WO2012100389A1 - 一种三萜皂苷类化合物，制备方法及用途 - Google Patents

一种三萜皂苷类化合物，制备方法及用途 Download PDF

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姜生
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Description

—种三萜皂苷类化合物， 制备方法及用途
技术领域
本发明属于医药技术领域， 具体涉及一类五环三萜类化合物及其制备方法。 背景技术
文冠果别名文官果、 岩木瓜，为无患子科文冠果属多年生草本植物 Xanthoceras sorbifolia Bunge 的果实。 文冠果为多年生植物， 原产于我国北方,现多栽培。 文冠果主要 用于祛风湿性关节炎、 风湿内热、 皮肤风湿等症的治疗， 1977年收载于中国药典。 文冠果种 子在民间用于治遗尿症， 茎叶在蒙药中治风湿， 已有很长的历史。 但是， 对文冠果药用方面 的深入开发研究才是近年来的事。
中国专利（CN1092992A)和（CN1092991A)公开文冠果种仁的粉，和中国专利（CN1052636C) 公丌文冠果种仁的粉的乙醇提取物可以有效的治疗遗尿， 并可能改善脑功能和增智。 沈阳药 科大学学报（2001， 18 (1)： 53-56)报导了文冠果的木材的正丁醇提取物和它的抗炎性作用。 美国专利申请公开书（N020030096030)公开了文冠果果壳提取物和所含的四种皂苷和两 个^醇化合物， 以及它们改善功能和抗衰老的功能， 和用于治疗夜尿， 尿频， 尿失禁， 弱智， 痴呆和增强人体抗御糖尿病的方法。 发明内容：
本发明公开如 I式的五环三萜类化合物， 本发明提供从文冠果中提取得到的 I式化合物 的制备方法。 本发明进一步提供 I式化合物为活性成分的， 具有抗炎、 抗肿瘤、 抗菌、 抗病毒活性， 能够用于治疗尿失禁和膀胱过度活动症。 具有 I 式的化合物 79
Figure imgf000003_0001
I
I 式的化合物可以从文冠果的果壳、 果柄、 枝干、 叶、 种仁、 种壳、 根或树皮中提取得 到， 也可以从其他植物中分离得到， 或用合成方法得到。 其中提取方法如下：
文冠果采用 70%的甲醇或乙醇提取， 减压回收提取液至醇浓度低于 3%; 提取液分别用石 油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取， 回收溶剂， 收集得到石油醚萃取物、 氯仿萃取物、 乙 酸乙酯萃取物、 正丁醇萃取物； 正丁醇萃取物经非极性大孔树脂柱色谱处理， 依次用水和醇 梯度洗脱， 得到 60%醇洗脱流分； 正丁醇萃取物经硅胶柱色谱法分离， 以氯仿 /甲醇梯度洗脱， 得流分 5 (氯仿 /甲醇： 3: 1 )经半制备型 HPLC色谱分离， 以甲醇 /水（60%)， 为流动相洗脱， 得到化合物 I。
具有 II式的化合物
Figure imgf000003_0002
其中 Π式化合物提取方法如下： 文冠果经溶剂提取法， 采用 70%的甲醇提取， 减压回收提取液至醇浓度低于 3%; 提取液 分别用石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取， 回收溶剂， 收集得到石油醚萃取物、 氯仿萃 取物、 乙酸乙酯萃取物、 正丁醇萃取物； 正丁醇萃取物经非极性大孔树脂柱色谱处理， 依次 用水和醇梯度洗脱， 得到 60%醇洗脱流分； 正丁醇萃取物经硅胶柱色谱法分离， 以氯仿 /甲醇 梯度洗脱，得流分 8 (氯仿 /甲醇： 2: 1 );流分 8，经半制备型 HPLC色谱分离，以甲醇 /水（65%), 为流动相洗脱， 得到化合物 II。 本发明的化合物通常是以立体异构形式的混合物存在的， 在这些立体异构体形式中， 通 常是以一种形式为主， 可依据本领域普通技术人员所掌握的常规技术得到所需的异构体。 本发明进一步提供 I、 Π式化合物为活性成分的， 具有抗炎、 抗肿瘤、 抗菌、 抗病毒活 性， 能够用于治疗尿频、 尿急、 遗尿、 尿失禁和膀胱过度活动症。 还可防治脑衰老、 增强记 忆、 改善脑功能， 治疗弱智、 痴呆、 老年痴呆， 孤独症、 脑创伤、 帕金森病和其他由于脑功 能不健全或障碍引起的疾病， 还可用于治疗关节炎、 风湿症、 循环不良、 动脉硬化、 雷诺氏 症、 心绞痛、 心脏功能紊乱、 头痛、 头晕、 肾功能紊乱、 阳痿和早泄。 这些化合物具有各种 药学和医疗学用途。 