WO2013097681A1 - 一种甾醇类衍生物、其制备方法及用途 - Google Patents

一种甾醇类衍生物、其制备方法及用途 Download PDF

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extract
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段震文
郭树仁
李雪梅
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北京北大维信生物科技有限公司
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    • C07J71/0005—Oxygen-containing hetero ring
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine

Definitions

  • the invention belongs to the field of medicine and chemical industry, and relates to a sterol derivative, a preparation method thereof and use thereof. Background technique
  • Red yeast rice (o/za ⁇ fermented r ice) is a purple-red rice koji made from rice as a raw material and fermented by Monascus (0/7 C).
  • the red koji is called danqu in ancient times. It is made by inoculating Monascus-based mutexes or koji on rice. Its color is reddish, so it is also known as red yeast, red rice, red rice, red rice, and Fujian and other places, it is also known as Fuqu, Fumi and so on.
  • Xuezhikang Gelatin is a high-efficiency and safe domestically produced modern lipid-regulating Chinese medicine made by special fermentation of Monascus by Beijing Beida Weixin Biotechnology Co., Ltd. Indications for the treatment of cardiovascular and cerebrovascular diseases caused by hyperlipidemia and atherosclerosis. Its main mechanism of action is to inhibit the activity of 3-hydroxy-3-mercaptoglutaryl coenzyme A (HMG-CoA) reductase.
  • HMG-CoA 3-hydroxy-3-mercaptoglutaryl coenzyme A
  • the synthesis of endogenous cholesterol reduces serum total cholesterol (TC;), blood triglyceride (TG), low-density lipoprotein (LDL), and elevated high-density lipoprotein (HDL) levels.
  • Xuezhikang capsule is an alcohol extract of red yeast rice, which is rich in a series of natural statins such as lovastatin.
  • statins such as lovastatin.
  • blood lipids contain pigments, isoflavones, alcohols, 20 amino acids, unsaturated fatty acids and various trace elements. Therefore, it is still necessary to find new compounds having lipid-lowering or inhibiting HMG-Co A reductase activity.
  • obesity As a systemic endocrine and metabolic disease, obesity has become a universal trend worldwide. It not only affects posture and activity, but also is closely related to diseases such as hyperlipidemia, atherosclerosis, coronary heart disease, and diabetes. The causes of obesity are multifaceted, such as genetic factors, environmental factors, eating habits, etc. Among them, high-fat diet is an important cause of obesity. In recent years, drug therapy has been one of the effective means of treating obesity by reducing fat absorption for therapeutic purposes. Pancreatic and gastric lipase are required for digestion and absorption of fat in the gut.
  • the fat in the food is hydrolyzed into monoacylglycerol and free fatty acids, which are absorbed in the intestines and then re-synthesized in the body, causing fat to build up, which can eventually lead to obesity.
  • the use of lipase inhibitors can effectively inhibit the decomposition of lipase in the intestinal tract to reduce the fat absorption, control and treatment of obesity (Chen Wei et al. Advances in drug therapy research. Chinese Journal of Traditional Chinese Medicine, 2007, 25 (5): 947-948; Wu Jing et al. Progress in drug therapy for obesity. Medical Review, 2006, 12 (11): 693-693.
  • s ibutramin sibutramine, central nervous system diet pills
  • lis tat orlistat, gastrointestinal lipase inhibitors
  • both drugs have obvious adverse reactions: the side effects of s ibutramin are mainly thirst, constipation, dizziness and insomnia, or the adverse reactions of lis tat are mainly gastrointestinal symptoms, common diarrhea, abdominal pain, oily spots, stomach Intestinal flatulence, etc., its long-term effects also need further evaluation.
  • the inventors have obtained an alcohol derivative through intensive research and creative labor, and the inventors have surprisingly found that the compound of the present invention can be effectively inhibited
  • HMG-CoA reductase has the potential to act as a drug for lowering or regulating blood lipids or for preventing and/or treating dyslipidemia, hyperlipidemia, hypercholesterolemia, or atherosclerosis.
  • the compounds of the present invention are capable of effectively inhibiting the proliferation of cancer cells (tumor cells), thereby having the potential as a drug for preventing and/or treating and/or adjuvantly treating cancer;
  • the compound of the present invention is capable of effectively inhibiting the activity of lipase, thereby having the potential as a drug for preventing and/or treating and/or assisting in the treatment of diseases associated with obesity or obesity.
  • One aspect of the invention relates to a compound of formula I, or a pharmaceutically acceptable salt, ester or ether thereof,
  • R 2 is selected from the group consisting of -OH, H, and dC 3 alkyl
  • R 4 is selected from the group consisting of -0H, H, and d_C 3 alkyl
  • the sites for ester formation or ether formation are any of 0, 1, 2, 3 or 4 of R 2 , R 3 , and R 4 .
  • R 2 , R 3 and R 4 are all H.
  • Formula I I The chemical name of the compound of formula II: 16, 22-epoxy ergot-5, 7-diene-3, 20, 23, 25-tetraol (16, 22-epoxy-ergos ta-5, 7-dien-3 , 20, 23, 25-tetraol ).
  • the invention also relates to a hydrate or solvate of a compound of formula I or formula II above. Another aspect of the invention relates to a process for the preparation of a compound of formula I or formula, comprising the steps of:
  • red yeast rice and/or red yeast rice for example, a blood lipid capsule content, which is a dry powder
  • red yeast rice for example, a blood lipid capsule content, which is a dry powder
  • one or more organic solvents in ethanol are ultrasonically extracted one or more times as a solvent for 20-40 minutes each time, and the extracts are combined to remove the solvent to obtain a refined extract;
  • the alcohol extract may be obtained by ultrasonically extracting one or more times with 2 - 6 volumes of 50% - 100% ethanol or 50% - 100% decyl alcohol as a solvent, 20 - 40 each time. In minutes, the extracts were combined and the solvent was removed to give an alcohol extract.
  • red yeast rice since Xuezhikang itself is an alcohol extract of red yeast rice, it can be directly used as red raw material, and the extraction step is basically the same as that of the blood lipid capsule, but the content of the compound in red yeast rice is relatively low.
  • the specific strain of the red yeast rice is not particularly limited It includes any strain or strain belonging to red yeast rice. Blood lipid capsules (such as Peking University's production) can be purchased through hospitals or pharmacies.
  • step 2) The extract obtained in the step 1) was subjected to silica gel column chromatography, and eluted with a gradient of petroleum ether and ethyl acetate; the volume ratio of petroleum ether-ethyl acetate was 75: 25, 50: 50 - 25: 75, 0: 100;
  • step 2) Take the petroleum ether-ethyl acetate in step 2) as the eluted fraction of 50:50 - 25:75, separate by C18 reverse phase column chromatography, and elute with decyl alcohol-water gradient sterol-water The volume ratio is 10: 90, 50:50 - 75:25, 100: 0;
  • step 3 The eluted fraction of the sterol-water in step 3) of 50:50 - 75:25 is purified by semi-preparative HPLC, using acetonitrile-0.2% aqueous acetic acid (45:55) as the mobile phase.
  • the C18 semi-preparative column is a stationary phase, and the chromatographic peak portion of 9.2 min is collected;
  • step 4) is lyophilized to give a compound of formula I or formula II.
  • the preparation method according to any one of the present invention which satisfies any one or more of the following (1) to (9):
  • the organic solvent is preferably dichlorosilane
  • step 1) the ultrasonic extraction is performed 3 times;
  • step 1) the solvent is removed by concentration under reduced pressure
  • step 2) the volume ratio of petroleum ether-ethyl acetate is 75: 25, 50: 50, 25: 75, 0: 100;
  • step 3 take the petroleum ether-ethyl acetate in step 2) to a 50: 50 or 25: 75 elution fraction;
  • the inventors have found through experiments that the eluted fraction of petroleum ether-ethyl acetate of 50:50 - 25:75 contains the compound of the present invention.
  • step 3 the volume ratio of sterol-water is 10:90, 50:50, 75:25, 100:0;
  • step 4 take the decyl alcohol-water in step 3) as a 50: 50 or 75: 25 elution fraction;
  • step 5 the conditions for freeze-drying are: cold trap temperature -40 to -85 ° C, vacuum degree 0 - 100 Pa; preferably cold trap temperature -50 to -82.7 ° C, vacuum degree 2 - 13 Pa; more preferably cold trap temperature - 82.7 ° C, vacuum 2 Pa, or cold trap temperature _ 50 ° C, vacuum
  • a further aspect of the invention relates to a process for the preparation of a hydrazine compound, comprising the steps of: using hexahydroxyergosterol as a substrate, such as (3, 16, 20, 22, 23, 25-hexahydroxyergosterol, abbreviated as a compound A) in p-toluenesulfonic acid monohydrate or 2, 4, 6-triisopropyl
  • Compound A can be obtained by the preparation method of Chinese Patent Publication No. CN101469014A (Application No. 200710304346.0).
  • the molar ratio of the compound A to the p-toluenesulfonic acid monohydrate is 5: 1-2:1; specifically, the compound A and the p-toluenesulfonic acid monohydrate in the benzene solution
  • the compound of the formula II is obtained by refluxing for 5-10 hours.
  • the molar ratio of compound A to 2,4,6-triisopropylsulfonyl chloride is 5: 1-2: 1; specifically, compound A and 2, 4, 6-three different
  • the compound of the formula II is obtained by reacting propylsulfonyl chloride in a pyridine solution at a temperature of from 30 ° C to 70 ° C for 10 to 30 hours.
  • the compound of formula II can, under certain conditions, produce different derivatives, such as ester derivatives, including but not limited to: acetates, sulfonates.
  • the ester derivative can be obtained by reacting a compound of the formula II with a common acid liver, an acid chloride, a sulfonyl chloride or a sulfonic acid.
  • the catalyst reacted with the acid anhydride may be selected from the group consisting of pyridine, concentrated sulfuric acid, NaHC0 3 Etc. For example:
  • the p-phenylenesulfonyl chloride is obtained by reacting triethylamine as an acid scavenger in dichloromethane at 40 ° C to 40 ° C.
  • a tetrakis(trifluoroanthracene sulfonate) of a compound of formula II (corresponding to a compound of formula I, -) is prepared by reacting a compound of the formula II with a molar ratio of 1:4-1:6 with trifluorosulfonium sulfonic acid anhydride in chloroformane at -20 ° C - 30 ° C in 1-5. It is made in hours.
  • a compound of formula II can also form a silyl ether derivative, such as a tert-butyl dimercaptosilicone ether of a compound of formula II.
  • a silyl ether derivative such as a tert-butyl dimercaptosilicone ether of a compound of formula II.
  • the tetra(tert-butyldidecylsilyl ether) of the compound of the formula II (corresponding to the compound of the formula I, R ⁇ R ⁇ RfR TBDMSO - ) is prepared by: a compound of the formula II having a molar ratio of 1:4 After reacting with sodium hydride in tetrahydrofuran, it is reacted with tert-butyldiindenylchlorosilane at 20 ° C to 40 ° C for 1-3 hours.
  • a further aspect of the invention relates to an extract comprising the hydrazine compound of the invention.
  • the extract according to any one of the present invention which is an extract of a dry powder of a blood lipid capsule or a red yeast extract.
  • the extract according to any one of the present invention wherein the content of the compound of the formula 0.00 is 0.0001 to 5% (w/w), 0.001 to 2% (w/w) or 0.001 to 1% (w/w).
  • the content of the compound of the formula II can also be adjusted by subjecting the extract of the present invention to appropriate concentration. The concentration can be carried out by methods known to those skilled in the art.
  • the petroleum ether-ethyl acetate obtained in the above steps 1) to 2) is an eluted portion of 50:50 - 25:75; preferably petroleum ether-ethyl acetate is 50:50 or 25:75 Elution portion; further preferably, petroleum ether-ethyl acetate is an elution portion of 25:75.
  • a further aspect of the invention relates to a composition comprising a compound of formula I or formula, and/or an extract of any of the invention; optionally further comprising a pharmaceutically acceptable carrier or Excipients.
  • the composition is a pharmaceutical composition.
  • the pharmaceutical composition of the present invention usually contains 0.1 to 90% by weight of the compound of the formula I or the formula I I and/or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • Pharmaceutical compositions can be prepared according to methods known in the art. For this purpose, if desired, a compound of formula I or formula II and/or a pharmaceutically acceptable salt thereof can be combined with one or more solid or liquid pharmaceutical excipients and/or adjuvants to form a human The appropriate form of administration or dosage form will be employed.
  • the compound of the formula I or the formula of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof or a pharmaceutical composition containing the same may be administered in a unit dosage form, which may be enterally or parenterally, such as orally, muscle, subcutaneous, nasal cavity, Oral mucosa, skin, peritoneum or rectum.
  • a unit dosage form which may be enterally or parenterally, such as orally, muscle, subcutaneous, nasal cavity, Oral mucosa, skin, peritoneum or rectum.
  • Formulations such as tablets, capsules, pills, aerosols, pills, powders, solutions, suspensions, emulsions, granules, liposomes, transdermal agents, buccal tablets, suppositories, lyophilized powders Injection, etc. It may be a general preparation, a sustained release preparation, a controlled release preparation, and various microparticle delivery systems.
  • a carrier for example, a diluent and an absorbent such as starch, dextrin, calcium sulfate, lactose, mannitol, sucrose, sodium chloride, glucose, urea, calcium carbonate, kaolin, microcrystalline cellulose, silicic acid.
  • a diluent and an absorbent such as starch, dextrin, calcium sulfate, lactose, mannitol, sucrose, sodium chloride, glucose, urea, calcium carbonate, kaolin, microcrystalline cellulose, silicic acid.
  • wetting agent and binder such as water, glycerin, polyethylene glycol, ethanol, propanol, starch slurry, dextrin, syrup, honey, glucose solution, gum arabic, gelatin paste, sodium carboxymethyl cellulose , shellac, thiol cellulose, potassium phosphate, polyvinylpyrrolidone, etc.
  • disintegrating agents such as dried starch, alginate, agar powder, brown algae starch, sodium bicarbonate and tannic acid, Calcium carbonate, polyoxyethyl hydrazine, sorbitan fatty acid ester, sodium dodecyl sulfonate, decyl cellulose, ethyl cellulose, etc.
  • disintegration inhibitors such as sucrose, glyceryl tristearate, cocoa a fat, a hydrogenated oil, etc.
  • an absorption enhancer such as a quaternary ammonium salt, sodium lauryl sulfate, etc.
  • Tablets may also be further formulated into coated tablets, such as sugar coated tablets, film coated tablets, enteric coated tablets, or bilayer tablets and multilayer tablets.
  • various carriers known in the art can be widely used.
  • the carrier are, for example, a diluent and an absorbent such as glucose, lactose, starch, cocoa butter, hydrogenated vegetable oil, polyvinylpyrrolidone, Geluc ire, kaolin, talc, etc.; binders such as gum arabic, tragacanth, Gelatin, ethanol, honey, liquid sugar, rice paste or batter; etc.; disintegrating agents, such as agar powder, dried starch, alginate, sodium dodecyl sulfate, methyl cellulose, ethyl cellulose, and the like.
  • the drug delivery unit in order to prepare the drug delivery unit as a suppository, various carriers well known in the art can be widely used.
  • the carrier are, for example, polyethylene glycol, lecithin, cocoa butter, higher alcohols, esters of higher alcohols, gelatin, semi-synthetic glycerides and the like.
  • the active ingredient of the compound of formula I or formula II or a pharmaceutically acceptable salt thereof is mixed with the various carriers described above, and the resulting mixture is placed in a hard gelatin or soft gelatin. in.
