WO2012035188A1 - Procedimiento de sulfatación de oligosacáridos por calentamiento con microondas - Google Patents

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José Luis DE PAZ CARRERA
Pedro Manuel Nieto Mesa
Susana MAZA PÉREZ
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    • C07H15/18—Acyclic radicals, substituted by carbocyclic rings
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    • C08B37/0078—Degradation products

Definitions

  • the present invention describes an O-sulphation process of synthetic heparin precursor oligosaccharides, in which a microwave heating is performed that reduces reaction times. Therefore, the present invention falls within the field of chemical synthesis.
  • Heparin is a highly sulfated and heterogeneous polysaccharide that belongs to the glycosaminoglycan family (GAGs) and participates in a wide variety of biological processes.
  • the structure of heparin is constituted by the repetition of disaccharide units of d-glucosamine and l-iduronic or d-glucuronic acid, linked by 1 ⁇ 4 bonds.
  • This disaccharide may contain O-sulfate groups at positions 3 and 6 of the glucosamine unit and at position 2 of the uric acid.
  • the glucosamine unit nitrogen may be sulfated, acetylated or as a free amino group.
  • This structural variety of heparin, particularly in the sulphation pattern is responsible for its specific interaction with a wide range of proteins.
  • the traditional method consists of the synthesis of the protected oligosaccharide, followed by deprotection of the hydroxyl groups to be sulfated, sulphation thereof and deprotection of the rest of the molecule.
  • the time spent in these stages of deprotection / sulphation is greater than that necessary for the synthesis of the protected oligosaccharide.
  • low or moderate yields are usually obtained for these final stages, particularly for sulphation, which are carried out on very elaborate and, therefore, very valuable compounds.
  • microwave radiation has been widely used in chemical synthesis (Kappe, CO; Dallinger, D. Nal Rev, Drug Discov. 2006, 5, 51-63).
  • One of the main advantages of microwave-assisted synthesis is the dramatic reduction of reaction times, which go from days and hours, to minutes and seconds. These improvements induced by the Microwave radiation seems to be obtained in reactions where charged molecules and polar solvents are involved. Therefore, the sulfation reaction is especially suitable for using microwave radiation.
  • microwave-assisted sulfations have received very little attention in the sector. So far, microwave radiation has not been used for the synthesis of sulphated GAGs, including heparin oligosaccharides.
  • the present invention describes a fast and high performance method for the Osulfatation of synthetic precursors of heparin oligosaccharides using microwave radiation. This procedure greatly facilitates the preparation of this type of highly sulfated carbohydrates, avoiding experimental problems associated with the use of sulfur trioxide complexes in traditional conditions.
  • the present invention relates to an oligosaccharide O-sulphation process comprising a microwave heating step of the reaction mixture.
  • the oligosaccharide O-sulphatation process comprises the following steps:
  • Ri and R2 are independently selected from H or protecting groups
  • R 3 and R 4 are independently selected from H, C r C 6 alkyl or -C ⁇ 0) OR6, where Re is selected from H, aryl, C1-C4 alkyl,
  • R 5 is selected from H, alkyl aryl or CrC 4j
  • m is a value between 1 and 8
  • n is a value between 1 and 5
  • alkyl refers to radicals of hydrocarbon chains, linear or branched, having 1 to 10 carbon atoms, preferably from 1 to 6, and more preferably from 1 to 4 and which are attached to the rest of the molecule by a single bond, for example, methyl, ethyl, n-propyl, / -propyl, n-butyl, tere-butyl, sec-butyl, n-pentyl, n-hexyl etc.
  • alkyl groups may be optionally substituted by one or more substituents such as halogen (called haloalkyl), hydroxyl, alkoxy, carboxyl, carbonyl, cyano, acyl, alkoxycarbonyl, amino, nitro, mercapto and alkylthio.
  • halogen called haloalkyl
  • aryl refers in the present invention to a phenyl, naphthyl, indenyl, phenanthryl or anthracil radical.
