WO2013034845A2 - Principe actif issu de torulaspora delbrueckii et utilisation cosmetique pour ameliorer et/ou reparer la fonction barriere de la peau - Google Patents
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Definitions
- the skin is continually subjected to aggressions that lead to the destructuring of its barrier function.
- the enzymatic hydrolysis is preferably carried out using a protease, under conditions making it possible to obtain peptides with a molecular weight of less than 2000 Da.
- surfactants preferably emulsifiers, whether they are nonionic, anionic, cationic or amphoteric;
- the active principle according to the invention thus makes it possible to stimulate keratinocyte differentiation, and this effect is mainly dependent on the nAChR pathway.
- the cutaneous barrier plays a regulating role in the water balance of the skin. When this is harmed, it appears disturbances in the regulation of water exchanges. The water then migrates more easily to the outside environment, which increases the PIE. On the other hand, if the state of the cutaneous barrier improves, the values of water loss decrease because the regulation of the exchanges in water is ensured in a correct way.
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Abstract
L'objet de l'invention principe actif particulier issu de Torulaspora delbrueckii et son utilisation pour améliorer et/ou restaurer la fonction barrière de la peau. L'invention se rapporte également à des compositions cosmétiques renfermant ce principe actif et à un procédé cosmétique de soin pour améliorer et/ou restaurer la fonction barrière de la peau.
Description
PRINCIPE ACTIF ISSU DE TORULASPORA DELBRUECKII ET
UTILISATION COSMETIQUE POUR AMELIORER ET/OU REPARER LA
FONCTION BARRIERE DE LA PEAU
La présente invention se rapporte à l'utilisation cosmétique de Torulaspora de/brueckii comme principe actif cosmétique, en particulier pour améliorer et/ou réparer la fonction barrière de la peau, ainsi qu'à un procédé cosmétique de soin de la peau.
L'invention se rapporte également à un principe actif issu de Torulaspora de/brueckii, à un procédé d'obtention ainsi qu'à des compositions cosmétiques renfermant cet actif.
La fonction barrière de la peau est essentielle au maintien de l'hydratation et des propriétés physiques du tissu cutané. Elle résulte de la différenciation épidermique, processus séquentiel et orienté au cours duquel les kératinocytes subissent de nombreux changements morphologiques et métaboliques aboutissant à la stratification de l'épiderme et à la formation de la couche cornée.
La peau est continuellement soumise à des agressions qui conduisent à la déstructuration de sa fonction barrière.
L'altération de la barrière cutanée a des répercussions sur l'état de la peau. Elle peut notamment se traduire par un trouble de l'hydratation : la peau perd de son imperméabilité, elle se déshydrate et sa perte insensible en eau augmente.
Le brevet F -0953114 décrit une solution efficace pour améliorer et/ou réparer la fonction barrière cutanée, en utilisant dans une composition cosmétique au moins un agent augmentant l'expression des récepteurs nicotiniques à acétylcholine nAChRs des cellules de la peau.
L'objectif de la présente invention est de proposer un principe actif spécifique présentant un tel effet.
Pour y répondre, l'invention vise l'utilisation d'un principe actif issu de Toru/aspora de/brueckii.
Toru/aspora de/brueckii est une levure isolée à partir de massepain. Elle appartient à l'embranchement des ascomycètes, la classe des saccharomycètes, l'ordre des saccharomyceta/es, la famille des saccharomycetaceae, le genre Toru/aspora, l'espèce de/brueckii. Elle est également connue sous les synonymes suivants : Saccharomyces de/brueckii, Saccharomyces fermentati, Saccharomyces rosei.
Cette levure est utilisée dans l'industrie agro-alimentaire pour son pouvoir fermentaire.
Or, de façon surprenante, Toru/aspora de/brueckii présen e des effets notables au niveau de la peau avec des propriétés cosmétiques très intéressantes.
L'invention vise donc, un principe actif issu de Toru/aspora de/brueckii, comme principe actif cosmétique dans une composition destinée à être appliquée sur la peau, pour améliorer et/ou réparer la fonction barrière cutanée.
L'invention vise également spécifiquement un principe actif cosmétique comprenant des peptides de structure obtenus à partir de Toru/aspora de/brueckii ainsi qu'un procédé d'obtention de ce principe actif et des compositions cosmétiques incluant au moins un tel principe actif.
Préférentiellement, le principe actif selon l'invention est obtenu par hydrolyse de Toru/aspora de/brueckii.
Enfin, l'invention a également pour objet un procédé cosmétique de soin de la peau pour améliorer et/ou réparer la fonction barrière cutanée.
La présente invention est maintenant décrite en détail.
UTILISATION
L'invention concerne un principe actif issu de Torulaspora delbrueckii pour son application comme principe actif dans une composition à application topique. En particulier l'invention vise l'utilisation cosmétique d'un principe actif issu de Torulaspora delbrueckii en tant que principe actif cosmétique dans ou pour la préparation une composition cosmétique.
Par principe actif au sens de l'invention, on entend toute molécule ou mélange de molécules présentant une efficacité cosmétique sur la peau et non un excipient. Par principe actif issu de Torulaspora delbrueckii ou obtenu à partir de Torulaspora delbrueckii au sens de l'invention, on entend toute molécule ou mélange de molécules issu(es) de la structure du ferment Torulaspora delbrueckii : il peut s'agir de molécules natives de la levure ou de molécules obtenues par hydrolyse de la levure. Préférentiellement, il s'agit d'un hydrolysat de Torulaspora delbrueckii. Le terme principe actif au sens de l'invention exclut les molécules produites par fermentation de Torulaspora delbrueckii.