  • the active ingredient of the compound of formula I or formula II, or a pharmaceutically acceptable salt thereof may also be formulated as a microtidy agent, suspended in an aqueous medium to form a suspension, or incorporated into a hard capsule or used as an injection.
  • an injectable preparation such as a solution, an emulsion, a lyophilized powder, and a suspension
  • all diluents conventionally used in the art for example, water, ethanol, polyethylene glycol, 1, 3 can be used.
  • - propylene glycol, ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester, and the like in order to prepare an isotonic injection, an appropriate amount of sodium chloride, glucose or glycerin may be added to the preparation for injection, and a conventional cosolvent, a buffer, a pH adjuster or the like may be added.
  • coloring agents may also be added to the pharmaceutical preparations as needed.
  • the dose of the compound of formula I or formula or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to the invention depends on a number of factors, such as the nature and severity of the disease to be prevented or treated, the sex, age, weight and individual response of the patient or animal, Specific compound, route of administration and frequency of administration Numbers, etc.
  • the above dosages may be administered in a single dosage form or divided into several, for example two, three or four dosage forms.
  • composition as used herein is meant to include a product comprising specified quantities of each specified ingredient, and any product produced directly or indirectly from a specified combination of specified ingredients.
  • each active ingredient in the pharmaceutical compositions of the present invention can be varied so that the amount of active compound obtained is effective to achieve the desired therapeutic response for a particular patient, composition, and mode of administration.
  • the dosage level will be selected based on the activity of the particular compound, the route of administration, the severity of the condition being treated, and the condition and past medical history of the patient to be treated. However, it is the practice in the art to dose the compound from a level below that required to achieve the desired therapeutic effect, gradually increasing the dosage until the desired effect is achieved.
  • a further aspect of the invention relates to a compound of the invention or an extract according to any of the invention or a composition of the invention for reducing or regulating blood lipids or for preventing and/or treating dyslipidemia, hyperlipemia, hypercholesterolemia Use in drugs, or atherosclerosis.
  • a further aspect of the invention relates to the use of a compound of the invention or an extract of any of the invention or a composition of the invention for the preparation of an HMG-CoA reductase inhibitor.
  • a further aspect of the invention relates to a method of inhibiting HMG-CoA reductase in vivo or in vitro, comprising the step of using an effective amount of a compound of the invention or an extract of any of the invention or a composition of the invention .
  • Experimental Example 1 demonstrate that the compound of the present invention has an activity of inhibiting HMG-CoA reductase, and the activity is dose-dependent.
  • a further aspect of the invention relates to a method of reducing or regulating blood lipids or preventing and/or treating and/or adjuvant treatment of dyslipidemia, hyperlipidemia, hypercholesterolemia, or atherosclerosis, comprising administering an effective amount
  • the step of the compound of the invention or the extract of any of the invention or the composition of the invention is administered to a patient.
  • a further aspect of the invention relates to a compound of the invention or to any of the invention Use of an extract or a composition of the invention in the manufacture of a medicament for the prevention and/or treatment and/or adjuvant treatment of cancer; in particular, the cancer is colon cancer, liver cancer, lymphoma, or melanoma.
  • a further aspect of the invention relates to the use of a compound of the invention or an extract of any of the invention or a composition of the invention for the preparation of a medicament or agent for inhibiting tumor cells; in particular, the tumor cell is a colon Cancer cells, liver cancer cells, lymphatic cancer cells or melanoma cells.
  • a further aspect of the invention relates to a method of inhibiting tumor cells comprising using an effective amount of a compound of the invention, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or an extract of any of the invention or a composition of the invention Step; specifically, the tumor cell is a colon cancer cell, a liver cancer cell, a lymphoma cell or a melanoma cell.
  • the method of inhibiting tumor cells is a method of inhibiting tumor cells in vivo or in vitro.
  • a further aspect of the invention relates to a method of preventing and/or treating and/or adjuvant treatment of cancer comprising the use of an effective amount of a compound of the invention, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or an extract of any of the inventions or The step of the composition of the present invention; specifically, the cancer is colon cancer, liver cancer, lymphoma, or melanoma.
  • a further aspect of the invention relates to a compound of the invention or an extract according to any of the invention or a composition of the invention for the preparation of a medicament for the prevention and/or treatment and/or adjuvant treatment of obesity or obesity-related diseases or Use in a slimming drug; specifically, the obesity-related disease is hyperlipidemia, atherosclerosis, coronary heart disease, or diabetes.
  • a further aspect of the invention relates to the use of a compound of the invention or an extract according to any of the invention or a composition of the invention in the manufacture of a medicament or agent for inhibiting lipase.
  • a further aspect of the invention relates to a method of inhibiting a lipase comprising the use of an effective amount of a compound of the invention, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or an extract of any of the invention or a composition of the invention step.
  • the method for inhibiting lipase is A method of inhibiting lipase in vivo or in vitro.
  • a further aspect of the invention relates to a method of preventing and/or treating and/or assisting in the treatment of obesity or obesity-related diseases or a method of losing weight, comprising administering an effective amount of a compound of the invention or any of the inventions
  • the step of the extract or the composition of the present invention is hyperlipidemia, atherosclerosis, coronary heart disease, or diabetes.
  • an effective amount of a compound of the invention may be applied in pure form, or as a pharmaceutically acceptable ester or prodrug. Form (in the case of these forms) application.
  • the compound can be administered as a pharmaceutical composition comprising the compound of interest and one or more pharmaceutically acceptable excipients.
  • the total daily usage of the compounds and compositions of the present invention will be decided by the attending physician within the scope of sound medical judgment.
  • the specific therapeutically effective dosage level for any particular patient will depend on a number of factors, including the disorder being treated and the severity of the disorder; the activity of the particular compound employed; the particular composition employed; Patient's age, weight, general health, sex and diet; time of administration, route of administration and excretion rate of the particular compound employed; duration of treatment; drug used in combination with or concurrent with the particular compound employed; Similar factors are known in the medical field. For example, it is the practice in the art that the dosage of the compound be started from a level lower than that required to achieve the desired therapeutic effect, and the dosage is gradually increased until the desired effect is obtained.
  • the dose of the compound of the formula I of the present invention for use in mammals, especially humans may be between 0.001 and 1000 mg/kg body weight/day, for example between 0.01 and 100 mg/kg body weight/day, for example 0. 01 - 10 mg / kg body weight / day.
  • the compounds according to the present invention are effective for preventing and/or treating various diseases or conditions of the present invention.
  • the term '-( 3 alkyl) includes thiol, ethyl, propyl and isopropyl.
  • the term "obesity” includes but is not limited to simple obesity (no obvious endocrine, metabolism) The cause can be found, related to heredity, eating habits, etc.), secondary obesity (often some diseases such as adrenal hyperfunction, can be eliminated due to the cure of the disease).
  • the obesity may be obesity in a mammal, including a human or a pig.
  • abnormality-related diseases includes, but is not limited to, hyperlipidemia, atherosclerosis, coronary heart disease, or diabetes, and the like.
  • lipase (l ipase , enzyme classification number EC 3. 1. 1. 3 ) includes, but is not limited to, mammalian lipases, such as human lipases or porcine lipases, which are human Pancreatic lipase, the pig's lipase may be porcine pancreatic lipase (porc ine
  • the term "effective amount” refers to a dose that achieves the treatment, prevention, alleviation and/or alleviation of the disease or condition described herein in a subject.
  • the percentage of the content of a certain component means weight percentage (w/w) unless otherwise specified.
  • the invention also relates to the following aspects 1 - 22:
  • any one of (1) to (4) below for the preparation of a medicament for preventing and/or treating and/or adjuvant treatment of cancer; in particular, the cancer is colon cancer, liver cancer, lymphoma, Or melanoma,
  • R 2 is selected from - 0H H, and dC 3 alkyl
  • R 4 is selected from the group consisting of -OH H, and dC 3 alkyl; Further, any two, three or four of R 2 , R 3 and R 4 are simultaneously -OH; (2) a salt of the formula II,
  • tumor cell is a colon cancer cell, in the preparation of a drug or a reagent for inhibiting tumor cells in vivo or in vitro; Liver cancer cells, lymphoma cells or melanoma cells.
  • the extract in the item (3) is an extract of a red yeast extract and/or a red yeast extract (for example, a blood lipid capsule content) Things.
  • red yeast rice and/or red yeast rice for example, a dry powder of a blood lipid capsule
  • a 2- 6 volume volume selected from the group consisting of dichlorosilane, ethyl acetate, acetone, methanol, and ethanol.
  • One or more organic solvents are ultrasonically extracted as a solvent one or more times, each time for 20-40 minutes, the extracts are combined, and the solvent is removed to obtain a refined extract;
  • step 2) The extract obtained in the step 1) was subjected to silica gel column chromatography, and eluted with a gradient of petroleum ether and ethyl acetate; the volume ratio of petroleum ether-ethyl acetate was 75: 25, 50: 50 - 25: 75, 0: 100;
  • step 2) Take the petroleum ether-ethyl acetate in step 2) as the elution part of 50:50 - 25:75 Separation, separation by CI 8 reverse phase column chromatography, gradient elution with decyl alcohol-water, the volume ratio of sterol-water is 10: 90, 50: 50 - 75: 25, 100: 0;
  • step 3 The eluted fraction of the sterol-water in step 3) of 50:50 - 75:25 is purified by semi-preparative HPLC, using acetonitrile-0.2% aqueous acetic acid (45:55) as the mobile phase.
  • the C18 semi-preparative column was the stationary phase and the chromatographic peak fraction of 9.2 min was collected.
  • step 1) the organic solvent is dichlorodecane
  • step 1) the ultrasonic extraction is performed 3 times;
  • step 1) the solvent is removed by concentration under reduced pressure
  • step 2) the volume ratio of petroleum ether-ethyl acetate is 75: 25, 50: 50, 25: 75, 0: 100;
  • step 3 take the petroleum ether-ethyl acetate in step 2) to a 50: 50 or 25: 75 elution fraction;
  • step 3 the volume ratio of sterol-water is 10:90, 50:50, 75:25, 100:0;
  • step 4 take the decyl alcohol-water in step 3) as a 50: 50 or 75: 25 elution fraction;
  • step 4 the collected 9.2 min peaks are combined.
  • composition of the item (4) further comprises a pharmaceutically acceptable carrier or adjuvant.
  • a method for inhibiting tumor cells in vivo or in vitro comprising the step of using an effective amount of any one of (1) to (4) described in the first aspect; specifically, the tumor cell is a colon Cancer cells, liver cancer cells, lymphatic cancer cells or melanoma cells.
  • the extract in the item (3) is an extract of a red yeast extract and/or a red yeast extract (for example, a blood lipid capsule content).
  • red yeast rice and/or red yeast rice for example, a dry powder of a blood lipid capsule
  • a 2- 6 volume volume selected from the group consisting of dichlorosilane, ethyl acetate, acetone, methanol, and ethanol.
  • One or more organic solvents are ultrasonically extracted as a solvent one or more times, each time for 20-40 minutes, the extracts are combined, and the solvent is removed to obtain a refined extract;
  • step 2) The extract obtained in the step 1) was subjected to silica gel column chromatography, and eluted with a gradient of petroleum ether and ethyl acetate; the volume ratio of petroleum ether-ethyl acetate was 75: 25, 50: 50 - 25: 75, 0: 100;
  • step 2) Take the petroleum ether-ethyl acetate in step 2) as the eluted fraction of 50:50 - 25:75, separate by C18 reverse phase column chromatography, gradient elution with methanol-water, methanol-water volume The ratio is 10: 90, 50: 50 - 75:25, 100: 0; and
  • step 3 The eluted fraction of the sterol-water in step 3) of 50:50 - 75:25 is purified by semi-preparative HPLC, using acetonitrile-0.2% aqueous acetic acid (45:55) as the mobile phase.
  • the C18 semi-preparative column was the stationary phase and the chromatographic peak fraction of 9.2 min was collected.
  • step 1) the organic solvent is dichlorodecane
  • step 1) the ultrasonic extraction is performed 3 times;
  • step 1) the solvent is removed by concentration under reduced pressure
  • step 2) the volume ratio of petroleum ether-ethyl acetate is 75: 25, 50: 50, 25: 75, 0: 100;
  • step 3 take the petroleum ether-ethyl acetate in step 2) to a 50: 50 or 25: 75 elution fraction;
  • step 3 the volume ratio of sterol-water is 10:90, 50:50, 75:25, 100:0;
  • step 4 take the decyl alcohol-water in step 3) as a 50: 50 or 75: 25 elution fraction;
  • step 4 the collected 9.2 min chromatic peaks are combined.
  • the method of the seventh aspect wherein the composition of the item (4) further comprises a pharmaceutically acceptable carrier or adjuvant.
  • any one of (1) to (4) below for the preparation of a medicament for preventing and/or treating and/or assisting in the treatment of an obesity or obesity-related disease or a weight-loss medication; in particular, the obesity Disease-related diseases are hyperlipidemia, atherosclerosis, coronary heart disease, or diabetes,
  • R 2 is selected from the group consisting of -0H, H, and d_C 3 alkyl
  • R 4 is selected from - 0H, H, and d_C 3 alkyl
  • any two, three or four of R 2 , R 3 and R 4 are simultaneously -OH; (2) a salt of the formula II,
  • the extract is an extract of red yeast extract and/or red yeast extract (for example, blood lipid capsule content).
  • the extract of the item (3) is a petroleum ether-ethyl acetate obtained in the following steps 1) to 2) of 50: 50 - 25: an elution fraction of 75; or a decyl alcohol-water obtained in steps 1) to 3) as follows: 50: 50 - 75: 25 elution fraction; or as follows in steps 1) to 4) Part of the 9.2min peak:
  • red yeast rice and/or red yeast rice for example, a dry powder of a blood lipid capsule
  • a 2- 6 volume volume selected from the group consisting of dichlorosilane, ethyl acetate, acetone, methanol, and ethanol.
  • One or more organic solvents are ultrasonically extracted as a solvent one or more times, each time for 20-40 minutes, the extracts are combined, and the solvent is removed to obtain a refined extract;
  • step 2) The extract obtained in the step 1) was subjected to silica gel column chromatography, and eluted with a gradient of petroleum ether and ethyl acetate; the volume ratio of petroleum ether-ethyl acetate was 75: 25, 50: 50 - 25: 75, 0: 100;
  • step 2) Take the elution fraction of petroleum ether-ethyl acetate in step 2) from 50:50 to 25:75, separate by C18 reverse phase column chromatography, and elute with decyl alcohol-water gradient sterol-water The volume ratio is 10: 90, 50: 50 - 75: 25, 100: 0;
  • step 3 The eluted fraction of the sterol-water in step 3) of 50:50 - 75:25 is purified by semi-preparative HPLC, using acetonitrile-0.2% aqueous acetic acid (45:55) as the mobile phase.
  • the C18 semi-preparative column was the stationary phase and the chromatographic peak fraction of 9.2 min was collected.
  • step 1) the organic solvent is dichlorodecane
  • step 1) the ultrasonic extraction is performed 3 times;
  • step 1) the solvent is removed by concentration under reduced pressure
  • step 2) the volume ratio of petroleum ether-ethyl acetate is 75: 25, 50: 50, 25: 75, 0: 100;
  • step 3 take the petroleum ether-ethyl acetate in step 2) as an elution fraction of 50:50 or 25:75; (6) In step 3), the volume ratio of sterol-water is 10:90, 50:50, 75:25, 100:0;
  • step 4 take the decyl alcohol-water in step 3) as a 50: 50 or 75: 25 elution fraction;
  • step 4 the collected 9.2 min color peaks are combined.
  • composition of the item (4) further comprises a pharmaceutically acceptable carrier or adjuvant.
