FR2975298A1 - Utilisation cosmetique de peptides de cynara scolymus - Google Patents
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Abstract
L'objet de l'invention est l'utilisation de peptides de poids moléculaire inférieur à 2000Da issus de feuilles de Cynara scolymus pour normaliser l'épaisseur de la peau et/ou augmenter l'hydratation et/ou atténuer les rides de la peau du visage, en particulier des peaux ménopausées. L'invention se rapporte également à des principes actifs particuliers issus de feuilles de Cynara scolymus, aux compositions cosmétiques les incluant et à un procédé cosmétique de soin de la peau.
Description
UTILISATION COSMETIQUE DE PEPTIDES DE CYNARA SCOLYMUS
La présente invention se rapporte à l'utilisation de molécules spécifiques issues de Cynara sco/ymus, ainsi qu'à un principe actif particulier contenant de telles molécules, pour une action cutanée hydratante et antirides, particulièrement adaptée aux peaux ménopausées.
L'invention concerne également un procédé d'obtention de ce principe actif, les compositions l'incluant, et un procédé de traitement cosmétique anti-âge destiné au soin de la peau du visage, en particulier au soin de la peau ménopausée. A la ménopause, le ralentissement de l'activité hormonale conduit à l'aggravation et à l'accélération brutale du vieillissement cutané. Au-delà du vieillissement chronobiologique et photo-induit et de divers stimuli exogènes et endogènes, le déficit en oestrogènes dû à la ménopause entraîne des conséquences importantes sur la biologie et l'aspect de la peau. Au niveau du derme, on constate une perte de densité causée par une chute du contenu en collagènes et en glucoaminoglycanes, et par une accentuation de la dégradation des fibres élastiques. Ces modifications conduisent à une diminution de l'hydratation et de l'élasticité du tissu, qui se traduit visuellement par un relâchement et des rides plus prononcés. Au niveau de l'épiderme, l'activité mitotique des kératinocytes décroit et la cohésion des cornéocytes est altérée, ce qui entraîne une atrophie et un dessèchement de l'épiderme associés à une sensation de peau rêche et squameuse qui tiraille. En outre, la peau ménopausée plus fine est fragilisée et devient plus sensible aux stress extérieurs comme les variations de températures ou les irradiations UV.
En particulier, le taux de fer augmente et conduit à un accroissement de la production de métalloprotéinases MMP-1 par les fibroblastes exposés aux irradiations UVA, favorisant ainsi le photo-vieillissement de la peau. Aussi, face à ces constats, les femmes ménopausées recherchent aujourd'hui des produits cosmétiques adaptés à leur peau, capables de combattre efficacement l'accentuation brutale des signes du vieillissement cutané liée à la ménopause. L'objectif de la présente invention est de répondre à ce besoin en proposant un principe actif cosmétique spécifique avec une action ciblée qui permet de compenser le vieillissement hormonal de la peau.
A cet effet, l'invention se propose d'utiliser des peptides purifiés de poids moléculaire inférieur à 2000ba issus de feuilles de Cynara scolymus, qui, de façon surprenante, permettent d'hydrater et d'atténuer les rides des peaux ménopausées en compensant les carences cellulaires tant au niveau du derme que de l'épiderme.
Cynara scolymus ou artichaut, est une plante utilisée dans l'alimentation mais également pour ses vertus médicinales, notamment pour ses propriétés antioxydantes, hépatoprotectrices, cholérétiques et cardiovasculaires. Par ailleurs, l'utilisation de molécules issues de feuilles d'artichaut dans des compositions cosmétiques est également connue. En particulier, on connaît l'utilisation d'acide caffeoylquinique comme amincissant, ou encore d'acide caffeoylquinique ou de cynaropicrine comme anti-inflammatoire dans des compositions destinées à combattre le vieillissement de la peau. La demande de brevet JP-2006206532 décrit en particulier l'utilisation de cynaropicrine comme inhibiteur de NF-KappaB, pour une efficacité anti-inflammatoire pour combattre certaines maladies et le vieillissement cutané. Toutefois, ces extraits existants ne présentent pas une action ciblée sur le derme et l'épiderme pour compenser les carences cellulaires de la peau et lutter contre le vieillissement hormonal cutané. En outre, les molécules utilisées, en particulier l'acide cafféoylquinique, possèdent une couleur qui se modifie au contact de l'air, propriété peu compatible avec la fabrication de produits cosmétiques type crème blanche. L'invention vise donc l'utilisation de peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba issus de feuilles de Cynara sco/ymus, ou d'un hydrolysat de feuilles de Cynara scolymus comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba, en tant que principe actif cosmétique dans une composition cosmétique, ledit principe actif et/ou ladite composition étant destiné(s) à normaliser l'épaisseur de la peau et/ou augmenter l'hydratation et/ou atténuer les rides de la peau du visage, en particulier des peaux ménopausées. Par « hydrolysat » on entend tout extrait obtenu à partir de feuilles de Cynara scolymus, comprenant au moins une étape d'hydrolyse enzymatique ou chimique, préférentiellement enzymatique. L'invention vise également un principe actif cosmétique particulier à savoir un hydrolysat de feuilles de Cynara scolymus comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba, ainsi qu'un procédé d'obtention d'un tel principe actif. Avantageusement le procédé d'obtention selon l'invention est simple à mettre en oeuvre et permet d'obtenir des principes actifs de couleur ambrée, facilement formulables pour la fabrication de produits cosmétiques.
Selon un autre aspect, l'invention vise aussi des compositions cosmétiques incluant entre 0,01 et 20% d'un principe actif cosmétique comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba de feuilles de Cynara scolymus. Ces compositions peuvent se présenter sous toutes formes permettant l'application par voie topique.
Enfin, l'invention a également pour objet un procédé cosmétique de soin de la peau, destiné à augmenter l'hydratation de la peau du visage et/ou à atténuer les rides et/ou normaliser l'épaisseur cutanée, notamment des peaux ménopausées, comprenant l'application topique d'une composition renfermant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba issus de feuilles de Cynara sco/ymus Avantageusement, la présente invention permet d'agir à la fois sur la normalisation de la croissance des cellules épidermiques et sur le maintien de la matrice dermique, pour lutter contre le vieillissement cutané, en particulier pour combattre efficacement l'accentuation brutale des signes de vieillissement liée à la ménopause. La présente invention est maintenant décrite en détail.
