WO2012157746A1 - 自己免疫疾患治療薬 - Google Patents

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alkoxy
phenyl
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青木　淳賢
久美子 巻出
飛鳥 井上
智彦 大和田
仁也 井久保
優子 尾谷
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Tohoku University
The University of Tokyo
Original Assignee
Tohoku University
The University of Tokyo
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    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
    • G01N2500/04—Screening involving studying the effect of compounds C directly on molecule A (e.g. C are potential ligands for a receptor A, or potential substrates for an enzyme A)

Definitions

  • the present invention relates to a screening method for compounds useful as autoimmune therapeutic agents.
  • the present invention also relates to a therapeutic agent for autoimmune diseases.
  • the invention further relates to lysophosphatidylserine and novel derivatives thereof.
  • Lysophospholipid is a general term for phospholipids having one acyl group.
  • the lysophospholipid has a property that it is less hydrophobic than the diacylphospholipid constituting the cell membrane and can be easily released from the cell membrane.
  • Some lysophospholipids function as signal molecules between cells or between membranes and have been found to have an important role in vivo.
  • Patent Document 1 Japanese Patent Application Laid-Open No. 2007-267601.
  • lysophosphatidylserine which is a kind of lysophospholipid, is involved in acute inflammation caused by mast cell degranulation (Non-patent Documents 1 and 2).
  • LPS 1 GPR34
  • LPS 2 P2Y10
  • LPS 3 A630033H20Rik
  • LPS 4 GPR174
  • LPS 1 is involved in signal transduction that induces or enhances degranulation of mast cells and can be a target for the treatment of allergic diseases and chronic inflammatory diseases
  • Patent Document 2 a specific lysophosphatidylserine derivative
  • lysophosphatidylthreonine strongly promotes the degranulation reaction of mast cells
  • Autoimmune disease is a general term for diseases that cause symptoms when the immune system, which is originally a defense mechanism against foreign substances, reacts excessively and attacks even normal cells and tissues of itself.
  • systemic autoimmune diseases that affect the whole body and organ-specific diseases that affect only specific organs.
  • autoimmune diseases often become chronic diseases or intractable diseases, and some of them are designated as diseases for which specific diseases are researched by the Ministry of Health, Labor and Welfare.
  • Much research has been conducted on methods for treating autoimmune diseases, for example, methods for treating chronic inflammation caused by autoimmune diseases using cytokine-specific antibodies involved in inflammation (Patent Document 2), and pathogenic self.
  • Patent Document 3 A method for treating diseases by neutralizing antibodies
  • autoimmune diseases many causes of autoimmune diseases have not been elucidated, and effective treatments have not yet been established for many autoimmune diseases.
  • drugs that suppress the immune system and anti-inflammatory drugs stereos or non-steroid drugs that relieve inflammation are used as the first selection agent.
  • An object of the present invention is to provide a new treatment method for autoimmune diseases. Furthermore, the present invention is to provide a method for assaying compounds useful for the treatment of autoimmune diseases.
  • the inventors of the present invention have made extensive studies in order to achieve the above-mentioned problems. As a result, the compounds having agonist activity of LPS 2 (P2Y10) and LPS 4 (GPR174) have been found to have therapeutic and preventive effects on autoimmune diseases. Completed the invention.
  • the following screening method is provided.
  • a screening method for a therapeutic or prophylactic agent for an autoimmune disease comprising using P2Y10 or GPR174 to evaluate the agonist activity or antagonist activity of a test compound for a lysophosphatidylserine receptor.
  • the method according to (1) above wherein the agonist activity is evaluated.
  • the method according to (1) or (2) above for screening for an interleukin 2 production inhibitor.
  • EGFR human epidermal growth factor receptor
  • AP alkaline phosphatase
  • TGF ⁇ transforming growth factor ⁇
  • R 11 is a hydrogen atom, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy C 1-6 alkyl, or benzyl
  • R 12 and R 13 are each independently a hydrogen atom, C 1-6 alkyl, formyl, C 1-6 alkylcarbonyl, C 1-6 alkoxycarbonyl, C 1-6 alkoxy C 1-6 alkyl, or benzyloxy Selected from carbonyl
  • R 15 is a hydrogen atom, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy C 1-6 alkyl, C 1-6 alkylcarbonyloxy C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxycarbonyloxy C 1-6 alkyl, Phenyl, benzyl, phthalidyl, dioxolenoneylmethyl, or furylmethyl
  • p is an integer selected from 2 to 6
  • Y 1 is a direct bond or —C ( ⁇ O) —
  • R 16 is C 3-30 alkyl, wherein one or more phen
  • the phenyl or heteroaryl may be substituted with one or more substituents selected from C 1-10 alkyl, C 1-10 alkoxy and a halogen atom;
  • the above benzyl, benzyloxy, phenyl, phthalidyl, dioxolenoneylmethyl, furylmethyl, phenylene, and heteroarylene are C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy, hydroxy, C 1-6 alkylcarbonyloxy, nitro May be substituted with one or more substituents selected from phenyl and halogen atoms] Or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • R 16 is C 10-24 alkyl (wherein one or more —CH 2 — of alkyl may be replaced by —O—, and one or more single bonds between carbon atoms are double bonds) Or may be replaced by a triple bond), or selected from the formula: — (CH 2 ) r —Q 1 ; r is an integer selected from 2 to 20; Q 1 is phenyl or 5-6 membered heteroaryl, which is C 1-10 alkyl, C 1-10 alkoxy, phenyl C 1-10 alkyl, phenyl C 1-10 alkoxy, 5- The compound according to the above (11), or a pharmaceutically acceptable salt thereof, which may be substituted with 6-membered heteroaryl C 1-10 alkyl or 5-6-membered heteroaryl C 1-10 alkoxy.
  • R 16 is C 12-20 alkyl (wherein alkyl 1 to 3 —CH 2 — may be replaced by —O—, and one single bond between carbon atoms is a double bond) Or is selected from the formula: — (CH 2 ) r —Q 1 ; r is an integer selected from 2 to 7; Q 1 is phenyl or 5-6 membered heteroaryl, which is C 1-10 alkyl, C 1-10 alkoxy, phenyl C 1-3 alkyl, phenyl C 1-3 alkoxy, 5- The compound according to the above (12), or a pharmaceutically acceptable salt thereof, which may be substituted by 6-membered heteroaryl C 1-3 alkyl or 5-6-membered heteroaryl C 1-3 alkoxy.
  • R 21 is a hydrogen atom, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy C 1-6 alkyl, or benzyl
  • R 22 and R 23 are each independently a hydrogen atom, C 1-6 alkyl, formyl, C 1-6 alkylcarbonyl, C 1-6 alkoxycarbonyl, C 1-6 alkoxy C 1-6 alkyl, or benzyloxy Selected from carbonyl
  • R 24 is a hydrogen atom or C 1-3 alkyl
  • R 25 represents a hydrogen atom, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy C 1-6 alkyl, C 1-6 alkylcarbonyloxy C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxycarbonyloxy C 1-6 alkyl, Phenyl, benzyl, phthalidyl, dioxolenoneylmethyl, or furylmethyl
  • X 2 is a hydrogen atom, a halogen atom, hydroxy, C 1-6 alkoxy, formyloxy
  • a 2 is the following formula:
  • R 21 , R 22 and R 23 are as defined in (14) above, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • R 26 is C 12-20 alkyl (wherein 1 to 3 —CH 2 — of alkyl may be replaced by —O—, and one single bond between carbon atoms is a double bond) Or is selected from the formula: — (CH 2 ) s —Q 2 ; s is an integer selected from 2 to 7; Q 2 is phenyl or 5-6 membered heteroaryl, which is C 1-10 alkyl, C 1-10 alkoxy, phenyl C 1-3 alkyl, phenyl C 1-3 alkoxy, 5- The compound according to the above (14) or (15), or a pharmaceutically acceptable salt thereof, which may be substituted with 6-membered heteroaryl C 1-3 alkyl, or 5-6-membered heteroaryl C 1-3 alkoxy .
  • lysophosphatidylserine derivatives have therapeutic and preventive effects on autoimmune diseases, and have completed the present invention. That is, according to still another aspect of the present invention, the following therapeutic or preventive agent is provided.
  • R 1 is a hydrogen atom, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy C 1-6 alkyl, or benzyl
  • R 2 and R 3 are each independently a hydrogen atom, C 1-6 alkyl, formyl, C 1-6 alkylcarbonyl, C 1-6 alkoxycarbonyl, C 1-6 alkoxy C 1-6 alkyl, or benzyloxy Selected from carbonyl
  • R 4 is a hydrogen atom or C 1-3 alkyl
  • R 5 represents a hydrogen atom, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy C 1-6 alkyl, C 1-6 alkylcarbonyloxy C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxycarbonyloxy C 1-6 alkyl, Phenyl, benzyl, phthalidyl, dioxolenoneylmethyl, or furylmethyl
  • X is a hydrogen atom, a halogen atom, hydroxy, C 1-6 alkoxy, formyloxy,
  • the phenyl or heteroaryl may be substituted with one or more substituents selected from C 1-10 alkyl, C 1-10 alkoxy and a halogen atom;
  • R 7 is a hydrogen atom or C 1-6 alkyl;
  • the above benzyl, benzyloxy, phenyl, phthalidyl, dioxolenoneylmethyl, furylmethyl, phenylene, and heteroarylene are C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy, hydroxy, C 1-6 alkylcarbonyloxy, nitro May be substituted with one or more substituents selected from phenyl and halogen atoms]
  • the therapeutic agent or preventive agent of an autoimmune disease containing the compound represented by these, or its pharmaceutically acceptable salt.
  • R 6 is C 10-24 alkyl (wherein one or more —CH 2 — of alkyl may be replaced by —O—, and one or more single bonds between carbon atoms are double bonds) Or may be replaced by a triple bond), or selected from the formula: — (CH 2 ) m —Q; m is an integer selected from 2 to 20; Q is phenyl or 5-6 membered heteroaryl, which is C 1-10 alkyl, C 1-10 alkoxy, phenyl C 1-10 alkyl, phenyl C 1-10 alkoxy, 5-6
  • R 6 is C 12-20 alkyl (wherein the alkyl 1-3 —CH 2 — may be replaced by —O—, and one single bond between carbon atoms is a double bond) Or may be selected from the formula: — (CH 2 ) m —Q; m is an integer selected from 2 to 7; Q is phenyl or 5-6 membered heteroaryl, which is C 1-10 alkyl, C 1-10 alkoxy, phenyl C 1-3 alkyl, phenyl C 1-3 alkoxy, 5-6
  • the therapeutic or prophylactic agent according to the above (19) which may be substituted with a member heteroaryl C 1-3 alkyl or a 5-6 membered heteroaryl C 1-3 alkoxy.
  • (21) (2S) -2-Amino-3-[(3-oleoyloxypropoxy) -hydroxyphosphoryloxy] propionic acid; (2S) -2-Amino-3-[(3-basenoyloxypropoxy) -hydroxyphosphoryloxy] propionic acid; (2S) -2-amino-3-[(3-Elideyloxypropoxy) -hydroxyphosphoryloxy] propionic acid; (2S) -2-amino-3-[(3-palmitoleoyloxypropoxy) -hydroxyphosphoryloxy] propionic acid; (2S) -2-amino-3-[(3-palmitoyloxypropoxy) -hydroxyphosphoryloxy] propionic acid; (2S) -2-amino-3-[(3-palmitoyloxypropoxy) -hydroxyphosphoryloxy] propionic acid; (2S) -2-amino-3-[(3-myristoyloxypropoxy) -hydroxyphosphoryloxy] propionic acid;
  • the autoimmune diseases are malignant rheumatoid arthritis, systemic lupus erythematosus, multiple sclerosis, myasthenia gravis, Graves' disease, antiphospholipid antibody syndrome, Sjogren's syndrome, primary biliary cirrhosis, polymyositis, and autoimmunity
  • the compound according to any one of (11) to (16) above, or the compound of the formula (I) defined in any one of (17) to (21) above, Or the pharmaceutical composition for treating or preventing an autoimmune disease containing the pharmaceutically acceptable salt is provided.
  • an interleukin 2 production inhibitor containing a pharmaceutically acceptable salt thereof is provided.
  • the compound according to any one of (11) to (16) above, or the compound of the formula (I) defined in any one of (17) to (21) above Alternatively, a lymphocyte adhesion inhibitor containing a pharmaceutically acceptable salt thereof is provided.
  • the compound according to any one of (11) to (16) above, or the compound of the formula (I) defined in any one of (17) to (21) above Alternatively, a method of treating or preventing autoimmune disease comprising administering to a patient a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • a therapeutic or prophylactic agent for autoimmune diseases which is a new method for treating autoimmune diseases. Furthermore, the present invention provides an efficient screening method for compounds useful for the treatment of autoimmune diseases.
  • FIG. 1 is a graph showing the evaluation test results (Test Example 1) of agonist activity of lysophosphatidylserine or its analogs against the P2Y10 receptor.
  • FIG. 2 is a graph showing the evaluation test results (Test Example 1) of agonist activity of lysophosphatidylserine or its analogs against the GPR174 receptor.
  • FIG. 3 is a graph showing the white blood cell count of a 17-week-old systemic lupus erythematosus spontaneously developing mouse in Test Example 2.
  • FIG. 4 is a graph showing autoantibody production in 17-week-old systemic lupus erythematosus spontaneously developing mice in Test Example 2.
  • FIG. 1 is a graph showing the evaluation test results (Test Example 1) of agonist activity of lysophosphatidylserine or its analogs against the GPR174 receptor.
  • FIG. 3 is a graph showing the white blood cell count of a 17-week-old systemic lupus
  • FIG. 5 is a graph showing changes in the spleen of 17-week-old spontaneously lupus erythematosus spontaneously developing mice in Test Example 2.
  • 6 is a graph showing changes in mesenteric lymph nodes in 17-week-old spontaneously lupus erythematosus mice in Test Example 2.
  • FIG. 7 is a diagram showing the deposition of immune complexes in the kidneys of 17-week-old systemic lupus erythematosus spontaneously developing mice in the PBS administration group (control group) in Test Example 2.
  • FIG. 8 is a graph showing the deposition of immune complexes on the kidneys of 17-week-old spontaneously lupus erythematosus spontaneously developing mice in the test compound administration group in Test Example 2.
  • FIG. 9 is a graph showing blood alanine transaminase (ALT) values of human autoimmune disease hepatitis model mice in Test Example 3.
  • FIG. 10 is a photograph showing the site of liver injury in the liver section of a human autoimmune disease hepatitis model mouse (PBS administration group) in Test Example 3.
  • FIG. 11 is a photograph showing the site of liver injury in a liver section of a human autoimmune disease hepatitis model mouse (LPS (18: 1) administration group) in Test Example 3.
  • FIG. 12 is a graph obtained by quantifying the sites of liver injury in liver sections of human autoimmune disease model mice (PBS administration group, LPS (18: 1) administration group) in Test Example 3.
  • FIG. 10 is a photograph showing the site of liver injury in the liver section of a human autoimmune disease hepatitis model mouse (PBS administration group) in Test Example 3.
  • FIG. 11 is a photograph showing the site of liver injury in a liver section of a human autoimmune disease hepatitis model mouse (LP
  • FIG. 13 is a photograph showing the site of liver injury in a liver section of a human autoimmune disease hepatitis model mouse (deoxy-LPSLP (18: 1) administration group) in Test Example 3.
  • FIG. 14 is a photograph showing the site of liver injury in a liver section of a human autoimmune disease hepatitis model mouse (LPalloTlo (18: 1) administration group) in Test Example 3.
  • FIG. 15 is a graph showing the expression level of P2Y10 in spleen-derived lymphocytes activated with concanavalin A (Test Example 4).
  • FIG. 16 is a graph showing the expression level of GPR174 in spleen-derived lymphocytes activated with concanavalin A (Test Example 4).
  • FIG. 17 is a graph showing the influence of a test compound on adhesion of spleen-derived lymphocytes activated with concanavalin A to ICAM-1 (Test Example 5).
  • FIG. 18 is a graph showing the influence of a test compound on IL-2 production of spleen-derived lymphocytes activated with concanavalin A (Test Example 6).
  • FIG. 19 shows human, mouse and rat oligonucleotides used as forward and reverse primers for the P2Y10 gene (SEQ ID NO: 1-6) and oligonucleotides used as forward primer and reverse primer for the GPR174 gene (SEQ ID NO: 7- It is a figure showing the base sequence of 12).
  • FIG. 20 shows the base sequence of the human P2Y10 gene (SEQ ID NO: 13).
  • FIG. 21 shows the base sequence of the mouse P2Y10 gene (SEQ ID NO: 14).
  • FIG. 22 is a diagram showing the base sequence of the rat P2Y10 gene (SEQ ID NO: 15).
  • FIG. 23 shows the base sequence of the human GPR174 gene (SEQ ID NO: 16).
  • FIG. 24 is a diagram showing the base sequence of the mouse GPR174 gene (SEQ ID NO: 17).
  • FIG. 25 is a diagram showing the base sequence of the rat GPR174 gene (SEQ ID NO: 18).
  • FIG. 26 shows the sequences of human, mouse and rat P2Y10 proteins (SEQ ID NOs: 19 to 21).
  • FIG. 27 shows the sequences of human, mouse and rat GPR174 proteins (SEQ ID NOs: 22 to 24).
  • FIG. 28 is a diagram showing the base sequences of oligonucleotides (SEQ ID NOs: 25 to 30) used as primers in the real-time PCR method of Test Example 4.
  • a method for screening a pharmaceutical compound comprising using P2Y10 or GPR174 to evaluate an agonist activity or antagonist activity of a test compound at a lysophosphatidylserine receptor.
  • the test compound to be screened is not particularly limited, and examples thereof include organic compounds and inorganic compounds (particularly low molecular compounds), proteins, peptides, and the like.
  • the screening is not particularly limited as long as it uses P2Y10 or GPR174.
  • a cell expressing a gene encoding P2Y10 or GPR174, a transgenic non-human mammal overexpressing a gene encoding P2Y10 or GPR174, A transgenic non-human mammal expressing a gene encoding human P2Y10 or human GPR174 can be used.
  • the cell to be used for screening is not particularly limited, and examples thereof include commonly used known microorganisms such as Escherichia coli or yeast, or known cultured cells such as HUVEC cells. Examples of non-human mammals include mice, rats, rabbits, dogs, cats, monkeys and the like. Screening may also use animal tissues and cells. In that case, administration of the test compound can be performed by allowing the test compound to act on the subject, for example, by including the test compound in a solution or medium in which the tissue or cells are retained.
  • the screening method of the present invention can be used for screening a compound having agonistic activity of a test compound against P2Y10 or GPR174. Due to the function of P2Y10 or GPR174, a compound having the agonist activity becomes a candidate compound for a medicament used as a therapeutic or prophylactic agent for diseases such as autoimmune diseases.
  • the autoimmune disease may be any of systemic diseases and organ-specific diseases, such as malignant rheumatoid arthritis, systemic lupus erythematosus, multiple sclerosis, myasthenia gravis, Graves' disease, antiphospholipid antibody syndrome, Examples include Sjogren's syndrome, primary biliary cirrhosis, polymyositis, and autoimmune hepatitis.
  • the screening method of the present invention can be performed using a cultured cell that expresses a gene encoding P2Y10 or GPR174, and the use of the cultured cell is preferred in terms of screening efficiency.
  • the assay can be performed using calcium response, cAMP production, reporter gene, and the like as indicators.
  • the cultured cell is allowed to express a gene encoding a further labeled human epidermal growth factor receptor (EGFR) ligand, and the assay is performed by quantifying the amount of the labeled compound to be cleaved. It can be carried out.
  • EGFR human epidermal growth factor receptor
  • the labeled EGFR ligand include a fusion protein of an EGFR ligand and alkaline phosphatase (AP).
  • AP alkaline phosphatase
  • the EGFR ligand to be labeled include transforming growth factor ⁇ (TGF ⁇ ), heparin-binding EGF-like growth factor (HB-EGF), and amphiregulin.
  • TGF ⁇ transforming growth factor ⁇
  • HB-EGF heparin-binding EGF-like growth factor
  • amphiregulin amphiregulin.
  • an interleukin-2 production inhibitor or a lymphocyte adhesion inhibitor comprising evaluating the agonist activity of a test compound for a lysophosphatidylserine receptor using P2Y10 or GPR174.
  • a method for screening is provided.
  • GPR174 is used in the screening method for interleukin 2 production inhibitor
  • P2Y10 is used in the screening method for lymphocyte adhesion inhibitor.
  • P2Y10 used in the screening method of the present invention is not particularly limited as long as it is a polypeptide having lysophosphatidylserine receptor activity as P2Y10.
  • P2Y10 derived from mammals such as humans, mice, and rats is used. . Specific examples include the following polypeptides.
  • A a polypeptide comprising an amino acid sequence represented by SEQ ID NOs: 19 to 21;
  • B a polypeptide comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NOs: 19 to 21 and having lysophosphatidylserine receptor activity;
  • C a polypeptide comprising an amino acid sequence in which 1 to 10 amino acids are deleted, substituted, added and / or inserted in the amino acid sequence represented by SEQ ID NOs: 19 to 21 and having lysophosphatidylserine receptor activity ;
  • D an amino acid sequence having a homology with the amino acid sequence represented by SEQ ID NOs: 19 to 21 of 80% or more, preferably 90% or more, more preferably 95% or more, and having lysophosphatidylserine receptor activity Having a polypeptide.
  • GPR174 used in the screening method of the present invention is not particularly limited as long as it is a polypeptide having lysophosphatidylserine receptor activity as GPR174.
  • GPR174 derived from mammals such as humans, mice and rats is used. . Specific examples include the following polypeptides.
  • A a polypeptide comprising an amino acid sequence represented by SEQ ID NOs: 22 to 24;
  • B a polypeptide comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NOs: 22 to 24 and having lysophosphatidylserine receptor activity;
  • C a polypeptide comprising an amino acid sequence in which 1 to 10 amino acids are deleted, substituted, added and / or inserted in the amino acid sequence represented by SEQ ID NOs: 22 to 24 and having lysophosphatidylserine receptor activity ;
  • D an amino acid sequence having a homology with the amino acid sequences represented by SEQ ID NOs: 22 to 24 of 80% or more, preferably 90% or more, more preferably 95% or more, and having lysophosphatidylserine receptor activity Having a polypeptide.
  • the numerical value of homology may be a numerical value calculated using a homology search program known to those skilled in the art.
  • BLAST Basic Local Alignment Search Tool
  • Altschul SF Gish by Altschul et al. W, Miller W, Myers EW, Lipman DJ., J. Mol. Biol., 215: p403-410 (1990)
  • Altschyl SF Madden TL, Schaffer AA, Zhang J, Miller W, Lipman DJ, Acids . 25: p3389-3402 (1997)
  • amino acid sequence numerical values calculated using default parameters in BLAST2N [Nucleic Acids Res., 25, (3389 (1997); Genome ⁇ ⁇ Res., 7, 649 (1997)] can be mentioned.
  • the mutant or homologue when a mutant or homologue of a specific amino acid sequence is used, can be prepared using DNA encoding the amino acid sequence of the mutant or homologue.
  • DNA encoding such a mutant or homologue can also be prepared by any method known to those skilled in the art, such as chemical synthesis, genetic engineering techniques, and mutagenesis. Specifically, DNA encoding the sequences described in SEQ ID NOs: 13 to 18 is used, and desired DNA can be obtained by introducing mutations into these DNAs. For example, it can be carried out using a method of bringing DNA into contact with a drug that becomes a mutagen, a method of irradiating ultraviolet rays, a genetic engineering method, or the like.
  • Site-directed mutagenesis which is one of the genetic engineering methods, is useful because it can introduce a specific mutation at a specific position.
  • Molecular cloning 2nd edition Current Protocols in Molecular. Biology, Nucleic Acids Research, 10, 6487, 1982, Nucleic Acids Research, 12, 9441, 1984, Nucleic Acids Research, 13, 4431, 1985, Nucleic Acids Research, 13, 8749,1985, Proc. Na Sci.Acad. USA, 79, 6409, 1982, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82, 488, 1985, Gene, 34, 315, 1985, Gene, 102, 67, 1991, etc. Can do.
  • lysophosphatidylserine or an analog thereof can be used as a control compound, examples of which include the compounds of the above formulas (I), (Ia) and (Ib), and more specifically And the compounds described in the examples.
  • C 1-3 alkyl means a linear, branched, or cyclic alkyl group having 1 to 3 carbon atoms, such as methyl, ethyl, n-propyl, i-propyl, Cyclopropyl is included.
  • C 1-6 alkyl means a linear, branched, cyclic or partially cyclic alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, such as methyl, ethyl, n-propyl. I-propyl, n-butyl, s-butyl, i-butyl, t-butyl, n-pentyl, 3-methylbutyl, 2-methylbutyl, 1-methylbutyl, 1-ethylpropyl, n-hexyl, 4-methylpentyl , 3-methylpentyl, 2-methylpentyl, 1-methylpentyl, 3-ethylbutyl, and 2-ethylbutyl, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cyclopropylmethyl, and the like, for example, C 1-4 alkyl And C 1-3 alkyl and the like are also included.
  • C 1-10 alkyl in the definition of the compounds herein, refers to a linear, branched, cyclic or partially cyclic alkyl group having 1 to 10 carbon atoms, e.g., C 1-
  • linear, branched, cyclic or partially cyclic represented by C 7 H 15 , C 8 H 17 , C 9 H 19 , and C 10 H 21 These alkyl groups are included.
  • C 3-30 alkyl means a linear, branched, cyclic or partially cyclic alkyl group having 7 to 30 carbon atoms, such as C 1-6 alkyl.
  • C 1-6 alkylcarbonyl means an alkylcarbonyl group having a C 1-6 alkyl group already defined as the alkyl moiety, such as methylcarbonyl (acetyl), ethylcarbonyl, tert-butylcarbonyl. In addition, C 1-4 alkylcarbonyl and the like are included.
  • C 1-6 alkoxy means an alkyloxy group having an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms already defined as an alkyl moiety, and includes, for example, methoxy, ethoxy, n-propoxy, i-propoxy N-butoxy, s-butoxy, i-butoxy, t-butoxy, n-pentoxy, 3-methylbutoxy, 2-methylbutoxy, 1-methylbutoxy, 1-ethylpropoxy, n-hexyloxy, 4-methylpen Toxic, 3-methylpentoxy, 2-methylpentoxy, 1-methylpentoxy, 3-ethylbutoxy, cyclopentyloxy, cyclohexyloxy, cyclopropylmethyloxy, etc. are included, for example, C 1-4 alkoxy and C 1 Also included are -3 alkoxy and the like. In this specification, “C 1-4 alkoxy” includes, for example, C 1-3 alkoxy and the like.
  • C 1-6 alkoxycarbonyl means an alkoxycarbonyl group having a C 1-6 alkoxy group already defined as an alkoxy moiety, such as methoxycarbonyl, ethoxycarbonyl, tert-butoxycarbonyl, C 1-3 alkoxycarbonyl and the like are included.
  • C 1-6 alkoxy C 1-6 alkyl in the present specification includes, for example, methoxymethyl, ethoxymethyl, 2-methoxyethyl, 1-methoxyethyl and the like.
  • benzyl means a group represented by the formula: C 6 H 5 CH 2 —.
  • benzyloxy means a group represented by the formula: C 6 H 5 CH 2 O—.
  • benzyloxycarbonyl means a group represented by the formula: C 6 H 5 CH 2 OC ( ⁇ O) —.
  • 5-6-membered heteroaryl refers to a monocyclic aromatic heterocyclic group having 5 to 6 ring atoms, including one or more heteroatoms selected from an oxygen atom, a nitrogen atom and a sulfur atom Means.
  • Specific examples include pyrrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, triazolyl, pyridyl, pyrimidyl, pyridazinyl, furyl, thienyl, oxazolyl, oxadiazolyl, thiazolyl, thiadiazolyl and the like.
  • phenylene means a divalent group in which benzene is substituted at two positions, and may be any of 1,2-substituted, 1,3-substituted, and 1,4-substituted. Good.
  • 5-6-membered heteroarylene refers to a monocyclic aromatic heterocycle having 5 to 6 ring atoms, including one or more heteroatoms selected from an oxygen atom, a nitrogen atom, and a sulfur atom Means a divalent group substituted at two positions.
  • Specific examples of the heterocyclic ring constituting the group include pyrrole, imidazole, pyrazole, triazole, pyridine, pyrimidine, pyridazine, furan, thiophene, oxazole, oxadiazole, thiazole, thiadiazole and the like.
  • phenylene or 5-6 membered heteroarylene when one or more phenylene or 5-6 membered heteroarylene is inserted into alkyl, the insertion position of phenylene and 5-6 membered heteroarylene, and the substitution position of phenylene and 5-6 membered heteroarylene are There is no particular limitation.
  • the number of inserted phenylene and 5-6 membered heteroarylene is, for example, 1 to 5, preferably 1 to 3.
  • —CH 2 — of alkyl when one or more —CH 2 — of alkyl is replaced with —O—, the position of —CH 2 — to be replaced is not particularly limited as long as it can be replaced. Further, phenylene or a 5-6 membered heteroarylene may be inserted between the substituted —O— and —CH 2 — or between —O— and —O—.
  • the number of —O— to be replaced is, for example, 1 to 10, preferably 1 to 5, and more preferably 1 to 3.
  • the position of the replaced single bond is not particularly limited as long as it can be replaced.
  • the double bond may be a cis configuration or a trans configuration.
  • the number of double bonds and triple bonds replaced is, for example, 1 to 10, preferably 1 to 5, and more preferably 1 to 3.
