2013152683A1 - 双环取代吡唑酮偶氮类衍生物、其制备方法及用途 - Google Patents

双环取代吡唑酮偶氮类衍生物、其制备方法及用途 Download PDF

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WO2013152683A1
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hydroxy
pyrazole
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范传文
张龙
周豪杰
赵洪令
杨莹莹
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齐鲁制药有限公司
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Definitions

  • the invention belongs to the field of medicinal chemical industry and relates to a new class of bicyclic substituted pyrazolone azo derivatives, preparation methods and uses thereof. For example, it is used as a thrombopoietin (TP0) mimetic for a platelet production promoter and/or a megakaryocyte production promoter.
  • TP0 thrombopoietin
  • thrombopoietin a member of a large family of transmembrane signaling proteins (collectively cytokines), plays an important role in plateletogenesis and is the most basic regulator of megakaryocyte proliferation, differentiation, maturation, and platelet production.
  • Megakaryocyte production refers to the process of cell proliferation, differentiation and maturation of megakaryocyte cell lines before platelet dry blood circulation. At least eight cytokines have been implicated in the development and maturation of megakaryocytes, while TP0 acts on the entire process of megakaryocyte development and maturation (Kaushansky K. N EngJ Med. 1998, 10: 74).
  • TP0 can also act on primitive hematopoietic stem cells, extensively expand the number of stem cells, and accelerate stem cells into the cell cycle.
  • TP0 binds to its receptor C-MPL
  • TP0 initiates downstream signaling and triggers the survival, proliferation and differentiation of megakaryocytes, and similar signals are transmitted to the seedless platelets, although this signal does not induce platelet survival and proliferation. And differentiation, but it can enhance the hemostasis of platelets (Oda A, Miyakawa Y, Drakev BJ, et at. Thrombos is and Haemostas is. 1999, 82: 377 ).
  • TPO is the main body fluid regulator in the case of thrombocytopenia.
  • a number of animal experiments have shown that it increases platelet count, platelet size and increases the role of isotopic binding into platelets (Metcalf. Nature. 1994, 369: 519).
  • TPO is thought to affect megakaryocyte production mainly through the following ways: 1) causing an increase in the size and number of megakaryocytes; 2) increasing DNA inclusions; 3) increasing mitosis of megakaryocytes; 4) causing an increase in megakaryocyte maturation; 5) An increase in the percentage of cell precursors in the form of acetylcholinesterase positive cells in the callus.
  • TP0 thrombocytopenia caused by osteophyte transplantation and radiotherapy and chemotherapy in cancer or lymphoma treatment.
  • TP0 analogs that can treat thrombocytopenia.
  • W0964018, W09825965, etc. first disclosed polypeptide analogs having increased platelet function.
  • Amgen's thromboproliferative drug, Romiplostim (Nplate) developed for the treatment of chronic idiopathic thrombocytopenic purpura (ITP) was marketed in the United States and was the first FDA-approved drug.
  • a thrombopoietin peptidomimetic drug also the first thrombopoietin drug for the treatment of chronic idiopathic thrombocytopenic purpura (ITP), also increases and maintains platelet count. The drug was also approved in Europe in early 2009.
  • Equopa developed by GSK, is the first oral non-peptide thrombopoietin (TP0) receptor agonist approved for the treatment of adult chronic ITP patients, which binds to the transmembrane region of the TP0 receptor on osseous megakaryocytes, causing cytoplasmic Activation of the tyrosine kinases JAK2 and Tyk2, which subsequently cause signal transduction, promotes phosphorylation of STAT5, MAPK, and PI3K kinases, induces proliferation and differentiation of megakaryocytes from osteophyte progenitor cells, and stimulates platelet production (Terry Gernsheimer. Chronic Idiopathic Thrombocytopenic Purpura) : Mechanisms of Pathogenesis. The Oncologist, 2009, 14: 14-21).
  • TP0 thrombopoietin
  • TP0 analogs Although some small molecule TP0 analogs have been found to contribute significantly to the treatment of thrombocytopenia, there is still a need to develop more TP0 analogues with better efficacy and lower side effects for the treatment of thrombocytopenia. Provide more ideas and options for a broader range of TP0 receptor agonists. Summary of the invention
  • the present invention is intended to provide a series of small molecules that can be used as TP0 mimetics, a series of new silent ring-substituted pyrazolone azo compounds having the structure shown in Formula I, and methods for their preparation are disclosed. Bioactivity assays have shown that bicyclic substituted pyrazolone azo compounds having the structure of formula I are more potent TP0 mimics and/or have good in vivo pharmacokinetic behavior.
  • One aspect of the invention relates to a compound of the structure of formula I, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof,
  • R is independently selected from aryl, heteroaryl or a 3-8 membered heterocyclic ring containing from 1 to 3 heteroatoms, wherein the hydrogen atom on the aryl, heteroaryl or heterocyclic ring is optionally one or more Substituted from an alkyl group, a halogen, a hydroxyl group, a tetrasyl group, an imidazole, a sulfonic acid, a carboxylic acid or a carboxylic acid ester;
  • R 3 are each independently selected from the group consisting of hydrogen, alkyl, halo, nitro, ⁇ , hydroxy, and 1 ⁇ and R 2 , or R 2 and R 3 have at least one group together with a C atom on a directly attached benzene ring Forming a 4- to 8-membered saturated or unsaturated aliphatic ring, an aromatic ring, a heterocyclic ring or a heteroaromatic ring, the heterocyclic or heteroaromatic ring having 1 to 4 hetero atoms, wherein the hetero atom may be optionally selected from N , 0, S atom, the hydrogen atom on the aliphatic ring, the aromatic ring, the heterocyclic ring, the heteroaromatic ring may be further substituted by a substituent, taking J ⁇ from a hydroxyl group, a halogen, an alkyl group, an alkane
  • R 4 - R 8 are each independently selected from hydrogen, alkyl, alkoxy, haloalkyl #U>, haloalkyl, halo, nitro, J.., alkenyl, hydroxy, U or any adjacent R 4 - 11 8 together with the C atom on the directly attached benzene ring form a 4-8 membered saturated or unsaturated aliphatic ring, aromatic ring, heterocyclic ring or heteroaryl ring, said heterocyclic or heteroaromatic ring containing 1-4 Hetero atom,
  • the hetero atom may be optionally selected from N, 0, S atoms, and the hydrogen atom on the aliphatic ring, the aromatic ring, the heterocyclic ring or the heteroaromatic ring may be further substituted by a substituent selected from a hydroxyl group and a halogen. , , alkyl, alkane or.
  • the solvate may be a hydrate, an ethanolate or an acetonate or the like. These solvates can be obtained by crystallization in a corresponding solvent.
  • n is from 0-4.
  • R and R 3 - R 8 are as defined above, and n is from 0 to 4 (e.g., 0, 1, 2, 3, or 4).
  • a compound of formula I according to any of the preceding claims wherein said halogen is selected from the group consisting of fluorine, chlorine, bromine or iodine. In one embodiment, wherein the halogen is selected from the group consisting of fluorine.
  • said alkyl group is a linear or branched pit group.
  • the alkane is from methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, sec-butyl and tert-butyl.
  • the alkane is a methyl group.
  • a compound of formula I according to any one of the invention which is selected from the compounds shown in Table 1 below, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof:
  • Another aspect of the invention relates to a process for the preparation of a compound of the formula I according to the invention, which comprises the following step a) from the corresponding halogenated substance Corresponding boric acid or borate compound for Suzuki coupling
  • Intermediate II c) is carried out by diazotization of intermediate I with sodium nitrite in an acidic solution, and then reacting with intermediate II in an alkaline solution to obtain the corresponding compound:
  • R and RHl 8 are as defined above;
  • X is a halogen, preferably Br and I.
  • the reducing agent is selected from one or more of Pd-C/ammonium formate, ammonium chloride/reduced iron powder, Pd-C/hydrogen, SnCl 2 /concentrated hydrochloric acid.
  • the ethyl acetate compound is selected from one or more of methyl acetonate, ethyl acetonide, isopropyl acetonide, tert-butyl acetoacetate, and 3-pentyl acetoacetate. Ethyl acetate methyl ester and ethyl acetate ethyl acetate are preferred.
  • the acidic solution is selected from one or more of the formulated solutions of acetic acid, sulfuric acid, hydrochloric acid, and in one embodiment is selected from the group consisting of hydrochloric acid.
  • the solution is selected from the group consisting of one or more of sodium hydrogencarbonate, potassium hydrogencarbonate, sodium carbonate, and potassium carbonate. In one embodiment, sodium hydrogencarbonate or potassium hydrogencarbonate is preferred.
  • a further aspect of the invention relates to a pharmaceutical composition comprising a compound of formula I according to the invention, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof, and optionally one or more pharmaceutically acceptable carriers or excipient.
  • a further aspect of the invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising an effective amount of a compound of formula I according to the invention, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof, and optionally one or more pharmaceutically acceptable Accepted carrier or excipient.
  • the pharmaceutical composition may further comprise an effective amount of one or more drugs selected from the group consisting of, for example, colony stimulating factors, chemokines, interleukins or interferons, and the like. Use of the pharmaceutical composition in the treatment of a thrombocytopenic drug.
  • a further aspect of the invention relates to a compound of formula I according to the invention or a pharmaceutically acceptable compound thereof Use of a salt or solvate in the preparation or as a TP0 receptor agonist.
  • a further aspect of the invention relates to a compound of formula I according to the invention, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof, for use in the manufacture and/or prevention and/or adjuvant treatment of a mammal, including a human, associated with thrombocytopenia Use in a drug for a disease or condition;
  • the disease or condition associated with thrombocytopenia is a disease caused by or caused by:
  • Idiopathic thrombocytopenic purpura Idiopathic thrombocytopenic purpura (ITP), osteophyte inhibition after chemotherapy or radiotherapy, organ transplantation, osteophyte transplantation, liver or stem cell transplantation, epiphyseal hyperplasia syndrome, aplastic anemia or leukemia.
  • a further aspect of the invention relates to the use of a compound of formula I according to the invention, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof, as a medicament or agent for promoting the production of platelets and/or megakaryocytes.
  • a further aspect of the invention relates to the use of a compound of formula I according to the invention, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof, for the manufacture of a medicament or agent for hemostasis and/or coagulation or for assisting hemostasis and/or coagulation.
  • a further aspect of the invention relates to a method for promoting platelet production or regulating platelet levels in vivo or in vitro comprising the use of an effective amount of a compound of formula I according to any one of the invention or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof The steps of the object.
  • a further aspect of the invention relates to a method for promoting megakaryocyte production or modulating megakaryocyte levels in vivo or in vitro, comprising using an effective amount of a compound of formula I according to any one of the invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof or The step of the solvate.
  • a further aspect of the invention relates to a method of treating and/or preventing and/or adjunctively treating a disease or condition associated with thrombocytopenia in a mammal, including a human, comprising using an effective amount of any one of the inventions described a step of a compound of formula I or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof;
  • the disease or condition associated with thrombocytopenia is a disease caused by or caused by: Idiopathic thrombocytopenic purpura (ITP), osteophyte inhibition after chemotherapy or radiotherapy, organ transplantation, osteophyte transplantation, liver or stem cell transplantation, epiphyseal hyperplasia syndrome, aplastic anemia or leukemia.
  • Idiopathic thrombocytopenic purpura Idiopathic thrombocytopenic purpura (ITP), osteophyte inhibition after chemotherapy or radiotherapy, organ transplantation, osteophyte transplantation, liver or stem cell transplantation, epiphyseal hyperplasia syndrome, aplastic anemia or leukemia.
  • a further aspect of the invention relates to a method of hemostasis or coagulation or to assist in hemostasis and/or coagulation comprising the use of an effective amount of a compound of formula I according to any of the invention or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof
  • Any aspect of the invention or any one of the aspects of the invention is equally applicable to any other aspect or any of the other aspects, as long as they do not contradict each other, of course, when applicable to each other, if necessary Appropriate modifications are made to the corresponding features.
  • the invention is further described below.
  • halogen refers to fluoro, chloro, bromo and iodo.
  • the aryl group may be a phenyl group, for example, a pyridine ring, a furan ring, a thiazole ring, a pyrazole ring, and the heteroaryl ring is, for example, an anthracene ring, a naphthalene ring, a benzofuran ring, a benzothiophene ring. , benzopyrrole and the like.
  • alkyl alkenyl and “alkynyl” as used in the present invention have their ordinary meanings as commonly understood in the art and are straight or branched hydrocarbyl groups such as, but not limited to, methyl, ethyl. , propyl, isopropyl, n-butyl, sec-butyl, tert-butyl, allyl, propenyl, propynyl, etc., and said "alkyl”, “alkenyl” and “alkynyl” Can be collectively referred to as “hydrocarbon group” or "chain diameter base”.
  • the various raw materials used in the reaction are the skills The skilled artisan can prepare it based on prior knowledge, or can be made by methods well known in the literature, or can be commercially obtained.
  • the intermediates, raw materials, reagents, reaction conditions and the like used in the above reaction schemes can be appropriately changed according to the knowledge of those skilled in the art.
  • one skilled in the art can also synthesize other compounds of formula I not specifically enumerated herein in accordance with the methods of the second aspect of the invention.
  • the compound of the formula I of the present invention can be used in combination with other pharmaceutically active ingredients as long as it does not cause other adverse effects such as an allergic reaction.
  • the active compound of the formula I of the present invention can be used alone as a therapeutic drug, or can be used in combination with one or more other small molecules or peptide drugs having the same or synergistic mechanism. Combination therapy is achieved by administering the individual therapeutic components simultaneously, sequentially or separately.
  • composition means a product comprising specified amounts of each of the specified ingredients, as well as any product produced directly or indirectly from a specified amount of each specified combination of ingredients.
  • the compounds of formula I of the present invention can be used in the form of pharmaceutically acceptable salts derived from inorganic or organic acids.
  • pharmaceutically acceptable salts means within the scope of sound medical judgment, suitable for contact with tissues of humans and lower animals without excessive toxicity, irritation, allergic reactions, etc., and with reasonable effects/risks More than the proportion of salt.
  • Pharmaceutically acceptable salts are well known in the art.
  • the salt can be reacted by reacting an acidic functional group of the compound of the present invention with a suitable organic or inorganic base. It is prepared in situ during the final isolation and purification of the compounds of the invention or separately.
  • the base is, for example, a hydroxide of a pharmaceutically acceptable metal cation, an organic primary amine, a secondary or tertiary amine, and the like.
  • Pharmaceutically acceptable salts also include, but are not limited to, alkali metal or alkaline earth metal based cations such as lithium, sodium, potassium, calcium, magnesium and aluminum salts, and non-toxic quaternary ammonium and amine cations, including tetramethyl Press, tetraethyl, methyl, dimethyl, trimethyl, triethyl, diethyl and ethyl.
  • alkali metal or alkaline earth metal based cations such as lithium, sodium, potassium, calcium, magnesium and aluminum salts
  • non-toxic quaternary ammonium and amine cations including tetramethyl Press, tetraethyl, methyl, dimethyl, trimethyl, triethyl, diethyl and ethyl.
  • each active ingredient in the pharmaceutical compositions of the present invention can be varied so that the resulting amount of active compound is effective to provide the desired therapeutic response to the particular patient, composition, and mode of administration.
  • the dosage level will be selected based on the activity of the particular compound, the route of administration, the severity of the condition being treated, and the condition and past medical history of the patient to be treated. However, it is the practice in the art that the dose of the compound be lower than the water required to achieve the desired therapeutic effect. Start at the beginning and gradually increase the dose until the desired effect is obtained.
  • a therapeutically and/or prophylactically effective amount of a compound of the invention may be administered in pure form, or in the form of a pharmaceutically acceptable salt, ester or prodrug. (in the case of these forms) application.
  • the compound can be administered as a pharmaceutical composition containing the compound of interest and one or more pharmaceutically acceptable excipients.
  • therapeutic and/or prophylactically effective amount refers to a compound in a sufficient amount to treat the disorder with a reasonable effect/risk ratio suitable for any medical treatment and/or prophylaxis.
  • the total daily usage of the compounds and compositions of the present invention will be determined by the attending physician within the scope of sound medical judgment.
  • the specific therapeutically effective dosage level for any particular patient will depend on a number of factors, including the disorder being treated and the severity of the disorder; the activity of the particular compound employed; the particular composition employed; Patient's age, weight, general health, sex and diet; time of administration, route of administration and excretion rate of the particular compound employed; duration of treatment; drug used in combination with or concurrent with the particular compound employed; Similar factors are known in the medical field.
  • the dosage of the compound be started from a level lower than that required to achieve the desired therapeutic effect, and the dosage is gradually increased until the desired effect is obtained.
  • 001 ⁇ 1000 mg/kg ⁇ for example, between 0.01 and 100 mg/kg body weight/day, for example, between 0.01 and 100 mg/kg body weight/day, for example, 0. 01 - 10 mg / kg body weight / day.
  • compositions containing an effective amount of a compound of the invention can be prepared using pharmaceutical carriers well known to those skilled in the art.
  • the invention therefore also provides a pharmaceutical composition comprising a compound of the invention formulated together with one or more non-toxic pharmaceutically acceptable carriers.
  • the pharmaceutical compositions may be specially formulated for oral administration in solid or liquid form for parenteral injection or for rectal administration.
  • the pharmaceutical composition can be formulated into a plurality of dosage forms for ease of administration, for example, oral preparations (such as tablets, capsules, solutions or suspensions); injectable preparations (such as injectable solutions or suspensions, Or an injectable dry powder, which can be used immediately before injection.
  • oral preparations such as tablets, capsules, solutions or suspensions
  • injectable preparations such as injectable solutions or suspensions, Or an injectable dry powder, which can be used immediately before injection.
  • the carrier of the pharmaceutical composition comprises: a binder for oral preparation (such as starch, usually corn, wheat or rice starch, gelatin, methylcellulose, sodium carboxymethylcellulose and/or poly a vinylpyrrolidone), a diluent (such as lactose, dextrose, sucrose, mannitol, behenyl alcohol, cellulose and/or glycerin), a lubricant (such as silica, talc, stearic acid or a salt thereof, usually Magnesium stearate or calcium stearate, and/or polyethylene glycol), and if necessary, a disintegrant such as starch, agar, alginic acid or a salt thereof, usually sodium alginate, and/or a foam Mixtures, cosolvents, stabilizers, suspending agents, pigments, flavoring agents, etc., preservatives, solubilizers, stabilizers, etc.
  • a binder for oral preparation such as starch, usually corn
  • the pharmaceutical preparations can be administered orally or parenterally (e.g., intravenously, subcutaneously, internally or topically), and if certain drugs are unstable under gastric conditions, they can be formulated into enteric coated tablets.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be administered orally, rectally, parenterally, intravaginally, topically (e.g., by powder, chondril or drops), to humans and other mammals, or as an oral spray. Or nasal spray.