Par « hydrolysat » on entend tout extrait obtenu à partir de Torulaspora delbrueckii, comprenant au moins une étape d'hydrolyse enzymatique ou chimique, préférentiellement enzymatique.
L'invention vise en particulier l'utilisation d'un principe actif issu de Torulaspora delbrueckii en tant que principe actif cosmétique restructurant.
Selon l'invention un principe actif issu de Torulaspora delbrueckii ' peut en effet être utilisé comme agent cosmétique sur la peau pour améliorer et/ou réparer la fonction barrière cutanée. La présence en quantité suffisante de peptides, en particulier de peptides de poids moléculaire inférieur à 2000 Da, dans le principe actif de Torulaspora delbrueckii permet en particulier de lui conférer cette activité cosmétique.
Lorsqu'il est appliqué sur la peau, le principe actif issu de Torulaspora de/brueckii agit notamment sur la voie des récepteurs nicotiniques de l'acétylcholine nAChRs de la peau.
Les nAChRs sont des canaux ioniques dont l'ouverture est régulée par l'acétylcholine. Ils sont spécialisés dans le transport transmembranaire des cations et contrôlent de nombreux processus intervenant dans l'homéostasie de I epiderme. La stimulation des nAChRs induit l'influx de calcium et de sodium et l'efflux de potassium, ce qui permet de réguler finement les flux ioniques intracellulaires et de synchroniser les événements métaboliques intervenant tout au long de la différenciation épidermique.
Contrôlant l'influx de calcium dans les kératinocytes, les nACHRs interviennent fortement dans la régulation de la cohésion et de la différenciation des kératinocytes, processus largement impliqués dans la formation d'une fonction barrière optimale.
Avantageusement, selon l'invention, l'utilisation sur la peau d'un principe actif issu de Torulaspora de/brueckii permet de stimuler les nAChRs et ainsi de favoriser l'homéostasie épidermique.
La cohésion de l'épiderme repose sur la présence de complexes incluant des jonctions adhérentes de l'épiderme, qui assurent une forte adhésion entre les kératinocytes et qui sont nécessaires à la formation et au maintien de la fonction barrière. Ces jonctions unissent le cytosquelette d'actine de deux kératinocytes adjacents par l'intermédiaire d'une glycoprotéine transmembranaire localisée dans la membrane cytoplasmique des cellules, la cadhérine-E. En plus de leur rôle de point d'ancrage intercellulaire, ces jonctions fonctionnent également comme des plateformes de signalisation contrôlant le remaniement du cytosquelette, la migration cellulaire et la polarisation de l'épiderme.
Avantageusement, selon l'invention, l'application d'un principe actif issu de Torulaspora de/brueckii sur la peau permet de stimuler l'adhésion interkératinocytaire, notamment en stimulant la synthèse de cadhérine-E.
Au cours de leur migration vers la surface cutanée, les kératinocytes subissent des modifications biochimiques et structurales pour se transformer progressivement en cellules kératinisées. Les nAChRs sont impliqués dans la différenciation terminale et la cornif ication des kératinocytes. Ils influencent notamment l'expression par les kératinocytes des cytokératines 1 et 10, de la filaggrine et des protéines impliquées dans la formation de l'enveloppe cornée telles que l'involucrine, la loricrine et la transglutaminase-1.
Selon l'invention, l'application d'un principe actif issu de Torulaspora de/brueckii sur la peau, permet de stimuler la différenciation terminale des kératinocytes, notamment en stimulant la synthèse de loricrine.
L'invention vise donc un principe actif issu de Torulaspora de/brueckii pour son application comme principe actif dans une composition à application topique, le principe actif et/ou la composition étant utilisés pour stimuler les nAChRs présents sur les membranes des kératinocytes, et ainsi réguler l'homéostasie épidermique. Spécifiquement, le principe actif selon l'invention et/ou la composition l'incluant peuvent être utilisés pour :
- stimuler l'adhésion interkératinocytaire, notamment en stimulant la synthèse de cadhérine-E,
- stimuler la différenciation des kératinocytes, notamment en stimulant la synthèse de loricrine.
Ces actions ont pour effet d'accélérer la construction de l'épiderme, de favoriser sa cohésion et sa maturation, et d'améliorer ainsi la fonction barrière et l'état de surface de la peau.
Selon un mode de réalisation particulièrement adapté, l'invention vise l'utilisation d'un principe actif issu de Toru/aspora de/brueckii contenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000 Da, tel que décrit en suivant. PRINCIPE ACTIF
L'invention vise donc l'utilisation d'un principe actif issu de Toru/aspora de/brueckii 'en tant que principe actif dans une composition à application topique. L'invention concerne également un principe actif cosmétique particulier comprenant des peptides obtenus à partir de Toru/aspora de/brueckii, préférentiellement un principe actif comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000 Da obtenus à partir de Toru/aspora de/brueckii. Préférentiellement le principe actif selon l'invention comprenant des peptides obtenus à partir de Toru/aspora de/brueckii est un hydrolysat de Toru/aspora de/brueckii, et encore plus préférentiellement un hydrolysat enzymatique de Toru/aspora de/brueckii.
De façon préférée, le principe actif selon l'invention comprend une teneur en peptides supérieure ou égale à 42% par rapport à la teneur totale en matière sèche, préférentiellement supérieure à 60%.
Le principe actif cosmétique selon l'invention peut également comprendre des cendres, des carbohydrates et des polyphénols.