UTILISATION Selon un premier aspect, l'invention vise l'utilisation de peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba issus de feuilles de Cynara sco/ymus, ou d'un hydrolysat de feuilles de Cynara sco/ymus comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba, en tant que principe actif cosmétique dans une composition cosmétique, pour augmenter l'hydratation et/ou atténuer les rides de la peau du visage. L'invention est particulièrement utile pour les peaux ménopausées, et vise l'utilisation de peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba issus de feuilles de Cynara sco/ymus, ou d'un hydrolysat de feuilles de Cynara sco/ymus comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba, en tant que principe actif cosmétique dans une composition cosmétique destinée aux peaux ménopausées. Préférentiellement, la composition cosmétique est une composition cosmétique anti-âge. En particulier, l'invention vise l'utilisation de peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba issus de feuilles de Cynara sco/ymus, ou d'un hydrolysat de feuilles de Cynara sco/ymus comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba, en tant que principe actif cosmétique dans une composition cosmétique, pour compenser les carences cellulaires à l'origine du vieillissement cutané au niveau du derme et de l'épiderme, et maintenir l'épaisseur de la peau. Au niveau de l'épiderme, les peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba issus de feuilles de Cynara sco/ymus, ou un hydrolysat de feuilles de Cynara sco/ymus comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba, peuvent être utilisés pour normaliser la croissance des kératinocytes, notamment en stimulant l'expression du récepteur à l'EGF (« Epidermal Growth Factor » facteur de croissance de l'épiderme) localisé au niveau de la membrane des kératinocytes, dont l'activation induit une cascade de signalisation complexe contrôlant différents aspects de la biologie des kératinocytes comme la prolifération, la différenciation et la cicatrisation. Avantageusement, une telle utilisation est particulièrement adaptée aux peaux ménopausées, car à la ménopause, l'activité mitotique des kératinocytes décroît avec les fluctuations hormonales, entraînant un amincissement de l'épiderme et l'expression du récepteur à l'EGF (EGRF) est significativement réduite. Le demandeur a en effet mis en évidence que l'expression de l'EGFR par les kératinocytes issus de peaux ménopausées était significativement réduite en comparaison de l'expression de l'EGFR par les kératinocytes issus de peaux non ménopausées, et a montré que l'utilisation de peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba issus de feuilles de Cynara sco/ymus ou d'un hydrolysat de feuilles de Cynara sco/ymus comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba, tendait à restaurer cette expression. Au niveau du derme, les peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba issus de feuilles de Cynara sco/ymus, ou un hydrolysat de feuilles de Cynara sco/ymus comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba, peuvent être utilisés pour : -stimuler la synthèse des composants matriciels du derme, notamment du collagène I, et/ou - limiter la dégradation de la matrice extracellulaire, en inhibant la production de métalloprotéinases MMP-1 dans les cellules dermiques. De façon avantageuse, une telle utilisation est particulièrement adaptée aux peaux ménopausées. En effet, suite à la ménopause, le derme perd au moins 30% de son contenu en collagènes I et III dans les cinq premières années, avec une diminution moyenne de 2,1% par an sur une période de 20 ans. En outre, parallèlement aux fluctuations hormonales, le taux de fer est largement augmenté lors de la ménopause. Cet excès de fer potentialise la sensibilité des fibroblastes à l'activité des métalloprotéinases MMP-1 induite par les UVA et exacerbe la dégradation de la matrice extracellulaire observée avec le vieillissement cutané. En préservant la croissance des kératinocytes et en consolidant le matelas dermique, l'invention permet de maintenir l'épaisseur de la peau, d'augmenter l'hydratation et de lisser le microrelief cutané. Elle peut être avantageusement utilisée pour combattre l'accentuation brutale des signes de vieillissement liée à la ménopause. Selon un mode de réalisation particulièrement adapté, l'invention vise l'utilisation d'un principe actif issu de feuilles de Cynara sco/ymus contenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000Da, tel que décrit en suivant.
PRINCIPE ACTIF L'invention concerne également un principe actif cosmétique particulier, à savoir un hydrolysat de feuilles de Cynara sco/ymus comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000Da.
Le principe actif selon l'invention peut également comprendre d'autres molécules, en particulier des carbohydrates. De façon préférée les peptides de poids moléculaire inférieur à 2000Da représentent au moins 80% en poids des protéines totales du principe actif.
Le principe actif selon l'invention est préférentiellement un hydrolysat issu d'un procédé comprenant une hydrolyse enzymatique. Le principe actif présente préférentiellement une couleur ambrée, stable. Il peut se présenter sous forme liquide et être défini par au moins une des caractéristiques exposées ci-après, préférentiellement toutes. Matières sèches : Le taux de matières sèches d'un principe actif selon l'invention (mesuré par passage à l'étuve à 105°C en présence de sable d'un échantillon de poids initial donné jusqu'à obtention d'un poids constant) peut être compris entre 10 et 150 g/I, préférentiellement entre 19 et 32 g/I. Mesure du pH : Le pH (mesuré par la méthode potentiométrique à température ambiante) peut être compris entre 3,0 et 6,0, préférentiellement entre 3,0 et 4,0. Carbohydrates: Détermination de la teneur en sucres totaux Le dosage de la teneur en sucres totaux peut être réalisé par la méthode de DUBOIS (DUBOIS M. et al., (1956), Analytical chemistry, 28, n°3 p. 350-356). En présence d'acide sulfurique concentré et de phénol, les sucres réducteurs donnent un composé jaune orangé. A partir d'une gamme étalon, on peut déterminer le taux de sucres totaux d'un échantillon. La teneur en sucres totaux est préférentiellement comprise entre 20% et 67% en poids par rapport à la matière sèche. Caractérisation des carbohydrates Les masses moléculaires des carbohydrates présents dans le principe actif selon l'invention sont déterminées grâce à la chromatographie en phase liquide haute performance (CLHP). La fraction glucidique du principe actif selon l'invention est composée de fructose, de glucose, de sucrose et de mannose sous forme d'oligosaccharides de degré de polymérisation inférieur ou égal à 7 (poids moléculaire inférieur ou égal à 1300 Da), et majoritairement sous forme de monosaccharides (poids moléculaire inférieur à 180 Da).
Protéines Détermination de la teneur en protéines : Le dosage de la teneur en protéines est réalisé selon la méthode de LOWRY (Lowry et al. Protein measurement with the folin reagent, J. Biol. Chem, 193, 265-275, 1951). Le réaction de Folin donne une coloration bleue avec certains acides aminés. La coloration obtenue est comparée avec celle d'une courbe établie avec un sérum étalon. La teneur en protéines totales est préférentiellement comprise entre 1 et 24 g/I, encore plus préférentiellement comprise entre 2,0 et 5,0 g/I. La teneur en protéines peut aussi être exprimée en pourcentage par rapport à la matière sèche. Elle représente donc préférentiellement entre 6 et 27 % en poids par rapport à la matière sèche. Caractérisation de la fraction protéique : La caractérisation de la fraction protéique du principe actif selon l'invention est réalisée par exclusion stérique F.P.L.0 (Fast Protein Liquid Chromatography). L'étalonnage de la colonne est réalisé par le passage de marqueurs de masse moléculaire définie (Cytochrome C, Aprotinine, Vitamine B12 et Cytidine). Les protéines du principe actif selon l'invention sont composées d'au moins 80% de peptides inférieurs à 2000Da.
Teneur en cendres brutes : La teneur en cendres brutes est déterminée par la pesée des résidus issus de l'incinération à 550°C dans un four à moufle électrique (VULCANTM) Le poids du résidu est calculé en déduisant la tare. La teneur en minéraux est exprimée en pourcentage par rapport à la matière sèche. La teneur en cendres brutes d'un principe actif selon l'invention est préférentiellement comprise entre 20 et 42%. Teneur en composés phénoliques Les composés phénoliques forment en présence de ferricyanure de potassium des composés colorés, détectables à 715nm. L'intensité de coloration est proportionnelle à la quantité de composés phénoliques.
Les lectures sont réalisées à partir d'une gamme étalon d'acide gallique allant de 40 à 120 mg/I. Les résultats obtenus pour les étalons permettent de tracer une droite densité optique en fonction de la concentration et le taux de polyphénols des échantillons est lu directement sur cette droite. La teneur en composés phénoliques d'un principe actif selon l'invention est inférieure à 4% en pourcentage par rapport à la matière sèche. Identification de la fraction active Afin de déterminer la fraction majoritairement active du principe actif selon l'invention, une étude a été réalisée. Cette étude consiste à fractionner les espèces moléculaires du principe actif selon l'invention : - une fraction A constituée de cendres, obtenue par ressolubilisation des résidus issus de l'incinération à 550°C dans un four à moufle électronique, reprise dans de l'eau distillée et filtrée, - une fraction B contenant des sucres libres, obtenue par hydrolyse des oligosaccharides en sucres simples, et des peptides non hydrolysés du principe actif, - une fraction C constituée de carbohydrates et d'une partie des peptides du principe actif.
L'étude consiste à comparer l'effet de ces différentes fractions sur la synthèse de collagène I, au résultat obtenu pour le principe actif selon l'invention à 2%. L'essai est réalisé sur fibroblastes humains de peaux ménopausées, selon le protocole opératoire décrit en suivant.
A JO, les fibroblastes de derme de peaux ménopausées sont ensemencés dans un milieu de culture, puis incubés à 37°C. A J2, les fibroblastes sont traités avec le principe selon l'invention et les fractions A,B, C et du principe actif à 2%, puis incubés. A J3, les surnageants sont récupérés et un immunomarquage est réalisé.
Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau ci-après Taux de collagène I / Témoin (%) Principe actif à 2% +243 Fraction A 2% 0 Fraction B 2% +169 Fraction C 2% 0 Les fractions A et C ne sont pas efficaces. C'est la fraction B qui confère au principe actif son activité.
