WO2011026349A1 - 一类羧酸与β氨基酸组成的二肽硼酸及其酯类化合物、制备方法及其用途 - Google Patents

一类羧酸与β氨基酸组成的二肽硼酸及其酯类化合物、制备方法及其用途 Download PDF

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iii
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reaction
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朱永强
朱新荣
马玉恒
吴刚
赵欣
李月杰
陈亚利
殷晓进
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江苏先声药物研究有限公司
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    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F5/00—Compounds containing elements of Groups 3 or 13 of the Periodic Table
    • C07F5/02—Boron compounds
    • C07F5/025—Boronic and borinic acid compounds

Definitions

  • Dipeptide boronic acid and ester compound thereof composed of carboxylic acid and ⁇ amino acid, preparation method and use thereof
  • the invention belongs to the field of drug synthesis, and particularly relates to a preparation method of a novel peptide boric acid and an ester compound thereof and the application thereof in pharmacodynamics.
  • malignant tumors are still one of the major diseases that threaten people's lives.
  • cancer treatment has made great progress, it has not yet been able to treat cancer radically.
  • the anti-cancer drugs currently on the market have certain curative effects, they are mostly cytotoxic drugs with serious toxic and side effects. Therefore, it is imperative for medical workers to study targeted new anticancer drugs from effective tumor targets.
  • Ubiquitin-Proteasome Pathway regulates the levels of proteins involved in cell cycle control, and this pathway has important relationships with cancer, cardiovascular and cerebrovascular diseases, and the pathogenesis of neurodegenerative diseases. .
  • the use of some potent inhibitors to inhibit this pathway from over-degrading important proteins will provide new insights into the treatment of these diseases.
  • Millennium Pharmaceuticals of the United States successfully launched the first proteasome inhibitor Wanxuan in the United States in 2003 for the treatment of recurrent myeloma. In 2004, the drug was approved for listing in the European Union. In September 2005, the drug was first listed in Guangzhou, China by Xi'an Yangsen.
  • proteasome inhibitors To address this therapeutically proven target, we have designed a new class of structural proteasome inhibitors. It is an object of the present invention to provide novel boric acid and borate ester compounds which are novel in structure and which have the function of inhibiting proteasome. As a 20S proteasome inhibitor, they can block tumor cell proliferation and induce tumor cell apoptosis, which can be used for the treatment and prevention of various diseases such as malignant tumors in humans and animals.
  • Another object of the present invention is to provide a process for producing the above-described peptide boronic acid and an ester compound thereof.
  • Still another object of the present invention is to provide an application of the above-described peptide boronic acid and an ester compound thereof for the preparation of an antitumor drug.
  • the object of the present invention can be specifically achieved by the following measures:
  • R 2 is a fluorenyl group of C 10 10, a cyclodecyl or heterocyclic fluorenyl group of C 3 -6, a benzyl group, a naphthylmethyl group or a fluorenylmethyl group, or an fluorenyl group optionally having a Cl ⁇ 4, Cl ⁇ 4 Substituted by methoxy, cyano, hydroxy, decyl, amino or halogen; 1 2 is preferably decyl, benzyl, naphthylmethyl or fluorenylmethyl, or optionally fused to Cl ⁇ 4 Substituted by a cyano group, a cyano group, a hydroxy group, a decyl group, an amino group or a halogen; most preferably a decyl group or a benzyl group of C1010, or optionally substituted with a fluorenyl group or a halogen of CCl4.
  • 3 ⁇ 4 or ⁇ 2 are each independently hydroxy, Cl ⁇ 10 the embankment group, Cl ⁇ 10 the embankment or aryloxy group, or B, 3 ⁇ 4, and ⁇ 2 - is formed from N, S or a heterocyclic group containing 0 3 ⁇ 4 or ⁇ 2 is preferably independently a hydroxyl group, a decyl group of Cl ⁇ 10, a decyloxy group or an aryloxy group of Cl ⁇ 10, or B, 3 ⁇ 4 and ⁇ 2 together to form a boric acid-a-decanediol ester.
  • 3 ⁇ 4 or ⁇ 2 is most preferably independently a hydroxyl group, or B, 3 ⁇ 4 and ⁇ 2 together form a boronic acid-a-decanediol ester.
  • Pg is a decanoyl group of C1010, a decyloxy group of Cl ⁇ 10, a benzoyl group, a naphthyl group, a tetrahydronaphthoyl group or a heterocyclic acyl group (for example containing a hetero atom?, S or 0), or optionally C1 ⁇ 4 fluorenyl, Cl ⁇ 4 decyloxy, halogen or
  • Pg is preferably a decanoyl group, a benzoyl group, a pyridyl group, a pyrazinyl group, a naphthalene group of Cl 10
  • Pg is most preferably a decyloxy group of Cl ⁇ 10
  • R 3 or R 4 are each independently hydrogen, methyl, ethyl, methoxy, ethoxy, fluoro, chloro, bromo or trifluoromethyl.
  • R 2 and Pg groups of the present invention means that the groups of R 2 and Pg may or may not be substituted by these groups, that is, not limited to being The case where these groups are substituted is also included in the case where they are not substituted by the listed ones.
  • This expression is in the form of a fluorenyl group which is a substituted or unsubstituted C 10 10 group, a C 3 -6 ring fluorenyl group or a heterocyclic fluorenyl group, a phenyl group, a naphthyl group or a fluorenyl group, wherein the substituent is Cl ⁇ 4.
  • the radicals, cyano, hydroxy, decyl, amino or halogen of Cl ⁇ 4 are expressed in the same manner, but the substitution or substitution is not limited to the sulfhydryl group of Cl ⁇ 10, but extends to all
  • the group includes a substituted or unsubstituted C3-6 cyclodecyl or heterocycloalkyl group, a substituted or unsubstituted benzyl group, a substituted or unsubstituted naphthylmethyl group, a substituted or unsubstituted anthracene group.
  • mercapto is used to mean a saturated hydrocarbon group
  • fluorenyl group of Cl ⁇ 10 means a saturated hydrocarbon group having 1 to 10 carbon atoms
  • fluorenyl group of Cl ⁇ 4 means a saturated hydrocarbon group having 1 to 10 carbon atoms.
  • cycloalkyl refers to a non-aromatic carbocyclic group, including a cyclized fluorenyl group.
  • the cycloalkyl group can include a bicyclic or polycyclic system.
  • examples of the cycloalkyl group include a cyclopropyl group, a cyclobutyl group, a cyclopentyl group, a cyclohexyl group, a cycloheptyl group, and a cyclodecyl group of C3 to 6 means a cyclodecyl group having 1 to 10 carbon atoms.
  • benzyl refers to benzyl, and substituted benzyl means that at least one hydrogen atom on the phenyl ring of the benzyl group is substituted by a non-hydrogen moiety, and the substituent of the benzyl group may be halogen, -CN, -OH, - SH, -NH 2 , a linear or branched fluorenyl group of 1 to 6 carbons, a substituted linear or branched fluorenyl group of 1 to 6 carbons.
  • heterocyclic fluorenyl refers to a non-aromatic heterocarbocyclyl group, including a cyclized fluorenyl group, wherein one or more of the ring-forming carbon atoms The subunit is substituted by a hetero atom such as a 0, N or S atom.
  • the heterocyclic fluorenyl group preferably has 3, 4, 5, 6 or 7 ring-forming atoms.
  • heterocyclyl refers to a cyclic group containing a hetero atom 0, N or S, such as furan, thiophene, pyrrole, thiophene, imidazole, quinoline, indole, benzofuran, anthracene, acridine, etc. .
  • Metal group means a -0-fluorenyl group having a carbon number of usually 1 to 10.
  • Examples of the decyloxy group include a methoxy group, an ethoxy group, a propoxy group (e.g., n-propoxy group and isopropoxy group), a t-butoxy group and the like.
  • Aryl means an aromatic carbocyclic group including monocyclic or polycyclic aromatic hydrocarbons such as phenyl, naphthyl, anthracenyl, phenanthryl and the like.
  • the "aryloxy group” means a -0-aryl group, and the concept of the aryl group is as described above, and the most preferable example of the aryloxy group is a phenoxy group.
  • Halogen includes fluorine, chlorine, bromine and iodine.
  • the R 2 group in the compound of the present invention may be a racemate or an optically active one, and the R 2 group in the present invention is preferably in the R configuration.
  • the compounds of the invention may be used to prepare antitumor drugs,
  • each group Pg, Ri, R 2 , Z l 7 Z 2 in the reaction formula is as described above, and the formula (II-1) is reacted with methanol under the action of S0C1 2 to obtain the formula (11-2), II-2) Condensation with Pg under peptide condensing agent to form formula (II-3) or formula (II-2) Reaction with Pg of acid chloride to form formula (11-3), saponification and reacidification of formula (II-3) to form (II); and on the other hand, (III-6) reacts with metal reagent R 2 MgX and is then free at room temperature Hydrazine!
  • the preparation method of the compound (II) includes the following steps:
  • a compound of the formula (II-3) can be produced by the following two routes: a. A compound of the formula (II-2) is condensed with Pg in the presence of a peptide condensing agent to form a formula (II-3). a compound; b, Pg first reacts with SOCl 2 to form an acid chloride, and then reacts with a compound of the formula (II-2) to form a compound of the formula (II-3).
  • the peptide condensing agent commonly used in the above reaction is N, N-dicyclohexyl-carbodiimide (abbreviated as DCC), 1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride. (abbreviated as EDGHC1), 1-hydroxybenzotriazole (abbreviated as HOBt) or isobutyl chloroformate.
  • DCC N, N-dicyclohexyl-carbodiimide
  • EDGHC1 1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride.
  • HOBt 1-hydroxybenzotriazole
  • isobutyl chloroformate isobutyl chloroformate.
  • the preparation method of the compound (III) includes the following steps (taking B, 3 ⁇ 4 and ⁇ 2 together to form a boric acid-a-nonanediol ester as an example):
  • a-pinene represented by formula (III-1) forms chiral decanediol (III-2) under the action of oxidant 804 4 ;
  • a compound represented by the formula (III-8) is obtained by removing a protective group bis(trimethylsilyl) under acidic conditions to form an amino hydrochloride salt compound of a boronic acid ester represented by the formula (III).
  • R 5 refers to a linear, branched or substituted anthracene of 1 to 4 carbon atoms
  • X represents a halogen such as F, Cl, Br, I
  • M represents an alkali metal such as Li, Na. , K, etc.
  • compounds (II) and (III) are reacted in the presence of a certain condensing agent to form (1).
  • the condensing agent used is TBTU (0-benzotriazole-oxime, oxime, ⁇ ', ⁇ ,-tetramethyluronium tetrafluoroborate), 1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethyl Carbon Diimine hydrochloride (abbreviated as EDOHCl), 1-hydroxybenzotriazole (abbreviated as HOBt) or isobutyl chloroformate.
  • the borate ester compound represented by the formula (I) can be de-esterified to form boric acid, that is, the 3 ⁇ 4 and Z 2 groups are removed to form a compound of the formula (IV), and the reaction is carried out.
  • ester groups There are two methods for removing ester groups: one is the cleavage of the diol under the action of sodium periodate, the sodium salt of boric acid is formed, the pH of the system is adjusted to be acidic, and boric acid is obtained; the second is the boric acid ester and space.
  • Boric acid with a higher steric hindrance (such as isobutylboronic acid, phenylboronic acid) is transesterified to obtain the desired product boric acid, and the product is obtained by some separation means.
  • the inventors of the present invention have confirmed by experiments that the compound of the present invention has a good activity of inhibiting proteasome and antitumor activity, and some compounds exhibit better proteasome inhibitory activity and antitumor activity at a nanomolar level, and have a proteasome preparation. Application value of inhibitors or anti-tumor drugs.
  • the compound designed by the invention has a high yield and a simple process, and is suitable for industrial production.
  • the amino-protecting agent Pg and the ⁇ -amino acid methyl ester oxime-2 prepared in 1 were dissolved in THF, and ⁇ -methylmorpholine and a suitable peptide condensation reaction reagent (DCC + HOBt) were added at 0 °C. Slowly warm to room temperature and continue to react for a certain period of time until TLC shows the reaction is complete. The insoluble solid is removed by filtration, the filtrate is evaporated to dryness, and an appropriate amount is added to the obtained viscous liquid.
  • DCC + HOBt suitable peptide condensation reaction reagent
  • the amino protecting agent Pg was dissolved in SOC1 2 at 0 ° C, and a catalytic amount of dry DMF was added thereto, and the mixture was reacted at room temperature for 20 minutes, and heated to 50 ° C for a certain period of time to evaporate unreacted SOCl 2 .
  • the acid chloride of the protective agent Pg is obtained. Dissolve in an appropriate amount of dry toluene, dry and set aside.
  • the ⁇ -amino acid methyl ester II-2 was dissolved in an organic solvent (toluene), an excess of hydrazine-methylmorpholine was added, and a toluene solution of the Pg acid chloride prepared above was added dropwise at 0 °C.
  • the reaction was carried out at 0 ° C for a certain period of time, and then slowly raised to room temperature for a certain period of time until TLC showed completion of the reaction.
  • the solvent was distilled off under reduced pressure, and the obtained solid was dissolved with an organic solvent (ethyl acetate), respectively, and washed with alkali (5% sodium hydrogen carbonate), acid (10% citric acid), and alkali (5% sodium hydrogencarbonate) Wash with saturated saline.
  • the desiccant was dried (anhydrous sodium sulfate and anhydrous magnesium sulfate). The desiccant was filtered off, and the solvent was evaporated to dryness under reduced pressure to give the crude product of the amino-protected ?-amino acid methyl ester II-3. The crude product was used directly in the next step of saponification without purification.
  • the crude product of the above prepared hydrazine-3 is dissolved in an organic solvent (acetone or methanol), and an aqueous solution of inorganic alkali (2N NaOH) is added at 0 ° C to maintain the pH of the system between 11 and 13, until TLC showed the reaction was complete.
  • the organic solvent was distilled off under reduced pressure, and an aqueous solution of mineral acid (5N HCl) was added dropwise at 0 ° C until the pH of the system was between 1 and 3. It is extracted with an organic solvent (ethyl acetate), and the organic phase is dried with a drying solvent (anhydrous sodium sulfate or anhydrous magnesium sulfate).
  • the desiccant was filtered off, and the solvent was evaporated to dryness under reduced pressure to give the crude product II.
  • ⁇ 3 ⁇ 2 ⁇ 20 is dissolved in water, and III-la, tert-butanol, a small amount of pyridine, and a catalytic amount of osmium tetroxide are added to the reaction system.
  • the mixture was heated to reflux for 24 hours at a certain temperature (10 CTC), and the reaction was completed by TLC. Naturally, it was cooled to room temperature, and an appropriate amount of reducing agent (NaHS0 3 ) and solid salt were added.
  • the liquid layer was separated, and the aqueous layer was extracted with an organic solvent (diethyl ether), and the organic phase was combined, and the organic phase was dried (dry sodium sulfate and anhydrous magnesium sulfate).
  • the desiccant was filtered off, and the solvent was evaporated under reduced pressure to give a viscous liquid. Distillation under reduced pressure gave product III-2a.
  • Magnesium chips, an anhydrous organic solvent (anhydrous THF or anhydrous ether) and a small iodine tablet were placed in a strictly dried reaction flask.
  • a mixed solution of a halogenated hydrocarbon R 2 X and an anhydrous organic solvent (anhydrous THF or anhydrous diethyl ether) was added dropwise to the reaction mixture at room temperature.
  • the reaction system is heated to a slightly boiling state in a water bath, and after most of the magnesium reaction is completed, the reflux system is heated. After 30 minutes, the remaining magnesium was completely reacted completely. The reaction system was slowly cooled and set aside.
  • III-6a is dissolved in an anhydrous organic solvent (anhydrous THF or diethyl ether), and the reaction system is cooled to a temperature of 78 °C.
  • anhydrous organic solvent anhydrous THF or diethyl ether
  • the reaction system was naturally warmed to room temperature, and stirring was continued for 18 h at room temperature. The solid was removed by filtration, and concentrated to give the compound III-7a.
  • the prepared hexamethylene solution of III-8a prepared above was protected with an inert gas (e.g., ? or Ar gas) and cooled to a temperature of 78 °C.
  • an organic solvent e.g., dioxane, diethyl ether
  • hydrogen chloride gas is dissolved is added to the reaction system, and then naturally raised to room temperature to precipitate a solid.
  • the filter cake was washed with an organic solvent (anhydrous diethyl ether) to give Compound III-a.
  • the product was used in the next step without purification.
  • III-2b ⁇ 3 ⁇ 2 ⁇ 20 is dissolved in water, and III-lb, tert-butanol, a small amount of pyridine, and a catalytic amount of osmium tetroxide are added to the reaction system. The mixture was heated under reflux at a certain temperature (10 CTC) for 48 hours, and the reaction was completed by TLC. Naturally, it was cooled to room temperature, and an appropriate amount of reducing agent (NaHS0 3 ) and solid salt were added.
  • reducing agent NaHS0 3
  • the organic solvent was distilled off under reduced pressure, and the organic solvent (diethyl ether and ethyl acetate) was added to the mixture of the mixture of the liquid and the solid, and the aqueous layer was extracted with an organic solvent (diethyl ether and ethyl acetate). Dry with a desiccant (anhydrous sodium sulfate or anhydrous magnesium sulfate). The desiccant was filtered off, and the solvent was evaporated under reduced pressure to give a viscous liquid.
  • the product III-2b was obtained by distillation under reduced pressure at a high vacuum.
  • Magnesium chips, an anhydrous organic solvent (anhydrous THF or anhydrous ether) and a small iodine tablet were placed in a strictly dried reaction flask.
  • a mixed solution of a halogenated hydrocarbon R 2 X and an anhydrous organic solvent (anhydrous THF or anhydrous diethyl ether) was added dropwise to the reaction mixture at room temperature.
  • the reaction system was heated with a water bath. The solution was brought to a slightly boiling state. After most of the magnesium reaction was completed, the system was heated to reflux for 30 minutes to completely react the remaining magnesium. The reaction system was slowly cooled and set aside.
  • III-6b is dissolved in an anhydrous organic solvent (anhydrous THF or diethyl ether), and the reaction system is cooled to a temperature of 78 °C.
  • anhydrous organic solvent anhydrous THF or diethyl ether
  • Dissolve II and III in an organic solvent such as THF, CH 2 C1 2
  • an organic solvent such as THF, CH 2 C1 2
  • N-methylmorpholine and a condensing agent TBTU or EDOHCl + HOBt or isobutyl chloroformate
  • the organic phase is dried with a drying agent (anhydrous sodium sulfate and anhydrous magnesium sulfate).
  • a drying agent anhydrous sodium sulfate and anhydrous magnesium sulfate.
  • the desiccant was filtered off, and the solvent was evaporated under reduced pressure to give a glassy solid compound boronic acid I.
  • the boronic acid ester I prepared in 1 is dissolved in an organic solvent such as diethyl ether and CH 2 C 1 2 , and water and isobutylboronic acid are added. After stirring the reaction for 4 hours at room temperature, TLC showed the reaction was completed. The organic phase was extracted 3 times with water, the aqueous phases were combined and evaporated to dryness. The resulting viscous solid was washed with a small amount of diethyl ether to give a solid compound of boronic acid IV.