  • parenteral refers to administrations including intravenous, intramuscular, intraperitoneal, intrasternal, subcutaneous and intraarticular injections and infusions.
  • compositions suitable for parenteral injection may include physiologically acceptable sterile aqueous or nonaqueous solutions, dispersions, suspensions or emulsions, and sterile powders for the preparation of sterile injectable solutions or dispersions.
  • suitable aqueous or nonaqueous vehicles, diluents, solvents or vehicles include water, ethanol, polyols (propylene glycol, polyethylene glycol, glycerol, etc.), vegetable oils (such as olive oil), injectable organic esters such as oleic acid. Ethyl esters and suitable mixtures thereof.
  • compositions may also contain adjuvants such as preservatives, wetting agents, emulsifying agents and dispersing agents.
  • adjuvants such as preservatives, wetting agents, emulsifying agents and dispersing agents.
  • Prevention of the action of microorganisms is ensured by various antibacterial and antifungal agents, such as parabens, chlorobutanol, benzophenone, behenic acid and the like.
  • isotonic agents such as sugars, sodium chloride, and the like. Prolonged absorption of the injectable pharmaceutical form is achieved by the use of substances which delay absorption, such as aluminum monostearate and gelatin.
  • Suspensions may contain suspending agents in addition to the active compound, such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene behenyl alcohol and polyoxyethylene sorbitol ester, microcrystalline cellulose, aluminum hydroxide , bentonite, agar and tragacanth or a mixture of these substances.
  • suspending agents such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene behenyl alcohol and polyoxyethylene sorbitol ester, microcrystalline cellulose, aluminum hydroxide , bentonite, agar and tragacanth or a mixture of these substances.
  • the rate of absorption of the drug depends on its rate of dissolution, which in turn may depend on crystal size and crystalline form.
  • delayed absorption of the parenterally administered drug form is accomplished by dissolving or suspending the drug in an oil vehicle.
  • the injectable depot form can be prepared by forming a microcapsule matrix of the drug in a biodegradable polymer such as polylactide-polyglycolide.
  • a biodegradable polymer such as polylactide-polyglycolide.
  • the drug dry release rate can be controlled based on the ratio of drug to polymer and the nature of the particular polymer employed. Examples of other biodegradable polymers include polyorthoesters and polyanhydrides.
  • Injectable depot formulations are also prepared by embedding the drug in liposomes or microemulsions which are compatible with body tissues.
  • the injectable preparation can be sterilized, for example, by filtration with a bacteriophage or by incorporating a sterilizing agent in the form of a sterile solid composition which can be dissolved or dispersed in sterile water or other sterilized form before use. Injectable medium.
  • the compounds of the invention or compositions thereof may be administered orally or parenterally.
  • the form for oral administration may be a tablet, a capsule, a coating agent, and an enteral preparation such as an injection or a suppository. These formulations are prepared according to methods familiar to those skilled in the art.
  • the excipients used in the manufacture of tablets, capsules, and coatings are conventional excipients such as starch, gelatin, gum arabic, silica, polyethylene glycol, solvents for liquid dosage forms such as water, ethanol, propylene glycol, vegetable oils (such as corn). Oil, peanut oil, olive oil, etc.).
  • the dosage of the compound of the formula I according to the invention in tablets, capsules, coatings, injections and suppositories is calculated as the amount of the compound present in the unit dosage form.
  • the compound of the formula I of the invention is generally present in an amount of from 0.1 to 1000 mg, preferably in a unit dosage form containing from 1 to 100 mg, more preferably in a unit dosage form containing from 5 to 20 mg.
  • solid dosage forms for oral administration which may be provided by the present invention include capsules, tablets, pills, powders and granules.
  • the active compound may be mixed with at least one inert pharmaceutically acceptable excipient or carrier such as sodium citrate or dicalcium phosphate and/or the following: a) filler or extender such as starch, Lactose, sucrose, glucose, mannitol and silicic acid; b) binders such as carboxymethylcellulose, alginate, gelatin, polyvinylpyrrolidone, sucrose and gum arabic; c) humectants such as glycerin; d) disintegration Such as agar, calcium carbonate, potato or tapioca starch, alginic acid, certain silicates and sodium carbonate; e) solution blockers such as paraffin; f) absorption accelerators such as quaternization g) wetting agents such as cetyl alcohol and glyceryl monostearate; h) adsorbents such as kaolin and bentonite and i) lubricants such as talc, calcium stearate or
  • Solid compositions of a similar type may be used as fillers in soft and hard capsules using such excipients as lactose and high molecular weight polyethylene glycols and the like.
  • the solid dosage forms of tablets, dragees, capsules, pills and granules can be prepared with coatings and shells such as enteric coatings and other materials well known in the art of pharmaceutical preparations. These solid dosage forms may optionally contain opacifying agents, and may be formulated such that they are only or preferentially dried in a certain portion of the intestinal tract in a delayed manner. Examples of embedding compositions that can be used include polymeric materials and waxes. If appropriate, the active compound may also be formulated in microencapsulated form with one or more of the above excipients.
  • Liquid dosage forms for oral administration include pharmaceutically acceptable emulsions, solutions, suspensions, syrups and elixirs.
  • the liquid dosage form may contain, in addition to the active compound, an inert diluent commonly used in the art, such as water or other solvents, solubilizers and emulsifiers such as ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzoic acid.
  • Benzyl ester propylene glycol, 1, 3-butanediol, dimethylformamide, oils (especially cottonseed oil, peanut oil, corn oil, germ oil, olive oil, castor oil and sesame oil), glycerin, tetrahydrofurfuryl alcohol, Fatty acid esters of polyethylene glycol and dehydrated kaempferol and mixtures thereof.
  • the oral compositions may contain, in addition to the inert diluent, excipients such as wetting agents, emulsifying and suspending agents, sweetening agents, flavoring agents and flavoring agents.
  • the compounds of the invention and compositions thereof are also contemplated for topical administration.
  • Dosage forms for topical administration of a compound of the invention include powders, sprays, cholestases and inhalants.
  • the active compound is mixed under sterile conditions with a pharmaceutically acceptable carrier and any of the required preservatives, buffers or propellants.
  • Ophthalmic formulations, ocular cartilage agents, powders and solutions are also contemplated as being within the scope of the invention.
  • the compounds of the invention may also be administered in the form of liposomes.
  • liposomes are typically prepared using phospholipids or other lipid materials. Liposomes are formed from single or multiple layers of hydrated liquid crystal dispersed in an aqueous medium. Any non-toxic, physiologically acceptable and metabolizable lipid capable of forming liposomes can be used.
  • the composition of the invention in liposome form, in addition to the invention In addition to the compound, a stabilizer, a preservative, an excipient, or the like may be contained.
  • Preferred lipids are natural and synthetic phospholipids and phosphatidylcholines (lecithins), which may be used singly or in combination. Methods of forming liposomes are well known in the art. detailed description
  • the temperature is expressed in degrees Celsius (C)
  • the operation is carried out at room temperature or temperature
  • the organic solvent is dried over anhydrous sodium sulfate, and the evaporation of the solvent is reduced by a rotary evaporator. Pressure evaporation, bath temperature not higher than 60
  • the reaction process is traced by thin layer chromatography (TLC) or LC-MS;
  • the final product has satisfactory proton nuclear magnetic resonance spectroscopy (CH-NMR) and mass spectrometry (MS) data.
  • 6-Bromo-4 nitro- 2,3-dihydro-5-nonanol ( 2.57 g, 10 mmol), potassium carbonate ( 1.66 g, 12 with ol) were uniformly mixed in 100 ml of acetone, and then added thereto.
  • Methane (3.55 g, 25 mmol), protected by nitrogen, protected from light, 40 reaction for 8 h, TLC detection of raw materials disappeared, concentrated under reduced pressure, dried with 200 ml of 7j, filtered, filter cake washed several times with water, decompression Drying, quantitative yield gave 6-bromo-4-nitro-5-methyl #1 ⁇ -2,3-dihydroindole.
  • the obtained filter cake is made up of 40 ml hydrochloric acid solution (concentration 2 mol/ L) Wash several times, beat with methanol, beat with methylene chloride, and filter by suction to obtain (Z)-4-(7-(2-(1-(3, 4-dimethylphenyl)-3-methyl-5) -oxo-1,5-dihydro-pyrazole-4-yl)indenyl)-6-hydroxy-2,3-dihydro-1H-indan-5-yl)benzoic acid (0.33 mg, produced) Rate 44%).
  • a preparation step similar to that described in Example 1, using 3- ⁇ phenylboronic acid as a starting material, can give (Z)-3-(7-(2-(1-(3, 4-dimethylphenyl)) -3-methyl- 5-oxo-1, 5-dihydro-pyrazole-4-ylidene) fluorenyl)-6-hydroxy-2,3-dihydro-1H-indan-5-yl) Benzoic acid (compound 3).
  • a preparation procedure similar to that described in Example 1 can be obtained by using 4-fluoro-3-benzoic acid and 4-bromo-6-nitro-2,3-dihydro-5-nonanol as raw materials.
  • a preparation procedure similar to that described in Example 1 can be obtained by using 3- ⁇ benzoic acid and 3-bromo-1-nitro-5,6,7-tetrahydronaphthalene-2-pan as a starting material.
  • Compound 10 A preparation procedure similar to that described in Example 1 can be obtained by using 3- ⁇ phenylboronic acid and 1-bromo-3-nitro-5,6,7-tetrahydronaphthalene-2-pan as a starting material. Z) - 3-(3-(2-(1-(3, 4-dimethylphenyl)-3-methyl- 5-oxo-1, 5-dihydro-pyrazole-4-yl) ) fluorenyl)-2-hydroxy-5,6,8-tetrahydronaphthalen-1-yl)benzoic acid (Compound 10).
  • a preparation procedure similar to that described in Example 1 can be obtained by using 4-bromo-6-nitro-2,3-dihydro-5-nonanol, 3-phenylboronic acid and 3- ⁇ phenylacetylene as raw materials.
  • Example 2 A method similar to that in Example 1 can be obtained from a quantitative yield of 3-(6-methyl#1 ⁇ -7-nitro-2,3-dihydro-1hydro-indol-5-yl)benzoic acid. -(7- ⁇ -6-Hydroxy-2,3-dihydro-1hydro-indol-5-yl)benzoic acid hydrobromide.
  • 2,3-dihydro-1H-indole-5amine (13.3 g, 0.1 mol) was mixed well in 50 ml of concentrated hydrochloric acid and 20 ml of water, and the temperature was lowered to below; W3 ⁇ 4 was stirred, and an aqueous solution of sodium nitrite was added thereto. ( 7.6 g, 0.11 mol ), maintain the reaction temperature at ⁇ , continue stirring for 0.5 h, then add stannous chloride (56.5 g, 0.25 mol) concentrated hydrochloric acid solution (20 ml), naturally rise to room temperature, TLC monitoring The raw material is completely reacted.
  • a method similar to the preparation of the compound 13, using 7-bromo-6-methoxy-5-nitro 1,2,3,4-tetrahydronaphthalene as a raw material can obtain (Z)- 3- (4- 2-(1-(2,3-Dihydro-1H-indol-5-yl)-3-methyl-5-oxo-1,5-dihydro-pyrazole-4-ylidene) 3-Hydroxy-5,6,8-tetrahydronaphthalen-2-yl)benzoic acid (Compound 14).
  • a method similar to the preparation of the compound 5, using 2,3-dihydro-1 -hydroindol-5-amine as a starting material, can give (Z)-5-(7-(2-(l-(2, 3 - Dihydro-1 -indan-5-yl)-3-methyl-5-oxo-1,5-dihydro-pyrazole-4-ylidene)indolyl)-6-hydroxy-2,3- Dihydro-1-indan-4-yl)-2-fluorobenzoic acid (Compound 15).
  • 3-bromo-1-nitro-5,6,8-tetrahydronaphthalene-2-pan (3.5 g, 12.86 m mol) was uniformly mixed in 50 ml of acetonitrile and 5 ml of DMF, and K 2 C0 3 was added. (4 ⁇ 44 g, 32.16 m mol), N 2 was replaced with air for 3 times, and then benzyl chloride (1.8 g, 14.15 m mol) was added to the reaction solution, and the oil bath 83 was reacted under 2 protection.
  • Compound 19 A synthesis method similar to that of compound 17, using 6-bromo-4-nitro-2,3-dihydro-1hydroindole-5-ol as a starting material, can give (Z)-5-(7-(2-( 1-(3,4-Dimethylphenyl)-3-methyl-5-oxo-1, 5-dihydro-pyrazole-4-ylidene)indolyl-6-hydroxy-2,3 -Dihydro-1H-indan-5-yl)-furan-2-carboxylic acid (Compound 19).
  • a synthesis similar to compound 17 is 5-(3-(6-(benzyloxy)-7-nitro-2,3-dihydro-1H-indole-5-yl)phenyl)-1H-tetra
  • the azole is used as a raw material, and then debenzylated by reduction, and then reacted with 1-(3,4-dimethylphenyl)-3-methyl- 1 hydropyrrole-5-(4 hydroxy) ketone to obtain (Z) - 4 - (2-(6-(3-(2H-tetrazol-5-yl)phenyl)-5-hydroxy-2,3-dihydro-1H-indan-4-yl) ⁇ ))-1- (3,4-Dimethylphenyl)-3-methyl-1hydro-pyrazole-5(4-hydro)-one (Compound 21).
  • a synthesis method similar to compound 21, using 2-bromothiazole-5-carboxylic acid as a starting material, can give (Z)-5-(2-(2-(3, 4-dimethylphenyl))-3 -methyl- 5-oxo- 1,5-dihydro-pyrazole-4-yl)indenyl)-6-hydroxy-2,3-dihydro-1H-indan-5-yl)-thiazole -5-carboxylic acid (Compound 23).
  • the 32D-MPL proliferative effect of the compound of the present invention on the stably transduce TP0 receptor cells in vitro and the proliferative effect on the hollow fiber tube model in nude mice were determined by the following assay.
  • 32D-MPL cells stably transposing TP0 receptor are specifically dependent on TP0 for proliferation. When there is no TP0 maintenance, 32D-MPL cells will undergo apoptosis. From a biological point of view, if a compound can replace TP0 to maintain cells For proliferation, the compound is an agonist of the TP0 receptor. See, for example, Kim MJ, Park SH, Opel la SJ et al. NMR structural studies of interactions of a smal l, nonpeptidyl Tpo mimic with the thrombopoietin receptor extracel lular Juxtamembrane and transmembrane domains. J Biol Chem 2007; 282: 14253-14261.
  • Test sample Example 1-25 Synthesis of compound 1-25.
  • the blank cell 32D is a mouse osteoblast (murine interleukin 3, mIL-3 deficient cell strain, purchased from Invitrogen, purchased from ATCC, ATCC under accession number CRL-11346), and added RPMI1640 with 10 ng/ml mIL-3.
  • the medium containing 10% fetal bovine serum, medium and serum were purchased from Invitrogen was cultured.
  • the pCIneo/mpl plasmid constructed above was stably transfected into the cultured mouse osteophyte 32D cell line by electroporation to obtain the 32D-MPL cell bank 1.
  • the specific steps were as follows: Collect the cells in the logarithmic growth phase and adjust the cell density to 10 7 cel l /ml; 40 ⁇ 8 plasmid and 400 ⁇ 1 cell suspension, thoroughly mixed; add the cell mixture to the electric rotor (4 with); electric cup at room temperature (or ice bath) lOmin; set the relevant parameters on the instrument: voltage 400V, pulse intensity 17ms, put the electric rotor into the electric rotation pool, start the electroporation device; after electric shock, place the electric rotor at room temperature for 10 minutes; after electric shock, add 5ml preheated complete medium to the electric rotor (purified from Invitrogen Company), the cell suspension was placed in a T25 flask at a density of 6e5cel l/ml, and placed in a 37-
  • Cell bank 1 was subjected to cell bank 2 screened by antibiotic G418 (concentration 200 ng/ml), and cell bank 2 was again subjected to screening medium (RPMI1640 medium supplemented with 10% fetal bovine serum, 200 ng/ml G418 and 100 ng/ml TPO).
  • Screen medium RPMI1640 medium supplemented with 10% fetal bovine serum, 200 ng/ml G418 and 100 ng/ml TPO.
  • Subcloning Cells of cell bank 2 are seeded into 96-well plates, and 60 wells are seeded in each 96-well plate, one cell per well; after 1 - 2 weeks, only one cell of the well is labeled, waiting for the cell to grow After full, gradually expand into 24-well, 6-well and T25 bottles to obtain recombinant monoclonal fine 32D-MPL e
  • the cell culture conditions of the recombinant monoclonal cell line 32D-MP obtained above were: RPMI-1640 medium (containing 1.5 g/L sodium bicarbonate, 2 mM L-glutamine, 4. 5 g/L glucose, 10 mM HEPES, 1. 0 mM sodium pyruvate, 2. 5 ng/mL recombinant mouse IL-3), 10% (v/v) fetal bovine serum, saturated with 5 % (v/v) carbon dioxide at 37 Culture in a humidity incubator.
  • BALB/C nu/nu female nude mice were purchased from the Shanghai Laboratory Animal Center of the Chinese Academy of Sciences; the polyvinylidene fluoride hollow fiber tube was purchased from the United States Spectrumlabs, the hollow tube parameters were external diameter 1. 2 with, internal With a diameter of 1.0, the barrier molecular weight is greater than 500 kDa.
  • a 32D-MPL cell suspension (1*10 7 cells/ml cell density) was injected into the hollow fiber tube, and then the hollow fiber tube was sealed into a short tube of 2 cm length by a heat sealing method. These short tubes were subcutaneously inoculated into nude mice, and the inoculated nude mice were randomly divided into groups of 6 rats in each group.
  • the test group was given a positive control drug or each test compound, orally, once a day.
  • the nude mice were sacrificed, the cells in the fiber tube were collected, resuspended in the culture medium, and then the cell proliferation was measured by the MTT method, and the EC 5 was calculated using the 4-parameter regression equation of GraghPad Prism software. .
  • the results are shown in Table 2.

