WO2013137777A1 - Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью (варианты) - Google Patents

Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью (варианты) Download PDF

Info

Publication number
WO2013137777A1
WO2013137777A1 PCT/RU2013/000164 RU2013000164W WO2013137777A1 WO 2013137777 A1 WO2013137777 A1 WO 2013137777A1 RU 2013000164 W RU2013000164 W RU 2013000164W WO 2013137777 A1 WO2013137777 A1 WO 2013137777A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
pro
pharmaceutical composition
glu
phe
gly
Prior art date
Application number
PCT/RU2013/000164
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Владимир Павлович ЛОБКО
Анастасия Геннадьевна ЧЕЛЯЕВА
Original Assignee
Lobko Vladimir Pavlovich
Chelyaeva Anastasia Gennadevna
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lobko Vladimir Pavlovich, Chelyaeva Anastasia Gennadevna filed Critical Lobko Vladimir Pavlovich
Publication of WO2013137777A1 publication Critical patent/WO2013137777A1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/26—Iron; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/30—Zinc; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/32—Manganese; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis

Definitions

  • composition with neuroprotective, anti-anesthetic, antioxidant, antihypoxic, neurometabolic, anti-ischemic activity (options)
  • the invention relates to the pharmaceutical industry and medicine and can be used in the manufacture and use of pharmaceutical compositions with a polypeptide sequence of Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, with neuroprotective, antiamnestic, antioxidant,
  • Semax is a drug that effectively affects the processes associated with the formation of memory and learning, improves mnemonic functions, improves the adaptation of the human body to hypoxia, cerebral ischemia, anesthesia and other damaging effects. In other words, semax improves the energy processes of the brain, increasing it
  • Semax is a good nootropic, neurometabolic stimulant.
  • a pharmaceutical composition for the treatment of ischemic stroke comprising the Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro polypeptide sequence (RF Patent 2251429, published July 27, 2004).
  • the disadvantage of the analogue is the relatively low speed of the onset of the therapeutic effect.
  • the disadvantage of the analogue is the impossibility of its use for medicinal purposes.
  • Semax as a neuroprotector is known (Patent for the invention of the Russian Federation 2394816, published on July 20, 2010).
  • Table 7 presents the change in neurological deficit in rats after bilateral ligation of the common carotid arteries under the influence of the drug Semax, Mexidol and Amtizol.
  • Mexidol is more preferred, Semax because of the insufficient effectiveness of the latter and the impossibility of increasing its concentration in solution.
  • Semax peptide of the formula Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro is known to use the Semax peptide of the formula Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro as an antithrombotic, anticoagulant,
  • the disadvantage of the analogue is its relatively low effectiveness of the therapeutic effect.
  • the disadvantage of the analogue is the relatively low speed of the onset of the therapeutic effect.
  • composition having neurotropic, antiamnestic, antihypoxic and antiischemic activity.
  • the composition as active components, contains Semax and Mexidol or their pharmaceutically acceptable salts in therapeutically effective amounts.
  • Semax is enhanced by the use of Mexidol.
  • the patent provides for the use of isotopes 13 C, 15 N, etc. for making isotopic labels in a drug.
  • the isotopes determine the dynamics of the distribution of the drug in the tissues of the body.
  • the prototype of the two variants of the invention is the pharmaceutical composition (Semax. Publication on the Internet:
  • polypeptide methionine-glutamine-histidine-phenylalanine-prolyl-glycine-proline (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro).
  • the drug is used for acute and chronic cerebrovascular insufficiency and related diseases, including stroke and its consequences.
  • Strengthening the effect of the drug is carried out by increasing its amount (increasing the number of drops in the nose or increasing the frequency of instillation). In particular, with moderate strokes, 2 drops are injected into each nostril, three times a day (1% Semax). And with a severe stroke, four drops are injected into each nostril, five times a day.
  • neuroprotective, antiamnestic, antioxidant, antihypoxic, neurometabolic, antiischemic activity containing
  • polypeptide methionine-glutamine-histidine-phenylalanine-prolyl-glycine-proline (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro "coincide with the features of the claimed variants of the invention.
  • a pharmaceutically acceptable solvent is water (distilled water).
  • a pharmaceutically acceptable excipient in a pharmaceutical composition is methyl ester.
  • Nipagin belongs to the pharmacological group: Antiseptics and
  • the disadvantages of the prototype are the relatively low speed of the onset of the therapeutic effect, not sufficiently large therapeutic effect of the pharmaceutical product, low stability of the pharmaceutical composition over the expiration date.
  • shelf life the period during which the pharmaceutical composition retains its properties in a measure that ensures its use according to
  • composition with neuroprotective, antiamnestic, antioxidant, antihypoxic, neurometabolic,
  • the pharmaceutical composition having neuroprotective, antiamnestic, antioxidant, antihypoxic, neurometabolic, antiischemic activity contains a methionine-glutamine-histidine-phenylalanine-prolyl-glycine-proline polypeptide (Met-Glu-His-Phe-Pro- Gly-Pro), and differs from the prototype in that it additionally contains minerals in the following ratio of components in mg / l:
  • antihypoxic, neurometabolic, anti-ischemic activity contains a polypeptide methionine-glutamine-histidine-phenylalanine-prolyl-glycine-proline (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro), and differs from the prototype in that it additionally contains mineral substances when the following ratio of components in mg / l:
  • polypeptide is methionine-glutamine-phenylalanine-histidine-glycine-proline-prolyl - 0.01 '10 3 - 80' 10 3,
  • the pharmaceutical composition is designed in such a way that it contains carbon isotopes 13 C, and the ratio of the number of carbon isotopes 13 C to the total amount of carbon in the pharmaceutical composition is from 0.005 to 0.75.
  • the pharmaceutical composition is in the form of a solution, for example, nasal drops (for use intranasally).
  • the pharmaceutical composition has a pH value of from 4 to 7.
  • the kinematic viscosity of the pharmaceutical composition in the form of a solution is from 1.01 to 1.23 mm / s.
  • the kinematic viscosity of the pharmaceutical composition is determined using a capillary viscometer.
  • a pharmaceutically acceptable solvent in addition to the active substance (methionine-glutamine-histidine-phenylalanine-prolyl-glycine-proline polypeptide or its pharmaceutically acceptable salt) and mineral substances, a pharmaceutically acceptable solvent can be used.
  • active substance methionine-glutamine-histidine-phenylalanine-prolyl-glycine-proline polypeptide or its pharmaceutically acceptable salt
  • mineral substances mineral substances
  • a pharmaceutically acceptable solvent in addition to solvent, in
  • the pharmaceutical composition may use a pharmaceutically acceptable excipient or pharmaceutically acceptable excipients.
  • water distilled water
  • another solvent may be used.
  • paraoxybenzoic acid methyl ester e.g., from 0.01 to 80 g / l
  • another substance can be used.
  • the active substance is a polypeptide methionine-glutamine-histidine-phenylalanine-prolyl-glycine-proline (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro) and mineral substances in a pharmaceutically acceptable solvent, in particular in water.
  • the active substance methionine-glutamine-histidine-phenylalanine-prolyl-glycine-proline polypeptide
  • mineral substances are selected from the above ranges, and the rest is selected from the solvent.
  • cardiostimulating effect while maintaining the duration of action
  • up to 95% ethyl alcohol is introduced into the drug.
  • Alcohol due to osmotic phenomena causes pain and local negative reaction, which accelerates the effect of the drug.
  • Biologically active additives are known which, when introduced together with the active principle, increase the pharmacological activity of therapeutic drugs by optimizing the rate of assimilation of the active principle. So in antitumor drug (USSR Copyright Certificate 1683190 published on 04/20/1995) are additionally administered
  • polyvinylpyrrolidone and sorbic acid These components increase the antitumor activity of the active principle.
  • the concentration of the active substance in the pharmaceutical agent due to the introduction of mineral substances into the pharmaceutical composition.
  • Trace elements iron, copper, manganese, zinc, cobalt, iodine, fluorine, chromium, molybdenum, vanadium, nickel, strontium, silicon, selenium are recognized as essential for human and animal life.
  • Mineral substances in solution (in particular, in pharmaceutical composition) are contained in pharmaceutically acceptable salts, for example, succinates, chlorides, carbonates or sulfates, as well as in various pharmaceutically acceptable complex compounds.
  • Metals have a pronounced local effect on the mucous membranes. At the concentrations of mineral substances considered in the application, the local action of these substances may be astringent or irritating.
  • the mechanism of local action of metals is due to their ability to react with tissue proteins. As a result of this interaction, proteins coagulate and form albuminates with metal ions. Moreover, if partial coagulation of proteins occurs only in the surface layers of tissues, an astringent or irritating effect is observed that is reversible.
  • the pharmaceutical composition of certain minerals in a quantity strictly defined for each mineral.
  • a weight range in the pharmaceutical composition was established for each mineral. The use of less than specified in the range, the amount of mineral does not lead to technical results. The use of a larger amount of mineral substance than indicated in the range not only does not lead to the achievement of technical results, but worsens the therapeutic effect of the action of the peptide Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro. It was found that with an increase in the concentration of minerals in the pharmaceutical composition (above the stated ranges), they suppress the effect of the peptide Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, the therapeutic effect of the drug disappears.
  • Figure 1 presents the chromatogram of the claimed pharmaceutical composition with a UV detector (210 nm). Sorbent C 18.
  • Figure 2 presents the chromatogram of the claimed pharmaceutical composition with an MS detector. A peak with a retention time of 4.096 minutes is highlighted.
  • Fig.3 presents a chromatogram of the claimed pharmaceutical composition with an MS detector. A peak with a retention time of 4.664 minutes is highlighted.
  • Figure 4 presents the chromatogram of the claimed pharmaceutical composition with an MS detector. A peak with a retention time of 5.282 min was highlighted.
  • Figure 5 presents the chromatogram of the claimed pharmaceutical composition with an MS detector. A peak with a retention time of 12.163 minutes is highlighted.
  • composition on a column with a chiral sorbent and with a UV detector (220 nm).
  • Yu On Fig presents a chromatogram of the claimed pharmaceutical composition on a column with a chiral sorbent and with a MS detector (220 nm). A peak with a retention time of 5.274 is highlighted.
  • Figure 9 presents the chromatogram of the claimed pharmaceutical composition on a column with a chiral sorbent and with an MS detector (220 nm). A peak with a retention time of 6.366 is highlighted.
  • Figure 10 presents the chromatogram of the claimed pharmaceutical composition on a column with a chiral sorbent and with a MS detector (220 nm). A peak with a retention time of 7.263 is highlighted.
  • Figure 11 presents the chromatogram (left side) of the claimed
  • composition on a column with a chiral sorbent and with an MS detector (220 nm). A peak with a retention time of 14.648 is highlighted.
  • composition on a column with a chiral sorbent and with an MS detector (220 nm). A peak with a retention time of 14.648 is highlighted.
  • FIG. 1 presents a diagram of a cavitation reactor for isotopic enrichment of various mixtures.
  • Fig presents a diagram of the installation for isotope enrichment.
  • Example 1 a method of introducing minerals into water.
  • Example 2 - a method of obtaining pharmaceutical compositions and verification of stability.
  • Example 3 tests for general toxicity.
  • Examples 4-8 illustrate the effectiveness of the claimed pharmaceutical compositions with neuroprotective, antiamnestic, antioxidant, antihypoxic, neurometabolic, antiischemic activity.
  • the studies were carried out using materials published in the sources / 1 - 5 /.
  • In the application for clarity, presents a comparison of the effects of the claimed pharmaceutical formulations with the action of the drug Semax on models that were used to study the effectiveness of the drug Mexidol. Concentrations of the peptide Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro were chosen so that the results can be compared with the results of the use of the drug 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxypyridine succinate.
  • Example 1 The introduction of mineral substances into the solution (in water) was carried out according to the method 161. There are other ways of introducing mineral substances into the solution. Solutions were prepared from pure metals using
  • the concentration of metals in solutions was controlled by the atomic absorption method for determining the contents of sodium, potassium, calcium, magnesium, iron, manganese, copper, zinc, lead, cadmium, cobolt, nickel, and chromium.
  • Example 2 For example, we describe the receipt of one pharmaceutical composition with manganese, zinc and iron of a certain concentration.
  • the control showed the qualitative performance of the pharmaceutical composition.
  • FIG. 1-15 illustrates studies of only one pharmaceutical composition:
  • Figure 1-12 presents the chromatograms of the investigated sample
  • FIG. 13 and 14 show the MSMS spectra of the pharmaceutical composition. And on Fig presents a high-resolution mass spectrum of the pharmaceutical composition.
  • compositions with a different composition of mineral substances are similar (the differences are small and are comparable with the thick line in the graphs).
  • the dielectric constant of the pharmaceutical composition characterizes its ability to accumulate electric charges.
  • the indicator “real component of relative dielectric constant” was a control, a kind of criterion for the applicability of the pharmaceutical composition.
  • LD 50 is up to 1000 mg / kg when administered intraperitoneally.
  • LD 50 is up to 3000 mg / kg, which allows the claimed compounds to be classified as non-toxic substances.
  • Example 4 The antioxidant activity of pharmaceutical compositions based on the peptide Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, mineral substances and containing 13 C isotopes, was compared with the antioxidant activity of the drug Semax chemiluminescent method 111.
  • the content of the peptide Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro is 0.15 g / l.
  • Semax also contained the peptide Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro - 0.15 g / l.
  • Semax 0.1% was diluted with water 1: 6.7 to the required concentration of the active substance in water (serial numbers
  • Semax containing the peptide Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro - 0.1 g / l with pharmaceutical formulations based on the peptide Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, minerals and isotope content carbon 13 With equal to 0.5% and 75% of all carbon in the pharmaceutical composition (serial numbers of pharmaceutical formulations 57 - 72).
  • the comparison results are shown in table 13. It was found that in antioxidant activity (AO A), pharmaceutical formulations based on the peptide Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro and minerals mainly exceeded Semax by up to 17%.
  • Example 5 Antihypoxic and neurometabolic activity of pharmaceutical compositions based on the peptide Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, mineral substances and containing 13 C carbon isotopes, was compared with
  • mice were weighed 25 - 27 g for acute hypoxia / 9, 10 /.
  • Acute hypoxia (normobaric hypoxic hypoxia)
  • mice modeled by placing mice in a heat chamber with a volume of 250 cm 3 .
  • Semax was administered once intraperitoneally 30, 60 and 90 minutes before placing the mice in the heat chamber and terminating the access of air to the heat chamber.
  • the time from the moment of drug administration to the placement of mice in a heat chamber and the termination of air access in the tables is indicated by Tv in minutes.