  • an organic solvent such as diethyl ether and CH 2 C 1 2
  • the boric acid ester I prepared in 1 was dissolved in an organic solvent (acetone or methanol), and then an aqueous solution of ammonium acetate and NaI0 4 were added . After stirring at room temperature for 24 hours, TLC showed the reaction was completed.
  • the organic solvent is distilled off under reduced pressure, the aqueous phase is adjusted to pH 3 with a mineral acid (hydrochloric acid), extracted with an organic solvent (ethyl acetate or CH 2 C1 2 ), and the organic phase is combined, and the organic phase is dried with a drying agent (anhydrous sulfuric acid) Sodium and anhydrous magnesium sulfate).
  • the desiccant is filtered off, and the solvent is evaporated under reduced pressure to give a foamy solid compound boric acid.
  • the hydrochloride salt of the other ⁇ amino acid methyl ester used in the present invention can be produced by the above procedure, Compound lb: Synthesized by ⁇ -4-methylphenylalanine according to the method of synthesizing Compound la; Compound lc: Synthetic compound The method of la is synthesized by ⁇ -4-chlorophenylalanine; compound Id: synthesized by ⁇ -4-methoxyphenylalanine according to the method of synthesizing compound la; compound le : by the method of synthesizing compound la Synthesis of ⁇ -3-methylphenylalanine; Compound If: synthesized by ⁇ -3-fluorophenylalanine according to the method of synthesizing compound la; Compound lg : ⁇ -3-chloro by the method of synthesizing compound la Synthesis of phenylalanine; compound lh : synthesized by the method of synthesizing compound la using ⁇ -3-methoxyphenylalanine; compound
  • the insoluble material N, ⁇ '-dicyclohexylurea (DCU) was removed by filtration, and the filtrate was added with ethyl acetate 150 mL, respectively, with 5% NaHC0 3 solution (30 mL), 10% citric acid solution. (30mL), washed with 5% NaHC0 3 solution (30mL) and saturated saline solution (2 X 20mL). The ethyl acetate layer was dried over anhydrous Na 2 S0 4, filtered, and the solvent was evaporated under reduced pressure to give 1.44 g of the compound, the product as a white solid, yield 98%. The product is not pure Directly used in the next step.
  • amino-protected amino acids used in the present invention can be prepared by the methods described in Example (3).
  • 3bA ⁇ 2bA is synthesized by the method of the embodiment (3); 3cA-.2cA is synthesized by the method of the embodiment (3); 3dA: 2dA is synthesized by the method of the embodiment (3); 3eA : 2eA is used as an example ( 3) Method synthesis; 3fA : 2f A was synthesized by the method of Example (3); 3gA : 2gA was synthesized by the method of Example (3); 3hA : 2hA was synthesized by the method of Example (3); 3iA : 2iA method used in Example (3) synthesis; 3jA: 2jA the procedure of Example (3) synthesis; 3kA: the pair 2kA procedure of Example (3) synthesis; 31A: the ⁇ ⁇ the Example (3 ) is synthesized; 3mA: 2mA method used in Example (3) synthesis; 3nA: 2nA method used in Example (3) synthesis; 3oA: the pair 2oA method used in Example (3) synthesis; 3pA: the p
  • Trimethyl borate (7.5 mL, 66 mmol) was added to a solution of the above-prepared compound III-3a at 110 ° C, and stirring was continued for 1 hour, then 12 mL of 5N HCl solution was added, and the mixture was allowed to warm to room temperature. The reaction mixture was transferred to a sep. funnel, and the organic layer was evaporated. The solvent was evaporated to give a white solid, 9.3 g, yield 99.4%. The product was used in the next step without purification.
  • Dichloromethylborate -0C-decanediol ester III-6a ( 15.78 g, 60 mmol) was dissolved in 100 mL of anhydrous tetrahydrofuran. The dried nitrogen gas was passed through, and the temperature was lowered to 78 ° C. Then, the prepared tert-butyl format reagent in anhydrous ether solution was slowly added dropwise. After the dropwise addition, the dried ZnCl 2 powder (4.08 g, 30 mmol). Raise to room temperature naturally and continue stirring at room temperature. After TLC detection, the reaction was completed after 18 hours.
  • Dichloromethylene borate-OC-decanediol ester III-6a ( 1.58 g, 6 mmol) was dissolved in 20 mL of diethyl ether and stirred at room temperature. Nitrogen gas was introduced, and the temperature was lowered to a temperature of 78 ° C, and then a diethyl ether solution of the prepared n-butyl format reagent was slowly added dropwise. After the dropwise addition was completed, dry ZnCl 2 powder (0.41 g, 3 mmol) was added. Raise to room temperature naturally and continue stirring at room temperature. After TLC detection, the reaction was completed after 18 hours.
  • Dichloromethylene borate-OC-decanediol ester III-6a ( 1.31 g, 5 mmol) was dissolved in 20 mL of diethyl ether and stirred at room temperature. Nitrogen gas was introduced, and the temperature was lowered to a temperature of 78 ° C, and then a solution of the prepared benzyl chloride format reagent in diethyl ether was slowly added dropwise. After the dropwise addition was completed, dry ZnCl 2 powder (0.41 g, 3 mmol) was added. Raise to room temperature naturally and continue stirring at room temperature. After TLC detection, the reaction was completed after 24 hours.
  • the -oco-decyl glycol ester III-6a (5.26 g, 20 mmol) was dissolved in 30 mL of diethyl ether and stirred at room temperature. Nitrogen gas was introduced, and the temperature was lowered to 78 ° C, and then a solution of the prepared methylbenzyl chloride format reagent in diethyl ether was slowly added dropwise. After the dropwise addition was completed, dry ZnCl 2 powder (0.55 g, 4 mmol) was added. Raise to room temperature naturally and continue stirring at room temperature. After TLC detection, the reaction was completed after 24 hours.
  • Dichloromethylene borate-oc-decanediol ester III-6a (2.62 g, 10 mmol) was dissolved in 20 mL of diethyl ether and stirred at room temperature. Nitrogen gas was introduced, and the temperature was lowered to a temperature of 78 ° C, and then a solution of the prepared fluorobenzyl bromide format reagent in diethyl ether was slowly added dropwise. After the dropwise addition was completed, dry ZnCl 2 powder (0.27 g, 2 mmol) was added. Raise to room temperature naturally and continue stirring at room temperature. After TLC detection, the reaction was completed after 24 hours.
  • Dichloromethylene borate-OC-decanediol ester III-6a (5.26 g, 20 mmol) was dissolved in 50 mL of diethyl ether and stirred at room temperature. Nitrogen gas was introduced, and the temperature was lowered to a temperature of 78 ° C, and then a solution of the prepared 3-methylbenzyl bromide format reagent in diethyl ether was slowly added dropwise. After the dropwise addition was completed, dry ZnCl 2 powder (1.36 g, 10 mmol) was added. Raise to room temperature naturally and continue stirring at room temperature. After TLC detection, the reaction was completed after 24 hours.
  • Dichloromethylene borate-OC-decanediol ester III-6a (3.89 g, 14.8 mmol) was dissolved in 40 mL of diethyl ether and stirred at room temperature. Nitrogen gas was introduced, and the temperature was lowered to a temperature of 78 ° C, and then a solution of the prepared 3-fluorobenzyl bromide format reagent in diethyl ether was slowly added dropwise. After the dropwise addition was completed, dry ZnCl 2 powder (1.0 g, 7.4 mmol) was added. Raise to room temperature naturally and continue stirring at room temperature. After TLC detection, the reaction was completed after 24 h.
  • Dichloromethylene borate-OC-decanediol ester III-6a (5.26 g, 20 mmol) was dissolved in 50 mL of diethyl ether and stirred at room temperature. Nitrogen gas was introduced, and the temperature was lowered to a temperature of 78 ° C, and then a solution of the prepared 2-methylbenzyl bromide format reagent in diethyl ether was slowly added dropwise. After the dropwise addition was completed, dry ZnCl 2 powder (1.36 g, 10 mmol) was added. Raise to room temperature naturally and continue stirring at room temperature. After TLC detection, the reaction was completed after 24 hours.
  • Dichloromethylene borate-OC-decanediol ester III-6a (4.5 g, 17.6 mmol) was dissolved in 40 mL of diethyl ether and stirred at room temperature. Pass nitrogen gas, and cool to a temperature of 78 ° C, then slowly add the prepared 2-fluorobenzyl bromide format reagent B Ether solution. After the dropwise addition was completed, dry ZnCl 2 powder (1.2 g, 8.8 mmol) was added. Raise to room temperature naturally and continue stirring at room temperature. After TLC detection, the reaction was completed after 24 hours.
  • the 100 mL three-necked flask was added with chopped magnesium strips (0.24 g, 10 mmol), 15 mL of anhydrous diethyl ether, and then a small amount of iodine was added, and bromomethylcyclohexane (1.77 g, 10 mmol) was added dropwise at room temperature. 10 mL of diethyl ether solution, after the completion of the dropwise addition, the mixture was heated to a slight boiling until the magnesium bar was dissolved, and the solution of the fluorobenzyl bromide format reagent in diethyl ether was naturally cooled. Place it in a dry place for later use.
  • Dichloromethylene borate-OC-decanediol ester III-6a (2.26 g, 10 mmol) was dissolved in 20 mL of diethyl ether and stirred at room temperature. Nitrogen gas was introduced, and the temperature was lowered to a temperature of 78 ° C, and then a solution of the prepared fluorobenzyl bromide format reagent in diethyl ether was slowly added dropwise. After the dropwise addition was completed, dry ZnCl 2 powder (0.27 g, 2 mmol) was added. Raise to room temperature naturally and continue stirring at room temperature. After TLC detection, the reaction was completed after 24 hours.
  • the filtrate was cooled to a temperature of 78 ° C, and 23 mL of a diethyl ether solution of a concentration of 1.3 M hydrogen chloride was added, and then naturally warmed to room temperature, and a large amount of milky white solid appeared. Freezing allows the solid to completely precipitate. Filtration and diethyl ether washing afforded 2.31 g of a white solid, yield 68.8%.
  • Example 1 Under the protection of nitrogen, the hydrazine-benzoyl-phenylalanine (3aA) (0.10 g, 0.37 mmol) in Example 1 was dissolved in 10 ml of dry THF, and the system was cooled to -5 ° C, and HOBt was added. (0.06 g, 0.44 mmol). After 20 min., the mixture was cooled to -15 ° C and then EDC.HC1 (0.07 g, 0.37 mmol). Finally, 2-methyl-4-amino-butylboronic acid-0C-decanediol hydrochloride salt III-16a (0.11 g, 0.37 mmol) and DIPEA (0.064 mL, 0.37 mmol) were added.
  • the method of synthesizing other similar compounds of the present invention can employ the above method.
  • N-benzoyl ⁇ -phenylpropanamide-D-proline boronic acid-(+)- ⁇ -decanediol ester (0.21 g, 0.407 mmol) was dissolved in 6 mL of methanol, and 2-methylpropyl group was added.
  • Boric acid (0.207 g, 2.04 mmol) and 6 mL of n-hexane were added to the HCl solution (1M, 1 mL) and the mixture was stirred at room temperature. After 5 hours, TLC showed the reaction was completed. The layers were separated, and the lower layer was washed with 10 mL of hexane for 1 time, and dried under anhydrous sodium sulfate.
  • the method utilizes the fluorescent substrate polypeptide Suc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC (abbreviated as Suc-LLVY-AMC, Sue represents succinyl group, AMC represents 7-amide-4-methylcoumarin) under the action of proteasome Hydrolysis will occur, releasing the principle of fluorescent AMC (Ex: 380nm, Em: 460nm).
  • Suc-LLVY-AMC the fluorescent substrate polypeptide Suc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC
  • Sue represents succinyl group
  • AMC represents 7-amide-4-methylcoumarin
  • the proteasome used in this experiment was the human erythrocyte 20S proteasome, and the enzyme, fluorescent substrate and test buffer were purchased from Biomol.
  • the experimental system is 100 wL, which contains the proteasome 90 / L (0.2 / g), the substrate 10 / L, its Final concentration of 50 / M, drugs (inhibitors) 0.1 / L, a final concentration of 10- 7 M 10- U M, the concentration of the actual configuration 10- 4 ⁇ 10- 8 ⁇ .
  • the specific experimental process is as follows:
  • the 20S proteasome (1 /g / /L) was diluted to a concentration of 0.0022 /g in a buffer solution, 90 L was added to each well of a 96-well fluorescent plate, and 0.1 L of the sample to be tested was added to each well.
  • the listed drug Wanxi was used as a positive control drug, and the blank control group and the background control group were added with 0.1 / L DMSO at 37 ° C for 20 min. After the reaction was completed, 10 / L of the fluorescent substrate was added to each well, and the reaction was carried out at 37 ° C for 1 hour in the dark, and the fluorescence value was measured by a 380 nm / 460 nm fluorescent microplate reader (Tecan, Infinite M200).
  • the therapeutic dose of the compound of the present invention may vary depending, for example, on the particular use of the treatment, the mode of administration of the compound, the health of the patient, and the judgment of the prescribing physician.
  • the proportion or concentration of a compound of the invention in a pharmaceutical composition will vary depending on a number of factors, including dosage, chemical properties (e.g., hydrophobicity), and route of administration.
  • the compounds of the invention may be provided in an aqueous physiological buffer containing from about 0.1 to about 10% w/v of the compound for parenteral administration. Some typical dosage ranges range from about 1 g / kg to about lg / kg body weight per day.
  • the dosage range is from about 0.01 mg I kg body weight to about 100 mg/kg body weight per day.
  • the dose is highly likely to depend on such variables as the type and progression of the disease or disorder, the overall health of the particular patient, the relative biological efficacy of the selected compound, the formulation of the excipient, and the route of administration. Effective doses can be derived from dose response curves from in vitro or animal model test systems.