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Abstract

本发明属于医药化工领域，涉及一类双环取代吡唑酮偶氮类衍生物、其制备方法、其药物组合物和用途。具体地说，本发明涉及式I所示化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物。本发明还涉及式I化合物的制备方法，包括它的药物组合物以及它们的制药用途。本发明的式I化合物是有效的TPO激动剂，是良好的治疗血小板减少症药物。

Description

双环取代吡唑酮偶氮类衍生物、 其制备方法及用途 技术领域
本发明属于医药化工领域，涉及一类新的双环取代吡唑酮偶氮类衍 生物、 其制备方法及用途。 例如其在作为血小板生成素 （TP0 )模拟物 用于血小板生成促进剂和 /或巨核细胞生成促进剂的用途。 背景技术
血小板生成素 （TP0 )是跨膜信号蛋白庞大家族（总称细胞因子） 中的一员， 在血小板生成过程中扮演着重要角色， 是巨核细胞增殖、 分 化、成熟以及血小板产生的最基本的调控因子（Kuter et al. Proc. Nat Acad Sci USA. 1994， 91: 11104 )。 巨核细胞生成是指血小板幹放 血液循环以前的巨核细胞系细胞增殖、分化和成熟的过程。 目前已发现 至少有 8种细胞因子参与巨核细胞的发育和成熟，而 TP0则作用于巨核 细胞发育和成熟的全过程（Kaushansky K. N EngJ Med. 1998， 10: 74 )。 此外， TP0还可作用于原始造血干细胞， 广泛扩增干细胞的数量， 并加 速干细胞进入细胞周期。 当 TP0结合到其受体 C- MPL， TP0启动下游的 信号传导并引发巨核细胞的成活、增殖和分化，相似的信号也传递到无 核的血小板， 虽然这种信号不能诱导血小板的成活、 增殖和分化， 但是 却能加强血小板的止血功能 （Oda A， Miyakawa Y， Drakev BJ， et at. Thrombos is and Haemostas is. 1999， 82： 377 )。
研究发现： TPO在血小板减少的情况下是主要的体液调节器。 多项 动物实验显示其能够增加血小板数量、血小板大小并能够增加同位素结 合到血小板中的作用 ( Metcalf. Nature. 1994， 369: 519 )。 TPO被认 为主要通过以下几个途径影响巨核细胞生成： 1 ) 引起巨核细胞大小和 数量的增加； 2 )增加 DNA内含物； 3 )增加巨核细胞的有丝分裂； 4 ) 导致巨核细胞成熟的增加； 5 )在骨髄中以乙酰胆碱酯酶阳性细胞形式 导致细胞前体百分比增加。
由于血小板具有凝血止血作用， 并且当其数量非常低时， 患者会有 大量出血而死亡的风险，所以具有增加血小板数量和大小作用的 TP0成 为诊断和治疗各种血液疾病以及癌症或淋巴瘤治疗中骨髄移植、放化疗 导致的血小板减少的治疗中为最为有效的基本手段（Harker , Curr Opin Hematol. 1999， 6: 127 )。
为解决患者体内血小板减少的严重问题，科研工作者长期以来一直 在不断寻找能够治疗血小板减少症的活性 TP0 类似物。 W0964018、 W09825965等首先公开了具有增加血小板功能的多肽类似物。 2008年 8 月， 安进公司开发的用于治疗慢性特发性血小板减少性紫癜（ITP)的 促血小板生成药物罗米司亭 （Romiplostim, Nplate)在美国上市，该药 物是 FDA批准的第一个血小板生成素拟肽药物，也是第一个用于治疗慢 性特发性血小板减少性紫癜（ITP)的促血小板生成药物， 同样能升高并 维持血小板数量。 2009 年初该药物也在欧洲获得批准。
临床研究发现， 该药物具有严重的相关不良反应， 主要有骨髄网硬 蛋白沉积、停用后血小板减少症恶化。其他用药风险包括由于血小板过 度升高而引起血凝块。 另外， 如果患者骨髄发育不良而服用本品， 可能 引起急性白血病。 因此，一些小分子 TP0类似物相继^ L现和公开报道 ( W00028987, W00153267, W00035446, W02006064957等）。 GSK公司开 发的艾曲波帕是首个获准治疗成人慢性 ITP 患者的口服非肽类血小板 生成素（ TP0 )受体激动剂， 结合于骨髄巨核细胞上 TP0受体的跨膜区， 引起细胞质的酪氨酸激酶 JAK2和 Tyk2的活化， 随后引起信号转导，促 使 STAT5、 MAPK、 PI3K激酶磷酸化， 诱导巨核细胞从骨髄祖细胞的增殖 和分化， 刺激血小板的生成 ( Terry Gernsheimer. Chronic Idiopathic Thrombocytopenic Purpura: Mechanisms of Pathogenesis. The Oncologist, 2009, 14: 14—21 )。
虽然目前已经发现的一些小分子 TP0 类似物对血小板减少症的治 疗做出了很大的贡献， 但仍需要开发出更多疗效更好， 副作用更低的 TP0类似物， 为血小板减少症的治疗提供更多更广的 TP0受体激动剂的 思路和选择。 发明内容
本发明意在提供一系列可用作 TP0模拟物的小分子，设计了具有式 I所示结构的一系列新的默环取代吡唑酮偶氮类化合物并公开了其制备 方法。生物活性试验表明， 具有式 I结构的双环取代吡唑酮偶氮类化合 物是更为有效的 TP0模拟物和 /或具有良好的体内药物动力学行为。
本发明的一个方面涉及式 I所示结构的化合物，或其药学上可接受 的盐或溶剂合物，
Figure imgf000004_0001
式 I
其中，
R独立地选自芳基、 杂芳基或含 1- 3个杂原子的 3-8元杂环， 其 中所述的芳基、 杂芳基或杂环上的氢原子任选被一个或多个选自烷基、 卤素、 羟基、 四峻基、 咪唑、 磺酸、 羧酸或羧酸酯的取 所取代；
- R3各自独立地选自氢、 烷基、 卤素、 硝基、 、 ^、 羟基， 且 1^和 R2， 或者 R2和 R3至少有一组与直接相连的苯环上的 C原子一起 形成 4- 8元饱和或不饱和脂肪环、 芳环、 杂环或杂芳环， 所述的杂环或 杂芳环含有 1-4个杂原子， 其中所述的杂原子可任意选自 N、 0、 S原 子， 所述的脂肪环、 芳环、 杂环、 杂芳环上的氢原子可以进一步被取代 基取代， 取 J ^自羟基、 卤素、 、 烷基、 烷
R4 - R8各自独立地选自氢、烷基、烷氧基、 卤代烷 #U>、 卤代烷基、 卤素、 硝基、 J.. 、 烯基、 羟基、 、 U 或者任意相邻的 R4- 118与直接相连的苯环上的 C原子一起形成 4-8元饱和或不饱和脂肪 环、 芳环、 杂环或杂芳环， 所述的杂环或杂芳环含有 1-4 个杂原子， 其中所述的杂原子可任意选自 N、 0、 S原子， 所述的脂肪环、 芳环、 杂 环、 杂芳环上的氢原子可以进一步被取代基取代， 取代基选自羟基、 卤 素、 、 烷基、 烷 或 。
所述溶剂合物可以为水合物、 乙醇合物或丙酮合物等。这些溶剂合 物可以通过在相应的溶剂中结晶获得。
根据本发明任一项所述的式 I化合物，其中所述的式 I化合物选自 式 I (A) :
Figure imgf000005_0001
式 I (A)
其中， R、 ！^及！^- R8如前所述， n从 0-4。
根据本发明任一项所述的式 I化合物，其中所述的式 I化合物选自 式 I (B) :
Figure imgf000005_0002
式 I (B)
其中， R及 R3- R8如前所述， n从 0- 4 (例如 0、 1、 2、 3、 或 4 )。
根据本发明任一项所述的式 I化合物，其中所述的卤素选自氟、氯、 溴或碘。 在一个实施方案中， 其中所述的卤素选自氟。 根据本发明任一项所述的式 I化合物，其中所述的烷基是直链或支 链的坑基基团。
根据本发明任一项所述的式 I化合物， 其中所述的烷 ^^自甲基、 乙基、 正丙基、 异丙基、 正丁基、 仲丁基、 叔丁基、 戊基和己基。 在一 个实施方案中， 其中所述的烷 ^^自甲基、 乙基、 正丙基、 异丙基、 正 丁基、仲丁基和叔丁基。在一个实施方案中，其中所述的烷 自甲基。
根据本发明任一项所述的式 I化合物，其选自下面的表 1所示的化 合物， 或其药学上可接受的盐或溶剂合物：
表 1: 本发明的部分具体的化合物
实施例
化合物名称 结构式
编号
(Z)-4-(7-(2-(l-(3, 4 -二
甲基苯基)- 3-甲基- 5 -氧
1 代- 1， 5 -二氢 -吡唑 -4 -亚
基)肼基) +羟基- 2， 3 -二
氢- 1H-茚满- 5-基)苯甲酸
(Z)-4-(7-(2-(l-(3, 4 -二
甲基苯基)- 3-甲基- 5 -氧
2 代- 1， 5 -二氢 -吡唑 -4 -亚
基)肼基) - 5 -羟基 -2， 3 -二
氢- 1H-茚满- 4-基)苯甲酸
Figure imgf000006_0001
(Z)-3-(7-(2-(l-(3, 4 -二 甲基苯基)- 3-甲基- 5 -氧
代- 1， 5 -二氢 -吡唑 -4 -亚 基)肼基) +羟基- 2， 3 -二 氢- 1H-茚满- 5-基)苯甲酸
(Z)-3-(7-(2-(l-(3, 4 -二 甲基苯基)- 3-甲基- 5 -氧
代- 1， 5 -二氢 -吡唑 -4 -亚 基)肼基) - 5 -羟基 -2， 3 -二 氢- 1H-茚满- 4-基)苯甲酸
(Z)-5-(7-(2-(l-(3, 4 -二 甲基苯基)- 3-甲基- 5 -氧
代- 1， 5 -二氢 -吡唑 -4 -亚 基)肼基) +羟基- 2， 3 -二 氢- 1H-茚满- 5-基)- 2 -氟
苯甲酸
Figure imgf000007_0001
(Z)-5-(4-(2-(l-(3, 4 -二 甲基苯基)- 3-甲基- 5 -氧
代- 1， 5 -二氢 -吡唑 -4 -亚
基)肼基) - 3 -羟基
- 5， 6， 7， 8 -四氢萘- 2-
Figure imgf000007_0002
基)- 2-氟苯甲酸 (Z)-5-(3-(2-(l-(3, 4 -二 甲基苯基)- 3-甲基- 5 -氧 代- 1， 5 -二氢 -吡唑 -4 -亚
基)肼基) - 2 -羟基
- 5， 6， 7， 8 -四氢萘- 1- 基)- 2-氟苯甲酸
(Z)-5-(3-(2-(l-(3, 4 -二 甲基苯基)- 3-甲基- 5 -氧 代- 1， 5 -二氢 -吡唑 -4 -亚
基)肼基) - 2 -羟基
- 5， 6， 7， 8 -四氢萘- 1- 基)- 2-氟苯甲酸
(Z)-3-(4-(2-(l-(3, 4 -二 甲基苯基)- 3-甲基- 5 -氧 代- 1， 5 -二氢 -吡唑 -4 -亚
基)肼基) - 3 -羟基
- 5， 6, 7, 8 -四氢萘- 2 -基）
苯甲酸
(Z)-3-(3-(2-(l-(3, 4 -二 甲基苯基)- 3-甲基- 5 -氧 代- 1， 5 -二氢 -吡唑 -4 -亚
基)肼基) - 2 -羟基
- 5， 6, 7, 8 -四氢萘- 1 -基）
Figure imgf000008_0001
苯甲酸 (Z)-3- (7- (2- (1- (3乙炔 基苯基 )-3 -甲基 -5 -氧代
- 1， 5-二氢-吡唑- 4-亚基） 肼基) - 6 -羟基 -2， 3 -二氢
- 1H-茚满- 5-基)苯甲酸
(Z)-3- (7- (2- (1- (3乙炔 基苯基 )-3 -甲基 -5 -氧代
- 1， 5-二氢-吡唑- 4-亚基） 肼基) - 5 -羟基 -2， 3 -二氢
- 1H-茚满- 4-基)苯甲酸
(Z)-3-(7-(2-(l-(2, 3 -二 氢- 1-茚满- 5-基)- 3-甲基
- 5 -氧代 -1， 5-二氢-吡唑
-4-亚基)肼基) +羟基
- 2， 3 -二氢 -1 -茚满 -5 -基）
苯甲酸
(Z)-3-(4-(2-(l-(2, 3 -二 氢- 1H-茚- 5-基)- 3-甲基
- 5 -氧代 -1， 5-二氢-吡唑
-4-亚基)肼基) - 3 -羟基
- 5， 6, 7, 8 -四氢萘- 2 -基）
苯甲酸
Figure imgf000009_0001
(Z)-5- (7- (2- (1- (2， 3 -二
氢- 1-茚满- 5-基)- 3-甲基
- 5 -氧代 -1， 5-二氢-吡唑
-4-亚基)肼基) +羟基
-2, 3-二氢一 1一茚满一 4一
基)- 2-氟苯甲酸
Figure imgf000010_0001
(Z)-5- (6- (2- (1- (2， 3 -二
氢- 1-茚满- 5-基)- 3-甲基
- 5 -氧代 -1， 5-二氢-吡唑
-4-亚基)肼基) - 5 -羟基
-2, 3-二氢一 1一茚满一 4一
。 基)- 2-氟苯甲酸
1工
(Z)-5-(4-(2-(l-(3, 4 -二 一 ζ工 甲基苯基)- 3-甲基- 5 -氧
代- 1， 5 -二氢 -吡唑 -4 -亚
基)肼基) - 3 -羟基
- 5， 6， 7， 8 -四氢萘- 2 -基) - 呋喃- 2-甲酸
(Z)-5-(3-(2-(l-(3, 4 -二 OH
甲基苯基)- 3-甲基- 5 -氧
代- 1， 5 -二氢 -吡唑 -4 -亚
基)肼基) - 2 -羟基
- 5， 6， 7， 8 -四氢萘- 1 -基) - 呋喃- 2-甲酸 (Z)-5-(7-(2-(l-(3, 4 -二
甲基苯基)- 3-甲基- 5 -氧
代- 1， 5 -二氢 -吡唑 -4 -亚
基)肼基) +羟基- 2， 3 -二
氢- 1H-茚满- 5-基)-呋喃
- 2 -甲酸
(Z)-5-(6-(2-(l-(3, 4 -二 OH
甲基苯基)- 3-甲基- 5 -氧
代- 1， 5 -二氢 -吡唑 -4 -亚
基)肼基) - 5 -羟基 -2， 3 -二
氢- 1H-茚满- 4-基） -呋喃
- 2 -甲酸
,N N'、 NH
(Z) - 4- (2- (6- (3- (2H -四
唑- 5 -基)苯基) - 5 -羟基
-2, 3-二氢一 1H—茚满一 4一
基)肼叉) - \ N-NH
1- (3， 4-二甲苯 V 。
基)- 3-甲基- 1氢-吡唑- 5
(4氢) -酮
(Z) - 4- (2- (7- (3- (2H -四
唑- 5 -基)苯基) +羟基
-2, 3-二氢- 1H-茚满- 5- 基)肼叉) - 1- (3， 4-二甲苯
基)- 3-甲基- 1氢-吡唑- 5
(4氢) -酮
Figure imgf000011_0001
(Z)-5-(7-(2-(l-(3, 4 -二
甲基苯基)- 3-甲基- 5 -氧
代- 1， 5 -二氢 -吡唑 -4 -亚
23
基)肼基) +羟基- 2， 3 -二
氢- 1H-茚满- 5-基)-噻唑
- 5 -甲酸
(Z)-5-(6-(2-(l-(3, 4 -二 OH
甲基苯基)- 3-甲基- 5 -氧
代- 1， 5 -二氢 -吡唑 -4 -亚
24
基)肼基) - 5 -羟基 -2， 3 -二
氢- 1H-茚满- 4-基） -噻
唑- 5-甲酸
(Z)-5- (4- (2- (1- (2， 3 -二
氢- 1-氢茚- 5-基)- 3-甲基
- 5 -氧代 -1， 5-二氢-吡唑
25
-4-亚基)肼基) - 3 -羟基
- 5， 6， 7， 8 -四氢萘- 2- 基)- 2-氟苯甲酸 本发明另一方面涉及本发明式 I化合物的制备方法，其包括以下步 a) 由相应的卤代物与相应的硼酸或硼酸酯化合物进行 Suzuki 偶
^^应， 再经还原剂还原得到相应的胺（中间体 I ):
Figure imgf000012_0001
Figure imgf000013_0001
中间体 I
或
Figure imgf000013_0002
中间体 I b) 取代苯胺与亚硝酸钠在酸性溶液中进行重氮化反应， 再加入氯 化亚锡还原得到肼， 然后与乙酰乙酸酯类化合物加热缩合得到中间体
II：
Figure imgf000013_0003
中间体 II c) 由中间体 I与亚硝酸钠在酸性溶液中进行重氮化反应， 再与中 间体 II在碱性溶液中反应制得相应的化合物：
Figure imgf000014_0001
中间体 I 中间体 II 目标化合物
其中， R及 RHl8如前所述； X为卤素， 优选 Br和 I。
所述还原剂选自 Pd- C/甲酸铵、 氯化铵 /还原铁粉、 Pd- C/氢气、 SnCl2/浓盐酸中的一种或多种。
所述乙醜乙酸酯类化合物选自乙醜乙酸甲酯、 乙醜乙酸乙酯、 乙醜 乙酸异丙酯、 乙酰乙酸叔丁酯、 乙酰乙酸- 3-戊酯中的一种或多种， 优 选乙酸乙酯甲酯和乙醜乙酸乙酯。
所述酸性溶液选自乙酸、 硫酸、 盐酸中的一种或多种配制的溶液， 在一个实施例中选自盐酸。 所 性溶液选自碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳 酸钠、碳酸钾中的一种或多种配制的溶液，在一个实施例中优选碳酸氢 钠、 碳酸氢钾。 本发明的再一方面涉及一种药物组合物， 其包含本发明的式 I化 合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物， 以及任选的一种或多种药学 上可接受的载体或赋形剂。
本发明的再一方面涉及一种药用组合物， 其包括有效剂量的本发 明的式 I 化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物， 以及任选的一种 或多种药学上可接受的载体或赋形剂。 该药用组合物可以进一步含有 有效量的选自下列的一种或多种药物： 例如集落刺激因子、趋化因子、 白介素或干扰素等。该药物组合物在治疗血小板减少症药物中的用途。 本发明的再一方面涉及本发明的式 I化合物或其药学上可接受的 盐或溶剂合物在制备或作为 TP0受体激动剂中的用途。
本发明的再一方面涉及本发明的式 I化合物或其药学上可接受的 盐或溶剂合物在制备用于治疗和 /或预防和 /或辅助治疗哺乳动物（包 括人）的与血小板减少相关的疾病或病症的药物中的用途；