L'analyse de la fraction B par HPLC (Chromatographie Liquide Haute Performance), montre qu'elle est constituée de sucres et de peptides. Les sucres contenus en totalité dans la fraction C n'étant pas efficaces, ce sont les peptides qui sont efficaces. Par ailleurs, afin de connaître la famille de peptides responsable de 20 l'efficacité du principe actif selon l'invention, une étude supplémentaire a été réalisée sur la fraction B séparée en : - une fraction D contenant les peptides de masse molaire comprise entre 2000 et 5000 Da, et une fraction E contenant les peptides de masse molaire inférieure à 2000Da. L'étude consiste à comparer l'effet de ces différentes fractions sur la synthèse de collagène I, au résultat obtenu pour le principe actif selon l'invention à 2%. L'essai est réalisé sur fibroblastes humains de peaux ménopausées, selon le même protocole que précédemment. Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau ci-après Taux de collagène I / Témoin (%) Principe actif à 2% +243 Fraction D 2% 0 Fraction E 2% +158 Ce sont donc bien les peptides de poids moléculaire inférieur à 2000 Da qui confèrent au principe actif son efficacité.
PROCEDE D'OBTENTION Le principe actif selon l'invention tel que décrit précédemment peut être obtenu 15 préférentiellement par un procédé comprenant une hydrolyse enzymatique. Un procédé particulièrement adapté comprend au moins la succession des étapes suivantes : - solubilisation de poudre de feuilles de Cynara sco/ymus dans l'eau, - hydrolyse enzymatique à l'aide d'une protéase, 20 - séparation des phases soluble et insoluble, - inactivation des activités enzymatiques par traitement thermique, - ultrafiltration et récupération du filtrat pour récupérer les peptides de poids moléculaire inférieur à 2000 Da, - filtration et filtration stérilisante, ainsi qu'une ou plusieurs étapes d'ajout d'un adjuvant pour éliminer les composés phénoliques au cours du procédé. Les paramètres des différentes étapes doivent être ajustés afin d'obtenir des principes actifs comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba, en particulier un principe actif comprenant des protéines dont au moins 80% sont des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba.
COMPOSITIONS COSMETIQUES ET PROCEDE COSMETIQUE DE SOIN DE LA PEAU La présente invention couvre aussi les compositions cosmétiques incluant un hydrolysat de feuilles de Cynara sco/ymus comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba, dans différentes formes galéniques, adaptées à l'administration par voie topique cutanée. Ces compositions peuvent se présenter notamment sous forme d'émulsions huiledans-eau, émulsions eau-dans-huile, émulsions multiples (Eau/Huile/Eau ou Huile/Eau/Huile) qui peuvent être éventuellement des microémulsions ou des nanoémulsions, ou sous forme de solutions, suspensions, hydrodispersions, gels aqueux ou poudres. Elles peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d'une pommade, d'un gel, d'une pâte ou d'une mousse, ou sous forme solide.
Ces compositions sont préférentiellement des compositions contenant entre 0,01 et 20%, en poids d'un ou plusieurs hydrolysat(s) de feuilles de Cynara sco/ymus comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba selon la présente invention, préférentiellement entre 0,1% et 3%. Ces compositions comprennent, outre l'actif, un milieu physiologiquement acceptable et de préférence cosmétiquement acceptable, c'est-à-dire qui ne provoque pas de sensations d'inconfort inacceptables pour l'utilisateur tels que des rougeurs, tiraillements ou picotements.
Les compositions selon l'invention peuvent contenir comme adjuvant au moins un composé choisi parmi : - les huiles, qui peuvent être choisies notamment parmi les huiles de silicone, linéaires ou cycliques, volatiles ou non volatiles ; - les cires, telles que l'ozokérite, la cire de polyéthylène, la cire d'abeille ou la cire de carnauba ; - les élastomères de silicone, - les tensioactifs, de préférence émulsionnants, qu'ils soient non ioniques, anioniques, cationiques ou amphotères ; - les co-tensioactifs, tels que les alcools gras linéaires ; - les épaississants et/ou gélifiants, - les humectants, tels que les polyols comme la glycérine ; - les filtres organiques, - les filtres inorganiques, - les colorants, les conservateurs, les charges, - les tenseurs, - les séquestrants, - les parfums, - et leurs mélanges, sans que cette liste soit limitative.
Des exemples de tels adjuvants sont cités notamment dans le Dictionnaire CTFA (International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook publié par le Personal Gare Product Council). Bien entendu, l'homme du métier veillera à choisir les éventuels composés complémentaires, actifs ou non-actifs, et leur quantité, de telle sorte que les propriétés avantageuses du mélange ne soient pas, ou sensiblement pas, altérées par l'adjonction envisagée. Ces compositions sont notamment destinées à augmenter l'hydratation et/ou atténuer les rides de la peau du visage, en particulier des peaux ménopausées.
L'invention vise à cet effet un procédé cosmétique de soin de la peau humaine, destiné à augmenter l'hydratation et/ou atténuer les rides de la peau du visage, en particulier des peaux ménopausées, comprenant l'application topique d'une composition renfermant des peptides de feuilles de Cynara sco/ymus de poids moléculaire inférieur à 2000Da ou un principe actif en contenant, en particulier d'une composition renfermant entre 0,01 et 20% en poids de principe(s) actif(s) issu(s) de feuilles de Cynara sco/ymus selon la présente invention.
EXEMPLES Un exemple non limitatif de procédé d'obtention, de principe actif obtenu à partir de feuilles de Cynara sco/ymus comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000Da, est présenté en suivant, ainsi que des exemples de composition incluant un tel principe actif.
Exemple 1 : procédé d'obtention du principe actif selon l'invention Un exemple de procédé d'obtention d'un principe actif selon l'invention, comprend la mise en oeuvre des étapes suivantes : - solubilisation de poudre de feuilles de Cynara sco/ymus dans l'eau à raison de 50 g/I, - hydrolyse enzymatique à l'aide d'une protéase, - ajout d'un adjuvant pour éliminer les composés phénoliques, - séparation des phases soluble et insoluble par décantation, - inactivation des activités enzymatiques par traitement thermique à 90°C, - ajout d'un adjuvant pour éliminer les composés phénoliques, - ultrafiltration et récupération du filtrat avec une membrane adaptée pour récupérer les peptides de poids moléculaire inférieur à 2000 Da, - filtration et filtration stérilisante.
Le principe actif obtenu présente les caractéristiques suivantes : - aspect : liquide limpide - couleur : ambré - teneur en matières sèches : 25,2g/I - pH:3,5 - teneur en sucres totaux : 8,7g/l, soit 34% en poids par rapport à la matière sèche, - teneur en protéines totaux : 2,9 g/I, soit 11% en poids par rapport à la matière sèche, - teneur en polyphénols de 0,6% en poids par rapport à la matière sèche. Le pourcentage de peptides de poids moléculaire inférieur à 2000Da est d'environ 91% des protéines totales.
Exemple 2 : utilisation d'un principe actif selon l'invention dans une crème de nuit Phase A . Eau QSP 100% Phase B. Pelemol 2014 (Phoenix Chemical, Inc) 20% SOPHIDERM (Sophim) 7% Diamant N (Aiglon SA) 5% DUB GMS AE (Stéarinerie Dubois) 4% Simulsol CS (Seppic) 2% Emulgade 1000 MI (Cognis) 2% Cethyl Alcohol (Stéarinerie Dubois) 2% DUB MM (Stéarinerie Dubois) 2% Phase C. Principe actif selon l'invention (exemple 1) 3% Conservateur 0,7% Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Cette émulsion blanche épaisse présente un pH de 5.
