RU2445965C2 - Пероральная фармацевтическая композиция для лечения воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к медицине и касается пероральной фармацевтической композиции для лечения воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта, включающей альгинат натрия, функциональную добавку и воду. В качестве функциональной добавки композиция содержит дипептид глутамил-триптофан в форме мононатриевой соли. Изобретение обеспечивает повышение эффективности композиции при лечении воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта. 6 пр., 11 табл.

Description

Заявляемое изобретение относится к медицине, в частности к лекарственным препаратам на основе пептидов для перорального применения, а именно к фармацевтическим композициям, содержащим средство для лечения воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта. Оно может найти широкое применение в гастроэнтерологии.

Нарушение механизмов физиологической регуляции системы пищеварения приводит, как правило, к формированию полиморбидности, т.е. вовлечению в патологический процесс различных органов пищеварения и развитию нескольких заболеваний желудочно-кишечного тракта, объединенных общим патологическим процессом. Фармакотерапия заболеваний органов пищеварительной системы имеет свои особенности и конкретные показания, в зависимости от поражения того или иного органа (желудка, печени, поджелудочной железы и т.д.) и симптоматики заболевания. Вместе с тем развитие полиморбидности, наиболее характерной для пожилого возраста, требует особого подхода к фармакотерапии, заключающегося в применении лекарственных препаратов, влияющих на единый патогенетический механизм гастроэнтерологических заболеваний. Это связано также с нарастанием инволюционных процессов в слизистой оболочке различных отделов желудочно-кишечного тракта, изменением темпов регенерации и снижением активности пищеварительных ферментов при старении организма [Валенкевич Л.Н., Уголев A.M. Пищеварительная система // Биология старения. Руководство по физиологии. - Л.: Наука, 1982. - С.343-369; Лазебник Л.Б., Дроздов В.Н. Заболевания органов пищеварения у пожилых. - М.: Анахарсис, 2003. - 208 с.].

Известен синтетический пептидный иммуномодулятор «Гепон» (Thr-Glu-Lys-Arg-Arg-Glu-Thr-Val-Glu-Arg-Glu-Lys-Glu), используемый для перорального применения в комплексной терапии у больных пожилого возраста с язвенной болезнью желудка не ассоциированной с Heliobacter pylori [Лазебник Л.Б. и др. Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология, 2003, №3, с.17-20]. Применение «Гепона» в комплексной терапии способствовало ускорению процессов регенерации, сокращению сроков рубцевания язвенного дефекта и улучшению показателей клеточного иммунитета. Однако изолированное применение «Гепона» не приводило к рубцеванию язвенного дефекта.

Также известен синтетический пептидный иммуномодулятор ликопид (N-ацетилглюкозаминил-1-4-N-ацетилмурамид-L-аланил-D-изоглутамин), применяемый перорально в комплексной терапии хронической язвенной болезни двенадцатиперстной кишки, ассоциированной с Heliobacter pylori, в сочетании с хроническим гастритом [RU №2252777, 2003; Способ лечения хелиобактерассоциированной хронической дуоденальной язвы]. Комплексная терапия, включающая ликопид, показала высокую эффективность в эрадикации Heliobacter pylori и в восстановлении структурно-функциональных показателей слизистой оболочки желудка. Однако индивидуальное влияние ликопида на патогенез заболевания не выявлено.

Известно вещество, обладающее защитным действием при поражениях желудка различной этиологии, - альгинат натрия. При пероральном введении альгината натрия в дозе 100 мг/кг крысам-самцам Вистар за час до ульцерогенного воздействия снижались число и размеры деструктивных участков слизистой желудка и нормализовался энергобаланс в ткани желудка [Хасина Э.И., Кривоногова А.С. Аграрный вестник Урала, 2009, №11(65), с.92-94]. Альгинат натрия представляет собой натриевую соль альгиновой кислоты - смеси полиуроновых кислот, составленных из остатков D-маннуроновой и L-гулуроновой кислот, то есть относится к классу полисахаридов [Сливкин А.И. Вестник ВГУ, сер. Химия, биология, 2000, с.30-46]. Альгинат натрия в виде водного раствора в желудке образует пленку, защищающую слизистую оболочку желудка.

Наиболее близкой по совокупности существенных признаков к заявляемой композиции является композиция, представляющая собой водный раствор 8-14% мас./об. альгината натрия и, в качестве функциональной добавки, до 5% мас./об. бикарбоната калия, до 5% мас./об. карбоната кальция и до 1% мас./об. карбомера, нейтрализованного гидроксидом натрия [RU №2173139, М. кл. A61K 9/22, 2001]. Указанная композиция (лекарственный препарат «Гевискон») предназначена для лечения рефлюкс-эзофагита, гастрита, диспепсии или язвенной болезни. В RU №2173139 указывается, что при взаимодействии фармацевтической композиции с содержимым желудка образуется карбонизированная (насыщенная углекислым газом) желатинозная пена или пленки, которые плавают на содержимом желудка. Это, безусловно, эффективно при лечении рефлюкс-эзофагита и связанных с ним неприятных ощущений, однако, как и в случае применения других препаратов, повышающих pH желудочного сока, мало влияет на течение воспалительных и репаративных процессов в органах желудочно-кишечного тракта.