  • mice After placing the mice in a heat chamber, as oxygen was consumed, its concentration in the air and in the body of the mice decreased, and the amount of carbon dioxide increased. As a result, animals developed acute hypoxic hypoxia. Life expectancy (until breathing stopped) was recorded using a stopwatch and judged by its increase
  • hypoxia The results of these comparisons are similar to those obtained in the acute normobaric hypoxic hypoxia model.
  • EXAMPLE 6 The neuroprotective effect of pharmaceutical formulations based on the Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro peptide, minerals, and 13 C containing carbon isotopes was compared with the neuroprotective effect of Semax.
  • Ischemic stroke in rats was reproduced by bilateral ligation of the common carotid arteries.
  • Experimental animals were administered intraperitoneally Semax and the claimed pharmaceutical compositions with serial numbers from 25 to 48. The characteristics of these pharmaceutical compositions are shown in tables 4 to 6.
  • rat survival Neurological deficit in animals was determined every hour during the first 24 hours, and then 1 time per day. The severity of the condition was determined by the sum of the corresponding points.
  • the neuroprotective effects of the remaining compounds are superior to the neuroprotective effect of Semax.
  • compositions 31, 32 in their neuroprotective effect do not exceed composition 30. Therefore, these formulations are not advisable to use.
  • Pharmaceutical formulations 39, 40 in their neuroprotective effect do not exceed composition 38. Therefore, these formulations are not advisable to use.
  • Pharmaceutical formulations 47, 48 in their neuroprotective effect do not exceed composition 46. Therefore, these formulations are not advisable to use.
  • GI Hemorrhagic stroke
  • GI Hemorrhagic stroke
  • rat craniotomy and brain tissue destruction were performed in the area of the internal capsule with the subsequent injection of the same rat into the site of blood damage (0.03 ml of blood).
  • a stroke was achieved in the area of the internal capsule with virtually no damage to neighboring brain tissues.
  • the pharmaceutical composition based on the peptide Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, minerals and carbon isotopes 13 C was administered to animals
  • Semax was administered to animals intraperitoneally at a dose of 0.07 mg per day per rat.
  • the administration schedule was the following: the first injection was carried out 2 hours after the operation, then 3 injections after 4 hours. Then, the pharmaceutical composition based on the peptide Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro and minerals, as well as Semax was administered once a day within 14 days.
  • compositions 31, 32 in their neuroprotective effect do not exceed composition 30.
  • the same values are indicated by the “- // -” symbols. Therefore, it is not advisable to use these compounds in practice.
  • composition 38 Pharmaceutical formulations 39, 40 in their neuroprotective effect do not exceed composition 38. The same values are indicated by the “- // -” symbols.
  • composition 46 Pharmaceutical formulations 47, 48 in their neuroprotective effect do not exceed composition 46. Identical values are indicated by the “- // -” symbols.
  • concentration of the peptide Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro to a value of 80 g / l and above.
  • An increase in the efficacy of formulations with a concentration of up to 80 g / L was observed compared to the best pharmaceutical formulations mentioned above based on the Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro peptide (See table 18). Rise also did not exceed 3-5%.
  • Example 7 The antiestatic effect of pharmaceutical compositions based on the peptide Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, mineral substances and carbon isotopes 13 C, was compared with the anti-amnestic effect of the drug Semax.
  • mice The effect of pharmaceutical formulations based on the peptide Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, minerals and carbon isotopes 13 C, and the drug Semax on amnesia (learning and memory processes) in mice was studied using a conditioned reaction of passive avoidance of electrodermal irritation .
  • Mice were exposed to electroconvulsive shock (current 30 mA for 0.3-0.5 s to the auricles) immediately after learning the conditioned passive avoidance reaction (model of amnesia caused by electroconvulsive shock) / 10, 12 /.
  • the drugs were administered once intraperitoneally 30, 60 and 90 minutes before the training of mice.
  • the safety of the conditioned reaction of passive avoidance was checked 24 hours after the amnesiac effect.
  • 3 C, as well as the Semax preparation actively prevent the development of amnesia of the conditioned passive avoidance reaction (see table 20 )
  • the number of mice trained in the conditioned reaction of passive avoidance ranged from 50 to 60%.
  • the upper range values provide almost all pharmaceutical compositions based on the peptide Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro and minerals, as well as compositions containing carbon isotopes 13 C.
  • the lower value of the range provides Semax.
  • Table 20 shows that pharmaceutical compositions based on the peptide Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, minerals and carbon isotopes 13 C increase the onset of the therapeutic effect while maintaining the duration of action without increasing the concentration of the pharmaceutical agent. There is also an increase in the therapeutic effect without increasing the concentration of the pharmaceutical agent.
  • mice Using a scopolamine amnesia model, it was found that in mice pharmaceutical formulations based on the Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro peptide, 13 C minerals and carbon isotopes, and the Semax drug also prevent the development of amnesia of the conditioned passive avoidance reaction ( see table 21).
  • compositions based on the peptide Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, minerals and carbon isotopes 13 C increase the onset of the therapeutic effect while maintaining the duration of action without increasing the concentration of the pharmaceutical agent. There is also an increase in the therapeutic effect without increasing the concentration of the pharmaceutical agent.
  • An increase in the speed of the onset of the therapeutic effect and an increase in the therapeutic effect due to the use of Semax can be achieved by increasing its amount in injection.
  • Example 8 The anti-ischemic effect of pharmaceutical compositions based on the peptide Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, minerals and carbon isotopes 13 C, was compared with the anti-ischemic effect of the drug Semax. The comparison results are presented in table 22.
  • mice white non-linear mice (males) weighing 35 -
  • Brain ischemia was reproduced by ligation of both common carotid arteries. Animals after surgery were observed for 7 days. Pharmaceutical formulations based on the peptide Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro and minerals, and the drug Semax was administered intraperitoneally for 7 days. On the first day, drugs were administered twice: immediately after relying and 3 hours after surgery. In the second, third, etc. until the seventh day, the drugs were administered once a day.
  • mice After bilateral ligation of the common carotid arteries (and not using the above drugs), more than 90% of the mice died during the observed days.
  • the concentration of the peptide Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro was 0.0035 g / L.
  • the drug Semax was diluted with water in a ratio of 1: 286.
  • Table 22 shows that the survival rate of mice using the majority of pharmaceutical formulations based on the Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro peptide, minerals and 13 C carbon isotopes is higher than the survival rate of mice when using Semax diluted with water.
  • N ° l, N ° 9 and N ° 17 are similar in action to that of Semax. With an increase in the amount of mineral substances in the compositions, their effect increases.
  • compositions 7, in their action do not exceed the effect of composition N ° 6.
  • Pharmaceutical formulations N ° 15, N ° 16 in their action do not exceed the effect of the composition N ° 14.
  • Pharmaceutical formulations j ⁇ ° 23 and N ° 24 in their action do not exceed the effect of the composition N ° 22. Therefore, it is not advisable to produce and use them.
  • polypeptide is methionine-glutamine-phenylalanine-histidine-prolyl-glycine-proline (Met-Glu-His-Phe -Pro-Gly-Pro) - 0.01 ' March 10 - March 10 to 80;
  • composition j ⁇ 22 containing, mg / l are confirmed:
  • methionine-glutamine-histidine-phenylalanine-prolyl-glycine-proline polypeptide (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro) - 0.0 G 10 3 - 80 10 3 ;
  • the pharmaceutical composition contains 13 C carbon isotopes, and the ratio of 13 C carbon isotopes to the total amount of carbon in the pharmaceutical composition is from 0.005 to 0.75 (from 0.5% to 75%)
  • polypeptide methionine-glutamine-histidine-phenylalanine-prolyl-glycine-proline (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro), mineral substances and carbon isotopes 13 C (from 0.5 to 75%) in the following ratio of components in mg / l:
  • composition of mineral substances in the pharmaceutical compositions described above was limited by the list of mineral substances (macroelements and
  • the Guide describes a method for introducing mineral substances into a solution, as well as methods for precisely controlling the amount of mineral substances in solutions.
  • compositions N ° l and ⁇ ° 2 in addition to the minerals indicated in them, any may be added or any of the following may be added (with the exception of the minerals already indicated in the composition), mg / l:
  • the first composition can be performed as follows:
  • neurometabolic, anti-ischemic activity containing methionine-glutamine-histidine-phenylalanine-prolyl-glycine-proline polypeptide (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro), characterized in that it additionally contains mineral substances in the following ratio of components in mg / l:
  • neurometabolic, anti-ischemic activity containing methionine-glutamine-histidine-phenylalanine-prolyl-glycine-proline polypeptide (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro), characterized in that it additionally contains mineral substances in the following ratio of components in mg / l:
  • Carbon isotopes 13 C increase the resistance of molecules to
  • Carbon C isotopes are non-toxic. The experiments show that feeding mice and rats with foods enriched with 75% 13 C carbon does not lead to side effects and poor health.
  • compositions enriched in carbon 13 C isotopes have increased stability, they are non-toxic and, in addition, have increased neuroprotective, antiamnestic, antioxidant,
  • the reactor was manufactured according to the method described in the source / 15 /.
  • the flow rate in the reactor, along the length of the channel, varied from 10 m / s to 50 m / s.
  • Fig presents a diagram of a cavitation reactor for isotope enrichment of various mixtures, in particular, hydrocarbon reagents to obtain the peptide Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, enriched in isotopes
  • the reactor is located in the installation, which contains the pump 6NK-6x1, providing a maximum flow rate of 90 m 3 / h, a pressure of 125 m with an electric motor power of 75 kW, a rotational speed of the electric motor rotor and pump wheel 2950 rpm. Additionally, the installation contains tanks for reagents and measuring instruments.
  • the cavitation reactor 1 (see Fig. 16) is made in the form of a flat Laval nozzle with cavitation bodies 2-9 in the channel 10.
  • Fig presents a cross section of a cavitation reactor.
  • the reactor channel in the area of cavitation bodies is divided into several channels.
  • cavitation bodies 5 and 6 divide the channel into smaller channels 13, 14 and 15. Outside, the channel is limited by walls 16 and 17, as well as two covers 1 1 and 12.
  • arrows 18 show the direction of movement of the reagent at the inlet to the reactor
  • arrow 19 shows the direction of movement of the reagent at the outlet of the reactor.
  • channels 24 and 25 are made for supplying carbon dioxide and nitrogen to the cavitation zones. Installation works as follows.
  • the hydrocarbon reagent from the tank 28 is pumped through the reactor 27 through the reactor 27 and enters the tank 28.
  • the pressure drop in the reactor is controlled by pressure gauges 29 and 30.
  • the temperature of the reactant is monitored by thermometer 31.
  • the reagent is heated in the tank by a heater 32.
  • the hydrocarbon reagent moves along the cavitator channel in direction 18.
  • the flow is divided into several flows. Beyond the cavitation bodies, cavitation areas arise.
  • cavitation 2 3, and 4 are cavitation zones 20, 21, 22, and 23.
  • cavitation 2 Upon entering the cavitation region, the reagent “boils”, cavitation bubbles appear, and cavitation cavities exit the cavitation region the bubbles collapse.
  • an increase in pressure to several thousand atmospheres and an increase in temperature to a thousand degrees are observed
  • the gas-vapor mixture obtained in the reactor together with the liquid reagent enters the tank 28.
  • the gas-vapor mixture is fed through a pipe 33 to a separator with a porous baffle, where the gas-vapor mixtures with C and C are separated.
  • the reactor worked from several hours to several days.
  • a direct dependence of the degree of enrichment of the vapor-gas mixture and the reagent with the 13 C isotope on the operating time of the cavitation reactor is established.
  • the amount of 13 C carbon isotopes was controlled by high resolution mass spectroscopy.
  • the reagent was enriched with the 13 C carbon isotope to 75%.
  • compositions were obtained containing the peptide Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro with a carbon content of 13 C from 0.5% to 75% of the total carbon in the pharmaceutical composition.
  • reagent enrichment was carried out to obtain various drugs with 15 N. isotopes.
  • Substitution of the isotopes of nitrogen 1 N on the isotopes of nitrogen 15 N was carried out in the above cavitation reactor.
  • the reactor When the reactor is operating, the reagent moves along the cavitator channel in direction 18.
  • the flow When flowing around cavitation bodies, the flow is divided into several flows. Beyond the cavitation bodies, cavitation areas arise. At the entrance to the cavitation area, the reagent “boils”, cavitation bubbles appear, when leaving the cavitation area, cavitation bubbles collapse.
  • nitrogen was supplied through the channels 24 and 25 in such a way that the gas fell into the cavitation zones.
  • the gas-vapor mixture obtained in the reactor together with the reagent enters the tank 28.
  • the gas-vapor mixture is fed through a pipe 33 to a separator with a porous partition, where the gas-vapor mixtures with 14 N and 5 N are separated.
  • the reagent was enriched with a nitrogen isotope , 5 N, to 13.75%.
  • the value of the indicator "p" took values from 0.01% to 13.75%.
  • the indicator "p” was determined by the formula
  • n n 15 N 100% / (n l4 N + n 15 N),
  • n 15 N is the number of nitrogen isotopes with a relative atomic mass of 15.0037;
  • n 14 N is the number of nitrogen isotopes with relative atomic mass
  • compositions were obtained having neuroprotective, antiamnestic, antioxidant,
  • composition with neuroprotective A.
  • polypeptide methionine-glutamine-histidine-phenylalanine-prolyl-glycine-proline (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro), characterized in that it additionally contains mineral substances in the following ratio of components in mg / l:
  • the pharmaceutical composition is designed in such a way that it contains nitrogen isotopes 15 ⁇ , and the ratio of the number of nitrogen isotopes 15 N to the total amount of nitrogen in the pharmaceutical composition is from 0.0001 to 0.1375.
  • polypeptide methionine-glutamine-histidine-phenylalanine-prolyl-glycine-proline (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro), characterized in that it additionally contains mineral substances in the following ratio of components in mg / l:
  • the pharmaceutical composition is designed in such a way that it contains 13 C carbon isotopes, and the ratio of the number of carbon isotopes
  • the pharmaceutical composition is designed in such a way that it contains nitrogen isotopes ⁇ 5 ⁇ , and the ratio of the number of nitrogen isotopes 15 N to the total amount of nitrogen in the pharmaceutical composition is from 0.0001 to 0.1375.
  • the claimed pharmaceutical compositions can be used to treat optic neuritis.
  • compositions can be used as antithrombotic and anticoagulant agents.
  • compositions based on the peptide Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, minerals and a carbon content of 1 C equal to 75% of the total carbon in the pharmaceutical composition
  • the dose of the drug is 0.3 mg. Average life, min
  • the dose of the drug is 0.3 mg. Average life, min
  • mice with amnesia of the conditioned reaction of passive avoidance 24 hours after amnesic exposure,% (values rounded to the nearest whole number)
  • mice in each experiment is 30.
  • mice with amnesia of the conditioned reaction of passive avoidance 24 hours after amnesic exposure,% (values rounded to the nearest whole number)
  • mice The number of mice in each experiment is the same.

