WO2012060734A1 - N-изовалероил-l-глутамил-l-триптофан как средство, препятствующее язвообразованию в желудке и двенадцатиперстной кишке - Google Patents

N-изовалероил-l-глутамил-l-триптофан как средство, препятствующее язвообразованию в желудке и двенадцатиперстной кишке Download PDF

Info

Publication number
WO2012060734A1
WO2012060734A1 PCT/RU2011/000720 RU2011000720W WO2012060734A1 WO 2012060734 A1 WO2012060734 A1 WO 2012060734A1 RU 2011000720 W RU2011000720 W RU 2011000720W WO 2012060734 A1 WO2012060734 A1 WO 2012060734A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
animals
tryptophan
glutamyl
isovaleroyl
drug
Prior art date
Application number
PCT/RU2011/000720
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Татьяна Анатольевна КУДРЯВЦЕВА
Сергей Викторович ПЕТЛЕНКО
Евгений Иосифович ГРИГОРЬЕВ
Original Assignee
Общество С Ограниченной Ответственностью "Цитонир"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Общество С Ограниченной Ответственностью "Цитонир" filed Critical Общество С Ограниченной Ответственностью "Цитонир"
Priority to EP20110838304 priority Critical patent/EP2601963B1/en
Publication of WO2012060734A1 publication Critical patent/WO2012060734A1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/05—Dipeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants

Definitions

  • the invention relates to organic chemistry, namely to peptide compounds.
  • the inventive substance can be used as a tool for the treatment and prevention of peptic ulcer of the stomach and duodenum.
  • Peptic ulcer of the stomach and duodenum - a chronic cyclically recurring recurring disease - is one of the most common diseases of the gastrointestinal tract.
  • the leading role in the pathogenesis of peptic ulcer belongs to the imbalance between the factors of aggression of the gastric juice and the protection of the mucous membrane of the stomach and duodenum.
  • the pharmacotherapy of the disease includes various groups of drugs, the action of which is aimed at the main links in the pathogenesis of ulcer formation: antacids, blockers of H 2 receptors and proton pump, antibiotics, anti-Helicobacter pylori, etc. [Vasiliev Yu.V.
  • Envelope (antacid) drugs in the treatment of certain diseases of the upper digestive tract // Gastroenterology - App. to Consilium Medicum. - 2004. - 5. - S. 244-248 .; Vasiliev Yu.V. Modern therapy for peptic ulcer associated with Helicobacter pilori // Difficult patient. - 2007. - Jfe 6-7. - S. 35-41 .; Vasiliev Yu.V. Peptic ulcer // Selected chapters of clinical gastroenterology / ed. L.B. Lazebnika. M: Anaharsis, 2005. - S. 82-112].
  • the basis of the invention is the synthesis of a new compound of the class of peptides, the use of which interferes with the processes of ulceration in the stomach
  • X H, Na, K, with a molecular weight of 417.5 - 456.5 as a means of preventing ulceration in the stomach and duodenum.
  • the inventive chemical compound was synthesized by us for the first time and has no structural analogues — N-protected peptides — known from the prior art.
  • the product is homogeneous according to thin-layer chromatography: Rf mobility: 0.67 (benzene-acetone 1: 1 system, Simfol plate, chlorine / benzidine manifestation).
  • the combined organic layer was washed successively with a 0.5 N solution of H2SO4 (3 x 50 ml), water (2 x 50 ml), cooled to 0 ° C, 2.5% ANSO3 solution (1 x 50 ml), water (2 x 50 ml ), 0.5 N H2SO4 solution (2 x 50 ml), water (2 x 50 ml) and saturated Na 2 S0 4 solution (2 x 50 ml).
  • the organic layer was dried over anhydrous Na 2 S04, the solvent was evaporated on a vacuum rotary evaporator at 40 ° C, and the residue was crystallized under hexane.
  • the resulting precipitate was filtered and dried in a vacuum oven over KOH and P 2 0 5 . Yield 1.1 g (80%).
  • the product is chromatographically homogeneous according to thin-layer chromatography: mobility Rf: 0.27 (1: 1 benzene-acetone system, Silufol plate, chlorine / benzidine manifestation).
  • the content of the basic substance was determined by high performance liquid chromatography (HPLC) on a Beckman chromatograph on a Supelco LC-18-DB column 4.6 x 250 mm.
  • Mobile phase A 0.1% TFA (trifluoroacetic acid); mobile phase B: MeCN (acetonitrile) / 0.1% TFA; gradient B 0 — ⁇ 20% in 30 min.
  • Flow rate 1 ml / min. Detection at 220 nm, scanning 190-600 nm, sample 20 ⁇ l.
  • the content of the main substance is 98.45%.
  • a study of acute toxicity was carried out on 60 white outbred male mice weighing 20-23 g. Animals were divided into 6 equal groups. The drug was administered to animals once intramuscularly in a volume of 0.1 ml at doses of 1 mg / kg, 5 mg / kg. 10 mg / kg, 20 mg / kg, in a sterile 0.9% NaCl solution. Animals of the control group were injected with the same volume of 0.9% NaCl solution.
  • red blood cells In animals, the number of red blood cells, hemoglobin, reticulocytes, platelets, leukocytes, leukocyte formula, erythrocyte sedimentation rate (ESR), and erythrocyte resistance were determined by the generally accepted methods in peripheral blood. Along with this, the content of total protein in blood serum was determined by the method of Lowry, potassium and sodium by plasma spectrophotometry.
  • ⁇ 20 g obtained from the Rappolovo nursery (Leningrad region).
  • the animals were quarantined for 14 days before the experiment.
  • the animals were kept in accordance with the rules adopted by the European Convention for the Protection of Vertebrate Animals used for experimental and other scientific purposes (Strasbourg, 1986).
  • the animals were placed in standard plastic cages and kept on a standard diet (granulated feed PK120-3 according to order ⁇ ° 1179 of the USSR Ministry of Health from 10.10.83) with free access to water.
  • mice were divided into experimental and control groups of 10 rats each.
  • the test drug or the reference drug was orally administered to the animals of the experimental groups, and to the animals of the control group, distilled water in the same volume:
  • Example 1 The effectiveness of the use of M-isovaleroyl-L-glutamyl-L-tryptophan for prophylactic course use on a model of water immersion stress.
  • the experimental animals were divided into 5 groups of 10 animals each. They received the following therapy:
  • Sucralfate is a preparation containing beta-O-fructofuranosyl-alpha-O-glucopyranosidzhzhakis (hydrosulfate) aluminum complex as an active substance. It is recommended for the treatment and short-term prophylaxis of gastropathies induced by non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) for 3-4 times a day. Like other preparations containing aluminum, it is not suitable for long-term use.
  • NSAIDs non-steroidal anti-inflammatory drugs
  • Misoprostol - methyl ether (11 alpha, 13EN + -) - 11,16-dihydroxy-16-methyl-9-oxoprost-13-ene-1-acid, is also approved for the prevention of gastropathy induced by NSAIDs.
  • test substance The test substance, reference preparations and distilled water were administered once daily for 7 days, as well as on the day of stress ulcerogenic exposure 1 hour before stress.
  • Rats starving for 18 hours were placed in special canisters and immersed vertically in water to the level of the xiphoid process. In this position, the animals were kept for 5 hours at a water temperature of 23 ° C. Then the animals were removed from the experiment.
  • PI average number of destruction in the group x% of animals with ulcers / 100 [Pauls F., Wick AM, Mac. Key EM et al. An assau method for anti ulcer substances // Gastroenterology.- 1947. Ch28.- P.774-782.].
  • the intensity of free radical oxidation processes was evaluated by the accumulation of malondialdehyde (MDA) in blood serum [Temirbulatov R.A., Seleznev E.I. Method for increasing the intensity of free radical oxidation of lipid-containing blood components and its diagnostic value // Labor. a business. - 1981. - Jfe 4. - S.209-211.].
  • MDA malondialdehyde
  • the state of the antioxidant system was judged by the activity of superoxide dismutase (SOD) [Chevari S, Chaba I., Skey Y. The role of superoxide dismutase in the oxidative processes of the cell and the method for determining it in biological materials // Labor. a business. -1985. - Jfe P. - S.678-681].
  • alkaline phosphatase alkaline phosphatase
  • the severity of stress changes in the internal organs of animals was evaluated by the change in the relative mass of the adrenal gland, thymus and spleen, which was calculated as the ratio of the mass of the organ to the mass of the animal times 100.
  • Prophylactic intragastric administration of the drug in both doses helped to reduce the number and area of stomach ulcers caused by stress.
  • the effect of K-isovaleroyl-G ⁇ glutamyl-L-tryptophan was dose-dependent, and this dependence was the opposite.
  • the decrease in the area of destruction had a more pronounced character, since the change in the average number of ulcers per animal in the group occurred mainly due to a decrease in the number of large destruction (Table 1). So, the preparation of AHT reduced the area of large destruction in 2.7 and 3.4 times, depending on the dose.
  • the prophylactic effect in a lower dose was more pronounced in terms of preventing the formation of the total number of destruction and reducing their area.
  • the prophylactic administration of ⁇ -isovaleroyl-L-glutamyl-L-tryptophan at a dose of 0.1 ⁇ g / kg contributed to a decrease, comparable with sucralfate, in the number of animals with ulcers in the group.
  • Calculation and comparison of ulceration and gastroprotective activity indices showed that the antiulcer activity of the HBT drug at a dose of 0.1 ⁇ g / kg was comparable to that of the drugs comparing sucralfate and misoprostol. So, in animals, receiving M-isovaleroyl-L-glutamyl-L-tryptophan, the lesion area was 2.1-2.6 times less than in animals in the control group.
  • GA gastroprotective activity calculated by the number of destruction.
  • GA 2 gastroprotective activity calculated by the area of lesions.
  • the data obtained indicate that the studied drug, ⁇ -isovaleroyl-b-glutamyl-b-tryptophan, has a prophylactic effect, increasing the resistance of the gastric mucosa to the damaging effect of stress. Increased resistance of the gastric mucosa was also manifested in the prevention of excessive intensification of lipid peroxidation (LPO) and the preservation of the activity of enzymes of the antioxidant system (AOS) in rat blood serum (Table 3). -isovaleroyl-b-glutamyl-b-tryptophan in the studied doses prevented a decrease in the activity of SOD and an increase in the production of MDA.
  • LPO lipid peroxidation
  • AOS antioxidant system
  • the obtained data indicate that the drug VGT had a stress-protective effect, which manifested itself in a decrease the degree of damage to the gastric mucosa, prevention of adrenal hypertrophy, excessive intensification of lipid peroxidation, impaired protective function of AOS and increased activity of enzymes markers of tissue damage.
  • Example 2 The effectiveness of the use of N-iuoeanepowi-L-znymaMUJi-L-tryptophan for prophylactic course use on a model of ulceration caused by oral administration of inodmetacin.
  • mice were divided into experimental and control groups, 10 rats each.
  • the test drug or the reference drug was orally administered to the animals of the experimental groups, and to the animals of the control group, distilled water in the same volume:
  • experimental group 1 animals treated with isovaleroyl-L-glutamyl-L-tryptophan at a dose of 0.1 ⁇ g / kg; - experimental group 2 - K-isovaleroyl-L-glutamyl-L-tryptophan at a dose of 10 ⁇ g / kg;
  • the animals were injected into the stomach as an ulcerogenic substance.
  • indomethacin at a dose of 20 mg / kg (2 ml / kg).
  • Indomethacin is a non-steroidal anti-inflammatory drug that has an ulcerogenic effect on the gastric mucosa.
  • the prophylactic administration of the HBT drug significantly impeded the formation of gastric ulcer caused by indomethacin (Table 6).
  • the area of destruction of the gastric mucosa in animals treated with the preparation of HBT decreased by 5 times.
  • GA 2 gastroprotective activity calculated by the area of lesions.
  • Example 3 The effectiveness of the therapeutic use of N-U3oeanepoun-L-glutamyl-b-tryptophan in the model of ulceration caused by indomethacin.
  • mice were divided into experimental and control groups of 10 rats each.
  • the test drug or the reference drug was orally administered to the animals of the experimental groups, and to the animals of the control group, distilled water in the same volume:
  • indomethacin An ulcerogenic dose of indomethacin equal to 30 mg / kg was administered intragastrically in a volume of 2 ml / kg. Treatment was started 24 hours after administration of indomethacin and continued for 5 days. Animals in the experimental groups received L-isovaleroyl-L-glutamyl-L-tryptophan or the comparison drug Sucralfate, and in the control group, distilled water.
  • GA gastroprotective activity calculated by the amount of destruction
  • AHT preparation 10.0 ⁇ g / kg 224 ⁇ 16 8.310 ⁇ 0.426 3.76 ⁇ 0.20 * 1.233 ⁇ 0.104 0.56 ⁇ 0.05
  • the drug isovaleg il-b-glutamyl-b-tryptophan has a therapeutic effect on the model of indomethacin ulcerogenesis.
  • the best therapeutic effect was observed at a dose of 0.1 ⁇ g / kg.
  • the data presented indicate that the claimed compound - N-isovaleg il-b-glutamyl-b-tryptophan - prevents ulceration on the mucous membranes of the stomach and can be used as a therapeutic and prophylactic antiulcer.
  • the claimed compound can be produced by pharmaceutical or chemical enterprises specializing in organic synthesis.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Indole Compounds (AREA)

Abstract

Изобретение относится к органической химии, а именно к пептидным соединениям. Заявлен модифицированный N-защищенный дипептид общей формулы (I) где X = H, Na, K, с молекулярной массой 417,5 - 456,5. Соединение препятствует язвообразованию на слизистых желудка и двенадцатиперстной кишки.