Le principe actif selon l'invention se présente préférentiellement sous forme liquide. Il peut être défini par au moins une des caractéristiques exposées ci- après, préférentiellement toutes.
Matières sèches :
Le taux de matières sèches d'un principe actif issu de Toru/aspora de/brueckii selon l'invention, mesuré par passage à l'étuve à 105°C en présence de sable jusqu'à obtention d'un poids constant, est compris entre 10 et 150 g/1, préférentiellement entre 18 et 28 g/1.
Mesure du H :
Le pH mesuré par la méthode potentiométrique à température ambiante conduit à des valeurs comprises entre 4,0 et 7,0, préférentiellement entre 5,3 et 6,3.
Protéines
Détermination de la teneur en protéines :
Le dosage de la teneur en protéines est réalisé selon la méthode de LOW Y (Lowry et al. Protein measurement with the folin reagent, J. Biol. Chem, 193, 265-275, 1951). La réaction de Folin donne une coloration bleue avec certains acides aminés. La coloration obtenue est comparée avec celle d'une courbe établie avec un sérum étalon.
La teneur en protéines totales est préférentiellement comprise entre 6,5 et 107 g/1, encore plus préférentiellement comprise entre 12 et 20 g/1.
La teneur en protéines peut aussi être exprimée en pourcentage par rapport à la matière sèche. Elle représente donc préférentiellement au moins 42% en poids par rapport à la matière sèche.
Caractérisation de la fraction protéique :
La caractérisation de la fraction protéique du principe actif selon l'invention est réalisée par exclusion stérique F.P.L.C (Fast Protein Liquid Chromatography). L'étalonnage de la colonne est réalisé par le passage de marqueurs de masse moléculaire définie (Cytochrome C, Aprotinine,
Vitamine B12 et Cytidine).
Les protéines du principe actif selon l'invention sont composées d'au moins 60% de peptides de poids moléculaire inférieur à 2000 Da.
Teneur en cendres brutes :
La teneur en cendres brutes est dé erminée par la pesée des résidus issus de l'incinération à 550°C dans un four à moufle électrique (VULCAN™). Le poids du résidu est calculé en déduisant la tare.
La teneur en cendres brutes est exprimée en pourcentage par rapport à la matière sèche.
La teneur en cendres brutes d'un principe actif selon l'invention est préférentiellement comprise entre 25 e†31%.
Carbohydrates :
Détermination de la teneur en sucres totaux
Le dosage de la teneur en sucres totaux peut être réalisé par la méthode de DUBOIS (DUBOIS M. et al.( (1956), Analytical chemistry, 28, n°3 p. 350- 356). En présence d'acide sulfurique concentré et de phénol, les sucres réducteurs donnent un composé jaune orangé. A partir d'une gamme étalon, on peut déterminer le taux de sucres totaux d'un échantillon.
La teneur en sucres totaux est préférentiellement comprise entre 6,2 et 7,7% en poids par rapport à la matière sèche.
Caractérisation des carbohydrates
Les masses moléculaires des carbohydrates présents dans le principe actif selon l'invention sont déterminées grâce à la chromatographie en phase liquide haute performance (CLHP).
La fraction glucidique du principe actif selon l'invention est composée de glucose, de mannose et de fructose, sous forme d'oligosaccharides de degré de polymérisation inférieur ou égal à 20 (poids moléculaire inférieur ou égal à 3600 Da).
Teneur en composés phénol iques :
Les composés phénol iques forment en présence de ferricyanure de potassium des composés colorés, détectables à 715 nm. L'intensité de coloration est proportionnelle à la quantité de composés phénoliques.
Les lectures sont réalisées à partir d'une gamme étalon d'acide gallique allant de 40 à 120 mg/l. Les résultats obtenus pour les étalons permettent
de tracer une droite densité optique en fonction de la concentration et le taux de polyphénols des échantillons est lu directement sur cette droite. La teneur en composés phénoliques d'un principe actif obtenu à partir de Toru/aspora de/brueckii selon l'invention est nférieure à 0,4% en pourcentage par rapport à la matière sèche.
Identification de la fraction active
Afin de déterminer la fraction active du principe actif selon l'invention, une étude a été réalisée. Cette étude est réalisée à partir du principe actif de l'exemple 1. Elle consiste à fractionner les espèces moléculaires du principe actif selon l'invention :
- une fraction A constituée de cendres, obtenue par ressolubilisation des résidus issus de l'incinération à 550°C dans un four à moufle électronique, reprise dans de l'eau distillée et filtrée,
- une fraction B contenant essentiellement de sucres, obtenue en purifiant les carbohydrates neutres du principe actif par adsorption successive des composés cationiques puis anioniques sur des résines Ioniques,
- une fraction C constituée essentiellement de peptides, obtenue en purifiant les peptides par adsorption / élution sur une résine échangeuse de cations.
L'étude consiste à comparer l'effet de ces différentes fractions dosées à 1% sur la synthèse de la loricrine, au résultat obtenu pour le principe actif selon l'invention à 1%. L'essai est réalisé sur kératinocytes humains normaux, selon le protocole opératoire décrit au point A.II de la partie sur l'évaluation de l'efficacité cosmétique.
Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau ci-après :
Les fractions A et B ne sont pas efficaces. C'est la fraction C qui confère au principe actif son activité.
L'analyse de la fraction C par HPLC (Chromatographie Liquide Haute
Performance), montre qu'elle est constituée de 86% de peptides dont 71% ont un poids moléculaire inférieur à 2000 Da.