  • the aryl radical may be optionally substituted by one or more substituents such as alkyl, haloalkyl, aminoalkyl, dialkylamino, hydroxyl, alkoxy, phenyl, mercapto, halogen, nitro, cyano and alkoxycarbonyl.
  • substituents such as alkyl, haloalkyl, aminoalkyl, dialkylamino, hydroxyl, alkoxy, phenyl, mercapto, halogen, nitro, cyano and alkoxycarbonyl.
  • an NH 2 R group is understood as a primary amine, an NHRR 'group as a secondary amine and a group as a tertiary amine NRR'R ", where the R, R 'and R" groups are the same or different alkyl groups and preferably alkyl groups of 1 to 6 carbons.
  • a protective group is understood as a chemical group that reacts with a functional group of a reagent in order to obtain chemoselectivity in a chemical reaction.
  • protecting groups are:
  • TMS trimethylsilyl
  • TDMS ferf-butyldimethylsilyl
  • TIPS triisopropylsilyl
  • Ri and R2 are protecting groups that are independently benzyl, p-methoxybenzyl, acetate, benzoate, pivaloate, levulino, trialkylsilyl or triarylsilyl selected. More preferably, R 1 and R 2 are benzyl.
  • R 3 is -C (0) Obencil and R 4 is H.
  • n is 1. and more preferably, the oligosaccharide employed in the process is the compound of formula (II):
  • n 2 + more preferably the oligosaccharide employed in the process is the compound of formula (III):
  • n 3 and more preferably the oligosaccharide employed in the process is the compound of formula (IV):
  • R 7 is selected from -NMe 3 or -NEt 3.
  • R 7 is pyridine.
  • the organic solvent employed in the process of the present invention is selected from ⁇ , ⁇ '-dimethylformamide or pyridine.
  • the word "comprises” and its variants are not intended to exclude other technical characteristics, additives, components or steps.
  • other objects, advantages and features of the invention will be derived partly from the description and partly from the practice of the invention.
  • the following examples and drawings are provided by way of illustration, and are not intended to be limiting of the present invention.
  • the sulfation reactions with microwaves have been carried out in sealed containers in a "Biotage Initiator" equipment.
  • the SO 3 -NMe 3 complex (5 equiv. Per OH group; Sigma-Aldrich; the complex was previously washed with H 2 O, MeOH, and CH 2 CI 2 and dried under high vacuum) and a magnet was introduced into a vial for 5 mL microwave reactions, which was sealed with a septum. The septum was punctured with a needle that was connected under high vacuum and the mixture was allowed to dry for 12 h.
  • the sulfated disaccharide 2 was synthesized from 1 (table 1) using the traditional sulphation method with SO 3 -NMe 3 at 60 9 C in DMF (oil bath heating, entry 1).
  • TLC thin layer chromatography
  • Microwave heating greatly reduces the reaction time, using the same conditions, with only 5 equivalents of SO 3 -NMe 3 complex per OH group (input 2).
  • Disaccharide 2 is obtained pure and with excellent performance after chromatographic purification with Sephadex LH-20 These results demonstrate the effect of microwave radiation on the sulfation reaction.
  • the reaction was carried out at 100 e C (entries 3 and 4). In just 15 min, compound 2 was obtained with a yield of 91%, while heating with microwave for 1 h entails a slight increase in yield up to 98%. Interestingly, under these conditions, carbamate N-sulphation has not been detected. Similar results were obtained using the S0 3 -Py complex in Py at 60 S C (entry 5).
  • the next objective was the preparation of hexasaccharide 6 containing 7 sulfate groups in its structure (table 2).
  • the sulfation with microwaves was carried out with the S0 3 -NMe 3 complex at 100 S C and in order to optimize the necessary reaction time, this was varied between 5 and 30 min (entries 1-3). With 30 min of reaction, hexasaccharide 6 was obtained with an excellent yield of 90%.
  • TLC entry 4
  • the CCF analysis of this reaction mixture showed no progression after increasing the temperature above 100 9 C and increasing the reaction time. Similar results have been described in the literature for the sulfation of certain heparin oligosaccharides using the S03 * Py complex.

