WO2013077617A1 - 면역억제제 및 트랜스글루타미나제 ２ 억제제를 포함하는 아토피 피부염의 예방, 치료 또는 개선용 조성물 - Google Patents

면역억제제 및 트랜스글루타미나제 ２ 억제제를 포함하는 아토피 피부염의 예방, 치료 또는 개선용 조성물 Download PDF

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    • C12Y203/00—Acyltransferases (2.3)
    • C12Y203/02—Aminoacyltransferases (2.3.2)
    • C12Y203/02013—Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase (2.3.2.13), i.e. transglutaminase or factor XIII

Definitions

  • the present invention relates to a composition for preventing, treating or improving atopic dermatitis comprising an immunosuppressive agent and a transglutaminase 2 inhibitor as an active ingredient.
  • Atopic dematitis is a common skin disorder with unexplained strong pruritus, combined with dry skin, erythema and inflammation (Lancet. 1998; 351: 1715-1721).
  • Atopic dermatitis is a chronic disease that causes great discomfort in long-term life, mainly in infants and young children. It occurs in 10 to 15% of all infants and infants, with the incidence in the atopy group being 60% in infants less than 1 year and 85% in infants less than 5 years (Lancet. 1998; 351: 1715-1721). 40% of children with atopic dermatitis have improved gradually with growth, but the incidence of adults is about 1 to 3% of all adults due to pollution and environmental pollution caused by rapid industrialization (Immunol.
  • atopic dermatitis may vary from person to person, but the most common symptoms are first, severe itching, second, the patient's skin remains dry, and third, dry skin. Due to the loss of the defense function of the skin surface, it is easy to invade the skin of irritants from the outside, and the invasion causes the skin to reject the inflammatory reaction (Lancet. 1998; 351: 1715-1721, J. Pediatr). Health Care. 2002; 16; 143-145.
  • Atopic dermatitis treatments that have been developed to date include steroids, tacrolimus, topical anti-inflammatory agents such as pimecrolimus, antihistamines and immunosuppressive agents such as cyclosporin.
  • topical anti-inflammatory agents such as pimecrolimus
  • antihistamines and immunosuppressive agents
  • cyclosporin a topical anti-inflammatory agent
  • hypotensive moisturizers and photochemotherapy with ultraviolet rays A have been used as clinical supplements.
  • these therapies or therapies help to control the symptoms to an appropriate level rather than the underlying treatment, and so far do not fully meet the needs of patients with atopic dermatitis.
  • glucosamine as an active ingredient, a transglutaminase inhibitor, which is a commercially available natural substance that has been recognized for its safety (Korean Patent Publication No. 2008-0035997). number).
  • glucosamine was only effective in some subjects, and was poor in patients with severe atopic dermatitis.
  • immunosuppressive agents such as cyclosporin have been used in patients with severe atopic dermatitis who do not know the existing treatments.
  • immunosuppressive agents are excellent, they have disadvantages such as renal toxicity, gingival thickening, hirsutism, neurotoxicity, hypertension, hyperlipidemia, hyperglycemia, hyperkalemia, hyperuricemia, hemolytic uremic syndrome, and infection.
  • disadvantages such as renal toxicity, gingival thickening, hirsutism, neurotoxicity, hypertension, hyperlipidemia, hyperglycemia, hyperkalemia, hyperuricemia, hemolytic uremic syndrome, and infection.
  • the immunosuppressive agent has a problem of reducing to the original state when the administration is stopped.
  • the present inventors have solved the above problems, while reducing the side effects of immunosuppressive agents that can cause side effects when overdose, while trying to develop a high therapeutic effect of atopic dermatitis, including a transglutaminase 2 inhibitor
  • the therapeutic effect of atopic dermatitis while reducing the dosage of the immunosuppressive agent, was confirmed to be higher than that when the immunosuppressive agent was administered alone, thereby completing the present invention.
  • An object of the present invention is to improve the atopic dermatitis and pharmaceutical composition for treating atopic dermatitis comprising an immunosuppressant and a transglutaminase 2 inhibitor as an active ingredient that can show an excellent therapeutic effect over the immunosuppressant even if the dose of the immunosuppressant is reduced It is to provide a cosmetic composition for.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating atopic dermatitis comprising an immunosuppressant and a transglutaminase 2 inhibitor as an active ingredient.
  • the present invention provides a cosmetic composition for improving atopic dermatitis comprising an immunosuppressant and a transglutaminase 2 inhibitor as an active ingredient.
  • Concomitant administration of the immunosuppressive agent and the transglutaminase 2 inhibitor according to the present invention reduces the dose of the immunosuppressive agent which is difficult to prolong the long-term administration due to side effects, and tends to worsen the lesions at the time of discontinuation, and the immunosuppressant or transglutata It may show a much higher atopic treatment or improvement effect than administration of the minaze 2 inhibitor alone.
  • Figure 1 shows the results obtained by comparing the clinical skin score after measuring glucosamine (500 mg / kg / day) and tacrolimus (FK-506) (1.0 mg / kg / day) alone or in combination It is also.
  • FIG. 2 shows clinical changes in skin lesions in atopy-induced NC / Nga mice after glucosamine (500 mg / kg / day) and tacrolimus (FK-506) (1.0 mg / kg / day) alone or in combination. The figure which showed the result confirmed.
  • Figure 3 shows the results of comparing the clinical skin score after cyclosporin (CsA) (10, 45, 100 mg / kg / day) and glucosamine (100, 500 mg / kg / day) alone or in combination, It is also.
  • CsA cyclosporin
  • glucosamine 100, 500 mg / kg / day
  • FIG. 4 is a diagram showing the results obtained by comparing glucosamine with a fixed dose of 500 mg / kg / day, and a single or combined administration of cyclosporin (CsA), followed by clinical skin scores.
  • CsA cyclosporin
  • FIG. 5 to 8 shows tacrolimus (FK-506) 1.0 mg / kg / day and glucosamine 500 mg / kg / day alone or in combination, IL-5 (FIG. 5), IL-13 (FIG. 6), TARC Fig. 7 shows the results of comparing expression of eotaxin (eotaxin) (Fig. 8).
  • FIG. 9 shows cyclosporin (CsA) (2, 5, 10 mg / kg / day) and glucosamine (500 mg / kg / day) alone or in combination, IL-5, IL-13, eotaxin, TARC And a result of comparing the reduction effect of TSLP.
  • CsA cyclosporin
  • glucosamine 500 mg / kg / day
  • FIG. 10 is a diagram showing the inhibitory effect of CLA + and CD3 + T cells when tacrolimus (FK-506) (1.0 mg / kg / day) and glucosamine (500 mg / kg / day) alone or in combination.
  • tacrolimus FK-506
  • glucosamine 500 mg / kg / day
  • FIG. 11 is a diagram showing the effect of reducing the number of CD4 + CD25 + regulatory T cells when alone or in combination with low dose cyclosporin (CsA) (2, 5, 10 mg / kg / day) and glucosamine (500 mg / kg / day) to be.
  • CsA cyclosporin
  • glucosamine 500 mg / kg / day
  • 12 and 13 show the inhibitory effect of the proliferation and activity of mast cells and eosinophils when tacrolimus (FK-506) (1.0 mg / kg / day) and glucosamine (500 mg / kg / day) alone or in combination It is also.
  • Figure 14 is a diagram showing the results of comparing the number of mast cells and eosinophils infiltrated skin lesions when cyclosporin (CsA) (10mg / kg / day) low dose and glucosamine (500mg / kg / day) alone or in combination administration.
  • CsA cyclosporin
  • 15 is a diagram showing the effect of reducing serum IgE by administration of taclolimus (FK-506) and glucosamine in combination.
  • FIG. 16 is a diagram showing the change of Involucrin and filaggrin expression by the combination of cyclosporin (CsA) and glucosamine.
  • 17 is a diagram showing the SCORAD index measured every time the dosage method is changed while repeating the method of administering glucosamine alone and the composition of cyclosporin and glucosamine to atopic dermatitis patients.
  • 18 is a diagram showing the SCORAD index measured every time the dosing method is changed, with the combination of cyclosporin and glucosamine in combination alone or in combination alone (upper: results of all 10 patients, lower left: combination first Results of 5 people, right below: Results of 5 people who performed the combination later).
  • Fig. 19 shows the average SCORAD change (lower left) in five patients (DRUG1) who performed the combination first and the average SCORAD change (lower right) in the first five patients (DRUG0). This is a diagram showing the comparison of the average line with the results of all patients.
  • FIG. 20 shows the results of calculating the objective functional values (OFV) when glucosamine is used in combination with cyclosporin and when cyclosporin alone is administered.
  • OFV objective functional values
  • Figure 21 is a diagram showing the results of the patient's affected by the designated time after cyclosporine and glucosamine in combination.
  • Fig. 22 shows the results of analyzing the expression levels of cytokines (IL-4, IL-5, IFN- ⁇ , IFN- ⁇ ) after co-administration of cyclosporin and glucosamine (jasmine).
  • Fig. 23 shows the average value of changes in the amount of IL-4 expression when cyclosporine alone is administered and cyclosporine and glucosamine are coadministered.
  • FIG. 24 to 26 show IFN-g (FIG. 24), IL-4 (FIG. 25), and IL-inhibitory effects when the immunosuppressive agent tacrolimus (FK-506), cyclosporin, glucosamine, and dexamethasone were administered alone.
  • -5 is a diagram showing the results confirmed through the change of (Fig. 26).
  • the present invention relates to a composition for preventing, treating or improving atopic dermatitis, comprising an immunosuppressive agent and a transglutaminase 2 inhibitor as an active ingredient.
  • the composition includes a pharmaceutical composition and a cosmetic composition.
  • Concomitant administration of the immunosuppressive agent and the transglutaminase 2 inhibitor of the present invention effectively reduces the secretion of inflammatory cytokines in atopic dermatitis patients, and atopic dermatitis even with an amount of immunosuppressant much less than an effective amount for treating atopic dermatitis.
  • the effect of treatment can be confirmed, reducing the side effects of immunosuppressants.
  • immunosuppressant refers to a drug that inhibits an immune response of a living body.
  • the immunosuppressive agents include glucocorticoid, cyclosporine, tacrolimus (FK506), pimecrolimus, ISA (TX) 247, calcineurin inhibitor, rapamycin (Rapamycin) , Type IV PDE inhibitors, Mycophenolate Mofetil, dexamethasone and the like can be exemplified, but not limited thereto, and all known immunosuppressive agents can be used.
  • one type of immunosuppressant may be used alone, or two or more types of immunosuppressants may be used in combination.
  • the immunosuppressive agent is one selected from the group consisting of cyclosporine, tacrolimus, dexamethasone, and pimecrolimus. The above can be utilized.
  • the "transglutaminase 2 (TG2) inhibitor” includes both an activity inhibitor of TG2 or an inhibitor of expression of TG2.
  • TG2 is an enzyme (Methods in Enzymol. 1985; 113: 358-375) that catalyzes the binding of epsilon gamma glutamilysine ( ⁇ - ⁇ -glutamyl-lysine) to glutamine and lysine groups of different proteins. It is considered an important factor in healing tissues (FASEB J. 1999; 13: 1787-1795). However, abnormally activated TG2 contributes to the development of various diseases such as brain disease, arteriosclerosis, inflammatory disease, autoimmune disease and fibrosis (Neurochem. Int. 2002; 40: 85-103).
  • the inhibitor of activity of TG2 in the present invention may preferably be an anti-TG2 antibody capable of neutralizing the activity of TG2.
  • the anti-TG2 antibody may be a polyclonal antibody or a monoclonal antibody.
  • Antibodies of the invention can be prepared by conventional methods well known in the art of immunology using TG2 protein as an antigen.
  • Another inhibitor of TG2 activity is a compound that inhibits TG2 activity, such as cystamine, putrescine, monodansylcadaverine, w-dibenzylaminoacylamine ( w-dibenzylaminoalkylamine), 3-halo-4,5-dihydroisoxazole, 3-[(2-oxopropyl) thio] imidazolium derivative (2-[(2 -oxopropyl) thio] imidazolium derivatives).
  • epicalocatechin gallate or chlorogenic acid may be used.
  • “Inhibition of expression of the TG2 gene” of the present invention includes inhibition of gene transcription and translation into a protein and includes not only the complete stop of gene expression but also the decreased expression.
  • Antisense molecules are most commonly used as a method of inhibiting gene expression. Antisense molecules inhibit the expression of target genes by inhibiting transcriptional initiation by triple chain formation, transcriptional inhibition by hybridization at sites where local open loop structure is formed by RNA polymerase, and in RNA where synthesis is in progress.
