WO2013137173A1 - バイオセンサの製造方法 - Google Patents
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Abstract
酵素層およびメディエータ層それぞれが酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含むことにより、長期間保管可能なバイオセンサを簡単に製造することができる技術を提供する。 酵素層106bおよびメディエータ層106cが反応層106として一緒に形成されるので、従来のように、カバー層130および電極層110それぞれに個別に酵素層106bおよびメディエータ層106cをそれぞれ形成する必要がなく、簡単に反応層106を形成することができ、酵素層106bおよびメディエータ層106cそれぞれが酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含むことにより、保管状態において、酵素とメディエータとの反応が抑制されると共に、メディエータ層106cのメディエータが還元されるのが抑制されるため、長期期間保管可能なバイオセンサ100を簡単に製造することができる。
Description
本発明は、作用極および対極を含む電極系が設けられた電極層と、キャビティを形成するためのスリットが形成されて電極層に積層されるスペーサ層と、キャビティに連通する空気穴が形成されてスペーサ層に積層されるカバー層と、作用極および対極に設けられた反応層とを備えるバイオセンサの製造方法に関する。
図10の従来のバイオセンサに示すように、作用極501および対極(図示省略)と参照極502とを含む電極系と、測定対象物質と特異的に反応する酵素を含む酵素層503aおよびメディエータを含むメディエータ層503bから成る反応層とを有するバイオセンサ500を用いて、試料に含まれる測定対象物質と反応層とが反応することで生成される還元物質を作用極501と対極との間に電圧を印加して酸化することにより得られる酸化電流を計測することで測定対象物質の定量を行う物質の測定方法が知られている(例えば特許文献1参照)。
図10に示すバイオセンサ500は、ポリエチレンテレフタレートやポリイミドなどの絶縁性基板に電極が設けられて形成された電極層504と、電極層に設けられた各電極間の短絡を防止するための絶縁体層505と、カバー層506とが積層されて形成される。また、電極層504にメディエータ層503bが設けられ、カバー層506に酵素層503aが設けられており、電極層504とカバー層506とが、それぞれに設置された両面テープから成る接着層508により互いに貼りあわされることで、酵素層503aおよびメディエータ層503bが分離して互いに離隔した状態で配置されている。
また、電極層504には、作用極501および対極と参照極502とが設けられ、これらの電極501,502にそれぞれ電気接続される電極パターンが設けられることにより電極層504に電極系が形成されている。
そして、酵素層503aおよびメディエータ層503bが対向する空間内に液体から成る試料が供給されると、供給された試料が各電極501,502および反応層に接触すると共に、反応層が試料に溶解する。
また、カバー層506に設けられた酵素層503aには、試料に含まれるグルコースに特異的に反応するグルコースオキシダーゼおよび親水性高分子が含まれている。また、作用極501および対極上に設けられたメディエータ層503bには、メディエータ(電子受容体)としてのフェリシアン化カリウムおよび親水性高分子が含まれている。そして、酵素層503aおよびメディエータ層503bそれぞれに含まれる親水性高分子により、各層503a,503bの剥離が防止されている。
また、フェリシアン化カリウムが試料に溶解することによるフェリシアン化イオンは、グルコースオキシダーゼと反応してグルコースがグルコノラクトンに酸化される際に放出される電子により還元体であるフェロシアン化イオンに還元される。したがって、バイオセンサ500にグルコースを含む試料が供給されると、フェリシアン化イオンはグルコースが酸化されることにより放出される電子により還元されるため、試料に含まれて酵素反応により酸化されるグルコースの濃度に応じた量だけフェリシアン化イオンの還元体であるフェロシアン化イオンが生成される。
このよう構成されたバイオセンサ500では、酵素反応の結果生じたメディエータの還元体を作用極501上で酸化することにより得られる酸化電流が試料中のグルコース濃度に依存した大きさとなるため、この酸化電流を計測することにより試料に含まれるグルコースの定量を行うことができる。
ところで、酵素層503aに含まれる酵素とメディエータ層503bに含まれるメディエータとがバイオセンサ500の保管状態において反応することにより、メディエータが経時的に還元されるため、バイオセンサ500を用いた測定対象物質の測定精度が劣化するおそれがある。そこで、上記したバイオセンサ500では、反応層を形成する酵素層503aおよびメディエータ層503bが分離して互いに離隔された状態で配置されることにより、酵素によるメディエータの還元が防止されている。しかしながら、このように構成すると、バイオセンサ500が長期間保管されることにより酵素およびメディエータが反応して反応層が劣化するのを防止できる一方で、電極層504およびカバー層506それぞれに個別にメディエータ層503bおよび酵素層503aを形成しなければならず手間がかかり、製造コストの増大を招いていた。
また、酵素層503aおよびメディエータ層503bそれぞれに含まれる親水性高分子は、各層503a,503bの剥離を防止したり、例えば血液試料がバイオセンサ500に供給された場合に、血液試料を濾過して血球の移動を阻止することで、血液試料のヘマトクリット値が測定に与える影響を抑制する機能を有している。その一方で、親水性高分子はメディエータ層503bに含まれるメディエータを還元することが知られている。例えばバイオセンサ500が長期間保管されることにより、親水性高分子によるメディエータの還元が徐々に進み、上記した酸化電流を測定する際に、親水性高分子により還元されたメディエータの還元体が酸化することによる酸化電流もバックグランド電流として、測定対象である酸化電流と一緒に測定されるので、測定精度が劣化する。
したがって、従来では、バイオセンサ500に使用期限を設け、使用期限を過ぎて長期間保管されたバイオセンサ500は測定精度が劣化するため廃棄されており、試料に含まれる測定対象物質の測定において、ランニングコストの増大を招いていた。以上のように、従来では、親水性高分子がメディエータに与える影響について十分な検討が為されていなかった。
本発明は、上記課題に鑑みてなされたものであり、酵素層およびメディエータ層それぞれが酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含むことにより、長期間保管可能なバイオセンサを簡単に製造することができる技術を提供することを目的とする。
