WO2011125331A1 - 金属サレン錯体誘導体及びその製造方法 - Google Patents

金属サレン錯体誘導体及びその製造方法 Download PDF

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石川義弘
江口晴樹
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    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Definitions

  • the present invention relates to a derivative of a metal salen complex and a method for producing the same.
  • an iron salen complex known as a metal catalyst is known. Furthermore, the applicant revealed that the iron-salen complex itself has magnetism and further has an antitumor effect, and after applying the iron-salen complex to humans and animals, by applying a magnetic field from outside the body, It was proposed that the complex could be induced to the target affected area to concentrate the pharmacological effects of iron-salen complex locally.
  • the drug molecule can be induced to the affected tissue by a magnetic field by binding the drug molecule to the iron-salen complex.
  • This iron-salen complex is disclosed in JP2009-173631, JP2009-196913, JP2009-196914, JP2009-256232, JP2009-256233, and JP2009-274962.
  • JP-A-2009-287949 magnetically separates a bound antigen or antibody from a free antigen or antibody by connecting an antibody and an antigen to an iron-salen complex by a biotin-avidin reaction.
  • a method for quantifying antibodies or antigens was proposed.
  • JP 2009-173631 JP 2009-196913 JP 2009-196914 JP 2009-256232 A JP 2009-256233 A JP 2009-274962 A JP 2009-287949 A
  • an object of the present invention is to provide a derivative of a metal salen complex that is excellent in terms of yield and stability, and to provide a method for producing the metal salen complex.
  • the present invention provides a metal-salen complex to a disulfide bond to a functional molecule comprising at least one of an enzyme, an antibody, an antigen, a peptide, an amino acid, an oligonucleotide, a protein, a nucleic acid, and a pharmaceutical molecule.
  • a metal-salen complex derivative bonded through at least one of an ether bond, an ester bond, and an amide bond, and a method for producing the same.
  • the bond between the metal-salen complex and the functional molecule is generated via a cross-linking agent that cross-links both.
  • the present invention includes ABC (A: metal salen complex, B: binding region having at least one of disulfide bond, ether bond, ester bond, amide bond, C: enzyme, antibody, antigen, peptide, It is a metal-salen complex derivative represented by a functional molecule consisting of at least one of amino acid, oligonucleotide, protein, nucleic acid, and pharmaceutical molecule.
  • ABC metal salen complex
  • B binding region having at least one of disulfide bond, ether bond, ester bond, amide bond
  • C enzyme, antibody, antigen, peptide
  • It is a metal-salen complex derivative represented by a functional molecule consisting of at least one of amino acid, oligonucleotide, protein, nucleic acid, and pharmaceutical molecule.
  • the binding region (B) includes a cross-linking agent molecule that cross-links the metal salen complex (A) and the functional molecule (C), and the metal salen complex (A) and the crosslinker.
  • the agent molecule is bonded by a disulfide bond, an ether bond, an ester bond, or an amide bond
  • the crosslinking agent molecule and the functional molecule (C) are bonded by a disulfide bond, an ether bond, an ester bond, or an amide bond.
  • the said metal salen complex (A) is not specifically limited, For example, it is shown by the following (I) formula. (I)
  • a to h is (“—B—C”, and the remainder is hydrogen or an arbitrary substituent.
  • the substituent is capable of forming a binding region with a crosslinking agent molecule and / or a functional molecule.
  • the metal-salen complex includes a monomer as shown in (I) and a metal Multimers, including dimers, can be selected that are bonded at the atomic part either directly or via other atoms (such as oxygen).
  • M is a metal atom, for example, Fe, Cr, Mn, Co, Ni, Mo, Ru, Rh, Pd, W, Re, Os, Ir, Pt, Nd, Sm, Eu, or Gd.
  • the disulfide bond region (B) is obtained by bonding an SH group introduced as a substituent into the metal-salen complex (A) and an SH group of the functional molecule (C), or
  • the metal-salen complex (A) or the functional molecule (C) is obtained by bonding the SH group of the functional molecule (C) and the SH group of the cross-linking agent molecule.
  • the ether bond region (B) is obtained by bonding a hydroxyl group introduced as a substituent to the metal salen complex (A) and a hydroxyl group of the functional molecule (C), or The metal-salen complex (A) or the hydroxyl group of the functional molecule (C) is bonded to the hydroxyl group of the cross-linking agent molecule.
  • the ester bond region (B) is obtained by bonding a hydroxyl group or a carboxyl group introduced as a substituent into the metal salen complex (A) and a carboxyl group and a hydroxyl group of the functional molecule (C). Or obtained by bonding a hydroxyl group or a carboxyl group of the metal-salen complex (A) or the functional molecule (C) and a carboxyl group or a hydroxyl group of the functional molecule (C). is there.