经药理活性研究， 本发明的化合物对大鼠离体膀胱平滑肌的影响， 拮抗 Ach (乙酰胆碱） 收缩大鼠离体膀胱平滑肌的作用， 对膀胱逼尿肌有松弛作用， 和拮抗胆碱样作用有关。 通过 对雌性未育及育后恢复大鼠离体膀胱括约肌的影响和对家兔膀胱外括约肌细胞外电极生物电 的影响， 证明 I式化合物对膀胱括约肌有收缩作用。 通过文冠果总皂苷对水负荷小鼠排尿次 数的影响和大鼠阴部神经损伤后漏尿点压的影响， 证明本发明化合物能改善尿频、 遗尿、 尿 失禁等 0AB的症状。 本发明的药物组合物含有治疗有效量的 I式化合物和组合物及其单体为活性成分， 以及 含有一种或多种药学上可接受的载体。 本发明的化合物和药物组合物可用于制备治疗尿失禁 和膀胱过度活动症的药物组合物。 上文所述药学上可接受的载体是指药学领域常规的药物载 体， 例如： 稀释剂、 赋形剂如水等， 填充剂如淀粉、 蔗糖等、； 粘合剂如纤维素衍生物、 藻酸 盐、 明胶和聚乙烯毗咯垸酮； 湿润剂如甘油； 崩解剂如琼脂、 碳酸钙和碳酸氢钠； 吸收促进 剂如季按化合物； 表面活性剂如十六烷醇； 吸附载体如髙岭土和皂粘土； 润滑剂如滑石粉、 硬脂酸钙和镁、 和聚乙二醇等。 另外还可以在组合物中加入其它辅剂如香味剂、 甜味剂等。 本发明化合物可以组合物的形式通过口服、 鼻吸入、 直肠或肠胃外给药的方式施用于需要这 种治疗的患者。 用于口服时， 可将其制成常规的固体制剂如片剂、 粉剂、 粒剂、 胶囊等， 制 成液体制剂如水或油悬浮剂或其它液体制剂如糖浆剂等； 用于肠胃外给药时， 可将其制成注 射用的溶液、 水或油性悬浮剂等。 优选的形式是片剂、 包衣片剂、 胶囊、 栓剂、 鼻喷雾剂和 注射剂。 本发明药物组合物的各种剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。 例如使活性成分 与一种或多种载体混合， 然后将其制成所需的剂型。 本发明的药物组合物优选含有重量比为
0.1%— 99.5 %的活性成分， 最优选含有重量比为 0.5 %— 95%的活性成分。 具体实施方式下面的实施例可以使本专业技术人员更全面地理解本发明， 但不以任何方 式限制本发明。 附图说明
图 1: 化合物 I的氢谱 图 2: 化合物 I的碳谱 图 3: 化合物 I的碳氢远程相关谱 （HMBC) 图 4: 化合物 I的碳氢直接相关谱 （HSQC) 图 5: 化合物 II的氢谱 图 6: 化合物 Π的碳谱 图 7: 化合物 Π的碳氢远程相关谱 （HMBC) 图 8: 化合物 II的碳氢直接相关谱 （HSQC)
实施例 1
文冠果种仁粉末 8公斤， 分 2次， 分别用 70%乙醇 30L提取 3次， 每次 2小时， 趁热过 滤， 滤液减压浓缩至无醇味， 得浓缩液 20L。 分别用石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取， 回收溶剂， 收集得到石油醚萃取物、 氯仿萃取物、 乙酸乙酯萃取物、 正丁醇萃取物； 正丁醇 萃取物经采用 D101大孔树脂柱以不同浓度的乙醇水梯度洗脱， 得到水， 30%、 60%、 70%和 90% 乙醇五个部分。 其中 60%乙醇洗脱部分以 140 目硅胶拌样， 以 CHC13:MeOH(4:l，2:l，l:l)， CHC13:Me0H:H20(6:3:l下层)为洗脱剂经硅胶柱色谱分离得到 80个流分， 经薄层分析将成分 一致部分合并。 其中 53^54部分再次进行硅胶柱层析， 洗脱剂 CHC13:MeOH:H20(65:30:10)下 层， 等度洗脱， 得到 38个流分。 其中 2(Γ28合并以甲醇溶解进行 sephadexLH- 20柱层析， 甲 醇为洗脱剂，经薄层色谱检验将主含皂苷部分合并，采用 0DS柱不同比例甲醇水溶液（10%， 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 100%)梯度洗脱， 根据液相检测对其中的 17^25流分分别采用制
Figure imgf000006_0001
3-0- [ β -D-glucopyranosyl (1— 6) ]- β -D-glucopyranosyl, 28-0- [ a -L-rhamnosyl (1 — 2) ]- β - D- glucopyranosyl-16-deoxybarringtogenol C 实施例 2 文冠果采用 70%的甲醇或乙醇提取， 减压回收提取液至醇浓度低于 3%; 提取液分别用石 油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 JE丁醇萃取， 回收溶剂， 收集得到石油醚萃取物、 氯仿萃取物、 乙 酸乙酯萃取物、 正丁醇萃取物； 正丁醇萃取物经非极性大孔树脂柱色谱处理， 依次用水和醇 梯度洗脱，得到 60%醇洗脱流分； 正丁醇萃取物经硅胶柱色谱法分离， 以氯仿 /甲醇梯度洗脱， 得流分 5 (氯仿 /甲醇： 3: 1 )经半制备型 HPLC色谱分离， 以甲醇 /水（60%)， 为流动相洗脱， 得到化合物 I。