Ce sont donc bien essentiellement les peptides, en particulier les peptides de poids moléculaire inférieur à 2000 Da qui confèrent au principe actif son efficacité.
PROCEDE D'OBTENTION
Un principe actif issu de Torulaspora delbrueckii selon l'invention peut être obtenu par un procédé qui permet d'obtenir et de concentrer le principe actif en terme de peptides, en particulier en terme de peptides de poids moléculaire inférieur à 2000 Da. Il comprend au moins les étapes suivantes :
- solubilisation aqueuse des ferments de Torulaspora delbrueckii, et
- au moins une hydrolyse enzymatique en vue d'obtenir des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000 Da.
Préférentiellement, il comprend au moins les étapes suivantes :
- solubilisation aqueuse des ferments de Torulaspora delbrueckii,
- séparation des phases soluble et insoluble pour récupérer la phase soluble,
- au moins une hydrolyse enzymatique en vue d'obtenir des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000 Da, et
- inactivation des activités enzymatiques.
Selon un mode de réalisation adapté, le procédé comprend au moins les étapes suivantes :
- solubilisation aqueuse des ferments de Toru/aspora de/brueckii, préférentiellement à raison de 20 g/l,
- séparation des phases soluble et insoluble pour récupérer la phase soluble,
- hydrolyse enzymatique pour obtenir des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000 Da,
- inactivation des activités enzymatiques par traitement thermique,
- f iltration(s) et concentration de la fraction active comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000 Da.
L'hydrolyse enzymatique est préférentiellement réalisée à l'aide d'une protéase, dans des conditions permettant d'obtenir des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000 Da.
Des étapes supplémentaires de f iltration et filtration stérilisante, de décoloration et/ou désodorisation peuvent être envisagées.
Le principe actif obtenu se présente sous la forme d'une solution aqueuse liquide limpide de couleur jaune clair.
COMPOSITIONS COSMÉTIQUES ET PROCÈDE COSMÉTIQUE DE SOIN DE LA PEAU
La présente invention couvre aussi les compositions cosmétiques incluant au moins un principe actif issu de Toru/aspora de/brueckii dans différentes formes galéniques, adaptées à l'administration par voie topique cutanée.
Ces compositions peuvent se présen er notamment sous forme d'émulsions huile- dans-eau, émulsions eau-dans-huile, émulsions multiples (Eau/Huile/Eau ou Huile/Eau/Huile) qui peuvent être éventuellement des microémulsions ou des nanoémulsions, ou sous forme de solutions, suspensions, hydrodispersion, gel aqueux ou poudres. Elles peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d'une pommade, d'un gel, d'une pâte ou d'une mousse, ou sous forme solide.
Ces compositions contiennent entre 0,01 et 20% en poids de principe(s) actif(s) issu(s) de Toru/aspora de/brueckii selon la présen e invention, préférentiellement entre 0,1% et 3%.
Ces compositions comprennent, outre le principe actif, un milieu physiologiquement acceptable et de préférence cosmétiquement acceptable, c'est-à-dire qui ne provoque pas de sensations d'inconfort inacceptables pour l'utilisateur, tels que des rougeurs, tiraillements ou picotements.
Les compositions selon l'invention peuvent contenir comme adjuvant au moins un composé choisi parmi :
- les huiles, qui peuvent être choisies notamment parmi les huiles de silicone, linéaires ou cycliques, volatiles ou non volatiles ;
- les cires, telles que l'ozokérite, la cire de polyéthylène, la cire d'abeille ou la cire de carnauba ;
- les élastomères de silicone,
- les tensioactifs, de préférence émulsionnants, qu'ils soient non ioniques, anioniques, cationiques ou amphotères ;
- les co-tensioactifs, tels que les alcools gras linéaires ;
- les épaississants et/ou gélifiants,
- les humectants, tels que les polyols comme la glycérine ;
- les filtres organiques,
- les filtres inorganiques,
- les colorants, les conservateurs, les charges,
- les tenseurs,
- les séquestrants,
- les parfums,
- et leurs mélanges, sans que cette liste soit limitative.
Des exemples de tels adjuvants sont cités notamment dans le Dictionnaire CTFA (International Cosmetic Ingrédient Dictionary and Handbook publié par le Personal Care Product Council).
Bien entendu, l'homme du métier veillera à choisir les éventuels composés complémentaires, actifs ou non-actifs, et leur quantité, de telle sorte que les propriétés avantageuses du mélange ne soient pas, ou sensiblement pas, altérées par l'adjonction envisagée.
Ces compositions sont notamment destinées au soin, au traitement, à la protection de la peau humaine contre les effets d'agressions internes ou externes diverses, en particulier à améliorer la fonction barrière et/ou l'état de surface de la peau.
L'invention vise à cet effet un procédé cosmétique de soin de la peau humaine, destiné à améliorer la fonction barrière et/ou l'état de surface de la peau, comprenant l'application topique sur la peau d'une composition renfermant un principe actif issu de Toru/aspora de/brueckii , en particulier une composition renfermant entre 0,01 et 20% en poids de principe(s) actif(s) issu(s) de Toru/aspora de/brueckii 'selon la présente invention.