具体地， 所述与血小板减少相关的疾病或病症是如下疾病， 或者 由如下疾病导致或引起：
特发性血小板减少性紫癜（ITP )、 化疗或放疗后的骨髄抑制、 器 官移植、 骨髄移植、 肝或干细胞移植、 骨髄异常增生综合征、 再生障 碍性贫血或白血病。
本发明的再一方面涉及本发明的式 I化合物或其药学上可接受的 盐或溶剂合物在作为或者制备促进血小板和 /或巨核细胞生成的药物或 试剂中的用途。
本发明的再一方面涉及本发明的式 I化合物或其药学上可接受的 盐或溶剂合物在制备止血和 /或凝血或者辅助止血和 /或凝血的药物或 试剂中的用途。 本发明的再一方面涉及一种在体内或体外促进血小板生成或者调 节血小板水平的方法，包括使用有效量的本发明任一项所述的式 I化合 物或其药学上可接受的盐或溶剂合物的步骤。
本发明的再一方面涉及一种在体内或体外促进巨核细胞生成或者 调节巨核细胞水平的方法， 包括使用有效量的本发明任一项所述的式 I 化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物的步骤。 本发明的再一方面涉及一种治疗和 /或预防和 /或辅助治疗哺乳动 物（包括人）的与血小板减少相关的疾病或病症的方法， 包括使用有效 量的本发明任一项所述的式 I 化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合 物的步骤；
具体地， 所述与血小板减少相关的疾病或病症是如下疾病， 或者 由如下疾病导致或引起： 特发性血小板减少性紫癜（ITP )、 化疗或放疗后的骨髄抑制、 器 官移植、 骨髄移植、 肝或干细胞移植、 骨髄异常增生综合征、 再生障 碍性贫血或白血病。
本发明的再一方面涉及一种止血或凝血的或者辅助止血和 /或凝 血的方法，包括使用有效量的本发明任一项所述的式 I化合物或其药学 上可接受的盐或溶剂合物的步骤。 本发明任一方面或该方面的任一实施方案所具有的特征同样适用 于其它方面或该其它方面的任一实施方案， 只要它们不会相互矛盾， 当 然在相互之间适用时， 必要的话可对相应特征作适当修饰。 下面对本发明作进一步的描述。
本发明所引述的所有文献， 它们的全部内容通过引用并入本文， 并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时， 以本发明的表述 为准。 此外， 本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知 的一般含义， 即便如此， 本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更 详尽的说明和解释， 提及的术语和短语如有与公知含义不一致的， 以 本发明所表述的含义为准。
在本发明的式 I化合物中， 术语 "卤素" 或 "卤代"是指氟、 氯、 溴和碘。
所述芳基可以是苯基， 所述杂环例如是吡啶环、 呋喃环、噻唑环、 吡唑环， 所述杂芳环例如是茚环、 萘环、 苯并呋喃环、 苯并噻吩环、 苯并吡咯环等。
本发明中所采用的术语 "烷基" 、 "烯基" 和 "炔基" 具有本领 域公知的一般含义， 它们是直链或支链的烃基基团， 例如但不限于甲 基、 乙基、 丙基、 异丙基、 正丁基、 仲丁基、 叔丁基、 烯丙基、 丙烯 基、 丙炔基等， 并且所述的 "烷基" 、 "烯基" 和 "炔基" 可以统称 为 "烃基" 或 "链径基" 。
在本发明合成式 I化合物的方法中，反应所用的各种原材料是本领 域技术人员根据已有知识可以制备得到的，或者是可以通过文献公知的 方法制得的， 或者是可以通过商业购得的。 以上反应方案中所用的中间 体、原材料、 试剂、反应条件等均可以根据本领域技术人员已有知识作 适当改变的。或者，本领域技术人员也可以根据本发明第二方面方法合 成本发明未具体列举的其它式 I化合物。
本发明的式 I化合物可以与其它药物活性成分组合使用，只要它不 产生其他不利作用， 例如过敏反应。
本发明式 I所示的活性化合物可以单独作为治疗药物使用，或者可 以与一种或多种其他具有同类或协同作用机制的小分子或肽类药物联 合使用。 联合治疗通过将各个治疗组分同时、 顺序或隔开给药来实现。
本文所用的术语 "组合物"意指包含指定量的各指定成分的产品， 以及直接或间接从指定量的各指定成分的组合产生的任何产品。
本发明的式 I化合物可以以衍生自无机酸或有机酸的药学上可接 受的盐的形式使用。 术语 "药学上可接受的盐" 指在可靠的医学判断 范围内，适合用于与人类和低等动物的组织接触而不出现过度的毒性、 刺激、 过敏反应等， 且与合理的效果 /风险比相称的盐。 药学上可接受 的盐是本领域公知的。 所述盐可通过使本发明化合物的酸性官能团与 合适的有机碱或无机碱反应。 在本发明化合物的最终分离和纯化过程 中原位制备或者单独制备。 所述的碱例如药学上可接受的金属阳离子 的氢氧化物、 有机伯胺、 仲胺或叔胺等。
药学上可接受的盐还包括但不限于基于碱金属或碱土金属的阳离 子如锂、 钠、 钾、 钙、 镁和铝盐等， 以及无毒的季铵和胺阳离子， 包 括按、 四甲基按、 四乙基按、 甲基按、 二甲基按、 三甲基按、 三乙基 後、 二乙基按和乙基按等。
可改变本发明药物组合物中各活性成分的实际剂量水平， 以便所 得的活性化合物量能有效针对具体患者、 组合物和给药方式得到所需 的治疗反应。 剂量水平须根据具体化合物的活性、 给药途径、 所治疗 病况的严重程度以及待治疗患者的病况和既往病史来选定。 但是， 本 领域的做法是， 化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水 平开始， 逐渐增加剂量， 直到得到所需的效果。
当用于上述治疗和 /或预防或其他治疗和 /或预防时，治疗和 /或预 防有效量的一种本发明化合物可以以纯形式应用， 或者以药学上可接 受的盐、 酯或前药形式 (在存在这些形式的情况下）应用。 或者， 所述 化合物可以以含有该目标化合物与一种或多种药物可接受赋形剂的药 物组合物给药。词语 "治疗和 /或预防有效量"的本发明化合物指以适 用于任何医学治疗和 /或预防的合理效果 /风险比治疗障碍的足够量的 化合物。 但应认识到， 本发明化合物和组合物的总日用量须由主诊医 师在可靠的医学判断范围内作出决定。 对于任何具体的患者， 具体的 治疗有效剂量水平须根据多种因素而定， 所述因素包括所治疗的障碍 和该障碍的严重程度； 所采用的具体化合物的活性； 所采用的具体组 合物； 患者的年龄、 体重、 一般健康状况、 性别和饮食； 所采用的具 体化合物的给药时间、 给药途径和排泄率； 治疗持续时间； 与所采用 的具体化合物组合使用或同时使用的药物； 及医疗领域公知的类似因 素。 例如， 本领域的做法是， 化合物的剂量从低于为得到所需治疗效 果而要求的水平开始， 逐渐增加剂量， 直到得到所需的效果。 一般说 来，本发明式 I化合物用于哺乳动物特别是人的剂量可以介于 0. 001 ~ 1000 mg/kg体重 /天， 例如介于 0. 01 - 100 mg/kg体重 /天， 例如介于 0. 01 - 10 mg/kg体重 /天。
运用本领域技术人员熟悉的药物载体可以制备成含有效剂量的本 发明化合物的药物组合物。 因此本发明还提供包含与一种或多种无毒 药物可接受载体配制在一起的本发明化合物的药物组合物。 所述药物 组合物可特别专门配制成以固体或液体形式供口服给药、 供胃肠外注 射或供直肠给药。
所述的药物组合物可配制成许多剂型， 便于给药， 例如， 口服制剂 (如片剂、 胶囊剂、 溶液或混悬液）； 可注射的制剂（如可注射的溶液或 混悬液， 或者是可注射的干燥粉末，在注射前加入注射水可立即使用）。 所述的药物组合物中载体包括： 口服制剂使用的粘合剂（如淀粉， 通常 是玉米、 小麦或米淀粉， 明胶、 甲基纤维素、 羧甲基纤维素钠和 /或聚 乙烯吡咯烷酮）， 稀释剂（如乳糖、 右旋糖、 蔗糖、 甘露醇、 山椠醇、 纤 维素和 /或甘油）， 润滑剂（如二氧化硅、 滑石、 硬脂酸或其盐， 通常是 硬脂酸镁或硬脂酸钙，和 /或聚乙二醇），以及如果需要，还含有崩解剂， 如淀粉、 琼脂、 海藻酸或其盐， 通常是藻酸钠， 和 /或泡腾混合物， 助 溶剂、稳定剂、 悬浮剂、 色素、矫味剂等， 可注射的制剂使用的防腐剂、 加溶剂、 稳定剂等； 局部制剂用的基质、 稀幹剂、 润滑剂、 防腐剂等。 药物制剂可以经口服或胃肠外方式 (例如静脉内、皮下、 内或局部） 给药，如果某些药物在胃部条件下是不稳定的， 可以将其配制成肠衣片 剂。
更具体地说， 本发明的药物组合物可通过口服、 直肠、 胃肠外、 阴道内、 局部（如通过散剂、 软骨剂或滴剂）、 口颊给予人类和其他哺 乳动物， 或者作为口腔喷雾剂或鼻腔喷雾剂给予。 本文所用术语 "胃 肠外" 指包括静脉内、 肌肉内、 腹膜内、 胸骨内、 皮下和关节内注射 和输液的给药方式。
适合于胃肠外注射的组合物可包括生理上可接受的无菌含水或非 水溶液剂、 分散剂、 混悬剂或乳剂， 及供重构成无菌可注射溶液剂或 分散剂的无菌散剂。 合适的含水或非水载体、 稀释剂、 溶剂或媒介物 的实例包括水、 乙醇、多元醇（丙二醇、聚乙二醇、甘油等）、植物油（如 橄榄油）、 可注射有机酯如油酸乙酯及它们的合适混合物。
这些组合物也可含有辅料， 如防腐剂、 湿润剂、 乳化剂和分散剂。 通过各种抗细菌剂和抗真菌剂， 例如尼泊金酯类、 三氯叔丁醇、 苯盼、 山椠酸等， 可确保防止微生物的作用。 还包括等渗剂， 例如糖类、 氯 化钠等。 通过使用能延迟吸收的物质， 例如单硬脂酸铝和明胶， 可达 到可注射药物形式的延长吸收。
混悬剂中除活性化合物外还可含有悬浮剂， 例如乙氧基化异十八 醇、 聚氧乙烯山椠醇和聚氧乙烯失水山椠糖醇酯、 微晶纤维素、 偏氢 氧化铝、 膨润土、 琼脂和黄蓍胶或者这些物质的混合物等。
在一些情况下， 为延长药物的作用， 期望减慢皮下或肌内注射药 物的吸收。 这可通过使用水溶性差的晶体或无定形物质的液体混悬剂 来实现。 这样， 药物的吸收速度取决于其溶解速度， 而溶解速度又可 取决于晶体大小和晶型。 或者， 胃肠外给药的药物形式的延迟吸收通 过将该药物溶解于或悬浮于油媒介物中来实现。
可注射贮库制剂形式可通过在生物可降解聚合物如聚丙交酯-聚 乙交酯中形成药物的微胶囊基质来制备。 可根据药物与聚合物之比和 所采用的具体聚合物的性质， 对药物幹放速度加以控制。 其他生物可 降解聚合物的实例包括聚原酸酯类和聚酐类。 可注射贮库制剂也可通 过将药物包埋于能与身体组织相容的脂质体或微乳中来制备。
可注射制剂可例如通过用滤菌器过滤或通过掺入无菌固体组合物 形式的灭菌剂来灭菌， 所述固体组合物可在临用前溶解或分散于无菌 水或其他无菌可注射介质。
本发明化合物或其组合物可用口服方法或非胃肠道给药方式。口服 给药形式可以是片剂、胶囊剂、 包衣剂， 肠道外用药制剂有注射剂和栓 剂等。这些制剂是按照本领域的技术人员所熟悉的方法制备的。为了制 造片剂、胶囊剂、 包衣剂所用的辅料是常规用的辅料，例如淀粉、明胶、 阿拉伯胶，硅石， 聚乙二醇， 液体剂型所用的溶剂如水、 乙醇、 丙二醇、 植物油（如玉米油、花生油、橄榄油等）。 含有本发明化合物的制剂中还 有其它辅料， 例如表面活性剂， 润滑剂， 崩解剂， 防腐剂， 矫味剂和色 素等。 在片剂、 胶囊剂、 包衣剂、 注射剂和栓剂中含有本发明式 I化合 物的剂量是以单元剂型中存在的化合物量计算的。在单元剂型中本发明 式 I化合物一般含量为 0. l- 1000mg, 优选的单元剂型含有 l-100mg, 更优选的单元剂型含有 5-20mg。 具体地说， 本发明可以提供的供口服 给药的固体剂型包括胶囊剂、 片剂、 丸剂、 散剂和颗粒剂。 在此类固 体剂型中， 活性化合物可与至少一种惰性的药物可接受赋形剂或载体 如柠檬酸钠或磷酸二钙和 /或以下物质混合： a)填充剂或增量剂如淀 粉、 乳糖、 蔗糖、 葡萄糖、 甘露糖醇和硅酸； b)粘合剂如羧甲基纤维 素、 海藻酸盐、 明胶、 聚乙烯吡咯烷酮、 蔗糖和阿拉伯树胶； c)保湿 剂如甘油； d)崩解剂如琼脂、 碳酸钙、 马铃薯或木薯淀粉、 海藻酸、 某些硅酸盐和碳酸钠； e)溶液阻滞剂如石蜡； f)吸收加速剂如季铵化 合物； g)湿润剂如鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯； h)吸附剂如高岭土和膨 润土以及 i)润滑剂如滑石粉、 硬脂酸钙、 硬脂酸镁、 固体聚乙二醇、 十二烷羞 酸钠和它们的混合物。 在胶囊剂、 片剂和丸剂的情况下， 所述剂型中也可包含緩冲剂。
相似类型的固体组合物使用赋形剂例如乳糖及高分子量聚乙二醇 等， 也可用作软胶囊和硬胶囊中的填充物。
片剂、 糖衣丸剂、 胶囊剂、 丸剂和颗粒剂的固体剂型可与包衣和 壳料如肠溶衣材和医药制剂领域公知的其他衣材一起制备。 这些固体 剂型可任选含有遮光剂， 且其组成还可使其只是或优先地在肠道的某 个部位任选以延迟方式幹放活性成分。 可以使用的包埋组合物的实例 包括高分子物质和蜡类。 如果适合， 活性化合物也可与一种或多种上 述赋形剂配成微囊形式。
供口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳剂、 溶液剂、 混悬 剂、 糖浆剂和酏剂。 液体剂型除含有活性化合物外还可含有本领域常 用的惰性稀幹剂， 例如水或其他溶剂， 增溶剂和乳化剂例如乙醇、 异 丙醇、 碳酸乙酯、 乙酸乙酯、 苄醇、 苯甲酸苄酯、 丙二醇、 1, 3-丁二 醇、 二甲基甲酰胺、 油类（特别是棉籽油、 花生油、 玉米油、 胚芽油、 橄榄油、 蓖麻油和芝麻油）、 甘油、 四氢糠醇、 聚乙二醇和脱水山椠糖 醇的脂肪酸酯及它们的混合物。 口服组合物除包含惰性稀释剂外还可 包含辅料， 例如湿润剂、 乳化剂和悬浮剂、 甜味剂、 矫味剂和香味剂。
本发明的化合物及其组合物还考虑用于局部给药。 供局部给予本 发明化合物的剂量形式包括散剂、 喷雾剂、 软骨剂和吸入剂。 在无菌 条件下将活性化合物与药学上可接受的载体和任何所需的防腐剂、 緩 冲剂或推进剂混合。 眼用制剂、 眼软骨剂、 散剂和溶液剂也被考虑在 本发明范围内。
本发明化合物也可以脂质体形式给药。 如本领域所公知， 脂质体 通常用磷脂或其他脂类物质制得。 脂质体由分散于含水介质中的单层 或多层水化液晶所形成。 任何能够形成脂质体的无毒、 生理上可接受 和可代谢的脂质均可使用。 脂质体形式的本发明组合物除含有本发明 化合物外， 还可含有稳定剂、 防腐剂、 赋形剂等。 优选的脂类是天然 和合成的磷脂和磷脂酰胆碱（卵磷脂）， 它们可单独或者混合使用。 形 成脂质体的方法是本领域公知的。 具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述。本领域技术 人员将会理解， 下面的实施例仅用于说明本发明， 而不应视为限定本发 明的范围。 实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所 描述的技术或条件（例如参考 J.萨姆布鲁克等著， 黄培堂等译的 《分 子克隆实验指南》， 第三版， 科学出版社）或者按照产品说明书进行。 所用试剂或仪器未注明生产厂商者， 均为可以通过市购获得的常规产 品。 在本发明中， 除非另外说明， 其中： （i)温度以摄氏度 0C)表示， 操作在室温或温度环境下进行； （i i)有机溶剂用无水硫酸钠干燥，溶剂 的蒸发用旋转蒸发仪减压蒸发， 浴温不高于 60 (i i i)反应过程用 薄层色谱 (TLC)或 LC- MS跟踪； （iv)终产物具有满意的质子核磁共振光 谱 CH- NMR)和质谱 (MS)数据。 实施例 1 : (Z) - 4- (7- (2- (1- (3, 4-二甲基苯基) -3-甲基- 5-氧代 - 1， 5-二氢-吡唑- 4-亚基)肼基) -6-羟基- 2， 3-二氢- 1H-茚满- 5-基)苯甲 酸 （化合物 1)的合成：
Figure imgf000023_0001
化合物 1
a. 的合成:
Figure imgf000023_0002
将 6 -溴一 4一硝基一2， 3 -二氢一5 -茚醇（ 2.57 g， lOmmol )、碳酸钾（ 1.66 g， 12隨 ol)在 100 ml丙酮中混合均匀，再向其中加入埃甲烷（ 3.55 g， 25 mmol), 氮气保护下， 避光， 40 反应 8 h， TLC检测原料点消失， 减压浓缩后， 用 200 ml7j稀幹， 过滤， 滤饼用水洗涤数次， 减压干燥， 定量产率得到 6 -溴- 4 -硝基 -5 -甲 #1^-2， 3 -二氢茚。
取 6 -溴- 4 -硝基- 5 -甲氧基- 2， 3-二氢茚 （1.36 g， 5 mmol), 4 -羧 基苯硼酸频那醇酯 （2.0 g， 8隨 ol)在 20 ml 1,4-二氧六环中混合均 匀， 加入 4 ml碳酸钠水溶液（2 mol/L)。 氮气置换 3次后， 再向其中 加入四三苯基膦钯（0.36 g， 0.31隨 ol)， 氮气保护下， 105 加热回流， 反应 28 h， TLC检测原料反应完全。 80 减压浓缩后， 加入 100 ml 盐 酸溶液（3 mol/L浓度）， 100ml乙酸乙酯萃取 3次， 合并乙酸乙酯层， 无水硫酸钠干燥， 经柱层析得 4- (6 -甲 #1^-7 -硝基- 2， 3 -二氢 -1 氢- 茚- 5-基）苯甲酸（1.06 g， 产率： 68%)。
b. 4- (7- 6-羟基- 2， 3-二氢- 1氢-茚- 5-基)苯甲酸氢溴酸盐的 合成:
Figure imgf000024_0001