  • the “pharmaceutically acceptable salt” of the compound of the present invention is not particularly limited as long as it is a salt that can be used as a pharmaceutical product.
  • Examples of the salt formed by the compound of the present invention with a base include salts with inorganic bases such as sodium, potassium, magnesium, calcium and aluminum; salts with organic bases such as methylamine, ethylamine and ethanolamine.
  • the salt may be an acid addition salt.
  • the salt examples include hydrochloric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid and other mineral acids; and formic acid, Examples include acid addition salts with organic acid acids such as acetic acid, propionic acid, oxalic acid, malonic acid, succinic acid, fumaric acid, maleic acid, lactic acid, malic acid, tartaric acid, citric acid, methanesulfonic acid, and ethanesulfonic acid. .
  • the compounds of the present invention also include hydrates, various solvates and crystal polymorphs.
  • the atoms (for example, hydrogen atom, carbon atom, oxygen atom, nitrogen atom, sulfur atom and phosphorus atom) contained in the compound of the present invention are isotope atoms other than the most naturally occurring isotopes.
  • the isotope atom may be a radioactive conductor atom. That is, according to one aspect of the present invention there is provided a compound of formula (I), (Ia) or (Ib) as defined herein, or a salt thereof, labeled with an isotope atom. .
  • labeling with an isotope atom may be, for example, labeling with a radioisotope ( 3 H, 14 C, 32 P, etc.). From the aspect of ease of preparation of the compound, 3 H Labeling is preferred.
  • the 3 H-labeled compound of the present invention can be synthesized, for example, by using a 3 H-labeled fatty acid or a derivative thereof.
  • the compounds of formula (I), (Ia) and (Ib) are administered as prodrugs and are converted in vivo into active compounds.
  • R 5 of formula (I), R 15 of (Ia) and R 25 of (Ib) may be a group forming a phosphate ester. Specific examples thereof include groups described in Journal of Medicinal Chemistry, 2008, 51 (8), 2337, and the like.
  • C 1-6 alkyl eg, tert-butyl
  • C 1-6 alkoxy C 1- 6 alkyl eg methoxymethyl
  • C 1-6 alkylcarbonyloxy C 1-6 alkyl eg pivaloyloxymethyl
  • C 1-6 alkoxycarbonyloxy C 1-6 alkyl eg isopropoxycarbonyloxy) Methyl
  • optionally substituted phenyl eg, C 1-3 alkoxyphenyl
  • optionally substituted benzyl eg, C 1-6 alkoxy, hydroxy, C 1-6 alkylcarbonyloxy, nitro, and benzyl which may be substituted by a group of 1 to 3 selected from a halogen atom
  • phthalidyl e.g., C 1-6 Good -isobenzofuranone-3-yl optionally substituted by a group having 1 to 4 selected from alkoxy
  • di-oxo Lennon yl methyl e
  • R 1a and R 2a are each independently selected from C 1-6 alkyl ]
  • the compound of the formula (I) can be prepared by condensing the compound 1-1 and the compound 1-2 and then oxidizing.
  • the first stage condensation reaction is carried out in a suitable solvent such as methylene chloride, tetrahydrofuran, N, N′-dimethylformamide, toluene, diethyl ether, 1,4-dioxane, etc. (for example, 1H-tetrazole, etc.) )
  • This step is not particularly limited, but can be performed, for example, at a reaction temperature of 0 to 70 ° C., preferably 15 to 30 ° C., and a reaction time of, for example, 10 minutes to 2 days, preferably 1 to 2 hours.
  • it is desirable that compound 1-1 and compound 1-2 are dissolved in a suitable solvent, mixed and then subjected to azeotropic treatment with a solvent such as toluene or benzene.
  • the second stage oxidation step is carried out in a suitable solvent such as, for example, tert-butylhydrochloride in a suitable solvent such as methylene chloride, tetrahydrofuran, N, N′-dimethylformamide, toluene, diethyl ether, 1,4-dioxane.
  • a suitable solvent such as methylene chloride, tetrahydrofuran, N, N′-dimethylformamide, toluene, diethyl ether, 1,4-dioxane.
  • This step is not particularly limited, but can be performed, for example, at a reaction temperature of 0 to 70 ° C., preferably 15 to 30 ° C., and a reaction time of, for example, 5 minutes to 1 day, preferably 30 minutes to 1 hour.
  • the oxidation reaction in the second stage can be performed on the product obtained by post-treating the condensation reaction in the first stage, but can be performed as a one-pot reaction without
  • the obtained compound 1-3 has a protecting group, it can be subjected to appropriate deprotection conditions and / or by further substituent substitution to obtain the desired formula (I), (Ia) and (Ib ) Can be obtained.
  • the compound of formula (I) can be prepared by acylating compound 2-1 with an acid chloride of compound 2-2.
  • the reaction is carried out in a suitable solvent such as methylene chloride, tetrahydrofuran, N, N′-dimethylformamide, toluene, diethyl ether, 1,4-dioxane and the like in the presence of a suitable base (for example, 4-dimethylaminopyridine).
  • a suitable base for example, 4-dimethylaminopyridine
  • This step is not particularly limited, but can be performed at a reaction temperature of, for example, 0 to 70 ° C., preferably 15 to 30 ° C., and a reaction time of, for example, 10 minutes to 2 days.
  • the acylation can also be carried out using a carboxylic acid corresponding to compound 2-2 and a suitable condensing agent (for example, 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride).
  • a suitable condensing agent for example, 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride.
  • the obtained compound 2-3 has a protecting group, it can be subjected to appropriate deprotection conditions and / or by further substituent substitution to obtain the desired formula (I), (Ia) and (Ib). ) Can be obtained.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be used in various dosage forms such as tablets, capsules, powders, granules, pills, solutions, emulsions, suspensions, solutions, spirits, syrups for oral administration.
  • parenteral preparations include, for example, injections such as subcutaneous injections, intravenous injections, intramuscular injections, intraperitoneal injections; transdermal administration or patches , Ointments or lotions; sublingual and buccal patches for buccal administration; and aerosols for nasal administration, but not limited thereto. These preparations can be produced by known methods usually used in the preparation process.
  • the compounds of formula (I), (Ia) and (Ib) are preferably administered as parenteral agents.
  • the pharmaceutical composition may contain various commonly used components, such as one or more pharmaceutically acceptable excipients, disintegrants, diluents, lubricants, flavoring agents, and coloring agents. , Sweeteners, flavoring agents, suspending agents, wetting agents, emulsifying agents, dispersing agents, adjuvants, preservatives, buffering agents, binders, stabilizers, coating agents and the like.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be in a sustained or sustained release dosage form.
  • the dosage of the therapeutic agent, prophylactic agent, or pharmaceutical composition of the present invention can be appropriately selected depending on the administration route, the patient's body shape, age, physical condition, degree of disease, elapsed time after onset, etc.
  • the pharmaceutical composition can comprise a therapeutically effective amount and / or a prophylactically effective amount of a compound of formula (I), (Ia), or (Ib) above.
  • the compound of the above formula (I), formula (Ia) or formula (Ib) can be generally used at a dose of 1 to 10000 mg / day / adult.
  • the pharmaceutical composition may be administered in a single dose or multiple doses, such as immunosuppressants (cyclosporine, tacrolimus, sirolimus, methotrexate, azathioprine, etc.), steroidal anti-inflammatory drugs (hydrocortisone, prednisolone, dexamethasone) Etc.), non-steroidal anti-inflammatory drugs (such as loxoprofen sodium, indomethacin, diclofenac sodium), or antibody drugs (such as infliximab, adalimumab, tocilizumab, sertolizumab pegol, etanercept) You can also.
  • immunosuppressants cyclosporine, tacrolimus, sirolimus, methotrexate, azathioprine, etc.
  • steroidal anti-inflammatory drugs hydrocortisone, prednisolone, dexamethasone
  • non-steroidal anti-inflammatory drugs such as loxoprofen sodium
  • the therapeutic agent or prophylactic agent of the present invention may contain a conventionally known coloring agent, preservative, flavoring, flavoring agent, coating agent, antioxidant, vitamin, amino acid, peptide, protein, and mineral content (iron, zinc, if necessary). , Magnesium, iodine, etc.).
  • the therapeutic agent or prophylactic agent of the present invention is in a form suitable for pharmaceutical compositions, functional foods, health foods, beverages, supplements, etc., such as granules (including dry syrup), capsules (soft capsules, hard capsules). , Prepared in the form of various solid preparations such as tablets (including chewables), powders (powder), pills, or liquid preparations for internal use (including liquids, suspensions, syrups) May be.
  • the therapeutic agent or prophylactic agent of the present invention can be used as it is as a pharmaceutical composition, functional food, health food, supplement or the like.
  • additives for formulation for example, excipients, lubricants, binders, disintegrants, fluidizers, dispersants, wetting agents, preservatives, thickeners, pH adjusters, colorants, Examples include flavoring agents, surfactants, and solubilizing agents.
  • thickeners such as pectin, xanthan gum, and guar gum, can be mix
  • thickeners such as pectin, xanthan gum, and guar gum
  • it can also be set as a coating tablet using a coating agent, or it can also be set as a paste-form glue. Furthermore, even if it is a case where it prepares in another form, what is necessary is just to follow the conventional method.
  • Reagents and data measurement reagents are available from Sigma-Aldrich Chemical Co. Those purchased from Tokyo Chemical Industry, Wako Pure Chemicals, and Kanto Chemical were used without further purification. 1 H- and 13 C-NMR were measured using a BRUKER AVANCE 400 spectrometer (400 MHz), and the chemical shift was deuterated chloroform (7.26 ppm ( 1 H-NMR), 77.00 ppm ( 13 C-NMR)). In ppm. 31 P-NMR chemical shifts are expressed in ppm relative to phosphoric acid in water (85% w / w, 0.00 ppm).
  • Mass spectrometry was measured in the BRUKER microTOF-05 spectrometer (ESI-TOF) or a SHIMADZU AXIMA-TOF (MALDI-TOF) positive and negative ion mode.
  • Silica gel used for column chromatography was purchased from Kanto Chemical. Elemental analysis was performed using a Yanaco MT-6 CHN CORDER spectrometer.
  • 1,3-Diisopropylcarbodiimide (6.325 g, 50.1 mmol) and CuCl (50.8 mg, 0.513 mmol) were dissolved in anhydrous tBuOH (4.556 g, 59.9 mmol), and at room temperature under argon atmosphere for 3 days Stir. A small portion of the reaction mixture was taken and the completion of the reaction was confirmed by 1 H-NMR. Anhydrous CH 2 Cl 2 (25 ml) and polyvinylpyrrolidone (1.004 g) were added to the reaction mixture, stirred for 15 minutes and filtered through Celite®. The filtrate was concentrated to give the title compound (8.18 g, 40.47 mmol, 81%, green oil). The obtained compound was used as an esterification reagent without further purification.
  • Step 2 Preparation of N-tert-butoxycarbonylserine tert-butyl ester
  • L-serine (1.025 g, 9.756 mmol) was dissolved in a mixture of 1N NaOH aqueous solution (1N, 10 ml), H 2 O (10 ml) and dioxane (20 ml), and the mixture was stirred at 0 ° C.
  • Di-tert-butyl dicarbonate (3.192 g, 14.63 mmol) was added to the solution at 0 ° C., and the mixture was stirred as it was for 10 minutes and then at room temperature for 24 hours.
  • 5% KHSO 4 aqueous solution was added to the reaction mixture to bring the pH to 3 and extracted with AcOEt (150 ml ⁇ 3). The organic layers were combined, washed with brine and dried over Na 2 SO 4 .
  • N-Boc serine was distilled off to give N-Boc serine as a crude product (2.228 g, colorless oil).
  • Step 3 Preparation of (2S) -3-[(diisopropylamino) -tert-butoxyphosphinooxy] -2- (tert-butoxycarbonylamino) propionic acid tert-butyl ester
  • 1,3-propanediol (623.3 mg, 8.192 mmol) and pyridine (0.2 ml) were dissolved in CH 2 Cl 2 (15 ml) and oleoyl chloride (623.4 mg in CH 2 Cl 2 (5 ml). , 2.072 mmol) was added dropwise at 0 ° C.
  • the reaction mixture was stirred for 24 hours and quenched with 5% KHSO 4 aqueous solution (15 ml).
  • the organic layer was separated, washed with 5% aqueous KHSO 4 solution and brine, dried over Na 2 SO 4 and concentrated.
  • Step 5 Preparation of (2S) -2- (tert-butoxycarbonylamino) -3-[(3-oleoyloxypropoxy) -tert-butoxy-phosphoryloxy] propionic acid tertbutyl ester
  • Example 9 In the production of Example 9, the following compounds were used as synthetic intermediates.
  • Example 13 In the production of Example 13, the following compounds were used as synthetic intermediates.
  • Step 1 Preparation of 8-azidooctanoic acid N 3 — (CH 2 ) 7 COOH
  • DMF DMF
  • NaN 3 5.76 g, 88.60 mmol
  • KHSO 4 aqueous solution 1N, 50 ml
  • hexane 100 ml ⁇ 3
  • Step 2 Preparation of 8- (4-heptyl-1,2,3-triazol-1-yl) octanoic acid
  • 1,3-propanediol 324.4 mg, 4.263 mmol
  • 6- ⁇ 4-hexyl- (2Z) -2-buten-1-yloxy ⁇ hexanoic acid 300.2 mg, 1.048 mmol
  • 4-dimethyl Aminopyridine (14.3 mg, 0.119 mmol) was dissolved in CH 2 Cl 2 (10 ml) and 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (212.5 mg, 1.109 mmol) was added to 0. The mixture was added at ° C and stirred at room temperature for 19 hours.
  • Example 16 In the production of Example 16, the following compounds were used as synthetic intermediates.
  • Step 1 3-tert-butyldimethylsilyloxy-1-propanol TBSO- (CH 2 ) 3 —OH NaH (790.9 mg, 19.77 mmol) was suspended in THF (3 ml) and stirred at 0 ° C. To the suspension was added dropwise a solution of 1,3-propanediol (1000.4 mg, 13.15 mmol) in THF (3 ml) and stirred at 0 ° C. for 30 minutes. A solution of tert-butyldimethylsilyl chloride (2.3841 g, 5.82 mmol) in THF (4 ml) was added dropwise and stirred at room temperature for 22.5 hours.
  • Step 3 3-tert-butyldimethylsilyloxy-propionic acid TBSO- (CH 2 ) 2 —COOH 3-tert-butyldimethylsilyloxy-1-propanal (1.0438 g, 5.542 mmol) and 2-methyl-2-butene (1.7191 g, 24.51 mmol) were dissolved in t BuOH (15 ml) and H A solution of NaH 2 PO 4 .2H 2 O (867.8 mg, 5.562 mmol) and NaClO 2 (2.0425 g, 22.58 mmol) in 2 O (5 ml) was added and stirred at room temperature for 1 hour.
  • Step 1 Preparation of N-tert-butoxycarbonyl-L-allo-threonine tert-butyl ester
  • Step 2 (2S, 3S) -3-[(Diisopropylamino) -tert-butoxyphosphinooxy] -2- (tert-butoxycarbonylamino) -3-methyl-propionic acid tert-butyl ester
  • Step 1 Preparation of (R) -4- (4-methoxyphenoxy) methyl-2,2-dimethyl-1,3-dioxolane
  • Step 5 (2S, 3S) -2-tert-butylcarbonylamino-3-[((2R) -2- (tert-butyldimethylsilyloxy) -3- (4-methoxyphenoxy) propoxy) -tert-butoxy [Phosphoryloxy] butyric acid tert-butyl ester
  • tert-butyl hydroperoxide (TBHP) decane solution (5.0-6.0 M, 0.251 ml, 1.255 mmol) was added at room temperature, and the mixture was stirred at room temperature for 1.5 hours. did.
  • Step 7 (2S, 3S) -2-tert-Butylcarbonylamino-3-[((2R) -2- (tert-butyldimethylsilyloxy) -3-hydroxypropoxy) -tert-butoxyphosphoryloxy] butyric acid tert -Preparation of butyl esters
  • Step 8 Preparation of (2S, 3S) -2-amino-3-[((2R) -2-hydroxy-3-oleoyloxypropoxy) -hydroxyphosphoryloxy] butyric acid
  • reaction mixture was stirred at room temperature for 3.5 hours, tert-butyl hydroperoxide (TBHP) decane solution (5.0-6.0 M, 0.431 ml, 2.155 mmol) was added at room temperature, and the mixture was further stirred for 1.5 hours. did.
  • TBHP tert-butyl hydroperoxide
  • Step 7 Preparation of (2S) -2-amino-3-[((2R) -2-hydroxy-3- ⁇ 3- (2-heptyloxyphenyl) propionyloxy ⁇ propoxy) -hydroxyphosphoryloxy] propionic acid
  • Step 1 Cloning of P2Y10 and GPR174 genes
  • Full-length cDNAs of human, mouse, and rat P2Y10 and GPR174 genes were obtained by PCR using HUVEC cells, mouse tail genome, and rat tail genome as templates.
  • the oligonucleotide consisting of the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 1-6 is used as a forward primer
  • the oligonucleotide consisting of the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 7-12 is used as a reverse primer Using.
  • a base sequence containing a restriction enzyme KpnKI recognition site is added to the 5 ′ end of each of the forward primers.
  • a base sequence including a restriction enzyme Sma I recognition site is added to the 3 ′ ′ end of human P2Y10 of the reverse primer, and restriction enzyme EcoR is added to the 3 ′ ′ end of human GPR174, mouse and rat P2Y10 and GPR174.
  • Each nucleotide sequence including a V recognition site is added.
  • PrimeSTARPrimHS # R010Q, 010TAKARA
  • the base sequences represented by SEQ ID NOs: 13 to 15 have open reading frames (O R F) of 984 bases, 987 bases, and 987 bases in human, mouse, and rat, respectively, and are predicted from this O R F.
  • the amino acid sequences (328 amino acids, 329 amino acids, and 329 amino acids) were as shown in SEQ ID NOs: 19 to 21, respectively.
  • the base sequences represented by SEQ ID NOs: 16 to 18 have ORFs of 1002 bases, 1008 bases and 1008 bases in human, mouse and rat, respectively, and amino acid sequences predicted from these ORFs (each 334 Amino acids, 336 amino acids, 336 amino acids) were as shown in the amino acid sequences represented by SEQ ID NOs: 22 to 24.
  • Step 2 Evaluation of agonist activity by TGF ⁇ cleavage assay HEK293 cells are suspended in Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) containing 10% fetal calf serum (FCS) at 2.0x10 5 cells / mL, and 4 mL in a 60 mm dish. Seeded one by one. After culturing for 24 hours in the presence of 5% CO 2 , various expression vectors were transfected using LipofectAMINE 2000 (Invitrogen). 1 ⁇ g of AP-tagged TGF ⁇ plasmid vector and 1 ⁇ g of mouse P2Y10 or GPR174 plasmid vector were used per 60 mm dish.
  • DMEM Dulbecco's modified Eagle's medium
  • FCS fetal calf serum
  • AP-labeled TGF ⁇ is a protein in which human placental alkaline phosphatase is fused to the N-terminal side of membrane-bound pro-TGF ⁇ , and the AP-labeled TGF ⁇ plasmid vector is Tokumaru et al., J Cell Biol 151, 209-220 ( 2000). Twenty-four hours after transfection, the cells were detached using trypsin / EDTA, resuspended in a culture solution to 2.0 ⁇ 10 4 cells / well, and seeded in a 96-well plate. When stimulating with a compound, Hanks balanced salt solution (HBSS, containing 5 mM HEPES) was used for resuspension.
  • HBSS Hanks balanced salt solution
  • test compounds were added, and the mixture was further allowed to stand for 1 hour in the presence of 5% CO 2 .
  • the 96-well plate was centrifuged (190 ⁇ g, 3 minutes), and 80 ⁇ L of the supernatant was transferred to another 96-well plate.
  • 80 ⁇ L of a reaction buffer 40 mM Tris-HCl (pH 9.5)
  • p-NPP p-nitrophenyl phosphate
  • OD405 was measured with a microplate reader (background), heated at 37 ° C. for 1 hour, and then measured again.
  • the AP activity was calculated by applying a value obtained by subtracting the background from the second absorbance to the following equation.
  • Example 34 LPS (18: 1)
  • Example 1 deoxy-LPS (18: 1)
  • Example 19 LPalloT (18: 1)
  • deoxy-LPS (18: 1) is an agonist having selectivity for P2Y10
  • LPalloT (18: 1) is a selectivity for GPR174.
  • Emax maximum response value
  • MRL-lpr / lpr mice (hereinafter also referred to as MRL / lpr mice, 8-9 weeks old, rabbit) were purchased from Japan SLC Co., Ltd.
  • the compound of Example 34 (LPS (18: 1), purchased from Avanti Polar Lipids, 858143C) was taken into a silicon-coated glass tube (Asahi Techno Glass, 9831-1207) with a microsyringe and dried to nitrogen, 0.01% (w / v) BSA-PBS was added, vortexed, and sonicated with a bath sonicator for 2 minutes to prepare 10 mM LPS.
  • a small osmotic pump (Alzet, model 2006) was soaked in physiological saline (Otsuka raw food injection) and incubated at 37 ° C for 60 hours. Thereafter, each osmotic pump was filled with 200 ⁇ L of LPS solution and 0.01% (w / v) BSA-PBS using a 1 mL syringe (TERUMO, SS-01T) and the attached 27G needle. After administration of Nembutal anesthetic to Balb / c mice at 100 mg / kg, a small osmotic pump was implanted vertically into the abdominal cavity of the mouse, and the peritoneum and abdominal wall were sutured.
  • MRL / lpr mice ( ⁇ , 9 weeks old) were filled with the compound of Example 34 (LPS (18: 1), 10 mM) (small discharge rate 0.15 ⁇ L / hr, 42 days) ) Was implanted into the abdominal cavity to provide a continuous supply of LPS (18: 1).
  • LPS low-density polypeptide
  • VetScan HM2 fully automated blood cell device
  • Measurement of the amount of autoantibodies was performed by the following procedure.
  • a 96-well assay plate was coated with a poly-L-lysine solution (50 ⁇ L / well) and allowed to stand at room temperature for 8 hours to coat the well bottom.
  • 100 ⁇ l / well of 1 ng / ⁇ L DNA solution was added and incubated at 37 ° C. for 8 hours to bind to the plate.
  • 180 ⁇ L / well of blocking buffer was added, and blocking was performed at room temperature for 2 hours.
  • a serum sample diluted with assay buffer was added at 50 ⁇ L / well and allowed to stand at room temperature for 2 hours. Then wash 3 times with TTBS using Skan Washer 400 (Molecular Devices), add 50 ⁇ L / well of biotinylated anti-mouse IgG (H + L) (Vector, BA2001) diluted 2000 times with Assay buffer, and react for 2 hours. I let you.
  • kidney paraffin sections were prepared and immunocomplexes were stained with anti-mouse IgG antibodies. Paraffin sections were deparaffinized by sequentially immersing them in Xylen (3 times), 100% (3 times), 90%, 70%, and 50% EtOH for 3 minutes each, and then washed with running water for 5 minutes. Thereafter, the slide was immersed in 3% H 2 O 2 for 30 minutes to inactivate the tissue's endogenous peroxidase, and washed again with running water for 5 minutes. Using a pressure cooker, the slide glass was immersed in 1 mM EDTA to activate the antigen, and then endogenous biotin was blocked using an Avidin / Biotin Blocking kit (VECTOR, SP-2001).
  • VECTOR Avidin / Biotin Blocking kit
  • the plate was washed with PBS, DAPI was added and nuclear staining was performed for 5 minutes, and then the excess solution was washed off with PBS and encapsulated using an encapsulating agent, Aqueous Mounting Medium, PermaFluor (Thermo, TA-030-FM).
  • an encapsulating agent Aqueous Mounting Medium, PermaFluor (Thermo, TA-030-FM).
  • the small osmotic pump is used in the same procedure as in Test Example 2. Implanted in the abdominal cavity of mice. After 4 days, the animals were fasted for 12 hours, and concanavalin A (ConA) was intravenously injected at 20 mg / kg. After a certain time, blood was collected to prepare serum. After perfusion with PBS, the liver was removed and paraffin blocks and sections were prepared. Alanine transaminase (ALT) in serum was measured using transaminase CII test Wako. Paraffin sections were stained with hematoxylin and eosin and observed using an optical microscope.
  • ConA concanavalin A
  • spleen cells activated with ConA were collected, and total RNA was extracted using GenElute Mammalian Total RNA kit (SIGMA-ALDRICH). Further, cDNA was obtained by reverse transcription using a high capacity cDNA RT kit (Applied Biosystems) according to a conventional method. cDNA, a primer for measuring a target gene, and SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems) were mixed, and PCR products were quantified by real-time PCR using 7300 Real-Time PCR System. Oligonucleotides shown in SEQ ID NOs: 25 to 28 were used as primers. Further, GAPDH primers used as control genes are shown in SEQ ID NOs: 29 and 30. The expression levels of P2Y10 receptor and GPR174 receptor are shown in FIGS. It was confirmed that the expression level of any receptor increased upon stimulation with concanavalin A.
  • Spleen cells activated with ConA were collected, washed twice with PBS, suspended in PBS containing 1 ⁇ M CMFDA, and fluorescently labeled at 37 ° C. for 1 hour. Further, the spleen cells were washed twice with PBS and suspended in RPMI1640 medium (containing 0.01% bovine serum albumin (BSA)). A 96-well black plate was treated with 2.5 ⁇ g / ml recombinant mouse ICAM Fc at 4 ° C. for 24 hours, and blocked with PBS containing 0.5% BSA for 30 minutes. 96 well palte was washed 3 times with PBS, and spleen cells were seeded at 2 ⁇ 10 5 cells / well.
  • BSA bovine serum albumin
  • LPS (18: 1), deoxy LPS (18: 1), and LPalloT (18: 1) were used.
  • the test results are shown in FIG. From the test results, it was confirmed that LPS (18: 1) and deoxy LPS (18: 1) inhibit adhesion of spleen cells to ICAM-1, but LPalloT (18: 1) does not inhibit this adhesion ( Compound final concentration: 10 ⁇ M).
  • mice Male, body weight 20-25 g
  • RPMI1640 medium 100 mU / ml penicillin, 100 ⁇ g
  • streptomycin 2 mM L-glutamine, 10% FBS
  • Stimulation was performed in the presence of 1 ⁇ g / ml ConA, and the cells were cultured at 37 ° C. for 60 hours.
  • Spleen cells activated with ConA were collected, suspended in RPMI1640 medium (containing 0.01% BSA), and seeded on a 96-well plate at 5 ⁇ 10 5 cells / well.
  • Activated spleen cells in the presence of test compounds were stimulated at 37 ° C. with 1 ⁇ / ml ConA to promote IL-2 production.
  • the culture supernatant was collected from the 96 well plate.
  • the concentration of IL-2 in the supernatant was determined by sandwich ELISA using Mouse IL-2 Matched Antibody Pairs for ELISA (eBioscience, BMS601MST). The measured value was expressed as mean value ⁇ standard error after several repeated experiments using spleen cells collected from different mouse individuals.
  • LPS (18: 1), deoxy-LPS (18: 1), and LPalloT (18: 1) were used.
  • the test results are shown in FIG. From the test results, LPS (18: 1) and LPalloT (18: 1) inhibit IL-2 production in spleen cells in a concentration-dependent manner, but deoxy-LPS (18: 1) inhibits IL-2 production. It was confirmed not to.