  • the extract in the item (3) is an extract of a red yeast extract and/or a red yeast extract (for example, a blood lipid capsule content).
  • red yeast rice and/or red yeast rice for example, a dry powder of a blood lipid capsule
  • a 2- 6 volume volume selected from the group consisting of dichlorosilane, ethyl acetate, acetone, methanol, and ethanol.
  • One or more organic solvents are ultrasonically extracted as a solvent one or more times, each time for 20-40 minutes, the extracts are combined, and the solvent is removed to obtain a refined extract;
  • step 2) The extract obtained in the step 1) was subjected to silica gel column chromatography, and eluted with a gradient of petroleum ether and ethyl acetate; the volume ratio of petroleum ether-ethyl acetate was 75: 25, 50: 50 - 25: 75, 0: 100;
  • step 2) Take the elution fraction of petroleum ether-ethyl acetate in step 2) from 50:50 to 25:75, separate by C18 reverse phase column chromatography, and elute with decyl alcohol-water gradient sterol-water The volume ratio is 10: 90, 50: 50 - 75: 25, 100: 0;
  • step 3 The eluted fraction of the sterol-water in step 3) of 50:50 - 75:25 is purified by semi-preparative HPLC, using acetonitrile-0.2% aqueous acetic acid (45:55) as the mobile phase.
  • the C18 semi-preparative column was the stationary phase and the chromatographic peak fraction of 9.2 min was collected.
  • step 1) the organic solvent is dichlorodecane
  • step 1) the ultrasonic extraction is performed 3 times;
  • step 1) the solvent is removed by concentration under reduced pressure
  • step 2) the volume ratio of petroleum ether-ethyl acetate is 75: 25, 50: 50, 25: 75, 0: 100;
  • step 3 take the petroleum ether-ethyl acetate in step 2) to a 50: 50 or 25: 75 elution fraction;
  • step 3 the volume ratio of methanol to water is 10:90, 50:50, 75:25, 100:0;
  • step 4 take the decyl alcohol-water in step 3) as a 50: 50 or 75: 25 elution fraction;
  • step 4 the collected 9.2 min chromatic peaks are combined.
  • composition of the item (4) further comprises a pharmaceutically acceptable carrier or adjuvant.
  • the compound of the present invention is capable of effectively inhibiting HMG-CoA reductase, has a dose-dependent inhibition of HMG-CoA reductase activity; has the function of reducing or regulating blood lipids or preventing and/or treating dyslipidemia, hyperlipemia, high cholesterol The potential of drugs for blood, or atherosclerosis.
  • the compound of the present invention is capable of effectively inhibiting the proliferation of cancer cells (tumor cells), and has an inhibitory effect in a concentration-effect relationship; thereby having the potential as a drug for preventing and/or treating and/or adjuvant treatment of cancer.
  • the compound of the present invention is capable of effectively inhibiting lipase activity, and inhibiting action in a concentration-effect relationship; thereby having a drug or a weight-loss drug as a preventive and/or therapeutic and/or adjuvant treatment for obesity or obesity-related diseases. potential.
  • Fig. 1 shows the inhibition curve of the compound of formula II on the growth of HCT116 cells.
  • Fig. 2 shows the inhibition curve of the compound of formula II on the growth of H22 cells.
  • Fig. 3 shows the inhibition curve of the compound of formula II on the growth of HepG2 cells.
  • Fig. 4 shows the inhibition curve of the compound of formula II on the growth of S180 cells.
  • Fig. 5 Inhibitory curve of the compound of formula II on the growth of YAC-1 cells.
  • Fig. 7 Inhibitory curve of the compound of formula II on the growth of U937 cells.
  • Fig. 8 shows the inhibition curve of the compound of formula II on the growth of B16-F10 cells.
  • 70. 5 ppm, 72. 4 ppm, 74. 5 ppm, 80. 4 ppm, 83. 8 ppm and 84. 4 ppm are present at 6 points connected to the oxygen atom. carbon.
  • the molecular weight and 13 C-NMR and DEPT signal diagrams if the compound has 6 oxygen atoms, the molecular weight exceeds 460.32, and it is inferred that the compound has 5 oxygen atoms and 4 hydrogen atoms which do not exhibit a hydrogen spectrum signal.
  • the carbon language ( 13 C-NMR and DEPT ) of the compound was analyzed and had 28 carbon atoms, of which 6 carbons were fluorenyl groups. Based on the ultraviolet absorption spectroscopy, the three maximum absorptions at 271.6 nm, 282. 2 nm and 293.8 nm are basically consistent with ergot alcohols. It is preliminarily concluded that the compound has a framework of ergosterol. From the molecular formula, the degree of unsaturation can be calculated as 7.
  • the compound in addition to the two double bonds and the six unsaturations of the four rings of the alcohol skeleton, the compound has an unsaturation and can only be a ring here, thereby judging that the ring is by the fifth An epoxy ring formed by an oxygen atom.
  • the HSQC map is combined with the HMBC-related signal diagram.
  • the six carbons connected to the oxygen atom are respectively assigned to four carbons connected by four hydroxyl groups (70. 5, 72.4, 74. 5, 80. 4 ppm) and 2 carbons (83. 8, 84. 4 ppm) connected to one remaining oxygen atom.
  • the fifth loop system is composed of C-16 (83.
  • TBDMS - C1 (tert-butyldidecylchlorosilane) (5.53 g, 36.8 mmol) was dissolved in 10 mL of THF and added dropwise to the above reaction solution with stirring to control the dropping rate so that the reaction temperature was not too high. After completion, the reaction was continued for 1.5 h at room temperature. The reaction solution was poured into water, extracted with dichloromethane, and the organic phase was washed with water, washed with saturated brine and dried over anhydrous sodium sulfate. Filtrate Concentration, column chromatography, to give the compound of formula II as tetrakis(tert-butyldidecylsilyl ether).
  • Experimental Example 1 HMG-CoA Reductase Inhibition Activity
  • the lovastatin standard was purchased from Sigma.
  • Rat liver microsomes (HMG-CoA reductase), which are commercially available, can also be referred to the following preparation methods: The liver of male rats is taken out, washed with KESD buffer, centrifuged at 1200 g for 15 min, and the supernatant is taken. liquid. After centrifugation at 105, OOOg for 90 min twice, the pellet was collected. 8.3% glycerol was added to the pellet and heated in a 37 °C warm bath for 1 h. Rat liver microsomes were purified by saturated ammonium sulfate and 35-50% purified fractions were collected. The resulting purified fraction can be stored in a -80 ° C freezer.
  • Potassium chloride potassium dihydrogen phosphate, ethylenediaminetetraacetic acid, dithiothreitol-- purchased from Beijing Chemical Reagent Company;
  • Nicotinamide adenine dinucleotide (NADPH) purchased from Merk;
  • HMG-CoA 3-Hydroxy-3-indolylglutaryl coenzyme A
  • the compound of formula II was dissolved in a 75% ethanol solution at an initial concentration of 8. 0 mg/mL and diluted stepwise, 4. 0 mg/mL, 2. 0 mg/mL, 1. 0 mg/mL; lovastatin was The positive control was dissolved in 75% ethanol solution at a concentration of 2.0 mg/mL; the total volume in the assay system was 250 ⁇ , and the concentrations of the components were: potassium chloride 200 mM, potassium dihydrogen phosphate 160 mM, ethylenediamine Tetraacetic acid 4 mM, 2 ⁇ 4 threitol 10 mM, two substrates nicotinamide adenine dinucleotide and 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A were 200 ⁇ and 50 ⁇ , respectively, ⁇ 8.
  • Lovastatin is a positive control.
  • the experimental results show that the compound of the present invention, particularly the compound of formula II, has an inhibitory effect on the activity of HMG-CoA reductase and has a concentration-effect relationship. Its IC 5 .
  • the value is about 250 ⁇ / ⁇ , indicating that the compound has a good inhibitory effect on the activity of HMG-CoA reductase.
  • ester derivatives or ether derivatives of the compound of formula II such as the tetraacetate of the compound of formula II, the tetra-p-benzenesulfonate of the compound of formula II, the compound of formula II, prepared in Examples 6-9
  • the tetrakis(trifluorosulfonate) and the tetrakis(tert-butyldidecylsilyl ether) of the compound of formula II also have similar activities for inhibiting HMG-CoA reductase.
  • Experimental Example 2 Cancer cell inhibition assay of a compound of formula II
  • HCT116 and H22 were purchased from Korean cell line bank, Seoul, Korea; S180, HepG-2, YAC-1, Thpl, U937 and B16-F10 were purchased from Chinese Academy of Sciences Typical Culture Collection Committee cell bank.
  • MTT was purchased from Amresco; RPMI1640 and double antibody were purchased from Sigma; fetal bovine serum (FBS) was purchased from Gibco, USA; other reagents were domestically analyzed.
  • FBS fetal bovine serum
  • the cells in the logarithmic growth phase were inoculated into a 96-well culture plate at 2 ⁇ 10 4 cells/well, and the drug was added to the final concentrations of the drug: 500, 250, 125, 62.5, 31.25, 15.625 and 7.8125 g/mL at 37 After incubating for 72 h in a 5% C0 2 cell culture incubator, add MTT 10 ⁇ 7 wells, incubate at 37 ° in the dark for 4 h, remove the culture solution, add 15 G ⁇ DMS0 or acidified isopropanol, shake for 5 min, at 570 The 0D value was determined at the nm wavelength. Repeated 3 times, a blank control was used. The medium used for each cell line was the same, and both were RPMI16 40 medium containing 10% fetal bovine serum and 1% double antibody (penicillin and streptomycin). .
  • the experimental procedure can also refer to Yang Xiuwei et al., “Screening of In Vitro Antitumor Activity of Alkaloids of Strychnos chinensis”, Modern Chinese Medicine, 2006, 8 (9): 11-13.
  • the compound of formula II has an inhibitory effect on the growth of mouse hepatoma cell line H22, and has a concentration-effect relationship. Its IC 5 . The value is about 50 g/mL, indicating a good inhibitory effect on the proliferation of mouse hepatoma cells.
  • the compound of formula II has an inhibitory effect on the growth of human hepatoma cell line HepG2, and has a concentration-effect relationship. Its IC 5 .
  • the value is approximately 200 g/mL, indicating Human hepatoma cell proliferation has a good inhibitory effect.
  • the compound of formula II has an inhibitory effect on the growth of mouse sarcoma cell line S180, and has a concentration-effect relationship.
  • the compound has the potential to prevent and treat liver cancer.
  • the compound of formula II has an inhibitory effect on the growth of mouse lymphoma cell YAC-1 in a concentration-effect relationship. Its IC 5 . The value was about 62.5 g/mL, indicating a good inhibition of mouse lymphoma cell proliferation.
  • the compound of formula II has an inhibitory effect on the growth of human mononuclear lymphoma cells THP1 in a concentration-effect relationship. Its IC 5 . The value is about 250 g/mL, indicating a good inhibition of human mononuclear lymphoma cell proliferation.
  • Figure 6
  • the compound of formula II has an inhibitory effect on the growth of human tissue lymphoma cell line U937, and is in a concentration-effect relationship. Its IC 5 .
  • the value is about 50 g/mL, indicating a good inhibition of human tissue lymphoma cell proliferation.
  • lymphoma lymphoma
  • Fig. 8 The results showed that the compound of formula II inhibited the growth of mouse melanoma cell line B16-F10 in a concentration-effect relationship. Its IC 5 . The value was about 62.5 ⁇ /mL, indicating a good inhibition of mouse melanoma cell proliferation. It can be seen that this compound has the potential to prevent melanoma.
  • the compounds of the present invention particularly the compounds of formula II, have potent inhibitory effects on a variety of tumor cells and have the potential to prevent and/or treat and/or adjuvant the treatment of cancer.
  • ester derivatives or ether derivatives of the compound of formula II such as the tetraacetate of the compound of formula II, the tetra-p-benzenesulfonate of the compound of formula II, the compound of formula II, prepared in Examples 6-9 Tetrakis(trifluorosulfonate) and tetra(tert-butyldidecylsilyl ether) of the compound of formula II also have similar activity in inhibiting tumor cells, and have preventive and/or therapeutic and/or adjuvant treatment of cancer. The potential of the drug.
  • Experimental Example 3 Lipase inhibition activity experiment
  • Orlistat - purchased from the Golden Elephant Pharmacy.
  • Porcine pancreatic lipase - purchased from Sigma.
  • Oleic acid was purchased from Sigma.
  • the enzyme solution is 0.5 mg/mL pancreatic lipase solution; the buffer is 0.07M NaH 2 P0-K 2 HP0 4 phosphate buffer solution (pH 7.0 ); the color developer is 5% copper acetate solution, and the pH is adjusted with pyridine. 6.1.
  • the organic phase and the aqueous phase were clarified by layering. Take 4 mL of the upper organic phase in a small conical flask, add 1 mL of the color developer, and stir for 3 min on a magnetic stirrer to produce a green complex with copper ions. Centrifuge at 4000 rpm for 10 min, take the upper layer of bismuth benzene solution containing copper oleate, and measure the absorbance at 714 nm with a spectrophotometer. A blank solution containing no lipase was prepared in the same manner as a reference, and the concentration of the fatty acid was determined by comparing the oleic acid absorbance working curve.
  • the unit of lipase enzyme activity is defined as: Under certain conditions, the amount of enzyme released per minute of ⁇ ⁇ ⁇ fatty acid is defined as one unit of lipase activity (U).
  • Inhibition rate [(lipase activity - post-inhibition lipase activity) I lipase activity] X 100%
  • the experimental results show that the compound of the present invention, especially the compound of the formula II, has a good inhibitory effect on the activity of lipase, and its IC 5 .
  • the value is approximately 220 ⁇ 8 and the inhibition is in a concentration-effect relationship. It can be seen that the compounds of the invention have the potential to prevent and/or treat and/or assist in the treatment of obesity or obesity-related diseases.
  • ester derivatives or ether derivatives of the compound of formula II such as the tetraacetate of the compound of formula II, the tetra-p-benzenesulfonate of the compound of formula II, the compound of formula II, prepared in Examples 6-9
  • Tetrakis(trifluorosulfonate) and tetra(tert-butyldidecylsilyl ether) of the compound of formula II also have similar lipase-inhibiting activity, and have preventive and/or therapeutic and/or adjuvant treatment for obesity. Or the potential of drugs for obesity-related diseases.