  • the amide bond region (B) is obtained by bonding the amide group or carboxyl group introduced as a substituent to the metal salen complex (A) and the carboxyl group or amide group of the functional molecule (C). Or obtained by bonding the carboxyl group or amide group of the metal-salen complex (A) or the functional molecule (C) with the amide group and carboxyl group of the functional molecule (C). It is what was done.
  • a metal-salen complex derivative composed of a conjugate of a functional molecule such as a pharmaceutical molecule and a metal-salen complex with good yield and stability.
  • the disulfide bond region (B) includes, for example, a crosslinking agent molecule having a structure of the following formula (II).
  • the metal-salen complex (A) is bonded to “• O—” in (II), and the disulfide group (—S—S—) bonded to the functional molecule (C) is bonded to at least one of i and j. ing.
  • crosslinking agent molecule in the disulfide bond region (B) has the following structure (III).
  • III The metal-salen complex (A) is bonded to “.C (O) —” of (III), and a disulfide group bonded to the functional molecule (C) is bonded to at least one of i and j.
  • Still another cross-linking agent in the disulfide bond region (B) has the following structure (IV).
  • IV The metal-salen complex (A) is bonded to “.CH 2 —” of (IV), and a disulfide group bonded to the functional molecule (C) is bonded to at least one of i and j.
  • the metal-salen complex and the condensation aid molecule are dehydrated and condensed into a suitable form in which a functional molecule (C) such as an enzyme is directly bonded to the metal-salen complex to produce an active ester (intermediate) of the two.
  • a functional molecule (C) such as an enzyme
  • the condensation aid molecule of the active ester is substituted to form an amide bond, and the metal salen complex and the target component are bonded via the amide bond.
  • N, N′-dicyclohexylcarbodiimide is a dehydrating condensing agent molecule
  • N-hydroxysuccinimide is a condensing aid molecule
  • the metal-salen complex (A) and the functional molecule (C) can also be bonded using the above-described condensation aid molecule (H ONSu) as a crosslinking agent molecule.
  • a metal-salen complex is condensed with a condensation aid molecule, and a disulfide bond is formed by reacting the SH group of the condensation aid molecule with the SH group of a functional molecule. Bind molecules.
  • the metal-salen complex is provided with a functional group for condensing with the functional group of the crosslinking agent molecule in at least one of the side chains of ah described above in order to condense with the crosslinking agent molecule.
  • the metal-salen complex dehydrates and condenses with the hydroxyl group of the crosslinking agent molecule on at least one of the side chains of ah described above in order to bind to the crosslinking agent molecule (condensation aid molecule: H ONSu). It has a functional group (carboxyl group or hydroxyl group) as follows.
  • crosslinker molecules include the following.
  • Carbodiimide condensing agent diisopropylcarbodiimide (DIPC) 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) -carbodiimide (EDC WSCI), 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) -carbodiimide hydrochloride (WSCI ⁇ HCl), Dicyclohexylcarbodiimide (DCC)
  • Fluorophosphate condensing agent [O- (7-azabenzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-tetramethyluronium hexafluorophosphate O-benzotriazol-1-yl-N, N, N ′ , N'-Tetramethyluronium hexafluorophosphate benzotriazol-1-yl-oxy-tris-pyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate, benzotriazol-1-yl-tris (dimethylamino) phosphonium hexafluorophosphide salt (BOP)
  • N-hydroxypolycarboxylic imides N-hydroxysuccinimide (HONS u), N-hydroxy-5-norbornene-2,3-dicarboxylic imide (HONB)
  • the distribution of the metal salen complex, the condensation assistant and the condensation agent is, for example, as follows.
  • Metal salen complex: Condensation aid: Condensing agent 1: 1 to 2: 1 to 2
  • a protein papain-lyophilisate, 10 mg
  • purchased from Sigma-Aldrich and L-cysteine (10 mg) were placed in water (H 2 O, 1 mL) for 30 minutes and stirred. Thereafter, the mixture was stirred with a phosphate buffer (300 ⁇ L, 1M), pH 7.01. And 6 hours after stirring, the compound 11 and the compound 12 (Papain couple
  • a phosphate buffer 300 ⁇ L,
  • An iron-salen complex having a carboxyl group was generated according to the above-described process using 3hydroxybenzoic acid as a starting material.
  • an iron-salen complex, N′-dicyclohexylcarbodiimide (DCC), and hydroxysuccinimide (HONSu) are reacted to form an active ester, which is then reacted with a target substance (papain-lyophilisate):
  • a target substance papain-lyophilisate