上記した目的を達成するために、本発明のバイオセンサは、絶縁性基板の一方面に作用極および対極を含む電極系が設けられた電極層と、スリットが形成されて、前記スリットが前記作用極および前記対極の先端側に配置されて前記電極層の前記一方面に積層されるスペーサ層と、前記電極層および前記スリットにより形成されて試料が供給されるキャビティと、前記キャビティに連通する空気穴が形成されて前記キャビティを被覆して前記スペーサ層に積層されるカバー層と、前記キャビティに露出する前記作用極および前記対極の先端側に設けられた反応層とを備えるバイオセンサの製造方法において、測定対象物質と反応する酵素および酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含む酵素層を形成する酵素層形成工程と、メディエータおよび酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含むメディエータ層を形成するメディエータ層形成工程とを有する反応層形成工程を備えることを特徴としている(請求項1)。
このように構成された発明では、スペーサ層のスリットにより形成されたキャビティに露出する作用極および対極の先端側に設けられる反応層は、測定対象物質と反応する酵素および酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含む酵素層を形成する酵素層形成工程と、メディエータおよび酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含むメディエータ層を形成するメディエータ層形成工程とを有する反応層形成工程により形成される。したがって、酵素層およびメディエータ層が、電極層に設けられた作用極および対極の先端側に反応層として一緒に形成されるので、従来のように、カバー層および電極層それぞれに酵素層およびメディエータ層をそれぞれ個別に形成する必要がなく、簡単に反応層を形成することができる。
また、酵素および酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含む酵素層と、メディエータおよび酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含むメディエータ層とが形成されることにより、酵素層に含まれる酵素およびメディエータ層に含まれるメディエータの周囲が酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子により囲まれると共に、酸素およびメディエータが分離された状態で反応層が形成される。本願発明者による鋭意検討の結果、親水性高分子が酸素原子の二重結合を有する場合に、酸素結合の二重結合を有する官能基がメディエータに対して求核攻撃することによりメディエータが還元されると考えられるため、このように構成すると、酵素およびメディエータの周囲が酸素原子の2重結合を有さない親水性高分子により囲まれた状態となるので、バイオセンサの保管状態において反応層に含まれるメディエータおよび酵素が接触するのを防止できると共に、メディエータが親水性高分子により還元されるのを抑制することができる。
したがって、本試薬構造を採用することにより長期期間保管可能なバイオセンサを簡単に製造することができる。
また、酵素層が形成された後にメディエータ層が形成されており、電極層により近い位置に酵素層が配置されている。酵素はメディエータより拡散速度が小さいので、電極近傍での酵素・メディエータ量が、メディエータの上に酵素が積層された場合より多くなり、センサの応答性と測定精度が向上する。
また、前記反応層形成工程は、前記酵素層形成工程の後であって前記メディエータ層形成工程の前に実行される、酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含む第1中間層を形成する第1中間層形成工程をさらに有しているとよい(請求項2)。
このように構成すると、酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含む第1中間層が、酵素層とメディエータ層との間に第1中間層形成工程により形成されるため、酵素層に含まれる酵素がメディエータ層に含まれるメディエータに接触するのが第1中間層により防止されるので、酵素層に含まれる酵素とメディエータ層に含まれるメディエータとが反応するのをさらに抑制することができる。
また、前記反応層形成工程は、前記酵素層形成工程の前に実行される、酸素原子の二重結合を有する親水性高分子を含む親水層を形成する親水層形成工程をさらに有していてもよい(請求項3)。
このように構成すると、酵素層が形成される前に、酸素原子の二重結合を有する親水性高分子を含む親水層が親水層形成工程により形成されるが、一般的に、酸素原子の二重結合を有する親水性高分子は、酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子よりも血球等の移動を阻止する効果が高い。したがって、電極層に設けられた親水層には、酸素原子の二重結合を有する親水性高分子が含まれているため、バイオセンサのキャビティに例えば血液試料が供給された場合に、親水層の親水性高分子により血液試料が効率よく濾過されて血液試料に含まれる血球の移動が阻止されるので、血液試料のヘマトクリット値の差異に伴う測定精度への影響を低減することができる。したがって、正確で信頼性の高いバイオセンサを提供することができる。
また、前記反応層形成工程は、前記親水層形成工程の後であって前記酵素層形成工程の前に実行される、酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含む第2中間層を形成する第2中間層形成工程をさらに有しているとよい(請求項4)。
このように構成すると、酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含む第2中間層が、親水層と酵素層との間に第2中間層形成工程により形成されるため、親水層に含まれる酸素原子の二重結合を有する親水性高分子がメディエータ層に含まれるメディエータに接触するのが第2中間層により防止されるので、メディエータ層に含まれるメディエータが親水層の親水性高分子により還元されるのをさらに抑制することができる。
また、前記酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子は、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシエチルメチルセルロース、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコールのうちの少なくとも1つを含むとよい(請求項5)。
このように構成すると、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシエチルメチルセルロース、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコールのうちの少なくとも1つが酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子として試薬層に含まれることにより、試薬層に含まれるメディエータが還元されるのを防止することができると共に、試薬層が親水層から剥離するのを防止することができるので、実用的な構成のバイオセンサを提供することができる。