Результат, на достижение которого направлено заявляемое изобретение, заключается в повышении эффективности пероральной фармацевтической композиции.

Указанный результат достигается тем, что пероральная фармацевтическая композиция, включающая воду, альгинат натрия и функциональную добавку, в качестве функциональной добавки содержит дипептид глутамил-триптофан (Glu-Trp) в форме мононатриевой соли при следующем соотношении компонентов в расчете на одну дозу 10 мл (в мг)

глутамил-триптофан	0,01-0,50
альгинат натрия	50-500
вода	остальное

Мононатриевая соль глутамил-триптофана выпускается по ФСП Р№002382/01-050209 под наименованием «Тимоген-натрий».

Известно использование тимогена в инъекциях при лечении острого панкреатита, послеоперационного перитонита, а также желчно-каменной болезни, осложненной острым холециститом [Под ред. B.C.Смирнова. Клиническая фармакология тимогена. - С.-Петербург, 2004. - С.81-87]. Эффективность применения тимогена в этой лекарственной форме для данных заболеваний заключалась в системном действии препарата на иммунитет. Не было установлено влияние тимогена на хроническое течение патологического процесса. Эффективность тимогена при заболеваниях органов желудочно-кишечного тракта при пероральном применении не исследовалась.

Пероральное применение тимогена как компонента лекарственного противовирусного средства «Цитовир» было эффективным при гриппе и ОРВИ [RU №2165254, 2001 БИ №11]. Выявить влияние тимогена в этой композиции на состояние органов желудочно-кишечного тракта невозможно, особенно на фоне избытка аскорбиновой кислоты, присутствующей в «Цитовире». Кроме того, исследования физиологической роли коротких пептидов в питании показали, что устойчивость пептидов к действию ферментов желудка и тонкого кишечника очень низка [Тутельян В.А. и др. Бюл. эксперим. биологии и медицины, 2003, т.135, №1, с.4-10]. В силу сказанного выше неожиданными оказались и эффективность перорального использования тимогена при заболеваниях органов желудочно-кишечного тракта, и устойчивость заявляемой композиции к действию ферментов.

Заявляемая композиция получена растворением компонентов в воде с последующей стерилизацией образовавшегося геля.

Композиция была исследована на моделях язвообразования, токсического гепатита и токсического панкреатита, а также в клинической практике при лечении лиц пожилого возраста.

Пример 1. Гастропротекторная активность заявляемой фармацевтической композиции при лечебном применении на модели язвообразования.

Экспериментальное исследование выполнено на 50 аутбредных крысах-самцах линии Sprague-Dawley с массой тела 180-200 г. До экспериментов животных подвергали 14-дневному карантину и рандомизации. Животных содержали в условиях вивария на стандартном рационе.

Животных распределяли в следующие группы:

- крысы, получавшие ульцероген (индометацин) и физиологический раствор (2 мл/кг) - контрольная группа животных;

- крысы, получавшие внутрижелудочно ульцероген и препарат сравнения (сукральфат в дозе 200.0 мг/кг);

- крысы, получавшие внутрижелудочно ульцероген и фармацевтическую композицию (10.0 мкг/кг);

- крысы, получавшие внутрижелудочно ульцероген и фармацевтическую композицию (0.1 мкг/кг).

За 24 ч до применения ульцерогена животных лишали пищи при свободном доступе к воде, так как голодание вследствие активации анаэробного гликолиза способствует снижению уровня факторов защиты в слизистой желудка. Ульцерогенную дозу индометацина, равную 10 мг/кг, вводили в течение трех последовательных дней внутримышечно на стерильном апирогенном физиологическом растворе. Фармацевтическую композицию и препарат сравнения в указанных выше дозах вводили внутрижелудочно в течение 7 дней от момента моделирования индометациновой язвы желудка (лечебная схема). Животные контрольной группы получали эквиобъемные количества растворителя в соответствующих режимах.

В динамике определяли массу тела животных. Через 24 ч после окончания лечения животных подвергали эвтаназии мгновенной декапитацией с забором крови, желудки извлекали, вскрывали по малой кривизне, промывали холодным физиологическим раствором и макроскопически, с помощью бинокуляра, при ярком вертикальном освещении определяли число деструкции, которые дифференцировали по площади их поверхности на: мелкие (точечные, менее 1 мм), средние (округлые и полосовидные, от 1 мм) и крупные (более 1-2 мм). Наличие крови на дне деструкции выявляли в пероксидазной реакции с субстратом ортодианизидина с подкраской слизистой метиленовым синим; при этом гемсодержащая поверхность окрашивалась в коричнево-черный цвет на синеватом фоне интактной слизистой.