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Abstract

本发明公开了一种羧酸与β氨基酸组成的二硼酸及其酯类化合物、制备方法及其用途， 该化合物具有式I结构，R1为取代或非取代的C1～10的烷基、C3～6的环烷基或杂环烷基、苯基、萘基或吲哚基，R2为取代或非取代的C1～10的烷基、C3～6的环烷基或杂环烷基、苄基、萘甲基或吲哚甲基，Z1或Z2分别独立地为羟基、C1～10的烷基、C1～10的烷氧基或芳氧基，或者B、Z1和Z2一起形成含有N、S或O的杂环基团；Pg为取代或非取代的C1～10的烷酰基、C1～10的烷氧酰基、 芳香族酰基或含有N、S或O的杂环酰基。本发明的化合物可以应用在制备蛋白酶体抑制剂或抗肿瘤药物方面。

Description

说明书 一类羧酸与 β氨基酸组成的二肽硼酸及其酯类化合物、 制备方法及其用途 技术领域
本发明属于药物合成领域，具体涉及一类新型肽硼酸及其酯类化合物的制备方法及其 在药效学上的应用。 目前，恶性肿瘤仍然是威胁人们生命的主要疾病之一。癌症的治疗目前虽然已经取得 了很大的进步， 但还未能从根本上治疗癌症。 目前上市的抗癌药物虽然具有一定的疗效， 但它们大多是细胞毒药物， 具有严重的毒副作用。 因此， 如何从有效的肿瘤靶点出发来研 究靶向性的新型抗癌药物成为医药工作者的当务之急。
泛素-蛋白酶体途径（Ubiquitin-Proteasome Pathway, 简称 UPP)能够调控参与细胞周 期控制的蛋白质的水平，这一途径与癌症、心脑血管疾病及神经系统退行性疾病的发病等 都有重要的关系。使用一些有效的抑制剂来抑制这一途径过度降解重要的蛋白质将会为上 述疾病的治疗提供新的思路。 针对这一新型靶点， 美国千年制药公司于 2003年在美国成 功地上市了第一个蛋白酶体抑制剂万珂， 用于复发性骨髓瘤的治疗。 2004年该药又被批 准在欧盟上市。 2005年 9月， 该药由西安杨森首次在我国广州上市。 2005年， 该药同时 在法国、 比利时和荷兰获得具有医药界的诺贝尔奖称号的 "PrixGalien"奖。 在 2007年 7月 11日又经美国 FDA批准用于治疗复发或难治性套细胞淋巴瘤 （Mantle Cell Lymphoma, 简称 MCL)， 成为目前唯一获 FDA批准用于治疗 MCL的药物。
2007年万珂的销售额达到 7.64亿美元， 与 2006年相比增长 20%。 2008年 5月日本 制药大亨武田制药收购了千年公司，从而使得该药预计在 2008年全年销售额达到 13亿美 元， 目前占市场份额的 57.19%， 预计到 2011年市场份额达到 69.36%。 万珂在中国市场 售价为每支约 1万 4千元，治疗一个周期费用约 4万元。这样昂贵的药物对许多患者来说 是非常沉重的经济负担。 而且， 目前的临床数据显示， 这类药物也存在比较多的副作用， 如腹泻、 呕吐以及神经病变等。 因此， 如何开发出一种价廉、 疗效更高、 副作用更低的蛋 白酶体抑制剂药物是目前我们所关注的问题。
针对这一疗效确证的靶点， 我们设计了一类结构全新的蛋白酶体抑制剂。 本发明的目的是提供一种结构新颖的且具有抑制蛋白酶体功能的新型硼酸和硼酸酯 类化合物。 它们作为 20S 蛋白酶体抑制剂， 能阻断肿瘤细胞增殖， 诱发肿瘤细胞凋亡， 从而可用于人和动物的多种疾病如恶性肿瘤的治疗和预防。
本发明的另一目的是提供一种上述肽硼酸及其酯类化合物的制备方法。
本发明还有一个目的是提供一种上述肽硼酸及其酯类化合物在制备抗肿瘤药物方面 的应用。
本发明的目的具体可以通过以下措施来达到：
一种羧酸与 β ，
Figure imgf000004_0001
其中 :
!^为。1〜10的垸基、 C3〜6的环垸基或杂环垸基、 苯基、 萘基或吲哚基， 或者任选 地被 Cl〜4的垸基、 Cl〜4的垸氧基、 氰基、 硝基、 羟基、 巯基、 氨基或卤素取代； 优选为 Cl〜10的垸基、 苯基、 萘基或吲哚基， 或者任选地被 Cl〜4的垸基、 Cl〜4的 垸氧基、 氰基、 硝基、 羟基、 巯基、 氨基或卤素取代； ！^最优选为苯基， 或者任选地被 Cl〜4的焼基、 Cl〜4的垸氧基、 硝基或卤素取代。
R2为 Cl〜10的垸基、 C3〜6的环垸基或杂环垸基、 苄基、 萘甲基或吲哚甲基， 或者 任选地被 Cl〜4的垸基、 Cl〜4的垸氧基、 氰基、 羟基、 巯基、 氨基或卤素取代； 1 2优 选为 Cl〜10的垸基、 苄基、 萘甲基或吲哚甲基， 或者任选地被 Cl〜4的垸基、 氰基、 羟 基、 巯基、 氨基或卤素取代； 最优选为 Cl〜10 的垸基或苄基， 或者任选地被 Cl〜4 的垸基或卤素取代。
¾或∑2分别独立地为羟基、 Cl〜10的垸基、 Cl〜10的垸氧基或芳氧基， 或者 B、 ¾和∑2—起形成含有 N、 S或 0的杂环基团； ¾或∑2优选分别独立地为羟基、 Cl〜10 的垸基、 Cl〜10的垸氧基或芳氧基， 或者 B、 ¾和∑2—起形成硼酸 -a-蒎垸二醇酯； ¾ 或∑2最优选分别独立地为羟基， 或者 B、 ¾和∑2—起形成硼酸 -a-蒎垸二醇酯。
Pg为 Cl〜10的垸酰基、 Cl〜10的垸氧酰基、 苯酰基、 萘酰基、 四氢萘酰基或杂环 酰基 (如含有杂原子？^、 S或 0)， 或者任选地被 Cl〜4的垸基、 Cl〜4的垸氧基、 卤素或
Cl〜4的卤代垸基取代； Pg优选为 Cl〜10的垸酰基、 苯酰基、 吡啶酰基、 吡嗪酰基、 萘 酰基、 四氢萘酰基， 或者任选地被 Cl〜4的垸基、 Cl〜4的垸氧基、 卤素或 Cl〜4的卤 代垸基取代； Pg最优选为 Cl〜10的垸氧甲酰基、 苯甲酰基、 吡啶甲酰基、 吡嗪甲酰基、 萘甲酰基、 四氢萘甲酰基， 或者任选地被 Cl〜4的垸基、 Cl〜4的垸氧基、 卤素或 Cl〜4 的卤代垸基即代。 更进一步， Pg进一步优选为：
Figure imgf000005_0001
其中 R3或 R4分别独立地为氢、 甲基、 乙基、 甲氧基、 乙氧基、 氟、 氯、 溴或三氟甲 基。
本发明 、 R2和 Pg基团中的 "任选地被…取代"是指 、 R2和 Pg的基团可以被这 些基团取代， 也可以不被这些基团取代， 即并不仅限于被所列举的这些基团取代的情况， 也包括不被所列举的这些基团取代的情况。 这种表达方式与 为取代或非取代的 Cl〜 10的垸基、 C3〜6的环垸基或杂环垸基、 苯基、 萘基或吲哚基， 其中取代基为 Cl〜4的 垸基、 Cl〜4的垸氧基、 氰基、 羟基、 巯基、 氨基或卤素"的表达方式相同， 但是取代或 非取代的限定并非仅狭义地指 Cl〜10的垸基， 而是扩大到所有所述的基团， 即包括取代 或非取代的 C3〜6的环垸基或杂环垸基、 取代或非取代的苄基、 取代或非取代的萘甲基、 取代或非取代的吲哚甲基等， 其中取代基为 Cl〜4的垸基、 Cl〜4的垸氧基、 氰基、 羟 基、 巯基、 氨基或卤素。
术语 "垸基"用于表示饱和烃基， Cl〜10的垸基是指含有 1〜10个碳原子的饱和烃 基， Cl〜4的垸基是指含有 1〜10个碳原子的饱和烃基。
术语"环垸基 "指非芳族碳环基，包括环化的垸基。环垸基可以包括二环或多环系统。 环垸基的例子包括环丙基， 环丁基， 环戊基， 环己基， 环庚基， C3〜6的环垸基是指含有 1〜10个碳原子的环垸基。
术语"苄基"是指苯甲基， 取代的苄基是指在苄基的苯环上至少一个氢原子被非氢部 分取代， 苄基的取代基可以是卤素， -CN， -OH, -SH， -NH2, 1-6个碳的直链或支链垸基， 1-6个碳的取代的直链或支链垸基。
术语"杂环垸基"是指非芳族杂碳环基， 包括环化的垸基， 其中一个或多个成环碳原 子被杂原子例如 0， N或 S原子取代。 杂环垸基优选具有 3， 4， 5， 6或 7个成环原子。 术语"杂环基 "是指含有杂原子 0、 N或 S的环状基团， 如呋喃、 噻吩、 吡咯、 噻睡、 咪唑、 喹啉、 吲哚、 苯并呋喃、 嘌吟、 吖啶等。
Figure imgf000006_0001
"垸氧基"是指 -0-垸基基团， 其碳原子数一般为 1〜10个。 垸氧基的例子包括甲氧 基， 乙氧基， 丙氧基 （如， n-丙氧基和异丙氧基）， t-丁氧基等。
"芳基"是指芳族碳环基， 包括单环或多环芳烃例如苯基， 萘基， 蒽基， 菲基等。 "芳氧基"是指 -0-芳基， 而芳基的概念如上所述， 芳氧基最优选的例子是苯氧基。 "卤素"包括氟， 氯， 溴和碘。
本发明化合物中的 R2基团可以为消旋体， 也可以具有光学活性， 本发明中的 R2基团 优选为 R构型。
本发明化合物可以用以制备抗肿瘤药物， 其
I
Figure imgf000006_0002
III-6 III-8 III
Figure imgf000006_0003
该反应式中各基团 Pg， Ri , R2， Zl 7 Z2的定义如前所述， 式 （II-1) 在 S0C12作用下 与甲醇反应得到式（11-2)，式（II-2)在肽缩合剂下与 Pg缩合生成式（II-3)或者式（II-2) 与酰氯的 Pg 反应生成式 （11-3)， 式 （II-3) 皂化再酸化生成 （II) ; 而另一边， （III-6) 与金属试剂 R2MgX 反应， 再在室温下被无水 ∑!^12催化成式 （111-7)， 式 （III-7) 与 MN(SiMe3)2反应生成式（111-8)， 式（III-8)在酸性条件下脱保护形成式（III) ; 最后（II) 和 （III) 缩合成式 （1)。 式 （I) 还可脱除与 B连接的基团从而得到硼酸产物。
Figure imgf000007_0001
Pg, Ri , R2， Zl 7 Z2的定义如上所述。
化合物 （II) 的制备方法包括如下的步骤：
1 ) 式（II-1 )结构的氨基酸在 SOCl2作用下与甲醇反应得到式（II-2)结构的化合物；
2) 式 （II-3) 结构的化合物可以通过以下两种途径来制备： a、 式 （II-2) 结构的化 合物在肽缩合剂存在下， 与 Pg 发生缩合反应， 生成式 （II-3) 的化合物； b、 Pg首先与 SOCl2发生反应生成酰氯， 然后再与式（II-2)结构的化合物反应生成式（II-3) 结构的化 合物。
3 ) 式 （II-3) 盐， 然后在酸性条 件下生成化合物 （11)。
H2N^^^OCH3
O O O II-l II-2 II-3 其中， ？§和1^的定义如上所述。
上述反应中常见的肽缩合剂为 N, N-二环己基-碳二亚胺 （缩写为 DCC)， 1- ( 3-二甲 氨基丙基） -3-乙基碳二亚胺盐酸盐（缩写为 EDGHC1)， 1-羟基苯并三氮唑（缩写为 HOBt) 或氯甲酸异丁酯。
化合物（III) 的制备方法包括如下的步骤（以 B、 ¾和∑2—起构成硼酸 -a-蒎垸二醇 酯为例）：
1 ) 式 （III-1 ) 所示的 a-蒎烯在氧化剂 0804的作用下生成手性的蒎垸二醇 （III-2) ;
2) 干燥的 CH2C12在 -11CTC下与正丁基锂发生反应， 生成式（III-3)所示的有机金属 中间体；
3 ) 式（III-3)结构的化合物与式（III-4)所示的硼酸酯在 -11CTC下反应，生成式（III-5) 4) 式 （III-5) 结构的化合物与式 （III-2) 结构的手性蒎垸二醇进行酯交换， 生成式 (III-6) 所示的硼酸酯；
5) 式 （III-6) 结构的化合物与金属试剂 R2MgX在 -78°C下反应， 然后在室温下被无 水 ZnCl2催化生成式 （III-7) 所示的化合物；
6) 式 （III-7) 结构的化合物与 MN(SiMe3)2反应生成双 （三甲基硅） 保护的胺基硼 酸酯如式 （III-8) 所示的化合物；
7) 式（III-8)所示的化合物在酸性条件下将保护基双（三甲基硅）脱除生成如式（III) 所示的硼酸酯的氨基盐酸盐类化合物。
Figure imgf000008_0001
111-8
Figure imgf000008_0002
b
J
Y
III
其中， 的定义同前所述， R5是指 1 到 4个碳原子的直链、 支链或取代垸烃， X 代表卤素如 F、 Cl、 Br、 I， M代表碱金属如 Li、 Na、 K等。
最后将化合物 （II) 和 （III) 在一定的缩合剂存在下反应生成 （1)。 所用缩合剂为 TBTU (0-苯并三氮唑 -Ν, Ν, Ν', Ν，-四甲脲四氟硼酸酯）， 1- (3-二甲氨基丙基） -3-乙基碳 二亚胺盐酸盐 （缩写为 EDOHCl)， 1-羟基苯并三氮唑 （缩写为 HOBt) 或氯甲酸异丁酯。 式（I)所示的硼酸酯化合物可以脱去酯基生成硼酸，即脱去 ¾和 Z2基团生成式（IV ) 化合物， 反应方
Figure imgf000009_0001
I IV
脱除酯基的方法有两种：一是在高碘酸钠的作用下，二醇发生断裂，生成硼酸的钠盐， 将体系 pH值调为酸性， 得到硼酸； 二是硼酸酯与空间位阻较大的硼酸 （如异丁基硼酸、 苯基硼酸） 发生酯交换得到目的产物硼酸， 经过一些分离手段得到产物。
本发明的发明人通过实验证实，本发明化合物具有良好的抑制蛋白酶体的活性和抗肿 瘤活性，部分化合物在纳摩尔水平下表现出较好的蛋白酶体抑制活性和抗肿瘤作用，具有 制备蛋白酶体抑制剂或抗肿瘤药物方面的应用价值。同时，本发明所设计的化合物制备方 法产率较高， 工艺简单， 可适合于工业化生产。
第一部分 化合物的合成
本发明的化合物的制备可按照如下过程实施：
一、 化合物（II) 的制备
Η Η
H2 ^^^OH HCI - H2N^^^OCH3 p^ ^^^OCHa pg N^^^OH
〇 〇 R! O Ri O
Π-1 H-2 II-3 II
1、 β-氨基酸甲酯盐酸盐 II-2的制备：
将不带任何保护基的 β-氨基酸 II-1 溶解于无水甲醇中， -5 °C下向反应体系中滴加 SOCl2， 缓慢升至室温后反应 1小时， 再回流 1小时。蒸除溶剂，得到的固体经重结晶（甲 醇 /乙醚） 得到 β-氨基酸甲酯的盐酸盐 （式 11-2)。
2、 氨基保护的 β-氨基酸甲酯 ΙΙ-3的制备：
方法 a:
将氨基保护剂 Pg和 1中所制备的 β-氨基酸甲酯 ΙΙ-2溶于 THF中， 0°C下加入 Ν-甲基 吗啉及合适的肽缩合反应试剂 （DCC + HOBt)。 缓慢升至室温， 继续反应一定时间， 直 至 TLC显示反应完成。 过滤除去不溶性固体， 蒸干滤液， 向得到的粘稠液体中加入适量
- 1 - 的乙酸乙酯溶解， 有机相分别用碱洗 （5%碳酸氢钠）， 酸洗 （10%柠檬酸）， 碱洗 （5%碳 酸氢钠） 及饱和食盐水洗。 干燥剂干燥 （无水硫酸钠或无水硫酸镁）。 滤除干燥剂， 减压 蒸干溶剂， 得到氨基保护的 β-氨基酸甲酯 Π-3的粗产品。 粗产品未经纯化， 直接用于下 步皂化反应。
方法 b:
在 0°C下， 将氨基保护剂 Pg溶解于 S0C12中， 加入催化量的干燥 DMF， 室温下反应 20分钟， 升温到 50°C反应一定时间， 蒸除未反应的 SOCl2。 得到保护剂 Pg的酰氯。 用适 量的干燥甲苯溶解， 干燥放置备用。
将 β-氨基酸甲酯 II-2溶于有机溶剂 （甲苯） 中， 加入过量的 Ν-甲基吗啉， 在 0°C下 滴加上述制备的 Pg的酰氯的甲苯溶液。 在 0°C下反应一定时间， 然后缓慢升至室温反应 一定时间， 直至 TLC显示反应完成。 减压蒸除溶剂， 得到的固体用适量有机溶剂 （乙酸 乙酯） 溶解， 分别用碱洗 （5%碳酸氢钠）， 酸洗 （10%柠檬酸）， 碱洗 （5%碳酸氢钠） 及 饱和食盐水洗。 干燥剂干燥 （无水硫酸钠和无水硫酸镁）。 滤除干燥剂， 减压蒸干溶剂， 得到氨基保护的 β-氨基酸甲酯 II-3的粗产品。 粗产品未经纯化， 直接用于下步皂化反应。
3、 化合物 II的制备：
将上述制备好的 ΙΙ-3的粗产品溶解于有机溶剂（丙酮或甲醇） 中， 在 0°C下加入无机 碱的水溶液（2N NaOH)， 使体系 pH值保持在 11~13之间， 直至 TLC显示反应完成。 减 压蒸除有机溶剂， 在 0°C下滴加无机酸的水溶液 （5N HC1) 直至体系 pH值为 1~3之间。 用有机溶剂 （乙酸乙酯） 萃取， 有机相用干燥剂干燥 （无水硫酸钠或无水硫酸镁）。 滤除 干燥剂， 减压蒸干溶剂， 得到较纯产物 II。
二、 化合物（III) 的制备
1、 化合物 III-a的制备：
Figure imgf000010_0001
Figure imgf000011_0001
III-7a III-8a ΠΙ-a
,OR5
ΠΙ-4： R50-B
OR5
1 ) III-2a的制备：
将 Με3ΝΟ·2Η20溶解于水中， 向反应体系中加入 III-la、 叔丁醇、 少量吡啶及催化量 的四氧化锇。 一定温度下 （10CTC ) 加热回流 24小时， TLC检测反应完毕。 自然降至室 温， 加入适量还原剂 （NaHS03) 及固体食盐。 分液， 水层用有机溶剂 （乙醚） 提取， 合 并有机相， 有机相用干燥剂干燥 （无水硫酸钠和无水硫酸镁）。 滤除干燥剂， 减压蒸干溶 剂， 得到粘稠液体。 减压蒸馏得到产品 III-2a。
2) 化合物 III-3的制备：
在 -11CTC下， 向惰性气体（如？^或八！"气）保护的无水二氯甲垸和无水四氢呋喃体系 中慢慢滴加正丁基锂溶液， 滴加完毕后保持 -11CTC继续反应 1小时。 得到化合物 III-3的 溶液。 直接用于下步反应。
3) 化合物 III-5的制备：
在 -11CTC下， 向 2) 中制备好的化合物 III-3的反应体系中慢慢滴加式 III-4所示的硼 酸酯， 保持 -11CTC搅拌 1小时后加入无机酸溶液（5N HC1)淬灭反应， 自然升至室温。 分 液， 水层用有机溶剂（乙醚）萃取， 合并有机相， 有机相用干燥剂干燥（无水硫酸钠或无 水硫酸镁）。 滤除干燥剂， 减压蒸干溶剂得白色粘稠状固体化合物 111-5。 产品未经纯化直 接用于下步反应。
4) 化合物 III-6a的制备：
将化合物 III-5用有机溶剂 （无水乙醚或二氯甲垸） 溶解， 加入制备好的 III-2a， 室 温搅拌反应 18小时后， TLC显示反应完成。 分液， 水相用有机溶剂 （乙酸乙酯） 提取， 合并有机相， 有机相用干燥剂干燥 （无水硫酸钠和无水硫酸镁）。 滤除干燥剂， 减压蒸干 溶剂， 经柱层析分离得化合物 III-6a。
5) 格式试剂 R2MgX的制备：
在严格干燥过的反应瓶内加入镁屑、 无水有机溶剂 （无水 THF或无水乙醚） 及一小 粒碘片。 室温下向反应体系中滴加卤代烃 R2X和无水有机溶剂 （无水 THF或无水乙醚） 的混合溶液。 用水浴将反应体系加热至微沸状态， 待大部分镁反应完后， 加热回流体系 30分钟， 使剩余的镁全部反应完全。 使反应体系慢慢冷却， 备用。
6) 化合物 III-7a的制备：
在惰性气体（如 N2或 Ar气）保护下，用无水有机溶剂（无水 THF或乙醚）溶解 III-6a， 反应体系降温至一 78°C。向其中慢慢滴加 5)中制备好的 R2MgX格式试剂的有机溶剂（无 水 THF或乙醚）溶液。 滴加完毕后， 加入干燥好的 ZnCl2粉末。 反应体系自然升至室温， 室温下继续搅拌 18h后 TLC显示反应完成。 过滤除去固体， 浓缩后柱层析分离得化合物 III-7a。
7) 化合物 III-8a的制备：