EXEMPLES
Un exemple non limitatif de procédé d'obtention, de principe actif issu Toru/aspora de/brueckii comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000 Da, est présen é en suivant, ainsi que des exemples de composition incluant un tel principe actif. Exemple 1 : procédé d'obtention du principe actif selon l'invention
Un exemple de procédé d'obtention d'un principe actif selon l'invention, comprend la mise en oeuvre des étapes suivantes :
- solubilisation aqueuse à 20 g/1 de ferments de Toru/aspora de/brueckii,
- séparation des phases soluble et insoluble pour récupérer la phase soluble,
- hydrolyse enzymatique pour obtenir des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000 Da à l'aide d'une protéase,
- inactivation des activités enzymatiques par traitement thermique,
- décoloration par ajout d'adjuvant,
- f iltration afin d'éliminer les molécules de haut poids moléculaire,
- concentration de la fraction active comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000 Da,
- f iltration et f iltration stérilisante sur 0,22 μτη.
Le principe actif obtenu présente les caractéristiques suivantes :
- aspect : liquide limpide
- couleur : jaune clair
- teneur en matières sèches : 25,1 g/1
- pH : 5,8
- teneur en protéines totales : 16,2 g/1, soit 64,50% en poids par rapport à la matière sèche,
- teneur en en sucres totaux : 1,7 g/1, soit 6,95% en poids par rapport à la matière sèche,
- teneur en cendres : 7,10 g/1, soit 28,30% en poids par rapport à la matière sèche,
- teneur en polyphénols de 0,25% en poids par rapport à la matière sèche.
Exemple 2 : utilisation d'un principe actif selon l'invention dans un gel hydratant
La formulation est la suivante :
A. Eau QSP 100% Propylène glycol 4%
Carbopol Ultrez 10 (Lubrizol) 0,3%
B. Simulsol 1292DF (Seppic) 4% DUB PTCC (Stéarinerie Dubois) 6,3% Microcare C1024 (Thor) 3,3% DUB OLEINE V2 (Stéarinerie Dubois) 3,3%
Montanov 14 (Seppic) 3%
C. Conservateur 0,7%
Principe actif selon l'invention 3%
D. NaOH QSP pH 5,5 Ce gel émulsionné a un pH de 5,5.
Il peut être obtenu par la mise en oeuvre des étapes suivantes :
- mélanger A, bien disperser le gel,
- mélanger B,
- chauffer A et B séparément à 80°C sous agitation.
- émulsionner B dans A sous émulseur,
- ajouter C dans l'ordre à 40°C sous agitation rotor stator,
- ajuster le pH avec D à 30°C, lentement en veillant à la bonne homogénéisation du gel,
- laisser sous émulseur jusqu'à complet refroidissement.
Exemple 3 : utilisation d'un principe actif selon l'invention dans une crème de nuit La formulation est la suivante :
A. Eau QSP 100%
Carbopol 2050 (Noveon) 0,4%
B. DUB MCT 5545 (Stéarinerie Dubois) 4%
DUB 5E& (Stéarinerie Dubois) 3%
Alcool Cétylique (Stéarinerie Dubois) 1%
Sophiderm (Sophim) 9%
Beeswax ( ita) 1%
DUB DIOL (Stéarinerie Dubois) 6%
BIOPHILIC H (Lucas Meyer) 2%
C. Conservateur 0,7%
Principe actif selon l'invention 3%
D. NaOH QSP pH 6 Ce gel émulsionné blanc onctueux a un pH de 6.
Il peut être obtenu par la mise en oeuvre des étapes suivantes :
- mélanger A, bien disperser le gel,
- mélanger B,
- chauffer A et B séparément à 80°C sous agitation.
- émulsionner B dans A sous émulseur rotor sator de 1000 tours/minute,
- ajouter C dans l'ordre à 40°C sous agitation rotor stator,
- ajuster le pH avec D à 30°C, sous agitateur mécanique à 1500 tours/minute,
- laisser sous émulseur jusqu'à complet refroidissement.
Exemple 4 : utilisation d'un principe actif selon l'invention dans un gel
La formulation est la suivante :
A. Eau QSP 100% Carbopol ETD 2020 (Noveon) 0,2% B. Phoenate &C-7 (Phoenix Chemical) 1,2% DUB MCT (Stéarinerie Dubois) 0,8%
C. Conservateur 0,7% Principe actif selon l'invention 3%
D. NaOH QSP pH 6,3 Ce gel peut être obtenu par la mise en oeuvre des étapes suivantes :
- mélanger A, bien disperser le gel,
- mélanger B,
- émulsionner B dans A sous émulseur rotor sator de 1800 tours/minute,
- ajouter C dans l'ordre sous agitation rotor stator,
- ajuster le pH avec D lentement en veillant à la bonne homogénéisation du gel.
EVALUATION Ε L'EFFICACITE COSMETIQUE C>'UN PRINCIPE ACTIF SELON L'INVENTION
Ces essais ont pour objet d'illustrer l'invention, en montrant l'efficacité cosmétique du principe actif selon l'invention sur la peau, en particulier pour réparer ou améliorer la fonction barrière.
Le principe actif utilisé pour les essais est celui de l'exemple 1.
La composition utilisée pour les essais in vivo est celle de l'exemple 4.
A -Test in vitro
L'effet du principe actif selon l'invention sur la différenciation et l'adhésion des kératinocytes et son mécanisme d'action via la voie des nACHRs ont été étudiés grâce à l'utilisation d'un antagoniste et d'un agoniste des nAChRs évalués sur la synthèse de loricrine (sur kératinocytes humains en monocouche et sur épiderme reconstruit) et de cadhérine-E (sur épiderme reconstruit).