Abstract

Изобретение относится к области фармацевтической промышленности и медицине. Задачей настоящего изобретения является создание эффективного фармацевтического состава, обладающего нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, противоишемической активностью. Задача решается за счет того, что фармацевтический состав содержит пептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, и от прототипа отличается тем, что дополнительно содержит минеральные вещества: марганец, железо, цинк. Кроме того, в фармацевтическом составе часть изотопов углерода 12С замещена на изотопы углерода 13С. Техническими результатами изобретения являются: увеличение скорости наступления лечебного эффекта, увеличение лечебного эффекта без увеличения концентрации пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, повышение стабильности в течение срока годности.

Description

Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиа нестичес ой, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью (варианты)
Область техники, к которой относится изобретение.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности и медицине и может быть использовано при изготовлении и применении фармацевтических составов с полипептидной последовательностью Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, обладающих нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной,
противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью.
Уровень техники.
Важной проблемой современной медицины является создание новых средств, способных эффективно защищать, а также лечить заболевания мозга.
Эффективным направлением исследований в этой области является создание новых средств на базе препарата семакс. Семакс - препарат, который эффективно влияет на процессы, связанные с формированием памяти и обучением, улучшает мнестические функции, улучшает адаптацию организма человека к гипоксии, церебральной ишемии, наркозу и другим повреждающим воздействиям. Другими словами, семакс улучшает энергетические процессы мозга, повышая его
устойчивость к стрессовым повреждениям, гипоксии. Семакс является хорошим ноотропом, нейрометаболическим стимулятором.
В заявке заявлены два варианта фармацевтического состава.
Аналогом каждому варианту фармацевтического состава является
фармацевтическая композиция для лечения ишемического инсульта, содержащая полипептидную последовательность Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro (Патент на изобретение РФ 2251429, опубликованный 27.07.2004).
Недостатком аналога является относительно малая скорость наступления лечебного эффекта.
Кроме того, имеется аналог - патент РФ 2156087, опубликованный 20.09.2000. В патенте описана биологически активная добавка (БАД) к пище, включающая калий, марганец, цинк, железо и дополнительно 29 различных веществ. В патенте заявлено, что биологически активная добавка обладает антигипоксическими и антиоксидантными свойствами.
Недостатком аналога является невозможность его применения в лечебных целях.
Известно применение Семакса в качестве нейропротектора (Патент на изобретение РФ 2394816, опубликованный 20.07.2010). В патенте РФ 2394816 в таблице 7 представлено изменение неврологического дефицита у крыс после двусторонней перевязки общих сонных артерий под влиянием препарата Семакс, Мексидол и Амтизол. В патенте делается вывод о том, что Мексидол более предпочтителем, Семакс из-за не достаточной эффективности последнего и невозможности повышения его концентрации в растворе.
Известен аналог (Патент на изобретение РФ 2425670, опубликованный
10.08.201 1). В аналоге используют Семакс и холина альфосцерат. Препарат холина альфосцерат повышает эффективность применения Семакса.
Известно применение пептида Семакса формулы Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в качестве антитромботического, антикоагулянтного,
фибриндеполимеризационного и фибринолитического средства (Патент
РФ2290194, опубликованный 27.12.2006).
Недостатком аналога является его относительно малая эффективность лечебного действия.
Известно применение полипептидной последовательности Met-Glu-His-Phe- Pro-Gly-Pro в качестве стимулятора памяти (Авторское свидетельство СССР 939440, опубликованное 30.06.1982), который является основой ноотропного средства и фармацевтической композицией ноотропного действия (Патент РФ N° 2045958, С 16 А 61 К 38/08, 1994).
Недостатком аналога является относительно малая скорость наступления лечебного эффекта.
Известно заявка на изобретение 2006146529, опубликованная 20.07.2008. В заявке описана фармацевтическая композиция, обладающая нейротропной, антиамнестической, противогипоксической и противоишемической активностью. Композиция, в качестве активных компонентов, содержит Семакс и Мексидол или их фармацевтически приемлемые соли в терапевтически эффективных количествах. Здесь эффективность Семакса повышается за счет применения Мексидола.
Известен также патент ЕАПВ 008591, опубликованный 29.06.2007. В патенте предложено использовать производные 3-(3,5-диоксо-4,5-дигидро-ЗН- (1,2,4)триазин-2-ил) бензамида в качестве ингибиторов Р2Х7 для лечения
различных заболеваний, в том числе ишемию при инсульте или сердечном приступе. В патенте предусмотрено использование изотопов 13С, 15N и др. для внесения изотопных меток в лекарственное средство. По изотопам определяют динамику распространения лекарства в тканях организма.
Прототипом двум вариантам изобретения является фармацевтический состав (Семакс. Публикация в сети Интернет:
http://semaks.ru/SEMAX/semax_0 l_short.htm), обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической,
нейрометаболической, противоишемической активностью, содержащий
полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro).
Препарат применяют при острой и хронической недостаточности мозгового кровообращения и связанных с ней заболеваниях, в том числе при инсульте и его последствиях.
Усиление действия препарата осуществляют увеличением его количества (увеличением числа капель в нос или увеличением частоты закапывания). В частности, при инсультах средней тяжести вводится по 2 капли в каждую ноздрю, три раза в день (1% Семакс). А при тяжелом инсульте вводится по четыре капли в каждую ноздрю, пять раз в день.
Исследования показали, что прототип не всегда эффективен при этих патологиях. Другим недостатком прототипа является относительно малая скорость наступления лечебного эффекта.
Признаки прототипа «фармацевтический состав, обладающий
нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью, содержащий
полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro» совпадают с признаками заявленных вариантов изобретения.
У прототипа фармацевтически приемлемым растворителем является вода (дистиллированная вода). Фармацевтически приемлемым вспомогательным веществом в фармацевтическом составе является метиловый эфир
параоксибензойной кислоты (нипаген).
Нипагин относится к фармакологической группе: Антисептики и
дезинфицирующие средства.
Структурная формула полипептида метионин-глутамин-гистидин- фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro):
Figure imgf000005_0001
Недостатками прототипа являются относительно малая скорости наступления лечебного эффекта, не достаточно большой лечебный эффект фармацевтического средства, низкая стабильность фармацевтического состава в течение срока годности.
Сущность изобретения.
Дадим определения терминам.
Срок годности - период, в течение которого фармацевтический состав сохраняет свои свойства в мере, обеспечивающей его использование по
назначению.
Задачей настоящего изобретения является создание эффективного
фармацевтического состава, обладающего нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической,
противоишемической активностью.
Задача решается за счет того, что фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью, содержит полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His- Phe-Pro-Gly-Pro), и от прототипа отличается тем, что дополнительно содержит минеральные вещества при следующем соотношении компонентов в мг/л:
полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин- пролин - 0.01 · 10 3 - 80 · 10 3 ;
железо - 0.007 - 24.5;
марганец - 0.006 - 7.5;
цинк - 0.065 - 66.9.
Также задача решается за счет того, что фармацевтический состав,
обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной,
противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью, содержит полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин- пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro), и от прототипа отличается тем, что дополнительно содержит минеральные вещества при следующем соотношении компонентов в мг/л:
полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин- пролин - 0.01 ' 10 3 - 80 ' 10 3 ;
железо - 0.007 - 24.5;
марганец - 0.006 - 7.5;
цинк - 0.065 - 66.9,
и при этом фармацевтический состав выполнен таким образом, что содержит изотопы углерода 13С, и отношение количества изотопов углерода 13С к общему количеству углерода в фармацевтическом составе составляет величину от 0.005 до 0.75. Фармацевтический состав выполнен в виде раствора, например, назальных капель (для применения интраназально). Фармацевтический состав имеет значение рН от 4 до 7.
Кинематическая вязкость фармацевтического состава, выполненного в виде раствора, от 1.01 до 1.23 мм /с. Кинематическую вязкость фармацевтического состава определяют с помощью капиллярного вязкозиметра.
В фармацевтическом составе кроме действующего вещества (полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин или его фармацевтически приемлемой соли) и минеральных веществ могут использовать фармацевтически приемлемый растворитель. Кроме растворителя, в
фармацевтическом составе могут использовать фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество или фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества.
В качестве фармацевтически приемлемого растворителя может быть использована вода (дистиллированная вода), а также другой растворитель.
В качестве фармацевтически приемлемого вспомогательного вещества может быть использован метиловый эфир параоксибензойной кислоты (например, от 0.01 до 80 г/л) или другое вещество.
Другими словами, основой фармацевтического состава являются
действующее вещество полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин- пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro) и минеральные вещества в фармацевтически приемлемом растворителе, в частности, в воде.
В фармацевтическом составе действующее вещество (полипептид метионин- глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин) и минеральные вещества выбирают из вышеуказанных диапазонов, а растворитель - остальное.
Техническими результатами изобретения являются:
- увеличение скорости наступления лечебного эффекта (уменьшение времени наступления лечебного эффекта) при сохранении продолжительности действия без увеличения концентрации полипептида метионин-глутамин-гистидин- фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro) при лечении расстройства нервной системы, ишемии и гипоксии центральной нервной системы и миокарда, амнезии, а также при повышении активности эндогенной системы и уменьшении интенсивности свободнорадикальных процессов;
- увеличение лечебного эффекта без увеличения концентрации полипептида метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His- Phe-Pro-Gly-Pro) при лечении расстройства нервной системы, ишемии и гипоксии центральной нервной системы и миокарда, амнезии, а также при повышении активности эндогенной системы и уменьшении интенсивности
свободнорадикальных процессов;
- повышение стабильности фармацевтического состава с полипептидом метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His- Phe-Pro-Gly-Pro) в течение срока годности.
В настоящее время, увеличение скорости наступления лечебного эффекта при введении лекарственных средств в организм обеспечивают:
- дозировкой средства и временем его воздействия;
- введением в раствор вспомогательного ингредиента - ускорителя скорости воздействия (частный случай регулятора скорости воздействия).
Приведем примеры.
Известен раствор (заявка РФ N 94015245, опубликованная 27.12.1995) в котором в качестве регулятора скорости воздействия используют 5-10% раствор гиалуроновой кислоты.
Известен кардиостимулирующий препарат (патент РФ N 2068697,
опубликованный 10.1 1.1996), содержащий яд зеленой жабы, хлорбутанодигидрат, хлористый натрий и воду. Для повышения скорости наступления
кардиостимулирующего эффекта (при сохранении продолжительности действия), обеспечиваемого указанным ядом, в препарат вводят до 95% этилового спирта. Спирт за счет осмотических явлений вызывает болевые ощущения и местную негативную реакцию, что и ускоряет действие препарата.
Известны биологически активные добавки, которые при их введении совместно с действующим началом повышают фармакологическую активность лечебных препаратов за счет оптимизации скорости усвоения действующего начала. Так в противоопухолевое средство (Авторское свидетельство СССР 1683190, опубликованное 20.04.1995) дополнительно вводят
поливинилпирролидон и сорбиновую кислоту. Эти компоненты повышают противоопухолевую активность действующего начала.
В изобретении достигается увеличение скорости наступления лечебного эффекта при сохранении продолжительности действия без увеличения
концентрации действующего вещества в фармацевтическом средстве, за счет введение в состав фармацевтического средства минеральных веществ.
Ниже приведем общие сведения о минеральных веществах.
Минеральные вещества подразделяют на макро- и микроэлементы.
К макроэлементам относятся кальций, фосфор, магний, калий, натрий, хлор и сера.
Микроэлементов: железо, медь, марганец, цинк, кобальт, йод, фтор, хром, молибден, ванадий, никель, стронций, кремний, селен признаны необходимыми для жизнедеятельности человека и животных.
Макроэлементы регулируют водно-солевой обмен, поддерживают осмотическое давление в клетках и межклеточных жидкостях, что необходимо для передвижения между ними питательных и лекарственных веществ. Процессы кроветворения происходят с участием железа, меди, марганца, кальция и других минеральных веществ (элементов). Минеральные вещества (микроэлементы) активируют действие ферментов, гормонов, участвуют во всех видах обмена веществ.