Description

^изовалероил-Ь-глута ил-Ь-триптофан как средство, препятствующее язвообразованию в желудке и двенадцатиперстной кишке Область техники
Изобретение относится к органической химии, а именно к пептидным соединениям. Заявляемое вещество может найти применение как средство для лечения и профилактики язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки.
Предшествующий уровень техники
Язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки - хроническое циклически протекающее рецидивирующее заболевание - является одним из самых распространенных заболеваний желудочно-кишечного тракта. По современным представлениям ведущая роль в патогенезе язвенной болезни принадлежит нарушению равновесия между факторами агрессии желудочного сока и защиты слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки. Вследствие полиэтиологичности язвенной болезни, фармакотерапия заболевания включает различные группы лекарственных средств, действие которых направлено на основные звенья патогенеза язвообразования: антациды, блокаторы Н2-рецепторов и протонной помпы, антибиотики, антихеликобактерные средства и др. [Васильев Ю.В. Обволакивающие (антацидные) лекарственные препараты в терапии некоторых заболеваний верхних отделов пищеварительного тракта // Гастроэнтерология - Прил. к Consilium Medicum. - 2004. - 5. - С. 244-248.; Васильев Ю.В. Современная терапия язвенной болезни, ассоциируемой с Helicobacter pilori // Трудный пациент. - 2007. - Jfe 6-7. - С. 35-41.; Васильев Ю.В. Язвенная болезнь // Избранные главы клинической гастроэнтерологии / под ред. Л.Б. Лазебника. М: Анахарсис, 2005. - С. 82-112].
В настоящее время известно около 450 противоязвенных препаратов с различным механизмом действия. Однако нет ни одного препарата, который бы не вызывал, особенно при длительном применении, нежелательных побочных реакций. В силу этого так важна профилактика язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки. Раскрытие изобретения
В основу изобретения положена задача синтеза нового соединения класса пептидов, использование которого препятствует процессам язвообразования в желудке
и двенадцатиперстной кишке, вызванным лекарственным или стрессорным воздействием или ассоциированным с заболеваниями других внутренних органов.
Указанная задача решается синтезом -изовалероил-Ь-глутамил-Ь- триптофана формулы
Figure imgf000004_0001
где X = Н, Na, К, с молекулярной массой 417,5 - 456,5 как средства, препятствующего язвообразованию в желудке и двенадцатиперстной кишке.
Заявляемое химическое соединение синтезировано нами впервые и не имеет структурных аналогов - N- защищенных пептидов, - известных из уровня техники.
Синтез -валероил-Ь-глутамил-Ь-триптофана (С21Н27 зОб) проводили в две стадии:
1. Получение Ν-оксисукцинимидного эфира изовалериановой кислоты.
3.0 мл (30 мМ) изовалериановой кислоты растворяли в 30 мл тетрагидрофурана, добавляли 4,0 г Ν-оксисукцинимида, полученный раствор охлаждали на ледяной бане. 7,2 г (35мМ) Ν,Ν' -дициклогексилкарбодиимида растворяли в 30 мл тетрагидрофурана и аналогично охлаждали. Полученные растворы объединяли и перемешивали при охлаждении льдом 3 часа и затем двое суток при комнатной температуре.
Выпавшую Ν,Ν'- дициклогексилмочевину отфильтровывали, растворитель упаривали на вакуумном роторном испарителе при 40°С, остаток растворяли в минимальном количестве этилацетата и кристаллизовали при добавлении гексана. Полученный осадок отфильтровывали и перекристаллизовывали из изопроп илового спирта. Продукт сушили в вакуумном шкафу над КОН и Р2О5. Выход 4,7 г (76 %).
Продукт гомогенен по данным тонкослойной хроматографии: подвижность Rf: 0,67 (система бензол-ацетон 1:1, пластинка Simfol, проявление хлор/бензидин).
2. Получение ^изовалероил-Ь-глутамил-Ь-триптофан
1,2 г (6 мМ) Ν-оксисукцинимидного эфира изовалериановой кислоты суспендировали в 30 мл смеси диоксан - вода (1:1), при сильном перемешивании порциями добавляли 1,0г (3 мМ) мононатриевой соли глутамил-триптофана. Перемешивание продолжали двое суток. рН реакционной смеси поддерживали в интервале 8,0 - 8,5 прибавлением 0,1 N раствора NaOH . По окончании реакции реакционную смесь подкисляли 0,5 N раствором H2S04 до рН= 3 и экстрагировали этилацетагом (3 х 50 мл). Объединенный органический слой последовательно промывали 0,5 N раствором H2SO4 (3 х 50 мл), водой (2 х 50 мл), охлажденным до 0°С 2,5% раствором аНСОз ( 1 х 50 мл), водой (2 х 50 мл), 0,5 N раствором H2SO4 (2 х 50 мл), водой (2 х 50 мл) и насыщенным раствором Na2S04 (2 х 50 мл). Органический слой сушили над безводным Na2S04, растворитель упаривали на вакуумном роторном испарителе при 40°С, остаток кристаллизовали под гексаном. Полученный осадок отфильтровывали и сушили в вакуумном шкафу над КОН и Р205. Выход 1,1 г (80%).
Продукт хромато графически гомогенен по данным тонколсойной хроматографии: подвижность Rf: 0,27 (система бензол-ацетон 1:1, пластинка Silufol, проявление хлор/ бензидин).
Содержание основного вещества определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на хроматографе "Beckman" на колонке Supelco LC- 18-DB 4,6 х 250 мм. Подвижная фаза А: 0,1% TFA (трифторуксусная кислота); подвижная фаза В: MeCN (ацетонитрил) / 0,1%TFA; градиент В 0 —►20% за 30 мин. Скорость потока 1 мл/мин. Детекция при 220 нм, сканирование 190-600 нм, проба 20 мкл. Содержание основного вещества 98,45%.
Для C21H27N3O6 вычислено в %: С (60,42), Н (6,52), N (10,07); найдено в %:
С (60,31), Н (6,63), N (9, 95); ПМР-спектр (протонный магнитный резонанс) снимали на спектрометре Bruker AM 300 MHz, в DMSO (диметилсульфоксид): 6.97 (СН3); 1,71(СН); 1,97(СН2); 3,00(СН); 4,92(СН2); 7,20, 7,08, 6,92, 6,82 (СН индол): 7,47 (NH индол); 7,84, 7,94 (NH амид); 10,63 (СООН). УФ-спектр (спектр поглощения в ультрафиолетовой области) снимали на спектрофотометре «Весктап»: Атах 280 нм, плечо 286 нм (0,004% р-р в 0,01 М NaOH).
3. Получение натриевой соли М-изовалероил-Ь-глутамил-Ь- триптофана.
600 мг Ы-изовалероил-Ь-глугамил-Ь-триптофана суспендировали в 50 мл дистиллированной воды и добавляли 0,01 N раствор NaOH до рН =7. Полученный раствор упаривали на вакуумном роторном испарителе, продукт кристаллизовали из минимума воды изопропиловым спиртом. Осадок отфильтровывали и сушили в вакуумном шкафу над КОН и Р205.
Калиевую соль получали аналогичным путем.
Было изучено общетоксическое действие заявляемого соединения.
Общетоксическое действие М-изовалероил-Ь-глугамил-Ь-триптофана исследовали в соответствии с требованиями «Руководства по экспериментальному доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (2000): острой токсичности при однократном введении препарата, а также подострой и хронической токсичности при длительном введении дипептида.