实施例 3
白色粉末 （甲醇）， 10%硫酸乙醇溶液显紫色， Liebermann-Burchard反应阳性， Molish反 应阳性， 示其为一三萜皂苷类化合物。 酸水解反应， 检测有葡萄糖和鼠李糖存在。
1H NMR谱给出 7个特征的角甲基信号： 3 0.91 ( 3H, s) , 1.03 (3H, s), 1.11 (3H, s), 1.22 (3H, s), 1.26 (6H, s), 1.28 (3H, s); 四个糖的端基质子信号： δ 4.74 (1Η, d, J= 7.2 Hz), 4.90 (1H d, J = 7.5 Hz), 5.73 (1H, d, J = 7.7 Hz), 6.61 (1H, s, rha-H-1), 提示该化合物中存在三个葡萄糖片 段和一个鼠李糖片段， 且由其偶合常数可知葡萄糖的苷键构型均为 5型。 将其核磁数据与化 合 物 3 -O-yff-D-glucopyranosyl (1→6)-yS-D-glucopyranosyl,
28-O-^-D-glucopyranosyl(l→6)[ -L-rhamnopyranosyl (1→2)]-y9-D-glucopyranosyl 16-deoxybarringtogenol C禾口 3-0-[P-D-glucopyranosyl (1→6)] (3'-angeloyl)-P-D-glucopyranosyl, 28-0-[a-L-rhamnosyl (1→2)]- -D-glucopyranosyl 16-deoxybarringtogenol C的数据比较，化合物 的基本母核为： 16-deoxybarringtogenol C， 可推测化合物的 C-3位和 C-28位分别连接糖链， 且 C-28 位糖链结构为 28-O-[a-L-rhamnosyl (1→2)]-p-D-glucopyranosyl , C-3 位糖链结构为 3-O- ?-D-glucopyranosyl ( 1→6)- 9-D-glucopyranosyl。
在 HMBC谱中可见 <5 4.74 (Η- Γ') 与母核上的 28位碳信号 ^ 75.6 (C-28)存在远程相关， 6.61 (Η-Γ") 与 C-2" '位碳信号 (5 80.8 (C-2'")存在远程相关； 4.90 (Η-1 ') 与母核上的 3位碳信 号 ό 89.6 (C-3)存在远程相关， δ 5.13 (H-1 ") 与 C-6'位碳信号 <5 71.0 (C-6')存在远程相关。 故确 定化合物结构中的糖链连接顺序为： 3-O-[P-D-glucopyranosyl (1→6)]-P-D-glucopyranosyl, 28-O-fa-L-rhamnosyl (1→2)]-β-0- glucopyranosyl。
综合化合物的 ID 和 2D NMR数据， 可鉴定化合物的结构为： 3-O-[p-D-glucopyranosyl (l→6)]-p-D-glucopyranosyl, 28-O-[a-L-rhamnosyl (1→2)]-β-ϋ- glucopyranosyl- 16-deoxybarringtogenol C。 数据归属见下表
表 1 化合物的 NMR数据归属 （300MHz， pyridine-rf5)
No. No. -5c
1 40.1 O-glu-1 107.5 4.90 (1H, d, J=7.5Hz)
2 26.3 2 76.2
3 89.6 5.35(l H,dd,J=4.8, 12.5Hz) 3 78.9
4 39.4 4 72.2
5 56.3 5 77.5
6 19.1 6 71.0
7 33.4 •O-glu-1 105.9 >.13 (1H, d, J=7.7Hz)
8 40.9 2 75.7
9 48.4 3 79.0
10 37.4 4 72.2
11 24.6 5 79.1
12 124.4 5.43 (1H， br. s) 6 63.3
13 143.7 i-O-glu- 104.1 4.74 (1H, d, J=7.2Hz)
14 42.5 2 80.8