Минеральные вещества (Fe, Си, Zn и другие) в растворе (в частности, в фармацевтическом составе) находятся в составе фармацевтически приемлемых солей, например, сукцинатов, хлоридов, карбонатов или сульфатов, а также в составе различных фармацевтически приемлемых комплексных соединений.
Минеральные вещества, соли металлов оказывают противомикробный эффект, инактивируя ферменты, необходимые для жизнедеятельности микроорганизмов. Инактивация ферментов происходит путем взаимодействия ионов металлов с сульфгидрильными группами ферментов.
На слизистые оболочки металлы оказывают выраженное местное действие. При рассматриваемых в заявке концентрациях минеральных веществ, местное действие этих веществ может быть вяжущим или раздражающим. Механизм местного действия металлов обусловлен их способностью реагировать с белками тканей. В результате такого взаимодействия белки свертываются и образуют с ионами металлов альбуминаты. При этом, если происходит частичное свертывание белков только в самых поверхностных слоях тканей, наблюдается вяжущий или раздражающий эффект, имеющий обратимый характер.
Проведенные исследования показали, что минеральные вещества, входящие в состав препарата, усиливают их лечебный эффект. Обеспечивается это, в основном, за счет явно выраженного раздражающего эффекта на ткани организма, а также путем воздействия на ферментативную систему организма.
Для всех вариантов, рассматриваемых в изобретении фармацевтических составов рациональные диапазоны значений содержания минеральных веществ, следующие:
железо - 0.007 - 24.5;
марганец - 0.006 - 7.5;
цинк - 0.065 - 66.9.
Данные диапазоны частично пересекаются с диапазонами значений
минеральных веществ в БАД (см. патент РФ 21 6087). Новизна изобретения обеспечивается за счет использования в фармацевтическом составе полипептида метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His- Phe-Pro-Gly-Pro).
При разработке изобретения установлено, что увеличение скорости
наступления лечебного эффекта, увеличение лечебного эффекта без увеличения концентрации пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в фармацевтическом составе, повышение стабильности фармацевтического состава с пептидом Met-Glu-His-Phe- Pro-Gly-Pro в течение срока годности, обеспечивается введением в
фармацевтический состав определенных минералов (определенной комбинации минералов) в строго определенном для каждого минерала количестве. В результате проведенных исследований для каждого минерала установлен весовой диапазон в фармацевтическом составе. Использование меньшего, чем указано в диапазоне, количества минерального вещества не приводит к достижению технических результатов. Использование большего, чем указано в диапазоне, количества минерального вещества не только не приводит к достижению технических результатов, но ухудшает лечебный эффект от действия пептида Met-Glu-His-Phe- Pro-Gly-Pro. Установлено, что с повышением концентрации минеральных веществ в фармацевтическом составе (выше заявленных диапазонов) они подавляют действие пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, лечебный эффект от препарата исчезает.
Дополнительное увеличение скорости наступления лечебного эффекта, увеличение лечебного эффекта без увеличения концентрации пептида Met-Glu- His-Phe-Pro-Gly-Pro в фармацевтическом составе, повышение стабильности фармацевтического состава с пептидом Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в течение срока годности обеспечивается частичным замещением в фармацевтическом составе изотопов углерода С на изотопы углерода С.
Перечень фигур чертежей.
На фиг.1 представлена хроматограмма заявленного фармацевтического состава с УФ-детектором (210нм). Сорбент С 18.
На фиг.2 представлена хроматограмма заявленного фармацевтического состава с МС-детектором. Выделен пик с временем удержания 4.096 мин.
На фиг.З представлена хроматограмма заявленного фармацевтического состава с МС-детектором. Выделен пик с временем удержания 4.664 мин.
На фиг.4 представлена хроматограмма заявленного фармацевтического состава с МС-детектором. Выделен пик с временем удержания 5.282 мин.
На фиг.5 представлена хроматограмма заявленного фармацевтического состава с МС-детектором. Выделен пик с временем удержания 12.163 мин.
На фиг.6 представлена хроматограмма (левая часть) заявленного
фармацевтического состава на колонке с хиральным сорбентом и с УФ-детектором (220нм).
На фиг.7 представлена хроматограмма (правая часть) заявленного
фармацевтического состава на колонке с хиральным сорбентом и с УФ-детектором (220нм). Выделен пик со временем удержания 5.274.
ю На фиг.8 представлена хроматограмма заявленного фармацевтического состава на колонке с хиральным сорбентом и с МС-детектором (220нм). Выделен пик со временем удержания 5.274.
На фиг.9 представлена хроматограмма заявленного фармацевтического состава на колонке с хиральным сорбентом и с МС-детектором (220нм). Выделен пик со временем удержания 6.366.
На фиг.10 представлена хроматограмма заявленного фармацевтического состава на колонке с хиральным сорбентом и с МС-детектором (220нм). Выделен пик со временем удержания 7.263.
На фиг.11 представлена хроматограмма (левая часть) заявленного
фармацевтического состава на колонке с хиральным сорбентом и с МС-детектором (220нм). Выделен пик со временем удержания 14.648.
На фиг.12 представлена хроматограмма (правая часть) заявленного
фармацевтического состава на колонке с хиральным сорбентом и с МС-детектором (220нм). Выделен пик со временем удержания 14.648.
На фиг.13 представлен MSMS спектр (левая часть) молекулярного иона со значением Z = 153.5.
На фиг.14 представлен MSMS спектр (правая часть) молекулярного иона со значением Z = 153.5.
На фиг.15 представлен масс-спектр высокого разрешения фармацевтического состава.
На фиг.16 представлена схема кавитационного реактора для изотопного обогащения различных смесей.
На фиг.17 представлено поперечное сечение кавитационного реактора.
На фиг.18 представлена схема установки по изотопному обогащению.
Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения.
Изобретение иллюстрируется представленными ниже примерами.
Пример 1 - способ введения минеральных веществ в воду.
Пример 2 - способ получения фармацевтических составов и проверка на стабильность.
Пример 3 - испытания на общую токсичность. Примеры 4-8 иллюстрируют эффективность заявленных фармацевтических составов обладающих нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью. Исследования проведены с использованием материалов, опубликованных в источниках /1 - 5/. В заявке, для наглядности, представлены сравнения действия заявленных фармацевтических составов с действием препарата Семакс на моделях, которые использовались для исследования эффективности препарата Мексидол. Концентрации пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro выбирались таким образом, чтобы результаты можно было сравнить с результатами применения препарата 2- этил-6-метил-З-гидроксипиридина сукцинат.
Пример 1. Введение минеральных веществ в раствор (в воду) осуществляли по методике 161. Существуют и другие способы введения минеральных веществ в раствор. Растворы готовили из чистых металлов при использовании
фармацевтически приемлемых растворителей, обеспечивающих устойчивость растворов при хранении.
Для проведения углубленных исследований, при разработке заявки на изобретение, концентрации металлов в растворах обеспечивались в следующих диапазонах, мг/л:
железо - 0.007 - 24.5;
марганец - 0.006 - 7.5;
цинк - 0.065 - 66.9.
Кроме того, были проведены исследования на сверхбольшое содержание минеральных веществ в составах. Об этих исследованиях будет написано ниже.
Контроль концентраций металлов в растворах осуществляли атомно- абсорбционным методом определения содержания натрия, калия, кальция, магния, железа, марганца, меди, цинка, свинца, кадмия, кобольта, никеля, хрома. П.1.3.2.1 источника 161.
Кроме того, исследовались и другие фармацевтические составы, содержащие пептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro с минеральными веществами: кальций, калий медь, кобальт, хром, натрий и молибден. Для исследований, концентрации этих металлов в растворах обеспечивались в следующих диапазонах, мг/л:
медь - 0.0003 - 0.56; кобальт - 0.0003 - 0.67;
хром - 0.0012 - 1.89;
молибден - 0.0006 - 1.89;
кальций - 0.001 - 17.5;
калий - 0.001 - 2.56;
натрий - 0.019 - 350.
Пример 2. Для примера, опишем получение одного фармацевтического состава с марганцем, цинком и железом определенной концентрации.
В реактор с мешалкой, наливают 8 л воды для инъекций. После чего в реактор загружают пептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro - Юг, заливают раствор с марганцем (общее содержание марганца 0. 23 мг), заливают раствор с железом (общее содержание железа 0. 37 мг), заливают раствор с цинком (общее
содержание цинка 6.6 мг), при постоянном перемешивании. Затем доводят рН раствора до значения 4,5. Полученный раствор доводят до объема 10 л водой для инъекций и пропускают через фильтр.
Контроль показал качественное выполнение фармацевтического состава.
Аналогичным образом были получены и проконтролированы другие заявленные фармацевтические составы с минеральными веществами и пептидом Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro.
Проведены лабораторные исследования заявленных фармацевтических составов. В заявке на фиг. 1-15 проиллюстрированы исследования только одного фармацевтического состава:
пептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro - 1г/л (Капли назальные, 0,1%);
минеральные вещества, мг/л:
железо - 0.037;
марганец - 0.023;
цинк - 0.66.
На фиг.1-12 представлены хроматограммы исследованного образца
фармацевтического состава с минеральными веществами. На фиг. 13 и 14 представлены MSMS спектры фармацевтического состава. А на фиг.15 представлен масс-спектр высокого разрешения фармацевтического состава.
Остальные заявленные и описанные в заявке фармацевтические составы также подвергались лабораторным исследованиям. Хроматограммы образцов
фармацевтических составов с другим составом минеральных веществ аналогичны (различия малы и на графиках соизмеримы с толщенной линии).
Кроме того, исследованы электрические характеристики фармацевтических составов. Установлено, что действующее вещество и минеральные вещества присутствуют в фармацевтическом составе в количествах, обеспечивающих
при температуре 253 - 773К, частоте электрического или электромагнитного поля в диапазоне от 50 Гц до 100Гц, значение действительной составляющей относительной диэлектрической проницаемости в диапазоне от 5 до 80.
Диэлектрическая проницаемость фармацевтического состава характеризует его способность к накоплению электрических зарядов.
Установлено, величина действительной составляющей относительной диэлектрической проницаемости может изменяться путем изменения концентрации (содержания) пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и минеральных веществ.
Целесообразно, для повышения фармацевтического действия обеспечивать значение действительной составляющей относительной диэлектрической
проницаемости в диапазоне от 5 до 80. Если её значение будут ниже или выше, то эффективность действия фармацевтического состава может уменьшаться. Поэтому в. исследованиях показатель «действительная составляющая относительной диэлектрической проницаемости» являлся контрольным, своего рода критерием применимости фармацевтического состава.
Пример 3. Испытания на общую токсичность проводили путем
внутрибрюшинного введения фармацевтических составов на базе пептида Met- Glu-His-Phe-Pro-Gly-Ргои минеральных веществ крысам.
Для проведения исследований концентрации минеральных веществ в растворах выбраны, мг/л:
калий - 30.000;
магний - 80.000; железо - 30.000;
цинк - 80.000.
марганец - 10.000;
медь 1.000;
кобальт - 1.000;
хром - 2.000;
молибден - 2.000;
кальций - 3.500;
натрий - 390.0.
LD50 составляет величину до 1000 мг/кг при внутрибрюшинном введении.
При внутримышечном введении LD50 составляет величину до 3000 мг/кг, что позволяет отнести заявляемые составы к нетоксичным веществам.
При длительном применении фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и минеральных веществ у крыс не выявило изменений со стороны органов и тканей организма (были несущественные).
Пример 4. Антиоксидантную активность фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и содержащих изотопы 13С, сравнивали с антиоксидантной активностью препарата семакс хемилюминесцентным методом 111.
В фармацевтических составах содержание пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly- Pro - 0.15 г/л. Препарат Семакс также содержал пептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly- Pro - 0.15г/л. Препарат Семакс 0.1% был разбавлен водой 1 :6.7 до необходимой концентрации действующего вещества в воде (порядковые номера
фармацевтических составов 49 - 56). Результаты сравнения приведены в таблице 13.
Также сравнивали Семакс, содержащий пептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro - 0.1 г/л с фармацевтическими составами на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro- Gly-Pro, минеральных веществ и с содержанием изотопов углерода 13С равным 0.5% и 75% от всего углерода в фармацевтическом составе (порядковые номера фармацевтических составов 57 - 72). Результаты сравнения приведены в таблице 13. Установлено, что по антиоксидантной активности (АО А) фармацевтические составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и минеральных веществ в основном превосходили Семакс на величину до 17%.
Фармацевтические составы с порядковыми номерами 49, 57 и 65 не
превосходили Семакс.
Фармацевтические составы с порядковыми номерами 55 и 56 по АО А практически не превосходили фармацевтический состав с порядковым номером 54.
Фармацевтические составы с порядковыми номерами 63 и 64 по АОА не превосходили фармацевтический состав с порядковым номером 62.
Фармацевтические составы с порядковыми номерами 71 и 72 по АОА не превосходили фармацевтический состав с порядковым номером 70. У составов 71 и 72 наблюдалось некоторое снижение АОА.
Следовательно, фармацевтические составы с порядковыми номерами 55 и 56, 63 и 64, 71 и 72 применять в качестве антиоксидантного средства экономически не целесообразно (затратно).