Elle peut être obtenue par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - mélanger B, - chauffer A et B séparément à 80°C au bain-marie, sous faible agitation mécanique, - émulsionner A dans B sous émulseur rotor stator à 1000 tours/minute pendant 10 minutes puis à 1500 tours/minute, - à 25°C, ajouter C, dans l'ordre indiqué sous agitation rotor stator à 1500 tours/minute jusqu'à complet refroidissement. Exemple 3 : utilisation d'un principe actif selon l'invention dans un lait Phase A. Eau QSP 100 % Blanose 7M31CF (Hercule) 0,7 % Phase B. Lanol 2681 (Seppic) 4% DUB DIOL (Stéarinerie Dubois) 3,4 % Cethyl Alcohol (Stéarinerie Dubois) 2,4 % Stearyl Alcohol (Stéarinerie Dubois) 3 % DUB PULPIE (Stéarinerie Dubois) 1,7 % Phytowax Olive 18L57 (Sophim) 1,4% DUB MM (Stéarinerie Dubois) 1% Phase C. Principe actif selon l'invention (exemple 1) 3% Conservateur 0,7 % Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Ce gel émulsionné blanc liquide présente un pH de 6. Il peut être obtenu par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - mélanger A, bien disperser le gel sous agitation mécanique à 1000 tours/minute - mélanger B, - chauffer A et B séparément à 80°C sous agitation magnétique, - émulsionner A dans B sous émulseur rotor stator à 3500 tours/minute, - à 40°C, additionner C dans l'ordre et vérifier l'homogénéisation, - laisser sous agitation jusqu'à complet refroidissement. 5 Exemple 4 : utilisation d'un principe actif selon l'invention dans un fluide de jour Phase A. Eau QSP 100% Phase B. Pelemol BB (Phoenix Chemical, Inc) 4,2% DUB LAHE (Stéarinerie Dubois) 4 % DUB LIQUIDE 85 (Stearinerie Dubois) 4% 10 DUB MCT5545 (Stearinerie Dubois) 4% DC 9040 (Dow Corning) 3% Ritabate 80 (Rita) 2,1% Cethyl Alcohol (Stéarinerie Dubois) 2% DC 345 (Dow Corning) 2% 15 DC73110 (Dow Corning) 1,7% Diamant N (Aiglon SA) 1,4% Rita GMS (Rita) 1% Phase C. Principe actif selon l'invention (exemple 1) 3% Conservateur 0,7 % 20 Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Cette émulsion fluide très légèrement écrue présente un pH de 5,4. Elle peut être obtenue par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - mélanger B, 25 - chauffer séparément A et B à 80°C au bain-marie, sous agitation magnétique, - émulsionner A dans B sous émulseur rotor-sator, à 3500 tours/minutes, pendant quelques minutes puis à 5000 tours/minute, - à 40°C ajouter C, dans l'ordre indiqué, - continuer l'homogénéisation sous émulseur jusqu'à complet refroidissement en diminuant progressivement l'agitation. 5 Exemple 5 : utilisation d'un principe actif selon l'invention dans une mousse de soin Phase A. Eau QSP 100% Satialgine US551 (Cargill) 2 % Phase B. DUB OK (Stéarinerie Dubois) 6,4 % DUB HELIOCHRISTAL (Stéarinerie Dubois) 6,1% Phytowax Olive 16L55 (Sophim) 4,7% Simulsol 165 (Seppic) 4% MC30 (Sophim) 4% Phytowax Olive 12L44 (Sophim) 3,4% Montanov L (Seppic) 2% Sophiderm (Sophim) 2% Cetiol LC (Henkel) 1% Lanol 37T (Seppic) 1% Emerest 2380 (Cognis) 1% Phase C. Conservateur 0,7 % Principe actif selon l'invention (exemple 1) 3% 1 o 15 20
Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Cette émulsion onctueuse, blanche et mousseuse, présente un pH de 6,3. Elle peut être obtenue par la mise en oeuvre des étapes suivantes : 25 - mélanger A, bien disperser le gel à 50°C, sous agitation mécanique, - mélanger B, chauffer A et B séparément sous agitation mécanique, au bain-marie à 80°C, - ajouter B dans A sous émulseur rotor-sator à 5000 tours/minute, - à 30°C ajouter C, dans l'ordre indiqué et laisser sous forte agitation pour garder l'effet mousseux, jusqu'à complet refroidissement, Exemple 6 : utilisation d'un principe actif selon l'invention dans un unificateur de teint Phase A. Eau QSP 100% Glycérine 8,7 % Sodium laureth sulfate 1,3% Phase B. DUB RG AE (Stéarinerie Dubois) 5,4% Isopropylmyristate 3,4% 1 o Rita GMS (Rita) 2,4% AAB2 (Aiglon SA) 2,1% Stearic Acid 2% DUB APRILOSE (Stéarinerie Dubois) 1,5% DUB LIQUIDE 85 (Stéarinerie Dubois) 1,4% 15 Phase C. Conservateur 0,7 % Principe actif selon l'invention (exemple 1) 3% Phase D. Titanium dioxide (Anstead International) 2% Kaolin (Accros) Ombre calcinée n°1104 (le moulin à Couleurs) 20 Phase E. Carbopol ETD2050 à 1% pH6,5 (Novéon) 10% Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. Ce gel émulsionné beige-rosé présente un pH de 6,3. Il peut être obtenu par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - mélanger A, 25 - mélanger B, - chauffer séparément A et B à 80°C au bain-marie, sous agitation magnétique, - émulsionner A dans B sous émulseur rotor stator à 3200 tours/minute, - mélanger D et vérifier la complète homogénéisation de phase pulvérulente, - ajouter D et augmenter l'agitation à 5000 tours/minute, - préparer le gel E en dispersant le Carbopol ETC 2050 à 1% dans de l'eau distillée puis, en ajustant le pH à 6,5 avec NaOH, - ajouter E dans l'émulsion, à 6800 tours/minute, et laisser homogénéiser jusqu'à complet refroidissement. Exemple 7: utilisation d'un principe actif selon l'invention dans une crème antirides Eau QSP 100% 1 o Isononyl isononanoate (Lanol99, Seppic) 5,0 % Butylène glycol 2,0% Arachidyl alcohol/Behenyl alcohol/Arachidyl glucoside (Montanov202,Seppic) 2,0% Cetearyl alcohol/Cetearyl glucoside (Montanov 68, Seppic) 2,0% 15 Conservateurs 0,7% Polyaxrylamide/C13-14isoparaff in/laureth-7 (Sepigel305-Seppic) 0,3% Principe actif selon l'invention 3,0% Exemple 8 : utilisation d'un principe actif selon l'invention dans un gel 20 Eau QSP 100% NaOH QSP pH6,3 PEG-7 glyceryl cocoate (PHOENATE GC-7, Phoenix Chemical) 1,2 % Caprilic/capric triglycerides (DUB MCT5545, Stéarinerie Dubois)0,8% 25 Conservateurs 0,7% Acrylate/C10-30 alkyl acrylate crosspolymère (Carbopol EDT2020, Noveon) 0,2% Principe actif selon l'invention 3,0% EVALUATION DE L'EFFICACITE COSMETIQUE D'UN PRINCIPE ACTIF SELON L'INVENTION Ces essais ont pour objet d'illustrer l'invention, en montrant les déficiences des cellules de peaux ménopausées, et l'efficacité du principe actif selon l'invention sur la peau, en particulier sur les peaux ménopausées, à travers son action à la fois sur l'épiderme et sur le derme. A. Modélisation in vitro 1. Etude comparative de marqueurs biologiques sur cellules kératinocytaires non ménopausées et ménopausées Le but de l'étude est de comparer l'expression de gènes de kératinocytes humains normaux issus de peaux non ménopausées et de peaux ménopausées. Cette étude a été réalisée sur des kératinocytes obtenus à partir de peaux de 3 donneurs non ménopausés et à partir de peaux de 3 donneurs ménopausés. Elle a été mise en oeuvre sur le support « hBA15-NHEK» contenant 164 gènes (plus témoins et gènes « housekeeping ») en duplicate sélectionnés pour leur importance dans la physiologie des kératinocytes. Grâce à une technologie de « microrrays », les profils génomiques de ces populations dites non ménopausées et ménopausées ont été comparés. Après extraction, l'intégrité et la qualité des ARN (acide ribonucléique) sont contrôlées puis les ARN sont stockés à -80°C. L'analyse de l'expression des gènes a été réalisée en utilisant des « DNA arrays » (puces à ADN) simplifiés standards dédiés à la recherche et adaptés au screening (produits par la société BioAlternatives). L'analyse a été réalisée selon une technologie miniaturisée et optimisée propre, basée sur l'utilisation d'ARN messagers et d'une révélation par chimiluminescence. Les images obtenues à l'aide du LAS4000 (Fujifilm) ont été analysées avec le logiciel TotalLab TL100 (Perkin Elmer). Les résultats sont présentés dans le tableau suivant : Expression (%) Gènes Abréviation Kératinocytes Kératinocytes non ménopauses ménopauses Epidermal growth EGFR 100 43 factor receptor (Récepteur au facteur de croissance épidermique) Epidermal fatty FABP5 100 77 acid binding protein 5 (protéine de liaison des acides gras épidermiques 5) "Fatty acid FAS 100 81 synthase" (acide gras synthase) Antigène Ki67 KI67 100 83 Parmi les gènes étudiés, on constate que le récepteur à l'EGF est nettement moins exprimé par les kératinocytes ménopausés en comparaison avec les kératinocytes non ménopausés.