15 26.8 3 78.3
16 19.1 4 72.3
17 43.7 5 78.9
18 41.8 6 63.2
19 47.0 "-Rha-1 101.1 6.61 (1H, s)
20 37.0 2 73.1
21 77.4 3 72.9
22 75.3 4 74.9
23 28.7 1.26 (3H, s) 5 69.6
24 17.6 1.03 (3H, s) 6 19.1 1.86 (3H, d, J=6.0 Hz)
25 16.3 0.91 (3H, s)
26 17.3 1.11 (3H, s) 27 26.8 1.28 (3H, s)
28 75.6
29 31.0 1.22 (3H, s)
30 20.2 1.26 (3H, s) 实施例 4 文冠果种仁粉末 S公斤， 分 2次， 分别用 70%乙醇 30L提取 3次， 每次 2小时， 趁热过滤， 滤液减压浓缩至无醇味， 得浓缩液 20L。 分别用石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取， 回 收溶剂， 收集得到石油醚萃取物、 氯仿萃取物、 乙酸乙酯萃取物、 正丁醇萃取物； 正丁醇萃 取物经采用 D101大孔树脂柱以不同浓度的乙醇水梯度洗脱， 得到水， 30%、 60%、 70%和 90% 乙醇五个部分。 其中 60%乙醇洗脱部分以 140 目硅胶拌样， 以 CHC13 :MeOH (4 : l, 2 : l， 1 : 1)， CHC13 :MeOH:H20 (6 : 3 : l下层）为洗脱剂经硅胶柱色谱分离得到 80个流分， 经薄层分析将成分 一致部分合并。 其中 53〜54部分再次进行硅胶柱层析， 洗脱剂 CHC13 :MeOH:H20 (65 : 30 : 10)下 层， 等度洗脱， 得到 38个流分。 其中 2CT28合并以甲醇溶解进行 sephadexLH- 20柱层析， 甲 醇为洗脱剂，经薄层色谱检验将主含皂苷部分合并，采用 0DS柱不同比例甲醇水溶液（10%， 20%, 25%， 30%， 35%, 40%, 45%, 100%)梯度洗脱， 根据液相检测对其中的 37〜42流分分别采用制 备高效液相以 60%甲醇水溶液为流动相进行了分离制备， 得到化合物 II。
实施例 5 文冠果经溶剂提取法， 采用 70%的甲醇提取， 减压回收提取液至醇浓度低于 3%; 提取液 分别用石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 JH丁醇萃取， 回收溶剂， 收集得到石油醚萃取物、 氯仿萃 取物、 乙酸乙酯萃取物、 正丁醇萃取物； 正丁醇萃取物经非极性大孔树脂柱色谱处理， 依次 用水和醇梯度洗脱， 得到 60%醇洗脱流分； 正丁醇萃取物经硅胶柱色谱法分离， 以氯仿 /甲醇 梯度洗脱，得流分 8 (氯仿 /甲醇： 2: 1 );流分 8，经半制备型 HPLC色谱分离，以甲醇 /水（65%)， 为流动相洗脱， 得到化合物 II。
实施例 6
白色粉末 （甲醇）， 10%硫酸乙醇溶液显紫色， Liebermann-Burchard反应阳性， Molish反 应阳性， 示其为一三萜皂苷类化合物。 酸水解反应， 检测有葡萄糖和鼠李糖存在， 碱水解反 应， 检测有当归酸存在， 提示结构中有当归酰基片段。 HR-ESI-MS 给出准分子离子峰 mlz 1351.6893 [M+H]+(calcd. 1351.6893 for C65H107O29)， 结合其 NMR谱数据推测其分子式为
1H NMR谱给出 7个特征的三萜母核角甲基信号： δ 0.92 (3HS s) , 0.95 (3Η, s), 1.05 (3H, s)， 1.10 (3H, s), 1.25 (3H, s)， 1.26 (3H, s), 1.29 (3H, s)和 2个当归酰基上的特征质子信号 2.05 (3H, br. s), 2.13 (3H, dd, J=1.4, 7.0 Hz);五个糖的端基质子信号： (54.72 (1H, d, J= 8.5 Hz), 4.96 (1H d, J= 8.0 Hz), 5.04 (1H, d, J= 7.7 Hz), 5.13 (1H, d， J= 7.7 Hz), 6.54 (1H， s， rha-H-1), 提示该 化合物中存在四个葡萄糖片段和一个鼠李糖片段， 且由其偶合常数可知葡萄糖的苷键构型均 为 β 型。 将其核磁数据与化合物 3-O-/?-D-glucopyranosyl ( 1 -»6)- -D-glucopyranosyl, 28-O-yff-D-glucopyranosyl( 1→6)[a-L-rhamnopyranosyl (1→2)]- ?-D-glucopyranosyl