将 4- ( 6 -甲 #1^-7 -硝基 -2， 3 -二氢- 1氢-茚- 5 -基）苯甲酸 （ 0.63 g， 2 mmol)溶解于 100 ml乙醇中， 加入 0.4 g Pd-C和甲酸铵 (1.3 g, 20 mmol ), 80 回流 1.5h， TLC检测原料反应完全， 降至室温后过滤， 滤液减压浓缩得目标产物 4- (7- 6-甲氧基 -2,3-二氢- 1 氢-茚- 5- 基)苯甲酸（0.54 g， 产率 96%)。
将 4-(7- ^-6 -甲 #1^-2， 3 -二氢 -1氢-茚- 5 -基)苯甲酸（ 0.47 g， 2隨 ol)溶解于 15 ml氢溴酸溶液中 （浓度 40%)， 120 回流 14h， TLC 检测原料反应完全， 减压蒸出溶剂得 0.53 g褐色固体， 接转入下步反 应。
c 1- (3， 4-二甲基苯基) -3-甲基- 1氢-吡唑- 5 ( 4 合成
Figure imgf000024_0002
将 3， 4 -二甲基苯胺 ( 12.2 g， 0.1 mol )在 50 ml 浓盐酸和 20ml 7j 中混合均匀， 降温至 以下， 机械搅拌下， 向其中滴加亚硝酸钠的 7j溶液 (7.6 g， 0.11 mol )， 维持反应温度在 ΟΓ, 继续搅拌 0.5 h， 再向其中加入氯化亚锡（56.5 g， 0.25 mol) 的浓盐酸溶液（20 ml ), 自然升至室温， TLC监测原料反应完全。抽滤， 滤饼干燥得 3， 4-二甲基 苯肼盐酸盐 (11.8 g)。
将 3， 4 -二甲基苯肼盐酸盐 (8.7 g, 50 m mol )， 溶解于 100 ml冰 乙酸中， 加入乙酰乙酸乙酯（6.5 g， 50 mmol)和醋酸钠 (4.1 g， 50 mmol), 120 回流反应 7h， TLC检测原料反应完全。 减压蒸出冰乙酸， 加入 100 ml水， 100ml 乙酸乙酯萃取 4次， 合并乙酸乙酯层并无水硫 酸钠干燥， 减压浓缩后得 1- (3， 4-二甲基苯基) -3-甲基- 1氢-吡唑- 5 ( 4 氢）酮 （8.3 g， 产率 82%)
d. (Z) -4- (7- (2- (1- (3， 4一二甲基苯基)— 3 -甲基一5 -氧代一1， 5 -二氢 -吡唑 -4-亚基)肼基) -6-羟基- 2， 3-二氢- 1H-茚满- 5-基)苯甲酸 （化合 物 1)的合成：
Figure imgf000025_0001
化合物 1
将 4- (7-氛基- 6-羟基- 2,3-二氢- 1 氢-茚- 5-基)苯甲酸氢溴酸盐 (0.5 g， 1.43隨 ol)溶解于 15 ml浓盐酸中， 降温至 0 , 向其中緩 慢滴加 NaN02 ( 0.11 g， 1.51 mmol )水溶液（ 10 ml )， 保温反应 0.5h， TLC检测原料反应完全。 再向其中加入 1- (3， 4-二甲基苯基) -3-甲基- 1 氢-吡峻- 5 (4氢）酮（0.29 g， 1.43 mmol), 反应 15 min， 控制反应 温度 0 ， 用饱和碳酸氢钠调节 ρΗ值为 9左右， 加入 10ml无水乙醇， 自然升至室温继续反应 24 h后， TLC检测原料反应完全， 过滤， 所得 滤饼用 40 ml盐酸溶液（浓度 2mol/L)洗涤数次， 甲醇打浆， 二氯甲 烷打浆， 抽滤得 (Z) -4- (7- (2- (1- (3, 4-二甲基苯基) -3-甲基- 5-氧代 -1, 5-二氢-吡唑- 4-亚基)肼基) - 6 -羟基 -2， 3 -二氢 -1H -茚满 -5 -基)苯甲 酸（0.33 mg, 产率 44%)。
-羅 (600MHz, DMS0-d6, δ ppm)： 13.82 (s， 1H), 12.98 (s， 1H), 9.40 (s， 1H), 8.01 (d, 2H， J = 8.0 Hz) , 7.70 (d, 1H， J = 1.2 Hz), 7.67 (d, 2H， J = 8.0 Hz) , 7.63 (dd, 1H)， 7.18 (d, 1H， J = 8.4Hz) , 7.05 (s， 1H), 3.28 (t， 2H)， 2.86 (t， 2H)， 2.27 (s， 3H)， 2.25 (s， 3H), 2.21 (s, 3H), 2.08 (m, 2H)。 ESI— MS (m/z)： [M+H]+ 483.3, [M-H]" 481.3e 实施例 2: (Z)- 4- (7- (2- (1- (3， 4-二甲基苯基) -3-甲基- 5-氧代 - 1， 5-二氢-吡唑- 4-亚基)肼基) -5-羟基- 2， 3-二氢- 1H-茚满- 4-基)苯甲 酸的 （化合物 2)的合成：
Figure imgf000026_0001
化合物 2
与制 ^匕合物 1类似的方法， 以 4 -溴- 6 -硝基 -2， 3-二氢- 5-茚醇为 原料， 可以得到（Z)- 4- (7- (2- (1- (3,4-二甲基苯基) -3-甲基- 5-氧代 -1, 5-二氢-吡唑- 4-亚基)肼基) - 5 -羟基 -2， 3 -二氢 -1H -茚满 -4 -基)苯甲 酸 （化合物 2)。
ESI-MS (m/z)： [M+H]+ 483.3, [M-H]" 481.3β 实施例 3: (Ζ)- 3- (7- (2- (1- (3,4-二甲基苯基) -3-甲基- 5-氧代
-二氢 -吡唑 -4-亚基)肼基) -6-羟基- 2， 3-二氢- 1H-茚满- 5-基)苯甲 酸 (化合物 3)的合成
Figure imgf000027_0001
化合物 3
与实施例 1中所述类似的制备步骤， 以 3- ^^苯硼酸为原料，可以 得到（Z)- 3- (7- (2- (1- (3， 4-二甲基苯基) -3-甲基- 5-氧代- 1， 5-二氢-吡 唑- 4-亚基）肼基) -6-羟基- 2， 3-二氢- 1H-茚满- 5-基）苯甲酸（化合物 3)。
-羅 (600MHz, DMS0-d6, δ ppm)： 13.84 (s， 1H), 13.03 (s， 1H), 9.37 (s， 1H), 8.13 (s， 1H), 7.93 (d, 1H， J = 7.8Hz) , 7.79 (d, 1H， J = 7.8Hz) , 7.71 (s， 1H), 7.68 (dd, 1H), 7.59 (t， 1H), 7.19 (d, 1H, J = 7.8Hz) , 7.05 (s， 1H) , 3.30 (t， 2H)， 2.87 (t， 2H) , 2.29 (s， 3H)， 2.26 (s， 3H), 2.22 (s， 3H), 2.09 (m, 2H)。
ESI- MS (m/z)： [M+H]+ 483.2, [M-H]" 481.3e 实施例 4: (Z)- 3- (7- (2- (1- (3， 4-二甲基苯基) -3-甲基- 5-氧代 - 1， 5-二氢-吡唑- 4-亚基)肼基) -5-羟基- 2， 3-二氢- 1H-茚满- 4-基)苯甲 酸 (化合物 4)的合成
Figure imgf000027_0002
化合物 4 与实施例 1中所述类似的制备步骤， 以 3- ^^苯硼酸和 4-溴- 6 -硝 基- 2， 3-二氢- 5-茚醇为原料，可以得到（Z) -3- (7- (2- (1- (3， 4 -二甲基苯 基) - 3-甲基- 5-氧代- 1， 5-二氢-吡唑- 4-亚基)肼基) -5-羟基- 2， 3-二氢 - 1H-茚满- 4-基)苯甲酸 (化合物 4)。
ESI-MS (m/z)： [M+H] + 483. 2, [M-H] " 481. 3β 实施例 5 : (Ζ) - 5- (7- (2- (1- (3, 4-二甲基苯基) -3-甲基- 5-氧代 - 1， 5-二氢-吡唑- 4-亚基)肼基) -6-羟基- 2， 3-二氢- 1H-茚满- 5-基) -2- 氟苯甲酸 (化合物 5)的合成
Figure imgf000028_0001
化合物 5
a. 5- (7-硝基-6-甲|^-2，3-二氢-1 氢-茚- 5 -基) -2 -氟苯甲酸的 合成：
与化合物 1 中制备 4- (7-硝基-6-甲#1^-2， 3 -二氢 -1氢-茚 -5 -基) 苯甲酸类似的方法， 以 4-氟- 3- ^^苯硼酸为原料， 可以得到 5- (7 -硝 基- 6 -甲 #1^-2， 3 -二氢 -1氢-茚 -5 -基) - 2 -氟苯甲酸。
b. 5- (7- ^-6-羟基-2， 3 -二氢 -1氢-茚 -5 -基) - 2 -氟 -苯甲酸氢溴 酸盐的合成：
Figure imgf000029_0001
将 5- (7-硝基- 6-甲氧基 -2,3-二氢- 1 氢-茚- 5-基)- 2-氟苯甲酸 (1.9 g， 5.74 mmol )溶解于 150 ml 乙醇和 50 ml水的混合溶液中， 加入还原铁粉 ( 1.54 g， 27.5隨 ol )和氯化铵 ( 1.49 g， 27.8mmol )， 80*€回流 2.5 h， TLC检测原料反应完全， 降至室温后过滤， 滤液减压 浓缩得目标产物 5-(7- ^-6 -甲 #1^-2， 3 -二氢 -1氢-茚 -5 -基) -2-氟- 苯甲酸（1.5 g， 产率 92%)。
将 5- (7-氨基- 6-甲氧基 -2,3-二氢- 1 氢-茚- 5-基)- 2-氟-苯甲酸 (0.57 g， 2 隨 ol)溶解于 15 ml氢溴酸溶液中 （浓度 40%)， 120 回 流 14h， TLC检测原料反应完全， 减压蒸出溶剂得 0.7 g褐色固体， 直 接进行下步反应。
c (Z) -5- (7- (2- (1- (3， 4一二甲基苯基)— 3 -甲基一5 -氧代一1， 5 -二氢 -吡唑- 4-亚基)肼基) - 6 -羟基 -2， 3 -二氢 -1H -茚满 -5 -基) - 2 -氟苯甲酸： 与实施例 1中所述类似的制备步骤， 以 5-(7- ^-6-羟基-2，3-二 氢- 1 氢-茚- 5-基）- 2-氟-苯甲酸氢溴酸盐为原料， 可以得到 (Z) - 5- (7- (2- (1- (3， 4-二甲基苯基) - 3-甲基- 5-氧代- 1， 5-二氢-吡唑 -4-亚基)肼基) - 6 -羟基 -2， 3 -二氢 -1H-茚满- 5 -基) -2-氟苯甲酸 (化合物 5， 产率 41%)。
-羅 (600MHz, DMS0-d6, δ ppm)： 13.84 (s， 1H), 13.03 (s， 1H), 9.37 (s， 1H), 8.07 (s， 1H), 7.83 (s， 1H), 7.77 (d, 1H， J = 7.8Hz) , 7.60 (dd, 1H) ， 7.45 (s， 1H), 7.24 (t， 1H), 7.09 (s， 1H), 2.92 (t， 2H)， 2.87 (t， 2H)， 2.29 (s， 3H)， 2.26 (s， 3H), 2.22 (s， 3H), 2.09 (m, 2H)。
ESI— MS (m/z)： [M+H]+ 501.2, [M-H]" 499.3e 实施例 6: (Z)- 5- (4- (2- (1- (3， 4-二甲基苯基) -3-甲基- 5-氧代 - 1， 5 -二氢 -吡唑 - 4-亚基)肼基) - 3 -羟基 -5， 6， 7， 8 -四氢萘- 2 -基) - 2 -氟 苯甲酸 (化合物 6)的合
Figure imgf000030_0001
化合物 6
与实施例 1中所述类似的制备步骤， 以 4-氟- 3- ^^苯硼酸和 4 -溴 - 6 -硝基 -2， 3-二氢- 5-茚醇为原料， 可以得到（Z) -5- (4- (2- (1- (3， 4 -二 甲基苯基)- 3-甲基- 5-氧代- 1,5-二氢-吡唑- 4-亚基）肼基) -3-羟基 - 5， 6, 7, 8-四氢萘 -2-基)- 2-氟苯甲酸 (化合物 6)。
ESI-MS (m/z)： [M+H]+ 501.2, [M-H]" 499.3β 实施例 7: (Ζ)- 5- (3- (2- (1- (3,4-二甲基苯基) -3-甲基- 5-氧代 - 1， 5-二氢-吡唑- 4-亚基)肼基) -2-羟基- 5， 6， 7， 8-四氢萘 -1-基)- 2 -氟 苯甲酸 (化合物 7)的合成
Figure imgf000030_0002
化合物 7
与实施例 1中所述类似的制备步骤， 以 4-氟- 3- ^^苯硼酸和 3 -溴 -1-硝 基 - 5， 6， 7， 8- 四 氢 萘 -2- 盼 为 原 料 ， 可 以 得 到 (Z) - 5- (3- (2- (1- (3， 4-二甲基苯基) - 3-甲基- 5-氧代- 1， 5-二氢-吡唑 -4-亚基)肼基) -2-羟基- 5， 6, 7, 8-四氢萘 -1-基)- 2-氟苯甲酸 (化合物 7)。
-羅 (600MHz, DMS0-d6, δ ppm)： 13.73 (s， 1H), 13.31 (s， 1H), 8.93 (s， 1H), 7.68 (s， 1H), 7.66 (d, 1H， J = 8.4Hz) , 7.62 (d, 1H， J = 8.4Hz) , 7.49 (Broad s, 1H), 7.42 (s， 1H), 7.40 (t， 1H), 7.18 (d, 1H, J = 8.4Hz) , 3.17 (m, 2H)， 2.77 (t， 2H)， 2.32 (s， 3H)， 2.25 (s， 3H), 2.22 (s， 3H), 1.68 (m, 2H)， 1.60 (m, 2H)。
ESI- MS (m/z)： [M+H]+ 515.3, [2Μ-ΗΓ 1027· 0。 实施例 8: (Z)- 5- (3- (2- (1- (3， 4-二甲基苯基) -3-甲基- 5-氧代 - 1， 5-二氢-吡唑- 4-亚基)肼基) -2-羟基- 5， 6， 7， 8-四氢萘 -1-基)- 2 -氟 苯甲酸 (化合物 8)的合
Figure imgf000031_0001
化合物 8
与实施例 1中所述类似的制备步骤， 以 4-氟- 3- ^^苯硼酸和 1- 溴- 3-硝基- 5， 6， 7， 8-四氢萘 -2-盼为原料， 可以得到
(Z)-5- (3- (2- (1- (3， 4-二甲基苯基) -3-甲基- 5-氧代- 1， 5-二氢-吡唑 -4-亚基)肼基) - 2-羟基- 5， 6, 7, 8-四氢萘 -1-基)- 2-氟苯甲酸 (化合物 8)。
ESI-MS (m/z)： [M+H]+ 515.3, [M-H]" 513.1β 实施例 9: (Ζ)- 3- (4- (2- (1- (3,4-二甲基苯基) -3-甲基- 5-氧代 - 1， 5-二氢-吡唑- 4-亚基)肼基) -3-羟基- 5， 6， 7， 8-四氢萘 -2-基)苯甲酸 (化合物 9)的合成：
Figure imgf000032_0001
化合物 9
与实施例 1中所述类似的制备步骤， 以 3- ^^苯硼酸和 3-溴- 1- 硝基- 5， 6， 7， 8-四氢萘 -2-盼为原料， 可以得到（Z)- 3- (4- (2- (1- (3， 4- 二甲基苯基) - 3-甲基- 5-氧代- 1， 5-二氢-吡唑- 4-亚基)肼基) -3-羟基 - 5， 6， 7， 8-四氢萘 -2-基)苯甲酸 (化合物 9)。
-羅 (600MHz, DMS0-d6, δ ppm)： 13.74 (s， 1H), 13.13 (s， 1H), 8.86 (s， 1H), 7.96 (d, 1H， J = 7.2Hz) , 7.76 (s， 1H), 7.68 (s， 1H), 7.62 (d, 1H， J = 7.2Hz) , 7.60 (d, 1H， J = 7.8Hz) , 7.48 (d, 1H， J = 7.2Hz) , 7.43 (s， 1H), 7.18 (d, 1H, J = 7.8Hz) , 2.78 (t， 2H)， 2.33 (s， 3H)， 2.25 (s， 3H), 2.22 (s， 3H) , 2.20 (m, 2H)， 1.69 (m, 2H)， 1.60 (m, 2H)。
ESI- MS (m/z)： [M+H]+ 497.3, [M-H]" 495.6e 实施例 10: (Z)- 3- (3- (2- (1- (3， 4-二甲基苯基) -3-甲基- 5-氧代 - 1， 5-二氢-吡唑- 4-亚基)肼基) -2-羟基- 5， 6， 7， 8-四氢萘 -1-基)苯甲酸 (化合物 10)的合成
Figure imgf000032_0002
化合物 10 与实施例 1中所述类似的制备步骤， 以 3- ^^苯硼酸和 1-溴- 3 -硝 基- 5， 6， 7， 8-四氢萘 -2-盼为原料，可以得到（Z) - 3- (3- (2- (1- (3， 4-二甲 基苯基）-3-甲基- 5-氧代- 1, 5-二氢-吡唑- 4-亚基）肼基） -2-羟基 - 5， 6， 7， 8-四氢萘 -1-基)苯甲酸 (化合物 10)。
ESI-MS (m/z)： [M+H] + 497. 3, [M-H] " 495. 6β 实施例 11: (Ζ) -3- (7- (2- (1- (3乙炔基苯基) - 3 -甲基 -5 -氧代 - 1，5- 二氢-吡唑- 4-亚基)肼基) -6-羟基- 2， 3-二氢- 1H-茚满- 5-基)苯甲酸 (化 合物 11)的合成：
Figure imgf000033_0001
化合物 11
与实施例 1中所述类似的制备步骤， 以 3- ^^苯硼酸和 3- ^苯 乙炔为原料， 可以得到（Ζ) - 3- (7- (2- (1- (3-乙炔基苯基) -3-甲基- 5 -氧 代- 1， 5-二氢-吡唑- 4-亚基)肼基) - 6 -羟基 -2， 3 -二氢 -1H -茚满 -5 -基)苯 甲酸 (化合物 11)。
ESI-MS (m/z)： [M+H] + 479. 2, [M-H] " 477. 3β 实施例 12: (Ζ) -3- (7- (2- (1- (3乙炔基苯基) - 3 -甲基 -5 -氧代 - 1，5- 二氢-吡唑- 4-亚基)肼基) -5-羟基- 2， 3-二氢- 1H-茚满- 4-基)苯甲酸 (化 合物 12)的合成：
Figure imgf000034_0001