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Abstract

　本発明により、Ｐ２Ｙ１０またはＧＰＲ１７４を使用して、リゾホスファチジルセリン受容体への被検化合物のアゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を評価することを含む、自己免疫疾患の治療剤または予防剤のスクリーニング方法が提供される。

Description

自己免疫疾患治療薬
　本発明は、自己免疫治療薬として有用な化合物のスクリーニング方法に関する。また本発明は、自己免疫疾患治療薬に関する。さらに本発明は、リゾホスファチジルセリンおよび新規なその誘導体に関する。
　リゾリン脂質はアシル基を１本有するリン脂質の総称である。リゾリン脂質は、細胞膜を構成するジアシルリン脂質に比べ疎水性が低下しており、容易に細胞膜から遊離することができるという性質を有している。いくつかのリゾリン脂質は、細胞間あるいは膜間のシグナル分子として機能し、生体内で重要な役割を持っていることが明らかとなっており、従来から、組織障害などの炎症反応が起こる際、生体膜のリン脂質が加水分解されリゾリン脂質が産生されることが知られている（特許文献１：特開２００７－２６７６０１号）。リゾリン脂質の一種であるリゾホスファチジルセリン（ＬｙｓｏＰＳ）はマスト細胞の脱顆粒に起因する急性炎症に関与することが知られている（非特許文献１および２）。ＬｙｓｏＰＳ受容体として、Ｇタンパク質共役受容体の中から、ＬＰＳ１（ＧＰＲ３４）、ＬＰＳ２（Ｐ２Ｙ１０）、ＬＰＳ３（Ａ６３００３３Ｈ２０Ｒｉｋ）、およびＬＰＳ４（ＧＰＲ１７４）が同定されている（非特許文献３）。このうちＬＰＳ１はマスト細胞の脱顆粒反応を誘導または増強するシグナル伝達に関与し、アレルギー性疾患および慢性炎症疾患の処置のための標的となりうるとの報告がされている（特許文献１）。また特定のリゾホスファチジルセリン誘導体（リゾホスファチジルスレオニン）がマスト細胞の脱顆粒反応を強力に促進することが知られている（特許文献２）。
　自己免疫疾患は、本来は異物に対する防御機構である免疫系が過剰に反応し、自分自身の正常な細胞や組織に対してまで攻撃を加えてしまうことで症状を来す疾患の総称であり、全身にわたり影響が及ぶ全身性自己免疫疾患と、特定の臓器だけが影響を受ける臓器特異的疾患の２種類に大別される。自己免疫疾患は、一般的に慢性疾患、難治性疾患となることが多く、そのいくつかは厚生労働省特定疾患研究対象疾患に指定されている。自己免疫疾患の処置方法については多くの研究がなされており、例えば、炎症に関与するサイトカイン特異的抗体を用いた自己免疫疾患に起因する慢性炎症の処置方法（特許文献２）、および病原性自己抗体の中和による疾患の治療方法（特許文献３）などが報告されている。しかし、自己免疫疾患の原因は解明されていない点が多く、有効な治療法は多くの自己免疫疾患でまだ確立されていない。自己免疫疾患に対しては免疫系を抑制する薬剤や炎症を和らげる抗炎症薬（ステロイドまたは非ステロイド薬）などが第一選択剤として用いられている。
特表２００７－２６７６０１号 特開２００７－５８４４０２号 特表２０１０－５０２１８３号 特表２００９－５０５６４０号
Nature 第279巻、第250-252頁(1979年) J.C. FEBS Lett. 第105巻、第58-62頁(1979年) Journal of Health Science 第５７巻、第２号、第115-128頁（2011）
　本発明は、新たな自己免疫疾患の処置方法を提供することを目的とする。さらに本発明は、自己免疫疾患の処置に有用な化合物のアッセイ方法を提供することである。
　本発明者らは、上記課題を達成するために鋭意研究を進めたところ、ＬＰＳ２（Ｐ２Ｙ１０）およびＬＰＳ４（ＧＰＲ１７４）のアゴニスト活性を有する化合物に自己免疫疾患に対する治療および予防効果を見いだし、本発明を完成させた。
　本発明の１つの側面によれば、以下のスクリーニング方法が提供される。
　（１）Ｐ２Ｙ１０またはＧＰＲ１７４を使用して、リゾホスファチジルセリン受容体への被検化合物のアゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を評価することを含む、自己免疫疾患の治療剤または予防剤のスクリーニング方法。
　（２）アゴニスト活性を評価する、上記（１）に記載の方法。
　（３）インターロイキン２産生抑制剤をスクリーニングするための、上記（１）または（２）に記載の方法。
　（４）リンパ球接着抑制剤をスクリーニングするための、上記（１）または（２）に記載の方法。
　（５）Ｐ２Ｙ１０またはＧＰＲ１７４をコードする遺伝子を発現する細胞を使用する、上記（１）～（４）のいずれかに記載の方法。
　（６）細胞がさらに標識化されたヒト上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）リガンドをコードする遺伝子を発現する、上記（５）に記載の方法。
　（７）標識化されたＥＧＦＲリガンドが、ＥＧＦＲリガンドとアルカリフォスファターゼ（ＡＰ）の融合タンパク質である、上記（６）に記載の方法。
　（８）標識化されたＥＧＦＲリガンドが、標識化されたトランスフォーミング増殖因子α（ＴＧＦα）である、上記（６）または（７）に記載の方法。
　（９）対照化合物としてリゾホスファチジルセリンまたはその類縁体を使用する、上記（１）～（８）のいずれかに記載の方法。
　（１０）自己免疫疾患が、悪性関節リウマチ、全身エリテマトーデス、多発性硬化症、重症筋無力症、バセドウ病、抗リン脂質抗体症候群、シェーグレン症候群、原発性胆汁性肝硬変、多発性筋炎、および自己免疫性肝炎から選択される疾患である、上記（１）～（９）のいずれかに記載の方法。　本発明者らは、ＬＰＳ２（Ｐ２Ｙ１０）およびＬＰＳ４（ＧＰＲ１７４）のアゴニスト活性を有する化合物を見いだした。すなわち本発明の別の側面によれば、以下の化合物が提供される。
　（１１）式（Ｉａ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
［式中、Ａ１は下式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
で表される基であり；
　Ｒ１１は、水素原子、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシＣ１－６アルキル、またはベンジルであり；
　Ｒ１２およびＲ１３は、それぞれ独立に、水素原子、Ｃ１－６アルキル、ホルミル、Ｃ１－６アルキルカルボニル、Ｃ１－６アルコキシカルボニル、Ｃ１－６アルコキシＣ１－６アルキル、またはベンジルオキシカルボニルから選択され；
　Ｒ１５は、水素原子、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシＣ１－６アルキル、Ｃ１－６アルキルカルボニルオキシＣ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシカルボニルオキシＣ１－６アルキル、フェニル、ベンジル、フタリジル、ジオキソレノンイルメチル、またはフリルメチルであり；
　ｐは、２～６から選択される整数であり；
　Ｙ１は、直接結合、または－Ｃ（＝Ｏ）－であり；
　Ｒ１６は、Ｃ３－３０アルキルであり、ここでアルキルには１以上のフェニレンまたは５－６員ヘテロアリーレンが挿入されていてもよく、アルキルの１以上の－ＣＨ２－は－Ｏ－と置き換えられていてもよく、炭素原子間の１以上の単結合は、二重結合または三重結合に置き換えられていてもよく、アルキルの末端はフェニルまたは５－６員ヘテロアリールにより置換されていてもよく、該フェニルまたはヘテロアリールは、Ｃ１－１０アルキル、Ｃ１－１０アルコキシおよびハロゲン原子から選択される１以上の置換基により置換されていてもよく；
　上記のベンジル、ベンジルオキシ、フェニル、フタリジル、ジオキソレノンイルメチル、フリルメチル、フェニレン、およびヘテロアリーレンは、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシ、ヒドロキシ、Ｃ１－６アルキルカルボニルオキシ、ニトロ、フェニルおよびハロゲン原子から選択される１以上の置換基により置換されていてもよい］
で表される化合物、または医薬として許容なその塩。
　（１２）Ｒ１６が、Ｃ１０－２４アルキル（ここでアルキルの１以上の－ＣＨ２－は－Ｏ－と置き換えられていてもよく、炭素原子間の１以上の単結合は、二重結合または三重結合に置き換えられていてもよい）、または式：－（ＣＨ２）ｒ－Ｑ１から選択され；
　ｒは、２～２０から選択される整数であり；
　Ｑ１は、フェニルまたは５－６員ヘテロアリールであり、該フェニルまたはヘテロアリールは、Ｃ１－１０アルキル、Ｃ１－１０アルコキシ、フェニルＣ１－１０アルキル、フェニルＣ１－１０アルコキシ、５－６員ヘテロアリールＣ１－１０アルキル、または５－６員ヘテロアリールＣ１－１０アルコキシにより置換されていてもよい、上記（１１）に記載の化合物、または医薬として許容なその塩。
　（１３）Ｒ１６が、Ｃ１２－２０アルキル（ここでアルキルの１～３の－ＣＨ２－は－Ｏ－と置き換えられていてもよく、炭素原子間の１つの単結合は、二重結合に置き換えられていてもよい）、または式：－（ＣＨ２）ｒ－Ｑ１から選択され；
　ｒは、２～７から選択される整数であり；
　Ｑ１は、フェニルまたは５－６員ヘテロアリールであり、該フェニルまたはヘテロアリールは、Ｃ１－１０アルキル、Ｃ１－１０アルコキシ、フェニルＣ１－３アルキル、フェニルＣ１－３アルコキシ、５－６員ヘテロアリールＣ１－３アルキル、または５－６員ヘテロアリールＣ１－３アルコキシにより置換されていてもよい、上記（１２）に記載の化合物、または医薬として許容なその塩。
　さらに本発明の別の側面によれば、以下の化合物が提供される。
　（１４）式（Ｉｂ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000011
 ［式中、Ａ２は式（ＩＩｅ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000012
 で表される基であり；
　Ｒ２１は、水素原子、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシＣ１－６アルキル、またはベンジルであり；
　Ｒ２２およびＲ２３は、それぞれ独立に、水素原子、Ｃ１－６アルキル、ホルミル、Ｃ１－６アルキルカルボニル、Ｃ１－６アルコキシカルボニル、Ｃ１－６アルコキシＣ１－６アルキル、またはベンジルオキシカルボニルから選択され；
　Ｒ２４は、水素原子またはＣ１－３アルキルであり；
　Ｒ２５は、水素原子、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシＣ１－６アルキル、Ｃ１－６アルキルカルボニルオキシＣ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシカルボニルオキシＣ１－６アルキル、フェニル、ベンジル、フタリジル、ジオキソレノンイルメチル、またはフリルメチルであり；
　Ｘ２は、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ、Ｃ１－６アルコキシ、ホルミルオキシ、Ｃ１－６アルキルカルボニルオキシ、またはベンジルオキシであり；
　ｓは、０～４から選択される整数であり；
　Ｙ２は、－Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２７－、または－ＮＲ２７Ｃ（＝Ｏ）－であり；
　Ｒ２６は、式：－（ＣＨ２）ｔ－Ｑ２であり；
　ｔは、２～２０から選択される整数であり；
　Ｑ２は、フェニルまたは５－６員ヘテロアリールであり、該フェニルまたはヘテロアリールは、Ｃ１－１０アルキル、Ｃ１－１０アルコキシ、フェニルＣ１－１０アルキル、フェニルＣ１－１０アルコキシ、５－６員ヘテロアリールＣ１－１０アルキル、または５－６員ヘテロアリールＣ１－１０アルコキシにより置換されていてもよく；
　Ｒ２７は、水素原子、またはＣ１－６アルキルであり；
　さらに上記のベンジル、ベンジルオキシ、フェニル、フタリジル、ジオキソレノンイルメチル、およびフリルメチルは、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシ、ヒドロキシ、Ｃ１－６アルキルカルボニルオキシ、ニトロ、フェニルおよびハロゲン原子から選択される１以上の置換基により置換されていてもよい］
で表される化合物、または医薬として許容なその塩。
　（１５）Ａ２が下式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000013
 で表され、Ｒ２１、Ｒ２２およびＲ２３は、上記（１４）に定義したとおりである、上記（１４）に記載の化合物、または医薬として許容なその塩。
　（１６）Ｒ２６が、Ｃ１２－２０アルキル（ここでアルキルの１～３の－ＣＨ２－は－Ｏ－と置き換えられていてもよく、炭素原子間の１つの単結合は、二重結合に置き換えられていてもよい）、または式：－（ＣＨ２）ｓ－Ｑ２から選択され；
　ｓは、２～７から選択される整数であり；
　Ｑ２は、フェニルまたは５－６員ヘテロアリールであり、該フェニルまたはヘテロアリールは、Ｃ１－１０アルキル、Ｃ１－１０アルコキシ、フェニルＣ１－３アルキル、フェニルＣ１－３アルコキシ、５－６員ヘテロアリールＣ１－３アルキル、または５－６員ヘテロアリールＣ１－３アルコキシにより置換されていてもよい、上記（１４）または（１５）に記載の化合物、または医薬として許容なその塩。
　また本発明者らは、リゾホスファチジルセリン誘導体に自己免疫疾患に対する治療および予防効果を見いだし、本発明を完成させた。すなわち本発明のさらに別の側面によれば、以下の治療剤または予防剤が提供される。
　（１７）式（Ｉ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000014
 ［式中、Ａは式（ＩＩ）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000015
 で表される基であり；
　Ｒ１は、水素原子、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシＣ１－６アルキル、またはベンジルであり；
　Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立に、水素原子、Ｃ１－６アルキル、ホルミル、Ｃ１－６アルキルカルボニル、Ｃ１－６アルコキシカルボニル、Ｃ１－６アルコキシＣ１－６アルキル、またはベンジルオキシカルボニルから選択され；
　Ｒ４は、水素原子またはＣ１－３アルキルであり；
　Ｒ５は、水素原子、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシＣ１－６アルキル、Ｃ１－６アルキルカルボニルオキシＣ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシカルボニルオキシＣ１－６アルキル、フェニル、ベンジル、フタリジル、ジオキソレノンイルメチル、またはフリルメチルであり；
　Ｘは、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ、Ｃ１－６アルコキシ、ホルミルオキシ、Ｃ１－６アルキルカルボニルオキシ、またはベンジルオキシであり；
　ｎは、０～４から選択される整数であり；
　Ｙは、－Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７－、または－ＮＲ７Ｃ（＝Ｏ）－であり；
　Ｒ６は、Ｃ３－３０アルキルであり、ここでアルキルには１以上のフェニレンまたは５－６員ヘテロアリーレンが挿入されていてもよく、アルキルの１以上の－ＣＨ２－は－Ｏ－と置き換えられていてもよく、炭素原子間の１以上の単結合は、二重結合または三重結合に置き換えられていてもよく、アルキルの末端はフェニルまたは５－６員ヘテロアリールにより置換されていてもよく、該フェニルまたはヘテロアリールは、Ｃ１－１０アルキル、Ｃ１－１０アルコキシおよびハロゲン原子から選択される１以上の置換基により置換されていてもよく；
　Ｒ７は、水素原子、またはＣ１－６アルキルであり；
　上記のベンジル、ベンジルオキシ、フェニル、フタリジル、ジオキソレノンイルメチル、フリルメチル、フェニレン、およびヘテロアリーレンは、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシ、ヒドロキシ、Ｃ１－６アルキルカルボニルオキシ、ニトロ、フェニルおよびハロゲン原子から選択される１以上の置換基により置換されていてもよい］
で表される化合物、または医薬として許容なその塩を含有する、自己免疫疾患の治療剤または予防剤。
　（１８）Ａが下式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000016
 で表され、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、上記（１７）に定義したとおりである、上記（１７）に記載の治療剤または予防剤。
　（１９）Ｒ６が、Ｃ１０－２４アルキル（ここでアルキルの１以上の－ＣＨ２－は－Ｏ－と置き換えられていてもよく、炭素原子間の１以上の単結合は、二重結合または三重結合に置き換えられていてもよい）、または式：－（ＣＨ２）ｍ－Ｑから選択され；
　ｍは、２～２０から選択される整数であり；
　Ｑは、フェニルまたは５－６員ヘテロアリールであり、該フェニルまたはヘテロアリールは、Ｃ１－１０アルキル、Ｃ１－１０アルコキシ、フェニルＣ１－１０アルキル、フェニルＣ１－１０アルコキシ、５－６員ヘテロアリールＣ１－１０アルキル、または５－６員ヘテロアリールＣ１－１０アルコキシにより置換されていてもよい、上記（１７）または（１８）に記載の治療剤または予防剤。
　（２０）Ｒ６が、Ｃ１２－２０アルキル（ここでアルキルの１～３の－ＣＨ２－は－Ｏ－と置き換えられていてもよく、炭素原子間の１つの単結合は、二重結合に置き換えられていてもよい）、または式：－（ＣＨ２）ｍ－Ｑから選択され；
　ｍは、２～７から選択される整数であり；
　Ｑは、フェニルまたは５－６員ヘテロアリールであり、該フェニルまたはヘテロアリールは、Ｃ１－１０アルキル、Ｃ１－１０アルコキシ、フェニルＣ１－３アルキル、フェニルＣ１－３アルコキシ、５－６員ヘテロアリールＣ１－３アルキル、または５－６員ヘテロアリールＣ１－３アルコキシにより置換されていてもよい、上記（１９）に記載の治療剤または予防剤。
　（２１）（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－オレオイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－バセノイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－エライドイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－パルミトレオイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－パルミトイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－ミリストイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－ラウロイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－ヘキサデシルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（２－オレイルオキシエトキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－オレイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（４－オレイルオキシブトキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（５－オレイルオキシペントキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［３－｛８－（４－ヘプチル－１，２，３－トリアゾル－１－イル）オクタノイルオキシ｝プロポキシ－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［３－｛８－（４－ヘキシル－１，２，３－トリアゾル－１－イル）オクタノイルオキシ｝プロポキシ－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［６－｛４－ヘキシルオキシ－（２Ｚ）－２－ブテン－１－イルオキシ｝ヘキサノイルオキシ］プロポキシ－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［２－（オレイルオキシカルボニル）エトキシ－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［３－（オレイルオキシカルボニル）プロポキシ－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［４－（オレイルオキシカルボニル）ブトキシ－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
　（２Ｓ，３Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－オレオイルオキシプロピル）－ヒドロキシホスホリルオキシ］酪酸；
　（２Ｓ，３Ｓ）－２－アミノ－３－［｛３－（（９Ｅ）－オクタデセノイルオキシ）プロピル｝－ヒドロキシホスホリルオキシ］酪酸；
　（２Ｓ，３Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－ステアロイルオキシプロピル）－ヒドロキシホスホリルオキシ］酪酸；
　（２Ｓ，３Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－パルミトレオイルオキシプロピル）－ヒドロキシホスホリルオキシ］酪酸；
　（２Ｓ，３Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－パルミトイルオキシプロピル）－ヒドロキシホスホリルオキシ］酪酸；
　（２Ｓ，３Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｒ）－２－ヒドロキシ－３－オレオイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］酪酸；
　（２Ｓ，３Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｒ）－２－ヒドロキシ－３－パルミトイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］酪酸；
　（２Ｓ，３Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｒ）－２－ヒドロキシ－３－ステアロイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］酪酸；
　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｓ）－２－ヒドロキシ－３－オレオイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｓ）－２－ヒドロキシ－３－ステアロイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｓ）－２－ヒドロキシ－３－パルミトイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｒ）－２－ヒドロキシ－３－｛３－（２－ヘプチルオキシフェニル）プロピオニルオキシ｝プロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｒ）－２－ヒドロキシ－３－｛３－（３－ヘプチルオキシフェニル）プロピオニルオキシ｝プロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｒ）－２－ヒドロキシ－３－｛３－（４－ヘプチルオキシフェニル）プロピオニルオキシ｝プロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｒ）－２－ヒドロキシ－３－｛３－（４－ベンジルオキシフェニル）プロピオニルオキシ｝プロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｒ）－２－ヒドロキシ－３－オレオイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｒ）－２－ヒドロキシ－３－ステアロイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；および
　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｒ）－２－ヒドロキシ－３－パルミトイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸
から選択される化合物、または医薬として許容なその塩を含有する、上記（１７）～（２０）のいずれかに記載の治療剤または予防剤。
　（２２）自己免疫疾患が、悪性関節リウマチ、全身エリテマトーデス、多発性硬化症、重症筋無力症、バセドウ病、抗リン脂質抗体症候群、シェーグレン症候群、原発性胆汁性肝硬変、多発性筋炎、および自己免疫性肝炎から選択される疾患である、上記（１７）～（２１）のいずれかに記載の治療剤または予防剤。
　さらに本発明の別の側面によれば、上記（１１）～（１６）のいずれかに記載の化合物、もしくは上記（１７）～（２１）のいずれかにおいて定義される式（Ｉ）の化合物、または医薬として許容なその塩を含有する、自己免疫疾患を治療または予防するための医薬組成物が提供される。
　さらに本発明の別の側面によれば、上記（１１）～（１６）のいずれかに記載の化合物、もしくは上記（１７）～（２１）のいずれかにおいて定義される式（Ｉ）の化合物、または医薬として許容なその塩を含有する、インターロイキン２産生抑制剤が提供される。
　さらに本発明の別の側面によれば、上記（１１）～（１６）のいずれかに記載の化合物、もしくは上記（１７）～（２１）のいずれかにおいて定義される式（Ｉ）の化合物、または医薬として許容なその塩を含有する、リンパ球接着抑制剤が提供される。
　さらに本発明の別の側面によれば、上記（１１）～（１６）のいずれかに記載の化合物、もしくは上記（１７）～（２１）のいずれかにおいて定義される式（Ｉ）の化合物、または医薬として許容なその塩を患者に投与することを含む、自己免疫疾患の治療方法または予防方法が提供される。
　本発明によれば、新たな自己免疫疾患の処置方法となる自己免疫疾患の治療剤または予防剤が提供される。さらに本発明は、自己免疫疾患の処置に有用な化合物の効率なスクリーニング方法が提供される。
図１は、リゾホスファチジルセリンまたはその類縁体のＰ２Ｙ１０受容体に対するアゴニスト活性の評価試験結果（試験例１）を表すグラフである。 図２は、リゾホスファチジルセリンまたはその類縁体のＧＰＲ１７４受容体に対するアゴニスト活性の評価試験結果（試験例１）を表すグラフである。 図３は、試験例２における１７週齢の全身性エリテマトーデス自然発症マウスの白血球数を表すグラフである。 図４は、試験例２における１７週齢の全身性エリテマトーデス自然発症マウスの自己抗体産生量を示すグラフである。 図５は、試験例２における１７週齢の全身性エリテマトーデス自然発症マウスの脾臓の変化を示すグラフである。 図６は、試験例２における１７週齢の全身性エリテマトーデス自然発症マウスの腸間膜リンパ節の変化を示すグラフである。 図７は、試験例２におけるＰＢＳ投与群（対照群）の１７週齢の全身性エリテマトーデス自然発症マウスの腎臓への免疫複合体の沈着を示す図である。 図８は、試験例２における試験化合物投与群の１７週齢の全身性エリテマトーデス自然発症マウスの腎臓への免疫複合体の沈着を示す図である。 図９は、試験例３におけるヒト自己免疫疾患肝炎モデルマウスの血中アラニントランスアミナーゼ（ALT）値を示すグラフである。 図１０は、試験例３におけるヒト自己免疫疾患肝炎モデルマウス（ＰＢＳ投与群）の肝臓切片において肝障害発生部位を示す写真である。 図１１は、試験例３におけるヒト自己免疫疾患肝炎モデルマウス（LPS (18:1) 投与群）の肝臓切片において肝障害発生部位を示す写真である。 図１２は、試験例3におけるヒト自己免疫性疾患モデルマウス（PBS投与群、LPS(18:1)投与群）の肝臓切片において肝障害発生部位を定量化したグラフである。 図１３は、試験例３におけるヒト自己免疫疾患肝炎モデルマウス（deoxy-LPS (18:1) 投与群）の肝臓切片において肝障害発生部位を示す写真である。 図１４は、試験例３におけるヒト自己免疫疾患肝炎モデルマウス（LPalloT (18:1) 投与群）の肝臓切片において肝障害発生部位を示す写真である。 図１５は、コンカナバリンＡで活性化した脾臓由来のリンパ球におけるP2Y10の発現量を示すグラフである（試験例４）。 図１６は、コンカナバリンＡで活性化した脾臓由来のリンパ球におけるGPR174の発現量を示すグラフである（試験例４）。 図１７は、コンカナバリンＡで活性化した脾臓由来のリンパ球のＩＣＡＭ－１への接着に対する試験化合物の影響を示すグラフである（試験例５）。 図１８は、コンカナバリンＡで活性化した脾臓由来のリンパ球のＩＬ－２産生に対する試験化合物の影響を示すグラフである（試験例６）。 図１９は、ヒト、マウスおよびラットの、P2Y10遺伝子のフォワードプライマーおよびリバースプライマーとして使用したオリゴヌクレオチド（配列番号１～６）およびGPR174遺伝子のフォワードプライマーおよびリバースプライマーとして使用したオリゴヌクレオチド（配列番号７～１２）の塩基配列を表す図である。 図２０は、ヒトP2Y10遺伝子の塩基配列を表す図である（配列番号１３）。 図２１は、マウスP2Y10遺伝子の塩基配列を表す図である（配列番号１４）。 図２２は、ラットP2Y10遺伝子の塩基配列を表す図である（配列番号１５）。 図２３は、ヒトGPR174遺伝子の塩基配列を表す図である（配列番号１６）。 図２４は、マウスGPR174遺伝子の塩基配列を表す図である（配列番号１７）。 図２５は、ラットGPR174遺伝子の塩基配列を表す図である（配列番号１８）。 図２６は、ヒト、マウスおよびラットP2Y10タンパク質の配列を表す図である（配列番号１９～２１）。 図２７は、ヒト、マウスおよびラットGPR174タンパク質の配列を表す図である（配列番号２２～２４）。 図２８は、試験例４のリアルタイムＰＣＲ法でプライマーとして使用されたオリゴヌクレオチド（配列番号２５～３０）の塩基配列を表す図である。
　以下、本発明を更に具体的に説明する。
　本発明の１つの側面によれば、Ｐ２Ｙ１０またはＧＰＲ１７４を使用して、リゾホスファチジルセリン受容体への被検化合物のアゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を評価することを含む、医薬化合物のスクリーニング方法が提供される。スクリーニング対象となる被検化合物としては特に限定されず、有機化合物および無機化合物（特に、低分子化合物）、タンパク質、ペプチドなどが例として挙げられる。
　スクリーニングはＰ２Ｙ１０またはＧＰＲ１７４を使用するものであれば特に限定されず、例えば、Ｐ２Ｙ１０またはＧＰＲ１７４をコードする遺伝子を発現する細胞、Ｐ２Ｙ１０またはＧＰＲ１７４をコードする遺伝子を過剰に発現するトランスジェニック非ヒト哺乳動物、ヒトＰ２Ｙ１０またはヒトＧＰＲ１７４をコードする遺伝子を発現するトランスジェニック非ヒト哺乳動物などを用いて行うことができる。ここで、スクリーニングに使用する細胞としては、特には限定されないが、通常使用されている公知の微生物、例えば大腸菌、または酵母、あるいは公知の培養細胞、例えば、HUVEC細胞などが挙げられる。また、非ヒト哺乳動物の例としては、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、サルなどが挙げられる。また、スクリーニングは動物の組織および細胞を使用してもよい。その場合、被検化合物の投与は、例えば、組織または細胞が保持される溶液または培地などに被検化合物を含ませることなどにより、対象に被検化合物を作用させることにより行うことができる。
　本発明のスクリーニング方法は、Ｐ２Ｙ１０またはＧＰＲ１７４への被検化合物のアゴニスト活性を有する化合物のスクリーニングに利用することができる。Ｐ２Ｙ１０またはＧＰＲ１７４の機能から、当該アゴニスト活性を有する化合物は、自己免疫疾患などの疾患の治療剤または予防剤として使用される医薬の候補化合物となる。自己免疫疾患としては、全身性疾患および臓器特異性疾患の何れであってもよく、例えば、悪性関節リウマチ、全身エリテマトーデス、多発性硬化症、重症筋無力症、バセドウ病、抗リン脂質抗体症候群、シェーグレン症候群、原発性胆汁性肝硬変、多発性筋炎、および自己免疫性肝炎などが挙げられる。
　本発明の１つの態様において、本発明のスクリーニング方法はＰ２Ｙ１０またはＧＰＲ１７４をコードする遺伝子を発現する培養細胞を使用して行うことができ、培養細胞の使用は、スクリーニングの効率の点で好ましい。また、Ｐ２Ｙ１０またはＧＰＲ１７４はＧタンパク質共役型受容体であることから、カルシウム応答、ｃＡＭＰ産生、レポーター遺伝子などを指標としてアッセイを行うことができる。本発明の１つの態様として、前記培養細胞にさらに標識化されたヒト上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）リガンドをコードする遺伝子を発現させて、切断される標識化合物の量を定量することによりアッセイを行うことができる。ここで、標識されたＥＧＦＲリガンドの具体例としては、ＥＧＦＲリガンドとアルカリフォスファターゼ（ＡＰ）の融合タンパク質などが挙げられる。また、標識化されるＥＧＦＲリガンドとしては、トランスフォーミング増殖因子α（ＴＧＦα）、ヘパリン結合性EGF様増殖因子（HB-EGF）、およびアンフィレグリン （Amphiregulin）などが挙げられる。標識されたＥＧＦＲリガンドを用いるアッセイ方法は、例えば、Tokumaru et al., J Cell Biol 151, 209-220 (2000)；石黒ら、脂質生化学研究 52, 221-224, (2010)を参照して行うことができる。
　本発明の１つの側面によれば、Ｐ２Ｙ１０またはＧＰＲ１７４を使用して、リゾホスファチジルセリン受容体への被検化合物のアゴニスト活性を評価することを含む、インターロイキン２産生抑制剤またはリンパ球接着抑制剤をスクリーニングするための方法が提供される。好ましくは、インターロイキン２産生抑制剤のスクリーニング方法において、ＧＰＲ１７４が使用され、リンパ球接着抑制剤のスクリーニング方法においてＰ２Ｙ１０が使用される。
　本発明のスクリーニング方法において使用されるＰ２Ｙ１０は、Ｐ２Ｙ１０としてのリゾホスファチジルセリン受容体活性を有するポリペプチドであれば特に限定されす、例えば、ヒト、マウス、ラットなどの哺乳類由来のＰ２Ｙ１０が使用される。具体的な例としては、以下のポリペプチドが挙げられる。
　（ａ）配列番号１９～２１で表されるアミノ酸配列からなるポリペプチド；
　（ｂ）配列番号１９～２１で表されるアミノ酸配列を含み、かつリゾホスファチジルセリン受容体活性を有するポリペプチド；
　（ｃ）配列番号１９～２１で表されるアミノ酸配列において１～１０のアミノ酸が欠失、置換、付加、および／または挿入されたアミノ酸配列を含み、かつリゾホスファチジルセリン受容体活性を有するポリペプチド；
　（ｄ）配列番号１９～２１で表されるアミノ酸配列との相同性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上であるアミノ酸配列を含み、かつリゾホスファチジルセリン受容体活性を有するポリペプチド。
　本発明のスクリーニング方法において使用されるＧＰＲ１７４は、ＧＰＲ１７４としてのリゾホスファチジルセリン受容体活性を有するポリペプチドであれば特に限定されす、例えば、ヒト、マウス、ラットなどの哺乳類由来のＧＰＲ１７４が使用される。具体的な例としては、以下のポリペプチドが挙げられる。
　（ａ）配列番号２２～２４で表されるアミノ酸配列からなるポリペプチド；
　（ｂ）配列番号２２～２４で表されるアミノ酸配列を含み、かつリゾホスファチジルセリン受容体活性を有するポリペプチド；
　（ｃ）配列番号２２～２４で表されるアミノ酸配列において１～１０のアミノ酸が欠失、置換、付加、および／または挿入されたアミノ酸配列を含み、かつリゾホスファチジルセリン受容体活性を有するポリペプチド；