16-deoxybarringtogenol C禾口 3-O-[p-D-glucopyranosyl (1→6)] (3'-angeloyl)- β-D-glucopyranosyl, 28-0-[a-L-rhamnosyl (1→2)]- -D-glucopyranosyl 16- deoxybarringtogenol C的数据比较， 可推 测化合物的基本母核为： 16-deoxybarringtogenol C，其 C-3位和 C-28位分别连接糖链，且 C-28 位 糖 链 结 构 为 28-0- ?-D-glucopyranosyl(l→6)[ct-L-rhamnopyranosyl (\→2)]-β-Ό- glucopyranosyl, C-3位糖链结构为 3-O-yff-D-glucopyranosyl (l→6)-^-D-glucopyranosyl， 当归醜 基连接在糖片段上。
在 HMBC谱中可见 (5 4.72 (Η-Γ') 与母核上的 28位碳信号 74.8 (C-28)存在远程相关， 6.54 (Η-Γ") 与 C-2" '位碳信号 <5 80.5 (C-2'")存在远程相关； <5 5.04 (H-1 '"" ) 与 C-6'"位碳信号 3 70.7 (C-6'")存在远程相关； <5 4.96 (Η-Γ) 与母核上的 3位碳信号 89.7 (C-3)存在远程相关， 5.13 (H-1 ") 与 C-6'位碳信号 (5 70.7 (C-6')存在远程相关。故确定化合物结构中的糖链连接顺序 为： 3-O-[P-D-glucopyranosyl (1→6)]-p-D-glucopyranosyl, 28-O-[a-L-rhamnosyl (1→2)]-β-ϋ- glucopyranOSyl。 同时可见 <5 5.69 (Η-2') 与当归酰基的羰基碳信号 3 167.6相关， 提示当归酰基 连接在 C-2'位。 在化合物的 H'^-COSY谱中， 可见 (5 5.69 (11-2')与 4.96 (}1-1 ')相关， 验证了 当归酰基的连接位置。
综合化合物的 1D和 2D NMR数据， 可鉴定化合物的结构为： 3-O-[p-D-glucopyranosyl
(1→6)]- (2'-angeloyl)-P_D-glucopyranosyl, lS-Ο-β-Ό- glucopyranosyl( 1→6) [α-L-rhamnopyranosyl
(1→2)]-y9-D-glucopyranosyl- 16-deoxy barringtogenol C。 数据归属见下表
表 2 化合物 LN-WG-B的 NMR数据归属 （300MHz， pyridine-^)
No. Sc Sn No. Sn
1 39.7 ■6>-glu-l 】04.5 4.96 (1H, d, J=8.0Hz)
2 26.4 2 75.4
3 89.7 3.25(lH,dd,J=4.2, 1 1.4Hz) 3 76.6
4 29.2 4 72.6
5 56.1 5 77.6
6 19.0 6 70.7
7 33.2 ■O-glu-1 105.9 5.13 (1H, d, J=7.7Hz)
8 40.8 2 75.6 5.69 (lH,dd,J=8.0, 9.3 Hz)
9 48.4 3 78.9
10 37.3 4 72.2
11 24.4 5 78.9
12 124.7 5.38 (l H, br. s) 6 63.3 X
13 143. 28- ■O-glu-1 104.2 4.72 (1H, d, J=8.5Hz) 14 42.： 2 80.5
15 26.A 3 78.9
o
16 18.{ 4 72.3
17 43.i 5 77.2
18 42.( 6 70.7
19 47.( "-rha-1 101.4 6.54 (1H, s) 20 36.i A 2 73.0
21 77.4 3 73.0
22 75.t 4 75.6
23 28·ί 1.05 (3H, s) 5 69.8
24 n.A 0.92 (3H, s) 6 】9.4 1.84 (3H, d, J=6.1 Hz) 25 16.4 0.95 (3H, s) (9-glu-l 106.2 5.04 (1H, d, J=7.7Hz 26 17.2 1.10 (3H, s) 2 76.1
27 26i 1.26 (3H s) 3 79.0