Исследование по изучению острой токсичности проведено на 60 белых беспородных мышах-самцах массой 20-23 г. Животные были разделены на 6 равных групп. Препарат вводили животным однократно внутримышечно в объеме 0,1 мл в дозах 1 мг/кг, 5 мг/кг. 10 мг/кг, 20 мг/кг, в стерильном 0,9% растворе NaCl. Животным контрольной группы в том же объеме вводили 0,9% раствор NaCl.
Исследования по изучению подострой токсичности проведено на 60 белых беспородных крысах-самцах массой 150-250 г. Ежедневно однократно животным подопытных групп вводили препарат внутримышечно в течение 90 дней в дозах 100 мкг/кг, 1 мг/кг, 10 мг/кг в 0,25 мл 0,9% раствора NaCl. Животным контрольной группы вводили в том же объеме 0,9% раствор NaCl. До введения препарата, на 30, 60 и 90 сутки после начала введения препарата у животных исследовали морфологический состав и свойства периферической крови. При завершении эксперимента исследовали биохимические и коагулологические показатели крови.
Исследования по изучению хронической токсичности проводили в течении 6 месяцев, исходя из длительности рекомендуемого клинического назначения препарата, на 100 морских свинках-самцах массой 300-350г. Животные подопытных групп получали ежедневно однократно внутримышечно дипептид в течение 6 мес. в дозах 100 мкг/кг, 1 мг/кг. 10 мг/кг в 0,5 мл 0,9% раствора NaCl. В контрольной группе животным вводили по аналогичной схеме 0,9% раствор NaCl в том же объеме.
У животных в периферической крови общепринятыми методами определяли количество эритроцитов, гемоглобина, ретикулоцитов, тромбоцитов, лейкоцитов, лейкоцитарную формулу, скорость оседания эритроцитов (СОЭ), резистентность эритроцитов. Наряду с этим определяли содержание в сыворотке крови общего белка по методу Лоури, калия и натрия методом плазменной спектрофотометрии. После завершения эксперимента проводили патоморфологическое исследование головного и спинного мозга, спинномозговых ганглиев, щитовидной железы, паращитовидных желез, надпочечников, семенников, гипофиза, сердца, легких, аорты, печени, почки, мочевого пузыря, поджелудочной железы, желудка, тонкой кишки, толстой кишки, тимуса, селезенки, лимфатических узлов, костного мозга.
При изучении острой токсичности установлено, что однократное введение дипептида животным в дозе, превышающей терапевтическую, рекомендованную для клинического применения, более чем в 100 раз, не вызывает токсических реакций, что свидетельствует о большой терапевтической широте препарата.
Отсутствие общетоксического действия К-изовалероил-Ь-глутамил-Ь- триптофана позволило рекомендовать его для проведения испытаний in vivo при экспериментальной язвенной патологии.
Было изучено фармакологическое действие заявляемого соединения в экспериментальных моделях язвообразования в желудке и двенадцатиперстной кишке. Следует отметить, что в патогенезе индуцированных приемом нестероидных противовоспалительных препаратов (НПВП) или стрессорным воздействием поражений желудочно-кишечного тракта большое место занимает нарушение трофики слизистых оболочек, снижение энергетического и пластического обеспечения тканей пищеварительного тракта в целом. Таким образом, ульцерогенному (язвообразующему) воздействию подвергается не только слизистая оболочка желудка, но и двенадцатиперстной кишки.
Были проведены три серии экспериментов:
- исследование профилактического противоязвенного действия N- изовалероил-Ь-глутамил-Ь-триптофана (BIT) на модели водоиммерсионного стресса;
исследование профилактического курсового введения ВГТ на формирование язв желудка, вызванных индометацином;
- исследование лечебного действия ВГТ на модели язв, вызванных индометацином.
Все исследования проводились на крысах-самцах линии Вистар массой 220
± 20 г, полученных из питомника Рапполово (Ленинградская область). В течение 14 дней до эксперимента животные находились на карантине. Содержание животных осуществляли в соответствии с правилами, принятыми Европейской Конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей (Страсбург, 1986). Животных размещали в стандартных пластиковых клетках и содержали на стандартном пищевом рационе (гранулированный корм ПК120-3 согласно приказу Ν° 1179 МЗ СССР от 10.10.83г.) при свободном доступе к воде.
В каждой серии экспериментов животных распределяли на опытные и контрольную группы по 10 крыс в каждой. Животным опытных групп перорально вводили исследуемый препарат или препарат сравнения, а животным контрольной группы - дистиллированную воду в том же объеме:
Пример 1. Эффективность применения М-изовалероил-Ь-глутамил-Ь- триптофана при профилактическом курсовом применении на модели водоиммерсионного стресса.
Подопытные животные были разбиты на 5 групп по 10 особей в каждой. Они получали следующую терапию:
- контрольная группа - дистиллированная вода per os;
- опытная группа 1 - животные, получавшие М-изовалероил-Ь-глутамил-Ь- триптофан в дозе 0,1 мкг/кг; - опытная группа 2 - животные, получавшие М-изовалероил-Ь-глутамил-Ь- триптофан в дозе 10 мкг/кг;
- опытная группа 3 - препарат сравнения сукральфат в дозе 200 мг/кг;
- опытная группа 4 - препарат сравнения мизопростол в дозе 50 мг/кг.
Сукральфат - препарат, содержащий в качестве действующего вещества бета-О-фруктофуранозил-альфа-О-глюкопиранозидчжгакис (гидросульфат) алюминия комплекс. Он рекомендован для лечения и кратковременной профилактики гастропатий, индуцированных нестероидными противовоспалительными препаратами (НПВГТ) для 3-4 кратного приема в сутки. Как и другие препараты, содержащие алюминий, для длительного приема он не пригоден.
Мизопростол - метиловый эфир (11 альфа, 13ЕН+-)-11,16-дигидрокси-16- метил-9-оксопрост- 13 -ен- 1 -овой кислоты, - также разрешен к применению для профилактики гастропатий, индуцированной НПВП.
Эксперимент проводили следующим образом:
Исследуемое вещество, препараты сравнения и дистиллированную воду вводили ежедневно однократно в течение 7 дней, а также в день стрессового ульцерогенного воздействия за 1 час до стресса.
За 18 часов до ульцерогенного воздействия животных лишали пищи, оставляя свободный доступ к воде.
Крыс, голодавших в течение 18 часов, помещали в специальные пеналы и погружали в воду вертикально до уровня мечевидного отростка. В таком положении животных выдерживали 5 часов при температуре воды 23°С. Затем животных выводили из опыта.
В ходе эксперимента осуществляли контроль над изменением массы тела животных. Подопытных животных умерщвляли методом декапитации. Кровь собирали в пробирки. Желудки извлекали, вскрывали по большой кривизне, промывали холодным физиологическим раствором и с помощью лупы при ярком освещении тщательно осматривали поверхность слизистой. Учитывали цвет слизистой оболочки, наличие гиперемии и ее интенсивность. Определяли число и площадь деструкций, которые дифференцировали на точечные (менее 1 мм), полосовидные и крупные (более 1 мм). Подсчитывали среднее количество деструкций на одно животное в группе, процент животных с язвами. Определяли индекс Паулса (ИП), как интегральный показатель количества деструкций, по формуле:
ИП = среднее количество деструкций в группе х % животных с язвами/100 [Pauls F., Wick A.M., Mac. Key E.M. et al. An assau method for anti ulcer substances // Gastroenterology.- 1947. Ч28.- P.774-782.]. Вычисляли индекс изъязвления: ИЯ = средняя площадь деструкций в группе х% животных с язвами/ 100, а также гастропротекторную активность: ГА) = ИП контрольной группы ИП опытной группы, ГА2 = ИЯ контрольной группы/ИЯ опытной группы. Изучаемый препарат считали активным, если ГА>2.
Интенсивность процессов свободнорадикального окисления оценивали по накоплению малонового диальдегида (МДА) в сыворотке крови [Темирбулатов Р.А., Селезнев Е.И. Метод повьшения интенсивности свободнорадикального окисления липидсодержащих компонентов крови и его диагностическое значение // Лабор. дело. - 1981. - Jfe 4. - С.209-211.]. О состоянии антиоксидантной системы судили по активности супероксиддисмутазы (СОД) [Чевари С, Чаба И., Секей Й. Роль супероксиддисмутазы в окислительных процессах клетки и метод определения ее в биологических материалах // Лабор. дело. -1985. - Jfe П. - С.678-681].
В сыворотке крови определяли активность аланинаминотрансферазы
(АлАТ) и щелочной фосфатазы (ЩФ) с помощью наборов фирмы «Витал Девелопмент корпорейшн».
Выраженность стрессорных изменений внутренних органов животных оценивали по изменению относительной массы надпочечников, тимуса и селезенки, которую вычисляли как отношение массы органа к массе животного, умноженное на 100.
Статистическую обработку производили, используя пакет статистических программ STATISTICA 6.
Известно [Селье Г. Очерки об адаптационном синдроме. М., «Медгиз», 1960, с.207], что в результате стрессорного воздействия у животных развивается комплекс изменений во внутренних органах, так называемая «триада Селье»: гипертрофия надпочечников, инволюция иммунокомпетентных органов, появление деструкций в слизистой оболочке желудка.
Эксперимент показал, что у животных, подвергнутых 5-часовому водоиммерсионному стрессу, происходило развитие выраженной гиперемии слизистой оболочки желудка, а также образование язв и эрозий. Кроме того, отмечались гипертрофия надпочечников и усиление ПОЛ (Табл. 1-4)
Таблица 1. Влияние курсового профилактического применения Н-шовалероил-Ь- глутамил-Ь-триптофана на формирование стрессорных язв (M±SEM)
Figure imgf000011_0001
* - достоверные изменения по сравнению с контрольной (стресс) группой, Р < 0,05.
Профилактическое внутрижелудочное введение препарата в обеих дозах способствовало уменьшению количества и площади язвенных поражений желудка, вызванных стрессом. Эффект К-изовалероил-Г^глутамил-Ь-триптофана зависел от дозы, причем эта зависимость носила обратный характер. Уменьшение площади деструкций имело более выраженный характер, так как изменение среднего количества язв на одно животное в группе происходило в основном за счет снижения количества крупных деструкций (Табл. 1). Так, препарат ВГТ уменьшал площадь крупных деструкций в 2,7 и 3,4 раза, в зависимости от дозы. Профилактический эффект в меньшей дозе был более выражен в отношении предотвращения образования общего количества деструкций и сокращения их площади. Кроме того, профилактическое введение -изовалероил-Ь-глутамил-Ь- триптофана в дозе 0,1 мкг/кг способствовало снижению, сопоставимому с сукральфатом, количества животных с язвами в группе. Расчет и сравнение индексов изъязвления и гастропротекторной активности показали, что противоязвенная активность препарата ВГТ в дозе 0,1 мкг/кг была сопоставима с таковой препаратов сравнения сукральфата и мизопростола. Так, у животных, получавших М-изовалероил-Ь-глутамил-Ь-триптофана, площадь поражений была в 2,1-2,6 раза меньше, чем у животных в группе контроля.
Таблица 2. Гастропротекторная активность (ГА) Т -изовалероил-Ь-глутамил-Ь- триптофана при водоиммерсионном стрессе (M±SEM)
Figure imgf000012_0001
* - достоверные изменения по сравнению с контрольной (стресс) группой, Р<0,05.
ГА] - гастропротекторная активность рассчитанная по количеству деструкций.
ГА2. гастропротекторная активность рассчитанная по площади поражений.
Таблица 3.
Активность супероксиддисмутазы и содержание малонового ангидрида в сыворотке крови крыс при водоиммерсионном стрессе (M±SEM)
Figure imgf000012_0002
# - достоверные изменения по сравнению с интактными животными, Р<0,05;
* - достоверные изменения по сравнению с контрольной группой, Р<0,05
Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что исследуемый препарат - -изовалероил-Ь-глутамил-Ь-триптофан проявляет профилактический эффект, повышая устойчивость слизистой оболочки желудка к повреждающему действию стресса. Повышение резистентности слизистой оболочки желудка проявлялось также в предупреждении чрезмерной интенсификации перекисного окисления липидов (ПОЛ) и сохранении активности ферментов антиоксидантной системы (АОС) в сыворотке крови крыс (Табл. 3). -изовалероил-Ь-глутамил-Ь-триптофан в исследуемых дозах предотвращал снижение активности СОД и увеличение продукции МДА.
Таблица 4.
Влияние N-uioecuiepowi-L-znymaM ил-Ь-триптофана на активность аланинаминотрансферазы и щелочной фосфатазы в сыворотке крови крыс, подвергнутых водоиммерсионному стрессу (M±SEM)
Figure imgf000013_0001
# - достоверные изменения по сравнению с интактными животными, Р<0,05;
* - достоверные изменения по сравнению с контрольной (стресс) группой, Р<0,05
Профилактическое использование препарата способствовало сохранению активности аланинаминотрансферазы (АлАТ) и щелочной фосфатазы (ЩФ) на уровне, близком таковому у интактных животных. При этом эффект препарата ВГТ в дозе 0,1 мкг/кг был более заметен. (Табл. 4).
Расчет относительной массы селезенки и тимуса показал, что при стрессе достоверных изменений этих показателей не отмечалось, в то время как относительная масса надпочечников достоверно увеличивалась на 18% (Табл. 5). -изовалероил-Ь-глутамил-Ь-триптофан в дозе 0,1 мкг/кг предотвращал развитие гипертрофии надпочечников, способствуя снижению их массы на 16-17%, по сравнению с таковыми у контрольных животных. Введение малой дозы препарата приводило к уменьшению относительной массы селезенки по отношению к показателям, отмечавшимся у интактных животных, на 24%.
Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что препарат ВГТ оказывал стресспротекторное действие, которое проявлялось в уменьшении степени поражения слизистой оболочки желудка, предотвращении гипертрофии надпочечников, чрезмерной интенсификации ПОЛ, нарушения защитной функции АОС и увеличения активности ферментов-маркеров повреждения тканей.
Таблица S.
Влияние курсового профилактического введения N-u3oe nepowi-L- глутам un-L- рип офана на массу органов крыс, подвергнутых стрессу
(mSEM)
Figure imgf000014_0001
# - достоверные изменения по сравнению с интактными животными, Р<0,05;
* - достоверные изменения по сравнению с контрольной группой, Р<0,05.