Исследования на антиоксидантную активность фармацевтических составов также проведены по методике /8/. Результаты, в основном, аналогичны
вышеприведенным.
Пример 5. Противогипоксическую и нейрометаболичес ую активность фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и содержащих изотопы углерода 13С, сравнивали с
активностью препарата Семакс.
Сравнения выполнены на белых нелинейных мышах (самцах) массой 25 - 27 г по острой гипоксии /9, 10/.
Острую гипоксию (нормобарическую гипоксическую гипоксию)
моделировали путем помещения мышей в термокамеру объемом 250 см3.
В опытах регистрировали продолжительность жизни животных после прекращения доступа воздуха в термокамеру. Животные помещались в
термокамеру поодиночке.
Семакс вводили однократно внутрибрюшинно за 30, 60 и 90 минут до помещения мышей в термокамеру и прекращения доступа воздуха в термокамеру. Время от момента введения препарата до помещения мышей в термокамеру и прекращения доступа воздуха в таблицах обозначено Тв в минутах.
Каждый из фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro- Gly-Pro и минеральных веществ, вводили однократно внутрибрюшинно также за 30, 60 и 90 минут до помещения мышей в термокамеру и прекращения доступа воздуха в термокамеру.
После помещения мышей в термокамеру, по мере потребления кислорода концентрация его в воздухе и в организме мышей снижалась, а количество углекислого газа возрастало. В результате у животных развивалась острая гипоксическая гипоксия. Продолжительность жизни (до остановки дыхания) регистрировали с помощью секундомера и по ее увеличению судили об
эффективности испытанных препаратов.
Результаты сравнения противогипоксической и нейрометаболической активности фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly- Рго, минеральных веществ и содержащих изотопы углерода 13С, с
противогипоксической активностью препарата Семакс приведены в таблицах 14- 17.
На модели острой нормобарической гипоксической гипоксии (в термокамере) установлено, что большая часть фармацевтических составов на базе пептида Met- Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и минеральных веществ увеличивала продолжительность жизни мышей в среднем более чем на 5% по сравнению с разбавленным 1 :6.7 Семаксом.
Установлено увеличение скорости наступления лечебного эффекта при сохранении продолжительности действия без увеличения концентрации
фармацевтического средства. Это хорошо видно в таблице 17. Заявленные препараты увеличивают скорость наступления лечебного эффекта, что сближает значения продолжительности жизни при Тв = ЗОмин и Тв =60мин и 90 мин.
Достигнуто увеличение лечебного эффекта без увеличения концентрации и количества пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro.
Сравнения также проведены на моделях: острой гипобарической гипоксии в вытяжной барокамере с имитацией подъема животных со скоростью 50 м/с до высоты 1 1000 м; острой гемической гипоксии и острой гистотоксической
гипоксии. Результаты этих сравнений аналогичны, результатам, полученным на модели острой нормобарической гипоксической гипоксии.
Кроме того, были проведены исследования по повышению концентрации пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro до величины 80г/л. Наблюдалось повышение эффективности действия по сравнению с лучшими вышеупомянутыми
фармацевтическими составами на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro.
Однако повышение не превышало 3-5%. Повышение концентрации пептида Met- Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro более 80г/л, в частности, до 240 г/л приводило к снижению эффективности по сравнению с лучшими фармацевтическими составами.
Пример 6. Нейропроте торное действие фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и содержащих изотопы углерода 13С сравнивали с нейропротекторным действием препарата Семакс.
При сравнении концентрация пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro - 0.038 г/л. Семакс разбавляли водой 1 :26.
Сравнительные исследования выполнены на белых нелинейных крысах- самцах массой 230-250 г, у которых моделировали ишемический инсульт и геморрагический инсульт.
Ишемический инсульт у крыс воспроизводили двусторонней перевязкой общих сонных артерий. Подопытным животным вводили внутри брюшинно Семакс и заявленные фармацевтические составы с порядковыми номерами от 25 по 48. Характеристики этих фармацевтических составов приведены в таблицах 4 - 6.
Животных после операции наблюдали в течение 2 недель с учетом
выживаемости крыс. Неврологический дефицит у животных определяли каждый час в течение первых 24 ч, а затем 1 раз в сутки. Тяжесть состояния определяли по сумме соответствующих баллов.
Результаты исследования нейропротекторного действия препаратов
представлены в таблице 18. Анализ результатов, приведенных в таблице показал, что у крыс, получивших внутрибрюшинно Семакс, неврологический дефицит был максимально выражен (5.3±0,1 балла) через 3, 4 и 5 сутки после двусторонней перевязки общих сонных артерий. Количество крыс в опыте - 12. Из них погибло 2 животных (16.67%). В опытах было установлено, что составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe- Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода 13С в дозах 0.07 мг в сутки на крысу оказывает выраженное нейропротекторное действие, в целом превосходя по выраженности действия в отношении неврологического дефицита Семакса.
Было проведено 24 опыта с крысами, получившими внутрибрюшинно фармацевтический состав на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода 13С. Количество крыс в каждом опыте - 12. В опытах погибало 10-15% животных.
Фармацевтические составы с порядковыми номерами 25, 33 и 41 по
нейропротекторному действию не превосходят Семакс (Смотри таблицу 18).
Нейропротекторные действия остальных составов превосходят нейропротекторное действие Семакса.
Наиболее выраженое нейропротекторное действие у фармацевтических составов с порядковыми номерами 26 - 32, 34-40, 42-48.
Однако следует учесть следующее. Фармацевтические составы 31 , 32 по своему нейропротекторному действию не превосходят состав 30. Поэтому эти составы использовать не целесообразно. Фармацевтические составы 39, 40 по своему нейропротекторному действию не превосходят состав 38. Поэтому эти составы использовать не целесообразно. Фармацевтические составы 47, 48 по своему нейропротекторному действию не превосходят состав 46. Поэтому эти составы использовать не целесообразно.
Геморрагический инсульт (ГИ) у крыс воспроизводили моделированием локального кровоизлияния в головном мозге (создание ГИ с ишемией мозга) проводили по методике /11/. В соответствие с методикой проводили трепанацию черепа крысы и деструкцию мозговой ткани в области внутренней капсулы с последующим введением в место повреждения крови этой же крысы (0,03 мл крови). Таким образом, достигали инсульт в области внутренней капсулы практически без повреждений соседних тканей мозга.
Фармацевтический состав на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода 13С вводили животным
внутрибрюшинно в дозе 0.07мг в сутки на крысу. Семакс вводили животным внутрибрюшинно в дозе 0.07мг в сутки на крысу. Схема введения была следующей: первую инъекцию осуществляли через 2 ч после операции, потом 3 инъекции через 4 ч. Затем фармацевтический состав на базе пептида Met-Glu-His- Phe-Pro-Gly-Pro и минеральных веществ, а также Семакс вводили ежедневно один раз в сутки в течение 14 суток.
В течение 14 суток после операции оценивали координацию движений на вращающемся стержне в течение 2 минут и способность препаратов повышать выживаемость животных (см. таблицу 19).
Установлено, что фармацевтические составы с порядковыми номерами 25, 33 и 41 по координации движения на вращающемся стержне практически не превосходят Семакс. Нейропротекторные действия остальных составов
превосходят нейропротекторное действие Семакса.
Координация движения крыс заметно повышается при применении
составов с порядковыми номерами 26 - 32 (см. характеристики составов в таблице 4), 34-40 (см. характеристики составов в таблице 5), 42-48 (см. характеристики составов в таблице 6). Однако следует учесть следующее.
Фармацевтические составы 31 , 32 по своему нейропротекторному действию не превосходят состав 30. Одинаковость значений отмечены значками «-//-». Поэтому эти составы использовать на практике не целесообразно.
Фармацевтические составы 39, 40 по своему нейропротекторному действию не превосходят состав 38. Одинаковость значений отмечены значками «-//-».
Поэтому эти составы использовать на практике не целесообразно.
Фармацевтические составы 47, 48 по своему нейропротекторному действию не превосходят состав 46. Одинаковость значений отмечены значками «-//-».
Поэтому эти составы использовать на практике не целесообразно.
Фармацевтические составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода 13С повышают (по сравнению с
Семаксом) выживаемость крыс после операций.
Как и в примере 5, были проведены исследования по повышению
концентрации пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro до величины 80г/л и выше. Наблюдалось повышение эффективности действия составов с концентрацией до 80г/л по сравнению с лучшими вышеупомянутыми фармацевтическими составами на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro (См. таблицу 18). Повышение также не превышало 3-5%. Повышение концентрации пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly- Рго до 240 г/л приводило к снижению эффективности по сравнению с лучшими вышеупомянутыми фармацевтическими составами.
О не допустимости чрезмерного повышения содержание препарата Семакс указывалось в патенте РФ 2394816 (см. таблицу 7 в описании патента РФ 2394816).
Пример 7. Антиа нестическое действие фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода 13С, сравнивали с антиамнистическим действием препарата Семакс.
Сравнения выполнены на белых нелинейных мышах (самцах) массой 25 - 27 г.
Влияние фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro- Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода 13С, и препарата Семакс на амнезию (процессы обучения и памяти) у мышей исследовали, используя условную реакцию пассивного избегания электрокожного раздражения. Мышей подвергали воздействию электросудорожного шока (ток 30 мА в течение 0.3-0.5с к ушным раковинам) сразу после обучения условной реакции пассивного избегания (модель амнезии, вызванной электросудорожным шоком) /10, 12/.
Влияние фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro- Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода 13С, и препарата Семакс на амнезию также оценивали на модели скополаминовой амнезии после обучения условной реакции пассивного избегания /10/.
Препараты вводили однократно внутрибрюшинно за 30, 60 и 90 минут до обучения мышей. Сохранность условной реакции пассивного избегания проверяли через 24 ч после амнезирующего воздействия.
На модели амнезии, вызванной электросудорожным шоком, было
обнаружено, что у мышей фармацевтические составы на базе пептида Met-Glu- His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода |3С, а также препарат Семакс активно предупреждают развитие амнезии условной реакции пассивного избегания (см. таблицу 20). Число мышей, обучившихся условной реакции пассивного избегания, составляло от 50 до 60%. Причем верхние значения диапазона обеспечивают практически все фармацевтические составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и минеральных веществ, а также составы, содержащие изотопы углерода 13С. Нижнее значение диапазона обеспечивает Семакс.
Анализ таблица 20 показывает, что фармацевтические составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода 13С увеличивают скорость наступления лечебного эффекта при сохранении продолжительности действия без увеличения концентрации фармацевтического средства. Также наблюдается увеличение лечебного эффекта без увеличения концентрации фармацевтического средства.
Вышеперечисленные эффекты могут быть достигнуты и за счет применения Семакса путем увеличения дозы Семакса или его концентрации в дозе. В опытах (см. таблицу 20) количество Семакса было увеличено с 0.07 мг до 0.3 мг на мышь.
На модели скополаминовой амнезии было обнаружено, что у мышей фармацевтические составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода 13С, а также препарат Семакс также предупреждают развитие амнезии условной реакции пассивного избегания (см. таблицу 21).
Фармацевтические составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода 13С увеличивают скорость наступления лечебного эффекта при сохранении продолжительности действия без увеличения концентрации фармацевтического средства. Также наблюдается увеличение лечебного эффекта без увеличения концентрации фармацевтического средства.
Увеличение скорости наступления лечебного эффекта и увеличение лечебного эффекта за счет использования Семакса может быть достигнуто путем увеличения его количества в иньекции.
Пример 8. Противоишемическое действие фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода 13С, сравнивали с противоишемическим действием препарата Семакс. Результаты сравнения представлены в таблице 22.
Исследования проведены на белых нелинейных мышах (самцы) массой 35 -
37г.
Ишемию головного мозга воспроизводили путем перевязки обеих общих сонных артерий. Животных после операции наблюдали в течение 7 дней. Фармацевтические составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и минеральных веществ, и препарат Семакс вводили внутрибрюшинно в течение 7 дней. В первый день препараты вводились дважды: сразу после опирации и через 3 часа после операции. Во второй, третий, и т.д. до седьмого дня препараты вводились один раз в сутки.
После двусторонней перевязки общих сонных артерий (и не использовании вышеуказанных препаратов) более 90% мышей погибали в течение наблюдаемых дней.
Фармацевтические составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода 13С, а также препарат Семакс
существенно увеличивали выживаемость мышей в период наблюдения. При этом концентрация пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro составляла 0.0035г/л. В экспериментах препарат семакс разводили водой в соотношении 1 :286.