また、前記酸素原子の二重結合を有する親水性高分子は、少なくともカルボキシメチルセルロース含むとよい(請求項6)。
このように構成すると、酸素原子の二重結合を有する親水性高分子として少なくともカルボキシメチルセルロースを含む親水層を電極層上に設けることにより、親水層に積層される試薬層が剥離するのを防止することができる。また、バイオセンサのキャビティに例えば血液試料が供給された場合に、親水層の親水性高分子により血液試料が濾過されて血液試料に含まれる血球の移動が阻止されるので、血液試料のヘマトクリット値の差異に伴う測定精度への影響を低減することができる。
本発明によれば、酵素層およびメディエータ層が、電極層に設けられた作用極および対極の先端側に反応層として一緒に形成されるので、従来のように、カバー層および電極層それぞれに酵素層およびメディエータ層をそれぞれ個別に形成する必要がなく、簡単に反応層を形成することができ、酵素層およびメディエータ層それぞれが酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含むことにより、保管状態において、酵素層に含まれる酵素と、メディエータ層に含まれるメディエータとの接触が抑制され、メディエータ層のメディエータが還元されるのが抑制されるため、長期期間保管可能なバイオセンサを簡単に製造することができる。
<第1実施形態>
本発明の第1実施形態にかかるバイオセンサおよびこのバイオセンサの製造方法について図1~図4を参照して説明する。
本発明の第1実施形態にかかるバイオセンサおよびこのバイオセンサの製造方法について図1~図4を参照して説明する。
(バイオセンサの構成および製造方法)
図1は本発明の第1実施形態にかかるバイオセンサを示す図であって、(a)は分解斜視図、(b)は斜視図である。図2は図1のバイオセンサのキャビティ部分の横断面図である。図3は本発明の第1実施形態にかかるバイオセンサの製造方法を示す図であって、(a),(b)はそれぞれ異なる工程を示す。
図1は本発明の第1実施形態にかかるバイオセンサを示す図であって、(a)は分解斜視図、(b)は斜視図である。図2は図1のバイオセンサのキャビティ部分の横断面図である。図3は本発明の第1実施形態にかかるバイオセンサの製造方法を示す図であって、(a),(b)はそれぞれ異なる工程を示す。
この発明のバイオセンサ100は、作用極101および対極102を含む電極系と、メディエータおよび測定対象物質と反応する酵素を含む反応層106とを有し、測定器(図示省略)に装着されて使用されるものである。すなわち、測定器に装着されたバイオセンサ100の先端側に設けられたキャビティ103に供給された血液などの試料に含まれるグルコースなどの測定対象物質と、バイオセンサ100に設けられた反応層106とが反応することで生成される還元物質を、作用極101と対極102との間に電圧を印加して酸化することにより得られる酸化電流を計測することで、試料に含まれる測定対象物質の定量が行われる。
すなわち、バイオセンサ100は、図1および図2に示すように、それぞれ、セラミック、ガラス、プラスチック、紙、生分解性材料、ポリエチレンテレフタレートなどの絶縁性材料により形成された、作用極101および対極102を含む電極系が設けられた電極層110と、キャビティ103に連通する空気穴105が形成されたカバー層130と、キャビティ103を形成するためのスリット104が形成され、電極層110およびカバー層130に挟まれて配置されるスペーサ層120とが、試料導入口103aが設けられる先端側が揃った状態で積層されて接着されることにより形成される。また、作用極101および対極102上には、試料に含まれるグルコースなどの測定対象物質と反応する酵素を含む反応層106が設けられている。そして、後端側から測定器の所定の挿入口に挿入されて装着されることで、バイオセンサ100は測定器に装着される。
この実施形態では、電極層110は、ポリエチレンテレフタレートなどの絶縁性材料から成る絶縁性基板により形成される。また、電極層110を形成する絶縁性基板の一方面に、白金、金、パラジウムなどの貴金属やカーボン、銅、アルミニウム、チタン、ITO、ZnOなどの導電性物質から成る導電層が、スクリーン印刷やスパッタリング蒸着法により形成されている。そして、絶縁性基板の一方面に形成された導電層に、レーザ加工やフォトリソグラフィによるパターン形成が施されることにより、作用極101および対極102と、バイオセンサセンサチップ100が測定器に装着されたときに、作用極101および対極102のそれぞれと測定器とを電気的に接続する電極パターン101a,102aとを含む電極系が形成される。
また、作用極101および対極102は、それぞれの先端側が、キャビティ103に露出するように配置される。また、作用極101および対極102のそれぞれの後端側の電極パターン101a,102aは、試料導入口103aと反対側の電極層110の端縁であって、スペーサ層120が積層されない電極層110の端縁まで延伸されて形成される。
次に、上記したようにして形成された電極層110にスペーサ層120が積層される。スペーサ層120は、ポリエチレンテレフタレートなどの絶縁性材料から成る基板により形成され、基板の先端縁部のほぼ中央にキャビティ103を形成するためのスリット104が形成されている。そして、スリット104が、作用極101および対極102の先端側に配置されて、スペーサ層120が電極層110の一方面を部分的に被覆して積層されることにより、電極層110およびスリット104により試料が供給されるキャビティ103が形成される。
続いて、電極層110にスペーサ層120が積層されて形成されるキャビティ103部分が、プラズマにより洗浄処理された後に、反応層106が形成される。なお、プラズマ洗浄工程において使用されるプラズマは、酸素プラズマ、窒素プラズマ、アルゴンプラズマなど、プラズマによる金属活性化処理において使用される種々のプラズマを使用することができ、減圧プラズマであっても大気圧プラズマであってもよい。
図3(a),(b)に示すように、反応層106は、カバー層130がスペーサ層120に積層される前に、キャビティ103に露出する作用極101および対極102の先端側に、酵素および酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含有する試薬202と、メディエータおよび酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含有する203とを順番に滴下することにより形成される。また、キャビティ104への血液などの試料の供給を円滑にするために、界面活性剤やリン脂質などの親水化剤がキャビティ104内壁に塗布される。