28 74.Ϊ 4 72.2
29 30.S 1.25 (3H, s) 5 78.9
30 20.2 1.29 (3H, s) 6 63.3
2 -Ang
1 167.6
2 129.2
3 138.4 6.04 (IH,dq,J=I .I, 7.0 Hz)
4 16.6 2.13 (3H,dd,J=1.4, 7.0 Hz)
5 21.4 2.05 (3H, br. s) 实施例 7 采用 MTT法， 比较了实施例 2 和实施例 4中不同化合物对人黑色素瘤 （A375-S2) 和人宫颈癌细胞 (HeLa) 的细胞毒活性， 其对以上两种细胞株 5β值见表 6所示。 Λ 表 3化合物 I体外肿瘤抑制活性测试结果（ICso ng/ml)
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
A375-S2 4.3 24.5 31.0 46.7 63.3 >100 46.4 14.2 37.1 35.2 43.2
HeLa 20.1 20.3 >100 >100 >100 30.0 34.4 52.6 >100 >100 >100
Figure imgf000010_0001
33.0 34.2 48.7 〉100 >100 >100 >100

Claims

权利 要 求
1 具有下式 I的化合物
Figure imgf000011_0001
2 如权利要求 1所述化合物的制备方法 文冠果采用 70%的甲醇或乙醇提取， 减压回收提取液至醇浓度低于 3%; 提取液分别用石 油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取， 回收溶剂， 收集得到石油醚萃取物、 氯仿萃取物、 乙 酸乙酯萃取物、 IE丁醇萃取物； JH丁醇萃取物经非极性大孔树脂柱色谱处理， 依次用水和醇 梯度洗脱， 得到 60%醇洗脱流分； 正丁醇萃取物经硅胶柱色谱法分离， 以氯仿 /甲醇梯度洗脱， 得氯仿 /甲醇： 3: 1的流分经半制备型 HPLC色谱分离， 以 60%的甲醇 /水， 为流动相洗脱， 得 到化合物 I。
3 具有下式 II的化合物
Figure imgf000011_0002
II 4 如权利要求 3所述化合物的制备方法 文冠果经溶剂提取法， 采用 70%的甲醇提取， 减压回收提取液至醇浓度低于 3%; 提取液 分别用石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取， 回收溶剂， 收集得到石油醚萃取物、 氯仿萃 取物、 乙酸乙酯萃取物、 正丁醇萃取物； 正丁醇萃取物经非极性大孔树脂柱色谱处理， 依次 用水和醇梯度洗脱， 得到 60%醇洗脱流分； 正丁醇萃取物经硅胶柱色谱法分离， 以氯仿 /甲醇 梯度洗脱， 得氯仿 /甲醇： 2: 1的流分； 流分经半制备型 HPLC色谱分离， 以 65%甲醇 /水为流 动相洗脱， 得到化合物 II。
5 如权利要求 1或 3所述化合物在制备治疗抗肿瘤药物中的应用。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1349820A (zh) * 2001-10-31 2002-05-22 杨柏珍 文冠果果壳提取物在制备提高脑功能食品和药品中的应用
CN101123880A (zh) * 2004-09-07 2008-02-13 太平洋艾瑞有限公司 带有当归酰基的抗肿瘤化合物

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1349820A (zh) * 2001-10-31 2002-05-22 杨柏珍 文冠果果壳提取物在制备提高脑功能食品和药品中的应用
CN101123880A (zh) * 2004-09-07 2008-02-13 太平洋艾瑞有限公司 带有当归酰基的抗肿瘤化合物

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LI, WEI ET AL.: "Two new triterpenoid saponins from the carpophore of Xanthoceras sorbifolia Bunge", JOURNAL OF ASIAN NATURAL PRODUCTS RESEARCH, vol. 10, no. 3, 2008, pages 260 - 264 *

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