Увеличение концентрации пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в составах до 80г/л приводило к дальнейшему повышению выживаемости мышей до 99%.
Из таблицы 22 видно, что выживаемость мышей при использовании большинства фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro- Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода 13С выше, чем выживаемость мышей при использовании разбавленного водой препарата Семакс.
Фармацевтические составы N°l, N°9 и N°17 по действию аналогичны действию Семакса. С увеличением количества минеральных веществ в составах их действие усиливается.
Фармацевтические составы 7, по своему действию не превосходят действие состава N°6. Фармацевтические составы N°15, N°16 по своему действию не превосходят действие состава N°14. Фармацевтические составы j\°23 и N°24 по своему действию не превосходят действие состава N°22. Поэтому производить и применять их не целесообразно.
Таким образом, описано применение и подтверждены технические результаты состава jYel, содержащего, мг/л:
полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин- пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro) - 0.01 ' 10 3 - 80 10 3 ;
железо - 0.007 - 24.5; марганец - 0.006 - 7.5;
цинк - 0.065 - 66.9.
Также, описано применение и подтверждены технические результаты состава j\22 содержащего, мг/л:
полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин- пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro) - 0.0 Г 10 3 - 80 10 3 ;
железо - 0.007 - 24.5;
марганец - 0.006 - 7.5;
цинк - 0.065 - 66.9,
и при этом фармацевтический состав содержит изотопы углерода 13С, и отношение количества изотопов углерода 13С к общему количеству углерода в фармацевтическом составе составляет величину от 0.005 до 0.75 ( от 0.5% до 75%)
Проведены также исследования составов содержащих:
полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин- пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro) и минеральные вещества при следующем соотношении компонентов в мг/л:
калий - 0.01 - 17.5;
натрий - 0.019 - 350;
железо - 0.007 - 24.5;
цинк - 0.065 - 66.9;
магний - 0.0001 - 7.0;
хром - 0.0012 - 1.89;
марганец - 0.006 - 7.5;
кальций - 0.001 - 2.56;
медь - 0.0003 - 0.56;
кобальт - 0.0003 - 0.67;
молибден - 0.0006-1.89.
Проведены также исследования составов содержащих:
полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин- пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro), минеральные вещества и изотопы углерода 13С (от 0.5 до 75%) при следующем соотношении компонентов в мг/л:
калий - 0.01 - 17.5; натрий - 0.019 - 350;
железо - 0.007 - 24.5;
цинк - 0.065 - 66.9;
магний - 0.0001 - 7.0;
хром - 0.0012 - 1.89;
марганец - 0.006 - 7.5;
кальций - 0.001 - 2.56;
медь - 0.0003 - 0.56;
кобальт - 0.0003 - 0.67;
молибден - 0.0006-1.89.
Состав минеральных веществ в выше описанных фармацевтических составах был ограничен перечнем минеральных веществ (макроэлементов и
микроэлементов) в «Руководстве по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище. - М.: Федеральный центр
Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004, - 240с». В Руководстве описан метод введения минеральных веществ в раствор, а также методы точного контроля количества минеральных веществ в растворах.
В вышеперечисленных вариантах составов приведены диапазоны весовых значений (в мг/л) компонентов составов, которые по сравнению с прототипом (Семаксом) дают эффект (по техническим результатам) более чем на 3-5%.
Для практической реализации составов N°l и Ν°2, дополнительно к указанным в них минеральным веществам могут быть добавлен любой или добавлены любые из нижеприведенных (за исключением уже указанных в составе минеральных веществ), мг/л:
калий - 0.01 - 17.5;
натрий - 0.019 - 350;
железо - 0.007 - 24.5;
цинк - 0.065 - 66.9;
магний - 0.0001 - 7.0;
хром - 0.0012 - 1.89;
марганец - 0.006 - 7.5;
кальций - 0.001 - 2.56; медь - 0.0003 - 0.56;
кобальт - 0.0003 - 0.67;
молибден - 0.0006-1.89.
Например, первый состав может быть выполнен следующим образом:
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной,
антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической,
нейрометаболической, противоишемической активностью, содержащий полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro), отличающийся тем, что дополнительно содержит минеральные вещества при следующем соотношении компонентов в мг/л:
полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин- пролин - 0.01 · 10 3 - 80 10 3 ;
железо - 0.007 - 24.5;
марганец - 0.006 - 7.5;
цинк - 0.065 - 66.9;
молибден - 0.0006-1.89.
Или может быть выполнен следующим образом:
Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной,
антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической,
нейрометаболической, противоишемической активностью, содержащий полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro), отличающийся тем, что дополнительно содержит минеральные вещества при следующем соотношении компонентов в мг/л:
полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин- пролин - 0.01 · 10 3 - 80 10 3 ;
железо - 0.007 - 24.5;
марганец - 0.006 - 7.5;
цинк - 0.065 - 66.9;
молибден - 0.0006-1.89;
кобальт - 0.0003 - 0.67.
В настоящее время в Мире изотопы углерода 13С широко применяются в биохимии и медицине для диагностики. В заявке представлены результаты собственных исследований по влиянию изотопов углерода С на стабильность и эффективность действия лекарственных составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe- Pro-Gly-Pro.
Установлено, что повышение стабильности заявленного фармацевтического состава в течение срока годности может быть достигнуто за счет замены (от 0.5% до 75%) изотопов углерода С на изотопы углерода С. Установлено, что изотопы углерода |3С в молекулах пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro
замедляют происходящие в молекулах химические реакции, формируют более прочные ковалентные связи, чем изотопы углерода 12С.
Изотопы углерода 13С повышают сопротивляемость молекул к
окислительному воздействию радикалов.
Изотопы углерода С не токсичны. Проведенные эксперименты показывают, что кормление мышей и крыс пищей, обогащенной на 75% углеродом 13С, не приводит к побочным эффектам и ухудшению их здоровья.
В процессе экспериментальной проверки заявленных фармацевтических составов, обогащенных изотопами углерода 13С установлено, что эти составы обладают повышенной стабильностью, они не токсичны и, кроме того, обладают повышенной нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной,
противогипоксической, противоишемической активностью по сравнению с фармацевтическим составом, в котором отсутствуют изотопы углерода 13С.
Способы производства стабильного высокообогащенного нерадиоактивного изотопа углерода- 13 широко применяются в российской и мировой
промышленности. Хорошо отработаны способы получения изотопа углерода- 13 методом газовой диффузии через пористые перегородки, диффузии в потоке пара, термодиффузии, а также методом дистилляции, изотопного обмена,
центрифугирования, электролиза, генной инженерии и др. Краткая характеристика этих методов приведена в источнике /13/.
В Московской государственной академии тонкой химической технологии им. М.В. Ломоносова отрабатывают современные нанотехнологии получения и включения атомов стабильных изотопов углерода ,3С в молекулы различной структуры. В академии получают молекулы изотопномеченных соединений с различными уровнями изотопного обогащения - от долей процентов до ста процентов изотопов в веществе. Работы ведутся в интересах медицинской диагностики. В источнике /14/ приведено 165 ссылок на иностранные источники информации по изотопному обогащению различных веществ.
В свою очередь, авторы активно участвовал в работах по изотопному обогащению углеводородов, а также реагентов для получения различных
лекарственных препаратов. Обогащение реагентов изотопами углерода 13С
(замещение изотопов углерода 12 С на изотопы углерода 13 С) осуществляли в кавитационном реакторе конструкции профессора Кормилицына В. И. (Московский Энергетический Институт - технический университет).
Реактор был изготовлен по методике, приведенной в источнике /15/. Скорость течения в реакторе, по длине канала, изменялась от 10м/с до 50м/с.
На фиг.16 представлена схема кавитационного реактора для изотопного обогащения различных смесей, в частности, углеводородных реагентов для получения пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, обогащенного изотопами
I ^
углерода С. Реактор расположен в установке, которая содержит насос 6НК-6х1, обеспечивающий максимальный расход 90 м3/час, напор 125 м при мощности электродвигателя 75кВт, частоте оборотов ротора электродвигателя и колеса насоса 2950 об/мин. Дополнительно установка содержит емкости для реагентов и измерительные приборы.
Схема установка представлена на фиг.18.
Кавитационный реактор 1 (см. фиг.16) выполнен в виде плоского сопла Лаваля с телами кавитации 2-9 в канале 10.
На фиг.17 представлено поперечное сечение кавитационного реактора. Канал реактора в области тел кавитации разделяется на несколько каналов. Например, тела кавитации 5 и 6 разделяют канал на более мелкие каналы 13, 14 и 15. Снаружи канал ограничивают стенки 16 и 17, а также две крышки 1 1 и 12.
На фиг.16 стрелками 18 показано направление движения реагента на входе в реактор, стрелкой 19 показано направление движения реагента на выходе из реактора.
В стенке 16 выполнены каналы 24 и 25 для подачи в зоны кавитации двуокиси углерода и азота. Установка работает следующим образом. Углеводородный реагент из емкости 28 с помощью насоса 26 прокачивается через реактор 27 и поступает обратно в емкость 28. Падение давления на реакторе контролируется манометрами 29 и 30. Температура реагента контролируется по термометру 31. Подогрев реагента в емкости осуществляют нагревателем 32.
При работе реактора углеводородный реагент движется по каналу кавитатора в направлении 18. При обтекании тел кавитации поток разделяется на несколько потоков. За телами кавитации возникают области кавитации. В частности, за телами (если смотреть по направлению движения реагента) кавитации 2, 3 и 4 располагаются зоны кавитации 20, 21, 22 и 23. При входе в область кавитации реагент «закипает», возникают кавитационные пузырьки, при выходе из области кавитации кавитационные пузырьки схлопываются. При этом, в области (в месте) схлопывания кавитационного пузырька наблюдается повышение давления до нескольких тысяч атмосфер и повышение температуры до тысячи градусов
Цельсия. Через каналы 24 и 25 в поток подается двуокись углерода таким образом, чтобы газ попал в зоны кавитации.
Парогазовая смесь, полученная в реакторе совместно с жидким реагентом поступает в емкость 28. Далее парогазовая смесь по трубопроводу 33 поступает в сепаратор с пористой перегородкой, где парогазовые смеси с С и С разделяются.
В экспериментах реактор работал от нескольких часов до нескольких суток. Установлена прямая зависимость степени обогащения парогазовой смеси и реагента изотопом 13С от времени работы кавитационного реактора.
Контроль количества изотопов углерода 13С осуществлялся масс- спектроскопией высокого разрешения.
В результате экспериментов было достигнуто обогащение реагента изотопом углерода 13С до 75%.
Таким образом, были получены фармацевтические составы, содержащие пептид Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro с содержанием изотопа углерода 13С от 0.5% до 75% от всего углерода в фармацевтическом составе.
Кроме того, проведены работы по обогащению реагентов для получения различных лекарственных препаратов изотопами 15N. Замещение изотопов азота 1 N на изотопы азота 15N осуществляли в вышеописанном кавитационном реакторе. При работе реактора реагент движется по каналу кавитатора в направлении 18. При обтекании тел кавитации поток разделяется на несколько потоков. За телами кавитации возникают области кавитации. При входе в область кавитации реагент «закипает», возникают кавитационные пузырьки, при выходе из области кавитации кавитационные пузырьки схлопываются. В эксперимента через каналы 24 и 25 в поток подавали азот таким образом, чтобы газ попал в зоны кавитации.
Парогазовая смесь, полученная в реакторе совместно с реагентом поступает в емкость 28. Далее парогазовая смесь по трубопроводу 33 поступает в сепаратор с пористой перегородкой, где парогазовые смеси с 14N и ,5N разделяются.
В результате экспериментов было достигнуто обогащение реагента изотопом азота ,5N до 13.75%. Значение показателя «п» принимало значения от 0.01% до 13.75%.
Показатель «п» определяли по формуле
n = n15N 100% / (nl4N+n15N),
где n15N - количество изотопов азота с относительной атомной массой 15.0037;
n14N - количество изотопов азота с относительной атомной массой
14,0067.
Таким образом были получены следующие фармацевтические составы, обладающие нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной,
противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью.
А. Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной,
антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической,
нейрометаболической, противоишемической активностью, содержащий
полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro), отличающийся тем, что дополнительно содержит минеральные вещества при следующем соотношении компонентов в мг/л:
полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин- пролин - 0.01 10 3 - 80 10 3 ;
железо - 0.007 - 24.5; марганец - 0.006 - 7.5;
цинк - 0.065 - 66.9,
и при этом фармацевтический состав выполнен таким образом, что содержит изотопы азота 15Ν , и отношение количества изотопов азота 15N к общему количеству азота в фармацевтическом составе составляет величину от 0.0001 до 0.1375.
Б. Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной,
антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической,
нейрометаболической, противоишемической активностью, содержащий
полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro), отличающийся тем, что дополнительно содержит минеральные вещества при следующем соотношении компонентов в мг/л:
полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин- пролин - 0.01 10 3 - 80 10 3 ;
железо - 0.007 - 24.5;
марганец - 0.006 - 7.5;
цинк - 0.065 - 66.9,