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Abstract

La presente invención describe un procedimiento de O-sulfatación de oligosacáridos precursores de heparina sintética, en el que se realiza un calentamiento por microondas que reduce los tiempos de reacción.

Description

PROCEDIMIENTO DE SULFATACIÓN DE OLIGOSACÁR1POS POR CALENTAMIENTO CON MICROONDAS
La presente invención describe un procedimiento de O-sulfatación de oligosacáridos precursores de heparina sintética, en el que se realiza un calentamiento por microondas que reduce los tiempos de reacción. Por tanto, la presente invención se engloba dentro del campo de la síntesis química.
ESTADO DE LA TÉCNICA ANTERIOR
La heparina es un polisacárido altamente sulfatado y heterogéneo que pertenece a la familia de los glicosaminoglicanos (GAGs) y participa en una amplía variedad de procesos biológicos. La estructura de la heparina está constituida por la repetición de unidades disacarídicas de d-glucosamina y ácido l-idurónico o d-glucurónico, unidas mediante enlaces 1→4. Este disacárido puede contener grupos O-sulfato en las posiciones 3 y 6 de la unidad de glucosamina y en la posición 2 del ácido uránico. Además, el nitrógeno de la unidad de glucosamina puede encontrarse sulfatado, acetilado o como grupo amino libre. Esta variedad estructural de la heparina, particularmente en el patrón de sulfatación, es la responsable de su interacción específica con una amplia gama de proteínas.
La síntesis química ha sido ampliamente utilizada para obtener oligosacáridos de heparina con estructura definida, etapa necesaria para determinar relaciones estructura-actividad para secuencias específicas de este polisacárido (Arungundram, S.; Al-Mafraji, K.; Asong, J.; Leach, F. E.; Amster, I. J.; Venot, A.; Turnbull, J. E.; Boons, G. J. J. Am. Chem. Soc. 2009, 131, 17394- 17405). Sin embargo, la síntesis de estos productos sigue siendo un proceso extremadamente complejo. El método tradicional consiste en la síntesis del oligosacárido protegido, seguida de desprotección de los grupos hidroxilos que van a ser sulfatados, sulfatación de los mismos y desprotección del resto de la molécula. En muchos casos, el tiempo empleado en estas etapas de desprotección/sulfatación es mayor que el necesario para la síntesis del oligosacárido protegido. Además, suelen obtenerse rendimientos bajos o moderados para estas etapas finales, particularmente para la sulfatación, que se realizan sobre compuestos muy elaborados y, por tanto, muy valiosos.
La O-sulfatación de los grupos hidroxilos de precursores sintéticos de oligosacáridos de heparina, se realiza normalmente utilizando un complejo de trióxido de azufre, como S03-NEt3 o S03-NMe3, DMF como disolvente y calentando a 50-60°C. De forma alternativa, se ha empleado el complejo S03-Py y piridina (Py) como disolvente. Para oligosacáridos con un gran número de grupos hídroxilo se requiere un gran exceso del complejo de trióxido de azufre y tiempos de reacción muy largos, incluso de varios días. En algunos casos, aún utilizando condiciones de reacción extremas, se obtienen rendimientos moderados debido a que la reacción no se completa y se detectan numerosos productos de sulfataciones parciales {de Paz, J. L; Martin- Lomas, M. Eur. J. Org. Chem. 2005, 1849-1858). Esto conlleva la realización de varios ciclos de reacción, utilizando excesos de complejo de sulfatación y purificando los crudos de productos parcialmente sulfatados en cada ciclo. Las diferencias de rendimientos y tiempos de reacción que se encuentran en la bibliografía pueden atribuirse a la distinta distribución de grupos protectores y/o a la procedencia del agente sulfatante. Es de destacar que la inestabilidad de los oligosacáridos de heparina altamente sulfatados conlleva ciertas limitaciones en el uso de altas temperaturas durante prolongados tiempos de reacción.