Пример 2. Эффективность применения N-iuoeanepowi-L-znymaMUJi-L- триптофана при профилактическом курсовом применении на модели язвообразован ия, вызванного пероральным введением инодметацина.
Пять групп животных по 10 особей в группе готовили к эксперименту как в Примере 1.
В каждой серии экспериментов животных распределяли на опытные и контрольную группы, по 10 крыс в каждой. Животным опытных групп перорально вводили исследуемый препарат или препарат сравнения, а животным контрольной группы - дистиллированную воду в том же объеме:
- контрольная группа - дистиллированная вода per os;
- опытная группа 1 - животные, получавшие -изовалероил-Ь-глутамил-Ь- триптофана в дозе 0,1 мкг/кг; - опытная группа 2 - К-изовалероил-Ь-глутамил-Ь-триптофан в дозе 10 мкг/кг;
- опытная группа 3 - препарат сравнения сукральфат в дозе 200мг/кг.
В качестве ульцерогенного вещества животным вводили в желудок
индометацин в дозе 20 мг/кг (2 мл/кг).
Индометацин является нестероидным противовоспалительным препаратом, который отличается ульцерогенным воздействием на слизистые оболочки желудка.
Эффективность профилактического применения заявляемого вещества оценивали через 24 часа после введения индометацина. Исследование проводили как в Примере 1.
Установлено, что введение индометацина в ульцерогенной дозе вызывало образование деструкций слизистой оболочки желудка, причем наибольшее их количество и площадь приходились на крупные и полосовидные повреждения. Возникновение язвенных дефектов слизистой оболочки желудка сопровождалось снижением активности СОД и увеличением содержания МДА, повышением активности АлАТ и ЩФ в сыворотке крови, изменением относительной массы органов (достоверным увеличением относительной массы печени и селезенки, выраженной тенденцией к увеличению этого показателя у надпочечников и тимуса) (Табл. 6-9).
Профилактическое введение препарата ВГТ в значительной степени препятствовало образованию язвенных поражений желудка, вызванных индометацином (Табл. 6). Площадь деструкций слизистой оболочки желудка у животных, получавших препарат ВГТ, снижалась в 5 раз.
Таблица 6.
Влияние курсового профилактического применения N-moeanepowi-L- глутамил-Ь-триптофана на формирование индометациновых язв (M±SEM) крупноточечные полосовидные
Группы
кол-во площадь ол-во площадь
Контроль
7,9±1,0 5,2±0,7 6,9±1,0 15,2±4,0
индометацин
Препарат
ВГТ 0,1 2,7±0,5* 1,4±0,3* 2,0±0,7* 1,9±0,7* мкг/кг
Препарат
ВГТ 10,0 3,5±0,9 1,7±0,6* 1,2±0,5* 1,8±1,1* мкг/кг
Сукральфат
2,4±0,*8 1,0±0,4* 1,2±0,4* 1,8±0,9*
200 мг/кг Группы мелкоточечные всего
кол-во площадь кол-во площадь
Контроль
индометацин 6,5±1,3 2,2±0,5 21,3±2,1 22,6±4,5
Препарат
BIT 0,1 2,8±0,7 0,8±0,2 7,5±1,0* 4,1±0,9* мкг/кг
Препарат
ВГТ 10,0 3,6±1,3 0,5±0,1 8,3±1,7* 4,1±1,6* мкг/кг
Сукральфат
200 мг/кг 1,8±0,6 0,5±0,2* 5,4±1,4* 3,3±1,2*
* - достоверные изменения по сравнению с контрольной группой, Р<0,05.
Расчет и сравнение интегральных показателей противоязвенной активности показали, что изовалероилглутамилтриптофан обладает выраженной гастропротекторной активностью (Табл. 7).
Табли а 7.
Гастропротеюпорная активность ^изовалероил-Ь- лутамил-Ь-триптофана при моделировании индометациновых язв желудка
Figure imgf000016_0001
* - достоверные изменения по сравнению с контрольной группой, Р<0,05.
ГА) - гастро протекторная активность рассчитанная по количеству деструкций.
ГА2 - гастропротекторная активность рассчитанная по площади поражений.
Наряду с этим, установлено, что введение индометацина в дозе 20 мг/кг сопровождалось выраженной индукцией процессов свободнорадикального окисления и параллельно развивающимися нарушениями антиоксидантного статуса организма (Табл. 8). Профилактическое введение исследуемого вещества способствовало снижению в сыворотке крови концентрации конечного продукта ПОЛ - МДА на 140%, а также повышению активности фермента эндогенной антиоксидантаой системы - СОД в 1,6 раза по сравнению с аналогичными показателями у животных контрольной группы.
Таблица 8. Влияние профилактического введения Т^- зовалероил-Ь-глутамил-Ь- триптофана на активность аланинаминотрансферазы и щелочной фосфатазы в сыворотке крови крыс при индометациновом язвообразовании
(M±SEM)
Figure imgf000017_0001
- достоверные изменения по сравнению с интактными животными, Р<0,05;
- достоверные изменения по сравнению с контрольной группой, Р<0,05
Таблица 9.
Влияние -изовалероил-Ь-глутамил-Ь-триптофана на активность аланинаминотрансферазы и щелочной фосфатазы в сыворотке крови крыс при индометациновом язвообразовании (M±SEM)
Figure imgf000017_0002
# - достоверные изменения по сравнению с интактными животными, Р<0,05;
* - достоверные изменения по сравнению с контрольной группой, Р<0,05. Введение ВГТ в обеих дозах препятствовало увеличению активности АлАТ в сыворотке крови, вызванному введением индометацина. На активность щелочной фосфатазы достоверного влияния исследуемый препарат не оказал (Табл. 9).
Кроме того, введение препарата ВГТ в изучаемых дозах способствовало сохранению относительной массы селезенки, надпочечников и тимуса на уровне, характерном для интактных животных (Табл. 10).
Таблица 10. Влияние курсового профилактического введения -изовалероил-Ь-глутамил-Ь- триптофана на массу органов крыс при индометациновом язвообразовании
W±SEM)
Figure imgf000018_0001
# - достоверные изменения по сравнению с интактными животными, Р<0,05;
* - достоверные изменения по сравнению с контрольной группой, Р<0,05. Представленные результаты показывают, что заявляемое вещество проявляет гастропротекторную активность на модели индометацинового повреждения при профилактическом курсовом применении.
Пример 3. Эффективность лечебного применения N-U3oeanepoun-L- глутамил-Ь-триптофана на модели язвообразования, вызванного индометацином.
5 групп животных по 10 особей в каждой готовили как в Примере 1.
В каждой серии экспериментов животных распределяли на опытные и контрольную группы по 10 крыс в каждой. Животным опытных групп перорально вводили исследуемый препарат или препарат сравнения, а животным контрольной группы - дистиллированную воду в том же объеме:
- контрольная группа - дистиллированная вода per os;
- опытная группа 1 - животные, получавшие изовалероилглутамилтриптофан в дозе
0,1 мкг/кг;
- опытная группа 2 - изовалероилглутамилтриптофан в дозе 10 мкг/кг ;
- опытная группа 3 - препарат сравнения сукральфат в дозе 200мг/кг.
Ульцерогенную дозу индометацина, равную 30 мг/кг, вводили внутрижелудочно в объеме 2 мл/кг. Лечение начинали через 24 часа после введения индометацина и продолжали в течение 5 дней. Животные в опытных группах получали Ы-изовалероил-Ь-глутамил-Ь-триптофан или препарат сравнения сукральфат, а в контрольной группе - дистиллированную воду.
Введение подопытным животным ульцерогенной дозы индометацина (30 мг/кг) через сутки вызывало образование язвенных поражений у 100% животных. На 5-е сутки количество и площадь поражений у животных контрольной группы (индометацин) не изменились (Табл. 11).