具体的には、反応層106は、電極層110上に酵素および酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含む酵素層106bと、酵素層106bに積層され、メディエータおよび酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含むメディエータ層106cとを備え、反応層形成工程により次のようにして形成される。
すなわち、図3(a)に示すように、酵素および酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子としてメチルセルロースを含有する試薬202が滴下装置200からキャビティ103に所定量滴下されて乾燥することにより酵素層106bが形成される(酵素層形成工程)。次に、図3(b)に示すように、メディエータおよび酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子としてヒドロキシプロピルメチルセルロースを含有する試薬203が滴下装置200からキャビティ103に所定量滴下されて乾燥することによりメディエータ層106cが形成されることにより(メディエータ層形成工程)、反応層106が形成される。
以上のように、この実施形態では、酵素層形成工程およびメディエータ層形成工程により本発明の「反応層形成工程」が構成されている。
また、酵素としては、グルコースオキシダーゼ、乳酸オキシダーゼ、コレステロールオキシダーゼ、アルコールオキシダーゼ、ザルコシンオキシダーゼ、フルクトシルアミンオキシダーゼ、ピルビン酸オキシダーゼ、グルコースデヒドロゲナーゼ、乳酸デヒドロゲナーゼ、アルコールデヒドロゲナーゼ、ヒドロキシ酪酸デヒドロゲナーゼ、コレステロールエステラーゼ、クレアチニナーゼ、クレアチナーゼ、DNAポリメラーゼなどを用いることができ、これらの酵素を検出したい測定対象物質(グルコース、乳酸、コレステロール、アルコール、ザルコシン、フルクトシルアミン、ピルビン酸、ヒドロキシ酪酸など)に応じて選択することで種々のセンサを形成することができる。
例えば、グルコースオキシダーゼまたはグルコースデヒドロゲナーゼを用いれば血液試料中のグルコースを検出するグルコースセンサを形成でき、アルコールオキシダーゼまたはアルコールデヒドロゲナーゼを用いれば血液試料中のエタノールを検出するアルコールセンサを形成でき、乳酸オキシダーゼを用いれば血液試料中の乳酸を検出する乳酸センサを形成でき、コレステロールエステラーゼとコレステロールオキシダーゼとの混合物を用いれば総コレステロールセンサを形成できる。
また、メディエータとしては、フェリシアン化カリウム、フェロセン、フェロセン誘導体、ベンゾキノン、キノン誘導体、オスミウム錯体、ルテニウム錯体などを用いることができる。
また、酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子として、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシエチルメチルセルロース、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコールなどを用いることができる。なお、試薬202,203それぞれに、酵素およびメディエータと一緒に混合される酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子は増粘剤として機能する。また、酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子は、2種類以上を組み合わせて用いてもよい。
また、親水化剤としては、TritonX100(シグマアルドリッチ社製)、Tween20(東京化成工業社製)、ビス(2-エチルヘキシル)スルホコハク酸ナトリウムなどの界面活性剤、レシチンなどのリン脂質を用いることができる。また、親水化剤は、上記したようにキャビティ104に塗布する以外に、試薬202,203それぞれに混合してキャビティ104に滴下したり、試薬層が形成された後にキャビティ104に滴下してもよい。また、試料に含まれるイオン濃度のばらつきを低減するために、リン酸などの緩衝剤を設けてもよい。
次に、反応層106がキャビティ103に形成された後に、ポリエチレンテレフタレートなどの絶縁性材料から成る基板により形成されたカバー層130が、スペーサ層120に積層されることにより、バイオセンサ100が形成される。図1(a),(b)に示すように、カバー層130には、スペーサ層120に積層されたときにキャビティ103と連通する空気穴105が形成されており、カバー層130は、キャビティ103を被覆してスペーサ層120に積層される。
なお、この実施形態では、バイオセンサ100は、血液中のグルコースの定量を行うことを目的に形成されており、測定対象物質としてのグルコースと特異的に反応する酵素としてFAD(フラビンアデニンジヌクレオチド)を補酵素とするGDH(グルコースデヒドロゲナーゼ)(以下、FAD-GDHと表記する)を含み、測定対象物であるグルコースとFAD-GDHとの反応により生成される電子により還元されて還元物質と成るメディエータとしてフェリシアン化カリウムを含む反応層106がキャビティ103に露出する作用極101および対極102の先端側に設けられている。
このように構成されたバイオセンサ100では、先端の試料導入口103aに血液から成る試料を接触させることにより、毛細管現象により試料が空気穴105に向かって吸引されてキャビティ103に試料が供給される。そして、キャビティ103に供給された試料に反応層106が溶解することにより、試料中の測定対象物質であるグルコースとFAD-GDHとの酵素反応により電子が放出され、放出された電子によりフェリシアン化イオンが還元されて還元物質であるフェロシアン化イオンが生成される。そして、反応層106が試料に溶解することによる酸化還元反応により生成された還元物質を、バイオセンサ100の作用極101と対極102との間に電圧(例えば0.3V)を印加して電気化学的に酸化することにより、作用極101と対極102との間に流れる酸化電流を計測することで試料中のグルコースの定量が測定器において行われる。なお、バイオセンサ100の作用極101と対極102との間に電圧が印加された後、3~5秒後の電流値が酸化電流として計測される。
(バックグランド電流の比較例)
図4はバイオセンサの保管期間とバックグランド電流との関係を示す図であり、横軸が保管期間(h)を示し、縦軸がバックグランド電流の大きさ(μA)を示す。また、同図中の◆は、酵素層106bおよびメディエータ層106cが酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含まない従来のバイオセンサのバックグランド電流を示し、同図中の■は、本実施形態のバイオセンサ100のバックグランド電流を示す。なお、バックグランド電流の測定は、バックグランド電流測定用の試料をキャビティ103に供給した後、通常の手順と同様に酸化電流を計測することにより行った。