и при этом фармацевтический состав выполнен таким образом, что содержит изотопы углерода 13С, и отношение количества изотопов углерода |3С к общему количеству углерода в фармацевтическом составе составляет величину от 0.005 до 0.75;
и кроме того фармацевтический состав выполнен таким образом, что содержит изотопы азота Ι5Ν , и отношение количества изотопов азота 15N к общему количеству азота в фармацевтическом составе составляет величину от 0.0001 до 0.1375.
Таким образом, при реализации заявленных фармацевтических составов обеспечивается:
- увеличение скорости наступления лечебного эффекта (уменьшение времени наступления лечебного эффекта) при сохранении продолжительности действия без увеличения концентрации полипептида метионин-глутамин-гистидин- фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro) при лечении расстройства нервной системы, ишемии и гипоксии центральной нервной системы и миокарда, амнезии, а также при повышении активности эндогенной системы и уменьшении интенсивности свободнорадикальных процессов;
- увеличение лечебного эффекта без увеличения концентрации полипептида метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His- Phe-Pro-Gly-Pro) при лечении расстройства нервной системы, ишемии и гипоксии центральной нервной системы и миокарда, амнезии, а также при повышении активности эндогенной системы и уменьшении интенсивности
свободнорадикальных процессов;
- повышение стабильности фармацевтического состава с полипептидом метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His- Phe-Pro-Gly-Pro) в течение срока годности.
Также установлено, что заявленные фармацевтические составы являются эффективными стимуляторами памяти. Обеспечивают восстановление
интеллектуально-мнестических функций нервной системы и улучшают общее состояние больного.
Заявленные фармацевтические составы могут применяться для лечения невритов зрительного нерва.
Кроме того, заявленные фармацевтические составы могут применяться, как антитромботические и антикоагулянтные средства.
Таблица 1
Фармацевтические составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и минеральных веществ
Figure imgf000034_0001
*) нумерация фармацевтических составов сквозная.
Таблица 2
Фармацевтические составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и с содержанием изотопов углерода 13С равным 0.5% от всего углерода в фармацевтическом составе
Figure imgf000034_0002
Таблица 3
Фармацевтические составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и с содержанием изотопов углерода 13С равным 75% от всего углерода в фармацевтическом составе
Figure imgf000034_0003
Таблица 4
Фармацевтические составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и минеральных веществ
Figure imgf000035_0001
Таблица 5
Фармацевтические составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и с содержанием изотопов углерода 13С равным 0.5% от всего углерода в фармацевтическом составе
Figure imgf000035_0002
Таблица 6
Фармацевтические составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и с содержанием изотопов углерода С равным 75% от всего углерода в фармацевтическом составе
Figure imgf000035_0003
Таблица 7
Фармацевтические составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и минеральных веществ
Figure imgf000036_0001
Таблица 8
Фармацевтические составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и с содержанием изотопов углерода 13С равным 0.5% от всего углерода в фармацевтическом составе
Figure imgf000036_0002
Таблица 9
Фармацевтические составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и с содержанием изотопов углерода 13С равным 75% от всего углерода в фармацевтическом составе
Figure imgf000036_0003
Таблица 10
Фармацевтические составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и минеральных веществ
Figure imgf000037_0001
Таблица 11
Фармацевтические составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и с содержанием изотопов углерода С равным 0.5% от всего углерода в фармацевтическом составе
Figure imgf000037_0002
Таблица 12
Фармацевтические составы на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и с содержанием изотопов углерода 1 С равным 75% от всего углерода в фармацевтическом составе
Figure imgf000037_0003
Таблица 13
Результаты сравнения антиоксидантной активности препарата Семакс, разбавленного водой 1 :6.7, с антиоксидантной активностью фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ, а также содержащих изотопы углерода 13С
(порядковые номера фармацевтических составов 49 - 72)
Figure imgf000038_0001
66 3.74
67 3.82
68 4.05
69 4.19
70 4.18
71 3.45
72 3.43
Таблица 14
Результаты проверки противогипоксической активности
препарата Семакс, доза* 0.5мг
Figure imgf000039_0001
*) доза препарата на одну мышь. Препарат Семакс разбавлен водой 1 :6.7.
**) среднее время по испытуемым мышам в опыте.
Таблица 15
Результаты проверки противогипоксической активности фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro и минеральных веществ. Доза 0.3 мг.
Средняя продолжительность жизни, мин
Время Порядковый номер фармацевтического состава с 0.15 граммами Тв, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в литре
Figure imgf000040_0001
Таблица 16
Результаты проверки противогипоксической активности фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода 13С.
Доза препарата 0.3 мг. Средняя продолжительность жизни, мин
Figure imgf000040_0002
Таблица 17
Результаты проверки противогипоксической активности фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода 13С.
Доза препарата 0.3 мг. Средняя продолжительность жизни, мин
Время Порядковый номер фармацевтического состава с 0.15 граммами Тв, пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro в литре
Figure imgf000041_0001
Таблица 18
Результаты проверки нейропротекторного действия (на модели ишемического инсульта) фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly- Pro, минеральных веществ и изотопов углерода С и нейропротекторного действия препарата Семакс.
Измерения в баллах, М±т, где т=0.1
Figure imgf000041_0002
Фарм. состав N°25 4.9 5.0 5.2 5.3 5.3 5.3 5.2 5.1 5.0 5.0
Фарм. состав ·Ν°26 4.6 4.7 4.8 4.7 4.7 4.6 4.5 4.4 4.4 4.3
Фарм. состав 27 4.4 4.4 4.7 4.7 4.7 4.5 4.5 4.5 4.4 4.4
Фарм. состав N228 4.4 4.4 4.6 4.6 4.6 4.5 4.4 4.4 4.4 4.4
Фарм. состав N°29 4.3 4.3 4.4 4.5 4.6 4.5 4.3 4.3 4.3 4.3
Фарм. состав ЗО 4.2 4.2 4.3 4.4 4.5 4.5 4.4 4.4 4.4 4.4
Фарм. состав jN°31 -II- -II- -II- -II- -II- -II- -II- -II- -II- -II-
Фарм. состав N232 -II- -II- -II- -II- -II- -II- -II- -II- -II- -II-
Фарм. состав ЗЗ 4.9 5.0 5.2 5.3 5.3 5.3 5.2 5.1 5.0 5.0
Фарм. состав 34 4.6 4.7 4.8 4.7 4.7 4.6 4.5 4.4 4.4 4.3
Фарм. состав N235 4.4 4.4 4.7 4.7 4.7 4.5 4.5 4.5 4.4 4.4
Фарм. состав jY°36 4.4 4.4 4.6 4.6 4.6 4.5 4.4 4.4 4.4 4.4
Фарм. состав JV237 4.3 4.3 4.4 4.5 4.5 4.5 4.3 4.3 4.3 4.3
Фарм. состав 38 4.2 4.2 4.3 4.4 4.4 4.4 4.4 4.4 4.4 4.4
Фарм. состав N°39 -II- -II- -II- -II- -II- -II- -II- -II- -II- -II-
Фарм. состав Ν°40 -II- -II- -II- -II- -II- -II- -II- -II- -II- -II-
Фарм. состав jN°41 4.9 5.0 5.2 5.3 5.3 5.3 5.2 5.1 5.0 5.0
Фарм. состав jN°42 4.6 4.7 4.7 4.7 4.7 4.6 4.5 4.4 4.4 4.3
Фарм. состав N243 4.4 4.4 4.6 4.6 4.6 4.5 4.5 4.5 4.4 4.4
Фарм. состав J 244 4.4 4.4 4.6 4.6 4.6 4.5 4.4 4.4 4.4 4.4
Фарм. состав N 45 4.3 4.3 4.4 4.5 4.5 4.5 4.3 4.3 4.3 4.3
Фарм. состав N°46 4.2 4.2 4.3 4.4 4.4 4.4 4.4 4.4 4.4 4.4
Фарм. состав jN°47 -II- -II- -II- -II- -II- -II- -II- -II- -II- -II-
Фарм. состав N 48 -II- -II- -II- -II- -II- -II- -II- -II- -II- -II-
Таблица 19
Результаты проверки нейропротекторного действия (на модели геморрагического инсульта) фармацевтических составов на базе пептида Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-
Pro, минеральных веществ с изотопами углерода С, и нейропротекторного действия препарата Семакс. Количество крыс, не удержавшихся на вращающемся стержне в течение 2 минут
(количество выживших крыс)
Figure imgf000043_0001
Фарм. состав N°42 4(10) 3(9) 2(8) 1(8) 0(8)
Фарм. состав Ν°43 4(10) 3(10) 2(10) 1(8) 0(8)
Фарм. состав Ν°44 4(10) 3(10) 2(10) 1(10) 0(9)
Фарм. состав JY«45 3(Ю) 2(10) 1(10) 1(10) 0(9)
Фарм. состав jN°46 3(10) 2(10) 1(10) 0(Ю) 0(10)
Фарм. состав N°47 -II- -II- -II- -II- -II-
Фарм. состав N°48 -II- -II- -II- -II- -II-
*) количество крыс, не удержавшихся на вращающемся стержне в течение 2 минут. **) количество выживших крыс к моменту контроля. На контроль предоставлялось 10 крыс.
Таблица 20
Результаты проверки влияния фармацевтических составов на базе пептида Met- Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода С, а также Семакса на амнезию у мышей, вызванную электросудорожным шоком. Число мышей с амнезией условной реакции пассивного избегания через 24 часа после амнезирующего воздействия, % (значения округлены до целого числа)
Figure imgf000044_0001
Фарм. состав Ν°32 22 20 17 15 15
Фарм. состав Ν°41 22 20 17 15 15
Фарм. состав j\->42 21 19 15 14 14
Фарм. состав N°43 21 19 16 15 14
Фарм. состав N°44 20 18 14 13 13
Фарм. состав Ν°45 20 18 14 13 13
Фарм. состав N°46 20 17 13 12 12
Фарм. состав Ν°4Ί 20 17 14 12 13
Фарм. состав 4& 22 20 17 15 15
) Количество мышей в каждом опыте - 30.
**) Семакс, доза 0.3 мг на мышь.
Таблица 21
Результаты проверки влияния фармацевтических составов на базе пептида Met- Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода 13С, а также Семакса на амнезию у мышей, вызванную скополамином. Число мышей с амнезией условной реакции пассивного избегания через 24 часа после амнезирующего воздействия, % (значения округлены до целого числа)
Figure imgf000045_0001
Фарм. состав Ν»28 20 15 11 1 1 11
Фарм. состав Ν°29 19 15 11 1 1 11
Фарм. состав JY230 18 13 10 10 10
Фарм. состав JN°31 19 12 10 10 1 1
Фарм. состав Ν°32 21 19 15 13 13
Фарм. состав Ν°41 21 19 15 13 13
Фарм. состав j\°42 21 18 13 12 13
Фарм. состав N°43 20 17 1 1 1 1 12
Фарм. состав N244 20 15 1 1 1 1 11
Фарм. состав N°45 19 15 1 1 1 1 и
Фарм. состав jN°46 18 13 10 10 10
Фарм. состав N247 19 13 10 1 1 1 1
Фарм. состав N248 21 19 16 13 13
*) Количество мышей в каждом опыте -
**) Семакса, доза 0.3 мг на мышь.
Таблица 22
Результаты проверки влияния фармацевтических составов на базе пептида Met- Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro, минеральных веществ и изотопов углерода 13С, а также Семакса на выживаемость мышей на 7-е сутки после двусторонней перевязки общих сонных артерий.
Количество мышей в каждом опыте -
Figure imgf000046_0001
составляла 0.0035г/л (80г/л)
Фармацевтические составов на базе пептида Met-Glu-His- Phe-Pro-Gly-Pro и минеральных веществ
Фармацевтический состав Ν°1 93
Фармацевтический состав N°2 94
Фармацевтический состав J e3 94
Фармацевтический состав Ns4 94
Фармацевтический состав JN°5 95
Фармацевтический состав N°6 96
Фармацевтический состав Ns7 93
Фармацевтический состав Ν°8 91
Фармацевтический состав N°9 93
Фармацевтический состав Ν°10 94
Фармацевтический состав \ 1 94
Фармацевтический состав Ν°12 94
Фармацевтический состав jNbl3 96
Фармацевтический состав N°14 96
Фармацевтический состав N°15 92
Фармацевтический состав Ν°16 90
Фармацевтический состав JVel7 93
Фармацевтический состав N2 I 8 94
Фармацевтический состав j\°19 94
Фармацевтический состав N220 95
Фармацевтический состав N°21 97
Фармацевтический состав Na22 97
Фармацевтический состав N°23 92
Фармацевтический состав N°24 91
Фармацевтический состав jN°89 97
Фармацевтический состав j\°90 97
Фармацевтический состав JV291 97
Фармацевтический состав J4S92 97 Фармацевтический состав N°93 98
Фармацевтический состав N«94 99
Фармацевтический состав Ne95 99
Фармацевтический состав N°96 99
Литература
1. Воронина Т.А., Островская Р.У. Методические указания по изучению ноотропной активности фармакологических веществ //Руководство по
экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. / Под ред. Фисенко В.П. - М., 2000. - С.153-158.
2. Буреш Я., Бурешова О., Хьюстон П.Д. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения: пер. с англ./Под. ред. Батуева А.С. - М.: Высш. шк., 1991. - 399 с.
3. Владимиров Ю.А., Шерстнев М.П., Азимбаев Т.К. Оценка
антиокислительной и антирадикальной активностей веществ и биологических объектов с помощью железоинициированной хемилюминесценции // Биофизика. - 1992. - Т.37, вып.6. - С.1041-1047.
4. Воронина Т.А. Отечественный препарат нового поколения мексидол:
основные эффекты, механизм действия, применение. - М., 2004. - 21 с.
5. Гусев Е.И., Скворцова В.И. Ишемия головного мозга. - М.: Медицина, 2001.
6. Руководство по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище. - М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004, - 240с.
7. Владимиров Ю.А., Шерстнев М.П., Азимбаев Т.К. Оценка
антиокислительной и антирадикальной активностей веществ и биологических объектов с помощью железоинициированной хемилюминесценции // Биофизика. - 1992. - Т.37, вып.6. - С.1041-1047. 8. В.Х.Хавинсон, В.Г.Морозов, В.Н.Анисимов. Влияние эпиталамина на свободнорадикальные процессы у человека и животных. Успехи геронтологии, 1999г., выпуск 3 .
9. Методические рекомендации по экспериментальному изучению
препаратов, предлагаемых для клинического изучения в качестве
антигипоксических средств. Под редакцией Л.Д.Лукьяновой. - М., 1990.
10. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Под редакцией Р.У.Хабриева. - М.: Минздрав РФ, 2005.
1 1. McGraw СР., Pashayan A.G., Wendel О.Т. Cerebral infarction in the
Mongolian gerbil exacerbated by phenoxybenzaminetreatment // Stroke. - 1976 - Vol.7, No 5. - P.485-488.
12. Cumin R., Bandle E.F., Gamzu E., Haefely W.E. Effect of the novel compound antiracetam (Ro 13-5057) upon impared learning and memory in rodents //
Psychopharmacol. - 1982. - Vol.78. - P.104-1 11.
13. Разделение изотопов. Физическая энциклопедия.
http://dic.academic.ru/dic.nsf/enc physics/ 1071 /ИЗОТОПОВ .
14. Нанотехнология и включение атомов дейтерия 2Н, углерода 13 С, азота 15N, и кислорода 18O в молекулы аминокислот и белков.
http://samlib.iWo/oleg_w_rn cdocumentsandsettingsolegmosinmoidokumentynanotehnol ogiiaiwkljuchenieatomowdejterija2hrtf.shtml
15. Р.Ф.Ганиев, В.И.Кормилицын, Л.И.Украинский. Волновая технология приготовления альтернативных видов топлив и эффективность их сжигания.- М.:Научно-издательский центр «Регулярная и хаотическая динамика», 2008.-1 16 с.