Por lo tanto, son necesarios métodos más rápidos y eficientes para la preparación de oligosacáridos de heparina altamente sulfatados. En los últimos años, la radiación con microondas ha sido ampliamente utilizada en síntesis química (Kappe, C. O.; Dallinger, D. Nal Rev, Drug Discov. 2006, 5, 51 -63). Una de las principales ventajas que presenta la síntesis asistida por microondas es la reducción espectacular de los tiempos de reacción, que pasan de días y horas, a minutos y segundos. Estas mejoras inducidas por la radiación microondas parece que se obtienen en reacciones donde estén involucradas moléculas cargadas y disolventes polares. Por tanto, la reacción de sulfatación es especialmente apropiada para utilizar radiación microondas. Sin embargo, sorprende que las sulfataciones asistidas por microondas hayan recibido muy poca atención en el sector. Hasta el momento, la radiación microondas no ha sido utilizada para la síntesis de GAGs sulfatados, incluidos los oligosacáridos de heparína.
DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN
La presente invención describe un método rápido y de alto rendimiento para la Osulfatación de precursores sintéticos de oligosacáridos de heparina utilizando radiación microondas. Este procedimiento facilita en gran medida la preparación de este tipo de carbohidratos altamente sulfatados, evitando problemas experimentales asociados al uso de complejos de trióxido de azufre en las condiciones tradicionales.
En un primer aspecto, la presente invención se refiere a un procedimiento de O-sulfatación de oligosacáridos que comprende una etapa de calentamiento medíante microondas de la mezcla de reacción.
En una realización preferida, el procedimiento de O-sulfatacíón de oligosacáridos comprende las siguientes etapas:
a) mezclar el oligosacárido de fórmula (I)
Figure imgf000004_0001
donde Ri y R2 se seleccionan independientemente entre H o grupos protectores,
R3 y R4 se selecciona independientemente entre H, alquilo CrC6 o -C{0)OR6, donde Re sé selecciona entre H, arilo, alquilo C1-C4,
R5 se selecciona entre H, arilo o alquilo CrC4j
m es un valor entre 1 y 8,
n es un valor entre 1 y 5
con un complejo de coordinación S03-R7, donde R es una amina primaria, secundaria o terciaria sustituida por alquilo C1-C6 o una amina heterocíclica, en un disolvente orgánico. b) calentar la mezcla obtenida en (a) mediante microondas a una temperatura entre 50 y 150eC. En la presente invención, el término "alquilo" se refiere a radicales de cadenas hidrocarbonadas, lineales o ramificadas, que tienen de 1 a 10 átomos de carbono, preferiblemente de 1 a 6, y más preferiblemente de 1 a 4 y que se unen al resto de la molécula mediante un enlace sencillo, por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo, /-propilo, n-butilo, tere-butilo, sec-butilo, n-pentilo, n-hexilo etc. Los grupos alquilo pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes tales como halógeno (denominándose haloalquilo), hidroxilo, alcoxilo, carboxilo, carbonilo, ciano, acilo, alcoxicarbonilo, amino, nitro, mercapto y alquiltio. El término "arilo" se refiere en la presente invención a un radical fenilo, naftilo, indenilo, fenantrilo o antracilo. El radical arilo puede estar opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes tales como alquilo, haloalquilo, aminoalquilo, dialquilamino, hidroxilo, alcoxilo, fenilo, mercapto, halógeno, nitro, ciano y alcoxicarbonilo.
En la presente invención se entiende como amina primaria un grupo NH2R, como amina secundaria un grupo NHRR' y como amina terciaria un grupo NRR'R", donde los grupos R, R' y R" son grupos alquilo iguales o diferentes y preferiblemente grupos alquilo de entre 1 a 6 carbonos.