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Abstract

本发明属于医药化工领域，涉及一种甾醇类衍生物、其制备方法及用途。具体地，本发明涉及式I所示的化合物，或其药学上可接受的盐，其中，R1选自-OH、=O、H、以及C1-C3烷基；R2选自-OH、H、以及C1-C3烷基；R3选自-OH、=O、H、以及C1-C3烷基；R4选自-OH、H、以及C1-C3烷基；并且R1、R2、R3和R4中任意0个、1个、2个、3个或4个为-OH。本发明的化合物能够有效地抑制HMG-CoA还原酶、肿瘤细胞、以及脂肪酶，具有作为降低、抗肿瘤、或者减肥的药物的潜力。

Description

一种 ffi醇类衍生物、 其制备方法及用途 技术领域
本发明属于医药化工领域， 涉及一种甾醇类衍生物、 其制备方法 及用途。 背景技术
红曲（ o/za ^fermented r ice)是以大米为原料， 经红曲霉 ( 0/7 C )发酵制成的一种紫红色米曲。 红曲古代称丹曲， 是将红曲 霉为主的曲母或酒曲接种于米饭上发酵而成，其色赤红，故又名赤曲、 红米、 红大米、 红糟， 又因主产于福建等地， 故又名福曲、 福米等。
我国利用红曲菌的历史悠久， 从汉代起就用它制曲。 红曲是一味 食疗兼备的传统中药。 早在古代它已被广泛应用于食品着色、 酿酒、 发酵、 中医中药方面。 《饮膳正要》有红曲 "味甘、 平、 无毒" 、 "健 脾、 益气、 温中" ； 《本草纲目》有 "甘、 温、 无毒" 、 "治女人血 痛及产后恶血不净， 擂酒饮之良" ； 《本草衍义补遗》有 "活血、 消 食、 健脾暖胃、 治赤白下痢、 跌打损伤" 等记载。
上世纪 70 年代， 日本 Endo 教授首次从红色红曲霉（ Ο/½ r^er)中分离出生理活性物质莫纳克林 K (monacol in K)以来， 众多 国内外学者在红曲霉代谢产物中不断发现生理活性物质， 包括 monaco l in 类化合物， 红曲色素， 降压成分 GABA 及抗氧化成分 dimerumic ac id及最近分离的一些萜类化合物等等。 随着现代生物化 学与药理学的发展， 红曲的降血脂、 降压、 降糖、 抗肥胖、 抗癌、 防 治老年痴呆及骨质疏松等功效不断被挖掘。 从而为传统的红曲增添了 新的内涵。
血脂康胶嚢是北京北大维信生物科技有限公司自主研究的特制 红曲霉发酵制成的高效、 安全的国产现代调脂中药。 适应症为高脂血 症及动脉粥样硬化引起的心脑血管疾病的治疗。 其主要作用机制为通 过抑制 3-羟基 -3-曱基戊二酰辅酶 A ( HMG-CoA )还原酶的活性， 可抑 制内源性胆固醇的合成，降低血清总胆固醇（ TC；)、血甘油三酯（ TG )、 低密度脂蛋白 （LDL ) 、 升高高密度脂蛋白 （HDL ) 水平。 血脂康胶嚢 是红曲的醇提取物， 它富含洛伐他汀等一系列天然他汀类化合物。 除 了他汀类化合物以外， 血脂康胶嚢中还含有色素类化合物、 异黄酮类 化合物、 醇类化合物、 20种氨基酸、不饱和脂肪酸及多种微量元素。 故尚需要发现新的具有降脂或抑制 HMG-Co A还原酶活性的化合物。
此外， 血脂康中还可能存在一些未知的抗癌成分。 故尚需要发现 新的具有抗癌作用的化合物。
肥胖症作为一种全身性内分泌代谢疾病， 在世界范围内成普遍趋 势。 它不但影响体态和活动， 而且与高脂血症、 动脉粥样硬化、 冠心 病、 糖尿病等疾病密切相关。 肥胖发生的原因是多方面的， 如遗传因 素、 环境因素、 饮食习惯等， 其中高脂饮食是导致肥胖的重要原因。 近年来， 药物治疗是治疗肥胖症的有效手段之一， 通过减少脂肪吸收 达到治疗目的。 胰和胃脂肪酶是肠道中脂肪消化吸收所必需的。 食物 中的脂肪被水解为单酰甘油和游离脂肪酸后， 在肠道被吸收， 然后在 体内重新合成脂肪， 造成脂肪堆积， 最终可导致肥胖。 应用脂肪酶抑 制剂可有效抑制肠道中脂肪酶对脂肪的分解催化作用， 达到减少脂肪 吸收、 控制和治疗肥胖的目的 （陈瑾等.肥胖的药物治疗研究进展.中 华中医药学刊， 2007， 25 (5) : 947-948; 吴静等. 肥胖的药物治疗进 展. 医学综述， 2006, 12 (11) : 693-693。 )
目前， 美国 FDA只批准了 2 种药物可以长期用于肥胖症治疗： s ibutramin (西布曲明，中枢神经作用减肥药）和 or l i s tat(奥利司他， 胃肠道脂肪酶抑制剂）。但这两种药都有明显的不良反应： s ibutramin 的副作用主要有口渴、便秘、 头晕和失眠， or l i s tat的不良反应主要 是胃肠道症状， 常见的有腹泻腹痛、 油性斑点、 胃肠胀气等， 其长期 效果也有待于进一步评价。
因此， 目前亦尚需要发现新的具有抑制脂肪酶作用的药物。 发明内容
本发明人经过深入的研究和创造性的劳动， 得到了一种 醇类衍 生物， 并且本发明人惊奇地发现， 本发明的化合物能够有效地抑制
HMG-CoA还原酶，从而具有作为降低或调节血脂或者预防和 /或治疗血 脂异常、 高血脂症、 高胆固醇血症、 或动脉粥样硬化的药物的潜力。 此外， 本发明人还惊奇地发现： 1 )本发明的化合物能够有效地抑制 癌细胞（肿瘤细胞）的增殖， 从而具有作为预防和 /或治疗和 /或辅助 治疗癌症的药物的潜力； 2 ) 本发明的化合物能够有效地抑制脂肪酶 的活性， 从而具有作为预防和 /或治疗和 /或辅助治疗肥胖症或肥胖症 相关疾病的药物的潜力。 由此提供了下述发明： 本发明的一个方面涉及式 I所示的化合物， 或其药学上可接受的 盐、 酯或醚，
Figure imgf000005_0001
其中，
选自 -0H、 =0 (羰基） 、 H、 和 d-C3烷基；
R2选自 -0H、 H、 和 d-C3烷基;
R3选自- 0H、 =0、 H、 和 C「C3烷基；
R4选自- 0H、 H、 和 d_C3烷基；
并且 Ri、 R2、 R3、 和 R4中任意的 0个、 1个、 2个、 3个或 4个为
-0H。
对于式 I化合物的酯或醚， 成酯或成醚的位点为 R2、 R3、 和 R4中任意的 0个、 1个、 2个、 3个或 4个。
在本发明的一个实施方案中， 或 =0 (欺基） ， R2、 R3和 R4均为 H。 根据本发明的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、 酯或 醚， 其为下面的式 I I 所示的化合物， 或其药学上可接受的盐、 酯或 醚，
Figure imgf000006_0001
式 I I。 式 I I 化合物的化学名为： 16, 22-环氧麦角 -5， 7-二烯 - 3， 20， 23， 25 - 四 醇 ( 16, 22-epoxy-ergos ta-5, 7-dien-3, 20, 23, 25-tetraol ) 。
根据本发明的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、 酯或 醚， 其中， 所述酯选自曱酸酯、 醋酸酯、 丙酸酯和磺酸酯； 所述醚为 叔丁基二曱基硅醚； 具体地， 所述磺酸酯基为对曱苯磺酯或三氟曱磺 本发明还涉及上述的式 I或式 I I化合物的水合物或溶剂化物。 本发明的另一方面涉及式 I或式 Π化合物的制备方法， 包括下 述步骤：
1 )取红曲和 /或红曲的醇提物（例如血脂康胶嚢内容物， 其为干 粉） ， 用 2 - 6倍体积的选自二氯曱烷、 乙酸乙酯、 丙酮、 曱醇、 乙 醇中的一种或多种有机溶剂作为溶剂超声提取一次或多次， 每次 20 - 40分钟， 合并提取液， 除去溶剂， 得到精提物；
可选地， 所述醇提物可以如下方法制得： 用 2 - 6 倍体积的 50% - 100%乙醇或 50% - 100%曱醇作为溶剂超声提取一次或多次， 每次 20 - 40分钟， 合并提取液， 除去溶剂， 得到醇提物。
不拘于理论的限制， 由于血脂康本身是红曲的醇提物， 因此可以 直接用红曲为原料， 提取步骤与血脂康胶嚢内容物干粉基本相同， 但 红曲中的该化合物的含量相对低。 所述红曲的具体菌株并不特别限 定， 包括任一属于红曲的菌种或菌株。 血脂康胶嚢（例如北大维信生 产） 可以通过医院或药店购买得到。
2 )将步骤 1 )得到的精提物进行硅胶柱色谱分离， 用石油醚和乙 酸乙酯进行梯度洗脱；石油醚 -乙酸乙酯的体积比依次为 75: 25、 50: 50 - 25: 75、 0: 100;
3)取步骤 2)中的石油醚 -乙酸乙酯为 50:50 - 25:75的洗脱部分， 经 C18反相柱色谱进行分离， 用曱醇 -水进行梯度洗脱， 曱醇-水的体 积比依次为 10: 90、 50:50 - 75:25、 100: 0;
4)取步骤 3)中的曱醇 -水为 50: 50 - 75: 25的洗脱部分用半制备 高效液相色语纯化， 以乙腈 -0.2%乙酸水溶液（ 45: 55 ) 为流动相， C18半制备柱为固定相， 收集 9.2 min的色谱峰部分； 和
5 )将步骤 4 ) 的产物进行冷冻干燥， 得到式 I或式 II化合物。 根据本发明的任一项所述的制备方法， 其满足如下的（1) - (9) 中的任一项或者多项：
(1) 步骤 1) 中， 所述有机溶剂优选为二氯曱烷；
( 2 ) 步骤 1 ) 中， 所述超声提取进行 3次；
( 3) 步骤 1) 中， 通过减压浓缩除去溶剂；
( 4 )步骤 2 )中，石油醚 -乙酸乙酯的体积比依次为 75: 25、 50: 50、 25: 75、 0: 100;
(5) 步骤 3) 中， 取步骤 2) 中的石油醚 -乙酸乙酯为 50: 50或 25: 75的洗脱部分；
本发明人通过试验发现， 石油醚 -乙酸乙酯为 50: 50 - 25: 75的洗 脱部分都含有本发明的化合物。
(6)步骤 3)中， 曱醇 -水的体积比依次为 10:90、 50: 50、 75:25、 100: 0;
( 7 ) 步骤 4 ) 中， 取步骤 3) 中的曱醇 -水为 50: 50或 75: 25的 洗脱部分；
本发明人通过试验发现， 曱醇 -水为 50: 50 - 75: 25的洗脱部分都 含有本发明的化合物。 ( 8 ) 步骤 4 ) 中， 将收集的 9.2 min的色语峰部分合并； 和
( 9) 步骤 5 ) 中， 冷冻干燥的条件是： 冷阱温度 -40 至 -85°C， 真空度 0 - 100 Pa; 优选为冷阱温度 -50至 -82.7°C，真空度 2 - 13 Pa; 更优选为冷阱温度 -82.7°C， 真空度 2 Pa, 或冷阱温度 _50°C，真空度
8.5 Pa。 本发明的再一方面涉及式 Π化合物的制备方法， 包括下述步骤： 以六羟基麦角甾醇为底物， 如（3， 16， 20， 22， 23， 25-六羟基麦角 甾醇， 简称为化合物 A) ， 在对曱苯磺酸一水合物或 2, 4, 6-三异丙 基
Figure imgf000008_0001
化合物 A 式 II
化合物 A 可参照中国专利公开 CN101469014A ( 申请号为 200710304346.0 ) 的制备方法制得。
在本发明的一个实施方案中， 化合物 A与对曱苯磺酸一水合物的 摩尔比为 5: 1-2: 1; 具体地， 化合物 A与对曱苯磺酸一水合物在曱 苯溶液中， 经过回流反应 5-10小时制得式 II化合物。
在本发明的一个实施方案中， 化合物 A与 2,4,6-三异丙基磺酰氯 的摩尔比为 5: 1-2: 1; 具体地， 化合物 A与 2，4，6-三异丙基磺酰氯 在吡啶溶液中，于 30°C - 70 °C的温度下反应 10 - 30小时制得式 II化合 物。
式 II化合物在一定条件下， 可生成不同的衍生物， 例如酯类衍 生物， 包括但不限于： 醋酸酯、 磺酸酯。
所述酯类衍生物可以通过使式 II化合物与常用酸肝、 酰氯、 磺 酰氯、磺酸反应制得。与酸酐反应的催化剂可选自吡啶、浓硫酸、 NaHC03 等 例如：
式 II 化合物的四乙酸酯 （相当于式 I 所示的化合物中，
Figure imgf000009_0001
-OC (=0) - CH3 )的制备方法为： 将式 11化合物在催 化量的浓¾酸下， 以乙酸酐作为反应试剂和溶剂， 于 40- 80°C下反应 1 -3小时后制得。
式 II 化合物的四对曱苯磺酯 （相当于式 I所示的化合物中， = = =¾=- OTs)的制备方法为： 将摩尔比为 1: 4-1: 8的式 II 化合物与对曱苯磺酰氯， 以三乙胺为除酸剂， 在二氯甲烷中于 20°C - 40 °C反应制得。
式 II化合物的四 (三氟曱磺酸酯）（相当于式 I所示的化合物中，
Figure imgf000009_0002
- ) 的制备方法为： 将摩尔比为 1: 4-1: 6 的 式 II化合物与三氟曱磺酸酐，在二氯曱烷中与吡啶在 20°C - 30°C下反 应 1-5小时制得。
式 II化合物在一定条件下， 亦可生成硅醚类衍生物， 例如式 II 化合物的叔丁基二曱基硅醚。 例如：
式 II化合物的四 (叔丁基二曱基硅醚）（相当于式 I所示的化合物 中， R^R^RfR TBDMSO - ) 的制备方法为： 将摩尔比为 1: 4 的 式 II化合物与氢化钠在四氢呋喃中反应后， 与叔丁基二曱基氯硅烷在 20 °C - 40°C下反应 1-3小时制得。 本发明的再一方面涉及一种提取物， 其含有本发明的式 Π化合 物。
根据本发明任一项所述的提取物， 其为血脂康胶嚢内容物干粉的 提取物或者红曲的提取物。
根据本发明任一项所述的提取物， 其中式 Π 化合物的含量为 0.0001— 5% (w/w) 、 0.001— 2% (w/w)或 0.001— 1% (w/w) 。 式 II 化合物的含量也可以通过将本发明的提取物通过适当浓缩进行调整。 所述浓缩可以通过本领域人员知悉的方法进行。
根据本发明任一项所述的提取物， 其为如下的 （1)至（3) 中的 任一项：
( 1 )上述的步骤 1 ) 至 2 ) 中制得的石油醚 -乙酸乙酯为 50: 50 - 25: 75的洗脱部分；优选石油醚 -乙酸乙酯为 50: 50或 25: 75的洗脱 部分； 进一步优选石油醚 -乙酸乙酯为 25: 75的洗脱部分。
( 2 )上述的步骤 1 )至 3 ) 中制得的曱醇 -水为 50: 50 - 75: 25的 洗脱部分； 优选曱醇 -水为 75: 25的洗脱部分； 和
( 3 )上述的步骤 1 ) 至 4 ) 中制得的 9. 2 min的色语峰部分。 本发明的再一方面涉及一种组合物， 其包含式 I或式 Π的化合 物、 和 /或本发明中任一项所述的提取物； 可选地， 还包括药学上可 接受的载体或辅料。 具体地， 所述组合物为药物组合物。