　（ｄ）配列番号２２～２４で表されるアミノ酸配列との相同性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上であるアミノ酸配列を含み、かつリゾホスファチジルセリン受容体活性を有するポリペプチド。
　ここで相同性の数値は、当業者に公知の相同性検索プログラムを用いて算出される数値であってよく、例えば、AltschulらによるBLAST (Basic Local Alignment Search Tool) プログラム（たとえば、Altschul SF, Gish W, Miller W, Myers EW, Lipman DJ., J. Mol. Biol., 215: p403-410 (1990), Altschyl SF, Madden TL, Schaffer AA, Zhang J, Miller W, Lipman DJ., Nucleic Acids Res. 25: p3389-3402 (1997))を利用し決定することができる。例えば、アミノ酸配列については、BLAST2 〔Nucleic Acids Res.、 25、 3389（1997）； Genome Res.、 7、 649 (1997)〕においてデフォルトパラメータを用いて算出される数値などがあげられる。
　本発明において特定のアミノ酸配列の変異体や相同体を使用する場合には、変異体や相同体のアミノ酸配列をコードするＤＮＡを用いて、当該変異体または相同体を調製することができる。このような変異体や相同体をコードするＤＮＡは、化学合成、遺伝子工学的手法、突然変異誘発などの当業者に既知の任意の方法で作製することもできる。具体的には、配列番号１３～１８に記載の配列をコードするＤＮＡを利用し、これらＤＮＡに変異を導入することにより所望のＤＮＡを取得することができる。例えば、ＤＮＡに対し、変異原となる薬剤と接触作用させる方法、紫外線を照射する方法、遺伝子工学的手法等を用いて行うことができる。遺伝子工学的手法の一つである部位特異的変異誘発法は特定の位置に特定の変異を導入できる手法であることから有用であり、モレキュラークローニング第２版、カレント・プロトコールズ・イン・モレキュラー・バイオロジー、Nucleic Acids Research, 10, 6487, 1982、Nucleic Acids Research, 12, 9441, 1984、Nucleic Acids Research, 13, 4431, 1985、Nucleic Acids Research, 13, 8749,1985、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 79, 6409, 1982、Proc. Natl. Acad. Sci.USA, 82, 488, 1985、Gene, 34, 315, 1985、Gene, 102, 67, 1991等に記載の方法に準じて行うことができる。
　本発明のスクリーニングにおいて、対照化合物としてリゾホスファチジルセリンまたはその類縁体を使用することができ、その例としては上記式（Ｉ）、（Ｉａ）および（Ｉｂ）の化合物など、より具体的には後述の実施例に記載した化合物などが挙げられる。
　本明細書において「Ｃ１－３アルキル」とは、炭素数１～３の直鎖状、分岐鎖状、環状のアルキル基を意味し、例えば、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｉ－プロピル、シクロプロピルが含まれる。
　本明細書において「Ｃ１－６アルキル」とは、炭素数１～６の直鎖状、分岐鎖状、環状または部分的に環状のアルキル基を意味し、例えば、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｉ－プロピル、ｎ－ブチル、ｓ－ブチル、ｉ－ブチル、ｔ－ブチル、ｎ－ペンチル、３－メチルブチル、２－メチルブチル、１－メチルブチル、１－エチルプロピル、ｎ－ヘキシル、４－メチルペンチル、３－メチルペンチル、２－メチルペンチル、１－メチルペンチル、３－エチルブチル、および２－エチルブチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、およびシクロプロピルメチルなどが含まれ、例えば、Ｃ１－４アルキルおよびＣ１－３アルキルなども含まれる。
　本明細書の化合物の定義において「Ｃ１－１０アルキル」とは、炭素数１～１０の直鎖状、分岐鎖状、環状または部分的に環状のアルキル基を意味し、例えば、Ｃ１－６アルキルとして既に例示したアルキル基のほか、Ｃ７Ｈ１５、Ｃ８Ｈ１７、Ｃ９Ｈ１９、およびＣ１０Ｈ２１で表される、直鎖状、分岐鎖状、環状または部分的に環状ののアルキル基が含まれる。
　本明細書において「Ｃ３－３０アルキル」とは、炭素数７～３０の直鎖状、分岐鎖状、環状または部分的に環状のアルキル基を意味し、例えば、Ｃ１－６アルキルとして既に例示したＣ３－６アルキル基のほか、Ｃ７Ｈ１５、Ｃ８Ｈ１７、Ｃ９Ｈ１９、Ｃ１０Ｈ２１、Ｃ１１Ｈ２３、Ｃ１２Ｈ２５、Ｃ１３Ｈ２７、Ｃ１４Ｈ２９、Ｃ１５Ｈ３１、Ｃ１６Ｈ３３、Ｃ１７Ｈ３５、Ｃ１８Ｈ３７、Ｃ１９Ｈ３９、Ｃ２０Ｈ４１、Ｃ２１Ｈ４３、Ｃ２２Ｈ４５、Ｃ２３Ｈ４７、Ｃ２４Ｈ４９、Ｃ２５Ｈ５１、Ｃ２６Ｈ５３、Ｃ２７Ｈ５５、Ｃ２８Ｈ５７、Ｃ２９Ｈ５９、およびＣ３０Ｈ６１で表される、直鎖状または分岐鎖状、環状または部分的に環状のアルキル基が含まれる。
　本明細書において「Ｃ１－６アルキルカルボニル」とは、アルキル部分として既に定義したＣ１－６アルキル基を有するアルキルカルボニル基を意味し、例えばメチルカルボニル（アセチル）、エチルカルボニル、tert-ブチルカルボニルの他、Ｃ１－４アルキルカルボニルなどが含まれる。
　本明細書において「Ｃ１－６アルコキシ」とは、アルキル部分として既に定義した炭素数１～６のアルキル基を有するアルキルオキシ基を意味し、例えば、メトキシ、エトキシ、ｎ－プロポキシ、ｉ－プロポキシ、ｎ－ブトキシ、ｓ－ブトキシ、ｉ－ブトキシ、ｔ－ブトキシ、ｎ－ペントキシ、３－メチルブトキシ、２－メチルブトキシ、１－メチルブトキシ、１－エチルプロポキシ、ｎ－ヘキシルオキシ、４－メチルペントキシ、３－メチルペントキシ、２－メチルペントキシ、１－メチルペントキシ、３－エチルブトキシ、シクロペンチルオキシ、シクロヘキシルオキシ、シクロプロピルメチルオキシなどが含まれ、例えば、Ｃ１－４アルコキシおよびＣ１－３アルコキシなども含まれる。また、本明細書において「Ｃ１－４アルコキシ」には、例えばＣ１－３アルコキシなども含まれる。
　本明細書において「Ｃ１－６アルコキシカルボニル」とは、アルコキシ部分として既に定義したＣ１－６アルコキシ基を有するアルコキシカルボニル基を意味し、例えばメトキシカルボニル、エトキシカルボニル、tert-ブトキシカルボニルの他、Ｃ１－３アルコキシカルボニルなどが含まれる。
　本明細書における「Ｃ１－６アルコキシＣ１－６アルキル」には、例えばメトキシメチル、エトキシメチル、２－メトキシエチル、１－メトキシエチルなどが含まれる。
　本明細書におけるベンジルは、式：Ｃ６Ｈ５ＣＨ２－で表される基を意味する。本明細書におけるベンジルオキシは、式：Ｃ６Ｈ５ＣＨ２Ｏ－で表される基を意味する。本明細書におけるベンジルオキシカルボニルは、式：Ｃ６Ｈ５ＣＨ２ＯＣ（＝Ｏ）－で表される基を意味する。
　本明細書において「５－６員へテロアリール」とは、酸素原子、窒素原子および硫黄原子から選択される１以上のヘテロ原子を含む、環原子が５～６の単環の芳香族ヘテロ環基を意味する。具体例としては、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、ピリジル、ピリミジル、ピリダジニル、フリル、チエニル、オキサゾリル、オキサジアゾリル、チアゾリル、チアジアゾリルなどが含まれる。
　本明細書において「フェニレン」とは、ベンゼンが２カ所で置換された２価の基を意味し、１，２－置換、１，３－置換、および１，４－置換の何れであってもよい。
　本明細書において「５－６員へテロアリーレン」とは、酸素原子、窒素原子および硫黄原子から選択される１以上のヘテロ原子を含む、環原子が５～６の単環の芳香族ヘテロ環が２カ所で置換された２価の基を意味する。当該基を構成するヘテロ環の具体例としては、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール、ピリジン、ピリミジン、ピリダジニン、フラン、チオフェン、オキサゾール、オキサジアゾール、チアゾール、チアジアゾールなどが挙げられる。
　本明細書において、アルキルに１以上のフェニレンまたは５－６員ヘテロアリーレンが挿入されている場合、フェニレンおよび５－６員ヘテロアリーレンの挿入場所、ならびにフェニレンおよび５－６員ヘテロアリーレンの置換位置は特に限定されない。挿入されるフェニレンおよび５－６員ヘテロアリーレンの数は、例えば１～５、好ましくは１～３である。
　本明細書において、アルキルの１以上の－ＣＨ２－が－Ｏ－と置き換えられている場合、置き換えられる－ＣＨ２－の位置は置き換え可能であれば特に限定されない。また置き換えられた－Ｏ－と－ＣＨ２－の間に、または－Ｏ－と－Ｏ－の間にフェニレンまたは５－６員ヘテロアリーレンが挿入されていてもよい。置き換えられる－Ｏ－の数は、例えば１～１０、好ましくは１～５、より好ましくは１～３である。
　本明細書において、炭素原子間の１以上の単結合が、二重結合または三重結合に置き換えられている場合、置き換えられる単結合の位置は置き換え可能であれば特に限定されない。二重結合はシス配置であってもトランス配置であってもよい。置き換えられる二重結合および三重結合の数は、例えば１～１０、好ましくは１～５、より好ましくは１～３である。
　上記式（Ｉ）、（Ｉａ）、および（Ｉｂ）で表される化合物に関する本発明には、互変異性体、幾何異性体、光学異性体などの各種の立体異性体、およびそれらの混合物が含まれる。
　本発明の化合物の「医薬として許容な塩」とは、医薬品として使用可能な塩であれば特に限定されない。本発明化合物が塩基と形成する塩としては、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アルミニウムなどの無機塩基との塩；メチルアミン、エチルアミン、エタノールアミン等の有機塩基との塩などが挙げられる。当該塩は、酸付加塩であってもよく、かかる塩としては、具体的には、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の鉱酸；および、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸などの有機酸酸との酸付加塩が挙げられる。
　更に、本発明化合物には、水和物、各種溶媒和物や結晶多形等も含まれる。
　本発明の化合物に含まれる原子（例えば、水素原子、炭素原子、酸素原子、窒素原子、硫黄原子およびリン原子など）は、それぞれの天然に最も多く存在する同位体以外の同位体原子であってもよく、当該同位体原子は放射性導体原子であってもよい。すなわち、本発明の１つの側面によれば、同位体原子で標識化された本明細書で既に定義された式（Ｉ）、（Ｉａ）または（Ｉｂ）の化合物、またはその塩が提供される。ここで、同位体原子による標識化は、例えば、放射性同位体による標識化（３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐなど）であってもよく、化合物の調製の容易さの側面からは、３Ｈによる標識化が好ましい。本発明の３Ｈ標識化化合物は、例えば、３Ｈ標識化された脂肪酸またはその誘導体を使用することにより合成することができる。
　本発明の１つの態様において、式（Ｉ）、（Ｉａ）および（Ｉｂ）の化合物は、プロドラッグとして投与され、生体内において活性化合物に変換される。例えば式（Ｉ）のＲ５、（Ｉａ）のＲ１５および（Ｉｂ）のＲ２５はリン酸エステルを形成する基であってもよい。その具体例としては、例えばJournal of Medicinal Chemistry, 2008, 51(8), 2337に記載の基などが挙げられ、Ｃ１－６アルキル（例えば、tert-ブチル）、Ｃ１－６アルコキシＣ１－６アルキル（例えば、メトキシメチル）、Ｃ１－６アルキルカルボニルオキシＣ１－６アルキル（例えば、ピバロイルオキシメチル）、Ｃ１－６アルコキシカルボニルオキシＣ１－６アルキル（例えば、イソプロポキシカルボニルオキシメチル）、置換されていてもよいフェニル（例えば、Ｃ１－３アルコキシフェニル）、置換されていてもよいベンジル（例えば、Ｃ１－６アルコキシ、ヒドロキシ、Ｃ１－６アルキルカルボニルオキシ、ニトロ、およびハロゲン原子から選択される１～３の基により置換されていてもよいベンジル）、フタリジル（例えば、Ｃ１－６アルコキシから選択される１～４の基により置換されていてもよいイソベンゾフラノン－３－イル）、ジオキソレノンイルメチル（例えば、ジオキソレノン環５位がＣ１－６アルコキシまたはフェニルから選択される基により置換されていてもよいジオキソレノン－４－イルメチル）、またはフリルメチル（例えば、フラン環５位がニトロにより置換されていてもよい２－フリルメチルなどが含まれる。
　式（Ｉ）、（Ｉａ）および（Ｉｂ）の化合物は、例えば、以下のスキームに示す工程により合成することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000017
［式中、Ａ、ｎ、Ｘ、Ｙ、Ｒ５、およびＲ６は、本明細書において既に定義したとおりであり；Ｒ１ａおよびＲ２ａは、それぞれ独立にＣ１－６アルキルから選択される］
　式（Ｉ）の化合物は、化合物１－１と化合物１－２を縮合した後に酸化することにより調製することができる。第１段階の縮合反応は例えば塩化メチレン、テトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎ’－ジメチルホルムアミド、トルエン、ジエチルエーテル、１，４－ジオキサンなどの適当な溶媒中で、適当な反応促進剤（例えば１Ｈ－テトラゾールなど）の存在下で行うことができる。この工程は、特に限定はされないが、例えば０～７０℃、好ましくは１５～３０℃の反応温度、および例えば１０分～２日、好ましくは１～２時間の反応時間で行うことができる。また、本工程においては化合物１－１と化合物１－２を適当な溶媒に溶解し、混合した後にトルエンやベンゼンなどの溶媒により共沸処理を施すことが望ましい。
　第２段階の酸化工程は、例えば塩化メチレン、テトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎ’－ジメチルホルムアミド、トルエン、ジエチルエーテル、１，４－ジオキサンなどの適当な溶媒中で、適当な酸化剤（例えばｔ－ブチルヒドロペルオキシド、メタクロロ過安息香酸、ヨウ素－ピリジン－水等）を使用して行うことができる。この工程は、特に限定はされないが、例えば０～７０℃、好ましくは１５～３０℃の反応温度、および例えば５分～１日、好ましくは３０分～１時間の反応時間で行うことができる。第２段階の酸化反応は、第１段階の縮合反応を後処理して得られた生成物に対して行うこともできるが、第１段階の後処理を行うことなしにワンポット反応として行ってもよい。
　得られる化合物１－３が保護基を有する場合は、適切な脱保護条件に付すことにより、および／または、さらに置換基変換を行うことにより、目的の式（Ｉ）、（Ｉａ）および（Ｉｂ）の化合物を得ることができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000018
［式中、Ａ、ｎ、Ｘ、Ｒ５、およびＲ６は、本明細書において既に定義したとおりであり、Ｙは－ＯＣ（＝Ｏ）－である］
　式（Ｉ）の化合物は、化合物２－１を化合物２－２の酸クロリドでアシル化することにより調製することができる。当該反応は例えば塩化メチレン、テトラヒドロフラン、Ｎ,Ｎ’－ジメチルホルムアミド、トルエン、ジエチルエーテル、1，4－ジオキサンなどの適当な溶媒中で、適当な塩基（例えば４－ジメチルアミノピリジンなど）の存在下または塩基の非存在下で行うことができる。この工程は、特に限定はされないが、例えば０～７０℃、好ましくは１５～３０℃の反応温度、および例えば１０分～２日の反応時間で行うことができる。アシル化は、化合物２－２に対応するカルボン酸と適当な縮合剤（例えば、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩など）を使用して行うこともできる。
　得られる化合物２－３が保護基を有する場合は、適切な脱保護条件に付すことにより、および／または、さらに置換基変換を行うことにより、目的の式（Ｉ）、（Ｉａ）および（Ｉｂ）の化合物を得ることができる。
　本発明の医薬組成物は、種々の剤形、例えば、経口投与のためには、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、丸剤、液剤、乳剤、懸濁液、溶液剤、酒精剤、シロップ剤、エキス剤、エリキシル剤とすることができ、非経口剤としては、例えば、皮下注射剤、静脈内注射剤、筋肉内注射剤、腹腔内注射剤などの注射剤；経皮投与または貼付剤、軟膏またはローション；口腔内投与のための舌下剤、口腔貼付剤；ならびに経鼻投与のためのエアゾール剤とすることができるが、これらには限定されない。これらの製剤は、製剤工程において通常用いられる公知の方法により製造することができる。式（Ｉ）、（Ｉａ）および（Ｉｂ）の化合物は、好ましくは非経口剤として投与される。
　当該医薬組成物は、一般に用いられる各種成分を含みうるものであり、例えば、１種以上の薬学的に許容され得る賦形剤、崩壊剤、希釈剤、滑沢剤、着香剤、着色剤、甘味剤、矯味剤、懸濁化剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、補助剤、防腐剤、緩衝剤、結合剤、安定剤、コーティング剤等を含みうる。また本発明の医薬組成物は、持続性または徐放性剤形であってもよい。
　本発明の治療剤、予防剤、または医薬組成物の投与量は、投与経路、患者の体型、年齢、体調、疾患の度合い、発症後の経過時間等により、適宜選択することができ、本発明の医薬組成物は、治療有効量および／または予防有効量の上記式（Ｉ）、（Ｉａ）、または（Ｉｂ）の化合物を含むことができる。本発明において上記式（Ｉ）、式（Ｉａ）または式（Ｉｂ）の化合物は、一般に１～１００００ｍｇ／日／成人の用量で使用されうる。当該医薬組成物の投与は、単回投与または複数回投与であってもよく、例えば免疫抑制剤（シクロスポリン、タクロリムス、シロリムス、、メトトレキサート、アザチオプリンなど）、ステロイド系抗炎症薬（ヒドロコルチゾン、プレドニゾロン、デキサメタゾンなど）、非ステロイド系抗炎症薬（ロキソプロフェンナトリウム、インドメタシン、ジクロフェナクナトリウムなど）、または抗体医薬（インフリキシマブ、アダリムマブ、トシリズマブ、セルトリズマブペゴル、エタネルセプトなど）などの他の薬剤と組み合わせて使用することもできる。
　本発明の治療剤または予防剤は、必要に応じ、従来公知の着色剤、保存剤、香料、風味剤、コーティング剤、抗酸化剤、ビタミン、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、およびミネラル分（鉄、亜鉛、マグネシム、ヨードなど）などの成分を含有していてもよい。本発明の治療剤または予防剤は、医薬組成物、機能性食品、健康食品、飲料、サプリメントなどに適した形態、例えば顆粒剤（ドライシロップを含む）、カプセル剤（軟カプセル剤、硬カプセル剤）、錠剤（チュアブル剤などを含む）、散剤（粉末剤）、丸剤などの各種の固形製剤、または内服用液剤（液剤、懸濁剤、シロップ剤を含む）などの液状製剤などの形態で調製してもよい。また、本発明の治療剤または予防剤は、そのまま、医薬組成物、機能性食品、健康食品、サプリメントなどとして使用することもできる。
　製剤化のための添加物としては、例えば、賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、流動化剤、分散剤、湿潤剤、防腐剤、粘稠剤、ｐＨ調整剤、着色剤、矯味矯臭剤、界面活性剤、溶解補助剤が挙げられる。また、液剤の形態にする場合は、ペクチン、キサンタンガム、グアガムなどの増粘剤を配合することができる。また、コーティング剤を用いてコーティング錠剤にしたり、ペースト状の膠剤とすることもできる。さらに、他の形態に調製する場合であっても、従来の方法に従えばよい。
　以下、実施例を示すことにより本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
　試薬およびデータ測定
　試薬はＳｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ．、東京化成工業、和光純薬、関東化学から購入したものをさらに精製することなく使用した。１Ｈ－および１３Ｃ－ＮＭＲは、ＢＲＵＫＥＲ　ＡＶＡＮＣＥ４００スペクトロメーター（４００ＭＨｚ）を使用して測定し、ケミカルシフトは重クロロホルム（７．２６ｐｐｍ（１Ｈ－ＮＭＲ）、７７．００ｐｐｍ（１３Ｃ－ＮＭＲ））に対するｐｐｍで表示した。３１Ｐ－ＮＭＲケミカルシフトは水中のリン酸（８５％ｗ／ｗ、０．００ｐｐｍ）に対するｐｐｍで表示した。質量分析はＢＲＵＫＥＲ　ｍｉｃｒｏＴＯＦ－０５スペクトロメーター（ESI-TOF）またはa SHIMADZU AXIMA-TOF (MALDI-TOF)のポジティブおよびネガティブイオンモードまたはで測定した。カラムクロマトグラフィーに使用するシリカゲルは関東化学から購入した。元素分析はＹａｎａｃｏ　ＭＴ－６　ＣＨＮ　ＣＯＲＤＥＲスペクトロメーターを使用して行った。
　［実施例１］（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－オレオイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000019
　工程１：２－ｔｅｒｔ－ブチル－１，３－ジイソプロピル－イソウレアの調製
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000020
　１，３－ジイソプロピルカルボジイミド（６．３２５ｇ、５０．１ｍｍｏｌ）およびＣｕＣｌ（５０．８ｍｇ、０．５１３ｍｍｏｌ）を無水ｔＢｕＯＨ（４．５５６ｇ、５９．９ｍｍｏｌ）に溶解させ、アルゴン雰囲気下、室温で３日間攪拌した。反応混合物の一部を少量とり、１Ｈ－ＮＭＲにより反応の完了を確認した。無水ＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍｌ）およびポリビニルピロリドン（１．００４ｇ）を反応混合物に加え、１５分間攪拌し、セライト（登録商標）で濾過した。濾液を濃縮し、表題の化合物を得た（８．１０８ｇ、４０．４７ｍｍｏｌ、８１％、緑色油状物）。得られた化合物は更に精製することなくエステル化試薬として使用した。
　1H-NMR(CDCl3):δ=3.760-3.609 (1H, m), 3.230-3.094 (1H, m), 1.456-1.363 (9H, m), 1.070 (6H, d, J=6.44 Hz), 1.036 (6H, d, J=6.16 Hz)。
　工程２：Ｎ－tert-ブトキシカルボニルセリンtert-ブチルエステルの調製
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000021
　１Ｎ　ＮａＯＨ水溶液（１Ｎ、１０ｍｌ）、Ｈ２Ｏ（１０ｍｌ）およびジオキサン（２０ｍｌ）の混合液にＬ－セリン（１．０２５ｇ、９．７５６ｍｍｏｌ）を溶解させ、０℃で撹拌した。当該溶液にジ－ｔｅｒｔ－ブチル　ジカーボネート（３．１９２ｇ、１４．６３ｍｍｏｌ）を０℃で加え、そのまま１０分攪拌し、その後室温で２４時間攪拌した。５％ＫＨＳＯ４水溶液を反応混合物に加え、ｐＨを３にし、ＡｃＯＥｔ（１５０ｍｌ×３）で抽出した。有機層を合わせて、食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を留去して、Ｎ－Ｂｏｃセリンを粗生成物として得た（２．２２８ｇ、無色油状物）。Ｎ－Ｂｏｃセリンの粗生成物（２．２２８ｇ）を無水ＣＨ２Ｃｌ２（１５０ｍｌ）に溶解させ、２－ｔｅｒｔ－ブチル－１，３－ジイソプロピル－イソウレア（７．１１２ｇ）を加え、反応溶液を室温で１８時間攪拌した。反応混合物にヘキサン（１５０ｍｌ）を加え、１０分攪拌した。該混合物をセライト（登録商標）で濾過し、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ＝４：１）により精製し、表題の化合物を得た（１．６７７ｇ、６．４１８ｍｍｏｌ、６６％、白色固体）。
　1H-NMR(CDCl3):δ=5.407 (1H, m), 4.255 (1H, m), 3.897 (2H, m), 2.333 (1H, m), 1.483 (9H, s), 1.452 (9H, s)。
　HRMS (ESI, [M+Na]+): 計算値 C12H23NNaO5 +: 284.1468；実測値：284.1469。
　融点 76.9-77.7 ℃。
　工程３：（２Ｓ）－３－［（ジイソプロピルアミノ）－tert-ブトキシホスフィノオキシ］－２－（tert-ブトキシカルボニルアミノ）プロピオン酸tert-ブチルエステルの調製
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000022
　ビス（ジイソプロピルアミノ）－tert－ブチルホスフィン（６４３．１ｍｇ、２．１１２ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（６ｍｌ）およびトルエン（０．５ｍｌ）の混合溶媒に溶解させ、Ｎ－tert-ブトキシカルボニルセリンtert-ブチルエステル（４３０．１ｍｇ、１．６４６ｍｍｏｌ）を加えた。水分を除去するために、得られた溶液減圧下濃縮し、アルゴン雰囲気下でＣＨ２Ｃｌ２（６ｍｌ）を加え、ＴＨＦ（６ｍｌ）中の１Ｈ－テトラゾール（１３７．２ｍｇ、１．９５９ｍｍｏｌ）を室温で加えた。数分後に白色固体が析出した。反応混合物を３時間室温で攪拌し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２０ｍｌ）を加えて反応をクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ×３）で抽出した。有機層を合わせて、食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ：Ｅｔ３Ｎ＝３５：４：１）により精製し、表題の化合物（７０４．１ｍｇ、１．５１６ｍｍｏｌ、９２％、黄色油状物）を得た。なお、カラムクロマトグラフィーは、溶離液に３％（ｖ／ｖ）Ｅｔ３Ｎを加えてシリカゲルを不活性化して行った。
　1H-NMR(CD2Cl2):δ=5.500 (1/2H, d, J=8.28 Hz), 5.332 (1/2H, d, J=8.28 Hz), 4.218-4.138 (1H, m), 3.895 (1H, m), 3.747-3.650 (1H, m), 3.569 (2H, m), 1.443 (9H, d, J=2.56 Hz), 1.415 (9H, d, J=2.96 Hz), 1.326 (9H, d, J=14.2 Hz), 1.140 (12H, dt, J=2.44, 6.60 Hz)。
　工程４：３－オレオイルオキシ－１－プロパノールの調製
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000023
　１，３－プロパンジオール（６２３．３ｍｇ、８．１９２ｍｍｏｌ）およびピリジン（０．２ｍｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍｌ）に溶解させ、ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）中のオレオイルクロリド（６２３．４ｍｇ，、２．０７２ｍｍｏｌ）を０℃で滴下して加えた。反応混合物を２４時間攪拌し、５％ＫＨＳＯ４水溶液（１５ｍｌ）により反応をクエンチした。有機層を分離し、５％ＫＨＳＯ４水溶液および食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝４：１）により精製し、表題の化合物を得た（５０３．６ｍｇ、１．４７９ｍｍｏｌ、７１％、黄色油状物）。
　1H-NMR(CDCl3):δ=5.345 (2H, m), 4.239 (2H, t, J=6.12 Hz), 3.691 (2H, t, J=6.02 Hz), 2.311 (2H, t, J= 7.54 Hz), 2.016 (4H, m), 1.869 (2H, quintet, J=6.00 Hz), 1.621 (2H, m), 1.285 (20H, m), 0.878 (3H, t, J=6.82 Hz)。
13C-NMR(CDCl3):δ=174.35, 130.03, 129.74, 61.14, 59.25, 34.31, 31.91, 31.80, 29.77, 29.69, 29.53, 29.33 , 29.17, 29.13, 29.10, 27.23, 27.17, 24.98, 22.69, 14.13。
　HRMS (ESI, [M+Na]+): 計算値 C21H40NaO3 +: 363.2870；実測値：363.2846。
　工程５：（２Ｓ）－２－（tert－ブトキシカルボニルアミノ）－３－［（３－オレオイルオキシプロポキシ）－tert－ブトキシ－ホスホリルオキシ］プロピオン酸tertブチルエステルの調製
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000024
　（２Ｓ）－３－［（ジイソプロピルアミノ）－tert-ブトキシホスフィノオキシ］－２－（tert-ブトキシカルボニルアミノ）プロピオン酸tert-ブチルエステル（３１３．４ｍｇ、０．６７７ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）とトルエン（０．５ｍｌ）の混合溶媒に溶解させ、減圧下溶媒を留去した。残渣に３－オレオイルオキシ－１－プロパノール（２７８．１ｍｇ、０．８１７ｍｍｏｌ）およびＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）を加え、減圧下溶媒を留去した。アルゴン雰囲気下で残渣をＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）に溶解させ、ＴＨＦ（５ｍｌ）中の１Ｈ－テトラゾール（１４７．７ｍｇ、２．１１ｍｍｏｌ）の溶液を室温で加えた。数分後に白色の固体が析出した。反応混合物を室温で３時間攪拌し、tert-ブチルヒドロペルオキシド（ＴＢＨＰ）デカン溶液（５．０－６．０Ｍ、０．２７２ｍｌ、１．３６ｍｍｏｌ）を室温で加え、さらに１．５時間室温で攪拌した。反応混合物を水（２０ｍｌ）で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ×３）で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下溶媒を留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ＝６：１）により精製し、表題の化合物を得た（２２７．５ｍｇ、０．３１６ｍｍｏｌ、４７％、黄色油状物）。
　1H-NMR(CDCl3):δ=5.485 (1H, m), 5.332 (2H, m), 4.348 (2H, m),4.223 (1H, m), 4.164 (2H, m), 4.061 (2H, m), 2.288 (2H, t, J=7.68 Hz), 1.995 (6H, m), 1.602 (2H, m), 1.470 (18H, s), 1.439 (9H, s), 1.278 (20H, m), 0.869 (3H, t, J=7.00 Hz)。
　13C-NMR(CDCl3):δ=173.66, 168.34, 155.23, 129.98, 129.71, 83.64, 82.68, 82.65, 79.92, 67.37, 64.07, 64.02, 60.31, 54.46, 54.38, 34.17, 31.87, 29.79, 29.77, 29.74, 29.68, 29.58, 29.49, 29.29, 29.16, 29.12, 29.09, 28.29, 27.94, 27.19, 27.15, 24.89, 22.65, 14.08。
　31P-NMR(CDCl3):δ=-5.584, -5.719。
　HRMS (ESI, [M+Na]+)：計算値：C37H70NNaO10P+: 742.4630；実測値：742.4658。
　工程６：（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－オレオイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸の調製
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000025
　（２Ｓ）－２－（tert－ブトキシカルボニルアミノ）－３－［（３－オレオイルオキシプロポキシ）－tert－ブトキシ－ホスホリルオキシ］プロピオン酸tertブチルエステル（２２５．１ｍｇ、０．３１３ｍｍｏｌ）を０℃でトリフルオロ酢酸（３ｍｌ）に溶解させ、溶液を室温で１．５時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、粗製の目的物（１６４．２ｍｇ、褐色の油状物）を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＡｃＯＨ＝９：１：０→８：１：１）により精製し、表題の化合物を酢酸塩として得た（９３．０ｍｇ、０．１８３ｍｍｏｌ、５９％、白色粉末）。さらに得られた酢酸塩をトリフルオロ酢酸に溶解させ、溶媒を留去し、トリフルオロ酢酸塩を得た（褐色の粉末）。
　1H-NMR(CDCl3):δ=5.362 (2H, m), 4,686 (2H, m), 4.550 (1H, m), 4.248 (2H, m), 4.106 (2H ,m), 2.398 (2H, t, J=7.52 Hz), 2.031 (6H, m), 1.613 (2H, m), 1.265 (20H, m), 0.874 (3H, m)。
　31P-NMR(CDCl3):δ=-1.091。
　HRMS (MALDI-TOF, [M+Na]+):計算値 C24H46NO8PNa+: 530.2853；実測値: 530.2810。
　元素分析：計算値 C24H46NO8P・CF3COOH: C, 50.24; H, 7.62; N, 2.25；実測値: C, 50.52; H, 7.78; N, 2.44。
　融点 164.3℃-165.2℃。
　実施例１と同様の手法により、以下の化合物を調製した。
　［実施例２］（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－バセノイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000026
　1H-NMR(CDCl3):δ= 5.338 (2H, m), 4.143-3.933 (7H, m), 2.275 (2H, m), 2.016-1.952 (4H, m), 1.634-1.588 (4H, m), 1.273 (23H, m), 0.879 (3H, t, J=6.24 Hz)。
　31P-NMR(CDCl3):δ=-1.253。
　HRMS (MALDI-TOF, [M+Na]+)：計算値：C24H46NO8PNa+: 530.2853；実測値: 530.2809。
　元素分析：計算値 C24H46NO8P・0.95CF3COOH: C, 50.51; H, 7.68; N, 2.27；実測値: C, 50.48; H, 7.61; N, 2.66。
　融点 155.0℃-156.2℃。
　［実施例３］（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－エライドイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000027
　1H-NMR(CDCl3):δ= 5.421(2H, m),4.738 (2H, m), 4.627 (1H, m), 4.296 (2H, m), 4.211 (2H, m), 2.427 (2H, t, J=7.68 Hz), 2.089(2H, m), 1.987 (4H, m), 1.655 (2H, m), 1.313 (20H, m), 0.879 (3H, t, J= 6.76 Hz)。
　31P-NMR(CDCl3):δ=-1.026。
　HRMS (MALDI-TOF, [M+Na]+)：計算値：C24H46NNaO8P+: 530.2853；実測値：530.2823.