化合物 12
与实施例 1中所述类似的制备步骤， 以 4 -溴- 6 -硝基 -2， 3-二氢- 5- 茚醇、 3- 苯硼酸和 3- ^苯乙炔为原料， 可以得到
(Z) -3- (7— (2— (1— (3乙^^苯基)— 3 -甲基一5 -氧代一1， 5-二氢一吡唑一 4一 亚基)肼基) - 5 -羟基 -2， 3 -二氢 -1H -茚满 -4 -基)苯甲酸 (化合物 12)。
ESI-MS (m/z)： [M+H] + 479. 2, [M-H] " 477. 3β 实施例 13: (Ζ) - 3- (7- (2- (1- (2, 3-二氢- 1-茚满- 5-基) - 3-甲基- 5- 氧代- 1， 5-二氢-吡唑- 4-亚基)肼基) -6-羟基- 2， 3-二氢- 1-茚满- 5 -基) 苯甲酸（化合物 13 ):
Figure imgf000034_0002
化合物 13 a. 3- (7-硝基- 6-甲氧基 -2, 3-二氢- 1氢-茚 -5-基)苯甲酸的合成:
B「 COOH
,OCH, 丄 Pd(PPh3)4
B -O, Na2CO:
Figure imgf000034_0003
取 6 -溴- 4 -硝基- 5 -甲氧基- 2， 3-二氢茚 （1.36 g， 5 隨 ol )、 3 -羧 基苯硼酸频那醇酯（2.0 g， 8 m mol)在 20 ml 1,4-二氧六环中混合 均匀， 加入 4 ml碳酸钠水溶液（浓度 2 mol/L)。 氮气置换 3次后， 再 向其中加入四三苯基膦钯 ( 0.36 g， 0.31 m mol )， 氮气保护下， 105 加热回流， 反应 28h， TLC检测原料反应完全。 80 减压浓缩后， 加入 100 ml 盐酸溶液（3 N浓度）， 100ml 乙酸乙酯萃取 3次， 合并乙酸乙 酯层， 无 酸钠干燥， 柱层析得 3-（6 -甲 #1^-7 -硝基- 2， 3 -二氢 -1 氢-茚 -5-基）苯甲酸（1.01 g， 产率 65%)。
b. 3- (7- 6-羟基- 2， 3-二氢- 1氢-茚- 5-基)苯甲酸氢溴酸盐的
Figure imgf000035_0001
与实施例 1 中类似的方法， 从 3-（6-甲#1^-7-硝基-2，3-二氢-1 氢-茚 -5 -基）苯甲酸可以定量产率得到 3-(7- ^-6-羟基-2， 3 -二氢 -1 氢-茚 -5-基)苯甲酸氢溴酸盐。
c 1- (2， 3-二氢- 1H-茚- 5-基)- 3-甲基- 1氢-吡唑- 5 (4氢）酮的合
Figure imgf000035_0002
将 2， 3 -二氢 -1H -茚- 5胺（ 13.3 g， 0.1 mol )在 50 ml 浓盐酸和 20ml水中混合均匀， 降温至 以下，； W¾搅拌下， 向其中滴加亚硝酸 钠的水溶液（ 7.6 g， 0.11 mol )， 维持反应温度在 ΟΓ, 继续搅拌 0.5 h， 再向其中加入氯化亚锡（56.5 g， 0.25 mol) 的浓盐酸溶液（20 ml ), 自然升至室温， TLC监测原料反应完全。抽滤，滤饼干燥得 2， 3-二氢 - 1H- 茚- 5-肼盐酸盐 (13.0 g)e 将 2， 3 -二氢 -1H -茚- 5 -肼盐酸盐 (9.2 g, 50 mmol )， 溶解于 100 ml 冰乙酸中， 加入乙酰乙酸乙酯（6.5 g， 50 m mol)和醋酸钠 (4.1 g， 50 m mol), 120 回流反应 7 h， TLC检测原料反应完全。 减压蒸出冰 乙酸， 加入 100 ml水， 100ml 乙酸乙酯萃取 4次， 乙酸乙酯层无水硫 酸钠干燥，减压浓缩后得 1- (2， 3-二氢- 1H-茚- 5-基)- 3-甲基- 1氢-吡唑 - 5 (4氢）酮 （8.6 g， 产率 80%)
d. (Z)- 3- (7- (2- (1- (2， 3-二氢- 1-茚满- 5-基）- 3-甲基- 5-氧代 - 1， 5-二氢-吡唑- 4-亚基)肼基) -6-羟基- 2， 3-二氢- 1-茚满- 5-基)苯甲 酸（化合物 13) 的合成：
Figure imgf000036_0001
化合物 13
与实施例 1 中类似的方法， 以 1- (2,3-二氢- 1H-茚- 5-基)- 3-甲基 - 1氢-吡唑- 5 ( 4氢）酮和 3-（7- ^-6 -羟基 -2， 3 -二氢 -1氢-茚 -5 -基） 苯甲酸氢溴酸盐为原料可以得到（Z)- 3- (7- (2- (1- (2， 3-二氢- 1-茚满 - 5 -基) - 3 -甲基 -5 -氧代 -1， 5-二氢-吡唑- 4-亚基)肼基) - 6 -羟基 -2， 3 -二 氢- 1-茚满- 5-基)苯甲酸（化合物 13， 产率 57%)。
-羅 (600MHz, DMS0-d6, δ ppm)： 13.84 (s， 1H), 13.32 (s， 1H), 9.36 (s， 1H), 8.12 (s， 1H), 7.93 (d, 1H， J = 7.8Hz) , 7.78 (s， 1H), 7.79 (d, 1H， J = 7.8Hz) , 7.67 (d, 1H， J = 8.4Hz) , 7.59 (t， 1H), 7.27 (d, 1H， J = 8.4Hz) , 7.05 (s， 1H), 3.29 (t， 2H)， 2.88 (m, 6H), 2.29 (s， 3H), 2.08 (m, 2H)， 2.04 (m， 2H)。
ESI— MS (m/z)： [M+H] +495.6, [M-H]" 493.6e 实施例 14: (Z)- 3- (4- (2- (1- (2，3-二氢- 1H-茚- 5-基)- 3-甲基- 5- 氧代- 1， 5-二氢-吡唑- 4-亚基)肼基) - 3 -羟基 -5， 6， 7， 8 -四氢萘- 2 -基)苯 甲酸 (化合物 14)的合成：
Figure imgf000037_0001
化合物 14
与化合物 13 的制备类似的方法， 以 7-溴- 6-甲氧基 -5-硝基 1,2, 3,4-四氢萘为原料， 可以得到（Z)- 3- (4- (2- (1- (2， 3-二氢- 1H -茚 - 5 -基） -3-甲基- 5-氧代- 1,5-二氢-吡唑- 4-亚基）肼基） -3-羟基 - 5， 6， 7， 8-四氢萘 -2-基)苯甲酸 (化合物 14)。
-羅 (600MHz, DMS0-d6, δ ppm)： 13.72 (s， 1H), 13.01 (s， 1H), 8.85 (s， 1H), 7.97 (d, 1H， J = 7.8Hz) , 7.77 (s， 1H), 7.75 (s， 1H), 7.65 (d, 1H， J = 8.4Hz) , 7.60 (t， 1H), 7.48 (d, 1H， J = 7.8Hz) , 7.42 (s， 1H), 7.25 (s， 1H), 2.89 (t， 2H)， 2.86 (t， 2H)， 2.77 (m, 2H)， 2.32 (s， 3H), 2.20 (m, 2H)， 2.02 (m， 2H)， 1.68 (m, 2H)， 1.59 (m, 2H)。
ESI— MS (m/z)： [M+H]+509.3, [M-H]" 507.6 β 实施例 15: (Z)- 5- (7- (2- (1- (2， 3-二氢- 1-茚满- 5-基)- 3-甲基- 5- 氧代- 1， 5-二氢-吡唑- 4-亚基）肼基） -6-羟基- 2， 3-二氢- 1-茚满- 4- 基)- 2-氟苯甲酸 (化合物 15)的合成
Figure imgf000038_0001
化合物 15
与化合物 5的制备类似的方法， 以 2， 3 -二氢 -1 -氢茚 -5 -胺为原料， 可以得到（Z)-5-(7-(2-(l-(2， 3 -二氢 -1 -茚满 -5 -基) - 3 -甲基 -5 -氧代 -1, 5-二氢-吡唑- 4-亚基)肼基) - 6 -羟基 -2， 3 -二氢 -1 -茚满 -4 -基) - 2 -氟 苯甲酸 (化合物 15)。
-羅 (600MHz, DMS0-d6, δ ppm)： 13.82 (s， 1H), 13.32 (s， 1H), 9.37 (s， 1H), 8.02 (s， 1H), 7.76 (s， 1H), 7.68 (d, 1H， J = 7.2Hz) , 7.76 (s， 1H), 7.68 (s， 1H), 7.40 (m, 1H), 7.27 (m, 1H), 7.02 (s， 1H), 3.27 (m, 2H)， 2.88 (m, 6H), 2.28 (s， 3H), 2.04 (m， 4H)。
ESI— MS (m/z)： [M+H]+ 513.3, [M-H]" 511.5e 实施例 16: (Z)- 5- (6- (2- (1- (2， 3-二氢- 1-茚满- 5-基)- 3-甲基- 5- 氧代- 1， 5-二氢-吡唑- 4-亚基）肼基) -5-羟基- 2， 3-二氢- 1-茚满- 4- 基)- 2-氟苯甲酸 (化合 16)的合成
Figure imgf000038_0002
化合物 16
与化合物 5的合成类似的方法， 以 2， 3-二氢- 1-氢茚- 5-胺和 4 -溴 - 6 -硝基 -2， 3-二氢- 5-茚醇为原料， 可以得到（Z) -5- (6- (2- (1- (2， 3 -二 氢-: l-茚满- 5-基) - 3-甲基- 5-氧代- 1， 5-二氢-吡唑- 4-亚基)肼基) -5 -羟 基- 2， 3 -二氢 -1 -茚满 -4 -基) -2 -氟苯甲酸 (化合物 16)。
ESI-MS (m/z)： [M+H]+ 513.3, [M-H]" 511.5β 实施例 17: (Ζ)- 5- (4- (2- (1- (3,4-二甲基苯基) -3-甲基- 5-氧代 - 1， 5-二氢-吡唑- 4-亚基)肼基) -3-羟基- 5， 6， 7， 8-四氢萘 -2-基)-呋喃 - 2 -甲酸 (化合物 17)的合成
Figure imgf000039_0001
化合物 17
a. 5- (3-苄氧基 -4-硝基- 5， 6， 7， 8-四氢萘 -2-基） -呋喃 -2-甲酸的
Figure imgf000039_0002
将 3-溴- 1-硝基- 5， 6， 7， 8-四氢萘 -2-盼 (3.5 g， 12.86 m mol )在 50 ml乙腈和 5 ml DMF中混合均匀， 加入 K2C03 ( 4· 44 g， 32.16 m mol), N2置换空气 3 次， 再向反应液中加入氯苄（1.8 g， 14.15 m mol), 2 保护下， 油浴 83 反应。 TLC跟踪检测至原料 3-溴- 1-硝基- 5， 6， 7, 8- 四氢萘 -2-盼完全反应完全， 减压蒸出乙腈后， 加入饱和 NH 1 7J溶液 100 ml,过滤，滤饼水洗数次，干燥得 6 -苄氧基- 7 -溴- 5 -硝基 -1， 2， 3, 4- 四氢萘 (3.8g, 产率 81.5%)。
6 -苄 -溴- 5 -硝基 -1， 2， 3， 4-四氢萘 (1.13 g， 3.12 m mol)， 5 -醛基呋喃- 2-硼酸（ 873 mg， 6.24mmol), Na2C03 (992 mg, 9.16mmol) 在甲苯（40 ml), 无水乙醇（40 ml)和水（40 ml) 的混合溶液中混合 均匀， N2置换空气 3次， 加入 Pd(dppf)Cl2 (184 mg, 0.25 隨 ol )， 2 保护下， 油浴 80 反应。 TLC 跟踪至原料 6-苄氧基 -7-溴- 5-硝基 - 1， 2， 3， 4-四氢萘反应完全， 加入 100 ml乙酸乙酯萃取， 并用无水硫酸 钠干燥有 W«， 减压浓缩后柱层析得 5- (3-苄氧基 -4-硝基- 5， 6， 7， 8 -四 氢萘- 2-基） -呋喃 -2-甲醛（ 794 mg, 产率 72.0%)。
b. 5- (4- 3-羟基- 5， 6， 7， 8-四氢萘 -2-基） -呋喃 -2-甲酸的合 成：
Figure imgf000040_0001
将 5- (3-苄氧基 -4-硝基- 5， 6， 7， 8-四氢萘 -2-基） -呋喃 -2-甲醛 (7.94 g， 21 m mol)溶于 100 ml 的 NaOH (浓度 10% )水溶液中， 加入 AgN03 ( 3.58 g， 21 m mol), 升温至 60 *€， 搅拌反应 4 h， LC- MS检 测反应完成， 过滤， 滤液用 3 N HC1调 pH值 2左右， 等量乙酸乙酯萃 取， 无水硫酸钠干燥有机相， 减压蒸除溶剂得 5- (3-苄氧基 -4-硝基 - 5， 6， 7， 8-四氢萘 -2-基） -呋喃 -2-甲酸（6.45 g， 77.9%产率）。
将 5- (3-苄氧基 -4-硝基- 5， 6， 7， 8-四氢萘 -2-基） -呋喃 -2-甲酸 (1.9 g， 4.83 m mol )溶解于 500 ml 乙酸乙酯中， 加入到 2L的高压 反应釜中， 加入 10%的 Pd/C， 氢气置换， 1. OMpa的压力下， 进行室温 催化加氢， 反应 18 h后， LC- MS监测反应完全， 过滤， 滤液减压蒸干 得 5- (4- 3-羟基- 5， 6， 7， 8-四氢萘 -2-基） -呋喃 -2-甲酸粗品（ 1.0 g， 产率 56.8%)。 直接进行下步反应。
c (Z) -5- (4- (2- (1- (3， 4-二甲基苯基) - 3 -甲基 -5 -氧代 -1， 5 -二氢 -吡唑 -4-亚基)肼基) -3-羟基- 5， 6， 7， 8-四氢萘 -2-基) -呋喃 -2-甲酸 (化 合物 17)的合成：
Figure imgf000041_0001
5-（4- 3-羟基- 5， 6， 7， 8-四氢萘 -2-基） -呋喃 -2-甲酸（ 600 mg， 2· 20 mmol )溶于 40 ml 盐酸（ 1 mol/L )溶液中， 降温至 以下， 向 其中緩慢滴加 NaN02 (182 mg， 2.63 m mol) 的 40 ml 7j溶液， 滴毕， 保温反应 30 min, TLC检测原料消失， 再向反应液中加入 1- ( 3， 4 -二 甲基苯基） - 3-甲基- 1氢吡咯- 5-（4氢）酮 （ 533 mg, 2.63 m mol )， 15 min后用饱和的碳酸氢钠溶液调 pH 8左右， 加入 40 ml无水乙醇， 自 然升至室温反应。 24 h后 LC- MS检测原料反应完全。 过滤， 滤饼水混 悬， 调 PH 5 左右， 再过滤， 滤饼干燥后柱层析得目标产物 (Z) - 5- (4- (2- (1- (3， 4-二甲基苯基) - 3-甲基- 5-氧代- 1， 5-二氢-吡唑 -4-亚基)肼基) - 3-羟基- 5， 6, 7, 8-四氢萘 -2-基)-呋喃- 2-甲酸 (化合物 17) (190 mg, 产率 17.8%)。
-羅 (600MHz, DMS0-d6, δ ppm)： 13.70 (s， 1H), 13.06 (s， 1H), 9.56 (s， 1H), 7.69 (s， 1H), 7.62 (d, 1H， J = 7.8Hz) , 7.48 (s， 1H), 7.34 (d, 1H， J = 3.0Hz) , 7.19 (d, 1H， J = 8.4Hz) , 6.72 (d, 1H， J = 3.0Hz) , 2.77 (m, 2H)， 2.45 (t， 2H) , 2.32 (s， 3H)， 2.26 (s， 3H), 2.22 (s， 3H), 1.70 (m, 2H)， 1.65 (m， 2H)。
ESI- MS (m/z)： [M-H] " 485.3。 实施例 18: (Z)- 5- (3- (2- (1- (3， 4-二甲基苯基) -3-甲基- 5-氧代 - 1， 5-二氢-吡唑- 4-亚基)肼基) -2-羟基- 5， 6， 7， 8-四氢萘 -1-基)-呋喃 - 2 -甲酸 (化合物 18)的合成
Figure imgf000042_0001
化合物 18
a. 5- (2-甲氧基 -3-硝基- 5， 6， 7， 8-四氢萘 -2-基） -呋喃 -2-甲酸的 合成:
Figure imgf000042_0002
5 -溴— 6 -甲 #1^—7 -硝基一1， 2， 3， 4一四氢萘 ( 6. 0 g， 20. 97 m mol )， 5 -醛基呋喃- 2 -硼酸（ 5. 87 g， 41. 94 m mol )， Na2C03 (6. 67 g， 62. 91 m mol)， 在甲苯（ 80 ml )， 无水乙醇（ 80 ml )和水（ 80 ml ) 的混合溶液 中混合均匀， N2置换 3次， 加入醋酸钯（ 377 mg， 1. 68 m mol )和配体 2 -双环己基膦 -2'，6' -二甲 苯（ 1. 377 g， 3. 36 mmol ), N2保护下， 油浴 80 反应。 TLC跟踪检测至原料 5 -溴- 6 -甲 #1^-7 -硝基 -1， 2， 3, 4- 四氢萘反应完全， 乙酸乙酯萃取， 无水硫酸钠干燥有机相， 柱层析得 5-（2-甲氧基 -3 -硝基 -5， 6， 7， 8 -四氢萘- 2 -基） -呋喃 -2 -醛（ 5. 338 g， 产率 84. 5% )。
5-（2-甲氧基 -3-硝基- 5， 6, 7, 8-四氢萘 -2-基） -呋喃 -2-醛（2. 408 g， 7. 99 m mol)溶于 20 ml 10%的 NaOH水溶液中， 加入 AgN03 ( 1· 36 g， 7. 99 m mol ), 升温至 60 ， 4 h后， LC- MS检测反应完全， 过滤， 滤 液用 lmol的 HCl调 pH值 2左右，过滤得 5- (2-甲氧基 -3-硝基- 5， 6, 7, 8- 四氢萘 -2-基） -呋喃 -2-甲酸（2. 11 g， 产率 83. 1 % )。
b. 5- (2-羟基- 3- 5， 6， 7， 8-四氢萘 -2-基） -呋喃 -2-甲酸的合 成：