II. Etude comparative de marqueurs biologiques sur cellules fibroblastiques non ménopausées et ménopausées : Etude de la dégradation matricielle induite par les MMP-1 Cette étude a permis d'étudier la dégradation matricielle induite par les MMP-1 sur culture de fibroblastes non ménopausés ou ménopausés soumis à une exposition aux UVA qui sont responsables de l'augmentation importante du taux de MMP-1 au niveau de la matrice extracellulaire. Pour cette étude, les fibroblastes humains normaux ont été cultivés dans des milieux de cultures spécifiques, induisant ainsi des conditions de non ménopause ou de ménopause.
Le protocole utilisé fait référence à la publication suivante : Jian et al, Exp dermato/ogy (2010). A JO : ensemencement des fibroblastes humains en plaque de 12 puits puis incubation à 37°C en présence de 5% de CO2.
A J3 : les cellules sont prétraitées avec une solution d'cestradiol/apotransferrine (fibroblastes non ménopausés) ou une solution de ferritine/holotransferrine (fibroblastes ménopausés) pendant 48 heures. A J5 : les cellules sont irradiées ; les irradiations sont réalisées à l'aide d'une lampe UV « Biosun » (Vilbert-Lourmat, France) avec des intensités UVA 1 o de 15J/cm2. Après irradiation, les cellules sont traitées de nouveau avec une solution d'cestradiol ou une solution de ferritine et maintenues à l'étuve à 37°C pendant 48 heures. A J7: les surnageants cellulaires sont récupérés. Le dosage des MMP-1 est 15 réalisé à l'aide d'un kit de dosage ELISA (réf.: bMP-100, R&b Systems) Les résultats sont présentés dans le tableau suivant Témoin 61 356 +484 Témoin 71 560 +689 Soumis à une irradiation UVA, les deux populations de fibroblastes non ménopausés et ménopausés présentent une augmentation significative de la 20 synthèse des MMP-1 en comparaison aux fibroblastes non irradiés témoin. Taux de MMP-1 (pg/ug protéines) Taux de MMP-1 / témoin non irradié (%) Non irradié Irradié UVA La production de MMP-1 par les fibroblastes ménopausés (+689) est néanmoins significativement plus élevée que celle des fibroblastes non ménopausés (+484%). Les fibroblastes ménopausés présentent donc une sensibilité accrue aux MMP-1 lorsqu'ils sont soumis à une irradiation UVA.
B. Modélisation in vivo 1. Etude comparative du contenu en eau de la peau entre un groupe de personnes ménopausées et un groupe de personnes non ménopausées L'objectif de l'étude est d'évaluer in vivo l'influence des changements hormonaux liés à la ménopause sur le niveau d'hydratation de la peau. L'étude a été menée sur 26 volontaires sains, de sexe féminin, répartis en 2 groupes - Groupe A « Peaux ménopausées » : 14 volontaires - Groupe B « Peaux non ménopausées » : 12 volontaires Les mesures du contenu en eau ont été réalisées au niveau des mollets à l'aide d'un MoistureMeter-D®. Le MoistureMeter-D® génère une onde électromagnétique à haute fréquence qui est envoyée par une sonde sur la peau. L'onde électromagnétique réfléchie est enregistrée, ce qui permet d'obtenir une constante diélectrique proportionnelle au contenu en eau du tissu mesuré. Plus la valeur de cette constante est élevée plus le contenu en eau du tissu est important. Le protocole opératoire est le suivant. Les volontaires viennent au laboratoire sans avoir appliqué de produit sur les mollets depuis 7 jours, on détermine des zones de mesure au niveau des mollets et on réalise des mesures au MOISTUREMETER-D® du contenu en eau. La variation entre le groupe « peaux ménopausées » et le groupe « peaux non ménopausées » a été calculée en pourcentage à partir des valeurs moyennes.
Les résultats correspondants à l'étude du contenu en eau de la peau étudié au Moisturemer-D® sur chacun des 2 groupes sont résumés dans le tableau suivant : Contenu en eau (constante diélectrique relative) Groupe « peaux ménopausées » 30,2 Groupe « peaux non ménopausées » 32,4 A « peaux ménopausées » / « peaux -6,6% non ménopausées » (%) Dans les conditions de cette étude, on constate qu'il existe une différence significative du contenu en eau de la peau, entre les groupes de personnes ménopausées et non ménopausées. Une diminution significative du contenu en eau de la peau est observée pour le groupe « peaux ménopausées ».
II. Etude comparative du relief cutané au niveau des pattes d'oie entre un groupe de personnes ménopausées et un groupe de personnes non ménopausées L'objectif de l'étude est d'évaluer in vivo l'influence des changements hormonaux liés à la ménopause sur le relief cutané au niveau des pattes d'oie.
L'étude a été menée sur 45 volontaires sains, de sexe féminin, répartis en 2 groupes : - Groupe A « Peaux ménopausées » : 21 volontaires - Groupe B « Peaux non ménopausées » : 24 volontaires L'étude des paramètres caractéristiques du relief cutané a été réalisée sur 20 acquisitions en 3D de la patte d'oie par projection de franges. Les acquisitions ont été réalisées à l'aide d'un appareil de projection de franges dédié à la mesure 3D du relief cutané. Ce système comprend un capteur de mesure associant un projecteur de franges lumineuses et une caméra CCD haute résolution reliée à un logiciel d'acquisition. Un système de repositionnement de la tête du volontaire selon les 3 axes de déplacement permet de retrouver la même zone de mesure aux différents temps de l'étude.
L'effet du produit est mesuré sur une région d'intérêt de 18X18mm découpée automatiquement sur l'acquisition originale. Le microrelief de la peau est étudié par deux paramètres de rugosité en 3D : - Sq : moyenne quadratique de rugosité de surface - Sa : moyenne arithmétique de rugosité de surface Le volume des rides est étudié par un paramètre de volume : - volume négatif : volume inférieur à la surface de la peau. Une diminution de ces différents paramètres est caractéristique d'un lissage du relief de la surface étudiée et d'une diminution des rides. Le protocole opératoire est le suivant.
Les volontaires viennent au laboratoire sans avoir appliqué de produit sur le visage (ni crème, ni maquillage), et on réalise des acquisitions de la patte d'oie par projection de franges. La variation entre le groupe « peaux ménopausées » et le groupe « peaux non ménopausées » a été calculée en pourcentage à partir des valeurs moyennes. Les résultats correspondant à l'étude des différents paramètres caractéristiques du relief cutané étudiés par projection de franges sur chacun des 2 groupes sont résumés dans le tableau suivant : Rugosité Volume des rides (volume négatif (mm3)) Sq (mm) Sa (mm) Groupe « peaux 0,0621 0,0452 -1,4974 ménopausées » Groupe « peaux non 0,0549 0,0413 -0,9546 ménopausées » A « peaux ménopausées » +13,2% +9,6% +56,9% / « peaux non ménopausées » (%) Cette étude montre qu'il existe une différence significative des paramètres caractéristiques du relief cutané étudiés par projection de franges, entre les groupes de personnes peaux ménopausées et non ménopausées.
Une augmentation significative de la rugosité de la peau et du volume des rides est observée pour le groupe « peaux ménopausées ». En effet, on observe une augmentation significative de - 13,2% pour le paramètre Sq - 9,6% pour le paramètre Sa - 56,9% pour le volume négatif. La ménopause a donc un réel impact sur le relief cutané.