　元素分析：計算値 C24H46NO8P・1.1CF3COOH: C, 49.71; H, 7.70; N, 2.21；実測値：C, 49.73; H, 7.72; N, 2.16。
　融点 112.3℃-113.8℃。
　［実施例４］（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－パルミトレオイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000028
　1H-NMR(CDCl3):δ= 5.375 (1H, m), 5.114 (1H, m), 4.728 (2H, m), 4.613 (1H, m), 4.286 (2H, t, J=5.98 Hz), 4.206 (2H, m), 2.418 (2H, t, J=6.88 Hz), 2.081-2.029 (4H, m), 1.681-1.634 (4H, m), 1.313 (16H, m), 0.881 (3H, t, J=6.02 Hz)。
　31P-NMR(CDCl3):δ=-1.087。
　HRMS (MALDI-TOF, [M+Na]+): 計算値 C22H42NO8PNa+:502.2540；実測値：502.2578.
　元素分析：計算値：C22H42NO8P・1.3CF3COOH: C, 47.07; H, 6.95; N, 2.23；実測値：C, 46.74; H, 6.97; N, 2.50。
　融点 151.5℃-153.0℃。
　［実施例５］（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－パルミトイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000029
　1H-NMR(CDCl3):δ=4.728 (2H, m), 4.616 (1H, s), 4.291 (2H, m), 4.202 (2H, m), 2.421 (2H, t, J=7.54 Hz), 2.083(2H, m), 1.632 (2H, m), 1.276 (24H, m), 0.881 (3H, t, J=7.04 Hz)。
　31P-NMR(CDCl3):δ=-1.088。
　HRMS (MALDI-TOF, [M+Na]+): 計算値 C22H44NO8PNa+: 504.2697；実測値: 504.2683。
　元素分析：計算値 C22H44NO8P・CF3COOH: C, 48.40; H, 7.83; N, 2.68；実測値: C, 48.77; H, 7.83; N, 2.68。
　融点 156.5℃-157.3℃。
　［実施例６］（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－ミリストイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000030
　1H-NMR(CDCl3/TFA-d=4:1):δ=4.728-4.627 (3H, m), 4.290-4.223 (4H, m), 2.421 (2H, m), 2.092 (2H, m), 1.631 (2H, m), 1.271 (20H, m), 0.878 (3H, t, J=6.80 Hz)。
　31P-NMR(CDCl3/TFA-d=4:1):δ=-1.056。
　融点 152.3-153.1 ℃。
　元素分析：計算値：C20H40NO8P?0.5CF3COOH: C, 49.41; H, 8.00; N, 2.74；実測値：C, 49.58; H, 7.93; N, 2.82。
　［実施例７］（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－ラウロイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000031
　1H-NMR(CDCl3/TFA-d=4:1):δ=4.734-4.608 (3H, m), 4.286 (4H, m), 2.412 (2H, m), 2.086 (2H, m), 1.621 (2H, m), 1.264 (16H, m), 0.874 (3H, t, J=6.80 Hz)
31P-NMR(CDCl3/TFA-d=4:1):δ=-1.299。
　融点 148.1-149.0 ℃。
　元素分析：計算値 C18H36NO8P?0.3CF3COOH: C, 48.60; H, 7.96; N, 3.05；実測値: C, 48.70; H, 8.24; N, 3.18。
　［実施例８］（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－ヘキサデシルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000032
　1H-NMR(CDCl3/TFA-d=4:1):δ= 4.699 (2H, m), 4.584 (1H, m), 4.188 (2H, m), 3.771 (2H, t, J=5.94 Hz), 3.635 (2H, t, J=7.14 Hz), 2.034 (2H, m), 1.629 (2H, m), 1.264 (26H, m), 0.878 (3H, t, J=6.82 Hz)。
　31P-NMR(CDCl3/TFA-d=4:1):δ=-1.006。
　元素分析：計算値 C22H46NNaO7P + 0.5CF3CO2H: C, 52.66; H, 8.93; N, 2.67；実測値：C, 52.75; H, 9.02; N, 2.76。
　融点 135.1-136.4 ℃。
　HRMS (MALDI-TOF, [M+Na]+)：計算値：C22H46NNaO7P+:490.2904；実測値：490.2893。
　［実施例９］（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（２－オレイルオキシエトキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000033
　1H-NMR(CDCl3/TFA-d=4:1):δ=5.360 (2H, m), 4.630 (2H, m), 4.520 (1H, m), 4.203 (2H, m), 3.825 (2H, m), 3.665 (2H, t, J=6.44 Hz), 2.023 (4H, m), 1.621 (2H, m), 1.269 (22H, m), 0.875 (3H, t, J=6.68 Hz)。
　31P-NMR(CDCl3):δ=-1.508。
　融点：144.6-145.8 ℃。
　元素分析：計算値：C23H46NO7P?0.75CF3COOH: C, 52.07; H, 8.34; N, 2.48；実測値：C, 51.90; H, 8.38; N, 2.56。
　［実施例１０］（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－オレイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000034
　1H-NMR(CDCl3/TFA-d=4:1):δ= 5.360 (2H, m), 4.685 (2H, m), 4.569 (1H, m), 4.172 (2H, m), 3.762 (2H, m), 3.626 (2H, t, J=7.04 Hz), 2.027 (4H, m), 1.624 (4H, m), 1.262 (22H, m), 0.875 (3H, t, J=6.72 Hz)。
　31P-NMR(CDCl3/TFA-d=4:1):δ=-1.116。
　HRMS (MALDI-TOF, [M+Na]+): 計算値 C24H48NNaO7P+:516.3061. Found: 516.3033。
　元素分析：計算値：C24H48NO7P + 0.9CF3CO2H: C, 51.97; H, 8.27; N, 2.35；実測値：C, 52.16; H, 8.43; N, 2.49。
　融点：155.1-156.1 ℃。
　［実施例１１］（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（４－オレイルオキシブトキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000035
　1H-NMR(CDCl3/TFA-d=4:1):δ= 5.370 (2H, m), 4.703 (2H, m), 4.584 (1H, m), 4.124 (2H, m), 3.677 (2H, m), 3.632 (2H, t, J=7.12 Hz), 2.033 (2H, m), 1.752 (4H, m), 1.625 (4H, m), 1.271 (22H, m), 0.878 (3H, t, J=6.72 Hz)。
　31P-NMR(CDCl3/TFA-d=4:1):δ=-1.140。
　HRMS (MALDI-TOF, [M+Na]+)：計算値 C25H50NNaO7P+:530.3217. Found: 530.3180。
　元素分析：計算値 C25H50NO7P + 1.5CF3CO2H: C, 49.55; H, 7.65; N, 2.06；実測値：C, 49.43; H, 7.95; N, 2.32。
　融点：158.9-159.8 ℃。
　［実施例１２］（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（５－オレイルオキシペントキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000036
　1H-NMR(CDCl3/TFA-d=4:1):δ=5.370 (2H, m), 4.683 (2H, m), 4.562 (1H, m), 4.082 (2H, m), 3.625 (4H, m), 2.025 (4H, m), 1.665 (6H, m), 1.424 (2H, m), 1.299 (22H, m), 0.878 (3H, t, J=6.78 Hz)。
　31P-NMR(CDCl3):δ=-1.121。
　融点 148.2-149.4 ℃。
　元素分析：計算値 C26H52NO7P?0.6CF3COOH: C, 55.36; H, 8.98; N, 2.37；実測値: C, 55.58; H, 9.16; N, 2.40。
　［実施例１３］（２Ｓ）－２－アミノ－３－［３－｛８－（４－ヘプチル－１，２，３－トリアゾル－１－イル）オクタノイルオキシ｝プロポキシ－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000037
　1H-NMR(CDCl3):δ= 7.878 (1H, s), 4.707 (2H, m), 4.621 (1H, m), 4.538 (2H, t, J=7.26 Hz), 4.270 (2H, m), 4.188 (2H, m), 2.874 (2H, t, J=7.86 Hz), 2.418 (2H, t, J=7.26 Hz), 2.037 (4H, m), 1.720 (2H, m), 1.628 (2H, m), 1.367-1.276 (14H, m), 0.866 (3H, t, J=6.78 Hz)。
　31P-NMR(CDCl3):δ=-1.142。
　HRMS (MALDI-TOF, [M+Na]+)：計算値：C23H43N4NaO8P+:557.2711；実測値：557.2755。
　融点 107.8-108.5℃。
　元素分析：計算値 C23H43N4O8P・0.9CF3COOH: C, 46.75; H, 6.94; N, 8.79；実測値: C, 46.93; H, 7.20; N, 8.39。
　［実施例１４］（２Ｓ）－２－アミノ－３－［３－｛８－（４－ヘキシル－１，２，３－トリアゾル－１－イル）オクタノイルオキシ｝プロポキシ－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000038
　1H-NMR(CDCl3):δ= 7.905 (1H, s), 4.743 (2H, m), 4.652 (1H, m), 4.557 (2H, t, J=7.32 Hz), 4.295 (2H, t, J=5.93 Hz), 4.214 (2H, m), 2.895 (2H, t, J=7.90 Hz), 2.440 (2H, t, J=7.50 Hz), 2.096-2.020 (4H, m), 1.737 (2H, m), 1.650 (2H, m), 1.389-1.302 (12H, m), 0.885 (3H, t, J=6.98 Hz)。
　31P-NMR(CDCl3):δ=-1.054。
　HRMS (MALDI-TOF, [M+Na]+)：計算値 C22H41N4O8PNa+:543.2554；実測値：543.2545。
　融点 113.1-114.2℃。
　元素分析：計算値 C22H41N4O8P・1.25CF3COOH: C, 44.14; H, 6.45; N, 8.40；実測値: C, 43.92; H, 6.85; N, 8.67。
　［実施例１５］（２Ｓ）－２－アミノ－３－［６－｛４－ヘキシルオキシ－（２Ｚ）－２－ブテン－１－イルオキシ｝ヘキサノイルオキシ］プロポキシ－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000039
　1H-NMR(CDCl3):δ= 5.823 (2H, m), 4.714 (2H, m), 4.602 (1H, m), 4.284 (2H, t, J=5.8 Hz), 4.240 (4H, d, J=5.6 Hz), 4.186 (2H, m), 3.647 (4H, t, J=7.0 Hz), 2.430 (2H, t, J=7.6 Hz), 2.067 (2H, m), 1.698-1.605 (6H, m), 1.414-1.297 (8H, m), 0.878(3H, t, J=6.5 Hz)。
　31P-NMR(CDCl3):δ=-1.144。
HRMS (MALDI-TOF, [M+Na]+)：計算値 C22H42NNaO10P+: 534.2439；実測値: 534.2394。
　融点 144.2-145.2℃。
　元素分析：計算値：C22H42NO10P・0.7CF3COOH: C, 47.53; H, 7.28; N, 2.37；実測値：C, 47.44; H, 7.64; N, 2.66。
　［実施例１６］（２Ｓ）－２－アミノ－３－［２－（オレイルオキシカルボニル）エトキシ－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000040
　1H-NMR(CDCl3/TFA-d=4:1):δ=5.377 (2H, m), 4.709 (2H, m), 4.609 (1H, m), 4.360 (2H, m), 4.165 (2H, m), 2.814 (2H, m), 2.033 (4H, m), 1.677 (2H, m), 1.272 (22H, m), 0.878 (3H, t, J=6.60 Hz)。
　31P-NMR(CDCl3/TFA-d=4:1):δ=-1.483。
　融点：137.9-139.0 ℃。
　元素分析：計算値：C24H46NO8P?0.8CF3COOH: C, 51.35; H, 7.88; N, 2.34；実測値：C, 51.42; H, 7.98; N, 2.47。
　［実施例１７］（２Ｓ）－２－アミノ－３－［３－（オレイルオキシカルボニル）プロポキシ－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000041
　1H-NMR(CDCl3/TFA-d=4:1):δ=5.368 (2H, m), 4.664 (2H, m), 4.553 (1H, m), 4.137 (4H, m), 2.528 (2H, m), 2.031 (6H, m), 1.660 (2H, m), 1.265 (22H, m), 0.877 (3H, t, J=6.78 Hz)。
　31P-NMR(CDCl3):δ=-1.401。
　融点 165.7-166.8 ℃。
　元素分析：計算値 C25H48NO8P?0.7CF3COOH: C, 52.72; H, 8.16; N, 2.33；実測値: C, 52.60; H, 8.42; N, 2.43。
　［実施例１８］（２Ｓ）－２－アミノ－３－［４－（オレイルオキシカルボニル）ブトキシ－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000042
　1H-NMR(CDCl3/TFA-d=4:1):δ=5.372 (2H, m), 4.714 (2H, m), 4.594 (1H, m), 4.143 (4H, m), 2.462 (2H, m), 2.029 (4H, m), 1.730-1.668 (6H, m), 1.268 (22H, m), 0.878 (3H, t, J=6.68 Hz)。
　31P-NMR(CDCl3/TFA-d=4:1):δ=-1.131。
　融点163.4-164.3 ℃。
　元素分析：計算値 C26H50NO8P?1.3CF3COOH: C, 50.23; H, 7.56; N, 2.05；実測値: C, 50.14; H, 7.64; N, 2.28。
　［実施例１９］（２Ｓ，３Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－オレオイルオキシプロピル）－ヒドロキシホスホリルオキシ］酪酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000043
　1H-NMR(CDCl3):δ= 5.384 (2H, m), 5.138 (1H, m), 4.507 (1H, s), 4.290 (2H, t, J=6.14 Hz), 4.214 (2H, m), 2.426 (2H, t, J=7.62 Hz), 2.105-1.991 (4H, m), 1.649 (6H, m), 1.278 (21H, m), 0.881 (3H, t, J=6.32 Hz)。
　31P-NMR(CDCl3):δ=-1.370。
　融点：158.9-160.2 ℃。
　元素分析：計算値：C25H48NO8P・1.05CF3COOH: C, 50.75; H, 7.71; N, 2.18；実測値：C, 50.56; H, 8.06; N, 2.45。
　HRMS (MALDI-TOF, [M+Na]+)：計算値：C25H48NNaO8P+: 544.3010；実測値：544.3049。
　［実施例２０］（２Ｓ，３Ｓ）－２－アミノ－３－［｛３－（（９Ｅ）－オクタデセノイルオキシ）プロピル｝－ヒドロキシホスホリルオキシ］酪酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000044
　1H-NMR(CDCl3):δ= 5.415 (2H, m), 5.124 (1H, m), 4.495 (1H, m), 4.285 (2H, m), 4.205 (2H, m), 2.420 (2H, t, J=7.72 Hz), 2.087 (2H, m), 1.982 (4H, m), 1.644 (4H, m), 1.281 (21H, m), 0.880 (3H, t, J=6.80 Hz)。
　31P-NMR(CDCl3):δ=-1.406。
　融点：171.9-173.4℃。
　元素分析：計算値：C25H48NO8P・0.6CF3COOH: C, 53.33; H, 8.30; N, 2.37；実測値：C, 53.51; H, 8.12; N, 2.24。
　HRMS (MALDI-TOF, [M+Na]+) ：計算値：C25H48NNaO8P+: 544.3010；実測値：544.3043。
　［実施例２１］（２Ｓ，３Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－ステアロイルオキシプロピル）－ヒドロキシホスホリルオキシ］酪酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000045
　1H-NMR(CDCl3):δ= 5.137 (1H, m), 4.506 (1H, s), 4.290 (2H, t, J=6.28 Hz), 4.216 (2H, m), 2.426 (2H, t, J=7.72 Hz), 2.093 (2H, m), 1.650 (4H, m), 1.279 (29H, m), 0.882 (3H, t, J=6.80 Hz)。
　31P-NMR(CDCl3):δ=-1.350。
　HRMS (MALDI-TOF, [M+Na]+)：計算値：C25H50NNaO8P+: 546.3166；実測値：546.3134。
　元素分析：計算値：C25H50NO8P・0.6CF3COOH: C, 53.15; H, 8.72; N, 2.37；実測値：C, 53.11; H, 8.72; N, 2.45。
　融点：161.3-162.2 ℃。
　［実施例２２］（２Ｓ，３Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－パルミトレオイルオキシプロピル）－ヒドロキシホスホリルオキシ］酪酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000046
　1H-NMR(CDCl3):δ= 5.385 (2H, m), 5.133 (1H, m), 4.501 (1H, m), 4.288 (2H, m), 4.212 (2H, m), 2.422 (2H, t, J=7.66 Hz), 2.091-1.986 (4H, m), 1.657 (6H, m), 1.319 (17H, m), 0.883 (3H, t, J=6.92 Hz)。
　31P-NMR(CDCl3):δ=-1.372。
　融点：203.7-205.1℃。
　HRMS (MALDI-TOF, [M+Na]+)：計算値：C23H44NNaO8P+: 516.2697；実測値：516.2737。
　［実施例２３］（２Ｓ，３Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－パルミトイルオキシプロピル）－ヒドロキシホスホリルオキシ］酪酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000047
　1H-NMR(CDCl3):δ= 5.146 (1H, m), 4.518 (1H, m), 4.297 (2H, m), 4.225 (2H, m), 2.433 (2H, t, J=7.54 Hz), 2.099 (2H, m), 1.654 (4H, m), 1.285 (25H, m), 0.883 (3H, t, J=6.17 Hz)。
　31P-NMR(CDCl3):δ=-1.363。
　融点：153.4-154.1℃。
　元素分析：計算値：C25H46NO8P・0.65CF3COOH: C, 51.23; H, 8.25; N, 2.46；実測値：C, 51.17; H, 8.52; N, 2.81。
　HRMS (MALDI-TOF, [M+Na]+)：計算値：C23H46NNaO8P+: 518.2853；実測値：518.2817。
　なお、実施例９の製造において、以下の化合物を合成中間体として使用した。
　［製造例１］２－オレイルオキシ－１－エタノール
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000048
　工程１：オレイルアルコールの調製
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000049
　ＭｅＯＨ（５ｍｌ）をオレオイルクロリド（３０３．１ｍｇ、１．００７ｍｍｏｌ）に０℃で加え、溶液を室温で２０分間攪拌した。メタノールを留去し、オレイン酸メチルエステルを得た。
　ＬｉＡｌＨ４（５８．１ｍｇ、１．５３１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５ｍｌ）に懸濁させ、ＴＨＦ（５ｍｌ）中のオレイン酸メチルエステル溶液を０℃で加え、室温で３時間攪拌した。反応混合物にＮａＳＯ４・１０Ｈ２Ｏを加え、セライト（登録商標）で濾過し、濾液を濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ＝５：１）により精製し、表題の化合物を得た（２６０．７ｍｇ、０．９７１ｍｍｏｌ、９６％、無色油状物）。
　1H-NMR(CDCl3):δ=5.347 (2H, m), 3.640 (2H, dt, J=6.52, 5.08 Hz), 2.020 (4H, m), 1.565 (2H, m), 1.303-1.268 (22H, m), 1.257 (1H, t, J=5.08 Hz), 0.881 (3H, t, J=6.86 Hz)。
　工程２：オレイルブロミドの調製
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000050
　オレイルアルコール（２４０．５ｍｇ、０．８９６ｍｍｏｌ）およびＣＢｒ４（３４５．１ｍｇ、１．０４１ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）に溶解させ、ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）中のＰＰｈ３（３４５．３ｍｇ、１．３１６ｍｍｏｌ）の溶液を０℃で加え、室温で３０分間攪拌した。反応混合物を濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ＝１０：１）により精製し、目的の化合物を得た（２９６．０ｍｇ、０．８９３ｍｍｏｌ、定量的、無色の油状物）。
　1H-NMR(CDCl3):δ=5.349 (2H, m), 3.406 (2H, t, J=6.88 Hz), 2.015 (4H, m), 1.854 (2H, m), 1.424 (2H, m), 1.303 (20H, m), 0.882 (3H, t, J=6.82 Hz)。
　工程３：２－オレイルオキシ－１－エタノールの調製
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000051
　ＮａＨ（５４９．２ｍｇ、１３．７３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍｌ）中に懸濁させ、０℃で撹拌し、ＤＭＦ（５ｍｌ）中のエチレングリコール（１．１２５５ｍｇ、１８．１３ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加え、０℃で３０分間攪拌した。ＴＨＦ（１０ｍｌ）中のオレイルブロミド（１．５００２ｇ、４．５３０ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加え、反応混合物を１４時間攪拌した。反応混合物をＨ２Ｏ（１０ｍｌ）で希釈し、Ｅｔ２Ｏ（２０ｍｌ×３）で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝６：１）により精製し、表題の化合物を得た（９５４．４ｍｇ、３．０５４ｍｍｏｌ、６７％、無色の油状物）。
　1H NMR (CDCl3) :δ=5.345 (2H, m), 3.726 (2H, m), 3.529 (2H, t, J=4.64 Hz), 3.467 (2H, t, J=6.70 Hz), 1.999 (5H, m), 1.585 (2H, m), 1.299-1.266 (22H, m), 0.879 (3H, t, J=6.84 Hz)。
　13C NMR (CDCl3) :δ=129.95, 129.81, 71.66, 71.41, 61.88, 31.90, 29.76, 29.74, 29.68, 29.66, 29.51, 29.48, 29.45, 29.34, 29.31, 29.24, 27.20, 26.11, 22.67, 14.10。
　HRMS (ESI, [M+Na]+)：計算値 C20H40NaO2 +: 335.2921；実測値: 335.2910。
　同様の手法により、以下の製造例２～４の化合物を調製し、それぞれ実施例１０～１２の化合物の製造に使用した。
　［製造例２］３－オレイルオキシ－１－プロパノール
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000052
　1H NMR (CDCl3) :δ=5.345 (2H, m), 3.778 (2H, t, J=5.55 Hz), 3.612 (2H, t, J=5.70 Hz), 3.424 (2H, t, J=6.64 Hz), 2.472 (1H, brs), 2.010 (4H, m), 1.830 (2H, m), 1.564 (2H, m), 1.279 (22H, m), 0.880 (3H, t, J=6.86 Hz)。
　13C NMR (CDCl3) :δ=129.94, 129.84, 71.50, 70.48, 62.51, 31.94, 31.90, 29.77, 29.75, 29.69, 29.52, 29.46, 29.43, 29.31, 29.25, 27.21, 27.20, 26.14, 22.67, 14.10。
　HRMS (ESI, [M+Na]+)：計算値：C21H42NaO2 +: 349.3077. Found: 349.3070。
　［製造例３］４－オレイルオキシ－１－ブタノール
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000053
　1H NMR (CDCl3) :δ=5.342 (2H, m), 3.639 (2H, t, J=5.82 Hz), 3.451 (2H, t, J=5.80 Hz), 3.423 (2H, t, J=6.72 Hz), 2.524 (1H, brs), 2.007 (4H, m), 1.668 (4H, m), 1.570 (2H, m), 1.277 (22H, m), 0.878 (3H, t, J=6.86 Hz).
　13C NMR (CDCl3) :δ=129.92, 129.83, 71.20, 70.88, 62.78, 31.89, 30.49, 29.76, 29.74, 29.64, 29.62, 29.51, 29.45, 29.43, 29.34, 29.31, 29.25, 27.19, 27.05, 26.13, 22.67, 14.09.
　HRMS (ESI, [M+Na]+)：計算値：C22H44NaO2 +: 363.3234. Found: 363.3216。
　［製造例４］５－オレイルオキシ－１－ペンタノール
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000054
　1H NMR (CDCl3) :δ=5.342 (2H, m), 3.646 (2H, t, J=6.50 Hz), 3.407 (2H, t, J=6.56 Hz), 3.388 (2H, t, J=6.76 Hz), 2.014 (4H, m), 1.576 (6H, m), 1.424 (3H, m), 1.291 (22H, m), 0.877 (3H, t, J=6.86 Hz).