通常本发明药物组合物含有 0. 1 - 90重量％的式 I或式 I I化合 物和 /或其可药用盐。 药物组合物可根据本领域已知的方法制备。 用 于此目的时， 如果需要， 可将式 I或式 I I化合物和 /或其可药用盐与 一种或多种固体或液体药物赋形剂和 /或辅剂结合， 制成可作为人用 的适当的施用形式或剂量形式。
本发明的式 I或式 Π化合物或其可药用盐或含有它的药物组合 物可以单位剂量形式给药， 给药途径可为肠道或非肠道， 如口服、 肌 肉、 皮下、 鼻腔、 口腔粘膜、 皮肤、 腹膜或直肠等。 给药剂型例如片 剂、 胶嚢、 滴丸、 气雾剂、 丸剂、 粉剂、 溶液剂、 混悬剂、 乳剂、 颗 粒剂、 脂质体、 透皮剂、 口含片、 栓剂、 冻干粉针剂等。 可以是普通 制剂、 緩释制剂、 控释制剂及各种微粒给药系统。 为了将单位给药剂 型制成片剂， 可以广泛使用本领域公知的各种载体。 关于载体的例子 是， 例如稀释剂与吸收剂， 如淀粉、 糊精、 硫酸钙、 乳糖、 甘露醇、 蔗糖、 氯化钠、 葡萄糖、 尿素、 碳酸钙、 白陶土、 微晶纤维素、 硅酸 铝等； 湿润剂与粘合剂， 如水、 甘油、 聚乙二醇、 乙醇、 丙醇、 淀粉 浆、 糊精、 糖浆、 蜂蜜、 葡萄糖溶液、 阿拉伯胶浆、 明胶浆、 羧曱基 纤维素钠、 紫胶、 曱基纤维素、磷酸鉀、 聚乙烯吡咯烷酮等； 崩解剂， 例如干燥淀粉、 海藻酸盐、 琼脂粉、 褐藻淀粉、 碳酸氢钠与枸橼酸、 碳酸钙、 聚氧乙浠、 山梨糖醇脂肪酸酯、 十二烷基磺酸钠、 曱基纤维 素、 乙基纤维素等； 崩解抑制剂， 例如蔗糖、 三硬脂酸甘油酯、 可可 脂、 氢化油等； 吸收促进剂， 例如季铵盐、 十二烷基硫酸钠等； 润滑 剂， 例如滑石粉、 二氧化硅、 玉米淀粉、 硬脂酸盐、 硼酸、 液体石蜡、 聚乙二醇等。 还可以将片剂进一步制成包衣片， 例如糖包衣片、 薄膜 包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。 为了将给药单元制成丸剂， 可以广泛使用本领域公知的各种载体。 关于载体的例子是， 例如稀释 剂与吸收剂， 如葡萄糖、 乳糖、 淀粉、 可可脂、 氢化植物油、 聚乙烯 吡咯烷酮、 Geluc ire、 高岭土、 滑石粉等； 粘合剂如阿拉伯胶、 黄蓍 胶、 明胶、 乙醇、 蜂蜜、 液糖、 米糊或面糊等； 崩解剂， 如琼脂粉、 干燥淀粉、 海藻酸盐、 十二烷基磺酸钠、 甲基纤维素、 乙基纤维素等。 为了将给药单元制成栓剂， 可以广泛使用本领域公知的各种载体。 关 于载体的例子是， 例如聚乙二醇、 卵磷脂、 可可脂、 高级醇、 高级醇 的酯、 明胶、 半合成甘油酯等。 为了将给药单元制成胶嚢， 将有效成 分式 I或式 I I化合物或其可药用盐与上述的各种载体混合， 并将由 此得到的混合物置于硬的明明胶嚢或软胶嚢中。 也可将有效成分式 I 或式 I I 化合物或其可药用盐制成微嚢剂， 混悬于水性介质中形成混 悬剂， 亦可装入硬胶嚢中或制成注射剂应用。 为了将给药单元制成注 射用制剂， 如溶液剂、 乳剂、 冻干粉针剂和混悬剂， 可以使用本领域 常用的所有稀释剂， 例如， 水、 乙醇、 聚乙二醇、 1, 3-丙二醇、 乙氧 基化的异硬脂醇、 多氧化的异硬脂醇、 聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。 另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、 葡萄糖或甘油， 此外， 还可以添加常规的助溶剂、 緩冲剂、 pH调节剂 等。
此外， 如需要， 也可以向药物制剂中添加着色剂、 防腐剂、香料、 矫味剂、 甜味剂或其它材料。
本发明式 I或式 Π化合物或其可药用盐的给药剂量取决于许多 因素， 例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度， 患者或动物的性 别、 年龄、 体重及个体反应， 所用的具体化合物， 给药途径及给药次 数等。 上述剂量可以单一剂量形式或分成几个， 例如二、 三或四个剂 量形式给药。
本文所用的术语 "组合物" 意指包括包含指定量的各指定成分的 产品， 以及直接或间接从指定量的各指定成分的组合产生的任何产 口
可改变本发明药物组合物中各活性成分的实际剂量水平， 以便所 得的活性化合物量能有效针对具体患者、 组合物和给药方式得到所需 的治疗反应。 剂量水平须根据具体化合物的活性、 给药途径、 所治疗 病况的严重程度以及待治疗患者的病况和既往病史来选定。 但是， 本 领域的做法是， 化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水 平开始， 逐渐增加剂量， 直到得到所需的效果。 本发明的再一方面涉及本发明的化合物或本发明任一项所述的 提取物或者本发明的组合物在制备降低或调节血脂或者预防和 /或治 疗血脂异常、 高血脂症、 高胆固醇血症、 或动脉粥样硬化的药物中的 用途。
本发明的再一方面涉及本发明的化合物或本发明任一项所述的 提取物或者本发明的组合物在制备 HMG-CoA还原酶抑制剂中的用途。
本发明的再一方面涉及一种在体内或体外抑制 HMG-CoA还原酶的 方法， 包括使用有效量的本发明的化合物或本发明任一项所述的提取 物或者本发明的组合物的步骤。
实验例 1的实验结果证明， 本发明的化合物具有抑制 HMG-CoA还 原酶的活性， 并且所述活性具有剂量依赖性。
本发明的再一方面涉及一种降低或调节血脂或者预防和 /或治疗 和 /或辅助治疗血脂异常、 高血脂症、 高胆固醇血症、 或动脉粥样硬 化的方法， 包括给与有效量的本发明的化合物或本发明任一项所述的 提取物或者本发明的组合物的步骤。 本发明的再一方面涉及本发明的化合物或本发明任一项所述的 提取物或者本发明的组合物在制备预防和 /或治疗和 /或辅助治疗癌 症的药物中的用途； 具体地， 所述癌症为结肠癌、 肝癌、 淋巴癌、 或 黑色素瘤。
本发明的再一方面涉及本发明的化合物或本发明任一项所述的 提取物或者本发明的组合物在制备抑制肿瘤细胞的药物或者试剂中 的用途； 具体地， 所述肿瘤细胞为结肠癌细胞、 肝癌细胞、 淋巴癌细 胞或黑色素瘤细胞。
本发明的再一方面涉及一种抑制肿瘤细胞的方法， 包括使用有效 量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐或本发明任一项所述的 提取物或者本发明的组合物的步骤； 具体地， 所述肿瘤细胞为结肠癌 细胞、 肝癌细胞、 淋巴癌细胞或黑色素瘤细胞。 具体地， 所述抑制肿 瘤细胞的方法为在体内或体外抑制肿瘤细胞的方法。
实验例 2的实验结果证明， 本发明的化合物能够有效地抑制肿瘤 细胞。
本发明的再一方面涉及预防和 /或治疗和 /或辅助治疗癌症的方 法， 包括使用有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐或本发 明任一项所述的提取物或者本发明的组合物的步骤； 具体地， 所述癌 症为结肠癌、 肝癌、 淋巴癌、 或黑色素瘤。 本发明的再一方面涉及本发明的化合物或本发明任一项所述的 提取物或者本发明的组合物在制备预防和 /或治疗和 /或辅助治疗肥 胖症或肥胖症相关疾病的药物或者减肥药物中的用途； 具体地， 所述 肥胖症相关疾病为高脂血症、 动脉粥样硬化、 冠心病、 或糖尿病。
本发明的再一方面涉及本发明的化合物或本发明任一项所述的 提取物或者本发明的组合物在制备抑制脂肪酶的药物或者试剂中的 用途。
本发明的再一方面涉及一种抑制脂肪酶的方法， 包括使用有效量 的本发明的化合物或其药学上可接受的盐或本发明任一项所述的提 取物或者本发明的组合物的步骤。 具体地， 所述抑制脂肪酶的方法为 在体内或体外抑制脂肪酶的方法。
实验例 3的实验结果证明， 本发明的化合物能够有效地抑制脂肪 酵。
本发明的再一方面涉及一种预防和 /或治疗和 /或辅助治疗肥胖 症或肥胖症相关疾病的方法或者一种减肥的方法， 包括给与有效量的 本发明的化合物或本发明任一项所述的提取物或者本发明的组合物 的步骤； 具体地， 所述肥胖症相关疾病为高脂血症、 动脉粥样硬化、 冠心病、 或糖尿病。 当用于上述治疗和 /或预防和 /或辅助治疗时， 治疗和 /或预防和 / 或辅助治疗的有效量的一种本发明化合物可以以纯形式应用， 或者以 药学可接受的酯或前药形式（在存在这些形式的情况下）应用。 或者， 所述化合物可以以含有该目的化合物与一种或多种药物可接受赋形 剂的药物组合物给药。 但应认识到， 本发明化合物和组合物的总日用 量须由主诊医师在可靠的医学判断范围内作出决定。 对于任何具体的 患者， 具体的治疗有效剂量水平须根据多种因素而定， 所述因素包括 所治疗的障碍和该障碍的严重程度； 所采用的具体化合物的活性； 所 采用的具体组合物； 患者的年龄、体重、 一般健康状况、 性别和饮食； 所采用的具体化合物的给药时间、给药途径和排泄率；治疗持续时间； 与所采用的具体化合物组合使用或同时使用的药物； 及医疗领域公知 的类似因素。 例如， 本领域的做法是， 化合物的剂量从低于为得到所 需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。 一般说来， 本发明式 I化合物用于哺乳动物特别是人的剂量可以介于 0. 001 - 1000 mg/kg体重 /天， 例如介于 0. 01 - 100 mg/kg体重 /天， 例如介于 0. 01 - 10 mg/kg体重 /天。
根据本发明的化合物可以有效地预防和 /或治疗本发明所述的各 种疾病或病症。
本发明中， 术语 ' -( 3烷基" 包括曱基、 乙基、 丙基和异丙基。 术语 "肥胖症" 包括但不限于单纯性肥胖（无明显内分泌、 代谢 的病因可寻， 与遗传、 饮食习惯等有关） 、 继发性肥胖（常是某些疾 病如肾上腺皮质功能亢进的一种， 可因疾病的治愈而消除） 。 所述肥 胖症可以是哺乳动物的肥胖症， 所述哺乳动物包括人或猪。
术语 "肥胖症相关疾病"包括但不限于高脂血症、动脉粥样硬化、 冠心病、 或糖尿病等等。
术语 "脂肪酶" （ l ipase , 酶分类号 EC3. 1. 1. 3 ) 包括但不限于 哺乳动物的脂肪酶， 例如人的脂肪酶或猪的脂肪酶， 所述人的脂肪酶 以是人胰脂肪酶， 所述猪的脂肪酶可以是猪胰脂肪酶 （porc ine
Figure imgf000015_0001
术语 "有效量" 是指可在受试者中实现治疗、 预防、 减轻和 /或 緩解本发明所述疾病或病症的剂量。
本发明中， 对于某种成分的含量的百分比， 如果没有特别说明， 均指重量百分比 （w/w ) 。 本发明还涉及如下方面 1 - 22:
1. 如下的 （1 ) - ( 4 ) 中的任一项在制备预防和 /或治疗和 /或 辅助治疗癌症的药物中的用途； 具体地， 所述癌症为结肠癌、 肝癌、 淋巴癌、 或黑色素瘤，
( 1 ) 式 I所示的 盐，
Figure imgf000015_0002
其中，
选自 -0H =0、 H、 以及 d-C3烷基;
R2选自- 0H H、 以及 d-C3烷基；
R3选 ll _0H =0、 H、 以及 d-C3烷基;
R4选自 -OH H、 以及 d-C3烷基； 并且 、 R2 、 R3 、 和 R4中任意 2个、 3个或 4个同时为 -OH; (2) 式 II所示的 盐，
Figure imgf000016_0001
式 II
( 3)提取物， 其含有式 II化合物； 和
(4)组合物， 其含有上述的 （1) - ( 3) 中的任一项。
2. 第 1 方面中所述的 （1) - (4) 中的任一项在制备在体内或 体外抑制肿瘤细胞的药物或者试剂中的用途； 具体地， 所述肿瘤细胞 为结肠癌细胞、 肝癌细胞、 淋巴癌细胞或黑色素瘤细胞。
3. 根据第 1或 2方面所述的用途， 其中， 所述第 （3)项中的提 取物为红曲提取物和 /或红曲醇提物 （例如血脂康胶嚢内容物） 的提 取物。
4. 根据第 3方面所述的用途， 其中， 所述第（3)项中的提取物， 其为如下的步骤 1 )至 2 )中制得的石油醚 -乙酸乙酯为 50: 50 - 25: 75 的洗脱部分；或如下的步骤 1 )至 3)中制得的曱醇 -水为 50: 50 - 75: 25 的洗脱部分； 或如下的步骤 1) 至 4) 中制得的 9.2 min的色语峰部 分：
1)取红曲和 /或红曲的醇提物 （例如血脂康胶嚢内容物干粉） ， 用 2- 6 倍体积的选自二氯曱烷、 乙酸乙酯、 丙酮、 甲醇、 乙醇中的 一种或多种有机溶剂作为溶剂超声提取一次或多次， 每次 20 - 40分 钟， 合并提取液， 除去溶剂， 得到精提物；
2 )将步骤 1 )得到的精提物进行硅胶柱色谱分离， 用石油醚和乙 酸乙酯进行梯度洗脱；石油醚 -乙酸乙酯的体积比依次为 75: 25、 50: 50 - 25: 75、 0: 100;
3) 取步骤 2) 中的石油醚 -乙酸乙酯为 50:50 - 25:75的洗脱部 分， 经 CI 8反相柱色谱进行分离， 用曱醇 -水进行梯度洗脱， 曱醇-水 的体积比依次为 10: 90、 50: 50 - 75:25、 100: 0; 和
4)取步骤 3)中的曱醇 -水为 50: 50 - 75: 25的洗脱部分用半制备 高效液相色语纯化， 以乙腈 -0.2%乙酸水溶液（ 45: 55 ) 为流动相， C18半制备柱为固定相， 收集 9.2 min的色谱峰部分。
5. 根据笫 4 方面所述的用途， 其特征在于 （1) - (8) 中的任 一项或者多项：
(1) 步骤 1) 中， 所述有机溶剂为二氯曱烷；
( 2 ) 步骤 1 ) 中， 所述超声提取进行 3次；
( 3) 步骤 1) 中， 通过减压浓缩除去溶剂；
( 4 )步骤 2 )中，石油醚 -乙酸乙酯的体积比依次为 75: 25、 50: 50、 25: 75、 0: 100;
(5) 步骤 3) 中， 取步骤 2) 中的石油醚 -乙酸乙酯为 50: 50或 25: 75的洗脱部分；
(6)步骤 3)中， 曱醇 -水的体积比依次为 10:90、 50: 50、 75:25、 100: 0;
( 7 ) 步骤 4 ) 中， 取步骤 3) 中的曱醇 -水为 50: 50或 75: 25的 洗脱部分； 和
( 8 ) 步骤 4 ) 中， 将收集的 9.2 min的色谱峰部分合并。
6. 根据笫 1或 2方面所述的用途， 其中， 所述第 （4)项中的组 合物还包括药学上可接受的载体或辅料。