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Abstract

収率や安定性の点において優れた金属サレン誘導体を提供すること、そして、この金属サレン錯体の製造方法を提供する。本発明は、金属サレン錯体に、酵素、抗体、抗原、ペプチド、アミノ酸、オリゴヌクレオチド、タンパク質、核酸、及び、医薬分子の少なくとも一つからなる目的成分をアミド結合又はジスルフィド結合を介して結合させた金属サレン錯体誘導体及びその製造方法である。

Description

金属サレン錯体誘導体及びその製造方法
　本発明は、金属サレン錯体の誘導体及びその製造方法に関するものである。
　金属サレン錯体として、金属触媒として知られる鉄サレン錯体が知られている。さらに、出願人は、鉄サレン錯体自身が磁性を有すること、さらに、抗腫瘍効果を有することを明らかにし、鉄サレン錯体を人や動物に投与後、体外から磁場を適用することによって、鉄サレン錯体を目的の患部に誘導して鉄サレン錯体の薬理効果を局所に集中することができることを提案した。
　さらに、出願人は、鉄サレン錯体に医薬分子を結合することによって、医薬分子を磁場によって患部組織に誘導できることを明らかにした。この鉄サレン錯体は、特開2009-173631、特開2009-196913、特開2009-196914、特開2009-256232、特開2009-256233、そして、特開2009-274962に開示されている。
　また、出願人は、特開2009-287949号公報に、鉄サレン錯体にビオチン－アビジン反応により抗体及び抗原を接続することによって、結合型抗原又は抗体と、遊離型抗原又は抗体とを磁気によって分離できる、抗体又は抗原の定量方法を提案した。
特開2009-173631号公報 特開2009-196913号公報 特開2009-196914号公報 特開2009-256232号公報 特開2009-256233号公報 特開2009-274962号公報 特開2009-287949号公報
　しかしながら、前記先行技術では、金属サレン錯体と医薬分子、抗原、抗体等とを十分結合できず、金属サレン錯体の誘導体の収率や安定性に難があった。そこで、本発明は、収率や安定性の点において優れた金属サレン錯体の誘導体を提供すること、そして、この金属サレン錯体の製造方法を提供することを目的とするものである。
　前記目的を達成するために本発明は、金属サレン錯体に、酵素、抗体、抗原、ペプチド、アミノ酸、オリゴヌクレオチド、タンパク質、核酸、及び、医薬分子の少なくとも一つからなる機能性分子を、ジスルフィド結合、エーテル結合、エステル結合、アミド結合の少なくとも一つを介して結合させた金属サレン錯体の誘導体及びその製造方法であることを特徴とするものである。好適には、金属サレン錯体と機能性分子の結合は両者を架橋する架橋剤を介して生成される。
　すなわち、本発明は、Ａ－Ｂ－Ｃ（Ａ：金属サレン錯体、Ｂ：ジスルフィド結合、エーテル結合、エステル結合、アミド結合の少なくとも一つを備える結合領域、Ｃ：酵素、抗体、抗原、ペプチド、アミノ酸、オリゴヌクレオチド、タンパク質、核酸、及び、医薬分子の少なくとも一つからなる機能性分子）で表わされる、金属サレン錯体誘導体であることを特徴とする。
　本発明の好適な形態は、前記結合領域（Ｂ）は前記金属サレン錯体（Ａ）と前記機能性分子（Ｃ）とを架橋する架橋剤分子を備え、前記金属サレン錯体（Ａ）と前記架橋剤分子とがジスルフィド結合、エーテル結合、エステル結合、又は、アミド結合によって結合し、前記架橋剤分子と前記機能性分子（Ｃ）とがジスルフィド結合、エーテル結合、エステル結合、又は、アミド結合によって結合されている。
　前記金属サレン錯体（Ａ）は、特に限定されるものではなく、例えば、下記（Ｉ）式によって示されるものである。
（Ｉ）
 