C. Etudes in vitro de l'efficacité du principe actif Le principe actif utilisé pour ces études est celui de l'exemple 1.
I. Effet sur la croissance des kératinocytes Cette étude a été menée dans le but de démontrer la capacité d'un principe actif selon l'invention à augmenter l'expression de l'ARNm codant pour le récepteur à l'EGF. L'étude a été réalisée par PCR quantitative sur kératinocytes obtenus à partir - de peaux de 4 donneurs non ménopausés d'âge moyen 42 ans, et de peaux de 4 donneurs ménopausés d'âge moyen 55 ans. Le protocole opératoire est décrit en suivant. A Jo, les kératinocytes humains sont ensemencés et incubés à 37°C. A J3 les cellules sont traitées avec le principe actif selon l'invention à 0,10% 1 o et 0,25% (V/V). Les cellules sont ensuite incubées à 37°C pendant 6 heures, puis sont récupérées et les ARN totaux extraits. Les ARN sont reverse-transcripts et les ADN complémentaires obtenus sont analysés par PCR quantitative. Les ARNm de la protéine GAPDH témoin interne de référence, sont également analysés en 15 parallèle de l'ARNm d'EGFR. Les résultats obtenus en pourcentage par rapport au témoin sont présentés dans le tableau suivant : Expression d'EGFR (%) Efficacité / Témoin (%) Kératinocytes non ménopausés Témoin 100 Principe actif (ex1) 0,25% 103 Kératinocytes ménopausés Témoin 64 Principe actif (ex1) 0,10% 76 +19 Principe actif (ex1) 0,25% 82 +28 Ces résultats confirme tout d'abord que l'expression de l'ARNm codant pour le 20 récepteur EGF par les kératinocytes issus de peaux ménopausées est significativement réduite (36%) par rapport à celle de kératinocytes issus de peaux non ménopausées.
Par ailleurs, on constate que le principe actif selon l'invention permet d'augmenter l'expression du récepteur EGF. EN particulier, le principe actif selon l'invention permet d'augmenter l'expression du récepteur EGF sur peaux ménopausées (de 19% lorsqu'il est testé à 0,10%, et de 28% lorsqu'il est testé à 0,25%).
II. Effet sur le maintien de la matrice dermique a. Etude sur la synthèse de collagène I Cette étude a été menée dans le but de démontrer la capacité d'un principe actif 10 selon l'invention à augmenter la synthèse de collagène I, composant majeur du derme. L'étude a été réalisée par dosage ELISA sur fibroblastes obtenus à partir : - de peaux de 3 donneurs non ménopausés d'âge moyen 42 ans, et - de peaux de 3 donneurs ménopausés d'âge moyen 55 ans. 15 Le protocole opératoire est décrit en suivant. A Jo, les fibroblastes humains sont ensemencés et incubés à 37°C. A J2, les fibroblastes sont traités avec le principe actif selon l'invention à 0,5%, 1% et 2% ou la vitamine C à 0,1pg/ml dilué dans le milieu de culture. Les cellules sont ensuite incubées. 20 A J3, les surnageants sont récupérés pour réaliser le dosage ELISA. Les résultats obtenus en pourcentage par rapport au témoin sont présentés en suivant : Synthèse de collagène I Variation du taux de (pg/pg protéines) collagène I / témoin (%) Fibroblastes non 460 ménopausés Fibroblastes ménopausés Témoin 448 Vitamine C 0,lpg/ml 1607 +259 Principe actif (ex1) 0,5% 579 +29 Principe actif (ex1) 1% 930 +108 Principe actif (ex1) 2% 1511 +238 On constate que le principe actif selon l'invention permet d'augmenter la synthèse du collagène I. En particulier, testé à 2%, le principe actif selon l'invention stimule la synthèse du collagène I de fibroblastes issus de peaux ménopausées de 238%. b. Etude de la dégradation matricielle induite par les MMP-1 Cette étude a pour objectif de déterminer l'effet d'un principe actif selon l'invention sur la synthèse de MMP-1, métalloprotéinase matricielle responsable de la dégradation des fibres de collagène I et III.
L'étude a été réalisée sur culture de fibroblastes non ménopausés ou ménopausés soumis à une exposition aux UVA qui sont responsables de l'augmentation important du taux de MMPs au niveau de la matrice extracellulaire du derme. Le protocole opératoire est le suivant. A Jo, les fibroblastes humains sont ensemencés et incubés à 37°C.
A J3, les cellules sont pré-traitées pendant 48 heures avec : - une solution d'oestradiol/apotransferrine pour les fibroblastes non ménopausés - une solution de ferritine/holotransferrine pour les fibroblastes ménopausés, en présence ou non du principe actif de l'exemple 1 à 0,1%, 20 0,25% et 0,5% (V/V).
A J5, les cellules sont irradiées à l'aide d'une lampe UV avec des intensités UVA de 15J/cm2. Après irradiation, les cellules sont de nouveau traitées comme à J3. A J7, à la fin de l'incubation, les surnageants cellulaires sont récupérés et le 5 dosage des MMP-1 est réalisé à l'aide d'un kit de dosage ELISA. Les résultats obtenus en pourcentage par rapport au témoin sont présentés en suivant : Taux de MMP-1 (pg/pg de Taux de MMP-1 / protéines) témoin ménopause UVA (%) Non irradié Irradié UVA Fibroblastes non ménopausés Témoin 67 356 Fibroblastes ménopausés Témoin 71 560 Principe actif (ex1) 0,10% 74 351 -37% Principe actif (ex1) 0,25% 75 300 -46% Principe actif (ex1) 0,50% 77 241 -57% On constate que le principe actif selon l'invention permet de limiter la production 10 de MMP-1 induite par les UVA. En particulier, testé à 0,5%, le principe actif selon l'invention limite la production de MMP-1 induite par les UVA dans des fibroblastes issus de peaux ménopausées de 57%.
15 D. Etudes in vivo de l'efficacité du principe actif Le principe actif utilisé pour ces études est celui de l'exemple 1. 1. Effet sur l'épaisseur de la peau L'objectif de l'étude est d'évaluer in vivo la capacité d'un principe actif selon l'invention formulé à 3% en émulsion, contre placebo, à maintenir l'épaisseur du 20 tissu cutané sur deux groupes de volontaires de statut de ménopause différent.
L'étude a été menée sur 37 volontaires sains, de sexe féminin, répartis en 2 groupes : - groupe A « Peaux ménopausées » : 19 volontaires d'âge moyen 55ans. - groupe B « Peaux non ménopausées » : 18 volontaires d'âge moyen 47ans.
Les acquisitions ont été réalisées par microscopie confocale au niveau des joues avant et après 28 et 56 jours d'applications biquotidiennes. Les acquisitions du microscope confocal correspondent à des coupes horizontales de la peau. L'analyse de l'épaisseur du tissu cutané a été réalisée par un expert en parcourant manuellement les coupes et en déterminant visuellement sur une zone stable (en dehors du microrelief ou des follicules pileux ou de tout autre élément perturbant) la distance entre la coupe présentant la surface du stratum corneum et la coupe présentant le début du derme papillaire (sous le stratum basal). La distance est exprimée en ,um. Une augmentation de cette distance est représentative d'un épaississement du tissu cutané.
Le protocole opératoire est le suivant : Entre J_14 et Jo les volontaires appliquent deux fois par jour une crème placebo sur le visage. A Jo on détermine deux zones au niveau des joues des volontaires, et on réalise des acquisitions par microscopie confocale sur chacune de ces zones.
Entre Jo et J27 les volontaires appliquent deux fois par jour l'émulsion contenant le principe actif selon l'invention (exemple 7) et le placebo. A J28 on repère les zones de mesure au niveau des joues des volontaires, et on réalise des acquisitions par microscopie confocale sur chacune de ces zones. Entre J28 et J55 les volontaires appliquent deux fois par jour l'émulsion contenant le principe actif selon l'invention et le placebo. A J56 on repère les zones de mesure au niveau des joues des volontaires, et on réalise des acquisitions par microscopie confocale sur chacune de ces zones.