用无水有机溶剂 （无水 THF) 溶解 6) 中制备好的 III-7a， 反应体系用惰性气体 （如 N2或 Ar气） 保护并降温至一 78°C， 然后慢慢滴加 MN (SiMe3) 2溶液。 滴加完毕后， 自 然升至室温， 室温下继续搅拌。 TLC检测显示， 20h后反应完毕。 减压蒸除溶剂， 得到粘 稠液体。 加入正己垸溶解， 过滤除去不溶物， 得到 III-8a的正己垸溶液。 备用。
8) 化合物 III-a的制备：
将上述制备好的 III-8a的正己垸溶液用惰性气体 （如？^或 Ar气） 保护并降温至一 78°C。 向反应体系中加入溶解氯化氢气体的有机溶剂（如二氧六环、 乙醚）溶液， 然后自 然升至室温， 析出固体。 过滤， 滤饼用有机溶剂 （无水乙醚） 洗涤， 得到化合物 III-a。 产品未经纯化， 直接用于下步反应。
2、 化合物 III-b的制备：
Figure imgf000012_0001
III-lb III-2b
Figure imgf000012_0002
III-7b III-b
III-4：
Figure imgf000012_0003
1 ) III-2b的制备: 将 Με3ΝΟ·2Η20溶解于水中， 向反应体系中加入 III-lb、 叔丁醇、 少量吡啶及催化 量的四氧化锇。 一定温度下 （10CTC ) 加热回流 48小时， TLC检测反应完毕。 自然降至 室温， 加入适量还原剂 （NaHS03) 及固体食盐。 减压蒸馏除去有机溶剂， 向残余的液体 和固体的混合物中加入有机溶剂 （乙醚和乙酸乙酯）， 分液， 水层用有机溶剂 （乙醚和乙 酸乙酯） 提取， 合并有机相， 有机相用干燥剂干燥 （无水硫酸钠或无水硫酸镁）。 滤除干 燥剂， 减压蒸干溶剂， 得到粘稠液体。 高真空度下减压蒸馏得产品 III-2b。
2) 化合物 III-3的制备：
在 -11CTC下， 向惰性气体（如？^或八！"气）保护的无水二氯甲垸和无水四氢呋喃体系 中慢慢滴加正丁基锂溶液， 滴加完毕后保持 -11CTC继续反应 1小时。 得到化合物 III-3的 溶液。 直接用于下步反应。
3) 化合物 III-5的制备：
在 -11CTC下， 向 2) 中制备好的化合物 III-3的反应体系中慢慢滴加式 III-4所示的 硼酸酯， 保持 -11CTC搅拌 1小时后加入无机酸溶液 （5N HC1) 淬灭反应， 自然升至室温。 分液， 水层用有机溶剂（乙醚）萃取， 合并有机相， 有机相用干燥剂干燥（无水硫酸钠和 无水硫酸镁）。 滤除干燥剂， 减压蒸干溶剂得白色粘稠状固体化合物 111-5。 产品未经纯化 直接用于下步反应。
4) 化合物 III-6b的制备：
将化合物 III-5用有机溶剂 （无水乙醚或二氯甲垸） 溶解， 加入制备好的 III-2b， 室 温搅拌反应 24小时后， TLC显示反应完成。 减压蒸除有机溶剂， 向剩余粘稠液体中加入 有机萃取剂 （乙酸乙酯或乙醚）， 分液， 水相用有机溶剂 （乙酸乙酯或乙醚） 提取， 合并 有机相， 有机相用干燥剂干燥（无水硫酸钠或无水硫酸镁）。滤除干燥剂， 减压蒸干溶剂， 经柱层析分离得化合物 III-6b。
5) 格式试剂 ^¾ 的制备：
在严格干燥过的反应瓶内加入镁屑、 无水有机溶剂 （无水 THF或无水乙醚） 及一小 粒碘片。 室温下向反应体系中滴加卤代烃 R2X和无水有机溶剂 （无水 THF或无水乙醚） 的混合溶液。用水浴将反应体系加热。 使溶液呈微沸状态， 待大部分镁反应完后， 加热回 流体系 30分钟， 使剩余的镁全部反应完全。 使反应体系慢慢冷却， 备用。
6) 化合物 III-7b的制备：
在惰性气体（如 N2或 Ar气）保护下，用无水有机溶剂（无水 THF或乙醚）溶解 III-6b， 反应体系降温至一 78°C。向其中慢慢滴加 5)中制备好的 R2MgX格式试剂的有机溶剂（无 水 THF或乙醚）溶液。 滴加完毕后， 加入干燥好的 ZnCl2粉末。 反应体系自然升至室温， 室温下继续搅拌 24h后 TLC显示反应完成。 过滤除去固体， 浓缩后柱层析分离得化合物 III-7b。
7) 化合物 III-8b的制备：
用无水有机溶剂 （无水 THF) 溶解 6) 中制备好的 III-7b， 反应体系用惰性气体 （如 ^或八！"气） 保护并降温至一 78°C， 然后慢慢滴加 MN (SiMe3) 2溶液。 滴加完毕后， 自 然升至室温， 室温下继续搅拌。 TLC检测显示， 24h后反应完毕。 减压蒸除溶剂， 得到的 粘稠液体。 加入大量干燥的石油醚溶解， 过滤除去不溶物， 得到 III-8b 的石油醚溶液， 备用。
8) 化合物 III-b的制备：
将上述制备好的 III-8b的石油醚溶液用惰性气体 （如 N2或 Ar气） 保护并降温至一 78°C。 向反应体系中加入溶解氯化氢气体的有机溶剂（如二氧六环、 乙醚）溶液， 然后自 然升至室温， 析出固体。 过滤， 滤饼用干燥的有机溶剂 （无水乙醚） 洗涤， 得到化合物 III-b。 产品未经纯化， 直接用于下步反应。
Figure imgf000014_0001
II la
Figure imgf000014_0002
II Ill b lb
1、 硼酸酯 （I) 的制备：
将 II及 III溶解在有机溶剂 （如 THF、 CH2C12) 中， 冷却到 -5°C， 加入 N-甲基吗啉 及缩合剂（TBTU或 EDOHCl + HOBt或氯甲酸异丁酯）， 反应 2小时后， 升至室温反应 1 小时。 过滤除去不溶性固体， 减压蒸干溶剂。 得到的固体用有机溶剂 （乙酸乙酯） 溶解， 有机相分别用碱洗（5%碳酸氢钠）， 酸洗（0.1N盐酸）， 碱洗（5%碳酸氢钠）及饱和食盐 水洗。 有机相用干燥剂干燥 （无水硫酸钠和无水硫酸镁）。 滤除干燥剂， 减压蒸干溶剂得 玻璃状固体化合物硼酸酯 I。
2、 硼酸 （IV) 的制备：
Figure imgf000015_0001
lb IVb 方法 a: 酯交换法
用有机溶剂（如乙醚和 CH2C12)溶解 1中制备的硼酸酯 I， 加入水及异丁基硼酸。 室 温搅拌反应 4小时后 TLC显示反应完成。 有机相用水提取 3遍， 合并水相， 减压蒸发至 干。 得到的粘稠固体用少量乙醚洗涤， 得到胶状固体化合物硼酸 IV。
方法 b: 氧化断裂法
用有机溶剂（丙酮或甲醇）溶解 1中制备的硼酸酯 I，然后加入醋酸铵水溶液及 NaI04。 室温下搅拌 24小时后， TLC显示反应完成。 减压蒸除有机溶剂， 水相用无机酸 （盐酸） 调节 pH值为 3， 用有机溶剂 （乙酸乙酯或 CH2C12) 萃取， 合并有机相， 有机相用干燥剂 干燥 （无水硫酸钠和无水硫酸镁）。 滤除干燥剂， 减压蒸干溶剂得泡沫状固体化合物硼酸
IV 以下以具体化合物的合成来描述本发明的化合物制备过程：
一、 式（II) 中化合物的制备：
Figure imgf000015_0002
Figure imgf000016_0001
1、 N-(S)-1,2,3,4-四氢 -1-萘甲酰基 苯丙氨酸（3aA) 的制备
(1) 苯丙氨酸甲酯盐酸盐（la) 的制备
Figure imgf000016_0002
在 lOOmL反应瓶中加入 25mL无水甲醇， 冰盐浴冷却到 -10°C以下， 搅拌下缓慢 滴加 S0C12 (7mL， 96mmol)， 然后于 -10°C以下反应 10min， 再加入 β-苯丙氨酸 （1.65g， lOmmol) , 低温反应 40 min， 撤去冰盐浴， 于室温反应 48h， 减压浓缩， 再加入 15 mL甲 醇， 反复减压浓缩两次。 加入 50 mL乙醚， 放置， 析出针状结晶， 过滤干燥， 粗产品再 用甲醇一乙醚重结晶，得白色晶体 β-苯丙氨酸甲酯盐酸盐 2.0g，收率 93%， [a]D 25 = +37.2° (c= l, CH3CH2OH), mp: 155-158°C。
本发明中所用到的其它 β氨基酸甲酯的盐酸盐可以采用上述步骤制备， 化合物 lb: 按合成化合物 la的方法采用 β-4-甲基苯基丙氨酸合成； 化合物 lc: 按合成化合物 la的 方法采用 β-4-氯苯基丙氨酸合成； 化合物 Id: 按合成化合物 la的方法采用 β-4-甲氧基苯 基丙氨酸合成； 化合物 le: 按合成化合物 la的方法采用 β-3-甲基苯基丙氨酸合成； 化合 物 If: 按合成化合物 la的方法采用 β-3-氟苯基丙氨酸合成； 化合物 lg: 按合成化合物 la 的方法采用 β-3-氯苯基丙氨酸合成； 化合物 lh: 按合成化合物 la的方法采用 β-3-甲氧基 苯基丙氨酸合成； 化合物 li: 按合成化合物 la的方法采用 β-3-硝基苯基丙氨酸合成； 化 合物 lj : 按合成化合物 la的方法采用 β-2-甲基苯基丙氨酸合成； 化合物 lk: 按合成化合 物 la的方法采用 β-2-氟苯基丙氨酸合成； 化合物 11: 按合成化合物 la的方法采用 β-2- 氯苯基丙氨酸合成；化合物 lm:按合成化合物 la的方法采用 β-2-甲氧基苯基丙氨酸合成。 合成的具体化合物及其性质如下表。
Figure imgf000017_0001
lk 硝基苯基丙氨酸甲酯盐酸盐
11 氟苯基丙氨酸甲酯盐酸盐
lm 氯苯基丙氨酸甲酯盐酸盐
In 甲基苯基丙氨酸甲酯盐酸盐
lo 甲氧基苯基丙氨酸甲酯盐酸盐
ip 硝基苯基丙氨酸甲酯盐酸盐
Figure imgf000018_0001
(2) N-苯甲酰基 苯丙氨
Figure imgf000018_0002
方法 a: DCC缩合法
将化合物 la ( 1.12g, 5.2mmol)溶于 20mL THF中， 用 N-甲基吗啉 ( NMM) ( 0.7mL, 6.2mmol) 中和， 于冰浴下冷却备用。 在另一反应瓶中加入苯甲酸 （0.64g， 5.2mmol) , 用 THF 20mL溶解，冰水浴冷却，于 0°C加入二环己基碳二亚胺（DCC) ( 1.07g， 5.2mmol) , HOBt ( 0.82g, 6.2mmol) , 于 0°C反应 40min， 然后加入已制备并冷却好的中和完毕的 la 的 THF溶液。 TLC检测反应， 4h后反应完毕，过滤除去不溶物 N, Ν'-二环己基脲（DCU)， 滤液加入乙酸乙酯 150mL，分别用 5%NaHC03溶液（30mL)、 10%的柠檬酸溶液（30mL)、 5%NaHC03溶液（30mL)和饱和食盐水溶液洗涤（2 X 20mL)。 乙酸乙酯层用无水 Na2S04 干燥， 过滤， 减压蒸除溶剂， 得化合物 1.44g， 产物为白色固体， 收率 98%。 产品未经纯 化， 直接用于下步反应。
方法 b: 酰氯法
在室温下， 向苯甲酸 （0.64g， 5.2mmol) 中加入 S0C12 ( 3.8ml， 52mmol)， 然后加 入催化量的干燥 DMF。 反应 20分钟， 再升温回流反应 1小时， 停止反应。 蒸除未反应的 S0C12。 得到苯甲酰氯。 将之溶解于 10ml干燥的 THF中， 备用。
将化合物 la ( 1.12g， 5.2mmol)溶于 20mL THF中，加入 N-甲基吗啉（NMM) ( 0.7mL, 6.2mmol)， 在 0°C下滴加上述制备好的苯甲酰氯的 THF溶液。在 0°C下反应 2小时， 然后 缓慢升至室温反应 1小时， TLC显示反应完成。 减压蒸除溶剂， 得到的固体用 30ml乙酸 乙酯溶解， 分别用 5%碳酸氢钠 （30mL)、 10%柠檬酸（30mL)、 5%碳酸氢钠 （30mL)及 饱和食盐水洗（2 X 20mL)。 有机相用无水 Na2S04干燥。 滤除干燥剂， 减压蒸干溶剂， 得 到粘稠的白色固体 1.42g， 收率 96.9%。 产品未经纯化， 直接用于下步皂化反应。
鉴于 DCC缩合法得到的产品不但产率高， 而且色泽较好， 所以本发明中所用到的其 它氨基保护的氨基酸甲酯可以采用实施例 （2) 中所述的 DCC缩合法制备， 所有甲酯均 未纯化， 直接用于下步反应。
化合物 2bA: 按 DCC缩合法利用苯甲酸和 lb合成； 2cA: 按 DCC缩合法利用苯甲 酸和 lc合成； 2dA: 按 DCC缩合法利用苯甲酸和 Id合成； 2eA: 按 DCC缩合法利用苯 甲酸和 le合成； 2fA: 按 DCC缩合法利用苯甲酸和 If合成； 2gA: 按 DCC缩合法利用 苯甲酸和 lg合成； 2hA: 按 DCC缩合法利用苯甲酸和 lh合成； 2iA: 按 DCC缩合法利 用苯甲酸和 li合成； 2jA: 按 DCC缩合法利用苯甲酸和 lj合成； 2kA: 按 DCC缩合法利 用苯甲酸和 lk合成； 21A: 按 DCC缩合法利用苯甲酸和 11合成； 2mA: 按 DCC缩合法 利用苯甲酸和 lm合成； 2nA: 按 DCC缩合法利用苯甲酸和 In合成； 2oA: 按 DCC缩合 法利用苯甲酸和 lo合成； 2pA: 按 DCC缩合法利用苯甲酸和 lp合成； 2gB: 按 DCC缩 合法利用 Boc酸和 lg合成； 2hB: 按 DCC缩合法利用 Boc酸和 lh合成； 2jB: 按 DCC 缩合法利用 Boc酸和 lj合成； 2gC: 按 DCC缩合法利用乙酸和 lg合成； 2hC: 按 DCC 缩合法利用乙酸和 lh合成； 2jC: 按 DCC缩合法利用乙酸和 lj合成； 2bD: 按 DCC缩 合法利用烟酸（吡啶 -3-甲酸）和 lb合成； 2cD: 按 DCC缩合法利用烟酸和 lc合成； 2dD: 按 DCC缩合法利用烟酸和 Id合成； 2eD: 按 DCC缩合法利用烟酸和 le合成； 2fD: 按 DCC缩合法利用烟酸和 If合成； 2gD:按 DCC缩合法利用烟酸和 lg合成； 2hD:按 DCC 缩合法利用烟酸和 lh合成； 2iD: 按 DCC缩合法利用烟酸和 li合成； 2jD: 按 DCC缩合 法利用烟酸和 lj合成； 2kD: 按 DCC缩合法利用烟酸和 lk合成； 21D: 按 DCC缩合法 利用烟酸和 11合成； 2pD: 按 DCC缩合法利用烟酸和 lp合成； 2gE: 按 DCC缩合法利 用吡嗪甲酸和 lg合成； 2hE: 按 DCC缩合法利用吡嗪甲酸和 lh合成； 2jE: 按 DCC缩 合法利用吡嗪甲酸和 lj合成； 2gF:按 DCC缩合法利用 2-萘甲酸和 lg合成； 2hF:按 DCC 缩合法利用 2-萘甲酸和 lh合成； 2jF: 按 DCC缩合法利用 2-萘甲酸和 lj合成； 2gG: 按 DCC缩合法利用 W-1,2,3,4-四氢小萘甲酸和 lg合成； 2hG:按 DCC缩合法利用 ( -1,2,3,4- 四氢 -1-萘甲酸和 lh合成； 2jG: 按 DCC缩合法利用 W-1,2,3,4-四氢 -1-萘甲酸和 lj合成； 2mG: 按 DCC缩合法利用 W-1,2,3,4-四氢小萘甲酸和 lm合成； 2nG: 按 DCC缩合法利 用 W-1,2,3,4-四氢小萘甲酸和 In合成; 2oG: 按 DCC缩合法利用 W-1,2,3,4-四氢小萘甲 酸和 lo合成； 2aH:按 DCC缩合法利用 (r)-l,2,3,4-四氢小萘甲酸和 la合成； 2cH:按 DCC 缩合法利用 (r)-l,2,3,4-四氢 -1-萘甲酸和 lc合成； 2dH: 按 DCC缩合法利用 (r)-l,2,3,4-四氢 -1-萘甲酸和 Id合成; 2al: 按 DCC缩合法利用 1,2,3,4-四氢 -2-萘甲酸和 la合成； 2bl: 按 DCC缩合法利用 1,2,3,4-四氢 -2-萘甲酸和 lb合成； 2el: 按 DCC缩合法利用 1,2,3,4-四氢 -2-萘甲酸和 le合成； 2M: 按 DCC缩合法利用 1,2,3,4-四氢 -2-萘甲酸和 lh合成； 2jl: 按 DCC缩合法利用 1,2,3,4-四氢 -2-萘甲酸和 lj合成； 2aJ: 按 DCC缩合法利用 5,6,7,8-四氢 -1-萘甲酸和 la合成; 2c J： 按 DCC缩合法利用 5,6,7,8-四氢小萘甲酸和 lc合成； 2hJ: 按 DCC缩合法利用 5,6,7,8-四氢小萘甲酸和 lh合成； 2iJ: 按 DCC缩合法利用 5,6,7,8-四氢 -1-萘甲酸和 li合成； 2jJ: 按 DCC缩合法利用 5,6,7,8-四氢 -1-萘甲酸和 lj合成； 2kJ: 按 DCC缩合法利用 5,6,7,8-四氢小萘甲酸和 lk合成； 2oJ: 按 DCC缩合法利用 5,6,7,8-四氢 -1-萘甲酸和 lo合成。
合成的具体化合物及其性质如下表。
Figure imgf000020_0001
Figure imgf000021_0001
Figure imgf000022_0001
gB N-Boc基 氟苯基丙氨酸甲酯
hB N-Boc基 氯苯基丙氨酸甲酯
2jB N-Boc基^-3-甲氧基苯基丙氨酸甲酯
Figure imgf000023_0001
gC 。 N-乙酰基 -氟苯基丙氨酸甲酯 人^^ OCH3
H hC 。 N-乙酰基 - 3-氯苯基丙氨酸甲酯 人^^ OCH3
H jC N-乙酰基 - 3-甲氧基苯基丙氨酸甲酯
Figure imgf000023_0002
bD N-吡啶 -3-甲酰基 氟苯基丙氨酸甲酯
N 0 OCH3 cD N-吡啶 -3-甲酰基 氯苯基丙氨酸甲酯
Figure imgf000023_0003
Figure imgf000024_0001
N-吡啶 -3-甲酰基 硝基苯基丙氨酸甲酯
N-吡啶 -3-甲酰基 氯苯基丙氨酸甲酯
N-吡啶 -3-甲酰基 硝基苯基丙氨酸甲酯
N-吡嗪甲酰基 - 3-氟苯基丙氨酸甲酯
N-吡嗪甲酰基 - 3-氯苯基丙氨酸甲酯
N-吡嗪甲酰基 - 3-甲氧基苯基丙氨酸甲酯
N-2-萘甲酰基 - 3 -氟苯基丙氨酸甲酯 hF N-2-萘甲酰基 -氯苯基丙氨酸甲酯
1〉
z工 \/=
z工 z工 \/ \/==
¾F N-2-萘甲酰基 - 3-甲氧基苯基丙氨酸甲酯
/ P 〇
〇工
工工 gG N-( -l,2,3,4-四氢 -1-萘甲酰基 - 3-氟苯基丙氨酸甲酯 hG N-( -l,2,3,4-四氢 -1-萘甲酰基 - 3-氯苯基丙氨酸甲酯
2jG N-( -l,2,3,4-四氢 -1-萘甲酰基 - 3-甲氧基苯基丙氨酸甲酯 mG N-( -l,2,3,4-四氢 -1-萘甲酰基 氯苯基丙氨酸甲酯
Figure imgf000026_0001
nG N-( -l ,2,3,4-四氢 -1 -萘甲酰基 甲基苯基丙氨酸甲酯 oG N-( -l,2,3,4-四氢 -1-萘甲酰基 甲氧基苯基丙氨酸甲酯 z工 \/= 〇 〇
aH 〇〇 〇〇 LL _〇 N-(R)-1 ,2,3,4-四氢 -1 -萘甲酰基 苯丙氨酸甲酯 〇工
工工
cH N-(R)-1 ,2,3,4-四氢 - 1 -萘甲酰基 氯苯基丙氨酸甲酯 dH N-(R)-1 ,2,3,4-四氢 -1 -萘甲酰基 甲基苯基丙氨酸甲酯
Figure imgf000027_0001
。 。
al 9 N- 1 ,2,3,4-四氢 -2-萘甲酰基 苯丙氨酸甲酯 bl N- 1 ,2,3,4-四氢 -2-萘甲酰基 氟苯基丙氨酸甲酯 el N- 1 ,2,3,4-四氢 -2-萘甲酰基 甲氧基苯基丙氨酸甲酯
Figure imgf000028_0001
2kJ N-5,6,7,8-四氢 -1-萘甲酰基 硝基苯基丙氨酸甲酯
Figure imgf000029_0001
2oJ 。 N-5,6,7,8-四氢 -1-萘甲酰基 甲氧基苯基丙氨酸甲酯
(3) N-苯甲酰基 苯丙氨
Figure imgf000029_0002
将化合物 2aA ( l .Og, 3.53mmol) 用 10mL丙酮溶解， 冰水浴下慢慢滴加 2N NaOH 至 pH值为 12~13， 继续保持冰水浴中反应， TLC检测， 2h后反应完毕。 冰水浴下滴加盐 酸至 pH值为 2~3， 产生大量白色固体， 过滤产生的沉淀， 用水、 乙醚洗涤后真空干燥， 得白色产品 0.89g，收率 93.6%， mp: 198.6-199.8 °C。 1H NMR (DMSC 6， 500 MHz) S2 S (-CH2, q， Ji = 6.15 Hz, J2 = 9.53 Hz, 1H)， 2.90 (-CH2, q， = 6.73 Hz, J2 = 8.95 Hz, 1H)， 5.42-5.45 (-CH, m， 1H)， 7.23-7.25 (-Ph, m， 1H)， 7.32 (-Ph, t， = 7.84 Hz, 2H)， 7.40-7.42 (-Ph, m， 2H)， 7.45-7.48 (-Ph, m， 2H)， 7.51-7.62 (-Ph, m， 1H)， 7.84-7.86 (-Ph, m， 2H)， 8.86 (-CONH, d, / = 8.25 Hz, 1 H)， 12.15 (-COOH, br, 1 H)。 MS (ESI) : m/z 268.0 [M-H]―。
本发明中所用到的其它氨基保护的氨基酸可以采用实施例 (3)中所述的方法制备。
3bA^将 2bA采用实施例 (3)的方法合成； 3cA-. 2cA采用实施例 (3)的方法合成； 3dA: 将 2dA采用实施例 (3)的方法合成； 3eA: 将 2eA采用实施例 (3)的方法合成； 3fA: 将 2f A 采用实施例 (3)的方法合成； 3gA: 将 2gA采用实施例 (3)的方法合成； 3hA: 将 2hA采用实 施例 (3)的方法合成； 3iA: 2iA采用实施例 (3)的方法合成； 3jA: 2jA采用实施例 (3) 的方法合成； 3kA: 将一 2kA采用实施例 (3)的方法合成； 31A: 将 ^ΙΑ采用实施例 (3)的方法 合成； 3mA: 2mA采用实施例 (3)的方法合成； 3nA: 2nA采用实施例 (3)的方法合成； 3oA: 将一 2oA采用实施例 (3)的方法合成； 3pA: 将 pA采用实施例 (3)的方法合成； 3gB : 将 2gB采用实施例 (3)的方法合成； 3hB : 将 2hB采用实施例 (3)的方法合成； 3jB : 将 2jB 采用实施例 (3)的方法合成； 3gC: 2gC采用实施例 (3)的方法合成； 3hC: 2hC采用实 施例 (3)的方法合成； 3jC: 将 2jC采用实施例 (3)的方法合成； 3bD: 将 2bD采用实施例 (3) 的方法合成； 3cD: 将 2cD采用实施例 (3)的方法合成； 3dD: 将 2dD采用实施例 (3)的方法 合成； 3eD: 2eD采用实施例 (3)的方法合成； 3fD: 将 fD采用实施例 (3)的方法合成； 3gD: ^ 2gD采用实施例 (3)的方法合成； 3hD: 2hD采用实施例 (3)的方法合成； 3iD: 将 2iD采用实施例 (3)的方法合成； 3jD: 将 2jD采用实施例 (3)的方法合成； 3kD: 将 2kD 采用实施例 (3)的方法合成； 31D: 21D采用实施例 (3)的方法合成； 3pD: 2pD采用实 施例 (3)的方法合成； 3gE: 将 2gE采用实施例 (3)的方法合成； 3hE: 将 2hE采用实施例 (3) 的方法合成； 3jE:一将 2jE采用实施例 (3)的方法合成； 3gF^将 2gF采用实施例 (3)的方法合 成； 3hF^将 2hF采用实施例 (3)的方法合成； 3jF: 2jF采用实施例 (3)的方法合成； 3gG:
2gG采用实施例 (3)的方法合成； 3hG: 将一 2hG采用实施例 (3)的方法合成； 3jG: 将^ jG 采用实施例 (3)的方法合成； 3mG: 将 2mG采用实施例 (3)的方法合成； 3nG: 将 2nG采用 实施例 (3)的方法合成； 3oG: 将 oG采用实施例 (3)的方法合成； 3aH: 将^ aH采用实施例 (3)的方法合成； 3cH: 2cH采用实施例 (3)的方法合成； 3(1Η 将 2dH采用实施例 (3)的 方法合成； 3^1: 将 2al采用实施例 (3)的方法合成； 31^1: 将 2bl采用实施例 (3)的方法合成； 3el: 将 2el采用实施例 (3)的方法合成； 3M: 将 2M采用实施例 (3)的方法合成； 3jl: 将 2jl 采用实施例 (3)的方法合成； 3aJ:一将 2aJ采用实施例 (3)的方法合成； 3cL_将 2cJ采用实施 例 (3)的方法合成； 3hJ^ 将 2hJ采用实施例 (3)的方法合成； 3iL_将 2iJ采用实施例 (3)的方 法合成； 3j J：一将 2j J采用实施例 (3)的方法合成； 3kJ: 将 2kJ采用实施例 (3)的方法合成； 3oJ: 将 2oJ采用实施例 (3)的方法合成。
合成的具体化合物及其性质如下表。
Figure imgf000030_0001
Figure imgf000031_0001
Figure imgf000032_0001
Figure imgf000033_0001
Figure imgf000034_0001
Figure imgf000035_0001
Figure imgf000036_0001
Figure imgf000037_0001
Figure imgf000038_0001
Figure imgf000039_0001
Figure imgf000040_0001
二、 式（III) 中化合物的制备：
1、 化合物 ΙΙΙ-a的制备：
(1) (+)-α-蒎烷二醇（化 III-2a) 的制备
Figure imgf000040_0002
1a 2a
将 Me3NO2H20 ( 165.6g, 1.49mol) 用 216mL水溶解， 搅拌下依次加入 （+ ) (X-蒎 烯 lb ( 191.4g, 1.4mol)、 1L叔丁醇、 108mL吡啶和四氧化锇 （lg， 3.9mmol)。 然后通入 氮气， 10分钟后， 加热至 100°C回流。 TLC检测显示， 72小时反应完毕。 自然降至室温， 加入 NaHS03 (20g, 0.19mol) 搅拌 60分钟， 待溶液颜色变为淡黄色时， 再加入 60g的 NaCl, 再搅拌 10分钟后， 减压蒸除有机溶剂。 釜底残液用 3 X 200mL乙醚提取， 合并有 机相， 并用无水硫酸钠干燥。减压蒸除有机溶剂， 得到的红棕色液体高真空度下减压得白 色固体 230.1g， 收率 96.5%， [a]D 20 = +8.3° (c =6.5, 甲苯）， mp: 53-56 °C . 1H NMR (CDC13, 500 MHz) S0.94 (3H, s), 1.27 (3H, s), 1.31 (3H, s), 1.37 (IH, d, J = 5.4 Hz), 1.62-1.66 (IH, m), 1.91-1.93 (IH, m), 2.01 (IH, t, / = 5.8 Hz), 2.18-2.21 (IH, m), 2.44-2.48 (IH, m), 2.81-2.95 (2H, m)， 3.97-4.00 (2H, q, / = 5.0 Hz). 13C NMR (CDC13, 125 MHz) 24.15, 27.89, 28.08, 29.64, 38.18, 39.00, 40.60, 54.10, 69.27, 73.88.
(2)二氯亚甲基锂（化合物 III-3) 的制备
Figure imgf000040_0003
在 250mL三口瓶中加入无水二氯甲垸（4.26mL， 66mmol)和 120mL无水四氢呋喃， 通入氮气， 降温至一 110°C， 然后慢慢滴加正丁基锂的正己垸溶液 （25.2mL， 60mmol)， 滴加完毕后低温继续搅拌 1小时。 溶液直接用于下步反应。
(3)二氯亚甲基硼酸二甲酯（化合物 III-5-1) 的制备
Figure imgf000041_0001
在一 110°C下， 向上述制备好的化合物 III-3a的溶液中加入硼酸三甲酯 （7.5mL， 66mmol)， 继续低温搅拌 1小时后加入 5N HC1溶液 12mL， 自然升至室温。 反应液转入 分液漏斗， 分出有机相， 水层用乙醚提取 （2 X 10mL)， 合并有机相， 无水硫酸钠干燥。 蒸除溶剂得白色粘稠状固体 9.3g， 收率 99.4%。 产品未经纯化直接用于下步反应。
(4)二氯亚甲基硼酸二异丙酯（化合物 III-5-2) 的制备
Figure imgf000041_0002
在一 11CTC下， 向已制备好的化合物 III-3a的溶液中加入硼酸三异丙酯 （9.3mL， 40mmol)， 继续低温搅拌 2小时后加入 5N HC1溶液 10mL， 自然升至室温。 反应液转入 分液漏斗， 分出有机相， 水层用乙醚提取 （2 X 15mL)， 合并有机相， 无水硫酸钠干燥。 蒸除溶剂得白色粘稠状固体 8.73g， 收率 >100 %。 产品未经纯化直接用于下步反应。
(5)二氯亚甲基硼酸 -(+)-α-蒎烷二醇酯（化合物 III-6a) 的制备
Figure imgf000041_0003
方法 a: 从化合物 III-5-1出发
在 25mL瓶中加入化合物 II-2a (32.2g, 0.19mol)和化合物 III-5-1 (51.6g, 0.33mol)。 再加入 30mLTHF溶解， 室温下搅拌。 TLC检测， 20h后反应完毕。 柱层析分离（乙酸乙 酯：石油醚 = 1： 18)得无色液体 49.4g, 收率 98.9% o 1H NMR (CDC13, 500 MHz) S0.S5 (3H, s)， 1.21 (IH, d， / = 11.2 Hz), 1.31 (3H， s)， 1.46 (3H， s)， 1.93-1.97 (2H， m)， 2.13 (IH, t， / = 5.2 Hz), 2.27-2.30 (1H， m)， 2.38-2.39 (1H， m)， 4.47 (2H， dd, / = 8.8 Hz), 5.40 (1H， s)。 13C NMR (CDC13, 125MHz) 23.90， 26.19, 26.95, 28.19, 35.00, 38.32, 39.23, 51.17, 79.43, 88.03。
方法 b: 从化合物 III-5-2出发
在 60mL瓶中加入化合物 II-2a (2g， 0.012mol)和化合物 III-5-2 (6.36g, 0.03mmol)。 再加入 20mLTHF溶解， 室温下搅拌。 TLC检测， 48h后反应完毕。 柱层析分离（乙酸乙 酯：石油醚 = 1 : 15) 得无色液体 2.92g， 收率 92.7%。
(6) 2-甲基 -4-氯-丁基硼酸 -(+)-α-蒎烷二醇酯（化合物 III-7a)
Figure imgf000042_0001
于 250mL三口瓶中加入剪碎的镁条 （1.75 g， 72 mmol)、 70mL无水乙醚， 再加入一 小粒碘， 室温下滴加叔丁基溴（ 11.65 g， 85 mmol) 的无水乙醚溶液 40ml， 滴完后加热微 沸至镁条溶解完毕， 自然冷却得叔丁基格式试剂的无水乙醚溶液。 干燥放置备用。
将二氯甲基硼酸 -0C-蒎垸二醇酯 III-6a ( 15.78 g, 60 mmol) 用 100 mL无水四氢呋喃 溶解。通入干燥的氮气， 并降温至一 78°C， 然后慢慢滴加上述制备好的叔丁基格式试剂的 无水乙醚溶液， 滴加完毕后， 加入干燥好的 ZnCl2粉末（4.08g， 30mmol)。 自然升至室温， 继续室温下搅拌。 TLC检测， 18h后反应完毕。 过滤除去固体， 浓缩后柱层析分离（乙酸 乙酉旨：石油醚 = 1 : 200)得无色液体 15.26g, 收率 89.5% 1H NMR (CDC13, 500 MHz) S0.S5 (-CH3, s, 3H), 0.92 (-CH3, q, / = 6.6 Hz, 6H), 1.19 (-CH2, d, / = 11.0 Hz, IH), 1.30 (-CH3, s, 3H), 1.42 (-CH3, s, 3H), 1.60-1.66 (-CH2, m, IH), 1.78-1.80 (-CH2, m, IH), 1.88-1.94 (-CH2, -CH, m, 3H), 2.09 (-CH, t, / = 5.1 Hz, IH), 2.24-2.26 (-CH, m, IH), 2.34-2.37 (-CH2, m, IH), 3.51-3.55 (-CH, m， 1H)， 4.35-4.37 (-CH, m， IH). 13C NMR (CDC13, 125 MHz) 21.22， 21.27, 22.85, 23.94, 25.58, 25.64, 26.30, 27.02, 28.41, 35.28, 38.25, 39.40, 42.81, 51.26, 78.50, 86.63.
(7) 5-氯-戊基硼酸 -(+)-oc-蒎烷 -8a)
Figure imgf000042_0002
于 lOOmL三口瓶中加入剪碎的镁条（0.17 g， 7.2 mmol ) 20mL无水乙醚， 再加入一 小粒碘， 室温下滴加正丁基溴 （1.17 g， 8.5 mmol) 的乙醚溶液 10ml， 滴完后加热微沸至 镁条溶解完毕， 自然冷却得正丁基格式试剂的乙醚溶液。 干燥处放置备用。
将二氯亚甲基硼酸 -OC-蒎垸二醇酯 III-6a ( 1.58 g, 6 mmol) 用 20mL乙醚溶解， 室温 下搅拌。 通入氮气， 并降温至一 78°C， 然后慢慢滴加制好的正丁基格式试剂的乙醚溶液。 滴加完毕后， 加入干燥好的 ZnCl2粉末（0.41 g， 3 mmol)。 自然升至室温， 继续室温下搅 拌。 TLC检测， 18h后反应完毕。 过滤除去固体， 浓缩后柱层析分离 （乙酸乙酯:石油醚 = 1 : 250)得无色液体 1.44 g, 收率 84.5% 1H NMR (CDC13, 500 MHz) S0.S5 (-CH3, s, 3H), 0.91 (-CH3, t, / = 7.2 Hz, 3H)， 1.18 (-CH2, d, / = 11.0 Hz, 1H)， 1.30 (-CH3, s, 3H)， 1.31-1.41 (-CH2, m, 3H), 1.42 (-CH3, s, 3H), 1.48-1.51 (-CH2, m, 1H), 1.82-1.95 (-CH2, m, 4H), 2.09 (-CH, t, / = 5.2 Hz, 1H), 2.23-2.28 (-CH, m, 1H), 2.33-2.39 (-CH2, m, 1H), 3.44-3.48 (-CH, m， 1H), 4.36 (-CH, d, / = 8.8 Hz, 1H). 13C NMR (CDC13, 125 MHz) J 13.91， 22.19, 23.94, 26.34, 27.02, 28.45, 29.50, 33.91, 35.29, 38.22, 39.41, 51.24, 78.51, 86.65.
(8) 1-苯基 -2-氯-乙基硼酸 -(+) 物 III-9a)
Figure imgf000043_0001
于 lOOmL三口瓶中加入剪碎的镁条 （0.12 g， 5 mmol)、 20mL无水乙醚， 再加入一 小粒碘， 室温下滴加苄氯（0.63 g， 5 mmol) 的乙醚溶液 10ml， 滴完后加热微沸至镁条溶 解完毕， 自然冷却得苄氯的格式试剂的乙醚溶液。 干燥处放置备用。
将二氯亚甲基硼酸 -OC-蒎垸二醇酯 III-6a ( 1.31 g, 5 mmol) 用 20mL乙醚溶解， 室温 下搅拌。 通入氮气， 并降温至一 78°C， 然后慢慢滴加制好的苄氯的格式试剂的乙醚溶液。 滴加完毕后， 加入干燥好的 ZnCl2粉末（0.41 g， 3 mmol)。 自然升至室温， 继续室温下搅 拌。 TLC检测， 24h后反应完毕。 过滤除去固体， 浓缩后柱层析分离 （乙酸乙酯： 石油醚 = 1： 15)得无色液体 1.24g， 收率 77.8%。 1H NMR (CDC13, 500 MHz) S0.S3 (-CH3, s, 3H), 1.07 (-CH2, d, / = 11.0 Hz, 1H)， 1.28 (-CH3, s, 3H)， 1.37 (-CH3, s, 3H)， 1.84-1.90 (-CH2, m， 2H)， 2.05 (-CH, t， / = 4.8 Hz, 1H)， 2.15-2.17 (-CH, m， 1H)， 2.30-2.34 (-CH2, m， 1H)， 3.08-3.23 (-CH2, m, 2H), 3.64 (-CH, q, / = 8.6 Hz, 1H), 4.32 (-CH, q, / = 8.8 Hz, 1H), 7.21-7.30 (-Ph, m， 5H). 13C NMR (CDC13, 125 MHz) 23.92, 26.18, 26.99, 28.33, 29.68, 35.14, 38.21, 39.34, 40.42, 51.19, 78.54, 86.77, 126.71, 126.76, 128.34, 129.17, 129.23, 138.40.
(9) 1-对甲苯基 -2-氯-乙基硼 -(+)-oc-蒎烷二醇酯（化合物 Ill-lOa)
Figure imgf000043_0002
于 lOOmL三口瓶中加入剪碎的镁条 （0.48 g， 20 mmol ) 30mL无水乙醚， 再加入一 小粒碘， 室温下滴加对甲基苄氯 （2.81 g， 20 mmol) 的乙醚溶液 15ml， 滴完后加热微沸 至镁条溶解完毕， 自然冷却得对甲基苄氯的格式试剂的乙醚溶液。 干燥处放置备用。 将二氯亚甲基硼酸 -oc-蒎垸二醇酯 III-6a (5.26 g, 20 mmol) 用 30mL乙醚溶解， 室 温下搅拌。通入氮气， 并降温至一 78°C， 然后慢慢滴加制好的对甲基苄氯的格式试剂的乙 醚溶液。 滴加完毕后， 加入干燥好的 ZnCl2粉末 （0.55 g， 4 mmol)。 自然升至室温， 继续 室温下搅拌。 TLC检测， 24h后反应完毕。过滤除去固体， 浓缩后柱层析分离（乙酸乙酯： 石油醚 = 1： 15)得无色液体 5.33 g, 收率 80.3% 1H NMR (CDC13, 300 MHz) 0.83 (-CH3, s, 3H)， 1.09 (-CH2, d, / = 11.1 Hz, 1H)， 1.28 (-CH3, s, 3H)， 1.38 (-CH3, s, 3H)， 1.83-1.92 (-CH2, m， 2H)， 2.06 (-CH, t， / = 5.0 Hz, 1H)， 2.14-2.21 (-CH, m， 1H)， 2.29-2.37 (-CH3, -CH2, m， 4H)， 3.01-3.21 (-CH, m， 2H)， 3.58-3.66 (-CH, m， 1H)， 4.29-4.36 (-CH, m， 1H)， 7.08-7.16 (-Ph, m， 4H). 13C NMR (CDC13, 75 MHz) 21.02, 23.91, 26.10, 26.23, 27.00, 28.33, 35.15, 38.21, 39.35, 40.01, 51.21, 78.52, 86.71, 128.26, 128.96, 129.02, 129.08, 135.30, 136.21.
( 10) 1-对氟苯基 -2-氯-乙基硼 -(+)-oc-蒎烷二醇酯（化合物 Ill-lla)
Figure imgf000044_0001
于 lOOmL三口瓶中加入剪碎的镁条 （0.24 g， 10 mmol) 15mL无水乙醚， 再加入一 小粒碘， 室温下滴加对氟苄溴 （1.89 g， 10 mmol) 的乙醚溶液 10ml， 滴完后加热微沸至 镁条溶解完毕， 自然冷却得对氟苄溴的格式试剂的乙醚溶液。 干燥处放置备用。
将二氯亚甲基硼酸 -oc-蒎垸二醇酯 III-6a (2.62 g, 10 mmol) 用 20mL乙醚溶解， 室 温下搅拌。通入氮气， 并降温至一 78°C， 然后慢慢滴加制好的对氟苄溴的格式试剂的乙醚 溶液。 滴加完毕后， 加入干燥好的 ZnCl2粉末 （0.27 g， 2 mmol)。 自然升至室温， 继续室 温下搅拌。 TLC检测， 24h后反应完毕。 过滤除去固体， 浓缩后柱层析分离 （乙酸乙酯： 石油醚 = 1： 10)得无色液体 2.04g，收率 60.7%。 1H NMR (CDC13, 500 MHz) 0.82 (-CH3, s, 3H)， 1.00 (-CH2, d, / = 11.1 Hz, 1H)， 1.28 (-CH3, s, 3H)， 1.36 (-CH3, s, 3H)， 1.83-1.90 (-CH2, m, 2H)， 2.06 (-CH, t, J = 5.3 Hz, 1H)， 2.31-2.35 (-CH2, m, 1H)， 3.04-3.19 (-CH2, m, 2H), 3.58-3.63 (-CH, m， 1H)， 4.30-4.35 (-CH, m， 1H)， 6.95-6.99 (-Ph, m， 2H)， 7.22-7.26 (-Ph, m， 2H). 13C NMR (CDCI3, 125MHz) 23.95, 26.16, 26.99, 28.40, 35.19, 39.35, 39.65, 51.23, 71.49, 78.68, 86.92, 115.21, 130.79, 134.22, 162.90.
( 11 ) 1-间甲苯基 -2-氯-乙基硼酸 -(+)-oc-蒎烷二醇酯（化合物 III-12a)
Figure imgf000045_0001
于 lOOmL三口瓶中加入剪碎的镁条（0.7 g， 28.8 mmol)、 40mL无水乙醚， 再加入一 小粒碘， 室温下滴加 3-甲基苄溴 （4.44 g， 24 mmol) 的乙醚溶液 10ml， 滴完后加热微沸 至反应完毕， 自然冷却得 3-甲基苄溴的格式试剂的乙醚溶液。 干燥处放置备用。
将二氯亚甲基硼酸 -OC-蒎垸二醇酯 III-6a (5.26 g, 20 mmol) 用 50mL乙醚溶解， 室 温下搅拌。 通入氮气， 并降温至一 78°C， 然后慢慢滴加制好的 3-甲基苄溴的格式试剂的 乙醚溶液。 滴加完毕后， 加入干燥好的 ZnCl2粉末 （1.36 g， 10 mmol)。 自然升至室温， 继续室温下搅拌。 TLC检测， 24h后反应完毕。 过滤除去固体， 浓缩后柱层析分离（乙酸 乙酯：石油醚 = 1 : 50) 得无色液体 4.84g， 收率 72.7%。 1H NMR (CDC13, 500 MHz) 0.82 (-CH3, s, 3H), 1.07 (-CH2, d, / = 11.0 Hz, IH), 1.27 (-CH3, s, 3H), 1.34 (-CH3, s, 3H), 1.84-1.90 (-CH2, m， IH), 2.06 (-CH, t, / = 5.2 Hz, IH), 2.15-2.19 (-CH, m， IH), 2.31-2.36 (-CH3, -CH2, m， 5H)， 3.04-3.19 (-CH2, m， 2H)， 3.59-3.66 (-CH, m， 1H)， 4.30-4.35 (-CH, m， 1H)， 6.99-7.08 (-Ph, m， 4H). 13C NMR (CDC13, 125 MHz) 21.32， 23.89, 26.14, 26.97, 28.30, 35.11, 38.19, 39.34, 40.33, 43.00, 51.18, 78.52, 86.74, 126.22, 127.47, 128.25, 129.98, 137.88, 138.37.
(12) 1-间氟苯基 -2-氯-乙基硼 -(+)-oc-蒎烷二醇酯（化合物 III-13a)
Figure imgf000045_0002
于 lOOmL三口瓶中加入剪碎的镁条 （0.64 g， 26.6 mmol)、 30mL无水乙醚， 再加入 一小粒碘， 室温下滴加 3-氟苄溴 （4.2 g， 22.2 mmol) 的乙醚溶液 10ml， 滴完后加热微沸 至反应完毕， 自然冷却得 3-氟苄溴的格式试剂的乙醚溶液。 干燥处放置备用。
将二氯亚甲基硼酸 -OC-蒎垸二醇酯 III-6a (3.89 g， 14.8 mmol)用 40mL乙醚溶解， 室 温下搅拌。 通入氮气， 并降温至一 78°C， 然后慢慢滴加制好的 3-氟苄溴的格式试剂的乙 醚溶液。 滴加完毕后， 加入干燥好的 ZnCl2粉末 （1.0 g， 7.4 mmol)。 自然升至室温， 继 续室温下搅拌。 TLC检测， 24 h后反应完毕。 过滤除去固体， 浓缩后柱层析分离 （乙酸 乙酯：石油醚 = 1 : 50) 得无色液体 4.60 g， 收率 92.3%。 1H NMR (CDC13, 500 MHz) S0.S3 (-CH3, s, 3H)， 1.02 (-CH2, q, / = 11.1 Hz, 1H)， 1.28 (-CH3, s, 3H)， 1.36 (-CH3, s, 3H)， 1.84-1.91 (-CH2, m, 2H), 2.06 (-CH, t, / = 5.6 Hz, IH), 2.16-2.18 (-CH, m, IH), 2.32-2.36 (-CH2, m, IH), 3.07-3.22 (-CH2, m， 2H)， 3.60-3.65 (-CH, m， 1H)， 4.32-4.36 (-CH, m， 1H)， 6.90-6.94 (-Ph, m. 1H), 6.97-6.99 (-Ph, m， 1H)， 7.03-7.04 (-Ph, m， 1H)， 7.22-7.27 (-Ph, m， 1H). 13C NMR (CDC13. 125 MHz) 23.88， 26.16, 26.96, 35.10, 38.20, 39.34, 40.00, 42.37, 51.17, 78.63, 86.90, 113.56, 116.30, 124.90, 129.85, 141.03, 163.82.
(13) 1-邻甲苯基 -2-氯-乙基硼 -(+)-oc-蒎烷二醇酯（化合物 III-14a)
Figure imgf000046_0001
于 lOOmL三口瓶中加入剪碎的镁条（0.7 g， 28.8 mmol)、 40mL无水乙醚， 再加入一 小粒碘， 室温下滴加 2-甲基苄溴 （4.44 g， 24 mmol) 的乙醚溶液 10ml， 滴完后加热微沸 至反应完毕， 自然冷却得 2-甲基苄溴的格式试剂的乙醚溶液。 干燥处放置备用。
将二氯亚甲基硼酸 -OC-蒎垸二醇酯 III-6a (5.26 g , 20 mmol) 用 50mL乙醚溶解， 室 温下搅拌。 通入氮气， 并降温至一 78°C， 然后慢慢滴加制好的 2-甲基苄溴的格式试剂的 乙醚溶液。 滴加完毕后， 加入干燥好的 ZnCl2粉末 （1.36 g， 10 mmol)。 自然升至室温， 继续室温下搅拌。 TLC检测， 24h后反应完毕。 过滤除去固体， 浓缩后柱层析分离（乙酸 乙酯：石油醚 = 1 : 50) 得无色液体 4.04 g， 收率 60.7%。 1H NMR (CDC13, 500 MHz) S0.S2 (-CH3, s, 3H), 1.00 (-CH2, d, / = 11.1 Hz, 1H), 1.28 (-CH3, s, 3H), 1.38 (-CH3, s, 3H), 1.84-1.90 (-CH2, m， 1H)， 2.06 (-CH, t， / = 5.0 Hz, 1H)， 2.12-2.16 (-CH, m， 1H)， 2.30-2.33 (-CH2, m， 2H)， 3.13-3.22 (-CH2, m， 2H)， 3.63-3.66 (-CH, m， 1H), 4.29-4.31 (-CH, m， 1H), 7.11-7.14 (-Ph, m， 4H). 13C NMR (CDC13, 125 MHz) 19.18, 19.37, 23.88, 26.06, 26.95, 28.28, 35.10, 38.17, 39.28, 51.18, 78.52, 86.72, 125.85, 126.91, 129.79, 130.41, 136.51, 140.17.
(14) 1-邻氟苯基 -2-氯-乙基硼 -(+)-oc-蒎烷二醇酯（化合物 III-15a)
Figure imgf000046_0002
于 lOOmL三口瓶中加入剪碎的镁条 （0.76 g， 31.7 mmol)、 35mL无水乙醚， 再加入 一小粒碘， 室温下滴加 2-氟苄溴 （5.0 g， 26.5 mmol) 的乙醚溶液 10ml， 滴完后加热微沸 至反应完毕， 自然冷却得 2-氟苄溴的格式试剂的乙醚溶液。 干燥处放置备用。
将二氯亚甲基硼酸 -OC-蒎垸二醇酯 III-6a (4.5 g, 17.6 mmol) 用 40mL乙醚溶解， 室 温下搅拌。 通入氮气， 并降温至一 78°C， 然后慢慢滴加制好的 2-氟苄溴的格式试剂的乙 醚溶液。 滴加完毕后， 加入干燥好的 ZnCl2粉末 （1.2 g， 8.8 mmol)。 自然升至室温， 继 续室温下搅拌。 TLC检测， 24h后反应完毕。 过滤除去固体， 浓缩后柱层析分离（乙酸乙 酯：石油醚 = 1 : 50)得无色液体 4.24 g,收率 71.6%。 1H NMR (CDC13, 500 MHz) 0.83 (-CH3, s, 3H), 1.05 (-CH2, q, / = 11.0 Hz, 1H), 1.28 (-CH3, s, 3H), 1.38 (-CH3, s, 3H), 1.85-1.91 (-CH2, m， 2H)， 2.06 (-CH, t, / = 5.0 Hz, 1H)， 2.16-2.19 (-CH, m， 1H)， 2.31-2.35 (-CH2, m， 1H), 3.11-3.27 (-CH2, m， 2H)， 3.69-3.73 (-CH, m， 1H)， 4.31-4.36 (-CH, m， 1H)， 7.01-7.07 (-Ph, m， 2H)， 7.19-7.23 (-Ph, m， 1H), 7.25-7.30 (-Ph, m， 1H). 13C NMR (CDC13, 125 MHz) 23.88, 26.11, 28.28, 33.83, 35.11, 38.19, 39.30, 41.43, 51.18, 78.60, 86.80, 115.21, 123.82, 125.41, 128.58, 131.76, 162.35.
(15) 1-环己基 -2-氯-乙基硼酸 - +)-oc-蒎烷二醇酯（化合物 III-16a)
Figure imgf000047_0001
于 100 mL三口瓶中加入剪碎的镁条 （0.24 g， 10 mmol)、 15 mL无水乙醚， 再加入 一小粒碘， 室温下滴加溴甲基环己垸（1.77 g， 10 mmol) 的乙醚溶液 10 mL， 滴完后加热 微沸至镁条溶解完毕， 自然冷却得对氟苄溴的格式试剂的乙醚溶液。 干燥处放置备用。
将二氯亚甲基硼酸 -OC-蒎垸二醇酯 III-6a (2.26 g, 10 mmol) 用 20 mL乙醚溶解， 室 温下搅拌。通入氮气， 并降温至一 78°C， 然后慢慢滴加制好的对氟苄溴的格式试剂的乙醚 溶液。 滴加完毕后， 加入干燥好的 ZnCl2粉末 （0.27 g， 2 mmol)。 自然升至室温， 继续室 温下搅拌。 TLC检测， 24h后反应完毕。 过滤除去固体， 浓缩后柱层析分离 （乙酸乙酯： 石油醚 = 1 : 10)得无色液体 2.06 g, 收率 61.2%。 1H NMR (CDC13, 500 MHz) 0.85 (-CH3, s, 3H), 0.91-0.96 (-CH2, m, 1H), 1.10-1.25 (-CH2, m, 4H), 1.30 (-CH3, s, 3H), 1.42 (-CH3, s, 3H), 1.54-1.56 (-CH2, m, 1H), 1.64-1.70 (-CH2, -CH, m, 5H), 1.76-1.81 (-CH2, m, 2H)， 1.88-1.93 (-CH2, m, 2H), 2.08-2.10 (-CH, m, 1H), 2.22-2.28 (-CH2, m, 1H), 2.34-2.38 (-CH2, m， 1H)， 3.46-3.58 (-CH, m， 1H)， 4.35-4.37 (-CH, m， 1H). 13C NMR (CDC13, 125 MHz) 23.92, 26.07, 26.24, 26.28, 26.51, 27.00, 28.39, 32.01, 33.58, 35.03, 35.27, 38.24, 39.40, 41.39, 51.35, 78.48, 86.61.
(16) 2-甲基 -4-氨基-丁基硼酸 -(+)-oc-蒎烷二醇酯盐酸盐（化合物 III-17a) /3/ O 20s ϋποίAV
Figure imgf000048_0001
¾。) 9rn(ε 99p。) 98Ό(ε。) £∞c ( 00Η ¾/ ¾Η ¾HWaZ =--- .·.
。)(m 9。) ΐο Χΐ。) 06Ί88Ϊ s ¾ ¾ / ¾Ηffi/ 1aaN = = ---- ..- . IH), 2.32-2.36 (-CH2, m, 1H)， 2.72-2.74 (-CH, m, 1H)， 4.45 (-CH, d, / = 8.9 Hz, 1H)， 7.30 (-NH3 +, t, / = 50.7 Hz, 3H)， 7.90 (-NH3 +, s, 3H). 13C NMR (DMSO-J6, 125 MHz) δ 13.60, 21.79, 23.51, 24.41, 25.87, 26.74, 28.00, 28.85, 34.63, 37.76, 38.79, 50.67, 75.45, 77.53, 86.58. MS (ESI) m/z 266.3 [M + H]+.
( 18) 1-苯基 -2-氨基-乙基硼酸 -(+)-oc-蒎烷二醇酯盐酸盐（化合物 III-19a)
Figure imgf000049_0001
于 lOOmL单口瓶中加入 LiN(SiMe3)2 (10 mL， 10 mmol) , 通入氮气， 并降温至一 78 V， 然后用注射器慢慢加入含有 1-苯基 -2-氯-乙基硼酸 -0C-蒎垸二醇酯 III-9a ( 3.19 g , 10 mmol) 的 THF溶液 10mL， 滴加完毕后， 自然升至室温， 继续室温下搅拌。 TLC检测， 24h后反应完毕。 减压蒸除溶剂， 加入 30mL正己垸溶解， 过滤除去不溶物。 将滤液降温 至一 78 °C， 加入 23mL浓度为 1.3M氯化氢的乙醚溶液， 然后自然升至室温， 出现大量乳 白色固体。冷冻使固体完全析出。过滤， 乙醚洗涤产品得乳白色固体 2.31 g， 收率 68.8%。 1H NMR (DMS0- , 500 MHz) 0.78 (-CH3, s， 3H)， 1.06 (-CH2, d, / = 10.9 Hz, 1H)， 1.23 (-CH3, s, 3H), 1.26 (-CH3, s, 3H), 1.62-1.66 (-CH2, m, 2H), 1.80-1.83 (-CH2, m, IH), 2.00 (-CH t, / = 5.4 Hz, 1H)， 2.07-2.11 (-CH, m， 1H)， 2.23-2.27 (-CH2, m， 1H)， 2.88-2.93 (-CH, m， 1H)， 3.03-3.10 (-CH2, m， 2H)， 4.35 (-CH, d， / = 8.8 Hz, 1H)， 7.22-7.32 (-Ph, m， 5H)， 7.42 (-NH3 +, t, / = 50.7 Hz, 3H)， 8.14 (-NH3 +, s, 3H). 13C NMR (DMSO-J6, 125 MHz) 23.50, 25.76, 26.73, 27.97, 34.38, 35.14, 37.72, 38.72, 50.57, 77.50, 86.55, 126.65, 128.28, 128.33, 129.04, 129.08, 136.92. MS (ESI) m/z 300.3 [M + Η]+·
( 19) 1-对甲苯基 -2-氨基-乙 -(+)-α-蒎烷二醇酯盐酸盐（化合物 III-20a)
Figure imgf000049_0002
于 lOOmL单口瓶中加入 LiN(SiMe3)2 (3 mL， 3 mmol)， 通入氮气， 并降温至一 78 °C， 然后慢慢加入含有 1-对甲苯基 -2-氯-乙基硼酸 -OC-蒎垸二醇酯 III-10a ( 1 g , 3 mmol)的 THF 溶液 5mL， 滴加完毕后， 自然升至室温， 继续室温下搅拌。 TLC检测， 24h后反应完毕。 减压蒸除溶剂， 加入 40mL 正己垸溶解， 过滤除去不溶物。 将滤液降温至一 78 °C， 加入 6.9 mL浓度为 1.3M氯化氢的乙醚溶液， 然后自然升至室温， 出现大量乳白色固体。 冷冻 使固体完全析出。 过滤， 乙醚洗涤产品得乳白色固体 0.76 g , 收率 72.5%。 NMR (DMSO- , 500 MHz) SO S (-CH3, s, 3H)， 1.08 (-CH2, d, / = 10.9 Hz, 1H), 1.23 (-CH3, s, 3H). 1.27 (-CH3, s, 3H), 1.63-1.67 (-CH2, m, 2H), 1.81-1.84 (-CH2, m, 1H), 1.94 (-CH, t, / = 5.4 Hz, 1H), 2.09-2.11 (-CH, m， 1H), 2.23-2.28 (-CH2, -CH, m， 4H)， 2.85-2.89 (-CH, m， 1H), 2.97-3.03 (-CH2, m， 2H)， 4.35 (-CH, d, / = 8.9 Hz, 1H)， 7.11 (-Ph, q, / = 8.1 Hz, 5H)， 7.45 (-NH3 +, t, / = 50.7 Hz, 3H)， 8.12 (-NH3 +, s, 3H). 13C NMR (DMSO-J6, 125 MHz) 20.50, 23.44, 25.72, 26.70, 27.93, 34.33, 34.65, 37.67, 38.72, 50.59, 77.50, 86.49, 128.77, 128.82, 128.90, 128.95, 133.80, 135.56. MS (ESI) m/z 314.3 [M + H]+.
(20) 1-对氟苯基 -2-氨基-乙 -(+)-oc-蒎烷二醇酯盐酸盐（化合物 III-21a)
Figure imgf000050_0001
于 lOOmL单口瓶中加入 LiN(SiMe3)2 (10 mL， 10 mmol) , 通入氮气， 并降温至一 78 ，然后慢慢加入含有 1-对氟苯基 -2-氯-乙基硼酸 -OC-蒎垸二醇酯 III-lla ( 3.36 g , 10 mmol) 的 THF溶液 10mL， 滴加完毕后， 自然升至室温， 继续室温下搅拌。 TLC检测， 24h后反 应完毕。 减压蒸除溶剂， 加入 60mL 正己垸溶解， 过滤除去不溶物。 将滤液降温至一 78 V， 加入 23mL浓度为 1.3M氯化氢的乙醚溶液， 然后自然升至室温， 出现大量淡黄色固 体。冷冻使固体完全析出。过滤，乙醚洗涤产品得乳白色固体 1.93 g ,收率 54.6%。 1H NMR (DMS0- , 500 MHz) 0.77 (-CH3, s, 3H)， 0.95 (-CH2, d, / = 10.9 Hz, 1H), 1.22 (-CH3, s, 3H).
I .26 (-CH3, s, 3H)， 1.63-1.66 (-CH2, m， 1H)， 1.81 (-CH2, d, / = 5.1 Hz, 1H)， 1.92 (-CH, t, / =
II .0 Hz, 1H)， 2.06-2.11 (-CH, m， 1H)， 2.22-2.27 (-CH2, m， 1H)， 2.88-2.93 (-CH2, m， 1H)， 3.01-3.09 (-CH2, -CH, m， 2H)， 4.34-4.36 (-CH, m， 1H)， 7.11 (-Ph, t， / = 8.9 Hz, 2H)， 7.28-7.31 (-Ph, q, / = 5.7 Hz, 2H)， 7.38 (-NH3 +, t, / = 50.3 Hz, 3H)， 8.18 (-NH3 +, s, 3H). 13C NMR (DMSO- , 125 MHz) 23.53, 25.78, 26.75, 28.00, 34.41, 37.73, 38.75, 50.59, 77.54, 86.59, 114.93, 115.09, 131.10, 133.24, 160.19, 162.12. MS (ESI) /z 318.3 [M + Η]+·
(21 ) 1-间甲苯基 -2-氨基-乙基硼酸 -(+)-α-蒎烷二醇酯盐酸盐（化合物 III-22a)
Figure imgf000051_0001
于 lOOmL单口瓶中加入 LiN(SiMe3)2 (12.5 mL， 12.5 mmol) , 通入氮气， 并降温至一 78 °C , 然后慢慢加入含有 1-间甲苯基 -2-氯-乙基硼酸 -a-蒎垸二醇酯 IIMOa (4.04 g, 12.1 mmol) 的 THF溶液 10mL， 滴加完毕后， 自然升至室温， 继续室温下搅拌。 TLC检测， 24h后反应完毕。 减压蒸除溶剂， 加入 40mL石油醚溶解， 过滤除去不溶物。 将滤液降温 至一 78°C， 加入 llmL浓度为 3.5M氯化氢的乙醚溶液， 然后自然升至室温， 出现大量乳 白色固体。冷冻使固体完全析出。过滤， 乙醚洗涤产品得乳白色固体 2.91 g， 收率 68.5%。 1H NMR (DMS0- , 500 MHz) 0.78 (-CH3, s， 3H)， 1.09 (-CH2, d, / = 11.3 Hz, 1H)， 1.22 (-CH3, s, 3H)， 1.26 (-CH3, s, 3H)， 1.60-1.65 (-CH2, m， 1H), 1.81-1.83 (-CH2, m， 1H), 1.89-1.94 (-CH, m, 1H), 2.05-2.12 (-CH, m, 1H), 2.21-2.28 (-CH3, -CH2, m, 4H), 2.81-2.90 (-CH, m, 1H)， 3.01-3.07 (-CH2, m， 2H)， 4.35 (-CH, q， / = 2.8 Hz, 1H)， 7.02-7.05 (-Ph, m， 3H)， 7.15-7.22 (-Ph, m， 1H)， 7.45 (-NH3 +, t, / = 84.4 Hz, 6H)， 8.15 (-NH3 +, s， 3H). 13C NMR (DMSO-J6, 125 MHz) 20.94, 23.57, 25.75, 26.78, 28.03, 34.43, 35.12, 37.61, 37.80, 50.58, 77.52, 86.63, 126.27, 127.35, 128.30, 129.87, 136.86, 137.36. MS (ESI) m/z 314.2 [M + Η]+·
(22) 1-间氟苯基 -2-氨基-乙基硼酸 -(+)-α-蒎烷二醇酯盐酸盐（化合物 III-23a)
Figure imgf000051_0002
于 lOOmL单口瓶中加入 LiN(SiMe3)2 (14 mL， 14 mmol)， 通入氮气， 并降温至一 78 ，然后慢慢加入含有 1-间氟苯基 -2-氯-乙基硼酸 -OC-蒎垸二醇酯 III-lla(4.6 g , 13.7 mmol) 的 THF溶液 10mL， 滴加完毕后， 自然升至室温， 继续室温下搅拌。 TLC检测， 24h后反 应完毕。 减压蒸除溶剂， 加入 40mL石油醚溶解， 过滤除去不溶物。 将滤液降温至一 78 V， 加入 12mL浓度为 3.5M氯化氢的乙醚溶液， 然后自然升至室温， 出现大量淡黄色固 体。冷冻使固体完全析出。过滤， 乙醚洗涤产品得乳白色固体 2.36 g， 收率 50%。 iH NMR (DMS0- , 300 MHz) 0.80 (-CH3, s, 3H)， 1.11 (-CH2, d, / = 10.2 Hz, 1H), 1.24 (-CH3, s, 3H).
1.30 (-CH3, s, 3H)， 1.67-1.72 (-CH2, m， 1H)， 1.86-1.88 (-CH2, m， 1H)， 1.90-1.94 (-CH, m， 1H)， 2.15-2.21 (-CH, m, IH), 2.27-2.32 (-CH2, m, IH), 2.98-3.17 (-CH2, -CH, m, 3H), 4.22 (-CH, q， / = 1.8 Hz, 1H)， 7.08-7.13 (-Ph, m， 1H)， 7.35-7.96 (-Ph, m， 2H)， 8.00 (-Ph, s, 1H)， 8.20 (-NH3 +, t， / = 65.8 Hz, 3H)， 8.68 (-NH3 +, s, 3H). 13C NMR (DMSO- , 125 MHz) 23.67, 25.94, 26.93, 28.51, 35.58, 37.95, 38.67, 51.24, 75.60, 114.67, 116.78, 124.23, 130.56 143.23, 162.44. MS (ESI) m z 318.2 [M + H]+.
(23) 1-邻甲苯基 -2-氨基-乙基硼酸 -(+)-oc-蒎烷二醇酯盐酸盐（化合物 III-24a)
Figure imgf000052_0001
于 lOOmL单口瓶中加入 LiN(SiMe3)2 (11 mL， 11 mmol), 通入氮气， 并降温至一 78 °C，然后慢慢加入含有 1-邻甲苯基 -2-氯-乙基硼酸 -OC-蒎垸二醇酯 III-10a ( 3.63 g , 11 mmol) 的 THF溶液 10mL， 滴加完毕后， 自然升至室温， 继续室温下搅拌。 TLC检测， 24h后反 应完毕。 减压蒸除溶剂， 加入 40mL石油醚溶解， 过滤除去不溶物。 将滤液降温至一 78 V， 加入 10mL浓度为 3.3M氯化氢的乙醚溶液， 然后自然升至室温， 出现大量乳白色固 体。冷冻使固体完全析出。过滤， 乙醚洗涤产品得乳白色固体 2.26 g， 收率 60%。 iH NMR (DMS0- , 500 MHz) 0.77 (-CH3, s, 3H)， 1.09 (-CH2, d, / = 18.1 Hz, IH), 1.19 (-CH3, s, 3H)， 1.22 (-CH3, s, 3H), 1.61-1.66 (-CH2, m, IH), 1.80-1.82 (-CH2, m, IH), 1.90 (-CH, t, / = 8.8 Hz, IH), 2.04-2.12 (-CH, m, IH), 2.20-2.29 (-CH3, -CH2, m, 4H), 2.84-2.97 (-CH2, m, 2H)， 3.08-3.14 (-CH, m， 1H)， 4.35 (-CH, q, / = 3.1 Hz, 1H)， 7.07-7.18 (-Ph, m， 4H)， 7.46 (-NH3 +, t, J = 84.5 Hz, IH), 8.25 (-NH3 +, s, 3H). 13C NMR (DMSO- , 125 MHz) 19.10, 23.55, 25.77, 26.76, 27.90, 32.67, 34.38, 36.08, 37.75, 50.56, 77.49, 86.47, 125.75, 126.78, 129.72, 130.21, 135.11, 136.15. MS (ESI) m/z 314.2 [M + H]+.
(24) 1-邻氟苯基 -2-氨基-乙基硼酸 -(+)-oc-蒎烷二醇酯盐酸盐（化合物 III-25a)
Figure imgf000052_0002
于 lOOmL单口瓶中加入 LiN(SiMe3)2 (13 mL， 13 mmol)， 通入氮气， 并降温至一 78
°C，然后慢慢加入含有 1-邻氟苯基 -2-氯-乙基硼酸 -OC-蒎垸二醇酯 III-lla (4.24 g， 13 mmol) 的 THF溶液 15mL， 滴加完毕后， 自然升至室温， 继续室温下搅拌。 TLC检测， 24h后反 应完毕。 减压蒸除溶剂， 加入 40mL石油醚溶解， 过滤除去不溶物。 将滤液降温至一 78 V， 加入 12mL浓度为 3.3M氯化氢的乙醚溶液， 然后自然升至室温， 出现大量淡黄色固 体。冷冻使固体完全析出。过滤， 乙醚洗涤产品得乳白色固体 2.24 g， 收率 50%。 iH NMR (DMS0- , 500 MHz) 0.77 (-CH3, s, 3H)， 1.10 (-CH2, d, / = 18.2 Hz, 1H)， 1.22 (-CH3, s, 3H). 1.23 (-CH3, s, 3H), 1.58-1.63 (-CH2, m, IH), 1.80-1.82 (-CH2, m, IH), 1.90 (-CH, t, / = 8.8 Hz, IH), 2.05-2.12 (-CH, m， 1H)， 2.19-2.27 (-CH2, m， 1H)， 2.93-3.11 (-CH2, -CH, m， 3H)， 4.34 (-CH, q, / = 3.2 Hz, 1H)， 7.11-7.17 (-Ph, m， 2H)， 7.26-7.35(-Ph, m， 2H)， 7.44 (-NH3 +, t, / = 84.4 Hz, 3H)， 8.24 (-NH3 +, s, 3H). 13C NMR (DMSO- , 125 MHz) 23.55, 25.72, 26.76, 28.00, 28.43, 34.35, 36.28, 37.76, 115.33, 123.62, 124.37, 128.93, 131.63, 162.30. MS (ESI) m z 318.3 [M + H]+.
(25) 1-环己基 -2-氨基-乙基 -(+)-oc-蒎烷二醇酯盐酸盐（化合物 III-26a)
Figure imgf000053_0001
于 lOO mL单口瓶中加入 LiN(SiMe3)2 (10 mL， lO mmol) , 通入氮气， 并降温至一78 °C， 然后慢慢加入含有 1-环己基 -2-氯-乙基硼酸 -OC-蒎垸二醇酯 III-16a ( 3.41 g , 10 mmol) 的 THF溶液 10 mL， 滴加完毕后， 自然升至室温， 继续室温下搅拌。 TLC检测， 24h后 反应完毕。 减压蒸除溶剂， 加入 60 mL正己垸溶解， 过滤除去不溶物。 将滤液降温至 -78 V， 加入 23 mL浓度为 1.3 M氯化氢的乙醚溶液， 然后自然升至室温， 出现大量淡黄色 固体。 冷冻使固体完全析出。 过滤， 乙醚洗涤产品得乳白色固体 1.95 g， 收率 55.4%。 1H NMR (DMS0- , 500 MHz) 0.80 (-CH3, s， 3H)， 0.86-0.93 (-CH2, m， 2H)， 1.07-1.19 (-CH2, -CH, m, 4H), 1.25 (-CH3, s, 3H), 1.33 (-CH3, s, 3H), 1.43-1.50 (-CH2, m, 2H), 1.64-1.68 (-CH2, m， 6H), 1.87-1.98 (-CH2, m, 2H), 2.18-2.34 (-CH2, m, 2H), 2.73-2.78 (-CH, m, 2H), 4.20-4.36 (-CH, m， 1H)， 8.11 (-NH3 +, br s, 3H). 13C NMR (DMSO-J6, 125 MHz) 23.54, 25.53, 25.90, 26.80, 28.13, 28.44, 32.37, 34.25, 35.09, 35.53, 36.60, 37.92, 38.79, 40.35, 51.19, 76.23, 84.13. MS (ESI) m/z 306.1 [M + Η]+· 三、 式（I) 的制备：
1、 硼酸酯化合物 （I) 的制备：
(1 ) N-苯甲酰基 苯丙酰 -D-亮氨酸硼酸 -(+)-α-蒎烷二醇酯的制备（1-1 )
Figure imgf000054_0001
在氮气保护下， 将实施例一中 Ν-苯甲酰基- ^苯丙氨酸 （3aA) ( 0.10 g, 0.37 mmol) 溶解在 10ml干燥的 THF中， 将体系冷却到 -5°C， 加入 HOBt ( 0.06 g， 0.44 mmol) , 反应 20分钟后， 将体系降温到 -15°C， 加入 EDC.HC1 ( 0.07 g, 0.37 mmol)。 最后加入实施例 二中的 2-甲基 -4-氨基-丁基硼酸 -0C-蒎垸二醇酯盐酸盐 III-16a ( 0.11 g, 0.37 mmol) 和 DIPEA ( 0.064 mL， 0.37 mmol)。 继续保持在 -15°C反应 2小时， 升至室温反应 3小时， TLC显示反应结束。 过滤除去不溶物， 减压蒸除溶剂， 用 20mL乙酸乙酯溶解， 分别用 5%NaHC03溶液（20mL)、 10%的柠檬酸溶液（20mL)、 5%NaHC03溶液（20mLl)、 饱和 食盐水溶液 (2 X 20mL)洗涤。 乙酸乙酯层用无水 Na2S04干燥， 过滤， 浓缩后得玻璃状固 体 0.166 g， 收率 87%。 所有硼酸酯化合物均未纯化， 直接用于下步反应。
本发明的其它类似化合物的合成方法可以采用上述的方法。 1-2: 将 3bA 与 III-16a 反应制备； 1-3: 将 3cA与 III-16a反应制备； 1-4: 将 3dA与 III-16a反应制备； 1-5: 将 3eA与 III-16a反应制备； 1-6: 将 3fA与 III-16a反应制备； 1-7: 将 3gA与 III-16a反应 制备； 1-8: 将 3gA与 III-17a反应制备； 1-9: 将 3gA与 III-18a反应制备； 1-10: 将 3gA 与 III-19a反应制备； 1-11: 将 3gA与 III-20a反应制备； 1-12: 将 3gA与 III-21a反应制 备； 1-13: 将 3gA与 III-22a反应制备； 1-14: 将 3gA与 III-23a反应制备； 1-15: 将 3gA 与 III-24a反应制备； 1-16: 将 3hA与 III-16a反应制备； 1-17: 将 3hA与 III-17a反应制 备； 1-18: 将 3hA与 III-18a反应制备； 1-19: 将 3hA与 III-19a反应制备； 1-20: 将 3hA 与 III-20a反应制备； 1-21: 将 3hA与 III-21a反应制备； 1-22: 将 3hA与 III-22a反应制 备； 1-23: 将 3hA与 III-23a反应制备； 1-24: 将 3hA与 III-24a反应制备； 1-25: 将 3ίΑ 与 III-16a反应制备； 1-26: 将 3jA与 III-16a反应制备； 1-27: 将 3kA与 III-16a反应制 备； 1-28: 将 31A与 III-16a反应制备； 1-29: 将 3mA与 III-16a反应制备； 1-30: 将 3nA 与 III-16a反应制备； 1-31: 将 3oA与 III-16a反应制备； 1-32: 将 3pA与 III-16a反应制 备； 1-33: 将 3gB与 III-16a反应制备； 1-34: 将 3hB与 III-16a反应制备； 1-35: 将 3jB 与 III-16a反应制备； 1-36: 将 3jB与 III-21a反应制备； 1-37: 将 3gC与 III-16a反应制 备； 1-38: 将 3hC与 III-16a反应制备； 1-39: 将 3hC与 III-21a反应制备； 1-40: 将 3jC 与 III-16a反应制备； 1-41: 将 3bD与 III-16a反应制备； 1-42: 将 3cD与 III-16a反应制 备； 1-43: 将 3dD与 III-16a反应制备； 1-44: 将 3eD与 III-16a反应制备； 1-45: 将 3fD 与 III-16a反应制备； 1-46: 将 3gD与 III-16a反应制备； 1-47: 将 3hD与 III-16a反应制 备； 1-48: 将 3iD与 III-16a反应制备； 1-49: 将 ¾D与 III-16a反应制备； 1-50: 将 ¾D 与 III-17a反应制备； 1-51: 将 ¾D与 III-18a反应制备； 1-52: 将 ¾D与 III-19a反应制 备； 1-53: 将 ¾D与 III-20a反应制备； 1-54: 将 ¾D与 III-21a反应制备； 1-55: 将 ¾D 与 III-22a反应制备； 1-56: 将 ¾D与 III-23a反应制备； 1-57: 将 ¾D与 III-24a反应制 备； 1-58: 将 3kD与 III-16a反应制备； 1-59: 将 31D与 III-16a反应制备； 1-60: 将 3pD 与 III-16a反应制备； 1-61: 将 3gE与 III-16a反应制备； 1-62: 将 3hE与 III-16a反应制 备； 1-63: 将 3hE与 III-21a反应制备； 1-64: 将 ¾E与 III-21a反应制备； 1-65: 将 3gF 与 III-16a反应制备； 1-66： 将 3hF与 III-16a反应制备； 1-67： 将 3hF与 III-21a反应制 备； 1-68: 将 3jF与 III-21a反应制备； 1-69: 将 3gG与 III-16a反应制备； 1-70: 将 3gG 与 III-18a反应制备； 1-71: 将 3hG与 III-16a反应制备； 1-72: 将 3hG与 III-21a反应制 备； 1-73: 将 3jG与 III-16a反应制备； 1-74: 将 3mG与 III-16a反应制备； 1-75: 将 3nG 与 III-16a反应制备； 1-76: 将 3oG与 III-16a反应制备； 1-77: 将 3aH与 III-19a反应制 备； 1-78: 将 3aH与 III-21a反应制备； 1-79: 将 3cH与 III-23a反应制备； 1-80: 将 3dH 与 III-20a反应制备； 1-81： 将 3al与 III-20a反应制备； 1-82： 将 3bl与 III-24a反应制备； 1-83：将 3el与 III-23a反应制备； 1-84：将 3hl与 III-18a反应制备； 1-85：将 3jl与 III-17a 反应制备； 1-86: 将 3aJ与 III-19a反应制备； 1-87: 将 3cJ与 III-22a反应制备； 1-88: 将 3hJ与 III-16a反应制备； 1-89： 将 3hJ与 III-21a反应制备； 1-90： 将 3ί J与 III- 16a反 应制备； 1-91: 将 3iJ与 III-17a反应制备； 1-92: 将 3jJ与 III-16a反应制备； 1-93: 将 3kJ与 III-21a反应制备； 1-94: 将 3oJ与 III-16a反应制备； 中间体羧酸部分采用实施例 一中制备的化合物 （11)， 中间体硼酸 -0C-蒎垸二醇酯氨基的盐酸盐采用实施例二中制备的 化合物 （111)。 结 构 化 学 名
Figure imgf000056_0001
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N-吡啶 -3-甲酰基 - ?-2-甲基苯基丙酰胺 -D-亮氨 -(+)-α-蒎烷二醇酯
Ν-吡啶 -3-甲酰基 - ?-2-甲氧基苯基丙酰胺 -D-亮氨酸硼 酸 -(+)-α-蒎烷二醇酯
Ν-吡啶 -3-甲酰基 - ?-2-硝基苯基丙酰胺 -D-亮氨 -(+)-α-蒎烷二醇酯
Ν-吡啶 -3-甲酰基 - ?-3-氟苯基丙酰胺 -D-亮氨酸硼酸 -(+)-α-蒎烷二醇酯
Ν-吡啶 -3-甲酰基 - ?-3-氯苯基丙酰胺 -D-亮氨酸硼酸 -(+)-α-蒎烷二醇酯
Ν-吡啶 -3-甲酰基 - ?-3-甲基苯基丙酰胺 -D-亮氨 -(+)-α-蒎烷二醇酯
Ν-吡啶 -3-甲酰基 - ?-3-甲氧基苯基丙酰胺 -D-亮氨酸硼 酸 -(+)-α-蒎烷二醇酯
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Figure imgf000066_0001
N-(W)-1，2，3，4-四氢萘 -1-甲酰基 苯丙酰胺 -D-(4-甲基- 苯基) -丙氨酸硼酸 -W-C -蒎烷二醇酯
N-(W)-1，2，3，4-四氢萘 -1-甲酰基 苯丙酰胺 -D-(3-甲基- 苯基) -丙氨酸硼酸 -W-C -蒎烷二醇酯
N-(W)-1，2，3，4-四氢萘 -1-甲酰基 - ?-2-氯苯基丙酰胺 -D-(2- 甲基-苯基) -丙氨酸硼酸 -(+)-α-蒎烷二醇酯
Ν-( )-1，2，3，4-四氢萘 -1-甲酰基 - ?-2-甲基苯基丙酰胺 -D-(4-氟-苯基) -丙氨酸硼酸 -(+)-α-蒎烷二醇酯
-1，2，3，4-四氢萘-2-甲酰基- ?-苯丙酰胺-0-(4-氟-苯基)- 丙氨酸硼酸 -W-C -蒎烷二醇酯
^1，2，3，4-四氢萘-2-甲酰基- ?-2-氟苯基丙酰胺-0-(2-氟- 苯基) -丙氨酸硼酸 -W-C -蒎烷二醇酯
N-l，2，3，4-四氢萘 -2-甲酰基 - ?-2-甲氧基苯基丙酰胺 -D-(2-甲基-苯基) -丙氨酸硼酸 -(+)-α-蒎烷二醇酯
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Ν-苯甲酰基 苯丙酰胺 -D-亮氨酸硼酸的制备（IV-1)
Figure imgf000070_0001
将 N-苯甲酰基^-苯丙酰胺- D-焭氨酸硼酸- (+)-α-蒎烷二醇酯 （0.21 g， 0.407 mmol) 用 6mL的甲醇溶解， 加入 2-甲基丙基硼酸 （0.207 g， 2.04 mmol) 及 6mL正己烷， 最后 加入 HC1溶液 （1M， lmL) , 室温搅拌反应。 5小时后 TLC显示反应完成。 分层， 下层 用 10mL己烷洗條 1遍，无水硫酸钠干燥下层。减压蒸干溶剂，过柱得到无色固体 116 mg , 收率 74.6%。 NMR (CD3OD, 500 MHz) 0.84-0.89 (-CH3, m, 6H), 1.14-1.32 (-CH2, m, 2H). 1.50-1.62 (-CH, m, IH), 2.62 (-CH, t, J= 7.1 Hz, IH), 3.04-3.18 (-CH2, m, 2H), 5.62-5.67 (-CH. m, IH), 7.26-7.41 (-Ph, m, 3H), 7.42-7.53 (-Ph, m, 5H), 7.82-7.85 (-Ph, m, 2H). 13C NMR ( CD3OD, 125 MHz) ^22.12, 23.82, 27.01, 37.76, 40.93, 45.18, 52.09, 127.74, 128.44, 129.52, 129.78, 132.81, 135.44, 141.85, 169.62, 177.12. MS (ESI) m/z 409.3 [M + 27]", 419.2 [M + 37]+· HRMS [M + Na + 2CH2]+ calcd, 447.2431 ; found, 447.2373.