Учитывали распределение животных в группе с дефектами слизистой оболочки по степени выраженности макроскопических изменений, проводили расчет индекса Паулса (ИП) по формуле: среднее количество язв × % животных с язвами / 100% и гастропротекторную активность (ГА): отношение ИП в контрольной группе к ИП в опытной группе. Изучаемый препарат считали активным, если ГА составляла 2 и более единиц.

Статистическую обработку данных проводили с помощью стандартного пакета программ «Microsoft Excel». Существенность изменений вычисляли с применением t-критерия Стьюдента.

Установлено, что моделирование язвы желудка путем введения индометацина в ульцерогенной дозе сопровождается развитием значимых патологических изменений у крыс через 3 суток от момента затравки. На 7 сутки животные теряли в весе до 30% от фоновых значений, что было связано как с потерей крови в результате желудочных кровотечений, так и с активизацией катаболизма. У всех животных из контрольной группы отмечали выраженную гиперемию и появление деструкции в слизистой оболочке желудка: значительное количество поверхностных и глубоких эрозий и отек околоэрозивной поверхности; на дне большинства деструкции выявлено наличие гем-положительного материала (кровь: окси- и метгемоглобин, вследствие кровоизлияния обнаженных подслизистых капилляров и окисления гемоглобина соляной кислотой желудочного сока). Динамика снижения массы тела отражена в таблице 1.

Значимое снижение массы тела отмечали в следующих случаях: в контроле и при введении фармацевтической композиции в дозе 10.0 мкг/кг - у 100% животных в группах. При применении фармацевтической композиции в дозе 0.1 мкг/кг наблюдалось увеличение массы тела крыс по сравнению с показателем в контрольной группе.

На фоне введения препарата сравнения сукральфата происходило существенное снижение как числа, так и площади язвенных дефектов. Гиперемия слизистой была отмечена у 40% животных.

Таблица 1
Влияние фармацевтической композиции на динамику массы тела (M±m, г) животных на модели индометациновой язвы желудка (n=10 в каждой группе)
Группа, доза, мкг/кг	Срок наблюдения
	Фон	3 дня	7 дней
Интактные	196±4	195±3	200±5
Контроль	195±2	180±3*	136±5*
Сукральфат, 200 мг/кг	198±3	186±4	169±3*
Фармацевтическая композиция, 10.0 мкг/кг	195±4	183±3	155±4*
Фармацевтическая композиция, 0.1 мкг/кг	200±5	191±6	177±3**
* - Р<0.05 по сравнению с фоновыми значениями; ** - P<0.05 по сравнению с контролем.

Результаты оценки влияния фармацевтической композиции на количество деструкции в слизистой оболочке желудка животных представлены в таблице 2.

Таблица 2
Влияние фармацевтической композиции на процесс язвообразования у животных на модели индометациновой язвы желудка (n=10 в каждой группе)
Группа, доза, мкг/кг	Животные с язвами, %	Количество язв (X±m)			Среднее (X±m)	ИП	ГА
		Крупные	Средние	Мелкие
Интактные	0	-	-	-	-	-	-
Контроль	100	11±2	7±1	16±3	35±3	34.7	-
Сукральфат, 200 мг/кг	100	5±2*	4±1	8±2*	17±4*	16.9*	2.05
Фармацевтическая композиция, 10.0 мкг/кг	100	4±1*	7±2	11±3	21±3*	21.7*	1.60
Фармацевтическая композиция, 0.1 мкг/кг	60*	3±1*	5±2	9±1*	17±2*	10.2*/**	3.40**
* - P<0.05 по сравнению с контролем; ** - P<0.05 по сравнению с препаратом сравнения.

Введение фармацевтической композиции в различных дозах внутрижелудочно препятствовало образованию язв желудка. Этот эффект в большей мере был выражен на фоне введения дозы 0.1 мкг/кг по общему числу язв желудка. В дозе 10.0 мкг/кг фармацевтическая композиция вызывала достоверное уменьшение числа крупных деструкций и не оказывала влияния на число средних и мелких язв.

Пример 2. Оценка гепатопротекторной активности заявляемой фармацевтической композиции при лечебном применении в экспериментальной модели токсического гепатита.

Опыты поставлены на 40 аутбредных крысах-самцах линии Sprague-Dawley массой 200-210 г. В каждой опытной группе было по 10 животных. Исследуемые препараты вводили крысам внутрижелудочно в виде водного раствора с помощью атравматического металлического зонда. Контрольным животным вводили воду очищенную.