На 5-е сутки в контрольной группе выжило только 7 животных из 10; в группе, получавшей ВГТ, выжило 9 из 10.
Применение препарата с лечебной целью показало, что М-изовалероил-Ь- глутамил-Ь-триптофана, а также сукральфат вызывали уменьшение количества и площади поражений желудка. Терапевтический эффект у препарата ВГТ был сильнее в дозе 0,1 мкг/кг; также повышалась выживаемость животных (9 выживших из 10). При этом достоверно снижалось количество и площадь Таблица 11.
Влияние курсового применения -изовалероил-Ь-глутамил-Ь- риптофана на заживление индометациновых язв (MiSEM)
Figure imgf000020_0001
* - достоверные изменения по сравнению с контрольной группой, Р<0,05;
ГА[ - гастропротекторная активность рассчитанная по количеству деструкция;
ГА2. гастропротекторная активность рассчитанная по площади поражений. поражений, индекс Паулса бьш в 2 раза меньше чем, у животных контрольной группы, а гастропротекторная активность была равна 2 и 2,6. По своему лечебному действию, в отношении способности сокращать количество и площадь поражений, препарат ВГТ в дозе 0,1 мкг/кг достоверно не отличался от препарата сравнения сукральфат. Однако в группе, получавшей сукральфат, деструкции желудка наблюдали только у 85,7% животных, поэтому ИП и ГА в этой группе были несколько выше, чем у животных, получавших Ν-изовалероил- Ь-глутамил-Ь-триптофана.
Наблюдение за изменением массы тела животных (Табл. 12) показало, что при введении животным ульцерогенной дозы индометацина на 5 сутки происходило достоверное снижение данного показателя на 17,6% по сравнению с интактньгми животными. Небольшое снижение массы тела у интактных животных связано с 18-часовым голоданием. Применение ВГТ с лечебной целью не вызывало достоверных изменений этого показателя по сравнению с интактньгми животными. Таблица 12.
Влияние введения ^изовалероил-Ь-глутамил-Ь-триптофана на изменение массы тела животных при индометациновой интоксикации (M±SEM)
Figure imgf000021_0001
# - достоверные изменения по сравнению с интактными животными, Р<0,05.
Образование деструкций слизистой оболочки желудка сопровождалось повышением интенсивности ПОЛ. Индометацин в ульцерогенной дозе вызывал снижение активности СОД и повышение уровня МДА уже через 1 сутки, на 5-е сутки активность СОД повышалась, а уровень МДА был в 2 раза выше нормы (Табл. 13).
Таблица 13.
Влияние лечебного действия ^товалероил-Ь-глутамил-Ь-триптофана на активность супероксиддисмутазы и содержание малонового ангидрида в сыворотке крови крыс при индометациновой интоксикации ί^ΞΕΜ)
Figure imgf000021_0002
# - достоверные изменения по сравнению с интактными животными, Р<0,05,
* - достоверные изменения по сравнению с контрольной группой, Р<0,05.
Применение малой дозы препарата ВГТ снижало содержание МДА на
70% и увеличивало активность СОД. Индометациновая интоксикация приводила к снижению активности АлАТ и повышению ЩФ. Применение обеих доз М-изовалероил-Ь-глутамил-Ь- триптофана повышало сниженную активность АлАТ, однако не до уровня, характерного для интактных животных, а также снижало активность ЩФ. При этом наибольший эффект наблюдался при использовании меньшей дозы препарата ВГТ (Табл. 14).
Таблица 14.
Влияние курсового применения ^-товалероил-Ь- лутамил-Ь-триптофана на активность аланинаминотрансферазы и щелочной фосфатовы в сыворотке крови крыс с индометациновыми язвами (M±SEM)
Figure imgf000022_0001
# - достоверные изменения по сравнению с интактными животными, Р<0,05
* - достоверные изменения по сравнению с контрольной группой, Р<0,05.
Полученные результаты также свидетельствуют, что введение ульцерогенной дозы индометацина вызывало развитие гипертрофии надпочечников, а также инволюцию селезенки и тимуса. Инволюция тимуса имела ярко выраженный характер - масса органа снижалась почти в 2 раза (Табл. 15).
Таблица 15.
Влияние курсового лечебного введения -шовалероил-Ь-глутам ил-L- триптофана на массу органов крыс при индометациновом повреждении желудка (M±SEM)
печень селезенка
Группы Масса
животных относительная относительная масса, г масса, % масса, г масса, %
Интактные животные 248±5 7,468±0,221 2,96±0,104 1,206±0,072 0,48±0,03
Индометацин 5 сутки 229±7 7,509±0,656 3,25±0,21 1,080±0,084 0,47±0,03
Препарат ВГТ 0,1 мкг/кг 217±9 7,062±0,411 3,27±0,18 1,06Т±0,085 0,48±0,03
Препарат ВГТ 10,0мкг/кг 224±16 8,310±0,426 3,76±0,20* 1,233±0,104 0,56±0,05
Сукральфат 200 мг/кг 223±12 7,158±0,330 3,23±0,13 1,260±0,083 0,57±0,04 надпочечники тимус
Масса
Группы
животных относительная относительная масса, г масса, г
масса, % масса, %
Интактные животные 248±5 41,6±1,4 0,017±0,001 0,312±0,011 0,124±0,006
Индометацин 5 сутки 229±7 55,1±5,1# 0,024±0,002 0,151±0,013# 0,066±0,005#
Препарат BIT 0, 1 мкг/кг 217±9 41,8±5,1* 0,019±0,002 0,173±0,018# 0,081±0,007
Препарат ВГТ 10,0 мкг/кг 224±16 48,3±2,2 0,022±0,002 0,179±0,032# 0,078±0,008
Сукральфат 200 мг/кг 223±12 50, ,2 0,023±0,002 0,155±0,011# 0,070±0,005#
# - достоверные изменения по сравнению с интактными животными, Р<0,05
* - достоверные изменения по сравнению с контрольной группой, Р<0,05
Применение препарата ВГТ с лечебной целью на фоне индометациновой интоксикации приводило к снижению повышенной массы надпочечников. Из таблицы 15 видно, что изменения массы тимуса при применении препаратов не достоверны, однако можно отметить тенденцию к увеличению сниженной массы тимуса под влиянием -изовалероил-Ь-глутамил-Ь-триптофана.
Таким образом, исходя из полученных результатов, можно заключить, что препарат -изовалег ил-Ь-глутамил-Ь-триптофан проявляет лечебное действие на модели индометацинового ульцерогенеза. При этом наилучший терапевтический эффект наблюдался в дозе 0,1 мкг/кг.
Представленные данные свидетельствуют, что заявляемое соединение - N- изовалег ил-Ь-глутамил-Ь-триптофан, - препятствует процессам язвообразования на слизистых оболочках желудка и может использоваться как лечебное и профилактическое противоязвенное средство.
Промышленная применимость
Заявленное соединение может выпускаться фармацевтическими или химическими предприятиями, специализирующимися на органическом синтезе.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Н-изовалероил-Ь-глутамил-Ь-триптофан общей формулы
Figure imgf000024_0001
где X = Н, Na, К, с молекулярной массой 417,5 - 465,5 как средство, препятствующее язвообразованию в желудке и двенадцатиперстной кишке.
PCT/RU2011/000720 2010-10-21 2011-09-21 N-изовалероил-l-глутамил-l-триптофан как средство, препятствующее язвообразованию в желудке и двенадцатиперстной кишке WO2012060734A1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP20110838304 EP2601963B1 (en) 2010-10-21 2011-09-21 N-isovaleroyl-l-glutamyl-l-tryptophan as an agent inhibiting the formation of ulcers in the stomach and the duodenum