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000001
　ａ～ｈの少なくとも一つが前記（「－Ｂ－Ｃ」であり、残りは、水素又は任意の置換基である。置換基は、架橋剤分子及び／又は機能性分子と結合領域が形成できるものであればよく、例えば、水酸基、アミド基、カルボキシル基、ＳＨ基の少なくとも一つである。なお、金属サレン錯体としては、（Ｉ）で示されるような単量体のものと、互いに、金属原子の部分で直接又は他の原子（酸素など）を介して結合した、２量体を含む多量体が選択可能である。
　Ｍは金属原子であり、例えば、Ｆｅ、Ｃｒ、Ｍｎ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｍｏ、Ｒｕ、Ｒｈ、Ｐｄ、Ｗ、Ｒｅ、Ｏｓ、Ｉｒ、Ｐｔ、Ｎｄ、Ｓｍ、Ｅｕ、又は、Ｇｄである。
　前記ジスルフィド結合領域（Ｂ）は、前記金属サレン錯体（Ａ）に置換基として導入されたＳＨ基と前記機能性分子（Ｃ）のＳＨ基とが結合して得られたものであるか、又は、前記金属サレン錯体（Ａ）又は前記機能性分子（Ｃ）のＳＨ基と前記架橋剤分子のＳＨ基とが結合して得られたものである。
　前記エーテル結合領域（Ｂ）は、前記金属サレン錯体（Ａ）に置換基として導入された水酸基と前記機能性分子（Ｃ）の水酸基とが結合して得られたものであるか、又は、前記金属サレン錯体（Ａ）又は前記機能性分子（Ｃ）の水酸基と前記架橋剤分子の水酸基とが結合して得られたものである。
　前記エステル結合領域（Ｂ）は、前記金属サレン錯体（Ａ）に置換基として導入された水酸基又はカルボキシル基と、前記機能性分子（Ｃ）のカルボキシル基と水酸基とが結合して得られたものであるか、又は、前記金属サレン錯体（Ａ）又は前記機能性分子（Ｃ）の水酸基又はカルボキシル基と、前記機能性分子（Ｃ）のカルボキシル基又は水酸基とが結合して得られたものである。
　前記アミド結合領域（Ｂ）は、前記金属サレン錯体（Ａ）に置換基として導入されたアミド基又はカルボキシル基と、前記機能性分子（Ｃ）のカルボキシル基又はアミド基とが結合して得られたものであるか、又は、前記金属サレン錯体（Ａ）又は前記機能性分子（Ｃ）のカルボキシル基又はアミド基と、前記機能性分子（Ｃ）のアミド基とカルボキシル基とが結合して得られたものである。
　以上説明したように、本発明によれば、収率や安定性が良好な、医薬分子等機能性分子と金属サレン錯体との結合体とからなる金属サレン錯体誘導体を提供することができる。
　ジスルフィド結合領域（Ｂ）は、例えば、下記（ＩＩ）式の構造からなる架橋剤分子を備える。
　　　　　　　　　（ＩＩ）
 