  • Inhibition of transcription by hybrid formation inhibition of splicing by hybridization at the junction of introns and exons, inhibition of splicing by hybridization at the site of splicosomal formation, transition from nucleus to cytoplasm by hybridization with mRNA Inhibition of translation initiation by hybridization at the site of translation initiation factor binding. They inhibit the expression of target genes by inhibiting transcription, splicing or translation processes.
  • the antisense molecule used in the present invention may inhibit the expression of the target gene by any of the above actions, and representative antisense molecules may include triple agents, ribozymes, RNAi, antisense nucleic acids, and the like.
  • Glucosamine may be used as a preferred example of the TG2 inhibitor.
  • "Glucosamine” is a breakdown product of chitosan, a major component of sea crab and shrimp shells. The main components of sea crab or shrimp shell are chitin and chitosan, chitin is composed of 2-acetamido-2-deoxy-beta-D-glucose (N-acetylglucosamine), and chitosan is a polysaccharide that has undergone deacetylation of chitin. Poly (beta- (1,4) -glucosamine). Glucosamine has the structure of Formula 1 below.
  • glucosamine derivative may be used instead of glucosamine.
  • glucosamine derivative refers to a hydrogen having a hydroxy group of glucosamine substituted with an acyl or alkyl compound, and having a structure of Formula 2 below.
  • R is an acyl group having 2 to 18 carbon atoms or straight or branched chain alkyl having 1 to 5, preferably acetyl propionyl, butyryl, pentanoyl, hexanoyl, heptanoyl, octanoyl, nonanoyl, Acyl groups such as decanoyl, undecanoyl, lauryl, tridecanoyl, myristyl, pentadecanoyl, palmitoyl, margaryl or stearyl groups, or methyl, ethyl, propyl, butyl, pentyl, isopropyl, It may be an alkyl group such as isobutyl or sec-butyl group.
  • glucosamine or derivatives thereof used in the present invention may be included in the pharmaceutical composition of the present invention in the form of a pharmaceutically acceptable salt according to the use thereof.
  • Such salt forms include, but are not limited to, for example, sulfates of glucosamine or glucosamine derivatives, hydrochlorides of glucosamine or glucosamine derivatives, maleates of glucosamine or glucosamine derivatives, and the like.
  • Preferred salt forms are sulfates of glucosamine or glucosamine derivatives.
  • the cyclosporin and the transglutaminase 2 inhibitor are preferably contained in a weight ratio of 1.8 to 2000, and the tacrolimus and the transglutaminase 2 inhibitor are contained in a weight ratio of 1 to 18 to 2000. desirable.
  • the more severe the severity of atopic dermatitis the higher the content of the immunosuppressive agent, and the lower the severity by treatment, it is preferable to reduce the content of the immunosuppressive agent.
  • compositions of the present invention can be used in the form of powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols and the like, oral formulations, sterile injectable solutions, suppositories, and transdermal formulations according to conventional methods.
  • Carriers, excipients and diluents that may be included in the composition include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, Microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil. If necessary, it is formulated with diluents or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, surfactants and the like.
  • composition of the present invention is preferably formulated into a solid preparation for oral administration.
  • Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, which include at least one excipient such as starch, calcium carbonate, sucrose or lactose, gelatin and the like in the active ingredient. Formulated by mixing. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate, talc can also be used.
  • composition of the present invention is preferably formulated into a liquid formulation for oral administration.
  • Liquid preparations for oral administration include suspensions, solutions, emulsions, syrups, and the like.
  • conventional inert diluents e.g., purified water, ethanol, liquid paraffin
  • various excipients may be used.
  • Wetting agents, sweetening agents, fragrances, preservatives and the like can be included.
  • compositions of the present invention may be formulated into a preparation for parenteral administration.
  • Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, suppositories.
  • suitable buffering solutions such as Hanks' solution, Ringer's solution, or physically buffered saline can be used.
  • Non-aqueous solvents and suspending agents include propylene glycol, polyethylene glycol, olive oil, Same vegetable oils, injectable esters such as ethyloleate, and the like can be used.
  • preservatives such as sodium citrate, sodium tartrate, sodium tartrate, sodium tartrate, sodium tartrate, sodium tartrate, sodium tartrate, sodium tartrate, sodium tartrate, sodium tartrate, sodium tartrate, sodium tartrate, sodium tartrate, sodium tartrate, sodium tartrate, sodium tartrate, sodium tartrate, sodium tartrate, sodium tartrate, sodium tartrate, sodium tartrate, sodium tartrate, sodium tartrate, sodium tartrate, sodium tartrate, sodium tartrate, sodium tartrate, sodium bicarbonate, sodium bicarbonate, sodium steaditol, sodium steatol, sodium stearate, sodium bicarbonate, sodium stearate, sodium bicarbonate, sodium stearate, sodium stearate, sodium stearate, sodium stearate, sodium stearate, sodium stearate, sodium stearate, sodium stearate, sodium stearate, sodium stearate, sodium stearate, sodium stearate, sodium stearate, sodium stearate, sodium stea
  • the total daily usage of the compositions of the present invention can be determined by treatment within the medical judgment.
  • the specific therapeutically effective amount for a particular patient depends on the type and severity of the reactions to be achieved, whether other agents are used in some cases, the age, body weight, general health, sex, diet, time of administration, route of administration, composition of the patient. It is desirable to apply differently depending on various factors including secretion rate, duration of treatment, and similar factors well known in the medical field.
  • cyclosporin may be mixed with glucosamine at 0.025 mg / kg or more and 2.9 mg / kg or less, and tacrolimus may be mixed with glucosamine at 0.0025 mg / kg or more and 0.29 mg / kg or less.
  • tacrolimus may be mixed with glucosamine at 0.0025 mg / kg or more and 0.29 mg / kg or less.
  • glucosamine may be mixed and administered at a dose of 5 mg / kg or more and 50 mg / kg or less, and the number of doses may be taken once or three times a day depending on the patient's skin condition.
  • cyclosporin may be mixed up to 5 mg / kg, depending on the condition of the skin lesion.
  • composition according to the present invention may be formulated as an external preparation for skin or cosmetic preparations.
  • the external preparation for the skin may include an ointment, a warning agent, a spray, a suspension, an emulsion, a cream, a gel, and the like.
  • the cyclosporin and the transglutaminase 2 inhibitor are preferably contained in a weight ratio of 1.8 to 2000, and the tacrolimus and the transglutaminase 2 inhibitor are preferably contained in a weight ratio of 1 to 18 to 20000. .
  • the immunosuppressant and the transglutaminase 2 inhibitor are preferably included in an amount of 0.001 to 5% by weight based on the total dry weight of the cosmetic composition.
  • the cosmetic composition of the present invention in addition to the above-mentioned active ingredient, various components generally used in the external preparation for skin within the range of not lowering the effect of the present invention, if necessary, for example, water-soluble components, powder components, oil, surfactants, It is possible to mix
  • vitamin A derivatives such as moisturizers such as ceramides or lipids, hydrocortisone, steroids such as ceramides, retinyl palmitate or retinyl palmitate, which have been widely used in conventional atopic skin treatments, or / And tocopherol (Tocopherol), and other plant extracts can be used in combination with N-stearoyl-phytosphingosine in the form of liposomes (liposome) using a known lecithin or (Nstearoyl-phytosphingosine).
  • the formulation of the cosmetic composition of the present invention can be selected arbitrarily, conventional cosmetic formulations such as skin ointment, essence, whitening cream, lotion, emulsion, pack, general cosmetics, skin milk, cream, serum, cosmetic soap, softening cosmetics, medicinal It can be prepared in various forms, such as lotion, hair tonic, systemic cleanser and oil gel.
  • the cosmetic composition of the present invention may further include at least one additive selected from the group consisting of oil, water, surfactants, humectants, thickeners, chelating agents, pigments, preservatives, and fragrances, and as a preferred formulation, softening cosmetics, It may have a formulation of nourishing cosmetics, nourishing cream, massage cream, nourishing serum, essence, and pack.
  • the cosmetic composition of the present invention can be alleviated and improved by atopic dermatitis by applying to the skin inflammation site.
  • the amount of application may be appropriately added or subtracted according to the inflammation site of the patient, and may be characterized by repeated application of 1 to 5 times a day.
  • the composition for preventing or treating atopic dermatitis of the present invention it can be expected that the effect of treatment to alleviate the symptoms for patients with early severe atopic dermatitis, can be used in combination with a long-term combination can be used to reduce the dose than the immunotherapy alone therapy It can improve pruritus and help atopic patients maintain their desired skin condition for a long time. That is, when using the composition for preventing or treating atopic dermatitis of the present invention, it can be expected not only the therapeutic effect of the relief of atopic symptoms, but also the effect of preventing the extreme pruritus and dermatitis symptoms are not induced.
  • NC / Nga mice 8-week-old male NC / Nga mice were purchased from Shizuoka Laboratory Animal Center (Hamamatsu, Japan). Glucosamine is described by Sigma-Aidrich Co. (St. Louis, MO), tacrolimus (FK-506) and cyclosporin were purchased from Chong Kun Dang and used. Df body ointment was prepared by Biostir Inc. (Kobe, Japan). In order to induce atopy in NC / Nga mice, the hair of the mouse was removed, and 4% SDS (sodium dodecyl sulfate) was applied to the back and ears. After 3 hours, Df body ointment was applied. This process was repeated twice for 4 weeks.
  • SDS sodium dodecyl sulfate
  • Skin lesions were identified using a clinical skin score.
  • Clinical skin scores range from 0 (none) to erythema / hemorrhage, scarring / dryness, edema, and abrasions / excoriation / erosion. The score was scored as 8 (severe), and the score was added and measured.
  • mice with a clinical skin score of 8 The effect of the alone / combined administration of immunosuppressant and TG2 inhibitor was used in mice with a clinical skin score of 8, and Df-induced dermatitis of NC / Nga mice was used to confirm the atopic improvement.
  • Glucosamine was administered orally or alone with tacrolimus or cyclosporine once a day for three weeks in order to confirm the effects of the combined administration of the surface inhibitors tacrolimus, cyclosporin and glucosamine TG2 inhibitor.
  • PBS was administered in place of the drug as a control and each group consisted of 5 mice.
  • Glucosamine was administered at 500 mg / kg / day, and tacrolimus was administered at 1.0 mg / kg / day, a dose that is effective in treating and preventing atopy.
  • tacrolimus FK-506 alone or in combination, clinical skin scores in atopically induced NC / Nga mice were confirmed.
  • the group of glucosamine in combination with tacrolimus is significantly improved in clinical skin score and clinical aspects than the glucosamine alone or tacrolimus (FK-506) alone group. I could confirm it.
  • cyclosporine low dose 10 mg / kg / day itself was not significant, but when administered in combination with glucosamine 100 mg / kg / day was confirmed to have a significant effect.
  • glucosamine was administered in combination at 500 mg / kg / day, cyclosporine was found to have a similar or slightly better therapeutic effect as the high dose of 100 mg / kg / day alone as well as 45 mg / kg / day.
  • the glucosamine was fixed at a 500 mg / kg / day dose and then cyclosporine was confirmed by clinical skin scores to show a therapeutic effect even at low doses of 2, 5, and 10 mg / kg / day.
  • the concentrations of IL-4, IL-5, IL-13, IFN- ⁇ , CCL17 / TARC and eotaxin were measured using an ELISA kit (R & D System, Minneapolis, Minnesota, USA). .
  • mice spleen cells were used to prepare IL-5, IL-13, eotaxin and TARC. Targeted ELISA analysis was performed.
  • FIGS. 5 to 8 expression of IL-5 (FIG. 5), IL-13 (FIG. 6), TARC (FIG. 7), and eotaxin (FIG. 8) alone was associated with glucosamine or tacrolimus.
  • IL-5 FIG. 5
  • IL-13 FIG. 6
  • TARC FIG. 7
  • eotaxin FIG. 8
  • Cyclosporin (CsA) 2 5, 10mg / kg / day low dose and 500mg / kg / day of glucosamine alone or in combination, mouse spleen cells, IL-5, IL-13, eotaxin, The reduction effect of TARC and TSLP was compared.
  • Th2 cytokines IL-4, IL-5, IL-13 and chemokine eotaxin at all doses including 2 mg / kg / day, when combined with a low dose of cyclosporine and glucosamine , TARC and TSLP were not treated, as well as the group treated with cyclosporine alone and glucosamine alone.