図4はバイオセンサの保管期間とバックグランド電流との関係を示す図であり、横軸が保管期間(h)を示し、縦軸がバックグランド電流の大きさ(μA)を示す。また、同図中の◆は、酵素層106bおよびメディエータ層106cが酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含まない従来のバイオセンサのバックグランド電流を示し、同図中の■は、本実施形態のバイオセンサ100のバックグランド電流を示す。なお、バックグランド電流の測定は、バックグランド電流測定用の試料をキャビティ103に供給した後、通常の手順と同様に酸化電流を計測することにより行った。
図4に示すように、バイオセンサの保管期間が長くなるのに伴い、従来のバイオセンサでは経時的にバックグランド電流が増大するのに対して、本実施形態のバイオセンサ100ではバックグランド電流が増大するのが抑制されている。
以上のように、この実施形態によれば、スペーサ層120のスリット104により形成されたキャビティ103に露出する作用極101および対極102の先端側に設けられる反応層106は、測定対象物質であるグルコースと反応する酵素および酸素原子の二重結合を有さないメチルセルロースを含む酵素層106bを形成する酵素層形成工程と、メディエータおよび酸素原子の二重結合を有さないヒドロキシプロピルメチルセルロースを含むメディエータ層を形成するメディエータ層形成工程とを有する反応層形成工程により形成される。したがって酵素層106bおよびメディエータ層106cが、電極層110に設けられた作用極101および対極102の先端側に反応層106として一緒に形成されるので、従来のように、カバー層130および電極層110それぞれに酵素層106bおよびメディエータ層106cをそれぞれ形成する必要がなく、簡単に反応層106を形成することができる。
また、酵素および酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含む酵素層106bと、メディエータおよび酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含むメディエータ層106cとが形成されることにより、酵素層106bに含まれる酵素およびメディエータ層106cに含まれるメディエータの周囲が酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子により囲まれると共に、酸素およびメディエータが分離された状態で反応層106が形成される。本願発明者による鋭意検討の結果、親水性高分子が酸素原子の二重結合を有する場合に、酸素結合の二重結合を有する官能基がメディエータに対して求核攻撃することによりメディエータが還元されると考えられるため、このように構成すると、酵素およびメディエータの周囲が酸素原子の2重結合を有さない親水性高分子により囲まれた状態となるので、バイオセンサ100の保管状態において反応層106に含まれるメディエータおよび酵素が接触するのを防止できると共に、メディエータが親水性高分子により還元されるのを抑制することができる。
したがって、酵素層106bおよびメディエータ層106cそれぞれが酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含むことにより、保管状態において、酵素層106bが含む酵素とメディエータ層106cが含むメディエータとの反応が抑制されると共に、メディエータ層106cのメディエータが還元されるのが抑制されるため、長期期間保管可能なバイオセンサを簡単に製造することができる。
また、酵素層106bが形成された後にメディエータ層106cが形成されており、電極層1110により近い位置に酵素層106bが配置されているので、キャビティ103に供給された試料に溶解したメディエータが電極層110に向かって拡散する際に、酵素反応の結果、試料中のグルコースなどの測定対象物質が酸化されることにより放出された電子が豊富な酵素層106bを通過することになるため、電極層110に向かって拡散するメディエータが効率よく還元されるので実用的である。
また、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシエチルメチルセルロース、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコールのうちの少なくとも1つが酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子として試薬層に含まれることにより、試薬層に含まれるメディエータが還元されるのを防止することができると共に、試薬層が電極層110または親水層106aから剥離するのを防止することができるので、実用的な構成のバイオセンサ110を提供することができる。
<第2実施形態>
本発明の第2実施形態にかかるバイオセンサの製造方法について図5を参照して説明する。図5は本発明の第2実施形態にかかるバイオセンサのキャビティ部分の横断面図である。この実施形態が上記した第1実施形態と異なるのは、図5に示すように、酵素層形成工程の後であってメディエータ層形成工程の前に実行される第1中間層形成工程において酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含む試薬がキャビティ103に所定量滴下されて乾燥することにより、酵素層106bとメディエータ層106cとの間に、酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含む中間層106d(第1中間層)がさらに形成される点である。その他の構成は上記した第1実施形態と同一であるため、その構成および動作の説明は同一符号を付すことにより省略する。
本発明の第2実施形態にかかるバイオセンサの製造方法について図5を参照して説明する。図5は本発明の第2実施形態にかかるバイオセンサのキャビティ部分の横断面図である。この実施形態が上記した第1実施形態と異なるのは、図5に示すように、酵素層形成工程の後であってメディエータ層形成工程の前に実行される第1中間層形成工程において酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含む試薬がキャビティ103に所定量滴下されて乾燥することにより、酵素層106bとメディエータ層106cとの間に、酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含む中間層106d(第1中間層)がさらに形成される点である。その他の構成は上記した第1実施形態と同一であるため、その構成および動作の説明は同一符号を付すことにより省略する。
このように構成すると、酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含む中間層106dが、酵素層106bとメディエータ層106cとの間に第1中間層形成工程により形成されるため、酵素層106bに含まれる酵素がメディエータ層106cに含まれるメディエータに接触するのが中間層106dにより防止されるので、酵素層106bに含まれる酵素とメディエータ層106cに含まれるメディエータとが反応するのをさらに抑制することができる。