On constate tout d'abord que dans les conditions de l'étude, il existe une différence significative de 8,9% de l'épaisseur du tissu cutané entre le groupe de peaux ménopausées (46,11pm) et le groupe de peaux non ménopausées (50,63,um).
Par ailleurs, la moyenne des résultats obtenus avec le principe actif selon l'invention pour chaque groupe de volontaires concernant l'augmentation de l'épaisseur du tissu cutané, sont présentés en suivant, en pourcentage de variation par rapport au placebo Variation / Placebo (%) J28 J56 Groupe A « peaux +2 2% +6,4% ménopausées » Groupe B « peaux _0,9% +3 5% non ménopausées » On constate que le principe actif permet d'augmenter l'épaisseur du tissu cutané, tout particulièrement l'épaisseur du tissu cutané des peaux ménopausées. En particulier, dans les conditions de cette étude, en comparaison au placebo après 56 jours d'applications biquotidiennes, le principe actif selon l'invention formulé à 3% en émulsion augmente l'épaisseur du tissu cutané des personnes ménopausées de 6,4%. En augmentant l'épaisseur du tissu cutané, le principe actif selon l'invention permet de limiter l'amincissement des tissus cutanés engendré par les changements hormonaux attribués à la ménopause.
Cette étude a également permis d'évaluer l'effet du principe actif selon l'invention sur l'épaisseur du tissu cutané du groupe « peaux ménopausées » après 28 et 56 jours de traitement en comparaison avec le traitement placebo.
Le tableau suivant présente les résultats correspondant l'épaisseur du tissu cutané mesurée sur le groupe A « peaux ménopausées » (traité par le principe Epaisseur du tissu cutané (,um) JO J28 J56 Groupe A « peaux ménopausées » 46,11 47,45 49,41 Zone principe actif Groupe B « peaux non 50,63 49,33 50,09 ménopausées » Zone Placebo Différence 4,52 1,87 0,68 Groupe B-Groupe A actif) et le groupe B « peaux non ménopausées » (traité par le placebo) à JO, J28 et J56.
Dans les conditions de cette étude, après 28 et 56 jours d'applications biquotidiennes sur le groupe A « peaux ménopausées », le principe actif formulé à 3% en émulsion, réduit la différence d'épaisseur du tissu cutané observé entre les deux groupes étudiés.
Le principe actif permet ainsi au groupe de personnes ménopausées de maintenir un tissu cutané comparable à celui du groupe non ménopausées, la différence entre les deux groupes n'étant plus significative dès J28.
II. Effet sur l'hydratation de la peau L'objectif de l'étude est d'évaluer in vivo le pouvoir hydratant du principe actif selon l'invention formulé à 3% en émulsion contre placebo, sur deux groupes de volontaires de statut de ménopause différent. La qualité de la peau se détériore avec l'âge en raison de différents facteurs dont le facteur hormonal. En effet, le vieillissement hormonal de la peau, résultant de la perte d'cestrogène liée à la ménopause, conduit à diverses modifications cutanées et, notamment à une diminution du contenu en eau de la peau. Il existe une différence significative du contenu en eau entre des personnes ménopausées et non ménopausées.
La présente étude a été menée sur 37 volontaires sains, de sexe féminin, répartis en 2 groupes - Groupe A « Peaux ménopausées » : 19 volontaires d'âge moyen 55 ans. - Groupe B « Peaux non ménopausées » : 18 volontaires d'âge moyen 47 ans. Les mesures du contenu en eau ont été réalisées au niveau des mollets à l'aide d'un MoistureMeter-b® avant et après 14 jours d'applications biquotidiennes. Le MoistureMeter-b® génère une onde électromagnétique à haute fréquence qui est envoyée par une sonde sur la peau. L'onde électromagnétique réfléchie est enregistrée, ce qui permet d'obtenir une constante diélectrique proportionnelle au contenu en eau du tissu mesuré. Plus la valeur de cette constante est élevée plus le contenu en eau du tissu est important. Le protocole opératoire est le suivant : Entre J_7 et Jo les volontaires n'appliquent aucune crème sur les mollets. A Jo on détermine deux zones au niveau des mollets, et on réalise des mesures du contenu en eau sur chacune de ces zones à l'aide d'un MoistureMeter-b®.
Entre Jo et J13 les volontaires appliquent deux fois par jour l'émulsion contenant le principe actif selon l'invention (exemple 8) et le placebo. A J14 on repère les zones de mesure au niveau des mollets des volontaires, et on réalise les mesures au MoistureMeter-b®. On constate tout d'abord que dans les conditions de cette étude, il existe bien 25 une différence significative de 6,6% du contenu en eau de la peau entre le groupe de peaux ménopausées (29,7) et celui de peaux non ménopausées (31,7).
Par ailleurs, la moyenne des résultats obtenus avec le principe actif selon l'invention pour chaque groupe de volontaires concernant le contenu en eau, sont présentés en suivant, en pourcentage de variation par rapport au placebo : Variation / Placebo (%) Groupe A « peaux ménopausées » +3,7% Groupe B « peaux non ménopausées » +1,4% On constate que le principe actif selon l'invention permet d'augmenter le contenu en eau de la peau, tout particulièrement le contenu en eau des peaux ménopausées. En particulier, dans les conditions de cette étude, en comparaison au placebo après 14 jours d'applications biquotidiennes, le principe actif selon l'invention formulé à 3% en émulsion augmente le contenu en eau des personnes ménopausées de 3,7%, améliorant ainsi l'hydratation de leur peau. En augmentant le contenu en eau de la peau ménopausée, le principe actif selon l'invention permet de limiter la perte d'hydratation engendrée par les 15 changements hormonaux attribués à la ménopause.
Cette étude permet également d'évaluer l'effet d'un principe actif selon l'invention sur le contenu en eau de la peau du groupe « peaux ménopausées » après 14 jours de traitement en comparaison avec le traitement placebo. 20 Un résumé des résultats correspondant au contenu en eau évaluée sur le groupe A « peaux ménopausées » (traité par le principe actif) et le groupe B « peaux non ménopausées » (traité par le placebo) à JO et J14 est présenté dans le tableau suivant.
Contenu en eau (constante diélectrique relative) JO J14 Groupe A « peaux 29,7 31,5 ménopausées » Zone principe actif Groupe B « peaux non 31,7 32,0 ménopausées » 10 Zone Placebo Différence Groupe B-6roupe A 2,1 0,5 On constate que dans les conditions de cette étude, après 14 jours d'applications 15 biquotidiennes sur le groupe A « peaux ménopausées », le principe actif formulé à 3% en émulsion, permet de réduire la différence du contenu en eau de la peau observé entre les deux groupes étudiés. Le principe actif permet ainsi au groupe de personnes ménopausées de retrouver un niveau d'hydratation comparable à celui du groupe non ménopausées, la 20 différence entre les deux groupes n'étant plus significative à J14.
III. Etude des propriétés antirides L'objectif de l'étude est d'évaluer in vivo l'effet antirides du principe actif selon 25 l'invention formulé à 3% en émulsion contre placebo, sur deux groupes de volontaires de statut de ménopause différent. L'étude réalisée pour investiguer l'effet du principe actif selon l'invention, a été menée sur 36 volontaires sains, de sexe féminin, répartis en 2 groupes - Groupe A « Peaux ménopausées » : 18 volontaires d'âge moyen 55 ans - Groupe B « Peaux non ménopausées » : 18 volontaires d'âge moyen 47 ans. Des acquisitions en 3D par projection de franges de la patte d'oie ont été réalisées avant et après 28 jours d'applications biquotidiennes. Les acquisitions ont été réalisées à l'aide d'un appareil de projection de franges dédié à la mesure 3D du relief cutané. Ce système comprend un capteur de mesure associant un projecteur de franges lumineuses et une caméra CCD haute résolution reliée à un logiciel d'acquisition. Un système de repositionnement de la tête du volontaire selon les 3 axes de déplacement permet de retrouver la même zone de mesure aux différents temps de l'étude.