Препаратом сравнения при изучении гепатопротекторной активности служил «Силибинин», капсулы, производства «Роза Фитофарм» (Болгария).

Гепатит моделировали у крыс-самцов линии Sprague-Dawley с массой тела 200-210 г путем внутрижелудочного введения тетрахлорметана (ТХМ) в течение 14 дней. ТХМ в 50% растворе на оливковом масле вводили в желудок в дозе 1.5 мл/кг. Лечение начинали с 15-го дня отравления. Введение фармацевтической композиции проводили ежедневно однократно в дозах 0.1 и 10 мкг/кг внутрижелудочно. Контрольные животные получали токсикант и эквиобъемное с гепатопротекторами количество воды очищенной. Гепатопротекторную активность оценивали через 7 и 14 дней после начала терапии.

В сыворотке крови определяли активность аспартатаминотрансферазы (ACT), аланинаминотрансферазы (АЛТ), щелочной фосфатазы, уровень холестерина, триглицеридов.

Патоморфологическое исследование включало в себя некропсию, макроскопическое исследование, взвешивание и гистологическое исследование внутренних органов. Некропсия выполнялась под непосредственным наблюдением патоморфолога. После эвтаназии было проведено исследование макро- и микроскопических особенностей строения печени. Для гистологического изучения кусочки печени замораживали на столике микротома жидкой углекислотой, а также фиксировали в 10% растворе формалина, срезы окрашивали Суданом IV и ядра гепатоцитов докрашивали гематоксилином.

Статистическую обработку проводили с помощью пакетов программ ((Microsoft Excel». Отличия между выборками оценивали с помощью t-критерия Стьюдента.

Установлено, что при введении заявляемой фармацевтической композиции в дозах 0.1 и 10 мкг/кг летальных эффектов не отмечалось. Состояние и поведение животных носили нормальный характер. В группе животных, получавших препарат силибинин, гибели также не отмечали. В контроле погибло 3 крысы из 10. Данные отражены в таблице 3.

Таблица 3
Влияние фармацевтической композиции на выживаемость крыс с токсическим гепатитом на 14 сутки
Экспериментальные группы/дозы	Погибло крыс абс. (%)
ТХМ (контроль)	3/10-(30)
ТХМ + Силибинин (100 мг/кг)	0/10*
ТХМ + Фармацевтическая композиция (0.1 мкг/кг)	0/10*
ТХМ + Фармацевтическая композиция (10 мкг/кг)	0/10*
* - P<0.05 по сравнению с контролем.

Активность печеночных аминотрансфераз в крови как маркер синдрома цитолиза при патологии печени токсического генеза существенно менялась у крыс опытных групп на 7 и 14 сутки терапии. Достоверное отличие в действии фармацевтической композиции отмечали при введении доз 0.1 и, в особенности, 10 мкг/кг. По этому показателю фармацевтическая композиция превосходила действие силибинина на 14 день терапии. Данные представлены в таблице 4.

Нормализация активности щелочной фосфатазы и уровней холестерина и триглицеридов происходила на фоне введения фармацевтической композиции в дозах 0.1 и 10 мкг/кг. В дозе 10 мкг/кг фармацевтическая композиция существенно влияла на изученные показатели. По своей активности фармацевтическая композиция не уступала препарату силибинин в дозе 100 мг/кг. Данные отражены в таблице 4 и 5.

Таблица 4
Влияние фармацевтической композиции на активность аминотрансфераз и щелочной фосфатазы в крови при токсическом гепатите
Экспериментальные группы/доза, мкг/кг	Изучаемые показатели
	АлАТ, ммоль/ч×л	АсАТ, ммоль/ч×л	ЩФ, нмоль/с×л
7 сутки терапии
Контроль	2.47±0.14	2.10±0.11	786±45
Силибинин (100 мг/кг)	1.56±0.12*	1.28±0.15*	469±30*
Фармацевтическая композиция (0.1 мкг/кг)	1.73±0.16*	1.31±0.14*	455±29*
Фармацевтическая композиция (10 мкг/кг)	1.44±0.15*	1.24±0.17*	477±23*
14 сутки терапии
Контроль	2.20±0.19	1.84±0.16	604±31
Силибинин (100 мг/кг)	0.99±0.16*	0.75±0.11*	288±17*
Фармацевтическая композиция (0.1 мкг/кг)	1.01±0.18*	0.72±0.12*	335±22*
Фармацевтическая композиция (10 мкг/кг)	0.54±0.10*/**	0.44±0.17*/**	221±16*/**
* - P<0.05 по сравнению с контролем; ** - P<0.05 по сравнению с препаратом сравнения.