<第3実施形態>
本発明の第3実施形態にかかるバイオセンサの製造方法について図6を参照して説明する。図6は本発明の第3実施形態にかかるバイオセンサのキャビティ部分の横断面図である。この実施形態が上記した第1実施形態と異なるのは、図6に示すように、酵素層形成工程の前に実行される親水層形成工程において酸素原子の二重結合を有する親水性高分子としてカルボキシメチルセルロース(CMC)を含む試薬がキャビティ103に所定量滴下されて乾燥することにより、酵素層106bが形成される前に電極層110上に親水層106aが形成される点である。その他の構成は上記した第1実施形態と同一であるため、その構成および動作の説明は同一符号を付すことにより省略する。
本発明の第3実施形態にかかるバイオセンサの製造方法について図6を参照して説明する。図6は本発明の第3実施形態にかかるバイオセンサのキャビティ部分の横断面図である。この実施形態が上記した第1実施形態と異なるのは、図6に示すように、酵素層形成工程の前に実行される親水層形成工程において酸素原子の二重結合を有する親水性高分子としてカルボキシメチルセルロース(CMC)を含む試薬がキャビティ103に所定量滴下されて乾燥することにより、酵素層106bが形成される前に電極層110上に親水層106aが形成される点である。その他の構成は上記した第1実施形態と同一であるため、その構成および動作の説明は同一符号を付すことにより省略する。
このように構成すると、酵素層106bが形成される前に、酸素原子の二重結合を有する親水性高分子(CMC)を含む親水層106aが親水層形成工程により形成されるが、一般的に、酸素原子の二重結合を有する親水性高分子は、酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子よりも血球等の移動を阻止する効果が高い。したがって、電極層110に設けられた親水層106aには、酸素原子の二重結合を有する親水性高分子が含まれているため、バイオセンサ100のキャビティ103に例えば血液試料が供給された場合に、親水層106aの親水性高分子により血液試料が効率よく濾過されて血液試料に含まれる血球の移動が阻止されるので、血液試料のヘマトクリット値の差異に伴う測定精度への影響を低減することができる。
したがって、正確で信頼性の高いバイオセンサ100を提供することができる。また、酸素原子の二重結合を有する親水性高分子を含む親水層106aを電極層110上に設けることにより、親水層106aに積層される酵素層106bが剥離するのを防止することができる。
なお、酸素原子の二重結合を有する親水性高分子として、カルボニル基、アシル基、カルボキシル基、アルデヒド基、スルホ基、スルホニル基、スルホキシド基、トシル基、ニトロ基、ニトロソ基、エステル基、ケト基、ケテン基などを有するポリマーを用いることができる。また、酸素原子の二重結合を有する親水性高分子は、2種類以上を組み合わせて用いてもよい。
また、図7のバイオセンサの変形例のキャビティ部分の横断面図に示すように、図5のバイオセンサ100において、酵素層106bが形成される前に親水層形成工程により親水層106aを電極層110上に形成してもよい。このように構成しても同様の効果を奏することができる。
<第4実施形態>
本発明の第4実施形態にかかるバイオセンサの製造方法について図8を参照して説明する。図8は本発明の第4実施形態にかかるバイオセンサのキャビティ部分の横断面図である。この実施形態が上記した第3実施形態と異なるのは、図8に示すように、親水層形成工程の後であって酵素層形成工程の前に実行される第2中間層形成工程において酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含む試薬がキャビティ103に所定量滴下されて乾燥することにより、親水層106aと酵素層106bとの間に、酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含む中間層106d(第2中間層)がさらに形成される点である。その他の構成は上記した第1実施形態と同一であるため、その構成および動作の説明は同一符号を付すことにより省略する。
本発明の第4実施形態にかかるバイオセンサの製造方法について図8を参照して説明する。図8は本発明の第4実施形態にかかるバイオセンサのキャビティ部分の横断面図である。この実施形態が上記した第3実施形態と異なるのは、図8に示すように、親水層形成工程の後であって酵素層形成工程の前に実行される第2中間層形成工程において酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含む試薬がキャビティ103に所定量滴下されて乾燥することにより、親水層106aと酵素層106bとの間に、酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含む中間層106d(第2中間層)がさらに形成される点である。その他の構成は上記した第1実施形態と同一であるため、その構成および動作の説明は同一符号を付すことにより省略する。
このように構成すると、酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含む中間層106dが、親水層106aと酵素層106bとの間に第2中間層形成工程により形成されるため、親水層106aに含まれる酸素原子の二重結合を有する親水性高分子がメディエータ層106cに含まれるメディエータに接触するのが中間層106dにより防止されるので、メディエータ層106cに含まれるメディエータが親水層106aの親水性高分子により還元されるのを抑制することができる。
また、図9のバイオセンサの変形例のキャビティ部分の横断面図に示すように、図7のバイオセンサ100において、酵素層106bが形成される前に第2中間層形成工程により、親水層106a上に中間層106dを形成してもよい。このように構成しても同様の効果を奏することができる。
なお、本発明は上記した実施形態に限定されるものではなく、その趣旨を逸脱しない限りにおいて、上記したもの以外に種々の変更を行なうことが可能であり、例えば、酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を、複数種類組み合わせて適切に混合することにより、血液試料中の血球の移動を効果的に阻止したり、酵素層およびメディエータ層の拡散、混合が低減されてメディエータの還元を抑制する抑制効果を奏することができる。
また、上記したバイオセンサ100の反応層106に含まれる酵素およびメディエータの組合せを変更することによりエタノールセンサや乳酸センサなどを形成してもよい。
また、上記した実施形態では、バイオセンサ100は、作用極101および対極102を有する二極電極構造に形成されているが、参照極をさらに設けることによりバイオセンサ100を三極電極構造に形成してもよい。この場合、対極102を接地して電圧出力部により参照極に参照電位を印加した状態で、作用極101に対極102を基準とする所定電位を印加すればよい。