Figure imgf000043_0001
将 5- (2-甲氧基 -3-硝基- 5， 6， 7， 8-四氢萘 -2-基） -呋喃 -2-甲酸 (1. 02 g, 3. 2 m mol)溶于 15 ml无水乙醇中， 室温滴加氯化亚锡（ 2. 13 g， 11. 2 m mol ) 的浓盐酸溶液， TLC跟踪检测至反应完全。 减压浓缩， 6mol/L的 NaOH溶液调 pH 10左右， 过滤， 滤液用 6mol/L的 HC1溶液 调 pH值 5左右， 有大量固体析出， 过滤干燥得 5- (2-甲 ¾^-3- J^ - 5， 6， 7， 8-四氢萘 -2-基） -呋喃 -2-甲酸（ 850 mg, 92. 0%产率）。
N2保护下， 将 5- (2-甲氧基 -3- 5， 6， 7， 8-四氢萘 -2-基） -呋喃 - 2 -甲酸（ 1. 22 g， 4. 25 m mol )溶于干燥的二氯甲烷（ 30 ml ) 中， 降 温至- 78 ， 将三溴化硼（2 ml , 21. 25 m mol )緩慢滴 应体系中， 完全滴完后自然升至室温。 LC- MS 检测原料 5- (2-甲氧基 -3-氨基 - 5， 6， 7， 8-四氢萘 -2-基） -呋喃 -2-甲酸消失， 加入 4 ml甲醇淬灭， 蒸 除溶剂，加入 30 ml水，用 6mol/L的 NaOH调 pH值 10左右，再用 6mol/L 的 HC1调 pH值 5左右，过滤得 5- (2-羟基- 3- 5， 6, 7, 8-四氢萘- 2- 基) -呋喃 -2-甲酸（1. 1 g， 产率 95. 0% )。
c (Z) -5- (3- (2- (1- (3， 4一二甲基苯基)— 3 -甲基一5 -氧代一1， 5 -二氢 -吡唑 -4-亚基)肼基) -2-羟基- 5， 6， 7， 8-四氢萘 -1-基) -呋喃 -2-甲酸 (化
Figure imgf000043_0002
将 5- (2-羟基- 3- 5， 6， 7， 8-四氢萘 -2-基） -呋喃 -2-甲酸（ 1. 0 g， 3.66 m mol ), 溶于 40 ml lmol/1 的 HC1溶液中， 降温至 以下， 向其中緩慢滴加 NaNO2 (303 mg, 4.39 m mol)的 40 ml 7j溶液； 滴毕， 维持该反应温度继续反应 30 min, TLC 跟踪原料 5- (2-羟基- 3-氛基 - 5， 6， 7， 8-四氢萘 -2-基） -呋喃 -2-甲酸反应完全。 加入 1- (3,4-二甲 基苯基）- 3 -甲基 -1氢吡咯- 5-（4氢）酮（ 740mg， 3.66 m mol), 15 min 后用饱和的碳酸氢钠溶液调 pH 8左右， 加入 40 ml无水乙醇， 自然升 至室温反应。 24 h后 LC- MS检测原料反应完全。 过滤， 滤饼用水混悬， 调 PH 值 5 左右， 再过滤， 滤饼干燥后柱层析得目标产物 (Z) - 5- (3- (2- (1- (3， 4-二甲基苯基) - 3-甲基- 5-氧代- 1， 5-二氢-吡唑 -4-亚基)肼基) - 2-羟基- 5， 6, 7, 8-四氢萘 -1-基)-呋喃- 2-甲酸 (化合物 18) (192 mg, 产率 10.8%)。
-羅 (600MHz, DMS0-d6, δ ppm)： 13.70 (s， 1H), 13.05 (s， 1H), 9.55 (s， 1H), 7.68 (s， 1H), 7.62 (d, 1H， J = 7.8Hz) , 7.48 (s， 1H), 7.34 (d, 1H， J = 3.0Hz) , 7.19 (d, 1H， J = 7.8Hz) , 6.72 (d, 1H， J = 3.0Hz) , 2.75 (m， 2H)， 2.45 (t， 2H)， 2.31 (s， 3H)， 2.26 (s， 3H), 2.22 (s， 3H), 1.70 (m, 2H)， 1.65 (m， 2H)。
ESI- MS (m/z)： [M+H]+ 487.2, [M-H]" 485.3e 实施例 19: (Z)- 5- (7- (2- (1- (3， 4-二甲基苯基) -3-甲基- 5-氧代 - 1， 5-二氢-吡唑- 4-亚基)肼基) -6-羟基- 2， 3-二氢- 1H-茚满- 5-基) -呋 喃- 2-甲酸 (化合物 19)的合
Figure imgf000044_0001
化合物 19 与化合物 17类似的合成方法， 以 6-溴- 4-硝基- 2， 3-二氢- 1氢茚 - 5 -醇为原料，可以得到（Z)- 5- (7- (2- (1- (3， 4-二甲基苯基) -3-甲基- 5- 氧代- 1， 5-二氢-吡唑- 4-亚基）肼基) -6-羟基- 2， 3-二氢- 1 H-茚满 -5- 基)-呋喃- 2-甲酸（化合物 19 )。
-羅 (600MHz, DMS0-d6, δ ppm)： 13.75 (s， 1H), 13.07 (s， 1H), 9.65 (s， 1H), 7.68 (s， 1H), 7.62 (d, 1H， J = 7.2Hz) , 7.39 (s， 1H), 7.32 (d, 1H， J = 2.4Hz) , 7.16 (d, 1H， J = 7.8Hz) , 7.07 (d, 1H， J = 2.4Hz) , 3.18 (m, 2H)， 2.85 (t， 2H)， 2.24 (s， 3H)， 2.22 (s， 3H), 2.20 (s， 3H), 2.06 (m, 2H)。
ESI— MS (m/z)： [M+H] + 473.3。 实施例 20: (Z)- 5- (6- (2- (1- (3， 4-二甲基苯基) -3-甲基- 5-氧代 - 1， 5-二氢-吡唑- 4-亚基)肼基) -5-羟基- 2， 3-二氢- 1H-茚满- 4-基） -呋 喃- 2-甲酸 (化合物 20)
Figure imgf000045_0001
化合物 20
与化合物 17类似的合成方法， 以 4-溴- 6-硝基- 2， 3-二氢- 1氢茚 - 5 -醇为原料，可以得到（Z)- 5- (6- (2- (1- (3， 4-二甲基苯基) -3-甲基- 5- 氧代- 1， 5-二氢-吡唑- 4-亚基)肼基) - 5 -羟基 -2， 3 -二氢 -1H -茚满 -4 -基） -呋喃 -2-甲酸 (化合物 20)。
ESI-MS (m/z)： [M+H]+ 473.3, [M-H]" 471.5β 实施例 21: (Ζ)-4-(2- (6-(3-(2Η -四唑 -5 -基)苯基) - 5 -羟基 -2，3- 二氢- 1H-茚满- 4-基)肼叉) -1- (3， 4-二甲苯基)- 3-甲基- 1氢-吡唑- 5 ( 4 氢） -酮（化合物 21)的合成
Figure imgf000046_0001
化合物 21
a. 5- (3-溴苯基） - -四唑的合成:
Figure imgf000046_0002
在氮气保护下， 在 100ml的圆地烧瓶中将 3-溴苯甲腈（3. 6g， 20 m mol )溶于 20ml的 DMF中， 然后向该体系加入 1. 43g叠氮钠和 1. 2g氯 化铵。 将该反应液加热到 100 反应 3小时， 冷却到室温后倒入 20ml 冰水中， 然后加入 0. 4 ml浓盐酸， 有白色固体析出， 将该固体滤出， 干燥得 3. 2g产品（产率 72% )。
b. 2- ( 6- (苄 )一 7 -硝基一2， 3 -二氢—1H -茚一 5 -基 )—4， 4， 5, 5- 四甲基 -1， 3， 2-二氧硼酸酯的合
Figure imgf000046_0003
在 100ml的圆底烧瓶中， 将 5- (苄氧基 ) -6-溴- 4-硝基- 2， 3-二氢 - 1H-茚（4. 2g， 12. 1 m mol )溶于 50ml的乙二醇二甲醚，然后加入 4. 95g 双联频那醇硼酸酯，氮气置换三次，加入 0. 765g四三苯基磷钯和 3. 15g 醋酸钾， 然后搅拌加热到 80 反应 8 小时， 冷却到室温， 加入 100ml 乙酸乙酯， 用饱和的食盐水洗涤三次， 无水硫酸钠干燥， 减压浓缩后， 快速硅胶柱层析（ V ^ : V 乙酸乙8旨=10： 1 )， 得到目标产物 2- ( 6- (苄氧 基） - 7 -硝基 -2， 3 -二氢 -1H -茚- 5 -基） -4， 4， 5， 5 -四甲基- 1， 3， 2-二氧硼 酸酯（4. 5g， 产率 94% )。
c 5- ( 3- ( 6- (苄 - 7 -硝基一2， 3 -二氢—1H -茚一 5 -基）苯基） - 1H-四唑的合成：
Figure imgf000047_0001
在 100ml 圆底烧瓶中，将 2-（ 6-（苄 ) - 7 -硝基 -2， 3-二氢- 1H- 茚- 5 -基） -4， 4， 5， 5 -四甲基- 1, 3， 2 -二氧硼酸酯（4. 5g，）溶于 50ml 的 1, 4-二氧六环和 25 ml 水中， 加入 2. 3g 5- (3-溴苯基） - 1H-四唑， 氮 气置换三次， 加入 0. 37g Pd (dppf) C12 和 3. 27g碳酸钠。 再次氮气置 换， 然后氮气保护下加热到 反应 5h， 将反应液冷却到室温， 用 100 ml 的乙酸乙酯稀释， 然后饱和食盐水洗涤三次， 有机层用无水硫 酸钠干燥， 过滤， 滤液蒸出溶剂， 快速柱层析分离得到灰色固体 5- ( 3- ( 6 -(苄 #U0-7 -硝基 -2， 3 -二氢 -1H -茚- 5 -基）苯基） - 1H -四唑（ 2. 5g， 产率 59% )。
d. (Z) -4- (2— (6- (3- (2H -四唑一5 -基)苯基)一 5 -羟基一2， 3-二氢一 1H— 茚满- 4-基)肼叉) -1- (3, 4-二甲苯基) - 3-甲基- 1氢-吡唑- 5 ( 4氢） -酮 (化合物 21)的合成：
Figure imgf000047_0002
与化合物 17类似的合成方法， 以 5- ( 3- ( 6- (苄氧基） -7-硝基 - 2,3-二氢- 1H-茚- 5-基）苯基） -1H-四唑为原料， 先经还原脱苄， 再与 1- (3,4-二甲基苯基） - 3-甲基- 1 氢吡咯 -5- (4 氢） 酮反应可以得到 (Z) - 4- (2- (6- (3- (2H -四唑 -5 -基)苯基) - 5 -羟基 -2， 3-二氢- 1H-茚满- 4- 基)肼叉) -1- (3,4-二甲苯基)- 3-甲基- 1氢-吡唑- 5 (4氢） -酮 (化合物 21)。
ESI-MS (m/z)： [M+H]+ 431.3; [M-H]" 429.2β 实施例 22: (Ζ) -4- (2— (7- (3- (2Η -四唑一5 -基)苯基)一 6 -羟基一2， 3- 二氢- 1H-茚满- 5-基)肼叉) -1- (3， 4-二甲苯基)- 3-甲基- 1氢-吡唑- 5 ( 4 氢） -酮（化合物 22)的
Figure imgf000048_0001
化合物 22
与化合物 21类似的合成方法， 以 5- (苄氧基 ) - 4 -溴- 6 -硝基 -2， 3- 二氢- 1H-茚为原料， 可以得到（Ζ)- 4- (2- (7- (3- (2Η-四唑- 5-基）苯 基)- 6 -羟基 -2， 3 -二氢 -1H -茚满 -5 -基)肼叉) -1-（3， 4 -二甲苯基) - 3 -甲 基- 1氢-吡唑- 5 ( 4氢） -酮（化合物 22)。
ESI-MS (m/z)： [M+H]+ 431.3; [M-H]" 429.2β 实施例 23: (Ζ)- 5- (7- (2- (1- (3,4-二甲基苯基) -3-甲基- 5-氧代 - 1， 5-二氢-吡唑- 4-亚基)肼基) -6-羟基- 2， 3-二氢- 1H-茚满- 5-基) -噻 唑- 5-甲酸 (化合物 23)的合成
Figure imgf000049_0001
化合物 23
与化合物 21类似的合成方法， 以 2-溴噻唑 -5-甲酸为原料， 可以 得到（Z) - 5- (7- (2- (1- (3， 4-二甲基苯基) -3-甲基- 5-氧代- 1， 5-二氢-吡 唑- 4-亚基)肼基) -6-羟基- 2， 3-二氢- 1H-茚满- 5-基) -噻唑 -5-甲酸 (化 合物 23)。
ESI-MS (m/z)： [M-H] " 488. 3。 实施例 24: (Z) - 5- (6- (2- (1- (3, 4-二甲基苯基) -3-甲基- 5-氧代 - 1， 5-二氢-吡唑- 4-亚基)肼基) -5-羟基- 2， 3-二氢- 1H-茚满- 4-基） - 噻唑- 5-甲酸 (化合物 2
Figure imgf000049_0002
化合物 24
与化合物 21类似的合成方法， 以 2-溴噻唑 -5-甲酸和 5- (苄氧基 ) - 4 -溴- 6 -硝基 -2， 3 -二氢 -1H -茚为原料， 可以得到
(Z) -5- (6— (2— (1— (3， 4一二甲基苯基)一 3 -甲基一5 -氧代一1， 5 -二氢一吡唑 -4-亚基)肼基) - 5 -羟基 -2， 3 -二氢 -1H -茚满 -4 -基） -噻唑- 5 -甲酸 (化 合物 24)。
ESI-MS (m/z)： [M-H] " 488. 3。 实施例 25: (Z) -5- (4- (2- (1- (2， 3-二氢- 1-氢茚- 5-基) - 3-甲基- 5- 氧代- 1， 5-二氢-吡唑- 4-亚基）肼基） -3-羟基- 5， 6， 7， 8-四氢萘- 2- 基) - 2-氟苯甲酸 (化合物 25)
Figure imgf000050_0001
化合物 25
与化合物 5的合成类似的方法， 以 2， 3 -二氢 -1 -氢茚 -5 -胺和 3 -溴 -1- 硝 基 - 5， 6， 7， 8- 四 氢 萘 -2- 醇 为 原 料 ， 可 以 得 到 (Z) -5- (4- (2- (l- (2, 3 -二氢 - 1 -氢茚 -5 -基) - 3 -甲基 -5 -氧代 -1， 5 -二氢- 吡唑- 4-亚基)肼基) -3-羟基- 5， 6, 7, 8-四氢萘 -2-基) - 2-氟苯甲酸 (化合 物 25)。
ESI-MS (m/z)： [M+H] + 527. 3, [M-H] " 525. 1β 实施例 26: 生物学活性试验
通过以下试验来测定本发明所述化合物在体外对稳转 TP0 受体的 细胞 32D- MPL促增殖作用， 以及对体内裸鼠中空纤维管模型上的促细 胞增殖作用。
稳转 TP0受体的 32D- MPL细胞， 是特异性依赖 TP0才能增殖的， 当没有 TP0维持时， 32D-MPL细胞会发生凋亡， 从生物学角度来说， 一个化合物如果能够替代 TP0维持细胞的增殖， 该化合物即为 TP0受 体的激动剂。 例如参见 Kim M-J, Park SH, Opel la SJ et al. NMR structural studies of interactions of a smal l, nonpeptidyl Tpo mimic with the thrombopoietin receptor extracel lular juxtamembrane and transmembrane domains. J Biol Chem 2007; 282: 14253—14261。
试验样品： 实施例 1-25合成的化合物 1-25。
阳性对照药物： 3' - { (2Z) - 2- [1- (3， 4-二甲苯基) - 3-甲基- 5 -氧 代- 1， 5-二氢- 4H-吡唑- 4-亚基]肼基 } - 2' -羟基 -3-联苯基甲酸）， 亦 如下式所示：
Figure imgf000051_0001
阳性对照药物
A) 药物体外对稳转 TP0受体的 32D- MPL细胞促增殖作用
该试验可以参考 Takanori Nakamura等描述的方法进行 ( Takanori Nakamura, Yoshitaka Miyakawa, et al. A novel non peptidyl human c-Mpl activator stimulates human megakaryopoiesis and thrombopoiesis. BLOOD 2006, 107 (11) : 4300-4307 )。 具体步骤如下： 在表达 TP0受体（ c-MPL )序列的两端插入分别酶切位点 Xhol- Mlul (下划线标出）以及可选的保护>?½， 序列由上海生工生物工程公司 合成， 其中含上述酶切位点的 C- MPL序列 （SEQ ID: 1 )如下：
1920 bp
TATTGGCAGCAGCCTTGAACGCGT (SEQ ID: 1)
将上面的序列 （SEQ ID: 1)与空白真核表达载体 PCIneo (购自 Invitrogen公司）分别以 Xhol和 Mlul进行双酶切， 连接， 转化， 获 得 C- MPL与表达载体 pCIneo的重组质粒， 命名为 pCIneo/mpl质粒。
空白细胞 32D是鼠骨髄细胞（鼠源白介素 3, mIL-3缺陷型细胞株， 购自 Invitrogen公司， 购自 ATCC, ATCC的保藏号为 CRL-11346 )， 在 添加 10ng/ml mIL-3的 RPMI1640培养基（含 10%胎牛血清， 培养基和 血清均购自 Invitrogen公司 ) 中培养。
通过电穿孔将上面构建的 pCIneo/mpl 质粒稳定转染培养好的鼠 骨髄 32D细胞株得到 32D- MPL细胞库 1， 具体步骤是： 收集处于对数 生长期的细胞， 调整细胞密度 107cel l/ml; 将 40μ8质粒与 400μ1细 胞悬液中， 充分混合； 将细胞混合液加到电转杯（4隨） 中； 电转杯 在常温（或冰浴） lOmin; 在电转仪上设置相关参数： 电压 400V, 脉 冲强度 17ms， 将电转杯放入电转池中， 启动电穿孔装置； 电击后， 将 电转杯在常温放置 lOmin; 电击后， 向电转杯中加入 5ml预热的完全 培养基（购自 Invitrogen公司）， 将细胞悬液以 6e5cel l/ml的密度 在 T25培养瓶中， 放入 37度培养箱中； 48小时后， 得到 32D- MPL细 胞库 1。