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000002

　（ＩＩ）の「・Ｏ－」に金属サレン錯体（Ａ）が結合し、ｉとｊの少なくとも一つに前記機能性分子（Ｃ）に結合するジスルフィド基（－Ｓ－Ｓ－）が結合している。
　前記ジスルフィド結合領域（Ｂ）の架橋剤分子の他の例は下記（ＩＩＩ）の構造からなる。
　　　　　　　　　（ＩＩＩ）
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000003

　（ＩＩＩ）の「・Ｃ（Ｏ）－」に金属サレン錯体（Ａ）が結合し、ｉとｊの少なくとも一つに前記機能性分子（Ｃ）に結合するジスルフィド基が結合している。
　前記ジスルフィド結合領域（Ｂ）の更に他の架橋剤は、下記（ＩＶ）の構造からなる。
　　　　　　　　　（ＩＶ）
 
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000004

　前記（ＩＶ）の「・ＣＨ２－」に金属サレン錯体（Ａ）が結合し、ｉとｊの少なくとも一つに前記機能性分子（Ｃ）に結合するジスルフィド基が結合している。
　金属サレン錯体に酵素等の機能性分子（Ｃ）を直接結合する好適な形態に、金属サレン錯体と縮合助剤分子とを脱水縮合して、両者の活性エステル（中間体）を生成し、活性エステルに機能性分子（Ｃ）のアミノ基を反応させることにより、活性エステルの縮合助剤分子を置換して、アミド結合を形成し、アミド結合を介して金属サレン錯体と目的成分とを結合することがある。これを示すと、次の反応式に示すとおりである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000005

　金属サレン錯体（Ａ）　　　　　　　　　　　　活性エステル
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000006

　　　　　　　　　　　　目的成分（Ｃ）
　ここで、N,N´－ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）は脱水縮合剤分子であり、Ｎ－ヒドロキシコハク酸イミド( H ONSu)は縮合助剤分子である。
　既述の縮合助剤分子（H ONSu）を架橋剤分子として、金属サレン錯体（Ａ）と機能性分子（Ｃ）とを結合することもできる。金属サレン錯体と縮合助剤分子とを縮合し、縮合助剤分子のＳＨ基と機能性分子のＳＨ基とを反応させることによりジスルフィド結合を形成し、ジスルフィド結合を介して金属サレン錯体と機能性分子とを結合する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000007