　13C NMR (CDCl3) :δ=129.92, 129.84, 71.05, 70.74, 62.86, 32.52, 31.89, 29.74, 29.51, 29.49, 29.46, 29.44, 29.31, 29.25, 27.19, 26.18, 22.67, 22.45, 14.09。
　HRMS (ESI, [M+Na]+)：計算値：C23H46NaO2 +: 377.3390；実測値: 377.3366。
　実施例１３の製造において、以下の化合物を合成中間体として使用した。
　［製造例５］３－｛８－（４－ヘプチル－１，２，３－トリアゾル－１－イル）オクタノイルオキシ｝－１－プロパノール
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000055
　工程１：８－アジドオクタン酸の調製
　Ｎ３－（ＣＨ２）７ＣＯＯＨ
　ＤＭＦ（８０ｍｌ）中の８－ブロモ－ｎ－オクタン酸（４．５０９ｇ、２０．２１ｍｍｏｌ）の溶液にＮａＮ３（５．７６ｇ、８８．６０ｍｍｏｌ）を加え、室温で２１時間攪拌した。反応混合物にＫＨＳＯ４水溶液（１Ｎ、５０ｍｌ）を加え、ヘキサン（１００ｍｌ×３）で抽出した。合わせた有機層をで乾燥させ、溶媒を留去し、表題の化合物を得た（２．９５７ｇ、１５．９６ｍｍｏｌ、７９％、無色油状物）。
　1H NMR (CDCl3) :δ=3.254 (2H, t, J=6.80 Hz), 2.348 (2H, t, J=7.60 Hz), 1.640-1.595 (4H, m), 1.352 (6H, m)。
　工程２：８－（４－ヘプチル－１，２，３－トリアゾル－１－イル）オクタン酸の調製
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000056
　８－アジドオクタン酸（１．００７ｇ、５．４３６ｍｍｏｌ）および１－ノニン（６７８．２ｍｇ、５．４６０ｍｍｏｌ）をtert－ブチルアルコールおよび水の１：１混合液（２１．６ｍｌ）中に懸濁させた。アスコルビン酸ナトリウム（０．５５ｍｍｏｌ、新たに調製した１Ｍ水溶液で５５０μｌ）、続いて水（２００μｌ）中の硫酸銅（ＩＩ）５水和物（１４．９ｍｇ、０．０５９７ｍｍｏｌ）の溶液を加え、混合物を２３時間激しく攪拌した。反応混合物を水（６０ｍｌ）で希釈し、氷冷し、発生した白色の析出物を回収した。冷水で析出物を洗浄した（１０ｍｌ×２）。得られた固体を減圧下乾燥し、表題の化合物を得た（１．３１６ｇ、４．２５３ｍｍｏｌ、７８％、白色固体）。
　1H NMR (CDCl3) :δ=7.260 (1H, s), 4.304 (2H, t, J=6.80 Hz), 2.706 (2H, m), 2.401 (2H, m), 1.885 (2H, m), 1.649 (4H, m), 1.335-1.271 (14H, m), 0.874 (3H, t, J=6.80 Hz)。
　HRMS (ESI, [M-H]-)：計算値 C17H30N3O2 -: 308.2344；実測値：308.2344。
　融点: 63.2-64.0℃。
　工程３：３－｛８－（４－ヘプチル－１，２，３－トリアゾル－１－イル）オクタノイルオキシ｝－１－プロパノール
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000057
　１，３－プロパンジオール（３００．２ｍｇ、３．９４５ｍｍｏｌ）、８－（４－ヘプチル－１，２，３－トリアゾル－１－イル）オクタン酸（３０１．７ｇ、０．９７５ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（１１．４ｍｇ、０．０９５ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）に溶解させ、０℃でＥＤＣＩ（１９４．８ｍｇ、１．０１６ｍｍｏｌ）を加え、室温で１４時間攪拌した。５％ＫＨＳＯ４水溶液（１０ｍｌ）により反応をクエンチし、有機層を５％ＫＨＳＯ４水溶液（１０ｍｌ×３）および食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を留去し、残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝２：３）により精製し、表題の化合物を得た（２６６．２ｍｇ、０．７２４ｍｍｏｌ、７４％、白色固体）。
　1H NMR (CDCl3) :δ=7.234 (1H, s), 4.298 (2H, t, J=7.16 Hz), 4.231 (2H, t, J=6.12 Hz), 3.693 (2H, t, J=6.08 Hz), 2.698 (2H, t, J=7.74 Hz), 2.311 (2H, t, J=7.44 Hz), 2.138 (1H, brs), 1.872 (4H, m), 1.621 (4H, m), 1.327-1.238 (14H, m), 0.873 (3H, t, J=6.94 Hz)。
　13C NMR (CDCl3) :δ= 174.16, 148.50, 120.50, 61.37, 59.08, 50.12, 34.24, 31.82 (×2), 30.26, 29.54, 29.28, 29.10, 28.84, 28.59, 26.26, 25.72, 24.80, 22.70, 14.16。
　HRMS (ESI, [M+Na]+)：計算値 C20H37N3NaO3 +: 390.2727；実測値 390.2749。
　上記製造例と同様の手法により以下の化合物を調製し、実施例１４の化合物の製造に使用した。
　［製造例６］３－｛８－（４－ヘキシル－１，２，３－トリアゾル－１－イル）オクタノイルオキシ｝－１－プロパノール
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000058
　1H NMR (CDCl3) :δ=7.260 (1H, s), 4.302 (2H, t, J=7.20 Hz), 2.705 (2H, t, J=7.60 Hz), 2.371 (2H, m), 1.883 (2H, m), 1.641 (4H, m), 1.339-1.276 (12H, m), 0.878 (3H, t, J=7.00 Hz)。
　HRMS (MALDI-TOF, [M+Na]-)：計算値 C16H29N3NaO2 -: 318.2152；実測値 318.2183。
　融点：60.7-61.6℃
　実施例１５の製造において、以下の化合物を合成中間体として使用した。
　［製造例７］３－［６－｛４－ヘキシル－（２Ｚ）－２－ブテン－１－イルオキシ｝ヘキサノイルオキシ］プロパノール
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000059
　工程１：４－ヘキシルオキシ－（２Ｚ）－２－ブテン－１－オールの調製
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000060
　ＤＭＦ（１０ｍｌ）中にＮａＨ（９６８．７ｍｇ、２４．２２ｍｍｏｌ）を懸濁させ、０℃に冷却した。懸濁液にＤＭＦ（２０ｍｌ）中のｃｉｓ－２－ブテン－１，４－ジオール（４．２６１ｇ、４８．３６ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加え、０℃で１時間攪拌し、その後ＴＨＦ（２０ｍｌ）中の１－ブロモヘキサン（２．６４５ｇ、１６．０２ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加え、室温で１３時間攪拌した。反応混合物をＡｃＯＥｔ（２０ｍｌ）およびＨ２Ｏ（３０ｍｌ）で希釈し、ＡｃＯＥｔ（２０ｍｌ×３）で抽出した。合わせた有機層を水および食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝６：１→４：１）により精製し、表題の化合物を得た（２．３２０ｇ、１３．４７ｍｍｏｌ、８４％、無色の油状物）。
　1H NMR (CDCl3) :δ=5.854-5.787 (1H, m), 5.744-5.682 (1H, m), 4.204 (2H, t, J=5.88 Hz), 4.042 (2H, d, J=6.04 Hz), 3.436 (2H, t, J=6.70 Hz), 2.032 (1H, t, J= 5.90 Hz), 1.582 (2H, quintet, J=6.72 Hz), 1.375-1.251 (6H, m), 0.883 (3H, t, J=6.86 Hz)。
　HRMS (ESI, [M+Na]+)：計算値 C10H20NaO2 +: 195.1356；実測値：195.1363。
　工程２：６－｛４－ヘキシル－（２Ｚ）－２－ブテン－１－イルオキシ｝ヘキサン酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000061
　ＤＭＦ（１０ｍｌ）中にＮａＨ（４７５．８ｍｇ、１１．９０ｍｍｏｌ）およびテトラブチルアンモニウムヨージド（６５４．３ｍｇ、１．７７１ｍｍｏｌ）を懸濁させ、０℃で撹拌した。懸濁液にＤＭＦ（１０ｍｌ）中の４－ヘキシルオキシ－（２Ｚ）－２－ブテン－１－オール（１．００４ｇ、５．８３０ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加え、０℃で１時間攪拌した。その後ＤＭＦ（２０ｍｌ）中の６－ブロモヘキサン酸メチルエステル（１．８２３ｇ、８．７２１ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加え、５０℃で４４時間攪拌した。反応混合物をＡｃＯＥｔ（３０ｍｌ）およびＨ２Ｏ（３０ｍｌ）で希釈し、ＡｃＯＥｔ（３０ｍｌ×３）で抽出した。合わせた有機層を水および食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝２９：１→９：１）により精製し、副生成物を含有する目的のエステルを得た（４８６．０ｍｇ、無色の油状物）。また出発物質のアルコールの一部（３１３．３ｍｇ）も回収した。
　得られた生成物および副生生物の混合物（４８３．１ｍｇ）をメタノール（１０ｍｌ）に溶解させ、ＮａＯＨ水溶液（２Ｎ、１０ｍｌ）を加え、室温で３．５時間攪拌した。反応混合物にジエチルエーテル（３０ｍｌ）を加え、ＨＣｌ水溶液（１Ｎ）を加えて水層のｐＨを２にして、ジエチルエーテル（３０ｍｌ×３）で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝９：１→２：１）により精製し、表題の化合物を得た（３５８．２ｍｇ、１．２５１ｍｍｏｌ、２１％、無色の油状物）。
　1H NMR (CDCl3) :δ=5.707 (2H, m), 4.033 (4H, d, J=4.60 Hz), 3.436-3.394 (4H, m), 2.360 (2H, t, J=7.48 Hz), 1.689-1.533 (6H, m), 1.421 (2H, m), 1.293 (6H, m), 0.883 (3H, t, J=6.88 Hz)。
　HRMS (ESI, [M-H]-)：計算値 C16H29O4 -: 285.2071；実測値 285.2070.
　工程３：３－［６－｛４－ヘキシル－（２Ｚ）－２－ブテン－１－イルオキシ｝ヘキサノイルオキシ］プロパノール
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000062
　１，３－プロパンジオール（３２４．４ｍｇ、４．２６３ｍｍｏｌ）、６－｛４－ヘキシル－（２Ｚ）－２－ブテン－１－イルオキシ｝ヘキサン酸（３００．２ｍｇ、１．０４８ｍｍｏｌ）および４－ジメチルアミノピリジン（１４．３ｍｇ、０．１１９ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）に溶解させ、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（２１２．５ｍｇ、１．１０９ｍｍｏｌ）を０℃で加え、室温で１９時間攪拌した。５％ＫＨＳＯ４水溶液（２０ｍｌ）で反応をクエンチし、有機層を５％　ＫＨＳＯ４水溶液（１５ｍｌ×３）および食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝４：１）により精製し、表題の化合物を得た（３１５．１ｍｇ、０．９１５ｍｍｏｌ、８７％、無色の油状物）。
　1H NMR (CDCl3) :δ=5.701 (2H, m), 4.232 (2H, t, J=6.2 Hz), 4.026 (4H, d, J=4.4 Hz), 3.682 (2H, t, J=5.8 Hz), 3.407 (4H, dt, J=6.4, 2.4 Hz), 2.323 (2H, t, J=7.4 Hz), 1.959 (1H, brs), 1.862 (2H, quintet, J=7.4 Hz), 1.684-1.528 (6H, m), 1.422-1.246 (8H, m), 0.880 (3H, t, J=6.8 Hz)。
　13C NMR (CDCl3) :δ=174.26, 129.68, 129.45, 70.77, 70.29, 66.65, 66.58, 61.31, 59.30, 34.35, 31.87, 31.83, 29.86, 29.54, 26.00, 25.92, 24.94, 22.76, 14.19。
　HRMS (ESI, [M+Na]+)：計算値 C19H36NaO5 +: 367.2455；実測値 367.2444。
　実施例１６の製造において、以下の化合物を合成中間体として使用した。
　［製造例８］３－ヒドロキシプロピオン酸オレイルエステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000063
　工程１：３－tert－ブチルジメチルシリルオキシ－１－プロパノール
　ＴＢＳＯ－（ＣＨ２）３－ＯＨ
　ＮａＨ（７９０．９ｍｇ、１９．７７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（３ｍｌ）中に懸濁させ、０℃で攪拌した。懸濁液にＴＨＦ（３ｍｌ）中の１，３－プロパンジオール（１０００．４ｍｇ、１３．１５ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加え、０℃で３０分間攪拌した。ＴＨＦ（４ｍｌ）中のtert－ブチルジメチルシリルクロリド（２．３８４１ｇ、５．８２ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加え、室温で２２．５時間攪拌した。反応混合物をＨ２Ｏ（２０ｍｌ）で希釈し、ＡｃＯＥｔ（２０ｍｌ×３）で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝８：１）により精製し、表題の化合物を得た（１．９０７５ｇ、１０．０２ｍｍｏｌ、７６％、無色の油状物）。
　1H-NMR(CDCl3):δ= 3.837 (2H, t, J=5.56 Hz), 3.805 (2H, t, J=5.44 Hz), 2.567 (1H, brs), 1.779 (2H, m), 0.900 (9H, s), 0.077 (6H, s)。
　工程２：３－tert－ブチルジメチルシリルオキシ－１－プロパナール
　ＴＢＳＯ－（ＣＨ２）２－ＣＨＯ
　３－tert－ブチルジメチルシリルオキシ－１－プロパノール（１．７９９５ｇ、９．４５３ｍｍｏｌ）を無水ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）、ＤＭＳＯ（１０ｍｌ）およびＥｔ３Ｎ（６．５７ｍｌ、４７．２８ｍｍｏｌ）に溶解させ、室温で攪拌しながらＳＯ３－ピリジン錯体（７．５２５７ｇ、４７．２８ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間攪拌した。反応混合物をＥｔ２Ｏ（３０ｍｌ）およびＨ２Ｏ（２０ｍｌ）で希釈し、Ｅｔ２Ｏ（２０ｍｌ×３）で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝２０：１）により精製し、表題の化合物を得た（１．０５２３ｇ、５．５８７ｍｍｏｌ、５９％、無色の油状物）。
　1H-NMR(CDCl3):δ=9.802 (1H, t, J=2.04 Hz), 3.986 (2H, t, J=6.02 Hz), 2.596 (2H, dt, J=6.04, 2.04 Hz), 0.880 (9H, s), 0.064 (6H, s)。
　工程３：３－tert－ブチルジメチルシリルオキシ－プロピオン酸
　ＴＢＳＯ－（ＣＨ２）２－ＣＯＯＨ
　３－tert－ブチルジメチルシリルオキシ－１－プロパナール（１．０４３８ｇ、５．５４２ｍｍｏｌ）および２－メチル－２－ブテン（１．７１９１ｇ、２４．５１ｍｍｏｌ）をｔＢｕＯＨ　（１５ｍｌ）に溶解させ、Ｈ２Ｏ（５ｍｌ）中のＮａＨ２ＰＯ４・２Ｈ２Ｏ（８６７．８ｍｇ、５．５６２ｍｍｏｌ）およびＮａＣｌＯ２（２．０４２５ｇ、２２．５８ｍｍｏｌ）の溶液を加え、室温で１時間攪拌した。ｔＢｕＯＨを留去し、残渣に５％ＫＨＳＯ４水溶液を加え、ＡｃＯＥｔ（２０ｍｌ×３）で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝２：１）により精製し、表題の化合物を得た（９４６．５ｍｇ、４．６３２ｍｍｏｌ、８４％、無色の油状物）。
　1H-NMR(CDCl3):δ=10.548 (1H, brs), 3.918 (2H, t, J=6.14 Hz), 2.585 (2H, t, J=6.18 Hz), 0.895 (9H, s), 0.086 (6H, s)。
　工程４：３－tert－ブチルジメチルシリルオキシプロピオン酸オレイルエステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000064
　オレイルアルコール（２０８．１ｍｇ、０．７７５ｍｍｏｌ）、３－tert－ブチルジメチルシリルオキシ－プロピオン酸（３０４．２ｍｇ、１．４８９ｍｍｏｌ）および４－ジメチルアミノピリジン（２１．６ｍｇ、０．１８０ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）に溶解させ、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（３４１．１ｍｇ、１．７７９ｍｍｏｌ）を０℃で加え、室温で１９時間攪拌した。Ｈ２Ｏ（１０ｍｌ）を加えて反応をクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ×３）で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝８：１）により精製し、表題の化合物を得た（３４５．１ｍｇ、０．７５９ｍｍｏｌ、９８％、無色の油状物）。
　1H-NMR(CDCl3):δ=5.347 (2H, m), 4.070 (2H, t, J=6.76 Hz), 3.895 (2H, t, J=6.42 Hz), 2.514 (2H, t, J=6.42 Hz), 2.012 (4H, m), 1.618 (2H, m), 1.267 (22H, m), 0.878 (12H, m), 0.054 (6H, s)。
　工程５：３－ヒドロキシプロピオン酸オレイルエステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000065
　ＴＨＦ（５ｍｌ）中の３－tert－ブチルジメチルシリルオキシプロピオン酸オレイルエステル（３００．１ｍｇ、０．６６０ｍｍｏｌ）の溶液にＨＦ・ピリジン錯体（７０％、０．１２０ｍｌ）を加え、室温で１２時間攪拌した。Ｈ２Ｏ（１０ｍｌ）を加え、ＡｃＯＥｔ（１０ｍｌ×３）で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、要馬を留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ＝４：１）により精製し、表題の化合物を得た（１９５．７ｍｇ、０．５７５ｍｍｏｌ、８７％、黄色の油状物）。
　1H-NMR(CDCl3):δ=5.345 (2H, m), 4.109 (2H, t, J=6.60 Hz), 3.865 (2H, t, J=5.20 Hz), 2.571 (2H, t, J=5.60 Hz), 2.416 (1H, brs), 2.011 (4H, m), 1.635 (2H, m), 1.265 (22H, m), 0.878 (3H, t, J=6.68 Hz)。
　13C-NMR(CDCl3):δ=173.03, 129.99, 129.76, 64.91, 58.32, 36.70, 31.89, 29.75, 29.71, 29.51, 29.38, 29.31, 29.22, 29.19, 28.55, 27.21, 27.17, 25.87, 22.67, 14.10。
　HRMS (ESI, [M+Na]+)：計算値 C21H40NaO3 +: 363.2870；実測値：363.2853。
　上記製造例と同様の手法により以下の化合物を調製し、実施例１７および１８の化合物の製造に使用した。
　［製造例９］４－ヒドロキシブタン酸オレイルエステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000066
　1H-NMR(CDCl3):δ=5.340 (2H, m), 4.065 (2H, t, J=6.78 Hz), 3.684 (2H, t, J=6.12 Hz), 2.431 (2H, t, J=7.16 Hz), 2.014 (4H, m), 1.881 (2H, m), 1.830 (1H, brs), 1.614 (2H, m), 1.294 (22H, m), 0.874 (3H, t, J=6.74 Hz)。
　13C-NMR(CDCl3):δ=174.04, 129.96, 129.76, 64.74, 62.12, 31.88, 31.09, 29.74, 29.71, 29.50, 29.38, 29.30, 29.20, 29.18, 28.58, 27.71, 27.19, 27.16, 25.88, 22.66, 22.55, 14.08。
　HRMS (ESI, [M+Na]+)：計算値 C22H42NaO3 +：377.3026；実測値：377.3006。
　［製造例１０］５－ヒドロキシペンタン酸オレイルエステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000067
　1H-NMR(CDCl3):δ=5.345 (2H, m), 4.061 (2H, t, J=6.76 Hz), 3.645 (2H, t, J=6.32 Hz), 2.346 (2H, t, J=7.24 Hz), 2.010 (4H, m), 1.723 (2H, m), 1.609 (4H, m), 1.491 (1H, brs), 1.266 (22H, m), 0.878 (3H, t, J=6.68 Hz)。
　13C-NMR(CDCl3):δ=173.81, 129.97, 129.77, 64.57, 62.27, 33.90, 32.08, 31.89, 29.75, 29.72, 29.51, 29.40, 29.31, 29.21, 29.19, 28.62, 27.20, 27.17, 25.90, 22.67, 21.06, 14.10。
　HRMS (ESI, [M+Na]+)：計算値：C23H44NaO3 +: 391.3183；実測値：391.3173。
　実施例１９～２３の化合物は、以下の化合物を合成中間体として使用して製造した。
　［製造例１１］（２Ｓ，３Ｓ）－３－［（ジイソプロピルアミノ）－tert-ブトキシホスフィノオキシ］－２－（tert-ブトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－プロピオン酸tert-ブチルエステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000068
　工程１：Ｎ－tert-ブトキシカルボニル－Ｌ－アロ－スレオニンtert-ブチルエステルの調製
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000069
　Ｌ－アロ－スレオニン（９９７．３ｍｇ、８．３７２ｍｍｏｌ）をＮａＯＨ水溶液（１Ｎ、１０ｍｌ）、Ｈ２Ｏ（１０ｍｌ）およびジオキサン（２０ｍｌ）の混合液に溶解させ、０℃で攪拌し、ジ－ｔｅｒｔ－ブチルジカルボネート（２．７６３ｇ、１２．６６ｍｍｏｌ）を１０分かけて加え、室温で２４時間攪拌した。反応混合物に５％ＫＨＳＯ４水溶液を加えてｐＨを３とし、ＡｃＯＥｔ（４０ｍｌ×３）で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を留去し、目的のＮ－Ｂｏｃ－Ｌ－アロ－スレオニンを得た（２．０１６ｇ、無色の油状物）。
　Ｎ－Ｂｏｃ－Ｌ－アロ－スレオニン（２．１０５ｇ）を無水ジクロロメタン（１５０ｍｌ）に溶解させ、２－ｔｅｒｔ－ブチル－１，３－ジイソプロピル－イソウレア（５．８７２ｇ、２９．３１ｍｍｏｌ）を加え、室温で１８時間攪拌した。反応混合物にヘキサンを加え、１０分間攪拌し、セライト（登録商標）で濾過し、濾液を濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ＝４：１）により精製して、表題の化合物を得た（１．５８１ｇ、５．７４１ｍｍｏｌ、６９％、白色固体）。
　1H-NMR(CDCl3):δ=5.226 (1H, m), 4.224 (1H, s), 4.123 (1H, m), 1.960 (1H, d, J=6.00 Hz), 1.486 (9H, s), 1.455 (9H, s), 1.234 (3H, d, J=6.40 Hz)。
　HRMS (ESI, [M+Na]+)：計算値：C13H25NNaO5 +: 298.1630；実測値：298.1609。
　融点：62.1-63.0 ℃。
　工程２：（２Ｓ，３Ｓ）－３－［（ジイソプロピルアミノ）－tert-ブトキシホスフィノオキシ］－２－（tert-ブトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－プロピオン酸tert-ブチルエステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000070
　ビス（ジイソプロピルアミノ）－ｔｅｒｔ－ブチルホスフィン（３０３．１ｍｇ、１．１０１ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）およびトルエン（０．５ｍｌ）に溶解させ、Ｎ－tert-ブトキシカルボニル－Ｌ－アロ－スレオニンtert-ブチルエステル（５０８．２ｍｇ、１．６６９ｍｍｏｌ）を加え、減圧下溶媒を留去した。残渣にＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）を加え、ＴＨＦ（５ｍｌ）中の１Ｈ－テトラゾール（１０５．９ｍｇ、１．５１２ｍｍｏｌ）の溶液を室温で加えた。数分後に白色固体が析出した。飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍｌ）を加えて反応をクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ×３）で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ：Ｅｔ３Ｎ＝３５：４：１）により精製し、表題の化合物を得た（４４５．０ｍｇ、０．９３０ｍｍｏｌ、８４％、黄色油状物）。なお、カラムクロマトグラフィーは、溶離液に３％（ｖ／ｖ）Ｅｔ３Ｎを加えてシリカゲルを不活性化して行った。
　1H-NMR(CD2Cl2):δ=5.825 (1/2H, m), 5.300 (1/2H, m), 4.085-3.959 (2H, m), 3.576 (2H, m), 1.436-1.431 (9H, m), 1.405-1.396 (9H, m), 1.360-1.308 (9H, m), 1.270 (3H, d, J= 6.56 Hz), 1.143 (12H, m)。
　HRMS (ESI, [M+Na]+)：計算値：C23H47N2NaO6P+: 501.3064；実測値：501.3053。
　［実施例２４］（２Ｓ，３Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｒ）－２－ヒドロキシ－３－オレオイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］酪酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000071
　工程１：（Ｒ）－４－（４－メトキシフェノキシ）メチル－２，２－ジメチル－１，３－ジオキソランの調製
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000072
　（Ｒ）－（－）－２，２－ジメチル－１，３－ジオキソラン－４－メタノール（３．００５８ｇ、２２．７４ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（７．７５０１ｇ、２９．５５ｍｍｏｌ）、およびｐ－メトキシフェノール（８．４９３１ｇ、６８．４２ｍｍｏｌ）を無水トルエン（３０ｍｌ）に溶解させ、ジエチルアゾジカルボキシレート（２Ｍトルエン溶液、１４．８ｍｌ、２９．６ｍｍｏｌ）を加え、７０℃で５時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィー（Ｅｔ２Ｏ：ヘキサン＝１：１５）により精製し、表題の化合物を得た（５．１２９７ｇ、２１．５３ｍｍｏｌ、９５％、無色の油状物）。
　1H-NMR(CDCl3):δ=6.841 (4H, m), 4.461 (1H, quintet, J=6.00 Hz), 4.158 (1H, m), 4.018 (1H, m), 3.889 (2H, m), 3.769(3H, s), 1.462 (3H, s), 1.402 (3H, s)。
　工程２：（２Ｓ）－３－（４－メトキシフェノキシ）－１，２－プロパンジオールの調製
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000073
　（Ｒ）－４－（４－メトキシフェノキシ）メチル－２，２－ジメチル－１，３－ジオキソラン（６．１０５ｇ、２５．６２ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１５０ｍｌ）に溶解させ、Amberlyst-15（３．９５９ｇ）を加え、室温で２日間攪拌した。濾過によりAmberlyst-15を除去し、濾液を濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ＝１：１）により精製し、表題の化合物を得た（５．０７３ｇ、２５．５９ｍｍｏｌ、定量的、白色固体）。
　1H-NMR(CDCl3):δ=6.848 (4H, m), 4.089 (1H, m), 4.013 (2H, m), 3.830 (1H, m) , 3.774 (3H, s) , 3.752 (1H, m) , 2.572 (1H, d, J=4.72 Hz), 1.979 (1H, t, J=6.08 Hz)。
　融点：73.2-74.5℃。
　工程３：（２Ｒ）－１，２－ビス（tert－ブチルジメチルシリルオキシ）－３－（４－メトキシフェノキシ）プロパンの調製
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000074
　（２Ｓ）－３－（４－メトキシフェノキシ）－１，２－プロパンジオール（５０４．８ｍｇ、２．５５ｍｍｏｌ）およびイミダゾール（５１９．２ｍｇ、７．６３ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（２．２ｍｌ）に溶解させ、室温でtert－ブチルジメチルシリルクロリド（１０６０．８ｍｇ、７．０４ｍｍｏｌ）を加え、６９時間攪拌した。反応混合物を水（１５ｍｌ）およびＡｃＯＥｔ（２０ｍｌ）で希釈し、水層をＡｃＯＥｔ（３０ｍｌ×３）で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ＝４：１）により精製し、表題の化合物を得た（１．０７２ｇ、２．５１ｍｍｏｌ、９８％、無色の油状物）。
　1H-NMR(CDCl3):δ=6.828 (4H, m), 4.025 (2H, m), 3.806 (1H, m), 3.767 (3H, s), 3.632 (2H, d, J=5.56 Hz), 0.893 (9H, s), 0.891 (9H, s), 0.104-0.060 (12H)。
　HRMS (ESI, [M+Na]+)：計算値：C22H42NaO4Si2 +: 449.2514；実測値449.2517。
　工程４：（２Ｒ）－２－（tert－ブチルジメチルシリルオキシ）－３－（４－メトキシフェノキシ）－１－プロパノールの調製
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000075
　ＨＦ・ピリジン錯体（７０％、１．２ｍｌ）をピリジン（５．５ｍｌ）に溶解させ、当該溶液をＴＨＦ（２０ｍｌ）中の（２Ｒ）－１，２－ビス（tert－ブチルジメチルシリルオキシ）－３－（４－メトキシフェノキシ）プロパン（２．９９２７ｇ、７．０１３ｍｍｏｌ）の溶液に加え、室温で１３時間攪拌した。反応混合物をＡｃＯＥｔ（２０ｍｌ）で希釈し、食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ＝４：１）により精製し、表題の化合物を得た（１．２７２１ｇ、４．０７１ｍｍｏｌ、５８％、無色の油状物）。出発物質９４．３ｍｇ（０．２２１ｍｍｏｌ、３％）、ジオール５２０．７ｍｇ（２．６２７ｍｍｏｌ、３７％）がそれぞれ回収された。
　1H-NMR(CDCl3):δ=6.826 (4H, s), 4.086 (1H, m), 3.911 (2H, m), 3.767 (3H, s), 3.722 (2H, m), 1.970 (1H, brs), 0.913 (9H, s), 0.143 (3H, s), 0.124 (3H, s)。
　HRMS (ESI, [M+Na]+)：計算値：C16H28NaO4Si+: 335.1649；実測値：335.1621。
　工程５：（２Ｓ，３Ｓ）－２－tert－ブチルカルボニルアミノ－３－［（（２Ｒ）－２－（tert－ブチルジメチルシリルオキシ）－３－（４－メトキシフェノキシ）プロポキシ）－tert－ブトキシホスホリルオキシ］酪酸tert－ブチルエステルの調製
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000076
　（２Ｓ，３Ｓ）－３－［（ジイソプロピルアミノ）－tert-ブトキシホスフィノオキシ］－２－（tert-ブトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－プロピオン酸tert-ブチルエステル（２９８．２ｍｇ、０．６２３ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）およびトルエン（０．５ｍｌ）に溶解させ、減圧下溶媒を留去した。残渣に（２Ｒ）－２－（tert－ブチルジメチルシリルオキシ）－３－（４－メトキシフェノキシ）－１－プロパノール（２３２．１ｍｇ、０．７４３ｍｍｏｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）およびトルエン（０．５ｍｌ）を加え、減圧下溶媒を留去した。アルゴン雰囲気下で残渣をＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）に溶解させ、ＴＨＦ（５ｍｌ）中の１Ｈ－テトラゾール（１３６．９ｍｇ、１．９５４ｍｍｏｌ）の溶液を室温で加えたところ、数分後に白色の固体が析出した。反応混合物を室温で３時間攪拌した後、tert-ブチルヒドロペルオキシド（ＴＢＨＰ）デカン溶液（５．０－６．０Ｍ、０．２５１ｍｌ、１．２５５ｍｍｏｌ）を室温で加え、室温で１．５時間攪拌した。反応混合物を水（１０ｍｌ）で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ×３）で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ＝５：１）により精製し、表題の化合物を得た（３４１．９ｍｇ、０．４８４ｍｍｏｌ、７８％、無色の油状物）。
　1H-NMR(CDCl3):δ=6.825-6.816 (4H, m), 5.640 (1H, m), 4.646 (1H, m), 4.281 (1H, m), 4.180 (1H, m), 4.138 (1H, m), 4.006 (2H, m), 3.864 (1H, m), 3.764 (3H, s), 1.500-1.487 (9H, m), 1.468 (9H, s), 1.431 (12H, m), 0.893 (9H, s), 0.132 (3H, s), 0.108 (3H, s)。
　31P-NMR(CDCl3):δ=-6.220, -5.903。
　工程６：（２Ｓ，３Ｓ）－２－tert－ブチルカルボニルアミノ－３－［（（２Ｒ）－２－（tert－ブチルジメチルシリルオキシ）－３－ヒドロキシプロポキシ）－tert－ブトキシホスホリルオキシ］酪酸tert－ブチルエステルの調製
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000077