En la presente invención se entiende como grupo protector un grupo químico que reacciona con un grupo funcional de un reactivo con el objetivo de obtener quimioselectividad en una reacción química. Ejemplos no limitantes de grupos protectores son:
A. Grupos protectores de alcoholes:
• β-Metoxietoximetil éter (MEM)
· Acetilo (Ac)
• Metoximetiléter (MOM)
• p-Metoxibenciléter (PMB)
• Metiltiometiléter
• Pivaloil (Piv)
· Tetrahidropirano (THP)
• Éter de sililo (trimetilsililo (TMS), ferf-butildimetilsililo (TBDMS) y triisopropilsililo (TIPS)
• Éteres de metilo
• Éteres de etoxíetilo (EE)
B. Grupos protectores de aminas:
• Carbobenciloxi (Cbz)
• p-metoxibencilcarbonilo (Moz o MeOZ) tert-butiloxícarbonilo (BOC),
• 9-Fluorenilmetiloxicarbonil (FMOC),
. Bencilo (Bn)
• p-metoxibencilo (MPM)
• 3,4-dimetoxibencilo (DMPM)
• p-metoxífenilo (PMP)
• Tosilo (Ts)
· Otras sulfonamidas (Nosilo y Nps)
C. Grupos protectores de carbonilo:
• Acétales y cetales Ditianos
Acilales
D. Grupos protectores de ácidos carboxílicos:
• Esteres de metilo
• Esteres de bencilo
• Esteres de tert-butilo
• Esteres de sililo.
Preferiblemente, Ri y R2 son grupos protectores que se seleccionan independientemente de entre bencilo, p-metoxibencilo, acetato, benzoato, pivaloato, levulino, trialquilsililo o triarilsililo. Más preferiblemente, R1 y R2 son bencilo.
Preferiblemente, R3 es -C(0)Obencilo y R4 es H.
Preferiblemente, n es 1 . y más preferiblemente, el oligosacárido empleado en el procedimiento es el compuesto de fórmula (II):
Figure imgf000007_0001
Preferiblemente, n es 2, y más preferiblemente el oligosacárido empleado en el procedimiento es el compuesto de fórmula (III):
Figure imgf000007_0002
(III)
Preferiblemente, n es 3 y más preferiblemente el oligosacárido empleado en el procedimiento es el compuesto de fórmula (IV):
Figure imgf000008_0001
(IV)
Preferiblemente, R7 se selecciona entre -NMe3 o -NEt3. Preferiblemente, R7 es piridina.
Preferiblemente, el disolvente orgánico empleado en el procedimiento de la presente invención se selecciona entre Ν,Ν'-dimetilformamida o piridina. A lo largo de la descripción y las reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos, ventajas y características de la invención se desprenderán en parte de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Los siguientes ejemplos y dibujos se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la presente invención.
EJEMPLOS
A continuación se ilustrará la invención mediante unos ensayos realizados por los inventores, que pone de manifiesto la especificidad y efectividad del procedimiento. 1. Procedimiento general para la per-O-sulfatación con microondas
Las reacciones de sulfatación con microondas se han llevado a cabo en recipientes sellados en un equipo "Biotage Initiator". El azúcar polihidroxilado (7-14 μιηοΙ, 1 .0 equiv.), el complejo de SO3-NMe3 (5 equiv. por grupo OH; Sigma-Aldrich; el complejo se lavó previamente con H2O, MeOH, y CH2CI2 y se secó a alto vacío) y un imán fueron introducidos en un vial para reacciones con microondas de 5 mL, que se selló con un septum. El septum se pinchó con una aguja que se conectó a alto vacío y la mezcla se dejó secar durante 12 h. A continuación se pasó argón, se añadió DMF seca (1 .0 mL) y la mezcla de reacción fue sometida a radiación microondas durante 15-30 min a 100eC (potencia media de 80 W). La reacción se enfrió hasta temperature ambiente y se paró con Et3N (150 μ!_). Se añadió MeOH (1 mL) y CH2CI2 (1 mL), y la mezcla de reacción se pasó por una columna cromatográfica de Sephadex LH- 20 que se eluyó con CH2CI2/MeOH (1 :1 ), obteniéndose la correspondiente sal de trietilamonio (rendimientos 90-99%). La elución de una columna Dowex 50WX4-Na+ con MeOH/H2O 3:1 dio lugar a la correspondiente sal sódica.