7. 一种在体内或体外抑制肿瘤细胞的方法， 包括使用有效量的 第 1方面中所述的 （1) - (4) 中的任一项的步骤； 具体地， 所述肿 瘤细胞为结肠癌细胞、 肝癌细胞、 淋巴癌细胞或黑色素瘤细胞。
8. 根据第 7方面所述的方法， 其中， 所述第 （3)项中的提取物 为红曲提取物和 /或红曲醇提物（例如血脂康胶嚢内容物）的提取物。
9. 根据第 8方面所述的方法， 其中， 所述第（ 3)项中的提取物， 其为如下的步骤 1 )至 2 )中制得的石油醚 -乙酸乙酯为 50: 50 - 25: 75 的洗脱部分；或如下的步骤 1 )至 3)中制得的曱醇 -水为 50: 50 - 75: 25 的洗脱部分； 或如下的步骤 1) 至 4) 中制得的 9.2 min的色语峰部 分：
1)取红曲和 /或红曲的醇提物 （例如血脂康胶嚢内容物干粉） ， 用 2- 6 倍体积的选自二氯曱烷、 乙酸乙酯、 丙酮、 甲醇、 乙醇中的 一种或多种有机溶剂作为溶剂超声提取一次或多次， 每次 20 - 40分 钟， 合并提取液， 除去溶剂， 得到精提物；
2 )将步骤 1 )得到的精提物进行硅胶柱色谱分离， 用石油醚和乙 酸乙酯进行梯度洗脱；石油醚 -乙酸乙酯的体积比依次为 75: 25、 50: 50 - 25: 75、 0: 100;
3) 取步骤 2) 中的石油醚 -乙酸乙酯为 50:50 - 25:75的洗脱部 分， 经 C18反相柱色谱进行分离， 用甲醇 -水进行梯度洗脱， 甲醇-水 的体积比依次为 10: 90、 50: 50 - 75:25、 100: 0; 和
4)取步骤 3)中的曱醇 -水为 50: 50 - 75: 25的洗脱部分用半制备 高效液相色语纯化， 以乙腈 -0.2%乙酸水溶液（ 45: 55 ) 为流动相， C18半制备柱为固定相， 收集 9.2 min的色谱峰部分。
10. 根据第 9方面所述的方法， 其特征在于 （1) - (8) 中的任 一项或者多项：
(1) 步骤 1) 中， 所述有机溶剂为二氯曱烷；
( 2 ) 步骤 1 ) 中， 所述超声提取进行 3次；
( 3) 步骤 1) 中， 通过减压浓缩除去溶剂；
( 4 )步骤 2 )中，石油醚 -乙酸乙酯的体积比依次为 75: 25、 50: 50、 25: 75、 0: 100;
(5) 步骤 3) 中， 取步骤 2) 中的石油醚 -乙酸乙酯为 50: 50或 25: 75的洗脱部分；
(6)步骤 3)中， 曱醇 -水的体积比依次为 10:90、 50: 50、 75:25、 100: 0;
( 7 ) 步骤 4 ) 中， 取步骤 3) 中的曱醇 -水为 50: 50或 75: 25的 洗脱部分； 和
( 8 ) 步骤 4 ) 中， 将收集的 9.2 min的色语峰部分合并。 11. 根据第 7 方面所述的方法， 其中， 所述第 （4) 项中的组合 物还包括药学上可接受的载体或辅料。
12. 如下的 （1) - (4) 中的任一项在制备预防和 /或治疗和 /或 辅助治疗肥胖症或肥胖症相关疾病的药物或者减肥药物中的用途； 具 体地， 所述肥胖症相关疾病为高脂血症、 动脉粥样硬化、 冠心病、 或 糖尿病，
( 1 ) 式 I所示的 盐，
Figure imgf000019_0001
其中，
选自- 0H、 =0、 H、 以及 d_C3烷基；
R2选自- 0H、 H、 以及 d_C3烷基；
R3选自- 0H、 =0、 H、 以及 d_C3烷基；
R4选自- 0H、 H、 以及 d_C3烷基；
并且 、 R2 、 R3 、 和 R4中任意 2个、 3个或 4个同时为 -OH; (2) 式 II所示的 盐，
Figure imgf000019_0002
式 Π;
( 3)提取物， 其含有式 II化合物； 和
(4)组合物， 其含有上述的 （1) - ( 3) 中的任一项。
13. 第 12 方面中所述的 （1) - (4) 中的任一项在制备在体内 或体外抑制脂肪酶的药物或试剂中的用途。
14. 根据第 12或 13方面所述的用途， 其中， 所述第 （3) 项中 的提取物为红曲提取物和 /或红曲醇提物 （例如血脂康胶嚢内容物） 的提取物。
15. 根据第 14方面所述的用途， 其中， 所述第 （3)项中的提取 物， 其为如下的步骤 1 ) 至 2) 中制得的石油醚 -乙酸乙酯为 50: 50 - 25: 75的洗脱部分； 或如下的步骤 1)至 3)中制得的曱醇 -水为 50: 50 - 75: 25的洗脱部分； 或如下的步骤 1)至 4) 中制得的 9.2min的色 谱峰部分：
1)取红曲和 /或红曲的醇提物 （例如血脂康胶嚢内容物干粉） ， 用 2- 6 倍体积的选自二氯曱烷、 乙酸乙酯、 丙酮、 甲醇、 乙醇中的 一种或多种有机溶剂作为溶剂超声提取一次或多次， 每次 20 - 40分 钟， 合并提取液， 除去溶剂， 得到精提物；
2 )将步骤 1 )得到的精提物进行硅胶柱色谱分离， 用石油醚和乙 酸乙酯进行梯度洗脱；石油醚 -乙酸乙酯的体积比依次为 75: 25、 50: 50 - 25: 75、 0: 100;
3) 取步骤 2) 中的石油醚 -乙酸乙酯为 50:50 - 25:75的洗脱部 分， 经 C18反相柱色谱进行分离， 用曱醇 -水进行梯度洗脱， 曱醇-水 的体积比依次为 10: 90、 50: 50 - 75:25、 100: 0; 和
4)取步骤 3)中的曱醇 -水为 50: 50 - 75: 25的洗脱部分用半制备 高效液相色语纯化， 以乙腈 -0.2%乙酸水溶液（ 45: 55 ) 为流动相， C18半制备柱为固定相， 收集 9.2 min的色谱峰部分。
16. 根据第 15 方面所述的用途， 其特征在于 （1) - (8) 中的 任一项或者多项：
(1) 步骤 1) 中， 所述有机溶剂为二氯曱烷；
( 2 ) 步骤 1 ) 中， 所述超声提取进行 3次；
( 3) 步骤 1) 中， 通过减压浓缩除去溶剂；
( 4 )步骤 2 )中，石油醚 -乙酸乙酯的体积比依次为 75: 25、 50: 50、 25: 75、 0: 100;
(5) 步骤 3) 中， 取步骤 2) 中的石油醚 -乙酸乙酯为 50: 50或 25: 75的洗脱部分； (6)步骤 3)中， 曱醇 -水的体积比依次为 10:90、 50: 50、 75:25、 100: 0;
( 7 ) 步骤 4 ) 中， 取步骤 3) 中的曱醇 -水为 50: 50或 75: 25的 洗脱部分； 和
( 8 ) 步骤 4 ) 中， 将收集的 9.2 min的色借峰部分合并。
17. 根据第 12或 13方面所述的用途， 其中， 所述第 （4) 项中 的组合物还包括药学上可接受的载体或辅料。
18. —种在体内或体外抑制脂肪酶的方法， 包括使用有效量的第 I2方面中所述的 （1) - (4) 中的任一项的步骤。
19. 根据第 18方面所述的方法， 其中， 所述第 （3)项中的提取 物为红曲提取物和 /或红曲醇提物 （例如血脂康胶嚢内容物） 的提取 物。
20. 根据第 19方面所述的方法， 其中， 所述第 （3)项中的提取 物， 其为如下的步骤 1 ) 至 2) 中制得的石油醚 -乙酸乙酯为 50: 50 - 25: 75的洗脱部分； 或如下的步骤 1)至 3)中制得的曱醇 -水为 50: 50 - 75: 25的洗脱部分； 或如下的步骤 1)至 4) 中制得的 9.2 min的色 谱峰部分：
1)取红曲和 /或红曲的醇提物 （例如血脂康胶嚢内容物干粉） ， 用 2- 6 倍体积的选自二氯曱烷、 乙酸乙酯、 丙酮、 甲醇、 乙醇中的 一种或多种有机溶剂作为溶剂超声提取一次或多次， 每次 20 - 40分 钟， 合并提取液， 除去溶剂， 得到精提物；
2 )将步骤 1 )得到的精提物进行硅胶柱色谱分离， 用石油醚和乙 酸乙酯进行梯度洗脱；石油醚 -乙酸乙酯的体积比依次为 75: 25、 50: 50 - 25: 75、 0: 100;
3) 取步骤 2) 中的石油醚 -乙酸乙酯为 50:50 - 25:75的洗脱部 分， 经 C18反相柱色谱进行分离， 用曱醇 -水进行梯度洗脱， 曱醇-水 的体积比依次为 10: 90、 50: 50 - 75:25、 100: 0; 和
4)取步骤 3)中的曱醇 -水为 50: 50 - 75: 25的洗脱部分用半制备 高效液相色语纯化， 以乙腈 -0.2%乙酸水溶液（ 45: 55 ) 为流动相， C18半制备柱为固定相， 收集 9.2 min的色谱峰部分。
21. 根据第 20方面所述的方法， 其特征在于 （1) - (8) 中的 任一项或者多项：
(1) 步骤 1) 中， 所述有机溶剂为二氯曱烷；
( 2 ) 步骤 1 ) 中， 所述超声提取进行 3次；
( 3) 步骤 1) 中， 通过减压浓缩除去溶剂；
( 4 )步骤 2 )中，石油醚 -乙酸乙酯的体积比依次为 75: 25、 50: 50、 25: 75、 0: 100;
(5) 步骤 3) 中， 取步骤 2) 中的石油醚 -乙酸乙酯为 50: 50或 25: 75的洗脱部分；
(6)步骤 3)中， 甲醇 -水的体积比依次为 10:90、 50: 50、 75:25、 100: 0;
( 7 ) 步骤 4 ) 中， 取步骤 3) 中的曱醇 -水为 50: 50或 75: 25的 洗脱部分； 和
( 8 ) 步骤 4 ) 中， 将收集的 9.2 min的色语峰部分合并。
22. 根据第 18方面所述的方法， 其中， 所述第 （4)项中的组合 物还包括药学上可接受的载体或辅料。 发明的有益效果
1. 本发明的化合物能够有效地抑制 HMG-CoA还原酶， 具有剂量 依赖性的抑制 HMG-CoA还原酶活性； 具有作为降低或调节血脂或者预 防和 /或治疗血脂异常、 高血脂症、 高胆固醇血症、 或动脉粥样硬化 的药物的潜力。
2. 本发明的化合物能够有效地抑制癌细胞（肿瘤细胞）的增殖， 且抑制作用且呈浓度 -效应关系； 从而具有作为预防和 /或治疗和 /或 辅助治疗癌症的药物的潜力。
3. 本发明的化合物能够有效地抑制脂肪酶的活性， 且抑制作用 且呈浓度 -效应关系； 从而具有作为预防和 /或治疗和 /或辅助治疗肥 胖症或肥胖症相关疾病的药物或者减肥药物的潜力。 附图说明
Fig. 1 式 II化合物对 HCT116细胞生长的抑制作用曲线。
Fig. 2 式 II化合物对 H22细胞生长的抑制作用曲线。
Fig. 3 式 II化合物对 HepG2细胞生长的抑制作用曲线。
Fig. 4 式 II化合物对 S180细胞生长的抑制作用曲线。
Fig. 5 式 II化合物对 YAC-1细胞生长的抑制作用曲线。
Fig. 6 式 II化合物对 THP1细胞生长的抑制作用曲线。
Fig. 7 式 II化合物对 U937细胞生长的抑制作用曲线。
Fig. 8 式 II化合物对 B16-F10细胞生长的抑制作用曲线。
Fig. 9 油酸吸光度工作曲线。 具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述， 但是本领 域技术人员将会理解， 下列实施例仅用于说明本发明， 而不应视为限 定本发明的范围。 实施例中未注明具体条件者， 按照常规条件或制造 商建议的条件进行。 所用试剂或仪器未注明生产厂商者， 均为可以通 过市购获得的常规产品。 实施例 1: 式 II化合物的制备（1)
操作步骤：
1)取血脂康胶嚢 （北大维信生产） 内容物干粉约 1 kg, 用 2- 6 倍体积的二氯甲烷为溶剂超声提取 3次， 每次 20 - 40分钟， 合并提 取液， 减压浓缩并回收溶剂， 得到二氯曱烷精提物 91 g。
2)取二氯曱烷精提物 50 g, 上硅胶柱色谱分离， 用石油醚和乙 酸乙酯进行梯度洗脱。 石油醚 -乙酸乙酯的体积比依次为 75:25， 50: 50， 25: 75， 0: 100。
3)取石油醚 -乙酸乙酯为 25: 75部分 5.0 g， 经 C18反相柱色谱 进行分离， 曱醇-水（ 10: 90-100: 0 )梯度洗脱得到 4 个部分（曱醇- 水 10: 90、 50: 50、 75: 25、 100: 0) ， 其中曱醇-水（ 75: 25 )洗脱 部分 1.3 g用半制备高效液相色谱纯化，以乙腈 -0.2%乙酸水溶液（ 45: 55 ) 为流动相， 流速为 4 mL/min, C18半制备色谱柱（ 10 x 250 mm, 5μπι) 为固定相， DAD检测器检测波长为 270 nm， 收集 9.2 min的色 谱峰， 多次累加后浓缩， 冷冻干燥得该化合物约 40 mg。 实施例 2: 式 II化合物的制备（2)
操作步骤：
1)取红曲 5 kg, 用 2-6 倍体积的二氯曱烷为溶剂超声提取 3 次， 每次 20 - 40分钟， 合并提取液， 减压浓缩并回收溶剂， 得到二 氯曱烷精提物 78 g。
2)取二氯甲烷精提物 30 g， 上硅胶柱色谱分离， 用石油醚和乙 酸乙酯进行梯度洗脱。 石油醚 -乙酸乙酯的体积比依次为 75:25， 50: 50， 25: 75， 0: 100。
3)取石油醚 -乙酸乙酯为 25: 75部分 3.0 g， 经 C18反相柱色谱 进行分离， 曱醇-水（ 10: 90-100: 0 )梯度洗脱得到 4 个部分（曱醇- 水 10: 90、 50: 50、 75: 25、 100: 0) ， 其中曱醇-水（ 75: 25 )洗脱 部分 0.8 g用半制备高效液相色谱纯化，以乙腈 -0.2%乙酸水溶液（ 45: 55) 为流动相， 流速为 4 mL/min, C18半制备色谱柱（ 10 x 250 mm, 5μπι) 为固定相， DAD检测器检测波长为 270 nm， 收集 9.2 min的色 谱峰， 多次累加后浓缩， 冷冻干燥得该化合物约 25 mg。 实施例 3: 式 II化合物的制备（3)
在反应瓶中加入曱苯（ 350 ml )，再加入化合物 A (4.4 g， 9.2 mmol) 和对曱苯磺酸一水合物 （0.59 g, 3.1 mmol )加热至回流并共沸除水 7 h， 反应后降至室温， 减压脱除溶剂， 然后硅胶柱层析纯化， 得粘 稠状的油状化合物， 即式 II化合物。
Figure imgf000025_0001
化合物 A 式 II 实施例 4: 式 II化合物的制备（4 )
在反应瓶中加入吡啶（ 100 ml )，再加入化合物 A (4.4 g， 9.2 mmol) 和 2， 4， 6 -三异丙基磺酰氯（0.93 g， 3.1 mmol)， 在 50°C反应 20 h， 减压脱除溶剂， 然后硅胶柱层析纯化， 得粘稠状的油状化合物， 即式 II
Figure imgf000025_0002
化合物 A 式 II 实施例 5: 化合物的结构鉴定