 
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000008
 
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000009
　金属サレン錯体は、架橋剤分子と縮合するために、、既述のａ－ｈの側鎖の少なくとも一つに、架橋剤分子の官能基と縮合するための官能基を備える。例えば、金属サレン錯体は、架橋剤分子（縮合助剤分子：H ONSu)）と結合するために、既述のａ－ｈの側鎖の少なくとも一つに、架橋剤分子の水酸基と脱水縮合する官能基（カルボキシル基又は水酸基）を下記のとおり有している。
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000010
　架橋剤分子（縮合助剤分子）としては、例えば、次のものがある。
　カルボジイミド系縮合剤
　ジイソプロピルカルボジイミド(DIPC)
　１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）－カルボジイミド(EDC=WSCI)、
　１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）－カルボジイミド塩酸塩(WSCI・HCl)、
　ジシクロヘキシルカルボジイミド(DCC)
　フルオロホスフェート系縮合剤
　［Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
　Ｏ－ベンゾトリアゾール－１－イル－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
　ベンゾトリアゾール－１－イル－オキシ－トリス－ピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート、ベンゾトリアゾール－１－イル－トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロリン化物塩(BOP)
　その他
　ジフェニルホスホリルアジド(DPPA)
　既述の縮合助剤として、次のものがある。
　Ｎ－ヒドロキシ多価カルボン酸イミド類
　Ｎ－ヒドロキシコハク酸イミド(HONS u)、
　Ｎ－ヒドロキシ－５－ノルボルネン－２，３－ジカルボン酸イミド（HONB）
　Ｎ－ヒドロキシトリアゾール類
　１－ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt)、
　その他
　３－ヒドロキシ－４－オキソ－３，４－ジヒドロ－１，２，３－ベンゾトリアジン(HO Obt)、
　２－ヒドロキシイミノ－２－シアノ酢酸エチルエステル
　p-ニトロフェノール(HONp)、
　ペンタフルオロフェノール(HOPfp)
　金属サレン錯体と縮合助剤と縮合剤の配分は例えば次のようである。
金属サレン錯体：縮合助剤：縮合剤＝１：１～２：１～２
　目的成分が金属サレン錯体と結合したことは、質量分析で確認可能である。アミド結合、ジスルフィド結合が生じていることは、質量分析、ＩＲ分光法で確認できる。
　金属サレン錯体の製造例
　次に、以下に説明するように、アミノ基を置換基として有する金属サレン錯体を製造した。
Step 1: 
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000011
4-（ニトロフェノール）nitrophenol (25g, 0.18mol)、（ヘキサメチレン－テトラミン）hexamethylene tetramine (25g,0.18mol)、（ポリリン酸）polyphosphoric acid (200ml)の混合物を１時間１００℃で攪拌した。その後、その混合物を500mlの酢酸エチルと１Lの水の中に入れ、完全に溶解するまで攪拌した。さらにその溶液に400mlの酢酸エチルを追加で加えたところその溶液は２つの相に分離し、水の相を取り除き、残りの化合物を塩性溶剤で２回洗浄し、無水MgSO4で乾燥させた結果、化合物2が１７ｇ（収率57%）合成できた。
Step 2: 
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000012
化合物2 (17g, 0.10mol), （無水酢酸）acetic anhydride (200ml), 硫酸（少量：約15ml）を室温で１時間攪拌させた。得られた溶液は、氷水（２L）の中に0.5時間混ぜ、加水分解を行った。得られた溶液をフィルターにかけ、大気中で乾燥させたところ白い粉末状のものが得られた。酢酸エチルを含む溶液を使ってその粉末を再結晶化させたところ、２４ｇの化合物3（収率76%）の白い結晶を得ることができた。
Step 3: 
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000013
化合物3 (24g, 77mmolとメタノール(500ml)に10%のパラジウムを担持したカーボン(2.4g)の混合物を一晩1.5気圧の水素還元雰囲気で還元した。終了後、フィルターでろ過したところ茶色油状の化合物4 (21g)が合成できた。
Step 4, 5: 
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000014
無水ジクロメタン(DCM) (200ml)に化合物4 (21g, 75mmol), 二炭酸ジ-tert-ブチル（di(tert-butyl) dicarbonate）(18g, 82mmol)を窒素雰囲気で一晩攪拌した。得られた溶液を真空中で蒸発させた後、メタノール(100ml)で溶解させた。その後、水酸化ナトリウム(15g, 374mmol)と水(50ml)を加え、5時間還流させた。その後冷却し、フィルターでろ過し、水で洗浄後、真空中て乾燥させたところ茶色化合物がえられた。得られた化合物は、シリカジェルを使ったフラッシュクロマトグラフィーを２回行うことで、10gの化合物6（収率58%）が得られた。
Step 6:
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000015
　無水エタノール400mlの中に化合物 6 (10g, 42mmol)を入れ、加熱しながら還流させ、無水エタノール20mlにエチレンジアミン(1.3g, 21mmol)を0.5時間攪拌しながら数滴加えた。そして、その混合溶液を氷の容器に入れて冷却し15分間かき混ぜた。その後、200mlのエタノールで洗浄しフィルターをかけ、真空で乾燥させたところ化合物7が8.5g （収率82%）で合成できた。
鉄サレン錯体とたんぱく質の結合例（ジスフィルド結合）
STEP 1:
化合物７Ａ
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000016
化合物８
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000017
　化合物８を、Manfred T. Reetz, Martin Rentzsch, Andreas Pletsch, Matthias Maywald, Peter Maiwald, Jerome j.-P. Peyralans, Andrea Maichele, Yu Fu, Ning Jiao, Frank Hollmann, Regis Mondiere and Andreas Taglieber, ‘Direct evolution of enantioselective hybrid catalysis: a novel concept in asymmetric catalysis’, Tetrahedron 63 (2007) 6404-6414、を参照して準備する。
STEP 2:
　化合物７Ａ(134mg,0.338mmol)、化合物８(122mg,0.721mmol)：架橋剤分子、diisopropylcarbodiimide (ジイソプロピルカーボジイミド)(170μmol)：脱水縮合剤、NaHCO3 (75mg; 0.89mmol)をTHF（テトラヒドロフラン）(20mL)にN, N-4-（ジメチルアミノピリジン）dimethylaminopyridinを 0.1Mを溶かした溶液に入れ、室温で２時間攪拌した。溶液は、エチルアセテートとヘキサンを１：１で混ぜた溶液に混ぜてシリカゲル（２０ｇ）を用いたクロマトグラフィーで化合物９（黄色、115ｇ、収率62％）を得た。
化合物９
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000018
STEP３：
　化合物９（17mg,31μmol）、FeCl3(11mg,)をメタノール(4mL)にいれ、室温、大気中で１６時間攪拌した。茶色の化合物が得られた。その後、真空中で乾燥させた。得られた化合物はジクロロメタン400mlで希釈し、塩性溶液で２回洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、真空中で乾燥させたところ化合物１０（18mg、収率90％）が得られた。
化合物１０
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000019
STEP4:
　化合物１０とシグマアルドリッチから購入したたんぱく質（papain-lyophilisate, 10mg）とL-cysteine (10mg)を水（H2O、1mL)に３０分入れて攪拌した。その後、リン酸緩衝液（300μL、１M）、ｐH=7.01で攪拌した。そして、攪拌から６時間後化合物１１及び化合物１２（両方のＳＨ基にPapainが結合）が合成された。
化合物１１
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000020