Таблица 5
Влияние фармацевтической композиции на уровень холестерина и триглицеридов в крови при токсическом гепатите
Экспериментальные	Изучаемые показатели
	Холестерин, ммоль/л			Триглицериды, ммоль/л
7 сутки терапии
Контроль	5.06±0.19		3.18±0.16
Силибинин (100 мг/кг)	3.60±0.18*		2.44±0.12*
Фармацевтическая композиция (0.1 мкг/кг)	3.77±0.19*		2.51±0.10*
Фармацевтическая композиция (10 мкг/кг)	3.66±0.16*		2.38±0.12*
14 сутки терапии
Контроль		3.88±0.16	2.48±0.19
Силибинин (100 мг/кг)		1.99±0.12*	1.48±0.14*
Фармацевтическая композиция (0.1 мкг/кг)		2.04±0.16*	1.33±0.18*
Фармацевтическая композиция (10 мкг/кг)		1.46±0.18*	1.08±0.10*/**
* - P<0,05 по сравнению с контролем; ** - P<0,05 по сравнению с препаратом сравнения.

После окончания эксперимента животные были подвергнуты эвтаназии для определения степени жировой дистрофии гепатоцитов. По данным вскрытия и макроскопического исследования изучаемых органов различий между опытными группами животных, получавших фармацевтическую композицию в обеих дозах и препарат сравнения, не установлено.

Существенно увеличивались линейные размеры и объем печени. Поверхность печени была гладкой, неоднородной коричнево-бурой окраски. Ткань печени на разрезе была темно-красной с множественными кровоизлияниями. Капсула печени была тонкой, прозрачной. Консистенция печени была мягкой.

Размеры и форма селезенки были увеличены. Поверхность селезенки имела однородную темно-вишневую окраску, была гладкой.

При гистологическом исследовании печени (окраска срезов Суданом) была выявлена жировая дистрофия центролобулярных и перипортальных гепатоцитов, выраженная в различной степени. Для полуколичественной оценки содержания липидов использовали пятибалльную шкалу:

1. Минимальная степень жировой дистрофии - гепатоциты с липидными включениями только в перипортальной зоне печеночной дольки.

2. Слабая степень: гепатоциты с липидными включениями занимают 1/4-1/3 длины печеночных балок в перипортальной зоне.

3. Умеренная степень: подобные гепатоциты занимают 1/4-1/3 длины печеночных балок по периферии дольки.

4. Высокая степень: гепатоциты с жировыми каплями занимают 1/2-2/3 длины печеночных балок.

5. Максимальная степень: стеатоз всей печеночной дольки, слияние жировых кист.

В контроле в печени крыс наблюдали глубокие повреждения паренхимы печени в виде жировой и белковой дистрофии с некробиозом части гепатоцитов. Жировая дистрофия носила диффузный характер. Средние и крупные капли жира заполняли цитоплазму большей части гепатоцитов во всех отделах печеночной дольки -максимальная степень жировой дистрофии.

В группе силибинина дистрофические изменения жирового характера в печени крыс были слабо выражены, носили очаговый характер. Крупные капли жира содержались в цитоплазме мелких групп - 4-5 гепатоцитов в поле зрения - слабая степень жировой дистрофии. При докраске гематоксилином трабекулярное строение печени и ядра гепатоцитов были отчетливыми.

У крыс, получавших фармацевтическую композицию в дозе 0.1 мкг/кг, дистрофические изменения печени были менее распространенными. Жировая дистрофия носила очаговый характер. Значительная часть гепатоцитов не содержала жировых включений - слабая степень жировой дистрофии.

В группе крыс, получавших фармацевтическую композицию в дозе 10 мкг/кг, выявлены дистрофические изменения очень слабой степени. Дистрофические изменения печени практически отсутствовали. Мелкие капли жира наблюдали в цитоплазме единичных гепатоцитов - минимальная степень жировой дистрофии. Трабекулярное строение печени и ядра гепатоцитов, докрашенных гематоксилином, были отчетливыми. Нарушений тинкториальных свойств цитоплазмы не отмечали. Таким образом, фармацевтическая композиция оказывает выраженное гепатопротекторное действие на модели гепатопатии токсического генеза. Фармацевтическая композиция способствует восстановлению функционального и морфологического состояния гепатоцитов.

Пример 3. Оценка панкреопротекторной активности фармацевтической композиции при лечебном применении в экспериментальной модели токсического панкреатита.

Эксперименты выполнены на 40 белых беспородных крысах-самцах с массой тела 220-240 г. Каждая экспериментальная группа содержала 10 животных.

Острый панкреонекроз (ОП) моделировали у крыс-самцов линии Sprague-Dawley с массой тела 220-240 г путем внутрибрюшинного введения 20% раствора L-аргинина в фосфатном буфере в дозе 5000 мг/кг дробно с интервалом 6 ч. Через 4 и 24 часа всем животным начинали инфузионную терапию путем внутривенного введения в дорзальную хвостовую вену. В силу острой токсичности применяемой дозы аргинина крысам опытных групп вводили препарат «Стерофундин Г-5» (Серия: B29LA24L производства «Б.Браун Мельзунген АГ», Германия) в одинаковой дозе 4 мл /100 г массы тела 4 раза в сутки.