  • peripheral vascular CD3 + T cells and CLA + cells are reported to be markedly increased in children with atopic disease.
  • tacrolimus FK-506
  • glucosamine glucosamine on the invasion of Df-induced CLA + and CD3 + T cells (shown in green on the surface) in NC / Nga rats was confirmed by immunohistochemistry.
  • immunofluorescence staining of CD3 + T cells or cutaneous lymphocyte antigens (CLA) was performed. Skin samples were obtained from each group of mice and then fixed using paraffin wax to obtain 5 ⁇ m sections. After paraffin was removed and rehydrated, sections were heated in 100 mM citrate buffer (pH 6.0) for 5 minutes.
  • Nuclei were counterstained with Hoechst 33258 (Sigma-Aldrich). Stained tissue samples were analyzed by an image analysis system (Dp Manager 1 r 2.1; Olympus Optical Co., Tokyo, Japan). Invasion of Df-induced CLA + and CD3 + T cells (shown in green on the surface) in NC / Nga mice after single or combined administration of tacrolimus (FK-506) 1.0 mg / kg / day and glucosamine 500 mg / kg / day It was confirmed in the same manner as above.
  • tacrolimus FK-506
  • Tregs regulatory T cells
  • This degradation of regulatory T cells is involved in causing an immune imbalance that is predominantly Th2 immune in patients with atopic dermatitis. Therefore, when cyclosporin and glucosamine are administered in combination, it was confirmed whether the change in the number of regulatory T cells occurs effectively.
  • Single cells derived from splenocytes were stained using FITC-anti-CD4 (GK1.5) and PE-anti-CD25 (280406) (R & D System, Minneapolis, Minnesota, USA). Stained cells were incubated in PBS, 2% FBS, 4 ° C. in the dark for 30 minutes. After washing the cultured cells twice, CellQuest software (Becton Dickinson) was used to confirm the change in T cell number.
  • Th2 cytokines along with inflammation, induce proliferation and activity of mast cells and eosinophils.
  • tissue of atopic dermatitis-induced mice were stained with toluidine blue or Congo red. The cell number was expressed by observing five high-power fields (X 400) as the cell density.
  • Tacrolimus FK-506 1.0mg / kg / day and Glucosamine 500mg / kg / day, alone or in combination, on the proliferation and activity of mast cells and eosinophils in NC / Nga rats and their effects on skin infiltration Compared.
  • control mouse P 0.001
  • glucosamine or tacrolimus were administered alone or in combination to atopy-induced mice to measure the level of IgE in serum. Sera of mice were obtained one week after the final administration, and the total amount of IgE was measured using an ELISA kit (Yamasa, Tokyo, Japan).
  • the combined administration shows a significant decrease in IgE than the control group as well as when administered alone, even when tacrolimus, an immunosuppressive agent of the present invention, is used at a low dose, the combined administration of tacrolimus and glucosamine shows a distinct effect compared to the conventional alone administration.
  • the combined administration of tacrolimus and glucosamine shows a distinct effect compared to the conventional alone administration.
  • Lysis buffer (10 mM Tris-HCl containing 50 mM NaCl, 50 mM NaF, 10 mM EDTA, 1 mM DTT, 1% Triton X-100, 0.1% SDS, 1% sodium deoxycholate, 1 mM phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF), 5 mM leupeptin, and 10 g / ml aprotinin, pH 7.5). 20 ⁇ g of the same amount of protein was isolated by 10% SDS polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and blotted onto NC membranes.
  • SDS-PAGE SDS polyacrylamide gel electrophoresis
  • the reaction was incubated with 1: 1000 dilution antibody against filaggrin, inboleucine and the control ⁇ -actin (Santa Cruz, CA, USA). Further incubation with HRP binding secondary antibody (1: 3,000 dilution) was followed by blots and visualized using ECL Plus TM Western Blotting Detection Reagents (Amersham, Piscataway, NJ, USA). The generated signal was confirmed using an Image Reader (LAS-3000; Fuji Photo Film, Tokyo, Japan).
  • CsA cyclosporin
  • glucosamine 500 mg / kg / day
  • cyclosporin In severe atopic dermatitis patients requiring cyclosporin administration, cyclosporin, an immunosuppressive agent, and glucosamine, a TG2 inhibitor, were administered alone or in combination, and the effect of the combination administration was determined by measuring the SCORD index, measurement of the lesion through the photograph, and the amount of cytokine expression.
  • vital signs ie, blood pressure and pulse, were measured after being rested for 3 minutes in a sitting position. As a result, the blood pressure and pulse of the subjects were all within the normal range.
  • Severe atopic dermatitis patients requiring cyclosporine were selected as subjects, and two weeks of cyclosporin, a designated dose of immunosuppressant, with glucosamine sulfate (500mg), two weeks, two weeks alone, and two weeks of SCORAD The index was measured. Cyclosporin was used at 100 mg (Cs1), 150 mg (Cs1.5) or 200 mg (Cs2), which was less than half the dose. The SCORAD index was measured before and during the change of dosing regimen.
  • the SCORAD index makes the area occupied by 0-100% according to the rule of nine, with 1/5 of the area, erythema, edema / papulation, (0-18) x 7/2, divided into six categories of oozing / crusts, scratches, lichenification and skin dryness, divided by severity 0-3
  • objective SCORAD and waking itch and sleep disturbances are calculated as the sum of subjective SCORADs (0-103) from 0 to 10 on each analog scale (European Task Force on Atopic Dermatitis, 1993).
  • cyclosporin and glucosamine were superior to the administration of glucosamine or cyclosporin alone, and the dose of cyclosporine at the time of the combined administration was less than half of the usual cyclosporin use dose.
  • the change in the SCORAD index of 10 patients was shown as a graph, and the SCORAD index of five patients who received glucosamine and cyclosporine (SEQ1) first and the group who received cyclosporine alone (SEQ0) five SCORAD index Change was confirmed.
  • a patient with a SCORAD index of 50.4 initially went down to 38.4 when co-administered cyclosporine and glucosamine, and then went up to 48.4 when only cyclosporine was administered, and then decreased to 37.4 when co-administered. .
  • the mean value of the 10 patients with atopic dermatitis was calculated and the average SCORAD change in 5 patients (DRUG1) and the first 5 patients (DRUG0), which were performed first, were determined. 19 is shown in FIG. 19 so that the comparison is possible together.
  • Photographs were taken at intervals of 4 weeks with the ruler next to the lesion at a distance of 30 cm from the affected site.
  • the person in charge of photography was taken by the specialty in charge of the subject, and the education for standardizing photography was conducted.
  • the lesions were taken at a constant posture and at a certain distance, and the illuminance of the photographing place was kept constant. Photographs were taken each time with the same composition to facilitate comparisons before and after the percussion.
  • the erythema and swelling of the lesion were severe before the combination therapy, and both lower extremities complained of pain due to general erythema and edema, and scratches due to itching were apparent.
  • a large portion of the lesions disappeared and erythema and edema of each lesion were significantly reduced.
  • the lesions deteriorated slightly and the erythema recurred in some skin areas and the scratches increased slightly.
  • cytokines such as IL-4, IL-5, IFN- ⁇ , and IFN- ⁇ were measured by known RT-PCR methods.
  • cytokine amounts such as IL-4, IL-5, IFN- ⁇ and IFN- ⁇ were decreased.
  • the expression level of IL-4 was significantly decreased by the co-administration, and in case of patient 1, the expression level of IL-5 was also markedly decreased.
  • FIG. 23 a graph showing the average of IL-4 expression change when glucosamine and cyclosporine were administered in combination with cyclosporine alone showed a significant difference in IL-4 expression change when used in combination. I could confirm that there is.
  • tacrolimus requires less than 10 times the amount of cyclosporine, tacrolimus requires 0.1 ng / ml at the minimum dose of glucosamine and 10 ng / ml at the maximum dose. Cyclosporin required 10 times the dose in comparison to tacrolimus, but there was no difference in the degree of inhibition.
  • the weight of the animals was converted to about 20 g. Since 1 mM of glucosamine corresponds to the administration of 10 mg / one, 0.1 mM was converted to 1 mg / one. It was confirmed that if the glutosamine 10 mg, cyclosporine 200 ng or more has an effect on atopic diseases. Based on this, the minimum and maximum doses of cyclosporin and glucosamine in the animal experimental model were converted as follows. In the case of tacrolimus, it is converted to a capacity of 1/10 of the following values.
  • Cyclosporine Glucosamine Cyclosporine (dose per kg) Glucosamine (dose per kg) Capacity 0.5 ⁇ 1 ⁇ g 0.1 to 1 mg 0.025-0.05 mg / kg 5 to 50 mg / kg Maximum capacity 50 to 100 ⁇ g 10 to 20 mg 2.5 to 5 mg / kg 500 to 1000 mg / kg
  • the minimum / maximum dose in these animals was converted to the dose appropriate for humans.
  • the difference in glucosamine blood levels in animals and humans is not significant.
  • the blood concentration was doubled when taking 1500 mg / day compared to 750 mg / day.However, when taking more than 1500 mg / day, the increase in blood concentration was not proportional to the dose and was considerably lowered. I could confirm it.
  • the mean blood concentration was 94.2ng / ml (22.1-156.2 ng / ml), and the minimum / maximum dose of the final combination of cyclosporin and glucosamine was as follows.
  • the combined dosage range of cyclosporin and glucosamine that can be finally administered to humans is a combination of lowest cyclosporine 0.025 mg / kg / day + glucosamine 5 mg / kg / day and highest cyclosporine 2.9 mg / kg / day + glucosamine 50 mg / It was confirmed that it can be kg / day.
  • glucosamine is usually 12 to 17 mg / kg
  • cyclosporine is 1 to 2.9 mg / kg.
  • a ratio of cyclosporin to 5-30: 1 was judged to be the most appropriate.
  • the content ratio of glucosamine to tacrolimus was determined to be 25 to 300: 1 for the most appropriate combination dosage range.
  • dexamethasone may also have a similar effect as one of immunosuppressive agents for the purpose of preventing or treating atopic dermatitis through co-administration with glucosamine of the present invention, and pimecrolimus, which is known to be very similar to tacrolimus. It was also judged to be usable as an immunosuppressive agent for the combined administration of the present invention.
  • tablets were prepared by tableting according to a conventional method for producing tablets.
  • the capsule was prepared by filling in gelatin capsules according to the conventional method for producing a capsule.
  • injections were prepared according to a conventional production method.
  • Beta-1,3-Glucan 1.0%
  • Beta-1,3-Glucan 1.0%
  • Beta-1,3-Glucan 5.0%

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Abstract

본 발명은 면역억제제 및 트랜스글루타미나제 2 억제제를 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염의 예방, 치료 또는 개선용 조성물에 관한 것이다.본 발명에 따른 면역억제제와 트랜스글루타미나제 2 억제제의 병용 투여는, 부작용으로 인하여 장기 투여가 어렵고, 중단 시 원상으로 병변이 악화되기 쉬운 면역억제제의 용량을 감량하고, 일부 환자에게서 아토피 치료 효과가 미진했던 트랜스글루타미나제 2 억제제를 면역억제제와 혼합하여, 면역억제제 또는 트랜스글루타미나제 2 억제제의 단독 투여보다 매우 높은 치료 효과를 달성할 수 있다.

Description

면역억제제 및 트랜스글루타미나제 ２ 억제제를 포함하는 아토피 피부염의 예방, 치료 또는 개선용 조성물
본 발명은 면역억제제 및 트랜스글루타미나제 2 억제제를 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염의 예방, 치료 또는 개선용 조성물에 관한 것이다.
아토피 피부염(atopic dematitis)은 공통적으로 원인 불명의 강한 소양감을 보이고 그 외에 피부의 건조, 피부 홍반과 염증이 복합적으로 동반되는 피부의 이상 증후군이다(Lancet. 1998; 351:1715-1721). 아토피 피부염은 장기간 생활에 큰 불편을 끼치는 만성 질환으로, 주로 영아나 유아에게서 일어난다. 이는 전체 영아, 유아의 10 내지 15%에서 발생하는데, 아토피 환자군 내의 발생 현황을 살펴보면, 1년 이하의 영아기 때 60%가, 5년 이하의 유아기 때 85%가 발생한다(Lancet. 1998; 351:1715-1721). 아토피 피부염 어린이 환자의 40%는 성장과 함께 병세가 점점 개선되었으나 급격한 산업화로 유발된 공해, 환경오염 등으로 인해 성인의 발생율이 전체 성인의 1 내지 3% 정도 (Immunol. Allergy. Cli. North Am. 2002; 22:1-24)로 산업화 이전에 비해 2 내지 3배로, 그 발생율이 증가되고 있다 (Lancet. 2003; 361:151-160). 이러한 이유로 많은 연구자들이 아토피 피부염의 임상적인 증상을 감소시키는데 관심을 갖고 있다.