细胞库 1经过抗生素 G418(浓度 200ng/ml )筛选得到的细胞库 2， 细胞库 2再采用筛选培养基（ RPMI1640培养基，并添加 10%胎牛血清、 200ng/ml G418和 lOOng/mlTPO )进行亚克隆： 将细胞库 2的细胞接 种到 96孔板上， 每块 96孔板上接种 60个孔， 每孔 1个细胞； 1 - 2 周后标记孔内只有一个细胞的孔， 待细胞长满后逐步扩培到 24孔板、 6孔板以及 T25瓶内， 获得重组单克隆细 32D-MPLe
由上得到的重组单克隆细胞株 32D- MP 的细胞培养条件是： RPMI- 1640培养基（含 1. 5g/L碳酸氢钠， 2 mM L-谷氨酰胺， 4. 5 g/L 葡萄糖， 10 mM HEPES, 1. 0 mM 丙酮酸钠， 2. 5 ng/mL 重组鼠 IL- 3 )， 添加 10% ( v/v )胎牛血清， 在 37 含 5% ( v/v )二氧化碳的饱和湿度 培养箱中培养。
在体外细胞增殖活性分析中， 32D- MPL细胞接种 96孔板， 然后用 不同浓度的阳性对照药物和各化合物作用 72 h。 随后用 MTT方法检测 细胞增殖情况， 用 GraghPad Prism软件的 4-参数回归方程计算 EC5。。 结果见表 2。
B) 药物对裸鼠体内 32D-MPL细胞促增殖作用
从中国科学院上海实验动物中心购买 5-6周龄的 BALB/C nu/nu雌 性裸鼠； 聚偏氟乙烯中空纤维管购自美国 Spectrumlabs公司， 中空管 参数为外部直径 1. 2隨， 内部直径 1. 0隨， 阻隔分子量为大于 500 kDa。 将 32D- MPL细胞悬液（1*107个 /ml 细胞密度）注入中空纤维管中， 然 后再通过热融封的方法将中空纤维管封成 2 cm长的短管。 这些短管再 接种到裸鼠皮下，接种好的裸鼠随机分组，每组 6只，对照组给予溶剂， 试验组给予阳性对照药物或各受试化合物， 口服， 每天 1次。 第 3天试 验结束时将裸鼠处死， 将纤维管内的细胞收集起来， 用培养液重悬， 随 后用 MTT方法检测细胞增殖情况， 用 GraghPad Prism软件的 4-参数回 归方程计算 EC5。。 结果见表 2。
表 2: 化合物的体内和体外活性数据
体外活性 体内活性
化合物编号
EC5。 （nM) EC5。 (mg/kg)
1 150 ± 40 ND
2 250 ± 54 ND
3 45 士 21 53. 1
4 110 士 14 ND
5 90士 28 ND
6 113 士 34 ND
7 99. 5 士 24 ND
8 65 士 19 ND
9 129 士 19 ND
10 550 士 144 ND
11 250 士 55 ND
12 114 士 33 ND
13 150 士 64 ND
14 82 士 22 ND 15 149 士 52 ND
16 223 士 74 ND
17 44 士 14 65. 2
18 33 士 24 49. 1
19 10 ± 4 22. 3
20 5 ± 2 15. 2
21 99 士 19 ND
22 122 ± 19 ND
23 95 士 34 ND
24 120 士 39 ND
25 >500 ND
阳， 14对照 50 士 14 46. 3
注： ND即 Not Determined, 表示未进行该化合物的体内药效试验。
2的试验结果中可见，本发明化合物具有较好的体外生物学活 性， 特别是化合物 20、 19、 18、 17、 3对构建的含 TP0受体的 32D- MPL 细胞增值的 EC5。小于 100nM。
并且表 2的试验结^^示，本发明的部分化合物具有良好的体内促
32D-MPL细胞增殖效果， 尤其是化合物 20、 19两个化合物表现出的体 内活性优于对照化合物。
尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，本领域技术人员 将会理解。根据已经公开的所有教导，可以对那些细节进行各种修改和 替换，这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附 权利要求及其任何等同物给出。

Claims

1. 式 I所示的化合物， 其药 上可接受的盐或溶剂合物，
Figure imgf000056_0002
式 I
其中，
R独立地选自芳基、 杂芳基或含 1- 3个杂原子的 3-8元杂环， 任选地，所述的芳基、杂芳基或杂环上的氢原子独立地被一个或多个 选自烷基、 卤素、 羟基、 四 ^、 咪唑、 磺酸、 羧酸或羧酸酯的取代 基所取代；
- R3各自独立地选自氢、 烷基、 卤素、 硝基、 J.. ^、 羟 基， 且！^和！^， 或者 R2和 R3至少有一组与直接相连的苯环上的 C原 子一起形成 4-8元饱和或不饱和脂肪环、 芳环、杂环或杂芳环， 所述 的杂环或杂芳环含有 1-4个杂原子，其中所述的杂原子可任意选自 N、 0、 S 原子； 任选地， 所述的脂肪环、 芳环、 杂环、 杂芳环上的氢原 子独立地被一个或多个选自羟基、 卤素、 、烷基、烷 或^^ 的取 取代；
R4 - R8各自独立地选自氢、 烷基、 烷 #1^、 卤代烷 #U>、 卤代烷 基、 卤素、 硝基、 J.. 、 烯基、 羟基、 、 或者任意 相邻的 -118与直接相连的苯环上的 C原子一起形成 4-8元饱和或不 饱和脂肪环、 芳环、 杂环或杂芳环， 所述的杂环或杂芳环含有 1-4 个杂原子， 其中所述的杂原子可任意选自 N、 0、 S原子； 可选地， 所 述的脂肪环、芳环、杂环、杂芳环上的氢原子独立地被一个或多个选 自羟基、 卤素、 、 烷基、 烷 或^ ^的取 取代。
2. 根据权利要求 1所述的化合物， 其药学上可接受的盐或溶剂 合物， 其中所述化合物为 I (Α)所示的化合物，
Figure imgf000057_0001
式 I (Α)
其中， R、 1^及114- R8如权利要求 1中所述， n为 0、 1、 2、 3或 4。
3. 根据权利要求 1所述的化合物， 其药学上可接受的盐或溶剂 合物， 其中所述化合物为 I (B)所示的化合物：
Figure imgf000057_0002
式 I (B)
其中， R及 R3- R8如权利要求 1中所述， n为 0、 1、 2、 3或 4。
4. 根据权利要求 1所述的化合物， 其药学上可接受的盐或溶剂 合物， 其中， 所述的卤素或卤代为氟、 氯、 溴或碘； 优选为氟。
5. 根据权利要求 1所述的化合物， 其药学上可接受的盐或溶剂 合物， 其选自如下的化合物：
(Z) -4- (7- (2- (l- (3, 4 -二甲基苯基 ) -3 -甲基 -5 -氧代 -1， 5 -二氢- 吡唑- 4-亚基)肼基) - 6 -羟基 -2， 3-二氢- 1H -茚满 -5 -基)苯甲酸， (Z)-4-(7-(2-(l-(3, 4 -二甲基苯基 )-3 -甲基 -5 -氧代 -1， 5 -二氢- 吡唑- 4-亚基)肼基) - 5 -羟基 -2， 3-二氢- 1H -茚满 -4 -基)苯甲酸，
(Z)-3-(7-(2-(l-(3, 4 -二甲基苯基 )-3 -甲基 -5 -氧代 -1， 5 -二氢- 吡唑- 4-亚基)肼基) - 6 -羟基 -2， 3-二氢- 1H -茚满 -5 -基)苯甲酸，
(Z)-3-(7-(2-(l-(3, 4 -二甲基苯基 )-3 -甲基 -5 -氧代 -1， 5 -二氢- 吡唑- 4-亚基)肼基) - 5 -羟基 -2， 3-二氢- 1H -茚满 -4 -基)苯甲酸，
(Z)-5-(7-(2-(l-(3, 4 -二甲基苯基 )-3 -甲基 -5 -氧代 -1， 5 -二氢- 吡唑- 4-亚基）肼基) -6-羟基- 2， 3-二氢- 1H-茚满- 5-基) -2-氟苯甲 酸，
(Z)-5-(4-(2-(l-(3, 4 -二甲基苯基 )-3 -甲基 -5 -氧代 -1， 5 -二氢- 吡唑- 4-亚基)肼基) -3-羟基- 5， 6, 7, 8-四氢萘 -2-基)- 2-氟苯甲酸，
(Z)-5-(3-(2-(l-(3, 4 -二甲基苯基 )-3 -甲基 -5 -氧代 -1， 5 -二氢- 吡唑- 4-亚基)肼基) -2-羟基- 5， 6, 7, 8-四氢萘 -1-基)- 2-氟苯甲酸，
(Z)-5-(3-(2-(l-(3, 4 -二甲基苯基 )-3 -甲基 -5 -氧代 -1， 5 -二氢- 吡唑- 4-亚基)肼基) -2-羟基- 5， 6, 7, 8-四氢萘 -1-基)- 2-氟苯甲酸，
(Z)-3-(4-(2-(l-(3, 4 -二甲基苯基 )-3 -甲基 -5 -氧代 -1， 5 -二氢- 吡唑- 4-亚基)肼基) -3-羟基- 5， 6, 7, 8-四氢萘 -2-基)苯甲酸，
(Z)-3-(3-(2-(l-(3, 4 -二甲基苯基 )-3 -甲基 -5 -氧代 -1， 5 -二氢- 吡唑- 4-亚基)肼基) -2-羟基- 5， 6, 7, 8-四氢萘 -1-基)苯甲酸，
(Z) -3- (7- (2- (1- (3 乙炔基苯基) - 3 -甲基 -5 -氧代 - 1， 5 -二氢-吡 唑- 4-亚基)肼基) - 6 -羟基 -2， 3 -二氢 -1H -茚满 -5 -基)苯甲酸，
(Z) -3- (7- (2- (1- (3 乙炔基苯基) - 3 -甲基 -5 -氧代 - 1， 5 -二氢-吡 唑- 4-亚基)肼基) - 5 -羟基 -2， 3 -二氢 -1H -茚满 -4 -基)苯甲酸，
(Z) -3- (7- (2- (1- (2， 3-二氢- 1-茚满- 5-基）- 3-甲基- 5-氧代 -1, 5-二氢-吡唑- 4-亚基)肼基) - 6 -羟基 -2， 3 -二氢 -1 -茚满 -5 -基)苯 甲酸，
(Z) -3- (4- (2- (1- (2， 3 -二氢 -1H -茚- 5 -基) - 3 -甲基 -5 -氧代 -1， 5- 二氢-吡唑- 4-亚基)肼基) -3-羟基- 5， 6, 7, 8-四氢萘 -2-基)苯甲酸，
(Z) -5- (7- (2- (1- (2， 3-二氢- 1-茚满- 5-基）- 3-甲基- 5-氧代 -1, 5-二氢-吡唑- 4-亚基）肼基） -6-羟基- 2， 3-二氢- 1-茚满- 4- 基)- 2-氟苯甲酸，
(Z) -5- (6- (2- (1- (2， 3-二氢- 1-茚满- 5-基）- 3-甲基- 5-氧代 -1, 5-二氢-吡唑- 4-亚基）肼基） -5-羟基- 2， 3-二氢- 1-茚满- 4- 基)- 2-氟苯甲酸，
(Z)-5-(4-(2-(l-(3, 4 -二甲基苯基 )-3 -甲基 -5 -氧代 -1， 5 -二氢- 吡唑- 4-亚基)肼基) -3-羟基- 5， 6, 7, 8-四氢萘 -2-基)-呋喃- 2-甲酸，
(Z)-5-(3-(2-(l-(3, 4 -二甲基苯基 )-3 -甲基 -5 -氧代 -1， 5 -二氢- 吡唑- 4-亚基)肼基) -2-羟基- 5， 6, 7, 8-四氢萘 -1-基)-呋喃- 2-甲酸，
(Z)-5-(7-(2-(l-(3, 4 -二甲基苯基 )-3 -甲基 -5 -氧代 -1， 5 -二氢- 吡唑- 4-亚基)肼基) -6-羟基- 2， 3-二氢- 1H-茚满- 5-基)-呋喃- 2 -甲 酸，
(Z)-5-(6-(2-(l-(3, 4 -二甲基苯基 )-3 -甲基 -5 -氧代 -1， 5 -二氢- 吡唑- 4-亚基)肼基) -5-羟基- 2， 3-二氢- 1H-茚满- 4-基） -呋喃 -2 -甲 酸，
(Z) - 4- (2- (6- (3- (2H -四唑 -5 -基）苯基) - 5 -羟基 -2， 3-二氢- 1H- 茚满- 4-基)肼叉) -1- (3， 4-二甲苯基)- 3-甲基- 1氢-吡唑- 5 (4氢） - 酮，
(Z) -4- (2- (7- (3- (2H -四唑 -5 -基）苯基) - 6 -羟基 -2， 3-二氢- 1H- 茚满- 5-基)肼叉) -1- (3， 4-二甲苯基)- 3-甲基- 1氢-吡唑- 5 (4氢） - 酮，
(Z)-5-(7-(2-(l-(3, 4 -二甲基苯基 )-3 -甲基 -5 -氧代 -1， 5 -二氢- 吡唑- 4-亚基）肼基) -6-羟基- 2， 3-二氢- 1H-茚满- 5-基)-噻唑- 5 -甲 酸，
(Z)-5-(6-(2-(l-(3, 4 -二甲基苯基 )-3 -甲基 -5 -氧代 -1， 5 -二氢- 吡唑- 4-亚基）肼基) -5-羟基- 2， 3-二氢- 1H-茚满- 4-基） -噻唑- 5- 甲酸， 和
(Z) -5- (4- (2- (1- (2， 3-二氢- 1-氢茚- 5-基）- 3-甲基- 5-氧代 -1, 5-二氢-吡唑- 4-亚基)肼基) -3-羟基- 5， 6, 7, 8-四氢萘 - 2-基) -2- 氟苯甲酸；
或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
6. 权利要求 1至 5中任一项所述的化合物的制备方法， 包括如 下步骤：
a) 由相应的卤代物与相应的硼酸或硼酸酯化合物进行 Suzuki 偶
Figure imgf000060_0001
中间体 I b) 取代苯胺与亚硝酸钠在酸性溶液中进行重氮化反应， 再加入 氯化亚锡还原得到肼，然后与乙酰乙酸酯类化合物加热缩合得到中间 体 II：
Figure imgf000060_0002
中间体 II c) 由中间体 I与亚硝酸钠在酸性溶液中进行重氮化反应， 再与 中间 I I在碱性溶液中反应制得相应的目标化合物:
Figure imgf000061_0001
中间体 I 中间体 I I 目标化合物 其中， ！^及！^- R8如权利要求 1至 5任一项中所述； X为卤素； 优选 Br和 I。
7. 根据权利要求 6所述的制备方法， 其中，
所述还原剂选自 Pd- C/甲酸铵、 氯化铵 /还原铁粉、 Pd- C/氢气、 SnCl2/浓盐酸中的一种或多种；
所述乙酰乙酸酯类化合物选自乙酰乙酸甲酯、 乙酰乙酸乙酯、 乙 酰乙酸异丙酯、 乙酰乙酸叔丁酯、 乙酰乙酸- 3-戊酯中的一种或多种； 所述酸性溶液选自乙酸、硫酸、盐酸中的一种或多种配制的溶液; 所 性溶液选自碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸钠、碳酸钾中的一 种或多种配制的溶液。
8. 根据权利要求 6所述的方法， 其中，
所述乙酰乙酸酯类化合物为乙酰乙酸甲酯和 /或乙酰乙酸乙酯； 所述酸性溶液为盐酸配制的溶液；
所述碱性溶液为碳酸氢钠溶液和 /或碳酸氢钾溶液。
9. 一种药物组合物，其包含权利要求 1至 5中任一项所述的式 I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，以及任选的一种或多种 药学上可接受的载体或赋形剂； 可选地， 所述药物组合物还包含有 效量的一种或多种选自如下的药物：
集落刺激因子、 趋化因子、 白介素以及干扰素。
10. 权利要求 1至 5中任一项所述的式 I化合物或其药学上可 接受的盐或溶剂合物在制备或作为 TP0受体激动剂中的用途。
11. 权利要求 1至 5中任一项所述的式 I化合物或其药学上可接 受的盐或溶剂合物在制备用于治疗和 /或预防和 /或辅助治疗哺乳动 物（包括人）的与血小板减少相关的疾病或病症的药物中的用途； 具体地， 所述与血小板减少相关的疾病或病症是如下疾病， 或 者由如下疾病导致或引起：
特发性血小板减少性紫癜（ITP ) 、 化疗或放疗后的骨髄抑制、 器官移植、 骨髄移植、 肝或干细胞移植、 骨髄异常增生综合征、 再 生障碍性贫血或白血病。
12. 权利要求 1至 5中任一项所述的式 I化合物或其药学上可 接受的盐或溶剂合物在作为或者制备促进血小板和 /或巨核细胞生成 的药物或试剂中的用途。
13. 权利要求 1至 5中任一项所述的式 I化合物或其药学上可接 受的盐或溶剂合物在制备止血和 /或凝血或者辅助止血和 /或凝血的 药物或试剂中的用途。
14. 一种在体内或体外促进血小板生成或者调节血小板水平的 方法，包括使用有效量的权利要求 1至 5中任一项所述的式 I化合物 或其药学上可接受的盐或溶剂合物的步骤。
15. 一种在体内或体外促进巨核细胞生成或者调节巨核细胞水 平的方法， 包括使用有效量的权利要求 1至 5 中任一项所述的式 I 化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物的步骤。
16. 一种治疗和 /或预防和 /或辅助治疗哺乳动物（包括人）的与 血小板减少相关的疾病或病症的方法，包括使用有效量的权利要求 1 至 5中任一项所述的式 I化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物的 步骤；
具体地， 所述与血小板减少相关的疾病或病症是如下疾病， 或 者由如下疾病导致或引起：
特发性血小板减少性紫癜（ITP ) 、 化疗或放疗后的骨髄抑制、 器官移植、 骨髓移植、 肝或干细胞移植、 骨髄异常增生综合征、 再 生障碍性贫血或白血病。
17. 一种止血或凝血的或者辅助止血和 /或凝血的方法，包括使 用有效量的权利要求 1至 5中任一项所述的式 I化合物或其药学上可 接受的盐或溶剂合物的步骤。
PCT/CN2013/073550 2012-04-11 2013-04-01 双环取代吡唑酮偶氮类衍生物、其制备方法及用途 WO2013152683A1 (zh)

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