I. Modélisation
Le protocole utilisé pour valider l'agoniste et l'antagoniste des nAChRs est illustré en suivant pour la synthèse de loricrine sur épiderme reconstruit. Il s'applique également pour la synthèse de cadhérine-E sur épiderme reconstruit. Les inserts comprenant les épidermes en construction sont placés dans un milieu de culture contenant :
- de la mécamylamine 1000 μΜ (antagoniste réversible des nACHRs), ou
- de la nicotine 500 μΜ (agoniste réversible des nACHRs).
A J18, les inserts sont récupérés, f ixés, déshydratés et inclus en paraff ine. Des coupes sont réalisées puis un marquage immunohistologique de la loricrine est effectué.
La visualisation est ensuite réalisée sur un microscope couplé à un système d'analyse d'images. L'intensité de la fluorescence (couleur verte) est proportionnelle à la synthèse de loricrine.
Une analyse quantitative, réalisée à l'aide du logiciel Matlab® a permis d'obtenir les résultats suivants :
Synthèse de loricrine
Témoin non traité 100%
Mécamylamine 1000 μΜ 53%
Nicotine 500 μΜ 113%
On constate qu'en présence de mecamylamine, la synthèse de loricrine est réduite par rapport au témoin non traité alors qu'elle est augmentée lors du traitement avec la nicotine.
L'effet inhibiteur de la mécamylamine et l'effet stimulateur de la nicotine ont été également visualisés sur la synthèse de loricrine de kératinocytes humains sur monocouche et sur la synthèse de cadhérine-E sur épiderme reconstruit. La mécamylamine peut donc être utilisée comme antagoniste des nAChRs et la nicotine comme agoniste des nACHRs. II. Effet du principe actif sur la différenciation kératinocytaire
Cette étude a pour objectif d'évaluer l'efficacité d'un principe actif selon l'invention sur la différenciation kératinocytaire en étudiant la synthèse de loricrine. Elle a été réalisée par Western Blot sur kératinocytes humains normaux isolés à partir de prépuces, selon le protocole opératoire décrit en suivant.
A JO, les kératinocytes humains sont ensemencés puis incubés à 37°C.
A Jl et J4, les cellules sont traitées avec :
- 0,5% ou 1% de principe actif selon l'invention,
- 250μΜ de nicotine, agoniste des nAChRs, témoin positif,
- 350μΜ de mécamylamine, antagoniste des nAChRs, et
- 1% de principe actif selon l'invention en présence de 350 μΜ de mécamylamine.
Les cellules sont ensuite incubées à 37°C.
A J7, les extraits cellulaires sont récupérés et le dosage par Western blot est réalisé.
Les résultats obtenus en pourcentage par rapport au témoin négatif sont présentés en suivant :
Taux de loricrine/témoin (%)
Mécamylamine350 μΜ -57
Nicotine 250 μΜ +51
Principe actif selon l'invention 0,5% +75
Principe actif selon l'invention 1% +282
Principe actif selon l'invention 1%
-58
+ Mécamylamine350 μΜ
On constate que le principe actif selon l'invention ou la nicotine (témoin positif) augmente la synthèse de loricrine par les kératinocytes humains. Testé à 1%, il augmente cette synthèse de 282% dans les conditions de l'étude.
Par ailleurs, on constate qu'en présence de mécamylamine, inhibiteur réversible des nAChRs, l'augmentation de la synthèse de loricrine par le principe actif est fortement réduite (réduction de 58%) prouvant la dépendance de la voie des nACHRs.
Le principe actif selon l'invention permet donc de stimuler la différenciation kératinocytaire, et cet effet est majoritairement dépendant de la voie des nAChRs.
III. Effet du principe actif sur la maturation de l'épiderme
Cette étude a pour objectif d'évaluer la capacité d'un principe actif selon l'invention à favoriser la maturation de l'épiderme, soit la construction d'un épiderme cohésif et stratifié.
Cette construction épidermique a été évaluée à l'aide :
- d'un marqueur de différenciation terminale : la loricrine, et
- d'un marqueur impliqué dans la formation des jonctions adhérentes : la cadhérine-E.
Le protocole opératoire est décrit en suivant.
A JO, les keratinocytes humains sont cultivés dans un milieu de culture puis ensemencés sur insert. Le milieu de culture est changé tous les 2 jours en présence du principe actif selon l'invention à 1% avec ou sans mécamylamine à 1000 μΜ.
A J13 et/ou J18, les inserts sont récupérés, fixés, déshydratés et inclus en paraffine.
Des coupes sont ensuite réalisées puis un marquage immunohistologique de la loricrine ou de la cadhérine-E est effectué.
La visualisation est ensuite réalisée sur un microscope couplé à un système d'analyse d'images. L'intensité de la fluorescence (couleur verte) est proportionnelle à la synthèse de loricrine ou de la cadhérine.
Une analyse quantitative, réalisée à l'aide du logiciel Matlab® a permis d'obtenir les résultats suivants :
- de la loricrine, marqueur de la différenciation terminale kératinocytaire, et
- de la cadhérine-E, protéine impliquée dans la formation des jonctions adhérentes.
Testé à 1% le principe actif selon l'invention dans les conditions de l'étude permet d'augmenter de 22% la synthèse de loricrine et de 43% la synthèse de cadhérine-E.
En outre, en présence de la mécamylamine, inhibiteur réversible des nAChRs, l'efficacité du principe actif selon l'invention est réduite, ce qui montre bien que cet effet est majoritairement dépendant des nAChRs. A. Tests in vivo
I. Etude de la capacité à préserver la fonction barrière
L'objectif de l 'étude est de quantifier in vivo sur volontaires l'effet du principe actif selon l'invention formulé à 3% en gel-émulsionné sur la perte insensible en eau (PIE) de la peau, en comparaison au placébo après une perturbation artificielle de la fonction barrière à l'aide d'un détergent.