また、上記した実施形態では、作用極101と対極102との間に所定電圧を印加することにより、作用極101と対極102との間に流れる電流を監視することで、キャビティ103に血液試料が供給されたことが検出されるが、キャビティ103に試料が供給されたことを検知するための検知用電極をさらに設けてもよい。この場合、対極102と検知用電極との間に所定電圧を印加することにより、対極102と検知用電極との間に流れる電流を監視することで、キャビティ103に試料が供給されたことを検出すればよい。
また、バイオセンサ100を形成する電極層110、スペーサ層120およびカバー層130のうち、少なくともカバー層130は、キャビティ103に血液試料が供給されたことを視認できるように透明な部材で形成するのが望ましい。
作用極および対極を含む電極系が設けられた電極層と、キャビティを形成するためのスリットが形成されて電極層に積層されるスペーサ層と、キャビティに連通する空気穴が形成されてスペーサ層に積層されるカバー層と、作用極および対極に設けられた反応層とを備えるバイオセンサに本発明を広く適用することができる。
100 バイオセンサ
101 作用極
102 対極
103 キャビティ
104 スリット
105 空気穴
106 反応層
106a 親水層
106b 酵素層
106c メディエータ層
106d 中間層(第1中間層、第2中間層)
110 電極層
120 スペーサ層
130 カバー層
101 作用極
102 対極
103 キャビティ
104 スリット
105 空気穴
106 反応層
106a 親水層
106b 酵素層
106c メディエータ層
106d 中間層(第1中間層、第2中間層)
110 電極層
120 スペーサ層
130 カバー層
Claims (6)
- 絶縁性基板の一方面に作用極および対極を含む電極系が設けられた電極層と、
スリットが形成されて、前記スリットが前記作用極および前記対極の先端側に配置されて前記電極層の前記一方面に積層されるスペーサ層と、
前記電極層および前記スリットにより形成されて試料が供給されるキャビティと、
前記キャビティに連通する空気穴が形成されて前記キャビティを被覆して前記スペーサ層に積層されるカバー層と、
前記キャビティに露出する前記作用極および前記対極の先端側に設けられた反応層とを備えるバイオセンサの製造方法において、
測定対象物質と反応する酵素および酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含む酵素層を形成する酵素層形成工程と、
メディエータおよび酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含むメディエータ層を形成するメディエータ層形成工程と
を有する反応層形成工程を備えることを特徴とするバイオセンサの製造方法。 - 前記反応層形成工程は、前記酵素層形成工程の後であって前記メディエータ層形成工程の前に実行される、酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含む第1中間層を形成する第1中間層形成工程をさらに有することを特徴とする請求項1に記載のバイオセンサの製造方法。
- 前記反応層形成工程は、前記酵素層形成工程の前に実行される、酸素原子の二重結合を有する親水性高分子を含む親水層を形成する親水層形成工程をさらに有することを特徴とする請求項1または2に記載のバイオセンサの製造方法。
- 前記反応層形成工程は、前記親水層形成工程の後であって前記酵素層形成工程の前に実行される、酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子を含む第2中間層を形成する第2中間層形成工程をさらに有することを特徴とする請求項3に記載のバイオセンサの製造方法。
- 前記酸素原子の二重結合を有さない親水性高分子は、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシエチルメチルセルロース、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコールのうちの少なくとも1つを含むことを特徴とする請求項1ないし4のいずれかに記載のバイオセンサの製造方法。
- 前記酸素原子の二重結合を有する親水性高分子は、少なくともカルボキシメチルセルロース含むことを特徴とする請求項1ないし5のいずれかに記載のバイオセンサの製造方法。
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Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2014069070A1 (ja) * | 2012-10-30 | 2014-05-08 | 株式会社村田製作所 | バイオセンサ |
JP2015212685A (ja) * | 2014-04-15 | 2015-11-26 | アークレイ株式会社 | センサおよび測定装置 |
JP2021502576A (ja) * | 2017-11-21 | 2021-01-28 | ビービービー インコーポレイテッド | バイオセンサ |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20150122645A1 (en) * | 2013-11-07 | 2015-05-07 | Medtronic Minimed, Inc. | Enzyme matrices for biosensors |
CN109270136B (zh) * | 2018-11-20 | 2022-01-11 | 中国科学院大学 | 一种抗hct干扰的葡萄糖传感器 |
US20230338945A1 (en) * | 2022-04-21 | 2023-10-26 | Arkray, Inc. | Biosensor and method of manufacturing biosensor |
US20230341347A1 (en) * | 2022-04-21 | 2023-10-26 | Arkray, Inc. | Biosensor |
Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH01156658A (ja) * | 1987-12-15 | 1989-06-20 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | バイオセンサ |
JPH05119013A (ja) * | 1991-03-04 | 1993-05-14 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | バイオセンサおよびその製造法 |
JPH0783872A (ja) * | 1993-07-23 | 1995-03-31 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | バイオセンサおよびその製造方法 |