本发明的其它类似的硼酸类化合物的合成可以采用上述相类似的方法。具体的化合物 如下表所示。
Figure imgf000070_0002
[M - H]", 429.1 [M + 13]". HRMS [M + Na]+ calcd, 439.1570; found, 439.1588.
N-苯甲酰基 - ?-2-甲基苯基丙酰胺 -D-亮氨酸硼酸 收率 77.1%. ¾ NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0.84-0.89 (-CH3, m, 6H), 1.12-1.17 (-CH2, m, IH), 1.24-1.30 (-CH2, m, 1H),1.50-1.61 (-CH, m, IH), 2.50 (-CH3, s, 3H), 2.57-2.61 (-CH, m, IH), 3.03 (-CH2, dd, = 7.0 Hz, J2 = 14.8 Hz, IH), 3.10 (-CH2, dd, = 8.2 Hz, J2 = 14.8 Hz, IH), 5.85-5.89 (-CH, m, IH), 7.16-7.22 (-Ph, m, 3H), 7.43-7.47 (-Ph, m, 3H),
7.51- 7.54 (-Ph, m, IH), 7.79-7.81 (-Ph, m, IH). 13C NMR (CD3OD, 125 MHz) S 19.41, 22.02, 23.87, 26.88, 37.03, 45.56, 48.31, 49.85, 126.92, 127.53, 128.47, 128.91, 129.56, 131.78, 132.82, 135.49, 137.26, 139.94, 169.64, 177.03. MS (ESI) m/z 395.1 [M -H]", 409.2 [M + 13]", 419.2 [M + Na]+, 435.2 [M + K]+. HRMS [M + Na]+ calcd, 419.2117; found, 419.2111.
N-苯甲酰基 - ?-2-甲氧基苯基丙酰胺 -D-亮氨酸硼 酸
收率 75%. ¾ NMR (CD3OD, 500 MHz) J0.85-0.88 (-CH3, m, 6H), 1.19-1.25 (-CH2, m, 2H), 1.54-1.57 (-CH, m, IH), 2.57-2.60 (-CH, m, IH), 3.05-3.09 (-CH2, m, 2H), 3.93 (-OCH3, s, 3H), 5.84-5.87 (-CH, m, IH), 6.95 (-Ph, t, / = 7.5 Hz, IH), 7.02 (-Ph, d, / = 8.1 Hz, IH), 7.27-7.31 (-Ph, m, IH), 7.36 (-Ph, dd, = 1.5 Hz, J2 = 7.6 Hz, IH), 7.46 (-Ph, t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.52-7.56 (-Ph, m, IH), 7.80-7.84 (-Ph, m, 2H). 13C NMR (CD3OD, 125 MHz) S 22.08, 23.83, 26.95, 36.31, 41.01, 45.51, 56.06, 112.21, 121.83, 128.43, 128.67, 129.24, 129.65, 130.36, 132.88, 135.66, 158.24, 169.52, 177.43. MS (ESI) m/z 411.2 [M - H]", 425.3 [M + 13]", 435.2 [M + Na]+. HRMS [M + Na]+ calcd, 435.2066; found, 435.2077.
N-苯甲酰基 - ?-2-硝基苯基丙酰胺 -D-亮氨酸硼酸 收率 70.5%. ¾ NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0.87-0.90 (-CH3, m, 6H), 1.26-1.34 (-CH2, m, 2H), 1.58-1.63 (-CH, m, IH), 2.66-2.69 (-CH, m, IH), 3.18 (-CH2, dd, = 4.0 Hz, J2 = 7.1 Hz, 2H), 6.03-6.06 (-CH, m, IH), 7.44-7.47 (-Ph, m, 2H),
7.52- 7.54 (-Ph, m, 2H), 7.70-7.72 (-Ph, m, IH), 7.74-7.76 (-Ph, m, IH), 7.79-7.81 (-Ph, m, IH). 13C NMR (CD3OD, 125 MHz) S 22.22, 23.79, 27.02, 36.77, 45.53, 48.37, 49.85, 125.80, 128.50, 129.62, 130.06, 133.07, 134.81, 135.06, 137.53, 150.09, 169.84, 176.52. MS (ESI) m/z 426.1 [M - H]", 450.2 [M + Na]+, 464.2 [M + K]+. HRMS [M + Na]+ calcd, 450.1811; found, 450.1840.
Figure imgf000072_0001
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Figure imgf000100_0001
第二部分 抑制蛋白酶体活性测定
蛋白酶体抑制活性
本方法利用荧光底物多肽 Suc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC (简写 Suc-LLVY-AMC， Sue表 示琥珀酰基， AMC表示 7-酰胺 -4-甲基香豆素）在蛋白酶体作用下会发生水解， 释放出具 有荧光的 AMC (Ex: 380nm， Em: 460nm) 的原理， 通过改变待测化合物浓度， 测得不 同浓度药物作用后的蛋白酶体催化底物得到的产物荧光值判断药物对酶的抑制程度，从而 计算药物对蛋白酶体抑制的 IC5Q值。
本实验所用的蛋白酶体为人红细胞 20S 蛋白酶体， 酶、 荧光底物及测试缓冲液均购 自 biomol公司。 实验体系为 100 wL， 其中含有蛋白酶体 90 /L (0.2 /g)， 底物 10 /L， 其 终浓度为 50 /M， 药物 （抑制剂） 0.1 /L， 其终浓度为 10— 7M 10— UM ， 实际配置浓度为 10— 4Μ 10—8Μ。 具体实验过程如下：
1、 药物配置：
准确称量药物，加入 DMSO溶解至 10—2Μ。用移液器吸取 10 L加至 90 L DMSO得 到 10— 3M， 然后从 10— 3M浓度药物中吸取 10 μΐ^加 90 μΐ^ DMSO得到 10— 4M， 同样方法得 至 IJ 10— 5 M 10— 6 M 10— 7 M 10— 8 M浓度的药物。
2、 底物制备：
将 5mg底物 Suc-LLVY-AMC (mw:763.9)粉末溶解于 654 /L DMSO中， 得到 10mM 储备液， -20°C保存， 使用时用缓冲液稀释 20倍， 每份样品中加入 10 L， 使得反应体系 中的底物浓度为 50 /M
3、 反应体系制备：
将 20S蛋白酶体 （1 /g / /L) 以缓冲溶液稀释成浓度为 0.0022 /g 的溶液， 96孔 荧光酶标板中每孔加入 90 L， 然后每孔中加入 0.1 L待测样品， 使用已上市药物万珂为 阳性对照药， 同时空白对照组及本底对照组中加入 0.1 /L DMSO 37°C反应 20 min。 反 应完毕后， 每孔加入 10 /L荧光底物， 避光 37°C反应 1小时， 380nm/ 460nm荧光酶标仪 ( Tecan, Infinite M200 ) 检测荧光值。
4、 数据处理
计算扣除本底后不同浓度药物作用下所得产物的荧光值， 运用 SPSS软件， 计算药物 对蛋白酶体抑制的 IC5Q浓度。 部分化合物的结果如下表:
化合物编号 化合物编号 化合物编号
VI-1 39.8 VI-26 35.4 VI-65 3.01
VI-2 38.9 VI-27 457 VI-66 117
VI-3 89.1 VI-28 1100 VI-69 1.02
VI-4 1250 VI-32 1250 VI-70 4000
VI-5 224 VI-34 87 VI-71 21.8
VI-7 19.0 VI-41 22.9 VI-72 195
VI-8 1250 VI-43 50.1 VI-73 28.1
VI-9 1200 VI-44 21.3 VI-74 21.8
VI-10 501 VI-47 1480 VI-75 164
VI-11 75.8 VI-48 1090 VI-76 78
VI-12 120 VI-49 930 VI-77 4500
VI-13 131 VI-50 63 VI-78 426 VI-15 301 VI-51 1770 VI-80 33.1
VI-16 16.5 VI-52 89.1 VI-81 4000
VI-17 316 VI-53 602 VI-84 870
VI-18 1620 VI-54 26.9 VI-85 41.6
VI-19 1150 VI-55 590 VI-86 691
VI-20 194 VI-57 7300 VI-87 158
VI-24 371 VI-58 269 VI-88 190
VI-25 50.1 VI-59 97.7 VI-90 3.89
VI-29 20.8 VI-60 46.7 VI-92 158
VI-30 26.3 VI-61 42.6 VI-93 831
VI-31 32.8 VI-62 34.6 VI-94 161
Velcade 1.90 VI-63 131
Velcade (万珂） 的化学结构式为:
Figure imgf000102_0001
本发明化合物的治疗剂量可以根据例如该治疗的具体用途，化合物的给药方式，病人 的健康状况， 以及处方医生的判断而改变。药物组合物中本发明化合物的比例或浓度将随 多种因素而改变， 包括剂量， 化学特性 （如疏水性）， 以及给药途径。 例如， 本发明化合 物可以提供于含有大约 0.1到大约 10%w/v化合物的水性生理缓冲液中用于非肠道给药。 一些通常的剂量范围为每天大约 l g / kg到大约 lg/kg体重。 在一些实施方案中， 剂量范 围从每天大约 0.01 mg I kg体重到大约 100mg/kg体重。 剂量极可能取决于这样的变量， 如疾病或失调的类型和进展程度，特定病人的总体健康状态，选定的化合物的相对生物学 功效， 赋形剂的配方， 及其给药途径。有效剂量可以从来自体外或动物模型测试系统的剂 量反应曲线推出。

Claims

权利要求书
1、 一种式 I结构的化合物，
Figure imgf000103_0001
其中，
!^为 〜10的垸基、 C3〜6的环垸基或杂环垸基、 苯基、 萘基或吲哚基， 或者任选 地被 Cl〜4的垸基、 Cl〜4的垸氧基、 氰基、 硝基、 羟基、 巯基、 氨基或卤素取代； 为 Cl〜10的垸基、 C3〜6的环垸基或杂环垸基、 苄基、 萘甲基或吲哚甲基， 或 者任选地被 Cl〜4的垸基、 Cl〜4的垸氧基、 氰基、 羟基、 巯基、 氨基或卤素取代；
¾或∑2分别独立地为羟基、 Cl〜10的垸基、 Cl〜10的垸氧基或芳氧基， 或者 B、 ¾和∑2—起形成含有 N、 S或 0的杂环基团；
Pg为 Cl〜10的垸酰基、 Cl〜10的垸氧酰基、 苯酰基、 萘酰基、 四氢萘酰基或杂环 酰基， 或者任选地被 Cl〜4的垸基、 Cl〜4的垸氧基、 卤素或 Cl〜4的卤代垸基取代。
2、 根据权利要求 1所述的化合物， 其中 !^为。1〜10的垸基、 苯基、 萘基或吲哚基， 或者任选地被 Cl〜4的垸基、 Cl〜4的垸氧基、 氰基、 硝基、 羟基、 巯基、 氨基或卤素取 代。
3、 根据权利要求 2所述的化合物， 其中 为苯基， 或者任选地被 Cl〜4的垸基、 Cl〜4的垸氧基、 硝基或卤素取代。
4、 根据权利要求 1所述的化合物， 其中 1 2为 〜10的垸基、 苄基、 萘甲基或吲哚 甲基， 或者任选地被 Cl〜4的垸基、 氰基、 羟基、 巯基、 氨基或卤素取代；
5、 根据权利要求 4所述的化合物， 其中 为 Cl〜10的垸基或苄基， 或者任选地被 Cl〜4的垸基或卤素取代。
6、 根据权利要求 1所述的化合物， 其中 ¾或∑2分别独立地为羟基， 或者 B、 ¾和 Z2一起形成硼酸 -a-蒎垸二醇酯。
7、 根据权利要求 1所述的化合物， 其中 Pg为 Cl〜10的垸酰基、 苯酰基、 萘酰基、 四氢萘酰基、 吡啶酰基或吡嗪酰基， 或者任选地被 Cl〜4的垸基、 Cl〜4的垸氧基、 卤素 或 Cl〜4的卤代垸基取代。
8、 根据权利要求 6所述的化合物， 其中 Pg为：
Figure imgf000104_0001
R3、 R4 、 R5、 R6分别独立地为氢、 甲基、 乙基、 甲氧基、 乙氧基、 氟、 氯、 溴或三
9、 一种权利要求 1〜8中任一所述的化合物的制备方法， 式 （II-1 ) 化合物在 S0C12 作用下与甲醇反应得到式 （Π-2) 化合物， 式 （II-2) 化合物在肽缩合剂下与 Pg缩合生成 式（II-3)化合物或者式（II-2)化合物与酰氯的 Pg反应生成式（II-3)化合物， 式（II-3) 化合物皂化再酸化生成式 （II) 化合物； 另一边， 式 （ΠΙ-6) 化合物与金属试剂反应， 再 被无水 ZnCl2催化成式（III-7)化合物，式（III-7)化合物与 MN(SiMe3)2反应生成式（III-8) 化合物， 式 （ΠΙ-8) 化合物在酸性条件下脱保护形成式 （III) 化合物， 最后式 （II) 化合 物和 （III) 化合物缩合成式 （I) 化合物， 其反应路线如下： - 1 11-2 II-3 II NH2丫 B(Z1)(Z2)
Figure imgf000104_0002
R 、2p
III-6 III-7 III-8 III
J Riv O丫 R? I 其中 、 R2、 ¾、 ∑2或！¾的定义如权利要求 1中所述， 且¾和∑2不为羟基。
10、根据权利要求 10所述的制备方法，将式（I)化合物脱去 ¾和 Z2基团生成式（IV ) 化合物， 其反
Figure imgf000104_0003
I IV
11、 权利要求 1〜8 中任一所述的化合物在制备蛋白酶体抑制剂或抗肿瘤药物方面的
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103030656B (zh) * 2011-09-30 2015-08-26 北京大学 蛋白酶体抑制剂硼替佐米及其类似物的合成方法
CN102512407B (zh) * 2011-11-23 2014-05-21 中山大学 一种β-苯丙氨酸类化合物作为醛糖还原酶抑制剂的应用
CN114437119A (zh) * 2020-10-30 2022-05-06 苏州开拓药业股份有限公司 一种c-Myc蛋白抑制剂及其制备方法和用途

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101120006A (zh) * 2005-02-11 2008-02-06 赛福伦公司 蛋白酶体抑制剂及其使用方法
CN101747354A (zh) * 2008-12-04 2010-06-23 江苏先声药物研究有限公司 一类β氨基酸组成的二肽硼酸及其酯类化合物、制备方法及其用途

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101120006A (zh) * 2005-02-11 2008-02-06 赛福伦公司 蛋白酶体抑制剂及其使用方法
CN101747354A (zh) * 2008-12-04 2010-06-23 江苏先声药物研究有限公司 一类β氨基酸组成的二肽硼酸及其酯类化合物、制备方法及其用途

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ZHU, YONGQIANG ET AL.: "Synthesis, in vitro and in vivo biological evaluation, docking studies, and structure-activity relationship (SAR) discussion of dipeptidyl boronic acid proteasome inhibitors composed of beta-amino acid", JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY, vol. 53, no. 5, 16 February 2010 (2010-02-16), pages 1990 - 1999, XP055050724, DOI: doi:10.1021/jm901407s *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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