Введение заявляемой фармацевтической композиции проводили ежедневно однократно в дозах 0.1 и 10 мкг/кг внутрижелудочно в течение 5 дней.

Через 72 часа и на 5 сутки всех выживших крыс подвергали эвтаназии. Собирали кровь и выделяли поджелудочную железу.

В сыворотке крови крыс определяли активность ферментов трипсина, α-амилазы, липазы. Антиоксидантный статус оценивали по активности пероксидазы и соотношению сульфгидрильных и дисульфидных групп в сыворотке крови. Выделенные на холоде поджелудочные железы отмывали физиологическим раствором натрия хлорида, очищали от жировой ткани и гомогенизировали в среде выделения, состоящей из 0.05 М фосфатно-солевого буфера и 5 мМ ЭДТА. В гомогенате поджелудочной железы определяли уровень белка, общих карбонильных групп (ОКГ), содержание сульфгидрильных и дисульфидных групп белков.

Статистическую обработку проводили с помощью пакетов программ «Microsoft Excel». Отличия между выборками оценивали с помощью t-критерия Стьюдента.

Оценку протекторного действия препаратов проводили через 72 часа и на 5-е сутки после моделирования ОП по биохимическим показателям крови и поджелудочной железы в сравнении с таковыми у контрольных животных, получавших терапию только препаратом «Стерофундин Г-5» (инфузионную терапию проводили всем опытным и контрольным крысам).

Во всех опытных группах крыс через 1 час после введения аргинина отмечали развитие гиподинамии и усиленное потребление воды. Через 24 часа у всех контрольных крыс отмечали выделение жидкого кишечного содержимого черного цвета. Гибель животных на эти сроки составила 20%.

Через 48 часов в контрольной группе отмечали усиление проявления ОП в виде скопления пальпируемого объема брюшного экссудата и появления петехий на коже под шерстным покровом. Гибель через 48 часов составила 40%.

Через 72 часа в контрольной группе осталось 5 крыс из 10. В сыворотке крови этих крыс были выявлены следующие изменения: резкое пиковое увеличение активности амилазы (10235.5 Е/л), трипсина (6.65 Е/л) и липазы (19.88 МЕ/л). Эти данные соответствовали тяжелому острому панкреонекрозу.

К 5 суткам все животные из контрольной группы впали в коматозное состояние и были выведены из эксперимента путем эвтаназии с забором крови и поджелудочной железы.

В группах терапии фармацевтической композицией отмечали уменьшение летальности через 24 и 72 часа, особенно при лечении препаратом в дозе 0.1 мкг/кг. У выживших крыс отмечали частые дефекации черным содержимым кишечника.

Фармацевтическая композиция способствовала увеличению количества выживших животных с ОП по сравнению с контрольной группой.

Экспериментальная терапия ОП изучаемой фармацевтической композицией способствовала снижению активности протеолитических ферментов в сыворотке крови. Данные представлены в таблице 6.

Таблица 6
Влияние фармацевтической композиции на активность протеолитических ферментов в крови при остром панкреатите
Экспериментальные группы/доза, мкг/кг	Изучаемые показатели
	Амилаза, МЕ/л	Трипсин, МЕ/л	Липаза, МЕ/л
3 сутки терапии
Контроль	10235±356	6.65±1.20	19.60±1.15
Фармацевтическая композиция (0.1 мкг/кг)	8146±162*	3.80±0.86*/**	13.55±1.03*/**
Фармацевтическая композиция (10 мкг/кг)	7911±105*	4.26±0.95*	17.60±1.12*
5 сутки терапии
Контроль †	6230±456	3.47±0.65	6.43±0.52
Фармацевтическая композиция (0.1 мкг/кг)	811±148*/**	1.79±0.44*/**	3.35±0.22*
Фармацевтическая композиция (10 мкг/кг)	1864±433*	2.14±0.29*	2.2±0.16*
* - P<0,05 по сравнению с контролем; ** - P<0,05 по сравнению с дозой фармацевтической композиции 10 мкг/кг.
Примечание: † - животные выведены из эксперимента в коматозном состоянии.

Терапия фармацевтической композицией в дозах 0.1 и 10 мкг/кг способствовала снижению активности амилазы, трипсина и липазы. При этом отчетливая разница в действии двух доз прослеживалась начиная с 3 суток терапии.

Антиоксидантное действие фармацевтической композиции оценивали по влиянию на активность пероксидазы и тиол-дисульфидный баланс сыворотки крови крыс через 5 дней терапии.