La barrière cutanée joue un rôle régulateur dans l'équilibre en eau de la peau. Lorsque celle-ci est lésée, il apparaît des dérèglements dans la régulation des échanges en eau. L'eau migre alors plus facilement vers le milieu extérieur, ce qui augmente la PIE. En revanche, si l'état de la barrière cutanée s'améliore, les valeurs de perte en eau diminuent car la régulation des échanges en eau est assurée de façon correcte.
La présente étude a été réalisée au niveau des bras sur 19 volontaires sams de sexe féminin, présentant une peau normale.
Les mesures ont été effectuées à l'aide d'un Tewamètre®, dispositif muni d'une sonde qui mesure le gradient de vapeur se mettant en place entre la surface cutanée et l'air ambiant. Cette mesure permet d'apprécier les échanges d'eau entre la surface cutanée et le milieu environnant.
Le protocole opératoire de l'étude est décrit en suivant.
Entre J-14 et JO, aucune crème n'a été appliquée au niveau des bras.
A JO, on détermine sur chaque volontaire des zones de mesure au niveau du haut des bras. Les zones de mesure sont les suivantes :
- zone non traitée
- zone traitée avec placebo
- zone traitée avec principe actif selon l'invention à 3%.
Des mesures de la PIE sont ensuite réalisées sur chaque zone au Tewamètre®. Entre JO et J6, les zones étudiées sont lavées avec un savon irritant, du Lauryl Sulfate de Sodium (SLS), et les volontaires appliquent également bi-quotidiennement le produit contenant le principe actif selon l'invention ou le placebo.
A J7, des mesures de la PIE sont réalisées sur chaque zone au Tewamètre®. Entre J7 et J13, les zones étudiées sont lavées avec un savon irritant, du Lauryl Sulfate de Sodium (SLS), et les volontaires appliquent également bi-quotidiennement le produit contenant le principe actif selon l'invention ou le placebo.
A J14, on réalise des dernières mesures de la PIE sur chaque zone au Tewamètre®. La moyenne des résultats obtenus avec le principe actif selon l'invention sont présentés dans le tableau suivant, en pourcentage de variation par rapport au placebo :
Dans les conditions de cette étude, on constate que dès 7 jours d'applications biquotidiennes, le principe actif selon l'invention formulé à 3% en gel-émulsionné diminue la PIE après agression répétée au SLS de 5,9% en comparaison au placebo. Cet effet se poursuit après 14 jours d'étude (diminution de 11% de la PIE).
Ces résultats montrent bien qu'un principe actif obtenu à partir de Torulaspora de/brueckii selon l'invention permet de limiter l'altération de la fonction barrière et préserver ainsi l'intégrité du stratum corneum.
II. Etude de la capacité à réparer la fonction barrière préalablement altérée a) Mesure de la PIE
L'objectif de l 'étude est de quantifier in vivo sur volontaires l'effet du principe actif selon l'invention formulé à 3% en gel-émulsionné sur la perte insensible en eau (PIE) de la peau, en comparaison au placébo sur une peau dont la fonction barrière a été préalablement perturbée artificiellement par un détergent, le Lauryl Sulfate de Sodium (SLS).
L'étude a été réalisée au niveau des mollets sur 19 volontaires sams de sexe féminin présentant une peau normale.
Les mesures ont été effectuées à l'aide d'un Tewamètre®.
Le protocole opératoire de l'étude est décrit en suivant.
Entre J-14 et 1-7 , aucune crème n'a été appliquée au niveau des bras.
Entre J-7 et J-l, les volontaires appliquent un savon irritant (SLS) sur les zones étudiées.
A JO, on détermine sur chaque volontaire des zones de mesure au niveau des mollets. Les zones de mesure sont les suivantes :
- zone non traitée
- zone traitée avec placebo
- zone traitée avec principe actif selon l'invention à 3%.
Des mesures de la PIE sont ensuite réalisées sur chaque zone au Tewamètre®.
Entre JO et J6, les volontaires appliquent également biquotidiennement le produit contenant le principe actif selon l'invention ou le placebo sur les zones étudiées.
A J7, des mesures de la PIE sont réalisées sur chaque zone au Tewamètre®.
Entre J7 et J13, les volontaires appliquent également biquotidiennement le produit contenant le principe actif selon l'invention ou le placebo sur les zones étudiées.
A J14, on réalise des dernières mesures de la PIE sur chaque zone au Tewamètre®.
La moyenne des résultats obtenus avec le principe actif selon l'invention sont présentés dans le tableau suivant, en pourcentage de variation par rapport au placebo :
Dans les conditions de cette étude, on constate que dès 7 jours d'applications biquotidiennes, le principe actif selon l'invention formulé à 3% en gel-émulsionné diminue la PIE d'une peau présentant une fonction barrière altérée au SLS de 5,4% en comparaison au placebo.
Cet effet se poursuit après 14 jours d'étude (diminution de 11% de la PIE).
Ces résultats montrent bien que l'application sur la peau d'un principe actif obtenu à partir de Toru/aspora de/brueckii selon l'invention conduit à une diminution des pertes en eau de la peau, permettant ainsi de restaurer l'effet barrière d'une peau préalablement altérée. b) Evaluation de l'état de surface de la peau observé à l'échelle cellulaire L'objectif de l'étude est de quantifier in vivo sur volontaires l'effet du principe actif selon l'invention formulé à 3% en gel-émulsionné sur l'état de surface de la peau observée à l'échelle cellulaire par microscopie confocale, en comparaison au placébo sur une peau dont la fonction barrière a été préalablement perturbée artificiellement par un détergent, le Lauryl Sulfate de Sodium (SLS).