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2010143328/15A RU2436587C1 (ru) 2010-10-21 2010-10-21 N-изовалероил-l-глутамил-l-триптофан как средство, препятствующее язвообразованию в желудке и двенадцатиперстной кишке
RU2010143328 2010-10-21

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2012060734A1 true WO2012060734A1 (ru) 2012-05-10

Family

ID=45404260

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2011/000720 WO2012060734A1 (ru) 2010-10-21 2011-09-21 N-изовалероил-l-глутамил-l-триптофан как средство, препятствующее язвообразованию в желудке и двенадцатиперстной кишке

Country Status (3)

Country Link
EP (1) EP2601963B1 (ru)
RU (1) RU2436587C1 (ru)
WO (1) WO2012060734A1 (ru)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2279882C1 (ru) * 2005-02-24 2006-07-20 Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "БАШКИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ Федерального Агентства по здравоохранению и социальному развитию" (ГОУ ВПО БГМУ РОСЗДРАВА) Способ эндоскопического лечения гастродуоденальных язв препаратом деринат

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5728680A (en) * 1987-12-30 1998-03-17 Cytoven J.V. Methods for normalizing numbers of lymphocytes
UA69730A (en) * 2003-11-26 2004-09-15 Ihor Volodymyrovych Yoffe Method for correcting disorders of timmune status in patients with multiple peptic ulcers of stomach and duodenum in complex of surgical treatment
KR20090119897A (ko) * 2007-02-13 2009-11-20 사이클론 파아머슈티컬 인코오퍼레이티드 점막의 질환으로 인한 조직 악화, 상처 또는 손상을 치료 또는 예방하는 방법

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2279882C1 (ru) * 2005-02-24 2006-07-20 Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "БАШКИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ Федерального Агентства по здравоохранению и социальному развитию" (ГОУ ВПО БГМУ РОСЗДРАВА) Способ эндоскопического лечения гастродуоденальных язв препаратом деринат

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
FALALYEYEVA T.M. ET AL.: "Effect of glyprolines on homeostasis of gastric mucosa in rats with stress ulcers", BULL EXP BIOL MED, vol. 149, no. I, July 2010 (2010-07-01), pages 26 - 8, XP055070525 *
KUNIMI HARUYO ET AL.: "Effects of CL-1700 on duodenal ulcer formation in the rat", JAPAN J. PHARMACOL, vol. 32, no. 1, 1982, pages 167 - 70, XP003031458 *
MIKIO ITO ET AL.: "Preventive Actions of N-(3-Aminopropionyl)-L-Histidinato Zinc (Z-103) through Increases in the Activities of Oxygen-Derived Free Radical Scavenging Enzymes in the Gastric Mucosa on Ethanol-Induced Gastric Mucosal Damage in Rats", JAPAN J. PHARMACOL, vol. 59, 1992, pages 267 - 274, XP000571038 *

Also Published As

Publication number Publication date
RU2436587C1 (ru) 2011-12-20
EP2601963B1 (en) 2015-04-22
EP2601963A4 (en) 2013-07-10
EP2601963A1 (en) 2013-06-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Wang et al. Distribution of microcystins in various organs (heart, liver, intestine, gonad, brain, kidney and lung) of Wistar rat via intravenous injection
ES2337964T3 (es) Derivados de peptidos o sus sales farmaceuticamente aceptables, su metodo de produccion, uso de dichos derivados y composicion farmaceutica.
JPWO2008066070A1 (ja) ジペプチジルペプチダーゼｉｖ阻害剤
Wilhelm et al. Hepatoprotective effect of 3-alkynyl selenophene on acute liver injury induced by D-galactosamine and lipopolysaccharide
CN107686506B (zh) 华法林-4-o-乙酰-gprp,其合成,活性和应用
JPH01206992A (ja) 塩基性蛋白、その誘導体およびフラグメント、ならびにそれらの用途
Nicolau et al. Epiisopiloturine hydrochloride, an imidazole alkaloid isolated from Pilocarpus microphyllus leaves, protects against naproxen-induced gastrointestinal damage in rats
BRPI0620530A2 (pt) sais e misturas de 9-oxioacridona-10-ácido acético e 1-alquilamina-1-deoxipolióis, composições farmacêuticas e métodos para tratamento
Wang et al. Recent evidence for toxic effects of NH3 exposure on lung injury: Protective effects of L-selenomethionine
Wang et al. Puerarin Ameliorates 5-Fluorouracil–Induced Intestinal Mucositis in Mice by Inhibiting JAKs
KR0145412B1 (ko) 항염증성 조성물, 항알레르기성 조성물 또는 이들 혼합 성질의 조성물
CN104673865A (zh) 具有降尿酸作用的秋刀鱼美拉德肽及其制备方法和用途
RU2436587C1 (ru) N-изовалероил-l-глутамил-l-триптофан как средство, препятствующее язвообразованию в желудке и двенадцатиперстной кишке
Siddiqi et al. Effect of different doses of Sodium Fluoride on various hydroxyproline fractions in rat serum
EP0674653B1 (en) Therapeutic compounds suitable for the treatment of diseases connected with glutathione deficiency, process for their preparation, and pharmaceutical compositions containing same
Santos et al. Dipeptide derivatives of AZT: synthesis, chemical stability, activation in human plasma, hPEPT1 affinity, and antiviral activity
RU2485970C1 (ru) Композиция и применение композиции для получения средства, обладающего гепатопротективной активностью
US8158168B2 (en) Anti-gastritis and anti-ulcer agent containing Momordicae semen extract and momordica saponin I isolated from the same
KR20110014401A (ko) 복분자 추출물을 함유하는 비스테로이드성 항염증제에 의해 유발된 위염 및 위궤양 예방 및 치료용 조성물
RU2445965C2 (ru) Пероральная фармацевтическая композиция для лечения воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта
RU2165758C1 (ru) Способ лечения язвенного колита
CN101054352B (zh) 磺酸类的新锶盐,它们的制备方法和包含它们的药物组合物
RU2687561C1 (ru) Средство для лечения язвенной болезни желудка
US20080274982A1 (en) Peptide Substance Restoring Respiratory Organs Function
RU2694061C1 (ru) Средство, обладающее антиагрегантной, цитопротекторной и антиоксидантной активностью

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 11838304

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2011838304

Country of ref document: EP

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE