WO2011124376A1 - Neue ansätze zur alzheimer-diagnose - Google Patents

Neue ansätze zur alzheimer-diagnose Download PDF

Info

Publication number
WO2011124376A1
WO2011124376A1 PCT/EP2011/001724 EP2011001724W WO2011124376A1 WO 2011124376 A1 WO2011124376 A1 WO 2011124376A1 EP 2011001724 W EP2011001724 W EP 2011001724W WO 2011124376 A1 WO2011124376 A1 WO 2011124376A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
disease
alzheimer
ratio
patient
subject
Prior art date
Application number
PCT/EP2011/001724
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Hermann Esselmann
Teja W. GRÖMER
Johannes Kornhuber
Piotr Lewczuk
Juan Manuel Maler
Jens Wiltfang
Original Assignee
Universität Duisburg-Essen
Friedrich-Alexander-Universität Erlangen-Nürnberg
Zentralinstitut Für Seelische Gesundheit
Universitätsklinikum Erlangen
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Universität Duisburg-Essen, Friedrich-Alexander-Universität Erlangen-Nürnberg, Zentralinstitut Für Seelische Gesundheit, Universitätsklinikum Erlangen filed Critical Universität Duisburg-Essen
Priority to EP11713692A priority Critical patent/EP2556375A1/de
Priority to CA2795236A priority patent/CA2795236A1/en
Priority to BR112012025870A priority patent/BR112012025870A2/pt
Priority to CN2011800286766A priority patent/CN102933966A/zh
Priority to JP2013503037A priority patent/JP5687332B2/ja
Priority to US13/639,866 priority patent/US20130045542A1/en
Publication of WO2011124376A1 publication Critical patent/WO2011124376A1/de

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
    • G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
    • G01N2333/4701—Details
    • G01N2333/4709—Amyloid plaque core protein

Definitions

  • the present invention relates to the field of dementia disorders, and more particularly to the field of neurodegenerative diseases, with the present invention substantially focused on Alzheimer's disease.
  • the present invention relates to the field of preclinical and clinical precursors of Alzheimer's disease.
  • the present invention relates to a novel neurochemical approach or a novel neurochemical analysis of certain parameters in a sample of the subject or patient to be examined, wherein a significantly improved prognosis with regard to the occurrence or development of Alzheimer's disease is made possible It is possible to conclude that Alzheimer's disease or its preclinical and clinical precursors are present.
  • the present invention relates to the use of a quantitative ratio of two mutually different amyloid beta peptides in a sample of a subject's body fluid to determine its likelihood of contracting Alzheimer's disease or determining its disease on a subject Precursor of Alzheimer's disease.
  • the present invention relates to corresponding methods with which the probability of a subject or patient can be determined to fall ill with Alzheimer's disease, or with which the presence of such a disease can be concluded.
  • the present invention relates to a kit, by means of which provision is made for determining the probability of a patient or volunteer suffering from Alzheimer's disease or determining the presence of a preclinical or clinical precursor of the Alzheimer's disease. Disease in the subject in question or patients is made possible.
  • CONFIRMATION COPY Dementia diseases are generally understood to be a deficit in the subjects or patients concerned with regard to cognitive, emotional or social abilities, which, as the disease progresses, leads to a sometimes profound impairment of the everyday life of the individuals affected by it.
  • Decisive for a dementia disease is the loss of already acquired skills, in which language, motor skills and personality structure may be affected.
  • Dementia disease is usually associated with a significant deterioration in short-term memory as well as a severe impairment of the mind.
  • a major component of dementia is the onset of so-called neurodegenerative diseases such as Alzheimer's disease, frontotemporal dementia and Lewy body dementia.
  • Neurodegenerative diseases are generally understood a group of usually slowly progressive, hereditary or sporadic occurring or conditional diseases of the nervous system. Characteristic of such diseases is the progressive loss of nerve cells, which can lead to various neurological symptoms. Neurodegenerative diseases can generally occur at all ages, but with increasing age, the risk of developing such a disease, significantly increases. Neurodegenerative diseases are usually diffuse or generalized and are generally associated with characteristic histological patterns of damage.
  • Alzheimer's disease is also referred to as Alzheimer's disease and is generally referred to in the following as being shortened by the acronym "AD".
  • AD Alzheimer's disease
  • Alzheimer's disease is equally a neurodegenerative disease that occurs especially in the elderly.
  • Alzheimer's disease occurs in its most common form in persons over the age of 65 years, with the corresponding precursor forms of Alzheimer's disease or preclinical and / or clinical precursors of Alzheimer's disease can occur much earlier.
  • the prevalence of neurodegenerative diseases and in particular Alzheimer's disease is rapidly increasing. For example, by the end of 2009, the number of people with Alzheimer's disease was estimated at approximately 35 million people worldwide, and estimates suggest that the number of people with Alzheimer's disease will reach more than 100 million by 2050 People are rising.
  • Alzheimer's disease is the most prevalent dementia disease.
  • Alzheimer's disease there is a certain familial accumulation, namely that about 15% to 20% of the cases of Alzheimer's disease are associated with a particular familial cluster.
  • Such cases are, in particular, those in which not only the person concerned but also persons from the circle of siblings, parents or grandparents etc. are affected by Alzheimer's disease.
  • genetic predisposition is also crucial, in which case these are in particular mutations in presenilin genes and in the APP gene (amyloid precursor gene).
  • the genetic proportion is less than 0.5%, so that, as a result, the vast majority of all Alzheimer's cases are of sporadic origin.
  • Alzheimer's disease As for Alzheimer's disease, it is associated with a worsening of cognitive performance over time, usually accompanied by a decrease in daily activities, behavioral problems and neuropsychological symptoms. In this context is then generally spoken of Alzheimer's dementia. Alzheimer's dementia is, as it were, the consequence or result of Alzheimer's disease describing the disease process. Alzheimer's dementia is therefore primarily used when the extent of brain The damage is so great that cognitive deficits can no longer be successfully compensated by still intact neurons. In general, the term Alzheimer's disease is encompassed by the term Alzheimer's disease.
  • Pathognostic for Alzheimer's disease are the plaques forming in the brain of the affected person, which have significantly incorrectly folded amyloid beta peptides, and the neurofibrils accumulating in the neurons.
  • the intracellular neurofibrillary tangles consist essentially of the tau protein, which then aggregates to the fibrils in question when excessively phosphorylated.
  • amyloid-beta-peptides which are also called A-beta-proteins, A-beta-peptides, A-beta and Aß-peptides, arise from the so called amyloid-precursor-protein (APP) which is an integral membrane protein.
  • APP amyloid-precursor-protein
  • the APP is a type I transmembrane protein with an amino-terminal end located on the extracellular side. The carboxyl terminus of the protein is correspondingly located on the intracellular side.
  • APP is cleaved by certain proteinases, the so-called secretases, in which particular the ß-secretase and the ⁇ -secretase is of particular importance.
  • the cleavage of APP leads to the release of the A-beta peptides from the precursor protein, wherein in a so-called amyloidogenic pathway APP is first cut on the extracellular side by the ⁇ -secretase. In a subsequent step, a further cut is made by the ⁇ -secretase, which takes place within the transmembrane domain of APP and leads to a release of the A-beta peptides.
  • the A beta peptides are a potentially neurotoxic fragment of the amyloid precursor protein, formed by the activity of ⁇ - and ⁇ -secretase, which generally has a length of 37-42 amino acids.
  • a beta-peptides arising in this context is the 40 amino acid A ⁇ (1-40), while a minor portion is formed from A ⁇ (1-42) corresponding to 42 amino acids.
  • the longer A ⁇ (1-42) has a higher tendency to aggregate than the smaller A ⁇ (1-40).
  • a number of other A beta peptides may be formed, such as at the amino terminal end truncated A beta peptides such as A ⁇ (2-40) and A ⁇ (2-42).
  • A-beta peptides are associated with the pathological development of Alzheimer's disease.
  • acetylcholinesterase inhibitors by means of which the enzymatic cleavage of the acetylcholine occurring in low levels in Alzheimer's patients is to be reduced.
  • this is not a therapeutic approach that does not affect the disease itself.
  • acetylcholinesterase inhibitors such as dosespezil, rivastigmine and galantamine, aims at a symptomatic treatment of Alzheimer's disease. It is based on such an approach it is only possible to improve cognitive performance for a limited period or to maintain it at a stagnant level.
  • cerebrospinal fluid or cerebrospinal fluid (CSF) is used in particular for this purpose. It is primarily aimed at the analysis of certain biomarkers, in which connection special, occurring in the liquor A beta peptides are used for analysis.
  • the disadvantage is that while the sample must be removed via a complex as not risk-free and sometimes painful puncture, which can sometimes be accompanied by undesirable infections.
  • cerebrospinal fluid sampling is only of limited use for the examination of a first suspicion of possible Alzheimer's disease, as it may be, for example, in patients with a mild cognitive disorder, and also only to a limited extent for the risk assessment of imminent Alzheimer's dementia.
  • CSF-NDD CSF-based Neurochemical Dementia Diagnostics
  • Alzheimer's disease or prognosis for possible disease is provided Alzheimer's disease in as early as possible, especially in a preclinical or early clinical stage, should be possible.
  • biomarkers from a specific sample are to be used in a targeted manner in order on this basis to make possible a premature statement with regard to the presence or possible development of Alzheimer's disease.
  • the possibility should also be opened based on the present invention to observe in a simple and reliable manner the course of Alzheimer's disease that has already erupted or to reconstruct the effectiveness of therapeutic approaches.
  • the present invention proposes - according to a first aspect of the present invention - the use of at least one quantitative ratio of two mutually different amyloid beta-peptides in a sample of a body fluid of a subject or patient to determine its probability to contract Alzheimer's disease, or to determine its likelihood of contracting Alzheimer's disease or to determine its disease on a precursor of Alzheimer's disease according to claim 1; Further, advantageous embodiments of this aspect of the invention are the subject of the relevant subclaims.
  • Another object of the present invention - according to another aspect of the present invention - are methods for determining the probability of a subject or patient to contract Alzheimer's disease according to claim 31 and claim 32;
  • a further advantageous embodiment of this aspect of the invention is the subject of the relevant subclaim.
  • the present invention thus - according to a first aspect of the present invention - is thus the use of at least one quantitative ratio (quotient) of two mutually different amyloid beta-peptides (A-beta; A ⁇ ) in a sample of a body fluid of a subject / or patients to determine their likelihood (risk) of contracting Alzheimer's disease (Alzheimer's disease, AD) and / or of determining (diagnosing) their disease in a precursor of Alzheimer's disease, where the amyloid-beta Peptides are selected from (a) A ⁇ (l-42), (b) A ⁇ (2-40) and (c) A ⁇ (2-42) and wherein the quantitative ratio of (a) / (b) or vice versa and / or from (a) / (c) or vice versa.
  • A-beta amyloid beta-peptides
  • the specific ratio of certain beta-amyloid peptides in terms of the presence of Alzheimer's disease is of high significance and thus the specific ratio of certain beta-amyloid peptides as a reliable indicator of the presence of Alzheimer's disease can also be used at an early stage of the disease, such as preclinical and early-clinical forms of Alzheimer's disease.
  • this is a use or a method which can be carried out ex vivo or in vitro on the basis of existing samples of body fluids, in particular blood-based samples, which ensures good standardization with easy practicability .
  • the inventive concept represents a significant relief of the subject / patient, since the underlying sample, especially on the basis of blood, without appreciable impairment or adverse reaction can be obtained.
  • a basic idea of the present invention is thus to be seen in enabling a meaningful or reliable prognosis or prediction with regard to the development of Alzheimer's disease based on the determination of the quantitative ratio of two specific amyloid beta peptides.
  • the present invention allows a meaningful determination or diagnosis with regard to the possible presence of a Alzheimer's disease or Alzheimer's disease - and this already at a very early stage of the disease, which can be determined even in the preclinical or early clinical phase.
  • the Applicant has found, in a completely surprising manner, that it is precisely the specific ratio of the amyloid beta peptide A ⁇ (1-42) on the one hand to the amyloid beta peptide A ⁇ (2-40) or to the amyloid beta, respectively
  • peptide A ⁇ (2-42) from a sample of a body fluid, preferably blood leads to particularly meaningful results in the analysis of the presence of Alzheimer's disease or the prognosis of the occurrence of Alzheimer's disease.
  • the principle underlying the present invention thus focuses on a neurochemical analysis of a sample of a body fluid, in particular based on blood, with regard to the specific, previously mentioned amyloid beta peptides in the sense of Alzheimer's disease or their specific Precursors of indicative biomarkers to enable in this way the previously mentioned statements regarding Alzheimer's disease in a subject or patient.
  • the abovementioned specific amyloid beta peptides - namely A ⁇ (1-42) on the one hand and A ⁇ (2-40) or A ⁇ (2-42) on the other hand - therefore function as indicative biomarkers, namely with respect to a particular specific concentration and As a result, with a specific relationship to each other, specific to the presence of Alzheimer's disease in a patient or subject.
  • the amyloid beta peptides in question and their specific concentrations or amounts in a sample are thus associated with Alzheimer's disease.
  • the amyloid beta peptides in question are thus to a certain extent indicators of pathological processes in the context of Alzheimer's disease.
  • the concept according to the invention is particularly meaningful on the one hand because it is based on the analysis of defined neurochemical biomarkers in a defined sample, which are directly related to Alzheimer's disease.
  • the use according to the invention or the method according to the invention as described in detail below, compared to the methods used in the prior art, such as psychometric methods, neuro-imaging methods or the like, significantly simpler and cheaper to perform.
  • biomarkers or bioindicators of the aforementioned type is - in addition to a statement as to whether a subject or patient Alzheimer's disease is present or whether there is a certain probability with respect to the subject or patient that this is due to an Alzheimer's Disease - even a further statement is possible to what extent any therapeutically active substances have a positive effect on the course of Alzheimer's disease, d. H. the biomarkers can equally be used as indicators of any drug effects.
  • the present invention is characterized in that based on the conception according to the invention a rapid and meaningful analysis is possible with regard to Alzheimer's disease or with respect to the likelihood of occurrence of such a disease, which in addition is not or is not for the patient in particular with regard to the sample provision is only a little onerous.
  • the present invention given possibility of determining an Alzheimer's disease already in a preclinical or early clinical stage or by the ability to make a statement about the possible occurrence of Alzheimer's disease in the further life of the subject or patient can already in at a very early stage or in the sense of a preventive approach to the possible Alzheimer's disease, for example with regard to a correspondingly optimized life leadership of the subject or with regard to the purposeful administration of medicaments, which can for example improve the cognitive abilities of the subject or the patient or delay the progressive course of the disease.
  • the underlying peptide A ⁇ (1-42) is an amyloid beta-peptide 42 amino acids in length, whose first position or amino-terminal end is formed by aspartate, while A ⁇ (2-40 ) or A ⁇ (2-42) are amyloid beta peptides which are 40 amino acids and 42 amino acids in length and are each truncated at their amino-terminal end.
  • a ⁇ (2-40 ) or A ⁇ (2-42) amyloid beta peptides which are 40 amino acids and 42 amino acids in length and are each truncated at their amino-terminal end.
  • amyloid beta peptides in question are well known to those skilled in the art both in structure and in terms of their nomenclature, so that no further explanation is needed in this regard.
  • the term "quantitative ratio” or “quotient”, as used in the context of the present invention, focuses in particular on the relative concentration or the relative amount of the abovementioned amyloid beta peptides to one another and thus on a relative quantification of in Speech amyloid beta peptides.
  • the determination of the respective concentration or quantity and the resulting ratios of the corresponding amyloid beta peptides can be determined or determined on the basis of analysis methods which are well known to the person skilled in the art.
  • a preferred method according to the invention for determining the respective ratios on the basis of immunoprecipitation with a subsequent protein separation and detection method is given below in detail.
  • the subject or patient can generally be a human or animal being, in particular a mammal (mammal).
  • the subject or patient is a human being.
  • the sample or body fluid of the test person or patient may, in a non-restrictive manner, be liquids which originate from or are formed by the subject's body.
  • the sample or body fluid may be, in particular, blood, plasma, lymph, urine and / or cerebrospinal fluid [cerebrospinal fluid].
  • rebrospinalis Cerebrospinal fluid
  • body fluid based on blood, such as.
  • blood plasma or blood serum particularly advantageous because in particular on this basis - in a completely surprising way - can achieve particularly meaningful results and also the sampling is simplified.
  • these symptoms of a particularly mild brain performance disorder preferably a particularly mild memory disorder
  • they may in particular show symptoms of mild cognitive impairment (MCI).
  • mild cognitive impairment may be an isolated dementia disorder or an isolated memory impairment.
  • the subjects or patients who are considered or further investigated in the context of the use according to the invention or the method according to the invention have cognitive impairments or weaknesses which are more pronounced than in individuals of comparable age or comparable constitution.
  • mild cognitive impairment is characterized by the fact that the symptoms are not yet or not so pronounced that they lead to a lasting impairment of the subject or patient in his daily activities.
  • the use according to the invention or the method according to the invention is also of great interest in particular with regard to patients or subjects with mild cognitive impairment (MCI), since in general persons with a slight cognitive impairment are more likely to develop Alzheimer's disease in the further course ill. Studies show that 10% to 15% of people with mild cognitive impairment suffer from Alzheimer's disease each year. 724
  • the present invention is generally not directed to subjects or patients with mild cognitive impairment (MCI), in which using the inventive use or the method according to the invention can be diagnostically clarified whether an Alzheimer's disease is present or if there is a risk limited development of Alzheimer's disease. Rather, such subjects or patients without specific symptoms of cognitive impairment or - especially with regard to a differential diagnosis - even those patients or subjects are examined in which there is at least the suspicion of a different from Alzheimer's disease dementia.
  • MCI mild cognitive impairment
  • the precursor of Alzheimer's disease which can be detected or diagnosed based on the present invention, it is particularly a preclinical or subclinical stage of Alzheimer's disease.
  • the preclinical precursor of Alzheimer's disease can be, in particular, an incipient or prodromal Alzheimer's disease, which is also synonymously referred to as incipient AD.
  • the precursor of Alzheimer's disease may be a beginning or probable Alzheimer's disease.
  • the incipient Alzheimer's disease may be a precursor of Alzheimer's disease, which can not yet be diagnosed as having Alzheimer's disease at this stage of the disease with diagnostic methods established in the prior art.
  • the precursor of Alzheimer's disease which can be detected on the basis of the use according to the invention or the method according to the invention, can also be a clinical stage of Alzheimer's disease.
  • the precursor of Alzheimer's disease may be an early Alzheimer's disease, which is also synonymously referred to as early AD.
  • early Alzheimer's disease may be an early stage Alzheimer's disease clinically diagnosable based on methods known in the art.
  • precursor of Alzheimer's disease may be such a stage of Alzheimer's disease with advanced cognitive deficits, although the cognitive deficits have not yet progressed so far that they lead to a profound impairment of the subject or patient in everyday life to lead.
  • Alzheimer's dementia it is thus possible in particular taking into account the above remarks on the concept of Alzheimer's dementia, on the basis of the inventive concept to make a statement about the existence or about the future development of Alzheimer's dementia in a subject or patient to enable, in particular Based on the appropriate preclinical and / or clinical stages of Alzheimer's dementia based on and / or as a result of underlying Alzheimer's disease.
  • the use according to the invention or the method according to the invention can thus be carried out in the background in order to initiate measures already at an early stage which can delay or weaken the course of Alzheimer's disease, thus improving the quality of life of the patient or test subjects to maintain as long as possible.
  • the ratio of the amyloid beta-peptides in question is a quantitative or concentration-related ratio.
  • blood of the subject or patient is used as a sample to determine the quantitative ratio of the amyloid beta peptides in question.
  • blood plasma plasma
  • serum serum
  • plasma plasma
  • the present invention is based on the completely surprising finding of the Applicant that - without wishing to be limited to this theory - in the context of Alzheimer's disease - and this also in the early stages of the disease - to a certain extent a holistic or higher pathological "adjustment" of the entire organism or body is present, which is also associated with a significant change in the respective concentrations of the amyloid beta peptides in question in the blood.
  • amyloid beta-peptides as such are not present in the blood, but primarily in the brain tissue themselves or in the brain-related fluids, such as the cerebrospinal fluid, are affected in the context of the disease and, thus, blood is effectively treated as peripheral and brain-separated body fluid with respect to changes in the amyloid-beta Peptides has not been used in the prior art.
  • the completely surprising suitability of the use of blood or blood plasma and / or blood serum as the sample to be analyzed is also based on the completely surprising finding of the Applicant, that especially in the early stages of Alzheimer's disease a fundamental "adjustment" of certain physiological parameters in the body the person affected by the disease is present, which is reflected in a special way in the blood of the person concerned, in particular, as regards the conditions in question of the aforementioned special amyloid beta-peptides.
  • a blood-based or blood test-based neurochemical analysis or determination for the detection of dementia diseases is thus provided, which can be used, for example, within the framework of a corresponding diagnostic approach ⁇ blood-based neurochemical dementia diagnostics (blood- ⁇ )).
  • blood- ⁇ blood-based neurochemical dementia diagnostics
  • the concept according to the invention is distinguished by the fact that, on the one hand, a meaningful concept for the determination of Alzheimer's disease - and this despite the generally low concentrations of the amyloid beta peptides to be analyzed in the sample - and, on the other hand, a concept that protects the patient which is suitable for repeated use, for example as part of a follow-up or the like.
  • amyloid beta peptides in particular (a) A ⁇ (l-42) on the one hand and (b) A ⁇ (2-40) and / or (c) A ⁇ (2-42) on the other the sample, to a certain extent in the manner of an upstream purification or separation step, in particular separated or isolated by means of immunoprecipitation.
  • the purification can be carried out in such a way that to a certain extent an ensemble of different types of amyloid beta-peptides, including (a) A ⁇ (l-42) and (b) A ⁇ (2-40) and / or (c) A ⁇ (2-42), is separated from the underlying sample. This increases the analysis accuracy.
  • At least one ligand specific for amyloid beta peptides or binding thereto preferably at least one antibody, can be used.
  • the at least one ligand preferably the at least one antibody, may be specific for amyloid beta peptides of the type (a) A ⁇ (ly) and / or A ⁇ (2-y), where y is an integer from 37 to 43 ,
  • the variable y particularly characterizes the length of the peptide with respect to its carboxy-terminal end.
  • the at least one ligand preferably antibody specific for the amino-terminal end of (a) A ⁇ (l-42) and / or (b) A ⁇ (2-40) and / or (c) A ⁇ (2-42).
  • a ligand or antibody can be used which has at least substantially identical sensitivity or specificity at least for the particular amyloid beta peptides A ⁇ (I-42), A ⁇ (2-40) and A ⁇ (2 42), which has the advantage that only a single ligand or antibody type needs to be used in the purification step.
  • the antibody of the type 1E8 can be used according to the invention.
  • the antibody is particularly sensitive to amyloid beta peptides which have aspartate at position 1 in terms of their amino acid sequence, such as (a) A ⁇ (1-42) or at position 2 alanine, such as (b) A ⁇ (2-40) or (c) A ⁇ (2-42).
  • the antibody of type 1E8 can be obtained commercially from Bayer Schering Pharma AG, Berlin, Germany.
  • An antibody preferred according to the invention is described in particular in EP 1 270 592 A1, the entire disclosure content of which is hereby incorporated by reference in its entirety.
  • the detection in particular the determination of the amount or content and / or, in particular after the previously carried out isolation or separation or purification of the amyloid beta peptides to be determined the concentration of the respective amyloid beta-peptides, in particular of (a) A ⁇ (l-42) on the one hand and (b) A ⁇ (2-40) and / or (c) A ⁇ (2-42) on the other hand, based on Protein separation method or on the basis of in particular quantitative immunodictive protein detection method, preferably based on a combination of protein separation methods and in particular quantitative immunodictive protein detection method performed.
  • the fraction obtained with the various amyloid-beta peptides is further processed accordingly or subjected to further analysis.
  • a gel electrophoretic method in particular a two-dimensional gel electrophoresis, preferably a urea-based two-dimensional gel electrophoresis, can be used as the protein separation or protein detection method.
  • a star blot method can be used as the protein separation or protein detection method.
  • At least one ligand, preferably antibody, for labeling the amyloid beta may also be used in the context of the particularly qualitative immunodetective protein detection method, preferably in the Western blot method.
  • Peptides are used, in particular in the manner of a primary ligand or primary antibody, which binds in a first marking step directly to the amyloid beta peptides in question or intervene hereby act.
  • the at least one ligand, preferably antibody should be specific for amyloid beta peptides of the form A ⁇ (ly) and A ⁇ (2-y), where y is an integer from 37 to 43.
  • the ligand or antibody used in the context of the particularly quantitative immunodetective protein detection method should be specific for (a) A ⁇ (1-42) and / or (b) A ⁇ (2-40) and / or (c) A ⁇ (2-42). be.
  • the at least one ligand preferably antibody specific for the amino-terminal end of (a) A ⁇ (l-42) or (b) A ⁇ (2-40) and / or (c) A ⁇ (2-42 ) be.
  • both a ligand type or antibody type can be used which has an at least substantially identical sensitivity to the aforementioned amyloid beta peptides.
  • the antibody of the 1E8 type described above can be used.
  • the use of different types of ligands or antibodies with respective specific sensitivity for individual amyloid beta peptides is possible.
  • the specific detection can take place via the use of appropriate secondary ligands or secondary antibodies well known to the person skilled in the art, for which enzymes or dyes, in particular fluorescent dyes, can be coupled for purposes of detection, the resulting conjugate being able to deliver a detectable and evaluable measurement signal is.
  • amyloid beta peptides can be carried out, for example, based on reference traces.
  • the underlying principle is well known to those skilled in the art.
  • the classification of the ratios of amyloid beta-peptides obtained on the basis of the analyzed sample can be made on the basis of a comparison with a reference system or a reference value range, the corresponding reference quantities, as described below, for example with reference to a Reference group of subjects or patients in the form of statistical values.
  • loid beta peptides are analyzed in a sample of the same kind and in particular summarized statistically.
  • the classification of the subject or patient to be examined then takes place on the basis of a correlation or a comparison of the particular conditions found in the subject or patient in question with the relationships of the same kind found in the reference groups in question
  • the procedure is such that the likelihood of contracting Alzheimer's disease is determined based on the comparison or the correlation of the quantitative ratio with the corresponding reference ratios, and / or the presence of a disease at a precursor of the Alzheimer's disease Alzheimer's disease is diagnosed or diagnosed.
  • the term "correspondingly" as used in the context of the conditions to be compared of a subject or patient to be examined on the one hand and a reference group on the other hand refers in particular to conditions which are the same or comparable in their nature, ie in particular corresponding ratios of identical amyloid beta peptides.
  • the ratio of (a) A ⁇ (l-42) / (b) A ⁇ (2-40) of a subject having the correlated ratio (a) A ⁇ (l-42) / (b ) A ⁇ (2-40) of the reference group is, in particular, a statistical (mean) value or a range of values of a collective belonging to this group.
  • the determined reference ratios are thus in particular values or ranges determined in relation to a collective of reference subjects or reference patients in the sense of a statistical ratio based on numerous subjects, which may have been previously generated, for example.
  • these are, in particular, statistically determined ranges of values or statistical mean values a corresponding standard deviation, which can underlie the assignment.
  • the reference subjects of the reference subject collective or the reference patients of the reference patient group may in particular in the context of a biostatistical evaluation on the presence or absence of mild cognitive impairment (MCI) and / or a preclinical precursor of Alzheimer's disease, in particular an incipient or prodromal Alzheimer's disease (incipient AD), and / or a clinical precursor of Alzheimer's disease, in particular early Alzheimer's disease (early AD).
  • MCI mild cognitive impairment
  • incipient AD incipient or prodromal Alzheimer's disease
  • eyely AD a clinical precursor of Alzheimer's disease
  • the examination or evaluation is based on examination methods which are selected from the group of neurochemical methods, neuro-imaging methods, psychometric methods and combinations of at least two of the aforementioned Method, preferably based on a combination of all of the aforementioned methods is performed. In this way, to a certain extent a classification of the corresponding reference subjects or reference patients is made possible with regard to their clinical picture.
  • the examination or evaluation with respect to the reference subject collective or the reference patient group is based on at least one gold standard (GS), in particular selected from the group of clinical gold standards, neurochemical gold standards, psychometric gold standards and combinations of at least two of the aforementioned gold standards, preferably based on a combination of all of the aforementioned gold standards.
  • GS gold standard
  • the term "gold standard” refers in particular to a (examination) standard which is generally accepted at the time of the examination and which is suitable for the diagnosis of a disease in the sense of "best Action "leads to particularly meaningful results.
  • the gold standard thus generally constitutes the actual or authoritative standard.
  • gold standards used in the context of the present invention with regard to the analysis of the reference subjects or reference patients are well known to the person skilled in the art as such.
  • the examination or evaluation with regard to the reference values can be carried out on the basis of gold standards which comprise psychometric, neurochemical or neuro-imaging methods or parameters.
  • the assay may be performed based on a neurochemical process, wherein the neurochemical process comprises the determination of cerebrospinal fluid (CSF) parameters; in particular the ratio of A ⁇ (x-42) / A ⁇ (x-40) [AßratioTGC], where x, independently of one another, can be 1 or 2, and / or the content of A ⁇ (I-42) [ A ⁇ l42Inn] and / or the total content of tau and / or the content of phospho-Tau 181 can be determined.
  • CSF cerebrospinal fluid
  • neuro-imaging methods in particular brain atrophy examinations, preferably based on imaging methods, preferably single photon emission computed tomography (SPECT) and / or MRI (Magnet Resonance Imaging).
  • SPECT single photon emission computed tomography
  • MRI Magnetic Resonance Imaging
  • the psychometric method which can be used according to the invention can comprise investigations on the basis of MMSE (Mini-Mental State Examination).
  • MMSE Mini-Mental State Examination
  • the later occurrence of Alzheimer's disease in the diagnosis at the time of examination of the respective reference subjects or reference patients are included, in particular with regard to the assessment of the presence of a preclinical precursor of Alzheimer's disease at the time of examination if it can not be determined adequately by the aforementioned diagnostic methods.
  • the reference persons On the basis of the examination or diagnosis carried out in the reference patients or reference subjects, it is thus possible to divide the reference persons into respective classes with the corresponding clinical picture, for example into a group with patients suffering from a cognitive impairment (MCI). and at least one other group whose reference or reference patients are suffering from a precursor to Alzheimer's disease.
  • MCI cognitive impairment
  • This can be carried out, for example, on the basis of a rating of the respective diagnostic methods, wherein, for example, graded values or so-called cut-off values can be established, which effectively act as respective limit values for the assignment to one of the aforementioned groups.
  • the reference subjects or reference patients are divided into different reference groups depending on the diagnosis made on the basis of the examination or evaluation.
  • the respective reference groups (A) and (B) may be formed from reference subjects (A) without a diagnosed Alzheimer's disease or without a diagnosed precursor of Alzheimer's disease and (B ) with a diagnosed Alzheimer's disease or with a diagnosed precursor of Alzheimer's disease, in particular with a preclinical precursor of Alzheimer's disease, in particular an incipient or prodromal Alzheimer's disease incipient AD), and / or with a clinical precursor of Alzheimer's disease Disease, especially early Alzheimer's disease (early AD).
  • a further differentiation can take place in this respect: for example, a reference group (B l) with a preclinical precursor of Alzheimer's disease, in particular an incipient or prodromal Alzheimer's disease (incipient AD), another reference group (B2) with a clinical precursor of Alzheimer's disease, in particular early Alzheimer's disease (early AD), and optionally a third reference group ( B3) with diagnosed Alzheimer's disease in a more advanced stage.
  • a reference group (B l) with a preclinical precursor of Alzheimer's disease in particular an incipient or prodromal Alzheimer's disease (incipient AD)
  • another reference group (B2) with a clinical precursor of Alzheimer's disease in particular early Alzheimer's disease (early AD)
  • a third reference group ( B3) with diagnosed Alzheimer's disease in a more advanced stage for example, a reference group (B l) with a preclinical precursor of Alzheimer's disease, in particular an incipient or prodromal Alzheimer's disease (incipient AD), another reference
  • the procedure is in particular such that the quantitative ratio of (a) A ⁇ (l-42) / (b) A ⁇ (2-40) or the quantitative ratio of (a) A ⁇ (l-) 42) / (c) A ⁇ (2-42) in a blood sample or a sample of blood serum and / or blood plasma. is correct and with the respectively corresponding, in particular statistical reference values - ie with the corresponding ratios of the same kind, which were obtained in particular on the basis of a large number of individuals of the respective reference group - from the blood samples or the samples from blood serum or blood plasma of the corresponding Reference group is correlated and assigned to the corresponding reference group.
  • the assignment or correlation of the corresponding quantitative ratios from the respective amyloid beta peptides takes place in particular in such a way that they are assigned to the region lying in a comparable order of magnitude, which has been determined for the respective reference group.
  • the ratios of subjects or patients on the one hand and reference groups on the other hand to be compared or correlated are thus preferably corresponding ratios of the same size range, ie. H. a ratio determined for a subject or a patient can be assigned to the value range of the corresponding ratio of a reference group if the value determined for the subject or patient falls within the value range of the respective reference group.
  • the subject or patient can be assigned a lesser or none (ie, a non-existent or non-existent) probability of contracting Alzheimer's disease, or the subject and / or patient may have a non-disease at a preclinical stage of Alzheimer's disease, in particular on an incipient and / or prodromal Alzheimer's disease (incipient AD), and / or on a clinical precursor of Alzheimer's disease, especially early Alzheimer's disease (early AD) if the ratio determined in the subject or patient falls within the range of the corresponding reference ratios of the reference group (A) without diagnosed Alzheimer's disease and / or without a diagnosed precursor of Alzheimer's disease.
  • incipient AD incipient and / or prodromal Alzheimer's disease
  • early AD early Alzheimer's disease
  • the subject or patient can be assigned an increased probability of contracting Alzheimer's disease, or the subject or patient can be diagnosed with Alzheimer's disease 24
  • a disease at a preclinical stage of Alzheimer's disease in particular an incipient and / or prodromal Alzheimer's disease (incipient AD), or at a clinical precursor of Alzheimer's disease, in particular an early Alzheimer's disease (early AD), when the ratio determined in the subject or patient falls within the range of the corresponding reference ratios of the reference group (B) with diagnosed Alzheimer's disease or with diagnosed precursor of Alzheimer's disease.
  • incipient AD incipient and / or prodromal Alzheimer's disease
  • eyely AD early Alzheimer's disease
  • the aforementioned group (B), as described above, is subdivided into further subgroups (B1) and (B2) and optionally (B3), d. H. into a first subgroup (B1) with a preclinical stage of Alzheimer's disease, in particular with an incipient or prodromal Alzheimer's disease (incipient AD), and into a second subgroup (B2) with a clinical precursor of Alzheimer's disease, especially with early Alzheimer's disease (early AD).
  • the ratio determined in the subject or patient can be assigned to one of the previously described reference groups (ie in particular the reference group (A), (B) or (B1), (B2) or optionally (B3)) if the ratio determined in the subject or patient is at most 40%, in particular at most 30%, preferably at most 25%, preferably at most 20%, particularly preferably at most 10%, of the statistical mean value of the reference ratio of the respective reference group; relative to the aforementioned mean, deviates.
  • the ratio determined in the subject or patient can be assigned to one of the previously described reference groups if the ratio determined in the subject or patient is within the size range of the value range or statistical range statistically determined for the respective reference group . is within the range of the calculated standard deviation of the statistical mean obtained for each reference group. 2011/001724
  • the subject and / or patient with an increased probability of contracting Alzheimer's disease, or the subject and / or patient the disease at a preclinical stage of Alzheimer's disease, in particular attributable to an incipient and / or prodromal Alzheimer's disease (incipient AD), and / or to a clinical precursor of Alzheimer's disease, in particular to early Alzheimer's disease (early AD), when the amount and / or concentration of b) A ⁇ (2-40) and / or (c) A ⁇ (2-42), in particular to (b) A ⁇ (2-40), compared to the corresponding amounts and / or concentrations of the reference group without diagnosed Alzheimer's disease and / or without a diagnosed precursor of Alzheimer's disease is increased and thus likewise the ratio (a) A ⁇ (1-42) / (b) A ⁇ (2-40) or (a) A ⁇ (1-42) / (c) A ⁇ (2-42) is reduced.
  • an increase in the abovementioned individual values of the amyloid beta peptides in question results in an increased risk of Alzheimer's disease compared to the corresponding values of the reference group and, consequently, a reduced ratio as defined above to suffer or to have such a disease, in particular with regard to the aforementioned preclinical and clinical precursors.
  • the Applicant has surprisingly found in this connection that in particular the amount or concentration of amino terminally truncated amyloid ⁇ -peptides of the type 2-y, as described by the amyloid beta peptides A ⁇ (2- 40) and A ⁇ (2-42), especially in the blood of those patients who have an early precursor of Alzheimer's disease, in particular a preclinical or clinical precursor of Alzheimer's disease.
  • EP2011 / 001724 the amount or concentration of amino terminally truncated amyloid ⁇ -peptides of the type 2-y, as described by the amyloid beta peptides A ⁇ (2- 40) and A ⁇ (2-42), especially in the blood of those patients who have an early precursor of Alzheimer's disease, in particular a preclinical or clinical precursor of Alzheimer's disease.
  • MCI mild cognitive impairment
  • the subject and / or patient may be associated with an increased probability of contracting Alzheimer's disease, and / or that the subject and / or patient may have the disease at a preclinical stage of the Alzheimer's disease.
  • Alzheimer's disease in particular on an incipient and / or prodromal Alzheimer's disease (incipient AD), and / or on a clinical precursor of Alzheimer's disease, especially early Alzheimer's disease (early AD), when the relative ratio is A ⁇ (I-42) / A ⁇ (2-y) is reduced in comparison to the reference ratios of the reference group without diagnosed Alzheimer's disease and / or without a diagnosed precursor of Alzheimer's disease, where y is an integer of 37 to 43, especially 40 or 42, and / or when the relative ratio of (a) A ⁇ (l-42) / (b) A ⁇ (2-40) and / or (a) A ⁇ (l-42) / (c) A ⁇ (2-42), i Specifically, (a) A ⁇ (l-42) / (b) A ⁇ (2-40) decreased as compared to the reference ratios of the reference group without diagnosed Alzheimer's disease and / or without a diagnosed precursor of Alzheimer's disease is.
  • incipient AD incipient and / or prodromal Alzheimer'
  • an analysis of the abovementioned specific ratios as such from the respective amyloid beta peptides is thus made. Because in addition to the statements made previously for the individual values, the Applicant has equally surprisingly found that a preclinical or clinical Alzheimer's disease, in particular an inzipiente or prodromal Alzheimer's disease, with a significant decrease in the above conditions, especially in the blood , goes along with it.
  • the use according to the invention can also be carried out in combination with further analysis methods, for example in combination with a specific analysis of the ratio of A ⁇ (I-42) / A ⁇ (I-40), in particular in the cerebrospinal fluid, which further enhances the validity improved.
  • Another object of the present invention - according to a time aspect of the present invention - is a method according to the invention for determining the probability (risk) of a subject and / or patient to contract Alzheimer's disease (Alzheimer's disease, AD), wherein in a sample a body fluid of the subject and / or patients at least a quantitative ratio (quotient) of two mutually different amyloid beta peptides (A beta, A ⁇ ) is determined, wherein the amyloid beta peptides are selected from (a) Aß (l -42), (b) A ⁇ (2-40) and (c) A ⁇ (2-42) and wherein the quantitative ratio of (a) / (b) or vice versa and / or from (a) / (c) or vice versa is formed.
  • AD Alzheimer's disease
  • the present invention also relates, in accordance with one aspect of the present invention, to a method according to the invention for determining the probability (risk) of a subject and / or patient suffering from Alzheimer's disease (Alzheimer's disease, AD), in particular as defined above,
  • AD Alzheimer's disease
  • kits according to the invention in particular for determining the likelihood (risk) of a patient and / or subjects to suffer from Alzheimer's disease (Alzheimer's disease, AD) and / / or in particular for determining (diagnosing) its disease in a precursor of Alzheimer's disease
  • said kit comprising components and / or means for determining a quantitative ratio (quotient) of two mutually different amyloid beta peptides (A-beta; A ⁇ ) in a sample of a body fluid of a subject and / or patient, wherein the components and / or agents are selected such that they are the quantitative determination of amyloid beta peptides from the group of (a) Aß (l-42), (b ) A ⁇ (2-40) and (c) A ⁇ (2-42) for purposes of determining the quantitative ratio of (a) / (b) or vice versa and / or (a) / (c) o the vice
  • the components or agents of the kit according to the invention may in particular be agents or components for the purification, concentration, separation, separation or the like of the amyloid beta peptides to be investigated.
  • agents or components for protein separation which are familiar to the person skilled in the art, such as are used, for example, in the context of immunodectective methods or separation methods known per se, such as gel electrophoresis methods, come into consideration.
  • agents or components may also be substances which mark or intervene with the amyloid beta peptides to be analyzed, such as ligands or antibodies.
  • the kit according to the invention may comprise at least one ligand specific for amyloid beta peptides and / or binding thereto, preferably antibodies.
  • the at least one ligand, preferably antibody may be specific for amyloid beta peptides of the type A ⁇ (l-x) and A ⁇ (2-y), where y is an integer of 37 to 43.
  • the at least one ligand may be specific for (a) A ⁇ (l-42) and / or (b) A ⁇ (2-40) and / or (c) A ⁇ (2-42).
  • T EP2011 / 001724 may be specific for (a) A ⁇ (l-42) and / or (b) A ⁇ (2-40) and / or (c) A ⁇ (2-42).
  • the at least one ligand may be specific for the amino terminal end of (a) A ⁇ (1-42) and / or (b) A ⁇ (2-40) and / or (c) A ⁇ (2-42) ,
  • the present invention particularly focuses on a method or a method of amino-terminal-selective immunoprecipitation with a subsequent attomolar-sensitive, in particular urea-based, two-dimensional Western immunoblot (2D-A ⁇ -WIB) in order to obtain the complex beta-amyloid-peptide immunoprecipitation.
  • the present invention relates in particular to the identification of certain A-beta-peptide ratios (A-beta-peptide quotients) in the blood, which show highly significant differences between eiAD and Con patients.
  • a ⁇ (2-y) species in relation to A ⁇ (l-42) is increased in eiAD patients.
  • the said effect is particularly pronounced in preclinical stages (inzipiente AD), z.
  • MCI mild cognitive impairment
  • specific A-beta peptide ratios of A ⁇ (1-42) to particular A ⁇ (2-y) species in particular the ratios A ⁇ (1-42) / A ⁇ (2-40) and A ⁇ (1-40) can be determined.
  • a ⁇ (2-42) may be used for the neurochemical diagnosis of early and / or in-patient Alzheimer's disease by analysis of body fluids, preferably blood (eg in combination with the ratio A ⁇ (l-42) / A ⁇ (1-40)).
  • body fluids preferably blood (eg in combination with the ratio A ⁇ (l-42) / A ⁇ (1-40)).
  • a ⁇ (l-42) / A ⁇ (1-40) e.g in combination with the ratio A ⁇ (l-42) / A ⁇ (1-40)
  • This allows, in particular, a blood or blood test-based neurochemical dementia disease diagnosis of inzipient (preclinical / prodromal) Alzheimer's disease (AD).
  • the present invention thus also enables newly targeted strategies for secondary preventive treatment, especially of high risk patients.
  • CSF-NDD neuro-imaging techniques
  • MRI / SPECT neuro-imaging techniques
  • patients will be assigned a clinical gold standard, a neurochemical gold standard and gold standards (GS), psychometric (MMSE) and neurochemical parameters (CSF dementia biomarkers) as well as neurochemical parameters (CSF dementia biomarkers) and neuro - combine, layer and classify imaging process parameters (SPECT).
  • Biomarker-supported gold standards are used to achieve objective patient categorization, thereby achieving cross-validation of clinically-based phenotyping of early or onset Alzheimer's disease. 2011/001724
  • the 2D-Ab-WIB analysis of the blood signature of A-beta immunoreactive peptides shows a stable pattern of 18 fields (spots) which was quantified with reference to a mixture of A-beta standard peptides.
  • the biostatistical analysis shows that none of the individual A-beta immunoreactive fields showed a significant difference between the patient groups eiAD and Con. Only field 4, which corresponds to A ⁇ (1-42), shows a trend for a disease-specific difference.
  • Specific A-beta peptide ratios show highly significant differences between eiAD and Con patients.
  • This effect is primarily determined by the ratio of A ⁇ (1-42) (panel 4) to other A-beta peptide species which are amino-terminally truncated on the first amino acid, in this case aspartate (A ⁇ ( 2-x) species).
  • a ⁇ (l-42) to the sum of the A ⁇ species (2-42) (field 14), (2-40) (field 15), (2-39) (field 16), (2- 38) (panel 17) and (2-37) (panel 18)
  • the eiAD and Con groups are significantly different from each other whereas the ratios of the other A ⁇ (lx) species (eg A ⁇ (l-40) ) to the sum of A ⁇ (2-x) species or to single A ⁇ (2-x) species is not.
  • the diagnostic accuracy of the ratio of A ⁇ (l-42) / A ⁇ (2-40) (ratio of fields 4/15) is in the ratio A ⁇ (l-42) / A ⁇ (l-40) (fields 4/5), which is currently regarded as the gold standard for blood-based neuro-chemical diagnostic methods for the detection of dementia, especially Alzheimer's disease.
  • ratio A ⁇ (l-42) / A ⁇ (2-40) (4/15 field ratio) with routine cerebral perfusion SPECT analyzes ( 99m Tc-SPECT) can be observed, whereas such correlation is not for the ratio A ⁇ (l-42) / A ⁇ (l-40) (ratio of fields 4/5) can be observed.
  • the ratio A ⁇ (l-42) / A ⁇ (2-40) (ratio of fields 4/15) is more closely correlated with the ApoE e4 genotype, a proven risk factor for Alzheimer's disease, than the ratio A ⁇ ( l-42) / Aß (l-40).
  • a ⁇ (l-42) / A ⁇ (2-40) (ratio of fields 4/15) is significantly more closely correlated with the age of the patients than the ratio A ⁇ (l-42) / A ⁇ (1-40).
  • the Applicant observed a conspicuous decrease in the ratio A ⁇ (l-42) / A ⁇ (2-40) (ratio of fields 4/15) in the blood of MCI patients with prodromal Alzheimer's disease (Alzheimer's disease inoculated) Alzheimer's disease is indicated according to the CSF biomarker signature. This finding could not be observed for the ratio A ⁇ (l-42) / A ⁇ (l-40) (ratio of fields 4/5) in the blood.
  • Alzheimer's disease clearly shows that the formation of aminoterminal truncated A-beta peptide species is a very early event in the molecular pathogenesis of Alzheimer's disease.
  • a ⁇ (2-x) species relative to A ⁇ (1-42) in preclinical stages (Alzheimer's disease) may be particularly pronounced, e.g. In MCI patients with prodromal MCI Alzheimer's disease.
  • the amount or the content of A beta peptides with respect to blood or blood plasma and / or blood serum as the sample to be analyzed behaves in such a way that the amounts or contents of A beta peptides found there are not significant are correlated with CSF-A beta peptides, i. H. the A-beta peptide blood profile should not be considered as a kind of "diluted" CSF profile.
  • the amount or content of A beta-peptide in the blood is in a much more complex manner dependent on factors other than the CSF pattern, as many peripheral cell systems or cell populations (liver cells, platelets, monocytes, etc.) to contribute to or influence the pattern.
  • a beta peptides which have been identified as CSF biomarkers for the detection of dementia, to the blood or to blood tests.
  • a ⁇ (2-40) relative to A ⁇ (1-42) or to the total level of A beta peptides
  • CSF-NDD CSF-NDD
  • German Competence Network Dementia www. symposiumnet-demenzen.de Kornhuber et al .: "Early and differential diagnosis of dementia and mild cognitive impairment: design and cohort baseline cha acter istics of the German Dementia Competence Network.”, Dement. Geriatr., Cogn.
  • eiAD patients with early / onset Alzheimer's disease
  • eiAD will be included in the study to further validate the diagnosis of Alzheimer's disease, in which neuroimaging techniques (SPECT and / or cMRI) support the diagnosis of Alzheimer's disease
  • eiAD patients with a neuroimaging finding suggesting the presence of other dementias eg, vascular dementia or frontotemporal dementia
  • MRI and SPECT neuro-imaging techniques are available for 39 and 37 patients, respectively.
  • eiAD patients in whom the clinical diagnosis is supported by a CSF dementia biomarker pattern typical of Alzheimer's disease (reduced: A ⁇ (l-42), A ⁇ 42 / A ⁇ 40 ratio) are preferably included in the study Total Tau, Phospho-Taul81).
  • control cases with CSF-NDD typical for Alzheimer's disease are excluded. Patients are at risk for Alzheimer's disease if they already have Alzheimer's disease-indicating CSF dementia biomarker patterns and their cognitive deficit pattern indicates mild cognitive impairment.
  • a neurochemical gold standard based on CSF biomarkers for the detection of dementias will be used.
  • the neurochemical gold standard takes into account the quantitative information provided by all four CSF biomarkers for P2011 / 001724
  • NDD code is combined with the results of the Mini Mental State Examination Test (MMSE) to assess the neurochemical diagnostic procedures for detecting dementia and the cognition code (NDD Cog Code) receive or justify.
  • MMSE Mini Mental State Examination Test
  • NDD Code As the qualitative evaluation of CSF biomarkers is already used to support the clinical gold standard (see above), a high degree of correspondence between the clinical and the neurochemical gold standard is achieved.
  • the definition of the NDD Code and the NDD Cog Code is detailed below.
  • the NDD SPECT score corresponds to the sum of the NDD and SPECT scores.
  • AD Alzheimer's disease
  • CSF-NDD cerebral spinal fluid
  • CSF-NDD The clinical relevance of CSF-NDD is demonstrated by a large body of literature evidence (Hansson et al .: "Association between CSF biomarkers and incipient Alzheimer's disease in patients with mild cognitive impairment: a follow-up study," Lancet Neurol., 2006 , 5, 228-234; Engelborghs et al .: “Neuropsychological and behavioral correlates of CSF biomarkers in dementia", Neurochem. Int., 2006, 48, 286-295; Engelborghs et al .: “No association of CSF biomarkers with APOEepsilone4, plaque and tangle are in definite Alzheimer's disease. "Brain, 2007, 130, 2320-2326).
  • the information from the CSF biomarker signature for dementia is used as the basis for an objective diagnostic stratification or Subdivision of the patient group (neurochemical gold standard), which is independent of the conventional clinical stages. This is achieved by the establishment or establishment of a neurochemical dementia disease code (NDD Code), which in turn is obtained from an averaged neurochemical diagnostic score for dementia disorders (avNDD Score).
  • NDD Code neurochemical dementia disease code
  • the NDD score is based on information from the following four biomarkers of dementia in cerebrospinal fluid (CSF):
  • Ratio of A beta peptides A ⁇ (x-42) to A ⁇ (x-40) (AßratioTGC).
  • NDD score Patients with a CSF biomarker concentration for dementia in the high normal range are assigned an NDD score of arbitrary or freely chosen. In contrast, patients with pathological scores for CSF dementia disease biomarkers near the cut-off value, above the threshold, and well above the threshold receive NDD scores of "0,” “1,” and “2, respectively.” "assigned. Since all four biomarkers are not accessible to each individual patient for the detection of dementia, an average NDD score (avNDD Score) was calculated. H. £ Score / n. An avNDD score of -1 and +2, respectively, corresponds to a minimal or maximum risk of either recipient or overt clinical Alzheimer's disease.
  • the ordinal avNDD score is used to obtain the dichotomous NDD code:
  • the ranges of concentrations for CSF biomarkers for detecting dementias defining the various NDD_Score values are summarized in Table 1. Table 1: CSF dementia biomarker values that substantiate the NDD score
  • NDD-Cog code The score for neuro-chemical diagnostic procedures in dementia and cognition (NDD-Cog code) combines CSF-based neurochemical evidence for inpatient or overt Alzheimer's disease - as expressed by the NDD code - with the determination of cognitive deficits - such as expressed by the Mini-Mental Status Test (MMSE).
  • MMSE score An MMSE score of less than 25 units indicates dementia, with a maximum score of over 30 units not precluding mild cognitive impairment, as the MMSE is not sensitive enough to display subtle cognitive deficits.
  • the parameter specifications defining the NDD Cog_Code are summarized in Table 2.
  • an amino-terminal-selective immunoprecipitation and an attomolar-sensitive urea-based two-dimensional Western immunoblot 2D-A ⁇ -WIB
  • 2D-A ⁇ -WIB an attomolar-sensitive urea-based two-dimensional Western immunoblot
  • Individual peptide concentrations are determined by Western immunoblots in relation to a mixture of synthetic A-beta cells. Quantified peptides that run as a one-dimensional marker lane on the side of each two-dimensional Western Immunoblot.
  • A-beta immunoreactive fields separated by 2D-A ⁇ -WIB are characterized by their two-dimensional migratory behavior as compared to known synthetic A-beta peptides and by amino- and carboxy-terminal immunoprecipitation and subsequent 2D-A ⁇ -WIB identified.
  • Another molecular evidence from an independent work (Schieb H. et al., Preparation in Preparation) was used, which is obtained from the analysis of brain samples of transgenic mouse models of Alzheimer's disease (mouse model APP23), the Himhomogenate by 2D A ⁇ WIB separated and the fields are subsequently analyzed by mass spectrometry.
  • Fig. 1 an exemplary two-dimensional separation and labeling of A-beta peptides in the blood based on a photographic image of a 2D-A ⁇ -WIB.
  • the figure representation shows a stable 2D pattern of the corresponding blood A beta peptides;
  • FIG. 2 shows a freely chosen designation or numbering of a total of 18 amyloid beta peptides separated or separated by means of 2D-A ⁇ -WIB from blood plasma.
  • Figure 2 shows an exemplary 2D A ⁇ WIB with the corresponding breakdown of the corresponding spots of the amyloid beta peptides 1 through 18.
  • Synthetic amyloid beta peptides 1-37 / 38/39/40/42 are separated in the 1D line (STD), which shows that their migration or Migration position in the second dimension is not precisely aligned.
  • Figure 2 shows the alignment of human amyloid beta peptides: (4) A ⁇ (1-42); (5) A ⁇ (1-40); (6) A ⁇ (I-39); (7) A ⁇ (1-38); (8) A ⁇ (I-37); (14) A ⁇ (2-42); (15) A ⁇ (2-40); (16) A ⁇ (2-39); (17)
  • the identity of the A ⁇ immunoreactive fields (1) and (2) and (10) to (13) is not further investigated;
  • Fig. 3 A comparison of A-beta peptide ratios (a) 4/15
  • Fig. 5 is further specified using the following table:
  • Fig. 6 a comparative ROC analysis for A-beta peptide ratios
  • Fig. 6 is further specified by the following table:
  • NDD_Cog_Code 2: early Alzheimer's disease (eAD);
  • NDD Cog Code 1: inzipient Alzheimer's Disease (iAD);
  • NDD Cog Code - 0 no Alzheimer's disease (non AD or
  • Fig. 7a the specific A beta peptide ratio 4/5 (A ⁇ (I-42) / A ⁇ (I-40));
  • Fig. 7b the specific A-beta peptide ratio 4/14 (A ⁇ (I-42) / A ⁇ (2-42));
  • Figure 7c the specific A-beta peptide ratio 4/15 (A ⁇ (1-42) / A ⁇ (2-40));
  • FIG. 8c a yet further scattergram, wherein the boundary line or
  • Table 3 Correlation matrix (Spearman-Rho, both-sided significance level) of A-beta peptide ratios in the blood, CSF dementia biomarkers, age, diagnostic gold standard, cognitive parameters, neuroimaging data and ApoE epsilon 4 genotype logratio logratio logratio AvNDD NDD SPECT 4vs5 4vsl4 4 vsl 5 Score Score corr. coeff. 1, 000, 472 ** , 392 * -, 258 -, 172 logratio4vs5 sig. (2-0.0016 0.01022 0.09953 0.3081 1
  • NDD_SPECT_Score sig. (2-03081 1 0.02758 0.00619 0.00000

Abstract

Die Erfindung betrifft die Verwendung mindestens eines quantitativen Verhältnisses (Quotienten) aus zwei voneinander verschiedenen Amyloid-beta-Peptiden (A-beta; Aß) in einer Probe einer Körperflüssigkeit eines Probanden und/oder Patienten zur Bestimmung dessen Wahrscheinlichkeit (Risikos), an einer Alzheimer-Krankheit (Morbus Alzheimer, AD) zu erkranken und/oder zur Bestimmung (Diagnose) dessen Erkrankung an einer Vorstufe der Alzheimer-Krankheit, wobei die Amyloid-beta-Peptide ausgewählt werden aus (a) Aß(1-42), (b) Aß(2-40) und (c) Aß(2-42) und wobei das quantitative Verhältnis aus (a) / (b) oder vice versa und/oder aus (a) / (c) oder vice versa gebildet wird, sowie entsprechende Verfahren und ein in diesem Zusammenhang einsetzbares Kit.

Description

Neue Ansätze zur Alzheimer-Diagnose
Die vorliegende Erfindung betrifft die Bereich der Demenzerkrankungen und im Besonderen den Bereich der neurodegenerativen Erkrankungen, wobei die vorliegende Erfindung maßgeblich auf die Alzheimer-Krankheit fokussiert.
Insbesondere betrifft die vorliegende Erfindung den Bereich der präklinischen und klinischen Vorstufen der Alzheimer-Erkrankung.
Die vorliegende Erfindung betrifft insbesondere einen neuartigen neuro- chemischen Ansatz bzw. eine neuartige neuro-chemische Analyse bestimmter Parameter in einer Probe des zu untersuchenden Probanden bzw. Patienten, wobei eine signifikant verbesserte Prognose hinsichtlich des Auftretens bzw. der Entwicklung einer Alzheimer-Krankheit ermöglicht bzw. auf das Vorliegen einer Alzheimer-Krankheit bzw. deren präklinischer und klinischer Vorstufen geschlossen werden kann.
Insbesondere betrifft die vorliegende Erfindung die Verwendung eines quantitativen Verhältnisses aus zwei voneinander verschiedenen Amyloid-beta- Peptiden in einer Probe einer Körperflüssigkeit eines Probanden bzw. eines Patienten zur Bestimmung dessen Wahrscheinlichkeit, an einer Alzheimer- Krankheit zu erkranken bzw. zur Bestimmung dessen Erkrankung an einer Vorstufe der Alzheimer-Krankheit.
Des Weiteren betrifft die vorliegende Erfindung entsprechende Verfahren, mit denen die Wahrscheinlichkeit eines Probanden bzw. Patienten bestimmt werden kann, an einer Alzheimer-Krankheit zu erkranken, bzw. mit denen auf das Vorliegen einer solchen Erkrankung geschlossen werden kann.
Schließlich betrifft die vorliegende Erfindung ein Kit, anhand dessen Mittel bereitgestellt werden, mit denen die Bestimmung der Wahrscheinlichkeit eines Patienten bzw. Probanden, an einer Alzheimer-Krankheit zu erkranken, bzw. die Bestimmung auf das Vorliegen einer präklinischen bzw. klinischen Vorstufe der Alzheimer-Krankheit bei dem in Rede stehenden Probanden bzw. Patienten ermöglicht wird.
BESTÄTIGUNGSKOPIE Unter Demenzerkrankungen wird im Allgemeinen ein Defizit bei den davon betroffenen Probanden bzw. Patienten in Bezug auf kognitive, emotionale bzw. soziale Fähigkeiten verstanden, was bei Voranschreiten der Erkrankung zu einer mitunter tiefgreifenden Beeinträchtigung der Lebensalltags der davon betroffenen Individuen einhergeht. Maßgeblich für eine Demenzerkrankung ist der Verlust bereits erworbener Fähigkeiten, wobei diesbezüglich die Sprache, die Motorik und die Persönlichkeitsstruktur betroffen sein können. Eine Demenzerkrankung geht in der Regel mit einer deutlichen Verschlechterung des Kurzzeitgedächtnisses sowie einer starken Beeinträchtigung des Denkvermögens einher.
Einen großen Bestandteil der Demenzerkrankungen nehmen so genannte neu- rodegenerative Erkrankungen, wie die in Rede stehende Alzheimer-Krankheit, eine frontotemporale Demenz sowie eine Lewy-Körperchen-Demenz, ein.
Als neurodegenerative Erkrankungen werden im Allgemeinen eine Gruppe von meist langsam fortschreitenden, erblich oder sporadisch auftretenden bzw. bedingten Erkrankungen des Nervensystems verstanden. Kennzeichnend für derartige Erkrankungen ist der fortschreitende Verlust von Nervenzellen, was zu verschiedenen neurologischen Symptomen führen kann. Neurodegenerative Erkrankungen können grundsätzlich in allen Lebensalterstufen auftreten, wobei jedoch mit zunehmendem Alter die Gefahr, an einer derartigen Erkrankung zu erkranken, deutlich zunimmt. Neurodegenerative Erkrankungen verlaufen in der Regel diffus oder generalisiert und gehen im Allgemeinen mit jeweils charakteristischen histologischen Schädigungsmustern einher.
Eine der häufigsten Formen der neurodegenerativen Erkrankungen stellt die Alzheimer-Krankheit dar, welche synonym auch als Morbus Alzheimer bezeichnet und im Allgemeinen und auch im Nachfolgenden durch das Akronym "AD" verkürzend bezeichnet wird. Die Alzheimer-Krankheit ist gleichermaßen eine neurodegenerative Erkrankung, welche insbesondere bei älteren Menschen auftritt. So tritt die Alzheimer-Krankheit in ihrer häufigsten Form bei Personen jenseits des 65. Lebensjahrs auf, wobei die entsprechenden Vorläuferformen der Alzheimer-Krankheit bzw. präklinische und/oder klinische Vorstufen der Alzheimer-Krankheit auch deutlich früher auftreten können. Die Prävalenz neurodegenerativer Erkrankungen und insbesondere der Alzheimer-Krankheit ist stark zunehmend. So wurde die Anzahl der von der Alzheimer-Krankheit betroffenen Menschen zum Ende des Jahres 2009 auf weltweit etwa 35 Millionen Menschen geschätzt, wobei diesbezügliche Abschätzungen davon ausgehen, dass die Anzahl der von der Alzheimer-Krankheit betroffenen Personen bis zum Jahr 2050 auf über 100 Millionen Menschen ansteigt.
Die Verbreitung neurodegenerativer Demenzerkrankungen steigt weltweit stetig an, wodurch die öffentlichen Gesundheitssysteme in Zukunft schwerwiegenden sozio-ökonomischen Belastungen ausgesetzt sein werden. Die Alzheimer-Krankheit ist hierbei die am weitesten verbreitete Demenzerkrankung.
Was die Ursachen bzw. die Verteilung der Alzheimer-Krankheit anbelangt, so ist eine gewisse familiäre Häufung festzustellen, wonach nämlich etwa 15 % bis 20 % der erfassten Alzheimer-Fälle mit einer bestimmten familiären Häufung im Zusammenhang steht. Bei derartigen Fällen handelt es sich insbesondere um solche, bei denen neben dem Betroffenen selbst auch Personen aus dem Kreis der Geschwister, Eltern bzw. Großeltern etc. von einer Alzheimer- Krankheit betroffen sind. Nur bei einem sehr geringen Teil der Erkrankten ist auch eine genetische Prädisposition mitentscheidend, wobei es sich hierbei insbesondere um Mutationen in Präsenilin-Genen und im APP-Gen (Amyloid- Precursor-Gen) handelt. In Bezug auf die Gesamtfälle an Alzheimer- Erkrankungen beträgt der genetisch bedingte Anteil jedoch wenigster als 0,5 %, so dass im Ergebnis der weitaus größere Teil der aller Alzheimer-Fälle sporadischen Ursprungs ist.
Was die Alzheimer-Krankheit als solche weiterhin anbelangt, so geht diese mit einer im zeitlichen Verlauf der Erkrankung zunehmenden Verschlechterung der kognitiven Leistungsfähigkeit einher, die in der Regel mit einer Abnahme der täglichen Aktivitäten, Verhaltensauffälligkeiten und neuropsycho- logischen Symptomen einhergeht. In diesem Zusammenhang wird dann im Allgemeinen auch von einer Alzheimer-Demenz gesprochen. Die Alzheimer- Demenz stellt gewissermaßen die Folge bzw. das Resultat der den Krank- heitsprozess beschreibenden Alzheimer-Krankheit dar. Von einer Alzheimer- Demenz wird somit vorrangig dann gesprochen, wenn das Ausmaß der Hirn- Schädigung so groß ist, dass kognitive Defizite nicht mehr erfolgreich durch noch intakte Neurone kompensiert werden können. Im Allgemeinen ist der Begriff der Alzheimer-Demenz von dem Begriff der Alzheimer-Krankheit mitumfasst.
Pathognostisch für die Alzheimer-Krankheit sind die sich im Gehirn des Betroffenen bildenden Plaques, welche maßgeblich fehlerhaft gefaltete Amyloid- beta-Peptide aufweisen, sowie die sich in den Neuronen anlagernden Neurofibrillen. Die intrazellulär gelegenen Neurofibrillenbündel bestehen im Wesentlichen aus dem Tau-Protein, welches dann zu den in Rede stehenden Fibrillen aggregiert, wenn es übermäßig phosphoryliert ist.
Im Krankheitsverlauf wird durch das Absterben von Neuronen eine Hirnatrophie manifest; außerdem wird der Botenstoff Acetylcholin nicht mehr in ausreichenden Mengen produziert, was insbesondere auch durch eine Verminderung des Gehalts an Cholinacetyltransferase bedingt ist.
Die Amyloid-beta-Peptide, welche synonym auch als A-beta-Proteine, A-beta-Peptide, A-beta bzw. als Aß-Peptide bezeichnet werden, entstehen aus dem so genannten Amyloid-Precursor-Protein (APP), bei welchem es sich um ein integrales Membranprotein handelt. Beim APP handelt es sich um ein so genanntes Typ I-Transmembranprotein mit einem sich auf der extrazellulären Seite befindlichen aminoterminalen Ende. Der Carboxyl-Terminus des Proteins befindet sich entsprechend auf der intrazellulären Seite. APP wird von bestimmten Proteinasen, den so genannten Sekretasen, gespalten, wobei hier insbesondere der ß-Sekretase sowie der γ-Sekretase eine besondere Bedeutung zukommt. Durch die Spaltung von APP kommt es zur Freisetzung der A-beta- Peptide aus dem Vorläufer-Protein, wobei im Rahmen des so genannten amy- loidogenen Wegs APP in einem ersten Schritt auf der extrazellulären Seite von der ß-Sekretase geschnitten wird. In einem nachfolgenden Schritt erfolgt ein weiterer Schnitt durch die γ-Sekretase, welcher innerhalb der Transmembrandomäne von APP erfolgt und zu einer Freisetzung der A-beta- Peptide führt. Bei den A-beta-Peptiden handelt es sich somit um ein durch die Aktivität von ß- und γ-Sekretase gebildetes potenziell neurotoxisches Bruchstück aus dem Amyloid-Precursor-Protein, welches im Allgemeinen eine Länge von 37 bis 42 Aminosäuren aufweist. Der in diesem Zusammenhang entstehenden Haupttyp der A-beta-Peptide ist das 40 Aminosäuren lange Aß(l-40), während ein kleinerer Anteil aus Aß(l-42) gebildet wird, welches entsprechend 42 Aminosäuren aufweist. Das längere Aß(l-42) weist dabei eine höhere Tendenz zur Aggregation auf als das kleinere Aß(l-40). Darüber hinaus können eine Reihe weiterer A-beta-Peptide entstehen, wie beispielsweise am amino- terminalen Ende trunkierte A-beta-Peptide, wie Aß(2-40) und Aß(2-42).
Im Stand der Technik werden A-beta-Peptide in Zusammenhang mit der pathologischen Ausbildung der Alzheimer-Krankheit gebracht.
Vor dem zuvor genannten Hintergrund sind im Stand der Technik zahlreiche therapeutische Ansätze zu realisieren versucht worden, welche eine therapeutische Behandlung der Alzheimer-Krankheit an sich ermöglichen sollen. So liegt ein therapeutischer Fokus darauf, eine Immunisierung gegenüber den zuvor beschriebenen A-beta-Peptiden zu erreichen, insbesondere im Zusammenhang mit der Anregung der Biosynthese von diesbezüglich spezifischen Antikörpern. Ein weiterer therapeutischer Ansatz besteht in der Entwicklung und Anwendung spezifischer Sekretase-Inhibitoren, welche insbesondere spezifisch im Hinblick auf die vorgenannte ß-Sekretase bzw. γ-Sekretase sein sollen. Die diesbezüglichen Ansätze sind jedoch aus therapeutischer Sicht noch in keiner Weise zufriedenstellend bzw. mit mitunter schwerwiegenden Nebenwirkungen verbunden.
Ein weiterer therapeutischer Ansatz ist in der gezielten Applikation von so genannten Acetylcholinesterase-Inhibitoren zu sehen, anhand derer die enzy- matische Spaltung des bei Alzheimer-Erkrankten in zu niedrigen Mengen vorkommenden Acetylcholins vermindert werden soll. Hierbei handelt es sich jedoch um einen nicht die Krankheit an sich beeinflussenden therapeutischen Ansatz. Denn die Applikation von Acetylcholinesterase-Inhibitoren, wie Do- nepezil, Rivastigmin und Galantamin, zielt auf eine symptomatische Behandlung der Alzheimer-Krankheit ab. Auf Basis eines derartigen Ansatzes ist es lediglich möglich, die kognitive Leistungsfähigkeit für einen begrenzten Zeitraum leicht zu verbessern bzw. auf einem stagnierenden Niveau zu erhalten.
Im Ergebnis ist im Stand der Technik bislang kein therapeutischer Ansatz gefunden worden, anhand dessen die Alzheimer-Krankheit geheilt werden kann. Insbesondere auch vor dem Hintergrund eines bislang fehlenden wirksamen therapeutischen Ansatzes zur Behandlung der Alzheimer-Krankheit kommt einer möglichst frühzeitigen Diagnose der Erkrankung eine sehr große Bedeutung zu, wobei die Diagnose bereits in einem frühklinischen oder sogar präklinischen Stadium der Alzheimer-Krankheit gestellt werden sollte. Denn auf dieser Basis ist zum einen nicht nur eine Prognose bzw. die Bestimmung einer Wahrscheinlichkeit möglich, ob ein Proband bzw. Patient an der Alzheimer-Krankheit erkranken könnte, sondern zum anderen kann auf dieser Basis dem weiteren progressiven Krankheits verlauf bereits in einem sehr frühen Stadium entgegengewirkt werden. So ist es im Allgemeinen anerkannt, dass beispielsweise regelmäßige Bewegung, gezielte Gedächtnisübungen sowie eine gezielte Optimierung der Lebensweise den Krankheitsverlauf verzögern bzw. abmildern sowie den eigentlichen Ausbruch, d. h. die klinische Diagnose der Alzheimer-Krankheit, herauszögern können. Eine möglichst frühe Diagnose der Alzheimer-Krankheit, welche bereits auf Ebene der präklinischen oder frühklinischen Vorstufen ansetzt, ist auch im Hinblick auf neue therapeutische Ansätze zur Behandlung der Alzheimer-Krankheit von großer Bedeutung.
Vor diesem Hintergrund sind im Stand der Technik bereits zahlreiche Ansätze untersucht worden, anhand derer eine möglichst frühzeitige Diagnose der Alzheimer-Krankheit ermöglicht werden soll. So sind in diesem Zusammenhang allgemein etablierte klinische Verfahren von Bedeutung, welche maßgeblich auf einer Differentialdiagnose beruhen, wobei speziell ausgerichtete kognitive Leistungstests und auch eine Fremdanamnese - also die Berücksichtigung von Beobachtungen der Angehörigen einer betroffenen Person - um- fasst werden. Auch bildgebende Verfahren, wie die Computertomographie oder Magnetresonanztomographie werden angewendet, um eine Diagnose der Alzheimer-Krankheit zu ermöglichen. Die vorgenannten Ansätze sind jedoch mit dem Nachteil behaftet, dass sie zum einen mitunter apparativ aufwendig sind und im Allgemeinen eine Diagnose der Alzheimer-Krankheit erst in einem späteren bzw. fortgeschrittenen klinischen Stadium ermöglichen.
Ein weiterer Ansatz zur frühzeitigen Diagnose der Alzheimer-Krankheit be- steht in einer Liquoruntersuchung eines Probanden bzw. Patienten, wobei diesbezüglich insbesondere der so genannte Liquor cerebrospinalis bzw. die Cerebrospinal-Flüssigkeit (CSF) für die Untersuchung herangezogen wird. Dabei wird vornehmlich auf die Analyse bestimmter Biomarker abgezielt, wobei in diesem Zusammenhang auch spezielle, im Liquor vorkommende A-beta-Peptide zur Analyse herangezogen werden. Nachteilig ist, dass dabei die Probe jedoch über eine aufwendige wie nicht risikolose und mitunter schmerzhafte Punktion entnommen werden muss, was mitunter auch mit unerwünschten Infektionen einhergehen kann. Somit eignet sich eine Liquorent- nahme nur eingeschränkt zur Untersuchung bei einem ersten Verdacht auf ei- ne mögliche Alzheimer-Erkrankung, wie er beispielsweise bei Patienten mit einer leichten kognitiven Störung vorliegen kann, und auch nur eingeschränkt zur Risikoabschätzung einer drohenden Alzheimer-Demenz.
Im Stand der Technik wurden spezielle Biomarker für Demenzerkrankungen in der Cerebrospinal-Flüssigkeit identifiziert, wodurch die diagnostische Genauigkeit eines verlässlichen Nachweises der Alzheimer-Krankheit in einem frühen oder sogar vorklinischen Stadium in gewisser Weise verbessert werden soll. Im Vergleich zu Blutuntersuchungen sind die neuro-chemischen CSF- Diagnoseverfahren zur Erkennung von Demenzerkrankungen (CSF-Based Neurochemical Dementia Diagnostics (CSF-NDD)) im höheren Maße invasiv und zudem schmerzhafter, teurer und zeitaufwendiger. Routinemäßige Wiederholungsuntersuchungen im Rahmen von Verlaufskontrollen sind daher nicht durchführbar. Es besteht folglich ein großer Bedarf an alternativen Testverfahren mit vereinfachter und weniger belastenden Probengewinnung, welche darüber hinaus auch die Überwachung des Krankheitsverlaufs oder des Therapieerfolgs ermöglichen sollen. Vor dem zuvor angeführten Hintergrund besteht somit eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung darin, neue und effiziente Konzepte im Hinblick auf spezielle Verfahren und Verwendungen bereitzustellen, auf Basis derer eine Aussage über das Vorliegen einer Alzheimer-Krankheit bzw. eine Prognose im Hinblick auf eine mögliche Erkrankung an der Alzheimer-Krankheit in einem möglichst frühen, insbesondere in einem präklinischen oder frühklinischen Stadium, ermöglicht werden soll.
Insbesondere soll im Rahmen der vorliegenden Erfindung ein entsprechendes Konzept bzw. Verfahren bereitgestellt werden, welches leicht durchzufuhren ist und mit möglichst wenigen Nebenwirkungen verbunden ist. Dabei soll im Rahmen der vorliegenden Erfindung auch sichergestellt sein, dass die Bereitstellung bzw. Entnahme von im Rahmen des erfindungsgemäßen Konzeptes zu analysierende Proben für den Probanden möglichst schmerzfrei und mit möglichst geringen bzw. keinen Nebenwirkungen verbunden ist.
Eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung besteht darin, ein Kit bereitzustellen, anhand dessen eine einfache und standardisierte Durchführung des erfindungsgemäßen Konzeptes zur Ermittlung einer Alzheimer-Krankheit ermöglicht wird, insbesondere was die in Rede stehenden frühen Formen der Erkrankung anbelangt.
Schließlich besteht eine der Erfindung zugrundeliegende Aufgabe darin, ein Verfahren bzw. eine Verwendung bzw. ein Kit der vorgenannten Art bereitzustellen, welches bzw. welche jeweils die Nachteile des Standes der Technik zu vermeiden bzw. diese zumindest zu verringern imstande sind.
Insbesondere sollen im Rahmen der vorliegenden Erfindung in gezielter Weise spezifische Biomarker aus einer speziellen Probe verwendet werden, um auf dieser Basis eine möglichst frühzeitige Aussage im Hinblick auf das Vorliegen bzw. auf eine etwaige Entwicklung einer Alzheimer-Erkrankung zu ermöglichen. Insbesondere soll auf Basis der vorliegenden Erfindung darüber hinaus auch die Möglichkeit eröffnet werden, in einfacher und sicherer Weise den Verlauf einer bereits ausgebrochenen Alzheimer-Krankheit zu beobachten bzw. die Wirksamkeit von Therapieansätzen nachzuvollziehen.
Zur Lösung der zuvor geschilderten Aufgabenstellung schlägt die vorliegende Erfindung - gemäß einem ersten Aspekt der vorliegenden Erfindung - die Verwendung mindestens eines quantitativen Verhältnisses aus zwei voneinander verschiedenen Amyloid-beta-Peptiden in einer Probe einer Körperflüssig- keit eines Probanden bzw. Patienten zur Bestimmung dessen Wahrscheinlichkeit, an einer Alzheimer-Krankheit zu erkranken, bzw. zur Bestimmung dessen Wahrscheinlichkeit, an einer Alzheimer-Krankheit zu erkranken, bzw. zur Bestimmung dessen Erkrankung an einer Vorstufe der Alzheimer-Krankheit gemäß Anspruch 1 vor; weitere, vorteilhafte Ausgestaltungen dieses Erfin- dungsaspekts sind Gegenstand der diesbezüglichen Unteransprüche.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung - gemäß einem weiteren Aspekt der vorliegenden Erfindung - sind Verfahren zur Bestimmung der Wahrscheinlichkeit eines Probanden bzw. Patienten, an einer Alzheimer- Krankheit zu erkranken, nach Anspruch 31 bzw. nach Anspruch 32; eine weitere, vorteilhafte Ausgestaltung dieser Erfindungsaspekte ist Gegenstand des betreffenden Unteranspruchs.
Schließlich ist ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung - gemäß einem wiederum weiteren Aspekt der vorliegenden Erfindung - ein Kit nach Anspruch 34, welches insbesondere zur Bestimmung der Wahrscheinlichkeit eines Patienten bzw. Probanden, an einer Alzheimer-Krankheit zu erkranken, bzw. welches insbesondere zur Bestimmung dessen Erkrankung an einer Vorstufe der Alzheimer-Krankheit verwendet werden kann; weitere, vorteilhafte Ausgestaltungen dieses Erfindungsaspekts sind Gegenstand der betreffenden Unteransprüche.
Es versteht sich von selbst, dass im Folgenden besondere Ausgestaltungen, Ausführungsformen oder dergleichen, welche nur im Zusammenhang mit ei- nem Erfindungsaspekt beschrieben sind, auch in Bezug auf die anderen Erfin- dungsaspekte entsprechend gelten, ohne dass dies einer ausdrücklichen Erwähnung bedarf.
Darüber hinaus gilt, dass alle nachfolgend angeführten experimentellen Untersuchungen bzw. Studien oder dergleichen grundsätzlich mit dem Fachmann an sich bekannten bzw. genormten bzw. explizit angegebenen Methoden bzw. Verfahren durchgeführt werden können.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung - gemäß einem e r s t e n Aspekt der vorliegenden Erfindung - ist somit die Verwendung mindestens eines quantitativen Verhältnisses (Quotienten) aus zwei voneinander verschiedenen Amy- loid-beta-Peptiden (A-beta; Aß) in einer Probe einer Körperflüssigkeit eines Probanden und/oder Patienten zur Bestimmung dessen Wahrscheinlichkeit (Risikos), an einer Alzheimer-Krankheit (Morbus Alzheimer, AD) zu erkran- ken und/oder zur Bestimmung (Diagnose) dessen Erkrankung an einer Vorstufe der Alzheimer-Krankheit, wobei die Amyloid-beta-Peptide ausgewählt werden aus (a) Aß(l-42), (b) Aß(2-40) und (c) Aß(2-42) und wobei das quantitative Verhältnis aus (a) / (b) oder vice versa und/oder aus (a) / (c) oder vice versa gebildet wird.
Im Rahmen der vorliegenden Erfindung ist es somit völlig überraschend, dass die Aufgabenstellung durch die zuvor beschriebene erfindungsgemäße Verwendung eines Verhältnisses auf Basis spezieller Amyloid-beta-Peptide gelöst werden kann.
In diesem Zusammenhang ist es gleichermaßen völlig unerwartet, dass das in Rede stehende Verhältnis herangezogen werden kann, und das Vorliegen einer Alzheimer-Krankheit verlässlich festzustellen bzw. um die Entwicklung einer Alzheimer-Krankheit verlässlich prädiktiv zu bestimmen.
Zwar ist im Stand der Technik der Zusammenhang zwischen dem Auftreten von Amyloid-beta-Peptiden als solchen und der Alzheimer-Krankheit grundsätzlich bekannt, und auch der allgemeine Aspekt des Einsatzes von Amyloid- beta-Peptiden in Bezug auf die Diagnose der Alzheimer-Krankheit wird im Stand der Technik in Betracht gezogen; jedoch ist es bis zum Zeitpunkt der vorliegenden Erfindung im Stand der Technik in keiner Weise in Erwägung gezogen worden, ein derart spezielles, erfindungsgemäß zugrundeliegendes Verhältnis von Amyloid-beta-Peptiden - und dies darüber hinaus insbesondere auf Basis der Verwendung einer sehr speziellen Probe, wie nachfolgend noch angeführt - in Erwägung zu ziehen, um so eine fundierte bzw. verlässliche Aussage über das Vorliegen einer Alzheimer-Krankheit bzw. eine verlässliche Prognose bzw. Prädiktion der Ausbildung bzw. Entwicklung einer Alzheimer-Erkrankung bei einem Probanden/Patienten zu ermöglichen.
Dabei ist es im Rahmen der vorliegenden Erfindung vollkommen überraschend, dass das spezielle Verhältnis bestimmter Amyloid-beta-Peptide hinsichtlich des Vorliegens einer Alzheimer-Krankheit von hoher Signifikanz ist und somit das spezielle Verhältnis bestimmter Amyloid-beta-Peptide als verlässlicher Indikator für das Vorliegen einer Alzheimer-Krankheit auch in einem frühen Stadium der Erkrankung, wie beispielsweise präklinischen und frühklinischen Formen der Alzheimer-Erkrankung, herangezogen werden kann.
Dabei handelt es sich im Rahmen der vorliegenden Erfindung um eine Verwendung bzw. ein Verfahren, welche bzw. welches ex vivo bzw. in vitro auf Basis vorliegender Proben von Körperflüssigkeiten, insbesondere blutbasierten Proben, durchgeführt werden kann, was eine gute Standardisierung bei leichter Durchführbarkeit gewährleistet. Zudem stellt die erfindungsgemäße Konzeption eine deutliche Entlastung des Probanden/Patienten dar, da die zugrundeliegende Probe, insbesondere auf Basis von Blut, ohne nennenswerte Beeinträchtigung bzw. Nebenwirkung gewonnen werden kann.
Eine grundlegende Idee der vorliegenden Erfindung ist somit darin zu sehen, auf Basis der Ermittlung des quantitativen Verhältnisses zweier spezifischer Amyloid-beta-Peptide eine aussagekräftige bzw. verlässliche Prognose bzw. Prädiktion hinsichtlich der Entwicklung einer Alzheimer-Krankheit zu ermöglichen. Im Rahmen der vorliegenden Erfindung ist jedoch nicht nur eine aussagekräftige Prädiktion bzw. Prognose hinsichtlich der Entwicklung bzw. des Fortschreitens einer Alzheimer-Krankheit möglich; vielmehr erlaubt die vorliegende Erfindung auf Basis der Analyse des qualitativen Verhältnisses zweier spezieller Amyloid-beta-Peptide in der vorliegenden Probe eine aussagekräftige Bestimmung bzw. Diagnose hinsichtlich des etwaigen Vorliegens ei- ner Alzheimer-Erkrankung bzw. einer Alzheimer-Demenz - und dies bereits in einem sehr frühen Stadium der Erkrankung, welche nämlich bereits in der präklinischen bzw. frühen klinischen Phase bestimmt werden kann.
In diesem Zusammenhang hat die Anmelderin in völlig überraschender Weise herausgefunden, dass gerade das spezifische Verhältnis des Amyloid-beta- Peptids Aß(l-42) einerseits zu dem Amyloid-beta-Peptid Aß(2-40) bzw. zu dem Amyloid-beta-Peptid Aß(2-42) andererseits aus einer Probe einer Kör- perflüssigkeit, vorzugsweise Blut, zu besonders aussagekräftigen Ergebnissen hinsichtlich der Analyse des Vorliegens einer Alzheimer-Krankheit bzw. der Prognose des Auftretens einer Alzheimer-Krankheit führt.
Das der vorliegenden Erfindung zugrundeliegende Prinzip fokussiert somit auf eine neuro-chemische Analyse einer Probe einer Körperflüssigkeit, insbesondere auf Basis von Blut, im Hinblick auf die spezifischen, zuvor genannten Amyloid-beta-Peptide im Sinne von spezifisch für die Alzheimer-Krankheit bzw. ihre Vorstufen indikativen Biomarkern, um auf diese Weise die zuvor angeführten Aussagen hinsichtlich einer Alzheimer-Krankheit bei einem Probanden bzw. Patienten zu ermöglichen.
Im Rahmen der vorliegenden Erfindung ist es gleichermaßen möglich, eine differenzielle Diagnose der Alzheimer-Krankheit mit einem Ausschluss anderer Demenzerkrankungen zu ermöglichen, da - in völlig unerwarteter Weise - die Anmelderin herausgefunden hat, dass die sehr speziellen Verhältnisse der vorgenannten Amyloid-beta-Peptide in einer definierten Probe sehr spezifisch hinsichtlich der Alzheimer-Krankheit bzw. ihrer Vor- bzw. Frühformen sind. Hierin ist ein weiterer zentraler Vorteil der vorliegenden Erfindung zu sehen.
Erfindungsgemäß fungieren die vorgenannten speziellen Amyloid-beta- Peptide - nämlich Aß(l-42) einerseits und Aß(2-40) bzw. Aß(2-42) andererseits - demnach als indikative Biomarker, welche nämlich hinsichtlich einer jeweils speziellen Konzentration und - daraus resultierend - mit einem speziellen Verhältnis zueinander spezifisch für das Vorliegen einer Alzheimer- Krankheit bei einem Patienten bzw. Probanden sind. Die in Rede stehenden Amyloid-beta-Peptide und deren spezifischen Konzentrationen bzw. Mengen in einer Probe stehen somit im Zusammenhang mit der Alzheimer-Krankheit. Die in Rede stehenden Amyloid-beta-Peptide sind somit gewissermaßen Indikatoren für pathologische Vorgänge im Rahmen der Alzheimer-Krankheit.
Die erfindungsgemäße Konzeption ist zum einen besonders aussagekräftig, da sie auf der Analyse definierter neuro-chemischer Biomarker in einer definierten Probe basiert, welche im direktem Zusammenhang mit einer Alzheimer- Krankheit stehen. Zum anderen sind darüber hinaus die erfindungsgemäße Verwendung bzw. das erfindungsgemäße Verfahren, wie nachfolgend noch ausführlich beschrieben, gegenüber den im Stand der Technik eingesetzten Verfahren, wie psychometrischen Verfahren, neuro-bildgebenden Verfahren oder dergleichen, deutlich vereinfacht und kostengünstig durchzuführen.
Auf Basis der Verwendung spezieller Biomarker bzw. Bioindikatoren der vorgenannten Art ist - neben einer Aussage, ob bei einem Probanden bzw. Patienten eine Alzheimer-Krankheit vorliegt bzw. ob hinsichtlich des Probanden bzw. Patienten eine gewisse Wahrscheinlichkeit vorliegt, dass dieser an einer Alzheimer-Krankheit erkrankt - auch eine weiterführende Aussage möglich, inwiefern etwaige therapeutisch wirksame Substanzen eine positive Wirkung auf den Verlauf einer Alzheimer-Krankheit haben, d. h. die Biomarker können gleichermaßen als Indikatoren für etwaige Arzneimittelwirkungen herangezogen werden.
Die vorliegende Erfindung zeichnet sich dadurch aus, dass auf Basis der erfindungsgemäßen Konzeption eine schnelle sowie aussagekräftige Analyse hinsichtlich einer Alzheimer-Erkrankung bzw. hinsichtlich der Wahrscheinlichkeit des Auftretens einer solchen Erkrankung möglich ist, welche zudem für den Patienten insbesondere im Hinblick auf die Probenbereitstellung nicht bzw. nur wenig belastend ist.
Durch die erfindungsgemäß gegebene Möglichkeit der Bestimmung einer Alzheimer-Erkrankung bereits in einem präklinischen bzw. frühen klinischen Stadium bzw. durch die Möglichkeit, eine Aussage über das etwaige Auftreten einer Alzheimer-Erkrankung im weiteren Lebensverlauf des Probanden bzw. Patienten zu treffen, kann bereits in einem sehr frühen Stadium bzw. im Sinne eines präventiven Ansatzes auf die mögliche Alzheimer-Erkrankung reagiert werden, beispielsweise im Hinblick auf eine entsprechend optimierte Lebens- fuhrung des Probanden bzw. Patienten bzw. im Hinblick auf die zweckgerichtete Verabreichung von Medikamenten, welche beispielsweise die kognitiven Fähigkeiten des Probanden bzw. des Patienten verbessern bzw. den progressiven Verlauf der Erkrankung verzögern können.
Bei dem zugrundeliegenden Peptid Aß(l-42) handelt es sich insbesondere um ein Amyloid-beta-Peptid mit einer Länge von 42 Aminosäuren, dessen erste Position bzw. dessen aminoterminales Ende durch Aspartat gebildet wird, während es sich bei Aß(2-40) bzw. Aß(2-42) um Amyloid-beta-Peptide handelt, welche eine Länge von 40 Aminosäuren bzw. 42 Aminosäuren aufweisen und jeweils an ihrem aminoterminalen Ende trunkiert sind. Die in Rede stehenden speziellen Amyloid-beta-Peptide sind dem Fachmann sowohl hinsichtlich ihrer Struktur als auch hinsichtlich ihrer Nomenklatur als solche wohlbekannt, so dass es diesbezüglich keiner weiterführenden Ausführungen bedarf.
Der Begriff "quantitatives Verhältnis" bzw. "Quotient", wie er im Rahmen der vorliegenden Erfindung verwendet wird, fokussiert insbesondere auf die relative Konzentration bzw. die relative Menge der zuvor genannten Amyloid- beta-Peptide zueinander und somit auf eine relative Quantifizierung der in Rede Amyloid-beta-Peptide. Die Ermittlung der jeweiligen Konzentration bzw. Menge und der daraus resultierenden Verhältnisse der entsprechenden Amyloid-beta-Peptide kann auf Basis von dem Fachmann an sich wohlbekannten Analyseverfahren bestimmt bzw. ermittelt werden. Ein erfindungsgemäß bevorzugtes Verfahren zur Bestimmung der jeweiligen Verhältnisse auf Basis einer Immunpräzipitation mit einem nachfolgenden Proteinauftren- nungs- und -nachweisverfahren wird nachfolgend noch detailliert angeführt.
Im Rahmen der vorliegenden Erfindung kann es sich bei dem Probanden bzw. Patienten im Allgemeinen um ein menschliches oder tierisches Lebewesen, insbesondere um einen Säuger (Säugetier), handeln. Insbesondere handelt es sich bei dem Probanden bzw. Patienten um ein menschliches Lebewesen. Was die Probe- bzw. Körperflüssigkeit des Probanden bzw. Patienten anbelangt, so kann es sich hierbei in nicht beschränkender Weise um Flüssigkeiten handeln, welche vom Körper des Probanden stammen bzw. von diesem gebildet werden. Bei der Probe bzw. der Körperflüssigkeit kann es sich insbesondere um Blut, Plasma, Lymphe, Urin und/oder Cerebrospinal-Flüssigkeit [Liquor ce- T EP2011/001724
- 15 -
rebrospinalis (Gehirn-Rückenmarks-Flüssigkeit)] handeln. Wie nachfolgend noch detailliert angeführt, ist im Rahmen der vorliegenden Erfindung die Verwendung einer Körperflüssigkeit auf Basis von Blut, wie z. B. Blutplasma bzw. Blutserum, von besonderem Vorteil, insbesondere da sich auf dieser Basis - in völlig überraschender Weise - besonders aussagekräftige Ergebnisse erzielen lassen und zudem die Probenahme vereinfacht ist.
Was weiterhin den Probanden bzw. Patienten als solchen anbelangt, dessen Probe einer Körperflüssigkeit im Rahmen der vorliegenden Erfindung unter Zugrundelegung der Verwendung bzw. des Verfahrens nach der Erfindung analysiert werden soll, so kann dieser Symptome einer insbesondere leichten Gehirnleistungsstörung, vorzugsweise einer insbesondere leichten Gedächtnisstörung, aufweisen. Was den Probanden bzw. Patienten weiterhin anbelangt, so kann dieser insbesondere Symptome einer leichten kognitiven Beeinträchtigung (Mild Cpgnitive Impairment, MCI) aufweisen.
Bei der leichten kognitiven Beeinträchtigung (MCI) kann es sich insbesondere um eine inzipiente Demenzerkrankung bzw. um eine isolierte Beeinträchtigung des Gedächtnisses handeln. Im Allgemeinen weisen die Probanden bzw. Patienten, welche im Rahmen der erfindungsgemäßen Verwendung bzw. des erfindungsgemäßen Verfahrens in Betracht kommen bzw. weiterführend untersucht werden, kognitive Beeinträchtigungen bzw. Schwächen auf, welche stärker ausgeprägt sind als bei Individuen vergleichbaren Alters bzw. vergleichbarer Konstitution. Insbesondere ist die leichte kognitive Beeinträchtigung (MCI) dadurch gekennzeichnet, dass die Symptome noch nicht bzw. nicht derart ausgeprägt sind, dass sie zu einer nachhaltigen Beeinträchtigung des Probanden bzw. Patienten in seinem täglichen Handeln führen.
Die erfindungsgemäße Verwendung bzw. das erfindungsgemäße Verfahren ist auch insbesondere in Bezug auf Patienten bzw. Probanden mit einer leichten kognitiven Beeinträchtigung (MCI) von großem Interesse, da im Allgemeinen Personen mit einer leichten kognitiven Beeinträchtigung mit erhöhter Wahrscheinlichkeit im weiteren Verlauf an einer Alzheimer-Krankheit erkranken. So zeigen Studien, dass 10 % bis 15 % der von einer leichten kognitiven Beeinträchtigung betroffenen Personen pro Jahr an einer Alzheimer-Krankheit erkranken. 724
- 16 -
Die vorliegende Erfindung ist jedoch im Allgemeinen nicht auf Probanden bzw. Patienten mit einer leichten kognitiven Beeinträchtigung (MCI), bei welchen unter Einsatz der erfindungsgemäßen Verwendung bzw. des erfindungsgemäßen Verfahrens diagnostisch abgeklärt werden kann, ob eine Alzheimer- Erkrankung vorliegt oder ob die Gefahr besteht, im weiteren Verlauf eine Alzheimer-Krankheit zu entwickeln, beschränkt. Vielmehr können auch solche Probanden bzw. Patienten ohne konkrete Symptome einer kognitiven Beeinträchtigung bzw. - insbesondere im Hinblick auf eine Differenzialdiagnose - auch solche Patienten bzw. Probanden untersucht werden, bei denen zumindest der Verdacht auf eine von der Alzheimer-Krankheit verschiedenen Demenzerkrankung vorliegt.
Was die Vorstufe der Alzheimer-Krankheit anbelangt, welche auf Basis der vorliegenden Erfindung ermittelt bzw. diagnostiziert werden kann, so handelt es sich hierbei insbesondere um eine präklinische bzw. subklinische Stufe der Alzheimer-Krankheit. Bei der präklinischen Vorstufe der Alzheimer- Krankheit kann es sich insbesondere um eine inzipiente bzw. prodromale Alzheimer-Krankheit, welche synonym auch als incipient AD bezeichnet wird, handeln. Mit anderen Worten kann es sich im Rahmen der vorliegenden Erfindung bei der Vorstufe der Alzheimer-Krankheit um eine beginnende bzw. wahrscheinliche Alzheimer-Krankheit handeln. Insbesondere kann es sich bei der inzipienten Alzheimer-Krankheit um eine Vorstufe der Alzheimer- Krankheit handeln, welche mit im Stand der Technik etablierten Diagnoseverfahren in diesem Krankheitsstadium noch nicht als eine Alzheimer- Erkrankung diagnostiziert werden kann.
Erfindungsgemäß kann es sich bei der Vorstufe der Alzheimer-Krankheit, welche auf Basis der erfindungsgemäßen Verwendung bzw. des erfindungsgemäßen Verfahrens nachgewiesen werden kann, auch um eine klinische Stufe der Alzheimer-Krankheit handeln. Insbesondere kann es sich bei der Vorstufe der Alzheimer-Krankheit um eine frühe Alzheimer-Krankheit, welche synonym auch als early AD bezeichnet wird, handeln. Insbesondere kann es sich bei der frühen Alzheimer-Krankheit um eine bereits auf Basis der im Stand der Technik bekannten Verfahren klinisch diagnostizierbaren Alzheimer-Erkrankung im frühen Stadium handeln. Insbesondere kann es sich bei Vorstufe der Alzheimer-Krankheit um ein solches Stadium der Alzheimer-Krankheit mit zwar fortgeschrittenen kognitiven Defiziten handeln, wobei die kognitiven Defizite jedoch noch nicht so weit vorangeschritten sind, dass diese zu einer tiefgreifenden Beeinträchtigung des Probanden bzw. Patienten im Alltag führen.
Erfindungsgemäß ist es somit insbesondere unter Berücksichtigung der obigen Ausführungen zu dem Begriff der Alzheimer-Demenz möglich, auf Basis der erfindungsgemäßen Konzeption eine Aussage über das Vorliegen bzw. über die künftige Entwicklung einer Alzheimer-Demenz bei einem Probanden bzw. Patienten zu ermöglichen, insbesondere auf Grundlage der entsprechenden präklinischen und/oder klinischen Phasen der Alzheimer-Demenz auf Basis und/oder als Folge einer zugrunde liegenden Alzheimer-Erkrankung.
Auf dieser Basis kann die erfindungsgemäße Verwendung bzw. das erfindungsgemäße Verfahren somit vor dem Hintergrund durchgeführt werden, um bereits in einem frühen Stadium Maßnahmen einzuleiten, welche den Verlauf der Alzheimer-Krankheit verzögern bzw. abschwächen können, um so die Lebensqualität des Patienten bzw. Probanden möglichst lange aufrecht zu erhalten.
In bevorzugter Weise handelt es sich bei dem Verhältnis der in Rede stehenden Amyloid-beta-Peptide um ein mengen- bzw. konzentrationsbezogenes Verhältnis.
Besonders gute Ergebnisse hinsichtlich der Feststellung einer Alzheimer- Erkrankung bzw. hinsichtlich der Ermittelung des Risikos, an einer Alzheimer-Krankheit zu erkranken, können erfindungsgemäß erreicht werden, wenn das Verhältnis aus (a) Aß(l-42) / (b) Aß(2-40) [d. h. Aß(l-42)/Aß(2-40)- Verhältnis oder (a)/(b)- Verhältnis] und/oder das Verhältnis aus (a) Aß(l- 42) / (c) Aß(2-42) [d. h. Aß(l-42)/Aß(2-42)-Verhältnis oder (a)/(c)- Verhältnis], vorzugsweise das Verhältnis aus (a) Aß(l-42) / (b) Aß(2-40) [d. h. Aß(l-42)/Aß(2-42)- Verhältnis oder (a)/(c Verhältnis], gebildet wird. Gleichermaßen ist es erfindungsgemäß im besonderen Maße bevorzugt, wenn Blut des Probanden bzw. Patienten als Probe zur Ermittlung des quantitativen Verhältnisses der in Rede stehenden Amyloid-beta-Peptide eingesetzt wird. In diesem Zusammenhang ist es von besonderem Vorteil, wenn im Rahmen der vorliegenden Erfindung Blutplasma (Plasma) bzw. Blutserum (Serum), vorzugsweise Blutplasma (Plasma), des Probanden bzw. Patienten als Probe eingesetzt wird.
In diesem Zusammenhang ist es nämlich völlig überraschend, dass im Blut des Probanden bzw. Patienten und insbesondere im Plasma bzw. Serum eine signifikante Veränderung der in Rede stehenden Verhältnisse der bestimmten Amyloid-beta-Peptide im Zusammenhang mit der Alzheimer-Krankheit (und dies insbesondere auch im Hinblick auf frühe Stadien der Erkrankung) vorliegt.
In diesem Zusammenhang basiert die vorliegende Erfindung somit auf der völlig überraschenden Erkenntnis der Anmelderin, dass - ohne sich auf diese Theorie beschränken zu wollen - im Rahmen der Alzheimer-Erkrankung - und dies auch bereits in frühen Stadien der Erkrankung - gewissermaßen eine ganzheitliche bzw. übergeordnete pathologische "Verstellung" des gesamten Organismus bzw. Körpers vorliegt, was auch mit einer signifikanten Veränderung der jeweiligen Konzentrationen der in Rede stehenden Amyloid-beta- Peptide im Blut einhergeht.
Dass ausgerechnet Blut bzw. Blutplasma und/oder Blutserum zur Diagnose des Vorliegens einer Alzheimer-Krankheit herangezogen werden kann, ist umso überraschender, als bislang maßgeblich davon ausgegangen worden ist, dass Amyloid-beta-Peptide als solche nicht im Blut, sondern vorrangig im Gehirngewebe selbst bzw. in den mit dem Gehirn in Zusammenhang bzw. in Verbindung stehenden Flüssigkeiten, wie der Cerebrospinal-Flüssigkeit, im Rahmen der Erkrankung beeinflusst sind und somit Blut gewissermaßen als periphere und vom Gehirn selbst abgetrennte Körperflüssigkeit im Hinblick auf Veränderungen der Amyloid-beta-Peptide im Stand der Technik nicht maßgeblich herangezogen worden ist. Die völlig überraschende Eignung der Verwendung von Blut bzw. Blutplasma und/oder Blutserum als zu analysierende Probe basiert auch auf der völlig ü- berraschenden Erkenntnis der Anmelderin, dass insbesondere auch im Frühstadium der Alzheimer-Krankheit eine grundsätzliche "Verstellung" bestimmter physiologischer Parameter im Körper der von der Erkrankung Betroffenen vorliegt, welche sich in spezieller Weise auch im Blut des Betroffenen widerspiegelt, und zwar insbesondere, was die in Rede stehenden Verhältnisse der zuvor genannten speziellen Amyloid-beta-Peptide anbelangt.
In diesem Zusammenhang ist es gleichermaßen völlig überraschend, dass insbesondere das spezielle Amyloid-beta-Peptid Aß(2-40) herangezogen werden kann, welches nämlich in vielen anderen Geweben bzw. Körperbestandteilen so nicht nachzuweisen ist.
Auch in diesem Lichte ist es im Rahmen der vorliegenden Erfindung völlig unerwartet, dass im Blut bzw. im Blutplasma und/oder Blutserum ein spezielles Verhältnis von Amyloid-beta-Peptiden, nämlich von Aß(l-42) einerseits und Aß(2-40) bzw. Aß(2-42) andererseits, herangezogen werden kann, um eine verlässliche Aussage hinsichtlich der Bestimmung einer Alzheimer- Krankheit bzw. hinsichtlich der Bestimmung der Wahrscheinlichkeit, an einer solchen Krankheit zu erkranken, zu ermöglichen.
Dabei ist zusätzlich von Vorteil, dass Blut in einfacher Weise zur Verfügung gestellt werden kann und die diesbezügliche Entnahme schmerzfrei und im Wesentlichen risikolos für den Patienten bzw. Probanden ist. Hierin ist ein weiterer entscheidender Vorteil der vorliegenden Erfindung zu sehen.
Gemäß dieser bevorzugten erfindungsgemäßen Ausführungsform wird somit insbesondere eine blutbasierte bzw. auf Bluttests basierende neuro- chemischen Analyse bzw. Bestimmung zur Erkennung von Demenzerkrankungen bereitgestellt, welche beispielsweise im Rahmen eines entsprechenden Diagnoseansatzes eingesetzt werden kann {blood based neurochemical dementia diagnostics (blood-ΝΌΌ)). Im Ergebnis zeichnet sich die erfindungsgemäße Konzeption dadurch aus, dass einerseits ein hinsichtlich der Bestimmung einer Alzheimer-Erkrankung aussagekräftiges Konzept - und dies trotz der im Allgemeinen geringen Konzentrationen der zu analysierenden Amyloid-beta-Peptide in der Probe - und andererseits ein den Patienten schonendes Konzept bereitgestellt wird, welches sich zur wiederholten Anwendung, beispielsweise im Rahmen einer Verlaufskontrolle oder dergleichen, eignet.
Was die Durchführung der Analyse der Probe zur Ermittlung der relevanten Verhältnisse anbelangt, so können diesbezüglich eine Reihe von im Stand der Technik bekannten Aufreinigungs- und Analyseverfahren eingesetzt werden.
Besonders gute Ergebnisse werden erhalten, wenn die Amyloid-beta-Peptide, insbesondere (a) Aß(l-42) einerseits und (b) Aß(2-40) und /oder (c) Aß(2-42) andererseits, aus der Probe, gewissermaßen nach Art eines vorgeschalteten Aufreinigungs- bzw. Separierungsschrittes, insbesondere mittels Immunpräzi- pitation abgetrennt bzw. isoliert werden. Dabei kann die Aufreinigung derart durchgeführt werden, dass gewissermaßen ein Ensemble an verschiedenen Typen von Amyloid-beta-Peptiden, darunter auch (a) Aß(l-42) und (b) Aß(2- 40) und /oder (c) Aß(2-42), aus der zugrundeliegenden Probe abgetrennt wird. Hierdurch wird die Analysegenauigkeit erhöht.
In diesem Zusammenhang kann insbesondere im Rahmen der Immunpräzipi- tation mindestens ein für Amyloid-beta-Peptide spezifischer bzw. hieran bin- dender Ligand, vorzugsweise mindestens ein Antikörper, eingesetzt werden.
Diesbezüglich kann der mindestens eine Ligand, vorzugsweise der mindestens eine Antikörper, spezifisch für Amyloid-beta-Peptide vom Typ (a) Aß(l-y) und/oder Aß(2-y) sein, wobei y eine ganze Zahl von 37 bis 43 ist. In diesem Zusammenhang charakterisiert die Variable y insbesondere die Länge des Peptids in Bezug auf dessen carboxyterminalen Ende.
Was den Liganden bzw. den Antikörper weiterhin anbelangt, so ist es erfindungsgemäß bevorzugt, wenn dieser spezifisch für (a) Aß(l-42) und/oder (b) Aß(2-40) und/oder (c) Aß(2-42) ist. 24
- 21 -
Weiterhin kann der mindestens eine Ligand, vorzugsweise Antikörper spezifisch für das aminoterminale Ende von (a) Aß(l-42) und/oder (b) Aß(2-40) und/oder (c) Aß(2-42) sein.
Insbesondere kann erfindungsgemäß ein Ligand bzw. Antikörper eingesetzt werden, welcher zumindest im Wesentlichen eine identische Sensitivität bzw. Spezifität zumindest für die in Rede stehenden speziellen Amyloid-beta- Peptide Aß(l-42), Aß(2-40) und Aß(2-42) aufweist, was mit dem Vorteil einhergeht, dass im Rahmen des Aufreinigungsschrittes lediglich ein einziger Liganden- bzw. Antikörpertyp eingesetzt zu werden braucht.
Darüber hinaus ist aber auch der Einsatz mehrerer verschiedener Typen von Liganden bzw. Antikörpern mit jeweiliger Spezifität für das zu isolierende bzw. zu analysierende Amyloid-beta-Peptid möglich.
Beispielsweise kann erfindungsgemäß der Antikörper vom Typ 1E8 eingesetzt werden. Der Antikörper ist insbesondere sensitiv für Amyloid-beta-Peptide, welche hinsichtlich ihrer Aminosäuresequenz an Position 1 Aspartat aufweisen, wie (a) Aß(l-42), bzw. an Position 2 Alanin, wie (b) Aß(2-40) bzw. (c) Aß (2-42). Der Antikörper vom Typ 1E8 kann beispielsweise handelsüblich von der Bayer Schering Pharma AG, Berlin, Deutschland, bezogen werden. Ein erfindungsgemäß bevorzugter Antikörper ist insbesondere in der EP 1 270 592 AI beschrieben, deren gesamter Offenbarungsgehalt hiermit durch Bezugnahme vollumfänglich eingeschlossen ist.
Was die Analyse der in Rede stehenden Probe weiterhin anbelangt, so kann - insbesondere nach der zuvor durchgeführten Isolierung bzw. Auftrennung bzw. Aufreinigung der zu bestimmenden Amyloid-beta-Peptide - der Nachweis, insbesondere die Bestimmung der Menge bzw. des Gehaltes und/oder der Konzentration, der jeweiligen Amyloid-beta-Peptide, insbesondere von (a) Aß(l-42) einerseits und (b) Aß(2-40) und/oder (c) Aß(2-42) andererseits, auf Basis von Proteinauftrennverfahren bzw. auf Basis von insbesondere quantitativen immundetektiven Proteinnachweisverfahren, vorzugsweise auf Basis einer Kombination von Proteinauftrennverfahren und insbesondere quantitativen immundetektiven Proteinnachweisverfahren, durchgeführt werden. Dabei kann erfindungsgemäß insbesondere derart vorgegangen werden, dass die im P2011/001724
- 22 -
Rahmen des zuvor beschriebenen Aufreinigungsverfahrens erhaltene Fraktion mit den verschiedenen Amyloid-beta-Peptiden entsprechend weiter bearbeitet bzw. einer weiteren Analyse unterzogen wird.
In diesem Zusammenhang kann beispielsweise als Proteinauftrenn- bzw. Proteinnachweisverfahren ein gelelektrophoretisches Verfahren, insbesondere eine zweidimensionale Gelelektrophorese, vorzugsweise eine harnstoffbasierte zweidimensionale Gelelektrophorese, eingesetzt werden.
Weiterhin kann als Proteinauftrenn- bzw. Proteinnachweisverfahren ein We- sternblot- Verfahren eingesetzt werden.
Besonders vorteilhafte Ergebnisse werden erreicht, wenn der Nachweis der in Rede stehenden speziellen Amyloid-beta-Peptide auf Basis einer Kombination einer insbesondere harnstoffbasierten zweidimensionalen Gelelektrophorese mit einem nachgeschalteten Westernblot- Verfahren (2D-Aß-WIB) durchgeführt wird.
Was das im Rahmen der vorliegenden Erfindung zum Einsatz kommende Proteinauftrenn- bzw. Proteinnachweisverfahren weiterhin anbelangt, so kann auch im Rahmen des insbesondere qualitativen immundetektiven Proteinnachweisverfahrens, vorzugsweise bei dem Westernblot- Verfahren, mindestens ein Ligand, vorzugsweise Antikörper, zur Markierung der Amyloid-beta- Peptide eingesetzt werden, insbesondere nach Art eines Primärliganden bzw. Primärantikörpers, welcher im Rahmen eines ersten Markierungsschrittes direkt an die in Rede stehende Amyloid-beta-Peptide bindet bzw. hiermit inter- agiert. In diesem Zusammenhang sollte der mindestens eine Ligand, vorzugsweise Antikörper, spezifisch für Amyloid-beta-Peptide der Form Aß(l-y) und Aß(2-y) sein, wobei y eine ganz Zahl von 37 bis 43 ist. Weiterhin sollte der im Rahmen des insbesondere quantitativen immundetektiven Proteinnachweisverfahrens eingesetzte Ligand bzw. Antikörper spezifisch für (a) Aß(l-42) und/oder (b) Aß(2-40) und/oder (c) Aß(2-42) sein. Zu dem sollte der mindestens ein Ligand, vorzugsweise Antikörper, spezifisch für das ami- noterminale Ende von (a) Aß(l-42) bzw. (b) Aß(2-40) und/oder (c) Aß(2-42) sein. Auch für das insbesondere quantitative immundetektiven Proteinnachweisverfahren gilt, dass sowohl ein Ligandentyp bzw. Antikörpertyp eingesetzt werden kann, welcher eine zumindest im Wesentlichen identische Sensitivität gegenüber den zuvor genannten Amyloid-beta-Peptiden aufweist. Beispielsweise kann der zuvor beschriebene Antikörper vom Typ 1E8 eingesetzt werden. Darüber hinaus ist auch der Einsatz verschiedener Typen von Liganden bzw. Antikörper mit jeweiliger spezifischer Sensitivität für einzelne Amyloid-beta- Peptide möglich.
Die konkrete Detektion kann über den Einsatz entsprechender, dem Fachmann an sich wohlbekannter Sekundärliganden bzw. Sekundärantikörper erfolgen, an denen zu Zwecken der Detektion beispielsweise Enzyme oder Farbstoffe, insbesondere Fluoreszenzfarbstoffe, gekoppelt sein können, wobei das resultierende Konjugat ein detektierbares und auswertbares Messsignal zu liefern imstande ist.
Eine Identifizierung bzw. Zuordnung der speziellen Amyloid-beta-Peptide kann beispielsweise anhand von Referenzspuren erfolgen. Das zugrundeliegende Prinzip ist dem Fachmann wohlbekannt.
Für weitergehende Ausführungen zu den im Rahmen der vorliegenden Erfindung einsetzbaren Verfahren zur Analyse der in Rede stehenden Probe kann insbesondere verwiesen werden auf die wissenschaftliche Publikation von Maler, J. M.: "Urea based two-dimensional electrophoresis of beta-amyloid peptides in human plasma: Evidence for novel Aß species", Proteomics, 2007, 7, 3815-3820, deren gesamter Offenbarungsgehalt hiermit vollumfänglich durch Bezugnahme eingeschlossen ist.
Auf Basis der zuvor angeführten Kombination zur quantitativen Bestimmung der in Rede stehenden Amyloid-beta-Peptide in der Probe auf Basis einer vorgeschalteten Immunpräzipitation und eines nachfolgenden, insbesondere quantitativen immundetektiven Proteinnachweisverfahrens wird eine hohe Genauigkeit hinsichtlich der quantitativen Bestimmung der jeweiligen Amyloid-beta-Peptide gewährleistet. Aufgrund der im Rahmen der vorliegenden Erfindung eingesetzten Verfahrensführung zur quantitativen Bestimmung der Amyloid-beta-Proteine in der Probe können äußerst geringe Konzentration der - 24 -
in Rede stehenden Peptide detektiert bzw. erfasst werden, wobei diesbezüglich sogar Mengen bzw. Gehalte im attomolaren Bereich detektiert werden können.
Was die Auswertung bzw. Einordnung der im Rahmen der Analyse der Probe aufgefundenen speziellen Verhältnisse der in Rede stehenden Amyloid-beta- Peptide im Hinblick auf die Bestimmung der Wahrscheinlichkeit (Risikos) des Probanden bzw. Patienten, an einer Alzheimer-Krankheit zu erkranken, bzw. im Hinblick auf die Bestimmung dessen Erkrankung an einer Vorstufe der Alzheimer-Krankheit anbelangt, so kann im Rahmen der vorliegenden Erfindung in vorteilhafter Weise derart vorgegangen werden, dass das quantitative Verhältnis aus zwei voneinander verschiedenen Amyloid-beta-Peptiden, insbesondere wie zuvor definiert, mit hierzu entsprechenden Referenz- Verhältnissen korreliert bzw. verglichen bzw. diesen Referenzverhältnissen zugeordnet wird.
Mit anderen Worten kann die Einordnung der anhand der analysierten Probe gewonnenen Verhältnisse von Amyloid-beta-Peptiden auf Basis eines Vergleiches mit einem Bezugssystem bzw. einem Bezugswert bzw. einem Bezugswertebereich erfolgen, wobei die entsprechenden Bezugsgrößen, wie nachfolgend noch ausgeführt, beispielsweise anhand eines als Referenz dienenden Kollektivs von Probanden bzw. Patienten in Form von statistischen Werten ermittelt wird.
Dies kann beispielsweise derart erfolgen, dass zunächst eine Gruppe von Referenzprobanden auf das Vorliegen von kognitiven Störungen bzw. von Vorstufen der Alzheimer-Krankheit untersucht werden, beispielsweise auf Basis von im Stand der Technik bekannten Diagnoseverfahren, wie psychometrischen, neuro-chemischen und/oder neuro-bildgebenden Verfahren, gegebenenfalls unter rückschlüssigem Einbezug einer nachfolgenden tatsächlichen Ausbildung einer Alzheimer-Krankheit, und dass auf dieser Basis eine Phäno- typisierung hinsichtlich des diagnostischen Befundes bzw. eine Klassifizierung in jeweilige Referenz-Gruppen mit dem jeweiligen Krankheitsbild bzw. der jeweiligen Diagnose erfolgt und bei diesen zuvor ermittelten bzw. gebildeten Referenz-Gruppen gleichermaßen die speziellen Verhältnisse von Amy- 001724
- 25 -
loid-beta-Peptiden in einer Probe gleicher Art analysiert und insbesondere statistisch zusammengefasst werden.
Die Einordnung des zu untersuchenden Probanden bzw. Patienten erfolgt dann auf Basis einer Korrelation bzw. eines Vergleichs der bei dem in Rede stehenden Probanden bzw. Patienten gefundenen speziellen Verhältnisse mit den bei den in Rede stehenden Referenz-Gruppen aufgefundenen Verhältnissen gleicher Art. So kann im Rahmen der vorliegenden Erfindung derart vorgegangen werden, dass anhand des Vergleiches bzw. der Korrelation des quantitativen Verhältnisses mit den hierzu entsprechenden Referenz- Verhältnissen die Wahrscheinlichkeit bestimmt wird, an einer Alzheimer-Krankheit zu erkranken, und/oder das Vorliegen einer Erkrankung an einer Vorstufe der Alzheimer-Krankheit bestimmt bzw. diagnostiziert wird.
In diesem Zusammenhang bezieht sich der Begriff "entsprechend", wie er im Rahmen der zu vergleichenden Verhältnisse eines zu untersuchenden Probanden bzw. Patienten einerseits und einer Referenz-Gruppe andererseits verwen- det wird, insbesondere auf von ihrer Art her gleichen bzw. vergleichbaren Verhältnisse, d. h. insbesondere auf einander entsprechende Verhältnisse gleicher Amyloid-beta-Peptide. So kann beispielsweise und in nicht beschränkender Weise das Verhältnis aus (a) Aß(l-42) / (b) Aß(2-40) eines Probanden mit dem hierzu korrelierenden ermittelten Verhältnis (a) Aß(l-42) / (b) Aß(2-40) der Referenz-Gruppe verglichen werden. Dabei handelt es sich bei dem für die Referenz-Gruppe ermittelten Verhältnis insbesondere um einen statistischen (Mittel-) Wert oder um einen Wertebereich eines zu dieser Gruppe gehörenden Kollektivs. Bei den ermittelten Referenz- Verhältnissen handelt es sich somit insbesondere um in Bezug auf ein Kollektiv von Referenz-Probanden bzw. Referenz- Patienten ermittelte Werte bzw. Wertebereiche im Sinne eines statistischen Verhältnisses auf Basis zahlreicher Probanden, welches beispielsweise zuvor erstellt worden sein kann. In diesem Zusammenhang handelt es sich insbeson- dere um statistisch ermittelte Wertebereiche bzw. statistische Mittelwerte mit einer entsprechenden Standardabweichung, welche der Zuordnung zugrundeliegen können.
Im Rahmen der vorliegenden Erfindung ist es bevorzugt, die quantitativen Referenz-Verhältnisse auf Basis eines Referenz-Probandenkollektivs und/oder eines Referenz-Patientenkollektivs zu bestimmen bzw. zugrundezulegen.
In diesem Zusammenhang können die Referenz-Probanden des Referenz- Probandenkollektivs bzw. die Referenz-Patienten des Referenz-Patientenkollektivs insbesondere im Rahmen einer biostatistischen Evaluierung auf das Vorliegen oder Nicht- Vorliegen einer leichten kognitiven Beeinträchtigung (Mild Cognitive Impairment, MCI) und/oder einer präklinischen Vorstufe der Alzheimer-Krankheit, insbesondere einer inzipienten bzw. prodromalen Alzheimer-Krankheit (incipient AD), und/oder einer klinischen Vorstufe der Alzheimer-Krankheit, insbesondere einer frühen Alzheimer-Krankheit (early AD), untersucht werden.
Dabei kann es im Rahmen der vorliegenden Erfindung weiterhin vorgesehen sein, dass die Untersuchung bzw. Evaluierung auf Basis von Untersuchungsverfahren, welche ausgewählt sind aus der Gruppe von neuro-chemi sehen Verfahren, neuro-bildgebenden Verfahren, psychometrischen Verfahren und Kombinationen aus mindestens zwei der vorgenannten Verfahren, vorzugsweise auf Basis einer Kombination sämtlicher der vorgenannten Verfahren, durchgeführt wird. Auf diese Weise wird gewissermaßen eine Einteilung der entsprechenden Referenz-Probanden bzw. Referenz-Patienten hinsichtlich ihres Krankheitsbildes ermöglicht.
Weiterhin ist es im Rahmen der vorliegenden Erfindung bevorzugt, wenn die Untersuchung bzw. Evaluierung hinsichtlich des Referenz-Probandenkollektivs bzw. des Referenz-Patientenkollektivs auf Basis mindestens eines Goldstandards (GS), insbesondere ausgewählt aus der Gruppe von klinischen Goldstandards, neuro-chemischen Goldstandards, psychometrischen Goldstandards und Kombinationen aus mindestens zwei der vorgenannten Goldstandards, vorzugsweise auf Basis einer Kombination sämtlicher der vorgenannten Goldstandards, durchgeführt wird. Der Begriff "Goldstandard" (synonym auch als GS bezeichnet), wie er im Rahmen der vorliegenden Erfindung verwendet wird, bezieht sich insbesondere auf einen zum jeweiligen Untersuchungszeitpunkt allgemein anerkannten (Untersuchungs-)Standard, welcher bezüglich der Diagnose einer Erkrankung im Sinne eines "besten Handelns" zu besonders aussagekräftigen Ergebnissen führt. Der Goldstandard bildet somit im Allgemeinen den tatsächlichen bzw. maßgebenden Standard. Die im Rahmen der vorliegenden Erfindung hinsichtlich der Analyse der Referenz-Probanden bzw. Referenz-Patienten eingesetzten Goldstandards sind dem Fachmann als solche hinlänglich bekannt. Insbesondere kann die Untersuchung bzw. Evaluierung hinsichtlich der Referenzwerte auf Basis von Goldstandards durchgeführt werden, welche psychometrische, neuro-chemische bzw. neuro-bildgebende Verfahren bzw. Parameter umfassen.
Beispielsweise kann die Untersuchung bzw. Evaluierung auf Basis eines neu- ro-chemischen Verfahrens durchgeführt werden, wobei das neuro-chemische Verfahren die Bestimmung von Parametern der Cerebrospinal-Flüssigkeit (CSF) umfasst; dabei kann insbesondere das Verhältnis von Aß(x-42) / Aß(x- 40) [AßratioTGC], wobei x, unabhängig voneinander, den Wert 1 oder 2 einnehmen kann, und/oder der Gehalt an Aß(l-42) [Aßl42Inn] und/oder der Gesamtgehalt an Tau und/oder der Gehalt an Phospho-Tau 181 bestimmt werden.
Weiterhin können im Rahmen der Klassifizierung der Referenz-Probanden bzw. Referenz-Patienten auch neuro-bildgebende Verfahren eingesetzt werden, wobei die neuro-bildgebenden Verfahren insbesondere Hirnatrophie- Untersuchungen, vorzugsweise auf Basis von bildgebenden Verfahren, bevorzugt SPECT (Single Photon Emission Computed Tomography) und/oder MRI (Magnet Resonance Imaging), umfassen.
Zudem kann das erfindungsgemäß einsetzbare psychometrische Verfahren Untersuchungen auf Basis von MMSE (Mini-Mental State Examination) umfassen. Insbesondere kann in die Untersuchung bzw. Evaluierung das spätere Auftreten einer Alzheimer-Krankheit in die Diagnose zum Untersuchungszeitpunkt des jeweiligen Referenz-Probanden bzw. Referenz-Patienten einbezogen werden, insbesondere im Hinblick auf die Beurteilung des Vorliegens einer präklinischen Vorstufe der Alzheimer-Krankheit zum Untersuchungszeitpunkt, sofern diese nicht hinreichend anhand der vorgenannten Diagnoseverfahren bestimmt werden kann.
Auf Basis der durchgeführten Untersuchung bzw. Diagnose bei den Referenz- Patienten bzw. Referenz-Probanden kann somit eine Einteilung der Referenz- Personen in jeweilige Klassen mit dem entsprechenden Krankheitsbild erfolgen, beispielsweise in eine Gruppe mit Patienten, die an einer kognitiven Beeinträchtigung (MCI) leiden, und in mindestens eine weitere Gruppe, deren Referenz-Probanden bzw. Referenz-Patienten an einer Vorstufe der Alzheimer-Krankheit leiden. Dies kann beispielsweise auf Basis einer Wertung der jeweiligen Diagnoseverfahren durchgeführt werden, wobei beispielsweise abgestufte Werte bzw. so genannte cut-off-Werte etabliert werden können, welche gewissermaßen als jeweilige Grenzwerte für die Zuordnung in eine der vorgenannten Gruppen fungieren.
Im Rahmen der vorliegenden Erfindung kann es insbesondere vorgesehen sein, dass die Referenz-Probanden bzw. Referenz-Patienten in Abhängigkeit von der auf Basis der Untersuchung bzw. Evaluierung gestellten Diagnose in verschiedene Referenz-Gruppen eingeteilt werden.
In diesem Zusammenhang können die jeweiligen Referenz-Gruppen (A) bzw. (B) gebildet werden aus Referenz-Probanden bzw. Referenz-Patienten (A) ohne eine diagnostizierte Alzheimer-Krankheit bzw. ohne eine diagnostizierte Vorstufe der Alzheimer-Krankheit und (B) mit einer diagnostizierten Alzheimer-Krankheit bzw. mit einer diagnostizierten Vorstufe einer Alzheimer- Krankheit, insbesondere mit einer präklinischen Vorstufe der Alzheimer- Krankheit, insbesondere einer inzipienten bzw. prodromalen Alzheimer- Krankheit incipient AD), und/oder mit einer klinischen Vorstufe der Alzheimer-Krankheit, insbesondere einer frühen Alzheimer-Krankheit (early AD). Was die Gruppe (B) mit der diagnostizierten Alzheimer-Krankheit bzw. der diagnostizierten Vorstufe einer Alzheimer-Krankheit anbelangt, so kann diesbezüglich eine weitere Differenzierung erfolgen: Beispielsweise kann eine Referenz-Gruppe (B l) mit einer präklinischen Vorstufe der Alzheimer- Krankheit, insbesondere einer inzipienten bzw. prodromalen Alzheimer- Krankheit (incipient AD), eine weitere Referenz-Gruppe (B2) mit einer klinischen Vorstufe der Alzheimer-Krankheit, insbesondere einer frühen Alzheimer-Krankheit (early AD), sowie gegebenenfalls eine dritte Referenz-Gruppe (B3) mit einer diagnostizierten Alzheimer-Krankheit im weiter fortgeschrittenen Stadium gebildet werden.
Wie zuvor angeführt, können für die jeweiligen Referenz-Gruppen jeweils quantitative Referenz- Verhältnisse (Referenz-Quotienten) aus zwei voneinander verschiedenen Amyloid-beta-Peptiden, insbesondere wie zuvor definiert, ausgehend von einer Probe einer Körperflüssigkeit, insbesondere wie zuvor definiert, der jeweiligen, einer Referenz- Gruppe angehörenden Referenz- Probanden bzw. Referenz-Patienten ermittelt und zusammengefasst werden. Insbesondere handelt es sich bei der zu Zwecken der Korrelation in Bezug auf die in Rede stehenden Referenz-Patienten bzw. Referenz-Probanden der jeweiligen Referenz-Gruppen verwendeten Probe gleichermaßen um Blut bzw. Blutplasma und/oder Blutserum.
Diesbezüglich kann im Rahmen der vorliegenden Erfindung insbesondere derart vorgegangen werden, dass das quantitative Verhältnis aus zwei voneinander verschiedenen Amyloid-beta-Peptiden, insbesondere wie zuvor definiert, mit der hierzu entsprechenden Referenz-Gruppe korreliert bzw. verglichen bzw. der entsprechenden Referenz-Gruppe zugeordnet wird, um auf diese Weise die Wahrscheinlichkeit des Patienten bzw. des Probanden zu bestimmen, an einer Alzheimer-Krankheit zu erkranken, bzw. um auf diese Weise die Erkrankung des Patienten bzw. Probanden an einer Vorstufe der Alzheimer-Krankheit zu bestimmen.
Mit anderen Worten wird im Rahmen der vorliegenden Erfindung insbesondere derart vorgegangen, dass das quantitative Verhältnis aus (a) Aß(l-42) / (b) Aß(2-40) bzw. das quantitative Verhältnis aus (a) Aß(l-42) / (c) Aß(2-42) in einer Blutprobe bzw. einer Probe aus Blutserum und/oder Blutplasma be- stimmt und mit den jeweils entsprechenden, insbesondere statistischen Referenz-Werten - d. h. mit den entsprechenden Verhältnissen gleicher Art, welche insbesondere anhand einer Vielzahl an Individuen der jeweiligen Referenz-Gruppe gewonnen wurden - aus den Blutproben bzw. den Proben aus Blutserum bzw. Blutplasma der entsprechenden Referenz-Gruppe korreliert und der entsprechenden Referenz-Gruppe zugeordnet wird.
Dabei erfolgt die Zuordnung bzw. Korrelation der entsprechenden quantitativen Verhältnisse aus den jeweiligen Amyloid-beta-Peptiden insbesondere der- art, dass diese dem in einer vergleichbaren Größenordnung liegenden Bereich zugeordnet werden, welcher für die jeweilige Referenz-Gruppe ermittelt worden ist. Bei den zu vergleichenden bzw. zu korrelierenden Verhältnissen von Probanden bzw. Patienten einerseits und Referenz-Gruppen andererseits handelt es sich somit vorzugsweise um entsprechende Verhältnisse desselben Größenbereiches, d. h. ein für einen Probanden bzw. Patienten ermitteltes Verhältnis kann demjenigen Wertebereich des entsprechenden Verhältnisses einer Referenz-Gruppe zugeordnet werden, wenn der für den Probanden bzw. Patienten ermittelte Wert in den Wertebereich der jeweiligen Referenzgruppe fällt.
Auf Basis dieser Korrelation kann beispielsweise dem Probanden bzw. Patienten eine geringere oder keine (d. h. eine nicht vorliegende bzw. nicht gegebene) Wahrscheinlichkeit zugeordnet werden, an einer Alzheimer-Krankheit zu erkranken, bzw. kann dem Probanden und/oder Patienten eine Nichterkran- kung an einer präklinischen Stufe der Alzheimer-Krankheit, insbesondere an einer inzipienten und/oder prodromalen Alzheimer-Krankheit {incipient AD), und/oder an einer klinische Vorstufe der Alzheimer-Krankheit, insbesondere an einer frühen Alzheimer-Krankheit (early AD), zugeordnet werden, wenn das bei dem Probanden bzw. Patienten bestimmte Verhältnis in den Bereich der entsprechenden Referenz- Verhältnisse der Referenz-Gruppe (A) ohne diagnostizierte Alzheimer-Krankheit und/oder ohne diagnostizierte Vorstufe der Alzheimer-Krankheit fällt.
Zudem kann im Rahmen der vorliegenden Erfindung dem Probanden bzw. Pa- tienten eine erhöhte Wahrscheinlichkeit zugeordnet werden, an einer Alzheimer-Krankheit zu erkranken, bzw. kann dem Probanden bzw. Patienten die 24
- 31 -
Erkrankung an einer präklinischen Stufe der Alzheimer Krankheit, insbesondere an einer inzipienten und/oder prodromalen Alzheimer-Krankheit {inci- pient AD), bzw. an einer klinischen Vorstufe der Alzheimer-Krankheit, insbesondere an einer frühen Alzheimer-Krankheit {early AD), zugeordnet werden, wenn das bei dem Probanden bzw. Patienten bestimmte Verhältnis in den Bereich der entsprechenden Referenz- Verhältnisse der Referenzgruppe (B) mit diagnostizierter Alzheimer-Krankheit bzw. mit diagnostizierter Vorstufe einer Alzheimer-Krankheit fällt.
Auf Basis der zuvor getroffenen Aussagen ist es gleichermaßen möglich, eine weitere Zuordnung bzw. Unterdifferenzierung durchzuführen, sofern die zuvor genannte Gruppe (B), wie zuvor beschrieben, in weitere Untergruppen (Bl) und (B2) und gegebenenfalls (B3) unterteilt wird, d. h. in eine erste Untergruppe (Bl) mit einer präklinischen Stufe der Alzheimer-Krankheit, insbesondere mit einer inzipienten bzw. prodromalen Alzheimer-Krankheit (inci- pient AD), sowie in eine zweite Untergruppe (B2) mit einer klinischen Vorstufe der Alzheimer-Krankheit, insbesondere mit einer frühen Alzheimer- Krankheit {early AD).
Im Allgemeinen kann erfindungsgemäß das bei dem Probanden bzw. Patienten bestimmte Verhältnis einer der zuvor beschriebenen Referenz-Gruppen (d. h. insbesondere der Referenz-Gruppe (A), (B) bzw. (Bl), (B2) oder gegebenenfalls (B3)) zugeordnet werden, wenn das bei dem Probanden bzw. Patienten bestimmte Verhältnis höchstens 40 %, insbesondere höchstens 30 %, vorzugsweise höchstens 25 %, bevorzugt höchstens 20 %, besonders bevorzugt höchstens 10 %, vom statistischen Mittelwert des Referenz- Verhältnisses der jeweiligen Referenz-Gruppe, bezogen auf den zuvor genannten Mittelwert, abweicht. Gleichermaßen kann, wie zuvor angeführt, das bei dem Probanden bzw. Patienten bestimmte Verhältnis einer der zuvor beschriebenen Referenz-Gruppen zugeordnet werden, wenn das bei dem Probanden bzw. Patienten bestimmte Verhältnis in den Größenbereich des für die jeweiligen Referenz-Gruppe statistisch ermittelten Wertebereichs bzw. in den Bereich der berechneten Standardabweichung des für die jeweilige Referenz-Gruppe ermittelten statistischen Mittelwerts liegt. 2011/001724
- 32 -
Auf Basis der zuvor beschriebenen Zuordnung ist erfindungsgemäß somit eine Aussage im Hinblick auf das Krankheitsbild bzw. den prädiktiven Krankheitsverlauf des jeweiligen Probanden bzw. Patienten möglich.
Insbesondere ist es im Rahmen der vorliegenden Erfindung auch möglich, dem Probanden und/oder Patienten eine erhöhte Wahrscheinlichkeit zuzuordnen, an einer Alzheimer-Krankheit zu erkranken, bzw. dem Probanden und/oder Patienten die Erkrankung an einer präklinischen Stufe der Alzheimer-Krankheit, insbesondere an einer inzipienten und/oder prodromalen Alzheimer-Krankheit (incipient AD), und/oder an einer klinischen Vorstufe der Alzheimer-Krankheit, insbesondere an einer frühen Alzheimer-Krankheit (early AD), zuzuordnen, wenn die Menge und/oder Konzentration an (b) Aß(2-40) und/oder (c) Aß(2-42), insbesondere an (b) Aß(2-40), im Vergleich zu den hierzu entsprechenden Mengen und/oder Konzentrationen der Referenz-Gruppe ohne diagnostizierte Alzheimer-Krankheit und/oder ohne diagnostizierte Vorstufe einer Alzheimer-Krankheit erhöht ist und folglich gleichermaßen das Verhältnis (a) Aß(l -42) / (b) Aß(2-40) bzw. (a) Aß(l-42) / (c) Aß(2-42) verringert ist.
Mit anderen Worten liegt bei einer Erhöhung der zuvor genannten Einzelwerte der in Rede stehenden Amyloid-beta-Peptide im Vergleich zu den entsprechenden Werten der Referenz-Gruppe und bei einem folglich verringertem, wie zuvor definierten Verhältnis ein erhöhtes Risiko vor, an einer Alzheimer- Krankheit zu erkranken bzw. eine derartige Erkrankung, insbesondere im Hinblick auf die vorgenannten präklinischen und klinischen Vorstufen, aufzuweisen. Gemäß dieser erfindungsgemäßen Ausführungsform kann somit sozusagen auf die jeweiligen Einzelheiten der in Rede stehenden Amyloid-beta- Peptide fokussiert werden.
Denn die Anmelderin hat in diesem Zusammenhang in überraschender Weise herausgefunden, dass insbesondere die Menge bzw. Konzentration von amino- terminal trunkierten Amyloid-beta-Peptiden des Typs 2-y, wie von den in Rede stehenden Amyloid-beta-Peptiden Aß(2-40) und Aß(2-42), insbesondere im Blut solcher Patienten erhöht ist, die eine frühe Vorstufe der Alzheimer- Erkrankung, insbesondere eine präklinischen bzw. klinische Vorstufe der Alz- EP2011/001724
- 33 -
heimer-Krankheit, im Zusammenhang mit einer leichten kognitiven Beeinträchtigung (MCI) aufweisen.
Weiterhin ist es im Rahmen der erfindungsgemäßen Verwendung möglich, dass dem Probanden und/oder Patienten eine erhöhte Wahrscheinlichkeit zugeordnet wird, an einer Alzheimer-Krankheit zu erkranken, und/oder dass dem Probanden und/oder Patienten die Erkrankung an einer präklinischen Stufe der Alzheimer-Krankheit, insbesondere an einer inzipienten und/oder prodromalen Alzheimer-Krankheit (incipient AD), und/oder an einer klinischen Vorstufe der Alzheimer-Krankheit, insbesondere an einer frühen Alzheimer-Krankheit (early AD), zugeordnet wird, wenn das relative Verhältnis aus Aß(l-42) / Aß(2-y) im Vergleich zu den hierzu entsprechenden Referenz- Verhältnissen der Referenz-Gruppe ohne diagnostizierte Alzheimer-Krankheit und/oder ohne diagnostizierte Vorstufe einer Alzheimer-Krankheit verringert ist, wobei y eine ganze Zahl von 37 bis 43, insbesondere 40 oder 42, ist, und/oder wenn das relative Verhältnis von (a) Aß(l-42) / (b) Aß(2-40) und/oder (a) Aß(l-42) / (c) Aß(2-42), insbesondere (a) Aß(l-42) / (b) Aß(2- 40), im Vergleich zu den hierzu entsprechenden Referenz- Verhältnissen der Referenz-Gruppe ohne diagnostizierte Alzheimer-Krankheit und/oder ohne diagnostizierte Vorstufe einer Alzheimer-Krankheit verringert ist.
Gemäß dieser erfindungsgemäß bevorzugten Ausführungsform wird somit auf eine Analyse der zuvor genannten spezifischen Verhältnisse als solcher aus den jeweiligen Amyloid-beta-Peptiden abgestellt. Denn in Ergänzung zu den zuvor für die Einzelwerte getroffenen Aussagen hat die Anmelderin gleichermaßen völlig überraschend gefunden, dass eine präklinische bzw. klinische Alzheimer-Krankheit, insbesondere eine inzipiente bzw. prodromale Alzheimer-Krankheit, mit einer signifikante Abnahme der vorgenannten Verhältnisse, insbesondere im Blut, einhergeht.
Dieser seitens der Anmelderin erstmalig aufgezeigte Zusammenhang ist auch vor dem Hintergrund völlig überraschend, dass im Allgemeinen kein direkter Zusammenhang zwischen den entsprechenden Demenz-Biomarkern in anderen Bestandteilen des Körpers, wie der Cerebrospinal-Flüssigkeit, mit den nunmehr insbesondere im Blut aufgefundenen speziellen Verhältnissen von Amyloid-beta-Peptiden der vorgenannten Art besteht. Insbesondere durch die gezielte Kombination von speziellen Diagnoseverfahren im Rahmen der Klassifizierung der Referenz-Gruppen ist es im Rahmen der vorliegenden Erfindung gelungen, die Korrelation bzw. den Zusammenhang der vorgenannten Amyloid-beta-Peptide und der entsprechenden speziellen Verhältnisse im Blut insbesondere mit speziellen Vorformen der Alzheimer-Krankheit aufzuzeigen, so dass dieser Zusammenhang im Rahmen der vorliegenden Erfindung die Grundlage eines unter Verwendung von standardisierten Methoden durchzuführenden und aussagekräftigen Tests auf Basis einer Blutanalyse im Hinblick auf das Vorliegen einer Alzheimer-Krankheit bzw. einer entsprechenden Vorstufe ist.
Die Anwendbarkeit der erfindungsgemäßen Verwendung von speziellen Verhältnissen von Amy loid-beta-Peptiden insbesondere auf Basis einer Blutprobe ist umso überraschender, als im Allgemeinen bekannt ist, dass gerade keine direkte Verbindung zwischen den spezifischen Demenz-Biomarkern, beispielsweise in der Cerebrospinal-Flüssigkeit, zu denen im Blut vorliegt. Diesbezüglich ist auch beachtlich, dass in Bezug auf Blut als solches zahlreiche periphere Zellsysteme bzw. Zellpopulationen, wie beispielsweise Leberzellen, Blutplättchen, Monozyten oder dergleichen, einen Einfluss auf die in Rede stehenden Verhältnisse aufweisen können, so dass im Allgemeinen gerade nicht von der spezifischen Ausbildung von A-beta-Peptiden in der Cerebrospinal-Flüssigkeit auf die diesbezüglichen Verhältnisse im Blut oder vice versa geschlossen werden kann.
Daher ist es erfindungsgemäß nicht vorhersehbar gewesen, dass eine belastbare und verlässlichere Aussage hinsichtlich des Vorliegens von Alzheimer- Vorstufen der vorgenannten Art auf Basis einer Analyse einer Blutprobe möglich ist.
Die erfindungsgemäße Verwendung kann auch in Kombination mit weiteren Analyseverfahren, beispielsweise in Kombination mit einer speziellen Analyse des Verhältnisses von Aß(l-42) / Aß(l-40), insbesondere in der Cerebrospinal-Flüssigkeit, durchgeführt werden, was die Aussagekraft noch weiter verbessert. Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung - gemäß einem z e i t e n Aspekt der vorliegenden Erfindung - ist ein erfindungsgemäßes Verfahren zur Bestimmung der Wahrscheinlichkeit (Risikos) eines Probanden und/oder Patienten, an einer Alzheimer-Krankheit (Morbus Alzheimer, AD) zu erkranken, wobei in einer Probe einer Körperflüssigkeit des Probanden und/oder Patienten mindestens ein quantitatives Verhältnis (Quotient) aus zwei voneinander verschiedenen Amyloid-beta-Peptiden (A-beta; Aß) ermittelt wird, wobei die Amyloid-beta-Peptide ausgewählt werden aus (a) Aß(l-42), (b) Aß(2-40) und (c) Aß(2-42) und wobei das quantitative Verhältnis aus (a) / (b) oder vice versa und/oder aus (a) / (c) oder vice versa gebildet wird.
Die vorliegende Erfindung betrifft gleichermaßen - gemäß einem d r i t t e n Aspekt der vorliegenden Erfindung - ein erfindungsgemäßes Verfahren zur Bestimmung der Wahrscheinlichkeit (Risikos) eines Probanden und/oder Patienten, an einer Alzheimer-Krankheit (Morbus Alzheimer, AD) zu erkranken, insbesondere wie zuvor definiert,
(a) wobei in einer Probe einer Körperflüssigkeit des Probanden und/oder Patienten mindestens ein quantitatives Verhältnis (Quotient) aus zwei voneinander verschiedenen Amyloid-beta-Peptiden (A-beta; Aß) ermittelt wird, wobei die Amyloid-beta-Peptide ausgewählt werden aus (a) Aß(l- 42), (b) Aß(2-40) und (c) Aß(2-42) und wobei das quantitative Verhältnis aus (a) / (b) oder vice versa und/oder aus (a) / (c) oder vice versa gebildet wird;
(b) wobei das so erhaltene Verhältnis mit hierzu entsprechenden Referenz- Verhältnissen verglichen und/oder korreliert wird und/oder wobei das so erhaltene Verhältnis hierzu entsprechenden Referenz- Verhältnissen zugeordnet wird; und
(c) wobei anschließend auf Basis des Vergleichs und/oder der Korrelation und/oder der Zuordnung die Wahrscheinlichkeit des Patienten und/oder Probanden bestimmt wird, an einer Alzheimer-Krankheit zu erkranken.
Für weitergehende Ausführungen kann zur Vermeidung unnötiger Wiederholungen auf die übrigen Aspekte der vorliegenden Erfindung verwiesen werden, welche in Bezug auf die erfindungsgemäßen Verfahren entsprechend gelten. 724
- 36 -
Schließlich ist weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung - gemäß einem v i e r t e n Aspekt der vorliegenden Erfindung - ein erfindungsgemäßes Kit, insbesondere zur Bestimmung der Wahrscheinlichkeit (Risikos) eines Patienten und/oder Probanden, an einer Alzheimer-Krankheit (Morbus Alzheimer, AD) zu erkranken und/oder insbesondere zur Bestimmung (Diagnose) dessen Erkrankung an einer Vorstufe der Alzheimer-Krankheit, wobei das Kit Komponenten und/oder Mittel zur Bestimmung eines quantitativen Verhältnisses (Quotienten) aus zwei voneinander verschiedenen Amyloid-beta- Peptiden (A-beta; Aß) in einer Probe einer Körperflüssigkeit eines Probanden und/oder Patienten umfasst, wobei die Komponenten und/oder Mittel derart ausgewählt sind, dass diese die quantitative Bestimmung von Amyloid-beta- Peptiden aus der Gruppe von (a) Aß(l-42), (b) Aß(2-40) und (c) Aß(2-42) zu Zwecken der Ermittlung des quantitativen Verhältnisses aus (a) / (b) oder vice versa und/oder aus (a) / (c) oder vice versa ermöglichen.
Bei den Komponenten bzw. Mitteln des erfindungsgemäßen Kits kann es sich insbesondere um Mittel bzw. Komponenten zur Aufreinigung, Aufkonzentrierung, Auftrennung, Separierung oder dergleichen der zu untersuchenden Amyloid-beta-Peptide handeln. Diesbezüglich kommen auch dem Fachmann an sich geläufige Mittel bzw. Komponenten zur Proteinauftrennung, wie sie beispielsweise im Rahmen von immundetektiven Verfahren bzw. von an sich bekannten Auftrennverfahren, wie gelelektrophoretischen Verfahren, Verwendung finden, in Betracht.
Insbesondere kann es sich bei den Mitteln bzw. Komponenten aber auch um die zu analysierenden Amyloid-beta-Peptide markierende bzw. hiermit inter- agierende Substanzen, wie Liganden bzw. Antikörper, handeln.
In diesem Zusammenhang kann das erfindungsgemäße Kit mindestens einen für Amyloid-beta-Peptide spezifischen und/oder hieran bindenden Liganden, vorzugsweise Antikörper, aufweisen. Diesbezüglich kann der mindestens eine Ligand, vorzugsweise Antikörper, spezifisch für Amyloid-beta-Peptide des Typs Aß(l-x) und Aß(2-y) sein, wobei y eine ganze Zahl von 37 bis 43 ist.
Zudem kann der mindestens eine Ligand, vorzugsweise Antikörper, spezifisch für (a) Aß(l-42) und/oder (b) Aß(2-40) und/oder (c) Aß(2-42) sein. T EP2011/001724
- 37 -
Weiterhin kann der mindestens eine Ligand, vorzugsweise Antikörper, spezifisch für das aminoterminale Ende von (a) Aß(l-42) und/oder (b) Aß(2-40) und/oder (c) Aß(2-42) sein.
In Bezug auf weitergehende Ausführungen zu dem erfindungsgemäßen Kit kann auf die obigen Ausführungen zu der erfindungsgemäßen Verwendung bzw. den erfindungsgemäßen Verfahren verwiesen werden, welche in entsprechender Weise für das erfindungsgemäße Kit gleichermaßen gelten.
Weitere Vorteile, Merkmale, Eigenschaften und Aspekte der vorliegenden Erfindung ergeben sich auch aus den nachfolgenden, die erfindungsgemäße Konzeption im Detail beschreibenden Ausführungen mitsamt den nachfolgenden Ausführungsbeispielen sowie den beigefügten Figurendarstellungen:
Die vorliegende Erfindung fokussiert hinsichtlich der Probenanalyse insbesondere auf eine Methode bzw. ein Verfahren der aminoterminal-selektiven Immunpräzipitation mit einem nachfolgenden attomolar-sensitiven, insbesondere harnstoffbasierten zweidimensionalen Western-Immunblot (2D-Aß- WIB), um die komplexe beta-Amyloid-Peptid-Signatur im EDTA-Blutplasma von Probanden (n = 42), welche aus Fällen mit früher oder inzipienter Alzheimer-Erkrankung (eiAD, n = 21) und Kontrollprobanden (Con, n = 21) gebildet werden, zu untersuchen.
Die vorliegende Erfindung betrifft dabei insbesondere die Identifikation bestimmter A-beta-Peptid- Verhältnisse (A-beta-Peptid-Quotienten) im Blut, welche hochsignifikante Unterschiede zwischen eiAD- und Con-Patienten zeigen.
Insbesondere ist die Bildung von Aß(2-y)-Spezies in Relation zu Aß(l-42) bei eiAD-Patienten erhöht. Überraschenderweise ist der genannte Effekt besonders stark in präklinischen Stadien (inzipiente AD) ausgeprägt, z. B. bei Patienten mit leichten kognitiven Beeinträchtigungen (Mild Cognitive Impair- ment, MCI), welche nach dem Demenz-Biomarkermuster ihrer Cerebrospinal- Flüssigkeit eine prodromale Alzheimer-Krankheit aufweisen. Folglich können erfindungsgemäß spezifische A-beta-Peptid- Verhältnisse von Aß(l-42) zu bestimmten Aß(2-y)-Spezies, insbesondere die Verhältnisse Aß(l-42) / Aß(2-40) sowie Aß(l-42) / Aß(2-42), zur neuro-chemischen Diagnose einer frühen und/oder inzipienten Alzheimer-Krankheit durch Analyse von Körperflüssigkeiten, vorzugsweise Blut, verwendet werden (z. B. in Kombination mit dem Verhältnis Aß(l-42) / Aß(l-40)). Dies ermöglicht insbesondere eine blut- bzw. bluttestbasierte neuro-chemische Demenz- Erkrankungsdiagnose von inzipienter (präklinischer/prodromaler) Alzheimer- Krankheit (AD). Die vorliegende Erfindung ermöglicht somit auch neu ausgerichtete Strategien zur sekundären präventiven Behandlung insbesondere von Hochrisikopatienten.
Die Anmelderin hat in diesem Zusammenhang zum Beleg ihrer Erfindung eine aminoterminal-selektive Immunpräzipitation mit nachfolgendem attomo- lar-empfindlichen harnstoffbasierten zweidimensionalen Western-Immunblot (attomolar sensitive urea-based two-dimensional western-immunoblot (2D- Aß-WIB)) durchgeführt, um die komplexe beta-Amyloid-Peptid-Signatur in EDTA-Blutplasma von Probanden (n = 42), welche Fälle mit früher oder inzipienter Alzheimer-Erkrankung (early or incipient Alzheimer 's dementia (ei- AD, n = 21)) und eine Krankheitskontrollgruppe (disease controls (Con, n = 21)) umfassen, zu untersuchen.
Die klinische Phänotypisierung der Patienten mit Alzheimer-Krankheit wird durch CSF-NDD und in einer Mehrzahl der Fälle durch neuro-bildgebende Verfahren (MRI / SPECT) unterstützt. Zur biostatistischen Auswertung werden die Patienten entsprechend einem klinischen Goldstandard, einem neuro- chemischen Goldstandard und Goldstandards (GS), welche psychometrische (MMSE) und neuro-chemische Parameter (CSF dementia biomarkers) sowie auch neuro-chemische Parameter (CSF dementia biomarkers) und neuro- bildgebende Verfahrensparameter (SPECT) kombinieren, geschichtet bzw. klassifiziert. Dabei werden durch Biomarker gestützte Goldstandards (neuro- chemische GS; kombinierte neuro-chemische GS und SPECT GS) eingesetzt, um eine objektive Einordnung der Patienten zu erreichen, wodurch eine Kreuzvalidierung der klinisch gestützten Phänotypisierung der frühen oder inzipienten Alzheimer-Krankheit erreicht wird. 2011/001724
- 39 -
Die 2D-Ab-WIB-Analyse der Blut-Signatur von A-beta-immunreaktiven Peptiden zeigt ein stabiles Muster von 18 Feldern (Spots), welche unter Bezugnahme auf eine Mischung aus A-beta-Standardpeptiden quantifiziert wurde. Die biostatistische Analyse ergibt dabei, dass keines der einzelnen A-beta- immunreaktiven Felder einen signifikanten Unterschied zwischen den Patientengruppen eiAD und Con zeigte. Lediglich Feld 4, welches Aß(l-42) entspricht, zeigt einen Trend für einen krankheitsspezifischen Unterschied. Spezifische A-beta-Peptid- Verhältnisse zeigen hochsignifikante Unterschiede zwischen eiAD- und Con-Patienten. Dieser Effekt wird in erster Linie durch das Verhältnis von Aß(l-42) (Feld 4) zu anderen A-beta-Peptid-Spezies bestimmt, welche an der ersten Aminosäure, in diesem Fall Aspartat, aminoter- minal trunkiert sind (Aß(2-x)-Spezies). Folglich unterscheidet das Verhältnis von Aß(l-42) zur Summe der Aß-Spezies (2-42) (Feld 14), (2-40) (Feld 15), (2-39) (Feld 16), (2-38) (Feld 17) und (2-37) (Feld 18) die eiAD- und Con- Gruppe signifikant voneinander, wohingegen dies bei den Verhältnissen der anderen Aß(l-x)-Spezies (z. B. Aß(l-40)) zur Summe von Aß(2-x)-Spezies oder zu einzelnen Aß(2-x)-Spezies nicht der Fall ist.
In der Gruppe der Aß(l-x)-Peptide lässt nur das Verhältnis Aß(l-42) (Feld 4) zu Aß(l-40) (Feld 5) eine statistisch signifikante Unterscheidung der Patientengruppen eiAD und Con zu. Eine verfeinerte Datenanalyse zeigt, dass die verbesserte diagnostische Leistungsfähigkeit des Verhältnisses von Aß(l-42) zur Summe der Aß(2-x)-Spezies in erster Linie durch das Verhältnis von Aß(l-42) zu Aß(2-40) (Verhältnis der Felder 4/15), gefolgt von dem Verhält- nis Aß(l-42) zu Aß(2-42) (Verhältnis der Felder 4/14) erklärt wird. Die diagnostische Genauigkeit des Verhältnisses von Aß(l-42) / Aß(2-40) (Verhältnis der Felder 4/15) ist im Verhältnis Aß(l-42) / Aß(l-40) (Felder 4/5), welches derzeit als Goldstandard für blutbasierte neuro-chemische Diagnosever- fahren zur Erkennung von Demenzerkrankungen, insbesondere der Alzhei- mer-Krankheit, angesehen wird, deutlich überlegen.
Die Korrelationsanalyse lässt zudem den Schluss zu, dass das Verhältnis von Aß(l-42) zu aminoterminal trunkierten Aß(2-x)-Spezies, insbesondere Aß(l-42) / Aß(2-40) (Verhältnis der Felder 4/15), deutlich enger mit den CSF- Biomarkern für Demenzerkrankungen korreliert als das Verhältnis Aß(l-42) / Aß(l-40). Dieser Zusammenhang ist am stärksten für die Korrela- tion des Verhältnisses Aß(l-42) / Aß(2-40) (Verhältnis der Felder 4/15) zu dem Gesamtgehalt an Tau-Protein (Total-Tau) ausgeprägt. Darüber hinaus kann eine signifikante Korrelation des Verhältnisses Aß(l-42) / Aß(2-40) (Verhältnis der Felder 4/15) mit routinemäßigen Gehirndurchblutungs- SPECT-Analysen (99mTc-SPECT) beobachtet werden, wohingegen eine solche Korrelation nicht für das Verhältnis Aß(l-42)/Aß(l-40) (Verhältnis der Felder 4/5) beobachtet werden kann. Darüber hinaus ist das Verhältnis Aß(l-42) / Aß(2-40) (Verhältnis der Felder 4/15) enger mit dem ApoE-e4- Genotyp, einem nachgewiesenen Risikofaktor für die Alzheimer-Krankheit, korreliert als das Verhältnis Aß(l-42)/Aß(l-40). Andererseits ist Aß(l-42) / Aß(2-40) (Verhältnis der Felder 4/15) signifikant enger mit dem Alter der Patienten korreliert als das Verhältnis Aß(l-42) / Aß(l-40).
Eine signifikante Korrelation wird auch zwischen dem Alter und Total-Tau beobachtet, was aus der Literatur bekannt ist. Da die Patientengruppen eiAD und Con nicht altersgleich sind, kann nicht ausgeschlossen werden, dass einige der Beobachtungen in erster Linie durch das Alter und nicht durch krankheitsbedingte Unterschiede zu erklären sind. Alter ist jedoch der bedeutendste bekannte Risikofaktor für die Alzheimer-Krankheit und Total-Tau wurde kürzlich als der leistungsfähigste einzelne CSF-Biomarker zur Vorhersage von inzipienter Alzheimer-Krankheit bei MCI-Patienten identifiziert. Dieser Effekt war unabhängig vom Alter der MCI-Patienten. Darüber hinaus zeigt eine andere aktuelle Gehirndurchblutungs-SPECT-Studie, dass unter den CSF- Biomarkern zur Erkennung von Demenzerkrankungen (Phospho-Tau, Total- Tau, Aß(l-42)) Total-Tau und Phospho-Tau - aber nicht Aß(l-42) - signifikant mit lokalen Durchblutungsstörungen (linker parietaler Kortex) bei früher Alzheimer-Krankheit und MCI korreliert sind.
Überraschenderweise kann die Anmelderin eine auffällige Abnahme des Verhältnisses Aß(l-42) / Aß(2-40) (Verhältnis der Felder 4/15) im Blut von MCI- Patienten mit prodromaler Alzheimer-Krankheit (inzipienter Alzheimer- Krankheit) beobachten, wobei die Alzheimer-Krankheit entsprechend der CSF-Biomarker-Signatur indiziert ist. Dieser Befund konnte nicht für das Verhältnis Aß(l-42) / Aß(l-40) (Verhältnis der Felder 4/5) im Blut beobachtet werden. Hinweise aus der biochemischen Analyse von beta-Amyloid-Plaques aus Hirngewebe in unterschiedlichen Krankheitsstadien der menschlichen T EP2011/001724
- 41 -
Alzheimer-Krankheit zeigen in eindeutiger Weise, dass die Bildung von ami- noterminal trunkierten A-beta-Peptid-Spezies ein sehr frühes Ereignis in der molekularen Pathogenese der Alzheimer-Krankheit ist. Folglich kann die gesteigerte Bildung von Aß(2-x)-Spezies in Relation zu Aß(l-42) in vorklinischen Stadien (inzipienter Alzheimer-Krankheit) besonders ausgeprägt sein, z. B. in MCI-Patienten mit prodromaler MCI Alzheimer-Krankheit.
In diesem Zusammenhang verhält sich die Menge bzw. der Gehalt an A-beta- Peptiden in Bezug auf Blut bzw. Blutplasma und/oder Blutserum als zu analysierende Probe derart, dass die dort gefundenen Mengen bzw. Gehalte an A-beta-Peptiden nicht signifikant mit CSF-A-beta-Peptiden korreliert sind, d. h. das A-beta-Peptid-Blutprofil ist nicht als eine Art "verdünntes" CSF- Profil anzusehen. Darüber hinaus ist die Menge bzw. der Gehalt an A-beta- Peptid im Blut in weitaus komplexerer Art und Weise von anderen Faktoren abhängig als das CSF-Muster, da zahlreiche periphere Zellsysteme bzw. Zellpopulationen (Leberzellen, Blutplättchen, Monozyten etc.) zu dem Muster beitragen bzw. dieses beeinflussen. Dementsprechend ist es weder möglich noch gerechtfertigt, Befunde bzw. Zusammenhänge aus Untersuchungen an A-beta-Peptiden, welche als CSF-Biomarker zur Erkennung von Demenzerkrankungen identifiziert wurden, auf das Blut bzw. auf Bluttests zu transferieren bzw. diese zu verallgemeinern. So lassen sich beispielsweise - im Gegensatz zum Blut - keine Hinweise für vergleichbar hohe Konzentrationen an Aß(2-40) (relativ zu Aß(l-42) oder zu dem Gesamtgehalt an A-beta-Peptiden) in CSF-Proben finden.
Die vergleichende ROC- Analyse (Fig. 5) der Verhältnisse der Felder 4/5, 4/14 und 4/15 zeigen deutlich, dass die kombinierte Anwendung der Verhältnisse der Felder 4/5, 4/14 und 4/15 einen gesteigerten diagnostischen Wert besitzt: Bei mittlerer Empfindlichkeit bzw. Sensitivität (z. B. 70 bis 80 %) zeigt das Verhältnis der Felder 4/15 eine verbesserte Spezifität, wohingegen bei hoher Empfindlichkeit bzw. Sensitivität (90 bis 100 %) die Verhältnisse der Felder 4/5 und 4/14 bessere Ergebnisse liefern. Dies wird besonders dann ersichtlich, wenn eine logistische Regressionsanalyse Statistical Package of Social Sciences, SPSS, Version 17) angewendet wird (genaue Analyse nicht gezeigt), um die Patienten nach dem klinischen oder neuro-chemischen Goldstandard zu klassifizieren. Wenn alle drei Verhältnisse angewendet werden, werden 81 % bzw. 85,7 % der Patienten nach dem klinischen bzw. neuro-chemischen Goldstandard richtig klassifiziert. Wird nur das Verhältnis der Felder 4/5 angewendet, so werden lediglich 66,7 % bzw. 61,9 % der Patienten nach dem klinischen bzw. dem neuro-chemischen Goldstandard richtig klassifiziert.
1. Methoden
1.1 Patientenkohorten und klinische Phänotypisierung
Die komplexe beta-Amyloid-Peptid-Signatur in den EDTA-Blutplasmen von 42 Probanden wird untersucht. Sämtliche Patienten werden in der psychiatrischen Abteilung der Universität Erlangen/Nürnberg, Deutschland rekrutiert. Die Studienpopulation ist in 21 Patienten mit früher oder inzipienter Alzheimer-Krankheit (eiAD; D Code l = 1) und 21 Kontrollpatienten (Con; D Code l = 0) geschichtet bzw. unterteilt. Die Kontrollfälle umfassen Patienten mit heterogenen neuropsychiatrischen Krankheiten, einschließlich anderer Demenzerkrankungen. CSF-basierte neuro-chemische Diagnoseverfahren zur Erkennung von Demenzerkrankungen sind für sämtliche Patienten der Studie verfügbar. Der klinische Goldstandard {clinical GS) für die Phänotypisierung der 42 Patienten, präanalytische Probenbehandlung und CSF-gestützte neuro- chemische Diagnoseverfahren zur Erkennung von Demenzerkrankungen (CSF-NDD) richten sich nach internationalen Diagnoserichtlinien des Deutschen Kompetenznetzes Demenzen (www.kompetenznet-demenzen.de; Korn- huber et al.: "Early and differential diagnosis of dementia and mild cognitive impairment: design and cohort baseline cha acter istics of the German Dementia Competence Network. ", Dement. Geriatr. Cogn. Disord., 2009, 27, 404-417; Wiltfang et al.: "Consensus paper of the WFSBP Task Force on Bio- logical Markers of Dementia: the role of CSF and blood analysis in the early and differential diagnosis of dementia. ", World J. Biol. Psychiatry, 2005, 6, 69-84; Lewczuk et al.: "The German Competence Net Dementias: Standard operating procedures for the neurochemical dementia diagnostics. ", J. Neural Transm., 2006, 1 13, 1075-80; Lewczuk und Wiltfang: "Neurochemical dementia diagnostics: State of the art and research perspectives." Proteomics 2008, 8, 1292-301). Darüber hinaus werden zur weiteren Validierung der Diagnose der Alzheimer- Krankheit bevorzugt Patienten mit früher/inzipi enter Alzheimer-Krankheit (eiAD) in die Studie einbezogen, bei welchen neuro-bildgebende Verfahren (SPECT und/oder cMRI) die Diagnose der Alzheimer-Krankheit unterstützen. eiAD-Patienten mit einem neuro-bildgebendem Befund, welcher auf das Vorliegen anderer Demenzerkrankungen (z. B. vaskulärer Demenz oder fronto- temporale Demenz) hindeutet, werden nicht in die Studie einbezogen.
Um eine weitgehend standardisierte Interpretation der Daten aus routinemäßigen neuro-bildgebenden Verfahren zu ermöglichen, werden folgenden Unterteilungskriterien verwendet:
1,5 Tesla MRI oder 99mTc-SPECT_Score "3": frontotemporoparietale Atrophie, frontotemporoparietales Durchblutungsdefizit, Bild ist als typisch für die Alzheimer-Krankheit eingeordnet, keine signifikanten Läsionen, kein Neoplasma;
- Score "2": andere Hirnatrophie, generalisierte Atrophie, signifikante Anzahl an Läsionen, Hinweise auf Neoplasma;
- Score "1": andere pathologische Befunde;
- Score "0": keine pathologischen Befunde.
MRI- bzw. SPECT-neuro-bildgebende Verfahren sind für 39 bzw. 37 Patienten verfügbar. Darüber hinaus werden bevorzugt eiAD-Patienten in die Studie eingebunden, bei welchen die klinische Diagnose durch ein für die Alzheimer- Krankheit typisches CSF-Demenz-Biomarker-Muster gestützt wird (herabgesetzt: Aß(l-42), Verhältnis Aß42 / Aß40; erhöht: Total-Tau, Phospho- Taul81). Im Gegensatz hierzu werden Kontrollfälle mit für die Alzheimer- Krankheit typischem CSF-NDD ausgeschlossen. Bei den Patienten wird ein Risiko für inzipiente Alzheimer-Krankheit festgestellt, wenn sie bereits das die Alzheimer-Krankheit indizierende CSF-Demenz-Biomarker-Muster zeigen und ihr kognitives Defizitmuster eine leichte kognitive Beeinträchtigung indizierte.
Zusätzlich zu dem klinischen Goldstandard wird ein auf CSF-Biomarkern zur Erkennung von Demenzerkrankungen basierender neuro-chemischer Goldstandard angewendet. Der neuro-chemische Goldstandard berücksichtigt die quantitative Information, welche durch alle vier CSF-Biomarker zur Erken- P2011/001724
- 44 -
nung von Demenzerkrankungen bereitgestellt wird (Total-Tau, Phospho- Taul 81, Aß(l-42) und Aß(l-40)). Diese Information wird genutzt, um den NDD Score (Ordinalskala) und einen abgeleiteten dichotomen NDD Code zu erhalten. Der NDD Code wird mit den Ergebnissen des Mini-Mental-Status- Test (Mini Mental State Examination Test, MMSE) kombiniert, um die neuro- chemischen Diagnoseverfahren zur Erkennung von Demenzerkrankungen und den Kognitionscode (Cognition code (NDD Cog-Code)) zu erhalten bzw. zu begründen. Beide Codes ermöglichen eine objektive (NDD Code; n = 42) o- der weitgehend objektive (NDD Cog Code; n = 38) Phänotypisierung der Patienten, basierend auf deren molekularen und/oder kognitiven Biomarker- Information.
Da die qualitative Evaluation der CSF-Biomarker bereits zur Unterstützung des klinischen Goldstandards verwendet wird (siehe oben), wird ein hohes Maß an Übereinstimmung zwischen dem klinischen und dem neuro- chemischen Goldstandard erreicht. Die Definition des NDD Code und des NDD Cog Code ist im Folgenden detailliert ausgeführt. Schließlich werden der NDD Score (Bereich: -1 bis +2) und der SPECT_Score (Bereich: 0 bis 3) kombiniert, um den NDD SPECT Score (Bereich: -1 bis +5; n = 37) zu erhalten. Der NDD SPECT Score korrespondiert zur Summe der NDD- und SPECT-Scores.
1.2 Molekulare Phänotypisierung und neuro-chemischer Goldstandard: Ableitung des NDD Score
Die Ungenauigkeit der klinischen Diagnose der frühen Alzheimer-Krankheit (AD) ist signifikant. Nach durch Autopsien gestützten Studien beträgt die Genauigkeit selbst in mittleren bis weit fortgeschrittenen Stadien der Alzheimer- Krankheit bestenfalls 85 bis 90 %. Da das klinische Syndrom in frühen Stadien der Alzheimer-Krankheit noch sehr viel heterogener ist, dürfte in diesem Fall die Genauigkeit der klinischen Diagnose nicht über 85 % hinausgehen.
Es gibt einen gewichtigen Hinweis aus der Meta-Analyse mehrerer großer internationaler Multizenterstudien sowie aus autopsiegestützten Studien, dass eine spezifische Biomarker-Signatur für Demenzerkrankungen in der Ce- rebrospinal-Flüssigkeit (CSF) die richtige Diagnose von früher und sogar in- zipienter (präklinischer) Alzheimer-Krankheit stark stützt. Dies erklärt, weshalb CSF-gestützte neuro-chemische Diagnoseverfahren zur Erkennung von Demenzerkrankungen (CSF-NDD) im Jahr 2010 in die nationalen neuro- psychiatrischen S3-Richtlinien für die verbesserte Diagnose früher Demenzerkrankungen aufgenommen wurden. Die klinische Relevanz von CSF-NDD wird durch eine Vielzahl an Literaturbelegen aufgezeigt (Hansson et al.: "Association between CSF biomarkers and incipient Alzheimer's disease in pa- tients with mild cognitive impairment: a follow-up study ", Lancet Neurol., 2006, 5, 228-234; Engelborghs et al.: , "Neuropsychological and behavioural correlates of CSF biomarkers in dementia ", Neurochem. Int., 2006, 48, 286- 295; Engelborghs et al.: "No association of CSF biomarkers with APOEepsi- lon4, plaque and tangle bürden in definite Alzheimer's disease." Brain, 2007, 130, 2320-2326).
Da die im Rahmen der hier beschriebenen Studie untersuchte Patientenkohorte hauptsächlich aus Patienten mit früher oder inzipienter (präklini- scher/prodromaler) Alzheimer-Krankheit besteht, wird die Information aus der CSF-Biomarker-Signatur für Demenzerkrankungen als Bemessungsgrundlage für eine objektive diagnostische Schichtung bzw. Unterteilung der Patientengruppe (neuro-chemischer Goldstandard) verwendet, welche unabhängig von den konventionellen klinischen Stadien ist. Dies wird durch die Begründung bzw. Etablierung eines neuro-chemischen Demenz-Erkrankungscodes (NDD Code) erreicht, welcher wiederum aus einem gemittelten neuro- chemischen diagnostischem Score für Demenzerkrankungen (avNDD Score) erhalten wird.
Der NDD Score basiert auf den Informationen der folgenden vier Biomarker für Demenzerkrankungen in der Cerebrospinal-Flüssigkeit (CSF):
Verhältnis der A-beta-Peptide Aß(x-42) zu Aß(x-40) (AßratioTGC). Zur Bestimmung werden zwei ELISA-Tests der Firma THE GENETICS COMPANY, Zürich, verwendet, welche die Aß(l-42)- und Aß(l-40)- Peptide nicht spezifisch messen, sondern auch deren aminoterminal- trunkierte Spezies;
Aß(l-42) (Aßl42Inn): ELISA-Test von INNOGENETICS, Gent, misst spezifisch Aß(l-42);
- Total-Tau (ELISA-Test von INNOGENETICS);
Phospho-Tau 181 (ELISA-Test von INNOGENETICS). CSF-Biomarker-Informationen für Demenzerkrankungen sind für sämtliche Patienten verfügbar, jedoch nicht für alle Biomarker bei sämtlichen Patienten (Total-Tau: n = 42, Aßl42Inn: n = 42, Phospho-Tau: n = 29, AßratioTGC n - 20).
Patienten mit einer CSF-Biomarker-Konzentration für Demenzerkrankungen im hohen normalen Bereich bekommen willkürlich bzw. frei gewählt einen NDD-Score von zugewiesen. Im Gegensatz hierzu bekommen Patienten mit pathologischen Werten für CSF-Demenzerkrankungs-Biomarker in der Nähe des Grenzwerts {cut-off-value), über dem Grenzwert und weit über dem Grenzwert NDD-Scores von "0", "1" bzw. "2" zugeordnet. Da nicht für jeden einzelnen Patienten alle vier Biomarker zur Erkennung von Demenzerkrankungen zugänglich sind, wurde ein gemittelter NDD Score (average NDD Score, avNDD Score) berechnet, d. h. £Score/n. Ein avNDD Score von -1 bzw. +2 korrespondiert zu einem minimalen bzw. einem maximalen Risiko einer inzipienten oder offenkundigen klinischen Alzheimer-Krankheit.
Der ordinale avNDD Score wird verwendet, um den dichotomen NDD Code zu erhalten: Ein avNDD Score von < 1 korrespondiert zu einem geringen Risiko für eine inzipiente oder offenkundig klinische Alzheimer-Krankheit (NDD Code = 0), wohingegen ein avNDD Score von > 1 zu einem hohen Risiko für inzipiente oder offenkundige klinische Alzheimer-Krankheit (NDD Code = 1) korrespondiert.
Die Grenzwerte, welche die Klassifikationsbereiche des NDD Scores definieren, werden der Literatur entnommen oder aus eigenen Laborarbeiten abgeleitet (z. B. AßratioTGC): Total-Tau = 350 pg/ml; Phospho-Taul81 = 60 pg/ml; Aßl42Inn = 530 pg/ml; AßratioTGC = 0,09. Die Bereiche der Konzentrationen für CSF-Biomarker zur Erkennung von Demenzerkrankungen, welche die verschiedenen NDD_Score- Werte definieren, sind in Tabelle 1 zusammenge- fasst. Tabelle 1 : CSF-Demenz-Biomarker- Werte, die den NDD-Score begründen
Figure imgf000049_0001
Gemäß dem neuro-chemischen Goldstandard wurden 18 Patienten als eiAD (NDD_Code=l) und 24 Patienten als Con (NDD_Code=0) geschichtet bzw. eingeteilt.
1.3 Kombinierte molekulare und kognitive Phänotypisierung: Der neuro- chemische Demenzerkrankungs- und Kognitionsscore
Der Score für neuro-chemische Diagnoseverfahren bei Demenzerkrankungen und Kognition (NDD-Cog-Code) kombiniert den CSF-gestützten neuro- chemischen Nachweis für inzipiente oder offenkundige Alzheimer-Krankheit - wie durch den NDD Code ausgedrückt - mit der Bestimmung der kognitiven Defizite - wie durch den Mini-Mental-Status-Test (MMSE) ausgedrückt. Einen MMSE-Score von weniger als 25 Einheiten indiziert eine Demenzerkrankung, wobei ein Maximalscore von über 30 Einheiten leichte kognitive Beeinträchtigungen nicht ausschließt, da der MMSE nicht empfindlich genug ist, um subtile kognitive Defizite anzuzeigen. Die Parametervorgaben, welche den NDD-Cog_Code definieren, sind in Tabelle 2 zusammengefasst.
Tabelle 2: Parametereinstellungen für den NDD Cog Code
Figure imgf000050_0001
1.4 Aminoterminal-selektive Immunpräzipitation und attomolar-sensitiver harnstoffbasierter zweidimensionaler Western-Immunblot (2D-Aß-WIB)
Im Rahmen der durchgeführten Untersuchungen werden eine aminoterminal- selektive Immunpräzipitation und ein attomolar-sensitiver harnstoffbasierter zweidimensionaler Western-Immunblot (2D-Aß-WIB) nach Maler et al., 2007 verwendet, um die komplexe beta-Amyloid-Peptid-Signatur in EDTA- Blutplasma zu untersuchen. Einzelne Peptidkonzentrationen werden durch Western-Immunblots in Relation zu einer Mischung aus synthetischen A-beta- Peptiden quantifiziert, welche als eindimensionale Markerspur auf der Seite eines jeden zweidimensionalen Western-Immunblots mitlaufen. A-beta- immunreaktive Felder, welche durch 2D-Aß-WIB aufgetrennt werden, werden durch ihr zweidimensionales Migrations- bzw. Wanderungsverhalten im Vergleich zu bekannten synthetischen A-beta-Peptiden und durch amino- und carboxyterminalselektive Immunpräzipitation und nachfolgende 2D-Aß-WIB identifiziert. Darüber hinaus wurde ein weiterer molekularer Nachweis aus einer unabhängigen Arbeit (Schieb H. et al., Veröffentlichung in der Vorbereitung) verwendet, welcher aus der Analyse von Hirnproben transgener Mausmodelle der Alzheimer-Krankheit (mouse model APP23) erhalten wird, wobei die Himhomogenate durch 2D-Aß-WIB getrennt und die Felder nachfolgend massenspektrometrisch analysiert werden.
1.5 Biostatistische Datenanalyse
Aufgrund der verzerrten Datenverteilung mehrerer A-beta-Peptide aus dem Blutplasma, welche durch 2D-Aß-WIB getrennt wurden, werden die Rohkonzentrationen logarithmisch transformiert. Dementsprechend werden die biostatistischen Berechnungen (SPSS™) mit den logarithmierten Daten durchgeführt, einschließlich der Berechnung der Verhältnisse (Quotienten).
Weitere Vorteile, Merkmale, Eigenschaft und Aspekte der vorliegenden Erfindung ergeben sich auch aus den beigefügten Figurendarstellungen. Es zeigt:
Fig. 1 : eine beispielhafte zweidimensionale Auftrennung und Markierung von A-beta-Peptiden im Blut auf Basis einer fotographischen Abbildung eines 2D-Aß-WIB. Die Figurendarstellung zeigt ein stabiles 2D-Muster der entsprechenden Blut-A-beta-Peptide;
Fig. 2: eine frei gewählte Bezeichnung bzw. Nummerierung von insgesamt 18 mittels 2D-Aß-WIB aufgetrennten bzw. separierten Amy- loid-beta-Peptiden aus Blutplasma. Insbesondere zeigt Fig. 2 ein beispielhaftes 2D-Aß-WIB mit der entsprechenden Aufschlüsselung der entsprechenden Felder (spots) der Amyloid-beta-Peptide 1 bis 18. Die 18 Felder sind auf jeder der untersuchten bzw. analysierten Membranen der 2D-Blots zugegen (n = 42). Synthetische Amyloid-beta-Peptide 1-37/38/39/40/42 werden in der 1D-Linie (STD) aufgetrennt, welche aufzeigt, dass ihre Wanderungs- bzw. Migrationsposition in der zweiten Dimension nicht präzise ausgerichtet ist. Des Weiteren zeigt Fig. 2 die Ausrichtung bzw. Positionierung von Punkten bzw. Feldern von humanen Amyloid-beta- Peptiden: (4) Aß(l-42) ; (5) Aß(l-40); (6) Aß(l-39); (7) Aß(l-38); (8) Aß(l-37); (14) Aß(2-42); (15) Aß(2-40); (16) Aß(2-39); (17)
Aß(2-38); (18) Aß(2-37). Die Identität der Aß-immunreaktiven Felder (1) und (2) sowie (10) bis (13) wird nicht weiter untersucht;
Fig. 3: einen Vergleich von A-beta-Peptid- Verhältnissen (a) 4/15
(Aß(l-42) / Aß(2-40)), (b) 4/14 (Aß(l-42) / Aß(2-42)) und (c) 4/5 (Aß(l-42) / Aß(l-40)) in der Population der Gesamtstudie (n = 42), wobei eine Einteilung bzw. Schichtung in Patienten mit früher / inzipienter AD (eiAD; D Code l = 1) und eine Kontrolle (Con; D Code l = 0) gemäß dem klinischen Goldstandard erfolgt (Darstellung in Form von Feldern {box plots); Mann-Whitney-U- Test mit beidseitiger Angabe der Signifikanz bzw. Aussagekraft);
Fig. 4: einen Vergleich der A-beta-Peptid- Verhältnisse (a) 4/5
(Aß(l-42) / Aß(l-40)), (b) 4/14 (Aß(l-42) / Aß(2-42)), and 4/15 (Aß(l-42) / Aß(2-40)) für eine untersuchte Population, welche in eine Gruppe mit eiAD (NDD Code = 1, n = 18) und eine Gruppe Con (NDD Code = 0, n = 24) gemäß dem neuro-chemischen Goldstandard unterteilt bzw. geschichtet ist (Darstellung in Form von Feldern (box plots); Mann-Whitney-U-Test mit beidseitiger Anga- be der Signifikanz bzw. Aussagekraft);
Fig. 5: eine vergleichende ROC-Analyse für die A-beta-Peptid- Verhältnisse 4/5 (Aß(l-4) / Aß(l-40)), 4/14 (Aß(l-42) / Aß(2-42)), und 4/15 (Aß(l-42) / Aß(2-40)) bei Patienten mit früher / inzipien- ter AD (eiAD, n = 21, D Code l = 1) versus Kontrolle (Con, n = 21, D Code l = 0), welche gemäß dem klinischen Goldstandard unterteilt bzw. geschichtet sind. Die ROC-Analyse wird auf die Identifizierung von "wahrer AD" gesetzt, d. h. mit D_Code_l = 1. 24
- 51 -
Fig. 5 wird anhand der nachfolgenden Tabelle weiterführend spezifiziert:
Figure imgf000053_0001
Fig. 6: eine vergleichende ROC-Analyse für A-beta-Peptid- Verhältnisse
4/5 (Aß(l-42) / Aß(l-40)), 4/14 (Aß(l-42) / Aß(2-42)), und 4/15 (Aß(l-42) / Aß(2-40)) in Patienten mit früher/inzipienter AD (ei AD, n = 18, NDD Code = 1) versus Kontrolle (Con, n = 24, NDD Code = 0), unterteilt bzw. ermittelt gemäß dem neuro- chemischen Goldstandard. Die ROC-Analyse wird auf die Identifizierung von "wahrer AD" gesetzt bzw. eingestellt, d. h. D_Code_l = 1.
Fig. 6 wird anhand der nachfolgenden Tabelle weiter spezifiziert:
Figure imgf000054_0001
Die ROC-Analyse (NDD Code = 1) resultiert bei einer vorgegebenen bzw. festgesetzten Sensitivität von 83,3 % in Spezifitäten von 79,2 % (cut-ojpN ert: 0,0938), 58,3 % (cut-off- ert: 1,0296) und 37,5 % (cut-oJf-Wert: -0,8737 für logratio4vsl5, logratio4vsl4, und logratio4vs5;
eine vergleichende Analyse auf Basis einer Darstellung in Form von Feldern (box plot) mit einer nicht-parametrischen Evaluierung der Signifikanz bzw. Aussagekraft (Kruskal-Wallis-H) für (a) Aß- Peptid- Verhältnisse 4/5 (Aß(l-42) / Aß(l-40)), (b) 4/14 (Aß(l-42) / Aß(2-42)) und (c) 4/15 (Aß(l-42) / Aß(2-40)) für Patienten, bei denen CSF-Demenz-Biomarker und eine Aussage über die Leistungsfähigkeit im Rahmen eines kognitiven Tests auf Basis einer MMSE vorliegen (n = 38). Der NDD Cog Code wird als kombinierter molekularer und kognitiver Goldstandard zur Patienteneinteilung eingesetzt: NDD Cog Code = 3: Andere Demenzerkrankungen (oD);
MMSE < 25 und AvNDD_Scor < 1,0; (n = 3);
NDD_Cog_Code = 2: frühe Alzheimer-Krankheit (eAD);
MMSE < 25 und AvNDD_Score > 1,0; (n=15);
NDD Cog Code = 1 : inzipiente Alzheimer-Krankheit (iAD);
MMSE 25 - 30 und AvNDD_Score > 1,0; (n = 2);
NDD Cog Code - 0: keine Alzheimer-Krankheit (non AD bzw.
noAD): MMSE 25 - 30 und AvNDD Score < 1,0; (n = 18);
Fig. 7a: das spezielle A-beta-Peptid- Verhältnis 4/5 (Aß(l-42) / Aß(l-40));
log- Werte; Signifikanzwert: p = 0,132;
Fig. 7b: das spezielle A-beta-Peptid- Verhältnis 4/14 (Aß(l-42) / Aß(2-42));
log- Werte; Signifikanzwert: p = 0,027
Fig. 7c: das spezielle A-beta-Peptid- Verhältnis 4/15 (Aß(l-42) / Aß(2-40));
log- Werte; Signifikanzwert: p = 0,013.
Die nachfolgenden Figuren zeigen jeweils ein Streudiagramm (scatterplot) des avNDD_Score versus (a) Aß-Verhältnisse 4/5 (Aß(l-42) / Aß(l-40)), (b) 4/14 (Aß(l-42) / Aß(2-42)) und (c) 4/15 (Aß(l-42) / Aß(2-40)). Im Einzelnen zeigt
Fig. 8a: ein entsprechendes Streudiagramm, wobei die Grenzlinie bzw. cut- i -Linie y = -0,8737 aus der ROC-Analyse für log4vs5, NDD Code = 1 herrührt (vgl. Fig. 6); die AvNDD Score- Grenzlinie wird frei auf x = 0,9 gesetzt, da eine AvNDD-Score > 1,0 einem Subjekt bzw. einer Testperson ein Risiko einer frühen oder inzipienten AD (d.h. NDD_Code=l) zuordnet;
Fig. 8b: ein weiteres Streudiagramm, wobei die Grenzlinie bzw. cut-off- Linie y = 1,0296 aus der ROC-Analyse für log4vsl4, NDD_Code=l herrührt (vgl. Fig. 6); die AvNDD Score-Grenzlinie wird frei auf x = 0,9 gesetzt, da eine AvNDD-Score > 1,0 einem Subjekt bzw. einer Testperson ein Risiko einer frühen oder inzi- pienten AD (d.h. NDD_Code=l) zuordnet;
Fig. 8c: Ein wiederum weiteres Streudiagramm, wobei die Grenzlinie bzw.
cut-off-Lm' ie y = 0,0938 aus einer ROC-Analyse für log4vsl5, NDD Code = 1 herrührt (vgl. Fig. 6); die AvNDD Score- Grenzlinie wird frei auf x = 0,9 gesetzt, da eine AvNDD-Score > 1,0 einem Subjekt bzw. einer Testperson ein Risiko einer frühen oder inzipienten AD (d.h. NDD_Code=l) zuordnet.
Die nachfolgenden Figuren stellen jeweils Streudiagramme (scatterplots) der NDD_SPECT_Score versus A-beta- Verhältnisse (a) 4/5 (Aß(l-42) / Aß(l- 40)), (b) 4/14 (Aß(l-42) / Aß(2-42)) und (c) 4/15 (Aß(l-42) / Aß(2-40)); bei einer Gruppengröße von n = 37 dar. Es zeigt im Einzelnen
Fig. 9a: zeigt ein entsprechendes Streudiagramm, wobei die Grenzlinie bzw. cut-off-Lm' ie y = -0,8737 aus der ROC-Analyse für log4vs5, NDD Code = 1 herrührt (vgl. Fig. 6); die NDD_SPECT_Score- Grenzlinie wird frei auf x = 2,9 gesetzt, da bei einer NDD_SPECT_Score > 3,0 nach dem klinischen Goldstandard eingeteilte bzw. klassifizierte Patienten überlappungsfrei separiert bzw. differenziert werden können;
Fig. 9b: zeigt ein weiteres Streudiagramm, wobei die Grenzlinie bzw. cut- off-Lm' ie y = 1,0296 aus der ROC-Analyse für log4vsl4, NDD Code - 1 (vgl. Fig. 6) stammt; die NDD SPECT Score- Grenzlinie wird frei auf x = 2,9 gesetzt, da bei einer NDD_SPECT_Score > 3,0 nach dem klinischen Goldstandard eingeteilte bzw. klassifizierte Patienten überlappungsfrei separiert bzw. differenziert werden können;
Fig. 9c: zeigt ein entsprechendes Streudiagramm, wobei die Grenzlinie bzw. cut-off-Lm' ie y = 0,0938 aus der ROC-Analyse für log4vsl5, NDD Code = 1 (vgl. Fig. 6) stammt; die NDD_SPECT_Score- Grenzlinie wird frei auf x = 2,9 gesetzt, da bei einer NDD_SPECT_Score > 3,0 nach dem klinischen Goldstandard eingeteilte bzw. klassifizierte Patienten überlappungsfrei separiert bzw. differenziert werden können. Tabelle 3 : Korrelationsmatrix (Spearman-Rho; beidseitige Signifikanzhöhe) von A-beta-Peptid- Verhältnissen im Blut, CSF-Demenz- Biomarkern, Alter, diagnostischem Goldstandard, kognitiven Parametern, neuro-bildgebenden Daten und ApoE-epsilon-4- Genotyp logratio logratio logratio AvNDD NDD SPECT 4vs5 4vsl4 4 vsl 5 Score Score corr. coeff. 1 ,000 ,472** ,392* -,258 -,172 logratio4vs5 sig. (2- 0,00160 0,01022 0,09953 0,3081 1
n 42 42 42 42 37 corr. coefF. 0,472" 1 ,000 0,593" -0,328* -0,362* logratio4vsl4 sig. (2- 0,00160 0,00003 0,03399 0,02758
n 42 42 42 42 37 corr. coeff. 0,392* 0,593*' 1 ,000 -0,386* -0,442** logratio4vsl 5 sig. (2- 0,01022 0,00003 0,01 153 0,00619
n 42 42 42 42 37 corr. coeff. -0,258 -0,328* -0,386* 1 ,000 0,904**
AvNDD Score sig. (2- 0,09953 0,03399 0,01 153 0,00000
n 42 42 42 42 37 corr. coeff. -0,172 -0,362* -0,442" 0,904** 1 ,000
NDD_SPECT_Score sig. (2- 0,3081 1 0,02758 0,00619 0,00000
n 37 37 37 37 37 corr. coeff. -0,374* -0,456" -0,540" 0,397** 0,512" logAGE sig. (2- 0,01473 0,00241 0,00023 0,00922 0,00120
n 42 42 42 42 37 corr. coeff. 0,212 0,071 -0,216 -0,101 -0, 107
Gender sig. (2- 0,17690 0,65594 0,16883 0,52514 0,53020
n 42 42 42 42 37
ApoE Code l corr. coeff. -0,251 -0,282 -0,430** 0,391 * 0,310 sig. (2- 0,10857 0,07001 0,00452 0,01045 0,06185 n 42 42 42 42 37 corr. coeff. 0,146 -0,149 -0,289 0,223 0,312 logAßx40TGC sig. (2- 0,46772 0,45836 0,14407 0,26322 0,14751 n 27 27 27 27 23 corr. coeff. 0,254 -0,075 -0,203 -0,585" -0,628** logAßx42TGC sig. (2- 0,27960 0,75273 0,39067 0,00674 0,00916 n 20 20 20 20 16 corr. coeff. 0,215 0,289 0,226 -0,844" -0,736** logAßl 42Innx sig. (2- 0,17184 0,06312 0,14962 0,00000 0,00000 n 42 42 42 42 37 corr. coeff. 0,286 0,122 0,075 -0,878" -0,875" logAßratioTGC sig. (2- 0,22203 0,60896 0,75273 0,00000 0,00001 n 20 20 20 20 16 corr. coeff. 0,131 0,404* 0,366 -0,786" -0,788** logCSFratio
sig. (2- 0,51402 0,03686 0,06068 0,00000 0,00001 Aßl42vsAß40
n 27 27 27 27 23 corr. coeff. -0,247 -0,300 -0,438" 0,809" 0,787" logTotalTau sig. (2- 0,1 1425 0,05367 0,00376 0,00000 0,00000 n 42 42 42 42 37 corr. coeff. -0,375* -0,471 " -0,343 0,866" 0,875** logPhospho Taul 81 sig. (2- 0,04480 0,00984 0,06864 0,00000 0,00000 n 29 29 29 29 25 corr. coeff. 0,464" 0,270 0,254 -0,728" -0,71 1 ** logMMSE sig. (2- 0,00332 0,10133 0,12369 0,00000 0,00000 n 38 38 38 38 35
NDD Cog _Code corr. coeff. -0,369* -0,417" -0,315 0,749** 0,760" sig. (2- 0,02254 0,00917 0,05379 0,00000 0,00000 n 38 38 38 38 35 corr. coeff. -0,238 -0,369* -0,308 0,540** 0,590**
MRI_Score sig. (2- 0,14413 0,02072 0,05683 0,00039 0,00015 n 39 39 39 39 36 corr. coeff. -0,067 -0,281 -0,376' 0,640** 0,868**
SPECT_Score sig. (2- 0,69445 0,09261 0,02176 0,00002 0,00000 n 37 37 37 37 37