　（２Ｓ，３Ｓ）－２－tert－ブチルカルボニルアミノ－３－［（（２Ｒ）－２－（tert－ブチルジメチルシリルオキシ）－３－（４－メトキシフェノキシ）プロポキシ）－tert－ブトキシホスホリルオキシ］酪酸（３００．３ｍｇ、０．４２５ｍｍｏｌ）をＣＨ３ＣＮ（８ｍｌ）およびＨ２Ｏ（２ｍｌ）に溶解させ、０℃で撹拌し、硝酸セリウムアンモニウム（５８１．８ｍｇ、１．０６１ｍｍｏｌ）を加え、０℃で１時間攪拌した。Ｈ２Ｏ（１０ｍｌ）を加えて反応をクエンチし、有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ＝１：１）により精製し、表題の化合物を得た（１７７．４ｍｇ、０．２９６ｍｍｏｌ、７０％、褐色の油状物）。
　1H-NMR(CDCl3):δ=5.621 (1H, m), 4.683 (1H, m), 4.305 (1H, m), 4.026 (1H, m), 3.973 (1H, m), 3.911 (1H, m), 3.630 (2H, m), 1.488 (18H, s), 1.445 (12H, m), 0.986 (9H, s), 0.146 (6H, s)。
　工程７：（２Ｓ，３Ｓ）－２－tert－ブチルカルボニルアミノ－３－［（（２Ｒ）－２－（tert－ブチルジメチルシリルオキシ）－３－ヒドロキシプロポキシ）－tert－ブトキシホスホリルオキシ］酪酸tert－ブチルエステルの調製
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000078
　（２Ｓ，３Ｓ）－２－tert－ブチルカルボニルアミノ－３－［（（２Ｒ）－２－（tert－ブチルジメチルシリルオキシ）－３－ヒドロキシプロポキシ）－tert－ブトキシホスホリルオキシ］酪酸（９８．７ｍｇ、０．１６５ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（２ｍｌ）に溶解させ、４－ジメチルアミノピリジン（６０．３ｍｇ、０．５０２ｍｍｏｌ）を加え、０℃に冷却した。当該混合物に、ＣＨ２Ｃｌ２（１ｍｌ）中のオレオイルクロリド（６９．９ｍｇ、０．２３２ｍｍｏｌ）の溶液を０℃で滴下して加え、１３時間攪拌した。反応混合物にＭｅＯＨ（１ｍｌ）を加え、２時間攪拌し、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ＝３：１）により精製し、表題の化合物を得た（１２２．２ｍｇ、０．１４１ｍｍｏｌ、８６％、黄色油状物）。
　1H-NMR(CDCl3):δ=5.642 (1H, m), 5.336 (2H, m), 4.660 (1H, m), 4.277 (1H, m), 4.155 (1H, m), 4.023 (2H, m), 3.908 (2H, m), 2.304 (2H, t, J=7.44 Hz), 1.999 (4H, m), 1.608 (2H, m), 1.476 (18H, m), 1.433 (12H, m), 1.272 (20H, m), 0.873 (12H, m), 0.100 (3H, s), 0.089 (3H, s)。
　13C-NMR(CDCl3):δ=173.46, 167.88, 155.37, 129.98, 129.72, 82.50, 79.79, 75.71, 69.15, 69.06, 67.79, 67.73, 65.03, 64.99, 58.62, 34.14, 31.88, 29.82, 29.78, 29.74, 29.70, 29.50, 29.30, 29.18, 29.13, 29.10, 28.91, 28.31, 28.03, 27.20, 27.16, 25.66, 24.86, 22.66, 18.75, 18.59, 18.02, 14.10, -4.74。
　31P-NMR(CDCl3):δ=-5.961, -6.161。
　HRMS (ESI, [M+Na]+)：計算値：C44H86NNaO11PSi+: 886.5606；実測値：886.5592。
　工程８：（２Ｓ，３Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｒ）－２－ヒドロキシ－３－オレオイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］酪酸の調製
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000079
　（２Ｓ，３Ｓ）－２－tert－ブチルカルボニルアミノ－３－［（（２Ｒ）－２－（tert－ブチルジメチルシリルオキシ）－３－ヒドロキシプロポキシ）－tert－ブトキシホスホリルオキシ］酪酸tert－ブチルエステル（８７．４ｍｇ、０．１０１ｍｍｏｌ）を０℃でトリフルオロ酢酸（１．０ｍｌ）に溶解させ、室温で１時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＡｃＯＨ＝８：１：１→６：１：３）により精製し、表題の化合物を酢酸塩として得た（４３．７ｍｇ、０．０８１３ｍｍｏｌ、８０％、白色粉末）。得られた酢酸塩をトリフルオロ酢酸に溶解させ、溶媒を除去して表題の化合物のトリフルオロ酢酸塩を得た。
　1H-NMR(CDCl3/TFA-d=4:1):δ=5.362 (2H, m), 5.135 (1H, m), 4.449-4.179 (6H, m), 2.445 (2H, m), 2.017 (4H, m), 1.624 (5H,m), 1.284 (20H, m), 0.874 (3H, m)。
　31P-NMR(CDCl3/TFA-d=4:1):δ=-1.816。
　HRMS (MALDI-TOF, [M+Na]+):Calcd for C25H48NNaO9P+: 560.2959. Found: 560.2912。
　mp. 197.0℃-198.5℃。
　元素分析：計算値：C25H48NO9P・1.8CF3COOH: C, 46.24; H, 6.76; N, 1.89；実測値：C, 46.42; H, 6.85; N, 1.88。
　上記実施例と同様の手法により、以下の化合物を調製した。
　［実施例２５］（２Ｓ，３Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｒ）－２－ヒドロキシ－３－パルミトイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］酪酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000080
　1H-NMR(CDCl3):δ=5.086 (1H, m), 4.433 (1H, m), 4.376 (1H, m), 4.282 (3H, m), 4.134 (1H, m), 2.430 (2H, t, J=7.52 Hz), 1.619 (5H, m), 1.260 (25H, m), 0.875 (3H, t, J=6.60 Hz)。
　31P-NMR(CDCl3):δ=-1.649。
　HRMS (MALDI-TOF, [M+Na]+): Calcd for C23H46NNaO9P+: 534.3802. Found: 534.2806。
　融点：193.2℃-194.5℃。
　元素分析：計算値：C23H46NO9P・5CF3COOH・4H2O: C, 34.35; H, 5.15; N, 1.21；実測値：C, 34.14; H, 5.28; N, 1.49。
　以下の化合物はJ. Med. Chem. 2009, 52, 5837-5863.に記載の方法により調製した。
　［実施例２６］（２Ｓ，３Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｒ）－２－ヒドロキシ－３－ステアロイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］酪酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000081
　1H-NMR(CDCl3):δ=4.23 (2H, m), 4.05 (5H, m), 2.24 (2H, m), 1.52 (2H, m), 1.17 (31H, m), 0.79 (3H, t, J=6.8 Hz)。
　HRMS (ESI, [M-H]-): Calcd for C25H49NO9P-: 538.3145. Found: 538.3137。
　融点：179.0℃-179.5℃。
　出発原料として（Ｓ）－（－）－２，２－ジメチル－１，３－ジオキソラン－４－メタノールを用い、中間体として（２Ｓ）－３－［（ジイソプロピルアミノ）－tert-ブトキシホスフィノオキシ］－２－（tert-ブトキシカルボニルアミノ）－３－メチル－プロピオン酸tert-ブチルエステルを用いて、実施例２４と同様の手法で以下の化合物を調製した。
　［実施例２７］（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｓ）－２－ヒドロキシ－３－オレオイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000082
　1H-NMR(CDCl3):δ= 5.367 (2H, m), 4.671 (2H, m), 4.546 (1H, m), 4.281 (5H, m), 2.423 (2H, m), 2.018 (4H, m), 1.609 (2H, m), 1.270 (20H, m), 0.872 (3H, t, J=6.4 Hz)。
　31P-NMR(CDCl3):δ=-1.147。
　HRMS (MALDI-TOF, [M+Na]+)：計算値：C24H46NNaO9P+:546.2802；実測値：546.2784。
　融点：131.0-131.9℃。
　以下の化合物はJ. Med. Chem. 2009, 52, 5837-5863.に記載の方法により調製した。
　［実施例２８］（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｓ）－２－ヒドロキシ－３－ステアロイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000083
　1H-NMR(CDCl3):δ=4.59 (1H, m), 4.34 (1H, m), 4.17 (1H, m), 4.04 (2H, m), 3.90 (2H, m), 3.72 (1H, m), 2.23 (2H, m), 1.55 (2H, m), 1.08 (28H, m), 0.79 (3H, t, J=7.0 Hz)。
　HRMS (ESI, [M-H]-): Calcd for C24H47NO9P-: 524.2988. Found: 524.2971。
　融点：171.5℃-172.0℃。
　元素分析：計算値：C24H47NO9P・0.8CF3COOH: C, 50.57; H, 8.15; N, 2.33；実測値：C, 50.31; H, 7.82; N, 2.32。
　［実施例２９］（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｓ）－２－ヒドロキシ－３－パルミトイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000084
　1H-NMR(CDCl3):δ=4.684 (2H, m), 4.544 (1H, m), 4.282 (5H, m), 2.426 (2H, t, J=7.8 Hz), 1.609 (2H, m), 1.257 (24H, m), 0.874 (3H, t, J=6.8 Hz)。
　31P-NMR(CDCl3):δ=-1.272。
　HRMS (MALDI-TOF, [M+Na]+)：計算値：C22H44NNaO9P+:520.2646；実測値：520.2644。
　融点：128.1-129.2℃。
　［実施例３０］（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｒ）－２－ヒドロキシ－３－｛３－（２－ヘプチルオキシフェニル）プロピオニルオキシ｝プロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000085
　工程１：３－（２－ヒドロキシフェニル）プロピオン酸メチルエステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000086
　２－（ヒドロキシフェニル）プロピオン酸（１．００３０ｇ、６．０３６ｍｍｏｌ）およびＫＨＣＯ３（９６３．８ｍｇ、９．６２６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍｌ）に加え、さらにヨウ化メチル（１．３６７２ｇ、９．６３２ｍｍｏｌ）を加え、室温で５時間攪拌した。反応混合物に水（１０ｍｌ）を加え、ＡｃＯＥｔ（２０ｍｌ×３）で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝２：１）により精製し、表題の化合物を得た（１．０２４３ｇ、５．６８４ｍｍｏｌ、９４％、白色固体）。
　1H-NMR(CDCl3):δ=7.143-7.077 (2H, m), 6.997 (1H, s), 6.879 (1H, d, J=7.68 Hz), 6.869 (1H, t, J=7.36 Hz), 3.691 (3H, s), 2.909 (2H, t, J=6.42 Hz), 2.725 (2H, t, J=6.42 Hz)。
　工程２：３－（２－ヘプチルオキシフェニル）プロピオン酸メチルエステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000087
　ＮａＨ（８４．５ｍｇ、２．１１３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２ｍｌ）中に懸濁させ０℃で撹拌し、ＤＭＦ（２ｍｌ）中の３－（２－ヒドロキシフェニル）プロピオン酸メチルエステルの溶液（２５６．０ｍｇ、１．４２１ｍｍｏｌ）を滴下して加え、３０分間攪拌した。反応混合物にＤＭＦ（２ｍｌ）中の１－ブロモヘプタン（３７２．８ｍｇ、２．０８２ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加え、室温で２５時間攪拌した。反応混合物をＨ２Ｏ（１０ｍｌ）で希釈し、ＡｃＯＥｔ（２０ｍｌ×３）で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１０：０→９：１）により精製し、表題の化合物を得た（２３２．８ｍｇ、０．８３６ｍｍｏｌ、５９％、無色の油状物）。
　1H NMR (CDCl3) :δ=7.192-7.136 (2H, m), 6.875-6.814 (2H, m), 3.960 (2H, t, J=6.44 Hz), 3.668 (3H, s), 2.946 (2H, t, J=7.80 Hz), 2.625 (2H, t, J=7.80 Hz), 1.799 (2H, m), 1.453 (2H, m), 1.400-1.316 (6H, m), 0.900 (3H, t, J=6.50 Hz)。
　工程３：３－（２－ヘプチルオキシフェニル）プロピオン酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000088
　３－（２－ヘプチルオキシフェニル）プロピオン酸メチルエステル（２０６．０ｍｇ、０．７４０ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（５ｍｌ）およびＴＨＦ（５ｍｌ）に溶解させ、ＮａＯＨ水溶液（２Ｎ、５ｍｌ）を加え、室温で２時間攪拌した。ＨＣｌ水溶液（１Ｎ）を加えて水層のｐＨを２にしてＡｃＯＥｔ（２０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１：１）により精製し、表題の化合物を得た（１８７．８ｍｇ、０．７１０ｍｍｏｌ、９６％、白色固体）。
　1H NMR (CDCl3) :δ=11.361 (1H, brs), 7.206-7.153 (2H, m), 6.883-6.822 (2H, m), 3.967 (2H, t, J=6.46 Hz), 2.957 (2H, t, J=7.76 Hz), 2.679 (2H, t, J=7.78 Hz), 1.806 (2H, m), 1.496 (2H, m), 1.388-1.313 (6H, m), 0.902 (3H, t, J=6.80 Hz)。
　13C NMR (CDCl3) :δ=179.28, 156.96, 129.94, 128.57, 127.63, 120.19, 110.98, 67.75, 33.90, 31.77, 29.31, 29.03, 26.11, 25.98, 22.59, 14.07。
　HRMS (ESI, [M-H]-):Calcd for C16H23O3 -: 263.1653. Found: 263.1552。
　融点：< 30 ℃。
　工程４：（２Ｓ）－２－tert－ブチルカルボニルアミノ－３－［（（２Ｒ）－２－（tert－ブチルジメチルシリルオキシ）－３－（４－メトキシフェノキシ）プロポキシ）－tert－ブトキシホスホリルオキシ］プロピオン酸tert－ブチルエステルの調製
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000089
　（２Ｓ）－３－［（ジイソプロピルアミノ）－tert-ブトキシホスフィノオキシ］－２－（tert-ブトキシカルボニルアミノ）プロピオン酸tert-ブチルエステル（４９８．７ｍｇ、１．０７４ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）およびトルエン（０．５ｍｌ）の混合液に溶解させ、減圧下溶媒を留去した。残渣に、（２Ｒ）－２－（tert－ブチルジメチルシリルオキシ）－３－（４－メトキシフェノキシ）－１－プロパノール（４２３．５ｍｇ、１．３５５ｍｍｏｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）およびトルエン（０．５ｍｌ）を加え、減圧下溶媒を留去した。アルゴン雰囲気下で残渣をＣＨ２Ｃｌ２（７ｍｌ）に溶解させ、ＴＨＦ（７ｍｌ）中の１Ｈ－テトラゾール（２２６．０ｍｇ、３．２２６ｍｍｏｌ）の溶液を室温で加えたところ、数分後に白色の固体が析出した。反応混合物を室温で３．５時間攪拌し、tert-ブチルヒドロペルオキシド（ＴＢＨＰ）デカン溶液（５．０－６．０Ｍ、０．４３１ｍｌ、２．１５５ｍｍｏｌ）を室温で加え、さらに１．５時間攪拌した。反応混合物を水（１５ｍｌ）で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ×３）で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ＝５：１）により精製し、表題の化合物を得た（７８３．３ｍｇ、１．１３２ｍｍｏｌ、８４％、無色の油状物）。
　1H-NMR(CDCl3):δ=6.822 (4H, m), 5.482 (1H, m), 4.357 (1H, m), 4.256-4.148 (2H, m), 4.113-3.928 (3H, m), 3.854 (1H, m), 3.766 (3H, s), 1.484 (9H, s), 1.465 (9H, s), 1.435 (9H, s), 0.895 (9H, s), 0.129 (3H, s), 0.108 (3H, s)。
　31P-NMR(CDCl3):δ=-5.584, -5.823。
　HRMS (ESI, [M+Na]+)：計算値：C32H58NNaO11PSi+: 714.3409；実測値：714.3389。
　工程５：（２Ｓ）－２－tert－ブチルカルボニルアミノ－３－［（（２Ｒ）－２－（tert－ブチルジメチルシリルオキシ）－３－ヒドロキシプロポキシ）－tert－ブトキシホスホリルオキシ］プロピオン酸tert－ブチルエステルの調製
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000090
　（２Ｓ）－２－tert－ブチルカルボニルアミノ－３－［（（２Ｒ）－２－（tert－ブチルジメチルシリルオキシ）－３－（４－メトキシフェノキシ）プロポキシ）－tert－ブトキシホスホリルオキシ］プロピオン酸tert－ブチルエステル（３１８．０ｍｇ、０．４６０ｍｍｏｌ）をＣＨ３ＣＮ（１６ｍｌ）およびＨ２Ｏ（４ｍｌ）の混合液に溶解させ、０℃で撹拌し、硝酸セリウムアンモニウム（６２９．１ｍｇ、１．１４７ｍｍｏｌ）を加え、０℃で１時間攪拌した。Ｈ２Ｏ（２０ｍｌ）を加えて反応をクエンチし、ＡｃＯＥｔ（２０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ＝２：１→１：１）により精製し、表題の化合物を得た（２３８．２ｍｇ、０．４０７ｍｍｏｌ、８８％、褐色の油状物）。
　1H-NMR(CDCl3):δ=5.501 (1H, m), 4.363 (2H, m), 4.229 (1H, m), 3.987 (2H, m), 3.900 (1H, m), 3.629 (2H, m), 2.460 (1H, brs), 1.501-1.479 (18H, m), 1.450 (9H, s), 0.897 (9H, s), 0.110 (3H, s), 0.106 (3H, s)。
　31P-NMR(CDCl3):δ=-4.977, -5.265。
　HRMS (ESI, [M+Na]+)：計算値：C25H52NNaO10PSi+: 608.2990；実測値：608.3013。
　工程６：（２Ｓ）－２－tert－ブチルカルボニルアミノ－３－［（（２Ｒ）－２－（tert－ブチルジメチルシリルオキシ）－３－ヒドロキシプロポキシ）－tert－ブトキシホスホリルオキシ］プロピオン酸tert－ブチルエステルの調製
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000091
　（２Ｓ）－２－tert－ブチルカルボニルアミノ－３－［（（２Ｒ）－２－（tert－ブチルジメチルシリルオキシ）－３－ヒドロキシプロポキシ）－tert－ブトキシホスホリルオキシ］プロピオン酸tert－ブチルエステル（７５．４ｍｇ、０．１２９ｍｍｏｌ）および３－（２－ヘプチルオキシフェニル）プロピオン酸（４３．１ｍｇ、０．１６３ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（２ｍｌ）に溶解させ、４－ジメチルアミノピリジン（２．０ｍｇ、０．０１６６ｍｍｏｌ）を加え、室温で１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（３３．０ｍｇ、０．１７２ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５時間攪拌した。その後、ＭｅＯＨ（１ｍｌ）および１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（３０．１ｍｇ、０．１５７ｍｍｏｌ）を加え、さらに２時間攪拌した。Ｈ２Ｏ（１０ｍｌ）を加えて反応をクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ×３）で抽出した。合わせた有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ＝４：１）により精製し、表題の化合物を得た（１０３．４ｍｇ、０．１２２ｍｍｏｌ、９５％、淡黄色の油状物）。
　1H-NMR(CDCl3):δ=7.145 (2H, m), 6.829 (2H, m), 5.492 (1H, m), 4.350 (2H, m), 4.250-4.121 (2H, m), 4.004 (2H, m), 3.970-3.874 (4H, m), 2.940 (2H, t, J=7.78 Hz), 2.634 (2H, t, J=7.82 Hz), 1.793 (2H, m), 1.488 (9H, s), 1.469 (9H, s), 1.440 (9H, s), 1.360-1.301 (8H, m), 0.893 (3H, t, J=6.64 Hz), 0.876 (9H, s), 0.089 (3H, s), 0.076 (3H, s)。
　13C-NMR(CDCl3):δ=173.03, 156.95, 155.35, 129.94, 128.78, 127.55, 120.18, 110.18, 82.64, 82.63, 79.91, 69.19, 69.10, 67.75, 67.49, 65.16, 34.01, 31.77, 29.82, 29.78, 29.74, 29.31, 29.03, 28.31, 27.95, 26.11, 26.08, 25.66, 22.60, 18.02, 14.08, -4.77, -4.83。
　31P-NMR(CDCl3):δ=-5.632, -5.816。
　HRMS (ESI, [M+Na]+)：計算値：C41H74NNaO12PSi+: 854.4610；実測値：854.4610。
　工程７：（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｒ）－２－ヒドロキシ－３－｛３－（２－ヘプチルオキシフェニル）プロピオニルオキシ｝プロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸の調製
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000092
　（２Ｓ）－２－tert－ブチルカルボニルアミノ－３－［（（２Ｒ）－２－（tert－ブチルジメチルシリルオキシ）－３－ヒドロキシプロポキシ）－tert－ブトキシホスホリルオキシ］プロピオン酸tert－ブチルエステル（８３．６ｍｇ、０．０９８８ｍｍｏｌ）を０℃でトリフルオロ酢酸（１．０ｍｌ）に溶解させ、室温で１時間攪拌した。反応混合物をトリフルオロ酢酸で希釈し、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／ＡｃＯＨ＝８：１：１→６：１：３）により精製し、表題の化合物を酢酸塩として得た（３８．５ｍｇ、０．０７６２ｍｍｏｌ、７７％、白色粉末）。得られた酢酸塩をトリフルオロ酢酸に溶解させ、溶媒を留去し、表題の化合物をトリフルオロ酢酸塩として得た（白色粉末）。
　1H-NMR(CDCl3/TFA-d=4:1):δ=7.186 (1H, m), 7.087 (1H, m), 6.935-6.881 (2H, m), 4.667 (2H, m), 4.527 (1H, m), 4.297-4.173 (4H, m), 4.011 (2H, t, J=6.56 Hz), 2.967 (2H, m), 2.793 (2H, m), 1.790 (2H, m), 1.438 (2H, m), 1.367-1.268 (7H,m) 0.880 (3H, t, J=6.52 Hz)。
　31P-NMR(CDCl3):δ=-1.374。
　融点：134.2-135.0 ℃。
　元素分析：計算値：C22H36NO10P?0.6CF3COOH: C, 48.55; H, 6.43; N, 2.44；実測値：C, 48.45; H, 6.76; N, 2.56。
　上記実施例と同様の手法により、以下の化合物を調製した。
　［実施例３１］（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｒ）－２－ヒドロキシ－３－｛３－（３－ヘプチルオキシフェニル）プロピオニルオキシ｝プロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000093
　1H-NMR(CDCl3/TFA-d=4:1):δ=7.248 (1H, m), 6.865-6.822 (3H, m), 4.692-4.291 (6H, m), 4.115 (2H, m), 3.257 (2H, m), 2.944 (2H, m), 2.789 (2H, m), 1.787 (2H, t, J=6.92 Hz), 1.426-1.278 (8H, m), 0.882 (3H, t, J=6.48 Hz)。
　31P-NMR(CDCl3):δ=-1.298。
　融点：158.4-159.5 ℃。
　［実施例３２］（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｒ）－２－ヒドロキシ－３－｛３－（４－ヘプチルオキシフェニル）プロピオニルオキシ｝プロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000094
　1H-NMR(CDCl3/TFA-d=4:1):δ=7.103 (2H, d, J=8.04 Hz), 6.912 (2H, d, J=7.98 Hz), 4.665 (2H, m), 4.296 (1H, m), 4.207 (3H, m), 4.088 (2H, t, J=6.82 Hz), 3.835-3.605 (2H, m), 2.909 (2H, m), 2.748 (2H, m), 1.776 (2H, m), 1.419-1.316 (9H, m), 0.881 (3H, t, J=6.72 Hz)。
　31P-NMR(CDCl3):δ=-1.380。
　融点：163.7-164.6 ℃。
　元素分析：計算値：C22H36NO10P?0.4CF3COOH: C, 49.69; H, 6.66; N, 2.54；実測値：C, 49.42; H, 6.95; N, 2.78。
　［実施例３３］（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｒ）－２－ヒドロキシ－３－｛３－（４－ベンジルオキシフェニル）プロピオニルオキシ｝プロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000095
　1H-NMR(CDCl3/TFA-d=4:1):δ=7.341-7.291 (4H, m), 7.237-7.165 (1H, m), 7.101 (2H, d, J=8.08 Hz), 6.952 (2H, d, J=8.00 Hz), 5.120 (2H, s), 4.654 (2H, m), 4.492 (1H, m), 4.301-4.198 (4H, m), 3.833-3.779 (1H, m), 2.902 (2H, m), 2.744 (2H, m), 1.271 (1H, s)。
　31P-NMR(CDCl3):δ=-1.366。
　融点：131.0-132.1 ℃。
　元素分析：C22H28NO10P?0.8CF3COOH?1.2H2O: C, 46.45; H, 5.15; N, 2.30；実測値：C, 46.55; H, 5.36; N, 2.63。
　以下の化合物は、Avanti Polar Lipids（858143C）より購入したものを使用した。
　［実施例３４］（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｒ）－２－ヒドロキシ－３－オレオイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸（LPS（18:1））
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000096
　以下の化合物は、特開２００７－２８４４０２に記載の方法により調製した。
　［実施例３５］（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｒ）－２－ヒドロキシ－３－ステアロイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000097
　［実施例３６］（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｒ）－２－ヒドロキシ－３－パルミトイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000098
　本発明に使用される化合物、または本発明の化合物の合成方法を以下のスキームに示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000099
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000100
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000101
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000102
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000103
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000104
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000105
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000106
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000107
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000108
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000109
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000110
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000111
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000112
　［試験例１］TGFα切断アッセイによるアゴニスト活性の評価
　工程１：P2Y10およびGPR174遺伝子のクローニング
　HUVEC細胞、マウス尾ゲノム、ラット尾ゲノムをテンプレートとして、PCR法により、ヒト、マウス及びラットのP2Y10とGPR174遺伝子の全長cDNAを取得した。ヒト、マウスおよびラットのP2Y10とGPR174遺伝子は配列番号１～６で表される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドをフォワードプライマーとして、配列番号７～１２で表される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドをリバースプライマーとして用いた。
　なお、前記フォワードプライマーの各々の5 '末端には、制限酵素Kpn I認識部位を含む塩基配列がそれぞれ付加されている。また、リバースプライマーのヒトP2Y10の3 '末端には、制限酵素Sma I認識部位を含む塩基配列が付加されており、ヒトGPR174、マウス及びラットのP2Y10とGPR174の3 '末端には、制限酵素EcoR V認識部位を含む塩基配列がそれぞれ付加されている。PCRは、PrimeSTAR HS（#R010Q, TAKARA）を用いて、98℃（10秒間）/ 55℃（15秒間）/ 72℃（1分間）からなるサイクルを40回繰り返した。その結果、約1kbpのDNA断片が増幅された。Mighty Mix（タカラバイオ社）、HiSpeed Plasmid MidiKit （QIAGEN社）の各キットを使用して、このDNA断片をKpn I、Sma I及びEcoR Vで消化した後、プラスミドpCAGGSのマルチクローニングサイトに挿入することにより、それぞれのプラスミドを得た。ヒト、マウス及びラットのP2Y10とGPR174遺伝子の塩基配列は、株式会社 BEXに委託し、ダイターミネーター法により決定した。P2Y10遺伝子の塩基配列は、配列番号１３～１５で表される塩基配列のとおりであり、GPR174遺伝子の塩基配列は配列番号１６～１８で表される塩基配列のとおりであった。
　配列番号１３～１５で表される塩基配列は、ヒト、マウス、およびラットでそれぞれ984塩基、987塩基、987塩基のオープンリーディングフレーム（O R F）を有しており、このO R Fから予測されるアミノ酸配列（それぞれ328アミノ酸、329アミノ酸、329アミノ酸）は、配列番号１９～２１で表されるアミノ酸配列のとおりであった。また、配列番号１６～１８で表される塩基配列は、ヒト、マウス、およびラットでそれぞれ1002塩基、1008塩基、1008塩基のORFを有しており、このORFから予測されるアミノ酸配列（それぞれ334アミノ酸、336アミノ酸、336アミノ酸）は、配列番号２２～２４で表されるアミノ酸配列のとおりであった。
　工程２：TGFα切断アッセイによるアゴニスト活性の評価
　HEK293細胞を2.0x105cells/mLとなるように10%ウシ胎仔血清（FCS）含有のダルベッコ変法イーグル培地（DMEM）で懸濁し、60mmディッシュに4mLずつ播種した。5%CO2存在下で24時間培養後、LipofectAMINE 2000 (Invitrogen社)を用いて各種発現ベクターのトランスフェクションを行った。60mmディッシュあたり、AP標識TGFαのプラスミドベクターを1μg、マウスのP2Y10またはGPR174のプラスミドベクター1μgを用いた。なお、AP標識TGFαは膜結合型pro-TGFαのN末端側にhuman placental alkaline phosphataseが融合したタンパクであり、AP標識TGFαのプラスミドベクターは、Tokumaru et al., J Cell Biol 151, 209-220 (2000)の記載に基づいて作成することができる。トランスフェクション24時間後、トリプシン/EDTAを用いて細胞を剥がし、2.0x104cells/wellとなるように培養液に再懸濁し、96-wellプレートに播種した。化合物で刺激する場合は再懸濁液にハンクス平衡塩溶液（HBSS、5mM HEPES含有)を用いた。30分間静置後、各種濃度の被検化合物を添加し、5%CO2存在下でさらに1時間静置した。96-wellプレートを遠心 (190 x g , 3分)し、上清80μLを別の96-wellプレートに移した。10 mM ｐ－ニトロフェニルホスフェート（p-NPP）を含有した反応バッファー（40 mM Tris-HCl (pH 9.5)）を上清及び細胞に80μL加えた。OD405をマイクロプレートリーダーで測定し（バックグラウンド）、37℃で1時間加温した後にOD405を再度測定した。各wellについて、AP活性は2回目の吸光度からバックグラウンドを引いた値を以下の式に当てはめて算出した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000113