아토피성 피부염의 임상증상은 개인에 따라 차이는 보이지만, 대표적으로 나타나는 증세는 첫째로 극심한 가려움증을 호소하고, 둘째로 환자의 피부가 건조한 상태로 유지되어 불쾌감을 갖게 하며, 셋째로는 건조성 피부로 인해 피부 표면의 방어기능이 소실되어 외부로부터 자극물질의 피부침입이 쉬워지고, 이러한 침입물로 인하여 피부가 거부반응을 일으켜 염증반응이 일어나는 것이다 (Lancet. 1998; 351:1715-1721, J. Pediatr.Health Care. 2002; 16;143-145).
아토피 피부염의 원인과 치료에 대해서는 최근까지 많은 연구가 진행되고 있으나, 질환 자체의 복잡성과 서로 상충되는 연구 데이터들로 인해 정확한 병인과 유효한 치료법에 대해서 아직까지 명확한 이론이 확립되지 않은 상태이다.
현재까지 개발되어 있는 아토피성 피부염 치료제는 스테로이드, 타크로리무스, 피메크롤리무스와 같은 국소 항염증 제제, 항히스타민제 및 사이클로스포린과 같은 면역억제제 등이 이용되고 있다. 또한, 보조적인 요법으로 저자극성 보습제 사용, 자외선 A를 이용한 광화학요법도 임상에서 시행되고 있다. 그러나, 이러한 치료법 또는 치료제는 근본적인 치료보다는 증상을 적절한 수준으로 조절하는데 도움을 주는 것으로서, 현재까지 아토피 피부염 환자들의 요구를 완전히 충족시켜주지 못하고 있다.
이러한 요구에 부응하기 위해 본 발명자는 이미 안전성이 인정되어 상용화되고 있는 천연물질인 트랜스글루타미나제 억제제로서의 글루코사민을 유효성분으로 함유한 아토피 피부염 치료제를 개발한 바 있다(대한민국공개특허 제2008-0035997호). 그러나, 글루코사민은 일부 개체에서만 치료 효과를 보일 뿐 심한 아토피 피부염 환자에서는 치료 효과가 미약하였다. 한편, 기존 치료법이 잘 안 듣는 심한 아토피 피부염 환자에게는 사이클로스포린과 같은 면역억제제가 사용되고 있다. 이러한 면역억제제는 효과는 우수하지만, 신장독성, 치은 비후, 다모증, 신경독성, 고혈압, 고지혈증, 고혈당, 고칼륨혈증, 고요산혈증, 용혈요독 증후군, 감염과 같은 부작용이 우려되는 단점이 있다. 또한, 면역억제제의 부작용으로 인하여 장기투여에 어려움이 있음에도 불구하고 투여를 중단할 경우 원래 상태로 환원되는 문제점이 있다.
본 발명자는 상기와 같은 문제점을 해결하고, 과다 투여시 부작용이 유발될 수 있는 면역억제제의 부작용을 줄이면서도 아토피 피부염 치료 효과가 높은 치료법을 개발하고자 예의 노력한 결과, 트랜스글루타미나제 2 억제제를 포함시키는 경우 면역억제제의 사용 용량을 줄이면서도 아토피 피부염의 치료 효과는 면역억제제를 단독 투여한 경우보다 상승하는 것을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 면역억제제의 용량을 감량하여도 면역억제제 이상의 우수한 치료 효과를 보일 수 있는 면역억제제와 트랜스글루타미나제 2 억제제를 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염 치료용 약학적 조성물 및 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위해서, 본 발명은 면역억제제와 트랜스글루타미나제 2 억제제를 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 면역억제제와 트랜스글루타미나제 2 억제제를 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 면역억제제와 트랜스글루타미나제 2 억제제의 병용 투여는, 부작용으로 인하여 장기 투여가 어렵고, 중단 시 원상으로 병변이 악화되기 쉬운 면역억제제의 용량을 감량하고, 면역억제제 또는 트랜스글루타미나제 2 억제제의 단독 투여보다 매우 높은 아토피 치료 또는 개선 효과를 나타낼 수 있다.
도 1은 글루코사민(500 mg/kg/day)과 타크로리무스(FK-506)(1.0mg/kg/day)를 단독 또는 병용 투여한 후 임상 피부 점수(clinical skin score)를 측정하여 비교한 결과를 나타낸 도이다.
도 2는 글루코사민(500 mg/kg/day)과 타크로리무스(FK-506)(1.0mg/kg/day)를 단독 또는 병용 투여한 후 아토피 유도된 NC/Nga 마우스에서의 피부 병변의 변화를 임상적으로 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 3은 사이클로스포린(CsA)(10, 45, 100 mg/kg/day)과 글루코사민(100, 500 mg/kg/day )을 단독 또는 병용 투여한 후, 임상 피부 점수를 측정하여 비교한 결과를 나타낸 도이다.
도 4는 글루코사민을 500mg/kg/day 용량으로 고정하고, 사이클로스포린(CsA)의 용량을 달리하여 단독 또는 병용 투여한 후, 임상 피부 점수를 측정하여 비교한 결과를 나타낸 도이다.
도 5 내지 도 8은 타크로리무스(FK-506) 1.0mg/kg/day와 글루코사민 500mg/kg/day을 단독 또는 병용 투여한 후, IL-5(도5), IL-13 (도6), TARC (도 7) 및 이오탁신(eotaxin)(도 8)의 발현을 비교한 결과를 나타낸 도이다.
도 9는 사이클로스포린 (CsA)(2, 5, 10mg/kg/day)과 글루코사민 (500mg/kg/day)을 단독 또는 병용 투여한 후, IL-5, IL-13, 이오탁신(eotaxin), TARC 및 TSLP의 감소 효과를 비교한 결과를 나타낸 도이다.
도 10은 타크로리무스(FK-506)(1.0mg/kg/day)와 글루코사민(500mg/kg/day) 단독 또는 병용 투여시, CLA+ 및 CD3+ T세포의 저해 효과를 나타낸 도이다.
도 11은 저용량의 사이클로스포린(CsA)(2, 5, 10mg/kg/day) 와 글루코사민 (500mg/kg/day)을 단독 또는 병용투여 하는 경우, CD4+CD25+ 조절 T 세포수의 감소 효과를 나타낸 도이다.
도 12는 및 도 13은 타크로리무스(FK-506)(1.0mg/kg/day)와 글루코사민 (500mg/kg/day)을 단독 또는 병용 투여 시, 비만세포 및 호산구의 증식, 활성의 억제 효과를 나타낸 도이다.
도 14는 사이클로스포린 (CsA)(10mg/kg/day) 저용량과 글루코사민 (500mg/kg/day)을 단독 또는 병용 투여 시, 피부 병변에 침투한 비만세포 및 호산구 수를 비교한 결과를 나타낸 도이다.
도 15는 타클로리무스(FK-506)와 글루코사민 병용 투여에 의한 혈청 IgE 감소 효과를 나타낸 도이다.
도 16은 사이클로스포린(CsA)과 글루코사민 병용 투여에 의한, 인보루크린 (Involucrin) 및 필라그린(filaggrin) 발현의 변화를 나타낸 도이다.
도 17은 아토피 피부염 환자에게 글루코사민을 단독 투여하는 방법과 사이클로스포린과 글루코사민을 혼합한 조성물을 투여하는 방법을 반복하면서, 투약방법이 변경될 때마다 측정한 SCORAD 지수를 나타낸 도이다.
도 18은 사이클로스포린과 글루코사민을 병용-단독 또는 단독-병용을 번갈아 시행하면서, 투약방법이 변경될 때마다 측정한 SCORAD 지수를 나타낸 도이다(위: 10명 전체의 결과, 아래 왼쪽: 병용을 먼저 시행한 5명의 결과, 아래 오른쪽: 병용을 나중에 시행한 5명의 결과를 나타냄).
도 19는 도18의 값들의 평균값을 구하여 병용을 먼저 시행한 5명(DRUG1)에서의 평균 SCORAD 변화(아래 왼쪽)와 단독을 먼저 시행한 5명(DRUG0)에서의 평균 SCORAD 변화(아래 오른쪽), 전체 환자의 결과에 각각의 평균선을 함께 표시하여 비교가 가능하도록(위) 나타낸 도이다.
도 20은 사이클로스포린에 글루코사민을 병용한 경우와 사이클로스포린 단독을 투여한 경우의 목적 함수값 (objective functional value; OFV)을 계산한 결과를 나타낸 도이다.
도 21은 사이클로스포린과 글루코사민을 병용투여한 후 지정된 시간별로 환자의 환부를 촬영한 결과를 나타낸 도이다.
도 22 사이클로스포린과 글루코사민(자스민)을 병용투여한 후, 사이토카인 (IL-4, IL-5, IFN-β, IFN-γ)의 발현량을 분석한 결과를 나타낸 도이다.
도 23은 사이클로스포린 단독 투여와 사이클로스포린과 글루코사민을 병용투여했을 때의 IL-4 발현량 변화의 평균값을 나타낸 도이다.
도 24 내지 도 26은 면역억제제인 타크로리무스(FK-506), 사이클로스포린, 글루코사민, 덱사메타존을 단독 투여한 경우의 염증 억제 효과를 IFN-g(도 24), IL-4(도 25), IL-5(도 26)의 변화를 통해 확인한 결과를 나타낸 도이다.
본 발명은 면역억제제와 트랜스글루타미나제 2 억제제를 유효성분으로 포함하는, 아토피 피부염의 예방, 치료 또는 개선용 조성물에 관한 것이다.
상기 조성물은 약학적 조성물 및 화장료 조성물을 포함한다.
이하, 본 발명에 대해 상세히 설명한다.
본 발명의 면역억제제와 트랜스글루타미나제 2 억제제를 병용 투여하면, 아토피 피부염 환자의 염증성 사이토카인의 분비가 효과적으로 감소하게 되며, 아토피 피부염 치료를 위한 유효량보다 훨씬 적은 양의 면역억제제로도 아토피 피부염 치료 효과를 확인할 수 있어, 면역억제제에 따른 부작용을 줄일 수 있다.
상기 "면역억제제"는 생체의 면역반응을 억제하는 약제를 통칭한다. 상기 면역억제제로는 글루코코르티코이드(Glucocorticoid), 사이클로스포린 (Cyclosporine), 타크로리무스(Tacrolimus, FK506), 피메크롤리무스 (Pimecrolimus), ISA(TX)247을 포함한 칼시뉴린(calcineurin) 억제제, 라파마이신 (Rapamycin), 타입 IV PDE 억제제 (Type IV PDE inhibitors), 마이코페놀레이트 모페틸 (Mycophenolate Mofetil), 덱사메타존 등을 예시할 수 있으나, 이에 제한되지 않으며, 공지된 모든 면역억제제를 이용할 수 있다.
또한 1 종의 면역억제제를 단독으로 이용하거나, 2 종 이상의 면역억제제를 조합으로 이용할 수 있으며, 바람직하게는 상기 면역억제제로서 사이클로스포린, 타크로리무스, 덱사메타존, 피메크롤리무스로 구성된 군에서 선택된 1종 이상을 이용할 수 있다.
상기 "트랜스글루타미나제 2 (transglutaminase 2, 이하 TG2) 억제제"는 TG2의 활성 억제제 또는 TG2의 발현 억제제를 모두 포함한다. TG2는 서로 다른 단백질의 글루타민기와 라이신기가 엡실론 감마 글루타밀라이신(ε-γ-glutamyl-lysine) 결합하는 것을 촉매하는 효소(Methods in Enzymol. 1985; 113: 358-375)로 피부 손상을 예방하고 손상된 조직을 치유하는데 중요한 인자로 여겨지고 있다 (FASEB J. 1999; 13: 1787-1795). 그러나, 비정상적으로 활성화된 TG2는 뇌질환, 동맥경화, 염증성 질환, 자가면역질환과 섬유증과 같은 여러 가지 질환의 발병에 기여한다 (Neurochem. Int. 2002; 40: 85-103).
본 발명에서 TG2의 활성 억제제는 바람직하게는 TG2의 활성을 중화시킬 수 있는 항-TG2 항체일 수 있다. 본 발명에서 항-TG2 항체는 다클론 항체 또는 단클론 항체일 수 있다. 본 발명의 항체는 TG2 단백질을 항원으로 하여 면역학 분야에서 널리 알려져 있는 통상의 방법으로 제조할 수 있다.