Claims

- 58 - Patentansprüche:
1. Verwendung mindestens eines quantitativen Verhältnisses (Quotienten) aus zwei voneinander verschiedenen Amyloid-beta-Peptiden (A-beta; Aß) in einer Probe einer Körperflüssigkeit eines Probanden und/oder Patienten zur Bestimmung dessen Wahrscheinlichkeit (Risikos), an einer Alzheimer-Krankheit (Morbus Alzheimer, AD) zu erkranken und/oder zur Bestimmung (Diagnose) dessen Erkrankung an einer Vorstufe der Alzheimer-Krankheit, wobei die Amyloid-beta-Peptide ausgewählt werden aus (a) Aß(l-42), (b) Aß(2-40) und (c) Aß(2-42) und wobei das quantitative Verhältnis aus (a) / (b) oder vice versa und/oder aus (a) / (c) oder vice versa gebildet wird.
2. Verwendung nach Anspruch 1, wobei der Proband und/oder Patient Symptome einer insbesondere leichten Gehirnleistungsstörung, vorzugsweise einer insbesondere leichten Gedächtnisstörung, aufweist und/oder wobei der Proband und/oder Patient Symptome einer leichten kognitiven Beeinträchtigung (Mild Cognitive Impairment, MCI) aufweist.
3. Verwendung nach Anspruch 1 oder 2, wobei es sich bei der Vorstufe der Alzheimer-Krankheit um eine präklinische Stufe der Alzheimer- Krankheit handelt und/oder wobei es sich bei der Vorstufe der Alzheimer-Krankheit um eine inzipiente und/oder prodromale Alzheimer- Krankheit (incipient AD) handelt.
4. Verwendung nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei es sich bei der Vorstufe der Alzheimer-Krankheit um eine klinische Stufe der Alzheimer-Krankheit handelt und/oder wobei es sich bei der Vorstufe der Alzheimer-Krankheit um eine frühe Alzheimer-Krankheit (early AD) handelt.
5. Verwendung nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei es sich bei dem Verhältnis um ein mengen- und/oder konzentrationsbezogenes Verhältnis handelt.
6. Verwendung nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei das Verhältnis aus (a) Aß(l-42) / (b) Aß(2-40) [d. h. Aß(l-42)/Aß(2- 40)-Verhältnis oder (a)/(b)-Verhältnis] und/oder
das Verhältnis aus (a) Aß(l-42) / (c) Aß(2-42) [d. h. Aß(l-42)/Aß(2- 42)- Verhältnis oder (a)/(c)- Verhältnis], vorzugsweise
das Verhältnis aus (a) Aß(l-42) / (b) Aß(2-40) [d. h. Aß(l-42)/Aß(2- 42)- Verhältnis oder (a)/(c)- Verhältnis],
gebildet wird.
7. Verwendung nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei Blut des Probanden und/oder Patienten als Probe eingesetzt wird.
8. Verwendung nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei Blutplasma (Plasma) und/oder Blutserum (Serum), vorzugsweise Blutplasma (Plasma), des Probanden und/oder Patienten als Probe eingesetzt wird.
9. Verwendung nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei die A- myloid-beta-Peptide, insbesondere (a) Aß(l-42) einerseits und (b) Aß(2- 40) und/oder (c) Aß(2-42) andererseits, aus der Probe insbesondere mittels Immunpräzipitation abgetrennt und/oder isoliert werden.
10. Verwendung nach Anspruch 9, wobei mindestens ein für Amyloid-beta- Peptide spezifischer und/oder hieran bindender Ligand, vorzugsweise Antikörper, eingesetzt wird, insbesondere wobei der mindestens eine Ligand, vorzugsweise Antikörper spezifisch für Amyloid-beta-Peptide der Form Aß(l-y) und Aß(2-y) ist, wobei y eine ganze Zahl von 37 bis 43 ist, und/oder insbesondere wobei der mindestens eine Ligand, vorzugsweise Antikörper spezifisch für (a) Aß(l-42) und/oder (b) Aß(2-40) und/oder (c) Aß(2-42) ist und/oder insbesondere wobei der mindestens eine Ligand, vorzugsweise Antikörper, spezifisch für das aminotermina- le Ende von (a) Aß(l-42) und/oder (b) Aß(2-40) und/oder (c) Aß(2-42) ist.
1 1. Verwendung nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei der Nachweis, insbesondere die Bestimmung der Menge und/oder des Gehaltes und/oder der Konzentration, der jeweiligen Amyloid-beta-Peptide, insbesondere von (a) Aß(l-42) einerseits und (b) Aß(2-40) und/oder (c) Aß(2-42) andererseits, auf Basis von Proteinauftrennverfahren und/oder insbesondere quantitativen immundetektiven Proteinnachweisverfahren, vorzugsweise auf Basis einer Kombination von Proteinauftrennverfahren und insbesondere quantitativen immundetektiven Proteinnachweisverfahren, durchgeführt wird.
12. Verwendung nach Anspruch 1 1, wobei als Proteinauftrennverfahren ein gelelektrophoretisches Verfahren, insbesondere eine zweidimensionale Gelelektrophorese, vorzugsweise eine harnstoffbasierte zweidimensionale Gelelektrophorese, eingesetzt wird und/oder wobei als Proteinnachweisverfahren ein Westernblot- Verfahren eingesetzt wird, und/oder wobei der Nachweis auf Basis einer Kombination einer insbesondere harnstoffbasierten zweidimensionalen Gelelektrophorese mit einem nachgeschalteten Westernblot-Verfahren (2D-Aß-WIB) durchgeführt wird.
13. Verwendung nach Anspruch 11 oder 12, wobei im Rahmen des insbesondere quantitativen immundetektiven Proteinnachweisverfahrens, vorzugsweise bei dem Westernblot-Verfahren, mindestens ein Ligand, vorzugsweise Antikörper, zur Markierung der Amyloid-beta-Peptide eingesetzt wird (Primärligand und/oder Primärantikörper), insbesondere wobei der mindestens eine Ligand, vorzugsweise Antikörper, spezifisch für Amyloid-beta-Peptide der Form Aß(l-y) und Aß(2-y) ist, wobei y eine ganze Zahl von 37 bis 43 ist, und/oder insbesondere wobei der mindestens eine Ligand, vorzugsweise Antikörper spezifisch für (a) Aß(l-42) und/oder (b) Aß(2-40) und/oder (c) Aß(2-42) ist und/oder insbesondere wobei der mindestens eine Ligand, vorzugsweise Antikörper, spezifisch für das aminoterminale Ende von (a) Aß(l-42) und/oder (b) Aß(2-40) und/oder (c) Aß(2-42) ist.
14. Verwendung nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei das quantitative Verhältnis aus zwei voneinander verschiedenen Amyloid- beta-Peptiden, insbesondere wie in einem der Ansprüche 1, 5 oder 6 definiert, mit hierzu entsprechenden Referenz- Verhältnissen korreliert und/oder verglichen und/oder diesen Referenz- Verhältnissen zugeordnet wird.
15. Verwendung nach Anspruch 14, wobei anhand des Vergleiches und/oder der Korrelation des quantitativen Verhältnisses mit den hierzu entsprechenden Referenz- Verhältnissen die Wahrscheinlichkeit bestimmt wird, an einer Alzheimer-Krankheit zu erkranken und/oder das Vorliegen einer Erkrankung an einer Vorstufe der Alzheimer-Krankheit bestimmt und/oder diagnostiziert wird.
16. Verwendung nach Anspruch 14 oder 15, wobei die quantitativen Referenz-Verhältnisse auf Basis eines Referenz-Probandenkollektivs und/oder eines Referenz-Patientenkollektivs bestimmt und/oder zugrundegelegt werden.
17. Verwendung nach Anspruch 16, wobei die Referenz-Probanden und/oder Referenz-Patienten des Referenz-Probandenkollektivs und/oder des Referenz-Patientenkollektivs insbesondere im Rahmen einer biostatistischen Evaluierung auf das Vorliegen oder NichtVorliegen einer leichten kognitiven Beeinträchtigung {Mild Cognitive Impairment, MCI) und/oder einer präklinischen Vorstufe der Alzheimer-Krankheit, insbesondere einer inzipienten und/oder prodromalen Alzheimer-Krankheit (incipient AD), und/oder einer klinischen Vorstufe der Alzheimer- Krankheit, insbesondere einer frühen Alzheimer-Krankheit {early AD), untersucht werden.
18. Verwendung nach Anspruch 17, wobei die Untersuchung und/oder Evaluierung auf Basis von Untersuchungsverfahren, ausgewählt aus der Gruppe von neuro-chemischen Verfahren, neuro-bildgebenden Verfahren, psychometrischen Verfahren und Kombinationen aus mindestens zwei der vorgenannten Verfahren, vorzugsweise auf Basis einer Kombination sämtlicher der vorgenannten Verfahren, durchgeführt wird.
19. Verwendung nach Anspruch 17 oder 18, wobei die Untersuchung und/oder Evaluierung auf Basis mindestens eines Goldstandards, insbesondere ausgewählt aus der Gruppe von klinischen Goldstandards, neu- ro-chemischen Goldstandards, psychometrischen Goldstandards und Kombinationen aus mindestens zwei der vorgenannten Standards, vorzugsweise auf Basis einer Kombination sämtlicher der vorgenannten Standards, durchgeführt wird.
20. Verwendung nach einem der Ansprüche 17 bis 19, wobei die Untersuchung und/oder Evaluierung auf Basis von Goldstandards durchgeführt wird, welche psychometrische, neuro-chemische und/oder neuro- bildgebende Verfahren und/oder Parameter umfassen.
21. Verwendung nach einem der Ansprüche 17 bis 20, wobei das neuro- chemische Verfahren die Bestimmung von Parametern der Cerebrospi- nal-Flüssigkeit (CSF) umfasst, insbesondere wobei das Verhältnis von Aß(x-42) / Aß(x-40) [AßratioTGC], insbesondere wobei x, unabhängig voneinander, den Wert 1 oder 2 einnimmt, der Gehalt an Aß(l-42) [Aßl42Inn], der Gesamtgehalt an Tau und/oder der Gehalt an Phospho- Tau 181 bestimmt wird.
22. Verwendung nach einem der Ansprüche 17 bis 21, wobei das neuro- bildgebende Verfahren insbesondere Hirnatrophie-Untersuchungen vorzugsweise auf Basis von bildgebenden Verfahren, bevorzugt SPECT (Single Photon Emission Computed Tomography) und/oder MRI {Magnet Resonance Imaging), umfasst.
23. Verwendung nach einem der Ansprüche 17 bis 22, wobei die psychometrischen Verfahren Untersuchungen auf Basis von MMSE (Mini- Mental State Examination) umfassen.
24. Verwendung nach einem der Ansprüche 17 bis 23, wobei die Referenz- Probanden und/oder Referenz-Patienten in Abhängigkeit von der auf Basis der Untersuchung und/oder Evaluierung gestellten Diagnose in verschiedene Referenz-Gruppen eingeteilt werden, insbesondere wobei die jeweiligen Referenz-Gruppen gebildet werden aus Referenz-Probanden und/oder Referenz-Patienten (A) ohne eine diagnostizierte Alzheimer- Krankheit und/oder ohne eine diagnostizierte Vorstufe der Alzheimer- Krankheit und (B) mit einer diagnostizierten Alzheimer-Krankheit und/oder mit einer diagnostizierten Vorstufe einer Alzheimer-Krankheit, insbesondere mit einer präklinischen Vorstufe der Alzheimer-Krankheit, insbesondere einer inzipienten und/oder prodromalen Alzheimer- Krankheit {incipient AD), und/oder mit einer klinischen Vorstufe der Alzheimer-Krankheit, insbesondere einer frühen Alzheimer-Krankheit (early AD).
25. Verwendung nach einem der Ansprüche 17 bis 24, wobei für die jeweiligen Referenz-Gruppen jeweils quantitative Referenz- Verhältnisse (Referenz-Quotienten) aus zwei voneinander verschiedenen Amyloid-beta- Peptiden (A-beta; Aß), insbesondere wie in einem der Ansprüche 1 , 5 oder 6 definiert, ausgehend von einer Probe einer Körperflüssigkeit, insbesondere wie in Anspruch 7 oder 8 definiert, der jeweiligen zu einer Referenz-Gruppe zugehörenden Referenz-Probanden und/oder Referenz- Patienten ermittelt und zusammengefasst werden.
26. Verwendung nach einem der Ansprüche 17 bis 25, wobei das quantitative Verhältnis aus zwei voneinander verschiedenen Amyloid-beta- Peptiden, insbesondere wie in einem der Ansprüche 1, 5 oder 6 definiert, mit der hierzu entsprechenden Referenz-Gruppe korreliert und/oder verglichen und/oder der entsprechenden Referenz-Gruppe zugeordnet wird, um auf diese Weise die Wahrscheinlichkeit des Patienten und/oder Probanden zu bestimmen, an einer Alzheimer-Krankheit zu erkranken und/oder um auf diese Weise die Erkrankung des Patienten und/oder Probanden an einer Vorstufe der Alzheimer-Krankheit zu bestimmen.
27. Verwendung nach einem der Ansprüche 17 bis 26, wobei dem Probanden und/oder Patienten eine geringere oder keine Wahrscheinlichkeit zugeordnet wird, an einer Alzheimer-Krankheit zu erkranken, und/oder wobei dem Probanden und/oder Patienten eine Nichterkrankung an einer präklinischen Stufe der Alzheimer-Krankheit, insbesondere an einer inzipienten und/oder prodromalen Alzheimer-Krankheit, und/oder an einer klinischen Vorstufe der Alzheimer-Krankheit, insbesondere an einer frühen Alzheimer-Krankheit (early AD) zugeordnet wird,
wenn das bei dem Probanden und/oder Patienten bestimmte Verhältnis in den Bereich der entsprechenden Referenz- Verhältnisse der Referenz- Gruppe (A) ohne die diagnostizierte Alzheimer-Krankheit und/oder ohne die diagnostizierte Vorstufe der Alzheimer-Krankheit fällt.
28. Verwendung nach einem der Ansprüche 17 bis 27, wobei dem Probanden und/oder Patienten eine erhöhte Wahrscheinlichkeit zugeordnet wird, an einer Alzheimer-Krankheit zu erkranken, und/oder wobei dem Probanden und/oder Patienten die Erkrankung an einer präklinischen Stufe der Alzheimer-Krankheit, insbesondere an einer inzipienten und/oder prodromalen Alzheimer-Krankheit, und/oder an einer klinischen Vorstufe der Alzheimer-Krankheit, insbesondere an einer frühen Alzheimer-Krankheit (early AD) zugeordnet wird,
wenn das bei dem Probanden und/oder Patienten bestimmte Verhältnis in den Bereich der entsprechenden Referenz- Verhältnisse der Referenz- Gruppe (B) mit der diagnostizierten Alzheimer-Krankheit und/oder mit der diagnostizierten Vorstufe einer Alzheimer-Krankheit fällt.
29. Verwendung nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei dem Probanden und/oder Patienten eine erhöhte Wahrscheinlichkeit zugeordnet wird, an einer Alzheimer-Krankheit zu erkranken, und/oder wobei dem Probanden und/oder Patienten die Erkrankung an einer präklinischen Stufe der Alzheimer-Krankheit, insbesondere an einer inzipienten und/oder prodromalen Alzheimer-Krankheit, und/oder an einer klinischen Vorstufe der Alzheimer-Krankheit, insbesondere an einer frühen Alzheimer-Krankheit (early AD) zugeordnet wird,
wenn die Menge und/oder Konzentration an (b) Aß(2-40) und/oder (c) Aß(2-42), insbesondere an (b) Aß(2-40), im Vergleich zu den hierzu entsprechenden Mengen und/oder Konzentrationen der Referenz-Gruppe ohne diagnostizierte Alzheimer-Krankheit und/oder ohne diagnostizierte Vorstufe einer Alzheimer-Krankheit erhöht ist und folglich das Verhältnis (a) Aß(l-42) / (b) Aß(2-40) und/oder (a) Aß(l-42) / (c) Aß(2-42) verringert ist.
30. Verwendung nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei dem Probanden und/oder Patienten eine erhöhte Wahrscheinlichkeit zugeordnet wird, an einer Alzheimer-Krankheit zu erkranken, und/oder wobei dem Probanden und/oder Patienten die Erkrankung an einer präklinischen Stufe der Alzheimer-Krankheit, insbesondere an einer inzipienten und/oder prodromalen Alzheimer-Krankheit, und/oder an einer klinischen Vorstufe der Alzheimer-Krankheit, insbesondere an einer frühen Alzheimer-Krankheit {early AD) zugeordnet wird,
wenn das relative Verhältnis aus Aß(l-42) / Aß(2-y) im Vergleich zu den hierzu entsprechenden Referenz- Verhältnissen der Referenz-Gruppe ohne diagnostizierte Alzheimer-Krankheit und/oder ohne diagnostizierte Vorstufe einer Alzheimer-Krankheit verringert ist, wobei y eine ganze Zahl von 37 bis 43, insbesondere 40 oder 42, ist, und/oder
wenn das relative Verhältnis von (a) Aß(l-42) / (b) Aß(2-40) und/oder (a) Aß(l-42) / (c) Aß(2-42), insbesondere (a) Aß(l-42) / (b) Aß(2-40), im Vergleich zu den hierzu entsprechenden Referenz- Verhältnissen der Referenz-Gruppe ohne diagnostizierte Alzheimer-Krankheit und/oder ohne diagnostizierte Vorstufe einer Alzheimer-Krankheit verringert ist.
31. Verfahren zur Bestimmung der Wahrscheinlichkeit (Risikos) eines Probanden und/oder Patienten, an einer Alzheimer-Krankheit (Morbus Alzheimer, AD) zu erkranken, wobei in einer Probe einer Körperflüssigkeit des Probanden und/oder Patienten mindestens ein quantitatives Verhältnis (Quotient) aus zwei voneinander verschiedenen Amyloid-beta- Peptiden (A-beta; Aß) ermittelt wird, wobei die Amyloid-beta-Peptide ausgewählt werden aus (a) Aß(l-42), (b) Aß(2-40) und (c) Aß(2-42) und wobei das quantitative Verhältnis aus (a) / (b) oder vice versa und/oder aus (a) / (c) oder vice versa gebildet wird.
32. Verfahren zur Bestimmung der Wahrscheinlichkeit (Risikos) eines Probanden und/oder Patienten, an einer Alzheimer-Krankheit (Morbus Alzheimer, AD) zu erkranken, insbesondere nach Anspruch 31,
(a) wobei in einer Probe einer Körperflüssigkeit des Probanden und/oder Patienten mindestens ein quantitatives Verhältnis (Quotient) aus zwei voneinander verschiedenen Amyloid-beta-Peptiden (A-beta; Aß) ermittelt wird, wobei die Amyloid-beta-Peptide ausgewählt werden aus (a) Aß(l-42), (b) Aß(2-40) und (c) Aß(2-42) und wobei das quantitative Verhältnis aus (a) / (b) oder vice versa und/oder aus (a) / (c) oder vice versa gebildet wird;
(b) wobei das so erhaltene Verhältnis mit hierzu entsprechenden Referenz-Verhältnissen verglichen und/oder korreliert wird und/oder wobei das so erhaltene Verhältnis hierzu entsprechenden Referenz- Verhältnissen zugeordnet wird; und
(c) wobei anschließend auf Basis des Vergleichs und/oder der Korrelation und/oder der Zuordnung die Wahrscheinlichkeit des Patienten und/oder Probanden bestimmt wird, an einer Alzheimer-Krankheit zu erkranken.
33. Verfahren nach Anspruch 31 oder 32, gekennzeichnet durch eines oder mehrere der Merkmale der Ansprüche 1 bis 30.
34. Kit, insbesondere zur Bestimmung der Wahrscheinlichkeit (Risikos) eines Patienten und/oder Probanden, an einer Alzheimer-Krankheit (Morbus Alzheimer, AD) zu erkranken und/oder insbesondere zur Bestimmung (Diagnose) dessen Erkrankung an einer Vorstufe der Alzheimer- Krankheit, wobei das Kit Komponenten und/oder Mittel zur Bestimmung eines quantitativen Verhältnisses (Quotienten) aus zwei voneinander verschiedenen Amyloid-beta-Peptiden (A-beta; Aß) in einer Probe einer Körperflüssigkeit eines Probanden und/oder Patienten umfasst, wobei die Komponenten und/oder Mittel derart ausgewählt sind, dass diese die quantitative Bestimmung von Amyloid-beta-Peptiden aus der Gruppe von (a) Aß(l-42), (b) Aß(2-40) und (c) Aß(2-42) zu Zwecken der Ermittlung des quantitativen Verhältnisses aus (a) / (b) oder vice versa und/oder aus (a) / (c) oder vice versa ermöglichen.
35. Kit nach Anspruch 34, wobei das Kit mindestens einen für Amyloid- beta-Peptide spezifischen und/oder hieran bindenden Liganden, vorzugsweise Antikörper, aufweist, insbesondere wobei der mindestens eine Ligand, vorzugsweise Antikörper spezifisch für Amyloid-beta-Peptide der Form Aß(l-y) und Aß(2-y) ist, wobei y eine ganze Zahl von 37 bis 43 ist, und/oder insbesondere wobei der mindestens eine Ligand, vorzugsweise Antikörper spezifisch für (a) Aß(l-42) und/oder (b) Aß(2-40) und/oder (c) Aß(2-42) ist und/oder insbesondere wobei der mindestens eine Ligand, vorzugsweise Antikörper, spezifisch für das aminotermina- le Ende von (a) Aß(l-42) und/oder (b) Aß(2-40) und/oder (c) Aß(2-42) ist.
Kit nach Anspruch 34 oder 35, gekennzeichnet durch eines oder mehrere der Merkmale der Ansprüche 1 bis 33.
PCT/EP2011/001724 2010-04-09 2011-04-07 Neue ansätze zur alzheimer-diagnose WO2011124376A1 (de)

Priority Applications (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP11713692A EP2556375A1 (de) 2010-04-09 2011-04-07 Neue ansätze zur alzheimer-diagnose
CA2795236A CA2795236A1 (en) 2010-04-09 2011-04-07 New formulations for diagnosis of alzheimer's disease
BR112012025870A BR112012025870A2 (pt) 2010-04-09 2011-04-07 uso de pelo menos uma razão quantitativa de dois diferentes peptídeos beta-amiloides, metodos e kit para determinar a probabilidade de um paciente contrair a doença de alzheimer (ad)
CN2011800286766A CN102933966A (zh) 2010-04-09 2011-04-07 阿尔茨海默病的新型诊断制剂
JP2013503037A JP5687332B2 (ja) 2010-04-09 2011-04-07 アルツハイマー病の診断のための処方
US13/639,866 US20130045542A1 (en) 2010-04-09 2011-04-07 New formulations for diagnosis of alzheimer's disease

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE102010014577.7 2010-04-09
DE102010014577 2010-04-09
DE102010014684.6 2010-04-12
DE102010014684A DE102010014684A1 (de) 2010-04-09 2010-04-12 Neue Ansätze zur Alzheimer-Diagnose

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2011124376A1 true WO2011124376A1 (de) 2011-10-13

Family

ID=44658140

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/EP2011/001724 WO2011124376A1 (de) 2010-04-09 2011-04-07 Neue ansätze zur alzheimer-diagnose

Country Status (8)

Country Link
US (1) US20130045542A1 (de)
EP (1) EP2556375A1 (de)
JP (1) JP5687332B2 (de)
CN (1) CN102933966A (de)
BR (1) BR112012025870A2 (de)
CA (1) CA2795236A1 (de)
DE (1) DE102010014684A1 (de)
WO (1) WO2011124376A1 (de)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103852579A (zh) * 2012-12-05 2014-06-11 姚钧 一种人体血清Aβ的定量检测方法

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11079370B2 (en) * 2015-07-30 2021-08-03 Kyocera Corporation Measurement method and measurement device
EP3242134A1 (de) * 2016-05-04 2017-11-08 Euroimmun Medizinische Labordiagnostika AG Assay zur diagnose einer neurologischen krankheit
CN112703402A (zh) * 2018-07-19 2021-04-23 吉宁特有限公司 基于标志物分子将个体鉴定为具有淀粉样蛋白阳性痴呆症或处于发展淀粉样蛋白阳性痴呆症的风险中的方法和相关用途
CN111323597A (zh) * 2018-12-14 2020-06-23 陈志成 用于检测受试者中mci和/或ad的方法、试剂盒及筛选化合物的方法
KR102473086B1 (ko) * 2019-03-06 2022-12-02 한양대학교 에리카산학협력단 은 나노갭 쉘을 이용한 알츠하이머병 진단방법
WO2021083977A1 (en) * 2019-10-28 2021-05-06 Agent Biomarkers and uses thereof for diagnosing the silent phase of alzheimer's disease
US20240077501A1 (en) * 2020-12-28 2024-03-07 Mcbi Inc. Judgment supporting information generating method, judgment supporting information generating system, and information processing device
CN113008850B (zh) * 2021-02-07 2022-02-25 首都医科大学宣武医院 诊断阿尔茨海默病的用途及诊断阿尔茨海默病的装置
CN113049696B (zh) * 2021-03-04 2022-03-18 首都医科大学宣武医院 一种诊断受试者是否患阿尔茨海默病的代谢产物及其用途
CN114966048A (zh) * 2022-05-12 2022-08-30 东南大学 血小板AβPP比值在阿尔茨海默病筛查中的应用
WO2024004944A1 (ja) * 2022-06-28 2024-01-04 株式会社Mcbi 判定支援情報生成方法、判定支援情報生成システム、及び情報処理装置

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1270592A1 (de) 2001-06-12 2003-01-02 Wiltfang, Jens Monoklonaler Antikörper, mbAb 1E8, welcher für die zwei ersten N-terminalen Aminosäuren von Amyloid-beta-Peptiden spezifisch ist und dessen Verwendung zum Nachweis von Amyloid-beta Peptiden und/oder sAPPa
EP1480041A1 (de) * 2003-05-22 2004-11-24 Innogenetics N.V. Verfahren zur Voraussage, zur Diagnose und zur vergleichenden Diagnose von Alzheimer

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1371986A1 (de) * 2002-06-06 2003-12-17 ABETA GmbH Diagnose von Alzheimer basiert auf dem hAbeta42:hAbeta40 Verhältnis

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1270592A1 (de) 2001-06-12 2003-01-02 Wiltfang, Jens Monoklonaler Antikörper, mbAb 1E8, welcher für die zwei ersten N-terminalen Aminosäuren von Amyloid-beta-Peptiden spezifisch ist und dessen Verwendung zum Nachweis von Amyloid-beta Peptiden und/oder sAPPa
US20030166019A1 (en) * 2001-06-12 2003-09-04 Jens Wiltfang Monoclonal antibody
EP1480041A1 (de) * 2003-05-22 2004-11-24 Innogenetics N.V. Verfahren zur Voraussage, zur Diagnose und zur vergleichenden Diagnose von Alzheimer

Non-Patent Citations (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
A. PICCINI ET AL: "Association of a Presenilin 1 S170F Mutation With a Novel Alzheimer Disease Molecular Phenotype", ARCHIVES OF NEUROLOGY, vol. 64, no. 5, 1 May 2007 (2007-05-01), pages 738 - 745, XP055000952, ISSN: 0003-9942, DOI: 10.1001/archneur.64.5.738 *
ENGELBORGHS ET AL.: "Neuropsychological and behavioural correlates of CSF biomarkers in dementia.", NEUROCHEM. INT., vol. 48, 2006, pages 286 - 295, XP025067853, DOI: doi:10.1016/j.neuint.2005.11.002
ENGELBORGHS ET AL.: "No association of CSF biomarkers with APOEepsilon4, plaque and tangle burden in definite Alzheimer's disease", BRAIN, vol. 130, 2007, pages 2320 - 2326
HANSSON ET AL.: "Association between CSF biomarkers and incipient Alzheimer's disease in patients with mild cognitive impairment: a follow-up study", LANCET NEUROL., vol. 5, 2006, pages 228 - 234, XP024968928, DOI: doi:10.1016/S1474-4422(06)70355-6
KORNHUBER ET AL.: "Early and differential diagnosis of dementia and mild cognitive impairment: design and cohort baseline characteristics of the German Dementia Competence Network", DEMENT. GERIATR. COGN. DISORD., vol. 27, 2009, pages 404 - 417
LEWCZUK ET AL.: "The German Competence Net Dementias: standard operating procedures for the neurochemical dementia diagnostics.", J. NEURAL TRANSM., vol. 113, 2006, pages 1075 - 80, XP019430451, DOI: doi:10.1007/s00702-006-0511-9
LEWCZUK, WILTFANG: "Neurochemical dementia diagnostics: State of the art and research perspectives", PROTEOMICS, vol. 8, 2008, pages 1292 - 301, XP002633614, DOI: doi:10.1002/PMIC.200700703
MALER J M ET AL: "Distinct fractional Abeta release patterns in human mononuclear phagocytes", JOURNAL OF NEUROIMMUNOLOGY, ELSEVIER SCIENCE PUBLISHERS BV, XX, vol. 206, no. 1-2, 3 January 2009 (2009-01-03), pages 1 - 4, XP025767901, ISSN: 0165-5728, [retrieved on 20080927], DOI: DOI:10.1016/J.JNEUROIM.2008.08.010 *
PIOTR LEWCZUK ET AL: "Electrophoretic separation of amyloid beta peptides in plasma", ELECTROPHORESIS, vol. 25, no. 20, 1 October 2004 (2004-10-01), pages 3336 - 3343, XP055000997, ISSN: 0173-0835, DOI: 10.1002/elps.200406068 *
See also references of EP2556375A1
TAMAOKA A ET AL: "Amyloid beta protein 42(43) in cerebrospinal fluid of patients with Alzheimer's disease", JOURNAL OF NEUROLOGICAL SCIENCES, ELSEVIER SCIENTIFIC PUBLISHING CO, AMSTERDAM, NL, vol. 148, no. 1, 1 May 1997 (1997-05-01), pages 41 - 45, XP027248197, ISSN: 0022-510X, [retrieved on 19970501] *
WILTFANG ET AL.: "Consensus paper of the WFSBP Task Force on Biological Markers of Dementia: the role of CSF and blood analysis in the early and differential diagnosis of dementia", WORLD J. BIOL. PSYCHIATRY, vol. 6, 2005, pages 69 - 84, XP009155896, DOI: doi:10.1080/15622970510029786
WILTFANG J ET AL: "ELEVATION OF BETA-AMYLOID PEPTIDE 2-42 IN SPORADIC AND FAMILIAL ALZHEIMER'S DISEASE AND ITS GENERATION IN PS1 KNOCKOUT CELLS", JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY, THE AMERICAN SOCIETY OF BIOLOGICAL CHEMISTS, INC., BALTIMORE, MD, US, vol. 276, no. 46, 16 November 2001 (2001-11-16), pages 42645 - 42657, XP001154588, ISSN: 0021-9258, DOI: DOI:10.1074/JBC.M102790200 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103852579A (zh) * 2012-12-05 2014-06-11 姚钧 一种人体血清Aβ的定量检测方法

Also Published As

Publication number Publication date
JP5687332B2 (ja) 2015-03-18
DE102010014684A1 (de) 2011-10-13
US20130045542A1 (en) 2013-02-21
JP2013527919A (ja) 2013-07-04
CN102933966A (zh) 2013-02-13
BR112012025870A2 (pt) 2017-07-18
CA2795236A1 (en) 2011-10-13
EP2556375A1 (de) 2013-02-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP2556375A1 (de) Neue ansätze zur alzheimer-diagnose
DE69632734T2 (de) QUANTIFIZIERUNG VON p97 ZUR DIAGNOSE UND ÜBERWACHUNG DER ALZHEIMHER-KRANKHEIT
EP2030023B1 (de) In vitro multiparameter-bestimmungsverf ahren zur diagnose und frühdiagnose von demenzerkrankungen
DE60123752T2 (de) Diagnose von tauopathien durch bestimmung des verhältnisses von tau/phospho-tau
EP1270592B1 (de) Monoklonaler Antikörper, mbAb 1E8, welcher für die zwei ersten N-terminalen Aminosäuren von Amyloid-beta-Peptiden spezifisch ist und dessen Verwendung zum Nachweis von Amyloid-beta Peptiden und/oder sAPPa
Tada et al. Coexistence of Huntington’s disease and amyotrophic lateral sclerosis: a clinicopathologic study
DE3702789A1 (de) Vorlaeuferprotein des apc-polypeptids, dafuer codierende dna und diagnostische verwendung der dna und des proteins
WO2014207049A2 (de) Verfahren zur ermittlung von indikatoren zur bestimmung von krankheiten
EP1904082B1 (de) VERFAHREN ZUR BESTIMMUNG DER KONZENTRATION DER ADIPOZYTAREN FORM DES FATTY ACID BINDUNG PROTEIN (A-FABP, FABP4, aP2)
DE60133661T2 (de) Nachweismittel von pathologischen veränderungen des proteins app und ihre verwendungen
DE102005034174A1 (de) Liquordiagnostisches in vitro Verfahren zur Diagnose von Demenz-Erkrankungen und neuroinflammatorischen Erkrankungen
DE69922535T2 (de) Komplex, bestehend aus einem chaperon und beta-amyloidprotein sowie verfahren, die diesen komplex benutzen
WO2007131775A1 (de) In vitro verfahren zur diagnose und frühdiagnose von neurodegenerativen erkrangungen
Damadzic et al. Neuritic pathology is lacking in the entorhinal cortex, subiculum and hippocampus in middle-aged adults with schizophrenia, bipolar disorder or unipolar depression
DE69736893T2 (de) Oxydativer stoffwechsel in glatten muskelzellen: verfahren in beziehung dazu
EP2676138A2 (de) Diagnosekit sowie ein verfahren zur untersuchung einer menschlichen patientenprobe auf das vorhandensein neuromyelitis-optica-spezifischer antikörpern
WO2005050219A1 (de) Schnelltest zur diagnose der alzheimerschen erkrankung
Gottfries et al. Alzheimer’s disease—one, two or several?
Wiendl et al. Revision of McDonald’s new diagnostic criteria for multiple sclerosis
EP0885392A1 (de) Differentialdianostisches verfahren zum nachweis verschiedener stadien der alzheimer-krankheit
Hunter et al. Meissner corpuscles in skin biopsies of patients with presenile dementia: a quantitative study
Ng'walali et al. Neuropathological diagnosis of Alzheimer's disease in forensic autopsy of elderly persons with fatal accident
DE19707230C2 (de) Verfahren zum Erkennen einer Erkrankung eines Organismus an einer transmissiblen spongiformen Enzephalopathie
WO2008138475A1 (de) Verwendung von crmp1 als marker für chronisch psychiatrische erkrankungen und monoklonaler antikörper gegen crmp1
EP3149485A1 (de) Verfahren zur diagnose einer durch den alternativen weg des komplementsystems vermittelten krankheit oder eines risikos hierfür

Legal Events

Date Code Title Description
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 201180028676.6

Country of ref document: CN

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 11713692

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2795236

Country of ref document: CA

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2013503037

Country of ref document: JP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 13639866

Country of ref document: US

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2011713692

Country of ref document: EP

REG Reference to national code

Ref country code: BR

Ref legal event code: B01A

Ref document number: 112012025870

Country of ref document: BR

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 112012025870

Country of ref document: BR

Kind code of ref document: A2

Effective date: 20121009