　さらに、無刺激群のAP活性（%）を差し引いた値を縦軸に用いてグラフを作成した。実施例３４（LPS（18:1））、実施例１（deoxy-LPS（18:1））および実施例１９（LPalloT（18:1））についての試験結果のグラフを図１および２に示す。図１および２のグラフより、deoxy-LPS（18:1）はＰ２Ｙ１０に、LPalloT（18:1）はＧＰＲ１７４にそれぞれ選択性を有するアゴニストであることが確認された。
　また各試験化合物について算出した最大反応値（Emax）を実施例３４（LPS（18:1））のEmaxと比較して、各化合物のアゴニスト活性を次のように表示した： 0-40%：－、40-60%：＋、60-80%：＋＋、80-100%：＋＋＋、試験結果なし：ＮＤ。結果を以下の表１および２に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000114
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000115
　［試験例２］全身性エリテマトーデス自然発症マウスにおける評価
　MRL-lpr/lprマウス（以下、MRL/lprマウスとも称する、8～9 週齢,♀）は日本SLC株式会社より購入した。実施例３４の化合物（LPS（18:1）、Avanti Polar Lipidsより購入、858143C）をマイクロシリンジでシリコンコーティング済みのガラス管（旭テクノグラス,9831-1207）に取り、窒素で乾固した後、0.01%（w/v）BSA-PBSを加えボルテックスを行い bath sonicator で2分間ソニケーションを行い10mM LPSに調製した。
　小型浸透圧ポンプ（Alzet社, model 2006）を生理食塩水（大塚生食注）に浸し、37℃で60時間インキュベートを行った。その後、1mL シリンジ（TERUMO,SS-01T）と付属の27Gの針を用いて各浸透圧ポンプにLPS溶液及び0.01%（w/v）BSA-PBSを200μLずつ充填した。Balb/cマウスにネンブタール麻酔薬を100mg/kgとなるように投与後、小型浸透圧ポンプをマウスの腹腔内に縦に埋め込み、腹膜、腹壁を縫合した。
　以上の手順により、MRL/lprマウス（♀、9週齢）に実施例３４の化合物（LPS（18:1）, 10 mM）を充填した小型浸透圧ポンプ（排出速度0.15 μL/hr, 42日間）を腹腔に埋め込むことにより、LPS（18:1）を持続的に供給した。17週齢にて、採血および臓器の回収を行った。血漿を用いて全自動血球装置（VetScan HM2）による血球細胞数の測定を行い、血清を用いてELISAによる自己抗体量の測定を行い、さらにリンパ組織は水分除去後、電子天秤で各臓器の重量を測定した。
　自己抗体量の測定（抗dsDNA抗体の検出）は以下の手順により行った。96 well アッセイプレートにポリ-L-リシン溶液（50μL/well）をまき、室温で8時間静置し well底をコーティングした。アスピレーターで溶液をよく取り除いた後、1ng/μL DNA溶液を100μl/well加え、37℃で8時間インキュベートし、プレートに結合させた。DNA溶液を取り除いた後、Blocking bufferを180μL/well加え、室温で2時間blockingを行った。Blocking bufferをよく除きAssay bufferで希釈した血清サンプルを50μL/well加え、室温で2時間静置した。その後、Skan Washer 400（Molecular Devices）を用いてTTBSで3回 washし、Assay bufferで2000倍に希釈したbiotinylated anti-mouse IgG（H+L）（Vector,BA2001）を50μL/well加え2時間反応させた。さらに、TTBSで3回 washし、Assay bufferで2000倍希釈したStreptavidin-HRP（Invitrogen,434323）を50μL/well加えて1時間反応させ、最後にTTBSで6回 wash後、TMB発色を10～15分間行い、1M H3PO4 で反応停止後、450nm での吸光度をマイクロプレートリーダー（VERSAmax, Molecular Devices）で測定した。
　また、腎臓のパラフィン切片を作製し、anti-mouse IgG抗体を用いて免疫複合体の染色を行った。パラフィン切片をXylen（3回）、100%（3回）、90%、70%、50% EtOHにそれぞれ3分間ずつ順次浸し脱パラフィンを行った後、流水で5分間洗浄した。その後、3% H2O2 にスライドを30分間浸し組織の内在性のペルオキシダーゼの不活化を行い、再度流水で5分間洗浄した。圧力鍋を用い、1mM EDTA中にスライドガラスを浸し抗原の賦活化を行った後、Avidin/Biotin Blocking kit（VECTOR, SP-2001）を用いて内在のビオチンのブロッキングを行なった。その後、スライドに 1% BSA-PBS を添加し、湿箱内にて室温で2時間 Blockingを行った。次いで、スライドガラスに 1% BSA-PBS で2000倍に希釈したbiotinylated anti-mouse IgG（H+L）を添加して室箱内にて4℃で一晩反応させた。反応終了後、PBSで5分間ずつ3回ずつ洗浄した。その後、ABC試薬を添加して室温で30分間反応させた後、PBSで5分間ずつ3回ずつ洗浄した。発色はtyramide working solutionを30μL/specimen添加し室温で5~10分間反応させた。その後、PBSで洗浄を行いDAPIを添加し5分間核染色を行った後、余分な液をPBSで洗い落とし、封入剤Aqueous Mounting Medium, PermaFluor（Thermo,TA-030-FM）を用いて封入した。
　上記の試験結果を図３～８に示す。試験結果より、LPS（18:1）は血中白血球数の減少（図３）、自己抗体産生の抑制（図４）、リンパ組織である脾臓および腸間膜リンパ節の腫脹の抑制（図５および６）、腎臓への免疫複合体の沈着抑制（図７および８）など、SLE様自己免疫疾患症状の発症抑制作用を有することが明らかとなった。
　［試験例３］ヒト自己免疫疾患肝炎モデルマウスにおける評価
　野生型Balb/cマウス（♂、9～10週齢）に試験化合物（1.5 mM）を充填した小型浸透圧ポンプ（排出速度1.0μL/hr, 7日間）を腹腔に埋め込むことにより、LPS（18:1）、実施例１の化合物（deoxy-LPS（18:1））または実施例１９（LPalloT（18:1））を持続的に供給した。小型浸透圧ポンプ（Alzet社, model 2001）は生理食塩水（大塚生食注）に浸し、37℃で4時間インキュベートしてから用い、それ以外は試験例２と同様の手順で小型浸透圧ポンプをマウスの腹腔に埋め込んだ。4日後に12時間断食し、コンカナバリンA（ConA）を20 mg/kgで尾静注した。一定時間後、採血を行い、血清を調製した。PBSにて灌流後、肝臓を摘出し、パラフィンブロック、切片の作製を行った。トランスアミナーゼCIIテストワコーを用いて血清中のアラニントランスアミナーゼ（ALT）を測定した。パラフィン切片はヘマトキシリンエオジン染色を行い、光学顕微鏡を用いて観察した。
　試験結果を図９～１３に示す。試験結果より、LPS（18:1）、deoxy-LPS（18:1）は血中アラニントランスアミナーゼ（ALT）値の上昇抑制（図９）、肝障害の抑制（図１０～１４）など、ConA誘発性肝炎の発症を抑制することが明らかとなった。
　［試験例４］活性化リンパ球におけるP2Y10受容体、GPR174受容体の発現量の変化
　マウス脾臓細胞をBalb/cマウス（雄、体重20～25g）の脾臓から採取し、RPMI1640培地（100mU/ml ペニシリン、100μg/ml ストレプトマイシン、2mM L-グルタミン、10% FBSを含む）に懸濁させ、24 well plateに1x106個/wellとなるように播種した。リンパ球のマイトジェンである1μg/mlのコンカナバリンA（ConA）存在下で刺激し、37℃で細胞を培養した。一定時間後、ConAで活性化させた脾臓細胞を回収しGenElute Mammalian Total RNA kit (SIGMA-ALDRICH)を用いてtotal RNAを抽出した。また、High capacity cDNA RT kit(Applied Biosystems)を用いて、定法に従って逆転写させ、cDNAを得た。cDNAと、目的遺伝子を計測するためのプライマーおよびSYBR Green PCR Master Mix(Applied Biosystems)を混合し、7300 Real-Time PCR Systemを用いてリアルタイムPCR法によりPCR産物を定量した。プライマーとして配列番号２５～２８に示すオリゴヌクレオチドを使用した。またコントロールジーンとして使用したGAPDHのプライマーを配列番号２９および３０に示す。P2Y10受容体、GPR174受容体の発現量について図１５および１６に示す。何れの受容体もコンカナバリンAによる刺激で発現量が増加することが確認された。
　［試験例５］マウス脾臓細胞のICAM-1に対する接着能の評価
　マウス脾臓細胞をBalb/cマウス（雄、体重20～25 g）の脾臓から採取し、RPMI1640培地（100 mU/ml ペニシリン、100μg/ml ストレプトマイシン、2 mM L-グルタミン、10% FBSを含む）に懸濁させ、24 well plateに5 x 106個/wellとなるように播種した。リンパ球のマイトジェンであるコンカナバリンA（ConA、1μg/ml）存在下で刺激し、37℃で48時間細胞を培養した。ConAで活性化させた脾臓細胞を回収し、PBSで2回洗浄し、1μMのCMFDAを含むPBSに懸濁させ、37℃で1時間蛍光標識した。さらに、脾臓細胞をPBSで2回洗浄し、RPMI1640培地（0.01%のウシ血清アルブミン（BSA）を含む）に懸濁させた。2.5μg/mlのリコンビナントマウスICAM Fcで96 well black plateを4℃で24時間処理し、0.5% BSAを含むPBSで30分間ブロッキングを行った。96 well palteをPBSで3回洗浄し、脾臓細胞を2 x 105個/wellとなるように播種した。試験化合物の存在下、蛍光標識した脾臓細胞を37℃で、リンパ球の接着を促進することが知られている10 mMのMg2+と1 mMのEGTAで刺激した。30分後、96 well plateを逆さにして30分間静置させ、接着していない細胞を除去し、1% NP-40を含むPBSを50μlずつ加えて細胞を溶解させた。プレートに接着した細胞の数は蛍光プレートリーダーを用いて蛍光強度を測定することで決定された。接着した細胞の割合を全細胞数のパーセンテージとして計算した。測定値はn=3で行った実験の平均値±標準誤差として示した。
　上記実施例で調製した化合物のうち、LPS（18:1）、deoxy LPS（18:1）、LPalloT（18:1）を使用した。試験結果を図１７に示す。試験結果より、LPS（18:1）、deoxy LPS（18:1）は脾臓細胞のICAM-1に対する接着を抑制するが、LPalloT（18:1）はこの接着を抑制しないことが確認された（化合物終濃度：10μM)。
　［試験例６］マウス脾臓細胞のIL-2産生に対する抑制効果の評価
　マウス脾臓細胞をBalb/cマウス（雄、体重20～25g）の脾臓から採取し、RPMI1640培地（100 mU/ml ペニシリン、100μg/ml ストレプトマイシン、2 mM L-グルタミン、10% FBSを含む）に懸濁させ、24 well plateに1 x 106個/wellとなるように播種した。1μg/mlのConA存在下で刺激し、37 ℃で60時間細胞を培養した。ConAで活性化させた脾臓細胞を回収し、RPMI1640培地（0.01%のBSAを含む）に懸濁させ、96 well plateに5 x 105個/wellとなるように播種した。試験化合物の存在下、活性化させた脾臓細胞を37℃で、IL-2の産生を促進させるために1μ/mlのConAで刺激した。12時間後、96 well plateから培養上清を回収した。上清中のIL-2の濃度は、Mouse IL-2 Matched Antibody Pairs for ELISA（eBioscience,BMS601MST）を用いて、サンドイッチELISAにより決定された。測定値は、異なるマウス個体から採取した脾臓細胞を用いて数回の反復実験を行い、平均値±標準誤差として示した。
　上記実施例で調製した化合物のうち、LPS（18:1）、deoxy-LPS（18:1）、LPalloT（18:1）を使用した。試験結果を図１８に示す。試験結果より、LPS（18:1）、LPalloT（18:1）は濃度依存的に脾臓細胞のIL-2産生を抑制するが、deoxy-LPS（18:1）はIL-2の産生を抑制しないことが確認された。

Claims (20)

  1. 　式（Ｉ）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
     ［式中、Ａは式（ＩＩ）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
     で表される基であり；
    　Ｒ１は、水素原子、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシＣ１－６アルキル、またはベンジルであり；
    　Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立に、水素原子、Ｃ１－６アルキル、ホルミル、Ｃ１－６アルキルカルボニル、Ｃ１－６アルコキシカルボニル、Ｃ１－６アルコキシＣ１－６アルキル、またはベンジルオキシカルボニルから選択され；
    　Ｒ４は、水素原子またはＣ１－３アルキルであり；
    　Ｒ５は、水素原子、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシＣ１－６アルキル、Ｃ１－６アルキルカルボニルオキシＣ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシカルボニルオキシＣ１－６アルキル、フェニル、ベンジル、フタリジル、ジオキソレノンイルメチル、またはフリルメチルであり；
    　Ｘは、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ、Ｃ１－６アルコキシ、ホルミルオキシ、Ｃ１－６アルキルカルボニルオキシ、またはベンジルオキシであり；
    　ｎは、０～４から選択される整数であり；
    　Ｙは、－Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７－、または－ＮＲ７Ｃ（＝Ｏ）－であり；
    　Ｒ６は、Ｃ３－３０アルキルであり、ここでアルキルには１以上のフェニレンまたは５－６員ヘテロアリーレンが挿入されていてもよく、アルキルの１以上の－ＣＨ２－は－Ｏ－と置き換えられていてもよく、炭素原子間の１以上の単結合は、二重結合または三重結合に置き換えられていてもよく、アルキルの末端はフェニルまたは５－６員ヘテロアリールにより置換されていてもよく、該フェニルまたはヘテロアリールは、Ｃ１－１０アルキル、Ｃ１－１０アルコキシおよびハロゲン原子から選択される１以上の置換基により置換されていてもよく；
    　Ｒ７は、水素原子、またはＣ１－６アルキルであり；
    　上記のベンジル、ベンジルオキシ、フェニル、フタリジル、ジオキソレノンイルメチル、フリルメチル、フェニレン、およびヘテロアリーレンは、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシ、ヒドロキシ、Ｃ１－６アルキルカルボニルオキシ、ニトロ、フェニルおよびハロゲン原子から選択される１以上の置換基により置換されていてもよい］
    で表される化合物、または医薬として許容なその塩を含有する、自己免疫疾患の治療剤または予防剤。
  2. 　Ａが下式：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
     で表され、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、請求項１に定義したとおりである、請求項１に記載の治療剤または予防剤。
  3. 　Ｒ６が、Ｃ１０－２４アルキル（ここでアルキルの１以上の－ＣＨ２－は－Ｏ－と置き換えられていてもよく、炭素原子間の１以上の単結合は、二重結合または三重結合に置き換えられていてもよい）、または式：－（ＣＨ２）ｍ－Ｑから選択され；
    　ｍは、２～２０から選択される整数であり；
    　Ｑは、フェニルまたは５－６員ヘテロアリールであり、該フェニルまたはヘテロアリールは、Ｃ１－１０アルキル、Ｃ１－１０アルコキシ、フェニルＣ１－１０アルキル、フェニルＣ１－１０アルコキシ、５－６員ヘテロアリールＣ１－１０アルキル、または５－６員ヘテロアリールＣ１－１０アルコキシにより置換されていてもよい、請求項１または２に記載の治療剤または予防剤。
  4. 　Ｒ６が、Ｃ１２－２０アルキル（ここでアルキルの１～３の－ＣＨ２－は－Ｏ－と置き換えられていてもよく、炭素原子間の１つの単結合は、二重結合に置き換えられていてもよい）、または式：－（ＣＨ２）ｍ－Ｑから選択され；
    　ｍは、２～７から選択される整数であり；
    　Ｑは、フェニルまたは５－６員ヘテロアリールであり、該フェニルまたはヘテロアリールは、Ｃ１－１０アルキル、Ｃ１－１０アルコキシ、フェニルＣ１－３アルキル、フェニルＣ１－３アルコキシ、５－６員ヘテロアリールＣ１－３アルキル、または５－６員ヘテロアリールＣ１－３アルコキシにより置換されていてもよい、請求項３に記載の治療剤または予防剤。
  5. 　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－オレオイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
    　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－バセノイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
    　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－エライドイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
    　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－パルミトレオイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
    　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－パルミトイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
    　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－ミリストイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
    　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－ラウロイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
    　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－ヘキサデシルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
    　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（２－オレイルオキシエトキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
    　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－オレイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
    　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（４－オレイルオキシブトキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
    　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（５－オレイルオキシペントキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
    　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［３－｛８－（４－ヘプチル－１，２，３－トリアゾル－１－イル）オクタノイルオキシ｝プロポキシ－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
    　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［３－｛８－（４－ヘキシル－１，２，３－トリアゾル－１－イル）オクタノイルオキシ｝プロポキシ－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
    　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［６－｛４－ヘキシルオキシ－（２Ｚ）－２－ブテン－１－イルオキシ｝ヘキサノイルオキシ］プロポキシ－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
    　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［２－（オレイルオキシカルボニル）エトキシ－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
    　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［３－（オレイルオキシカルボニル）プロポキシ－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
    　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［４－（オレイルオキシカルボニル）ブトキシ－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
    　（２Ｓ，３Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－オレオイルオキシプロピル）－ヒドロキシホスホリルオキシ］酪酸；
    　（２Ｓ，３Ｓ）－２－アミノ－３－［｛３－（（９Ｅ）－オクタデセノイルオキシ）プロピル｝－ヒドロキシホスホリルオキシ］酪酸；
    　（２Ｓ，３Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－ステアロイルオキシプロピル）－ヒドロキシホスホリルオキシ］酪酸；
    　（２Ｓ，３Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－パルミトレオイルオキシプロピル）－ヒドロキシホスホリルオキシ］酪酸；
    　（２Ｓ，３Ｓ）－２－アミノ－３－［（３－パルミトイルオキシプロピル）－ヒドロキシホスホリルオキシ］酪酸；
    　（２Ｓ，３Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｒ）－２－ヒドロキシ－３－オレオイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］酪酸；
    　（２Ｓ，３Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｒ）－２－ヒドロキシ－３－パルミトイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］酪酸；
    　（２Ｓ，３Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｒ）－２－ヒドロキシ－３－ステアロイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］酪酸；
    　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｓ）－２－ヒドロキシ－３－オレオイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
    　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｓ）－２－ヒドロキシ－３－ステアロイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
    　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｓ）－２－ヒドロキシ－３－パルミトイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
    　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｒ）－２－ヒドロキシ－３－｛３－（２－ヘプチルオキシフェニル）プロピオニルオキシ｝プロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
    　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｒ）－２－ヒドロキシ－３－｛３－（３－ヘプチルオキシフェニル）プロピオニルオキシ｝プロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
    　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｒ）－２－ヒドロキシ－３－｛３－（４－ヘプチルオキシフェニル）プロピオニルオキシ｝プロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
    　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｒ）－２－ヒドロキシ－３－｛３－（４－ベンジルオキシフェニル）プロピオニルオキシ｝プロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
    　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｒ）－２－ヒドロキシ－３－オレオイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；
    　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｒ）－２－ヒドロキシ－３－ステアロイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸；および
    　（２Ｓ）－２－アミノ－３－［（（２Ｒ）－２－ヒドロキシ－３－パルミトイルオキシプロポキシ）－ヒドロキシホスホリルオキシ］プロピオン酸
    から選択される化合物、または医薬として許容なその塩を含有する、請求項１～４のいずれか１項に記載の治療剤または予防剤。
  6. 　自己免疫疾患が、悪性関節リウマチ、全身エリテマトーデス、多発性硬化症、重症筋無力症、バセドウ病、抗リン脂質抗体症候群、シェーグレン症候群、原発性胆汁性肝硬変、多発性筋炎、および自己免疫性肝炎から選択される疾患である、請求項１～５のいずれか１項に記載の治療剤または予防剤。
  7. 　式（Ｉａ）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
     ［式中、Ａ１は下式：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
     で表される基であり；
    　Ｒ１１は、水素原子、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシＣ１－６アルキル、またはベンジルであり；
    　Ｒ１２およびＲ１３は、それぞれ独立に、水素原子、Ｃ１－６アルキル、ホルミル、Ｃ１－６アルキルカルボニル、Ｃ１－６アルコキシカルボニル、Ｃ１－６アルコキシＣ１－６アルキル、またはベンジルオキシカルボニルから選択され；
    　Ｒ１５は、水素原子、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシＣ１－６アルキル、Ｃ１－６アルキルカルボニルオキシＣ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシカルボニルオキシＣ１－６アルキル、フェニル、ベンジル、フタリジル、ジオキソレノンイルメチル、またはフリルメチルであり；
    　ｐは、２～６から選択される整数であり；
    　Ｙ１は、直接結合、または－Ｃ（＝Ｏ）－であり；
    　Ｒ１６は、Ｃ３－３０アルキルであり、ここでアルキルには１以上のフェニレンまたは５－６員ヘテロアリーレンが挿入されていてもよく、アルキルの１以上の－ＣＨ２－は－Ｏ－と置き換えられていてもよく、炭素原子間の１以上の単結合は、二重結合または三重結合に置き換えられていてもよく、アルキルの末端はフェニルまたは５－６員ヘテロアリールにより置換されていてもよく、該フェニルまたはヘテロアリールは、Ｃ１－１０アルキル、Ｃ１－１０アルコキシおよびハロゲン原子から選択される１以上の置換基により置換されていてもよく；
    　上記のベンジル、ベンジルオキシ、フェニル、フタリジル、ジオキソレノンイルメチル、フリルメチル、フェニレン、およびヘテロアリーレンは、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシ、ヒドロキシ、Ｃ１－６アルキルカルボニルオキシ、ニトロ、フェニルおよびハロゲン原子から選択される１以上の置換基により置換されていてもよい］
    で表される化合物、または医薬として許容なその塩。
  8. 　Ｒ１６が、Ｃ１０－２４アルキル（ここでアルキルの１以上の－ＣＨ２－は－Ｏ－と置き換えられていてもよく、炭素原子間の１以上の単結合は、二重結合または三重結合に置き換えられていてもよい）、または式：－（ＣＨ２）ｒ－Ｑ１から選択され；
    　ｒは、２～２０から選択される整数であり；
    　Ｑ１は、フェニルまたは５－６員ヘテロアリールであり、該フェニルまたはヘテロアリールは、Ｃ１－１０アルキル、Ｃ１－１０アルコキシ、フェニルＣ１－１０アルキル、フェニルＣ１－１０アルコキシ、５－６員ヘテロアリールＣ１－１０アルキル、または５－６員ヘテロアリールＣ１－１０アルコキシにより置換されていてもよい、請求項７に記載の化合物、または医薬として許容なその塩。
  9. 　Ｒ１６が、Ｃ１２－２０アルキル（ここでアルキルの１～３の－ＣＨ２－は－Ｏ－と置き換えられていてもよく、炭素原子間の１つの単結合は、二重結合に置き換えられていてもよい）、または式：－（ＣＨ２）ｒ－Ｑ１から選択され；
    　ｒは、２～７から選択される整数であり；
    　Ｑ１は、フェニルまたは５－６員ヘテロアリールであり、該フェニルまたはヘテロアリールは、Ｃ１－１０アルキル、Ｃ１－１０アルコキシ、フェニルＣ１－３アルキル、フェニルＣ１－３アルコキシ、５－６員ヘテロアリールＣ１－３アルキル、または５－６員ヘテロアリールＣ１－３アルコキシにより置換されていてもよい、請求項８に記載の化合物、または医薬として許容なその塩。
  10. 　式（Ｉｂ）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
     ［式中、Ａ２は式（ＩＩｅ）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
     で表される基であり；
    　Ｒ２１は、水素原子、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシＣ１－６アルキル、またはベンジルであり；
    　Ｒ２２およびＲ２３は、それぞれ独立に、水素原子、Ｃ１－６アルキル、ホルミル、Ｃ１－６アルキルカルボニル、Ｃ１－６アルコキシカルボニル、Ｃ１－６アルコキシＣ１－６アルキル、またはベンジルオキシカルボニルから選択され；
    　Ｒ２４は、水素原子またはＣ１－３アルキルであり；
    　Ｒ２５は、水素原子、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシＣ１－６アルキル、Ｃ１－６アルキルカルボニルオキシＣ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシカルボニルオキシＣ１－６アルキル、フェニル、ベンジル、フタリジル、ジオキソレノンイルメチル、またはフリルメチルであり；
    　Ｘ２は、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ、Ｃ１－６アルコキシ、ホルミルオキシ、Ｃ１－６アルキルカルボニルオキシ、またはベンジルオキシであり；
    　ｓは、０～４から選択される整数であり；
    　Ｙ２は、－Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２７－、または－ＮＲ２７Ｃ（＝Ｏ）－であり；
    　Ｒ２６は、式：－（ＣＨ２）ｔ－Ｑ２であり；
    　ｔは、２～２０から選択される整数であり；
    　Ｑ２は、フェニルまたは５－６員ヘテロアリールであり、該フェニルまたはヘテロアリールは、Ｃ１－１０アルキル、Ｃ１－１０アルコキシ、フェニルＣ１－１０アルキル、フェニルＣ１－１０アルコキシ、５－６員ヘテロアリールＣ１－１０アルキル、または５－６員ヘテロアリールＣ１－１０アルコキシにより置換されていてもよく；
    　Ｒ２７は、水素原子、またはＣ１－６アルキルであり；
    　さらに上記のベンジル、ベンジルオキシ、フェニル、フタリジル、ジオキソレノンイルメチル、およびフリルメチルは、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６アルコキシ、ヒドロキシ、Ｃ１－６アルキルカルボニルオキシ、ニトロ、フェニルおよびハロゲン原子から選択される１以上の置換基により置換されていてもよい］
    で表される化合物、または医薬として許容なその塩。
  11. 　Ａ２が下式：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
     で表され、Ｒ２１、Ｒ２２およびＲ２３は、請求項１０に定義したとおりである、請求項１０に記載の化合物、または医薬として許容なその塩。
  12. 　Ｒ２６が、Ｃ１２－２０アルキル（ここでアルキルの１～３の－ＣＨ２－は－Ｏ－と置き換えられていてもよく、炭素原子間の１つの単結合は、二重結合に置き換えられていてもよい）、または式：－（ＣＨ２）ｓ－Ｑ２から選択され；
    　ｓは、２～７から選択される整数であり；
    　Ｑ２は、フェニルまたは５－６員ヘテロアリールであり、該フェニルまたはヘテロアリールは、Ｃ１－１０アルキル、Ｃ１－１０アルコキシ、フェニルＣ１－３アルキル、フェニルＣ１－３アルコキシ、５－６員ヘテロアリールＣ１－３アルキル、または５－６員ヘテロアリールＣ１－３アルコキシにより置換されていてもよい、請求項１０または１１に記載の化合物、または医薬として許容なその塩。
  13. 　Ｐ２Ｙ１０またはＧＰＲ１７４を使用して、リゾホスファチジルセリン受容体への被検化合物のアゴニスト活性またはアンタゴニスト活性を評価することを含む、自己免疫疾患の治療剤または予防剤のスクリーニング方法。
  14. 　アゴニスト活性を評価する、請求項１３に記載の方法。
  15. 　インターロイキン２産生抑制剤をスクリーニングするための、請求項１３または１４に記載の方法。
  16. 　リンパ球接着抑制剤をスクリーニングするための、請求項１３または１４に記載の方法。
  17. 　Ｐ２Ｙ１０またはＧＰＲ１７４をコードする遺伝子を発現する細胞を使用する、請求項１３～１６のいずれか１項に記載の方法。
  18. 　アルカリフォスファターゼ（ＡＰ）で標識化されたトランスフォーミング増殖因子α（ＴＧＦα）をコードする遺伝子をさらに発現する細胞を使用する、請求項１７に記載の方法。
  19. 　対照化合物としてリゾホスファチジルセリンまたはその類縁体を使用する、請求項１３～１８のいずれか１項に記載の方法。
  20. 　自己免疫疾患が、悪性関節リウマチ、全身エリテマトーデス、多発性硬化症、重症筋無力症、バセドウ病、抗リン脂質抗体症候群、シェーグレン症候群、原発性胆汁性肝硬変、多発性筋炎、および自己免疫性肝炎から選択される疾患である、請求項１３～１９のいずれか１項に記載の方法。
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