2. Síntesis del disacárido sulfatado 2
Se procedió a la síntesis del disacárido sulfatado 2 a partir de 1 (tabla 1 ) usando el método tradicional de sulfatación con SO3-NMe3 a 609C en DMF (calentamiento en baño de aceite, entrada 1 ). El seguimiento por cromatografía en capa fina (CCF) indicaba una velocidad de reacción muy baja. Para completar la reacción fue necesario utilizar un gran exceso de reactivo sulfatante (20 equivalentes por grupo OH) y un tiempo de reacción muy elevado (7 días). Previamente, se habían descrito problemas similares en la O- sulfatación de ciertos oligosacáridos de heparina parcialmente protegidos. El calentamiento con microondas reduce enormemente el tiempo de reacción, utilizando las mismas condiciones, con tan solo 5 equivalentes de complejo SO3-NMe3 por grupo OH (entrada 2). El disacárido 2 se obtiene puro y con un rendimiento excelente después de la purificación cromatográfica con Sephadex LH-20. Estos resultados demuestran el efecto de la radiación microondas en la reacción de sulfatación. Para evaluar el efecto de la temperatura, se llevo a cabo la reacción a 100 eC (entradas 3 y 4). En tan solo 15 min se obtuvo el compuesto 2 con un rendimiento del 91 %, mientras que el calentamiento con microondas durante 1 h conlleva un ligero aumento del rendimiento hasta un 98%. Resulta interesante que, bajo estas condiciones, no se ha detectado la N-sulfatación del carbamato. Se obtuvieron resultados similares utilizando el complejo S03-Py en Py a 60SC (entrada 5).
Figure imgf000010_0001
Tabla 1. Sulfatación con microondas del disacárido 1
Entrada Reactivo sulfatante Disolvente Temperatura Tiempo de Rendim¡ento{%)
(SC) reacción
1 S03-NMe3 DDMMFF 60a 7 d cuantitativo
(20 equiv. por
grupo OH)
2 S03-NMe3 DMF 60 7 h 94
(5 equiv. por grupo
OH)
3 S03-NMe3 DMF 100 1 h 98
(5 equiv. por grupo
OH)
4 S03-NMe3 DMF 100 15 min 91
(5 equiv. por grupo
OH)
5 S03-Py Py 60 15 min cuantitativo
(5 equiv. por grupo
OH)
a Calentamiento convencional (baño de aceite)
b Estimado por CCF 3. Síntesis del tetrasacárido 3
Una vez optimizada la O-sulfatación del disacárido modelo 1 , aplicamos el mismo procedimiento a oligosacáridos de heparina más complejos. Para la O- sulfatación del tetrasacárido 3, el método tradicional de calentamiento en baño de aceite resultó bastante problemático (esquema 1 ). El tratamiento con SO3-N e3 dio lugar a una mezcla de productos parcialmente sulfatados. Cuando se usó un gran exceso de complejo de sulfatación, durante un prolongado tiempo de reacción, no se observó ninguna mejora. Después de purificar por Sephadex LH-20, el crudo de reacción se trató con el complejo SO3-Py. Fue necesaria una purificación cromatográfica en fase reversa con relleno de C-18 para obtener el tetrasacárido 4 con un rendimiento moderado del 43%. Sin embargo, la misma reacción se completó sin problemas calentando con microondas, y se obtuvo 4 con un rendimiento excelente después de la filtración por Sephadex LH-20 (esquema 1 ).
Figure imgf000011_0001
Esquema 1. Sulfatación del tetrasacárido 3. Reactivos y condiciones: a) SO3-NMe3 (>10 equiv. por grupo OH), DMF, 609C, >3 d; a continuación SO3-Py (10 equiv. por grupo OH), Py, temperatura ambiente, 48 h, 43%; b) SO3-NMe3 {5 equiv. por grupo OH), DMF, 100SC, microondas, 30 min, 95%. 4. Síntesis del hexasacárido 6
El siguiente objetivo fue la preparación del hexasacárido 6 que contiene 7 grupos sulfato en su estructura (tabla 2). La sulfatación con microondas se llevó a cabo con el complejo S03-NMe3 a 100SC y para optimizar el tiempo de reacción necesario, éste se varió entre 5 y 30 min (entradas 1 -3). Con 30 min de reacción se obtuvo el hexasacárido 6 con un rendimiento excelente del 90%. Es interesante indicar que cuando se realizó la reacción con el complejo S03-Py, se observó por CCF una mezcla de derivados parcialmente sulfatados (entrada 4). El análisis por CCF de esta mezcla de reacción no mostró progresión alguna después de aumentar la temperatura por encima de 1009C y aumentar el tiempo de reacción. En la bibliografía se han descrito resultados similares para la sulfatación de ciertos oligosacáridos de heparina usando el complejo S03*Py.