所用样品为实施例 1、 2、 3、 4制备的化合物。 结果证明实施例 1 - 4制备的化合物相同， 均为式 II化合物。
1. 化合物的理化数据
白色粉末， 旋光度： [a] 25 D -50.00 (c 0.118， CH2C12: MeOH = 1: 1) ;
UV光谱中有三个最大吸收峰，分别为 ax(CH2Cl2: MeOH) = 271.6 nm; 282.2 nm, 293.8 體。
FT-IR ( KBr, cm— 1 )光语： 3392 ( -OH ) , 2969, 2933 (饱和碳氢）， 1652, 1647 ( C=C ) ， 1456， 1378 (偕二曱基） 。
2. 分子式的确定 HR-ESI-MS给出的 »A 483. 3104 [M+Na] + (ca l cd. 483. 3081， err 2. 3)，推断为该化合物的分子量为 460. 32。在 -MR和 13C-NMR显示， 共有 40个氢信号和 28个碳信号。 从 DEPT显示， 有 6个季碳， 10个 CH , 6个 CH2及 6个 CH3。 在 13C-NMR中， 117. 2 ppm, 119. 6 ppm, 139. 1 ppm及 140. 6 ppm 处有 4个烯碳信号。 与 HSQC图与 13C-NMR图结合分 析, 70. 5 ppm, 72. 4 ppm, 74. 5 ppm, 80. 4 ppm, 83. 8 ppm及 84. 4 ppm 处存在与氧原子相连的 6个碳。 结合分子量和 、 13C-NMR及 DEPT信 号图， 如果该化合物拥有 6个氧原子的话分子量超过 460. 32 , 由此推 断该化合物具有 5个氧原子和未体现氢谱信号的 4个氢原子。 从而可 以判断上述 5个氧原子中， 4个氧原子归属为 4个羟基， 另外第 5个 氧原子以醚的形式存在。 根据上述分析， 可以确定该分子中有 28 个 碳原子， 44个氢原子及 5个氧原子， 分子式为 C28H4405。
3. 结构式的确定
分析该化合物的碳语 ( 13C-NMR及 DEPT ) ， 有 28个碳原子， 其中 6个碳为曱基。 基于紫外吸收光语中 271. 6 nm， 282. 2 nm及 293. 8 nm 处的 3个最大吸收与麦角 醇类基本吻合，初步推断该化合物具有麦 角甾醇的骨架。从分子式可以计算得其不饱和度为 7。从而可以推断： 该化合物除了 2个双键和 醇骨架 4个环的 6个不饱和处外， 还有一 个不饱和处而且此处只能是一个环， 由此可以判断该环是由第 5个氧 原子为中心形成的环氧环。 HSQC图与 HMBC相关信号图相结合分析， 与氧原子相连的 6个碳， 分别归属为 4个羟基相连的 4个碳（ 70. 5， 72. 4， 74. 5， 80. 4 ppm )及与剩下一个氧原子相连的 2个碳（83. 8， 84. 4 ppm)。 深入的 HMBC图分析， 可以推断第 5个环体系是由 C-16 (83. 8 ppm) , C-17 (66. 9 ppm) , C-20 (80. 4 ppm)， C-22 (84. 4 ppm)及氧 原子组成的 5元环。 这不但满足不饱和度， 而且还满足与氧原子相连 的碳原子数。 进一步分析质谱分析系统给出的分子量及分子式， 证实 了上述分析。 综合上述分析可推测该新化合物为： 16， 22-环氧麦角甾 -5, 7 -二烯 _3， 20, 23, 25_四醇即 ( 16， 22_epoxy - ergos ta - 5， 7-d ien-3, 20, 23, 25-tet rao l ) 。 结构式为下面的式 I I所示：
Figure imgf000027_0001
式 I I
Figure imgf000027_0002
式 Ι
4. 式 I I化合物的 NMR数据
如下面的表 1所示。
表 1 : 式 I I化合物的 MR数据 （600MHz, CDC13, / in Hz)
'H-NMR, 13C-NMR, HMBC
No. DEPT
(ppm) (ppm) (H→C)
1. 28 (1H， m)
1 38. 4 CH2 ―
1. 90 (1H， m)
1. 48 (1H， m)
2 32. 1 CH2 ―
1. 89 (1H， m)
3 3. 62 (1H， m) 70. 5 CH ―
2. 39 (1H， m)
4 40. 9 CH2 ―
2. 46 (1H， m)
5 ― 140. 6 C ―
6 5. 56 (1H， m) 119. 6 CH 4, 7
7 5. 38 (1H， m) 117. 2 CH ―
8 ― 139. 1 C ―
9 1. 95 (1H， m) 46. 0 CH ― ― 37. 3 C ―
1. 60 (1H， m)
20. 8 CH2 ―
1. 77 (1H， m)
1. 25 (1H， m)
39. 3 CH2 ―
2. 08 (1H, m)
― 43. 0 C
1. 87 (1H， m) 54. 0 CH 13
1. 75 (1H， m)
34. 2 CH2 14
2. 23 (1H， m)
4. 66 (1H， m) 83. 8 CH 13， 14， 15
1. 90 (1H， m) 66. 9 CH 20, 22
1. 12 (3H， s) 14. 6 CH3 27, 12， 13， 14
0. 96 (3H， s) 16. 6 CH3 9, 10, 1
― 80. 4 C ―
1. 43 (3H， s) 27. 8 CH3 20, 22, 24
4. 19 (1H,
84. 4 CH 21, 24, 23, 20 brs)
3. 66 (1H，
brd, / = 9. 0 72. 4 CH 28, 24， 25, 20 Hz)
1. 75 (1H， m) 46. 4 CH 27， 28
― 74. 5 C ―
1. 20 (3H， s) 30. 3 CH3 25, 24
1. 23 (3H， s) 24. 0 CH3 25, 24 . 82 (3H， d, J
14. 0 CH3 23, 25, 24 = 1. 1 Hz)
-" 表示不存在相关信号。 实施例 6: 式 II化合物的四乙酸酯的制备
将 20 mL的乙酸酐中， 化合物 A ( 4.23 g， 9.2 腿 ol ) 和 2滴浓 酸的混合液在水浴上加热至 50°C， 反应 2h。 冷却， 加饱和 NaHC03 水溶液， 用曱苯提取 3 次， 旋蒸有机层得成品， 硅胶柱层析得式 II 化合物的四乙酸酯。 为防止构型反转也可用吡啶催化。 实施例 7: 式 II化合物的四对甲苯磺酯的制备
在干燥的 25 mL烧瓶中， 加入式 II化合物 （ 4.23 g， 9.2 腿 ol ) 与 5 Oml干燥二氯曱烷. 冷却至 0 °C ，投入对曱苯磺酰氯（ 10.56 g， 55.3 mmol) , 在搅拌下滴加三乙胺（ 7· 46 g， 73.6 mmol ) 。 滴加完 毕， 20°C搅拌 l h， 反应混合液水洗（ 50 mLx 3) ， 无水^ I酸钠干燥， 过滤， 蒸干溶剂得到粗品，快速柱层析得到式 II化合物的四对曱苯磺 酯。 实施例 8: 式 II化合物的四（三氟甲磺酸酯）的制备
在搅拌下将式 Π化合物 （ 4.23 g, 9.2 mmol )和吡啶（ 4.36 g， 55.2 mmol )依次加入盛有 50 mL干燥二氯曱烷的烧瓶中， 然后于室 温（ 25°C )緩慢滴加三氟曱磺酸酐（ 12.46 g， 44.2 mmol )， 约 20 min 加完， 反应 2h， 浓缩滤液， 残余物经硅胶柱层析， 分离得式 II化合 物的四（三氟甲磺酸酯）。 实施例 9: 式 II化合物的四（叔丁基二曱基硅醚）的制备
100 mL圓底烧瓶中加入 20 mL THF及 1.26 g矿物油包裹的 NaH (含量 70%， 36.8 mmol) ， 搅拌使 NaH充分分散， 滴加式 II化合物 ( 4.23 g， 9.2 mmol ) 的 THF ( 10 mL) ， 室温下剧烈搅拌反应 1 h。
TBDMS - C1 (叔丁基二曱基氯硅烷） ( 5.53 g, 36.8 mmol)溶于 10 mL THF 中， 搅拌下滴加至上述反应液中， 控制滴速， 使反应温度不致太高， 滴加完毕， 室温下继续搅拌反应 1.5 h。 反应液倒入水中， 用二氯曱 烷提取， 有机相水洗到中性， 饱和盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥。 滤液 浓缩， 柱层析分离， 得式 I I化合物的四（叔丁基二曱基硅醚）。 实验例 1 : HMG-CoA还原酶抑制活性实验
1. 实验材料
1. 1 药品
式 I I化合物 一- 实施例 1 - 4中所制备。
洛伐他汀标准品 一 购于 S igma。
1. 2 酶
大鼠肝脏微粒体 (HMG-CoA 还原酶） —— ， 可以商购， 也可以 参考如下的制备方法： 取出雄性大鼠的肝脏， 用 KESD緩冲液冲洗之 后， 1200g离心 15 min， 取上清液。 再用 105， OOOg离心 90 min两次 之后， 收集离心沉淀。 离心沉淀中加入 8. 3%甘油， 用 37 °C温浴加热 1 h。大鼠肝脏微粒体粗体物用饱和硫酸铵纯化并收集 35-50%纯化部分。 可以将得到的纯化部分存放在 -80°C冰箱中。
1. 3 试剂
氯化鉀、 磷酸二氢鉀、 乙二胺四乙酸、 二硫苏糖醇 -— 购于北 京化学试剂公司；
烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 （NADPH ) ― 购于 Merk;
3-羟基 -3-曱基戊二酰辅酶 A (HMG-CoA ) 购于 S i gma。
2. 实验方法
将式 I I化合物用 75%乙醇溶液溶解， 初浓度为 8. 0 mg/mL并逐级 稀释， 4. 0 mg/mL, 2. 0 mg/mL, 1. 0 mg/mL; 洛伐他汀为阳性对照， 用 75%乙醇溶液溶解， 浓度为 2. 0 mg/mL; 测定体系中总体积为 250 μΐ , 各成分的浓度为： 氯化鉀 200 mM, 磷酸二氢鉀 160 mM， 乙二胺 四乙酸 4 mM, 二¾苏糖醇 10 mM, 两个底物烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 和 3-羟基 -3-甲基戊二酰辅酶 A的浓度分别为 200 μΜ和 50 μΜ, ρΗό. 8， 酶加 30 μΐ, 4个试验组各加 10 不同浓度的新化合物溶液， 阳性 对照组加 10 μΐ洛伐他汀溶液， 空白对照组加 10 L75%乙醇溶液， 在 Versamax 酶标仪上 37 °C条件下检测 0D34。的动态变化。 通过检测 0D34。在 5分钟内下降的快慢（以斜率值表示） ， 来评价 HMG-CoA还原 酶活性的强弱， 进而评价酶抑制剂活性的强弱， 结果见表 2。
3. 实验结果
如下面的表 2所示。
表 2·· 酶抑制剂活性检测结果
Figure imgf000031_0001
* 空白对照为溶剂。
洛伐他汀是阳性对照。
实验结果表明， 本发明的化合物特别是式 II 化合物对 HMG-CoA 还原酶的活性有抑制作用， 且呈浓度 -效应关系。 其 IC5。值约为 250 μ /ωΣ, 表明该化合物对 HMG-CoA还原酶的活性有较好的抑制作用。
进一步的研究发现， 式 II 化合物的酯类衍生物或者醚衍生物， 例如实施例 6- 9制备的 "式 II化合物的四乙酸酯、 式 II化合物的 四对曱苯磺酯、 式 II化合物的四（三氟曱磺酸酯）以及式 II化合物的 四（叔丁基二曱基硅醚）" 也具有类似的抑制 HMG-CoA还原酶的活性。 实验例 2: 式 II化合物的癌细胞抑制实验
1 实验材料
1.1 细胞株
HCT116及 H22 购于 Korean cell line bank, Seoul, Korea; S180, HepG-2, YAC-1, Thpl, U937及 B16-F10 购于中国科学院 典型培养物保藏委员会细胞库。
1.2 药品
实施例 1 - 4制备的新化合物 （式 II化合物） 。
1.3 试剂
MTT为购于 Amresco公司； RPMI1640和双抗购于 Sigma公司； 胎 牛血清 （FBS) 购于美国 Gibco公司； 其它试剂均为国产分析纯。
2 实验方法
取对数生长期的癌细胞， 以 2xl04 个 /孔， 接种于 96孔培养板， 加入药物至药物终浓度为： 500， 250, 125， 62.5， 31.25, 15.625 及 7.8125 g/mL，于 37°C， 5%C02细胞培养箱中培养 72h后加入 MTT 10 μΐ7孔， 于 37" 避光孵育 4 h， 去除培养液， 加入 15G μΐ DMS0或酸 化异丙醇， 振荡 5 min后， 于 570 nm波长测定 0D值。 重复 3次， 设 空白对照。 各种细胞株所用培养基都相同， 均为含 10%胎牛血清和 1% 双抗（青霉素和链霉素） 的 RPMI1640培养基。
计算公式：
细胞存活率 = (实验组 0D值 /对照组 0D值） χ 100%。
实验步骤也可以参考杨秀伟等， 《马钱子生物碱成分的体外抗肿 瘤活性筛选》 ， 中国现代中药， 2006， 8 ( 9) : 11-13。
3 实验结果
3.1式 II化合物的体外抗癌 （结肠癌） 活性
结果如 Fig.1所示。 结果显示， 式 II化合物对人结肠癌细胞株 HCT116的生长有抑制作用， 且呈浓度 -效应关系。 可见， 该化合物具 有防治结肠癌的潜力。
3.2 式 II化合物的体外抗癌 （肝癌） 活性
3.2.1如 Fig.2所示，式 II化合物对小鼠肝癌细胞株 H22的生长 有抑制作用， 且呈浓度 -效应关系。 其 IC5。值约为 50 g/mL， 表明对 小鼠肝癌细胞增殖有良好的抑制作用。
3.2.2如 Fig.3所示，式 II化合物对人肝癌细胞株 HepG2的生长 有抑制作用， 且呈浓度 -效应关系。 其 IC5。值约为 200 g/mL， 表明对 人肝癌细胞增殖有较好的抑制作用。
3.2.3如 Fig.4所示， 式 II化合物对小鼠肉瘤细胞株 S180的生 长有抑制作用， 且呈浓度 -效应关系。
可见， 该化合物具有防治肝癌的潜力。
3.3 式 II化合物的体外抗癌 （淋巴瘤） 活性
3.3.1如 Fig.5所示，式 II化合物对小鼠淋巴瘤细胞 YAC-1的生 长有抑制作用， 且呈浓度 -效应关系。 其 IC5。值约为 62.5 g/mL， 表 明对小鼠淋巴瘤细胞增殖有良好的抑制作用。
3.3.2如 Fig.6所示， 式 II化合物对人单核淋巴瘤细胞 THP1的 生长有抑制作用， 且呈浓度 -效应关系。 其 IC5。值约为 250 g/mL， 表 明对人单核淋巴瘤细胞增殖有较好的抑制作用。 图 6