또 다른 TG2의 활성 억제제는 TG2의 활성을 억제하는 화합물로서, 예를 들면, 시스타민 (cystamine), 푸트레신 (putrescine), 모노단실카다베린 (monodansylcadaverine), w-디벤질아미노아킬아민 (w-dibenzylaminoalkylamine), 3-할로-4,5-디히드로이속사졸 (3-halo-4, 5-dihydroisoxazole), 2-[(2-옥소프로필)티오]이미다졸리움 유도체 (2-[(2-oxopropyl)thio]imidazolium derivatives) 등을 언급할 수 있다. 또한, 에피칼로카테킨 갈레이트 (epigallocatechin gallate) 또는 클로로겐산 (chlorogenic acid)이 이용될 수 있다.
본 발명의 "TG2 유전자의 발현 억제"는 유전자 전사의 억제 및 단백질로의 번역 억제가 포함되며 유전자 발현이 완전히 정지된 것뿐만 아니라 발현이 감소된 것도 포함된다. 유전자의 발현을 억제하는 방법으로는 안티센스 분자를 이용하는 것이 가장 보편적이다. 안티센스 분자가 표적 유전자의 발현을 억제하는 작용으로는 삼중쇄 형성에 의한 전사개시 저해, RNA 폴리머라제에 의해 국부적인 개상 루프 구조가 만들어진 부위에서 하이브리드 형성에 의한 전사 억제, 합성이 진행되고 있는 RNA에서 하이브리드 형성에 의한 전사 저해, 인트론과 엑손과의 접합점에서 하이브리드 형성에 의한 스플라이싱 억제, 스플라이소좀 형성 부위에서 하이브리드 형성에 의한 스플라이싱 억제, mRNA와의 하이브리드 형성에 의한 핵으로부터 세포질로의 이행 억제, 번역 개시인자 결합 부위에서 하이브리드 형성에 의한 번역개시 억제 등이 있다. 이들은 전사, 스플라이싱 또는 번역 과정을 저해하여 표적 유전자의 발현을 억제한다.
본 발명에 사용되는 안티센스 분자는 상기의 어느 작용으로든지 표적 유전자의 발현을 억제할 수 있으며, 대표적인 안티센스 분자로는 3중제, 리보자임 (ribozyme), RNAi, 또는 안티센스 핵산 등이 포함될 수 있다.
TG2 억제제의 바람직한 일예로써 글루코사민을 이용할 수 있다. "글루코사민"은 바닷게 껍질이나 새우 껍질의 주성분인 키토산의 분해산물이다. 바닷게 또는 새우 껍질의 주성분은 키틴과 키토산으로, 키틴은 2-아세트아미도-2-데옥시-베타-D-글루코오스(N-아세틸글루코사민)로 구성되어 있으며, 키토산은 키틴의 탈아세틸화가 일어난 다당류로서 폴리(베타-(1,4)-글루코사민)이다. 글루코사민은 다음과 같은 화학식 1의 구조를 가진다.
화학식 1
Figure PCTKR2012009842-appb-C000001
본 발명에서는 글루코사민 대신에 글루코사민 유도체가 이용될 수도 있다. 본 발명에서 용어 "글루코사민 유도체"는 글루코사민의 하이드록시기의 수소가 아실 또는 알킬화합물로 치환된 것으로, 하기 화학식 2의 구조를 가지는 것을 말한다.
화학식 2
Figure PCTKR2012009842-appb-C000002
상기 식에서, R은 탄소수가 2 내지 18개인 아실기 또는 1 내지 5인 직쇄 또는 측쇄 알킬로서, 바람직하게는 아세틸 프로피오닐, 부티릴, 펜타오닐, 헥사노일, 헵타노일, 옥타노일, 노나노일, 데카노일, 운데카노일, 라우릴, 트리데카노일, 미리스틸, 펜타데카노일, 팔미토일, 마가릴 또는 스테아릴기 등의 아실기이거나, 또는 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 이소프로필, 이소부틸 또는 sec-부틸기 등의 알킬기일 수 있다.
또한, 본 발명에 사용되는 글루코사민 또는 그의 유도체는 그 사용 용도 등에 따라 약학적으로 허용가능한 염의 형태로 본 발명의 약학적 조성물에 포함될 수 있다. 이러한 염의 형태는, 예를 들어 글루코사민 또는 글루코사민 유도체의 황산염, 글루코사민 또는 글루코사민 유도체의 염산염, 글루코사민 또는 글루코사민 유도체의 말레이트 등이 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 바람직한 염의 형태는 글루코사민 또는 글루코사민 유도체의 황산염이다.
본 발명의 조성물에서 사이클로스포린과 트랜스글루타미나제 2 억제제는 1 대 1.8 내지 2000의 중량비로 함유되는 것이 바람직하며, 타크로리무스와 트랜스글루타미나제 2 억제제는 1 대 18 내지 2000의 중량비로 함유되는 것이 바람직하다. 또한, 아토피 피부염의 중증도가 심할수록 면역억제제의 함량을 높이고, 치료에 의해 중증도가 낮아질수록 면역억제제의 함량을 줄이는 것이 바람직하다.
본 발명의 조성물은 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀전, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 멸균 주사용액, 좌제 및 경피 투여용 제제로 제형화하여 사용될 수 있다. 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 소르비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 필요에 따라 충전제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제형화한다.
본 발명의 조성물은 경구 투여용 고상 제제로 제형화되는 것이 바람직하다. 경구 투여를 위한 고상 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되는데, 이러한 고상 제제는 유효성분에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트, 수크로스 또는 락토스, 젤라틴 등을 혼합하여 제형화된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다.
또한, 본 발명의 조성물은 경구 투여용 액상 제제로 제형화되는 것이 바람직하다. 경구 투여를 위한 액상 제제는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데, 이러한 액상 제제에는 통상적으로 사용되는 불활성 희석제(예를 들면, 정제수, 에탄올, 리퀴드 파라핀) 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
또한, 본 발명의 조성물은 비경구 투여를 위한 제제로 제형화될 수도 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 멸균된 수용액으로는 한스 용액 (Hank's solution), 링거 용액 (Ringer' solution) 또는 물리적으로 완충된 염수와 같은 적절한 완충 용액을 이용할 수 있으며, 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 이용될 수 있다. 필요에 따라 방부제, 안정화제, 습윤제 또는 유화제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제를 이용할 수도 있다. 한편, 좌제의 경우에는 이의 통상적인 기제인 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
인간 환자에게 투여되는 경우, 본 발명의 조성물의 총 1일 사용량은 의학적 판단 범위 내에서 처치에 의해 결정될 수 있다. 특정 환자에 대한 구체적인 치료적 유효량은 달성하고자 하는 반응의 종류와 정도, 경우에 따라 다른 제제가 사용되는지의 여부, 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별, 식이, 투여 시간, 투여 경로, 조성물의 분비율, 치료 기간을 비롯한 다양한 인자와 의약 분야에 잘 알려진 유사 인자에 따라 다르게 적용하는 것이 바람직하다.
바람직하게는 사이클로스포린은 0.025mg/kg 이상 2.9 mg/kg이하로 글루코사민과 혼합복용될 수 있고, 타크로리무스는 0.0025mg/kg 이상 0.29 mg/kg이하로 글루코사민과 혼합복용될 수 있다. 트랜스글루타미나제 2 억제제로서 글루코사민은 5mg/kg 이상 50mg/kg 이하로 혼합 처방 및 복용될 수 있으며, 복용 횟수는 환자의 피부 상태에 따라 적절히 가감하여 하루 1회 내지 3회 복용할 수 있다. 또한 사이클로스포린의 경우 피부 병변 상태에 따라, 최고 5mg/kg까지 혼합하여 복용될 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 조성물은 피부 외용제 또는 화장료 제제 등으로 제형화될 수 있다. 상기 피부 외용제는 연고제, 경고제, 스프레이제, 현탁액, 유액, 크림, 젤 등을 포함하는 것일 수 있다.
면역억제제로서 사이클로스포린과 트랜스글루타미나제 2 억제제는 1 대 1.8 내지 2000의 중량비로 함유되는 것이 바람직하며, 타크로리무스와 트랜스글루타미나제 2 억제제는 1 대 18 내지 20000의 중량비로 함유되는 것이 바람직하다.
본 발명의 바람직한 일 예로써, 면역억제제와 트랜스글루타미나제 2 억제제는 화장료 조성물 총 건조 중량에 대하여 0.001 내지 5중량%로 포함되는 것이 바람직하다.
또한 본 발명의 화장료 조성물은 상기한 유효성분 외에도 필요에 따라 본 발명의 효과를 저하시키지 않는 범위 내에서 피부 외용제에 일반적으로 사용하는 각종 성분, 예를 들면 수용성 성분, 분말 성분, 유분, 계면활성제, 보습제, 점도 조절제, 방부제, 산화방지제, 향료, 색소 등을 배합하는 것이 가능하다. 또한 종래의 아토피피부 치료제에 많이 사용되어온 세라마이드(Ceramides) 등 보습제 또는 지질 (Lipids) 성분이나 하이드로코티손 (Hydrocortisone) 등의 스테로이드 (Steroids), 레티닐 팔미테이트 (Retinyl palmitate) 등의 비타민A 유도체 또는/및 토코페롤 (Tocopherol), 기타 식물추출물 등을 공지의 레시틴 (lecithin)을 이용하여 리포좀 (liposome) 형태로 만들거나 N-스테아로일-파이토스핑고신 (Nstearoyl-phytosphingosine)에 포접시켜 병용도 가능하다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형은 임의로 선택할 수 있으되, 종래의 화장료제형인 피부외용연고, 에센스, 미백 크림, 로션, 에멀젼, 팩, 일반화장수, 스킨밀크, 크림, 세럼, 미용비누, 유연화장수, 약용화장수, 헤어토닉, 전신세정제, 오일젤과 같은 여러 가지 형태로 제조할 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물은 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 및 향료로 이루어지는 군으로부터 1 종 이상 선택되는 첨가제를 추가로 포함할 수 있으며, 바람직한 제형으로 유연화장수, 영양화장수, 영양크림, 맛사지크림, 영양세럼, 에센스, 팩의 제형을 가질 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 피부 염증 부위에 도포함으로써 아토피 피부염을 완화, 개선할 수 있다. 도포양은 환자의 염증 부위에 따라 적절히 가감될 수 있으며, 하루 1회 내지 5회 반복 도포하는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명의 아토피 피부염 예방 또는 치료용 조성물을 이용하면, 초기 심한 아토피 환자에 대해서는 증상을 완화시키는 치료의 효과를 기대할 수 있으며, 면역제제 단독 요법보다 용량을 줄여 사용할 수 있음으로 장기간 병용 투여가 가능하여 소양감을 개선하고아토피 환자가 장기간 바람직한 피부 상태를 유지할 수 있도록 할 수 있다. 즉, 본 발명의 아토피 피부염 예방 또는 치료용 조성물을 이용하는 경우, 아토피 증상의 완화에 따른 치료효과 뿐만 아니라 극심한 소양감 및 피부염 증상이 유발되지 않도록 하는 예방의 효과도 기대할 수 있다.
이하, 실시예를 통해 본 발명을 자세히 설명하도록 한다. 하기 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예 1. 아토피 피부염에 걸린 마우스에서의 아토피 치료 효과 확인
1.1 실험 재료 및 방법
8주령의 수컷 NC/Nga 마우스는 Shizuoka Laboratory Animal Center (Hamamatsu, Japan)에서 구입하였다. 글루코사민은 Sigma-Aidrich Co. (St. Louis, MO), 타크로리무스(FK-506) 및 사이클로스포린은 종근당에서 구입하여 사용하였다. Df body 연고는 Biostir Inc.(Kobe, Japan)에서 준비하였다. NC/Nga 마우스에서 아토피를 유도하기 위하여, 마우스의 털을 제거하고 등과 귀에 4% SDS(sodium dodecyl sulfate)를 처리하였으며 3시간 후, Df body 연고를 도포하였다. 이러한 과정을 4주 동안 2번씩 반복하였다. 피부 병변은 임상 피부 점수(clinical skin score)를 이용하여 확인하였다. 임상 피부 점수(clinical skin score)는 홍반/출혈 (erythema/hemorrhage), 흉터/건조 (scarring/dryness), 부종 (edema) 및 찰과상/진무름 (excoriation/erosion) 증상을 기초로 하여 0(none)~ 8(severe)으로 점수를 내고, 그 점수를 합산하여 측정하였다.