L'étude a été réalisée au niveau des mollets sur 19 volontaires sains de sexe féminin présentant une peau normale.
Les acquisitions (correspondant à des coupes horizontales de la peau) ont été réalisées à l'aide d'un microscope confocal sur les volontaires au niveau du stratum corneum après application locale de fluorescéine. La fluorescéine agit comme un agent de contraste. Elle diffuse dans les tissus et les espaces
interstitiels librement, et ne se lie pas spécifiquement. Elle s'immisce ainsi dans les cellules du stratum corneum et s'accumule dans les zones plus épaisses telles que les squames. Après nettoyage de la fluorescéine excédentaire, l'acquisition est réalisée à l'aide d'un laser 445 nm en mode fluorescence. Les images obtenues sont ensuite traitées puis analysées visuellement en aveugle par un jury entraîné, selon les paramètres indiqués dans le tableau suivant :
Le protocole opératoire de l'étude est décrit en suivant.
10 Entre J-14 et J-7, aucune crème n'a été appliquée au niveau des mollets.
Entre J-7 et J-l, les volontaires appliquent un savon irritant (SLS) sur les zones étudiées.
A JO, on détermine sur chaque volontaire des zones de mesure au niveau des mollets. Les zones de mesure sont les suivantes :
15 - zone non traitée
- zone traitée avec placebo
- zone traitée avec principe actif selon l'invention à 3%.
Des mesures de la PIE sont ensuite réalisées sur chaque zone au Tewamètre®. Entre JO et J6, les volontaires appliquent également biquotidiennement le produit 20 contenant le principe actif selon l'invention ou le placebo sur les zones étudiées.
A J7, des mesures de la PIE sont réalisées sur chaque zone au Tewamètre®.
Entre J7 et J13, les volontaires appliquent également biquotidiennement le produit contenant le principe actif selon l'invention ou le placebo sur les zones étudiées.
A J14, on réalise des dernières mesures de la PIE sur chaque zone au Tewamètre®. La moyenne des résultats obtenus avec le principe actif selon l'invention sont présentés dans le tableau suivant, en pourcentage de variation par rapport au placebo :
Dans les conditions de cette étude, on constate que dès 7 jours d'applications biquotidiennes, le principe actif selon l'invention formulé à 3% en gel-émulsionné améliore l'aspect de surface de la peau de 19,9% en comparaison au placebo. Cet effet se poursuit après 14 jours d'étude (amélioration de 25,7% de la PIE). Ces résultats montrent bien que l'application sur la peau d'un principe actif obtenu à partir de Toru/aspora de/brueckii selon l'invention permet de restaurer l'organisation cellulaire de la couche superficielle de la peau.
Claims
1. Principe actif cosmétique caractérisé en ce qu'il comprend des peptides obtenus à partir de Toru/aspora de/brueckii.
2. Principe actif cosmétique selon la revendication 1 caractérisé en ce qu'il comprend des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000 Da obtenus à partir de Toru/aspora de/brueckii.
3. Principe actif cosmétique selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce qu'il s'agit d'un hydrolysat de Toru/aspora de/brueckii.
4. Principe actif cosmétique selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu'il s'agit d'un hydrolysat obtenu par hydrolyse enzymatique de Toru/aspora de/brueckii.
5. Principe actif cosmétique selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu'il comprend une teneur en peptides supérieure ou égale à 42% par rapport à la teneur totale en matière sèche.
6. Principe actif cosmétique selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu'il présente un taux de matière sèche compris entre 10 et 150 g/1.
7. Principe actif cosmétique selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu'il présente au moins une de caractéristiques suivantes :
- taux de matière sèche compris entre 18 et 28 g/1,
- teneur en cendres brutes comprise entre 25 et 31% en poids par rapport à la matière sèche,
- teneur en sucres totaux comprise entre 6,2 et 7,7% en poids par rapport à la matière sèche.
8. Principe actif selon l'une des précédentes revendications, pour son application comme principe actif dans une composition à application topique, ledit principe actif et/ou ladite composition étant destinés à améliorer la fonction barrière et/ou l'état de surface de la peau.
9. Principe actif selon l'une des précédentes revendications, pour son application comme principe actif dans une composition à application topique, ledit principe actif et/ou ladite composition étant destinés à stimuler et/ou augmenter l'expression des récepteurs nicotiniques à acétylcholine des cellules de la peau.
10. Principe actif selon l'une des précédentes revendications, pour son application comme principe actif dans une composition à application topique, ledit principe actif et/ou ladite composition étant destinés à stimuler l'adhésion interkératinocytaire dans l'épiderme.
11. Principe actif selon l'une des précédentes revendications, pour son application comme principe actif dans une composition à application topique, ledit principe actif et/ou ladite composition étant destinés à stimuler la différenciation des kératinocytes dans l'épiderme.
12. Composition cosmétique pour application topique, caractérisée en ce qu'elle comprend entre 0,01 et 20% en poids un principe actif selon l'une des revendications 1 à 11.
13. Procédé cosmétique de soin de la peau humaine, pour améliorer et/ou restaurer la fonction barrière de la peau, comprenant l'application topique sur la peau d'une composition selon la revendication 12.
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