JP2000171428A (ja) * | 1998-09-29 | 2000-06-23 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | グルコ―スセンサ |
JP2001281202A (ja) * | 2000-01-27 | 2001-10-10 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | バイオセンサおよびその製造方法 |
WO2003048756A1 (fr) * | 2001-12-05 | 2003-06-12 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Biocapteur |
JP2009516168A (ja) * | 2005-11-14 | 2009-04-16 | バイエル・ヘルスケア・エルエルシー | セルロースポリマーを有する試験センサ試薬 |
JP2009244012A (ja) | 2008-03-31 | 2009-10-22 | Cci Corp | バイオセンサ |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1999051974A1 (fr) * | 1998-04-02 | 1999-10-14 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Procede de determination d'un substrat |
DE60132390T2 (de) * | 2000-01-27 | 2009-01-15 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd., Kadoma-shi | Biosensor und Verfahren zu seiner Herstellung |
EP1256798A4 (en) * | 2000-11-30 | 2009-05-20 | Panasonic Corp | BIOSENSOR, MEASURING INSTRUMENT FOR BIOSENSOR, AND METHOD FOR MEASURING SUBSTRATE |
US7922883B2 (en) * | 2005-06-08 | 2011-04-12 | Abbott Laboratories | Biosensors and methods of using the same |
US20090143658A1 (en) * | 2006-02-27 | 2009-06-04 | Edwards Lifesciences Corporation | Analyte sensor |
AU2007250086B2 (en) * | 2006-05-08 | 2013-07-18 | Bayer Healthcare Llc | Electrochemical test sensor with reduced sample volume |
US8080385B2 (en) * | 2007-05-03 | 2011-12-20 | Abbott Diabetes Care Inc. | Crosslinked adduct of polyaniline and polymer acid containing redox enzyme for electrochemical sensor |
TWI513978B (zh) * | 2012-06-08 | 2015-12-21 | Hmd Biomedical Inc | 檢測試片、檢測裝置及檢測方法 |
-
2013
- 2013-03-11 EP EP13761636.3A patent/EP2827140A1/en not_active Withdrawn
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-
2014
- 2014-09-11 US US14/483,490 patent/US20140373347A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH01156658A (ja) * | 1987-12-15 | 1989-06-20 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | バイオセンサ |
JPH05119013A (ja) * | 1991-03-04 | 1993-05-14 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | バイオセンサおよびその製造法 |
JPH0783872A (ja) * | 1993-07-23 | 1995-03-31 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | バイオセンサおよびその製造方法 |
JP2000171428A (ja) * | 1998-09-29 | 2000-06-23 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | グルコ―スセンサ |
JP2001281202A (ja) * | 2000-01-27 | 2001-10-10 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | バイオセンサおよびその製造方法 |
WO2003048756A1 (fr) * | 2001-12-05 | 2003-06-12 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Biocapteur |
JP2009516168A (ja) * | 2005-11-14 | 2009-04-16 | バイエル・ヘルスケア・エルエルシー | セルロースポリマーを有する試験センサ試薬 |
JP2009244012A (ja) | 2008-03-31 | 2009-10-22 | Cci Corp | バイオセンサ |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2014069070A1 (ja) * | 2012-10-30 | 2014-05-08 | 株式会社村田製作所 | バイオセンサ |
JP2015212685A (ja) * | 2014-04-15 | 2015-11-26 | アークレイ株式会社 | センサおよび測定装置 |
JP2021502576A (ja) * | 2017-11-21 | 2021-01-28 | ビービービー インコーポレイテッド | バイオセンサ |
JP7005780B2 (ja) | 2017-11-21 | 2022-01-24 | ビービービー インコーポレイテッド | バイオセンサ |
Also Published As
Publication number | Publication date |
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