Figure imgf000013_0001
Tabla 2. Sulfatación con microondas del hexasacárido 5
Entrada Reactivo sulfatante Disolvente Temperatura Tiempo Rendimiento
(SC) reacción (%)
1 S03-NMe3 DMF 100 5 min 20a
(5 equiv. por grupo OH)
2 S03-NMe3 DMF 100 20 min 80a
(5 equiv. por grupo OH)
3 S03-NMe3 DMF 100 30 min 90
(5 equiv. por grupo OH)
4 S03-Piridina (5 equiv. 60-→100 5 min-»2 25a
por grupo OH)
a Estimado por CCF
En conclusión, se describe un procedimiento para la per-O-sulfatación de precursores sintéticos de oligosacáridos de heparina. La aplicación de la radiación microondas ha reducido espectacularmente los tiempos de reacción, permitiendo que la sulfatación de productos desde di- hasta hexasacáridos transcurra rápidamente y con alto rendimiento. Cabe destacar que los cortos tiempos de reacción empleados en estas reacciones (15-30 min) permiten el uso de temperaturas más altas que en el caso del calentamiento convencional, sin que se produzca descomposición del azúcar. Se espera que este procedimiento acelere la preparación de estos compuestos, superando así uno de las mayores dificultades de la síntesis de GAGs.

Claims

REIVINDICACIONES
1. Procedimiento de O-sulfatación de oligosacáridos que comprende una etapa de calentamiento mediante microondas de la mezcla de reacción.
2. Procedimiento de O-sulfatación de oligosacáridos según la reivindicación 1 que comprende:
a. mezclar el oligosacárido de fórmula (I)
Figure imgf000015_0001
(I)
donde
Ri y R2 se seleccionan independientemente entre H o grupos protectores,
R3 y R4 se selecciona independientemente entre H, alquilo C1-C-6 o -C(O)OR6, donde R6 se selecciona entre H, arilo, alquilo CrC4,
Rs se selecciona entre H, arilo o alquilo C1 -C4,
m es un valor entre 1 y 8,
n es un valor entre 1 y 5
con un complejo de coordinación SO3-R7, donde R7 es una amina primaria, secundaria o terciaria sustituida por alquilo C-1-C-6 o una amina heterocíclica, en un disolvente orgánico,
b. calentar la mezcla obtenida en (a) mediante microondas a una temperatura entre 50 y 150SC.
Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 donde R1 y R2 son grupos protectores que se seleccionan independientemente de entre bencilo, p-metoxibencilo, acetato, benzoato, pivaloato, levulino, trialquilsililo o triarilsililo.
Procedimiento según la reivindicación 3 donde Ri y R2 son bencilo.
Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 donde R3 es - C(0)Obencilo y R4 es H.
Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 donde n es 1.
Procedimiento según la reivindicación 6 donde el oligosacárido compuesto de fórmula II):
Figure imgf000016_0001
8. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 donde n es 2.
9. Procedimiento según la reivindicación 8 donde el oligosacárido es el co
Figure imgf000016_0002
(III)
10. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 donde n es 3.
11. Procedimiento según la reivindicación 10 donde el oligosacárido
compuesto de fórmula (IV):
Figure imgf000017_0001
12. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 1 1 donde R se selecciona entre N(CH3)3 o N(CH2CH3)3.
13. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 1 1 donde R7 piridina.
14. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13 donde el disolvente orgánico se selecciona entre Ν,Ν'-dimetilformamida o piridina.
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