При ОП отмечали выраженное снижение уровня восстановленных сульфгидрильных групп крови и увеличение количества окисленных дисульфидных связей, что характеризовало формирование оксидативного стресса и истощение содержания сывороточных антиоксидантов. При этом активность пероксидазы крови значимо увеличивалась.

Терапия фармацевтической композицией на фоне инфузионной терапии положительно влияла на показатели тиол-дисульфидного равновесия крови и нормализовала активность пероксидазы. По своему действию на пероксидазную активность и содержание дисульфидных групп фармацевтическая композиция в дозе 0.1 мкг/кг превосходила действие 10 мкг/кг и контроля. Данные отражены в таблице 7.

Таблица 7
Влияние фармацевтической композиции на состояние антиоксидантной системы крови при остром панкреатите
Экспериментальные группы/доза, мкг/кг		Изучаемые показатели
	Пероксидаза, мкмоль/мин×мг	Сульфгидрильные группы, мкмоль/л	Дисульфидные группы, мкмоль/л
5 сутки терапии
Контроль †	81.2±7.6	258.1±8.0	142.5±11.0
Фармацевтическая композиция (0.1 мкг/кг)	23.5±5.4*/**	341.6±12.4*/**	62.1±8.5*/**
Фармацевтическая композиция (10 мкг/кг)	48.4±6.1*	306.2±5.9*	89.0±6.1*
* - P<0,05 по сравнению с контролем; ** - P<0,05 по сравнению с дозой фармацевтической композиции 10 мкг/кг.
Примечание: † - животные выведены из эксперимента в коматозном состоянии.

Показатели ткани поджелудочной железы - содержание белка и уровень карбонильных групп - являются маркерами протеолиза и оксидативного повреждения самой железы при панкреонекрозе. На фоне терапии фармацевтической композицией (при условиях инфузионной терапии препаратом Стерофундин Г-5) происходила нормализация этих показателей, что свидетельствовало о панкреопротективном действии. Данные представлены в таблице 8.

Таким образом, изучаемая фармацевтическая композиция обеспечивала восстановление функциональной активности поджелудочной железы крыс с острым панкреонекрозом, препятствовала ее протеолизу, снижала ферментемию и оказывала антиоксидантное и антигипотическое действие на фоне инфузионной терапии препаратом «Стерофундин Г-5».

Таблица 8
Влияние фармацевтической композиции на уровень общего белка и карбонильных групп в поджелудочной железе при остром панкреатите
Экспериментальные группы/доза, мкг/кг	Изучаемые показатели
	Белок, мг/г сырой ткани	ОКГ, нмоль/мг белка
5 сутки терапии
Контроль †	38.0±4.1		0.514±0.065
Фармацевтическая композиция (0.1 мкг/кг)	77.6±4.4*/**		0.276±0.040*/**
Фармацевтическая композиция (10 мкг/кг)	54.9±3.6*		0.359±0.013*
* - Р<0,05 по сравнению с контролем; ** - Р<0,05 по сравнению с дозой фармацевтической композиции 10 мкг/кг.
Примечание: † - животные выведены из эксперимента в коматозном состоянии.

Пример 4. Эффективность применения фармацевтической композиции у больных после ваготомии с пилоропластикой

Послеоперационные осложнения являются причиной формирования функциональной недостаточности, нарушений секреторной и моторной функций различных отделов желудочно-кишечного тракта.

Исследуемую фармацевтическую композицию применяли ежедневно 2 раза в день в течение 20 дней у 11 больных с состоянием после операции по поводу язвенной болезни двенадцатиперстной кишки (ваготомия с пилоропластикой).

Больные в различные сроки после операции (от 2 до 10 лет) отмечали нарушение стула, вздутие живота, урчание в брюшной полости, снижение аппетита.

Все больные ранее получали симптоматическую и патогенетическую терапию по поводу данного заболевания.

Контрольная группа состояла из 9 больных с аналогичным заболеванием, которым назначалось традиционное лечение.

В результате проведенного исследования установлено, что применение фармацевтической композиции способствовало повышению аппетита и устранению диспептических расстройств.

При гастродуоденоскопии установлено уменьшение воспалительных изменений слизистой пилорического отдела желудка и двенадцатиперстной кишки.

Очевидно, что нормализация пищеварения у больных с послеоперационными нарушениями связана с регуляторным воздействием фармацевтической композиции не только на функцию клеток слизистой желудка и двенадцатиперстной кишки, но и стимуляцией ферментативной активности дуоденального содержимого.

Фармацевтическая композиция не вызывает побочных эффектов, осложнений и лекарственной зависимости.

Пример 5. Эффективность применения фармацевтической композиции у больных с хроническим гепатитом

Исследование проведено на 15 больных в возрасте 27-62 лет. Длительность заболевания составляла от 3 до 20 лет. У 87% больных в анамнезе был перенесенный вирусный гепатит, у 13% - токсический гепатит.