면역억제제와 TG2 억제제의 단독/ 병용 투여의 효과는 임상 피부 점수가 8인 마우스를 사용하였으며, NC/Nga 마우스의 Df-유도된 피부염을 사용하여 아토피 개선 효과를 확인하였다.
1.2 면역억제제와 TG2억제제의 단독 또는 병용 투여에 의한 아토피 개선 효과 비교
면억억제제인 타크로리무스, 사이클로스포린과 TG2 억제제인 글루코사민의 복합 투여에 의한 효과를 확인하기 위하여, 글루코사민을 3주 동안 하루에 1회씩 경구적으로 타크로리무스 또는 사이클로스포린과 단독 또는 혼합하여 투여하였다. PBS를 대조군으로써 약물 대신에 투여하였으며 각각의 그룹은 5마리의 마우스로 구성되었다.
1.2.1 면역억제제와 글루코사민 병용 투여에 의한 임상 피부 점수 비교
타크로리무스와 글루코사민의 병용 투여 효과
글루코사민은 500mg/kg/day로, 타크로리무스는 아토피 치료 및 예방 효과를 나타내는 용량인 1.0 mg/kg/day로 투여하였다. 글루코사민과 타크로리무스(FK-506)를 단독 또는 병용 투여한 후, 아토피 유도된 NC/Nga 마우스에서의 임상 피부 점수를 확인하였다.
결과를 도 1 및 도 2에 나타내었다.
도 1 및 도 2에 나타낸 바와 같이, 글루코사민에 타크로리무스(FK-506)가 병용 투여된 그룹이 글루코사민 단독 또는 타크로리무스(FK-506) 단독 투여군보다 임상 피부 점수 및 임상적인 측면에서 뚜렷하게 병변이 개선되는 것을 확인할 수 있었다.
사이클로스포린과 글루코사민의 병용 투여 효과
사이클로스포린(CsA) 10, 45, 100 mg/kg/day와 글루코사민 100, 500 mg/kg/day를 단독 또는 병용투여하고, 피부병변을 유발한 NC/Nga 생쥐에서 치료효과를 임상 피부 점수를 통해 확인하였다.
결과를 도 3에 나타내었다.
도 3에 나타낸 바와 같이, 사이클로스포린 저용량인 10 mg/kg/day 자체는 효과가 유의하지 않았으나 글루코사민 100 mg/kg/day를 병용투여하자 유의한 효과가 있는 것을 확인할 수 있었다. 또한 글루코사민은 500mg/kg/day 용량으로 병용 투여하자 사이클로스포린 적정용량인 45mg/kg/day뿐만 아니라, 고용량인 100 mg/kg/day 단독과 유사하거나 약간 좋은 치료효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었다.
이러한 결과에 따라, 글루코사민을 500mg/kg/day 용량으로 고정한 후 사이클로스포린을 2, 5, 10 mg/kg/day인 저용량으로 하여도 치료 효과를 나타내는지 임상 피부 점수를 통해 확인하였다.
결과를 도 4에 나타내었다.
도 4에 나타낸 바와 같이, 사이클로스포린을 2 mg/kg/day인 저용량으로 투여하여도 글루코사민과 병용투여시 사이클로스포린(CsA) 10 mg/kg/day를 단독 투여한 경우보다 좋은 효과를 나타내었다.
1.2.2 면역억제제와 글루코사민 병용 투여에 의한 사이토카인 및 케모카인 비교
면억억제제와 TG2 억제제인 글루코사민을 포함하는 조성물 투여에 의한 사이토카인 및 케모카인 분비량의 변화를 확인하기 위하여, 최종 투여 1주일 경과 후, 비장으로부터 세포를 얻고 이를 PMA(Phorbol 12-Myristate 13-Acetate, sigma) 및 1μM의 이오노마이신(Calbiochem, La Jolla, CA, USA)에서 37℃, 5% CO2에서 24시간 동안 배양하였다. 배양 상등액을 모은 후 IL-4, IL-5, IL-13, IFN-γ, CCL17/TARC의 농도와 이오탁신(eotaxin)을 ELISA 키트(R&D System, Minneapolis, Minnesota, USA)를 사용하여 측정하였다.
타크로리무스(FK-506)와 글루코사민의 병용 투여 효과
타크로리무스(FK-506) 1.0mg/kg/day와 글루코사민 500mg/kg/day를 단독 또는 병용 투여한 후, 마우스의 비장 세포를 이용하여 IL-5, IL-13, 이오탁신(eotaxin) 및 TARC를 타깃으로 하는 ELISA 분석을 수행하였다.
결과를 도 5 내지 도 8에 나타내었다.
도 5 내지 도 8에 나타낸 바와 같이, IL-5(도5), IL-13 (도6), TARC (도 7) 및 이오탁신(eotaxin)(도 8)의 발현이 글루코사민 또는 타크로리무스를 단독으로 투여한 경우(p=0.008 및 p=0.011)또는 대조군(p=0.001)보다 글루코사민과 타크로리무스를 병용 투여하는 경우 뚜렷하게 저해되는 것을 확인할 수 있었다.
사이클로스포린과 글루코사민의 병용 투여 효과
사이클로스포린(CsA) 2, 5, 10mg/kg/day 저용량과 글루코사민 500mg/kg/day를 단독 또는 병용 투여한 후, 마우스의 비장 세포를 이용하여 IL-5, IL-13, 이오탁신(eotaxin), TARC 및 TSLP의 감소 효과를 비교하였다.
결과를 도 9에 나타내었다.
도 9에 나타낸 바와 같이, 저용량의 사이클로스포린과 글루코사민 병용투여시 2 mg/kg/day 용량을 포함한 모든 용량에서 Th2 사이토카인인 IL-4, IL-5, IL-13과 케모카인인 이오탁신(eotaxin), TARC 및TSLP가 치료하지 않은 군은 물론 사이클로스포린 단독 및 글루코사민을 단독으로 치료한 군에 비하여 유의한 감소를 보였다.
1.2.3 면역억제제와 글루코사민 병용 투여에 의한 T 세포의 면역조직화학적 변화 비교
타크로리무스(FK-506)와 글루코사민의 병용 투여 효과
말초혈관 CD3+ T세포 및 CLA+세포의 발현은 아토피 질환을 가진 아이들에서 뚜렷하게 증가되는 것으로 보고되어 있다. NC/Nga 쥐에서 Df-유도된 CLA+ 및 CD3+ T세포(표면에 녹색으로 표시)의 침습에 면역억제제인 타크로리무스(FK-506) 와 글루코사민의 병용투여가 미치는 영향을 면역조직화학 방법으로 확인하였다. 면역조직화학적 분석을 수행하기 위하여, CD3+ T 세포 또는 CLA(cutaneous lymphocyte antigen)의 면역 형광 염색을 수행하였다. 각각의 마우스 그룹으로부터 피부 샘플을 얻은 후 파라핀 왁스를 이용하여 고정시켰으며 5μm의 절편을 얻었다. 파라핀을 제거하고 재수화 후, 절편들을 100 mM 시트르산염 완충액 (pH 6.0)에서 5분 동안 가열하였다. 피부 조직 절편들은 3% BSA(bovine serum albumin)에서 1시간 동안 실온으로 전배양하였고, 연속적으로 1:100 anti-CD3 항체(rabbit polyclonal, abcam, Cambridge, UK) Egsns anti-CLA 항체 (rat monoclonal, Novus Biologicals, Littleton, CO, USA)와 4℃에서 하룻밤동안 반응시켰다. 그리고 CD3 염색을 위해 Alexa Fluor-labeled goat antirabbit IgG (594; Invitrogen, Eugene, OR, USA) 또는 CLA 염색을 위해 Alexa Fluor-labeled goat anti-rat IgG 및 IgM (488; Invitrogen)을 1시간 동안 실온에서 반응시켰다. 핵은 Hoechst 33258 (Sigma-Aldrich)로 대비 염색하였다. 염색된 조직 샘플은 image analysis system (Dp Manager 1 r 2.1;Olympus Optical Co.,Tokyo, Japan)에 의하여 분석하였다. 타크로리무스(FK-506) 1.0mg/kg/day와 글루코사민 500mg/kg/day를 단독 또는 병용 투여한 후, NC/Nga 쥐에서 Df-유도된 CLA+ 및 CD3+ T세포(표면에 녹색으로 표시)의 침습을 상기와 같은 방법으로 확인하였다.
결과를 도 10에 나타내었다.
도 10에 나타낸 바와 같이, 글루코사민과 타크로리무스를 병용 투여하는 경우 더욱 효과적으로 CLA+ 및 CD3+ T세포가 저해됨을 확인하였다.
사이클로스포린과 글루코사민의 병용 투여 효과
면역기능을 조절하는 조절 T 세포 (regulatory T cell; Treg)의 수와 기능은 아토피피부염에서 저하되는 것으로 알려져 있다. 이러한 조절 T 세포의 저하는 아토피 피부염 환자에서 Th2 면역반응이 우세한 면역 불균형 상태를 유발하는데 관여한다. 따라서 사이클로스포린과 글루코사민을 병용 투여하는 경우, 조절 T 세포 수의 변화가 효과적으로 일어나는 지 여부를 확인하였다. 비장세포로부터 유래된 단일 세포를 FITC-anti-CD4(GK1.5) 및 PE-anti-CD25 (280406) (R&D System, Minneapolis, Minnesota, USA)을 이용하여 염색하였다. 염색된 세포를 PBS, 2% FBS, 4℃ 조건의 암실에서 30분 동안 배양하였다. 배양된 세포를 2번 세척한 후, CellQuest software (Becton Dickinson)를 이용하여 T 세포 수의 변화를 확인하였다.
결과를 도 11에 나타내었다.
도 11에 나타낸 바와 같이, 저용량의 사이클로스포린(CsA)(2, 5, 10mg/kg/day) 와 글루코사민 500mg/kg/day를 병용투여 하는 경우, 가장 낮은 용량인 2 mg/kg/day 용량을 포함한 모든 용량에서 CD4+CD25+ 조절 T 세포수가 대조군인 치료하지 않은 군은 물론 사이클로스포린 단독 및 글루코사민을 단독으로 치료한 군에 비하여 유의한 감소를 보이는 것을 확인하였다.
1.2.4 면역억제제와 글루코사민 병용 투여에 의한 비만세포 및 호산구 감소 효과 비교
Th2 사이토카인은 염증과 함께 비만세포 및 호산구의 증식과 활성을 유도한다. 면역억제제와 글루코사민의 병용 투여가 이러한 염증 세포의 피부 침윤을 억제시킬 수 있는지 알아보기 위해 아토피 피부염이 유발된 마우스의 조직을 톨루이딘 블루(toluidine blue) 또는 콩고 레드 (Congo red)로 염색하였다. 세포 수는 세포의 밀도로 five high-power fields (X 400)로 관찰하여 나타내었다.
타크로리무스(FK-506)와 글루코사민의 병용 투여 효과
타크로리무스(FK-506) 1.0mg/kg/day와 글루코사민 500mg/kg/day를 단독 또는 병용 투여한 후, NC/Nga 쥐에서비만세포 및 호산구의 증식, 활성의 억제 효과와 피부 침윤에 미치는 영향을 비교하였다.
결과를 도 12 및 도 13에 나타내었다.
도 12 및 도 13에 나타낸 바와 같이, 침투된 세포의 수는 글루코사민 또는 타크로리무스(FK-506)를 단독으로 투여한 경우(P=0.003 및 P=0.002)보다 글루코사민과 타크로리무스(FK-506)를 병용 투여한 경우 뚜렷한 감소를 나타내는 것을 확인하였다(대조군 마우스 P=0.001).
사이클로포린과 글루코사민의 병용 투여 효과
사이클로스포린 10mg/kg/day 저용량과 글루코사민 500mg/kg/day를 단독 또는 병용 투여한 후, 피부 병변에 침투한 비만세포 및 호산구 수를 비교하였다.
결과를 도 14에 나타내었다.
도 14에 나타낸 바와 같이, 저용량의 사이클로스포린(10 mg/kg/day)과 글루코사민 병용투여시 피부병변에 침투한 비만세포 및 호산구수가 치료하지 않은 군은 물론 단독 투여군에 비하여 유의하게 감소하였다.
1.2.5 타클로리무스(FK-506)와 글루코사민 병용 투여에 의한 혈청 IgE 감소 효과
아토피 피부염의 주요 증상은 강한 Th2 면역반응과 연관되어 있어 IgE의 과다 생성이 일어난다. 따라서 아토피 유발 마우스에 글루코사민 또는 타크로리무스를 각각 단독 투여하거나 이를 병용 투여하여 혈청 내 IgE의 레벨을 측정하였다. 최종 투여 1주일이 경과한 후에 마우스의 혈청을 얻었으며, ELISA kit (Yamasa,Tokyo, Japan)을 사용하여 총 IgE의 양을 측정하였다.
결과를 도 15에 나타내었다.
도 15에 나타낸 바와 같이, 총 혈청 IgE의 양은 글루코사민 또는 타크로리무스 단독으로 투여한 경우(p=0.002 및 p=0.003)보다 뚜렷한 감소를 보였다. 각각 단독으로 투여한 경우와 대조군 사이에는 뚜렷한 차이를 확인할 수 없었다. 따라서, 병용 투여하는 경우 대조군뿐만 아니라 단독 투여하는 경우보다 현저한 IgE의 감소를 나타내므로, 본 발명의 면역억제제인 타크로리무스를 저용량으로 사용하더라도 타크로리무스와 글루코사민의 병용 투여가 기존 단독 투여에 비하여 뚜렷한 효과를 보인다는 것을 확인할 수 있었다.
1.2.6 사이클로스포린과 글루코사민 병용 투여에 의한 인보루크린(Involucrin) 및 필라그린(filaggrin) 발현 증가
아토피 피부염 환자는 피부 장벽의 기능이 저하된다. 이러한 피부 장벽 기능의 저하는 필라그린의 발현 감소 및 로리크린 등의 단백과 함께 각질세포막을 구성하는 인보루크린과 관련된 것으로 추정된다. 따라서, 사이클로스포린과 글루코사민의 병용 투여로 인한 필라그린 및 인보루크린의 발현 변화를 확인하였다. 마우스의 등으로부터 채취한 피부세포를 -80℃에서 보관하였다. 이후, 세포를 균질화 하고 Lysis buffer (10mM Tris-HCl containing50mM NaCl, 50mM NaF, 10mM EDTA, 1mM DTT, 1% Triton X-100, 0.1% SDS, 1%sodium deoxycholate, 1 mM phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF), 5mM leupeptin, and 10g/ml aprotinin, pH 7.5)에 용해시켰다. 20μg 동일한 양의 단백질을 10% SDSpolyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE)로 분리하고, NC 막에 블랏하였다. 반응을 정지시킨 후, 필라그린, 인보루크린 및 대조군인 β-엑틴(Santa Cruz, CA, USA)에 대한 1:1000 희석 항체를 이용하여 반응(incubation)시켰다. HRP 결합 이차항체(1:3,000 희석)을 이용하여 추가적으로 배양한 후 블랏하였으며, ECL Plus™ Western Blotting Detection Reagents (Amersham, Piscataway, NJ, USA)를 이용하여 시각화하였다. 발생 신호는 Image Reader (LAS-3000; Fuji Photo Film, Tokyo, Japan)를 이용하여 확인하였다.
결과를 도 16에 나타내었다.
도 16에 나타낸 바와 같이, 저용량의 사이클로스포린(CsA)(10mg/kg/day)과 글루코사민(500mg/kg/day) 병용투여시, 인보루크린(Involucrin) 및 필라그린 (filaggrin) 단백질의 발현이 정상군과 유사할 정도로 증가하는 것을 확인하였다.
실시예 2. 아토피 피부염 환자에서의 면역억제제와 TG2 억제제 병용 투여의 효과
사이클로스포린 투여를 요하는 심한 아토피 피부염 환자에 면역억제제인 사이클로스포린 및 TG2 억제제인 글루코사민을 단독 또는 병용 투여하여, SCORD 지수, 사진을 통한 환부 측정 및 사이토카인 발현양을 측정하여 병용 투여의 효과를 확인하였다. 실험을 수행하는 동안 활력징후 즉 혈압 및 맥박은 앉은 자세에서 3분 동안 안정을 취한 후 측정하였으며, 측정 결과 피험자들의 혈압과 맥박은 모두 정상 범위에 속하는 것을 확인하였다.
2.1 임상실험-SCORAD 지수
사이클로스포린 투여를 요하는 심한 아토피 피부염 환자를 피험자로 선정하여 지정된 용량의 면역억제제인 사이클로스포린을 단독 2주, 황산글루코사민 (500mg)과 병용하여 2주, 다시 단독 2주, 병용하여 2주를 투여하고 SCORAD 지수를 측정하였다. 사이클로스포린은 투여용량의 절반 이하인 100mg(Cs1), 150mg(Cs1.5) 또는 200mg(Cs2)을 이용하였다. 투약 전과 투약 방법이 바뀌는 시점에서 SCORAD 지수를 측정하였다. SCORAD 지수는 병변이 차지하는 면적을 9의 법칙(rule of nine) 원칙에 따라 0-100%로 하고 면적의 1/5과, 심한정도를 홍반(erythema), 부종/구진화(edema/papulation), 삼출/가피(oozing/crusts), 찰상(excoriations), 태선화 (lichenification), 피부건조(skin dryness)의 6항목으로 나누어 심한 정도를 0-3으로 나누어 합계한 (0-18) x 7/2를 더한 객관적 SCORAD및 깨어있는 동안의 가려움과 수면장애를 각 analog scale로 0-10까지 한 주관적 SCORAD의 총합(0-103)으로 계산한다(European Task Force on Atopic Dermatitis, 1993). 그러나 실제 환자에게 가려움과 수면장애에 대한 자각증상을 0-10의 scale로 평가하라고 하였을 때 제대로 하기 어려운 경우를 많이 경험하였고 실제 주관적인 척도를 제외한 객관적인 SCORAD 지수만 포함하여 0-83 점으로 평가하기도 하므로 (Kunz 등, Dermatology 1997;195:10-19), 본 실시예에서는 객관적인 SCORAD 지수만으로 평가하였다.
결과를 도 17에 나타내었다.
도 17에 나타낸 바와 같이, 아토피 피부염 환자에 글루코사민 단독 투여한 기간(11월10일~11월24일)에는 SCORAD에 변화가 거의 없었다. 그러나, 사이클로스포린과 글루코사민을 병용 투여하자 SCORAD가 72.5에서 51.5로 급격히 낮아졌다. 약물 중단(12월9일) 후 높아진 SCORAD가 사이클로스포린 단독(12월18일) 및 후속된 병용 투여 (12월30일)에 의해 낮아졌다. 이어서, 다시 사이클로스포린을 단독(1월9일) 투여하자 이전 치료에 의해 낮아졌던 SCORAD가 다시 올라가는 것을 확인하였다. 또 다른 환자에서는 사이클로스포린 단독 투여기간 (11월17일~12월1일)에는 SCORAD에 거의 변화가 없었으며, 이러한 결과는 일부 개체는 사이클로스포린도 잘 듣지 않는다는 기존의 보고를 뒷받침한다. 사이클로스포린과 글루코사민을 병용 투여한 기간 (12월1일~12월15일)에는 SCORAD가 41에서 34로 급격히 낮아졌다. 다시 사이클로스포린을 단독 (12월15일) 투여하자 오히려 SCORAD가 올라갔고, 병용 투여 (12월30일)에 의해 SCORAD가 낮아졌다. 즉, 글루코사민 단독 투여는 치료 효과가 미흡하였고, 사이클로스포린 단독 투여는 경우에 따라 SCORAD가 높아지는, 즉 치료 효과가 떨어지는 양상을 보였다. 그에 반하여 사이클로스포린과 글루코사민의 병용 투여는 글루코사민 또는 사이클로스포린 단독 투여에 비하여 치료 효과가 우수하였고, 병용 투여시 사이클로스포린의 용량은 통상의 사이클로스포린 사용 용량의 절반 이하였다.
2.2 사이클로스포린과 글루코사민의 병용투여에 따른 10명의 아토피 환자에서의 SCORAD 지수 측정
사이클로스포린과 글루코사민의 병용투여의 아토피 피부염 치료 효과를 더 많은 환자와 시간을 두고 관찰하기 위하여 아토피 환자 10명을 피험자로 선정하여 SCORAD 지수를 측정하였다. 상기의 방법과 마찬가지로, 2주의 간격을 두고 사이클로스포린 단독 투여와 사이클로스포린과 글루코사민의 병용투여를 반복하며 SCORAD 지수의 변화를 20주에 걸쳐 관찰하였다. 사이클로스포린의 사용량은 2 - 2.9 mg/kg/day, 평균 2.4mg/kg/day 이고, 글루코사민의 경우는 성인의 경우 1,000mg/day, 소아의 경우 500mg/day로 하였다. 10명의 환자의 SCORAD 지수의 변화를 하나의 그래프로 나타내었으며, 글루코사민과 사이클로스포린의 병용 투여를 먼저 시행한 환자군 (SEQ1) 5명의 SCORAD 지수 변화 및 사이클로스포린 단독을 먼저 시행한 환자군 (SEQ0) 5명의 SCORAD 지수 변화를 확인하였다.
결과를 도 18에 나타내었다.
도 18에 나타낸 바와 같이, 처음에 SCORAD 지수가 50.4 인 환자가 사이클로스포린과 글루코사민을 병용투여했을 때 38.4까지 내려갔으며, 다시 사이클로스포린만을 투여했더니 48.4로 올라갔고, 병용투여했을 때 37.4로 내려감을 확인할 수 있었다. 다른 환자는 처음에 SCORAD 지수가 68.4 였으나, 사이클로스포린과 글루코사민을 병용투여했더니 2주만에 SCORAD 지수가 35.5로 급격히 줄어들었다. 즉, 사이클로스포린의 단독 투여는 치료 효과가 미흡한 것을 확인하였으며, 사이클로스포린과 글루코사민의 병용투여로 증상이 완화되었던 환자도 사이클로스포린 단독 투여로 다시 증상이 악화되었다. 반면, 사이클로스포린과 글루코사민을 병용 투여했을 때는 글루코사민 단독 또는 사이클로스포린 단독 투여보다 사용 용량은 절반 이하였음에도 불구하고, 아토피 치료 효과가 매우 우수하였으며, 이를 통해 두 물질의 혼합으로 아토피 치료의 시너지 효과가 일어났음을 확인할 수 있었다.
상기 10명의 아토피 피부염 환자의 평균값을 구하여 먼저 시행한 5명 (DRUG1)에서의 평균 SCORAD 변화와 단독을 먼저 시행한 5명(DRUG0)에서의 평균 SCORAD 변화를 확인하고 전체 환자의 결과에는 각각의 평균선을 함께 표시하여 비교가 가능하도록 한 결과를 도 19에 나타내었다.
사이클로스포린을 중단할 경우 아토피 증상이 재발되는 것이 잘 알려져 있기 때문에 증상이 심한 환자에게 상기 면역억제제를 갑자기 중단하면 증상이 심해질 우려를 고려하여, 상기 10명의 임상실험에서는 병용-단독 또는 단독-병용을 시행하면서 약이 바뀌는 사이에 wash-out period (원하는 약이 체내에서 없어지기 까지 약을 투여하지 않고 기다리는 시간) 를 두지 않고 투약하였다. 따라서 글루코사민의 체내에서의 반감기가 1일 정도 되므로 이를 투여하였을 경우 처음 3일간은 혈중 농도가 단계적으로 증가하고 중단 후에도 3일에 걸쳐 서서히 감소함을 감안하여 글루코사민과 시간의 두 가지 파라미터에 대하여 상기 결과를 보정하였고, 이를 근거로 사이클로스포린에 글루코사민을 병용한 경우와 사이클로스포린 단독을 투여한 경우의 목적 함수값 (objective functional value; OFV)을 계산하였다.
결과를 도 20에 나타내었다.
도 20에 나타낸 바와 같이, 각각 631.640과 653.153의 값을 얻었다. 두 개의 parameter에서 목적 함수값이 5.99 이상 차이나면 p-value < 0.05가 되는데 병용과 단독의 차이가 21.5정도 되므로 이는 p-value < 0.05 를 만족하여 글루코사민과의 병용이 그렇지 않은 경우에 비하여 상승 효과를 나타내었음을 뒷받침해주었다.
2.3 사이클로스포린과 글루코사민의 병용투여에 따른 아토피 환자에서의 병변의 변화
환부로부터 30cm 거리에서 환부 옆에 눈금자를 같이 두고 4주 간격으로 사진촬영을 하였다. 사진 촬영을 전담하는 사람은 담당 전공의로 하며, 사진을 표준화하기 위한 교육을 실시하였다. 일정한 자세 및 일정한 거리에서 병변을 찍도록 하며, 사진촬영 장소의 조도를 일정하게 유지하도록 하였다. 매번 동일한 구도로 사진 촬영을 하여 투악 전후 비교를 용이하게 하였다.