L'effet du produit est mesuré sur une région d'intérêt de 18X18mm découpée automatiquement sur l'acquisition originale. Le microrelief de la peau est étudié par deux paramètres de rugosité en 3D : - Sq : moyenne quadratique de rugosité de surface - Sa : moyenne arithmétique de rugosité de surface Le volume des rides est étudié par un paramètre de volume : - volume négatif : volume inférieur à la surface de la peau. Le protocole opératoire est le suivant : Entre J_14 et Jo les volontaires appliquent une crème placebo deux fois par jour sur le visage.
A Jo on réalise des acquisitions de chaque patte d'oie par projection de franges. Entre Jo et J27 les volontaires appliquent deux fois par jour l'émulsion contenant le principe actif selon l'invention (exemple 7) et le placebo. A J28 on réalise à nouveau des acquisitions de chaque patte d'oie par projection de franges.
Cette étude permet tout d'abord de confirmer qu'il existe une différence significative des paramètres caractéristiques du relief cutané étudié par projection de franges, entre les groupes de personnes peaux ménopausées et non ménopausées. On observe en effet une augmentation significative de : - 20,5% du paramètre Sq, - 18,1% du paramètre Sa, et - 60,2% du volume négatif caractéristique du volume des rides, Comme observé au cours de l'étude de modélisation réalisée au paragraphe B.II.
Par ailleurs, les moyennes des résultats obtenus avec le principe actif selon l'invention pour chaque groupe de volontaires concernant le relief cutané, sont présentés en suivant, en pourcentage de variation par rapport au placebo Variation / Placebo (%) Paramètre Sq Paramètre Sa Volume négatif (mm) (mm) (mm3) Groupe A « peaux -5,2% -5,0% 41,3% ménopausées » Groupe B « peaux non -1,7% -1,9% +0,4% ménopausées » On constate que le principe actif selon l'invention permet d'améliorer les paramètres caractéristiques du relief cutané, tout particulièrement les paramètres caractéristiques du relief cutané des peaux ménopausées, réduisant ainsi rides et ridules. En particulier, dans les conditions de cette étude, en comparaison au placebo après 28 jours d'applications biquotidiennes, le principe actif selon l'invention formulé à 3% en émulsion, permet de diminuer sur les peaux ménopausées : - la rugosité du microrelief représentée par les paramètres Sq (-5,2%) et Sa (-5,0%), et - le volume des rides représenté par une diminution de 11,3% du 20 volume négatif.
Le principe actif selon l'invention permet donc aux personnes ménopausées de réduire leurs rides et ridules rendant ainsi leur relief cutané plus proche de celui du groupe de personnes non ménopausées. L'effet antirides du principe actif est spécifique aux peaux ménopausées.
Cette étude permet également d'évaluer l'effet d'un principe actif selon l'invention sur les paramètres caractéristiques du relief cutané du groupe « peaux ménopausées » après 28 jours de traitement avec le principe actif en comparaison au groupe « peaux non ménopausées » après traitement avec le placebo.
Les résultats correspondant aux paramètres caractéristiques du relief cutané sur le groupe A « peaux ménopausées » (traité par le principe actif) et le groupe B « peaux non ménopausées » (traité par le placebo) à JO et J28 est présenté dans les tableaux suivants - Paramètre Sq (mm) JO J28 Groupe A « peaux ménopausées » 0,0594 0,0554 Zone principe actif Groupe B « peaux non 0,0493 0,0501 ménopausées » Zone Placebo Différence Groupe A - Groupe B 0,0101 0,0053 Paramètre Sa JO J28 Groupe A « peaux ménopausées » 0,0438 0,0410 Zone principe actif Groupe B « peaux non 0,0371 0,0378 ménopausées » Zone Placebo Différence Groupe A - Groupe B 0,0067 0,0032 - Paramètre volume négatif JO J28 Groupe A « peaux ménopausées » -1,2381 -1,0400 Zone principe actif Groupe B « peaux non -0,7729 -0,8196 ménopausées » Zone Placebo Différence Groupe B - Groupe A 0,4652 0,2204 Dans les conditions de cette étude, après 28 jours d'applications biquotidiennes sur le groupe A « peaux ménopausées », le principe actif formulé à 3% en émulsion, réduit la différence des paramètres caractéristiques du relief cutané observé entre les deux groupes étudiés.
Le principe actif permet au groupe de personnes ménopausées de réduire leurs rides et ridules rendant ainsi leur relief cutané plus proche de celui du groupe de volontaires non ménopausées. En diminuant les paramètres caractéristiques du relief cutané du groupe de personnes ménopausées, le principe actif permet de corriger les méfaits de la 15 ménopause sur l'apparence de la peau. 41
Claims (14)
- REVENDICATIONS1. Utilisation de peptides de poids moléculaire inférieur à 2000Da issus de feuilles de Cynara scolymus, ou d'un hydrolysat de feuilles de Cynara sco/ymus comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000Da, en tant que principe actif cosmétique dans une composition cosmétique, ledit principe actif et/ou ladite composition étant destiné(s) à normaliser l'épaisseur de la peau et/ou augmenter l'hydratation et/ou atténuer les rides de la peau du visage.
- 2. Utilisation selon la revendication 1, la composition cosmétique étant une composition cosmétique anti-âge.
- 3. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, en tant que principe actif cosmétique dans une composition cosmétique, ledit principe actif et/ou ladite composition étant destiné(s) à normaliser la croissance des kératinocytes en agissant sur l'expression des récepteurs EGF localisés au niveau de la membrane des kératinocytes.
- 4. Utilisation selon l'une des précédentes revendications, la composition 15 cosmétique étant destinée aux peaux ménopausées.
- 5. Principe actif cosmétique adapté à une utilisation selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu'il s'agit d'un hydrolysat de feuilles de Cynara sco/ymus comprenant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000Da. 20
- 6. Principe actif cosmétique selon la revendication 5, caractérisé en ce que les peptides de poids moléculaire inférieur à 2000Da représentent au moins 80% en poids des protéines totales du principe actif.
- 7. Principe actif cosmétique selon l'une des revendications 5 ou 6, caractérisé en ce que la teneur en protéines est comprise entre 6 et 27% en 25 poids de matière sèche.
- 8. Principe actif cosmétique selon l'une des revendications 5 à 7, caractérisé en ce qu'il comprend également des carbohydrates.
- 9. Principe actif cosmétique selon la revendication 8, caractérisé en ce que la teneur en carbohydrates est comprise entre 20 et 67% en poids de matière 5 sèche.
- 10. Principe actif cosmétique selon l'une des revendications 5 à 9, caractérisé en ce qu'il présente un taux de matières sèches compris entre 10 et 150g/l.
- 11. Procédé d'obtention d'un principe actif selon l'une des revendications 5 10 à 10, caractérisé en ce qu'il comprend au moins les étapes suivantes : - solubilisation de poudre de feuilles de Cynara sco/ymus dans l'eau, - hydrolyse enzymatique à l'aide d'une protéase, - séparation des phases soluble et insoluble, - inactivation des enzymes par traitement thermique, 15 - ultrafiltration pour récupérer les peptides de poids moléculaire inférieur à 2000 Da, - filtration et filtration stérilisante, ainsi qu'une ou plusieurs étapes d'ajout d'un adjuvant pour éliminer les composés phénoliques au cours du procédé. 20
- 12. Composition cosmétique pour application topique, caractérisée en ce qu'elle comprend un principe actif selon l'une des revendications 5 à 10 présent entre 0,01 et 20% en poids total de la composition.
- 13. Procédé cosmétique de soin de la peau humaine, destiné à normaliser l'épaisseur de la peau et/ou à augmenter l'hydratation de la peau du visage et/ou 25 à atténuer les rides, comprenant l'application topique d'une composition renfermant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000Da issus de feuilles de Cynara sco/ymus ou un principe actif selon l'une des revendications 5 à 10.
- 14. Procédé cosmétique de soin de la peau humaine, destiné à normaliser l'épaisseur de la peau et/ou à augmenter l'hydratation de la peau du visage et/ou à atténuer les rides des peaux ménopausées, comprenant l'application topique d'une composition renfermant des peptides de poids moléculaire inférieur à 2000ba issus de feuilles de Cynara sco/ymus ou un principe actif selon l'une des revendications 5 à 10.
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