Claims

Формула изобретения
1. Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной,
антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической,
нейрометаболической, противоишемической активностью, содержащий
полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro), отличающийся тем, что дополнительно содержит минеральные вещества при следующем соотношении компонентов в мг/л:
полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин- пролин - 0.01 10 3 - 80 10 3 ;
железо - 0.007 - 24.5;
марганец - 0.006 - 7.5;
цинк - 0.065 - 66.9.
2. Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной,
антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической,
нейрометаболической, противоишемической активностью, содержащий
полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин-пролин (Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro), отличающийся тем, что дополнительно содержит минеральные вещества при следующем соотношении компонентов в мг/л:
полипептид метионин-глутамин-гистидин-фенилаланин-пролил-глицин- пролин - 0.01 ' 10 3 - 80 10 3 ;
железо - 0.007 - 24.5;
марганец - 0.006 - 7.5;
цинк - 0.065 - 66.9,
и при этом фармацевтический состав выполнен таким образом, что содержит изотопы углерода 13С, и отношение количества изотопов углерода 13С к общему количеству углерода в фармацевтическом составе составляет величину от 0.005 до 0.75.
3. Фармацевтический состав по любому из пп.1-2, отличающийся тем, что значение рН составляет величину от 4 до 7.
PCT/RU2013/000164 2012-03-15 2013-03-01 Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью (варианты) WO2013137777A1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EA201200310 2012-03-15
EA201200310A EA201200310A1 (ru) 2012-03-15 2012-03-15 Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью (варианты)

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2013137777A1 true WO2013137777A1 (ru) 2013-09-19

Family

ID=49161551

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2013/000164 WO2013137777A1 (ru) 2012-03-15 2013-03-01 Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью (варианты)

Country Status (2)

Country Link
EA (1) EA201200310A1 (ru)
WO (1) WO2013137777A1 (ru)

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2164764C1 (ru) * 2000-03-29 2001-04-10 Оао "Диод" Биологически активная добавка к пище
JP2003000198A (ja) * 2001-06-19 2003-01-07 Fancl Corp ミネラル含有食品組成物
RU2291701C2 (ru) * 2004-10-22 2007-01-20 Открытое акционерное общество "ЭКСИРУС" Способ переработки пантов маралов и северных оленей в ультрадисперсный порошок
CN101690590A (zh) * 2009-10-15 2010-04-07 南宁富莱欣生物科技有限公司 一种保健食品铁锌钙片及其生产方法
RU2440132C2 (ru) * 2006-12-27 2012-01-20 Закрытое акционерное общество "Синтез пептидов" Композиция, обладающая нейропротективной, антиамнестической, противогипоксической и противоишемической активностью

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2164764C1 (ru) * 2000-03-29 2001-04-10 Оао "Диод" Биологически активная добавка к пище
JP2003000198A (ja) * 2001-06-19 2003-01-07 Fancl Corp ミネラル含有食品組成物
RU2291701C2 (ru) * 2004-10-22 2007-01-20 Открытое акционерное общество "ЭКСИРУС" Способ переработки пантов маралов и северных оленей в ультрадисперсный порошок
RU2440132C2 (ru) * 2006-12-27 2012-01-20 Закрытое акционерное общество "Синтез пептидов" Композиция, обладающая нейропротективной, антиамнестической, противогипоксической и противоишемической активностью
CN101690590A (zh) * 2009-10-15 2010-04-07 南宁富莱欣生物科技有限公司 一种保健食品铁锌钙片及其生产方法

Also Published As

Publication number Publication date
EA201200310A1 (ru) 2013-09-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2013137777A1 (ru) Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью (варианты)
WO2013141758A1 (ru) Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью (варианты)
WO2013129977A2 (ru) Фармацевтический состав для инъекций, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, противоишемической активностью (варианты)
WO2014011077A2 (ru) Фармацевтический состав, обладающий метаболическим, противокатарактным, ретинопротекторным действием (варианты)
EA020584B1 (ru) Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью (варианты)
WO2013137778A1 (ru) Твердая лекарственная форма, обладающая нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, противоишемической активностью (варианты)
EA024401B1 (ru) Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью (варианты)
EA021246B1 (ru) Фармацевтический состав, обладающий сосудосуживающим, антиконгестивным, противовоспалительным действием (варианты)
WO2014171854A1 (ru) Антиоксидантный фармацевтический состав (варианты)
EA020559B1 (ru) Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью (варианты)
EA021295B1 (ru) Фармацевтический состав, обладающий сосудосуживающим, антиконгестивным, противовоспалительным действием (варианты)
EA021234B1 (ru) Фармацевтический состав, обладающий сосудосуживающим, антиконгестивным, противовоспалительным действием (варианты)
EA020673B1 (ru) Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью (варианты)
EA020560B1 (ru) Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью (варианты)
EA021247B1 (ru) Фармацевтический состав, обладающий сосудосуживающим, антиконгестивным, противовоспалительным действием (варианты)
EA021232B1 (ru) Фармацевтический состав, обладающий сосудосуживающим, антиконгестивным, противовоспалительным действием (варианты)
WO2014054975A2 (ru) Фармацевтический состав, обладающий метаболическим, противокатарактным, ретинопротекторным действием (варианты)
EA021266B1 (ru) Фармацевтический состав, обладающий сосудосуживающим, антиконгестивным, противовоспалительным действием (варианты)
EA020538B1 (ru) Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью (варианты)
EA021231B1 (ru) Фармацевтический состав, обладающий сосудосуживающим, антиконгестивным, противовоспалительным действием (варианты)
WO2014070038A1 (ru) Твердая лекарственная форма, обладающая нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, противоишемической активностью (варианты)
EA021265B1 (ru) Фармацевтический состав, обладающий сосудосуживающим, антиконгестивным, противовоспалительным действием (варианты)
EA020521B1 (ru) Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью (варианты)
EA020539B1 (ru) Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью (варианты)
EA020585B1 (ru) Фармацевтический состав, обладающий нейропротекторной, антиамнестической, антиоксидантной, противогипоксической, нейрометаболической, противоишемической активностью (варианты)

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 13762016

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 13762016

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1