결과를 도 21에 나타내었다.
도 21에 나타낸 바와 같이, 병용요법을 사용하기 전은 병변의 홍반과 부종이 심하고, 양쪽 하지는 특히 전반적인 홍반과 부종으로 인하여 환자가 통증을 호소하였으며 가려움으로 인한 찰상이 뚜렷하였다. 병용요법을 2 순환한 후의 사진에서는 많은 부분의 병변이 소실되고 각 병변의 홍반과 부종은 물론 찰상도 현저히 감소한 것을 확인할 수 있었다. 또한 사이클로스포린과 글루코사민 병용 투여에서 단독 투여로 투약 방법을 바꾼 후에는 병변이 약간 악화되어 홍반이 일부 피부부위에서 재발하고 찰상이 조금 증가하는 증상을 보이는 것을 확인할 수 있었다.
2.4 투약방법 변경에 따른, 사이토카인 발현량 분석
투약 전과 투약 방법이 변경되는 시점, 즉 2주마다 채혈하여 IL-4, IL-5, IFN-β, IFN-γ 등의 사이토카인을 공지된 RT-PCR 방법으로 측정하였다.
결과를 도 22 및 도 23에 나타내었다.
도 22에 나타낸 바와 같이, 글루코사민 및 사이클로스포린을 병용 투여하는 경우 IL-4, IL-5, IFN-β, IFN-γ 등의 사이토카인 양이 감소하였다. 특히 IL-4의 발현양이 병용 투여에 의해 현저하게 감소하였으며, 환자 1의 경우에는 IL-5의 발현양도 눈에 띄게 감소하였다. 또한 도 23에 나타낸 바와 같이, 글루코사민과 사이클로스포린을 병용투여했을 때와 사이클로스포린을 단독 투여했을 때의 IL-4 발현 변화의 평균을 그래프로 나타낸 결과, 병용 투여했을 때 IL-4 발현 변화에 유의적인 차이가 있는 것을 확인할 수 있었다.
실시예 3. 인간을 대상으로 한 적절한 투약 농도 계산
인간을 대상으로 면역억제제와 트랜스글루타미나제 2 억제제의 병용투여 용량을 결정하기 위해 세포 실험 및 동물 실험을 통하여 인간에 대한 적절한 용량을 도출하였다.
세포수준의 실험을 통한 사이클로스포린 및 글루코사민의 최소 및 최대 용량은 다음과 같다.
표 1
사이클로스포린 글루코사민
최소용량 1ng/ml 0.01 - 0.1. mM
최대용량 100 ng/ml 1-5 mM
타크로리무스의 경우 사이클로스포린에 비하여 10배 이하의 양을 필요로 하므로, 타크로리무스는 글루코사민 최소 용량 시, 0.1ng/ml, 최대 용량 시 10ng/ml을 필요로 한다. 사이클로스포린은 타크로리무스에 비하여 용량면에서 10배가 요구되나 억제 정도의 차이는 없는 것으로 확인되었다.
상기의 세포 수준 실험을 동물에 대한 직접 투여 용량으로 환산하기 위하여 동물의 무게를 약 20g정도로 하여 환산하였다. 글루코사민 1mM이 10 mg/한마리에 투여한 것에 해당하므로 0.1mM은 1 mg/한마리인 것으로 환산되었다. 클루코사민 10 mg, 사이클로스포린 200 ng 이상이면 아토피 질환에 대한 효과가 있음을 확인하였다. 이를 토대로 동물 실험 모델에서의 사이클로스포린과 글루코사민의 최소, 최대 용량을 다음과 같이 환산하였다. 타크로리무스의 경우 하기 값의 1/10의 용량으로 환산된다.
표 2
사이클로스포린 글루코사민 사이클로스포린(kg 당 용량) 글루코사민(kg 당 용량)
최소용량 0.5~ 1 μg 0.1 ~1 mg 0.025 ~0.05 mg/kg 5 ~50 mg/kg
최대용량 50 ~ 100 μg 10 ~20 mg 2.5 ~ 5 mg/kg 500 ~1000 mg/kg
상기 동물에서의 최소/최대 용량을 사람에게 적절한 용량으로 환산하였다. 일반적으로 동물과 사람에서의 글루코사민 혈중 농도의 차이는 크지 않다. 사람의 경우 750 mg/day에 비하여 1500 mg/day 복용 시 혈중농도가 2배 증가하는 것을 확인하였으나, 1500mg/day 이상 복용 시 혈중 농도의 증가가 용량에 비례하지 않고 상당히 낮아져 차이가 뚜렷해지지 않는 것을 확인할 수 있었다. 사이클로스포린을 3mg/kg 복용 시 평균 혈중 농도는 94.2ng/ml(22.1-156.2 ng/ml)로 나타났으며, 최종적인 사이클로스포린과 글루코사민의 병용 투여의 최소/최대 용량은 다음과 같다.
표 3
사이클로스포린 글루코사민
최소용량 0.025 -0.05 mg/kg 5 -50 mg/kg
최대용량 2.5 - 5 mg/kg 500 -1000 mg/kg 저용량목적이므로 사이클로스포린의 경우 3mg/kg 미만
따라서, 최종적으로 인간에게 투약될 수 있는 사이클로스포린 및 글루코사민의 혼용 투약 범위는 최저 사이클로스포린 0.025 mg/kg/day + 글루코사민 5 mg/kg/day의 복합 및 최고 사이클로스포린 2.9 mg/kg/day + 글루코사민 50 mg/kg/day 일 수 있음을 확인하였다.
상기와 같은 수치를 통하여 인간에서 처방할 수 있는 적절한 용량을 검토한 결과 글루코사민은 통상 12 내지 17mg/kg을, 사이클로스포린은 1 내지 2.9mg/kg이 처방됨으로, 아토피 치료 및 예방 효과를 나타내기 위해서는 글루코사민 대 사이클로스포린의 비율이 5 내지 30: 1 이 가장 적절한 것으로 판단되었다.
또한, 타크로리무스의 경우 사이클로스포린에 비하여 더 적은 양이 요구되므로 글루코사민 대 타크로리무스의 함량 비율은 25 내지 300: 1이 가장 적절한 병용 투여 범위인 것으로 판단되었다.
또한, 투약농도의 적절한 농도를 확인하기 위해 수행된 실험을 통해 면역억제제의 종류에 따른 면역억제 효과를 추가적으로 확인하였다.
결과를 도 24 내지 도 26에 나타내었다.
도 24 내지 도 26에 나타낸 바와 같이, 사이클로스포린, 타크로리무스(FK-506), 덱사메타존이 비슷한 패턴을 보이며 면역을 억제하는 것을 확인할 수 있었다. 따라서, 본 발명의 글루코사민과의 병용투여를 통한 아토피 피부염 예방 또는 치료 목적에 있어서 덱사메타존 역시 면역억제제의 하나로 유사한 효과를 나타낼 수 있음을 예측할 수 있었으며, 타크로리무스와 매우 유사한 것으로 알려져있는 피메크롤리무스 역시 본 발명의 병용 투여용 면역억제제로 사용가능할 것으로 판단되었다.
제제예 1. 약학적 제제
1.1 산제의 제조
면역억제제 및 트랜스글루타미나제 2 억제제 2g
유당 1g
상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
1.2 정제의 제조
면역억제제 및 트랜스글루타미나제 2 억제제 100mg
옥수수전분 100mg
유당 100mg
스테아린산 마그네슘 2mg
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
1.3. 캡슐제의 제조
면역억제제 및 트랜스글루타미나제 2 억제제 100mg
옥수수전분 100mg
유당 100mg
스테아린산 마그네슘 2mg
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
1.4 주사제의 제조
면역억제제 및 트랜스글루타미나제 2 억제제 100 ㎎
만니톨 180 ㎎
Na2HPO4·12H2O 26 ㎎
증류수 2974 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 제조방법에 따라서 주사제를 제조하였다.
제제예 2. 화장료 제제
2.1 유연화장수(스킨로션)의 제조
면역억제제 및 트랜스글루타미나제 2 억제제 0.5 %
베타-1,3-글루칸 1.0 %
부틸렌글리콜 2.0 %
프로필렌글리콜 2.0 %
카르복시비닐폴리머 0.1 %
피이지-12 노닐페닐에테르 0.2 %
폴리솔베이트 80 0.4 %
에탄올 10.0 %
트리에탄올아민 0.1 %
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 to 100 %
2.2 영양화장수(밀크로션)의 제조
면역억제제 및 트랜스글루타미나제 2 억제제 0.5 %
베타-1,3-글루칸 1.0 %
밀납 4.0 %
폴리솔베이트 60 1.5 %
솔비탄세스퀴올레이트 1.5 %
유동파라핀 0.5 %
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 5.0 %
글리세린 3.0 %
부틸렌글리콜 3.0 %
프로필렌글리콜 3.0 %
카르복시비닐폴리머 0.1 %
트리에탄올아민 0.2 %
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 to 100 %
2.3 영양크림의 제조
면역억제제 및 트랜스글루타미나제 2 억제제 1.0 %
베타-1,3-글루칸 5.0 %
밀납 10.0 %
폴리솔베이트 60 1.5 %
피이지 60 경화피마자유 2.0 %
솔비탄세스퀴올레이트 0.5 %
유동파라핀 10.0 %
스쿠알란 5.0 %
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 5.0 %
글리세린 5.0 %
부틸렌글리콜 3.0 %
프로필렌글리콜 3.0 %
트리에탄올아민 0.2 %
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 to 100 %

Claims (16)

  1. 면역억제제와 트랜스글루타미나제 2 억제제를 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서,상기 면역억제제는 사이클로스포린, 타크로리무스, 덱사메타존, 피메크롤리무스로 구성된 군에서 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 아토피 피부염 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  3. 제 1항에 있어서, 상기 트랜스글루타미나제 2 억제제는 트랜스글루타미나제 2 특이적 항체인 것을 특징으로 하는, 아토피 피부염 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  4. 제 1항에 있어서, 상기 트랜스글루타미나제 2 억제제는 트랜스글루타미나제 2유전자에 대한 안티센스 분자인 것을 특징으로 하는, 아토피 피부염 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  5. 제 4항에 있어서, 상기 트랜스글루타미나제 2의 유전자에 대한 안티센스 분자는 3중제, 리보자임, RNAi 및 안티센스 핵산로 구성된 군에서 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 아토피 피부염 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  6. 제 1항에 있어서, 상기 트랜스글루타미나제 2 억제제는 글루코사민인 것을 특징으로 하는, 아토피 피부염 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  7. 제 6항에 있어서,상기 글루코사민은 글루코사민 황산염인 것을 특징으로 하는, 아토피 피부염 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  8. 제 1항에 있어서, 면역억제제가 사이클로스포린인 경우,
    사이클로스포린과 트랜스글루타미나제 2 억제제는 1 대 1.8 내지 1 대 2000의 중량비로 함유되는 것을 특징으로 하는, 아토피 피부염 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  9. 제 1항에 있어서, 면역억제제가 타크로리무스인 경우,
    타크로리무스와 트랜스글루타미나제 2 억제제는 1 대 18 내지 1 대 2000의 중량비로 함유되는 것을 특징으로 하는, 아토피 피부염 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  10. 면역억제제와 트랜스글루타미나제 2의 억제제를 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물.
  11. 제 10항에 있어서, 상기 면역억제제는 사이클로스포린, 타크로리무스, 덱사메타존, 피메크롤리무스로 구성된 군에서 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
  12. 제 10항에 있어서, 상기 트랜스글루타미나제 2의 억제제는 글루코사민인 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
  13. 제10항에 있어서, 면역억제제가 사이클로스포린인 경우,
    사이클로스포린과 트랜스글루타미나제 2 억제제는 1 대 1.8 내지 1 대 2000의 중량비로 함유되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  14. 제 10항에 있어서, 면역억제제가 타크로리무스인 경우,
    타크로리무스와 트랜스글루타미나제 2 억제제는 1 대 18 내지 1 대 2000의 중량비로 함유되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  15. 제10항에 있어서, 상기 면역억제제와 트랜스글루타미나제 2 억제제는 화장료 조성물 총 건조 중량에 대하여 0.001 내지 5중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
  16. 제10항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 유연화장수, 영양화장수, 영양크림, 맛사지크림, 영양세럼, 에센스, 및 팩으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상으로 제형화 되는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
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