化合物１２
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000021

 
　３ヒドロキシ安息香酸を出発物質として、既述の工程にしたがって、カルボキシル基を有する鉄サレン錯体を生成した。次いで、鉄サレン錯体と、N´－ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）と、ヒドロキシコハク酸イミド(HONSu)と、を反応させて活性エステルを生成させ、これに、たんぱく質（papain-lyophilisate）：目的物質を反応させると、タンパク質がヒドロキシコハク酸イミドを置換して、鉄サレン錯体にアミド結合を介して結合した。アミド結合は赤外分光光度計によって確認された。

Claims (11)

  1. 　Ａ－Ｂ－Ｃ（Ａ：金属サレン錯体、Ｂ：ジスルフィド結合、エーテル結合、エステル結合、アミド結合の少なくとも一つを備える結合領域、Ｃ：酵素、抗体、抗原、ペプチド、アミノ酸、オリゴヌクレオチド、タンパク質、核酸、及び、医薬分子の少なくとも一つからなる機能性分子）で表わされる、金属サレン錯体誘導体。
  2. 　前記結合領域（Ｂ）は前記金属サレン錯体（Ａ）と前記機能性分子（Ｃ）とを架橋する架橋剤分子を備え、前記金属サレン錯体（Ａ）と前記架橋剤分子とがジスルフィド結合、エーテル結合、エステル結合、又は、アミド結合によって結合し、前記架橋剤分子と前記機能性分子（Ｃ）とがジスルフィド結合、エーテル結合、エステル結合、又は、アミド結合によって結合されている、請求項１記載の金属サレン錯体誘導体。
  3. 　前記金属サレン錯体（Ａ）は下記（Ｉ）式によって示されるものであり、
    （Ｉ）
     