Большинство больных предъявляли жалобы на боли в правом подреберье, общую слабость и быструю утомляемость, у 65% больных отмечались диспептические расстройства.

Все больные ранее получали симптоматическую и патогенетическую терапию по поводу данного заболевания.

Исследуемую фармацевтическую композицию применяли ежедневно 2 раза в день в течение 30 дней.

Контрольная группа состояла из 12 больных с аналогичным заболеванием, которым назначалось традиционное лечение.

На фоне проводимого лечения 86% больных отмечали исчезновение слабости, повышение аппетита и работоспособности. У 47% больных значительно снизилась интенсивность болевого синдрома.

Наиболее значительное внимание при проведении обследования больных уделялось оценке результатов биохимических исследований, характеризующих аминотрансферазную активность, пигментную и белковообразовательную функцию печени.

У 74% обследованных больных отмечались гипербилирубинемия, повышение уровня аланинаминотрансферазы (АЛТ), аспартатаминотрансферазы (ACT) и незначительное увеличение γ-глобулиновой фракции белков крови в основном за счет IgM, что свидетельствует об определенной активности хронического воспалительного процесса.

Применение фармацевтической композиции способствовало нормализации уровня билирубина, активности АЛТ и ACT (табл.9).

Таблица 9
Влияние фармацевтической композиции на биохимические показатели периферической крови больных хроническим гепатитом
Показатели (ммоль/л)	До лечения	После лечения
Холестерин	5.2±0.5	5.1±0.3
Билирубин	26.7±1.6	21.4±1.2*
ACT	41.3±2.5	31.5±2.4*
АЛТ	54.2±4.5	40.8±2.7*
ГГТ	45.4±3.4	42.6±4.3
Триглицериды	2.5±0.3	2.2±0.2
* - P<0.05 по сравнению с показателем до лечения.

Исследование иммуноглобулинов периферической крови, являющихся существенным критерием активности воспалительного процесса, после курса лечения с использованием фармацевтической композиции показало снижение уровня IgM (табл.10).

Таблица 10
Влияние фармацевтической композиции на иммунологические показатели у больных хроническим гепатитом
Показатели (г/л)	До лечения	После лечения
IgA	2.15±0.06	2.27±0.05
IgM	3.89±0.06	1.40±0.01*
IgG	14.6±1.3	13.2±0.4
* - P<0.05 по сравнению с показателем до лечения.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что применение фармацевтической композиции у больных хроническим гепатитом способствует нормализации метаболических процессов в печени, снижению активности воспалительного процесса и предотвращает гибель гепатоцитов.

Фармацевтическая композиция не вызывает побочных эффектов, осложнений и лекарственной зависимости.

Пример 6. Эффективность применения фармацевтической композиции у больных с хроническим панкреатитом

Фармацевтическую композицию применяли ежедневно 2 раза в день в течение 30 дней у 10 больных в возрасте 56-75 лет с диагнозом: Хронический панкреатит, латентная форма.

Контрольная группа состояла из 9 больных с аналогичным заболеванием, которым назначалось традиционное лечение.

Больные хроническим панкреатитом предъявляли жалобы на потерю аппетита, отрыжку, метеоризм, урчание в животе, расстройство стула.

Установлено, что применение фармацевтической композиции у больных хроническим панкреатитом способствовало повышению аппетита и снижению частоты диспептических расстройств.

При лабораторном исследовании дуоденального содержимого отмечено исходное снижение активности панкреатических ферментов (табл.11).

Таблица 11
Влияние фармацевтической композиции на активность пищеварительных ферментов у больных хроническим панкреатитам
Показатели	До лечения	После лечения
Трипсин, ммоль/л	2.14±0.09	3.2+0.1*
α-амилаза, кг/(ч·л)	5.2±0.4	7.1±0.2*
* - P<0,05 по сравнению с показателем до лечения.

В результате применения фармацевтической композиции отмечено достоверное увеличение активности панкреатических ферментов, что коррелирует с улучшением клинической симптоматики.

Фармацевтическая композиция не вызывает побочных эффектов, осложнений и лекарственной зависимости.

Таким образом, выявленные при экспериментальном и клиническом изучении фармакологические свойства фармацевтической композиции свидетельствуют о ее положительном воздействии на единые патогенетические механизмы гастроэнтерологических заболеваний и перспективности применения для лечения воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта.

Claims (1)

1. Пероральная фармацевтическая композиция для лечения воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта, включающая альгинат натрия, функциональную добавку и воду, отличающаяся тем, что в качестве функциональной добавки содержит дипептид глутамил-триптофан в форме мононатриевой соли при следующем соотношении компонентов в расчете на одну дозу 10 мл (в мг):
   глутамил-триптофан 0,01-0,50 альгинат натрия 50-500 вода остальное