3.3.3如 Fig.7所示， 式 II化合物对人组织淋巴瘤细胞 U937的 生长有抑制作用， 且呈浓度 -效应关系。 其 IC5。值约为 50 g/mL， 表 明对人组织淋巴瘤细胞增殖有良好的抑制作用。
可见， 该化合物具有防治淋巴癌 （淋巴瘤） 的潜力。
3.4 式 II化合物的体外抗癌 （黑色素瘤） 活性
结果如 Fig.8所示。 结果显示， 式 II化合物对小鼠黑色素瘤细 胞 B16-F10的生长有抑制作用， 且呈浓度 -效应关系。 其 IC5。值约为 62.5 μ /mL,表明对小鼠黑色素瘤细胞增殖有良好的抑制作用。可见， 该化合物具有防治黑色素瘤的潜力。
综上可见， 本发明的化合物特别是式 II化合物对多种肿瘤细胞 具有有效的抑制作用， 具有预防和 /或治疗和 /或辅助治疗癌症的药物 的潜力。
进一步的研究发现， 式 II 化合物的酯类衍生物或者醚衍生物， 例如实施例 6- 9制备的 "式 II化合物的四乙酸酯、 式 II化合物的 四对曱苯磺酯、 式 II化合物的四（三氟曱磺酸酯）以及式 II化合物的 四（叔丁基二曱基硅醚）" 也具有类似的抑制肿瘤细胞的活性， 具有预 防和 /或治疗和 /或辅助治疗癌症的药物的潜力。 实验例 3: 脂肪酶抑制活性实验
1 实验材料
1.1 药品
式 II化合物。
奥利司他 (orlistat)― 购自金象大药房。
1.2 酶
猪胰脂肪酶 -— 购自 Sigma公司。
1.3 试剂
油酸 一 购自 Sigma公司。
曱苯、 橄榄油、 吡啶、 醋酸铜、 NaH2P04、 K2HP04 均为国产分析纯。
2 实验方法
如下面的步骤所示， 也可以参考江慧芳， 王雅琴， 刘春国. 三种 脂肪酶活力测定方法的比较及改进. 化学与生物工程. 2007， 24 (8): 72-75; 和朱晓青， 吕敬慈， 霍世欣等. 荷叶生物碱对脂肪酶 的抑制作用. 上海大学学报（自然科学版） ， 2007， 13 (1):85-87。
2.1脂肪酸吸光度工作曲线的绘制：配制一系列不同浓度的油酸- 曱苯溶液（ 0-3.5 mmol/L, 分别为 0、 0.225、 0.45、 0.675、 0.9、 1.125、 1.35、 1.8、 2.25、 2.7、 和 3.5 mmol/L) ， 分别取 4 mL于锥形瓶中， 加入 l mL显色剂， 磁力搅拌 3min， 油酸分子与铜离子生成绿色的络 合物， 离心后取上层有机相在 714 nm处测定吸光度。
2.2 酶溶液为 0.5 mg/mL 胰脂肪酶溶液； 緩沖液为 0.07M NaH2P0-K2HP04磷酸盐緩冲溶液（ pH 7.0 )； 显色剂为 5%醋酸铜溶液， 用吡啶调节 pH 6.1。
2.3 脂肪酶活力的测定：
取 3 mL 0.07 M磷酸盐緩冲液和 1 mL橄榄油， 放入水浴恒温磁 力搅拌器 37°C中预热 5 min, 加入 1.3 mL酶液（不加酶抑制剂为阴 性对照； 加 0.1 mg/mL奥利司他溶液 100 为阳性对照； 0.6、 0.9、 1.1、 1.3、 1.8 mg/mL式 II化合物溶液各加 100 μΐθ ， 磁力搅拌 10 min, 立即加入 8mL 曱苯， 继续搅拌 2 min， 终止反应， 同时萃取生 成的油酸。 将溶液转移至离心管中， 在 4000 rpm下离心 10 min， 有 机相和水相分层澄清。 取上层有机相 4 mL于小锥形瓶中， 加入 1 mL 显色剂， 在磁力搅拌器上搅拌 3 min, 产生的油酸与铜离子生成绿色 络合物。 4000 rpm 离心 10 min， 取上层含有油酸铜的曱苯溶液， 用 分光光度计在 714 nm波长处测其吸光度。 以相同方法制备不含脂肪 酶的空白溶液为参比， 对照油酸吸光度工作曲线， 即可求得脂肪酸的 浓度。
3 酶活定义和计算公式
脂肪酶酶活力单位定义为： 在一定条件下， 每分钟释放出 Ι μιηο ΐ 脂肪酸的酶量定义为 1个脂肪酶活力单位（U ) 。
按下式计算酶活： X = (cV) / (tV)
式中： X为脂肪酶活力, U/mL; c为脂肪酸浓度， μπιο Ι /mL; V为 脂肪酸溶液的体积， mL; V，为酶液的用量， mL; t为作用时间， min。
抑制率 = [ (脂肪酶活力 -抑制后脂肪酶活力） I 脂肪酶活力] X 100%
4 实验结果
4. 1 油酸吸光度工作曲线
如 F i g. 9所示。
4. 2酶抑制剂活性检测结果
如下面的表 3所示。
表 3: 酶抑制剂活性检测结果
抑制剂浓 抑制剂体 产生油
样品 酶活 抑制率 度 系终浓度 吸光值 酸浓度
名称 U/mL ( % )
(mg/mL) ( g/mU (mM)
空白
― ― 0. 6680 2. 75 1. 69 ― 对照
奥利
0. 1 1. 85 0. 2042 0. 81 0. 50 69. 84% 司他
式 I I 6 111 0. 5665 2. 32 1. 43 15. 38% 化合 9 166 0. 5035 2. 06 1. 27 24. 85% 物 11 203 0. 3998 1. 63 1. 00 40. 83%
13 240 0. 2743 1. 10 0. 68 59. 76%
18 333 0. 2611 1. 04 0. 64 62. 13% 其中酶活按照上面 3中的计算公式计算得到， 其中：
V = 8 mL; V = 1. 3 mL; t = 10 min。
实验结果表明， 本发明的化合物特别是式 I I化合物对脂肪酶的 活性具有较好的抑制作用， 其 IC5。值约为 220 μ8 , 并且抑制作用 呈浓度 -效应关系。 可见， 本发明的化合物具有预防和 /或治疗和 /或 辅助治疗肥胖症或肥胖症相关疾病的药物的潜力。
进一步的研究发现， 式 I I 化合物的酯类衍生物或者醚衍生物， 例如实施例 6 - 9制备的 "式 I I化合物的四乙酸酯、 式 I I化合物的 四对曱苯磺酯、 式 I I化合物的四（三氟曱磺酸酯）以及式 I I化合物的 四（叔丁基二曱基硅醚）" 也具有类似的抑制脂肪酶的活性， 具有预防 和 /或治疗和 /或辅助治疗肥胖症或肥胖症相关疾病的药物的潜力。
尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述， 本领域技术人 员将会理解。 根据已经公开的所有教导， 可以对那些细节进行各种修 改和替换， 这些改变均在本发明的保护范围之内。 本发明的全部范围 由所附权利要求及其任何等同物给出。

Claims

权 利 要 求
1. 式 I所示的 的盐、 酯或醚:
Figure imgf000037_0001
其中，
选自- 0H、 =0、 H、 以及 d_C3烷基；
R2选自- 0H、 H、 以及 d_C3烷基；
R3选自- 0H、 =0、 H、 以及 d_C3烷基；
R4选自- 0H、 H、 以及 d_C3烷基；
并且 Ri、 R2、 R3、 和 R4中任意的 0个、 1个、 2个、 3个或 4个为
-0H。
2. 根据权利要求 1所述的化合物或其药学上可接受的盐、酯 或醚， 其为下面的式 I I 所示的化合物， 或其药学上可接受的盐、 酯 或醚:
Figure imgf000037_0002
式 Π ;
具体地， 所述酯选自曱酸酯、 醋酸酯、 丙酸酯、 对甲苯磺酯和三 氟曱磺酸酯； 所述醚为叔丁基二曱基硅醚； 更具体地， 所述酯或醚为 式 I I化合物的四乙酸酯、 式 I I化合物的四对曱苯磺酯、 式 I I化合 物的四（三氟甲磺酸酯）或式 I I化合物的四（叔丁基二曱基硅醚）。
3. 权利要求 2所述的化合物的制备方法， 包括下述步骤： 1 )取红曲和 /或红曲的醇提物 （例如血脂康胶嚢内容物） ， 用 2 - 6倍体积的选自二氯曱烷、 乙酸乙酯、 丙酮、 曱醇、 乙醇中的一种 或多种有机溶剂作为溶剂超声提取一次或多次， 每次 20 - 40分钟， 合并提取液， 除去溶剂， 得到精提物；
2 )将步骤 1 )得到的精提物进行硅胶柱色谱分离， 用石油醚和乙 酸乙酯进行梯度洗脱；石油醚 -乙酸乙酯的体积比依次为 75: 25、 50: 50 - 25: 75、 0: 100;
3)取步骤 2)中的石油醚 -乙酸乙酯为 50:50 - 25:75的洗脱部分， 经 C18反相柱色谱进行分离， 用曱醇 -水进行梯度洗脱， 曱醇-水的体 积比依次为 10: 90、 50:50 - 75:25、 100: 0;
4)取步骤 3)中的曱醇 -水为 50: 50 - 75: 25的洗脱部分用半制备 高效液相色谱纯化， 以 45: 55的乙腈 -0.2%乙酸水溶液为流动相， C18 半制备柱为固定相， 收集 9.2 min的色谱峰部分； 和
5)将步骤 4) 的产物进行冷冻干燥， 得到式 II化合物。
4. 根据权利要求 3所述的制备方法， 其满足如下的 （1) - (9) 中的任一项或者多项：
(1) 步骤 1) 中， 所述有机溶剂为二氯曱烷；
( 2 ) 步骤 1 ) 中， 所述超声提取进行 3次；
(3) 步骤 1) 中， 通过减压浓缩除去溶剂；
( 4 )步骤 2 )中，石油醚 -乙酸乙酯的体积比依次为 75: 25、 50: 50、 25: 75、 0: 100;
(5) 步骤 3) 中， 取步骤 2) 中的石油醚 -乙酸乙酯为 50: 50或 25: 75的洗脱部分；
(6)步骤 3)中， 曱醇 -水的体积比依次为 10:90、 50:50、 75:25、 100: 0;
( 7 ) 步骤 4 ) 中， 取步骤 3) 中的曱醇 -水为 50: 50或 75: 25的 洗脱部分；
( 8 ) 步骤 4 ) 中， 将收集的 9.2 min的色语峰部分合并； 和
(9) 步骤 5) 中， 冷冻干燥的条件是： 冷阱温度 -40 至 -85°C， 真空度 0 - 100 Pa; 优选为冷阱温度 -50至 -82.7°C，真空度 2 - 13 Pa; 更优选为冷阱温度 -82.7°C， 真空度 2 Pa, 或冷阱温度 _50°C，真空度
8.5 Pa。
5. 权利要求 2所述的化合物的制备方法， 包括下述步骤： 以六羟基麦角甾醇为底物， 如（3， 16， 20， 22， 23， 25-六羟基麦角 甾醇， 简称为化合物 A) ， 在曱苯磺酸一水合物或 2,4,6-三异丙基 磺酰
Figure imgf000039_0001
化合物 A 式 II
6. 一种提取物， 其含有权利要求 2所述的式 II化合物； 具 体地， 其为血脂康胶嚢内容物干粉的提取物或者红曲的提取物。
7. 根据权利要求 6所述的提取物， 其中式 II化合物的含量 为 0.0001 - 5% (w/w) 、 0.001— 2% ( w/w )或 0.001 - 1% (w/w) 。
8. 根据权利要求 6或 7所述的提取物， 其为如下的 （ 1 ) 至 ( 3) 中的任一项：
(1)权利要求 3中的步骤 1) 至 2) 中制得的石油醚-乙酸乙酯 为 50: 50 - 25: 75的洗脱部分；
(2)权利要求 3 中的步骤 1) 至 3) 中制得的曱醇 -水为 50: 50 - 75: 25的洗脱部分； 和
( 3)权利要求 3中的步骤 1 )至 4) 中制得的 9.2 min的色谱峰 部分。
9. 一种组合物， 其包含权利要求 1或 2所述的化合物、 和 / 或权利要求 6至 8中任一项所述的提取物； 可选地， 还包括药学上可 接受的载体或辅料。
10. 权利要求 1或 2所述的化合物或者权利要求 6至 8中任 一项所述的提取物或者权利要求 9所述的组合物在制备降低血脂或调 节血脂或者预防和 /或治疗血脂异常、 高血脂症、 高胆固醇血症、 或 动脉粥样硬化的药物中的用途。
11. 权利要求 1或 2所述的化合物或者权利要求 6至 8中任一项 所述的提取物或者权利要求 9所述的组合物在制备 HMG-CoA还原酶抑 制剂中的用途。
12. 一种在体内或体外抑制 HMG-CoA还原酶的方法， 包括使用 有效量的权利要求 1或 2所述的化合物或者权利要求 6至 8中任一项所 述的提取物或者权利要求 9所述的组合物的步骤。
13. 一种降低血脂或调节血脂或者预防和 /或治疗血脂异常、 高血脂症、 高胆固醇血症、 或动脉粥样硬化的方法， 包括使用有效量 的权利要求 1或 2所述的化合物或者权利要求 6至 8中任一项所述的提 取物或者权利要求 9所述的组合物的步骤。
14. 权利要求 1或 2所述的化合物或者权利要求 6至 8中任 一项所述的提取物或者权利要求 9 所述的组合物在制备预防和 /或治 疗和 /或辅助治疗癌症的药物中的用途； 具体地， 所述癌症为结肠癌、 肝癌、 淋巴癌、 或黑色素瘤。
15. 权利要求 1或 2所述的化合物或者权利要求 6至 8中任一项 肿瘤细胞的药物或者试剂中的用途； 具体地， 所述肿瘤细胞为结肠癌 细胞、 肝癌细胞、 淋巴癌细胞或黑色素瘤细胞。
16. 一种在体内或体外抑制肿瘤细胞的方法， 包括使用有效 量的权利要求 1或 2所述的化合物或者权利要求 6至 8中任一项所述的 提取物或者权利要求 9所述的组合物的步骤； 具体地， 所述肿瘤细胞 为结肠癌细胞、 肝癌细胞、 淋巴癌细胞或黑色素瘤细胞。
17. 一种预防和 /或治疗和 /或辅助治疗癌症的方法， 包括使 用有效量的权利要求 1或 2所述的化合物或者权利要求 6至 8中任一项 所述的提取物或者权利要求 9所述的组合物的步骤； 具体地， 所述癌 症为结肠癌、 肝癌、 淋巴癌、 或黑色素瘤。
18. 权利要求 1或 2所述的化合物或者权利要求 6至 8中任一项 所述的提取物或者权利要求 9所述的组合物在制备预防和 /或治疗和 / 或辅助治疗肥胖症或肥胖症相关疾病的药物或者减肥药物中的用途； 具体地， 所述肥胖症相关疾病为高脂血症、 动脉粥样硬化、 冠心病、 或糖尿病。
19. 权利要求 1或 2所述的化合物或者权利要求 6至 8中任一项 脂肪酶的药物或试剂中的用途。
20. 一种在体内或体外抑制脂肪酶的方法， 包括使用有效量 的权利要求 1或 2所述的化合物或者权利要求 6至 8中任一项所述的提 取物或者权利要求 9所述的组合物的步骤。
21. 一种预防和 /或治疗和 /或辅助治疗肥胖症或肥胖症相关 疾病或者减肥的方法， 包括使用有效量的权利要求 1或 2所述的化合物 或者权利要求 6至 8中任一项所述的提取物或者权利要求 9所述的组合 物的步骤； 具体地， 所述肥胖症相关疾病为高脂血症、动脉粥样硬化、 冠心病、 或糖尿病。
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