    Figure JPOXMLDOC01-appb-I000022

    前記ａ～ｈの少なくとも一つが前記「－Ｂ－Ｃ」であり、
    残りは、水素又は任意の置換基であり、
    Ｍは金属原子である請求項１記載の金属サレン錯体誘導体。
  4. 　前記ジスルフィド結合領域（Ｂ）は、前記金属サレン錯体（Ａ）に置換基として導入されたＳＨ基と前記機能性分子（Ｃ）のＳＨ基とが結合して得られたものであるか、又は、前記金属サレン錯体（Ａ）又は前記機能性分子（Ｃ）のＳＨ基と前記架橋剤分子のＳＨ基とが結合して得られたものである、請求項２記載の金属サレン錯体誘導体。
  5. 　前記エーテル結合領域（Ｂ）は、前記金属サレン錯体（Ａ）に置換基として導入された水酸基と前記機能性分子（Ｃ）の水酸基とが結合して得られたものであるか、又は、前記金属サレン錯体（Ａ）又は前記機能性分子（Ｃ）の水酸基と前記架橋剤分子の水酸基とが結合して得られたものである、請求項２記載の金属サレン錯体誘導体。
  6. 　前記エステル結合領域（Ｂ）は、
    　前記金属サレン錯体（Ａ）に置換基として導入された水酸基又はカルボキシル基と、前記機能性分子（Ｃ）のカルボキシル基と水酸基とが結合して得られたものであるか、
    　又は、
    　前記金属サレン錯体（Ａ）又は前記機能性分子（Ｃ）の水酸基又はカルボキシル基と、前記機能性分子（Ｃ）のカルボキシル基又は水酸基とが結合して得られたものである、
    　請求項２記載の金属サレン錯体誘導体。
  7. 　前記アミド結合領域（Ｂ）は、
    　前記金属サレン錯体（Ａ）に置換基として導入されたアミド基又はカルボキシル基と、前記機能性分子（Ｃ）のカルボキシル基又はアミド基とが結合して得られたものであるか、
    　又は、
    　前記金属サレン錯体（Ａ）又は前記機能性分子（Ｃ）のカルボキシル基又はアミド基と、前記機能性分子（Ｃ）のアミド基とカルボキシル基とが結合して得られたものである、請求項２記載の金属サレン錯体誘導体。
  8. 　金属サレン錯体に、酵素、抗体、抗原、ペプチド、アミノ酸、オリゴヌクレオチド、タンパク質、核酸、及び、医薬分子の少なくとも一つからなる機能性分子を、ジスルフィド結合、エーテル結合、エステル結合、アミド結合の少なくとも一つを介して結合させる、金属サレン錯体誘導体の製造方法。
  9. 　前記金属サレン錯体と前記機能性分子とを架橋剤分子を介して結合させる、請求項８記載の金属サレン錯体誘導体の製造方法。
  10. 　前記金属サレン錯体と縮合助剤分子とを脱水縮合して両者の活性エステルを生成し、当該活性エステルに前記機能性分子を反応させることにより、前記活性エステルの前記縮合助剤分子を置換して、前記金属サレン錯体と前記目的成分とを結合する、請求項８記載の金属サレン錯体誘導体の製造方法。
  11. 　前記縮合助剤分子がＮ－ヒドロキシコハク酸イミドである、請求項１０記載の金属サレン錯体誘導体の製造方法。
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